KR20160113287A - 단백질 응집 저해제로서의 헤테로아릴 아미드 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 어떤 헤테로아릴 아미드 화합물, 이를 함유하는 의약 조성물 및 단백질 응집을 예방, 역전, 둔화 또는 억제하기 위한 방법을 비롯한, 상기 화합물을 이용하는 방법 및, 파킨슨병, 알츠하이머병, 루이체병, 전두측두엽 치매, 치매를 동반한 파킨슨병, 헌팅턴병, 근위축측삭경화증, 및 다계통 위축증과 같은 신경변성 질환을 비롯한, 단백질 응집과 연관된 질병 및 암 및 흑색종을 치료하는 방법에 관한 것이다.

Description

단백질 응집 저해제로서의 헤테로아릴 아미드{HETEROARLY AMIDES AS INHIBITORS OF PROTEIN AGGREGATION}
[0001] 본 발명은 헤테로아릴 아미드 유도체, 이를 함유하는 의약 조성물, 및 단백질 응집을 예방, 역전, 둔화 또는 저해하는 방법을 비롯한, 이들의 이용 방법, 및 파킨슨병, 알츠하이머병, 루이체병, 전두측두엽 치매, 치매를 동반한 파킨슨병, 헌팅턴병, 근위축측삭경화증, 및 다계통 위축증과 같은 신경변성 질환 및 암을 비롯한, 단백질 응집과 연관된 질환들을 치료하는 방법에 관한 것이다.
서열목록
[0002] 출원인은 PCT 규칙 13ter.1(a)조 내지 (d)조 그리고 행정지침(Administrative Instructions), 섹션 208조 부록 C에 의거, 표준 규정에 따라 서열목록을 제출합니다 (EFS--WEB을 통하여 전자출원함). 출원인은 ASCII .txt 포맷으로 된 컴퓨터 판독가능형태로 기록되어 제출되는 상기 정보가 국제출원에 개시된 내용을 벗어나지 않음을 확인합니다. 출원인은 EFS-WEB을 통해 제출된 서열목록이 규칙 5.2(a)조에 따라 이 출원의 일부로서 간주 및 도입될 수 있도록 요청합니다. 첨부된 .txt 파일은 699462000840SeqList로 명명되었습니다. 국제출원의 일부를 구성하는 이 서열목록은 2015년 1월 27일에 작성되었으며 645 바이트 용량입니다.
[0003] 알츠하이머병 (Alzheimer's disease: AD), 파킨슨병 (Parkinson's disease: PD), 및 전두-후두 치매(fronto-temporal dementia: FTD)와 같이, 노령 인구집단의 신경변성 질환은 미국과 유럽연합에서 2천만이 넘는 사람들이 앓는 질환으로서, 노령인구의 가장 높은 사망 원인이기도 하다. 이들 신경변성 질환의 공통적인 특성은 단백질이 만성적으로 축적되어 신경독성 응집체로 된다는 것이다. 각각의 질환은 영향을 받은 특별한 신경 집단, 연관된 단백질 응집체 및 신경 변성으로부터 야기된 임상 특성에 의해 특징지어진다.
[0004] 연구 결과 단백질 응집의 초기 단계들은 돌연변이 또는 표적 단백질의 후번역-변형 (예컨대 니트로실화, 산화)을 포함하고, 이어서 유사하게 미스폴드된 단백질들과의 상호반응을 용이하게 해주는 비정상적인 배열을 채택하는 것으로 보인다. 이어서 비정상적인 단백질은 다이머, 트리머 및 "가용성 올리고머"라고도 칭해지는 고차 멀티머를 형성하여, 시냅스 기능을 파괴한다. 이에 더해, 응집체들은 세포막에서 앵커링하여 구상 올리고머(이것은 다시 막 내 포어를 형성할 수 있다) 및/또는 프로토피브릴 또는 피브릴을 형성할 수 있다. 이들 크기가 보다 크고, 불용성인 피브릴은 생물활성 올리고머의 저장소 기능을 할 수 있다.
[0005] 다양한 종류의 증거들이 단백질 응집체의 점진적인 축적이 신경변성 질환의 병인과 연관되어 있다는 생각을 뒷받침하고 있다. α-시누클레인, Aβ 단백질, 타우(Tau) 및 TDP43과 같은, 다른 몇명 단백질들이 신경변성 환자들의 뇌에 축적될 수 있다. 이들 환자들의 인지능력 손상은 신피질과 변연계(limbic system)에서의 시냅스 손상과 밀접하게 연관되어 있으며 단백질 응집체 수준 증가가 이 시냅스 손상에 기여하는 것일 수 있다. 많은 연구조사가, α-시누클레인 및 기타 아밀로이드 전구체 단백질 (APP) 대사산물의 축적이 시냅스 손상과 신경변성에 기여한다는 메카니즘을 자세히 설명하는데 그 초점을 맞추고 있다. 많은 연구가 올리고머라고도 알려진 소형 응집체의 형성이 신경독성(neutoxicity)에 있어 주요한 역할을 한다는 가설을 뒷받침하고 있다. 이들 펩타이드 올리고머는 다이머, 트라이머, 테트라머, 펜타머 및 환상 구조를 형성할 수 있는 기타 고차 배열로 조직화될 수 있다. 이러한 올리고머가 높은 수준으로 존재하는 경우 해당 환자의 치매와 시냅스 손실이 예견된다. 보다 작은 전구체 피브릴보다 올리고머가 독성 종이라는 증거로 인해, 특별한 방식으로 이들 조기 응집 과정을 표적화하는 화합물이 PD, AD 및 관련 상태에 대한 잠재적인 새로운 치료법으로 유용할 수 있다.
[0006] 다양한 신경변성 질환이 신경독성 단백질-기반 응집체의 축적과 연관되어 있다. 특발성 파킨슨병 (idiopathic Parkinson' disease: IPD), 루이체가 있는 치매 (dementia with Lewy bodies: LBD), PD 치매(PDD), 치매를 동반하는 파킨슨병 (Parkinson's disease with dementia: PDD), 및 다계통 위축증 (MSA)에서, 신경독성 응집체는, 정상적인 상태 하에서 세포 내에 존재하는 시냅스 단백질인 α-시누클레인 (SYN)으로 구성된다. FTD 및 근위축측삭경화(amyotrophic lateral sclerosis: ALS)에서, 신경독성 응집체는 타우(tau), TDP-43, 또는 SOD1와 같은 다른 세포내 단백질들로부터 유래한다. AD와 같은 특정 질환에 있어서, SYN은 일차 단백질 (예컨대, Aβ 단백질)과 응집한다. 헌팅턴병에서는, 응집체가 Htt 단백질의 분해 산물로부터 형성된다.
[0007] α-시누클레인의 축적은 암, 특히 흑색종 암 세포에서도 암시되어 왔다. Pan et al., PLoS One 2012, 7(9), e45183. 그러므로, 이러한 축적을 억제하는 화합물은 흑색종을 비롯한 다양한 암의 치료에 유용한 것으로 입증될 수 있다.
[0008] 이들 단백질 응집 과정에는 2개의 메카니즘이 연루되어 있다. 먼저, 미스폴드된 단백질 및/또는 응집된 단백질들이 다양한 세포막 구조에 앵커링한다. 세포질막 또는 세포 소기관(예컨대 미토콘드리아 또는 리소좀)의 막에 대한 미스폴드 또는 응집된 분자들의 결합은 단백질 전사, 자가포식현상, 미토콘드리아 기능 및 포어 형성을 방해할 수 있다. 예를 들어, 신경변성 SYN은 응집하여 시누클레인 단백질의 c-말단 영역의 특수 부분에 의해, 세포막 내의 지질과 상호반응한다. 이 영역에 결합하는 화합물들은 단백질-단백질 또는 단백질-지질 상호반응을 억제할 수 있으므로 세포독성 SYN 또는 기타 단백질의 올리고머화 및 막 상호반응을 차단하는데 이용될 수 있다. 두 번째 프로세스에서는 응집된 단백질이 앵커링된 서브유닛으로부터 방출되어 인접 세포로 전파된다. 독성 단백질 응집체의 이러한 세포-대-세포 전파는 이어서 신경변성 및 증상 악화의 해부학적 진전의 기저를 이룰 수 있다. 표적 단백질들과 상호반응하는 소분자 약물들은 방출 및/또는 전파를 제한함으로 해서, 응집된 단백질들의 세포독성 효과를 감소시킬 수 있다.
[0009] 단백질 응집 억제제 화합물들이 PCT 공개번호 Nos. WO2011/084642, WO2013/148365, WO2013/134371, 및 PCT 출원번호 No. PCT/US2013/050719에 설명되어 있다.
[0010] 바람직한 약학 특성을 갖는 단백질 응집 저해제들에 대한 필요성이 여전히 존재한다. 어떤 헤테로아릴 아미드 화합물들이 본 발명의 이와 같은 맥락에서 단백질 응집 조절 활성을 갖는 것으로 밝혀졌다.
발명의 개요
[0011] 한 가지 측면에서, 본 발명은 다음 화학식 (I)의 화합물 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염에 관한 것이다:
Figure pct00001
식 중
R1은 H, 할로, C1- 4알킬, 또는 CF3;
R2는 H, -CF3, 또는 치환되지 않거나 할로 또는 -CF3에 의해 치환된 C1- 4알킬;
A는 5원 헤테로아릴 고리;
Y는 부재하거나 또는 C1- 4알킬렌;
R3 및 R4는 이들이 결합한 질소와 함께 치환되지 않거나 C1- 4알킬로 치환된 모노시클릭 헤테로시클로알킬 고리를 형성하거나; 또는 Y가 C1- 4알킬렌이면, R3 및 Y는 이들이 결합한 질소와 함께 모노시클릭 헤테로시클로알킬 고리를 형성하고, R4는 H 또는 C1- 4알킬이다.
[0012] 특정 구체예에서, 화학식 (I)의 화합물은 후술하는 발명의 상세한 설명에 설명되거나 예시된 종들로부터 선택된다.
[0013] 또 다른 측면에서, 본 발명은 화학식 (I)의 화합물 적어도 1종 또는 약제학적으로 허용가능한 그의 염을 포함하는 의약 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 의약 조성물은 약제학적으로 허용가능한 부형제를 더 포함할 수 있다. 본 발명은 또한 의약으로서 사용하기 위한, 화학식 I의 화합물 또는 약제학적으로 허용가능한 그의 염에 관한 것이기도 하다.
[0014] 또 다른 측면에서, 본 발명은 신경변성 질환 또는 단백질 또는 펩타이드 응집과 연관된 병태의 치료 방법에 관한 것으로서, 상기 방법은 이러한 처리를 필요로 하는 대상자에게 적어도 1종의 화학식 (I)의 화합물 또는 약제학적으로 허용가능한 그의 염의 유효량을 투여하는 것을 포함하여 이루어진다. .
[0015] 또 다른 측면에서, 본 발명은 단백질 또는 펩타이드 응집과 관련된 질병 또는 의학적 상태를 치료하는 방법에 관한 것으로서, 상기 방법은 이러한 치료를 필요로 하는 대상자에게 적어도 1종의 화학식 (I)의 화합물 또는 약제학적으로 허용가능한 그의 염을 투여하는 것을 포함하여 이루어진다. 본 발명은 또한 이러한 질병 및 의학적 상태의 치료를 위한 의약의 제조에 있어서 화학식 (I)의 화합물의 용도 및 상기 화합물 및 염의 이러한 질병 및 의학적 상태의 치료를 위한 용도에 관한 것이다.
[0016] 또 다른 측면에서, 본 발명은 세포 내에서 단백질 또는 펩타이드 응집의 축적을 방해하거나, 또는 세포 내에서 단백질 또는 펩타이드 응집을 예방하거나, 둔화시키거나, 역전시키는 방법에 관한 것으로, 이 방법은 세포를 적어도 1종의 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 염, 및/또는 본 발명의 적어도 1종의 의약 조성물과 접촉시키는 것을 포함하여 이루어지되, 여기서 상기 접촉은 시험관내(in vitro), 생체외(ex vivo), 또는 생체내(in vivo)에서 이루어지는 것이다.
[0017] 본 발명의 부가적인 구체예, 특징 및 장점들은 이하의 상세한 설명과 본 발명의 실시를 통해 더욱 명확해질 것이다.
[0018] 간결한 설명을 위해, 본 명세서에 인용된 특허문헌을 비롯한 간행물 개시 내용은 그 전체가 본 발명에 참조 병합된다.
[0019] 도 1은 생물학적 실시예 3의 결과를 나타낸 도면이다. 도 1A에서, Y축 (I/Io)은 지질막의 존재(I) 또는 부재(Io) 하에, ASYN (평균 잔기 3-23)에 대한 이종핵 단일양자 코히어런스 (heteronuclear single quantum coherence: HSQC) 분광 시그널 강도의 비(ratio)이다. 도 1B에서, ASYN 잔기 3-23의 평균 I/Io 비는 추가된 실시예 1 화합물의 농도의 함수로서 플로팅되었다.
[0020] 도 2는 생물학적 실시예 4에 설명된 바와 같이, 실시예 1 화합물의 부재 및 존재 하에 ASYN 올리고머의 전자현미경 이미지를 정량화한 도면이다.
[0021] 도 3은 생물학적 실시예 5에 설명된 바와 같이, GFP-태그된 인간 ASYN을 발현하는 B103 신경모세포종 세포에서 ASYN의 축적에 미치는 실시예 1 화합물의 효과를 나타낸 도면이다.
[0022] 도 4는 라운드빔 태스크 모델에서 트랜스제닉 마우스에 미치는 1 mg/kg 및 5 mg/kg 용량의 실시예 1 화합물의 효과 및 생물학적 실시예 6A의 결과를 나타낸 도면이다.
[0023] 도 5는 A11 항체를 이용하여 뇌(cerebral) 및 뇌 해마 (hippocampal brain) 균질물의 생물학적 실시예 6A 도트 블랏 분석 결과를 나타낸 도면이다.
[0024] 도 6은 Line 61 ASYN 트랜스제닉 마우스의 피질 신경망 및 신경세포체(neuronal cell bodies) 내 ASYN 면역표지(immunolabeling)에 미치는 실시예 1 화합물의 효과 및 생물학적 실시예 6B의 결과를 나타낸 도면이다. 도 6A는 ASYN 신경망 팔(arm)을, 그리고 도 6B는 연구대상 신경세포체 팔을 반영한 도면이다.
[0025] 도 7은 티로신 히드록실라제 (도 7A), NeuN (도 7B), 및 신경교원섬유 산 단백질(glial fibrillary acidic protein: GFAP; 도 7C)을 비롯한 신경변성-관련 마커의 면역표지에 미치는 실시예 1 화합물의 효과 및 생물학적 실시예 6B의 결과를 나타낸 도면이다.
[0026] 도 8은 라운드빔 모터 퍼포먼스 분석을 이용하여 Line 61 ASYN 트랜스제닉 마우스에서 감각운동 장애에 미치는 실시예 1 화합물의 효과 및 생물학적 실시예 6B의 결과를 나타낸 도면이다.
[0027] 도 9는 Line 61 ASYN 트랜스제닉 마우스의 대변 덩어리(fecal boli)에 미치는 실시예 1 화합물의 효과 및 생물학적 실시예 7A의 결과를 나타낸 도면이다.
[0028] 도 10은 Line 61 ASYN 트랜스제닉 마우스의 ASYN의 심장 농도에 미치는 실시예 1 화합물의 효과 및 생물학적 실시예 7B의 결과를 나타낸 도면이다.
[0029] 도 11은 PDNG78 트랜스제닉 마우스의 망막 내 ASYN-GFP를 갖는 이미지 면적의 백분율에 미치는 실시예 1 화합물의 효과 및 생물학적 실시예 7C의 결과를 나타낸 도면이다.
[0030] 도 12는 PDNG78 트랜스제닉 마우스의 혈관주위 및 신경말단 GFP 표지에 미치는 실시예 1 화합물의 효과 및 생물학적 실시예 7C의 결과를 나타낸 도면이다.
발명의 상세한 설명
[0031] 본 발명에 대해 더욱 설명하기에 앞서, 본 발명은 개시된 특정 구체예로 한정되는 것이 아니라, 이들 구체예들은 얼마든지 변형가능한 것으로 이해되어야 한다. 또한 본 명세서에 사용된 용어들은 단지 특정 구체예를 설명하기 위한 목적일 뿐, 본 발명의 범위를 이에 한정하려는 의도가 아니며, 본 발명의 범위는 첨부된 청구범위에 의해서만 한정되는 것이다.
[0032] 달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어들은 본 발명이 속한 기술분야의 통상의 기술자에게 잘 이해되는 것들이다. 본 명세서에 인용된 모든 특허, 특허출원, 출원공개 및 기타 간행물들은 그 내용 전체가 본 발명에 참조병합된다. 본 명세서에 제시된 정의가 본 명세서에 인용된 다른 특허, 특허출원, 출원공개 문헌의 정의와 다를 경우, 본 명세서에서 제공된 정의가 우선하는 것으로 한다.
[0033] 발명의 설명과 청구범위에서, 단수 형태를 나타내는 "a," "an," 및 "the"는 문맥상 반대 의미가 명확한 경우를 제외하고 복수도 포괄한다. 또한 청구범위는 임의(optional) 구성요소가 배제된채 작성되어 있을 수 있다. 그러므로, 이 문단은 청구범위 구성요소의 인용 또는 "부정적" 한정과 관련하여 "...단독", "..만"과 같은 배타적인 용어의 사용례에 대한 선행 근거 역할을 하도록 의도된 것이다.
[0034] 본 명세서에서, "비롯하다", "함유하다", "포함하다"라는 표현은 열린(open) 의미로 사용된 것으로서, 비제한적인 의미를 갖는다.
