BR112015015242B1 - peptídeos inibidores de nox-1 seletivos e usos dos mesmos - Google Patents

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Frédéric Mazurier
Alain Taieb
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Inserm
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Abstract

PEPTÍDEOS INIBIDORES DE NOX-1 SELETIVOS E USOS DOS MESMOS A presente invenção se refere a peptídeos, composições e métodos inovadores para a prevenção e/ou tratamento de condições patológicas e doenças associadas à atividade de NADPH oxidase 1 (Noxl) e/ou produção de espécies de oxigênio reativo (ROS) aumentada. Os peptídeos inovadores são desse modo, particularmente úteis para tratar e/ou prevenir câncer, aterosclerose, angiogênese e envelhecimento.

Description

CAMPO DA INVENÇÃO
[0001] A invenção refere-se a peptídeos, composições e métodos inovadores para a prevenção e/ou tratamento de doenças e afecções patológicas associadas à atividade de NADPH oxidase 1 (Nox1) e/ou produção de espécies de oxigênio reativo (ROS) aumentada. Os peptídeos inovadores são, assim, particularmente úteis para tratar e/ou prevenir câncer, aterosclerose, angiogênese e envelhecimento.
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO
[0002] Nox1 gera ROS em afecções fisiológicas e determinadas afecções patológicas. ROS são conhecidas por contribuir para danos dentro de organismos e são, assim, associadas a muitas afecções diferentes. NADPH oxidases são também conhecidas como uma fonte de estresse oxidativo, que contribui para a causa de muitas afecções. A expressão de Nox1 é conhecida por ser associada a muitas afecções diferentes, incluindo cânceres.
[0003] A seletividade terapêutica sem toxicidade é claramente importante em um agente terapêutico. Particularmente, a destruição preferencial de células cancerosas sem toxidade para células normais é uma das considerações mais importantes na terapia contra o câncer.
[0004] Antes da presente invenção, diversos inibidores de NADPH oxidases (Nox) foram identificados, mas até agora nenhum inibidor de Nox específico foi desenvolvido.
[0005] Diversos inibidores de peptídeo permeáveis à célula, tal como o peptídeo gp91ds-tat, PR-39, assim como inibidores de peptídeo Rac foram também testados. O peptídeo gp9 Ids-tatfoi projetado para inibir especificamente Nox2 imitando uma sequência de Nox2 que é considerada importante para a interação com p47phox. Entretanto, o peptídeo não tem especificidade já que a região alvejada pelo peptídeo é homóloga em outras isoformas de NOX. Adicionalmente, o peptídeo tinha um inibidor de baixa eficácia, inibindo a geração de ROS de neutrófilos por 25% a 50 mM.
[0006] Recentemente, a companhia GenKyoTex desenvolveu inibidores de Nox mais específicos com o uso de derivados de Pirazol-pirido-diazepina, -pirazina e -oxazina diona, alvejando, particularmente, as enzimas Nox1 e Nox4. GenKyoTex está conduzindo atualmente uma Fase I clínica com uma molécula pequena, GKT137831, para o tratamento da nefropatia diabética. Os experimentos pré-clínicos são também conduzidos para o tratamento da nefropatia diabética, aterosclerose, fibrose pulmonar idiopática, fibrose hepática e modelos de angiogênese. Entretanto, embora seja específico para Nox1/Nox4, GKT137831 também mostra afinidade para Nox2, Nox3 e Nox5 e, assim, tem uma seletividade baixa.
[0007] Outros compostos químicos foram usados por muitos anos, incluindo apocinina, iodônio de difenileno (DPI) e cloridrato de 4- (2-aminoetil)-benzensulfonil fluoreto (AEBSF) e neopterina.
[0008] Apocinina, que foi extraída da Picrorhiza kurroa, pode prevenir a formação do complexo de oxidase ativa. O efeito inibidor da apocinina é, entretanto, controverso. De fato, foi mostrado que a apocinina não é específica para NADPH oxidases, mas, em vez disso, influencia outros eventos tais como a formação de Tromboxano A2 e a indução do fator de transcrição AP-1 e que a mesma é um antioxidante, em vez de um inibidor de enzima Nox.
[0009] Iodônio de Difenileno (DPI) é um inibidor não específico de todas as flavoenzimas e pode, assim, inibir as enzimas Nox, mas também as enzimas xantina oxidase e citocromo P450. Adicionalmente a ser não seletivo, DPI mostrou ser tóxico. O mesmo é também um inibidor de acetilcolinesterase e butirilcolinesterase assim como da bomba de Ca2+ interna que, adicionalmente a sua toxicidade intrínseca, levanta grandes preocupações em relação a sua aplicação.
[0010] Aminoetil-benzenossulfono-fluoreto (AEBSF) mostrou impedir a ligação do flavocitocromo b558 a p47phox, a ativação da NADPH oxidase e a elicitação da produção de 0’2 em macrófagos. AEBSF é, entretanto, primariamente um inibidor de serina protease; o mesmo tem, assim, a capacidade de inibição com proteases de eficácia maior tais como quimotripsina, calicreína, plasmina, trombina e tripsina e tem muitos efeitos adicionais.
[0011] Algumas outras moléculas não específicas, erroneamente nomeadas como inibidores de Nox indiretos, mostraram interferir com as vias de transdução de sinal a montante que afetam as enzimas Nox. As mesmas incluem o VAS2870 que é um composto de tiotriazolpirimidina que inibe a ativação de Src dependente de PDGF de enzimas Nox, inibidores de enzima que converte angiotensina (inibidores ACE), bloqueadores de receptor Ang II (ARBs), fosfodiesterase, eicosanoides, corticosteroides, MAP quinase, inibidores de proteína quinase C (tal como um derivado de benzo(b)piran-4- ona, S17834 da Shionogi Pharma).
[0012] Há também um número crescente de relatórios que usam abordagens de siRNA direcionadas contra as enzimas Nox. Especificamente, alguns RNAi foram desenvolvidos para reduzir a expressão de Nox1. Entretanto, o uso de RNAi como uma intervenção terapêutica para humanos está ainda em sua infância e pode levar anos para otimizar. Infelizmente, apenas alguns dos siRNAs foram testados apropriadamente para a especificidade de isoformas Nox. Não há quaisquer abordagens de siRNA satisfatórias para a inibição seletiva de Nox, especificamente Nox1.
[0013] Portanto, os compostos que foram desenvolvidos até agora não estão atuando diretamente para bloquear a enzima, mas ou interferem com a via de transdução a montante ou atuam como antioxidantes ou sequestrantes de ROS. Os únicos compostos que têm a capacidade de bloquear diretamente a enzima, entretanto, não têm a seletividade e inibem outras atividades enzimáticas. Os mesmos também têm baixa potência e biodisponibilidade, eliminando, assim, uma demonstração farmacológica de Nox como agentes terapêuticos in vivo. Diversos inibidores de peptídeo e molécula pequena das enzimas Nox foram úteis em estudos experimentais, mas problemas de especificidade e toxicidade militam contra qualquer um dos compostos existentes como candidatos para o desenvolvimento de fármaco.
[0014] Dado o amplo arranjo de alvos de doença documentado no trabalho recente, foi crítico revelar inibidores clinicamente úteis inovadores das enzimas Nox. O maior desafio foi, entretanto, a revelação de inibidores de peptídeo que têm a capacidade de atuar especificamente em isoformas de Nox individuais.
[0015] O Requerente se comprometeu e superou esse desafio de modo bem-sucedido. De fato, a presente invenção fornece inibidores de peptídeo inovadores que bloqueiam direta e especificamente o conjunto de NADPH oxidase-1 (Nox1), sem inibir outras NADPH noxidases, particularmente Nox2, Nox4, Nox5, Duoxl e Duox2. Nox1 está envolvido no desenvolvimento e progressão de um espectro amplo de doenças, incluindo câncer, envelhecimento, doenças neurodegenerativas e doenças cardiovasculares e representa, assim, um alvo terapêutico significativo. Os peptídeos inovadores de acordo com a presente invenção são, assim, também particularmente vantajosos na medida em que os mesmos não têm atividade antioxidante ou de sequestro de ROS não específica e os mesmos não inibem outras fontes de ROS. Em comparação à tecnologia de RNAi, os inibidores de peptídeo são bastante específicos para sua proteína alvo, reduzindo, assim, a probabilidade do efeito fora do alvo. Em comparação aos inibidores químicos, os peptídeos de acordo com a presente invenção não mostraram nenhum efeito tóxico in vivo. Ademais, os mesmos são fáceis de projetar e produzir.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
[0016] A presente invenção fornece, assim, um peptídeo por si só que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende pelo menos 7 a 35 aminoácidos contínuos, que compreendem uma porção da sequência geral de aminoácidos a seguir X1-P-X2-X3-P-X4-R (SEQ ID NO: 1), em que XI é A, P ou Q; X2 é P, T, V, A, S, C, M ou K; X3 é L, I, V ou A e X4 é T, V, S, A, M. Tais peptídeos são particularmente úteis em um método para impedir e/ou tratar uma doença ou afecção patológica associada ao à atividade de Nox1 e/ou à produção de espécies de oxigênio reativo (ROS) aumentada.
[0017] A presente invenção é direcionada a peptídeos seletivos inovadores que têm a capacidade de inibir seletivamente a ativação de Nox1 e são designados doravante como peptídeos inibidores de Nox1. Esses peptídeos inovadores são, assim, úteis como medicamento, agente de fotoproteção e/ou como agente antienvelhecimento. Os mesmos podem ser opcionalmente conjugados a um peptídeo de penetração de célula ou um agente que aumenta o acúmulo do dito peptídeo em uma célula (carreador de célula).
[0018] De acordo com uma primeira modalidade, a presente invenção refere-se a composições que compreendem uma quantidade eficaz dos peptídeos inibidores de Nox1 de acordo com a presente invenção, assim como composições farmacêuticas que compreendem uma quantidade terapeuticamente eficaz dos peptídeos inibidores de Nox1 e um veículo ou excipiente farmaceuticamente aceitável e composições cosméticas.
[0019] As composições e os peptídeos inibidores de Nox1 inovadores de acordo com a presente invenção podem ser vantajosamente usados em um método para o tratamento e/ou prevenção de doenças mediadas por radical de oxigênio e, mais especificamente, distúrbios relacionados à NADPH Oxidase-1/Nox1, incluindo distúrbios cardiovasculares, distúrbios dependente de angiogênese, distúrbios respiratórios, distúrbios de pele, distúrbios neurodegenerativos, distúrbios alérgicos e autoimunes, distúrbios gastrointestinais, cânceres e doenças relacionadas ao metabolismo comprometido. Mais particularmente, os mesmos são úteis em um método para tratar e/ou prevenir doenças vasculares e cardiovasculares, doenças cancerígenas, tais como câncer de cólon e câncer de pele, assim como distúrbios de pele, danos na pele por UV, afecções de pele devido ao envelhecimento, danos na pele induzidos por ROS, envelhecimento prematuro e/ou tumorigênese seguindo a exposição a UV (UV A ou UV B).
[0020] De acordo com uma segunda modalidade, a presente invenção refere-se a um método para diminuir os níveis de espécies de oxigênio reativo (ROS) e/ou inibir a produção de espécies de oxigênio reativo (ROS) em um indivíduo em necessidade e, particularmente, um método para reduzir e/ou inibir seletivamente a atividade de NADPH oxidase 1 (Nox1) que compreende administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz das composições ou peptídeos inibidores de Nox1 inovadores.
[0021] De acordo com uma terceira modalidade, a presente invenção refere-se a um método para tratar e/ou prevenir doenças mediadas por radical de oxigênio e, mais especificamente, distúrbios relacionados à NADPH Oxidase-1/Nox1, incluindo distúrbios cardiovasculares, distúrbios dependente de angiogênese, distúrbios respiratórios, distúrbios de pele, distúrbios neurodegenerativos, distúrbios alérgicos e autoimunes, distúrbios gastrointestinais, cânceres tais como cânceres de cólon e cânceres de pele e doenças relacionadas ao metabolismo comprometido. Os métodos da presente invenção são também úteis para tratar e/ou prevenir distúrbios de pele, danos na pele por UV, afecções de pele devido ao envelhecimento, danos na pele induzidos por ROS, envelhecimento prematuro e/ou tumorigênese de pele seguindo a exposição a UV (UV A ou UV B).
[0022] De acordo com uma quarta modalidade, a presente invenção refere-se a um processo para preparar os peptídeos inovadores assim como peptídeos que são opcionalmente conjugados a um peptídeo que penetra células ou um carreador de célula.
BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS
[0023] Figuras 1A e 1B: mostram o efeito citotóxico de cada peptídeo testado em queratinócitos humanos primários normais com o uso do ensaio de exclusão por azul de tripano e ensaio MTT. Conforme mostrado nas Figuras 1A e 1B, os queratinócitos humanos foram tratados com diferentes concentrações dos peptídeos A (SEQ ID NO: 41), B (SEQ ID NO: 42) e C (SEQ ID NO: 43) e a viabilidade foi medida 24, 48 e 72 horas após o tratamento com o uso do corante azul de tripan (A) e do ensaio MTT (B). A porcentagem da viabilidade em queratinócitos tratados foi normalizada às células não tratadas (NTC).
[0024] Figuras 2 A e 2B: mostram o nível de ROS relativo conforme medido em queratinócitos humanos primários e HT29 (linhagem celular de adenocarcinoma de cólon humano) tratados com 10 ou 50 pM de inibidor de peptídeo por 24 horas com o uso das sondas CM-H2DCF- DA. As células foram tratadas com 10 pM dos peptídeos A (SEQ ID NO: 41), B (SEQ ID NO: 42) e C (SEQ ID NO: 43) e o nível de ROS foi medido 24 horas após o tratamento. O nível de ROS foi normalizado a células não tratados (NTC) (*P<0,05). De acordo com a Figura 2A, uma diminuição significativa no nível de ROS foi observada em células de queratinócitos tratadas com peptídeo A (SEQ ID NO: 41) e peptídeo B (SEQ ID NO: 42). De acordo com a Figura 2B, a medição do nível de ROS em células HT29 mostrou que o tratamento com os peptídeos A e B resultou em uma redução significativa em no in nível de ROS, sugerindo um efeito inibidor específico desses peptídeos na atividade de Nox1.
[0025] Figuras 3A, 3B e 3C: mostram a inibição da expressão da proteína Nox1 e Nox2 endógena com o uso da expressão mediada por lentivírus de shRNA contra Nox1 e Nox2. Os queratinócitos foram transduzidos com shRNAs diferentes (shNoxl, shNox2 e o shCtrl de controle). A eficácia de transdução foi verificada pela análise de western blotting. A Figura 3 A mostra que tanto shNoxl quanto shNox2 inibiram estavelmente mais do que 80% da expressão de Nox1 e Nox2, respectivamente. A eficácia de transdução foi verificada pela análise de western blotting. O nível de ROS relativo (3B) e a atividade de Nox (3C) foram medidos 24 horas após o tratamento com peptídeo inibidor de Nox1 A em comparação ao peptídeo de controle C. O nível de ROS foi normalizado para células tratadas com peptídeo C de contrapartida. A atividade de NADPH oxidase foi medida pela unidade de luminescência relativa (RLU) por pg de proteínas. *P<0,05. De acordo com a Figura 3B, a medição do nível de ROS revelou que o tratamento com o inibidor de peptídeo A não tinha nenhum efeito nos níveis de estado estável de ROS em células transduzidas por shNoxl, indicando que o peptídeo A bloqueou a geração de ROS dependente de Nox1 com especificidade e eficiência muito alta (quase 100%). Na Figura 3C, a atividade de NADPH oxidase foi medida em células transduzidas por shCtrl e shNoxl tratadas com ou sem peptídeo inibidor de Nox1 A.
[0026] Figuras 4A, 4B e 4C: mostram a inibição da produção de ROS e atividade de NADPH oxidase e, assim, o efeito de fotoproteção em queratinócitos humanos e murinos do peptídeo inibidor de Nox1 A. Os queratinócitos isolados de biópsias humanas (queratinócitos humanos) e epiderme de camundongo (queratinócitos de camundongo) foram tratados com 10 pM ou de peptídeo inibidor de Nox1 A ou de peptídeo de sequência aleatória (scramble) de controle C. O nível de ROS (4A) e a atividade de NADPH oxidase (4B) foram medidos 24 horas após o tratamento. A atividade de NADPH oxidase em queratinócitos tanto humanos quanto de camundongo tratados com o peptídeo embaralhado de controle (C) foi arbitrariamente estabelecida a 100%. A % de inibição da atividade de NADPH oxidase mediante o tratamento com peptídeo inibidor de Nox1 A foi, então, avaliada (4C).
[0027] Figuras 5A e 5B: mostram o efeito do peptídeo A na atividade de Nox1 na pele de camundongo. Os camundongos SKH-1 foram tratados topicamente com diferentes doses: 0,4, 3 e 12 mg/kg (3 camundongos por dose) de peptídeo inibidor de Nox1 A. As biópsias de pele foram coletadas 2 horas, 24 horas, 48 horas e 72 horas após o tratamento e a atividade de NADPH oxidase foi medida (RLU/pg de proteínas). Os resultados foram normalizados aos camundongos não tratados (NT) e expressos como % de inibição da atividade de Nox. (B) Os camundongos foram tratados topicamente com 3 e 12 mg/kg de peptídeo A (2 camundongos por dose). 10 min após o tratamento, os camundongos foram expostos a UVB (150 mJ/cm2). As biópsias de pele foram coletadas 2 horas, 24 horas. Em 46 horas após o primeiro tratamento, os camundongos foram tratados novamente com a mesma concentração de peptídeo A e expostos a UVB 10 min depois. As biópsias de pele foram, então, coletadas em 2 horas, 24 horas (isto é, 48 e 72 horas após o primeiro tratamento, respectivamente). A atividade de NADPH oxidase foi medida (RLU/pg de proteínas) e foi normalizada aos camundongos não tratados (NT) e não irradiados.
[0028] Figuras 6A, 6B e 60: mostram os efeitos fotoprotetores do peptídeo A na indução de carcinomas de célula escamosa induzidos por UVB (SCC) com o uso de camundongos sem pelos SKH-1. Os camundongos foram tratados topicamente com 3 mg/kg de peptídeo A ou peptídeo de controle e irradiados com UVB 10 min após três vezes por semanada. A quantidade (6A) e o tamanho (6B) dos tumores foram avaliados uma vez por semana durante 29 semanas (6C). A distribuição de volume de tumor foi avaliada na semana 29. Claramente, há uma redução considerável em quantidades e tamanho dos tumores induzidos por UVB em camundongos SKH-1 administrados topicamente com o peptídeo A.
[0029] Figura 7: mostra uma diminuição significativa na atividade de NADPH oxidase tanto na pele sem tumor quanto em tumores induzidos por UVB em camundongos SKH-1 tratados com o peptídeo A ou peptídeo de controle. Os camundongos foram sacrificados após 29 semanas de tratamento. A pele sem tumor e os tumores foram coletados dos camundongos irradiados tratados com peptídeo A ou o veículo. A atividade de NADPH oxidase foi medida como RLU/pg de proteínas na pele sem tumor e tumores induzidos por UVB. A inibição relativa da atividade de Nox na pele sem tumor e nos tumores foi avaliada seguindo o estabelecimento arbitrário da atividade de Nox na pele sem tumor e tumores retirados de camundongos tratados com veículo a 100%. Os resultados foram, então, expressos como a porcentagem média dos camundongos tratados com veículo.
[0030] Figuras 8A e 8B: mostram que o peptídeo A sem tat pode inibir a atividade de Nox tão eficazmente quanto o peptídeo A. Além disso, os peptídeos menores derivados do peptídeo A inibem eficazmente a atividade de NADPH oxidase. Os queratinócitos foram tratados com 10 pM dos peptídeos indicados: peptídeo de controle embaralhado P1 (SEQ ID NO: 57), peptídeo A com sequência tat (SEQ ID NO: 41) ou sem a sequência tat (SEQ ID NQ:20); peptídeos mais curtos P7 (SEQ ID NO: 2) e P8 (SEQ ID NO: 56) (Figura 8A). A atividade de NADPH oxidase foi medida 24 horas após o tratamento (RLU/pg de proteínas) e foi normalizada para as células tratadas embaralhadas (Figura 8B).
[0031] Figuras 9A e 9B: mostram a expressão de progerina em biópsias de pele de camundongos proficientes (XPC+/+) e deficientes (XPC+/+) de XPC jovens e idosos. Os camundongos jovens tinham 4 meses de idade e os camundongos idosos tinham 1,5 ano de idade. (A) Os extratos de proteína totais das biópsias de pele foram avaliados quanto à progerina por análise de Western blot, β-actina foi usada como um controle de carregamento. (B) As bandas de proteína que corresponde à progerina foram quantificadas e normalizadas com β-actina. A densidade média ± SD de seis camundongos em cada grupo é apresentada como o valor relativo à densidade em camundongos do tipo selvagem jovens.
[0032] Figuras 10A, 10B e 10C: mostram os efeitos da deficiência de XPC na atividade de Nox e expressão de complexos OXPHOS. (A) A atividade de NOX foi medida (RLU/ug de proteína) em biópsias de pele de camundongos XPC+/+ e XPC'/_ jovens e idosos. Os resultados foram normalizados aos camundongos do tipo selvagem jovens. (B) A expressão de complexos OXPHOS foi avaliada por análise de western blot em camundongos XPC proficientes e deficientes jovens e idosos. (C) As bandas que correspondem a diferentes complexos OXPHOS foram quantificadas e normalizadas com β-actina. A densidade média ± SD de seis camundongos em cada grupo é apresentada como o valor relativo à densidade em camundongos do tipo selvagem jovens.
[0033] Figuras 11A e 11B: mostram o efeito do peptídeo inibidor de NOX1 A (InhNOX) na expressão de progerina em biópsias de pele de camundongos XPC+/+ e XPC/_ jovens. Camundongos de um mês de idade foram tratados com 3 mg/kg (6 camundongos por grupo) de peptídeo inibidor de Nox1 A (InhNOX) ou peptídeo de controle (veículo) três vezes por semana por três meses. (A) Os extratos de proteína totais das biópsias de pele foram avaliados quanto à progerina por análise de Western blot, β-actina foi usada como um controle de carregamento. (B) As bandas de proteína que corresponde à progerina foram quantificadas e normalizadas com β-actina. A densidade média ± SD de seis camundongos em cada grupo é apresentada como o valor relativo à densidade em camundongos do tipo selvagem jovens.
[0034] Figuras 12A e 12B: mostram os efeitos do peptídeo inibidor de Nox1 A (InhNOX) na expressão de proteína de complexos OXPHOS em biópsias de pele de camundongos XPC+/+ e XPC/_ jovens. Camundongos de um mês de idade foram tratados com 3 mg/kg (6 camundongos por grupo) de peptídeo inibidor de Nox1 A (InhNOX) ou peptídeo de controle (veículo) três vezes por semana por três meses. (A) A expressão de complexos OXPHOS foi avaliada por análise de western blot, β-actina foi usada como um controle de carregamento. (B) As bandas que correspondem a diferentes complexos OXPHOS foram quantificadas e normalizadas com β- actina. A densidade média ± SD de seis camundongos em cada grupo é apresentada como o valor relativo à densidade em camundongos do tipo selvagem jovens.
DESCRIÇÃO DETALHADA
[0035] A presente invenção é direcionada a peptídeos seletivos inovadores que têm a capacidade de inibir seletivamente a ativação de Nox1, bloqueando especificamente o conjunto de NADPH oxidase- 1 e consequentemente sua ativação, assim como aplicações como medicamento e agentes fotoprotetores. A invenção refere-se, assim, a método tanto terapêuticos quanto cosméticos. Esses peptídeos podem ser designados doravante como peptídeos inibidores de Nox1.
[0036] Modificações adicionais podem conferir a penetração de peptídeo nas células para alvejar as proteínas no citosol. Um exemplo de um método bem-sucedido é adicionar uma sequência rica em arginina ou uma sequência tat. Os peptídeos de acordo com a presente invenção foram selecionados com base em suas capacidades potenciais para competir com o conjunto de Nox1 através da interação com Nox1.
[0037] Os indivíduos que serão tratados incluem humanos e animais, de preferência, mamíferos, tais como roedores e primatas. O indivíduo pode ser um animal não humano ou mamífero não humano. O indivíduo pode ter qualquer uma das afecções mencionadas no presente documento ou pode estar em risco de desenvolver as mesmas. No caso de indivíduos humanos, os mesmos podem ter pelo menos 50 anos de idade, tal como pelo menos 60 ou 70 anos de idade.
[0038] Os peptídeos da invenção derivam da SEQ ID NO: 44 (a região PRR de NoxO1) ou SEQ ID NO: 45 (a região SH3 de NoxA1). Os mesmos compreendem normalmente 5 a 35 aminoácidos ou 5 a 20 aminoácidos ou 7 a 20 aminoácidos contíguos da SEQ ID NO:44 ou SEQ ID NO:45. A SEQ ID NO: 44 é PPTVPTRPSPGAIQSRCCTVTRRAL e a SEQ ID NO: 45 é QVVAQHSYSAQGPEDLGFRQGDTVDVLCEEPDVPLAVDQAWLEGHCDGRIG IFPKCFVVPAGPRM.
