BR112016014517B1

BR112016014517B1 - Processo para a obtenção de um óleo microbiano compreendendo um ou mais ácidos graxos poli-insaturados de uma ou mais células microbianas

Info

Publication number: BR112016014517B1
Application number: BR112016014517-8A
Authority: BR
Inventors: Brock TRIPLETT; Micah Needham; Nasrin Tabayehnejad; Ginger SHANK; Kirt Lyvell Matthews, Sr.; John Hogan; Mark Barker; Neil Francis Leininger
Original assignee: Dsm Ip Assets B.V.
Priority date: 2013-12-20
Filing date: 2014-12-19
Publication date: 2022-06-28
Also published as: WO2015095694A1; AU2014369046B2; TWI646188B; IL246335A0; CA2934508C; SG11201605043TA; IL246335B; JP6705581B2; US11124736B2; MX2016008223A; EP3083545B1; EP3083545A1; JP2017500045A; CA2934508A1; BR112016014517A2; EP3083545A4; TW201529833A; ES2953836T3; AR098895A1; AU2014369046A1

Abstract

PROCESSOS PARA OBTENÇÃO DE ÓLEO MICROBIANO A PARTIR DE CÉLULAS MICROBIANAS. São descritos processos para a obtenção de um óleo microbiano compreendendo um ou mais ácidos graxos poli-insaturados (PUFAs) de uma ou mais células microbia nas pela lise das células para formar uma composição de célula lisada e depois recuperando o óleo da composição de célula lisada. É descrito aqui, adicionalmente, um óleo microbiano que compreende um ou mais PUFAs que são recuperados das células microbianas por pelo menos um processo aqui descrito.

Description

REFERÊNCIA CRUZADA COM PEDIDOS RELACIONADOS

[001] Esse pedido reivindica o benefício da data de depósito do Pedido de Patente Provisório dos Estados Unidos No. 61/919.026, depositado em 20 de dezembro de 2013, cuja descrição está incorporada aqui por referência.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

[002] São descritos aqui processos para a obtenção de um óleo microbiano que compreende um ou mais ácidos graxos poli-insaturados (PUFAs) de uma ou mais células microbianas pela lise das células para formar uma composição de célula lisada e depois recuperando o óleo da composição de célula lisada. É descrito aqui, adicionalmente, um óleo microbiano que compreende um ou mais PUFAs que são recuperados das células microbianas por pelo menos um processo aqui descrito.

[003] Óleo microbiano, contendo um ou mais PUFAs, é produzido por microrganismos tais como, por exemplo, algas e fungos.

[004] Um processo típico para a obtenção de óleo que contém PUFA de células microbianas envolve microrganismos em crescimento que são capazes de produzir o óleo desejado em um fermentador, tanque ou biorreator para produzir biomassa de célula microbiana; separação da biomassa do meio de fermentação no qual a biomassa está crescendo; secagem da biomassa de célula microbiana usando um solvente orgânico imiscível em água (por exemplo, hexano) para extrair o óleo das células secas; e remoção do solvente orgânico (por exemplo, hexano) do óleo. Esse processo pode envolver adicionalmente a diluição do meio de fermentação que contém a biomassa de célula com água seguida pela centrifugação para separar a biomassa do meio de fermentação diluído.

[005] Outro processo para a obtenção de óleo que contém PUFA a partir de células microbianas microrganismos em crescimento que são capazes de produzir o óleo desejado em um fermentador, tanque ou biorreator para produzir biomassa de célula; liberação de óleo que contém PUFA no meio de fermentação no qual as células estão crescendo pelo uso de força mecânica (por exemplo, homogeneização), tratamento enzimático ou tratamento químico para romper as paredes celulares; e recuperação do óleo da composição resultante que compreende o óleo que contém PUFA, resíduos celulares e líquido usando um solvente orgânico miscível em água, por exemplo, álcool isopropílico. O óleo pode ser separado mecanicamente da composição e o álcool deve ser removido de ambos, do óleo e do fluxo de rejeito da biomassa aquosa.

[006] O emprego em escala industrial de qualquer um dos processos acima para a obtenção de óleos que contêm PUFA a partir de células microbianas requer o uso de grande quantidade de solvente orgânico volátil e inflamável, o que cria condições de operação perigosas e requer o uso de equipamento dispendioso a prova de explosão. Adicionalmente, o uso de um solvente orgânico gera um fluxo de rejeito de solvente orgânico que requer a implementação de um processo caro de recuperação de solvente para atender a limites ambientais estritos sobre as emissões de composto orgânico volátil (VOC), o que por sua vez resulta na necessidade de mais mão de obra e equipamento caro.

[007] Adicionalmente, o uso de calor nos processos acima para secar as células e/ou remover o solvente a partir do óleo recuperado pode degradar os óleos que contêm PUFA e aumentar a utilização de energia, o que pode adicionalmente aumentar os custos do processo. A degradação ocorre quando os óleos que contêm PUFA são expostos ao oxigênio tal como quando a integridade das paredes das células microbianas é rompida e/ou as células microbianas são expostas ao calor.

[008] Um processo sem solvente para a obtenção de um óleo que contém PUFA a partir de células microbianas envolve o crescimento de microrganismos que sejam capazes de produzir o óleo desejado em um fermentador, tanque ou biorreator para produzir biomassa de célula; liberação de óleo que contém PUFA no meio de fermentação no qual as células estão crescendo pelo uso de força mecânica (por exemplo, homogeneização) tratamento enzimático ou tratamento químico para romper as paredes celulares; e recuperação do óleo bruto da composição resultante que compreende o óleo que contém PUFA, resíduos celulares e líquido pela elevação do pH, adição de sal, aquecimento e/ou agitação da composição resultante. Esse processo sem solvente para a obtenção de óleos que contêm PUFA de células, entretanto, pode requerer longos períodos de recuperação de óleo, grande quantidade de sal, e/ou muitas etapas, o que pode aumentar os custos do processo.

[009] Como resultado, permanece a necessidade de um processo para obtenção de óleos que contêm PUFA de alta qualidade a partir de células microbianas que não usem um solvente orgânico volátil pode ser realizado usando equipamento prontamente disponível, necessita de um número mínimo de etapas, tenha períodos de recuperação de óleo mais curtos e possa fornecer um alto rendimento de óleo que contém PUFA de alta qualidade.

[010] É descrito aqui um processo para a obtenção de um óleo microbiano que compreenda um ou mais ácidos graxos poli-insaturados (PUFAs) a partir de uma ou mais células microbianas, compreendendo: (a) lisar as células que compreendem o óleo microbiano para formar uma composição de célula lisada; (b) demulsificar a composição de célula lisada compreendendo (i) agitação de baixo cisalhamento, agitação de fluxo axial ou (iii) uma combinação desses para formar uma composição de célula lisada demulsificada; (c) separar o óleo da composição de célula lisada demulsificada; e (d) recuperar o óleo.

[011] É descrito aqui um processo para a obtenção de um óleo microbiano que compreenda um ou mais ácidos graxos poli-insaturados (PUFAs) a partir de uma ou mais células microbianas, compreendendo: (a) lisar as células que compreendem o óleo microbiano para formar uma composição de célula lisada; (b) demulsificar a composição de célula lisada compreendendo (i) agitação de baixo cisalhamento, agitação de fluxo axial ou (iii) uma combinação dessas e uma base para formar uma composição de célula lisada demulsificada; (c) separar o óleo da composição de célula lisada demulsificada; e (d) recuperar o óleo.

[012] É de scrito aqui um processo para a obtenção de um óleo microbiano que compreenda um ou mais ácidos graxos poli-insaturados (PUFAs) a partir de uma ou mais células microbianas, compreendendo: (a) lisar as células que compreendem o óleo microbiano para formar uma composição de célula lisada; (b) demulsificar a composição de célula lisada compreendendo (i) agitação de baixo cisalhamento, agitação de fluxo axial ou (iii) uma combinação dessas para formar uma composição de célula lisada demulsificada; (c) separar o óleo da composição de célula lisada demulsificada; e (d) recuperar o óleo, onde pelo menos um dentre (a) ou (b) compreenda adicionalmente aquecer a composição até uma temperatura de pelo menos 60 °C.

[013] É descrito aqui um processo para a obtenção de um óleo microbiano que compreenda um ou mais ácidos graxos poli-insaturados (PUFAs) a partir de uma ou mais células microbianas, compreendendo: (a) lisar as células que compreendem o óleo microbiano para formar uma composição de célula lisada; (b) demulsificar a composição de célula lisada compreendendo (i) agitação de baixo cisalhamento, agitação de fluxo axial ou (iii) uma combinação dessas e uma base para formar uma composição de célula lisada demulsificada; (c) separar o óleo da composição de célula lisada demulsificada; e (d) recuperar o óleo onde pelo menos um dentre (a) ou (b) compreenda adicionalmente aquecer a composição até uma temperatura de pelo menos 60 °C.

[014] É descrito aqui um processo para a obtenção de um óleo microbiano que compreenda um ou mais ácidos graxos poli-insaturados (PUFAs) a partir de uma ou mais células microbianas, compreendendo: (a) lisar as células que compreendem o óleo microbiano para formar uma composição de célula lisada; (b) demulsificar a composição de célula lisada compreendendo (i) agitação de baixo cisalhamento, agitação de fluxo axial ou (iii) uma combinação dessas e elevar o pH da composição de célula lisada para 8 ou acima para formar uma composição de célula lisada demulsificada;(c) separar o óleo da composição de célula lisada demulsificada; e (d) recuperar o óleo.

[015] É descrito aqui um processo para a obtenção de um óleo microbiano que compreenda um ou mais ácidos graxos poli-insaturados (PUFAs) a partir de uma ou mais células microbianas, compreendendo: (a) lisar as células que compreendem o óleo microbiano para formar uma composição de célula lisada; (b) demulsificar a composição de célula lisada compreendendo (i) agitação de baixo cisalhamento, agitação de fluxo axial ou (iii) uma combinação desses e adicionar uma enzima para formar uma composição de célula lisada demulsificada; (c) separar o óleo da composição de célula lisada demulsificada; e (d) recuperar o óleo.

[016] É descrito aqui um processo para a obtenção de um óleo microbiano que compreenda um ou mais ácidos graxos poli-insaturados (PUFAs) a partir de uma ou mais células microbianas, compreendendo: (a) lisar as células que compreendem o óleo microbiano para formar uma composição de célula lisada; (b) demulsificar a composição de célula lisada compreendendo (i) agitação de baixo cisalhamento, agitação de fluxo axial ou (iii) uma combinação dessas e diminuir o pH da composição de célula lisada para 6,5 ou menos para formar uma composição de célula lisada demulsificada; (c) separar o óleo da composição de célula lisada demulsificada; e (d) recuperar o óleo.

[017] É descrito aqui um processo para a obtenção de um óleo microbiano que compreenda um ou mais ácidos graxos poli-insaturados (PUFAs) a partir de uma ou mais células microbianas, compreendendo: (a) lisar as células que compreendem o óleo microbiano para formar uma composição de célula lisada; (b) demulsificar a composição de célula lisada para formar uma composição de célula lisada demulsificada; (c) separar o óleo da composição de célula lisada demulsificada; e (d) recuperar o óleo, onde (a) e (b) são combinadas para formar uma etapa de lise e de demulsificação em uma etapa única que compreende (i) agitação de baixo cisalhamento, agitação de fluxo axial, ou (iii) uma combinação desses.

[018] É descrito aqui um processo para a obtenção de um óleo microbiano que compreenda um ou mais ácidos graxos poli-insaturados (PUFAs) a partir de uma ou mais células microbianas, compreendendo: (a) lisar as células que compreendem o óleo microbiano com (i) uma enzima adequada para formar uma composição de célula lisada demulsificada, (ii) um pH adequado para formar uma composição de célula lisada demulsificada ou (iii) uma combinação desses para formar uma composição de célula lisada demulsificada; (b) separa o óleo da composição de célula lisada demulsificada; e (c) recuperar o óleo, em que a composição de célula lisada demulsificada é obtida durante a dita lise sob (i) agitação de baixo cisalhamento, (ii) agitação de fluxo axial, ou (iii) uma combinação dessas.

[019] É descrito aqui um óleo microbiano obtido por qualquer um dos processos aqui descritos.

[020] Os aspectos e vantagens da invenção podem ser mais facilmente compreendidos por aqueles versados na técnica depois da leitura da descrição detalhada a seguir. É para ser apreciado que certos aspectos da invenção que são, por razões de clareza, descritas acima e abaixo no contexto de modalidades separadas, também podem ser combinados de modo a formar sub-combinações desses.

[021] Modalidades aqui identificadas como exemplificadoras são pretendidas serem ilustrativas e não limitantes.

[022] A expressão “cerca de” é pretendida para capturar variações acima e abaixo do número estabelecido que pode atingir os mesmos resultados como o número estabelecido.

[023] Os ácidos graxos são classificados com base na sua extensão e características de saturação da cadeia de carbono. Os ácidos graxos presentes em um óleo microbiano podem ter entre 4 a 28 átomos de carbono e são denominados ácidos graxos de cadeia curta, cadeia média ou cadeia longa com base no número de carbonos presentes na cadeia. Os ácidos graxos são denominados ácidos graxos saturados quando nenhuma ligação dupla está presente entre os átomos de carbono e são denominados ácidos graxos insaturados quando ligações duplas estão presentes. Ácidos graxos insaturados de cadeia longa são monossaturados quando apenas uma ligação dupla está presente e são poli- insaturados quando mais do que uma ligação dupla está presente.

[024] O óleo microbiano aqui descrito se refere a um óleo que compreende um ou mais PUFAs e que é obtido a partir de células microbianas.

[025] Ácidos graxos poli-insaturados (PUFAs) são classificados com base na posição da primeira ligação dupla a partir da terminação metila do ácido graxo; ácidos graxos ômega-3 (n-3) contêm uma primeira ligação dupla no terceiro carbono, enquanto que ácidos graxos ômega-6 (n-6) contêm uma primeira ligação dupla no sexto carbono. Por exemplo, ácido docosahexaenoico (DHA) é um ácido graxo ômega-3 de cadeia longa poli-insaturado (LC-PUFA) com uma extensão de cadeia de 22 carbonos e 6 ligações duplas, geralmente designado como “22:6n-3”. Em uma modalidade, o PUFA é selecionado dentre um ácido graxo ômega-3, um ácido graxo ômega-36 e suas misturas. Em outra modalidade, o PUFA é selecionado a partir de LC-PUFAs. Ainda em outra modalidade adicional, o PUFA é selecionado dentre ácido docosahexaenoico (DHA), ácido eicosapentaenoico (EPA), ácido docosapentaenoico (DPA), ácido araquidônico (ARA), ácido gama linolênico (GLA), ácido dihomo-gama-linolenico (DGLA), ácido estearidônico (SDA) e suas misturas. Em outra modalidade, o PUFA é selecionado dentre DHA, ARA e suas misturas. Em uma modalidade adicional, o PUFA é DHA. Em uma modalidade adicional, o PUFA é ARA.

[026] LC-PUFAs são ácidos graxos que contêm pelo menos 3 ligações duplas e possuem uma extensão de cadeia de 18 ou mais carbonos ou 20 ou mais carbonos. LC-PUFAs da série ômega-6 incluem, mas não são limitados a ácido dihomo- gamalinoleico (C20:3n-6), ácido araquidônico (C20:4n-6) ("ARA"), ácido docosatetraenoico ou ácido adrenico (C22:4n- 6) e ácido docosapentaenoico (C22:5n-6) ("DPA n-6"). Os LC- PUFAs da série ômega-3 incluem, mas não são limitados a ácido eicosatrienoico (C20:3n-3), ácido eicosatetraenoico (C20:4n-3), ácido eicosapentaenoico (C20:5n-3) ("EPA"),ácido docosapentaenoico (C22:5n-3) e ácido docosahexaenoico (C22:6n-3). Os LC-PUFAs também incluem ácidos graxos com mais do que 22 átomos de carbono e 4 ou mais ligações duplas incluindo, mas não limitados a C24:6(n-3) e C28:8(n- 3).

[027] Os PUFAs podem estar na forma de ácido graxo livre, sal, éster de ácido graxo (por exemplo, éster metílico ou etílico), monoacilglicerol (MAG),diacilglicerol (DAG), triacilglicerol (TAG) e/ou fosfolipídio (PL).

[028] Ácidos graxos altamente insaturados (HUFAs) são ácidos graxos ômega-3 ou ômega-6 poli-insaturados que contêm 4 ou mais ligações de carbono-carbono insaturadas.

[029] Como usado aqui, uma “célula” se refere a um biomaterial que contém óleo, tal como um biomaterial derivado de microrganismos oleaginosos. O óleo produzido por um microrganismo ou obtido de uma célula microbiana é referido como um “óleo microbiano”. O óleo produzido pelas algas e/ou fungos também é referido como óleo de alga e/ou óleo de fungo, respectivamente.