[0035] 보다 간결한 설명을 위해, 본 명세서에 제시된 정량적 표현들 중 몇몇은 "약"이라는 용어를 사용하여 정량되지 않았다. "약"이라는 표현이 명시적으로 사용되건, 그렇지 않건, 본 명세서에 주어진 모든 양은 실제로 주어진 값을 가리키며, 그러한 주어진 값이 그러한 주어진 값에 있어서 실험 조건 및/또는 측정 조건으로 인한 등가 및 근사값을 비롯하여, 본 발명이 속한 기술분야의 통상적인 기술에 기초할 때 합리적으로 추론될 수 있는 근사값을 의미하는 것이기도 하다. 수율이 백분율로서 주어지는 경우, 그러한 수율은 특정 화학양론적 조건 하에서 얻어질 수 있는 동일 물질의 최대량과 관련하여 주어지는 질량값을 가리킨다. 백분율로서 주어지는 농도는 달리 언급되지 않는 한, 질량비(mass ratios)를 가리킨다.
[0036] 달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어들은 본 발명이 속한 기술분야의 통상의 기술자에 의해 잘 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 비록 본 명세서에 설명된 것과 유사하거나 균등한 여하한 방법과 재료 역시 본 발명을 실시 또는 시험하는데 이용될 수 있지만, 바람직한 방법과 재료에 대해 이하에 설명한다. 본 명세서에서 논의되는 모든 간행물들은 그 문헌이 인용된 것과 관련된 방법 및/또는 재료를 개시 및 설명하는데 참조 병합된다.
[0037] 달리 언급한 경우를 제외하고, 본 발명의 구체예의 방법과 기술은 일반적으로 기술분야에 잘 알려진 통상적인 방법, 및 본 명세서 전반에 걸쳐 인용 및 논의된 다양한 일반적 그리고 보다 구체적인 참고문헌들에서 설명된 바와 같이 수행된다. 예컨대, Loudon, Organic Chemistry, Fourth Edition, New York: Oxford University Press, 2002, pp. 360-361, 1084-1085; Smith 및 March, March's Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure, 제5판, Wiley-Interscience, 2001.
[0038] 본 명세서에서 청구대상 화합물 사용된 명명법은 실시예에 설명되어 있다. 이 명명법은 일반적으로 통상적으로 이용되는 AutoNom 소프트웨어 (MDL, San Leandro, Calif.), 버젼 12.0.2를 이용하여 도출된 것이다.
[0039] 명확성을 기하기 위해, 개별 구체예들 맥락에서 설명된 본 발명의 어떤 특징들은 단일 구체예의 조합으로 제공될 수도 있다. 반대로, 간결명료성을 위해, 단일 구체예 맥락에서 설명된 본 발명의 다양한 특징들이 개별적으로 또는 적절한 서브콤비네이션으로 제공될 수도 있다. 변수로 나타내지는 화학기들에 관한 구체예들의 모든 조합이 본 발명에 포괄되며 본 명세서에서 각각의 모든 조합이 개별적으로 그리고 명시적으로, 이들 조합이 안정한 화합물을 포괄하는 한도 내에서 개시되어 있다 (즉, 분리, 특징화 및 생물학적 활성을 위해 테스트될 수 있는 화합물). 또한, 이러한 변수를 설명하는 구체예들에 수록된 화학기의 모든 서브콤비네이션 역시도 본 발명에 포괄되며 화학기의 각각의 모든 이러한 서브콤비네이션이 개별적으로 그리고 명시적으로 개시된 것처럼 특별히 포괄된다.
대표적인 구체예
[0040] 화학식 (I)의 몇몇 구체예에서, R1은 H, 플루오로, 클로로, 브로모, 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 부틸, 이소부틸, 2차-부틸, 또는 3차-부틸이다. 다른 구체예에서, R1은 H 또는 플루오로이다. 또 다른 구체예에서, R1은 H이다. 또 다른 구체예에서, R1은 플루오로이다.
[0041] 몇몇 구체예에서, R2는 H, -CF3이거나 또는 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 부틸, 이소부틸, 2차-부틸, 또는 3차-부틸로서 이들 각각은 치환되지 않거나 플루오로, 클로로, 브로모, 또는 -CF3에 의해 치환된 것이다. 또 다른 구체예에서, R2는 H이다. 또 다른 구체예에서, R2는 -CF3이거나 또는 할로 또는 -CF3에 의해 임의 치호나된 C1- 4알킬이다. 또 다른 구체예에서, R2는 치환되지 않거나 플루오로 또는 -CF3에 의해 치환된 C3- 4알킬이다. 또 다른 구체예에서, R2는 부틸이다. 또 다른 구체예에서, R2는 -CF3에 의해 치혼된 프로필이다.
[0042] 몇몇 구체예에서, R2는 "R" 입체화학 배열로 존재한다. 또 다른 구체예에서, R2는 "S" 입체화학 배열로 존재한다. 또 다른 구체예에서, 화학식 (I)의 화합물들은 R2 위치에서 입체화학적 혼합물이다. 또 다른 구체예에서, R2는 실제로 "R" 또는 실제로 "S" 입체화학 배열로 존재한다.
[0043] 몇몇 구체예에서, A는 두개 또는 세개의 헤테로원자 고리 원자를 갖는 5원 헤테로아릴 고리이다. 또 다른 구체예에서, A는 인접하지 않은 헤테로고리 원자를 2개 갖는 5원 헤테로아릴 고리이다. 또 다른 구체예에서, A는 티아졸, 티아디아졸, 옥사졸, 이미다졸, 또는 트리아졸이다. 또 다른 구체예에서, A는 티아졸 또는 티아디아졸이다. 또 다른 구체예에서, A는 티아졸이다
[0044] 몇몇 구체예에서, Y는 부재한다. 또 다른 구체예에서, Y는 -CH2-, -CH2CH2-, -CH(CH3)-, -(CH2)3-, -C(CH3)2-, -(CH2)4-, -CH((CH2)2CH3)-, -CH(CH(CH3)2)-, -CH(CH2CH3)CH2-, -CH(CH3)CH(CH3)-, -CH(CH3)(CH2)2-, 또는 -CH2CH(CH3)CH2-이다. 또 다른 구체예에서, Y는 -CH2-, -CH2CH2-, 또는 -CH(CH3)-이다. 또 다른 구체예에서, Y는 -CH2CH2-이다.
[0045] 몇몇 구체예에서, R3 및 R4는 이들이 결합한 질소와 함께, 치환되지 않거나 C1- 4알킬에 의해 치환된 모노시클릭 헤테로시클로알킬 고리를 형성한다. 또 다른 구체예에서, R3 및 R4는 이들이 결합한 질소와 함께 아제티딘, 피롤리딘, 피페리딘, 아제핀, 피페라진, 모르폴린, 티오모르폴린, 또는 1,1-디옥소-티오모르폴린을 형성하며, 이들 각각은 치환되지 않거나 C1- 4알킬에 의해 치환된 것들이다. 다른 구체예에서, R3 및 R4는 이들이 결합한 질소와 함께 각각 치환되지 않거나 C1- 4알킬에 의해 치환된 피페라진, 모르폴린, 또는 피롤리딘을 형성한다. 또 다른 구체예에서, R3 및 R4는 이들이 결합한 질소와 함께 각각 치환되지 않거나 C1- 4알킬에 의해 치환된 피페라진 또는 모르폴린을 형성한다. 또 다른 구체예에서, R3 및 R4는 이들이 결합한 질소와 함께 치환되지 않거나 C1- 4알킬에 의해 치환된 피페라진을 형성한다. 또 다른 구체예에서, R3 및 R4는 이들이 결합한 질소와 함께 피페라진 또는 4-메틸-피페라진을 형성한다.
[0046] 또 다른 구체예에서, Y는 C1- 4알킬렌, R3 및 Y는 R3가 결합한 질소와 함께 모노시클릭 헤테로시클로알킬 고리를 형성하고, R4는 H 또는 C1- 4알킬이다. 또 다른 구체예에서, Y 및 R3는 R3가 결합한 질소와 함께 피롤리딘 또는 피페리딘을 형성한다. 또 다른 구체예에서, R4는 H 또는 메틸이다.
[0047] 몇몇 구체예에서, R1은 H, R2는 H 또는 C1- 4알킬이고 (또는 H, 또는 C3-4알킬임), A는 티아졸, Y는 부재하거나 또는 에틸렌 (또는 부재하거나 에틸렌)이며, R3 및 R4는 이들이 결합한 질소와 함께 N-메틸피페라진을 형성한다.
[0048] 또 다른 구체예에서, 화학식 (I)의 화합물은 다음으로 이루어진 군의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염으로부터 선택된다:
Figure pct00002
Figure pct00003
Figure pct00004
Figure pct00005
[0049] 또 다른 구체예에서, 화학식 (I)의 화합물은 다음으로 이루어진 군의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염으로부터 선택된다:
Figure pct00006
[0050] 몇몇 구체예에서, 화학식 (I)의 화합물은 실시예 1-11 화합물, 및 약학적으로 허용가능한 그의 염으로부터 선택된다. 또 다른 구체예에서, 화합물은 염산염 형태이다. 또 다른 구체예에서, 화합물은 실시예 27 또는 28의 화합물, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염이다. 또 다른 구체예에서, 화학식 (I)의 R2는 (S) 입체화학 배열로 존재한다. 또 다른 구체예에서, 화학식 (I)의 R2는 (R) 입체화학 배열로 존재한다.
화학적 정의
[0051] "알킬"이라는 용어는 사슬 내에 1 내지 12개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지쇄 알킬기를 가리킨다. 알킬기의 예로는 메틸 (Me), 에틸 (Et), n-프로필, 이소프로필, 부틸, 이소부틸, 2차-부틸, 3차-부틸 (tBu), 펜틸, 이소펜틸, 3차-펜틸, 헥실, 이소헥실 및 통상의 기술과 본 발명에 제시된 교시에 비추어 전술한 예 중 어느 하나에 상응하는 것으로 간주될 수 있는 기를 들 수 있다.
[0052] "헤테로아릴"이라는 용어는 헤테로사이클 당 3 내지 12개의 고리 원자를 갖는 모노시클릭, 융합된 바이시클릭, 또는 융합된 폴리시클릭 방향족 헤테로사이클 (질소, 산소, 및 황으로부터 선택된 최대 4개의 헤테로원자들과 탄소 원자들로부터 선택된 고리 원자들을 갖는 고리 구조)을 가리킨다. 헤테로아릴기의 예로는 적절히 결합된 모이어티 형태로서 다음이 포함된다:
Figure pct00007
[0053] "할로겐"이라는 용어는 염소, 불소, 브롬 또는 요오드를 나타낸다. 용어 "할로"는 클로로, 플루오로, 브로모, 또는 요오도를 나타낸다.
[0054] "옥소"라는 용어는 카르보닐 산소를 나타낸다. 예를 들어, 옥소로 치환된 시클로펜틸은 시클로펜타논이다.
[0055] 통상의 기술자라면 상기 설명되거나 제시된 종들이 전부가 아니며, 이들 정의된 용어의 범위 내에서 부가적인 종들도 얼마든지 선택될 수 있음을 인식할 것이다.
[0056] "치환된"이라는 용어는 명시된 기 또는 모이어티가 1개 이상의 치환기를 가짐을 의미한다. "치환되지 않은"이라는 용어는 명시된 기가 치환기를 갖지 않음을 의미한다. "임의로 치환된"이라는 용어는 명시된 기가 치환되지 않거나 또는 1개 이상의 치환기에 의해 치환됨을 의미한다. "치환된"이라는 용어가 구조적인 시스템을 설명하는데 사용된 경우, 치환은 그 시스템 상에서 원자가가 허락하는 위치라면 어느 위치에서는 일어나도 무방한 것으로 의도된다.
[0057] 본 명세서에 설명된 모든 화학식들은 그 구조 화학식의 화합물 뿐만 아니라 어떤 변형 형태도 나타내도록 의도된 것이다. 예를 들어, 본 명세서에 주어진 화학식은 라세미 형태, 또는 1 이상의 에난티오머, 입체이성질체 또는 기하이성질체 또는 이들의 혼합물을 포함하도록 의도된 것이다. 이에 더해, 본 명세서에서 설명된 모든 화학식은 그러한 화합물의 수화물, 용매화물 또는 다형 또는 이들의 혼합물 역시도 칭하는 것으로 의도된다.
[0058] 본 명세서에 주어진 모든 화학식은 또한 표지되지 않은 형태는 물론 그 화합물의 동위원소 표지된 형태도 나타내도록 의도된다. 동위원소에 의해 표지된 화합물들은 1 이상의 원자들이 선택된 원자 질량 또는 질량수를 갖는 원자에 의해 대체된 것을 제외하고, 본 명세서에서 주어진 화학식에 의해 도시된 구조를 갖는다. 본 발명의 화합물 내로 통합가능한 동위원소의 예로는 수소 탄소, 질소, 산소, 인, 불소, 염소, 및 요오드의 동위원소, 예컨대, 각각 2H, 3H, 11C, 13C, 14C, 15N, 18O, 17O, 31P, 32P, 35S, 18F, 36Cl, 및 125I를 들 수 있다. 이와 같이 동위원소로 표지된 화합물들은 약물 또는 기질 조직 분포 분석 또는 환자의 방사선 치료를 비롯하여 대사 연구 (좋기로는 14C), 반응 운동 연구 (예컨대, 2H 또는 3H), 검출 또는 조영 기술 [예컨대 양전자방출 단층촬영술(PET) 또는 단일광자방출 컴퓨터 컴퓨터 단층촬영술(SPECT)]에 유용하다. 특히, 18F 또는 11C로 표지된 화합물이 PET 또는 SPECT 연구에 특히 바람직할 수 있다. PET 및 SPECT 연구는 에컨대, Brooks, D.J., "Positron Emission Tomography 및 Single-Photon Emission Computed Tomography in Central Nervous System Drug Development," NeuroRx 2005, 2(2), 226-236, 및 이 문헌에 이용된 참고문헌들에 설명된 바와 같이 수행될 수 있다. 또한, 중수소 (즉, 2H)와 같이 보다 무거운 동위원소에 의한 치환은 치료적으로 유리함으로 해서 예컨대 증가된 생체내 반감기 또는 투약 필요성 감소와 같이, 보다 큰 대사 안정성을 결과시킬 수 있다. 본 발명의 동위원소로 표지된 화합물 및 그의 전구약물들은 일반적으로 동위원소로 표지되지 않은 물질을 쉽게 이용가능한 동위원소 표지된 물질로 치환함으로써 후술하는 실시예 및 제조예 또는 반응식에 개시된 공정을 수행함으로써 제조될 수 있다.
[0059] 본 명세서에서 치환기에 대해 적용될 때, "Ci -j" (j > i임)이라는 명명법은 i와 j를 포함하여 i로부터 j까지의 탄소 멤버 각각 그리고 모두가 독립적으로 구현된 구체예를 칭한다. 예를 들어, C1- 3 이라는 용어는 탄소 멤버가 1개인 구체예 (C1), 탄소 멤버가 2개인 구체예(C2), 및 탄소 멤버가 3개인 구체예 (C3)를 독립적으로 칭하는 것이다.
[0060] 본 명세서에서 2치환기(disubstituent)라 함은 그러한 가능성의 두 가지 이상이 허용되는 다양한 결합성을 포괄하는 것이다. 예를 들어, 본 명세서에서 이치환기 -A-B- (여기서 A ≠B임)라 함은 첫번째 치환 멤버에 A가 결합되고 B는 두번째 치환 멤버에 결합된 경우를 가리킬 뿐만 아니라, A가 두번째 치환 멤버에 결합되고 B는 첫번째 치환 멤버에 결합된 경우도 포괄한다.
[0061] 본 발명은 또한 좋기로는 전술한 화합물 및 특히 본 명세서에 예시된 화학식 (I)의 화합물의 약제학적으로 허용가능한 염 및 이러한 염을 포함하는 의약 조성물, 그리고 이러한 염을 이용하는 방법에 관한 것이기도 하다.
[0062] "약제학적으로 허용가능한 염"이라 함은 본 발명에 따른 화합물의 유리산 또는 유리염기의 염을 가리키는 것으로서, 비독성이고, 생물학적으로 관용되며 또는 대상자에게 투여하기에 생물학적으로 적합한 염을 가리킨다. 이에 관하여는 일반적으로 S.M. Berge, et al., "Pharmaceutical Salts," J. Pharm. Sci., 1977, 66, 1-19를 참조할 수 있다. 약제학적으로 허용가능한 염들의 바람직한 예로는 약리적으로 유효하면서도 과도한 독성, 자극 또는 알레르기 반응 없이 대상자의 조직과 접촉하는데 적합한 것들을 들 수 있다. 본 명세서에 설명된 화합물은 충분히 산성인 기, 충분히 염기성인 기, 이들 두 가지 기들 모두, 또는 각 유형 2개 이상을 포함할 수 있으므로, 다수의 무기염기 또는 유기염기, 및 무기산 및 유기산과 반응하여 약제학적으로 허용가능한 염을 형성할 수 있다.
[0063] 약제학적으로 허용가능한 염들의 예로는 설페이트, 파이로설페이트, 바이설페이트, 설파이트, 바이설파이트, 포스페이트, 모노히드로겐-포스페이트, 디히드로겐포스페이트, 메타포스페이트, 파이로포스페이트, 클로라이드, 브로마이드, 요오다이드, 아세테이트, 프로피오네이트, 데카노에이트, 카프릴레이트, 아크릴레이트, 포르메이트, 이소부티레이트, 카프로에이트, 헵타오에이트, 프로피올레이트, 옥살레이트, 말로네이트, 숙시네이트, 수베레이트, 세바케이트, 푸마레이트, 말리에이트, 부틴--1,4-디오에이트, 헥신-1,6-디오에이트, 벤조에이트, 클로로벤조에이트, 메틸벤조에이트, 디니트로벤조에이트, 히드록시벤조에이트, 메톡시벤조에이트, 프탈레이트, 설포네이트, 메틸설포네이트, 프로필설포네이트, 베실레이트, 자일렌설포네이트, 나프탈렌-1-설포네이트, 나프탈렌-2-설포네이트, 페닐아세테이트, 페닐프로피오네이트, 페닐부티레이트, 시트레이트, 락테이트, γ-히드록시부티레이트, 글리콜레이트, 타르트레이트, 및 만델레이트를 들 수 있다. 약학적으로 허용가능한 염의 다른 리스트는 Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th Edition, Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1985에서 찾아볼 수 있다.