[0039] O peptídeo da invenção compreende tipicamente duas sequências distintas. Uma das mesmas é geralmente referida como a 'porção' no presente documento e a mesma é responsável pela atividade terapêutica do peptídeo discutido no presente documento. A porção pode ter geralmente um comprimento de 5 a 20 aminoácidos ou 7 a 20 aminoácidos tal como 7 a 19; 7 a 18; 7 a 17; 7 a 16; 7 a 15; 7 a 14; 7 a 13; 7 a 12; 7 a 11; 7 a 10; de preferência, 7 a 18; 7 a 15; 7 a 10; cerca de 7 aminoácidos; ou 8 a 18; 8 a 15; 8 a 10 aminoácidos.
[0040] A segunda sequência distinta ou qualquer parte do restante da sequência dentro do peptídeo pode fornecer propriedades vantajosas ao peptídeo. Essa segunda parte do peptídeo pode estar ausente e, assim, em uma modalidade, o peptídeo consiste apenas na sequência de 'porção' descrita acima que confere propriedades terapêuticas, isto é, os comprimentos da porção e do peptídeo são iguais. A segunda sequência tem tipicamente 0 a 31 aminoácidos de comprimento, tal como 5 a 30, 7 a 30, 10 a 25 ou 15 a 20 aminoácidos de comprimento. A segunda sequência pode ser um peptídeo que penetra célula, que é idêntico ou homólogo a qualquer um dos peptídeos que penetram célula específicos mencionados no presente documento. Claramente, pode haver uma 'segunda' sequência adicionalmente nos lados tanto N-terminal quanto C-terminal da porção.
[0041] O peptídeo tem tipicamente um comprimento de 7 a 35 aminoácidos ou 7 a 30 ou 7 a 20 ou 7 a 15 ou 7 a 10 ou cerca de 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos ou, de preferência 7, 8, ou 9 e, de preferência máxima, 7 aminoácidos de comprimento.
[0042] O dito peptídeo ou porção pode ser ou pode compreender uma sequência conforme definida na fórmula geral de aminoácido a seguir X1-P-X2-X3-P-X4-R (SEQ ID NO: 1),
[0043] em que X1 é A, P ou Q
[0044] X2 é P, T, V, A, S, C, M ou K
[0045] X3 é L, I, V ou A, e
[0046] X4 é T, V, S, A ou M.
[0047] O dito peptídeo ou porção pode ser ou pode também compreender qualquer uma das sequências conforme listadas na Tabela 1 abaixo ou pode ser um homólogo das mesmas:
Figure img0001
[0048] De acordo com outra modalidade, o dito peptídeo ou porção pode ser ou pode também compreender qualquer uma das sequências conforme listadas nas Tabelas 2 e 3 abaixo ou pode ser um homólogo das mesmas:
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[0049] De acordo com outra modalidade, a presente invenção também fornece um peptídeo ou uma porção que compreende uma sequência de aminoácidos de pelo menos 7 a 35 aminoácidos contínuos, 7 a 30 aminoácidos contínuos ou 7 a 20 aminoácidos contínuos que pode ser idêntica ou ter homologia a um fragmento de SEQ ID NO:44 (região PRR de NoxO1) ou SEQ ID NO:45 (região SH3 de NoxA1). Os níveis de homologia adequados são discutidos na seção abaixo em relação à homologia e incluem, por exemplo, análogos ou variantes conservadoras dos mesmos. De preferência, a sequência do peptídeo ou porção terapêutica tem 75%, 80%, 85%, 87%, 90%, 93%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade à SEQ ID NO: 44 ou SEQ ID NO: 45. Opcionalmente, o dito peptídeo é para o uso em um método para prevenir e/ou tratar uma doença ou afecção patológica associada ou à atividade de Nox1 e/ou à produção de espécies de oxigênio reativo (ROS) aumentada. De preferência, o dito peptídeo tem 7 a 15 aminoácidos de comprimento e/ou a dita porção tem, de preferência, 7 a 10 aminoácidos de comprimento, de maior preferência, cerca de 7 aminoácidos de comprimento. De preferência máxima, o dito peptídeo é idêntico a pelo menos 7 aminoácidos contíguos de SEQ ID NO: 44 (região PRR de NoxO1) ou SEQ ID NO: 45 (região SH3 de NoxA1) ou tem pelo menos 80% ou 85% ou 90% ou 95% de identidade à SEQ ID NO: 44 ou SEQ ID NO: 45.
SEQUÊNCIAS HOMÓLOGAS
[0050] As sequências homólogas são mencionadas no presente documento. As sequências homólogas podem representar a sequência de 'porção' terapêutica dentro do peptídeo ou ser a segunda sequência (restante) no peptídeo da invenção. As sequências homólogas podem ser homólogos de qualquer uma das sequências específicas mencionadas no presente documento. Um homólogo tem uma ou mais (tal como pelo menos 2, 3, 4 ou 5) adições e/ou deleções e/ou substituições em comparação à sequência original. A sequência homóloga pode compreender pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 87%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou pelo menos 99% de identidade de aminoácido ao longo do comprimento da sequência original ou ao longo de 4, 6, 10, 15 ou 20 aminoácidos da sequência original.
[0051] O termo "identidade de sequência" refere-se tipicamente a sequências que têm o valor determinado quando avaliadas com o uso de ClustalW (Thompson et al., 1994, supra) com os parâmetros a seguir: Pairwise alignment parameters Method: preciso, Matrix: PAM, Gap open penalty: 10,00, Gap extension penalty: 0,10; Multiple alignment parameters - Matrix: PAM, Gap open penalty: 10,00, % identity for delay: 30, Penalize end gaps: ativado, Gap separation distance: 0, Negative matrix: não, Gap extension penalty: 0,20, Residue-specific gap penalties: ativado, Hydrophilic gap penalties: ativado, Hydrophilic residues: G, P, S, N, D, Q, E, K. A identidade de sequência em urn residuo particular pretende incluir resíduos idênticos que foram simplesmente derivados.
[0052] A sequência homóloga pode ter 1, 2, 3, 4, 5 ou mais ou até 10 substituições de aminoácido em comparação à sequência original. As substituições são, de preferência, substituições conservadoras. As mesmas podem ser feitas de acordo com a Tabela 4 abaixo. Os aminoácidos no mesmo bloco na segunda coluna e, de preferência, na mesma linha na terceira coluna podem ser substituídos um pelo outro.
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[0053] Os peptídeos da presente invenção podem ser produzidos pode qualquer método adequado conhecido na técnica, tal como síntese química e/ou tecnologia de DNA recombinante. Por exemplo, o peptídeo inventivo pode ser sintetizado com o uso de técnicas de síntese de peptídeo de fase sólida (por exemplo, Fmoc). Alternativamente, o peptídeo pode ser sintetizado com o uso da tecnologia de DNA recombinante (por exemplo, com o uso de sistemas de expressão bacteriana ou eucariótica). Uma sequência de nucleotideos que codifica um polipeptídeo da invenção pode ser construída isolando ou sintetizando uma sequência de nucleotideos que codifica o peptídeo progenitor e, então, alterando a sequência de nucleotideos de modo a efetuar a introdução (isto é, inserção ou substituição) ou remoção (isto é, deleção ou substituição) do(s) resíduo(s) de aminoácido relevante(s). Os métodos para a síntese de proteína de estado sólido e síntese de proteína recombinante são bem conhecidos na técnica. Por exemplo, "Molecular Cloning, A Laboratory Manual" (Sambrook et al., 3a Edição, Cold Spring Harmor Press) é uma referência bem conhecida que detalha muitas técnicas adequadas para a produção recombinante de polipeptídeos. Uma variante de um peptídeo pode ser de ocorrência natural ou a mesma pode ser uma variante que não é conhecida por ocorrer naturalmente. As variantes de ocorrência não natural dos peptídeos podem ser feitas pela síntese direta ou, alternativamente, mutações podem ser introduzidas aleatoriamente ao longo de todo ou parte de um peptídeo desta invenção, tal como por mutagênese por saturação ou mutagênese direcionada a sítio em concordância com os métodos convencionais. Independentemente do método de produção, as variantes resultantes podem ser triadas quanto à capacidade de inibir Nox1 e/ou ROS para identificar as variantes desta invenção.
[0054] Os peptídeos inovadores podem ser isolados e/ou purificados (ou substancialmente isolados e/ou substancialmente purificados). Consequentemente, a invenção fornece o peptídeo do primeiro aspecto da presente invenção na forma isolada ou substancialmente isolada (por exemplo, substancialmente isolada dos outros peptídeos ou impurezas). O peptídeo pode ser isolado de outros peptídeos como um resultado da síntese de proteína de fase sólida, por exemplo. Alternativamente, o peptídeo pode ser substancialmente isolado de outras proteínas após a lise celular da produção recombinante. Os métodos padrão da purificação de proteína (por exemplo, HPLC) podem ser empregados para purificar substancialmente os peptídeos inventivos. Assim, uma preparação do peptídeo de acordo com a presente invenção de preferência é pelo menos 90% (em peso) livre de outros peptídeos e/ou contaminantes e, de maior preferência, é pelo menos cerca de 95% (em peso) livre de outros peptídeos e/ou contaminantes (tal como pelo menos cerca de 97% ou 98% (em peso) livre de outros peptídeos e/ou contaminantes).
[0055] O termo "peptídeo" inclui não apenas moléculas nas quais os resíduos de aminoácido são unidos por ligações de peptídeo (-CO-NH-), mas também moléculas nas quais a ligação de peptídeo é revertida. Tais peptidomiméticos retroinversos podem ser feitos com o uso de métodos conhecidos na técnica. Essa abordagem envolve produzir pseudopeptídeos que contêm alterações envolvendo a cadeia principal e não a orientação das cadeias laterais. Os peptídeos retroinversos, que contêm ligações de NH-CO em vez de ligações de peptídeo de CO-NH, são muito mais resistentes à proteólise. Similarmente, a ligação de peptídeo pode ser dispensada completamente desde que uma porção química ligante apropriada que retenha o espaçamento entre os átomos de carbono dos resíduos de aminoácido seja usada; é particularmente preferencial se a porção química ligante tiver substancialmente a mesma distribuição de carga e substancialmente a mesma planura que uma ligação de peptídeo. Será também apreciado que o peptídeo pode ser covenientemente bloqueado em seu N- ou C-terminal de modo a ajudar a reduzir a susceptibilidade à digestão exoproteolítica. Por exemplo, o grupo amino N-terminal dos peptídeos pode ser protegido reagindo com um ácido carboxílico e o grupo carboxila C-terminal do peptídeo pode ser protegido reagindo com uma amina. Outros exemplos das modificações incluem glicosilação e fosforilação. Outra modificação potencial é que os hidrogénios nas aminas de cadeia lateral de R ou K podem ser substituídos por grupos metileno (-NH2 -NH(Me) ou -N(Me)2).
[0056] O peptídeo pode ser modificado de outros modos, por exemplo, para aumentar ou diminuir a meia vida do peptídeo in vivo. Assim, análogos de peptoide, derivados de D-aminoácido e híbridos de peptídeo-peptoide podem ser usados. Uma modalidade adicional dos polipeptídeos variantes usados de acordo com a invenção compreende formas de D-aminoácido do polipeptídeo. A preparação dos polipeptídeos com o uso de D-aminoácidos em vez de L- aminoácidos diminui significativamente qualquer ruptura indesejada de tal agente por processos metabólicos normais, diminuindo as quantidades do agente que precisam ser administradas, juntamente com a frequência de sua administração.
[0057] O peptídeo da invenção tem a capacidade de reduzir a atividade de Nox1, por exemplo, por pelo menos 20% ou pelo menos 30% ou pelo menos 35%, 40%, 45%, 50%, 54%, 55%, 56%, 57 %, 58%, 59% ou 60%. De preferência, o peptídeo diminui e/ou inibe seletivamente a atividade de Nox1, mas não inibe as NADPH oxidases humanas selecionadas dentre Nox2, Nox4, Nox5, Duoxl e Duox2. De maior preferência, os peptídeos de acordo com a presente invenção diminuem e/ou inibem seletivamente a atividade de Nox1 através da ab-rogação específica da interação entre NoxO1 e NoxA1, mas não p47phox e p67phox. Os peptídeos de acordo com a presente invenção conforme descritos no presente documento acima são, assim, peptídeos inibidores específicos para Nox1.