[030] Como usada aqui, uma “célula microbiana” ou “microrganismo” se refere a organismos tais como algas, bactérias, fungos, levedura, protistas e suas combinações, por exemplo, organismos unicelulares. Em algumas modalidades, uma célula microbiana é uma célula eucariótica. Uma célula microbiana inclui, mas não está limitada a algas douradas (por exemplo, microrganismos do reino Stramenopiles); algas verdes; diatomáceas; dinoflagelados (por exemplo, microrganismos da ordem Dinophyceae incluindo membros do gênero Crypthecodinium tais como, por exemplo, Crypthecodinium cohnii ou C. cohnii); microalgas da ordem Thraustochytriales; levedura (Ascomicetos ou Basidiomicetos); e fungos do gênero Mucor, Mortierella, incluindo, mas não limitados a Mortierella alpina e Mortierella sect, schmuckeri e Pythium, incluindo, mas não limitado a Pythium insidiosum.

[031] Em outra modalidade, as células microbianas estão entre o gênero Mortierella, gênero Crypthecodinium ou ordem Thraustochytriales. Ainda em uma modalidade adicional, as células microbianas são de Crypthecodinium cohnii. Ainda em uma modalidade adicional, s células microbianas são selecionadas entre Crypthecodinium cohnii, Mortierella alpina, gênero Thraustochytrium, gênero Schizochytrium e suas misturas.

[032] Em uma modalidade adicional, as células microbianas incluem, mas não são limitadas a microrganismos que pertencem ao gênero Mortierella, gênero Conidiobolus, gênero Pythium, gênero Phytophthora, gênero Penicillium, gênero Cladosporium, gênero Mucor, gênero Fusarium, gênero Aspergillus, gênero Rhodotorula, gênero Entomophthora, gênero Echinosporangium e gênero Saprolegnia. Em outra modalidade, ARA é obtido das células microbianas do gênero Mortierella, que inclui, mas não está limitado a Mortierella elongata, Mortierella exigua, Mortierella hygrophila, Mortierella alpina, Mortierella schmuckeri e Mortierella minutissima. Em uma modalidade adicional, ARA é obtido das células microbianas de Mortierella elongata IFO8570, Mortierella exigua IFO8571, Mortierella hygrophila IFO5941, Mortierella alpina IFO8568, ATCC16266, ATCC32221,ATCC42430, CBS219.35, CBS224.37, CBS250.53, CBS343.66, CBS527.72, CBS529.72, CBS608.70 e CBS754.68, e mutantes desses. Em uma modalidade adicional, as células microbianas são de Mortierella alpina.

[033] Em uma modalidade adicional, as células microbianas são de microalgas da ordem Thraustochytriales, que inclui, mas não está limitada aos gêneros Thraustochytrium (incluindo as espécies arudimentale, aureum, benthicola, globosum, kinnei, motivum, multirudimentale, pachydermum, proHferum, roseum, striatum); os gêneros Schizochytrium (incluindo as espécies aggregatum, limnaceum, mangrovei, minutum, octosporum); os gêneros Ulkenia (incluindo as espécies amoeboidea, kerguelensis, minuta, profunda, radiate, sailens, sarkariana, schizochytrops, visurgensis, yorkensis); os gêneros Aurantiacochytrium; os gêneros Oblongichytrium; os gêneros Sicyoidochytium; os gêneros Parientichytrium; os gêneros Botryochytrium; e suas combinações. As espécies descritas dentro de Ulkenia serão consideradas membros do gênero Schizochytrium. Em outra modalidade, as células microbianas são da ordem Thraustochytriales. Em outra modalidade, as células microbianas são de Thraustochytrium. Em outra modalidade ainda, as células microbianas são de Schizochytrium. Em uma modalidade adicional, as células microbianas são escolhidas do gênero Thraustochytrium, Schizochytrium ou suas misturas.

[034] Em uma modalidade, o processo compreende a lise de células microbianas que compreendem um óleo microbiano para formar uma composição de célula lisada. As expressões “lise” e “lisar” se referem a um processo através do qual a parede e/ou membrana da célula microbiana é rompida. Em uma modalidade, a célula microbiana é lisada por ser submetida a pelo menos um tratamento selecionado dentre mecânico, químico, enzimático, físico e suas combinações. Em outra modalidade, o processo compreende lisar as células microbianas que compreendem o óleo microbiano para formar uma composição de célula lisada, em que a lise é selecionada entre mecânica, química, enzimática, física e suas combinações.

[035] Em algumas modalidades, antes da lise da célula, a célula pode ser lavada e/ou pasteurizada. Em algumas modalidades, a lavagem das células inclui o uso de uma solução aquosa, tal como água, para remover qualquer composto extracelular solúvel em água ou dispersível em água. Em algumas modalidades, a célula pode ser lavada uma vez, duas vezes, três vezes ou mais. Em algumas modalidades, pasteuriza as células inclui aquecer a célula para inativar quaisquer enzimas indesejáveis, por exemplo, quaisquer enzimas que possam degradar o óleo ou reduzir o rendimento de PUFAs. Em algumas modalidades, a célula é lavada e depois pasteurizada antes de ser lisada. Em algumas modalidades, as células que estão sendo lisadas estão contidas em um caldo de fermentação.

[036] Em algumas modalidades, o processo compreende lisar células microbianas não lavadas que compreendem um óleo microbiano para formar uma composição de célula lisada. Em algumas modalidades, um caldo de fermentação que compreende células microbianas que compreendem óleo microbiano é primeiro lavado com, por exemplo, água e depois as células lisadas para formar uma composição de célula lisada. Em outras modalidades, o processo compreende lisar células não lavadas em um meio de fermentação para formar uma composição de célula lisada.

[037] Tratamentos mecânicos incluem, mas não são limitados a homogeneização, ultrassom, prensagem a frio, moagem e combinações desses. Em algumas modalidades, o processo compreende lisar as células pela homogeneização. Em algumas modalidades, o processo compreende lisar a célula com um homogeneizador.

[038] A homogeneização inclui, mas está limitada a processos que utilizam uma prensa de célula francesa, sonicador, homogeneizador, microfluidizador, moinho de bolas, moinho de haste, moinho de cascalho, moinho de esfera, cilindro de trituração de alta pressão, impactador e eixo vertical, liquidificador industrial, misturador de alto cisalhamento, misturador de pá, homogeneizador polytron, homogeneizador industrial (por exemplo, Homogeneizador Niro Soavi VHP e Homoneizadores APV Rannie e APV Gaulin), processadores industriais fluidizados de alto cisalhamento (por exemplo, processador fluidizado de alto cisalhamento de microfluidos), homogeneizadores de lise de célula/moinho de bola (por exemplo, Dyno-Mill e Buhler) e suas combinações. Em algumas modalidades, as células fluem através de um homogeneizador que é opcionalmente aquecido. Em algumas modalidades, a homogeneização adequada pode incluir 1 a 3 passagens através do homogeneizador em pressões alta e/ou baixa.

[039] Em algumas modalidades, a pressão durante a homogeneização é de 150 bar a 1.400 bar (15.000 kPa a 140.000 kPa); 150 bar a 1.200 bar (15.000 kPa a 120.000 kPa); 150 bar a 900 bar (15.000 kPa a 90.000 kPa); 150 bar a 300 bar (15.000 kPa a 30.000 kPa); 300 bar a 1.400 bar (30.000 kPa a 140.000 kPa); 300 bar a 1.200 bar (30.000 kPa a 120.000 kPa); 300 bar a 900 bar (30.000 kPa a 90.000 kPa); 400 bar a 800 bar (40.000 kPa a 80.000 kPa); 500 bar a 700 bar (50.000 kPa a 70.000 kPa); ou 600 bar (60.000 kPa) . Em algumas modalidades, a pressão durante a homogeneização é de 2.000 psi (13,8 MPa) a 20.000 psi (137,9 MPa); 2.000 psi (13,8 MPa) a 18.000 psi (124,1 MPa); 2.000 psi (13,8 MPa) a 16.000 psi (110,3 MPa); 2.000 psi (13,8 MPa) a 14.000 psi (96,5 MPa); 2.000 psi (13,8 MPa) a 12.000 psi (82,7 MPa); 2.000 psi (13,8 MPa) a 10.000 psi (68,9 MPa); 2.000 psi (13,8 MPa) a 8.000 psi (55,2 MPa); 2.000 psi (13,8 MPa) a 6.000 psi (41,4 MPa); 2.000 psi (13,8 MPa) a 4.000 psi (27,6 MPa); 4.000 psi (27,6 MPa) a 20.000 psi (137,9 MPa); 4.000 psi (27,6 MPa) a 18.000 psi (124,1 MPa); 4.000 psi (27,6 MPa) a 16.000 psi (110,3 MPa); 4.000 psi (27,6 MPa) a 14.000 psi (96,5 MPa); 4.000 psi (27,6 MPa) a 12.000 psi (82,7 MPa); 4.000 psi (27,6 MPa) a 10.000 psi (68,9 MPa); 4.000 psi (27,6 MPa) a 8.000 psi (55,2 MPa); 4.000 psi (27,6 MPa) a 6.000 psi (41,4 MPa); 6.000 psi (41,4 MPa) a 20.000 psi (137,9 MPa); 6.000 psi (41,4 MPa) a 18.000 psi (124,1 MPa); 6.000 psi (41,4 MPa) a 16.000 psi (110,3 MPa); 6.000 psi (41,4 MPa) a 14.000 psi (96,5 MPa); 6.000 psi (41,4 MPa) a 12.000 psi (82,7 MPa); 6.000 psi (41,4 MPa) a 10.000 psi (68,9 MPa); 6.000 psi (41,4 MPa) a 8.000 psi (55,2 MPa); 8.000 psi (55,2 MPa) a 20.000 psi (137,9 MPa); 8.000 psi (55,2 MPa) a 18.000 psi (124,1 MPa); 8.000 psi (55,2 MPa) a 16.000 psi (110,3 MPa); 8.000 psi (55,2 MPa) a 14.000 psi (96,5 MPa); 8.000 psi (55,2 MPa) a 12.000 psi (82,7 MPa); 8.000 psi (55,2 MPa) a 10.000 psi (68,9 MPa); 10.000 psi (68,9 MPa) a 20.000 psi (137,9 MPa); 10.000 psi (68,9 MPa) a 18.000 psi (124,1 MPa); 10.000 psi (68,9 MPa) a 16.000 psi (110,3 MPa); 10.000 psi (68,9 MPa) a 14.000 psi (96,5 MPa); 10.000 psi (68,9 MPa) a 12.000 psi (82,7 MPa); 12.000 psi (82,7 MPa) a 20.000 psi (137,9 MPa); 12.000 psi (82,7 MPa) a 18.000 psi (124,1 MPa); 12.000 psi (82,7 MPa) a 16.000 psi (110,3 MPa); 12.000 psi (82,7 MPa) a 14.000 psi (96,5 MPa); 14.000 psi (96,5 MPa) a 20.000 psi (137,9 MPa); 14.000 psi (96,5 MPa) a 18.000 psi (124,1 MPa); 14.000 psi (96,5 MPa) a 16.000 psi (110,3 MPa); 16.000 psi (110,3 MPa) a 20.000 psi (137,9 MPa); 16.000 psi (110,3 MPa) a 18.000 psi (124,1 MPa); ou 18.000 psi (124,1 MPa) a 20.000 psi (137,9 MPa).

[040] Em algumas modalidades, as células microbianas são misturadas em um misturador de alto cisalhamento antes de serem homogeneizadas. Em algumas modalidades, o misturador de alto cisalhamento é operado em uma faixa de pelo menos 5.000 rpm; pelo menos 7.500 rpm; pelo menos 10.000 rpm; pelo menos pelo menos 12.500 rpm; pelo menos 15.000 rpm; 5.000 rpm a 15.000 rpm; 5.000 rpm a 12.500 rpm;5.000 rpm a 10.000 rpm; 5.000 rpm a 7.500 rpm; 7.500 rpm a 15.000 rpm; 7.500 rpm a 12.500 rpm; 7.500 rpm a 10.000 rpm;10.000 rpm a 15.000 rpm; 10.000 rpm a 12.500 rpm; ou 12.500 rpm a 15.000 rpm.

[041] Tratamentos físicos incluem, mas não são limitados a aquecimento, que inclui, mas não estão limitados a resistivo, convecção, vapor, banho fluido, solar e suas combinações. Em algumas modalidades, as células são aquecidas em um tanque com bobinas resistivas dentro/sobre suas paredes. Em algumas modalidades, as células são aquecidas em um banho líquido com tubos que passam através dele.

[042] Tratamentos químicos incluem, mas não são limitados a elevação do pH das células; diminuição pelo menos; contatar as células com um químico; e suas combinações.

[043] Em algumas modalidades, as células são lisadas pela elevação do pH das células. Em algumas modalidades, o pH é elevado pela adição de uma base. As bases incluem, mas não são limitadas a hidróxidos (por exemplo, LiOH, NaOH, KOH e Ca(OH)2 e suas combinações); carbonatos (Na2COa, K2CO3, MgCOa, e suas combinações); bicarbonatos (porexemplo, LiHCO3, NaHCO3, KHCO3, e suas combinações); e suas combinações. A base pode estar na forma de um sólido (por exemplo, cristais, granulados e péletes); um líquido (por exemplo, uma solução aquosa); e combinações desses.

[044] Em algumas modalidades, a base tem um pKb de 1 a 12, 1 a 10, 1 a 8, 1 a 6, 1 a 5, 2 a 12, 2 a 10, 2 a 8, 2 a 6 , 2 a 5, 3 a 10, 3 a 6, 3 a 5, 4 a 10, 4 a 8, 4 a 6, 5 a 10 ou 5 a 8. Como usada aqui, a expressão “pKb” se refere ao logaritmo negativo da constante de associação da base, Kb, da base. Kb se refere a constante de equilíbrio para a ionização da base em água, em que:

e Kb da base, B, é definida como :

[045] Em algumas modalidades, o pH é selecionado dentre cerca de 8 ou mais; cerca de 9 ou acima; cerca de 10 ou acima; cerca de 11 ou acima; e cerca de 12 ou acima. Em outras modalidades, o pH é selecionado dentre 7 a 13; 7 a 12; 7 a 11; 7 a 10; 7 a 9; 8 a 13; 8 a 12; 8 a 11; 8 a 10; 8 a 9; 9 a 12; 9 a 11; 9 a 10; 10 a 12; e 10 a 11.

[046] Em algumas modalidades, o pH das células pode ser elevado por um processo de cloro-álcali. Em algumas modalidades, o caldo de fermentação que contém cloreto de sódio e as células é submetido à eletrólise que resulta na formação de hidróxido de sódio, o que eleva o pH da célula. Em algumas modalidades, o caldo de fermentação inclui cloreto de cálcio ou cloreto de potássio ao invés de, ou em adição ao cloreto de sódio e a eletrólise resulta na formação de hidróxido de cálcio ou hidróxido de potássio, respectivamente, elevando dessa maneira o pH da célula.