[0064] 염기성 질소를 함유하는 화학식 (I)의 화합물의 경우, 약제학적으로 허용가능한 염은 기술분야에서 이용가능한 적절한 방법, 예컨대, 유리염기를 염산, 브롬화수소산, 황산, 설팜산, 질산, 붕산, 인산 등과 같은 무기산 또는 아세트산, 페닐아세트산, 프로피온산, 스테아르산, 락트산, 아스코르브산, 말레산, 히드록시말레산, 이세티온산, 숙신산, 발레르산, 푸마르산, 말론산, 피루브산, 옥살산, 글리콜산, 살리실산, 올레산, 팔미트산, 라우르산, 피라노시딜산 예컨대 글루쿠론산 또는 갈락투론산, 알파-히드록시산 예컨대 만델산, 시트르산 또는 타르타르산, 아미노산 예컨대 아스파르트산 또는 글루탐산, 방향족산 예컨대 벤조산, 2-아세톡시벤조산, 나프토산 또는 신남산, 설폰산, 예컨대 라우르설폰산, p-톨루엔설폰산, 메탄설폰산 또는 에탄설폰산 또는 예시된 산들의 병용가능한 혼합물, 및 이 기술이 속한 기술분야의 통상의 기술자에게 동등하거나 적합한 대체물로 간주되는 것들의 혼합물로 유리 염기를 처리함으로써 제조할 수 있다.
[0065] 본 발명은 또한 화학식 (I)의 화합물의 약제학적으로 허용가능한 전구약물, 및 이러한 약제학적으로 허용가능한 전구약물을 이용하는 치료방법에 관한 것이기도 하다. "전구약물(prodrug)"이라는 용어는 대상자에게 투여되어, 가용매분해 또는 효소분해와 같은 화학적 또는 생리학적 프로세스를 통해 또는 생리적 조건 하에서 생체내에서 당해 화합물을 산생하는, 지정된 화합물의 전구체를 의미한다 (예컨대 생리적 pH 하에서 화학식 (I)의 화합물로 전환되는 전구약물). "약제학적으로 허용가능한 전구약물"이라 함은 비독성의 생물학적으로 관용성이거나, 대상자에게 투여하는데 생물학적으로 적합한 전구약물이다. 적절한 전구약물 유도체의 선택 및 제조에 대한 예시적인 공정이 예컨대 "Design of Prodrugs", ed. H. Bundgaard, Elsevier, 1985에 설명되어 있다.
[0066] 본 발명은 또한 화학식 (I)의 화합물의 약제학적으로 활성적인 대사산물, 및 본 발명의 방법에 있어서 이러한 대사산물의 사용에 관한 것이기도 하다. "약제학적으로 활성적인 대사산물"이라 함은 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 염의 체내 대사 결과에 따른 약리학적 활성 산물을 의미한다. 화합물의 전구약물과 활성 대사산물은 기술 분야에 공지이거나 이용가능한 일상적인 기술을 이용하여 결정될 수 있다. 예컨대, 문헌 [Bertolini et al., J. Med . Chem. 1997, 40, 2011-2016; Shan et al., J. Pharm . Sci. 1997, 86 (7), 765-767; Bagshawe, Drug Dev . Res. 1995, 34, 220-230; Bodor, Adv . Drug Res. 1984, 13, 255-331; Bundgaard, Design of Prodrugs (Elsevier Press, 1985); 및 Larsen, Design 및 Application of Prodrugs, Drug Design and Development (Krogsgaard-Larsen et al., eds., Harwood Academic Publishers, 1991)] 참조.
의약 조성물
[0067] 치료 목적에서, 본 발명에 설명된 화합물을 포함하는 의약 조성물은 1 이상의 약제학적으로 허용가능한 부형제를 더 포함할 수도 있다. 약제학적으로 허용가능한 부형제는 비독성이며 대상자에게 투여하기에 생물학적으로 적합한 물질이다. 이러한 부형제는 본 명세서에 설명된 화합물의 투여를 용이하게 해주며 활성 성분과 병용가능한 것이다. 약제학적으로 허용가능한 부형제의 예로는 안정화제, 윤활제, 계면활성제, 희석제, 항산화제, 결합제, 색소, 벌크화제, 유화제 또는 맛조절제를 들 수 있다. 바람직한 구체예에서, 본 발명에 따른 의약 조성물은 멸균 조성물이다. 의약 조성물은 통상의 기술자에게 공지이거나 입수가능한 컴파운딩 기술을 이용하여 제조할 수 있다.
[0068] 본 발명은 또한 멸균 조성물에 관한 국가 및 자치단체 규정에 순응하는 조성물을 비롯한, 멸균 조성물 역시도 포괄한다.
[0069] 본 명세서에 설명된 의약 조성물 및 화합물은 또한 다양한 투여제형 제조와 관련하여 기술분야에 알려진 통상의 방법에 따라, 적절한 약제학적 용매 또는 담체 중에 용액, 에멀젼, 현탁액 또는 분산액 형태, 또는 고체 담체와 함께 알약, 정제, 로젠지, 좌제, 새쉐이 또는 당과(dragees), 과립, 분말, 재조성용 분말, 캡슐로서 조제될 수 있다. 본 발명의 의약 조성물은 적절한 전달 경로, 예컨대, 경구, 비경구, 직장, 코, 국소 또는 눈 경로 또는 흡입에 의해 투여될 수 있다. 좋기로는 조성물이 정맥내 또는 경구 투여용으로 조성되는 것이 바람직하다.
[0070] 경구 투여의 경우, 본 발명의 화합물들은 정제나 캡슐과 같은 고체 제형 또는 용액, 에멀젼 또는 현탁액으로서 제공될 수 있다. 경구용 조성물을 제조하기 위해, 본 발명의 화합물은 예컨대 1일 약 0.01 내지 약 50 mg/kg, 또는 1일 약 0.05 내지 약 20 mg/kg, 또는 1일 약 0.1 내지 약 10 mg/kg의 투여량을 제공하도록 조성될 수 있다. 부가적인 투여량으로는 1일 약 0.1 mg 내지 약 1 g, 1일 약 1 mg 내지 약 10 mg, 1일 약 10 mg 내지 약 50 mg, 1일 약 50 mg 내지 약 250 mg, 또는 1일 약 250 mg 내지 1 g의 투여량을 들 수 있다. 경구용 정제는 희석제, 붕괴제, 결합제, 윤활제, 감미제, 풍미제, 색소 및 방부제와 같은 약제학적으로 허용가능하며 병용가능한 부형제와 혼합된 활성 성분(들)을 포함할 수 있다. 적절한 불활성 충전제의 예로는 탄산나트륨 및 탄산칼슘, 인산나트륨 및 인산칼슘, 락토스, 전분, 슈가, 글루코스, 메틸 셀룰로스, 마그네슘 스테아레이트, 만니톨, 소르비톨 등을 들 수 있다. 액상 경구용 부형제의 예로는 에탄올, 글리세롤, 물 등을 들 수 있다. 전반, 폴리비닐-피롤리돈(PVP), 전분 글리콜산나트륨, 미세결정성 셀룰로스는 붕괴제의 예이다. 결합제로는 전분 및 젤라틴을 들 수 있다. 윤활제는 존재할 경우, 마그네슘 스테아레이트, 스테아르산 또는 탈크일 수 있다. 소망되는 경우, 정제는 위장관내에서의 흡수를 지연시키기 위해 글리세릴 모노스테아레이트 또는 글리세릴 디스테아레이트와 같은 물질로 코팅되거나 또는 장용 코팅에 의해 코팅될 수도 있다.
[0071] 경구 투여용 캡슐에는 경질 및 연질 젤라틴 캡슐이 있다. 경질 젤라틴 캡슐의 제조를 위해, 활성 성분(들)을 고체, 반고체 또는 액체 희석제와 혼합할 수 있다. 연질 젤라틴 캡슐은 활성 성분을 물, 낙화생유 또는 올리브유와 같은 오일, 액상 파라핀, 단쇄 지방산의 모노-및 디-글리세라이드의 혼합물, 폴리에틸렌 글리콜 400, 또는 프로필렌 글리콜과 혼합하여 제조할 수 있다.
[0072] 경구 투여용 액체는 현탁액, 용액, 에멀젼 또는 시럽 형태이거나, 또는 사용 전에 물 또는 기타 적절한 비히클과 재조성되기 위한 건조한 제품 형태로서 제공되거나 또는 동결건조형태로 제공될 수 있다. 이러한 액체 조성물은 필요에 따라: 약제학적으로 허용가능한 부형제 예컨대 현탁제 (예컨대 소르비톨, 메틸 셀룰로스, 알긴산나트륨, 젤라틴, 히드록시에틸셀룰로스, 카복시메틸셀룰로스, 알루미늄 스테아레이트 겔 등); 비수성 비히클, 예컨대, 오일 (예를 들어 아몬드 오일 또는 분획화된 코코넛 오일), 프로필렌 글리콜, 에틸 알코올, 또는 물; 보존제 (예커ㅈ대, 메틸 또는 프로필 p-히드록시벤조에이트 또는 소르브산); 레시틴과 같은 습윤제, 및 소망에 따라, 풍미제 또는 착색제를 포함할 수 있다.
[0073] 본 발명의 조성물은 좌약으로서 직장 투여용으로 조성될 수도 있다. 정맥내, 근육내, 복강내, 비내 또는 피내 경로를 비롯한 비경구 용도의 경우, 본 발명의 물질은 멸균 수용액 또는 현탁액에 적절한 pH 및 등장성을 갖도록 조성되거나 또는 비경구 용도로 허용가능한 오일 중에 제공될 수 있다. 적절한 수성 비히믈로는 링거액 및 등장서어 염화나트륨을 들 수 있다. 이러한 형태는 앰풀이나 일회용 주사 기기와 같은 단위 투여 형태로, 적정 투여량이 나오도록 설계된 바이알과 같은 다회 투여 형태 또는 주사가능한 포뮬레이션을 제조하는데 사용될 수 있는 예비 농축물 또는 고체 투여형태로서 제공될 수 있다. 예시적으로, 수분 내지 수일에 걸친 기간 동안 약제학적 담체와 혼합된 제제를 약 1 내지 1000 ㎍/kg/분의 주입 투여량 범위로 투여할 수 있다.
[0074] 코, 흡입 또는 경구 투여용의 경우, 본 발명의 의약 조성물은 예를 들어 적절한 담체 역시도 함유하는 스프레이 포뮬레이션을 이용하여 투여될 수 있다.
[0075] 국소 투여의 경우, 본 발명의 화합물은 크림이나 연고 또는 이와 유사하면서 국소 투여에 적합한 비히클로서 조성되는 것이 바람직하다. 국소 투여의 경우, 본 발명의 화합물은 비히클에 대해 약 0.1% 내지 약 10% 농도의 약물 비율로 하여 약제학적 담체와 함께 혼합될 수 있다. 본 발명의 물질의 또 다른 투여 모드는 경피 전달을 위한 팻치 포뮬레이션을 이용하는 것이다.
[0076] 본 발명에서, "치료하다(treat)" 또는 "치료(treatment)"라는 표현은 "예방적(preventative)" 및 "치유적(curative)" 개념의 치료를 모두 포괄한다. "예방적" 치료라 함은 질병, 질병의 증상 또는 의학적 상태의 진행의 지연, 나타날 수 있는 증상의 억제 또는 질병이나 증상의 진행 또는 재발 위험성 감소를 의미한다. "치유적" 치료라 함은 기존의 질병, 증상 또는 상태의 위중도를 경감시키거나 악화를 억제하는 것을 의미한다. 따라서, 치료라 함은 기존의 질환 증상의 악화을 경감 또는 방지하거나, 부가적인 증상이 발생하는 것을 방지하거나, 증상의 전신적인 기저 원인을 경감 또는 방지하거나, 질환 또는 장애를 억제하는, 예컨대, 질환 또는 장애의 진행을 멈추고, 질환이나 장애를 완화시키거나, 질환 또는 장애의 회귀를 야기하거나, 질환 또는 장애에 기인하는 상태를 완화시키거나 또는 질환 또는 장애의 증상을 멈추는 것을 의미한다.
[0077] "대상자"라는 용어는 이러한 치료를 필요로 하는, 예컨대 인간과 같은 포유류 환자를 가리킨다.
[0078] 단백질 응집에 의해 특징지어지는 신경변성 질환의 예로는 알츠하이머병, 파킨슨병, 전두후두 치매, 루이체 치매 (루이체병), 치매를 수반하는 파킨슨병, 다계통 위축증 및 근위축측삭경화증, 및 헌팅턴병, 그리고 암 및 염증 질환을 들 수 있다.
[0079] 일 측면에서, 본 발명의 화합물 및 의약 조성물은 α-시누클레인, β-아밀로이드, 및/또는 tau 단백질 응집을 특이적으로 표적화한다. 따라서, 이들 화합물과 의약 조성물은 α-시누클레인, β-아밀로이드, 및/또는 tau 단백질의 응집을 방지, 역전, 둔화 또는 억제하는데 이용될 수 있고, 예컨대α-시누클레인, β-아밀로이드, 및/또는 tau 단백질의 응집과 같은 응집에 관련되거나 이러한 응집에 기인하는 신경학적 변성 질환을 치료하기 위한 방법에 이용된다. 좋기로는, 본 발명의 방법은 α-시누클레인, β-아밀로이드, 및/또는 tau 단백질의 응집과 관련된 신경변성 질환을 표적화한다. 바람직한 구체예에서, 본 발명의 치료 방법은파킨슨병, 알츠하이머병, 루이체 질환, 또는 다계통 위축증을 표적화하는 것이 좋다. 또 다른 구체예에서, 이 방법은 암 또는 흑색종을 표적으로 한다. 본 발명의 화합물, 조성물 및 방법은 신경 세포 사멸과 같이 단백질 응집에 이차적인 유해한 효과를 경감시키는데도 이용된다.
[0080] 몇몇 측면에서, 본 발명의 화합물, 조성물 및 방법은 α-시누클레인 (SYN) 응집을 표적화하는데 사용된다. 또 다른 측면에서, 본 발명의 화합물, 조성물 및 방법은 Aβ 응집을 표적화하는데 사용된다.
[0081] 본 발명의 억제 방법에서, "유효량"이라 함은 단백질 또는 펩타이드의 응집의 진행을 경감, 둔화시키거나 또는 역전시키는데 충분한 양을 의미한다. 응집량의 측정은 후술하는 바와 같은 통상적인 분석법에 의해 수행될 수 있다. 이러한 변형은 시험관내 분석을 비롯한, 다양한 설정에 있어서 유용하다. 이러한 방법에서, 세포는 신경 세포인 것이 바람직하다.
[0082] 본 발명에 따른 치료 방법에서, "유효량"이라 함은 이러한 치료를 필요로 하는 대상자에 있어서 소망하는 치료적 잇점을 일반적으로 가져오는데 충분한 양 또는 투여량을 의미한다. 본 발명의 화합물의 유효량 또는 투여량은 예컨대 투여 또는 약물 전달의 모드 또는 경로, 약물의 약동학, 감염 위중도 및 경로, 대상자의 건강 상태 및 체중, 그리고 치료 주치의의 판단을 감안하여, 모델링, 투여량 증가 또는 임상시험과 같은 퉁상적인 방법에 의해 확인가능하다. 예시적인 투여량은 대상자 체중 1 킬로그램 당 1일 약 1 ug 내지 2 mg의 활성물질, 좋기로는 약 0.05 내지 100 mg/kg/1일, 또는 약 1 내지 35 mg/kg/1일, 또는 약 0.1 내지 10 mg/kg/1일의 양이다. 또 다른 구체예에서 예시적인 투여량은 1일 약 1 mg 내지 약 1 g, 또는 1일 약 1-500, 1-250, 1-100, 1-50, 50-500, 또는 250-500 mg이다. 투여량은 일회로 또는 분할된 투여량 단위 (예컨대, BID, TID, QID)로 주어질 수도 있다.
[0083] 환자의 질환이 일단 개선되면, 투여량을 예방적 치료 또는 유지적 치료를 위해 조정할 수 있다. 예를 들어, 투여 빈도 또는 투여량 또는 두가지 모두를 증상에 대한 함수로서, 소망되는 치료 효과 또는 예방 효과가 유지되는 수준까지 저하시킬 수 있다. 물론, 만일 증상이 적절한 수준까지 경감되면, 치료를 중단할 수 있다. 그러나, 환자들은 증상의 재발이 있을 경우, 장기간 베이스로, 간헐적 치료를 필요로 한다. 환자들은 또한 장기간 베이스로 만성 치료를 필요로 할 수도 있다.
약물 조합(Drug Combinations)
[0084] 본 명세서에 설명된 본 발명의 화합물들은 신경변성 질환의 치료시 1 이상의 부가적인 활성 성분들과 조합하여 의약 조성물 또는 방법에 사용될 수 있다. 암에 적용되는 또 다른 부가적인 활성 성분들에는 암 화학치료제의 부작용을 완화시켜주는 물질 또는 다른 암 치료제가 포함된다. 이러한 조합은 본 발명의 화합물의 효능을 증가시키거나, 다른 질병 증상을 경감시키거나, 한 가지 이상의 부작용을 감소시키거나 요구되는 투여량을 감소시키는 역할을 할 수 있다. 부가적인 활성 성분들은 본 발명의 화합물과는 별도의 의약 조성물을 통해 투여하거나 또는 본 발명의 화합물과 동일한 의약 조성물과 합쳐서 포함될 수도 있다. 부가적인 활성 성분들은 본 발명의 화합물의 투여와 동시에 또는 투여 전, 또는 투여 후에 투여될 수 있다.
