ES2882285T3 - Derivados de bis-heteroarilo como moduladores de la agregación de proteínas - Google Patents

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Abstract

Un compuesto de fórmula (I): **(Ver fórmula)** en donde B es un 3-indol; R2 es un grupo metilo, etilo, propilo, terc-butilo o n-butilo, pentilo o hexilo; R3 es H o alquilo C1-4; A es un tiazol; Ar es un fenilo o un heterociclo aromático de 5 o 6 miembros, opcionalmente sustituido con -(R4)n, en donde n es 0, 1, 2 o 3; cada R4 es independientemente alquilo C1-4, opcionalmente sustituido con uno o más halógenos o grupos O-alquilo C1-4), halógeno, -OH, -CN, CF3, CHF2, CH2F, alquilo C1-4, alquilo ramificado C1-4 o -O- alquilo C1-4, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Description

DESCRIPCIÓN
Derivados de bis-heteroarilo como moduladores de la agregación de proteínas
Campo técnico
La presente invención se refiere a ciertos derivados de bis-heteroarilo, composiciones farmacéuticas que los contienen y métodos para usarlos, incluidos métodos para prevenir, invertir, ralentizar o inhibir la agregación de proteínas, y métodos para tratar enfermedades que están asociadas con la agregación de proteínas, incluidas enfermedades neurodegenerativas tales como la enfermedad de Parkinson, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de cuerpos de Lewy, enfermedad de Parkinson con demencia, demencia frontotemporal, enfermedad de Huntington, esclerosis lateral amiotrófica y atrofia multisistémica y el cáncer, incluido el melanoma.
Antecedentes
Los trastornos neurodegenerativos de la población que envejece, tales como la enfermedad de Alzheimer (EA), enfermedad de Parkinson (EP) y demencia frontotemporal (DFT), afectan a más de 20 millones de personas solo en los Estados Unidos y la Unión Europea y se encuentran entre las principales causas de muerte para las personas mayores. Una característica común entre estos trastornos neurológicos es la acumulación crónica de proteínas en agregados neurotóxicos. Cada enfermedad se caracteriza por las poblaciones neuronales específicas que se ven afectadas, los agregados de proteínas particulares que están involucrados y las características clínicas que resultan de la degeneración neuronal.
Los estudios sugieren que las etapas iniciales de agregación de proteínas implican mutación o modificación postraduccional (p. ej., nitrosilación, oxidación) de la proteína diana, que luego adopta una conformación anormal que facilita las interacciones con proteínas igualmente mal plegadas. Las proteínas anormales luego se agregan para formar dímeros, trímeros y multímeros de orden superior, también denominados ''oligómeros solubles", que pueden alterar la función sináptica. Además, los agregados después se pueden anclar en la membrana celular y formar oligómeros globulares (que a su vez pueden formar poros en la membrana) y/o protofibrillas o fibrillas. Estas fibrillas insolubles más grandes pueden funcionar como depósitos de oligómeros bioactivos.
Diversas líneas de evidencia apoyan la idea de que la acumulación progresiva de agregados de proteínas está causalmente involucrada en la patogénesis de las enfermedades neurodegenerativas. Una serie de otras proteínas pueden acumularse en el cerebro de pacientes con neurodegeneración, tales como la a-sinucleína, proteína A beta, Tau y TDP43. El deterioro cognitivo de estos pacientes está estrechamente asociado con la pérdida sináptica en el neocórtex y los sistemas límbico, y los niveles crecientes de agregados de proteínas pueden contribuir a esta pérdida sináptica. Gran parte de la investigación se centra en detallar los mecanismos a través de los cuales la acumulación de a-sinucleína y otros metabolitos de la proteína precursora amiloide (APP) contribuyen al daño sináptico y la neurodegeneración. Muchos estudios apoyan la hipótesis de que la formación de pequeños agregados, también conocidos como oligómeros, juega un papel importante en la neurotoxicidad. Estos oligómeros peptídicos pueden organizarse en dímeros, trímeros, tetrámeros, pentámeros y otras matrices de orden superior que pueden formar estructuras anulares. Los niveles altos de tales oligómeros predicen la demencia y pérdida sináptica en los pacientes. Debido a que la evidencia indica que los oligómeros en lugar de las fibrillas precursoras más pequeñas son las especies tóxicas, serían útiles compuestos que se dirijan a estos procesos tempranos de agregación de una manera específica como nuevas terapias potenciales para la EP, la EA y afecciones relacionadas.
Varias enfermedades neurodegenerativas implican la acumulación de agregados basados en proteínas neurotóxicos. En la enfermedad de Parkinson idiopática (EPI), la demencia con cuerpos de Lewy (LBD), la enfermedad de Parkinson con demencia (PDD) y la atrofia multisistémica (MSA), los agregados neurotóxicos están compuestos de a-sinucleína (SYN), que es una proteína sináptica que es intracelular en condiciones normales. En la FTD y la esclerosis lateral amiotrófica (ELA), los agregados neurotóxicos se originan a partir de otras proteínas intracelulares tales como tau, TDP-43 o SOD1. Para ciertas enfermedades, como la EA, la SYN se agrega con la proteína primaria (p. ej., la proteína A beta). En la enfermedad de Huntington, los agregados se forman a partir de los productos de escisión de las proteínas Htt.
La acumulación de a-sinucleína también se ha relacionado con el cáncer, en particular, en las células cancerosas del melanoma. Pan et al., PLoS One 2012, 7(9), e45183. Por tanto, los compuestos que inhiben dicha acumulación pueden resultar útiles en el tratamiento de varios cánceres, incluido el melanoma.
Dos mecanismos están implicados en estos procesos de agregación de proteínas. En el primero, las proteínas mal plegadas y/o agregadas se anclan a las diversas estructuras de la membrana celular. La unión de las moléculas mal plegadas o agregadas a la membrana plasmática o las membranas de orgánulos (p. ej., mitocondrias o lisosomas) puede interferir con la transcripción de proteínas, la autofagia, la función mitocondrial y la formación de poros. A modo de ejemplo, la SYN neurotóxica se agrega e interacciona con lípidos en las membranas celulares mediante una porción específica de la región c-terminal de la proteína sinucleína. Los compuestos que se unen a esta región pueden inhibir las interacciones proteína-proteína o proteína-lípido y, por lo tanto, pueden usarse para bloquear la oligomerización neurotóxica de la SYN u otras proteínas y sus interacciones con las membranas. En el segundo proceso, la proteína agregada se libera de la subunidad anclada y se propaga a células adyacentes. Esta propagación de célula a célula de agregados de proteínas tóxicas después puede ser la base de la progresión anatómica de la neurodegeneración y el empeoramiento de los síntomas. Los fármacos de molécula pequeña que interaccionan con las proteínas diana pueden limitar la liberación y/o propagación y, por lo tanto, reducir los efectos neurotóxicos de las proteínas agregadas. Los compuestos que son inhibidores de la agregación de proteínas se describen en las publicaciones PCT N° WO 2011/084642, WO 2013/148365, WO 2013/134371 y WO 2014/014937. Los derivados de indol amida se describen en la publicación PCT N° WO 2010/142801.
Los siguientes compuestos de la biblioteca se describen en catálogos de productos químicos y están presentes en la base de datos de compuestos de PubChem:
Figure imgf000003_0001
Dado que la base de datos no describe ningún método que permita a un experto en la técnica prepararlos, no están realmente disponibles y, por lo tanto, no constituyen una técnica anterior.
Sigue existiendo la necesidad de inhibidores de la agregación de proteínas con propiedades farmacéuticas deseables. Se ha encontrado que ciertos compuestos bis-heteroarilo en el contexto de esta invención tienen actividad moduladora de la agregación de proteínas.
Sumario de la invención
En un aspecto, la invención se refiere a una entidad química de la siguiente Fórmula (I):
Figure imgf000004_0001
en donde
B es un 3-indol;
R2 es un grupo metilo, etilo, propilo, terc-butilo o n-butilo, pentilo o hexilo;
R3 es H o alquilo C1-4 ;
A es un tiazol;
Ar es un fenilo o un heterociclo aromático de 5 o 6 miembros, opcionalmente sustituido con -(R4)n,
En la fórmula (I), n es 0, 1,2 o 3; cada R4 es independientemente alquilo C1-4 (opcionalmente sustituido con uno o más halógenos o grupos O-alquilo C1-4), halógeno, -Oh , -CN, CF3 , CHF2 , CH2 F, alquilo C1-4 , alquilo ramificado C1-4 o -O­ alquilo C1-4 ;
o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma.
En una realización, los compuestos de fórmula (I) son para usar como medicamento, en particular, un medicamento para el tratamiento de la enfermedad de Parkinson.
En determinadas realizaciones, el compuesto de Fórmula (I) es un compuesto seleccionado de las especies descritas o ilustradas en la descripción detallada a continuación.
En un aspecto adicional, la invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende al menos un compuesto de Fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Las composiciones farmacéuticas según la invención pueden comprender además un excipiente farmacéuticamente aceptable. La invención también es un compuesto de Fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso como medicamento.
En otro aspecto, la invención se dirige a un método para tratar una enfermedad o afección neurodegenerativa asociada con la agregación de proteínas o péptidos, que comprende administrar a un sujeto que necesita dicho tratamiento una cantidad eficaz de al menos un compuesto de Fórmula (I) o un sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En otro aspecto, se describe en el presente documento un compuesto o composición para su uso en el tratamiento de una enfermedad neurodegenerativa o afección médica asociada con la agregación de proteínas o péptidos.
En otro aspecto, la invención se dirige a un método para tratar una enfermedad o afección médica asociada con la agregación de proteínas o péptidos, que comprende administrar a un sujeto que necesita dicho tratamiento una cantidad eficaz de al menos un compuesto de Fórmula (I) o un sal farmacéuticamente aceptable del mismo. La invención también se dirige al uso de un compuesto de Fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para el tratamiento de o para la preparación de un medicamento para el tratamiento de dichas enfermedades y afecciones médicas.
En otro aspecto más, la invención se refiere a un método para interferir con la acumulación de agregados de proteínas o péptidos en una célula, o para modular, prevenir, ralentizar, invertir o inhibir la agregación de proteínas o péptidos en una célula, que comprende poner en contacto la célula con un cantidad eficaz de al menos un compuesto de Fórmula (I) o una sal del mismo, y/o con al menos una composición farmacéutica de la invención, en donde el contacto es in vitro, ex vivo, o in vivo.
Realizaciones, características y ventajas adicionales de la invención serán evidentes a partir de la siguiente descripción detallada y a través de la práctica de la invención.
Descripción detallada de la invención
Antes de que la presente invención se describa con más detalle, debe entenderse que esta invención no se limita a las realizaciones particulares descritas, ya que, por supuesto, pueden variar. También debe entenderse que la terminología utilizada en el presente documento tiene el propósito únicamente de describir realizaciones particulares, y no pretende ser limitante, ya que el alcance de la presente invención estará limitado únicamente por las reivindicaciones adjuntas.
A menos que se defina de otro modo, todos los términos técnicos y científicos usados en el presente documento tienen el mismo significado que entiende comúnmente un experto en la técnica a la que pertenece esta invención.
Como se usa en el presente documento y en las reivindicaciones adjuntas, las formas singulares "un", "una" y "el", "la" incluyen referentes plurales a menos que el contexto indique claramente lo contrario. Cabe señalar además que las reivindicaciones pueden redactarse para excluir cualquier elemento opcional. Así pues, esta declaración pretende servir como base antecedente para el uso de terminología exclusiva tal como "únicamente", "solo" y similares en relación con la enumeración de elementos de reivindicación o el uso de una limitación "negativa".
Como se usa en el presente documento, los términos "que incluye", "que contiene" y "que comprende" se usan en su sentido abierto, no limitante.
Para proporcionar una descripción más concisa, algunas de las expresiones cuantitativas dadas en el presente documento no están calificadas con el término "aproximadamente". Se entiende que, ya sea que el término "aproximadamente" se use explícitamente o no, cada cantidad dada en el presente documento se pretende que se refiera al valor dado real, y también se pretende que se refiera a la aproximación a dicho valor dado que se podría inferir razonablemente basado en la experiencia ordinaria en la técnica, incluyendo equivalentes y aproximaciones debido a las condiciones experimentales y/o de medición para dicho valor dado. Siempre que se da un rendimiento como porcentaje, dicho rendimiento se refiere a una masa de la entidad para la cual se da el rendimiento con respecto a la cantidad máxima de la misma entidad que podría obtenerse en las condiciones estequiométricas particulares. Las concentraciones que se dan como porcentajes se refieren a relaciones en masa, a menos que se indique lo contrario.
A menos que se defina de otro modo, todos los términos técnicos y científicos usados en el presente documento tienen el mismo significado que el comúnmente entendido por un experto en la técnica a la que pertenece esta invención. Aunque cualquier método y material similar o equivalente a los descritos en el presente documento también puede usarse en la práctica o ensayo de la presente invención, ahora se describen los métodos y materiales preferidos.
Salvo que se indique lo contrario, los métodos y técnicas de las presentes realizaciones se realizan generalmente de acuerdo con métodos convencionales bien conocidos en la técnica y como se describe en varias referencias generales y más específicas que se citan y discuten a lo largo de la presente memoria descriptiva. Véase, por ejemplo, Loudon, Organic Chemistry, Cuarta edición, Nueva York: Oxford University Press, 2002, págs. 360-361, 1084-1085; Smith y March, March's Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure, Quinta edición, Wiley-Interscience, 2001.
La nomenclatura utilizada en el presente documento para nombrar los compuestos objeto se ilustra en los ejemplos del presente documento. Esta nomenclatura generalmente se ha obtenido utilizando la versión 16.1 de Biovia Draw 2016 disponible comercialmente.
Se aprecia que ciertas características de la invención, que, para mayor claridad, se describen en el contexto de realizaciones separadas, también se pueden proporcionar en combinación en una única realización. A la inversa, varias características de la invención, que, por brevedad, se describen en el contexto de una única realización, también pueden proporcionarse por separado o en cualquier subcombinación adecuada. Todas las combinaciones de las realizaciones pertenecientes a los grupos químicos representados por las variables están específicamente abarcadas por la presente invención y se describen en el presente documento como si todas y cada una de las combinaciones se describieran de forma individual y explícita, en la medida en que dichas combinaciones abarcan compuestos que son compuestos estables (es decir, compuestos que se pueden aislar, caracterizar y analizar para determinar su actividad biológica). Además, todas las subcombinaciones de los grupos químicos enumerados en las realizaciones que describen dichas variables también están abarcadas específicamente por la presente invención y se describen en el presente documento como si todas y cada una de dichas subcombinaciones de grupos químicos se describieran individual y explícitamente en el presente documento.
Realizaciones representativas
En algunas realizaciones de la Fórmula (I), todas las variables son como se definen en el presente documento (incluida cualquiera de las definiciones particulares indicadas a continuación), y también se aplican una o más de las siguientes limitaciones:
En algunas realizaciones, el carbono al que está unido R2 está en la configuración R. En otras realizaciones, el carbono al que está unido R2 está en la configuración S.