[047] Em algumas modalidades, as células são lisadas pela diminuição do pH das células. Em algumas modalidades, o pH é diminuído pela adição de um ácido. Os ácidos incluem, mas não são limitados sulfúrico; fosfórico; hidroclorídrico; hidrobrômico; hidroiódico; hipocloroso; cloroso; clórico; perclórico; fluorsúlfurico; nítrico; fluorantimonico; fluorbórico; hexafluorfosfórico; crômico; bórico; acético; cítrico; fórmico; e suas combinações. Em algumas modalidades, o pH é selecionado dentre cerca de 7 ou abaixo; cerca de 6,5 ou abaixo; cerca de 6 ou abaixo; cerca de 5,5 ou abaixo; cerca de 5 ou abaixo; cerca de 4,5 ou abaixo; cerca de 4 ou abaixo; cerca de 3,5 ou abaixo; cerca de 3 ou abaixo; cerca de 2,5 ou abaixo; cerca de 2 ou abaixo; cerca de 1,5 ou abaixo; cerca de 1 ou abaixo; e cerca de 0,5 ou abaixo. Em outras modalidades, o pH é selecionado dentre cerca de 0,5 a cerca de 7; cerca de 0,5 a cerca de 6,5; cerca de 0,5 a cerca de 6; cerca de 0,5 a cerca de 5,5; cerca de 0,5 a cerca de 5; cerca de 0,5 a cerca de 4,5; cerca de 0,5 a cerca de 4; cerca de 0,5 a cerca de 3,5; cerca de 0,5 a cerca de 3; cerca de 0,5 a cerca de 2,5; cerca de 0,5 a cerca de 2; cerca de 0,5 a cerca de 1,5; cerca de 0,5 a cerca de 1; cerca de 1 a cerca de 7; cerca de 1 a cerca de 6,5; cerca de 1 a cerca de 6; cerca de 1 a cerca de 5,5; cerca de 1 a cerca de 5; cerca de 2,5 a cerca de 7; cerca de 2,5 a cerca de 6,5; cerca de 2,5 a cerca de 6; cerca de 2,5 a cerca de 5,5; cerca de 2,5 a cerca de 5; cerca de 2,5 a cerca de 4,5; cerca de 2,5 a cerca de 4; cerca de 2,5 a cerca de 3,5; cerca de 2,5 a cerca de 3; cerca de 3 a cerca de 7; cerca de 3 a cerca de 6,5; cerca de 3 a cerca de 6; cerca de 3 a cerca de 5,5; cerca de 3 a cerca de 5; cerca de 3 a cerca de 4,5; cerca de 3 a cerca de 4; cerca de 3 a cerca de 3,5; cerca de 3,5 a cerca de 7; cerca de 3,5 a cerca de 6,5; cerca de 3,5 a cerca de 6; cerca de 3,5 a cerca de 5,5; cerca de 3,5 a cerca de 5; cerca de 3,5 a cerca de 4,5; cerca de 3,5 a cerca de 4; cerca de 4 a cerca de 7; cerca de 4 a cerca de 6,5; cerca de 4 a cerca de 6; cerca de 4 a cerca de 5,5; cerca de 4 a cerca de 5; cerca de 4 a cerca de 4,5; cerca de 4,5 a cerca de 7; cerca de 4,5 a cerca de 6,5; cerca de 4,5 a cerca de 6; cerca de 4,5 a cerca de 5,5; cerca de 4,5 a cerca de 5; cerca de 5 a cerca de 7; cerca de 5 a cerca de 6,5; cerca de 5 a cerca de 6; cerca de 5 a cerca de 5,5; cerca de 5,5 a cerca de 7; cerca de 5,5 a cerca de 6,5; cerca de 5,5 a cerca de 6; cerca de 6 a cerca de 7; cerca de 6 a cerca de 6,5; e cerca de 6,5 a cerca de 7.

[048] Em algumas modalidades, um ácido é adicionado em uma quantidade de cerca de 2% a cerca de 10%, cerca de 2% a cerca de 9%, cerca de 2% a cerca de 8%, cerca de 2% a cerca de 7%, cerca de 2% a cerca de 6%, cerca de 3% a cerca de 6%, cerca de 4% a cerca de 6%, cerca de 5% a cerca de 6%, cerca de 2% a cerca de 5%, cerca de 2% a cerca de 4%, cerca de 2% a cerca de 3%, cerca de 3% a cerca de 5%, cerca de 3% a cerca de 4%, ou cerca de 4% a cerca de 5% em peso (ou volume) do caldo de célula para diminuir o pH.

[049] Tratamento enzimático se refere à lise das células pelo contato das células com uma ou mais enzimas. Enzimas incluem, mas não são limitadas a proteases, celulases, hemicelulases, quitinases, pectinases e suas combinações. Exemplos não limitantes de proteases incluem serina proteases, treonina proteases, cisteína proteases, aspartato proteases, metaloproteases, ácido glutâmico proteases, alacase e suas combinações. Exemplos não limitantes de celulases incluem sucrase, maltase, lactase, alfa-glucosidase, beta-glucosidase, amilase, lisozime, neuraminidase, galactosidase, alfa-manosidase, glicuronidase, hialuronidase, pululanase, glicocerebrosidase, galactosilceramidase, acetilgalactosaminidase, fucosidase, hexosaminidase, iduronidase, maltase-glucoamilase, e suas combinações. Um exemplo não limitante de uma quitinase inclui quitotriosidase. Exemplos não limitantes de pectinases incluem pectoliase, pectozima, poligalacturonase e suas combinações. Em algumas modalidades, algumas enzimas são ativadas pelo calor. Em algumas modalidades, a lise não inclui o uso de enzima.

[050] Como usado aqui, uma “composição de célula lisada” se refere a uma composição que compreende uma ou mais células lisadas, incluindo restos celulares e outros conteúdos da célula, em combinação com o óleo microbiano (das células lisadas) e opcionalmente, um caldo de fermentação que contém um líquido (por exemplo, água), nutrientes, e células microbianas. Em algumas modalidades, uma célula microbiana está contida em um caldo de fermentação ou meio que compreendem água. Em algumas modalidades, uma composição de célula lisada se refere a uma composição que compreende uma ou mais células lisadas, restos celulares, óleo microbiano, conteúdos naturais da célula e componentes aquosos de um caldo de fermentação. Em uma modalidade, a composição de célula lisada compreende líquido, restos celulares e óleo microbiano. Em algumas modalidades, uma composição de célula lisada está na forma de uma emulsão de óleo em água que compreende uma mistura de uma fase aquosa contínua e uma fase oleosa dispersa. Em algumas modalidades, uma fase oleosa dispersa está presente em uma concentração de cerca de 1% a cerca de 60%; cerca de 1% a cerca de 50%; cerca de 1% a cerca de 40%; cerca de 1% a cerca de 30%; cerca de 1% a cerca de 20%; cerca de 5% a cerca de 60%; cerca de 5% a cerca de 50%; cerca de 5% a cerca de 40%; cerca de 5% a cerca de 30%; cerca de 5% a cerca de 20%; cerca de 10% a cerca de 60%; cerca de 10% a cerca de 50%; cerca de 10% a cerca de 40%; cerca de 20% a cerca de 60%; 20% a 50%, 20% a cerca de 40%; cerca de 30% a cerca de 60%; cerca de 30% a cerca de 50%; ou cerca de 40% a cerca de 60%) em peso (ou volume) de uma composição de célula lisada emulsionada.

[051] Em algumas modalidades, a lise das células microbianas resulta na formação de uma emulsão de materiais endógenos na célula ou biomassa celular incluindo, mas não limitado a proteínas, fosfolipídeos, carboidratos e suas combinações. Embora não estando ligado a qualquer teoria em particular, é considerado que o processo da presente invenção disperse ou desemulsifique uma composição de célula lisada emulsionada, permitindo que o óleo bacteriano seja separado da composição de célula lisada. As expressões “emulsão” e “emulsionada” se refere a uma mistura de duas ou mais fases ou camadas imiscíveis, em que uma fase ou camada está dispersa em outra fase ou camada. As expressões “fragmenta”, “dispersa”, “desemulsiona”, “desemulsificação”, “desemulsificar” e “dispersar” se referem a um processo de separação de fases ou camadas imiscíveis de uma emulsão. Por exemplo, desemulsificar ou dispersar uma composição de célula lisada emulsionada se refere a um processo pelo qual uma composição de célula lisada emulsionada muda de uma emulsão que possui uma ou mais fases ou camadas para uma composição que possui duas ou mais fases ou camadas. Por exemplo, em algumas modalidades, o processo da presente invenção dispersa uma composição de célula lisada emulsionada a partir de uma fase única para duas ou mais fases. Em algumas modalidades, as duas ou mais fases incluem uma fase oleosa e uma fase aquosa. Em algumas modalidades, um processo da presente invenção dispersa uma composição de célula lisada emulsionada em pelo menos três fases. Em algumas modalidades, as três fases são selecionadas a partir de uma fase oleosa, uma fase aquosa e uma fase sólida. Em algumas modalidades, as fases são selecionadas a partir de uma fase oleosa, uma fase emulsionada, uma fase aquosa e uma fase sólida.

[052] Em algumas modalidades, o tamanho médio da partícula das gotículas de óleo formadas durante a desemulsificação é selecionado dentre 5 micrômetros a 50 micrômetros; 5 micrômetros a 45 micrômetros; 5 micrômetros a 40 micrômetros; 5 micrômetros a 35 micrômetros; 5 micrômetros a 30 micrômetros; 5 micrômetros a 25 micrômetros; 5 micrômetros a 20 micrômetros; 5 micrômetros a 15 micrômetros; 10 micrômetros a 50 micrômetros; 10 micrômetros a 45 micrômetros; 10 micrômetros a 40 micrômetros; 10 micrômetros a 35 micrômetros; 10 micrômetros a 30 micrômetros; 10 micrômetros a 25 micrômetros; 10 micrômetros a 20 micrômetros; 10 micrômetros a 15 micrômetros; 15 micrômetros a 50 micrômetros; 15 micrômetros a 45 micrômetros; 15 micrômetros a 40 micrômetros; 15 micrômetros a 35 micrômetros; 15 micrômetros a 30 micrômetros; 15 micrômetros a 25 micrômetros; 15 micrômetros a 20 micrômetros; 20 micrômetros a 50 micrômetros; 20 micrômetros a 45 micrômetros; 20 micrômetros a 40 micrômetros; 20 micrômetros a 35 micrômetros; 20 micrômetros a 30 micrômetros; 20 micrômetros a 25 micrômetros; 25 micrômetros a 50 micrômetros; 25 micrômetros a 45 micrômetros; 25 micrômetros a 40 micrômetros; 25 micrômetros a 35 micrômetros; 25 micrômetros a 30 micrômetros; 30 micrômetros a 50 micrômetros; 30 micrômetros a 45 micrômetros; 30 micrômetros a 40 micrômetros; 30 micrômetros a 35 micrômetros; 35 micrômetros a 50 micrômetros; 35 micrômetros a 45 micrômetros; 35 micrômetros a 40 micrômetros; 40 micrômetros a 50 micrômetros; 40 micrômetros a 45 micrômetros; e 45 micrômetros a 50 micrômetros. Em uma modalidade adicional, o tamanho médio da partícula das gotículas de óleo formadas durante a desemulsificação é selecionado dentre pelo menos 10 micrômetros, pelo menos 15 micrômetros, pelo menos 20 micrômetros, pelo menos 25 micrômetros, pelo menos 30 micrômetros, pelo menos 35 micrômetros e pelo menos 40 micrômetros ou acima. Em modalidades adicionais, o tamanho médio da partícula das gotículas de óleo formadas durante a desemulsificação é selecionado dentre pelo menos 10 micrômetros, pelo menos 15 micrômetros, pelo menos 20 micrômetros e pelo menos 25 micrômetros. Em algumas modalidades, o tamanho médio da partícula pode ser medido usando, por exemplo, um analisador de tamanho de partícula Beckman Coulter LS 13 320 (Beckman Coulter, Brea, CA). Em algumas modalidades, o tamanho médio da partícula pode ser medido usando, por exemplo, um analisador de tamanho de partícula Malvern MS2000 (Malvern Instruments Ltd., Worcestershire, Reino Unido).

[053] Em algumas modalidades, uma composição de célula lisada demulsificada é formada sob (i) agitação de baixo cisalhamento, (ii) agitação em fluxo axial ou (iii) uma combinação desses. As expressões “agitar” e “agitação” se referem a um processo de afetar o movimento nas células, composição de célula lisada e/ou composição de célula lisada demulsificada através da aplicação de força. Em algumas modalidades, o processo compreende agitar as células, a composição de célula lisada e/ou a composição de célula lisada demulsificada pela agitação, misturação, combinação, sacudidela, vibração ou uma combinação dessas. Em algumas modalidades, um agitador tem um ou mais impulsores. Como usado aqui, “impulsor” se refere a um dispositivo arranjado para transmitir movimento às células, composição de célula lisada ou a composição de célula lisada demulsificada quando agitadas.

[054] A agitação de baixo cisalhamento e/ou agitação em fluxo axial podem ser fornecidas, por exemplo, por impulsores de fluxo axial (também conhecidos como turbinas de fluxo axial) e impulsores de fluxo misto. Os impulsores de fluxo axial incluem todos os impulsores nos quais a lâmina faz um ângulo menor do que 90° com o plano de rotação. Impulsores de fluxo axial adequados para formar uma composição de célula lisada demulsificada incluem, por exemplo, impulsores de fluidfoil (por exemplo, A320 (impulsores com número de Reynolds baixo) e A315 (impulsor de manuseio a gás)); impulsores de alta eficiência; impulsores hydrofoil (por exemplo, A310/A510 (hydrofoil de baixa solidez) e A312 (impulsor hydrofoil de entrada lateral)); propulsores (por exemplo, A100 impulsor de misturação do tipo marinho); A200(PBT); A100 (impulsor de fluxo axial); A200 (aerador de superfície); A333 de borda limpa (fluxo axial não colante); A340 (bomba de gás manual); A400 (número de Reynolds baixo com espiral dupla); A6000 (material de compósito); A620 (número de Reynolds baixo); MBI (misturador mag com botão de entrada) e combinações desses. Impulsores de fluxo misto incluem, por exemplo, turbinas passo-lâmina.

[055] Em algumas modalidades, uma composição de célula lisada demulsificada é formada sob (i) agitação de baixo cisalhamento, (ii) agitação de fluxo axial ou (iii) uma combinação dessas que é fornecida por um impulsor de fluxo axial. Em outras modalidades, uma composição de célula lisada demulsificada é formada sob (i) agitação de baixo cisalhamento, (ii) agitação de fluxo axial ou (iii) uma combinação dessas que é fornecida por um impulsor selecionado dentre impulsores de fluidfoil, impulsores de alta eficiência, impulsores hydrofoil, propulsores, turbinas passo-lâmina e suas combinações. Em uma modalidade adicional, uma composição de célula lisada demulsificada é formada sob (i) agitação de baixo cisalhamento, (ii) agitação de fluxo axial ou (iii) uma combinação dessas que é fornecida por um impulsor de hydrofoil.

[056] Em algumas modalidades, o agitador tem uma placa de aquecimento. Em algumas modalidades, o agitador tem uma cobertura para agitação. Em algumas modalidades, o agitador é um agitador no estilo de dispersão, que dispersa uma base e/ou um sal antes ou durante a lise das células e/ou depois da demulsificação da composição celular lisada.

[057] Em algumas modalidades, o processo compreende adicionalmente agitar (i) antes ou durante a lise das células; (ii) depois da demulsificação da composição de célula lisada; ou (iii) uma combinação desses. Impulsores adequados para agitar antes ou durante a lise das células e/ou depois da demulsificação da composição de célula lisada incluem impulsores de lâmina reta, impulsores de lâmina de Rushton, impulsores de fluxo axial, impulsores de fluxo radial, impulsores de disco de lâmina côncava, impulsores de alta eficiência, propulsores, pás, turbinas e combinações desses.

[058] Em algumas modalidades, o processo compreende agitar as células e/ou a composição de célula lisada demulsificada, em cerca de 2 hp (1,49 kW)/1.000 gal (3785,41 L) a cerca de 10 hp (7,46 kW)/1.000 gal (3785,41 L), cerca de 2 hp (1,49 kW)/1.000 gal (3785,41 L) a cerca de 5 hp (3,73 kW)/1.000 gal (3785, 41 L), cerca de 2 hp (1,49 kW)/1.000 gal (3785,41 L) a cerca de 4 hp (2,98 kW) (2,98 kW)/1.000 gal (3785,41 L), cerca de 2 hp (1,49 kW)/1.000 gal (3785, 41 L) a cerca de 3 hp (2,24 kW)/1.000 gal (3785,41 L), cerca de 2,5 hp (1,86 kW)/1.000 gal (3785,41 L) a cerca de 10 hp (7,46 kW)/1.000 gal (3785,41 L), cerca de 2,5 hp (1,86 kW)/1.000 gal (3785,41 L) a cerca de 5 hp (3,73 kW)/1.000 gal (3785, 41 L), cerca de 2,5 hp (1,86 kW)/1.000 gal (3785, 41 L) a cerca de 4 hp (2,98 kW)/1.000 gal (3785,41 L) ou cerca de 2,5 hp (1,86 kW)/1.000 gal (3785, 41 L) a cerca de 3 hp (2,24 kW)/1.000 gal (3785,41 L) de composição. Em outra modalidade, o processo compreende agitar as células e/ou a composição de célula lisada demulsificada em cerca de 2 hp (1,49 kW)/1.000 gal (3785, 41 L) ou mais, cerca de 2,1 hp (1,57 kW)/1.000 gal (3785, 41 L) ou mais, cerca de 2,2 hp (1,64 kW)/1.000 gal (3785, 41 L) ou mais, cerca de 2,3 hp (1,71 kW)/1.000 gal (3785, 41 L) ou mais, cerca de 2,4 hp (1,79 kW)/1.000 gal (3785,41 L) ou mais ou cerca de 2,5 hp (1,86 kW)/1.000 gal (3785,41 L) ou mais de composição. Em modalidades adicionais, o processo compreende agitar as células e/ou a composição de célula lisada demulsificada em cerca de 2 hp (1,49 kW)/1.000 gal (3785,41 L) a cerca de 3 hp (2,24 kW)/1.000 gal (3785,41 L) da composição. Em modalidades adicionais, o processo compreende agitar as células e/ou a composição de célula lisada demulsificada em cerca de 2 hp (1,49 kW)/1.000 gal (3785,41 L) a cerca de 10 hp (7,46 kW)/1.000 gal (3785,41 L) da composição.