[0058] A presente invenção é adicionalmente direcionada a métodos e composições para reduzir danos mediados por ROS induzidos por NADPH oxidase ou NOX à pele ou membranas de mucosas de um indivíduo. Uma modalidade da presente invenção é um método para inibir e reduzir danos mediados por ROS induzidos por NADPH oxidase ou NOX à pele ou membranas de mucosas de um indivíduo que compreende a etapa de entregar uma dose eficaz de um peptídeo de acordo com a presente invenção em um carreador farmaceuticamente aceitável a um indivíduo que sofre de danos mediados por ROS induzidos por NADPH oxidase ou NOX à pele ou membranas de mucosas de um indivíduo. Ainda adicionalmente, a presente invenção fornece métodos para modular radicais livres mediados por ROS induzidos por NADPH oxidase ou NOX responsáveis pelos danos de tecido oxidativos associados ao envelhecimento prematuro. A presente invenção compreende adicional e geralmente incorporar peptídeos de acordo com a invenção como um agente nutracêutico e/ou farmacêutico em composições adequadas. O termo "modular", "modulação" ou "que modula" incluem qualquer aumento ou diminuição na atividade de qualquer componente do sistema de NADPH oxidase ou NOX, especificamente Nox1. Como ROS são moléculas altamente reativas e podem gerar diversos danos nas células, acredita-se que o ciclo vicioso de ROS é responsável por um aumento exponencial nos danos oxidativos durante o envelhecimento, o que resulta em um declínio gradualmente funcional que caracteriza o processo de envelhecimento.
[0059] Nas modalidades preferenciais, os peptídeos e suas composições são muito eficazes como agentes fotoprotetores. A luz do sol tem um efeito profundo na pele causando envelhecimento de pele prematuro, câncer de pele e uma série de alterações de pele. A exposição à luz ultravioleta, particularmente UVA ou UVB, é responsável por 90% dos sintomas do envelhecimento de pele prematuro. O câncer de pele é uma consequência grave da exposição a UV crônica. A radiação ultravioleta (UV) do sol é a principal causa de câncer de pele. Os raios UV danificam o DNA, o material genético que forma os genes. Os genes controlam o crescimento e a saúde geral das células de pele. Se o dano genético for grave, uma célula de pele normal pode começar a crescer de maneira não controlada e desordenadamente e se tornar cancerosa. UV também pode causar queimaduras de sol e outros danos que fazem a pele parecer prematuramente velha e enrugada. Há diferentes tipos de cânceres de pele dependendo do tipo de célula da pele de qual os mesmos surgem. O câncer de pele pode ser um carcinoma de célula basal, carcinoma de célula escamosa ou melanoma maligno.
[0060] De acordo com a presente invenção, uma composição com base nos peptídeos da invenção que aprimora a fotoproteção para radiações tanto UVA quanto UVB é descrita. Tais composições podem ser usadas para tratar indivíduos que são predispostos aos riscos de danos à pele associados à exposição a UV aguda ou crônica. A dita composição pode ser administrada através de meios tópicos, orais ou intradérmicos. A composição pode ser facilmente incorporada em veículos topicamente aplicados tais como soluções, suspensões, emulsões, óleos, cremes, pomadas, pós, unguentos, bálsamos ou similares, como um meio de administrar os agentes ativos diretamente a uma área desejada da pele. Ademais, a dita composição pode também ser incorporada em formas de dosagem oral como cápsulas, comprimidos, xaropes, balas de caramelo, chocolates, bebidas funcionais e similares.
[0061] Nas modalidades preferenciais, a presente invenção fornece um método direcionado ao tratamento e/ou prevenção da tumorigênese de pele seguindo a exposição a UV crônica (UVA ou UVB). Em modalidades ainda adicionais, a presente invenção refere-se a um método para tratar a pele para fornecer a proteção contra radiação UV que compreende: aplicar à pele uma composição que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz dos peptídeos inibidores de Nox1 conforme descrito acima ou seus análogos ou variantes conservadoras dos mesmos em que o peptídeo é opcionalmente conjugado ou ligado a um agente que aumenta o acúmulo do dito peptídeo em uma célula. De preferência máxima, o peptídeo que tem uma sequência de acordo com a fórmula de aminoácido geral de SEQ ID NO: 1 ou em qualquer uma das sequências de aminoácidos conforme definidas nas SEQ ID NOs: 2 a 42 e, de preferência, 2 a 19 pode ser usado.
[0062] Em ainda outras modalidades preferenciais, a presente invenção é direcionada a um método para o tratamento e/ou cuidado da pele, membranas mucosas, coro cabeludo e/ou cabelo que compreende administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz ou cosmética de peptídeos inibidores de Nox1 conforme descrito acima, análogos e variantes conservadores dos mesmos em que o peptídeo é opcionalmente conjugado ou ligado a um agente que aumenta o acúmulo do dito peptídeo em uma célula. De preferência, o peptídeo tem a SEQ ID NO: 1 ou 42. Nas modalidades preferenciais, a invenção é direcionada ao método para o tratamento e/ou cuidado para aquelas afecções, distúrbios e/ou patologias da pele, membranas de mucosas, coro cabeludo e/ou cabelo que são o resultado da geração de ROS. Ainda especificamente, o tratamento e/ou cuidado rendidos pelos métodos e composições de acordo com a presente invenção é a fotoproteção, proteção do DNA celular e/ou reparo do DNA celular da pele, membranas de mucosas, coro cabeludo e/ou cabelo.
[0063] De acordo com as modalidades alternativas, o tratamento e/ou cuidado com a pele com as composições da presente invenção é feito para reduzir, postergar e/ou prevenir sinais de envelhecimento, fotoenvelhecimento e similares. Especificamente, as afecções de doença que podem ser tratadas podem incluir afecções de pele devido ao envelhecimento ou envelhecimento prematuro em que o peptídeo de acordo com a invenção é administrado como um agente antienvelhecimento ou um fotoprotetor.
[0064] A presente invenção também fornece uma composição que aprimora a fotoproteção de danos à pele induzidos tanto por UVA quanto por UVB, sendo que a dita composição compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de um peptídeo inibidor de Nox1 conforme descrito acima, análogos ou variantes conservadores dos mesmos. O dito peptídeo pode ser opcionalmente conjugado ou ligado a um agente que aumenta o acúmulo do dito peptídeo em uma célula. Nas modalidades preferenciais, tal composição oferece uma solução terapêutica a longo prazo segura para indivíduos em necessidade de fotoproteção aprimorada a raios tanto UVA quanto UVB. Especificamente, tal composição pode ser administrada a indivíduos que são predispostos aos riscos de câncer de pele devido à exposição a UVA e UVB prolongada.
[0065] A presente invenção refere-se a um método para reduzir ou inibir ou modular seletivamente a NOX/NADPH oxidase, especificamente, os níveis, funções ou atividade de Nox1 em um indivíduo em necessidade do mesmo. O dito método compreende administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de um peptídeo inibidor de Nox1 conforme descrito no presente documento, em que o peptídeo é opcionalmente conjugado ou ligado a um agente que aumenta o acúmulo do dito peptídeo em uma célula.
[0066] A presente invenção fornece adicionalmente um método para diminuir os níveis de espécies de oxigênio reativo (ROS) ou inibir a produção de espécies de oxigênio reativo (ROS), em um indivíduo em necessidade do mesmo, que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de um peptídeo inibidor de Nox1, conforme descrito no presente documento, opcionalmente conjugado ou ligado a um agente que aumenta o acúmulo do dito peptídeo em uma célula.
[0067] O peptídeo é opcionalmente conjugado ou ligado a um agente que aumenta o acúmulo do dito peptídeo em uma célula. Tal conjugação com um agente adequado tomaria o dito peptídeo mais permeável em membrana, tais como carreadores permeáveis em membrana celular. Tal agente pode ser um carreador permeável em membrana celular, por exemplo, peptídeo rico em aminoácido positivamente carregado, por exemplo, um peptídeo rico em arginina. A título de exemplo, o peptídeo rico em arginina pode ser uma etiqueta de poliarginina que tem a sequência RRRRRRRRR (SEQ ID NO: 46). Outros peptídeos que penetram célula podem ser escolhidos dentre o peptídeo NGR derivado do Ligante N de aminopeptidase (CD13) (CNGRCG: SEQ ID NO: 47) ou Peptídeo Líder Antennapedia (CT) (KKWKMRRNQFWVKVQRG: SEQ ID: 48), Peptídeo de Ligação Bcl-2 (Decanoil-KNLWAAQRYGRELRRMSDEFEGSFKGL: SEQ ID NO: 49), uma sequência tat (RKKRRQRRR: SEQ ID NO: 50), a buforina (TRSSRAGLQFPVGRVHRLLRK: SEQ ID NO: 51), um fragmento peptídico do Vírus Linfotrópico de célula T Humana (HTLV)-II Rex (TRRQRTRRARRNR: SEQ ID NO: 52), o peptídeo de translocação em membrana lipídica (KKAAAVLLPVLLAAP: SEQ ID NO: 53), o Peptídeo Alvo NRP-1, Streptomyces hygroscopicus (RPARPAR: SEQ ID NO: 54) e a penetratina (RQIKIWFQNRRMKWKKGG: SEQ ID NO: 55).
[0068] Os peptídeos de acordo com a presente invenção podem ser usados para a profilaxia e/ou tratamento de qualquer doença relacionada a NADPH oxidases que pode incluir doenças e distúrbios cardiovasculares incluindo, porém sem limitação, hipertensão, aterosclerose, hipertrofia cardíaca, insuficiência cardíaca, enfarte do miocárdio, restenose, diabetes, nefropatia diabética, danos à mucosa intestinal (particularmente a lesões da mucosa da doença inflamatória do intestino), hiperplasia neointimal e angina peitoral, outras doenças e distúrbios que coincidem com a produção de superóxido mediada por NADPH-oxidases, incluindo, porém sem limitação, artrite, doenças inflamatórias do intestine crônicas (IBD), sepse e outros distúrbios inflamatórios, asma brônquica, doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), doença infecciosa pulmonar, fibrose pulmonar, Síndrome de Angústia Respiratória Aguda (ARDS), câncer, doenças autoimunes, lesões de reperfusão, doenças renais, derrame, doença de Alzheimer, doença de Parkinson e outras doenças neurodegenerativas, fibrose cística, rejeições de órgãos e hipertensão pulmonar. Amplamente, os peptídeos de acordo com a invenção podem ser usados para a profilaxia ou tratamento de qualquer doença inflamatória mediada por espécies de oxigênio reativo (ROS) incluindo, porém sem limitação, distúrbios mediados por fosforilação, distúrbios mediados por leucócito polimorfonuclear, distúrbios mediados por macrófago, distúrbios mediados por lipopolissacarídeo, distúrbios mediados por fator-a de necrose tumoral, distúrbios mediados por citocina IFN-y, distúrbios mediados por interleucina-2, artrite inflamatória, artrite por peroxocromato de potássio, artrite reumatoide, osteoartrite ou doença de Alzheimer. Nas modalidades preferenciais, a presente invenção refere-se a um tratamento ou uma profilaxia, em que a atividade de NADPH oxidase 1 (Nox1) ou atividade de ROS leva a uma afecção de doença selecionada a partir do grupo que compreende distúrbios cardiovasculares, distúrbios respiratórios, distúrbios de metabolismo, distúrbios de pele, distúrbios de ossos, distúrbios CNS, distúrbios neuroinflamatórios e/ou neurodegenerativos, doenças renais, distúrbios do sono, distúrbios de reprodução, doenças que afetam os olhos e/ou lentes, distúrbios inflamatórios, doenças hepáticas, dor, cânceres, tumores, insuficiência renal aguda (ARF), distúrbios alérgicos, distúrbios de pele, danos por UV , afecções de pele devido ao envelhecimento, fotodanos da pele, danos da pele induzidos por ROS, envelhecimento prematuro, distúrbio ou doença relacionada à idade, distúrbios do sistema gastrointestinal, distúrbios de angiogênese, aterosclerose, reestenose após inserção de stent e/ou hipertensão e similares.
[0069] Em uma modalidade preferencial, a presente invenção fornece um método para inibir o crescimento de célula tumoral em um indivíduo em necessidade do mesmo que compreende administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um peptídeo inibidor de Nox1 de acordo com a invenção, análogos ou variantes conservadoras dos mesmos. O dito peptídeo pode ser opcionalmente conjugado ou ligado a um agente que aumenta o acúmulo do dito peptídeo em uma célula. Em uma modalidade mais preferencial, a dita inibição do crescimento de célula tumoral é a inibição do crescimento de queratinócito tumorigênico. Em ainda outra modalidade preferencial, o dito é um método para tratar e/ou prevenir a tumorigênese de pele seguindo a exposição a UV crônica (UVA ou UVB).