En una realización R3 es hidrógeno.
En algunas realizaciones de Fórmula (I), Ar es fenilo, piridina, pirimidina, piridazina, pirazina, pirazol, imidazol, triazol, opcionalmente sustituido con -(R4)n, siendo cada R4 independientemente alquilo C1-4, opcionalmente sustituido con uno o más halógenos o grupos O-alquilo C1-4), halógeno, -OH, -CN, CF3, CHF2 , CH2 F, alquilo C1-4, alquilo ramificado C1-4 o -O-alquilo C1-4.
En algunas realizaciones de Fórmula (I), -(R4)n es un alquilo C1-4.
Tabla 1.
Figure imgf000006_0001
Figure imgf000007_0001
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En otras realizaciones, el compuesto de Fórmula (I) se selecciona del grupo que consiste en los Ejemplos 1-14, Tabla 1, y sus sales farmacéuticamente aceptables.
Definiciones químicas
El término "alquilo" se refiere a un grupo alquilo de cadena lineal o ramificada que tiene de 1 a 12 átomos de carbono en la cadena. "Alquilo Cx-y" se refiere a grupos alquilo con x a y átomos de carbono. Por ejemplo, "alquilo C1-4" se refiere a grupos alquilo con 1 a 4 átomos de carbono en la cadena. Ejemplos de grupos alquilo incluyen metilo (Me), etilo (Et), npropilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo, terc-butilo (tBu), pentilo, isopentilo, terc-pentilo, hexilo e isohexilo.
El término "alcoxi" se refiere a un grupo alquil-O-, donde el alquilo es como se definió anteriormente. El grupo alcoxi está conectado a la estructura original a través del átomo de oxígeno. "Alcoxi C1-4" se refiere a grupos alcoxi en los que un grupo alquilo con 1 a 4 átomos de carbono está unido al oxígeno.
El término "alquileno" se refiere a un grupo divalente que es un radical de un alcano. El alquileno puede ser un radical alquilo divalente de cadena lineal o ramificada. "Alquileno C1-4" se refiere a grupos alquileno con 1 a 4 átomos de carbono. El término "arilo" se refiere a un grupo carbocíclico aromático monovalente de 6 a 14 átomos de carbono que tiene un solo anillo (un grupo fenilo) o múltiples anillos condensados (tales como naftilo, antracenilo o indanilo), en el que los anillos condensados son opcionalmente aromáticos, con la condición de que el punto de unión del grupo arilo a la estructura original sea a través de un átomo de un anillo aromático.
El término "cicloalquilo" se refiere a un carbociclo saturado o parcialmente saturado, monocíclico, policíclico condensado, policíclico con puente o espiropolicíclico que tiene de 3 a 12 átomos en el anillo por carbociclo. Los ejemplos ilustrativos de grupos cicloalquilo incluyen las siguientes entidades, en forma de restos debidamente unidos:
Figure imgf000008_0001
El término "halógeno" representa cloro, flúor, bromo o yodo. El término "halo" representa cloro, fluoro, bromo o yodo. El término "halo-alquilo" se refiere a un grupo alquilo como se describe en el presente documento, en donde uno o más átomos de hidrógeno en el grupo alquilo se han sustituido con un grupo halógeno. Los ejemplos de dichos grupos incluyen, sin limitación, grupos fluoroalquilo, tales como fluorometilo, difluorometilo, trifluorometilo, fluoroetilo, trifluoroetilo y similares.
El término "halo alcoxi" se refiere al grupo alquil-O- en donde uno o más átomos de hidrógeno en el grupo alquilo se han reemplazado por un grupo halógeno e incluyen, a modo de ejemplos, grupos tales como trifluorometoxi, fluoroetoxi y similares.
El término "heteroalquileno" se refiere a un grupo alquileno divalente en el que un átomo de la cadena de carbonos se reemplaza por -S-, -O- o -NR-, donde R es H o alquilo C1-4.
El término "heteroarilo" se refiere a un heterociclo aromático monocíclico, bicíclico condensado o policíclico condensado (estructura de anillo que tiene átomos en el anillo seleccionados de átomos de carbono y hasta cuatro heteroátomos seleccionados de nitrógeno, oxígeno y azufre) que tiene de 3 a 12 átomos en el anillo. Los grupos heteroarilo bicíclicos incluyen grupos bicíclicos con un anillo aromático y uno no aromático. Cuando un anillo heteroarilo está sustituido con -OH, un experto en la técnica entenderá que el sistema de anillo resultante puede dibujarse como el tautómero oxo-sustituido correspondiente. Los ejemplos ilustrativos de grupos heteroarilo incluyen las siguientes entidades, en forma de restos debidamente unidos:
Figure imgf000008_0002
El término "heterocicloalquilo" se refiere a un grupo saturado o parcialmente insaturado que tiene un solo anillo o múltiples anillos condensados, que incluyen sistemas de anillos condensados, con puente o espiro, y que tiene de 3 a 20 átomos en el anillo, que incluyen de 1 a 10 heteroátomos. Estos átomos del anillo se seleccionan del grupo que consiste en carbono, nitrógeno, azufre u oxígeno. En determinadas realizaciones, el(los) átomo(s) de nitrógeno y/o azufre del grupo heterocíclico están opcionalmente oxidados para proporcionar restos N-óxido, -S(O)- o -SO2-. Los ejemplos ilustrativos de grupos heterocíclicos incluyen las siguientes entidades, en forma de restos debidamente unidos:
Figure imgf000009_0001
El término "oxo" representa un oxígeno de carbonilo. Por ejemplo, un ciclopentilo sustituido con oxo es ciclopentanona.
Los expertos en la técnica reconocerán que las especies indicadas o ilustradas en las definiciones proporcionadas en el presente documento no son exhaustivas y que también pueden seleccionarse especies adicionales dentro del alcance de estos términos definidos.
El término "sustituido" significa que el grupo o resto especificado lleva uno o más sustituyentes. El término "no sustituido" significa que el grupo especificado no lleva sustituyentes. La expresión "opcionalmente sustituido" significa que el grupo especificado no está sustituido o está sustituido con uno o más sustituyentes. Cuando el término "sustituido" se utiliza para describir un sistema estructural, se pretende que la sustitución se produzca en cualquier posición permitida por la valencia en el sistema.
Cualquier fórmula representada en el presente documento pretende representar un compuesto de esa fórmula estructural así como ciertas variaciones o formas. Por ejemplo, una fórmula dada en el presente documento pretende incluir una forma racémica, o uno o más isómeros enantioméricos, diastereoméricos o geométricos, o una mezcla de los mismos. Además, cualquier fórmula dada en el presente documento pretende referirse también a un hidrato, solvato o polimorfo de dicho compuesto, o una mezcla de los mismos.
Cualquier fórmula dada en el presente documento también pretende representar formas no marcadas así como formas marcadas isotópicamente de los compuestos. Los compuestos marcados isotópicamente tienen estructuras representadas por las fórmulas dadas en el presente documento, excepto que uno o más átomos se reemplazan por un átomo que tiene una masa atómica o número de masa seleccionados. Los ejemplos de isótopos que pueden incorporarse en los compuestos de la invención incluyen isótopos de hidrógeno, carbono, nitrógeno, oxígeno, fósforo, flúor, cloro y yodo, tales como 2H, 3H, 11C, 13C, 14C, 15N, 18O, 17O, 31P, 32P, 35S, 18F, 36Cl y 125I, respectivamente. Dichos compuestos marcados isotópicamente son útiles en estudios metabólicos (preferiblemente con 14C), estudios de cinéticas de reacción (con, por ejemplo 2 H o 3 H), técnicas de detección o formación de imágenes [tales como la tomografía por emisión de positrones (PET) o la tomografía computarizada por emisión de fotón único (SPECT)] que incluyen ensayos de distribución en tejido de sustratos o fármacos, o en el tratamiento radiactivo de pacientes. En particular, un compuesto marcado con 18F o 11C puede ser particularmente preferido para estudios de PET o SPECT. Los estudios de PET y SPECT se pueden realizar como se describe, por ejemplo, en Brooks, D.J., "Positron Emission Tomography and Single-Photon Emission Computed Tomography in Central Nervous System Drug Development", NeuroRx 2005, 2 (2), 226-236, y referencias citadas en el mismo. Además, la sustitución con isótopos más pesados tales como el deuterio (es decir, 2H) puede ofrecer ciertas ventajas terapéuticas que resultan de una mayor estabilidad metabólica, por ejemplo, un aumento de semivida in vivo o requisitos de dosis reducidos. Los compuestos marcados isotópicamente de esta invención y sus profármacos se pueden preparar generalmente llevando a cabo los procedimientos descritos en los esquemas o en los ejemplos y preparaciones descritos a continuación sustituyendo un reactivo marcado isotópicamente fácilmente disponible por un reactivo no marcado isotópicamente.
La nomenclatura "C i-j" con j > i, cuando se aplica en el presente documento a una clase de sustituyentes, pretende referirse a realizaciones de esta invención para las que todos y cada uno de los números de miembros de carbono, desde i hasta j, incluidos i y j, se realizan independientemente. A modo de ejemplo, el término C1-3 se refiere independientemente a realizaciones que tienen un miembro de carbono (C1), realizaciones que tienen dos miembros de carbono (C2) y realizaciones que tienen tres miembros de carbono (C3).
Cualquier disustituyente al que se hace referencia en el presente documento pretende abarcar las diversas posibilidades de unión cuando están permitidas más de una de dichas posibilidades. Por ejemplo, la referencia al disustituyente -A-B-, donde A t B, se refiere en el presente documento a dicho disustituyente con A unido a un primer miembro sustituido y B unido a un segundo miembro sustituido, y también se refiere a dicho disustituyente con A unido al segundo miembro sustituido y B adjunto al primer miembro sustituido.
La invención también incluye sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos representados por la Fórmula (I), preferiblemente de los descritos anteriormente y de los compuestos específicos ilustrados en el presente documento, y composiciones farmacéuticas que comprenden dichas sales, y métodos para usar dichas sales.
Una "sal farmacéuticamente aceptable" pretende significar una sal de un ácido o base libre de un compuesto representado en el presente documento que no es tóxica, es biológicamente tolerable o biológicamente adecuada de otro modo para su administración al sujeto. Véase, en general, S.M. Berge et al., "Pharmaceutical Salts", J. Pharm. Sci., 1977, 66, 1-19. Las sales farmacéuticamente aceptables preferidas son aquellas que son farmacológicamente eficaces y adecuadas para el contacto con los tejidos de sujetos sin una toxicidad, irritación o respuesta alérgica indebidas. Un compuesto descrito en el presente documento puede tener un grupo suficientemente ácido, un grupo suficientemente básico, ambos tipos de grupos funcionales, o más de uno de cada tipo, y en consecuencia reaccionar con una serie de bases inorgánicas u orgánicas y ácidos inorgánicos y orgánicos, para formar una sal farmacéuticamente aceptable.
Ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables incluyen sulfatos, pirosulfatos, bisulfatos, sulfitos, bisulfitos, fosfatos, monohidrogenofosfatos, dihidrogenofosfatos, metafosfatos, pirofosfatos, cloruros, bromuros, yoduros, acetatos, propionatos, decanoatos, caprilatos, acrilatos, formiatos, isobutiratos, caproatos, heptanoatos, propiolatos, oxalatos, malonatos, succinatos, suberatos, sebacatos, fumaratos, maleatos, butino-1,4-dioatos, hexino-1,6-dioatos, benzoatos, clorobenzoatos, metilbenzoatos, dinitrobenzoatos, hidroxibenzoatos, metoxibenzoatos, ftalatos, sulfonatos, metilsulfonatos, propilsulfonatos, besilatos, xilenosulfonatos, naftaleno-1-sulfonatos, naftaleno-2-sulfonatos, fenilacetatos, fenilpropionatos, fenilbutiratos, citratos, lactatos, Y -hidroxibutiratos, glicolatos, tartratos y mandelatos. Las listas de otras sales farmacéuticamente aceptables adecuadas se encuentran en Remington's Pharmaceutical Sciences, 17a edición, Mack Publishing Company, Easton, Pensilvania, 1985.
Para un compuesto de Fórmula (I) que contiene un nitrógeno básico, se puede preparar una sal farmacéuticamente aceptable por cualquier método adecuado disponible en la técnica, por ejemplo, tratamiento de la base libre con un ácido inorgánico, tal como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido sulfámico, ácido nítrico, ácido bórico, ácido fosfórico y similares, o con un ácido orgánico, tal como ácido acético, ácido fenilacético, ácido propiónico, ácido esteárico, ácido láctico, ácido ascórbico, ácido maleico, ácido hidroximaleico, ácido isetiónico, ácido succínico, ácido valérico, ácido fumárico, ácido malónico, ácido pirúvico, ácido oxálico, ácido glicólico, ácido salicílico, ácido oleico, ácido palmítico, ácido láurico, un ácido piranosidílico, tal como ácido glucurónico o ácido galacturónico, un alfahidroxiácido, tal como ácido mandélico, ácido cítrico o ácido tartárico, un aminoácido, tal como ácido aspártico o ácido glutámico, un ácido aromático, tal como ácido benzoico, ácido 2-acetoxibenzoico, ácido naftoico o ácido cinámico, un ácido sulfónico, tal como ácido laurilsulfónico, ácido p-toluenosulfónico, ácido metanosulfónico o ácido etanosulfónico, o cualquier mezcla compatible de ácidos tales como las que se dan como ejemplos en el presente documento, y cualquier otro ácido y mezcla de los mismos que se consideren equivalentes o sustitutos aceptables a la luz de la experiencia ordinaria en esta tecnología.
Composiciones farmacéuticas
Para fines de tratamiento, las composiciones farmacéuticas que comprenden los compuestos descritos en el presente documento pueden comprender además uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables. Un excipiente farmacéuticamente aceptable es una sustancia que no es tóxica y, por lo demás, es biológicamente adecuada para su administración a un sujeto. Dichos excipientes facilitan la administración de los compuestos descritos en el presente documento y son compatibles con el ingrediente activo. Los ejemplos de excipientes farmacéuticamente aceptables incluyen estabilizantes, lubricantes, tensioactivos, diluyentes, antioxidantes, aglutinantes, agentes colorantes, agentes de carga, emulsionantes o agentes modificadores del sabor. En realizaciones preferidas, las composiciones farmacéuticas según la invención son composiciones estériles. Las composiciones farmacéuticas se pueden preparar usando técnicas de combinación conocidas o que estén disponibles para los expertos en la técnica.
La invención también contempla composiciones estériles, incluidas las composiciones que están de acuerdo con las normativas nacionales y locales que rigen dichas composiciones.