[059] Em algumas modalidades, o processo compreende agitar as células e/ou a composição de célula lisada em cerca de 0,01 hp (0,0075 kW)/1.000 gal (3785,41 L) a cerca de 2 hp (1,49 kW)/1.000 gal (3785, 41 L), cerca de 0,1 hp (0, 075 kW)/1.000 gal (3785, 41 L) a cerca de 2 hp (1,49 kW)/1.000 gal (3785,41 L), cerca de 0,5 hp (0,37 kW)/1.000 gal (3785,41 L) a cerca de 2 hp (1,49 kW)/1.000 gal (3785,41 L), cerca de 1 hp (0,75 kW)/1.000 gal (3785,41 L) a cerca de 2 hp (1,49 kW)/1.000 gal (3785,41 L) ou cerca de 1,5 hp (1,12 kW)/1.000 gal (3785, 41 L) a cerca de 2 hp (1,49 kW)/1.000 gal (3785,41 L) da composição. Em modalidades adicionais, o processo compreende agitar as células e/ou a composição de célula lisada em cerca de 0,01 hp (0,0075 kW)/1.000 gal (3785,41 L) ou mais, cerca de 0,1 hp (0,075 kW)/1.000 gal (3785,41 L) ou mais, cerca de 0,2 hp (0,15 kW)/1.000 gal (3785,41 L) ou mais, cerca de 0,3 hp (0,22 kW)/1.000 gal (3785, 41 L) ou mais, cerca de 0,4 hp (0,30 kW)/1.000 gal (3785,41 L) ou mais ou cerca de 0,5 hp (0,37 kW)/1.000 gal (3785,41 L) ou mais da composição. Em modalidades adicionais, o processo compreende agitar as células e/ou a composição de célula lisada em cerca de 0,01 hp (0,0075 kW)/1.000 gal (3785,41 L) a cerca de 2 hp (1,49 kW)/1.000 gal (3785,41 L) da composição. Em uma modalidade adicional, o processo compreende agitar as células e/ou a composição de célula lisada em cerca de 0,5 hp (0,37 kW)/1.000 gal (3785,41 L) ou mais.

[060] Em algumas modalidades, o processo compreende agitar a 10 rpm ou menos, 20 rpm ou menos, 50 rpm ou menos, 100 rpm ou menos, 150 rpm ou menos, 200 rpm ou menos, 250 rpm ou menos, 300 rpm ou menos, 350 rpm ou menos, 400 rpm ou menos, 10 rpm a 400 rpm, 10 rpm a 350 rpm, 10 rpm a 300 rpm, 10 rpm a 250 rpm, 10 rpm a 200 rpm, 10 rpm a 150 rpm, 10 rpm a 100 rpm, 10 rpm a 50 rpm, 10 rpm a 20 rpm, 20 rpm a 400 rpm, 20 rpm a 350 rpm, 2 0 rpm a 300 rpm, 20 rpm a 250 rpm, 20 rpm a 200 rpm, 20 rpm a 150 rpm, 20 rpm Í a 100 : rpm, 20 rpm a 50 rpm, 50 rpm a 400 rpm, 50 rpm a 350 rpm, 50 rpm a 300 rpm, 50 rpm a 250 rpm, 50 rpm a 200 rpm, 50 rpm a 150 rpm, 50 rpm a 100 rpm, 100 rpm a 400 rpm, 100 rpm a 350 rpm, 100 rpm a 300 rpm, 100 rpm a 250 rpm, 100 rpm a 200 rpm, 100 rpm a 150 rpm, 150 rpm a 400 rpm, 150 rpm a 350 rpm, 150 rpm a 300 rpm, 150 rpm a 250 rpm, 150 rpm a 200 rpm, 200 rpm a 400 rpm, 200 rpm a 350 rpm, 200 rpm a 300 rpm, 200 rpm a 250 rpm, 250 rpm a 400 rpm, 250 rpm a 350 rpm, 250 rpm a 300 rpm, 300 rpm a 400 rpm, 300 rpm a 350 rpm, ou 350 rpm a 4 00 rpm. Em algumas modalidades , a agitação ocorre em uma taxa de 350 rpm ou menos.

[061] Em algumas modalidades, o processo compreende agitar as células, composição de célula lisada e/ou composição de célula lisada demulsificada usando em um agitador que possui uma velocidade da ponta do impulsor de 90 ft/min (0,46 m/s) a 1.200 ft/min (6,1 m/s), 200 ft/min (1,02 m/s) a 1.000 ft/min (5,08 m/S), 300 ft/min (1,52 m/s) a 800 ft/min (4,06 m/s), 400 ft/min (2,03 m/s) a 700 ft/min (3,56 m/s) ou 500 ft/min (2,54 m/s) a 600 ft/min (3,05 m/s). Em algumas modalidades, o processo compreende agitar com um agitador que possui um impulsor uma velocidade da ponta do impulsor de 200 ft/min (1,02 m/s) a 1000 ft/min (5,08 m/s).

[062] Em algumas modalidades, o processo compreende agitar as células, composição de célula lisada e/ou composição de célula lisada demulsificada usando em um agitador que possui uma velocidade da ponta do impulsor de 5 cm/sec a 900 cm/seg, 5 cm/sec a 750 cm/sec, 5 cm/sec a 500 cm/seg, 5 cm/seg a 350 cm/seg, 5 cm/seg a 300 cm/seg, 5 cm/seg a 250 cm/seg, 5 cm/seg a 200 cm/seg, 5 cm/seg a 150 cm/seg, 5 cm/seg a 100 cm/seg, 5 cm/seg a 50 cm/seg, 5 cm/seg a 25 cm/seg, 25 cm/seg a 900 cm/seg, 25 cm/seg a 750 cm/seg, 25 cm/seg a 500 cm/seg, 25 cm/seg a 350 cm/seg, 25 cm/sec a 300 cm/seg, 2 5 cm/sec a 2 50 cm/seg, 2 5 cm/seg a 200 cm/seg, 25 cm/seg a 150 cm/sec, 25 cm/sec a 100 cm/sec, 25 cm/sec a 50 cm/sec, 50 cm/sec a 900 cm/seg, 50 cm/seg a 750 cm/seg, 50 cm/seg a 500 cm/seg, 50 cm/seg a 350 cm/seg, 50 cm/seg a 300 cm/seg, 50 cm/seg a 250 cm/seg, 50 cm/seg a 200 cm/seg, 50 cm/seg a 150 cm/seg, 50 cm/seg a 100 cm/seg, 100 cm/seg a 90 0 cm/seg, 100 cm/seg a 7 50 cm/seg, 100 cm/seg a 500 cm/seg, 100 cm/sec a 350 cm/seg, 100 cm/seg a 300 cm/sec, 100 cm/sec a 2 50 cm/seg, 100 cm/seg a 2 00 cm/seg, 100 cm/seg a 150 cm/seg, 150 cm/seg a 900 cm/seg, 150 cm/seg a 750 cm/seg, 150 cm/seg a 50 0 cm/seg, 150 cm/seg a 350 cm/seg, 150 cm/seg a 300 cm/seg, 150 cm/seg a 2 50 cm/seg, 150 cm/seg a 2 00 cm/seg, 2 00 cm/seg a 90 0 cm/seg, 200 cm/seg a 750 cm/seg, 200 cm/seg a 500 cm/seg, 2 00 cm/seg a 35 0 cm/seg, 2 00 cm/seg a 300 cm/seg, 2 00 cm/seg a 250 cm/seg, 250 cm/seg a 900 cm/seg, 250 cm/seg a 7 50 cm/seg, 2 50 cm/seg a 50 0 cm/seg, 2 50 cm/seg a 350 cm/seg, 250 cm/seg a 300 cm/seg, 300 cm/seg a 900 cm/seg, 300 cm/seg a 750 cm/seg, 300 cm/seg a 50 0 cm/seg, 300 cm/seg a 350 cm/seg, 350 cm/seg a 900 cm/seg, 350 cm/seg a 8 50 cm/seg, 350 cm/seg a 8 00 cm/seg, 350 cm/seg a 7 50 cm/seg, 350 cm/seg a 7 00 cm/seg, 350 cm/seg a 650 cm/seg, 350 cm/seg a 60 0 cm/seg, 350 cm/seg a 550 cm/seg, 350 cm/seg a 500 cm/seg, 350 cm/seg a 450 cm/seg, 350 cm/seg a 4 00 cm/seg, 4 00 cm/seg a 90 0 cm/seg, 4 00 cm/seg a 8 50 cm/seg, 400 cm/sec a 800 cm/seg, 400 cm/seg a 750 cm/seg, 400 cm/seg a 700 cm/seg, 400 cm/seg a 650 cm/seg, 400 cm/seg a 600 cm/seg, 400 cm/seg a 550 cm/seg, 400 cm/seg a 50 0 cm/seg, 4 00 cm/seg a 4 50 cm/seg, 4 50 cm/seg a 90 0 cm/seg, 450 cm/seg a 850 cm/seg, 450 cm/seg a 800 cm/seg, 4 50 cm/seg a 750 cm/seg, 4 50 cm/seg a 7 00 cm/seg, 4 50 cm/seg a 650 cm/seg, 450 cm/seg a 600 cm/seg, 450 cm/seg a 550 cm/seg, 4 50 cm/seg a 50 0 cm/seg, 50 0 cm/seg a 90 0 cm/seg, 50 0 cm/seg a 8 50 cm/seg, 50 0 cm/seg a 8 00 cm/seg, 50 0 cm/seg a 750 cm/seg, 50 0 cm/seg a 7 00 cm/seg, 50 0 cm/seg a 650 cm/seg, 500 cm/seg a 600 cm/seg, 500 cm/seg a 550 cm/seg, 550 cm/seg a 90 0 cm/seg, 550 cm/seg a 8 50 cm/seg, 550 cm/seg a 8 00 cm/seg, 550 cm/seg a 7 50 cm/seg, 550 cm/seg a 700 cm/seg, 550 cm/seg a 650 cm/seg, 550 cm/seg a 600 cm/seg, 600 cm/seg a 900 cm/seg, 600 cm/seg a 8 50 cm/seg, 60 0 cm/seg a 8 00 cm/seg, 60 0 cm/seg a 7 50 cm/seg, 600 cm/seg a 700 cm/seg, 600 cm/seg a 650 cm/seg, 650 cm/seg a 90 0 cm/seg, 650 cm/seg a 8 50 cm/seg, 650 cm/seg a 800 cm/seg, 650 cm/seg a 750 cm/seg, 650 cm/seg a 7 00 cm/seg, 7 00 cm/seg a 90 0 cm/seg, 7 00 cm/seg a 8 50 cm/seg, 700 cm/seg a 800 cm/seg, 700 cm/seg a 750 cm/seg, 7 50 cm/seg a 90 0 cm/seg, 7 50 cm/seg a 8 50 cm/seg, 7 50 cm/seg a 800 cm/seg, 800 cm/seg a 900 cm/seg, 800 cm/seg a 850 cm/seg ou 850 cm/seg a 900 cm/seg. A expressão “velocidade da ponta do impulsor” se refere a velocidade da porção mais externa do impulsor conforme ele gira em torno do seu eixo central.

[063] Em algumas modalidades, a agitação (e as etapas adicionais opcionais como aqui descritas) é realizada em um recipiente que compreende um impulsor, em que a proporção do diâmetro do impulsor para o volume do recipiente é de 0,1 a 0,5, 0,1 a 0,4, 0,2 a 0,5, 0,2 a 0,4, 0,3 a 0,5, ou 0,3 a 0,4.

[064] Em algumas modalidades, a agitação (e as etapas adicionais opcionais como aqui descritas) é realizada em um recipiente que compreende um impulsor, em que a proporção do diâmetro do impulsor para o diâmetro interno do recipiente é de pelo menos 0,25, pelo menos 0,34, pelo menos 0, 65, 0,25 a 0,33, 0,3 a 0,6, 0,3 a 0,5, 0,3 a 0,4, 0,34 a 0, 65, 0,34 a 0,6, 0,34 a 0,55, 0,37 a 0,55, 0,4 a 0,65, 0,4 a 0,6, 0,4 a 0,5 ou 0,42 a 0,55.

[065] Em algumas modalidades, a agitação compreende misturar as células, composição de célula lisada e/ou composição de célula lisada demulsificada, tal que as células, composição de célula lisada e/ou composição de célula lisada demulsificada é colocada sob condições de fluxo descritas por um número de Reynolds de 10 a 10.000, 1000 a 10.000, 1500 a 10.000 ou 2000 a 10.000. Em algumas modalidades, uma emulsão de célula lisada durante a agitação tem um número de Reynolds de 2000 ou mais, 3000 ou mais, 5000 ou mais ou 2000 a 10.000, 3000 a 10.000 ou 5000 a 10.000.

[066] Em algumas modalidades, os tanques de agitação podem ter dois impulsores. Em algumas modalidades, os impulsores usados para a agitação antes ou durante a lise das células e/ou depois da demulsificação da composição de célula lisada (isto é, a composição de célula lisada demulsificada) são impulsores de fluxo radial. Em algumas modalidades, os tanques de agitação podem ter dois impulsores. Em algumas modalidades, os impulsores usados para a agitação antes ou durante a lise das células e/ou depois da demulsificação da composição de célula lisada são impulsores de lâmina de Rushton. Em algumas modalidades, os impulsores são separados um do outro por uma distância pelo menos igual ao diâmetro do menor impulsor. Em outras modalidades, onde o volume de líquido em um vaso com um diâmetro (x) e uma lâmina de agitação de diâmetro (y) (onde y = 0,3x a 0,5x), uma altura de líquido (x) pode ser agitada se o impulsor inferior estiver colocado em uma localização do fundo de y/0,33 e o impulsor superior está colocado em uma distância de y a 2y acima do impulsor inferior para o bombeamento axial ou a uma distância de 2y a 3y acima do impulsor inferior para o bombeamento radial. Em algumas modalidades, os vasos de agitação possuem um volume de pelo menos 10.000 litros, pelo menos 20.000 litros, pelo menos 30.000 litros, pelo menos 40.000 litros, pelo menos 50.000 litros, pelo menos 60.000 litros, pelo menos 70.000 litros, pelo menos 80.000 litros, pelo menos 90.000, pelo menos 100.000, pelo menos 150.000, ou pelo menos 200.000 litros. Em algumas modalidades, uma composição de célula lisada é agitada em pelo menos 50 rpm, pelo menos 100 rpm ou pelo menos 200 rpm.

[067] Em algumas modalidades, o processo de formação de uma composição de célula lisada demulsificada compreende ainda adicionar pelo menos uma enzima. Em algumas modalidades, o processo de formação de uma composição de célula lisada demulsificada compreende ainda adicionar pelo menos um coquetel de enzimas. Enzimas adequadas para formar uma composição de célula lisada demulsificada incluem, por exemplo, beta-glicanase (por exemplo, Vinoflow Max (Novozymes Corp.) e Brewzyme LP (Dyadic Int.)); xilanase (por exemplo, Xylanase Plus (Dyadic Int.) e Pentopan( ovozymes Corp.)); celulase (por exemplo, Cellustar CL (Dyadic Int.), Fibrezyme G2000 (Dyadic Int.), Celluclast (Novozymes Corp.), Fungamyl (Novozymes Corp.), e (Viscozyme L (Novozymes Corp.)); pectinase (por exemplo, Pectinex(Novozymes Corp.)); mananase; amilase (por exemplo, Alphastar Plus(Dyadic Int.) e Termamyl (Novozymes Corp.)); e combinações dessas. Em algumas modalidades, o processo de formação de uma composição de célula lisada demulsificada compreende ainda adicionar pelo menos uma enzima selecionada entre beta-glicanase, xilanase, celulase, pectinase, mananase, amilase e suas combinações. Em algumas modalidades, o processo de formação de uma composição de célula lisada demulsificada compreende ainda adicionar pelo menos uma enzima beta-glicanase.