[0070] Em aspectos preferenciais, os métodos de acordo com a presente invenção são úteis para uma série de afecções selecionadas a partir de um grupo que compreende câncer, danos à pele induzidos por ROS, prevenção do envelhecimento na pele e outros distúrbios relacionados à idade, aterosclerose, reestenose após inserção de stent e/ou hipertensão e similares. Em modalidades bastante preferenciais, o câncer que é receptivo ao tratamento pelos métodos de acordo com a presente invenção é selecionado a partir do grupo que compreende câncer de pele, lesões de pele pré-malignas, cólon, adenocarcinomas de cólon, cânceres de próstata, papiloma benigno ou maligno e similares. O câncer pode ser melanoma ou uma malignidade hematopoiética, tal como leucemia linfoblástica aguda (ALL), síndrome mielodisplásica (MDS) ou uma leucemia mieloide, tal como leucemia mieloide crônica (CML) ou leucemia mieloide aguda (AML). O mesmo pode ser câncer pancreático.
[0071] O câncer pode ser um causado pela transformação celular oncogênica induzida por Ras, tal como câncer colorretal. O câncer pode ser adenocarcinoma ou um neoplasma gastrointestinal induzido por infecção por Helicobacter pylori. O câncer pode ser causado pelo vírus do papiloma. O câncer pode ser causado por silenciamento de gene xeroderma pigmentosum tipo C (XPC).
[0072] Em geral, a presente invenção abrange composição farmacêutica ou cosmética que compreende uma quantidade cosmética ou farmacêutica ou terapeuticamente eficaz de pelo menos um peptídeo da invenção ou misturas de peptídeos ou a invenção com um sal farmaceuticamente aceitável e tipicamente pelo menos um excipiente ou adjuvante cosmético ou farmaceuticamente aceitável.
[0073] A presente invenção também fornece composições farmacêuticas ou neutracêuticas para inibir ou modular atividade de Nox1 em um indivíduo, que compreende um peptídeo da invenção. Em ainda outras modalidades preferenciais, a presente invenção fornece composições para reduzir e/ou inibir seletivamente atividade de Nox1 em um indivíduo que necessita das mesmas, ou composições para diminuir os níveis de espécies de oxigênio reativo (ROS) ou inibir produção de espécies de oxigênio reativo (ROS) em um indivíduo que necessita das mesmas, em que a dita composição compreende uma quantidade eficaz de um peptídeo inibidor de Nox1 de acordo com a presente invenção. Em uma modalidade com ainda mais preferência, a presente invenção fornece uma composição para reduzir e/ou inibir seletivamente atividade de Nox1 e ou diminuir os níveis de espécies de oxigênio reativo (ROS) ou inibir produção de espécies de oxigênio reativo (ROS) em um indivíduo que necessita da mesma, que compreende uma quantidade eficaz de um peptídeo que tem uma sequência de aminoácido selecionada dentre a SEQ ID NO: I a 42 e, preferencialmente, 1 a 19 de variantes conservatives ou análogas da mesma, em que o peptídeo é opcionalmente conjugado ou fixado a um agente que aumenta a acumulação do dito peptídeo em uma célula.
[0074] Em ainda outro aspecto, a presente invenção se refere a composições que compreendem peptídeos de acordo com a presente invenção em que a dita composição compreende adicionalmente um excipiente ou carreador farmaceuticamente aceitável. Especificamente, a presente invenção se refere ao uso dos peptídeos inibidores de Nox1 da presente invenção como um ingrediente ativo, junto com pelo menos um carreador farmaceuticamente aceitável, excipiente e/ou diluentes para a fabricação de uma composição farmacêutica para o tratamento e/ou doenças profiláticas revelados no presente documento. Tais composições farmacêuticas compreendem o peptídeo inibidor de Nox1 junto com pelo menos um carreador farmaceuticamente aceitável, excipiente, ligantes, desintegrantes, agentes deslizantes, diluentes, lubrificantes, agentes de coloração, agentes de adoçamento, agentes aromatizantes, conservantes ou similares. As composições farmacêuticas da presente invenção podem ser preparadas em um carreador líquido ou sólido convencional ou diluentes e um adjuvante farmaceuticamente convencional em nível de dosagem adequado de uma maneira conhecida. As formas de administração incluem, por exemplo, pílulas, comprimidos, comprimidos com película, comprimidos revestidos, cápsulas, formulações lipossomais, micro- e nano-formulações, pós e depósitos. Além disso, a presente invenção também inclui preparações farmacêuticas para aplicação parental, incluindo aplicação dérmica, intradérmica, intragástrica, intracutânea, intravascular, intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, intranasal, intravaginal, intrabucal, percutânea, retal, subcutânea, sublingual, tópica ou transdérmica, nas quais as preparações, além de veículos e/ou diluentes típicos, contêm os peptídeos inovadores de acordo com a presente invenção. Técnicas para a formulação e administração do peptídeo da presente invenção podem ser reveladas em "Remington's Pharmaceutical Sciences" Mack Publishing Co. Easton PA.
[0075] Os peptídeos da invenção também podem ser administrados na forma de seus sais farmaceuticamente ativos. Os sais farmaceuticamente ativos adequados compreendem sais e alcalinos de adição de ácido ou sais alcalinos-terrosos. Por exemplo, sais de sódio, potássio, lítio, magnésio ou cálcio podem ser obtidos. A combinação de peptídeo inibidor de Nox1 ou peptídeo da presente invenção forma sais farmaceuticamente aceitáveis com ácidos orgânicos e inorgânicos. Exemplos de ácidos adequados para tal formação de sal de adição de ácido são ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, ácido acético, ácido cítrico, ácido oxálico, ácido malônico, ácido salicílico, ácido p-aminossalicílico, ácido málico, ácido fumárico, ácido succínico, ácido ascórbico, ácido maleico, ácido sulfônico, ácido fosfônico, ácido perclórico, ácido nítrico, ácido fórmico, ácido propiônico, ácido glucônico, ácido lático, ácido tartárico, ácido hidroxomaleico, ácido pirúvico, ácido fenilacético, ácido benzoico, ácido p-aminobenzoico, ácido p-hidroxibenzoico, ácido metanossulfônico, ácido etanossulfônico, ácido nitroso, ácido hidroxietanossulfônico, ácido etilenossulfônico, ácido p- toluenossulfônico, ácido nafitilsulfônico, ácido sulfanílico, ácido canforsulfônico, ácido chinês, ácido mandélico, ácido o-metilmandélico, ácido hidrogênio- benzenossulfônico, ácido pícrico, ácido adípico, ácido D-o-tolil tartárico, ácido tartrônico, ácido a-toluico, ácido (o, mas, p)-toluico, ácido sulfônico de naftilamina e outros ácidos carboxílicos ou minerais bem conhecidos para aqueles versados na técnica. Os sais são preparados colocando-se em contato a forma de base livre com uma quantidade suficiente do ácido desejado para produzir um sal de maneira convencional.
[0076] Em uma modalidade desse aspecto da invenção, o peptídeo inibidor de Nox1 da presente invenção pode ser conjugado para uma porção química de não peptídeo. Uma molécula de polímero a ser acoplada ao peptídeo pode ser qualquer molécula de polímero adequada, como um homopolímero ou heteropolímero natural ou sintético, tipicamente com um peso molecular na faixa de cerca de 300 a 100,000 Da, como cerca de 500 a 20.000 Da. Exemplos de moléculas de polímero adequadas incluem moléculas de polímero selecionadas a partir do grupo que consiste em óxido de polialquileno (PAO), incluindo polialquileno glicol (PAG), como polietileno glicol (PEG) e polipropileno glicol (PPG), PEGs ramificados, álcool polivinílico (PVA), policarboxilato, poli-(vinilprolidona), anidrido de ácido polietileno-co-maleico, anidrido de ácido poliestireno-co-maleico, dextrano, incluindo carboximetil dextrano ou qualquer outro biopolímero adequado para reduzir imunogenicidade e/ou aumentar meia-vida e/ou meia-vida de soro em vivo funcional. Outro exemplo de uma molécula de polímero é albumina humana ou outra proteína de plasma abundante. Geralmente, polímeros derivados de polialquileno glicol são biocompatíveis, não-tóxico, não- antigênico, não-imunogênico, têm diversas propriedades de solubilidade em água, e são facilmente excretados a partir de organismos vivos.
[0077] Os peptídeos inibidores de Nox1 da presente invenção também podem ser incorporados em sistemas de entrega farmacêutica e/ou sistemas de liberação sustentada, o termo "sistemas de entrega" se refere a um diluente, adjuvante, excipiente ou carreador com os quais o peptídeo da invenção é administrado. Esses carreadores cosméticos ou farmacêuticos podem ser líquidos, como água, óleos ou tensoativos, incluindo aqueles de petróleo, origem animal, vegetal ou sintética, como e não restritos a, óleo de amendoim, óleo de soja, óleo mineral, óleo de gergelim, óleo de castor, polissorbatos, ésteres de sorbitano, sulfatos de éter, sulfatos, betaínas, glicosídeos, maltosídeos, álcoois graxos, nanoxinóis, poloxâmeros, polioxietilenos, polietileno glicóis, dextrose, glicerol, digitonina e similares. Em "Remington's Pharmaceutical Sciences" por E.W. Os diluentes Martin, adjuvantes ou excipientes são descritos como carreadores apropriados. O termo "liberação sustentada" é usado em um sentido convencional em relação a um sistema de entrega de um composto que fornece a liberação gradual desse composto durante um período de tempo e preferencialmente, embora não necessariamente, com níveis de liberação de composto relativamente constantes durante um período de tempo. Exemplos de sistemas de liberação sustentada ou entrega são lipossomas, lipossomas misturados, oleossomos, niossomos, etossomos, milipartículas, micropartículas, nanopartículas e nanopartículas lipídicas sólidas, carreadores lipídicos não estruturados, esponjas, ciclodextrinas, vesículas, micelas, micelas misturadas de tensoativos, micelas misturadas de fosfolipídeo-tensoativo, miliesferas, microesferas e nanoesferas, litosferas, milicápsulas, microcápsulas e nanocápsulas, bem como microemulsões e nanoemulsões, que podem ser adicionados para alcançar uma penetração maior dos peptídeos inibidores de Nox1 e/ou aprimorar suas propriedades farmacocinéticas e farmacodinâmicas. Os sistemas preferenciais de liberação sustentada ou entrega são lipossomas, micelas misturadas de fosfolipídeo-tensoativo e microemulsões, mais preferencialmente microemulsões de água-em-óleo com uma estrutura interna de micela reversa.
[0078] Quando usadas como um agente antienvelhecimento ou fotoprotetor, as composições da invenção também podem compreender aditivos cosméticos e adjuvantes convencionais selecionados, em particular, de substâncias graxas, solventes orgânicos, espessantes, amaciantes, antioxidantes, agentes opacificantes, estabilizadores, emolientes, hidroxiácidos, agentes antiespuma, umectantes, vitaminas, fragrâncias, conservantes, tensoativos, carregadores, agentes sequestrantes, polímeros, impulsores, agentes basificantes ou acidificantes, corantes, colorantes ou qualquer outro ingrediente geralmente formulado em cosméticos, em particular, para a fabricação de composições de protetor solar/antissol na forma de emulsões.
[0079] Os métodos e composições da presente invenção podem ser usados em combinação com outras composições e procedimentos para o tratamento de doenças. Por exemplo, um tumor pode ser tratado de modo convencional com cirurgia, radiação, quimioterapia ou imunoterapia, combinados com métodos e composições da presente invenção. Os métodos e composições da presente invenção também podem, então, ser administrados de modo subsequente ao paciente para estender a dormência de micrometástases e para estabilizar e inibir o crescimento de qualquer tumor primário residual. As composições da presente invenção também podem ser combinadas com outros compostos antiangiogênicos ou proteínas, fragmentos, antissoros, agonistas receptores, antagonistas receptores de outras proteínas antiangiogênicas. Adicionalmente, os peptídeos inibidores de Nox1 inovadores da presente invenção podem ser combinados com excipientes farmaceuticamente aceitáveis e opcionalmente, matriz de liberação sustentada, como polímeros biodegradáveis, para formar composições terapêuticas.