Las composiciones farmacéuticas y compuestos descritos en el presente documento se pueden formular como soluciones, emulsiones, suspensiones o dispersiones en disolventes o vehículos farmacéuticos adecuados, o como píldoras, comprimidos, pastillas, supositorios, sobres, grageas, gránulos, polvos, polvos para reconstitución o cápsulas junto con vehículos sólidos según métodos convencionales conocidos en la técnica para la preparación de diversas formas farmacéuticas. Las composiciones farmacéuticas de la invención se pueden administrar mediante una vía de administración adecuada, tal como vía oral, parenteral, rectal, nasal, tópica u ocular, o por inhalación. Preferiblemente, las composiciones se formulan para administración intravenosa u oral.
Para la administración oral, los compuestos de la invención se pueden proporcionar en forma sólida, tal como un comprimido o cápsula, o como una solución, emulsión o suspensión. Para preparar las composiciones orales, los compuestos de la invención se pueden formular para dar una dosis de, p. ej., de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 50 mg/kg al día, o de aproximadamente 0,05 a aproximadamente 20 mg/kg al día, o de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 10 mg/kg al día. Las dosis adicionales incluyen de aproximadamente 0,1 mg a 1 g al día, de aproximadamente 1 mg a aproximadamente 10 mg al día, de aproximadamente 10 mg a aproximadamente 50 mg al día, de aproximadamente 50 mg a aproximadamente 250 mg al día, o de aproximadamente 250 mg a 1 g diario. Los comprimidos orales pueden incluir el(los) ingrediente(s) activo(s) mezclados con excipientes compatibles farmacéuticamente aceptables tales como diluyentes, agentes disgregantes, agentes aglutinantes, agentes lubricantes, agentes edulcorantes, agentes aromatizantes, agentes colorantes y agentes conservantes. Las cargas inertes adecuadas incluyen carbonato de sodio y calcio, fosfato de sodio y calcio, lactosa, almidón, azúcar, glucosa, metilcelulosa, estearato de magnesio, manitol, sorbitol y similares. Los ejemplos de excipientes orales líquidos incluyen etanol, glicerol, agua y similares. El almidón, la polivinilpirrolidona (PVP), el glicolato sódico de almidón, la celulosa microcristalina y el ácido algínico son ejemplos de agentes disgregantes. Los agentes aglutinantes pueden incluir almidón y gelatina. El agente lubricante, si está presente, puede ser estearato de magnesio, ácido esteárico o talco. Si se desea, los comprimidos pueden recubrirse con un material tal como monoestearato de glicerilo o diestearato de glicerilo para retrasar la absorción en el tracto gastrointestinal, o pueden recubrirse con un recubrimiento entérico.
Las cápsulas para administración oral incluyen cápsulas de gelatina dura y blanda. Para preparar cápsulas de gelatina dura, el(los) ingrediente(s) activo(s) se pueden mezclar con un diluyente sólido, semisólido o líquido. Las cápsulas de gelatina blanda se pueden preparar mezclando el ingrediente activo con agua, un aceite tal como aceite de cacahuete o aceite de oliva, parafina líquida, una mezcla de mono y diglicéridos de ácidos grasos de cadena corta, polietilenglicol 400 o propilenglicol.
Los líquidos para administración oral pueden estar en forma de suspensiones, soluciones, emulsiones o jarabes, o pueden liofilizarse o presentarse como un producto seco para reconstituir con agua u otro vehículo adecuado antes de su uso. Dichas composiciones líquidas pueden contener opcionalmente: excipientes farmacéuticamente aceptables tales como agentes de suspensión (por ejemplo, sorbitol, metilcelulosa, alginato de sodio, gelatina, hidroxietilcelulosa, carboximetilcelulosa, gel de estearato de aluminio y similares); vehículos no acuosos, p. ej., aceite (por ejemplo, aceite de almendras o aceite de coco fraccionado), propilenglicol, alcohol etílico o agua; conservantes (por ejemplo, phidroxibenzoato de metilo o propilo o ácido sórbico); agentes humectantes tales como lecitina; y, si se desea, agentes aromatizantes o colorantes.
Las composiciones de la invención se pueden formular para administración rectal como supositorio. Para uso parenteral, que incluye las vías intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, intranasal o subcutánea, los agentes de la invención se pueden proporcionar en soluciones o suspensiones acuosas estériles, tamponadas a un pH e isotonicidad apropiados o en un aceite parenteralmente aceptable. Los vehículos acuosos adecuados incluyen solución de Ringer y cloruro de sodio isotónico. Dichas formas pueden presentarse en forma de dosis unitaria, tal como ampollas o dispositivos de inyección desechables, en formas de dosis múltiples, tal como viales de los que se puede extraer la dosis adecuada, o en forma sólida o preconcentrada que se puede utilizar para preparar una formulación inyectable. Las dosis de infusión ilustrativas varían de aproximadamente 1 a 1000 pg/kg/minuto de agente mezclado con un vehículo farmacéutico durante un período que varía de varios minutos a varios días.
Para la administración nasal, inhalada u oral, las composiciones farmacéuticas de la invención se pueden administrar usando, por ejemplo, una formulación en aerosol que también contenga un vehículo adecuado.
Para aplicaciones tópicas, los compuestos de la presente invención se formulan preferiblemente como cremas o ungüentos o un vehículo similar adecuado para administración tópica. Para la administración tópica, los compuestos de la invención se pueden mezclar con un vehículo farmacéutico a una concentración de aproximadamente 0,1% a aproximadamente 10% de fármaco a vehículo. Otro modo de administración de los agentes de la invención puede utilizar una formulación de parche para efectuar la administración transdérmica.
Como se usa en el presente documento, los términos "tratar" o "tratamiento" abarcan tanto el tratamiento "preventivo" como el "curativo". El tratamiento "preventivo" pretende indicar un aplazamiento del desarrollo de una enfermedad, un síntoma de una enfermedad o afección médica, suprimiendo los síntomas que pueden aparecer o reduciendo el riesgo de desarrollo o recurrencia de una enfermedad o síntoma. El tratamiento "curativo" incluye reducir la gravedad o suprimir el empeoramiento de una enfermedad, síntoma o afección existente. Por lo tanto, el tratamiento incluye mejorar o prevenir el empeoramiento de los síntomas de la enfermedad existente, prevenir que se produzcan síntomas adicionales, mejorar o prevenir las causas sistémicas subyacentes de los síntomas, inhibir el trastorno o la enfermedad, p. ej., detener el desarrollo del trastorno o la enfermedad, aliviar el trastorno o enfermedad, producir la remisión del trastorno o enfermedad, aliviar una afección causada por la enfermedad o trastorno, o detener los síntomas de la enfermedad o trastorno.
El término "sujeto" se refiere a un paciente mamífero que necesita dicho tratamiento, tal como un ser humano.
Las enfermedades neurodegenerativas de ejemplo que se caracterizan por la agregación de proteínas incluyen la enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, demencia frontotemporal, demencia con cuerpos de Lewy (enfermedad de cuerpos de Lewy), enfermedad de Parkinson con demencia, atrofia multisistémica, esclerosis lateral amiotrófica y la enfermedad de Huntington, así como cánceres y enfermedades inflamatorias tales como la enfermedad de Crohn.
En un aspecto, los compuestos y composiciones farmacéuticas de la invención se dirigen específicamente a agregados de proteína a-sinucleína, p-amiloide y/o tau. Por lo tanto, estos compuestos y composiciones farmacéuticas se pueden usar para modular, prevenir, invertir, ralentizar o inhibir la agregación de proteínas a-sinucleína, p-amiloide y/o tau, y se usan en métodos de la invención para tratar enfermedades neurológicas degenerativas relacionadas con o causadas por agregación, p. ej., tal como agregación de proteínas a-sinucleína, p-amiloide y/o tau. Preferiblemente, los métodos de la invención se dirigen a enfermedades neurodegenerativas asociadas con la agregación de proteína a-sinucleína, p-amiloide y/o tau. En realizaciones preferidas, los métodos de tratamiento se dirigen a la enfermedad de Parkinson, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de cuerpos de Lewy o la atrofia multisistémica. En otras realizaciones, los métodos se dirigen al cáncer o melanoma. Los compuestos, las composiciones y el método de la presente invención también se utilizan para mitigar los efectos perjudiciales secundarios a la agregación de proteínas, tales como la muerte de células neuronales.
En algunos aspectos, los compuestos, composiciones y métodos de la invención se utilizan para dirigirse a la agregación de a-sinucleína (SYN). En aspectos alternativos, los compuestos, composiciones y métodos de la invención se utilizan para dirigirse a la agregación de Ap.
En los métodos inhibidores de la invención, una "cantidad eficaz" significa una cantidad suficiente para reducir, ralentizar la progresión o invertir la agregación de proteínas o péptidos. La medición de la cantidad de agregación se puede realizar por métodos analíticos de rutina como los que se describen a continuación. Dicha modulación es útil en una variedad de marcos, incluyendo en ensayos in vitro . En tales métodos, la célula es preferiblemente una célula nerviosa.
En los métodos de tratamiento de acuerdo con la invención, una "cantidad eficaz" significa una cantidad o dosis suficiente para producir generalmente el beneficio terapéutico deseado en sujetos que necesitan dicho tratamiento. Las cantidades o dosis efectivas de los compuestos de la invención pueden determinarse por métodos de rutina, tales como modelización, escalado de dosis o ensayos clínicos, teniendo en cuenta factores de rutina, p. ej., el modo o vía de administración o suministro del fármaco, la farmacocinética del agente, la gravedad y el curso de la infección, el estado de salud, condición y peso del sujeto, y el criterio del médico tratante. Una dosis de ejemplo está en el intervalo de aproximadamente 1 gg a 2 mg de agente activo por kilogramo de peso corporal del sujeto por día, preferiblemente aproximadamente de 0,05 a 100 mg/kg/día, o aproximadamente de 1 a 35 mg/kg/día, o aproximadamente de 0,1 a 10 mg/kg/día. En realizaciones alternativas, una dosis de ejemplo está en el intervalo de aproximadamente 1 mg a aproximadamente 1 g por día, o aproximadamente 1 -500, 1 -250, 1-100, 1 -50, 50-500 o 250-500 mg por día. La dosis total se puede administrar en unidades de dosificación únicas o divididas (p. ej., dos veces al día, tres veces al día, cuatro veces al día).
Una vez que se ha producido la mejoría de la enfermedad del paciente, la dosis puede ajustarse para un tratamiento preventivo o de mantenimiento. Por ejemplo, la dosis o la frecuencia de administración, o ambas, pueden reducirse en función de los síntomas, hasta un nivel en el que se mantenga el efecto terapéutico o profiláctico deseado. Por supuesto, si los síntomas se han aliviado a un nivel apropiado, el tratamiento puede interrumpirse. Sin embargo, los pacientes pueden requerir un tratamiento intermitente a largo plazo ante cualquier recurrencia de los síntomas. Los pacientes también pueden requerir un tratamiento crónico a largo plazo.
Combinaciones de fármacos
Los compuestos de la invención descritos en el presente documento pueden usarse en composiciones o métodos farmacéuticos en combinación con uno o más ingredientes activos adicionales en el tratamiento de trastornos neurodegenerativos. Otros ingredientes activos adicionales para aplicaciones contra el cáncer incluyen otros medicamentos para el cáncer o agentes que mitigan los efectos adversos de los agentes quimioterapéuticos para el cáncer. Dichas combinaciones pueden servir para aumentar la eficacia, mejorar otros síntomas de la enfermedad, disminuir uno o más efectos secundarios o disminuir la dosis requerida de un compuesto de la invención. Los ingredientes activos adicionales pueden administrarse en una composición farmacéutica separada de un compuesto de la presente invención o pueden incluirse con un compuesto de la presente invención en una única composición farmacéutica. Los ingredientes activos adicionales pueden administrarse simultáneamente con, antes o después de la administración de un compuesto de la presente invención.
Los agentes combinados que incluyen ingredientes activos adicionales son aquellos que se sabe o se descubre que son efectivos en el tratamiento de trastornos neurodegenerativos, incluidos los activos contra otro objetivo asociado con la enfermedad, tales como, pero no limitados a, a) compuestos que se dirigen al plegamiento incorrecto de proteínas (tales como fármacos que reducen la producción de estas proteínas, que aumentan su aclaramiento o que alteran su agregación y/o propagación); b) compuestos que tratan los síntomas de dichos trastornos (p. ej., terapias de reemplazo de dopamina); y c) fármacos que actúan como neuroprotectores por mecanismos complementarios (p. ej., los que se dirigen a la autofagia, los que son antioxidantes y los que actúan por otros mecanismos tales como los antagonistas de adenosina A2A).