[068] Em algumas modalidades, o processo de formação de uma composição de célula lisada demulsificada compreende adicionar uma enzima (por exemplo, na forma de pó ou em solução) em uma quantidade entre cerca de 0,05% a cerca de 10%, cerca de 0,05% a cerca de 9%, cerca de 0,05% a cerca de 8%, cerca de 0,05% a cerca de 7%, cerca de 0,05% a cerca de 6% , cerca de 0,05% a cerca de 5%, cerca de 0,05% a cerca de 4%, cerca de 0,05% a cerca de 3%, cerca de 0,05% a cerca de 2%, cerca de 0,05% a cerca de 1%, cerca de 0,05% a cerca de 0,5%, cerca de 0,05% a cerca de 0,1%, cerca de 0,1% a cerca de 10%, cerca de 0,1% a cerca de 9%, cerca de 0,1% a cerca de 8%, cerca de 0,1% a cerca de 7%, cerca de 0,1% a cerca de 6% , cerca de 0,1% a cerca de 5%, cerca de 0,1% a cerca de 4%, cerca de 0,1% a cerca de 3%, cerca de 0,1% a cerca de 2%, cerca de 0,1% a cerca de 1%, cerca de 0,1% a cerca de 0,5%, cerca de 0,5% a cerca de 10%, cerca de 0,5% a cerca de 9%, cerca de 0,5% a cerca de 8%, cerca de 0,5% a cerca de 7%, cerca de 0,5% a cerca de 6% , cerca de 0,5% a cerca de 5%, cerca de 0,5% a cerca de 4%, cerca de 0,5% a cerca de 3%, cerca de 0,5% a cerca de 2%, cerca de 0,5%) a cerca de 1%, cerca de 1% a cerca de 10%, cerca de 1% a cerca de 9%, cerca de 1% a cerca de 8%, cerca de 1% a cerca de 7%, cerca de 1% a cerca de 6% , cerca de 1% a cerca de 5%, cerca de 1% a cerca de 4%, cerca de 1%) a cerca de 3% e cerca de 1% a cerca de 2% em peso (ou volume) da composição. Em algumas modalidades, o processo de formação de uma composição de célula lisada demulsificada compreende adicionar uma enzima em uma quantidade de menos do que cerca de 10%, cerca de 9%, cerca de 8%, cerca de 7%, cerca de 6%, cerca de 5%, cerca de 4%, cerca de 3%, cerca de 2%, cerca de 1% e cerca de 0,5% em peso (ou volume) da composição.

[069] Em algumas modalidades, o processo de formação de uma composição de célula lisada demulsificada compreende adicionar um emulsificante. Em algumas modalidades, o emulsificante substitui a emulsão formada pelos materiais endógenos por que os PUFAs possuem uma afinidade acentuada por um emulsificante do que os materiais endógenos (por exemplo, proteínas, fosfolipídeos e carboidratos). Em algumas modalidades, a emulsão formada pelo emulsificante é mais estável do que a emulsão pelos materiais endógenos. Em algumas modalidades, uma emulsão formada pelo emulsificante é mais facilmente demulsificada usando os processos aqui descritos do que uma emulsão formada pelos materiais endógenos.

[070] Em algumas modalidades, o processo compreende demulsificar a composição de célula lisada pela diminuição do pH da composição de célula lisada. Em algumas modalidades, o pH é diminuído pela adição de um ácido. O ácido inclui, mas não está limitado a sulfúrico; fosfórico; hidroclorídrico; hidrobrômico; hidroiódico; hipocloroso; cloroso; clórico; perclórico; fluorsúlfurico; nítrico; fluorantimonico; fluorbórico; hexafluorfosfórico; cromico; bórico; acético; cítrico; fórmico; e suas combinações. Em algumas modalidades, o pH é selecionado dentre 7 ou menos; cerca de 6,5 ou menos; cerca de 6 ou menos; cerca de 5,5 ou menos; cerca de 5 ou menos; cerca de 4,5 ou menos; cerca de 4 ou menos; cerca de 3,5 ou menos; cerca de 3 ou menos; cerca de 2,5 ou menos; cerca de 2 ou menos; cerca de 1,5 ou menos; cerca de 1 ou menos; e cerca de 0,5 ou menos. Em algumas modalidades, o processo compreende diminuir o pH da composição de célula lisada para cerca de 6 ou menos. Em outras modalidades, o pH é selecionado dentre cerca de 0,5 a cerca de 7; cerca de 0,5 a cerca de 6,5; cerca de 0,5 a cerca de 6; cerca de 0,5 a cerca de 5,5; cerca de 0,5 a cerca de 5; cerca de 0,5 a cerca de 4,5; cerca de 0,5 a cerca de 4; cerca de 0,5 a cerca de 3,5; cerca de 0,5 a cerca de 3; cerca de 0,5 a cerca de 2,5; cerca de 0,5 a cerca de 2; cerca de 0,5 a cerca de 1,5; cerca de 0,5 a cerca de 1 ; cerca de 1 a cerca de 7; cerca de 1 a cerca de 6,5; cerca de 1 a cerca de 6; cerca de 1 a cerca de 5,5; cerca de 1 a cerca de 5; cerca de 1 a cerca de 4,5; cerca cerca de 5; cerca de 2 a cerca de 4,5; cerca de 2 a cerca de 4, cerca de 2 a cerca de 3,5; cerca de 2 a cerca de 3; cerca de 2 a cerca de 2,5; cerca de 2,5 a cerca de 7; cerca de 2,5 a cerca de 6,5; cerca de 2,5 a cerca de 6; cerca de 2,5 a cerca de 5,5; cerca de 2,5 a cerca de 5; cerca de 2,5 a cerca de 4,5; cerca de 2,5 a cerca de 4; cerca de 2,5 a cerca de 3,5; cerca de 2,5 a cerca de 3; cerca de 3 a cerca de 7; cerca de 3 a cerca de 6,5; cerca de 3 a cerca de 6; cerca de 3 a cerca de 5,5; cerca de 3 a cerca de 5; cerca de 3 a cerca de 4,5; cerca de 3 a cerca de 4; cerca de 3 a cerca de 3,5; cerca de 3,5 a cerca de 7; cerca de 3,5 a cerca de 6,5; cerca de 3,5 a cerca de 6; cerca de 3,5 a cerca de 5,5; cerca de 3,5 a cerca de 5; cerca de 3,5 a cerca de 4,5; cerca de 3,5 a cerca de 4; cerca de 4 a cerca de 7; cerca de 4 a cerca de 6,5; cerca de 4 a cerca de 6; cerca de 4 a cerca de 5,5; cerca de 4 a cerca de 5; cerca de 4 a cerca de 4,5; cerca de 4,5 a cerca de 7; cerca de 4,5 a cerca de 6,5; cerca de 4,5 a cerca de 6; cerca de 4,5 a cerca de 5,5; cerca de 4,5 a cerca de 5; cerca de 5 a cerca de 7; cerca de 5 a cerca de 6,5; cerca de 5 a cerca de 6; cerca de 5 a cerca de 5,5; cerca de 5,5 a cerca de 7; cerca de 5,5 a cerca de 6,5; cerca de 5,5 a cerca de 6; cerca de 6 a cerca de 7; cerca de 6 a cerca de 6,5; e cerca de 6,5 a cerca de 7. Em algumas modalidades, o processo compreende diminuir o pH da composição de célula lisada para cerca de 0,5 a cerca de 6.

[071] Em algumas modalidades, o processo compreende demulsificar a composição de célula lisada pela adição de um ácido em uma quantidade entre cerca de 0,5% a cerca de 20%, cerca de 0,5% a cerca de 15%, cerca de 0,5% a cerca de 10%, cerca de 0,5% a cerca de 9%, cerca de 0,5% a cerca de 8%, cerca de 0,5% a cerca de 7%, cerca de 0,5% a cerca de 6%, cerca de 0,5% a cerca de 5%, cerca de 0,5% a cerca de 4%, cerca de 0,5%) a cerca de 3%, cerca de 0,5% a cerca de 2% e cerca de 0,5% a cerca de 1% em peso (ou volume) do caldo celular ou da composição de célula lisada. Em uma modalidade, o processo compreende demulsificar a composição de célula lisada pela adição de um ácido em uma quantidade entre cerca de 0,5% a cerca de 20% em peso da composição de célula lisada.

[072] Em algumas modalidades, o processo ainda compreende combinar as etapas de lise e demulsificação juntas para formar uma etapa de lise e demulsificação em uma etapa.

[073] Em algumas modalidades, o processo compreende ainda combinar as etapas de lise e demulsificação juntas para formar uma etapa de lise e demulsificação em uma etapa que compreende adicionar pelo menos uma enzima já descrita aqui acima para obter uma composição de célula lisada demulsificada. Em outras modalidades, as células são lisadas com pelo menos uma enzima adequada para formar uma composição de célula lisada demulsificada. Em algumas modalidades, uma enzima adequada é uma enzima já descrita aqui acima para a obtenção de uma composição de célula lisada demulsificada.

[074] Em algumas modalidades, o emulsificante é um detergente. Em algumas modalidades, o emulsificante é um tensoativo. Em algumas modalidades, o emulsificante é adicionado antes, durante ou depois da lise. Em algumas modalidades, o emulsificante é adicionado depois da lise. Em algumas modalidades, o emulsificante é adicionado à composição de célula lisada. Como usadas aqui, a expressão “emulsificante” se refere a uma substancia que estabilize uma emulsão. Emulsificantes são selecionados a partir de emulsificantes iônicos, emulsificantes não iônicos e suas combinações. Em algumas modalidades, o emulsificante é um emulsificante iônico.

[075] Em algumas modalidades, o emulsificante iônico é selecionado dentre emulsificantes aniônicos, emulsificantes catiônicos e suas combinações. Em algumas modalidades, os emulsificantes aniônicos podem ser emulsificantes aniônicos de sulfato, tais como, por exemplo, sulfatos de alquila (por exemplo, lauril sulfato de amônia, lauril sulfato de sódio (SLS)/dodecil sulfato de sódio (SDS) e suas combinações), sulfatos de éter alquílico (por exemplo, lauril sulfato de sódio/lauril éter sulfato de sódio, miristil sulfato de sódio e suas combinações) e suas combinações; emulsificantes aniônicos de sulfato, tais como, por exemplo, docusatos (por exemplo, sódio sulfosuccinato de dioctila, tensoativos de sulfonato de flúor (por exemplo, perfluoroctanosulfonato e perfluorbutanosulfonato), sulfonatos de alquil benzeno e combinações desses); emulsificantes aniônicos de fosfato (por exemplo, fosfato de éter alquil arílico, fosfato de éter alquilico e combinações desses); emulsificantes aniônicos de carboxilato (por exemplo, carboxilatos de alquila (por exemplo, estearato de sódio, lauril sarcosinato de sódio) tensoativos de flúor carboxilato (por exemplo, perfluornonanoato, perfluoroctanoato e combinações desses) e combinações desses); e combinações desses. Em algumas modalidades, o emulsificante é um emulsificante aniônico. Em uma modalidade, o emulsificante aniônico é selecionado dentre um emulsificante aniônico de sulfato, um emulsificante aniônico de sulfonato, um emulsificante aniônico de fosfato, um emulsificante aniônico de carboxilato e combinações desses. Em outra modalidade, o emulsificante aniônico é um emulsificante aniônico de sulfato. Em outra modalidade, um emulsificante aniônico de sulfato é selecionado dentre lauril sulfato de amônia, dodecil sulfato de sódio, lauril sulfato de sódio/lauril éter sulfato de sódio, miristil sulfato de sódio e combinações desses. Ainda em outra modalidade adicional, um emulsificante aniônico de sulfato é dodecil sulfato de sódio.

[076] Em algumas modalidades, um emulsificante catiônico pode ser uma amina primária dependente do pH; uma amina secundária dependente do pH; uma amina terciária dependente do pH; di-hidrocloreto de octenidina; um cátion de amônia quaternária permanentemente carregado (por exemplo, sais de alquiltrimetilamônia (por exemplo, brometo de cetil trimetilamônia (CTAB)/brometo de hexadecil trimetil amônia, cloreto de cetil trimetilamônia (CTAC) e combinações desses), cloreto de cetilpiridínio (CPC), cloreto de benzacônio (BAC), cloreto de benzetônio (BZT), 5-bromo-5-nitro-1,3-dioxana, cloreto de dimetildioctadecilamônia, brometo de dioctadecildimetilamônia (DODAB) e combinações desses); e combinações desses

[077] Em algumas modalidades, o peso molecular do emulsificante é selecionado dentre 500 g/mol ou menos, 450 g/mol ou menos, 400 g/mol ou menos, 350 g/mol ou menos e 300 g/mol ou menos. Em uma modalidade adicional, o peso molecular do emulsificante é selecionado dentre 250 g/mol a 500 g/mol, 250 g/mol a 450 g/mol, 250 g/mol a 400 g/mol, 250 g/mol a 350 g/mol, 250 g/mol a 300 g/mol, 300 g/mol a 500 g/mol, 300 g/mol a 450 g/mol, 300 g/mol a 400 g/mol, 300 g/mol a 350 g/mol, 350 g/mol a 500 g/mol, 350 g/mol a 450 g/mol, 350 g/mol a 400 g/mol, 400 g/mol a 500 g/mol, 400 g/mol a 450 g/mol e 450 g/mol a 500 g/mol. Por exemplo, o peso molecular de SDS é de 288 g/mol e o peso molecular de CTAB é 364 g/mol. Em outra modalidade, o peso molecular do emulsificante é selecionado dentre 250 g/mol a 450 g/mol, 250 g/mol a 400 g/mol, 250 g/mol a 350 g/mol e 250 g/mol a 300 g/mol.

[078] Em algumas modalidades, um emulsificante é adicionado como um pó. Em algumas modalidades, um emulsificante é adicionado em uma solução que possui uma concentração de emulsificante em uma quantidade de 5% a 50%, 5% a 45%, 5% a 40%, 5% a 35%, 5% a 30%, 10% a 50%, 10% a 45%, 10% a 40%, 10% a 35%, 10% a 30%, 15% a 50%, 15% a 45%, 15% a 40%, 15% a 35%, 15% a 30%, 20% a 50%, 20% a 45%, 20% a 40%, 20% a 35%, 20% a 30%, 25% a 50%, 25% a 45%, 25% a 40%, 25% a 35%, 25% a 30%, 30% a 50%, 30% a 45%, 30% a 40% e 30% a 35%.

[079] Em algumas modalidades, um emulsificante (por exemplo, em forma de pó ou em solução) é adicionado em uma quantidade selecionada entre 0,2% a 10%, 0,2% a 9,5%, 0,2% a 9%, 0,2% a 8,5%, 0,2% a 8%, 0,2% a 7,5%, 0,2% a 7%, 0,2% a 6,5%, 0,2% a 6%, 0,2% a 5,5%, 0,2% a 5%, 0,2% a 4,5%, 0,2% a 4%, 0,2% a 3,5%, 0,2% a 3%, 0,2% a 2,5%, 0,2% a 2%, 0,2% a 1,5%, 0,2% a 1%, 0,2% a 0,5%, 0,5% a 10%, 0,5% a 9,5%, 0,5% a 9%, 0,5% a 8,5%, 0,5% a 8%, 0,5% a 7,5%, 0,5% a 7%, 0,5% a 6,5%, 0,5% a 6%, 0,5% a 5,5%, 0,5% a 5%, 0,5% a 4,5%, 0,5% a 4%, 0,5% a 3,5%, 0,5% a 3%, 0,5% a 2,5%, 0,5% a 2%, 0,5% a 1,5%, 0,5% a 1%, 1% a 10%, 1% a 9,5%, 1% a 9%, 1% a 8,5%, 1% a 8%, 1% a 7,5%, 1% a 7%, 1% a 6,5%, 1% a 6%, 1% a 5,5%, 1% a 5%, 1% a 4,5%, 1% a 4%, 1% a 3,5%, 1% a 3%, 1% a 2,5%, 1% a 2%, 1% a 1,5%, 1,5% a 10%, 1,5% a 9,5%, 1,5% a 9%, 1,5% a 8,5%, 1,5% a 8%, 1,5% a 7,5%, 1,5% a 7%, 1,5% a 6,5%, 1,5% a 6%, 1,5% a 5,5%, 1,5% a 5%, 1,5% a 4,5%, 1,5% a 4%, 1,5% a 3,5%, 1,5% a 3%, 1,5% a 2,5%, 1,5% a 2%, 2% a 10%, 2% a 9,5%, 2% a 9%, 2% a 8,5%, 2% a 8%, 2% a 7,5%, 2% a 7%, 2% a 6,5%, 2% a 6%, 2% a 5,5%, 2% a 5%, 2% a 4,5%, 2% a 4%, 2% a 3,5%, 2% a 3%, 2% a 2,5%, 2,5% a 10%, 2,5% a 9,5%, 2,5% a 9%, 2,5% a 8,5%, 2,5% a 8%, 2,5% a 7,5%, 2,5% a 7%, 2,5% a 6,5%, 2,5% a 6%, 2,5% a 5,5%, 2,5% a 5%, 2,5% a 4,5%, 2,5% a 4%, 2,5% a 3,5%, 2,5% a 3%, 3% a 10%, 3% a 9,5%, 3% a 9%, 3% a 8,5%, 3% a 8%, 3% a 7,5%, 3% a 7%, 3% a 6,5%, 3% a 6%, 3% a 5,5%, 3% a 5%, 3% a 4,5%, 3% a 4% e 3% a 3,5% em peso (ou volume) do caldo de fermentação ou da composição de célula lisada. Em outra modalidade, um emulsificante (por exemplo, em forma de pó ou em solução) é adicionado em uma quantidade selecionada entre 0,2% a 5%, 0,5% a 5%, 1% a 5%, 1,5% a 5%, 2% a 5%, 2,5% a 5% e 3% a 5% em peso (ou volume) do caldo de fermentação ou da composição de célula lisada. Em uma modalidade adicional, um emulsificante é adicionado em uma quantidade entre 0,2% a 10% em peso da composição de célula lisada.