[0085] 부가적인 활성 성분들은 당해 질환과 연관된 다른 표적에 대해서 활성적인 것들을 비롯하여 신경변성 질환을 치료하는데 효과적인 것으로 알려지거나 밝혀진 것들이며, 이의 비제한적인 예로는, a) 단백질 미스폴딩을 어드레스하는 화합물 (예컨대 이들 단백질의 생성을 감소시키거나, 이의 소거를 증가시키거나 또는 이의 응집 및/또는 전파를 변경시키는 약물들); b) 이러한 장애 증상을 치료하는 화합물 (예컨대, 도파민 대체 요법); 및 c) 보충 메카니즘에 의해 신경보호제로서 작용하는 약물 (예컨대, 자가포식을 표적화하는 약물, 항산화제 약물 및 아데노신 A2A 길항제와 같이 다른 메카니즘에 의해 작용하는 약물들)을 들 수 있다.
[0086] 예컨대, 본 발명의 조성물과 제형(formulation) 및 치료 방법은 예컨대 파킨슨병, 알츠하이머병 (AD), 루이체병(LBD: Lewy body disease) 및 다계통 위축증 (multiple system atrophy (MSA)), 또는 관련 증상이나 상태와 같이, 예컨대, 시누클레인, 베타-아밀로이드 및/또는 tau 단백질 응집에 기인하거나 이와 관련된 퇴행성 신경 질환을 치료 또는 경감하는데 유용한 다른 약물 또는 의약품을 추가로 더 함유할 수 있다. 예컨대, 본 발명의 의약 조성물은 이러한 활성 물질을 1종 이상 부가적으로 포함할 수 있으며 본 발명의 치료 방법은 1 이상의 이러한 활성 물질의 유효량을 투여하는 것을 더 포함할 수 있다. 특정 구체예에서, 부가적인 활성성분은 항생제 (예컨대 항균성 또는 정균성 펩타이드 또는 단백질), 예컨대, 그램 양성 또는 그램 음성 박테리아에 효과적인 항생제, 플루이드, 사이토카인, 면역조절제, 소염제, 보체 활성화제, 예컨대 콜라겐-유사 도메인 또는 피브리노겐-유사 도메인(예컨대 피콜린), 탄수화물-결합 도메인 등을 포함하는 펩타이드 또는 단백질 및 이의 조합일 수 있다. 부가적인 활성 물질로는 이러한 조성물에 유용한 것들을 들 수 있고 부가적인 방법은 도파민 치료 약물, 카테콜-O-메틸 트랜스퍼라제(COMT) 해제, 모노아민 옥시다제 저해제, 인지 증강제 (예컨대 아세틸콜린스테라제 저해제 또는 메만틴), 아데노신 2A 수용체 길항제, 베타-세크레타제 저해제 또는 감마-세크레타제 저해제를 들 수 있다. 특정 구체예에서, 1 이상의 본 발명의 화합물은 의약 조성물 또는 치료 방법에서 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 1 이상의 약물과 조합될 수 있다: 타크린(Cognex), 도네페질(Aricept), 리바스티그민(Exelon) 갈란타민 (Reminyl), 피소스티그민, 네오스티그민, Icopezil (CP-118954, 5,7-디히드로-3-[2-[l-(페닐메틸)-4-피페리디닐]에틸]-6H-피롤로-[4,5-f-]-l,2-벤즈이속사졸-6-온 말리에이트), ER-127528 (4-[(5,6-디메톡시-2-플루오로-l-인다논)-2-일]메틸-l-(3-플루오로벤질)피페리딘 히드로클로라이드), 자나페질 (TAK-147; 3-[l-(페닐메틸)피페리디-4-일]-l-(2,3,4,5-테트라히드로-lH-l-벤즈아제핀- 8-일)-l-프로판 푸마레이트), 메트리포네이트 (T-588; (-)-R-.알파.-[[2-(디메틸아미노)에톡시]메틸] 벤조[b]티오펜-5-메탄올 히드로클로라이드), FK-960 (N-(4-아세틸-l-피페라지닐)-p-플루오로벤즈아미드-히드레이트), TCH-346 (N-메틸-N-2-피로피닐디벤즈[b,f]옥세핀-10-메아민), SDZ-220-581 ((S)-.알파.-아미노-5-(포스포노메틸)-[l,l'-bi페닐]-3-프로피온산), 메만틴(Namenda/Exiba) 및 1,3,3,5,5-펜타메틸시클로헥산-l-아민 (Neramexane), 타렌플루르빌(Flurizan), 트라미프로세이트(Alzhemed), 클로로퀴놀, PBT-2 ( 8-히드록시퀴놀린 유도체), l-(2-(2-나프틸)에틸)-4-(3-트리플루오로메틸페닐)-l, 2,3,6-테트라히드로피리딘, Huperzine A, 포사티렐린, 류프롤리드 또는 그의 유도체, 이소프로니클린, (3-아미노프로필)(n-부틸)포스핀산 (SGS-742), N-메틸-5-(3-(5-이소프로폭시피리디닐))-4-펜텐-2-아민 (이스프로니클린), 1-데칸아미늄, N-(2-히드록시-3-설포프로필)-N-메틸-N-옥틸-, 내염(inner salt); zt-1), 살리실레이트, 아스피린, 아목시프린, 베노릴레이트, 콜린 마그네슘 살리실레이트, 디플루니살, 파이슬라민, 메틸 살리실레이트, 마그네슘 살리실레이트, 살리실 살리실레이트, 디클로페낙, 아세클로페낙, 아세메타신, 브롬페낙, 에토돌락, 인도메타신, 나부메톤, 술린닥, 톨메틴, 이부프로펜, 카르프로펜, 펜부펜, 페노프로펜, 플루르비프로펜, 케토프로펜, 케토롤락, 록소프로펜, 나프록센, 티아프로펜산, 수프로펜, 메페남산, 메클로페남산, 페닐부타존, 아자프로파존, 메타미졸, 옥시펜부타존, 술핀프라존, 피록시캄, 로르녹시캄, 멜록시캄, 테녹시캄, 셀레콕시브, 에토리콕시브, 루미라콕시브, 파레콕시브, 로페콕시브, 발데콕시브, 니메술리드 아릴알칸산, 2-아릴프로피온산(프로펜스), N-아릴안트라닐산(페남산), 피라졸리딘 유도체, 옥시캄, COX-2 저해제, 술폰아닐리드, 필수 지방산, 및 미노작 (2-(4-(4-메틸-6-페닐피리다진-3-일)피페라진-l-일)피리미딘 디히드로클로라이드 히드레이트), 또는 그의 조합.
[0087] 암 치료를 위한 잠재적인 조합에는 예컨대 단백질 및 지질 키나아제 억제제(예컨대, PI3K, B-raf, BCR/ABL), 방사선조사 처리 증강제, 마이크로튜불 바인더 (예컨대 탁솔, 빈블라스틴), 세포대사 억제제, DNA 인터컬레이터, 토포이소머라제 억제제(예컨대, 독소루비신), 및 DNA 알킬화제가 포함된다.
분석
[0088] 본 명세서에 설명된 화합물들은 시험관내(in vitro), 생체내(in vivo) 또는 생체외(ex vivo) 실험 시스템을 비롯한 연구 조사에 이용될 수 있다. 실험 시스템의 비제한적인 예로는 세포 샘플, 조직 샘플, 세포 성분 또는 세포 성분들의 혼합물, 장기 전체 또는 장기의 일부 또는 생명체를 들 수 있다. 연구 조사 적용의 비제한적인 예로는 분석 시약으로서의 사용, 생화학적 경로의 규명 또는 본 발명의 1종 이상의 화합물들의 존재 또는 부재 하에 그 실험 시스템에 대한 다른 제제의 효과 평가를 들 수 있다.
[0089] 본 발명의 화합물들은 또한 생화학적 분석에도 이용가능하다. 몇몇 구체예에서, 본 발명에 설명된 화합물을 대상자로부터의 조직이나 세포 샘플과 함께 인큐베이션시켜서 화합물의 투여에 대한 대상자의 잠재 반응을 평가하거나 특정 대상자 또는 일군의 대상자들에 있어서 본 발명의 어떤 화합물이 최적 효과를 이끌어 내는지를 결정할 수도 있다. 이러한 분석법은 (a) 1종 이상의 바이오마커의 조절을 분석할 수 있는 대상자로부터 세포 샘플 또는 조직 샘플을 수득하는 단계; (b) 본 발명에 설명된 1종 이상의 화합물을 세포 샘플 또는 조직 샘플에 투여하는 단계; 및 (c) 상기 화합물 투여 후 1종 이상의 바이오마커의 조절 양을 상기 화합물 투여 전의 바이오마커의 상태와 비교하는 단계를 포함한다. 임의로, 단계 (c)에 이어서, 상기 분석법은 단계 (c)에서 결정된 조절 양에 기반하여 단백질 응집과 연관된 질병 또는 의약적 병태를 치료하는데 이용될 수 있는 화합물을 선택하는 부가적인 단계 (d)를 포함할 수도 있다.
화학 합성
[0090] 본 발명의 방법에 유용한 이적인 화합물들을 이하에서 일반적인 제조방법과 함께 합성 반응식을 참조로 설명하며 그 이후에는 특정 구체예를 들어 설명한다. 통상의 기술자라면 본 발명에 설명된 여러갖 화합물들을 수득하는데 있어서, 희망 생성물을 생산하기 위해, 필요에 따라 보호기를 적절히 사용하거나 사용하지 않으면서 반응식에 따라, 궁극적으로 희망하는 치환기를 지니도록 출발물질을 적절히 선택할 수 있을 것이다. 또는, 궁극적으로 희망하는 치환기 대신, 반응식에 따라 지닐 수 있는 적절한 기를 희망하는 치환기로 적절히 대체할 수도 있다. 뿐만 아니라, 통상의 기술자라면 하기 반응식들에 도시된 전환은 특정 펜던트기의 관능성과 상용가능한(compatible) 순서이면 어떠한 순서로든 수행가능함을 인식할 것이다. 하기 일반 반응식에 묘사된 각각의 반응들은 좋기로는 약 0℃ 내지 사용된 유기용매의 환류 온도 범위에서 수행되는 것이 바람직하다. 달리 명시하지 않는 한, 변수들은 화학식 (I)에서 상기 정의된 바와 같다. 본 명세서에서 설명된 동위원소 표지된 화합물들은 적절히 표지된 출발물질을 이용하여 하기 설명된 방법에 따라 제조된다. 이러한 물질들은 일반적으로 방사능표지된 화학시약의 시중 공급업체로부터 구득가능하다.
Figure pct00008
[0091] 화학식 (I)의 화합물을 반응식 A에 설명된 바와 같이 제조한다. 아미노-에틸 인돌 유도체 A1는 상업적으로 구득하거나 또는 반응식 B에 따라 제조한다. 표준 아미드 형성 조건 하에서 화합물 A1을 활성화된 아실 화합물 A2와 커플링시켜 화학식 (I)의 화합물을 생성한다 (여기서 X는 예컨대, -OH 또는 -Cl임).
Figure pct00009
[0092] 반응식 B에 도시된 바와 같이, 메틸-인돌을 아실화시킨 다음 환원 아민화에 의해 치환된 인돌 A1을 제조한다.
Figure pct00010
[0093] 헤테로시클릭 화합물 C4를 반응식 C에 따라 제조한다. 어떤 화합물 A, C1, A-CO2R (여기서 R은 H 또는 C1- 4알킬임), 및 C2는 상업적으로 구득가능하다. 몇몇 구체예에서, 헤테로사이클 A를 할로겐화시켜 할로 화합물 C1을 얻은 다음 이를 아실화시켜 이관능화된(bis-functionalized) 화합물 C2를 얻는다. 다른 구체예에서는, 화합물 A-CO2R을 할로겐화시켜 화합물 C2를 얻는다. 표준 아미드 커플링 조건 하에서 아민 HNR3R4와의 커플링에 의해 화합물 C3가 생성된다. 에스테르 C3를 가수분해하여 아미노산 C4를 얻고 이를 반응식 A에 나타난 바와 같이 커플링 반응에 사용할 수 있다.
Figure pct00011
[0094] 반응식 D에 나타난 바와 같이, 메틸-헤테로시클릭 화합물 D1을 예컨대 파라포름알데히드와 일치시켜(homologated), 히드록시에틸 화합물 D2를 제공한다. 예컨대 할라이드 또는 토실레이트로서 히드록실기를 활성화시키고, HNR3R4로 대체하여, 아미노 화합물 D3를 수득한다. 헤테로시클릭 고리를 아실화시켜 에스테르 D4를 얻고 이를 가수분해하여 아미노산 D5를 얻는다.
실시예
[0095] 다음 실시예들은 어디까지나 본 발명을 구체적으로 설명하기 위한 목적으로 제공되는 것으로 본 발명이 이들 실시예로 한정되는 것은 아니다. 통상의 기술자라면 화학식 (I)의 다른 화합물들을 생산하기 위해 적절한 출발물질과 시약을 선택하여 다음의 합성 반응 및 반응식들을 변형시킬 수 있음을 인식할 것이다.
실시예 1: N -(1-(1H-인돌-3-일) 헥산 -2-일)-2-(4- 메틸피페라진 -1-일)티아졸-5-카르복스아미드.
Figure pct00012
[0096] 단계 1.
Figure pct00013
건조 1,2-디클로로에탄 (80 mL) 중 화합물 1A (6 g, 45.8 mmol)의 용액에AlCl3 (18.3 g, 137.4 mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 혼합물을 25℃로 승온시키고 30분간 교반하였다. 혼합물을 0℃로 냉각하고 화합물 1B (6.2g, 51.3mmol)를 적가하였다. 혼합물을 25℃에서 48 h 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 빙수에 서서히 붓고 디클로로메탄 (DCM, 3회 (3x))으로 추출하였다. 유기층을 염수로 세척하고 (3x), Na2SO4로 건조 및 농축하였다. 잔사를 컬럼(20:1 페트롤륨 에테르/EtOAc)으로 정제하여 화합물 1C (4.8 g, 49%)를 황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.16 (br s, 1H), 7.39 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.37 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.23 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.15 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.15 (s, 1H), 3.83 (s, 2H), 2.50 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 1.54-1.63 (m, 2H), 1.24-1.29 (m, 2H), 0.86 (t, J = 7.6 Hz, 3H).
[0097] 단계 2.
Figure pct00014
[0098] MeOH (150 mL) 중 화합물 1C (4.8 g, 22.3 mmol)의 혼합물을 AcONH4 (3.35 g, 44.6 mmol) 및 NaBH3CN (2.8 g, 44.6 mmol)에 첨가하였다. 혼합물을 24 시간 환류시켰다. 혼합물을 농축하고 잔사를 DCM (150 mL)에 용해시킨 다음, 염수로 세척하고(3x), Na2SO4 건조시킨 다음 농축하여 조질의 화합물 1D (2.4 g, 50%)를 황색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.09 (s, 1H), 7.54 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.29 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.03-7.18 (m, 2H), 6.98 (s, 1H), 3.01-3.03 (m, 1H), 2.89 (dd, J = 14.0, 4.0 Hz, 1H), 2.52 (dd, J = 14.0, 8.8 Hz, 1H), 1.18-1.50 (m, 8H), 0.85 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
[0099] 단계 3.
Figure pct00015
아세토니트릴 (70 mL) 중 화합물 1E (2.2 g, 10.0 mmol), N-메틸피페라진 (1.1 g, 11.0 mmol), 및 K2CO3 (3.4 g, 24.9 mmol)의 혼합물을 80℃에서 24 시간 교반하였다. 혼합물을 농축하고 H2O로 다음 EtOAc로 추출하였다 (3x). 유기층들을 한데 모아 건조 및 농축시켜 화합물 1G (2.5 g, >100%)를 갈색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.85 (s, 1H), 4.28 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.58 (t, J = 5.6 Hz, 4H), 2.50 (t, J = 5.6 Hz, 4H), 2.33 (s, 3H), 1.32 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
[0100] 단계 4.
Figure pct00016
THF (20 mL) 중 화합물 1G (2.0 g, 8.3 mmol)의 혼합물에 H2O (40 mL) 중NaOH (1.33 g, 33.2 mmol) 용액을 첨가하였다. 혼합물을 80℃에서 24 시간 교반하였다. 혼합물을 농축하여 THF를 제거하고 n-BuOH로 추출하였다. 유기층을 건조 및 농축하여 화합물 1H (1.38 g, 66.7%)를 백색 고체로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.55 (s, 1H), 3.49-3.52 (m, 4H), 2.53-2.56 (m, 4H), 2.36 (s, 3H).
[0101] 단계 5. THF (5 mL) 및 CH2Cl2 (50 mL) 중 화합물 1H (1.1 g, 5.1 mmol)의 혼합물에 화합물 1D (2 g, 8.09 mmol)를 첨가한 다음, 벤조트리아졸-1-일-옥시트리피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트 (PyBOP, 3.18 g, 6.12 mmol) 및 DIPEA (2.6 g, 20.4 mmol)를 첨가하였다. N2 하 25℃에서 24시간 후, 혼합물을 H2O (40 mL)로 희석하고 DCM으로 추출하였다 (3x). 유기층들을 한데 모아 Na2SO4로 건조, 농축하고 잔사를 예비-HPLC (Shimadzu LC-8A Preparative HPLC, Luna(2) C18 컬럼, NH4OAc 중 26%-56% 아세토니트릴에서 80 mL/분으로 20 분)로 정제하여 실시예 1의 화합물 (576 mg, 27 %)을 백색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.23 (s, 1H), 7.39 (1H, s), 7.38 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.22 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.07-7.21 (m, 2H), 7.06 (s, 1H), 5.50 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.40-4.46 (m, 1H), 3.56 (t, J = 5.2 Hz, 4H), 3.0-3.1 (m, 2H), 2.52 (t, J = 4.8 Hz, 4H), 2.36 (s, 3H), 1.26-1.60 (m, 6H), 0.88 (t, J = 7.2 Hz, 3H). LCMS: 100% (M+1+): 426.2.