Por ejemplo, las composiciones y formulaciones de la invención, así como los métodos de tratamiento, pueden comprender además otros fármacos o productos farmacéuticos, p. ej., otros agentes activos útiles para el tratamiento o paliativos de una enfermedad neurológica degenerativa relacionada o causada por la agregación de proteínas, p. ej., agregación de proteínas sinucleína, beta-amiloide y/o tau, p. ej., enfermedad de Parkinson, enfermedad de Alzheimer (EA), enfermedad de cuerpos de Lewy (LBD) y atrofia multisistémica (MSA), o síntomas o afecciones relacionados. Por ejemplo, las composiciones farmacéuticas de la invención pueden comprender adicionalmente uno o más de dichos agentes activos, y los métodos de tratamiento pueden comprender adicionalmente administrar una cantidad eficaz de uno o más de dichos agentes activos. En determinadas realizaciones, los agentes activos adicionales pueden ser antibióticos (p. ej., péptidos o proteínas antibacterianos o bacteriostáticos), p. ej., los eficaces contra bacterias Gram positivas o negativas, fluidos, citoquinas, agentes inmunorreguladores, agentes antiinflamatorios, agentes activadores del complemento, tales como péptidos o proteínas que comprenden dominios de tipo colágeno o dominios de tipo fibrinógeno (p. ej., una ficolina), dominios de unión a carbohidratos y similares y combinaciones de los mismos. Los agentes activos adicionales incluyen aquellos útiles en dichas composiciones y métodos que incluyen fármacos de terapia de dopamina, inhibidores de catecol-O-metil transferasa (COMT), inhibidores de monamino oxidasa, potenciadores de la cognición (tales como inhibidores de acetilcolinesterasa o memantina), antagonistas del receptor de adenosina 2A, inhibidores de beta-secretasa e inhibidores de gammasecretasa. En realizaciones particulares, al menos un compuesto de la presente invención puede combinarse en una composición farmacéutica o un método de tratamiento con uno o más fármacos seleccionados del grupo que consiste en: tacrina (Cognex), donepezilo (Aricept), rivastigmina (Exelon), galantamina (Reminyl), fisostigmina, neostigmina, icopezilo (CP-118954, maleato de 5,7-dihidro-3-(2-(1-(2-fluorobencil)-4-piperidinil)etil)-6H-pirrolo(3,2,f)-1,2-benzoisoxazol-6-ona), ER-127528 (hidrocloruro de 4-[(5,6-dimetoxi-2-fluoro-1-indanon)-2-il]metil-1-(3-fluorobencil)piperidina), zanapezilo (TAK-147; fumarato de 3-[1-(fenilmetil)piperidin-4-il]-1-(2,3,4,5-tetrahidro-1H-1-benzazepin-8-ilo)-1-propano), metrifonato (T-588; hidrocloruro de (-)-R-a-[[2-(dimetilamino)etoxi]metil]benzo[b]tiofeno-5-metanol), FK-960 (N-(4-acetil-1-piperazinil)-p-fluorobenzamida-hidrato), Tc H-346 (N-metil-N-2-pirofinildibenz[b,f] oxepina-10-metanamina), SDZ-220-581 (ácido (S)-alfa-amino-5-(fosfonometil)-[1,1'-bifenil]-3-propiónico), memantina (Namenda/Exiba), 1,3,3,5,5-pentametilciclohexan-1-amina (Neramexano), tarenflurbilo (Flurizan), tramiprosato (Alzhemed), clioquinol, PBT-2 (un derivado de 8-hidroxiquinilona), 1-(2-(2-naftil)etil)-4-(3-trifluorometilfenil)-1,2,3,6-tetrahidropiridina, huperzina A, posatirelina, leuprolida o sus derivados, isproniclina, ácido (3-aminopropil)(nbutil)fosfínico (SGS-742), N-metil-5-(3-(5-isopropoxipiridinil))-4-penten-2-amina (isproniclina), 1-decanaminio, N-(2-hidroxi-3-sulfopropil)-N-metil-N-octilo-, sal interna (zt-1), salicilatos, aspirina, amoxiprina, benorilato, salicilato de colina y magnesio, diflunisal, faislamina, salicilato de metilo, salicilato de magnesio, salicilato de salicilo, diclofenaco, aceclofenaco, acemetacina, bromfenaco, etodolaco, indometacina, nabumetona, sulindac, tolmetina, ibuprofeno, carprofeno, fenbufeno, fenoprofeno, flurbiprofeno, ketoprofeno, ketorolaco, loxoprofeno, naproxeno, ácido tiaprofénico, suprofeno, ácido mefenámico, ácido meclofenámico, metamizol, oxifenbutazona, sulfinprazona, piroxicam, lornoxicam, meloxicam, tenoxicam, celecoxib, etoricoxib, lumiracoxib, parecoxib, rofecoxib, valdecoxib, nimesulida, ácidos arilalcanoicos, ácidos 2-arilpropiónicos (profenos), ácidos N-arilantranílicos (ácidos fenámicos), derivados de pirazolidina, oxicams, inhibidores de COX-2, sulfonanilidas, ácidos grasos esenciales y Minozac (dihidrocloruro de 2-(4-(4-metil-6-fenilpiridazin-3-il)piperazin-1 -il)pirimidina hidrato) y combinaciones de los mismos.
Los agentes de combinación potenciales para terapias contra el cáncer pueden incluir, por ejemplo, inhibidores de proteína y lípido quinasa (p. ej., PI3K, B-raf, BCR/ABL), potenciadores del tratamiento con radiación, agentes de unión de microtúbulos (p. ej., taxol, vinblastina), inhibidores del metabolismo celular, intercaladores de ADN, inhibidores de la topoisomerasa (p. ej., doxorrubicina) y agentes alquilantes del ADN.
Ensayos
Los compuestos descritos en el presente documento se pueden utilizar en aplicaciones de investigación, que incluyen sistemas experimentales in vitro, in vivo o ex vivo. Los sistemas experimentales pueden incluir, sin limitación, muestras de células, muestras de tejido, componentes celulares o mezclas de componentes celulares, órganos completos o parciales u organismos. Las aplicaciones de investigación incluyen, sin limitación, el uso como reactivos de ensayo, la elucidación de rutas bioquímicas o la evaluación de los efectos de otros agentes en el sistema experimental en presencia o ausencia de uno o más compuestos descritos en el presente documento.
Los compuestos descritos en el presente documento también se pueden usar en ensayos bioquímicos. En algunas realizaciones, un compuesto descrito en el presente documento se puede incubar con una muestra de tejido o célula de un sujeto para evaluar la respuesta potencial del sujeto a la administración del compuesto, o para determinar qué compuesto descrito en el presente documento produce el efecto óptimo en un sujeto específico o conjunto de sujetos. Un ensayo de este tipo implicaría (a) obtener una muestra de células o una muestra de tejido de un sujeto en el que se pueda ensayar la modulación de uno o más biomarcadores; (b) administrar uno o más compuestos descritos en el presente documento a la muestra de células o muestra de tejido; y (c) determinar la cantidad de modulación de uno o más biomarcadores después de la administración del compuesto, en comparación con el estado del biomarcador antes de la administración del compuesto. Opcionalmente, después de la etapa (c), el ensayo implicaría una etapa adicional (d) de seleccionar un compuesto para su uso en el tratamiento de una enfermedad o afección médica asociada con la agregación de proteínas basándose en la cantidad de modulación determinada en la etapa (c).
Síntesis química
Las entidades químicas de ejemplo útiles en los métodos de la invención se describirán ahora con referencia a esquemas sintéticos ilustrativos para su preparación general a continuación y en los ejemplos específicos que siguen. Los expertos reconocerán que, para obtener los diversos compuestos del presente documento, los materiales de partida pueden seleccionarse adecuadamente de modo que los sustituyentes deseados finalmente se lleven a través del esquema de reacción con o sin protección según sea apropiado para dar el producto deseado. Alternativamente, puede ser necesario o deseable emplear, en lugar del sustituyente finalmente deseado, un grupo adecuado que pueda ser llevado a través del esquema de reacción y reemplazado según sea apropiado con el sustituyente deseado. Además, un experto en la técnica reconocerá que las transformaciones mostradas en los esquemas siguientes se pueden realizar en cualquier orden que sea compatible con la funcionalidad de los grupos colgantes particulares. Cada una de las reacciones representadas en los esquemas generales se lleva a cabo preferiblemente a una temperatura de aproximadamente 0°C a la temperatura de reflujo del disolvente orgánico usado. A menos que se especifique lo contrario, las variables son como se definieron anteriormente en referencia a la Fórmula (I). Los compuestos marcados isotópicamente como se describen en el presente documento se preparan de acuerdo con los métodos descritos a continuación, usando materiales de partida adecuadamente marcados. Dichos materiales están generalmente disponibles de proveedores comerciales de reactivos químicos radiomarcados.
Figure imgf000014_0001
Ciertos compuestos de Fórmula (I) se preparan como se muestra en el Esquema A. Los derivados de amino sustituidos A1 están disponibles comercialmente o se preparan de acuerdo con métodos conocidos, por ejemplo los descritos en la publicación internacional WO 2015/116663. Los compuestos A1 se acoplan con compuestos de acilo activados A2, en donde X es, por ejemplo, -OH o -Cl, e Y es un grupo saliente, por ejemplo halógeno, p. ej. Br, en condiciones convencionales de formación de amidas para producir compuestos A3. Los compuestos A3 se pueden convertir en derivados de Fórmula (I) usando condiciones conocidas por los expertos en la técnica, por ejemplo, las descritas en la publicación internacional WO2015116663. Las condiciones de reacción de ejemplo para dichas transformaciones incluyen calentar los compuestos A3 en donde Y es un grupo saliente, tal como halógeno, por ejemplo Br, con compuestos A4 a una temperatura elevada, por ejemplo 80 - 120°C, y presión, es decir, en un recipiente sellado, en un disolvente adecuado, por ejemplo acetonitrilo, en presencia de una base, por ejemplo K2CO3, durante un período de tiempo apropiado, por ejemplo, de 12 - 24 horas.
Figure imgf000014_0002
Como se muestra en el Esquema B, los compuestos A1 en donde B es un indol sustituido se pueden preparar a partir del metil-indol B1 por acilación seguida de aminación reductora. Estos métodos también son aplicables a la preparación de derivados donde el anillo R1 no es indol.
Esquema C
Figure imgf000014_0003
Como se muestra en el esquema C, los compuestos intermedios A1 también se pueden preparar usando una reacción de Henry para acoplar un aldehído heterocíclico C1 con un nitroalcano C2 adecuado. La reducción tanto del doble enlace como del grupo nitro (en una o dos etapas) de C3 proporciona las aminas A1.
Figure imgf000014_0004
Como se muestra en el Esquema D, los compuestos intermedios sustituidos en donde B es un indol, es decir, D1 también se pueden preparar por la reacción de Bartoli mediante la ciclación de un derivado de nitrofenilo D1 con bromuro de vinilmagnesio para formar indoles sustituidos D2. La instalación de un sustituyente carbaldehído en la posición 3 del indol se puede llevar a cabo, por ejemplo, mediante una reacción de Vilsmaier-Haack para dar aldehídos D3.
Los compuestos A4 están disponibles comercialmente o pueden prepararse como se describe en los Ejemplos. Por ejemplo, un derivado de piperazina adecuadamente protegido puede hacerse reaccionar con un grupo Ar adecuadamente funcionalizado, por ejemplo ArBr donde Ar es pirimidina, en un disolvente adecuado, por ejemplo tolueno, en presencia de una base, por ejemplo NaOtBu, en presencia de un catalizador apropiado, por ejemplo Pd(tBu3 P)2 a temperatura elevada, por ejemplo 80 - 1102C durante un período de tiempo apropiado, por ejemplo 16 -24 horas. La desprotección, utilizando condiciones conocidas por los expertos en la técnica, proporciona entonces los compuestos A4. Alternativamente, se puede hacer reaccionar un derivado de piperazina adecuadamente protegido con un grupo Ar adecuadamente funcionalizado, por ejemplo Arl, donde Ar es un pirazol adecuadamente protegido, en un disolvente adecuado, por ejemplo iPrOH, en presencia de una base, por ejemplo K3PO4, en presencia de un catalizador apropiado, por ejemplo Cul, y un ligando adecuado tal como etilenglicol a temperatura elevada, por ejemplo 100°C, durante un período de tiempo adecuado, por ejemplo 16-24 horas. Los expertos en la técnica apreciarán que también puede ser necesario el uso de un grupo protector en el pirazol y poder seleccionarlo de forma apropiada. Los expertos en la técnica conocerán grupos protectores adecuados (Protective Groups in Organic Synthesis, 3a edición, T. W. Greene, P. G. M. Wuts, Wiley-interscience, ISBN 0-471-16019-9) e incluyen bencilo y SEM (2-(trimetilsilil)etoximetilo). Los expertos en la técnica apreciarán que ciertos grupos protectores en el pirazol pueden desprotegerse simultáneamente con el grupo protector de piperazina, p. ej., SEM y BOC, mediante el uso de ácido fuerte, o selectivamente, p. ej., bencilo y BOC.
Ejemplos
Métodos analíticos
Los espectros de espectrometría de masas (MS) se registraron en un espectrómetro de masas LCMS-2010EV (Shimadzu) con ionización por electropulverización (ESI) acoplado a un HPLC modular Prominence (Shimadzu) usando una columna Xbridge C18-2,1x30 mm, 2,5 gm (Waters). Se inyectó un volumen de 3 gl de solución de muestra con una concentración de aprox. 1 mg/ml. La fase móvil para las condiciones básicas era una mezcla de A) formiato de amonio 5 mM amoniaco al 0,1% en agua, B) fase móvil A al 5% amoniaco al 0,1% en acetonitrilo. El gradiente utilizado era el siguiente - 5:95 (B/A) a 95:5 (B/A) en 4 min y mantenimiento de 95:5 (B/A) durante el siguiente 1 min. La cromatografía en fase normal se realizó usando columnas de gel de sílice (gel de sílice de n° de malla 100:200 o cartuchos para sistemas de cromatografía ultrarrápida como Teledyne Isco CombiFlash®).
Los espectros de RMN se registraron en un espectrómetro de RMN Varian de 400 MHz con tiempo de adquisición (at) = 2,0 s, retardo de relajación (d1) = 2,0 s y ensanchamiento de línea (lb) = 0,5 Hz. Los desplazamientos químicos son tomando como referencia señales derivadas de protones residuales de los disolventes deuterados (DMSO-d6 o CDCh). Los cambios químicos se dan en partes por millón (ppm) y las constantes de acoplamiento (J) en hercios (Hz). Las multiplicidades de espín se dan como ancho (an.), singlete (s), doblete (d), triplete (t), cuartete (q) y multiplete (m). Abreviaturas/reactivos frecuentes
Ac: acetilo
ACN o MeCN: acetonitrilo
Salmuera: solución acuosa saturada de cloruro de sodio
nBu: n-butilo
íBu: terc-butilo
DCM: diclorometano
DMAP: 4-(dimetilamino)piridina
DMF: W,W-Dimetilformamida
DMSO: dimetilsulfóxido
ES+ : Ionización positiva por electropulverización
ES- : Ionización negativa por electropulverización
ESI: ionización por electropulverización
Et2O: éter dietílico
EtOAc: acetato de etilo
HATU: hexafluorofosfato de 3-óxido de 1-[bis(dimetilamino)metilen]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridinio
HPLC: cromatografía líquida de alta resolución
DIPEA: N,N-diisopropiletilamina
DMAP: 4-(dimetilamino)piridina
h: hora
LC: cromatografía líquida
LCMS: Cromatografía líquida-Espectrometría de masas
Me: metilo
MeOH: metanol
MS: espectrometría de masas
min: minutos
RMN: resonancia magnética nuclear
t.a.: temperatura ambiente
TBAF: fluoruro de tetra-n-butilamonio
TEA: Trietilamina
TFA: ácido trifluoroacético
THF: tetrahidrofurano
TLC: cromatografía de capa fina
Los nombres de los compuestos se generaron a partir de las estructuras dibujadas utilizando Biovia Draw 2016 versión 16.1. Los siguientes ejemplos se ofrecen para ilustrar pero no limitar la invención. Un experto en la técnica reconocerá que las siguientes reacciones y esquemas sintéticos pueden modificarse mediante la elección de materiales de partida y reactivos adecuados con el fin de acceder a otros compuestos de Fórmula (I).
Ejemplo 1: N-[1 -(1 H-indol-3-ilmetil]2-(4-pirimidin-5-ilpiperazin-1 -il)tiazol-5-carboxamida
Figure imgf000016_0001
Etapa-1: Síntesis de hidrocloruro de 5-(piperazin-1-il)pirimidina
A una solución de 5-bromopirimidina (1,00 g, 6,30 mmol) en tolueno (20 ml) se le añadió piperazina-1-carboxilato de terc-butilo (1,17 g, 6,30 mmol) seguido de la adición de tBuONa (0,81 g, 8,50 mmol). La mezcla de reacción se purgó con argón durante 20 min. Se añadió Pd(f-Bu3P)2 (0,32 g, 0,62 mmol) y la mezcla de reacción se purgó con argón durante 10 min. La mezcla de reacción se calentó a 100°C durante 16 h. El progreso de la reacción se vigiló por TLC y LCMS. Una vez completada, la mezcla de reacción se concentró a vacío. La mezcla bruta obtenida se purificó por cromatografía en columna (sílice, n° de malla 100-200, EtOAc en hexanos del 5 al 25%). El producto se disolvió en dioxano HCl 4 M (10 ml) a 0°C y se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. La mezcla de reacción se filtró, se lavó con dioxano frío (5 ml), se secó a vacío para proporcionar el hidrocloruro de 5-(piperazin-1-il)pirimidina (0,35 g, 61%) como un sólido blanquecino.