[080] Em algumas modalidades, o emulsificante diminui a tensão interfacial (isto é, a tensão superficial) do caldo de fermentação ou da composição de célula lisada. Como usada aqui, a expressão “tensão interfacial” ou “tensão superficial” se refere a uma força que atua sobre uma linha imaginária de um metro de extensão na interface entre duas fases. Em algumas modalidades, a tensão interfacial da emulsão formada pelo emulsificante é menor do que a de uma emulsão formada pelos materiais endógenos. Em algumas modalidades, a tensão interfacial pode ser medida em dinas (1 dina = 1x10-5 N)/cm.

[081] Em algumas modalidades, o emulsificante aumenta um valor absoluto do potencial zeta do caldo de fermentação ou da composição de célula lisada (isto é, aumenta um potencial zeta positivo ou diminui um potencial zeta negativo). Em algumas modalidades, a adição de um emulsificante aniônico pode resultar em uma mudança para baixo no potencial zeta do caldo de fermentação ou da composição de célula lisada. Em algumas modalidades, a adição de um emulsificante catiônico pode resultar em uma mudança para cima no potencial zeta do caldo de fermentação ou da composição de célula lisada (por exemplo, aumenta um potencial zeta positivo ou aumenta um potencial zeta negativo). Como usada aqui, a expressão “potencial zeta” se refere ao potencial eletrocinético entre as partículas na emulsão. Em algumas modalidades, o potencial zeta pode ser medido em mV. Em algumas modalidades, o valor absoluto do potencial zeta da emulsão formada pelo emulsificante é maior do que de uma emulsão formada pelos materiais endógenos.

[082] Em algumas modalidades, a adição de um emulsificante iônico cria uma emulsão de óleo em água. Em algumas modalidades, a emulsão de óleo em água inclui, mas não está limitada a óleo, água, e um emulsificante iônico.

[083] Em algumas modalidades, o processo de formação de uma composição de célula lisada demulsificada compreende adicionalmente elevar o pH da composição de célula lisada. Em algumas modalidades, o pH é elevado pela adição de uma base à composição de célula lisada. As bases que podem ser usadas para demulsificar à composição de célula lisada são iguais àquelas descritas aqui acima. Em algumas modalidades, o pH é selecionado dentre cerca de 7,5 ou acima; cerca de 8 ou mais; cerca de 9 ou acima; cerca de 10 ou acima; cerca de 11 ou acima; e cerca de 12 ou acima. Em outras modalidades, o pH é selecionado dentre 7 a 13; 7 a 12; 7 a 11; 7 a 10; 7 a 9; 7 a 8; 8 a 13; 8 a 12; 8 a 11; 8 a 10; 8 a 9; 9 a 13; 9 a 12; 9 a 1 1; 9 a 10; 10 a 13; 10 a 12; e 10 a 11. Em algumas modalidades, o pH é selecionado dentre 9 a 11.

[084] Em algumas modalidades, o processo compreende adicionar um sal à composição de célula lisada. A expressão “sal” se refere a um composto iônico formado pela substituição de um íon de hidrogênio de um ácido por um metal (por exemplo, um metal alcalino, um metal alcalino- terroso ou um metal de transição) ou um composto positivamente carregado (por exemplo, NH4+) . Em algumas modalidades, o sal pode ser um sal de metal alcalino, sais de metal alcalino-terroso, sais de sulfato ou suas combinações. Espécies iônicas negativamente carregadas presentes em um sal incluem, mas não são limitados a haletos, sulfato, bissulfato, sulfito, fosfato, fosfato de hidrogênio, di-hidrogênio fosfato, carbonato, bicarbonato e suas combinações. Em algumas modalidades, o sal é selecionado dentre cloreto de sódio, sulfato de sódio, carbonato de sódio, cloreto de sódio, sulfato de sódio, carbonato de sódio, cloreto de cálcio, sulfato de potássio, sulfato de magnésio, glutamato monossódico, sulfato de amônia, cloreto de potássio, cloreto de ferro, sulfato de ferro, sulfato de alumínio, acetato de amônia e combinações desses. Em algumas modalidades, um sal não inclui NaOH. Um sal pode ser adicionado como um sólido (por exemplo, na forma cristalina, amorfa, peletizada, e/ou granulada) e/ou como uma solução (por exemplo, uma solução diluída, uma solução saturada ou uma solução super-saturada) que contém, por exemplo, água.

[085] Em algumas modalidades, o sal é adicionado em uma quantidade de 5 g/L a 25 g/L, 5 g/L a 10 g/L, 10 g/L a 15 g/L, 15 g/L a 20 g/L, 20 g/L a 25 g/L ou 10 g/L a 20 g/L.

[086] Em outras modalidades, um sal é adicionado à composição de célula lisada em uma quantidade de 20% ou menos, 15% ou menos, 10% ou menos, 7,5% ou menos, 5% ou menos, ou 2% ou menos em peso (ou volume), da composição de célula lisada. Em outras modalidades, um sal é adicionado à composição de célula lisada em uma quantidade entre cerca de 0,05% a cerca de 20%, cerca de 0,1% a cerca de 20%, cerca de 0,1% a cerca de 15%, cerca de 0,1% a cerca de 10%, cerca de 0,5% a cerca de 20%, cerca de 0,5% a cerca de 15%, cerca de 0,5% a cerca de 10%, cerca de 0,5% a cerca de 5%, cerca de 0,5% a cerca de 4%, cerca de 0,5% a cerca de 3%, cerca de 0,5% a cerca de 2,5%, cerca de 0,5% a cerca de 2%, cerca de 0,5% a cerca de 1,5%, cerca de 0,5% a cerca de 1%, cerca de 1% a cerca de 20%, cerca de 1% a cerca de 15%, cerca de 1% a cerca de 10%, cerca de 1% a cerca de 5%, cerca de 1% a cerca de 4%, 1% a cerca de 3%, cerca de 1% a cerca de 2,5%, cerca de 1% a cerca de 2%, cerca de 1% a cerca de 1,5%, cerca de 1,5% a cerca de 5%, cerca de 1,5% a cerca de 4%, cerca de 1,5% a cerca de 3%, cerca de 1,5% a cerca de 2,5%, cerca de 1,5% a cerca de 2%, cerca de 2% a 20%, cerca de 2% a cerca de 15%, cerca de 2% a cerca de 10%, cerca de 2% a cerca de 5%, cerca de 2% a cerca de 4%, cerca de 2% a cerca de 3%, cerca de 2% a cerca de 2,5%, cerca de 2,5% a cerca de 5%, cerca de 2,5% a cerca de 4%,cerca de 2,5% a cerca de 3%, cerca de 3% a cerca de 5%, cerca de 3% a cerca de 4%, cerca de 4% a cerca de 5%, cerca de 5% a cerca de 20%, cerca de 5% a cerca de 15%, cerca de 5% a cerca de 10%, cerca de 10% a cerca de 20%, cerca de 10% a cerca de 15%, ou cerca de 15% a cerca de 20%, em peso (ou volume) da composição de célula lisada (por exemplo, peso (ou volume) total do caldo) . Por exemplo, quando uma composição de célula lisada pesa 1000 kg, o sal que é adicionado em uma quantidade de 0,5% a 20% em peso (ou volume), requer a adição de 5 kg a 200 kg de sal em uma composição de célula lisada. Em algumas modalidades, um sal é adicionado à composição de célula lisada em uma quantidade entre cerca de 0,05% a cerca de 20%), cerca de 0,1% a cerca de 20% em peso (ou volume) da composição de célula lisada, cerca de 0,5% a cerca de 15% em peso (ou volume) ou cerca de 2% a cerca de 10% em peso (ou volume) da composição de célula lisada.

[087] Em algumas modalidades, o processo compreende adicionalmente aquecer antes, durante ou depois da lise das células. Em algumas modalidades, o aquecimento é realizado antes da adição do emulsificante, durante a adição de emulsificante, antes da adição de um sal; durante a adição do sal, depois da adição de um sal ou combinações desses. Em algumas modalidades, o processo compreende aquecer a composição de célula lisada e/ou células a pelo menos 10 °C, pelo menos 20 °C, pelo menos 25 °C, pelo menos 30 °C, pelo menos 35 °C, pelo menos 40 °C, pelo menos 45 °C, pelo menos 50 °C, pelo menos 55 °C, pelo menos 60 °C, pelo menos 65 °C, pelo menos 70 °C, pelo menos 75 °C, pelo menos 80 °C, pelo menos 85 °C, pelo menos 90 °C, pelo menos 95 °C ou pelo menos 100 °C. Em algumas modalidades, o processo compreende aquecer a composição de célula lisada e/ou células entre cerca de 10 °C a cerca de 100 °C, cerca de 10 °C a cerca de 90 °C, cerca de 10 °C a cerca de 80 °C, cerca de 10 °C a cerca de 70 °C, cerca de 20 °C a cerca de 100 °C, cerca de 20 °C a cerca de 90 °C, cerca de 20 °C a cerca de 80 °C, cerca de 20 °C a cerca de 70 °C, cerca de 30 °C a cerca de 100 °C, cerca de 30 °C a cerca de 90 °C, cerca de 30 °C a cerca de 80 °C, cerca de 30 °C a cerca de 70 °C, cerca de 40 °C a cerca de 100 °C, cerca de 40 °C a cerca de 90 °C, cerca de 40 °C a cerca de 80 °C, cerca de 50 °C a cerca de 100 °C, cerca de 50 °C a cerca de 90 °C, cerca de 50 °C a cerca de 80 °C, cerca de 50 °C a cerca de 70 °C, cerca de 60 °C a cerca de 100 °C, cerca de 60 °C a cerca de 90 °C, cerca de 60 °C a cerca de 80 °C, cerca de 70 °C a cerca de 100 °C, cerca de 70 °C a cerca de 90 °C, cerca de 80 °C a cerca de 100 °C, cerca de 80 °C a cerca de 90 °C ou cerca de 90 °C a cerca de 100 °C. Em modalidades adicionais, o processo compreende aquecer a composição de célula lisada entre cerca de 60 °C a cerca de 100 °C, cerca de 70 °C a cerca de 100 °C, cerca de 70 °C a cerca de 90 °C, cerca de 80 °C a cerca de 100 °C, cerca de 80 °C a cerca de 90 °C ou cerca de 90 °C a cerca de 100 °C. Em modalidades adicionais, processo compreende aquecer a composição de célula lisada a pelo menos 60 °C, pelo menos 70 °C, pelo menos 75 °C, pelo menos 80 °C, pelo menos 85 °C, pelo menos 90 °C, pelo menos 95 °C ou pelo menos 100 °C.

[088] Em algumas modalidades, a composição de célula lisada é aquecia por um período de tempo suficiente para demulsificar a composição de célula lisada.

[089] Em algumas modalidades, as células e/ou a composição de célula lisada podem ser aquecidas em um sistema fechado ou em um sistema com um evaporador. Em algumas modalidades, as células e/ou a composição de célula lisada podem ser aquecidas em um sistema com um evaporador tal que uma porção da água presente nas células e/ou composição de célula lisada é removida pela evaporação. Em algumas modalidades, o processo compreende aquecer as células e/ou composição de célula lisada em um sistema com um evaporador para remover até 1%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45% ou 50% em peso (ou volume) da água presente nas células e/ou composição de célula lisada. E algumas modalidades, o processo compreende aquecer as células e/ou composição de célula lisada em um sistema com um evaporador para remover até 1% a 50%, 1% a 45%, 1% a 40%, 1% a 35%, 1% a 30%, 1% a 25%, 1% a 20%, 1% a 15%, 1% a 10%, 1% a 5%, 5% a 50%, 5% a 45%, 5% a 40%, 5% a 35%, 5% a 30%, 5% a 25%, 5% a 20%, 5% a 15%, 5% a 10%, 10% a 50%, 10% a 45%, 10% a 40%, 10% a 35%, 10% a 30%, 10% a 25%, 10% a 20%, 10% a 15%, 15% a 50%, 15% a 45%, 15% a 40%, 15% a 35%, 15% a 30%, 15% a 25%, 15% a 20%, 20% a 50%, 20% a 45%, 20% a 40%, 20% a 35%, 20% a 30%, 20% a 25%, 25% a 50%, 25% a 45%, 25% a 40%, 25% a 35%, 25% a 30%, 30% a 50%, 30% a 45%, 30% a 40%, 30% a 35%, 35% a 50%, 35% a 45%, 35% a 40%, 40% a 50%, 40% a 45% ou 45% a 50% em peso (ou volume) de água.

[090] Em algumas modalidades, a composição de célula lisada é submetida a um ou mais de um emulsificante, uma base, um sal, calor e agitação para formar uma composição de célula lisada demulsificada.

[091] Em algumas modalidades, o processo compreende demulsificar células lisadas não lavadas que compreendem o óleo microbiano em uma composição de célula lisada demulsificada; e depois separar o óleo da composição de célula lisada demulsificada não lavada. Uma composição de célula lisada demulsificada não lavada se refere ao processo através do qual a composição de célula lisada não é lavada, por exemplo, com água ou tampão que é então removido, por exemplo, pela centrifugação. A lavagem de uma composição de célula lisada pode diminuir o rendimento global de óleo obtido de uma célula.

[092] Em uma modalidade alternativa, o número de vezes em que a composição de célula lisada é lavada pode ser diminuído em 1 vez, 2 vezes, 3 vezes ou mais. Em algumas modalidades, a lavagem é em não mais do que 1 vez, 2 vezes ou 3 vezes.

[093] Em algumas modalidades, as várias combinações que formam uma composição de célula lisada, a adição de um emulsificante à composição de célula lisada, o contato da composição de célula lisada com um sal, o aquecimento da composição de célula lisada e a agitação da composição de célula lisada podem ocorrer em um único tanque. Em algumas modalidades, as várias combinações de formação de células, contatar as células com uma base ou elevar o pH das células, adicionar um emulsificante à composição de célula lisada, contatar as células com um sal, aquecer as células e agitar as células podem ocorrer em um único tanque. Em algumas modalidades, o tanque único inclui um tanque de fermentação. Em algumas modalidades, o tanque de fermentação pode ter um volume de pelo menos 20.000 litros, pelo menos 50.000 litros, pelo menos 100.000 litros, pelo menos 120.000 litros, pelo menos 150.000 litros, pelo menos 200.000 litros ou pelo menos 220.000 litros. Em algumas modalidades, o tanque de fermentação pode ter um volume de 20.000 litros a 220.000 litros, 20.000 litros a 100.000 litros, 20.000 litros a 50.000 litros, 50.000 litros a 220.000 litros, 50.000 litros a 150.000 litros, 50.000 litros a 100.000 litros, 100.000 litros a 220.000 litros, 100.000 litros a 150.000 litros, 100,000 litros a 120,000 litros, 150.000 litros a 220.000 litros, 150.000 litros a 200.000 litros, ou 200.000 litros a 220.000 litros.

[094] Em algumas modalidades, a quantidade de células de uma composição de célula lisada formada em um tanque pode ser transferida para um ou mais tanques de agitação. Em algumas modalidades, os tanques de agitação podem ter um volume de pelo menos 20.000 litros, pelo menos 30.000 litros, pelo menos 40.000 litros ou pelo menos 50.000 litros. Em algumas modalidades, os tanques de agitação podem ter um volume de 20.000 litros a 50.000 litros, 20.000 litros a 40.000 litros, 20.000 litros a 30.000 litros, 30.000 litros a 50.000 litros, 30.000 litros a 40.000 litros ou 40.000 litros a 50.000 litros.

[095] Em geral, os processos aqui descritos não utilizam um solvente orgânico para obter, em separado ou recuperar de outra maneira um óleo microbiano das células microbianas. Em algumas modalidades, nenhum solvente orgânico é usado na obtenção de um óleo microbiano de células microbianas. Em outra modalidade, um solvente orgânico não é adicionado às células, não é adicionado a uma composição de célula lisada e/ou não é adicionado a um óleo durante os processos aqui descritos em uma quantidade ou concentração suficientes para obter um óleo microbiano. Solventes orgânicos incluem solventes polares, solventes não polares, solventes miscíveis em água, solventes imiscíveis em água e suas combinações.

[096] Em algumas modalidades, o processo compreende adicionalmente separar um óleo de uma composição de célula lisada demulsificada. Em algumas modalidades, o processo compreende separar um óleo de uma composição de célula lisada demulsificada pela centrifugação da composição de célula lisada demulsificada. Em algumas modalidades, um óleo é separado de uma composição de célula lisada demulsificada pela permissão de que a composição de célula lisada demulsificada repouse, em que o óleo se separa (por exemplo, como uma camada separada) da composição de célula lisada demulsificada usando a gravidade. Em algumas modalidades, a separação é por uma membrana lipofílica. Em algumas modalidades, a separação compreende centrifugar em uma temperatura de 10 °C a 100 °C. Em algumas modalidades, o óleo é separado da composição de célula lisada demulsificada, primeiro, pela elevação do pH para neutro (por exemplo, pela adição de uma base que está descrita aqui acima. E depois centrifugando a composição de célula lisada demulsificada para obter o óleo.