별법 합성예
[0102] CH3CN (3 L) 중 화합물 3A (400 g, 0.98 mol, 하기 참조) 및 K2CO3 (340 g, 2.5 mol)의 혼합물에 화합물 1F (197 g, 1.97 mol)를 첨가하였다. 혼합물을 N2 분위기 하, 80℃에서 12 시간 교반하였다. 혼합물을 물(4 L)로 희석하고 DCM (4 L x 3)으로 추출하였다. 유기층들을 한데 모아 Na2SO4로 건조 및 농축하였다. 잔사를 1:1 페트롤륨 에테르/에틸 아세테이트로 세척하여 실시예 1의 화합물(200 g, 44%)을 백색 고체로서 얻었다. 에틸 아세테이트 (235 mL) 중 4 M HCl을 DCM (2 L) 중 실시예 1의 화합물 (200 g, 0.47 mol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1 시간 교반하고, 용매를 농축시킨 다음 잔사를 메틸 t-부틸 에테르 (1 L)로 재결정하였다. 얻어진 고체를 여과에 의해 수깆하보 감압하 50℃에서 건조시켜 실시예 1의 화합물의 HCl 염(210 g, 92%)을 수득하였다.
실시예 2: N-(2-(1H-인돌-3-일)에틸)-2-(4- 메틸피페라진 -1-일)티아졸-5- 카르복스아미드 .
Figure pct00017
[0103] 단계 1.
Figure pct00018
H2O (100 mL) 중 NaOH (4.1 g, 102 mmol)의 용액을 0℃에서 테트라히드로퓨란 (THF, 100 mL) 중 화합물 2A (20 g, 84.7 mmol)의 용액에 적가하였다. 혼합물을 10℃에서 1 시간 교반하였다. 혼합물을 HCl (6 M)로 중화시키고 EtOAc (3x)로 추출하였다. 유기층을 염수로 세척하고 Na2SO4로 건조 및 농축하여 화합물 2B (17.7 g, 100%)를 황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.21 (s, 1H).
[0104] 단계 2.
Figure pct00019
1,1-카르보닐-디이미다졸 (2.06 g, 12.75 mmol)을 THF (16 mL) 중 화합물 2B (2.6 g, 12.5 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1 시간 교반한 다음 트리에틸아민 (TEA, 2.53 g, 25 mmol) 및 화합물 2C (2 g, 12.5 mmol)로 처리하였다. 얻어진 혼합물을 실온에서 12 시간 교반하였다. 혼합물을 EtOAc로 희석하고 1M HCl (2x) 및 염수로 세척한 다음 Na2SO4로 건조 및 농축하여 화합물 2D (4.41 g, >100%)를 황색 고체로서 수득하였다.
[0105] 단계 3. CH3CN (6 mL) 중 화합물 2D (1 g, 5.7 mmol) 및 K2CO3 (1.0 g, 7.2 mmol)의 혼합물에 N-메틸피페라진 (0.6 g, 5.7 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 N2 분위기 하, 80℃에서 12 시간 교반하였다. 물을 첨가하고 혼합물을 DCM (5x)으로 추출하였다. 유기층들을 한데 모아 Na2SO4로 건조 및 농축하여 황색 고체 (0.8 g)를 수득하고, 이를 메틸 3차 부틸 에테르 (5 mL)로 세척하여 실시예 2의 화합물 (0.3 g, 29%)을 백색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.37 (m, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.56 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.40 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.38-7.35 (m, 2H), 7.16 (s, 1H), 7.07 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 6.98 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 3.48-3.44 (m, 6H), 2.90 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.42-2.39 (m, 2H), 2.22 (s, 3H). MS: (M+H+): 370.
실시예 3: N-(1-(1H-인돌-3-일) 헥산 -2-일)-2-(피페라진-1-일)티아졸-5- 카르복스아미드 .
Figure pct00020
[0106] 단계 1.
Figure pct00021
1,1-카르보닐-디이미다졸 (4.04 g, 24.96 mmol)을 THF (40 mL) 중 화합물 2B (5.19 g, 24.96 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 이 혼합물을 실온에서 1 시간 교반한 다음 TEA (7.56 g, 74.88 mmol) 및 화합물 1D (5.4 g, 24.96 mmol)로 처리하였다. 실온에서 12시간 후, 혼합물을 EtOAc로 희석하고, 1 M HCl (2x) 및 염수로 연속 세척한 다음 Na2SO4로 건조 및 농축하 화합물 3A (7.74 g, 76%)를 황색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, MeOD-d4) δ 8.36 (d, 1H, J = 8.4 Hz), 7.97 (s, 1H), 7.56 (d, J = 8 Hz, 1H), 7.30 (d, J = 8 Hz, 1H), 7.06 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.05 (s, 1H), 6.95 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 4.31-4.28 (m, 1H), 3.0-2.97 (m, 1H), 1.75-1.50 (m, 2H), 1.45-1.25 (m, 4H), 2.22 (t, J = 6.8 Hz, 3H). MS: (M+H+): 406, 408.
[0107] 단계 2.
Figure pct00022
CH3CN (12 mL) 중 화합물 3A (2 g, 5.7 mmol) 및 K2CO3 (1.77 g, 12.8 mmol)의 혼합물에 화합물 3B (0.92 g, 4.9 mmol)를 첨가하였다. N2 분위기 하 80℃에서 12시간 후, 물(30 mL)을 첨가하고 혼합물을 EtOAc (3x)로 추출하였다. 유기층들을 한데 모아 Na2SO4로 건조, 농축하고 컬럼 크로마토그래피 (10 내지 67% EtOAc/페트롤륨 에테르)로 정제하여 화합물 3C (2 g, 79%)를 황색 고체로서 수득하였다. 이 화합물을 추가 특징화하지 않고 다음 단계에 직접 사용하였다.
[0108] 단계 3. 메탄올 (10 mL) 중 화합물 3C (1 g, 2.0 mmol)의 혼합물을 HCl (메탄올 중 10 mL, 4 M)로 처리하였다. 실온에서 3 시간 교반한 후, 용매를 제거하고 잔사를 빙수(20 mL)에 붓고, NaHCO3로 pH를 9로 조정한 다음 EtOAc (2x)로 추출하였다. 유기층들을 한데 모아 Na2SO4로 건조 및 농축하여 황색 고체(0.45 g)를 수득하였다. 컬럼 크로마토그래피 (페트롤륨 에테르/DCM/MeOH 50/50/0 내지 0/90/10)로 정제하여 실시예 3의 화합물(0.32 g, 39%)을 백색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.16 (s, 1H), 7.64 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.39-7.36 (m, 2H), 7.18 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.13 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.05 (s, 1H), 5.53 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 4.46-4.38 (m, 1H), 3.58-3.49 (m, 4H), 3.06-2.96 (m, 6H), 2.05 (s, 1H), 1.65-1.60 (m, 1H), 1.48-1.32 (m, 5H), 0.90-0.86 (m, 3H). MS: (M+H+): 412.
실시예 4: N-(2-(1H-인돌-3-일)에틸)-2-(2-(4- 메틸피페라진 -1-일)에틸)티아졸-5-카르복스아미드.
Figure pct00023
[0109] 단계 1.
Figure pct00024
밀봉된 시험관에서 화합물 4A (50 g, 0.5 mol) 및 파라포름알데히드 (50 g)의 혼합물을 140℃에서 3 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 컬럼 크로마토그래피 (50% DCM/EtOAc)로 정제하여 화합물 4B (27 g, 41 %)를 담황색 오일로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) d 7.62 (s, 1H), 7.16 (s, 1H), 3.91-3.98 (m, 2H), 3.23-3.28 (m, 2H).
[0110] 단계 2.
Figure pct00025
THF (100 mL) 중 화합물 4B (27 g, 0.2 mmol)의 용액에 물 (100 mL) 중 NaOH (16.7 g, 0.4 mol) 용액을 0℃에서 첨가하였다. 10분간 교반한 후, 4-메틸벤젠-1-술포닐 클로라이드 (59.5 g, 0.3 mol)를 수차례 나누어 첨가하였다. 이 혼합물을 실온으로 승온시키고 도합 2 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 EtOAc (3x)로 추출하였다. 유기상을 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조 및 농축 후 컬럼 크로마토그래피 (헥산/EtOAc = 2:1)로 정제하여 화합물 4C (32 g, 54 %)을 무색 오일로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) d 7.75 (2H, d, J = 8 Hz, 2H), 7.65 (1H, d, J = 4 Hz, 1H), 7.32 (d, J = 8 Hz, 2H), 7.22 (d, J = 4 Hz, 1H), 4.40 (t, J = 8 Hz, 2H), 3.80 (t, J = 8 Hz, 2H), 2.45 (s, 3H).
[0111] 단계 3.
Figure pct00026
아세토니트릴 (300 mL) 중 화합물 4C (32 g, 0.11 mol)의 용액에 N-메틸피페라진 (16.9 g, 0.16 mol) 및 Cs2CO3 (55 g, 0.16 mol)를 첨가하였다. 혼합물을 60℃에서 밤새 교반한 다음, 혼합물을 여과하고 여액을 농축한 다음 잔사를 컬럼 크로마토그래피 (DCM/MeOH = 10:1)로 정제하여 화합물 4D (14 g, 47 %)을 담황색 오일로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) d 7.67 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 7.19 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 3.21 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 2.79 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 2.59 (s, 4H), 2.50 (s, 4H), 2.31 (s, 3H).
[0112] 단계 4.
Figure pct00027
무수 THF (70 mL) 중 화합물 4D (14 g, 66 mmol)의 용액에 n-BuLi (32 mL, 80 mmol)를 -78℃에서 적가하였다. 혼합물을 이 온도에서 30분간 교반한 다음, 메틸 카본클로리데이트 (7.52 g, 80 mmol)르 이 용액에 동일한 온도에서 적가하였다. 혼합물을 3 시간 교반하고, 이 동안 실온으로 승온시켰다. 혼합물을 포화 NH4Cl (50 mL) 수용액으로 희석하고 EtOAc로 추출한 다음 염수로 세척하고 Na2SO4로 건조 및 농축시켜 화합물 4E (14 g, 78 %)를 수득하였다. 이 조질의 생성물을 추가 정제 없이 다음 단계에 직접 사용하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) d 8.26 (s, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.19 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 2.77 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 2.58 (s, 4H), 2.49 (s, 4H), 2.17 (s, 3H).
[0113] 단계 5.
Figure pct00028
MeOH (100 mL) 중 화합물 4E (14 g, 52 mmol)의 용액에 물(39 mL) 중 NaOH (3.12 mL, 78 mmol) 용액을 첨가하였다. 실온에서 3 시간 후, 혼합물을 농축하고 EtOAc (30 mL)로 추출하였다. 수성상을 1N HCl을 이용하여 pH = 5-6으로 조정하고 EtOAc (3x)으로 추출하였다. 유기층들을 한데 모아 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조 및 농축하여 화합물 4F를 오렌지색 고체로서 수득하였다(12 g, 92%). 이 조질의 생성물을 추가 정제하지 않고 다음 단계에 직접 사용하였다.
[0114] 단계 6. THF (10 mL) 및 DCM (2 mL) 중 화합물 4F (0.8 g, 3.1 mmol)의 용액을 2-클로로-1-메틸-피리디늄 요오다이드 (Mukaiyama reagent, 1.0 g, 3.8 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (DIPEA, 1.5 g, 16 mmol)으로 처리한 다음 10분간 교반하였다. 이어서 혼합물을 2-(1H-인돌-3-일)에탄아민 (0.5 g, 3.1 mmol)으로 처리하고 혼합물을 50℃에서 3 시간 동안 교반하였다. 결과적인 침전물을 여과하고 여액을 진공 농축하였다. 잔사를 에틸 아세테이트에 용해시키고 물(10 mL) 및 염수 (10 mL)로 세척한 다음, Na2SO4로 건조 및 농축하였다. 잔사를 예비 HPLC (Shimadzu LC-8A, Gemini C-18, 0.04% NH4OH 수용액 중 12-42% CH3CN, 80 mL/분으로 20분)로 정제하여 실시예 4의 화합물 (200 mg, 16 %)을 담황색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) d 8.10 (s, 1H), 7.81 (1H, s, 1H), 7.65 (d, J = 8 Hz, 1H), 7.40 (d, J = 8 Hz, 1H), 7.21 (t, J = 8 Hz, 1H), 7.08 (s, 1H), 5.99 (br s, 1H), 3.77 (q, J = 6.2 Hz, 2H), 3.16 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 3.10 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 2.75 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.58 (br s, 4H), 2.49 (br s, 4H), 2.32 (s, 3H).
실시예 5: N-(1-(1H-인돌-3-일) 헥산 -2-일)-2-(2-(4- 메틸피페라진 -1-일)에틸)티아졸-5-카르복스아미드.
Figure pct00029
[0115] THF (10 mL) 및 DCM (2 mL) 중 화합물 4F (1.2 g, 5 mmol)의 용액을 무카이야마 시약 (Mukaiyama reagent) (1.65 g, 6.5 mmol) 및 DIPEA (1.9 g, 20 mmol)으로 처리한 다음 10분간 교반하였다. 이어서 혼합물을 화합물 1D (1.2 g, 5 mmol)로 처리하고 50℃에서 3 시간 ryr반하였다. 얻어진 침전물을 여과하고 여액을 진공 농축하였다. 잔사를 에틸 아세테이트 (30 mL)에 용해사고, 물 (10 mL) 및 염수(10 mL)로 세척한 다음 Na2SO4로 건조 및 농축하였다. 예비 HPLC (Shimadzu LC-8A, Gemini C-18, 0.04% NH4OH 수용액 중 25-55% CH3CN, 80 mL/분으로 20분)로 정제하여 실시예 5의 화합물(250 mg, 14 %)을 백색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) d 8.10 (s, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.64 (d, J = 8 Hz, 1H), 7.38 (d, J = 8 Hz, 1H), 7.19-7.21 (m, 1H), 7.13-7.14 (m, 1H), 5.13 (br s, 1H), 4.41-4.45 (m, 1H), 3.13-3.18 (m, 1H), 3.05-3.09 (m, 1H), 2.74-2.77 (m, 1H), 2.58 (br s, 4H), 2.49 (br s, 4H), 2.32 (s, 3H), 1.63-1.70 (m, 1H), 1.49-1.54 (m, 1H), 1.34-1.39 (m, 4H), 0.89 (t, J = 4 Hz, 3H).
실시예 6: N-(1-(1H-인돌-3-일) 헥산 -2-일)-2-(4- 메틸피페라진 -1-일) 옥사졸 -5-카르복스아미드.
Figure pct00030
[0116] 단계 1
Figure pct00031
THF (150 mL) 중 화합물 6A (15.0 g, 106 mmol)의 용액에 리튬 헥사메틸 디실라자이드 (178 mL, 170 mmol)를 -60℃에서 첨가하였다. 용액을 -50℃에서 1 시간 교반하였다. 이어서 헥사클로로에탄(37.8 g, 160 mmol)을 용액에 첨가하였다. 용액을 실온에서 12 시간 교반하였다. NH4Cl 포화수용액 (50 mL)으로 반응을 중단하고 EtOAc (50 mL)로 추출하였다. 유기층을 분리하여 Na2SO4로 건조하고 진공 농축한 다음 잔사를 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 6B (10 g, 56%)를 무색 오일로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.71 (s, 1H), 3.39 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 1.38 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
[0117] 단계 2.
Figure pct00032
아세토니트릴 (80 mL) 중 화합물 6B (5.5 g, 31.3 mmol), N-메틸피페라진 (9.4 g, 94 mmol), 및 K2CO3 (17.3 g, 125.2 mmol)의 혼합물을 80℃에서 2 시간 동안 가열 환류시켰다. 혼합물을 H2O로 희석하고 EtOAc로 추출하였다. 유기층을 분리하고, Na2SO4로 건조 및 진공 농축하여 화합물 6C (7 g, 94%)를 갈색 오일로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.52 (s, 1H), 4.32 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.66 (t, J = 4.8 Hz, 4H), 2.48 (q, J = 4.8 Hz, 4H), 2.34 (s, 3H), 1.34 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
[0118] 단계 3.
Figure pct00033
H2O (10 mL) 및 THF (10 mL) 중 화합물 6C (2.0 g, 8.4 mmol) 및 NaOH (0.33 g, 8.4 mmol)의 혼합물을 실온에서 2 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 진공 농축하여 화합물 6D (3.0 g, 조질)을 황색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, D2O) δ 7.26 (s, 1H), 3.51 (s, 4H), 2.49 (s, 4H), 2.23 (s, 3H).