EM (ESI) m/e [M+H]+/Rt /%: 165,00/1,35/88,5%
Etapa-2: Síntesis de N-(1 -(1 H-indol-3-il)hexan-2-il)-2-(4-(pirimidin-5-il)piperazin-1 -il)tiazol-5-carboxamida
A una solución de 2-bromo-N-[1-(1H-indol-3-ilmetil)pentil]tiazol-5-carboxamida (0,15 g, 0,36 mmol) e hidrocloruro de 5-(piperazin-1-il)pirimidina (0,11 g, 0,55 mmol) en CH3CN (5 ml) se añadió K2CO3 (0,25 g, 1,84 mmol). La mezcla de reacción se calentó en un tubo sellado a 120°C durante 16 h. El progreso de la reacción se vigiló por TLC y LCMS. Una vez completada, la mezcla de reacción se concentró a vacío. El residuo se diluyó con H2O (10 ml) y se extrajo con MeOH en DCM al 5% (3 x 10 ml). La capa orgánica se separó, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a vacío. La mezcla bruta obtenida se purificó por cromatografía en columna (sílice, n° de malla 230-400, MeOH en DCM del 0,5 al 3,2%) y se trituró con DCM:pentano (1:9, 10 ml) para dar la N-[1-(1 H-indol-3-ilmetil)pentil]-2-(4-pirimidin-5-ilpiperazin-1-il)tiazol-5-carboxamida (0,060 g, 33%) como un sólido blanco.
Pureza HPLC: 99,3%
EM (ESI) m/e [M+H]+/Rt/%: 490,00/2,61/97,8%
RMN 1H (400 MHz, DMSO-de) 50,82 (t, J = 7,3 Hz, 3H) 1,14 - 1,37 (m, 4H) 1,41 - 1,59 (m, 2H) 2,75 - 3,01 (m, 2H) 3,42­ 3,46 (m, 4H) 3,60-3,66 (m, 4H) 4,10-4,18 (m, 1H) 6,91 - 6,99 (m, 1H) 7,04 (t, J= 7,34 Hz, 1H) 7,10 (s, 1H) 7,31 (d, J = 7,83 Hz, 1H) 7,58 (d, J= 7,82 Hz, 1H) 7,85 (s, 1H) 7,99 (d, J= 8,31 Hz, 1H) 8,54 (s, 2H) 8,62 (s, 1H) 10,76 (s an., 1H), Ejemplo 2: N-[1 -(1 H-indol-3-ilmetil)pentil]-2-(4-pirimidin-2-ilpiperazin-1 -il)tiazol-5-carboxamida
Figure imgf000017_0001
A una solución de 2-bromo-N-[1-(1H-indol-3-ilmetil)pentil]tiazol-5-carboxamida (0,15 g, 0,36 mmol) y 2-piperazin-1-ilpirimidina (0,09 g, 0,55 mmol) en CH3CN (5 ml) se añadió K2CO3 (0,15 g, 1,10 mmol) y la mezcla de reacción se calentó en un tubo sellado a 100°C durante 16 h. El progreso de la reacción se vigiló por TLC y LCMS. Una vez completada, la mezcla de reacción se concentró a vacío. El residuo se diluyó con H2O (10 ml) y se extrajo con MeOH en DCM al 10% (3 x 10 ml). La capa orgánica se separó, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a vacío. El residuo bruto obtenido se purificó mediante cromatografía en columna (sílice, n° de malla 230-400, MeOH en DCM del 0,5 al 4%) para producir la N-[1-(1 H-indol-3-ilmetil)pentil]-2-(4-pirimidin-2-ilpiperazin-1-il)tiazol-5-carboxamida (0,13 g, 72%) como un sólido blanquecino.
Pureza por HPLC: 96,2%
EM (ESI) m/e [M+H]+/Rt/%: 490,00/2,91/99,2%
RMN 1H (400 MHz, DMSO-de) 50,81 (t, J = 6,8 Hz, 3H) 1,18-1,38 (m, 4H) 1,44-1,58 (m, 2H) 2,80-2,94 (m, 2H) 3,52­ 3,58 (m, 4H) 3,84-3,92 (m, 4H) 4,08-4,16 (m, 1 H) 6,68 (s, 1H) 6,96-7,04 (m, 2H) 7,10 (s, 1H) 7,28-7,34 (m, 1H) 7,56­ 7,60 (m, 1H) 7,84 (s, 1H) 7,94 - 8,00 (m, 1H) 8,41 (s, 2H) 10,76 (s, 1H).
Ejemplo 3: N-[1 -(1 H-indol-3-ilmetil)pentil]-2-[4-(4-piridil)piperazin-1 -il]tiazol-5-carboxamida
Figure imgf000018_0001
A una solución de 2-bromo-N-[1-(1H-indol-3-ilmetil)pentil]tiazol-5-carboxamida (0,15 g, 0,36 mmol) y 1-(4-piridil)piperazina (0,09 g, 0,55 mmol) en CH3CN (5 ml) se añadió K2CO3 (0,15 g, 1,10 mmol) y la mezcla de reacción se calentó en un tubo sellado a 100°C durante 16 h. El progreso de la reacción se vigiló por TLC y LCMS. Una vez completada, la mezcla de reacción se concentró a vacío. El residuo se diluyó con H2O (10 ml) y se extrajo con MeOH en DCM al 10% (3 x 10 ml). La capa orgánica se separó, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a vacío. El producto bruto obtenido se purificó por HPLC preparativa para dar la N-[1-(1H-indol-3-ilmetil)pentil]-2-[4-(4-piridil)piperazin-1-il]tiazol-5-carboxamida (0,04 g, 22%) como un sólido blanco.
Pureza por HPLC: 99,6%
EM (ESI) m/e [M+H]+/Rt/%: 489,00/2,73/96,7%
RMN 1H (400 MHz, DMSO-afe) 50,81 (t, J = 7,3 Hz, 3H) 1,18-1,40 (m, 4H) 1,42-1,60 (m, 2H) 2,80-2,96 (m, 2H) 3,44 -3,66 (m, 8H) 4,10-4,18 (m, 1H) 6,86 (s, 2H) 6,95 (s an., 1H) 7,00 - 7,13 (m, 2H) 7,31 (d, J= 7,34 Hz, 1H) 7,58 (d, J= 6,85 Hz, 1H) 7,84 (s, 1 H) 7,97 (d, J= 7,34 Hz, 1H) 8,19 (s an., 2H) 10,75 (s an., 1 H)
Ejemplo 4: N-[1 -(1 H-indol-3-ilmetil)pentil]-2-[4-(3-piridil)piperazin-1 -il]tiazol-5-carboxamida
Figure imgf000018_0002
A una solución de 2-bromo-N-[1-(1H-indol-3-ilmetil)pentil]tiazol-5-carboxamida (0,15 g, 0,36 mmol) y 1-(3-piridil)piperazina (0,17 g, 0,55 mmol) en CH3CN (5 ml) se añadió K2CO3 (0,15 g, 1,10 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a 120°C durante 16 h. El progreso de la reacción se vigiló por TLC y LCMS. Una vez completada, la mezcla de reacción se concentró a vacío. El residuo se diluyó con H2O (10 ml) y se extrajo con MeOH en d Cm al 10% (2 x 10 ml). La capa orgánica se separó, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a vacío. El residuo bruto obtenido se purificó por cromatografía en columna (sílice n° de malla 230-400, MeOH en DCM del 0,5 al 4%) y se trituró con pentano (15 ml) para producir la N-[1-(1H-indol-3-ilmetil)pentil]-2-[4-(3-piridil)piperazin-1-il]tiazol-5-carboxamida (0,10 g, 55%) como un sólido blanquecino.
Pureza por HPLC: 95,3%
EM (ESI) m/e [M+H]+/Rt/%: 489,00/2,77/97,9%
RMN 1H (400 MHz, DMSO-afe) 50,84 (t, J = 6,8 Hz, 3H) 1,20-1,40 (m, 6H) 1,24-1,38 (m, 2H) 2,77 - 2,95 (m, 2H) 3,30­ 3,40 (m, 4H) 3,60-3,68 (m, 4H) 4,10-4,18 ( m, 1H) 6,96 (t, J = 7,1 Hz, 1H) 7,13 - 7,00 (m, 3H) 7,24-7,32 (m, 1H) 7,38 (d, J = 8,0 Hz, 1 H) 7,58 (d, J = 7,6 Hz, 1H) 7,85 (s, 1H) 7,98 (d, J = 8,2 Hz, 1H) 8,36 (s, 1H).
Ejemplo 5: N-[1 -(1 H-indol-3-ilmetil)pentil]-2-[4-(2-piridil)piperazin-1 -il]tiazol-5-carboxamida
Figure imgf000019_0001
A una solución de 2-bromo-N-[1-(1H-indol-3-ilmetil)pentil]tiazol-5-carboxamida (0,15 g, 0,36 mmol) y 1-(2-piridil)piperazina (0,07 g, 0,46 mmol) en CH3CN (5 ml) se añadió K2CO3 (0,15 g, 1,10 mmol) y la mezcla de reacción se calentó en un tubo sellado a 100°C durante 16 h. El progreso de la reacción se vigiló por TLC y LCMS. Una vez completada, la mezcla de reacción se concentró a vacío. El residuo se diluyó con H2O (10 ml) y se extrajo con MeOH en DCM al 10% (3 x 5 ml). La capa orgánica se separó, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a vacío. El producto bruto obtenido se purificó por cromatografía en columna (sílice, n° de malla 230-400, MeOH en DCM del 0,1 al 1,9%) para dar la N-[1-(1H-indol-3-ilmetil)pentil]-2-[4-(2-piridil)piperazin-1-il]tiazol-5-carboxamida (0,11 g, 61%) como un sólido blanquecino.
Pureza por HPLC: 95,3%
EM (ESI) m/e [M+H]+/Rt/%: 489,00/3,01/97,1%
RMN 1H (400 MHz, DMSO-de) 50,82 (t, J = 6,8 Hz, 3H) 1,19 - 1,40 (m, 4H) 1,44-1,60 (m, 2H) 2,77 - 2,95 (m, 2H) 3,52 - 3,59 (m, 4H) 3,62 - 3,69 (m, 4H) 4,10-4,16 (m, 1 H) 6,68 (dd, J = 7,1,4,9 Hz, 1H) 6,85 - 7,12 (m, 4H) 7,31 (d, J = 8,1 Hz, 1H) 7,52 - 7,61 (m, 2H) 7,84 (s, 1H) 7,97 (d, J = 8,4 Hz, 1H) 8,14 (d, J = 4,9 Hz, 1H) 10,78 (s, 1H)
Ejemplo 6: N-[1 -(1 H-indol-3-ilmetil)pentil]-2-(4-pirimidin-4-ilpiperazin-1 -il)tiazol-5-carboxamida
Figure imgf000019_0002
A una solución de 2-bromo-N-[1-(1H-indol-3-ilmetil)pentil]tiazol-5-carboxamida (0,15 g, 0,36 mmol) y 4-piperazin-1-ilpirimidina (0,09 g, 0,55 mmol en CH3CN (5 ml) se añadió K2CO3 (0,15 g, 1,10 mmol) y la mezcla de reacción se calentó en un tubo sellado a 100°C durante 16 h. El progreso de la reacción se vigiló por TLC y LCMS. Una vez completada, la mezcla de reacción se concentró a vacío. El residuo se diluyó con H2O (10 ml) y se extrajo con MeOH en DCM al 10% (3 x 10 ml). La capa orgánica se separó, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a vacío. El producto bruto obtenido se purificó por HPLC preparativa para producir la N-[1 -(1 H-indol-3-ilmetil)pentil]-2-(4-pirimidin-4-ilpiperazin-1-il)tiazol-5-carboxamida (0,04 g, 22%) como un sólido blanco.
Pureza por HPLC: 98,1%
EM (ESI) m/e [M+H]+/Rt/%: 490,00/2,6498,2%
RMN 1H (400 MHz, DMSO-de) 50,81 (t, J = 6,8 Hz, 3H) 1,18-1,36 (m, 4H) 1,44-1,58 (m, 2H) 2,82-2,94 (m, 2H) 3,52­ 3,60 (m, 4H) 3,76-3,82 (m, 4H) 4,08-4,14 (m, 1H) 6,90-7,04 (m, 3H) 7,10 (s, 1H) 7,31 (d, J = 7,2 Hz, 1H) 7,58 (d, J = 7,0 Hz, 1H) 7,84 (s, 1H) 7,98 (d, J = 7,2 Hz, 1H) 8,23 (s, 1H) 8,54 (s, 1 H) 10,76 (s, 1H).
Ejemplo 7: N-[1 -(1 H-indol-3-ilmetil)pentil]-2-(4-piridazin-4-ilpiperazin-1 -il)tiazol-5-carboxamida
Figure imgf000020_0001
Etapa-1: Síntesis de 3,6-dicloro-4-piperazin-1-il-piridazina
A una solución de 3,4,6-tricloropiridazina (3,90 g, 16,3 mmol) en EtOH (20 ml) se le añadió piperazina (5,60 g, 65,4 mmol). La mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 1 hora. El progreso de la reacción se vigiló por TLC y LCMS. Una vez completada, la mezcla de reacción se filtró y se lavó con EtOH (5 ml). El filtrado se concentró a vacío, el residuo se diluyó con H2O (5 ml), se agitó durante 30 min y se filtró. El residuo bruto obtenido se secó a vacío y se purificó triturando con pentano (5 ml) para dar la 3,6-dicloro-4-piperazin-1 -ilpiridazina (2,00 g, 52%) como un sólido blanco.
EM (ESI) m/e [M+H]+/Rt/%: 233,00/1,84/99,0%
RMN 1H (400 MHz, DMSO-afe) 52,78-2,86 (m, 4H) 3,17 (s, 1H) 3,20-3,28 (m, 4H) 7,35 (s, 1H).