[097] Em algumas modalidades, o processo compreende separar um óleo da composição de célula lisada demulsificada pela centrifugação da composição de célula lisada demulsificada em uma temperatura de pelo menos 10 °C, pelo menos 20 °C, pelo menos 25 °C, pelo menos 30 °C, pelo menos 35°C, pelo menos 40°C, pelo menos 45°C, pelo menos 50°C, pelo menos 55°C, pelo menos 60°C, pelo menos 65°C, pelo menos 70°C, pelo menos 75°C, pelo menos 80°C, pelo menos 85°C, pelo menos 90°C, pelo menos 95°C, ou pelo menos 100 °C. Em algumas modalidades, o processo compreende separar um óleo da composição de célula lisada demulsificada pela centrifugação da composição de célula lisada demulsificada em uma temperatura de 10 °C a 100 °C, 10 °C a 90 °C, 10 °C a 80 °C, 20 °C a 100 °C, 20 °C a 90 °C, 20 °C a 80 °C, 25 °C a 100 °C, 25 °C a 90 °C, 25 °C a 80 °C, 25 °C a 75 °C, 30 °C a 100°C, 30°C a 90°C, 30°C a 80 °C, 40 °C a 100 °C, 40 °C a 90 °C, 40 °C a 80 °C, 50 °C a 100 °C, 50 °C a 90 °C, 50 °C a 80 °C, 50 °C a 70 °C, 60 °C a 100 °C, 60 °C a 90 °C, 60 °C a 80 °C, 60 °C a 70 °C, 70 °C a 100 °C, 70 °C a 90 °C, 70 °C a 80 °C, 80 °C a 100 °C, 80 °C a 90 °C, ou 90 °C a 100 °C.

[098] Em algumas modalidades, a centrifugação é conduzida em uma taxa de alimentação (de uma composição de célula lisada demulsificada em uma centrifuga) de 1 quilograma por minuto (kg/min) a 500 kg/min, 1 kg/min a 400 kg/min, 1 kg/min a 300 kg/min, 1 kg/min a 200 kg/min, 1 kg/min a 100 kg/min, 1 kg/min a 75 kg/min, 1 kg/min a 50 kg/min, 1 kg/min a 40 kg/min, 1 kg/min a 30 kg/min, 1 kg/min a 25 kg/min, 1 kg/min a 10 kg/min, 10 kg/min a 500 kg/min, 10 kg/min a 400 kg/min, 10 kg/min a 300 kg/min, 10 kg/min a 200 kg/min, 10 kg/min a 100 kg/min, 10 kg/min a 75 kg/min, 10 kg/min a 50 kg/min, 10 kg/min a 40 kg/min, 10 kg/min a 30 kg/min, 20 kg/min a 500 kg/min, 20 kg/min a 400 kg/min, 20 kg/min a 300 kg/min, 20 kg/min a 200 kg/min, 20 kg/min a 100 kg/min, 20 kg/min a 75 kg/min, 20 kg/min a 50 kg/min, 20 kg/min a 40 kg/min, 25 kg/min a 500 kg/min, 25 kg/min a 400 kg/min, 25 kg/min a 300 kg/min, 25 kg/min a 200 kg/min, 25 kg/min a 100 kg/min, 25 kg/min a 75 kg/min, 25 kg/min a 50 kg/min, 30 kg/min a 60 kg/min, 30 kg/min a 50 kg/min, 30 kg/min a 40 kg/min, 50 kg/min a 500 kg/min, 100 kg/min a 500 kg/min, ou 200 kg/min a 500 kg/min.

[099] Em algumas modalidades, o processo compreende centrifugar uma composição de célula lisada demulsificada em uma força centrífuga de 1.000 g a 25.000 g, 1.000 g a 20.000 g, 1.000 g a 10.000 g, 2.000 g a 25.000 g, 2.000 g a 20.000 g, 2.000 g a 15.000 g, 3.000 g a 25.000 g, 3.000 g a 20.000 g, 5.000 g a 25.000 g, 5.000 g a 20.000 g, 5.000 g a 15.000 g, 5.000 g a 10.000 g, 5.000 g a 8.000 g, 10.000 g a 25.000 g, 15.000 g a 25.000 g ou pelo menos 1.000 g, pelo menos 2.000, g, pelo menos 4.000 g, pelo menos 5.000 g, pelo menos 7.000 g, pelo menos 8.000 g, pelo menos 10.000 g, pelo menos 15.000 g, pelo menos 20.000 g, ou pelo menos 25.000 g. Como usado aqui, "g" se refere a gravidade padronizada ou aproximadamente 9,8 m/s2. Em algumas modalidades, o processo compreende centrifugar uma composição de célula lisada demulsificada a 4.000 rpm a 14.000 rpm, 4.000 rpm a 10.000 rpm, 6.000 rpm a 14.000 rpm, 6.000 rpm a 12.000 rpm, 8.000 a 14.000 rpm, 8.000 rpm a 12.000 rpm ou 8.000 rpm a 10.000 rpm.

[100] Em algumas modalidades, o óleo pode ser recuperado, por exemplo, pela decantação, desnatação, a vácuo, por bombeamento, sucção, extração, sifonagem ou recuperando de outra maneira o óleo microbiano da superfície da composição separada.

[101] Em algumas modalidades, o processo compreende secar o óleo que foi recuperado para remover a água do óleo. Em algumas modalidades, a secagem do óleo pode incluir, mas não está limitada ao aquecimento do óleo para evaporar a água. Em algumas modalidades, depois da secagem, o óleo tem um conteúdo de água em peso (ou volume) por percentual de óleo que é menor do que 3%, menor do que 2,5%, menor do que 2%, menor do que 1,5%, menor do que 1%, menor do que 0,5%, menor do que 0,1%, ou 0%. Em algumas modalidades, depois da secagem, o óleo tem um conteúdo de água em peso (ou volume) por percentual de óleo de 0% a 3%, 0% a 2,5%, 0% a 2%, 0% a 1,5%, 0% a 1%, 0% a 0,5%, 0,1% a 3%, 0,1% a 2,5%, 0,1% a 2%, 0,1% a 1,5%, 0,1% a 1%, 0,1% a 0,5%, 0,5% a 3%, 0,5% a 2,5%, 0,5% a 2%, 0,5% a 1,5%, 0,5% a 1%, 1% a 3%, 1% a 2,5%, 1% a 2%, 1% a 1,5%, 1,5% a 3%, 1,5% a 2,5%, 1,5% a 2%, 2% a 3%, 2% a 2,5% ou 2,5% a 3%.

[102] É descrito aqui um óleo microbiano que pode ser obtido das células microbianas por qualquer um dos processos aqui descritos. Em algumas modalidades, o óleo compreende pelo menos 30% em peso (ou volume) de ácido araquidônico. Em algumas modalidades, o óleo compreende pelo menos 30% em peso (ou volume) de ácido docosahexaenoico.

[103] O valor de Anisidina (AV) é determinado de acordo com o Método Oficial AOCS Cd 18-90. Em uma modalidade, o óleo aqui descrito tem um AV menor do que cerca de 50; menor do que cerca de 40; menor do que cerca de 30; menor do que cerca de 20; menor do que cerca de 15; ou menor do que cerca de 10. Em algumas modalidades, o óleo tem um AV menor do que cerca de 50. A expressão valor de anisidina se refere à medida de produtos de reação secundários, tais como aldeídos e cetonas que correm durante a oxidação do óleo.

[104] O valor de peróxido (PV) é determinado de acordo com o Método Oficial AOCS Cd 8-53. Em uma modalidade, o óleo aqui descrito tem um PV menor do que cerca de 20 meq/kg; menor do que cerca de 10 meq/kg; ou menor do que cerca de 5 meq/kg. A expressão valor de peróxido se refere à medida de produtos de reação primários, tais como peróxidos e hidroperóxidos, que ocorrem durante a oxidação do óleo. Como usado aqui, o valor de peróxido é medido em meq/kg.

[105] Em algumas modalidades, o óleo tem um conteúdo de fósforo de 100 ppm ou menos, 95 ppm ou menos, 90 ppm ou menos, 8 5 ppm ou menos, 8 0 ppm ou menos, 7 5 ppm ou menos, 7 0 ppm ou menos, 65 ppm ou menos, 60 ppm ou menos, 55 ppm ou menos, 50 ppm ou menos, 45 ppm ou menos, 40 ppm ou menos, 35 ppm ou menos, 30 ppm ou menos, 25 ppm ou menos, 20 ppm ou menos, 15 ppm ou menos, 10 ppm ou menos, 9 ppm ou menos, 8 ppm ou menos, 7 ppm ou menos, 6 ppm ou menos, 5 ppm ou menos, 4 ppm ou menos, 3 ppm ou menos, 2 ppm ou menos, ou 1 ppm ou menos. Em algumas modalidades, o óleo tem um conteúdo de fósforo de cerca de 8 ppm ou menos.

[106] Em algumas modalidades, o óleo compreende um ou mais PUFAs. Em algumas modalidades, o óleo compreende pelo menos 10%, pelo menos 15%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70% ou pelo menos 80% de PUFA (pelo peso de PUFA). Em algumas modalidades, o óleo compreende pelo menos 10%, pelo menos 15%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70% ou pelo menos 80% de DHA (pelo peso de DHA) e/ou pelo menos 10%, pelo menos 15%, ou pelo menos 20% de DPA n-6 (pelo peso de DPA n-6) e/ou pelo menos 10%, pelo menos 15%, ou pelo menos 20% de EPA (pelo peso de EPA) e/ou pelo menos 10%, pelo menos 15%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, ou pelo menos 80% de ARA (pelo peso de ARA). Em algumas modalidades, o óleo compreende menos do que 50%, menos do que 40%, menos do que 30%, menos do que 20%, menos do que 15%, menos do que 10% ou menos do que 5% de EPA (pelo peso de EPA). Em algumas modalidades, o óleo compreende menos do que 50%, menos do que 40%, menos do que 30%, menos do que 20%, menos do que 15%, menos do que 10%, ou menos do que 5% de DHA (pelo peso de DHA). Em algumas modalidades, o óleo compreende menos do que 10%, menos do que 5%, menos do que 2%, menos do que 1%, ou menos do que 0,5% em peso (ou volume) de esteróis.

[107] Em algumas modalidades, o óleo compreende pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, ou 50% a 95%, 50% a 90%, 50% a 85%, 50% a 80%, 50% a 75%, 60% a 95%, 60% a 90%, 60% a 85%, 70% a 95%, 70% a 90%, 70% a 85%, 75% a 95%, 75% a 90%, ou 75% a 85%, em peso (ou volume) de triglicerídeos.

[108] Em algumas modalidades, os triglicerídeos compreendem pelo menos 10%, pelo menos 20%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70% ou pelo menos 80% em peso (ou volume) de DHA. Em algumas modalidades, os triglicerídeos compreendem pelo menos 10%, pelo menos 20%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, ou pelo menos 80% em peso (ou volume) de ARA. Em algumas modalidades, os triglicerídeos compreendem pelo menos 50%, pelo menos 40%, pelo menos 30%, pelo menos 20%, pelo menos 15%, pelo menos 10%, ou pelo menos 5% em peso (ou volume) de EPA.

[109] Em uma modalidade, o óleo microbiano obtido e/ou recuperado por qualquer um dos processos aqui descritos é um óleo bruto. Em outra modalidade, o óleo aqui descrito é um óleo refinado. Um “óleo bruto” é um óleo obtido de células microbianas sem processamento posterior. Um “óleo refinado” é um óleo obtido pelo tratamento de um óleo bruto com um processo padronizado de refino, branqueamento e/ou desodorização. Veja, por exemplo, Patente U.S. No. 5.130.242. Em algumas modalidades, o refino inclui, mas não está limitado a refino cáustico, degomagem, tratamento com ácido, tratamento com álcali, resfriamento, aquecimento, branqueamento, desodorização, desacidificação e combinações desses.

[110] Em algumas modalidades, o processo compreende concentrar um caldo de fermentação que compreende as células microbianas. Em algumas modalidades, o processo compreende concentrar a composição de célula lisada. Como usado aqui “concentrar” se refere à remoção da água da composição. Concentrar pode incluir, mas não está limitado a evaporar, secar quimicamente, centrifugar, e semelhante, e suas combinações. Em algumas modalidades, uma composição de células ou uma composição de célula lisada é concentrada para fornecer uma concentração de óleo de pelo menos 4%, pelo menos 5%, pelo menos 10%, pelo menos 15%, pelo menos 20%, pelo menos 25% ou pelo menos 30% em peso (ou volume) da composição. Em algumas modalidades, uma composição de células ou uma composição de célula lisada é concentrada para fornecer uma concentração de óleo de 4% a 40%, 4% a 30%, 4% a 20%, 4% a 15%, 5% a 40%, 5% a 30%, 5% a 20%, 10% a 40%, 10% a 30%, 10% a 20%, 15% a 40%, 15% a 30%, 20% a 40%, 20% a 30%, 25% a 40%, ou 30% a 40% em peso (ou volume) da composição.

[111] Condições de cultura eficazes para uma célula microbiana para uso com a invenção incluem, mas não são limitadas a condições eficazes de meios, biorreator, temperatura, pH e oxigênio, que permitam a produção de óleo. Um meio eficaz se refere a qualquer meio no qual uma célula microbiana, por exemplo, uma célula microbiana de Thraustochytriales, é tipicamente cultivada. Tal meio compreende um meio aquoso que possui carbono assimilável, fontes de nitrogênio e fosfato, assim como sais, minerais, metais e outros nutrientes apropriados, tais como vitaminas. As células microbianas para uso com a presente invenção podem ser cultivadas em biorreatores de fermentação convencionais, frascos de agitação, tubos de teste, discos de microtitulação e placas de Petri.

[112] Em algumas modalidades, uma célula microbiana compreende pelo menos 30% em peso (ou volume) de óleo, pelo menos 35% em peso (ou volume) de óleo, pelo menos 40% em peso (ou volume) de óleo, pelo menos 50% em peso (ou volume) de óleo, pelo menos 60% em peso (ou volume) de óleo, pelo menos 70% em peso (ou volume) de óleo, ou pelo menos 80% em peso (ou volume) de óleo. Em algumas modalidades, uma célula microbiana para uso com a presente invenção é capaz de produzir pelo menos 0,1 grama por litro por hora (g/L/h) de DHA, pelo menos 0,2 g/L/h de DHA, pelo menos 0,3 g/L/h de DHA, ou pelo menos 0,4 g/L/h de DHA. Em algumas modalidades, uma célula microbiana para uso com a presente invenção é capaz de produzir pelo menos 0,01 grama por litro por hora (g/L/h) de ARA, pelo menos 0,05 g/L/h de ARA, pelo menos 0,1 g/L/h de ARA, pelo menos pelo menos 0,2 g/L/h de ARA, pelo menos 0,3 g/L/h de ARA, ou pelo menos 0,4 g/L/h de ARA.

[113] Em algumas modalidades, um óleo obtido de acordo com qualquer um dos processos aqui descritos, a biomassa final ou suas combinações podem ser usados diretamente como um alimento ou um ingrediente alimentício, tal como um ingrediente em alimentos para bebês, fórmulas infantis, bebidas, molhos, alimentos baseados em laticínios (tal como leite, iogurte, queijo e sorvete), óleos (por exemplo, óleos de cozinha ou molhos de salada) ou alimentos assados; suplementos nutricionais (por exemplo, na forma de cápsula ou comprimido). Ração ou suplemento para ração para qualquer animal não humano (por exemplo, aqueles cujos produtos (por exemplo, carne, leite ou ovos) são consumidos pelos humanos); suplementos alimentícios; e farmacêuticos (para aplicação na terapia direta ou adjunta). A expressão “animal” se refere a qualquer organismo que pertença ao reino Animalia e inclui qualquer animal humano e animal não humano a partir dos quais os produtos (por exemplo, leite, ovos, carne de aves, carne de vaca, porco ou carneiro) são derivados. Em algumas modalidades, o óleo e/ou a biomassa podem ser usados em frutos do mar. Frutos do mar são derivados, sem limitação, de peixe, camarão e marisco. A expressão “produtos” inclui qualquer produto derivado de tais animais incluindo, sem limitação carne, ovos, leite ou outros produtos. Quando o óleo e/ou a biomassa é fornecida para tais animais, óleos poli-insaturados podem ser incorporados na carne, leite, ovos ou outros produtos de tais animais para aumentar seu conteúdo desses óleos.