[0119] 단계 4. DMF (30 mL) 중 화합물 6D (2.0 g, 9.5 mmol), 화합물 1D (1.64 g, 7.6 mmol), 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드 (EDC, 3.63 g, 19 mmol), 1-히드록시-벤조트리아졸 (HOBt, 2.57 g, 19 mmol), 및 TEA (1.92 g, 19 mmol)의 혼합물을 실온에서 12 시간 교반하였다. 이 혼합물을 물로 희석하고 EtOAc로 추출하였다. 유기층을 분리하고, 물(3x), 염수로 세척한 다음 Na2SO4로 건조 및 진공 농축하였다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피 (2 내지 10% MeOH/DCM)로 정제하여 실시예 6의 화합물(220 mg, 6%)을 백색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz CDCl3) δ 8.16 (s, 1H), 7.63 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.40 (s, 1H), 7.39 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.18 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.10 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.08 (s, 1H), 5.69 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 4.47 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 3.47 (d, J = 2.0 Hz, 4H), 3.08-2.98 (m, 2H), 2.49 (t, J = 4.4 Hz, 4H), 2.36 (s, 3H), 1.66-1.51 (m, 1H), 1.51-1.49 (m, 1H), 1.39-1.27 (m, 4H), 0.90 (d, J = 7.2 Hz, 3H).
실시예 7: N-(1-(1H-인돌-3-일) 헥산 -2-일)-5-(4- 메틸피페라진 -1-일)-1,3,4-티아디아졸-2-카르복스아미드.
Figure pct00034
[0120] 단계 1.
Figure pct00035
DMF (300 mL) 중 화합물 7A (60 g, 0.313 mol), K2CO3 (130 g, 0.94 mol), 및 메틸 피페라진의 용액을 40℃에서 3 시간 교반하였다. 반응 혼합물을 물에 붓고 CH2Cl2로 추출하였다. 유기층을 물로 세척하고, Na2SO4로 건조 및 농축하여 화합물 7B (58.5 g, 73%)를 황색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.37-4.47 (m, 2H), 3.60-3.71 (m, 4H), 2.47-2.60 (m, 4H), 2.34 (s, 3H),1.35-1.47 (m, 3H).
[0121] 단계 2.
Figure pct00036
[0122] THF (30 mL) 중 화합물 7B (5.0 g, 19.53 mmol)의 용액에 1 N aq. NaOH (30 mL)을 실온에서 첨가하고 혼합물을 3 시간 교반하였다. 혼합물을 농축하여 THF를 제거하고, 1 N aq. HCl로 pH를 8로 조정한 다음, 동결건조시켜 산 7C (5.25 g, 100%)를 황색 고체(NaCl)로서 얻은 다음 이를 추가 정제 없이 다음 단계에 사용하였다. 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 3.68 (m, 4H), 2.91 (m, 4H), 2.57 (s, 3H).
[0123] 단계 3. DCM (5 mL) 및 DMF (15 mL) 중 화합물 7C (450 mg, 2 mmol)의 용액에 EDC (400 mg, 2 mmol) 및 HOBt (310 mg, 2 mol)를 0℃에서 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 30분간 교반하였다. 화합물 1D (500 mg, 2 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 혼합물을 40℃에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 H2O로 희석하고 EtOAc로 추출하였다. 유기층을 Na2SO4로 건조 및 농축하여 조질의 생성물을 얻고 이를 컬럼 크로마토그래피 (페트롤륨 에테르/DCM/MeOH 50/50/0 내지 0/10/1) 및 재결정 처리하여(MeOH) 실시예 7의 화합물(230 g, 15%, 2 뱃치)을 회황색(off-yellow) 고체로서 얻었다. 1H NMR: (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.74 (s, 1H), 8.61 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.56 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.30 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.09 (s, 1H), 7.05-7.02 (m, 1H), 6.96-6.93 (m, 1H), 4.14 (s, 1H), 3.50 (s, 4H), 2.99-2.84 (m, 2H), 2.42 (s, 4H), 2.21 (s, 3H), 1.57 (s, 2H), 1.25-1.21 (m, 4H), 0.80 (s, 3H).
실시예 8: N-(1-(1H-인돌-3-일) 헥산 -2-일)-5-(4- 메틸피페라진 -1-일)-4H-1,2,4-트리아졸-3-카르복스아미드.
Figure pct00037
[0124] 단계 1.
Figure pct00038
1 M 황산 중 화합물 8A (4.5 g, 35 mmol)의 교반 용액에 물 (20 mL) 중 소듐 니트라이트(2.41 g, 52.5 mmol) 용액을 0℃에서 적가한 다음, 물(35 mL)을 더 첨가하였다. 25분 후, 물 (35 mL) 중 KBr (8.33 g, 70 mmol) 및 구리(I) 브로마이드(4.51 g, 10.5 mmol) 혼합물을 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 20℃에서 3 시간 교반한 다음 혼합물을 에틸 아세테이트 (3x)로 추출하고 추출물들을 한데 모아 염수 (30 mL)로 세척하고, Na2SO4로 건조 및 농축하여 화합물 8B (2.9 g, 43%)을 백색 고체로서 수득하였다. ES-API 실측치: 191.9, 189.9.
[0125] 단계 2.
Figure pct00039
DCM (5 mL) 및 THF (15 mL)의 혼합물 중 화합물 8B (2.9 g, 15 mmol)의 용액에 무카이야마 시약(5 g, 19.5 mmol) 및 DIPEA (5.8 mL)를 첨가하였다. 10분간 교반한 후, 1-(1H-인돌-3-일)헥산-2-아민 1D (3.3 g, 15 mmol)를 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 50℃에서 3 시간 교반하였다. 혼합물을 DCM으로 희석하고 물로 세척하였다. 유기상을 Na2SO4로 건조 및 농축하고 잔사를 실리카겔 (20:1 DCM/MeOH) 상에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 8C (2.7 g, 47%)를 담황색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) d 7.96 (br s, 1H), 7.54 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.23 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.07-7.11 (m, 2H), 7.01-7.04 (m, 1H), 6.96 (br s, 1H), 4.38 (d, J = 4 Hz, 1H), 2.95 (d, J = 4 Hz, 1H), 1.61 (br s, 1H), 1.39-1.46 (m, 1H), 1.19-1.28 (m, 4H), 0.78 (s, 3H).
[0126] 단계 3. 화합물 8C (778 mg, 2 mmol) 및 N-메틸피페라진 (1 g, 10 mmol)의 혼합물을 밀봉 시험관 내, 120℃에서 밤새 교반하였다. 에틸 아세테이트 (20 mL)를 첨가하고 침전된 고체를 여과하였다. 여액을 물 및 염수로 세척하였다. 용액을 Na2SO4로 건조, 농축하고 예비 TLC (10:1 DCM/MeOH)로 정제하여 실시예 8의 화합물 (184 mg, 18%)를 황색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.43 (br s, 1H), 7.54 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.26 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.19 (s, 1H), 7.05 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 6.96-7.00 (m, 3H), 4.32 (d, J = 4 Hz, 1H), 3.42 (s, 4H), 2.28-2.29 (m, 2H), 2.50 (s, 4H), 2.28 (s, 3H), 1.56-1.62 (m, 1H), 1.41-1.46 (m, 1H), 1.22-1.33 (m, 4H), 0.79 (t, J = 8.0 Hz, 3H).
실시예 9: N-(1-(1H-인돌-3-일) 헥산 -2-일)-2-(4- 메틸피페라진 -1-일)-1H-이미다졸-5-카르복스아미드.
Figure pct00040
[0127] 단계 1.
Figure pct00041
THF (200 mL) 및 TEA (40 g, 400 mmol) 중 이미다졸 9A (20 g, 294 mmol)의 용액에 디메틸술파밀 클로라이드 (55 g, 383 mmol)를 0℃에서 서서히 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 300 mL의 물에 붓고 에틸 아세테이트 (3x)로 추출하였다. 용액을 물 및 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조한 다음 농축시켜 화합물 9B (42 g, 89%)를 무색 오일로서 수득하고, 이를 실온에서 1 시간 정치한 후 응고시켰다. 이 고체 물질을 추가 정제 없이 다음 단계에 직접 사용하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) d 7.86 (s, 1H), 7.23 (s, 1H), 7.11 (s, 1H), 2.82 (s, 6H).
[0128] 단계 2.
Figure pct00042
무수 THF (100 mL) 중 화합물 9B (10 g, 57 mmol)의 용액에 n-BuLi (27.3 mL, 68 mmol)를 -78℃에서 적가하였다. 용액을 이 온도에서 30분간 교반하였다. 이어서 퍼브로모 메탄(20.5 g, 62.7 mmol)을 -78℃에서 첨가하고 혼합물을 3시간에 걸쳐 실온으로 승온시킨 다음 실온(25℃)에서 밤새 계속 교반하였다. 혼합물을 NH4Cl (50 mL) 포화수용액으로 희석하고 DCM (3x)으로 추출하였다. 유기층들을 한데 모아 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조 및 농축시켜 잔사를 MPLC (헥산/DCM 1:1)로 정제하여 화합물 9C (8.4 g, 57%)를 라이트(light) 오일로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) d 7.41 (s, 1H), 7.00 (s, 1H), 3.01 (s, 6H).
[0129] 단계 3.
Figure pct00043
디옥산 (100 mL) 중 화합물 9C (10 g, 39 mmol) 및 N-메틸피페라진 (12 g, 118 mmol)의 혼합물을 90℃에서 밤새 교반하였다. 용액을 물에 붓고 DCM (3x)으로 추출하였다. 유기층들을 한데 모아 Na2SO4로 건조 및 농축하고 잔사를 컬럼 크로마토그래피 (10:1 DCM/MeOH 10:1)로 정제하여 화합물 9D (3.6 g, 34 %)를 갈색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) d 7.27 (s, 1H), 6.84 (s, 1H), 3.43 (m, 8H), 2.97 (s, 3H), 2.91 (s, 6H).
[0130] 단계 4.
Figure pct00044
무수 THF (40 mL) 중 화합물 9D (3.6 g, 13 mmol)의 용액에 n-BuLi (6.3 mL, 16 mmol)를 -78℃에서 적가하였다. 용액을 이 온도에서 30분간 교반한 다음 메틸 카보노클로리데이트 (1.48 g, 16 mmol)를 첨가하였다. 이 혼합물을 -78℃에서 3시간 ryr반한 다음 실온으로 승온시켰다. 혼합물을 NH4Cl (50 mL) 포화수용액으로 희석하고 DCM (3x)으로 추출하였다. 유기층들을 한데 모아 Na2SO4로 건조 및 농축하고 잔사를 컬럼 크로마토그래피 (60:1 DCM/MeOH) 정제하여 화합물 9E (1.5 g, 54%)를 갈색의 점성있는 오일로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) d 7.29 (s, 1H), 3.76 (s, 3H), 3.50 (m, 4H), 2.77 (s, 6H), 2.51 (m, 4H), 2.28 (s, 3H).
[0131] 단계 5.
Figure pct00045
화합물 9E (1.5 g, 4.5 mmol) 및 진한 HCl (7.5 mL)의 혼합물을 60℃에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 진공 농축하고 잔사를 MeOH (10 mL)로 처리하였다. 침전된 백색 고체를 여과 수집하고 진공 건조하여 화합물 9F (800 mg, 84%)를 염산염으로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, D2O) d 7.53 (s, 1H), 4.09 (d, J = 14 Hz, 2H), 3.67 (t, J = 12.4 Hz, 2H), 3.59 (d, J = 12.4 Hz, 2H), 3.31 (t, J = 12.4 Hz, 2H), 2.97 (s, 3H).
[0132] 단계 6. DCM (2 mL) 및 THF (10 mL) 중 화합물 9F (1.05 g, 5 mmol)의 용액에 무카이야마 시약(1.65 g, 6.5 mmol) 및 DIPEA (1.9 g, 20 mmol)를 첨가하였다. 10분간 교반 후, 1-(1H-인돌-3-일)헥산-2-아민 1D (1.1 g, 5 mmol)을 첨가하고 혼합물을 50℃에서 3 시간 교반하였다. 용매를 진공 제거하고 잔사를 에틸 아세테이트로 희석하고 물 및 염수로 세척한 다음 Na2SO4로 건조 및 농축하였다. 잔사를 예비 TLC (10:1 DCM/MeOH)로 정제하여 실시예 9의 화합물(200 mg, 8.3%)을 담황색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, MeOD-d4) d 7.59 (d, J = 8 Hz, 1H), 7.30 (d, J = 8 Hz, 1H), 7.29 (s, 1H), 7.08-7.04 (m, 1H), 7.07 (s, 1H), 6.98-6.94 (m, 1H), 4.33-4.26 (m, 1H), 3.40-3.35 (m, 4H), 2.99-2.97 (m, 2H), 2.70-2.68 (m, 4H), 2.44 (s, 3H), 1.68-1.60 (m, 1H), 1.55-1.45 (m, 1H) 1.38-1.28 (m, 4H), 0.86 (t, J = 7 Hz, 3H).
실시예 10: N-(1-(5- 플루오로 -1H-인돌-3-일) 헥산 -2-일)-2-(2- 모르폴리노에틸 )티아졸-5-카르복스아미드.
Figure pct00046
[0133] 단계 1.
Figure pct00047
아세토니트릴 (127 mL) 중 화합물 4C (12.7 g, 44.8 mmol)의 용액을 모르폴린 (5.6 g, 65 mmol) 및 Cs2CO3 (21.3 g, 65 mmol)로 처리하고 50℃에서 밤새 교반하였다. 이 혼합물을 여과하고 여액을 농축한 다음 잔사를 컬럼 크로마토그래피 (CH2Cl2/MeOH = 10:1)로 정제하여 화합물 10A (5.6 g, 63%)을 담황색 오일로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, MeOD) d 7.66 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 7.19 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 3.72 (m, 4H), 3.22 (m, 2H), 2.77 (m, 2H), 2.52 (m, 4H).
[0134] 단계 2.
Figure pct00048
무수 THF (56 mL) 중 화합물 10A (5.6 g, 28 mmol)의 용액에 n-BuLi (13.6 mL, 17 mmol)를 -78℃에서 적가하였다. 혼합물을 이 온도에서 30분간 교반한 다음 메틸 카르보노클로리데이트 (3.2 g, 17 mmol)를 이 용액에 -78℃에서 적가하였다. 혼합물을 3 시간 교반하였다. 이 기간 동안 온도가 실온(25℃)으로 승온되었다. NH4Cl 포화수용액 (50 mL)을 첨가하여 반응을 중단시켰다. 혼합물을 EtOAc로 추출하고 염수로 세척한 다음 소듐 설페이트로 건조 및 농축하여 화합물 10B (4.0 g, 60%)를 수득하였다. 이 조질의 생성물을 추가 정제 없이 다음 단계에 직접 사용하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.27 (s, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.72-3.76 (m, 4H), 3.21 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 2.77 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 2.54 (s, 4H).
[0135] 단계 3.
Figure pct00049
MeOH (30 mL) 중 화합물 10B (3 g, 11.7 mmol)의 용액에 물(9 mL) 중 NaOH (0.7 g, 17 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 3 시간 교반하였다. MeOH를 진공 하에 제거하고 용액을 EtOAc (30 mL)로 세척하였다. 수성상을 1N HCl을 이용하여 pH = 5-6으로 조정하고 EtOAc (50 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 염수로 세척하고, 소듐 설페이트로 건조 및 농축시켜 화합물 10C를 오렌지색 고체(3 g, 100%)로서 수득하였다. 이 조질의 생성물을 추가 정제없이 다음 단계에 직접 사용하였다.
[0136] 단계 4.
Figure pct00050
CH2Cl2 (35 mL) 중 화합물 10D (3.5 g, 18 mmol)의 용액에 CDI (3.52 g, 21.8 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2 시간 교반한 다음 N,O-디메틸히드록실아민 염산염(2.3 g, 26 mmol)을 혼합물에 첨가하였다. 이 혼합물을 실온에서 4 시간 교반하였다. 혼합물을 물(30 mL)로 희석하고 EtOAc (50 mL x 2)로 추출하였다. 유기상을 염수로 세척하고, 소듐 설페이트로 건조, 농축하여 화합물 10E (4.5 g, 100%)를 갈색 오일로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.33 (s, 1H), 7.15-7.30 (m, 3H), 6.90-6.92 (m, 1H), 3.87 (s, 2H), 3.73 (s, 3H), 3.28 (s, 3H).
[0137] 단계 5
Figure pct00051
무수 THF (72 mL) 중 화합물 10E (3.57 g, 15 mmol)의 용액에 n-BuLi (46 mL, 91 mmol)를 -78℃에서 첨가하였다. 혼합물을 이 온도에서 10분간 교반하였다. 수성 HCl (1 M, 30 mL)을 첨가하여 반응을 중단시켰다. 혼합물을 EtOAc로 추출하고, 염수로 세척한 다음 소듐 설페이트로 건조 및 농축하여 화합물 10F (3.5 g, 70%)를 수득하였다. 이 조질의 생성물을 추가 정제없이 다음 단계에 직접 사용하였다.
[0138] 단계 6.
Figure pct00052
MeOH (140 mL) 및 THF (30 mL) 중 AcONH4 (46 g, 0.6 mol) 및 NaBH3CN (9.5 g, 0.15 mol) 용액에 화합물 10F (3.5 g, 15 mmol)를 첨가하였다. 이 혼합물을 실온에서 20시간 동안 교반하였다. MeOH 및 THF를 진공 제거하고 포화 NaHCO3를 잔사에 첨가하였다. 용액을 EtOAc (100 mL x 2)로 추출하였다. 유기상을 염수로 세척하고 소듐 설페이트로 건조 및 농축하여 화합물 10G (4.0 g, 100%)를 갈색 오일로서 수득하였다. 이 조질의 생성물을 추가 정제없이 다음 단계에 직접 사용하였다.