Etapa-2: Síntesis de hidrocloruro de 4-piperazin-1 -ilpiridazina
A una solución de 3,6-dicloro-4-piperazin-1 -il-piridazina (1,00 g, 4,29 mmol) en MeOH (20 ml) se le añadió NaOAc (0,70 g, 8,58 mmol) seguido de la adición de Pd/C (0,20 g). La mezcla de reacción se agitó en un autoclave a temperatura ambiente durante 6 h bajo 3,5 kg/cm2 (50 psi) de presión de hidrógeno. El progreso de la reacción se vigiló por TLC y LCMS. Una vez completada, la mezcla de reacción se filtró a través de Celite, se lavó con MeOH (25 ml) y el filtrado se concentró a vacío. El residuo bruto obtenido se disolvió en DCM (10 ml), se lavó con NaOH al 2% (10 ml). La capa orgánica se separó, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a vacío. El producto se disolvió en dioxano HCl (5 ml) a 0°C y se agitó a temperatura ambiente durante 10 min. La mezcla de reacción se filtró, el residuo se secó a vacío y se lavó con pentano (20 ml) para dar el hidrocloruro de 4-piperazin-1 -ilpiridazina (0,22 g bruto) como un sólido blanco.
EM (ESI) m/e [M+H]+ : 165,00/1,30/99,0%
RMN 1H (400 MHz, DMSO-afe) 53,21 - 3,27 (m, 4H) 3,58 (s, 1H) 7,84 - 7,94 (m, 4H) 7,24 - 7,30 (m, 1 H) 8,84 (d, J = 6,7 Hz, 1H) 9,03 (d, J = 2,4 Hz, 1H).
Etapa-3: Síntesis de N-[1-(1 H-indol-3-ilmetil)pentil]-2-(4-piridazin-4-ilpiperazin-1-il)tiazol-5-carboxamida
A una solución del hidrocloruro de 4-piperazin-1 -ilpiridazina (0,09 g, 0,48 mmol) y 2-bromo-N-[1-(1H-indol-3-ilmetil)pentil]tiazol-5-carboxamida (0,15 g, 0,58 mmol) en CH3CN (5 ml) se añadió K2CO3 (0,25 g, 1,84 mmol). La mezcla de reacción se calentó en un tubo sellado a 120°C durante 16 h. El progreso de la reacción se vigiló por TLC y LCMS. Una vez completada, la mezcla de reacción se concentró a vacío. El residuo se diluyó con H2O (10 ml) y se extrajo con MeOH en DCM al 10% (3 x 10 ml). La capa orgánica se separó, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a vacío. El residuo bruto obtenido se purificó por cromatografía en columna (sílice, n° de malla 230-400, MeOH en DCM del 0,5 al 3%) y HPLC preparativa para dar la N-[1 -(1 H-indol-3-ilmetil)pentil]-2-(4-piridazin-4-ilpiperazin-1-il)tiazol-5-carboxamida (0,034 g, 18%) como un sólido blanquecino.
Pureza por HPLC: 99,5%
EM (ESI) m/e [M+H]+/Rt/%: 490,00/2,52/98,8%
RMN 1H (400 MHz, DMSO-afe) 50,82 (t, J = 7,3 Hz, 3H) 1,18-1,28 (m, 4H) 1,42-1,62 (m, 2H) 2,80-2,94 (m, 2H) 3,58­ 3,66 (m, 8H) 4,08-4,18 (m, 1H) 6,92-7,02 (m, 3H) 7,09 (s, 1H) 7,32 (d, J = 7,4 Hz, 1H) 7,59 (d, J = 7,0 Hz, 1 H) 7,86 (s, 1H) 8,00 (d, J = 7,1 Hz, 1 H) 8,67 (s, 1H) 9,02 (s, 1H) 10,77 (s, 1H).
Ejemplo 8: N-[1 -(1 H-indol-3-ilmetil)pentil]-2-(4-piridazin-3-ilpiperazin-1 -il)tiazol-5-carboxamida
Figure imgf000021_0001
A una solución de 2-bromo-N-[1-(1H-indol-3-ilmetil)pentil]tiazol-5-carboxamida (0,15 g, 0,36 mmol) y 3-piperazin-1-ilpiridazina (0,09 g, 0,55 mmol) en CH3CN (5 ml) se añadió K2CO3 (0,15 g, 1,10 mmol) y la mezcla de reacción se calentó en un tubo sellado a 100°C durante 16 h. El progreso de la reacción se vigiló por TLC y LCMS. Una vez completada, la mezcla de reacción se concentró a vacío. El residuo se diluyó con H2O (10 ml) y se extrajo con MeOH en DCM al 10% (3 x 10 ml). La capa orgánica se separó, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a vacío. El residuo bruto obtenido se purificó por cromatografía en columna (sílice, n° de malla 230-400, MeOH en DCM del 0,5 al 4%) para producir la N-[1-(1H-indol-3-ilmetil)pentil]-2-(4-piridazin-3-ilpiperazin-1-il)tiazol-5-carboxamida (0,11 g, 61 %) como un sólido blanco.
Pureza por HPLC: 95,3%
EM (ESI) m/e [M+H]+/Rt/%: 490,00/2,61/99,1%
RMN 1H (400 MHz, DMSO-de) 50,81 (t, J = 6,8 Hz, 3H) 1,18-1,38 (m, 4H) 1,44-1,58 (m, 2H) 2,78-2,92 (m, 2H) 3,52­ 3,60 (m, 4H) 3,76-3,82 (m, 4H) 4,08-4,16 ( m, 1H) 6,88-7,04 (m, 3H) 7,10 (s, 1 H) 7,31 (d, J = 8,4 Hz, 1H) 7,58 (d, J = 6,6 Hz, 1 H) 7,85 (s, 1H) 7,98 (d, J = 7,4 Hz, 1H) 8,22 (s, 1H) 8,59 (s, 1H) 10,76 (s, 1H).
Ejemplo 9: N-[1 -(1 H-indol-3-ilmetil)pentil]-2-(4-pirazin-2-ilpiperazin-1 -il)tiazol-5-carboxamida
Figure imgf000021_0002
Etapa-1: Síntesis de N-[1 -(1 H-indol-3-ilmetil)pentil]-2-(4-pirazin-2-ilpiperazin-1 -il)tiazol-5-carboxamida
A una solución de 2-bromo-N-[1-(1H-indol-3-ilmetil)pentil]tiazol-5-carboxamida (0,15 g, 0,36 mmol) y 2-piperazin-1-ilpirazina (0,09 g, 0,55 mmol) en CH3CN (5 ml) se añadió K2CO3 (0,15 g, 1,10 mmol) y la mezcla de reacción se calentó en un tubo sellado a 100°C durante 16 h. El progreso de la reacción se vigiló por TLC y LCMS. Una vez completada, la mezcla de reacción se concentró a vacío. El residuo se diluyó con H2O (10 ml) y se extrajo con MeOH en d Cm al 10% (3 x 10 ml). La capa orgánica se separó, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a vacío. El residuo bruto obtenido se purificó por cromatografía en columna (sílice, n° de malla 230-400, MeOH en DCM del 0,5 al 4%) para dar la N-[1 -(1H-indol-3-ilmetil)pentil]-2-(4-pirazin-2-ilpiperazin-1-il)tiazol-5-carboxamida (0,11 g, 61%) como un sólido blanco.
Pureza por HPLC: 99,6%
EM (ESI) m/e [M+H]+/Rt/%: 490,00/2,78/90,0%
RMN 1H (400 MHz, DMSO-de) 50,83 (t, J = 6,8 Hz, 3H) 1,18-1,38 (m, 4H) 1,44-1,60 (m, 2H) 2,80-2,94 (m, 2H) 3,56­ 3,62 (m, 4H) 3,72-3,80 (m, 4H), 4,08-4,18 (m, 1H) 6,95-7,10 (m, 3H) 7,31 (d, J = 6,6 Hz, 1H) 7,58 (d, J = 5,8 Hz, 1H) 7,86 (d, J = 14,8 Hz, 2H) 7,94 - 8,01 (m, 1H) 8,12 (s, 1H) 8,38 (s, 1H) 10,76 (s, 1H).
Ejemplo 10: N-[1 -(1 H-indol-3-ilmetil)pentil]-2-(4-fenilpiperazin-1 -il)tiazol-5-carboxamida
Figure imgf000022_0001
A una solución de 2-bromo-N-[1-(1 H-indol-3-ilmetil)pentil]tiazol-5-carboxamida (0,20 g, 0,49 mmol) y 1-fenilpiperazina (0,09 g, 0,54 mmol) en CH3CN (4,5 ml) se añadió K2CO3 (0,20 g, 1,47 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a 80°C durante 16 h. El progreso de la reacción se siguió por TLC y LCMS. Una vez completada, la mezcla de reacción se concentró a vacío. El residuo se diluyó con H2O (10 ml) y se extrajo con MeOH al 10% en DCM (10 ml). La capa orgánica se separó, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a vacío. El residuo bruto obtenido se purificó por cromatografía en columna (sílice, n° de malla 230-400, MeOH en DCM del 0 al 10%) y luego se trituró con éter de petróleo (6 ml), pentano (10 ml) y DCM (2 ml) para dar la N-[1-(1H-indol-3-ilmetil)pentil]-2-(4-fenilpiperazin-1-il)tiazol-5-carboxamida (0,15 g, 62%) como un sólido blanquecino.
Pureza por HPLC: 97,7%
EM (ESI) m/e [M+H]+/Rt/%: 488,00/3,28/96,8%
RMN 1H (400 MHz, DMSO-de) 50,81 (t, J= 6,60 Hz, 3H) 1,14 - 1,38 (m, 4H) 1,41 - 1,63 (m, 2H) 2,77 - 2,95 (m, 2H) 3,23 - 3,29 (m, 4H) 3,55 - 3,64 (m, 4H) 4,04-4,18 (m, 1 H) 6,83 (t, J= 7,09 Hz, 1H) 6,93 - 7,07 (m, 4H) 7,10 (d, J= 1,47 Hz, 1H) 7,21 - 7,27 (m, 2H) 7,31 (d, J= 7,83 Hz, 1 H) 7,58 (d, J= 7,83 Hz, 1H) 7,84 (s, 1H) 7,97 (d, J= 8,80 Hz, 1 H) 10,76 (s an., 1H),
Ejemplo 11: N-[1 -(1 H-indo)-3-imetilpentil]-2-[4-(1 H-pirazol-4-il)piperazin-1 -il]tiazol-5-carboxamida
Figure imgf000022_0002
Etapa-1: Síntesis de 4-(1-bencilpirazol-4-il)piperazina-1-carboxilato de terc-butilo
A una solución de 1-bencil-4-yodo-pirazol (2,73 g, 9,67 mmol) y piperazina-1-carboxilato de terc-butilo (1,50 g, 8,06 mmol) en i-PrOH (30 ml), se añadieron etilenglicol (0,50 g, 8,06 mmol), Cul (0,30 g, 1,61 mmol) y K3PO4 (6,83 g, 32,2 mmol). La mezcla de reacción se calentó a 100°C durante 16 h. El progreso de la reacción se vigiló por TLC y LCMS. Una vez completada, la mezcla de reacción se diluyó con DCM (20 ml), se filtró a través de Celite, se lavó con DCM (20 ml) y se concentró a vacío. El residuo se diluyó con DCM (150 ml) y se lavó con H2O (25 ml). La capa orgánica se separó, se lavó con salmuera (25 ml), se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a vacío. El residuo bruto obtenido se purificó por cromatografía en columna (sílice, n° de malla 100-200, MeOH en DCM del 1 al 3%) para dar el 4-(1-bencilpirazol-4-il)piperazina-1-carboxilato de terc-butilo (1,50 g, 55%) como un semisólido amarillo claro.
EM (ESI) m/e [M+H]+/Rt/%: 343,00/3,08/94,3%
Etapa-2: Síntesis de la sal de bis(ácido trifluoroacético) de la 1-(1-bencilpirazol-4-il)piperazina (estequiometría supuesta) A una solución de 4-(1-bencilpirazol-4-il)piperazina-1-carboxilato de terc-butilo (0,75 g, 2,19 mmol) en DCM (10 ml), se añadió gota a gota TFA (1,24 g, 10,9 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. El progreso de la reacción se vigiló por TLC y LCMS. Una vez completada, la mezcla de reacción se concentró a vacío para dar sal de bis(ácido trifluoroacético) de la 1 -(1 -bencilpirazol-4-il)piperazina (1,00 g en bruto, estequiometría supuesta) como un líquido marrón oscuro.
Este compuesto se usó como tal para la siguiente reacción sin purificación adicional.
EM (ESI) m/e [M+H]+/Rt/%: 243,00/2,08/88,7%
Etapa-3: Síntesis de la sal de bis(ácido trifluoroacético) de la 1-(1H-pirazol-4-il)piperazina (estequiometría supuesta)
A una solución de sal de bis(ácido trifluoroacético) de la 1-(1-bencilpirazol-4-il)piperazina (1,00 g bruto, supuesto 2,19 mmol) en MeOH (40 ml), se añadió Pd/C (1,00 g) y la mezcla de reacción se calentó a 602C bajo una presión de hidrógeno de 4,2 kg/cm2 (60 psi) durante 16 h. El progreso de la reacción se vigiló por TLC y LCMS. Una vez completada, la mezcla de reacción se filtró a través de Celite, se lavó con MeOH (20 ml) y el filtrado se concentró a vacío. El residuo bruto obtenido se purificó triturando con DCM (5 ml) para dar la sal de bis(ácido trifluoroacético) de la 1-(1H-pirazol-4-il)piperazina (0,25 g bruto, estequiometría supuesta) como un sólido marrón claro.
EM (ESI) m/e [M+H]+/Rt /%: 153,00/0,63/78,0%
Etapa-4: Síntesis de N-[1 -(1 H-indol-3-ilmetil)pentil]-2-[4-(1 H-pirazol-4-il)piperazin-1 -il]tiazol-5-carboxamida
A una solución de sal de bis(ácido trifluoroacético) de la 1-(1H-pirazol-4-il)piperazina (estequiometría supuesta) (0,14 g, 0,39 mmol) y 2-bromo-N-[1-(1H-indol-3-ilmetil)pentil]tiazol-5-carboxamida (0,40 g, 0,98 mmol) en CH3CN (10 ml), se añadió K2CO3 (0,40 g, 2,95 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a 90°C durante 16 h. El progreso de la reacción se vigiló por TLC y LCMS. Una vez completada, la mezcla de reacción se diluyó con MeOH en DCM al 5% (25 ml), se filtró a través de Celite, se lavó con MeOH en DCM al 5% (20 ml) y el filtrado se concentró al vacío. El residuo bruto obtenido se purificó por cromatografía en columna (sílice, n° de malla 100-200, MeOH en DCM del 1 al 4%) y luego se trituró con DCM:pentano (1:9, 15 ml) y pentano (3 x 15 ml) para dar la N-[1-(1H-indol-3-ilmetil)pentil]-2-[4-(1H-pirazol-4-il)piperazin-1-il]tiazol-5-carboxamida (0,09 g, 19%) como sólido blanquecino.