[0080] Adicionalmente, composições da presente invenção podem ser administradas de modo concorrente com outras terapias, por exemplo, em conjunto com um regime de terapia de quimioterapia ou radiação. Exemplos de agentes quimioterapêuticos que podem ser combinados com os peptídeos inibidores de Nox1 inovadores de acordo com a presente invenção incluem agentes alquilantes, por exemplo, mostardas de nitrogênio, compostos de etileoimina, sulfonatos de alquila e outros compostos com uma ação alquilante como nitrosureias, cisplatina e dacarbazina; antimetabólitos, por exemplo, ácido fólico, antagonistas de purina ou pirimidina; inibidores mitóticos, por exemplo, alcaloides de vinca e derivados de podofilotoxina; antibióticos de citotoxina e derivados de camptotecina. Os agentes quimioterapêuticos ou de quimioterapia preferenciais incluem amifostina (etiol), cisplatina e/ou outros componentes de platina, preferencialmente incluindo carboplatina e/ou oxiliplatina, dacarbazina (DTIC), dactiomicina, meclorotamina (mostarda de nitrogênio), estrepitozocina, ciclofosfamida, carmustina (BCNU), lomustina (CCNU), doxorrubicina (adriamicina), lipo doxorrubicina (doxil), gencitabina (gemzar), daunorrubicina, lipo daunorrubicina (daunoxome), procarbazina, mitomicina, citarabina, etoposídeo, metotrexato, 5-fluorouracil (5- FU), vinblastina, vincristina, bleomicina, paclitaxel (taxol), docetaxel (taxotere), aldeslucina, asparaginase, bussulfan, carboplatina, cladribina, camptotecina, CPT-1 1, 10-hidroxi-7-etil-camptotecina (SN38), dacarbazina, floxuridina, floxuridina, hidroxiureia, ifosfamida, idarrubicina, mesna, interferão alfa, interferão beta, irinotecano, mitoxantrona, topotecano, leuprolida, megestrol, mefalano, mercaptopurina, plicamicina, mitotano, pegaspargase, pentostatina, pipobromana, plicamicina, estrepitozocina, tamoxifen, teniposido, testolactona, tioguanina, tiotepa, mostarda de uracilo, vinorelbina, clorambucila e combinações dos mesmos.
[0081] Quando usados para tratamento ou gerenciamento de aterosclerose, reestenose após inserção de stent e/ou hipertensão, os peptídeos inibidores de Nox1 de acordo com a presente invenção também podem ser usados sozinhos ou em combinação com outros fármacos usados para tratamento e/ou gerenciamento de aterosclerose, reestenose após inserção de stent e/ou hipertensão. Tais outros fármacos podem incluir, mas não são restritos a agentes trombolíticos como estreptoquinase, ativador de plasminogênio tecidual, plasmina e uroquinase, agentes antitrombóticos como inibidores de protease de fator de tecido (TFPI), proteínas anticoagulantes extraídas por nematoide (NAPs) e similares, inibidores de metaloproteinase, agentes anti-inflamatórios, agentes antidiabéticos ou anti-hiperglicemia incluindo insulina, secretagogos de insulina ou insulina sensibilizadores, inibidores SGLT-2, antagonista receptor AT, um inibidor de HMG-Co-A redutase, um inibidor de enzima conversora de angiotensina (ACE), um bloqueador de canal de cálcio, um inibidor de sintase de aldosterona, um antagonista de aldosterona, um inibidor de endopetidase neutra/enzima conversora de angiotensina dupla (ACE/NEP), um antagonista de endotelina, um diurético e similares .
[0082] Quando usados como um agente antienvelhecimento ou um fotoprotetor, os peptídeos inibidores de Nox1 da presente invenção podem ser combinados com um ou mais de extratos de planta/botânicos; ácido tiodipropiônico (TDPA) e ésteres dos mesmos; retinóides (por exemplo, ácido all-trans retinoico, ácido 9-cis retinoico, ácido fitânico e outros); hidroxiácidos (incluindo alfa-hidroxiácidos e beta- hidroxiácidos), ácido salicílico e salicilatos; agentes esfoliantes (por exemplo, ácido glicólico, ácido 3,6,9-trioxaundecanedioico, etc.), compostos de estimulação de sintatese de estrogênio (por exemplo, cafeína e derivados); compostos com capacidade de inibir atividade de 5 alfa-redutase (por exemplo, ácido linolênico, ácido linoleico, finasterida e misturas dos mesmos); agentes de intensificação de função de barreira (por exemplo, ceramidas, glicerídeos, colesterol e seus ésteres, ácidos graxos alfa-hidróxi e ômega-hidróxi e ésteres dos mesmos, etc.); inibidores de colagenase; e inibidores de elastase e similares.
[0083] As composições de antienvelhecimento ou fotoprotetoras também podem inclui um ou mais dos seguintes: um intensificador de penetração na pele, um emoliente, um tonificador de pele, um difusor óptico, um protetor solar, um agente esfoliante e um antioxidante. Um emoliente fornece os benefícios funcionais de melhorar suavidade da pele e reduzir o aparecimento de linhas finas e rugas grossas. Esses incluem a título de exemplificação, miristato de isopropilo, petrolato, lanolato de isopropila, silicones (por exemplo, meticona, dimeticona), óleos, óleos minerais, ésteres de ácido graxo ou quaisquer misturas dos mesmos. O emoliente pode estar preferencialmente presente de cerca de 0,1% em peso a cerca de 50 % em peso do peso total da composição.
[0084] Um tonificador de pele serve como um intensificador de colágeno para a pele. Um exemplo de um tonificador de pele adequado e preferencial é palmitoil oligopeptídeo. Outros tonificadores de pele são colágeno e/ou outros agentes intensificadores de glicosaminoglicano (GAG). Quando presente, o tonificador de pele pode compreender de cerca de 0,1 % em peso a cerca de 20 % em peso do peso total da composição. Um difusor óptico é uma partícula que altera as optometrias de superfície de pele, resultando em um embaçamento e amaciamento visual de, por exemplo, linhas e rugas. Exemplos de difusores ópticos que podem ser usados na presente invenção incluem, porém, sem limitação a, nitreto de boro, mica, náilon, polimetilmetacrilato (PMMA), pó de poliuretano, sericite, sílica, pó de silicone, talco, Teflon, dióxido de titânio, óxido de zinco ou quaisquer misturas dos mesmos. Quando presente, o difusor óptico pode estar presente de cerca de 0,01 % em peso a cerca de 20 % em peso do peso total da composição.
[0085] Um protetor solar para proteger a pele de raios ultravioleta danosos também pode ser incluído. Os protetores solares preferenciais são aqueles com uma ampla faixa de proteção contra UVB e UVA, como octocrileno, avobenzona (Parsol 1789), metoxicinmato de octilo, salicilato de octilo, oxybenzona, homosilato, benzofenona, derivados de cânfora, óxido de zinco e dióxido de titânio. Quando presente, o protetor solar pode compreender de cerca de 0,01 % em peso a cerca de 70 % em peso da composição.
[0086] Os agentes esfoliantes adequados incluem, por exemplo, alfa-hidroxiácidos, beta-hidroxiácidos, oxaácidos, oxadiácidos e seus derivados como ésteres, anidridos e sais dos mesmos. Os hidroxiácidos adequados incluem, entre outros, ácido glicólico, ácido lático, ácido málico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido 2-hidroxialcanoico, ácido mandélico, ácido salicílico e derivados dos mesmos. Um agente esfoliante preferencial é ácido glicólico. Quando presente, o agente esfoliante pode compreender de cerca de 0,1% em peso a cerca de 80% em peso da composição.
[0087] Um antioxidante funciona, dentre outras coisas, para retirar radicais livres da pele para proteger a pele de agressores ambientais. Exemplos de antioxidantes que podem ser usados nas presentes composições incluem compostos que têm funções de hidróxi fenólico, como ácido ascórbico e seus derivados/ésteres; beta-caroteno; catequinas; circumina; derivados de ácido ferúlico (por exemplo, ferulato de etila, ferulato de sódio); derivados de ácido gálico (por exemplo, gaiato de propilo); licopeno; ácido redútico; ácido rosmarínico; ácido tânico; cominho tetrahidrocuro; tocoferol e seus derivados; ácido úrico; ou quaisquer misturas dos mesmos. Outros antioxidantes adequados são aqueles que têm uma ou mais funções de tiol (— SH), tanto em forma reduzida ou não reduzida, como glutationa, ácido lipoico, ácido tioglicólico, como outros compostos de sulfidrila. O antioxidante pode ser inorgânico, como bissulfitos, metabibissulfitos, sulfitos ou outros sais e ácidos inorgânicos que contêm enxofre.
[0088] Outros aditivos convencionais incluem vitaminas, como tocoferol e ácido ascórbico; derivados de vitamina como monopalmitato de ascorbila; espessantes como hidróxi alquil celulose; agentes gelificantes; agentes estruturantes como beπtoπita, esmectita, silicato de magnésio alumínio e silicato de magnésio lítio; agentes quelantes de metal como EDTA; pigmentos como óxido de zinco e dióxido de titânio; colorantes; emolientes; e umectantes.
[0089] A presente invenção também se estende a uma porção ou parte ou fragmento do gene Nox 1 ou seus mRNA, especificamente variante de isoforma longa de NADPH oxidase 1, ativador isoforma 3 de NADPH oxidase 1, isoforma de organizador de NADPH oxidase 1. Particularmente, a presente invenção se refere a sequências de ácido nucleico que codificam os peptídeos de acordo com a presente invenção. Uma "porção ou parte ou fragmento" é definida como tendo um tamanho mínimo de pelo menos cerca de 8 nucleotídeos ou preferencialmente cerca de 12 a 17 nucleotídeos ou mais preferencialmente pelo menos cerca de 18 a 25 nucleotídeos e pode ter um tamanho máximo de pelo menos cerca de 5.000 nucleotídeos. Os equivalentes genômicos maiores que 5.000 nucleotídeos também podem ser empregados. Essa definição inclui todos os tamanhos na faixa de 8 a 5.000 nucleotídeos. Desse modo, essa definição inclui ácidos nucleicos de pelo menos 12, 15, 20, 25, 40, 60, 80, 100, 200, 300, 400, 500 ou 1.000 nucleotídeos ou ácidos nucleicos que têm qualquer número de nucleotídeos advindos esses valores (por exemplo, 13, 16, 23, 30, 28, 50, 72, 121 nucleotídeos, etc.) ou ácidos nucleicos que têm mais que 500 nucleotídeos ou qualquer número de nucleotídeos entre 500. A presente invenção inclui todos os ácidos nucleicos inovadores que têm pelo menos 8 nucleotídeos derivados a partir de ácidos nucleicos que codificam os peptídeos inibidores de Nox1 de acordo com a presente invenção, o complemento ou um equivalente funcional dos mesmos. Na modalidade com ainda maior preferência, a presente invenção fornece um ácido nucleico que codifica peptídeo de SEQ ID NO: 2 a 42 variantes conservatives ou análogas dos mesmos. Ainda adicionalmente, a invenção se refere a plasmídeos ou vetores que compreendem os ácidos nucleicos que codificam os peptídeos inibidores de Nox1 da presente invenção. Os ácidos nucleicos, plasm ídeos e vetores da invenção podem ser usados para tratar qualquer uma das afecções mencionadas no presente documento.
[0090] O peptídeo de acordo com a presente invenção pode ser rotulado com um ou mais rótulos detectáveis. O rótulo pode ser conjugado para o peptídeo tanto diretamente quanto por uso de um lincador. Quando o peptídeo de acordo com a presente invenção é conjugado para um rótulo direto, o rótulo direto é adequadamente uma entidade que é detectável em seu estado natural. Por exemplo, em que o rótulo direto é uma partícula colorida, como soles corantes, soles metálicos (por exemplo ouro coloidal), e partículas de látex coloridas, isso pode ser visível à olho nu, ou se tornar visível com o auxílio de um filtro óptico. Em que o rótulo direto é um rótulo fluorescente, isso pode ser submetido a estimulação aplicada, por exemplo, luz UV para promover fluorescência. As substâncias detectáveis adequadas incluem diversas enzimas, grupos prostéticos, materiais fluorescentes, materiais luminescentes e materiais radioativos.