[0139] 단계 7. 디클로로메탄 (6.4 mL) 및 THF (16 mL) 중 화합물 10C (1.6 g, 6.6 mmol)의 용액에 무카이야마 시약(2.2 g, 8.6 mmol) 및 DIPEA (1.6 g, 6.6 mmol)를 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 10분간 교반하였다. 화합물 10G (1.6 g, 6.8 mmol)를 첨가하고 혼합물을 40℃에서 2 시간 교반하였다. 얻어진 침전물을 여과하고 여액을 진공 농축하였다. 잔사를 에틸 아세테이트 (30 mL)에 용해시키고 물(10 mL) 및 염수 (10 mL)로 세척하고, 소듐 설페이트로 건조 및 농축시켰다. 잔사를 예비 HPLC (Shimadzu LC-8A 예비 HPLC, Luna(2) C18 컬럼, 10 mM NH4HCO3 수용액 중 25%-55% 아세토니트릴, 80 mL/분으로 20분)로 정제하여 실시예 10의 화합물 (300 mg, 9.8 %)을 백색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.38 (s, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.16 (t, J = 4.4 Hz, 1H), 7.01 (s, 1H), 6.81-6.86 (m, 1H), 5.80 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 4.33 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 3.63 (s, 4H), 3.05 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.89-2.94 (m, 2H), 2.64-2.66 (m, 2H), 2.43 (s, 4H), 1.55-1.58 (m, 1H), 1.42-1.44 (m, 1H), 1.22-1.31(m, 4H), 0.80 (t, J = 6.8 Hz, 3H).
실시예 11: N-(1-(1H-인돌-3-일) 헥산 -2-일)-2- 모르폴리노티아졸 -5- 카르복스아미드 .
Figure pct00053
[0140] THF (2 mL) 중 화합물 3A (200 mg, 0.49 mmol) 및 DIPEA (171 νL, 0.98 mmol)의 혼합물에 모르폴린 (42 νL, 0.49 mmol)을 첨가하였다. 이 혼합물을 밀봉된 Q-튜브 가압 반응기에서 170℃에서 1.5 시간 동안 교반하였다. 부가적인 모르폴린 (42 νL, 0.49 mmol)을 첨가하고 혼합물을 밀봉된 Q-튜브 가압 반응기에서 170℃에서 0.5 시간 동안 가열하였다. 혼합물을 농축하고 잔사를 컬럼 크로마토그래피 (0-5% MeOH/DCM)로 정제하여 실시예 11의 화합물 (148 mg, 73%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.08 (br s, 1H), 7.64 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.39 (s,1H), 7.37 (d, J = 8 Hz, 1H), 7.19 (dd, J = 7.5 Hz, 1H), 7.12 (dd, J = 7.5 Hz, 1H), 7.05 (d, J = 2 Hz, 1H), 5.57 (d, J = 8 Hz, 1H), 4.39-4.42 (m, 1H), 3.80 (t, J = 4.5 Hz, 4H), 3.51 (t, J = 4.5 Hz, 4H), 3.06 (dd, J = 14.5, 5.5 Hz, 1H ), 3.01 (dd, J = 14.5, 5.5 Hz, 1H ), 1.26-1.64 (m, 6H), 0.87 (t, J = 7 Hz, 3H). ESMS+: 413.6 [M+1].
[0141] 실시예 12-26의 화합물들을 상기 설명된 방법에 따라 제조할 수 있다.
실시예 27: ( S )-N-(1-(1H-인돌-3-일) 헥산 -2-일)-2-(4- 메틸피페라진 -1-일)티아졸-5-카르복스아미드 및
실시예 28: ( R )-N-(1-(1H-인돌-3-일) 헥산 -2-일)-2-(4- 메틸피페라진 -1-일)티아졸-5-카르복스아미드.
Figure pct00054
[0142] Chiralpak AD-H 컬럼 (250x30mm; 5μM id)을 이용하여 THAR 80 예비 SFC 상에서 에난티오머를 분리하였다. 라세메이트를 메탄올 (50mg/mL)에 용해시켜 매 주사 당 45 mg의 라세메이트를 로딩하였다. 70g/분의 유속에서 CO2 중 40% 2-프로판올 (첨가제: 0.05% NH3H2O)의 이동상 및 100 bar의 시스템 배압을 이용하여 분리하였다. 컬럼 온도는 40℃로 유지하였으며 220 nm에서 피크를 검출하였다. 총 사이클 시간은 6분이었다. 실시예 27 화합물 ((S)-N-(1-(1H-인돌-3-일)헥산-2-일)-2-(4-메틸피페라진-1-일)티아졸-5-카르복스아미드): LCMS (Xtimate C18, 2.1X30mm, 3μM id): 피크 1 RT: 2.036 (100%) MS: 426.2; 광학 회전 (Dichrom Polaraizer, 589 nM) -0.143(sd =0.0004); 키랄 순도 체 (OJ-H,40% MeOH (0.05% DEA)) 피크 1 RT: 3.61 (99.87%), 피크 Peak 2 RT: 5.3 (0.13%). 실시예 28 화합물 ((R)-N-(1-(1H-인돌-3-일)헥산-2-일)-2-(4-메틸피페라진-1-일)티아졸-5-카르복스아미드): LCMS (Xtimate C18, 2.1X30mm, 3μM id): 피크 1RT: 2.035 (98.77%) MS: 426.2. ㅍ피크 2RT: 2.373 (1.23%) MS: 427.2; 광학 회전 (Dichrom Polaraizer, 589 nM) +0.160 (sd =0.0003); 키랄 순도 체크 (OJ-H,40% MeOH (0.05% DEA)) 피크 1 RT: 3.6 (0.18%), 피크 2 RT: 5.23 (99.82%).
생물학적 실시예 1: α- 시누클레인 펩타이드 단편(4F)을 이용한 시험관내 형광 편광 분석.
[0143] 형광 편광 분석법은 α-시누클레인 펩타이드 단편의 자가 응집을 억제하는 화합물의 능력을 시험하기 위한 것이다. 펩타이드들을 실온에서 테스트 화합물(화합물 농도는 33.3 내지 0.3 μM이었음)의 존재 또는 부재 하에 60분간 인큐베이션시켰다. 샘플들을 485 nm 여기 및 520 nm 방출을 이용하여 형광 편광 모드에서 BMG Pherastar 플레이트 리더로 판독하였다 4-변수 논리 피트 (XLFit, IDBS Software)를 이용하여 데이터를 분석하였다. 펩타이드 4F (CTGFVKKDQLGK (SEQ ID NO: 1))를 American Peptide에 의해 준비하였다. 신선한 펩타이드 샘플을 5mM로 정제수에 재조성하고 50 mM NaCl과 함께 50 mM HEPES pH 7.4를 이용하여 최종 농도 100 nM로 희석하였다. 고체 화합물을 DMSO (10 mM)에 용해한 다음 완충액에 희석하였다.
[0144] 표 1에 테스트된 화합물들의 데이터를 나타내었다. 비교 화합물 A 및 B도 테스트하였다.
Figure pct00055
Figure pct00056
생물학적 실시예 2: 생체내 약동학 분석
[0145] 본 명세서에 설명된 화합물의 약동학 및 뇌 분포를, 수컷 C57BL/6 마우스들에서 1회 정맥 투여 또는 경구 투여 후에 탐지하였다. 54마리의 수컷 마우스들을 27마리씩 2개 군으로 나누었다. 그룹 1 (i.v.) 및 그룹 2 (p.o.) 동물들에게 테스트 화합물을 10 mg/kg (i.v.) 또는 2 mg/kg (p.o.)으로 투여하였다. 투여 전 및 투여한지 0.08, 0.25, 0.5, 1, 2, 4, 8, 및 24 시간 후(i.v.), 그리고, 투여 전 및 투여한지 0.25, 0.5, 1, 2, 4, 6, 8 및 24 h 시간 후 (p.o.)에 혈액 샘플을 수집하였다. 혈액을 항응집제로서 K2EDTA를 함유하는 표지된 마이크로원심분리 튜브에서, 각 시점에서 3마리 마우스 세트로부터 혈액을 채혈하였다. 전혈을 원심분리하여 혈장 샘플을 분리하고 이를 생물분석 전까지 -70℃에서 보관하였다. 혈액 샘플 수집 후, 마우스들을 CO2 질식시켜 인도적으로 안락사시키고 같은 시점에서 뇌를 꺼냈다. 수집 후, 뇌 샘플을 빙냉 포스페이트 완충염수(pH 7.4)로 세척하고, 여과지에서 살짝 말린 후, 칭량하고 폴리프로필렌 튜브에 넣었다. 추가의 뇌 샘플을 pH 7.4의 포스페이트 완충염수를 이용하여 균질화시켜 총 균질물 부피를 뇌 중량의 3배로 하였다. 이어서 샘플을 생물분석 전까지 -70℃에서 보관하였다. 모든 표본들을 아세토니트릴을 이용하여 단백질 침전에 의한 분석을 위해 가공하고 목적에 따라 적절히 LC/MS/MS 법(LLOQ: 1.01 ng/mL, 혈장 및 뇌)으로 분석하였다. Phoenix WinNonlin (버젼 6.3)의 비구획 분석 툴을 이용하여 약동학적 변수들을 계산하였다.
[0146] 이 분석으로부터 얻은 데이터를 표 2에 나타내었다.
Figure pct00057
생물학적 실시예 3: 지질 막과 α- 시누클레인의 상호반응에 미치는 테스트 화합물의 효과에 대한 NMR 분석
[0147] 지질 막의 존재 하에 전장 ASYN과 테스트 화합물과의 상호반응을 측정하기 위해, NMR 분석법을 수행하였다. NMR 측정은 20mM 포스페이트, pH=7.4, 100mM NaCl에서, Varian Direct Drive 600MHz 및 Varian Inova 800MHz 분광기를 이용하여 록 용매(lock solvent)로서 10% D2O를 이용하여 행하였다. NMRPipe을 이용하여 스펙트럼을 프로세싱하였다 (참조: F. Delaglio, S. Grzesiek, G. W. Vuister, G. Zhu, J. Pfeifer, A. Bax, J Biomol NMR 1995, 6, 277-293). α-시누클레인을 0.12mM 농도로 이용하고 1-팔미토일-2-올레오일-sn-글리세로-3-포스포글리세롤 (POPG)-리포좀을 (조내하는 경우) 0.8mg/ml 농도로 첨가하였다. 모든 1H-15N 상관 스펙트럼(correlation spectra)을 SOFAST 펄스 시퀀스로 기록하였다 (참조: P. Schanda, E. Kupce, B. Brutscher, J Biomol NMR 2005, 33, 199-211). 생리적 조건에 가까운 조건에서 공명 어사인먼트는 전술한 간행물로부터 쉽게 구득가능하였다(BMRB ID 16300; see J. N. Rao, Y. E. Kim, L. S. Park, T. S. Ulmer, J Mol Biol 2009, 390, 516-529). 리간드 적정(ligand titration)을 위해, 실시예 1의 화합물을 리포좀/ASYN 혼합물에 단계적으로 첨가하였다. 15N-1H 상관 스펙트럼을 각 단계별로 기록하고 시그널 간극을 희석 효과를 감안하면서 유리 형태의 ASYN를 참조로 하였다. 구득가능한 데이터의 노이즈를 줄이기 위해, ASYN의 몇가지 아미드 위치에서의 강도 비(intensity ratio)를 앞서 관찰된 SL1 및 SL2 결합 모드에 상응하도록 선택된 2개 영역에 대해 평균내었다 (참조: C. R. Bodner, A. S. Maltsev, C. M. Dobson, A. Bax, Biochemistry 2010, 49, 862-871).
[0148] 도 1에 도시된 바와 같이, ASYN에 대한 이종핵 단일양자 코히어런스(HSQC) 분광학 시그널 강도는 ASYN이 지질 막에 임베드된 경우 감쇠한다. HSQC의 이 지질-유도된 감쇠는 실시예 1 화합물에 의해 역전되었으므로, 이는 테스트 화합물이 ASYN과 지질 막과의 결부를 파괴하는 능력이 있음을 입증하는 것이다. 도 1A는 POPG 리포좀 존재 하에, ASYN 잔기의 함수로서 시그널 감쇠를 나타낸다. Y축(I/Io)은 지질 막의 존재 (I) 또는 부재 (Io) 하에 ASYN에 대한 HSQC 분광 시그널 강도 비이다. 도 1B에, ASYN 잔기 3-23의 평균 I/Io 비를, 첨가된 실시예 1의 화합물의 농도 함수로서 플로팅하였다. 이 플롯은 실시예 1의 화합물이 ASYN과 1-팔미토일-2-올레오일-sn-글리세로-3-포스포글리세롤 (POPG) (0.8 mg/mL) 리포좀과의 상호반응을 농도-의존 방식으로 역전시켰음을 보여준다. ASYN 잔기 66-76을 분석한 경우에도 유사한 결과가 얻어졌다.
생물학적 실시예 4: 지질 막의 환상 올리고머에 미치는 테스트 화합물의 효과
[0149] 지질 막 중 ASYN 올리고머의 형성에 미치는 테스트 화합물의 효과를 직접 보기 위해 전자 현미경을 이용하였다. 지질 단층을 갖는 Formvar 그리드를 50% ETOH 중 우라닐 아세테이트 포화용액으로 25분 간 카운터염색하였다. 이어서 그리드를 2% 비스무쓰 서브니트레이트 소적 상에 10분간 부유시키고, 다시 이중 증류수로 3회에 걸쳐 주의깊게 헹군 다음 완전히 건조시켰다. Zeiss EM10 투과전자현미경 Electron Microscope를 이용하여 그리드를 영상화하였다. 각각의 샘플 그리드로부터, 10,000x 배율의 전자 마이크로그래프 5-10개 및 40,000x 배율의 전자 마이크로그래프 5-10개 이미지를 얻었다. 최상의 네거티브를 주사하여 ImageJ 1.43 프로그램으로 분석하여 고차 전기장(100 x 100 nm) 당 환상 올리고머 갯수를 평가하였다(Rasband, W.S., ImageJ, U. S. National Institutes of Health, Bethesda, Maryland, USA, http://imagej.nih.gov/ij/, 1997-2014).
[0150] 이 연구에서, 실시예 1 화합물은 지질 막 중의 ASY의 환상, 고리형, 올리고머 형태의 축적을 극적으로 감수시키는 반면, 작은 비환성 응집체는 여전히 관찰되는 것으로 나타났다. 도 2A는 실시예 1의 화합물의 부재 및 존재 하에 지질 코팅된 Formvar 그리드 상에 형성된 ASYN 올리고머의 전자현미경 이미지를 나타낸 도면이다. 도 2B는 전자 현미경 이미지의 정량화를 반영하는 그래프이다. 실시예 1의 화합물은 10 nM의 낮은 농도에서도 Formvar 그리드 상에 검출된 환상 ASYN 올리고머의 갯수를 감소시켰다 (20회 측정에 대한 평균 ± SEM). 실시예 1 화합물은 ASYN에 상대적으로 준화학양론적(sub-stoichiometric) 농도에서 이러한 효과를 달성하였다. 이러한 발견은 실시예 1 화합물이 ASYN의 입체 배열을 안정화시켜 지질 막에서 고리형 올리고머를 형성할 가능성이 적다는 분자 다이나믹 모델링과 일치하는 것이다.
[0151] 이러한 결과는 실시예 1 화합물이 지질 막에 대한 ASYN 올리고머의 친화도를 감소시키는 방식으로 ASYN의 지질-결합 형태 및 올리고머 형태와 상호반응함을 시사하는 것이다. 실시에 1의 화합물은 ASYN 올리고머화 간섭, ASYN의 지질 막에 대한 결합 및 이들 막에서의 환상 고리형 올리고머("포어")의 형성을 간섭할 수 있었다. 이러한 결과는 실시예 1의 화합물이 ASYN의 응집을 변경하여, 파킨슨병에서 미스폴드되어 올리고머화된 ASYN의 신경독성에 기여하는 것으로 믿어지는 특정 올리고머 구조의 형성을 방지한다는 것도 시사하는 것이다.
생물학적 실시예 5: 세포 내 α- 시누클레인에 미치는 테스트 화합물의 효과
[0152] 인간 ASYN을 과발현하는 B103 신경모세포종 세포에서의 ASYN의 축적에 미치는 실시예 1의 화합물의 효과를 조사하였다. 이들 세포에서 GFP-태그된 ASYN을 발현하는데 렌티바이러스 발현계를 이용하였다. 발현 개시로부터 48 시간 후, 비히클 또는 실시예 1의 화합물 (0.1 또는 1.0 μM)을 다시 24시간 동안 첨가하였다. 이어서 축적된 GFP-ASYN의 양을 가시화하였다. 도 3에 나타난 바와 같이, 실시예 1의 화합물은 이들 세포에서 1.0 μM (*p<0.05 vs. 비히클 대조군)의 농도에서 GFP 형광 강도를 감소시켰다. 따라서 실시예 1의 화합물은 ASYN-과발현 세포에서 ASYN-GFPdml 농도를 감소시킨 것으로 밝혀졌다.
생물학적 실시예 6: 생체내 효능 연구
[0153] 파킨슨병 (PD)은 알파-시누클레인(ASYN)의 올리고머 형태의 비정상적인 축적에 의해 특징지어진다. ASYN의 이러한 독성 형태는 부분적으로, 세포막 내의 포어-유사 구조의 형성을 통해, PD 및 기타 시누클레인 병증에서 관찰되는 신경 장애 및 세포 사멸에 기여하는 것으로 가정되고 있다. 본 명세서에 설명된 화합물들은 ASYN의 이러한 독성 종의 형성 및 축적을 선택적으로 차단함으로써 PD-관련 증상 및 병인을 경감시키도록 설계되었다.
A) 파킨슨병의 트랜스제닉 마우스 모델
[0154] 실시예 1의 화합물을 Thy-1 프로모터 하에 인간 야생형 ASYN을 과발현하는 PD의 트랜스제닉 마우스 (Line 61 ASYN 트랜스제닉 마우스라고도 칭함)에서 평가하였다. 구체적으로, 실시예 1의 화합물을 3개월 동안 1일 1회 (주5일) aTant 0, 1, 또는 5 mg/kg (i.p.) 투여한 다음 PD-관련 감각운동 수행, 생화학적 변동 및 ASYN 및 관련 단백질에서의 신경병적 변화를 평가하였다.