Pureza por HPLC: 99,0%
EM (ESI) m/e [M+H]+/Rt/%: 478,00/2,60/98,8%
RMN 1H (400 MHz, DMSO-afe) 50,84 (t, J = 6,60 Hz, 3H) 1,20-1,40 (m, 4H) 1,44-1,62 (m, 2H) 2,80-2,90 (m, 2H) 2,98­ 3,04 (m, 4H) 3,56-3,64 (m, 4H) 4,10-4,20 (m, 1H) 6,92 - 6,99 (m, 1H) 7,04 (t, J = 7,09 Hz, 1H) 7,10 (s, 1H) 7,31 (d, J = 7,83 Hz, 3H) 7,58 (d, J = 7,34 Hz, 1H) 7,83 (s, 1H) 7,95 (d, J = 7,83 Hz, 1H) 10,75 (s an., 1H) 12,35 (s an., 1H).
Ejemplo 12: N-[1-(1 H-indol-3-ilmetil)pentil]-2-[4-(1 H-pirazol-5-il)piperazin-1-il]tiazol-5-carboxamida
Figure imgf000023_0001
Etapa-1: Síntesis de trimetil-[2-(pirazol-1-ilmetoxi)etil]silano
A una suspensión de NaH (1,94 g, 80,0 mmol) en THF (25 ml), se añadió gota a gota una solución de 1 H-pirazol (5,00 g, 73,5 mmol) en THF (30 ml) a 0°C y la mezcla de reacción se agitó a la misma temperatura durante 30 min. Se añadió SEM-CI (12,2 g, 73,5 mmol) a 0°C y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. El progreso de la reacción se vigiló por TLC y LCMS. Una vez completada, la mezcla de reacción se inactivó con H2O (200 ml) y se extrajo con EtOAc (3 x 100 ml). La capa orgánica se separó, se lavó con salmuera (100 ml), se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a vacío para dar el trimetil-[2-(pirazol-1-ilmetoxi)etil]silano (7,52 g, 51%) como un líquido amarillo.
EM (ESI) m/e [M+H]+/Rt/%: 199,00/3,25/84,9%
RMN 1H (400 MHz, DMSO-cfe) 5 -0,06 (s, 9H) 0,78 - 0,90 (m, 2H) 3,45 - 3,58 (m, 2H) 5,40 (s, 2H) 6,31 (m, 1H) 7,51 (m, 1H) 7,86 (m, 1H).
Etapa-2: Síntesis de 2-[(5-yodopirazol-1-il)metoxiletil-trimetilsilano
A una solución de trimetil-[2-(pirazol-1-ilmetoxi)etil]silano (7,25 g, 36,4 mmol) en THF (145 ml), se añadió gota a gota n-BuLi 2,5 M (16,1 ml, 40,0 mmol) a -78°C y la mezcla de reacción se agitó a la misma temperatura durante 45 min. Se añadió solución de I2 (13,8 g, 54,6 mmol) en THF (40 ml) a -78°C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. El progreso de la reacción se vigiló por TLC y LCMS. Una vez completada, la mezcla de reacción se inactivó con solución saturada de NH4Cl (100 ml) y se extrajo con Et2O (3 x 200 ml). La capa orgánica se separó, se lavó con salmuera (100 ml), se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a vacío. El residuo bruto obtenido se purificó por cromatografía en columna (sílice, n° de malla 230-400, EtOAc en hexanos del 0 al 7%) para dar el 2-[(5-yodopirazol-1-il)metoxi]etil-trimetilsilano (7,98 g, 67%) como un líquido marrón.
EM (ESI) m/e [M+H]+/Rt/%: 325,00/3,66/95,9%
RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) 5 -0,06 (s, 9H) 0,79 - 0,86 (m, 2H) 3,54 (t, J= 7,82 Hz, 2H) 5,43 (s, 2H) 6,56 (d, J= 2,00 Hz, 1H) 7,57 (d, J= 1,47 Hz, 1H).
Etapa-3: Síntesis de 4-[2-(2-trimetilsililetoximetil)pirazol-3-il]piperazina-1 -carboxilato de terc-butilo
A una solución de 2-[(5-yodopirazol-1-il)metoxi]etil-trimetilsilano (3,00 g, 9,23 mmol) en /'-PrOH (30 ml), se añadieron piperazina-1-carboxilato de terc-butilo (2,06 g, 11,0 mmol), Cul (0,35 g, 1,84 mmol), K3PO4 (7,83 g, 36,9 mmol) y etilenglicol (0,57 g, 9,23 mmol) y la mezcla de reacción se calentó en un tubo sellado a 100°C durante 20 h. El progreso de la reacción se vigiló por TLC y LCMS. Una vez completada, la mezcla de reacción se concentró a vacío. El residuo se diluyó con H2O (150 ml) y se extrajo con EtOAc (4 x 100 ml). La capa orgánica se separó, se lavó con salmuera (100 ml), se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a vacío. El producto bruto obtenido se purificó por cromatografía en columna (sílice, n° de malla 230-400, MeOH en DCM del 0 al 2%) para dar el 4-[2-(2-trimetilsililetoximetil)pirazol-3-il]piperazina-1 -carboxilato de terc-butilo (0,43 g, 12%) como un líquido amarillo.
EM (ESI) m/e [M+H]+/Rt/%: 383,00/3,89/98,0%
RMN 1H (400 MHz, DMSO-ds ) 5 -0,06 (s, 9H) 0,80 - 0,86 (m, 2H) 1,40 (s, 9H) 2,83 - 2,89 (m, 4H) 3,40 - 3,46 (m, 4H) 3,61 (t, J= 8,07 Hz, 2H) 5,26 (s, 2H) 5,91 (d, J= 1,96 Hz, 1H) 7,36 (d, J= 1,96 Hz, 1H).
Etapa-4: Síntesis de sal de bis(ácido trifluoroacético) de la 1-(1H-pirazol-5-il)piperazina (estequiometría supuesta)
A una solución de 4-[2-(2-trimetilsililetoximetil)pirazol-3-il]piperazina-1 -carboxilato de terc-butilo (0,41 g, 1,07 mmol) en DCM (5 ml), se añadió TFA (4 ml) a 0°C y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 5 h. El progreso de la reacción se vigiló por TLC y LCMS. Una vez completada, la mezcla de reacción se concentró a vacío. El residuo se trituró con Et2O (2 x 5 ml) y se secó a vacío para dar la sal de bis(ácido trifluoroacético) del ácido 1-(1H-pirazol-5-il) piperazina (estequiometría supuesta) (0,59 g, bruto) como un líquido marrón.
EM (ESI) m/e [M+H]+/Rt/%: 153,00/1,35/68,6%
Etapa-5: N-[1 -(1 H-indol-3-ilmetil)pentil]-2-[4-(1 H-pirazol-5-il)piperazin-1 -il]tiazol-5-carboxamida
A una solución de 2-bromo-N-[1 -(1 H-indol-3-ilmetil)pentil]tiazol-5-carboxamida (0,20 g, 0,49 mmol) en CH3CN (10 ml), se añadieron la sal de bis(trifluoroacético) de la 1-(1H-pirazol-5-il)piperazina (estequiometría supuesta) (0,28 g, bruto, de la etapa anterior, se supone 0,50 mmol) y K2CO3 (0,34 g, 2,46 mmol) y la mezcla de reacción se calentó en un tubo sellado a 100°C durante 16 h. El progreso de la reacción se vigiló por TLC y LCMS. Una vez completada, la mezcla de reacción se diluyó con H2O (70 ml) y se extrajo con EtOAc (3 x 100 ml). La capa orgánica se separó, se lavó con salmuera (70 ml), se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a vacío. El residuo bruto obtenido se purificó por cromatografía en columna (sílice, n° de malla 230-400, MeOH en DCM del 0 al 6%) para dar la N-[1 -(1 H-indol-3-ilmetil)pentil]-2-[4-(1H-pirazol-5-il)piperazin-1-il]tiazol-5-carboxamida (0,09 g, 40%) como un sólido blanco.
Pureza por HPLC: 95,6%
EM (ESI) m/e [M+H]+/Rt/%: 478,00/2,70/98,5%
RMN 1H (400 MHz, DMSO-cfe) 50,79 (t, J = 5,87 Hz, 3H) 1,17-1,30 (m, 4H) 1,44-1,55 (m, 2H) 2,78 - 2,91 (m, 2H) 3,18­ 3,24 (m, 4H) 3,52-3,58 (m , 4H) 4,10 (d, J= 4,89 Hz, 1H) 5,78 (s an., 1H) 6,90 - 6,98 (m, 1H) 7,03 (t, J= 7,58 Hz, 1H) 7,08 (d, J= 2,00 Hz, 1H) 7,29 (d, J= 7,83 Hz, 1H) 7,50 (s an., 1H) 7,56 (d, J= 7,83 Hz, 1H) 7,81 (s, 1H) 7,95 (d, J= 8,31 Hz, 1H) 10,74 (s an., 1H) 11,87 (s an., 1H).
Ejemplo 13: N-[1-(1 H-indol-3-ilmetil)pentil]-2-[4-(1-metilpirazol-4-il)piperazin-1-il]tiazol-5-carboxamida
Figure imgf000025_0001
Etapa-1: Síntesis de 4-(1-metilpirazol-4-il)piperazina-1-carboxilato de terc-butilo
A una solución de 4-yodo-1-metil-pirazol (2,68 g, 12,9 mmol) y piperazina-1-carboxilato de terc-butilo (2,00 g, 10,7 mmol) en /'-PrOH (40 ml), se añadieron etilenglicol (0,66 g, 10,7 mmol), Cul (0,41 g, 2,15 mmol) y K3PO4 (9,12 g, 43,0 mmol). La mezcla de reacción se calentó en un tubo sellado a 100°C durante 20 h. El progreso de la reacción se vigiló por TLC y LCMS. Una vez completada, la mezcla de reacción se concentró a vacío. El residuo se diluyó con H2O (150 ml) y se extrajo con EtOAc (3 x 100 ml). La capa orgánica se separó, se lavó con salmuera (100 ml), se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a vacío. El residuo bruto obtenido se purificó por cromatografía en columna (sílice, n° de malla 100-200, MeOH en DCM del 0 al 2%) para dar el 4-(1 -metilpirazol-4-il)piperazina-1 -carboxilato de terc-butilo (0,93 g, 33%) como un sólido blanquecino.
EM (ESI) m/e [M+H]+/Rt/%: 267,00/2,45/82,5%
RMN 1H (400 MHz, CDCla) 51,49 (s, 9H) 2,84 - 2,92 (m, 4H) 3,53 - 3,60 (m, 4H) 3,84 (s, 3H) 6,95 (s, 1H) 7,21 (s, 1H) Etapa-2: Síntesis de la sal de bis(ácido trifluoroacético) de la 1-(1-metilpirazol-4-il)piperazina (estequiometría supuesta) A una solución de 4-(1 -metilpirazol-4-il)piperazina-1 -carboxilato de terc-butilo (0,50 g, 1,88 mmol) en DCM (20 ml), se añadió gota a gota TFA (0,72 ml, 9,39 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 5 h. El progreso de la reacción se vigiló por TLC y LCMS. Una vez completada, la mezcla de reacción se concentró a vacío. El residuo bruto obtenido se lavó con Et2O (2 x 10 ml) para dar la sal de bis(ácido trifluoroacético) de la 1 -(1 -metilpirazol-4-il)piperazina (estequiometría supuesta) (0,54 g bruto) como un semisólido marrón.
Este compuesto se usó como tal para la siguiente reacción sin purificación adicional.
EM (ESI) m/e [M+H]+/Rt/%: 167,00/1,32/81,5%
RMN 1H (400 MHz, DMSO-dfe) 53,06-3,20 (m, 4H) 3,01 - 3,08 (m, 4H) 3,73 (s, 3H) 7,19 (s, 1H) 7,34 (s, 1H) 8,74 (s an., 1H). Etapa-3: Síntesis de N-[1 -(1 H-indol-3-ilmetil)pentil)-2-[4-(1 -metilpirazol-4-il)piperazin-1 -il]tiazol-5-carboxamida A una solución de 2-bromo-N-[1-(1H-indol-3-ilmetil)pentil]tiazol-5-carboxamida (0,25 g, 0,62 mmol) y sal de bis(ácido trifluoroacético) de la 1-(1-metilpirazol-4-il)piperazina (estequiometría supuesta) (0,26 g, 0,66 mmol) en CH3CN (7,5 ml), se añadió K2CO3 (0,42 g, 3,08 mmol) y la mezcla de reacción se calentó en un tubo sellado a 100°C durante 20 h. El progreso de la reacción se vigiló por TLC y LCMS. Una vez completada, la mezcla de reacción se diluyó con H2O (50 ml) y se extrajo con EtOAc (3 x 75 ml). La capa orgánica se separó, se lavó con salmuera (50 ml), se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a vacío. El residuo bruto obtenido se purificó por cromatografía en columna (sílice, n° de malla 230-400, MeOH en DCM del 0 al 4%) para dar la N-[1-(1H-indol-3-ilmetil)pentil]-2-[4-(1-metilpirazol-4-il)piperazin-1-il]tiazol-5-carboxamida (0,14 g, 46%) como un sólido blanquecino.
Pureza por HPLC: 96,5%
EM (ESI) m/e [M+H]+/Rt/%: 492,00/2,71/95,5%
RMN 1H (400 MHz, DMSO-ds) 50,83 (t, J = 6,8 Hz, 3H) 1,18 - 1,36 (m, 4H) 1,40-1,58 (m, 2H) 2,76 - 2,98 (m, 6H) 3,52 - 3,59 (m, 4H) 3,73 (s, 3H) 4,08 - 4,14 (m, 1H) 6,91 - 7,12 (m, 3H) 7,19 (s, 1H) 7,31 (d, J = 7,6 Hz, 2H) 7,58 (d, J = 7,8 Hz, 1H) 7,83 (s, 1H) 7,97 (d, J = 8,5 Hz, 1H) 10,76 (s, 1H).
Ejemplo 14: N-[1 -(1 H-indol-3-ilmetil)pentil]-2-[4-(2-metilpirazol-3-il)piperazin-1 -il]tiazol-5-carboxamida
Figure imgf000026_0001
Etapa 1: Síntesis de 4-(2-metilpirazol-3-il)piperazina-1-carboxilato de terc-butilo
A una solución de 5-yodo-1-metil-pirazol (1,34 g, 6,45 mmol) y piperazina-1-carboxilato de terc-butilo (1,00 g, 5,37 mmol) en /-PrOH (18 ml), se añadieron etilenglicol (0,33 g, 5,37 mmol), Cul (0,20 g, 1,07 mmol) y K3PO4 (4,55 g, 21,5 mmol). La mezcla de reacción se calentó en un tubo sellado a 100°C durante 16 h. El progreso de la reacción se vigiló por TLC y LCMS. Una vez completada, la mezcla de reacción se filtró a través de Celite, se lavó con EtOAc (100 ml) y el filtrado se concentró a vacío. El residuo bruto obtenido se purificó por cromatografía en columna (sílice, n° de malla 100-200, EtOAc en hexanos del 10 al 40%) para dar el 4-(2-metilpirazol-3-il) piperazina-1-carboxilato de tercbutilo (0,33 g, 24%) como un sólido amarillo.