EXEMPLOS Exemplo 1

[114] Um caldo celular não lavado (500-700 kg) contendo células microbianas (Schizochytrium sp.) foi pasteurizado a 60 °C por 1 hora. As células foram lisadas pela adição de uma solução de NaOH 50% em peso para ajustar o pH do caldo para pH 7,2-7,5 e 0,5% em peso do caldo de Alcalase® 2,4 FG (disponibilizada por Novozymes (Franklinton, NC)) e agitando por 2 horas a 55-60 °C. A composição de célula lisada foi demulsificada pela: continuação da agitação da composição a 190-221 rpm com impulsores hydrofoil de lâmina estreita; adição de 50% em peso de NaOH para ajustar o pH para 4; adição de 2% em peso da composição, NaCl; e aquecendo a 90 °C. Depois de algumas horas a 90 °C, o oleo microbiano foi separado da composição de célula lisada demulsificada pela centrifugação (um Seital SR 1010 (Seital srl, Itália)) da composição a 1750 rpm para fornecer um óleo bruto, que rendeu (em média) 76,47% de DHA (pelo peso de DHA).

Exemplo 2

[115] Um caldo celular não lavado (500-700 kg) contendo células microbianas (Schizochytrium sp.) foi pasteurizado a 60 °C por 1 hora. Uma composição de célula lisada demulsificada foi formada pela: adição de 1,5% em peso de caldo de uma solução de ácido sulfúrico 98% para ajustar para um pH de 1,6-2,1 e aquecendo a 90 °C com agitação a 190-221 rpm com impulsores hydrofoil de lâmina estreita e água para o aquecimento. Depois de algumas horas a 90 °C, o óleo microbiano foi separado da composição de célula lisada demulsificada pela adição de NaOH 50% em peso para ajustar o pH para neutro (6,5 a 8,5) e centrifugando (Seital SR 1010 (Seital srl, Itália)) a composição a 1750 rpm para fornecer um óleo bruto, que rendeu (em média) 84,57% de DHA (pelo peso de DHA).

Exemplo 3

[116] Um caldo celular não lavado (500-700 kg) contendo células microbianas (Schizochytrium sp.) foi pasteurizado a 60 °C for 1 hora. Uma composição de célula lisada demulsificada foi formada pela: adição de 1,5%, em peso de caldo, de uma solução de ácido sulfúrico 98% para ajustar para um pH de 1,6 a 2,1 e aquecendo a 90 °C com agitação a 221 rpm com impulsores hydrofoil de lâmina estreita vapor para o aquecimento. Depois de algumas horas a 90 °C, o oleo microbiano foi separado da composição de célula lisada demulsificada pela adição de NaOH 50% em peso para ajustar o pH para neutro (6,5 a 8,5) e centrifugando (Seital SR 1010 (Seital srl, Itália)) a composição a 1750 rpm para fornecer um óleo bruto, que rendeu 87,08% de DHA (pelo peso de DHA).

Exemplo 4

[117] Um caldo celular não lavado (500-700 kg) contendo células microbianas (Schizochytrium sp.) foi pasteurizado a 60 °C por 1 hora. Uma composição de célula lisada demulsificada foi formada pela: adição de 4%, em peso de caldo, de uma solução de ácido sulfúrico 98% para ajustar para um pH de <1,0 e então aquecendo a 90 °C com agitação a 151-190 rpm usando impulsores hydrofoil de lâmina estreita e água ou vapor para o aquecimento. Depois de algumas horas a 90°C, o óleo microbiano foi separado da composição de célula lisada demulsificada pela adição de 50% em peso de NaOH para ajustar o pH para neutro (6,5 a 8,5) e centrifugando (Seital SR 1010 (Seital srl, Itália)) a composição a 1750 rpm para fornecer um óleo bruto, que rendeu (em média) 93,61% de DHA (pelo peso de DHA).

Exemplo 5

[118] Um caldo celular não lavado (500-700 kg) contendo células microbianas (Schizochytrium sp.) foi pasteurizado a 60 °C por 1 hora. As células foram lisadas pela adição de 50% em peso de uma solução de NaOH para ajustar o pH de 7,2 a 7,5 e 0,5%, em peso de caldo, de Alcalase ® 2.4 FG (disponibilizada por Novozymes (Franklinton, NC)) e agitando por 2 horas a 55-60°. A composição de célula lisada foi demulsificada por: continuação da agitação da composição a 221 rpm com impulsores hydrofoil de lâmina estreita e água ou vapor para o aquecimento; adição de NaOH 50% em peso para ajustar o pH para 10,5; adição de 2%, em peso da composição, de NaCl; e aquecendo a 90 °C. Depois de algumas horas a 90 °C, o óleo microbiano foi separado da composição de célula lisada demulsificada pela centrifugação (Seital SR 1010 (Seital srl, Itália)) da composição a 1750 rpm para fornecer um óleo bruto, que rendeu (em média) 72,77% DHA (pelo peso de DHA).

Exemplo 6

[119] Um caldo celular não lavado (500-700 kg) contendo células microbianas (Schizochytrium sp.) foi pasteurizado a 60 °C por 1 hora. As células foram lisadas pela adição de 50% em peso de uma solução de NaOH para ajustar o pH para 7,2 a 7,5 e 0,5%, em peso de caldo, de Alcalase ® 2.4 FG (disponibilizada por Novozymes (Franklinton, NC)) e agitando por 8 horas a 55-60 °C com controle de pH em 7,27,5. A composição de célula lisada foi demulsificada por: continuação da agitação da composição a 221 rpm com impulsores hydrofoil de lâmina estreita e água ou vapor para o aquecimento; adição de NaOH 50% em peso para ajustar o pH para 10,5; adição de 2%, em peso da composição, de NaCl; e aquecendo a 90 °C. Depois de algumas horas a 90 °C, o óleo microbiano foi separado da composição de célula lisada demulsificada pela adição de 50% em peso de NaOH para ajustar o pH para neutro (6,5 a 8,5) e centrifugando (Seital SR 1010 (Seital srl, Itália)) da composição a 1750 rpm para fornecer um óleo bruto, que rendeu (em média) 85,28% DHA (pelo peso de DHA).

Exemplo 7

[120] Um caldo celular não lavado (500-700 kg) contendo células microbianas (Schizochytrium sp.) foi pasteurizado a 60 °C por 1 hora. As células foram lisadas pela adição de 50% em peso de uma solução de NaOH para ajustar o pH para 7,2 a 7,5 e 0,5%, em peso de caldo, de Alcalase ® 2.4 FG (disponibilizada por Novozymes (Franklinton, NC)) e agitando por 2 horas a 55-60° com controle do pH. O caldo foi tratado com uma segunda dose de 0,5%, em peso de caldo, de Alcalase® e mantido sob agitação por um adicional de 2 horas com controle de pH. A composição de célula lisada foi demulsificada por: continuação da agitação da composição a 221 rpm com impulsores hydrofoil de lâmina estreita e água ou vapor para o aquecimento; adição de 50% em peso de NaOH para ajustar o pH para 10,5; adição de 2%, em peso da composição, NaCl; e aquecendo a 90 °C. Depois de algumas horas a 90 °C, o óleo microbiano foi separado da composição de célula lisada demulsificada pela adição de NaOH 50% em peso para ajustar o pH para neutro (6,5 a 8,5) e centrifugando (Seital SR 1010 (Seital srl, Itália)) da composição a 1750 rpm para fornecer um óleo bruto, que rendeu (em média) 81,12% DHA (pelo peso de DHA).

Exemplo 8

[121] Um caldo celular não lavado (500-700 kg) contendo células microbianas (Schizochytrium sp.) foi pasteurizado a 60 °C por 1 hora. As células foram lisadas pela adição de 50% em peso de uma solução de NaOH para ajustar o pH para 7,2 a 7,5 e 0,5%, em peso de caldo, Alcalase ® 2.4 FG (disponibilizada por Novozymes (Franklinton, NC)) e agitando por 2 horas a 55-60°. A composição de célula lisada foi demulsificada por: continuação da agitação da composição a 221 rpm com impulsores hydrofoil de lâmina estreita; adição de NaOH 50% em peso para ajustar o pH para 10,5; adição de 2%, em peso da composição, de NaCl; e aquecendo a 90 °C. Depois de algumas horas a 90 °C, NaOH 50% em peso foram adicionados à composição para reajustar o pH para 9-10,5 e a composição mantida a 90 °C por algumas horas com agitação. O óleo microbiano foi separado da composição de célula lisada demulsificada pela centrifugação (Seital SR 1010 (Seital srl, Itália)) da composição a 1750 rpm para fornecer um óleo bruto, que rendeu (em média) 86,57% DHA (pelo peso de DHA).

Exemplo 9

[122] Um caldo celular não lavado (500-700 kg) contendo células microbianas (Schizochytrium sp.) foi pasteurizado a 60°C por 1 hora. As células foram lisadas pela adição de uma solução de NaOH 50% em peso para ajustar o pH para 7,2 a 7,5 e 0,5%, em peso de caldo, de Alcalase ® 2.4 FG (disponibilizada por Novozymes (Franklinton, NC)) e agitando por 2 horas a 55-60°. A composição de célula lisada foi demulsificada pela: continuação da agitação da composição a 221 rpm com impulsores hydrofoil de lâmina estreita; adição de 2,5%, em peso de caldo, de uma solução de NaOH 50% para ajustar o pH para 11,8; adição de 2%, em peso da composição, de NaCl; e aquecendo a 90 °C. Depois de algumas horas a 90 °C, NaOH 50% em peso foram adicionados à composição para reajustar o pH para 10,5 e a composição mantida a 90 °C com agitação. Depois de mais algumas horas, o óleo microbiano foi separado da composição de célula lisada demulsificada pela adição de NaOH 50% em peso para ajustar o pH para neutro (6,5 a 8,5) e centrifugando (Seital SR 1010 (Seital srl, Itália)) da composição a 1750 rpm para fornecer um óleo bruto, que rendeu (em média) >96% DHA (pelo peso de DHA).

Exemplo 10

[123] Um caldo celular não lavado (500-700 kg) contendo células microbianas (Schizochytrium sp.) foi pasteurizado a 60 °C por 1 hora. As células foram lisadas pela adição de uma solução de NaOH 50% em peso para ajustar o pH 7,2 a 7,5 e 0.5%, em peso de caldo, de Alcalase ® 2.4 FG (disponibilizada por Novozymes (Franklinton, NC)) e agitando por 2 horas a 55-60°. A composição de célula lisada foi demulsificada por: continuação da agitação da composição a 221 rpm com impulsores hydrofoil de lâmina estreita; adição de 2,5%, em peso de caldo, de uma solução de NaOH 50% em peso para ajustar o pH para 11; adição de 2%, em peso da composição, de NaCl; e aquecendo a 90 °C.Depois de algumas horas a 90 °C, uma solução de NaOH 50% em peso foram adicionados à composição para reajustar o pH para 10,5 e a composição mantida a 90 °C com agitação. Depois de mais algumas horas, o óleo microbiano foi separado da composição de célula lisada demulsificada pela centrifugação (Seital SR 1010 (Seital srl, Itália)) da composição a 1750 rpm para fornecer um óleo bruto.

Claims

1. Processo para a obtenção de um óleo microbiano compreendendo um ou mais ácidos graxos poli-insaturados de uma ou mais células microbianas, o processo caracterizado pelo fato de que compreende: (a) lisar as células que compreendem o óleo microbiano para formar uma composição de célula lisada; (b) demulsificar a composição de célula lisada para formar uma composição de célula lisada demulsificada; (c) separar o óleo da composição de célula lisada demulsificada; e (d) recuperar o óleo; em que (b) compreende (i) agitação de baixo cisalhamento, (ii) agitação em fluxo axial, ou (iii) uma combinação desses e em que dita (i) agitação em baixo cisalhamento, (ii) agitação em fluxo axial, ou (iii) umas combinações dessas são fornecidas por um impulsor selecionado dentre impulsores fluid foil, impulsores hydrofoil, turbinas passo-lâmina e suas combinações.

2. Processo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que pelo menos um dentre (a) ou (b) compreende adicionalmente o aquecimento das células ou da composição a pelo menos 60°C, preferencialmente de 60°C a 100°C.

3. Processo, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que (b) compreende ainda pelo menos um dentre o seguinte: (a) adicionar uma base à composição de célula lisada; (b) adicionar um sal em uma quantidade entre 0,05% a 20% em peso da composição de célula lisada; (c) adicionar pelo menos uma enzima; e/ou (d) adicionar um emulsificante à composição de célula lisada.

4. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que (b) compreende ainda elevar o pH da composição de célula lisada para 8 ou mais.

5. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que (a) compreende ainda agitar as células.

6. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que as células de (a) não são lavadas, e/ou as células de (a) estão contidas em um caldo de fermentação.

7. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que (c) compreende centrifugar a composição de célula lisada demulsificada.

8. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que o ácido graxo poli-insaturado é selecionado dentre um ácido graxo ômega-3, um ácido graxo ômega-6, e suas misturas.

9. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que o ácido graxo poli-insaturado é selecionado dentre ácido docosahexaenoico (DHA), ácido eicosapentaenoico (EPA), ácido docosapentaenoico (DPA), ácido araquidônico (ARA), ácido gama linolênico (GLA), ácido dihomo-gama-linolenico (DGLA), ácido estearidônico (SDA), e suas misturas.

10. Processo, de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que o ácido graxo poli- insaturado é o ácido docosahexaenoico (DHA).

11. Processo, de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que o ácido graxo poli- insaturado é o ácido araquidônico (ARA).

12. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo fato de que as células microbianas são células de algas, de leveduras, de fungos, protistas, ou de bactérias.

13. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizado pelo fato de que as células microbianas são do gênero Mortierella, gênero Crypthecodinium ou ordem Thraustochytriales.

14. Processo, de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que as células microbianas são do gênero Thraustochytrium, Schizochytrium, ou suas misturas.

15. Processo, de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que as células microbianas são de Mortierella alpina.

16. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 15, caracterizado pelo fato de que a composição de célula lisada compreende líquido, restos celulares, e óleo microbiano.

17. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 16, caracterizado pelo fato de que um solvente orgânico não é usado para obter o óleo das células.

18. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 17, caracterizado pelo fato de que o tamanho médio da partícula da composição de célula lisada demulsificada é de pelo menos 10 micrômetros.

19. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 3 a 18, caracterizado pelo fato de que a enzima é selecionada dentre beta-glicanase, xilanase, celulase, pectinase, mananase, amilase, e suas combinações.

20. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 3 a 19, caracterizado pelo fato de que a enzima é uma beta-glicanase.

21. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 3 a 20, caracterizado pelo fato de que a enzima é adicionada em uma quantidade entre 0,05% e 10% em peso da composição de célula lisada.

22. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 3 a 21, caracterizado pelo fato de que o emulsificante é um emulsificante iônico.

23. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 3 a 22, caracterizado pelo fato de que o sal é selecionado do grupo que consiste em sais de metal alcalino, sais de metal alcalino-terroso, sais de sulfato e suas combinações.

24. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 23, caracterizado pelo fato de que o óleo de (d) é um óleo bruto.

25. Processo, de acordo com a reivindicação 24, caracterizado pelo fato de que (d) compreende ainda refinar o óleo bruto para obter um óleo refinado.

26. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 25, caracterizado pelo fato de que o óleo compreende pelo menos 30% em peso de ácido araquidônico.

27. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 26, caracterizado pelo fato de que o óleo compreende pelo menos 30% em peso de ácido docosahexaenoico.

28. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 27, caracterizado pelo fato de que o óleo tem um valor de anisidina menor do que 50.

29. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 28, caracterizado pelo fato de que o óleo tem um conteúdo de fósforo de 8 ppm ou menos.

30. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 29, caracterizado pelo fato de que o óleo tem um valor de peróxido menor do que 5 meq/kg.

31. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3 e 5 a 30, caracterizado pelo fato de que (b) compreende ainda diminuir o pH para 6 ou menos, preferencialmente entre 0,5 e 6.

32. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3 e 5 a 31, caracterizado pelo fato de que (b) compreende ainda adicionar um ácido em uma quantidade entre 0,5% e 20% em peso da composição de célula lisada.

33. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 32, caracterizado pelo fato de que (a) e (b) são combinados juntos para formar uma etapa de lise e de demulsificação em uma etapa única.

34. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 33, caracterizado pelo fato de que (c) compreende elevar o pH da composição da célula lisada demulsificada.

35. Processo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a etapa: (a) compreende lisar as células que compreendem o óleo microbiano com (i) uma enzima adequada para formar uma composição de célula lisada demulsificada, (ii) um pH adequado para formar uma composição de célula lisada demulsificada, ou (iii) uma combinação desses.

36. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 5 a 35, caracterizado pelo fato de que (a) compreende ainda agitar as células com um impulsor de fluxo radial.

37. Processo, de acordo com a reivindicação 36, caracterizado pelo fato de que o impulsor de fluxo radial é um impulsor de Rushton.