[0155] The 주된 결과 척도로서 미끌어짐 횟수를 이용하여 감각운동 장애를 평가하는데 라운드 빔 태스크(Round Beam Task)를 이용하였다 (도 4). 트랜스제닉 마우스 모델의 생존성(viability)을 확인하기 위해, ASYN 트랜스제닉 및 비트랜스제닉(non-transgenic) 마우스들을 테스트하자, 비히클-처리된 트랜스제닉 대상체에 대한 미끌어짐 횟수는 비히클-처리된 비트랜스제닉 대조군에서의 미끌어짐 횟수보다 통계적으로 유의적으로 더 높았다 (****p<0.0001). 두가지 테스트 모두에서 실시예 1의 화합물로 처리된 트랜스제닉 마우스들은 비히클-처리된 트랜스제닉 마우스에 비해 미끌어짐이 통계적으로 유의적으로 감소하였다 ( # p<0.05 및 ## p<0.01 vs. 비히클-처리된 ASYN 트랜스제닉 마우스).
[0156] 뇌 피질 및 해마 뇌 균질물에 대한 웨스턴 블롯 분석 결과 트랜스제닉 ASYN 단백질 수준이 통계적으로 유의적으로 감소한 것으로 나타났다. 피질 균질물에서의 A11 항체 도트 블롯 방법(ASYN을 포함)을 이용한 올리고머 단백질의 생화학적 평가도 수행하였다. 피질 균질물 내의 올리고머의 A11 항체 도트 블롯 평가 결과,비히클-처리된 비트랜스제닉 대조군 마우스에 비해 비히클-처리된 ASYN 트랜스제닉 마우스에서 전두 피질의 세포질 분획에서 A11 면역염색의 통계적으로 유의적인 증가를 나타냄에 따라, 트랜스제닉 마우스 모델이 입증되었다 (도 5; *p<0.05). 실시에 1의 화합물 (5 mg/kg)에 의한 처리는 비히클-처리된 ASYN 트랜스제닉 마우스에 비해 마우스의 전두 피질 영역으로부터의 세포질 분획 내 올리고를 통계적으로 유의적으로 감소시켰다 (도 5; ### p<0.001).
B) Line 61 ASYN 트랜스제닉 마우스 모델
[0157] Masliah 및 동료들이 수행한 이전의 면역표지 연구결과 Line 61 ASYN 트랜스제닉 마우스의 피질 신경망에서 ASYN 면역표지가 통계적으로 유의하게 증가한 것으로 입증되었다 (Masliah E. et al., Science, 2000, 287(5456):1265-9). 이러한 신경병리학적 발견은 Masliah 및 동료들에 의해 설명된 방법을 이용한 본 연구에서도 재확인되었다. 실시예 1 화합물의 투여 (1 및 5 mg/kg 투여량) 결과 ASYN 면역표지에 미치는 효과에 의해 결정되는 바와 같이 ASYN 농도가 통계적으로 유의하게 감소되었다 (도 및 7). 비트랜스제닉/비히클 대조군에 비해 피질 신경망 ( **** p<0.0001) (도 6A) 및 ASYN 트랜스제닉 마우스( ** p<0.01) (도 6B)의 뉴런 세포체에서 밀리포어 항-α-시누클레인 항체를 이용한 ASYN 면역표지가 통계적으로 유의하게 증가하였다. 실시에 1의 화합물 (1 및 5 mg/kg)의 투여는 피질 신경망에서 α-시누클레인 면역표지를 통계적으로 유의하게 감소시키고(도 6A) ( #### p<0.0001 vs. 비히클 -처리된 ASYN 트랜스제닉 마우스), 및 5 mg/kg에서 ASYN 면역표지된 몇몇 뉴런 세포체에서 비통계적으로 유의적인 감소를 일으켰다 (도 6B).
[0158] 뿐만 아니라, 티로신 히드록실라제, NeuN, 및 GFAP를 비롯한 신경변성-관련 마커들의 정상화(normalization)도 관찰되었다.
[0159] 도 8에 도시된 바와 같이, Line 61 ASYN 트랜스제닉 마우스의 감각운동 장애에 미치는 0.5 mg/kg 및 1 mg/kg 투여량의 실시예 1 화합물의 효과를, 전술한 라운드 빔 모터 성능 분석법을 이용하여 조사하였다. 비히클-처리된 비트랜스제닉 대조군 대상자에 비해 비히클-처리된 ASYN 트랜스제닉 대조군 마우스에서 미끌어짐 횟수의 통계적으로 유의적인 증가가 관찰되었다(****p<0.0001). 1 mg/kg 투여량으로 실시예 1 화합물 처리하자 비히클-처리된 ASYN 트랜스제닉 마우스에 비해 ASYN 트랜스제닉 마우스에서 통계적으로 유의적인 개선 (미끌어짐 감소)이 나타났다 ( ## p<0.01). 0.5 mg/kg의 투여량에서, 실시예 1의 화합물은 비통계적으로 유의적인 미끌어짐 감소를 나타냈다.
[0160] 이와 함께, 이들 결과는 실시예 1의 화합물이 트랜스제닉 마우스 모델에서 감각운동, 생화학적 결과 및 신경병리학적 결과를 유의적으로 향상시켰음을 입증한다. 이러한 발견은 실시예 1의 화합물을 투여하면 파킨슨병/루이체 치매(PD/DLB)의 트랜스제닉 마우스 모델에서 거동적, 생화학적 및 신경병리학적 척도가 개선됨을 확인해주는 것이다.
생물학적 실시예 7: 생물학적 마커의 개발
A) 대변 덩어리 카운트(Fecal Boli Counts)
[0161] 번역가능한 기능 및 생화학적 바이오마커의 개발을 위한 일환으로, 새로운 환경에서 생산된 대변 덩어리 갯수 및 ASYN의 사후 심장 농도의 평가를 비롯한 부가적인 평가가 수행되었다.
[0162] 파킨슨 환자들의 50-80%는 만성 변비에 시달리고 있으며 진단보다 20+ 년만큼 선행될 수 있다s (Awad, R.A. World J. Gastroenterol . 2011, 17(46), 5035-5048; Kim, J.S. et al., J. Neurol . Sci . 2011, 310(1-2), 144-151). 관련된 증상에는 체류 시간 감소 및 EMG 이상증(괄약근, 직장항문 억제 리플렉스)이 포함되며, 부교감핵 및 신경 중 루이체 및 감소된 도파민 뉴럼을 비롯한 핵심적인 병리학적 발견이 포함된다. 이러한 장의 장애는 활동 수준 감소, 식이요법 변화 (음식 및 물), 파킨슨병의 약물 효과에 의해 복합된다.
[0163] 이전에 공개된 연구는 Line 61 ASYN 트랜스제닉 마우스들이 결장의 운동성, 대변 및 체중이 감소를 포함하였다 (Wang, L. et al. Neurogastroenterol . Motil. 2012, 24(9), e425-436). 본 연구의 경우, 자발적인 운동(locomotor) 활동 테스트 세션과 연계하여 대변 덩어리 카운트를 수행하였다. 5분의 테스트 세션 결과, 실험자는 테스트 방에 존재하는 대변 덩어리의 갯수를 카운트하고 그 결과를 도 9에 나타내었다. 비히클-처리된 ASYN 트랜스제닉 마우스의 경우 비히클-처리된 비트랜스제닉 대조군 마우스에 비해 새로운 환경에서 대변 덩어리 생성이 통계적으로 유의적으로 감소하였다 (*p<0.05). 실시예 1 화합물은 비트랜스제닉 마우스에서 생성된 대변 덩어리 갯수에 아무런 효과를 나타내지 않았지만, 0.5 mg/kg (#p<0.05 vs. 비히클 -처리된 ASYN 트랜스제닉 마우스) 및 1 mg/kg ( ### p<0.001 vs. 비히클 -처리된 ASYN 트랜스제닉 마우스)에서 ASYN 트랜스제닉 마우스의 기능을 복구시켰다.
B) 심장 기능
[0164] 장기능 장애와 마찬가지로, 심장 생화학 및 기능의 장애, 변경도 파킨슨병으로 진단받기 20년 이상 전에 이미 선행할 수 있다. PD 환자에서 잘-특징화된 기능 변경에는 변경된 심박 변수 및 기립 저혈압이 포함된다 (Kaufmann, H. et al., Handbook Clin . Neurol . 2013, 117, 259-278; Jain, S. et al., Neurobiol . Dis . 2012, 46(3), 572-580; Senard, J.M. et al., Rev. Neurol . (Paris) 2010, 166(10), 779-784; Post, K.K. et al., Parkinsonism Relat . Disord. 2008, 14(7), 524-531). 이러한 기능 변화는 심근 노르아드레날린 신경분포의 손실 및 심장의 자율신경 내 ASYN 응집체의 존재의 병리학적 발견을 수반한다 (Jellinger, K.A., J. Neurol. Sci . 2011, 310(1-2), 107-111). Previous characterizations of cardiac function 및 biochemistry in Line 61 ASYN 트랜스제닉 마우스에 행하여진 이전의 심장 기능 및 생화학 특징화에 의하면 노르아드레날린 섬유 내에 위치한 심장의 심실 및 심방벽에 hASYN이 존재하는 것으로 입증되었다 (Fleming, S.M., J. Parkinsons Dis. 2011, 1(4), 321-327). 본 발명의 연구에서는, ASYN 트랜스제닉 심장 조직의 존재를 확인하고 ASYN의 트랜스제닉 심장 수준에 미치는 실시예 1 화합물의 효과를 평가하기 위해 웨스턴 블롯 분석법에 의해 심장 ASYN의 사후 웨스턴 블롯 평가를 실시하였다(도 10). 비히클-처리된 비트랜스제닉 대조군 마우스에 비해 비시클-처리된 ASYN 트랜스제닉 마우스에서 ASYN의 심장 수준이 통계적으로 유의적으로 증가하였다 (***p<0.001). 비히클-처리된 ASYN 트랜스제닉 마우스에 비해 실시예 1의 화합물 0.5 또는 1 mg/kg으로 처리된 ASYN 트랜스제닉 마우스에서 ASYN 수준이 통계적으로 유의하게 정규화(정상화:normalization) 되었다 (####p<0.0001).
C) 망막 이미징
[0165] 뉴런 단백질 α-시누클레인 (ASYN)의 비정상적인 축적은 파킨슨병 (PD) 및 루이체 치매 (DLB)에 있어서 신경 세포 사멸과 시냅스 장애의 원인이 되는 것으로 가정되어 왔다. α-시누클레인 단백질-폴딩 역학을 선택적으로 간섭하여 증식 다이머의 형성을 방지하는 화합물들이 개발되어 동물 모델에서 평가되어 왔다. 몇몇 파킨슨병 환자에서는 시각 기능의 변화가 존재하며(Botha, H. et al., Parkinsonism Relat . Disord . 2012, 18(6), 742-747; Bodis-Wollner, I. et al., Behav . Neurosci . 2013, 127(2), 139-150; Bodis-Wollner, I., Parkinsonism Relat . Disord . 2013, 19(1), 1-14; Javaid, M.A. et al., Parkinsonism Relat . Disord. 2012, 18(Suppl. 1), S100-3) 최근의 연구에 의하면 PD 망막에서 잠재적인 병리학적 변화가 나타난 것으로 보고되었다. 광간섭단층촬영장치 (Optical coherence tomography: OCT) 연구에 의하면 파킨슨 환자의 망막 신경섬유 층이 감소된 것으로 입증되었다 (Yu, J.G. et al., PLoS One 2014, 9(1), e85718). 사후 평가 결과 PD 망막에서 ASYN 디포짓이 나타났다 (Bodis-Wollner, I. et al., Ann. Neurol. 2014, 75(6), 964-6).
[0166] DLB/PD의 PDNG78 트랜스제닉 마우스 모델 중 e-GFP- ASYN의 반복적인 세로방향 망막 이미징의 실행가능성은 이전에 파킨슨병의 동물 모델에서 신경변성적 변화의 진행을 평가 및 추적하는 방법으로서 입증된 바 있다 (Rockenstein et al., "Retinal scanning evaluations of alpha-sinuclein-eGFP deposition in a transgenic mouse model of PD/DLB," Society for Neurosciences, Annual Meeting, 2013, Abstract No. 329.06). PDNG78 망막 중 병리학적 특징의 진행은 CNS 병리학을 투영하는 것으로 나타났기 때문에, PD/DLB에서 트랜스제닉 마우스 모델에서 잠재적으로 치료적 개재를 비침습적이고도 반복적으로 평가하는 수단을 제공하는 것이다.
[0167] 이 연구는 파킨슨병/루이체 치매(PD/DLB)의 트랜스제닉 마우스 모델의 세로방향 망막 이미징 연구에서 α-시누클레인 (ASYN) 망막 질병의 존재 및 진행에 미치는 실시예 1 화합물의 효과 (0 & 5 mg/kg으로 3개월간 i.p. 투여)를 알아내기 위하여 수행되었다. 트랜스제닉 마우스 대상체들은 PDGF-베타 프로모터 하에서 융합 α-시누클레인-GFP (녹색형광단백질)을 과발현하며 흔히 PDNG78 트랜스제닉 마우스라 칭해진다 (Rockenstein, E. et al., J. Neurosci . Res. 2005, 80, 247-259). PDNG78 트랜스제닉 마우스는 비트랜스제닉 대조군 마우스에 비해 융합 ASYN-GFP를 2-5배 더 높은 수준으로 발현한다. ASYN의 CNS 발현 수준은 신피질 및 해마 영역을 포함하여 PDNG78 트랜스제닉 마우스 변연계에서 가장 높다. ASYN-GFP의 세포 분포는 뉴런 세포체 중의 축적, 신경망의 확산 염색, 시냅스 점상(punctate) 염색 및 혈관주의 디포짓을 비롯한 시누클레인 관련 질병 특징을 투여하는 것이다.
[0168] 치료 개시 전의 베이스라인 및 약 1개월 간격으로 행해진 후속적인 3회의 이미징 세션을 비롯하여 총 4회의 이미징 세션을 수행하였다. ASYN-GFP에 대한 이미지 백분율의 망막 이미지 분석 (도 11) 결과 치료 개시 전 베이스라인(**p<0.01 vs. 비히클 -처리된 비트랜스제닉 마우스) 및 각각의 후속 스캔 (*p<0.05 및 ***p<0.001 vs. 비히클 -처리된 비트랜스제닉 마우스)에서의 트랜스제닉 마우스의 망막 내 ASYN-GFP의 이미지 면역 백분율이 통계적으로 유의하게 증가한 것으로 나타났다. ASYN-GFP 양성 면적 백분율은 치료한 지 약 60일 후 실시예 1의 화합물(5 mg/kg)로 처리된 트랜스제닉 마우스에서 감소하여 90일 이미징 시점까지 유지되었다 (###p<0.001 vs. 비시클-처리된 ASYN 트랜스제닉 마우스).
[0169] ASYN-GFP 양성 입자 카운트(도 12)의 분석 결과 트랜스제닉 마우스에서는 혈관주위 및 신경말단 녹색형광단백질(GFP) 표지가 지속적으로 증가한 것으로 나타난 반면 비트랜스제닉 마우스에서는 그렇지 않은 것으로 나타났다. 치료 개시 전 베이스라인(*p<0.05 vs. 비히클 -처리된 비트랜스제닉 마우스) 및 치료 약 60일 후에 개시된 스캔(**p<0.01 vs. 비히클 -처리된 비트랜스제닉 마우스)에서 트랜스제닉 마우스의 망막에서의 총 ASYN-GFP 입자 카운트는 통계적으로 유의하게 증가하였다. ASYN-GFP 양성 입자의 갯수는 치료로부터 약 60일 후에 실시예 1의 화합물(5 mg/kg)로 처리된 ASYN 트랜스제닉 마우스에서 감소하였고 90일 이미징 시점까지 유지되었다 (##p<0.01 vs. 비히클-처리된 ASYN 트랜스제닉 마우스).
[0170] 이 연구 결과 실시예 1의 화합물을 투여하면(1일 5 mg/kg; 3개월간) PD/DLB의 모델로서 ASYN을 과발현하는 트랜스제닉 마우스의 ASYN 망막 병리학에서 이로운 변화가 나타나는 것으로 입증되었다. 이러한 데이터는 또한 잠재적으로 번역가능한 이미징 방법에 의해 실시예 1의 화합물의 이로운 효과를 부가적으로 입증하는 수단도 제공하는 것이다.
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Claims (4)

  1. 다음 화학식 (I)의 화합물 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염:
    Figure pct00058

    식 중
    R1은 H, 할로, C1- 4알킬, 또는 CF3;
    R2는 H, -CF3, 또는 치환되지 않거나 할로 또는 -CF3에 의해 치환된 C1- 4알킬;
    A는 5원 헤테로아릴 고리;
    Y는 부재하거나 또는 C1- 4알킬렌;
    R3 및 R4는 이들이 결합한 질소와 함께 치환되지 않거나 C1- 4알킬에 의해 치환된 모노시클릭 헤테로시클로알킬 고리를 형성하거나; 또는 Y가 C1- 4알킬렌이면, R3 및 Y는 이들이 결합한 질소와 함께 모노시클릭 헤테로시클로알킬 고리를 형성하고, R4는 H 또는 C1-4알킬이다.
  2. 다음으로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물 및 약학적으로 허용가능한 그의 염:
    Figure pct00059

    Figure pct00060

    Figure pct00061

    Figure pct00062

    Figure pct00063
  3. (a) 적어도 1종의 화학식 (I)의 화합물 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염, 및 (b) 약학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 의약 조성물.
  4. 적어도 1종의 화학식 (I)의 화합물 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염의 유효량을 치료를 필요로 하는 대상자에게 투여하는 것을 포함하는, 단백질 응집과 관련된 질병 또는 의학적 병태를 치료하는 방법.
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