[0091] Em uma modalidade da invenção, os peptídeos inibidores de Nox1 de acordo com a invenção podem ser conjugados para um ou mais agentes de detecção, diagnóstico ou terapêutico para entregar de modo seletivo a locais de doença como células cancerígenas, particularmente em humanos. A conjugação pode ser tanto diretamente quanto por uso de um lincador, de modo análogo à conjugação descrita acima. Os métodos correspondentes de detecção, diagnóstico e terapia das doenças são aspectos correspondentes da presente invenção, como são os peptídeos para uso em tal detecção, diagnóstico e terapêutico métodos. Os agentes de detecção, diagnóstico e terapêutico podem ser de ocorrência natural, modificado ou sintético. Os agentes terapêuticos podem promover ou inibir qualquer processo biológico implicado em uma via de doença humana. Os métodos de detecção, diagnóstico e terapia, com o uso dos peptídeos de acordo com a presente invenção conjugados para um ou mais agentes de detecção, diagnóstico ou terapêutico para entregar de modo seletivo a locais de doença, podem ser realizados em vitro, particularmente, em uma amostra obtida a partir de um indivíduo, ou em vivo no corpo de um indivíduo (paciente) a ser testado ou tratado. Por exemplo, o agente adicional pode ser um agente terapêutico que reconhece a técnica como sendo útil para tratar câncer. A interação de ligação específica entre o peptídeo e as células permitem que o agente terapêutico seja marcado de modo preciso para células cancerígenas em um paciente mamífero. Os agentes terapêuticos adequados para esse uso podem incluir qualquer composto que induza apoptose, morte de célula, diferenciação de célula, estase e/ou anti-angiogênese de célula ou de outro modo afete a taxa de sobrevivência e/ou crescimento de uma célula cancerígena.
[0092] A invenção fornece adicionalmente um método para preparar o peptídeo inibidor de Nox1 da invenção por síntese de fase sólida ou fase líquida, em que o dito método opcionalmente compreende uma etapa de conjugar ou fixar um agente que aumenta a acumulação do dito peptídeo em uma célula.
MÉTODOS DE ENTREGA
[0093] Uma vez formuladas, as composições da invenção (que contêm o peptídeo ou polinucleotídeo da invenção) podem ser entregues a um indivíduo em vivo com uso de uma variedade de técnicas e rotas conhecidas. Por exemplo, uma composição pode ser fornecida como uma solução, suspensão ou emulsão injetável e administrada através de injeção parenteral, subcutânea, epidérmica, intradérmica, intramuscular, intra-arterial, intraperitoneal, intravenosa com o uso de uma agulha ou seringa convencional, ou com o uso de um sistema de injeção de jato líquido. As composições também podem ser administradas de modo tópico à pele ou tecido mucosal, como nasal, intratraqueal, intestinal, retal ou vaginalmente, ou fornecidas como a aspersor dividido delicadamente adequado para administração respiratória ou pulmonar. Outros modos de administração incluem administração oral, supositórios, administração sublingual e técnicas de entrega transdermal ativa ou passiva.
REGIMES DE ENTREGA
[0094] A administração dos peptídeos/ poli nucleotídeos pode ser por qualquer método adequado conforme descrito acima. As quantidades adequadas do peptídeo podem ser determinadas empiricamente, mas tipicamente estão na faixa dada abaixo. Uma única administração de cada peptídeo pode ser suficiente para ter um efeito benéfico para o paciente, mas será verificado que o mesmo pode ser benéfico se o peptídeo for administrado mais de uma vez, no qual caso regimes de administração típicos podem ser, por exemplo, uma ou duas vezes por semana durante 2 a 4 semanas a cada seis meses, ou uma vez ao dia durante uma semana a cada quatro a seis meses. Conforme será verificado, cada peptídeo ou polinucleotídeo, ou combinação de peptídeos e/ou polinucleotídeos pode ser administrada para um paciente sozinho ou em combinação.
[0095] As dosagens para administração dependerão de diversos fatores, incluindo a natureza da composição, a rota de administração e a programação e sincronização do regime de administração. As doses adequadas de uma molécula ou uma combinação de moléculas da invenção pode ser da ordem de 1 pg até 10 pg, até 15 pg, até 20 pg, até 25 pg, até 30 pg, até 35 pg, até 50 pg, até 100 pg, até 500 pg ou mais por administração. As doses adequadas podem ser menores que 15 pg, mas pelo menos 1 ng, ou pelo menos 2 ng, ou pelo menos 5 ng, ou pelo menos 50 ng, ou pelo menos 100 ng, ou pelo menos 500 ng, ou pelo menos 1 pg, ou pelo menos 10 pg. Para algumas moléculas da invenção, a dose usada pode ser maior, por exemplo, até 1 mg, até 2 mg, até 3 mg, até 4 mg, até 5 mg ou mais alta. Tais doses podem ser fornecidas em uma formulação líquida, em uma concentração adequada para permitir um volume apropriado para administração pela rota selecionada.
EXEMPLOS
[0096] Dois peptídeos adicionais nomeados A e B de acordo com a presente invenção foram testados e comparados com um peptídeo de controle C conforme listado na Tabela 5 abaixo.
[0097] O peptídeo A (SEQ ID NO:41) compreende uma sequência tat que é N-terminal à sequência SEQ ID NQ:20. O peptídeo B (SEQ ID NO:42) compreende uma sequência tat que é N-terminal à sequência SEQ ID NO:21. O peptídeo C (SEQ ID NO:43) é um peptídeo de controle (ou peptídeo de sequência aleatória). TABELA 5: ALVO E SEQUÊNCIAS DE PEPTÍDEOS DE INIBIÇÃO
Figure img0006
[0098] O efeito citotóxico de cada peptídeo foi primeiro testado em normal queratinócitos humanos primários com o uso de teste de exclusão de tripano azul e teste MTT. Conforme ilustrado nas Figuras 1A e IB, nenhuma toxidade significativa foi observada após o tratamento com menos que 50 pM de peptídeos.
[0099] Os peptídeos inibidores de Nox1 foram revelados para diminuir de modo eficiente níveis intracelulares de ROS conforme demostrado pelos resultados a seguir.
[0100] O nível de ROS em queratinócitos humanos primários tratados com 10 ou 50 pM de peptídeos A, B, e C durante 24 horas foram testados com o uso das sondas CM-H2DCF-DA (Figura 2A). Uma diminuição significativa em nível de ROS foi observada em células tratadas com peptídeos inibidores de Nox1 A e B. Para examinar a especificidade desses peptídeos, os níveis de ROS foram testados em linha de célula de adenocarcinoma de cólon HT29 humana na qual Nox1 é o único membro ativo de família Nox. A medição de nível de ROS em células HT29 mostrou que o tratamento com peptídeos inibidores de Nox1 A e B resultou em uma redução significativa em nível de ROS, sugerindo um efeito inibidor específico desses peptídeos em atividade de Nox1 (Figura 2B).
[0101] Para examinar a especificidade desses peptídeos, a expressão de proteína de Nox1 e Nox2 endógena foi inibida com o uso de expressão mediada por lentivírus e shRNA contra Nox1 e Nox2. Ambos shNoxl e shNox2 inibidos de modo estável mais que 80% de expressão de Nox1 e Nox2, respectivamente (Figura 3A). shCtrl, queratinócitos transduzidos por shNoxl ou shNox2 foram, então, tratados com peptídeo A. As medições de nível de ROS revelaram que o tratamento com peptídeo A não tinha efeito em níveis de ROS de estado estável em shNoxl -células transduzidas mostrando, desse modo, que o peptídeo A bloqueou Nox1 -geração de ROS dependente com eficiência e especificidade muito altas (próximas a 100%) (Figura 3B). Adicionalmente, atividade de NADPH oxidase foi medida em shCtrl e shNoxl - células transduzidas tratadas com ou sem peptídeo A (Figura 3C). A atividade de NADPH oxidase igualmente diminuída foi revelada em células transduzidas shNoxl, células tratadas de peptídeo A e shNoxl-células transduzidas tratadas com peptídeo A demonstrando, desse modo, a eficácia e especificidade de peptídeo A para bloquear a ativação de Nox1.
EXEMPLO 1- AVALIAÇÃO IN VIVO DOS PEPTÍDEOS INIBIDORES DE NOX1
[0102] Para avaliar o efeito de fotoproteção de peptídeo inibidor de Nox1 A, foi primeiro examinado se esse peptídeo tinha um efeito inibidor em geração de ROS induzida por Nox1 em queratinócitos humanos e de camundongo (Figura 4). Os resultados mostraram um efeito preventivo similar de peptídeo A em geração de ROS induzida por Nox1 e atividade de Nox em queratinócitos humanos e de camundongo.
[0103] Para examinar o efeito de peptídeo A em atividade de Nox1 em pele de camundongo, os ratos SKH-1 foi tratado de modo tópico com doses de peptídeo diferentes A (Figura 5A). Os resultados mostraram que atividade de Nox inibiu de modo eficiente peptídeo A por até 3 dias quando administrado em 3 e 12 mg/kg. O efeito de peptídeo A em ratos irradiado com UVB foi, então, testado (Figura 5B). Os resultados mostraram que tratamento tópico com peptídeo A 10 minutos antes da irradiação ter bloqueado de modo eficaz UVB -induzido por ativação de Nox em ratos tratado com 3 e 12 mg/kg.
[0104] Para examinar os efeitos fotoprotetores de peptídeo A, o efeito de peptídeo A administração em indução de carcinomas (SCC) de célula escamosa induzida por UVB com o uso de SKH-1 ratos sem pelo, um modelo de murino bem definido para o estudo de fotocarcinogênese que desenvolve tumores de pele incluindo papiloma benigno e SCC maligno. A validade desse modelo é exemplificada por similaridade notável entre carcinogênese induzida por UVB nesses ratos e a via de carcinogênese UV em pele humana. Os ratos sem pelo SKH-1 rendeu dados extremamente valiosos na dose, tempo -curso e o espectro de ação para tumorigênese de pele seguido de irradiação UVB crônica. Nesse estudo, o peptídeo A (3 mg/kg) foi administrado três vezes por semana e 10 minutos antes de cada exposição a UVB. Os resultados mostraram que tratamento com peptídeo A resultou em uma diminuição de 2,3 e 2,9 vezes no número de tumor e tamanho tumor, respectivamente (Figura 6A e 6B). Além disso, 57% dos tumores em ratos tratado por peptídeo A tinha um volume menor que 5 mm3 comparado a penas 8% nos ratos tratado com peptídeo de controle C (Figura 6C).
[0105] As medições de atividade NADPH oxidase em tumores de camundongo mostraram uma eficiência significante de peptídeo A em prevenção de atividade de Nox (Figura 7). A atividade de NADPH oxidase foi reduzida em 70% em pele sem tumor e 54% em tumores isolados de ratos tratado com peptídeo A comparado com veículo de ratos tratado (Figura 7). EXEMPLO 2- EFEITO DE PEPTÍDEOS INIBIDORES DE NOX1 EM TERAPIA DE CÂNCER TABELA 6
Figure img0007
EXEMPLO 2.1: EFEITO IN VITRO EM LINHAS DE CÉLULA CANCERÍGENA
[0106] O efeito de inibição de Nox1 é avaliado em linhas de células diferentes conforme listado na Tabela 6. A proliferação celular, progressão de ciclo de célula e apoptose podem ser comparadas entre células não tratadas e células que são tratadas com peptídeos inibidores de Nox1.
EXEMPLO 2.2: XEMOENXERTOS DE CÉLULAS EM RATO NOD/SCID.
[0107] As células são tripizinizadas, lavadas em DPBS e ressuspensas em DPBS com 25% Matrigel (BD Biosciences). Células de 2 x 106 são injetadas de modo subcutâneo em ratos NOD/SCID com 6 a 8 semanas de vida (The Jackson Laboratory). Para cada linha celular, ratos são divididos em dois grupos: um tratado com veículo e o outro é tratado com um peptídeo inibidor de Nox1. A formação de tumor e crescimento de tumor é monitorado até dois meses. Cada tumor é dissecado, medido, fixado em 4% de paraformaldeído, embebido em parafina, e processado para coloração H&E. A taxa de proliferação e taxa de apoptose são avaliadas.
EXEMPLO 2.3: MODELOS DE RATO
[0108] Os efeitos de peptídeos inibidores de Nox1 em tumores de pele são testados com o uso de modelos a seguir: BCC induzido por UVB e espontâneo em ratos Patch47; SCC induzido por UVB em SKH-1; e formação de melanoma espontânea em ratos BRAF. Para cada modelo, ratos são divididos em dois grupos: um tratado com veículo e outro tratado com peptídeos inibidores de Nox1. EXEMPLO 3 - EFEITO DE PEPTÍDEOS INIBIDORES DE NOX1 EM DOENÇAS INFLAMATÓRIAS E AUTO-IMUNES TABELA 7
Figure img0008
EXEMPLO 3.1: EFEITOS IN VITRO
[0109] Os peptídeos inibidores de Nox1 são testados para artrite, macrófagos derivados de linfócitos do sangue periférico (PBL) são ativados na presença e ausência de peptídeos inibidores de Nox1. A secreção de mediadores inflamatórios diferentes (TNF-oc, IL-6, IL-1β, IL-8, IL-10) é detectada.