EM (ESI) m/e [M+H]+/Rt/%: 267,00/2,90/92,8%
Etapa-2: Síntesis de la sal de bis(ácido trifluoroacético) de la 1-(2-metilpirazol-3-il)piperazina (estequiometría supuesta) A una solución de 4-(2-metilpirazol-3-il)piperazina-1-carboxilato de terc-butilo (0,30 g, 1,12 mmol) en DCM (5 ml), se añadió gota a gota TFA (0,77 g, 6,76 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. El progreso de la reacción se vigiló por TLC y LCMS. Una vez completada, la mezcla de reacción se concentró a vacío para proporcionar la sal de bis(ácido trifluoroacético) de la 1 -(2-metilpirazol-3-il)piperazina (estequiometría supuesta) (0,40 g bruto) como un líquido marrón.
Este compuesto se usó como tal para la siguiente reacción sin purificación adicional.
EM (ESI) m/e [M+H]+/Rt/%: 167,00/1,66/87,7%
Etapa-3: Síntesis de N-[1 -(1 H-indol-3-ilmetil)pentil]-2-[4-(2-metilpirazol-3-il)piperazin-1 -il]tiazol-5-carboxamida A una solución de la sal de bis (ácido trifluoroacético) de la 1-(2-metilpirazol-3-il)piperazina (estequiometría supuesta (0,12 g, 0,31 mmol) y 2-bromo-N-[1-(1 H-indol-3-ilmetil)pentil]tiazol-5-carboxamida (0,25 g, 0,61 mmol) en CH3CN (7,5 ml), se añadió K2CO3 (0,42 g, 3,05 mmol) y la mezcla de reacción se calentó en un tubo sellado a 80°C durante 16 h. El progreso de la reacción se vigiló por TLC y LCMS. Una vez completada, la mezcla de reacción se diluyó con MeOH en DCM al 5% (30 ml), se filtró a través de Celite, se lavó con MeOH en DCM al 5% (30 ml) y se concentró a vacío. El residuo bruto obtenido se purificó por cromatografía en columna (sílice, n° de malla 100-200, MeOH en DCM del 1 al 5%) para producir la N-[1 -(1 H-indol-3-ilmetil)pentil]-2-[4-(2-metilpirazol-3-il)piperazin-1-il]tiazol-5-carboxamida (0,12 g, 40%) como un sólido blanco.
Pureza por HPLC: 97,2%
EM (ESI) m/e [M+H]+/Rt/%: 492,00/2,98/95,8%
RMN 1H (400 MHz, DMSO-afe) 50,82 (d, J = 6,5 Hz, 3H) 1,18 - 1,38 (m, 4H) 1,42-1,60 (m, 2H) 2,98 - 2,77 (m, 6H) 3,60-3,66 (m, 4H) 3,67 (s, 3H) 4,09 - 4,15 (m, 1H) 5,89 (s, 1H) 6,96 (t, J = 7,3 Hz, 1H) 7,00 - 7,12 (m, 2H) 7,25 - 7,35 (m, 2H) 7,58 (d, J = 7,8 Hz, 1H) 7,84 (s, 1H) 7,99 (d, J = 8,5 Hz, 1H) 10,77 (s, 1H).
Ejemplo biológico 1: Ensayo de polarización de fluorescencia in vitro con fragmento de péptido de alfa-sinucleína (4F). El ensayo de polarización de fluorescencia ensaya la capacidad de los compuestos para inhibir la autoagregación de fragmentos de péptidos de a-sinucleína. Los péptidos se incubaron durante 120 min a temperatura ambiente en presencia o ausencia de compuestos de ensayo (las concentraciones de compuesto eran de 33,3 a 0,015 pM). Las muestras se leyeron en un lector de placas Beckman Coulter DTX 880 en modo de polarización de fluorescencia usando excitación a 485 nm y emisión a 520 nm. Los datos se analizaron usando un ajuste logístico de cuatro parámetros (XLFit, IDBS Software). El péptido 4F (CTGFVKKDQLGK (SEQ ID NO: 1)) fue preparado por American Peptide. Se reconstituyeron muestras de péptidos recientes en agua purificada a 5 mM y se diluyeron en HEPES 50 mM a pH 7,4 con NaCl 50 mM hasta una concentración final de 100 nM. Los compuestos sólidos se disolvieron en DMSO (10 mM) y luego se diluyeron de forma seriada en DMSO (300x) seguido de dilución en tampón (1x) para proporcionar soluciones con una concentración final constante de DMSO de 0,33%. Los datos de los compuestos ensayados se presentan en la Tabla 1.
Tabla 1.
Figure imgf000027_0001
Ejemplo biológico 2: ensayo de RMN para determinar el efecto de los compuestos de ensayo en la interacción de la alfa-sinucleína con membranas lipídicas
Para medir la interacción de los compuestos de ensayo con ASYN de longitud completa en presencia de membranas lipídicas, se lleva a cabo un ensayo de RMN. Las mediciones de RMN se hacen en fosfato 20 mM, pH = 7,4, NaCl 100 mM en espectrómetros Varian Direct Drive 600 MHz y Varian Inova 800 MHz con D2O al 10% como disolvente de bloqueo. Los espectros se procesan utilizando NMRPipe (véase F. Delaglio, S. Grzesiek, G. W. Vuister, G. Zhu, J. Pfeifer, A. Bax, J Biomol NMR 1995, 6, 277-293). La a-sinucleína se usa en 0,12 mM mientras que los liposomas de 1-palmitoil-2-oleoil-sn-glicero-3-fosfoglicerol (POPG) se añaden en 0,8 mg/ml, cuando están presentes. Todos los espectros de correlación de 1H-15N se registran con una secuencia de pulsos SOFAST (véase P. Schanda, E. Kupce, B. Brutscher, J Biomol NMR 2005, 33, 199-211). La asignación de resonancias en condiciones casi fisiológicas está disponible en una publicación anterior (BMRB ID 16300; véase J. N. Rao, Y. E. Kim, L. S. Park, T. S. Ulmer, J Mol Biol 2009, 390, 516-529). Para la valoración del ligando, los compuestos de ensayo se añaden paso a paso a la mezcla de liposoma/ASYN. Los espectros de correlación de 15N-1H se registran para cada paso, y las intensidades de las señales se dan con referencia a la forma libre de ASYN mientras se tienen en cuenta los efectos de dilución. Para reducir el ruido en los datos disponibles, la relación de intensidades para varias posiciones de amida de ASYN se promedia para dos regiones elegidas para corresponder a los modos de unión SL1 y SL2 observados anteriormente (véase C. R. Bodner, A. S. Maltsev, C. M. Dobson, A. Bax, Biochemistry 2010, 49, 862-871).
La intensidad de la señal de espectroscopia de coherencia cuántica heteronuclear simple (HSQC) para ASYN se atenúa cuando ASYN está insertada en membranas lipídicas. La inversión de la atenuación inducida por lípidos de la señal de HSQC por los compuestos de ensayo indica la capacidad del compuesto de ensayo para interrumpir la asociación de ASYN con la membrana lipídica. Los compuestos de ensayo pueden invertir la interacción de ASYN con liposomas de 1-palmitoil-2-oleoil-sn-glicero-3-fosfoglicerol (POPG) (0,8 mg/ml) de una manera dependiente de la concentración. También se analizan los resultados para los restos 66-76 de ASYN.
Ejemplo biológico 3: Efecto de los compuestos de ensayo sobre oligómeros anulares en membranas lipídicas.
La microscopía electrónica se usa para visualizar directamente el efecto de los compuestos de ensayo en la formación de oligómeros de ASYN en las membranas lipídicas. Las rejillas de Formvar con la monocapa de lípidos se contratiñen con una solución saturada de acetato de uranilo en EtOH al 50% durante 25 minutos. A continuación, las rejillas se hacen flotar sobre una gota de subnitrato de bismuto al 2% durante 10 min, y de nuevo se enjuagan cuidadosamente con agua bidestilada tres veces y se dejan secar por completo. Se obtienen imágenes de las rejillas utilizando un microscopio electrónico de transmisión Zeiss EM10 Microscopio electrónico. De cada rejilla de muestra, se obtienen de 5-10 micrografías electrónicas con un aumento de 10.000x y 5-10 imágenes a 40.000x. Los mejores negativos se escanean y analizan con el programa ImageJ 1.43 para estimar el número de oligómeros anulares por campo de mayor potencia (100 x 100 nm) (Rasband, W.S., ImageJ, Institutos Nacionales de Salud de EE. UU., Bethesda, Maryland, EE. u U., http://imagej.nih.gov/ij/, 1997-2014).
Los compuestos de ensayo que interaccionan con las formas oligoméricas y unidas a lípidos de ASYN pueden hacerlo de una manera que reduce la afinidad de los oligómeros de ASYN por la membrana lipídica. Los compuestos pueden interferir con la oligomerización de ASYN, la unión de ASYN a las membranas lipídicas y la formación de oligómeros anulares en forma de anillo ("poros") en estas membranas, lo cual puede alterar la agregación de ASYN y prevenir la formación de estructuras oligoméricas específicas que se cree que contribuyen a la neurotoxicidad de ASYN oligomerizada mal plegada en la enfermedad de Parkinson.
Ejemplo biológico 4: Efecto de los compuestos de ensayo en la alfa-sinucleína en las células
Se estudia el efecto de los compuestos de ensayo en la acumulación de ASYN en células de neuroblastoma B103 que sobreexpresan ASYN humana. Se usa un sistema de expresión lentiviral para expresar ASYN marcado con GFP en estas células. Cuarenta y ocho horas después de iniciada la expresión, se añade vehículo o compuesto de ensayo durante 24 horas más. A continuación, se visualiza la cantidad de GFP-ASYN acumulada para determinar la reducción en la concentración de ASYN-GFP en las células que sobreexpresan ASYN.
Ejemplo biológico 5: estudios de eficacia in vivo
La enfermedad de Parkinson (EP) se caracteriza por una acumulación aberrante de formas oligoméricas de alfasinucleína (ASYN). Se plantea la hipótesis de que estas formas tóxicas de ASYN contribuyen a la disfunción neuronal y la muerte celular observadas en la EP y otras sinucleinopatías, en parte, a través de la formación de estructuras similares a poros en las membranas celulares. Los compuestos descritos en el presente documento se diseñaron para mejorar los síntomas relacionados con la EP y la patología bloqueando selectivamente la formación y acumulación de estas especies tóxicas de ASYN.
A) Modelo de ratón transgénico de la enfermedad de Parkinson. Los compuestos de ensayo se evalúan en un modelo de ratón transgénico de EP que sobreexpresa ASYN de tipo natural humana bajo el promotor Thy-1 (también denominado línea 61 de ratón transgénico para ASYN), mediante la administración de compuestos de ensayo en 0, 1 o 5 mg/kg (ip) una vez al día (cinco días a la semana) durante tres meses y luego evaluación del rendimiento sensoriomotor relevante para la EP, las alteraciones bioquímicas y los cambios neuropatológicos en ASYN y proteínas relacionadas.
Se usa la tarea de haz circular para evaluar las deficiencias sensoriomotoras, utilizando el número de deslizamientos como criterio de valoración principal. Se ensayan ratones transgénicos para ASYN y no transgénicos, y se calcula la significación estadística en el aumento del número de deslizamientos para sujetos transgénicos tratados con vehículo en comparación con sujetos de control no transgénicos tratados con vehículo.
Se realiza un análisis de transferencia Western de homogeneizados de cerebro de hipocampo y corteza cerebral, y se calcula la significación estadística de la reducción en los niveles de proteína ASYN transgénica. Se realizan evaluaciones bioquímicas de proteínas oligoméricas usando métodos de transferencia en mancha de anticuerpos A11 (incluyendo ASYN) en homogeneizados de corteza.
B) Modelos de ratón transgénico para ASYN de línea 61. Estudios previos de inmunomarcado de Masliah y colaboradores han demostrado aumentos estadísticamente significativos en el inmunomarcado de ASYN en el neuropilo cortical en el ratón transgénico para ASYN de la línea 61 (Masliah E. et al., Science, 2000, 287 (5456):1265-9). Estos hallazgos neuropatológicos pueden reconfirmarse en el estudio actual utilizando los métodos descritos por Masliah y colaboradores. Se controlan los marcadores relacionados con la neurodegeneración que incluyen la tirosina hidroxilasa, NeuN y GFAP.
Se estudia el efecto de los compuestos de ensayo en varias dosis sobre el deterioro sensoriomotor en ratones transgénicos de ASYN de la línea 61, utilizando el ensayo de rendimiento motor en haz redondo descrito anteriormente, y la importancia estadística en el aumento en el número de deslizamientos en ratones de control transgénicos para ASYN tratados con vehículo en comparación con sujetos de control no transgénicos tratados con vehículo. Estos estudios evalúan la mejora en los resultados sensoriomotores, bioquímicos, conductuales y neuropatológicos en un modelo de ratón transgénico de enfermedad de Parkinson/demencia con cuerpos de Lewy (PD/DLB).

Claims (8)

REIVINDICACIONES
1. Un compuesto de fórmula (I):
Figure imgf000029_0001
en donde
B es un 3-indol;
R2 es un grupo metilo, etilo, propilo, terc-butilo o n-butilo, pentilo o hexilo;
R3 es H o alquilo C1-4 ;
A es un tiazol;
Ar es un fenilo o un heterociclo aromático de 5 o 6 miembros, opcionalmente sustituido con -(R4)n,
en donde n es 0, 1, 2 o 3; cada R4 es independientemente alquilo C1-4 , opcionalmente sustituido con uno o más halógenos o grupos O-alquilo C1-4), halógeno, -OH, -CN, CF3 , CHF2 , CH2 F, alquilo C1-4 , alquilo ramificado C 1-4 o -O­ alquilo C1-4 , o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
2. El compuesto de la reivindicación 1, en donde R2 es n-butilo.
3. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1-2, en donde Ar es fenilo, piridina, pirimidina, piridazina, pirazina, pirazol, imidazol, triazol, opcionalmente sustituido con -(R4)n, siendo cada R4 independientemente alquilo C1-4 opcionalmente sustituido con uno o más halógenos u O-alquilo C 1-4 o halógeno, -OH, -CN, CF3 , CHF2 , CH2 F, alquilo C1-4 , alquilo C 1-4 ramificado o -O-alquilo C1-4.
4. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en donde -(R4)n es un alquilo C1-4.
5. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en donde Ar es una piridina, pirimidina, piridazina, pirazina, pirazol.
6. Un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 -5, seleccionado del grupo que consiste en:
Figure imgf000029_0002
Figure imgf000030_0001
Figure imgf000031_0001
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
7. Una composición farmacéutica que comprende al menos un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un excipiente farmacéuticamente aceptable.
8. Un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, para su uso en el tratamiento de una enfermedad o afección neurodegenerativa seleccionada de la enfermedad de Parkinson, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de cuerpos de Lewy o atrofia multisistémica.
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