[0110] Os efeitos de peptídeos inibidores de Nox1 também são testados para asma avaliando-se inflamação induzida por IgE- DNP que é testada na presença e ausência de peptídeos inibidores de Nox1. EXEMPLO 3.2: EFEITOS IN VIVO
[0111] O modelo de camundongo de artrite é tratado com doses de peptídeo inibidores de Nox1 diferentes para avaliar melhoria de peptídeo de escores clínicos e prevenção de destruição de osso.
[0112] Além disso, a eficácia de peptídeos inibidores de Nox1 em asma, hipersensibilidade de ouvido de camundongo é testada na presença e ausência de peptídeos inibidores de Nox1. EXEMPLO 4- EFEITO DE PEPTÍDEOS INIBIDORES DE NOX1 EM ANGIOGÊNESE TABELA 8
Figure img0009
[0113] Para avaliar o efeito de peptídeos inibidores de Nox1 em angiogênese normal em vitro, migração de célula endotelial e formação de estrutura similar a tubo com o uso de HUVEC são testadas.
[0114] Para avaliar o efeito de peptídeos inibidores de Nox1 em angiogênese normal em vivo, angiogênese de pele em modelo de ratos C57BL/6 e SKH-1, tratados com veículo ou peptídeos inibidores de Nox1, é examinada.
[0115] Para avaliar o efeito de peptídeos inibidores de Nox1 em angiogênese tumoral, teste de angiogênese em matrigel, modelos de xenoenxerto podem ser usados. As diversas linhas celulares, conforme listadas na Tabela 6, podem ser injetadas nos ratos e angiogênese pode ser, então, comparada entre ratos tratados com veículo e peptídeos inibidores de Nox1. EXEMPLO 5- EFEITO DE PEPTÍDEOS INIBIDORES DE NOX1 EM DISTÚRBIOS VASCULARES E CARDIOVASCULARES TABELA 9
Figure img0010
[0116] O efeito de peptídeos inibidores de Nox1 em hemangioma, a transformação de células endoteliais pelo antígeno T intermediário de vírus Polioma murino (PymT) é testada na presença ou ausência de peptídeos inibidores de Nox1.
[0117] Além disso, o efeito de peptídeos inibidores de Nox1 é avaliado em hipertensão, indução de hipertensão que segue infusão de angiotensina-ll na presença e ausência de peptídeos inibidores de Nox1. EXEMPLO 6- EFEITO DE PEPTÍDEOS INIBIDORES DE NOX1 EM DISTÚRBIOS NEURODEGENERATIVOS TABELA 10
Figure img0011
[0118] Para avaliar o efeito de peptídeos inibidores de Nox1 em doença de Parkinson e Alzheimer, células neuronais derivadas a partir de células de pele através de tecnologia iPS são usadas. Os efeitos de peptídeos inibidores de Nox1 em níveis ROS de células neuronais derivadas a partir de pacientes e pele saudável também são testados.
[0119] O efeito de peptídeos inibidores de Nox1 é avaliado em esclerose múltipla, modelos de camundongo de encefalomielite autoimune experimental (EAE). De fato, o modelo EAE induzido por peptídeo PLP139-151 em ratos SJL é usado. EXEMPLO 7- EFEITO DE INIBIDORES DE NOX1 EM DISTÚRBIOS DE PELE TABELA 11
Figure img0012
[0120] Os efeitos de peptídeos inibidores de Nox1 são avaliados em dermatite atópica, secreção de mediadores inflamatórios por queratinócitos ativados induzidos por IgE na presença e ausência de peptídeos inibidores de Nox1. A hipersensibilidade de ouvido de IgE também é testada na presença e ausência de peptídeos inibidores de Nox1.
[0121] Para avaliar os efeitos de peptídeos inibidores de Nox1 em Vitiligo, desafixação de melanócito pode ser testada com o uso de epiderme reconstruída e melanócitos primários.
[0122] Finalmente, os efeitos de antienvelhecimento de peptídeos inibidores de Nox1 são testados em queratinócitos primários e epiderme reconstruída. A diferenciação e marcadores de senescência são comparados entre células tratadas com veículo ou peptídeos inibidores de Nox1.
EXEMPLO 8 - EFEITO DE PEPTÍDEOS INIBIDORES DE N0X1 NO ENVELHECIMENTO DE PELE
[0123] Para avaliar os efeitos de aπtienvelhecimento de peptídeo inibidor de Nox1 A (SEQ ID NO: 41), o envelhecimento acelerado em ratos deficientes XPC foi avaliado primeiro. Para essa finalidade, a expressão de progerina, uma versão truncada de proteína lamina A envolvida em síndrome de progeria, foi avaliada em ratos XPC deficientes e proeficientes de 4 meses de vida (novo) e 1,5 anos de vida (velho) (XPC+/+ e XPC/_, respectivamente) (Figura 9A e 9B). Os resultados mostraram que o nível de progerina foi aumentado com a idade e que sua expressão foi maior em XPC/_ ratos que ratos do tipo selvagem.
[0124] Para examinar se esse fenótipo estava relacionado à superativação de NADPH oxidase, a atividade de NADPH oxidase foi primeiro medida em pele de camundongo (Figura 10A). Os resultados revelaram que atividade de NOX foi aumentada com a idade e que a mesma também foi maior em ratos XPC/_ que em homólogos do tipo selvagem. Visto que diversos estudos revelam que um espectro amplo de alterações em mitocôndria e DNA mitocondrial (mtDNA) incluindo desorganização aumentada de estrutura mitocondrial, declinam em função de fosforilação oxidativa mitocondrial (OXPHOS) e acumulação de mutação de mtDNA com envelhecimento, o nível expressão de proteínas OXPHOS foi, então, comparado entre ratos XPC/_ e XPC+/+ novos e velhos (Figura 10B). Os resultados indicaram a uma diminuição marcada na expressão do complexo I, II e III nos ratos do tipo selvagem velhos comparados aos homólogos novos. Além disso, o nível de expressão desses complexos em XPC/_ novos foi tão baixo quanto nos ratos do tipo selvagem velhos, correlacionando com o envelhecimento prematuro em ratos XPC/_.
[0125] Para investigar o papel de atividade NADPH oxidase em envelhecimento prematuro em ratos deficientes XPC, ratos XPC+/+ e XPC/_ de um mês de vida foram tratados com peptídeo inibidor de Nox1 ou veículo três vezes por semana durante três meses. A expressão de progerina (Figura 11), expressão de proteína OXPHOS (Figura 12) e perfil de metabolismo em células epidérmicas de murino foram, então, avaliados. Os resultados mostraram que a inibição de atividade de Nox1 diminuiu o envelhecimento acelerado em ratos XPC deficientes. De fato, a inibição de Nox1 bloqueou o aumento em expressão de proteína de progerina (Figura 11) e anulou a diminuição na expressão de complexos OXPHOS I, II e III (Figura 12). Para ter uma ideia geral sobre os efeitos de peptídeo inibidor de Nox1 na alteração de metabolismo induzida por impacto XPC, a abordagem proteômica foi usada. Os resultados mostraram que houve uma redução significativa na expressão de diversas proteínas envolvendo em via de pentose fosfato, ciclo TCA, OXPHOS mitocondrial e 3-oxidação de ácido graxo. O tratamento de ratos com peptídeo inibidor de Nox1 eliminou os efeitos de deficiência de XPC em alteração metabólica.
[0126] Todos esses experimentos foram realizados com peptídeo inibidor de Nox1 conforme apresentado em SEQ ID NO: 2 e os mesmos resultados foram obtidos.
[0127] Todos juntos, esses resultados indicaram que peptídeo inibidor de Nox1 A bem como peptídeo inibidor de Nox1 conforme apresentado em SEQ ID NO: 2 bloquearam envelhecimento prematuro induzido por deficiência de XPC.

Claims (17)

1. Peptídeo, caracterizado por compreender qualquer uma das sequências da Tabela 1 abaixo:
Figure img0013
Figure img0014
ou qualquer uma das seguintes sequências da Tabela 2 abaixo:
Figure img0015
2. Peptídeo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser opcionalmente conjugado a um peptídeo de penetração de célula ou a um agente que aumenta a acumulação do referido peptídeo em uma célula, por meio de uma ligação covalente ou não-covalente.
3. Peptídeo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo referido peptídeo de penetração de célula ser escolhido dentre um marcador de poliarginina que compreende a sequência RRRRRRRRR (SEQ ID NO: 46), o peptídeo NGR derivado a partir do N Ligante de aminopeptidase (CD13) (CNGRCG: SEQ ID NO: 47), ou peptídeo líder antennapedia (CT) (KKWKMRRNQFWVKVQRG: SEQ ID: 48), peptídeo de ligação Bcl-2 (Decanoil-KNLWAAQRYGRELRRMSDEFEGSFKGL: SEQ ID NO: 49), uma sequência TAT (RKKRRQRRR: SEQ ID NO: 50), a buforina (TRSSRAGLQFPVGRVHRLLRK: SEQ ID NO: 51), um fragmento peptídico do Vírus Linfotrópico de célula T Humana (HTLV)-II Rex (TRRQRTRRARRNR: SEQ ID NO: 52), o peptídeo de translocação em membrana lipídica (KKAAAVLLPVLLAAP: SEQ ID NO: 53), o Peptídeo Alvo NRP-1, Streptomyces hygroscopicus (RPARPAR: SEQ ID NO: 54) e a penetratina (RQIKIWFQNRRMKWKKGG: SEQ ID NO: 55).
4. Composição, caracterizada pelo fato que compreende um peptídeo conforme definido em qualquer uma das reivindicações de 1 a 3.
5. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende a composição conforme definida na reivindicação 4 e um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis.
6. Composição cosmética, caracterizada pelo fato de que compreende a composição conforme definida na reivindicação 4 e pelo menos um excipiente cosmeticamente aceitável.
7. Uso do peptídeo conforme definido em qualquer uma das reivindicações de 1 a 3 ou da composição conforme definida na reivindicação 4 ou 5, caracterizado pelo fato de ser para a fabricação de um fármaco para o tratamento e/ou prevenção de uma doença cardiovascular, doença respiratória, diabetes, nefropatia diabética, aterosclerose, asma, doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), doença infecciosa pulmonar, fibrose pulmonar, câncer, uma doença neurodegenerativa, doença de Alzheimer, doenças que afetam o olho e/ou lentes, câncer causado pelo silenciamento do gene Xeroderma pigmentousum tipo C (XPC), distúrbios da pele, doenças alérgicas e autoimunes, distúrbios da hematologia, distúrbios musculares, distúrbios osteoarticulares.
8. Uso, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo referido câncer ser câncer de pele, lesão da pele pré-maligna, câncer de cólon, adenocarcinoma de cólon, câncer de próstata, leucemia, neuroblastoma, gliomas, papiloma benigno ou maligno.
9. Uso, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo referido câncer de pele ser um carcinoma de célula basal, carcinoma de célula escamosa ou melanoma maligno.
10. Uso do peptídeo conforme definido em qualquer uma das reivindicações de 1 a 3 ou da composição conforme definida na reivindicação 4 ou 5, caracterizado pelo fato de ser na fabricação de um fármaco para o tratamento e/ou prevenção de distúrbios de pele, condições da pele devido ao envelhecimento prematuro, tumorigênese de pele em seguida à exposição à UV(UVAou UVB).
11. Uso do peptídeo conforme definido em qualquer uma das reivindicações de 1 a 3 ou da composição conforme definida na reivindicação 4 ou 5, caracterizado pelo fato de ser na fabricação de um fármaco para (i) reparar e proteger a pele, membranas mucosas, couro cabeludo contra radiação UV, dano por UV, (ii) aprimorar a fotoproteção contra os raios UVA e UVB, ou contra qualquer agente que induza inflamação, dano à pele, (iii) reduzir, postergar e/ou prevenir envelhecimento prematuro, foto envelhecimento, dano à pele induzido por ROS e condições de pele devido ao envelhecimento prematuro.
12. Uso do peptídeo conforme definido em qualquer uma das reivindicações de 1 a 3 ou da composição conforme definida na reivindicação 4 ou 5, caracterizado pelo fato de ser na fabricação de um fármaco para proteção contra quaisquer danos causados pelos raios UVA e/ou UVB.
13. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 7 a 12, caracterizado pelo referido fármaco ser administrado ao indivíduo topicamente, oralmente ou parentericamente.
14. Uso do peptídeo conforme definido em qualquer uma das reivindicações de 1 a 3 ou da composição conforme definida na reivindicação 4 ou 6, caracterizado por ser na fabricação de um fármaco para reduzir, postergar, e/ou prevenir os sinais do envelhecimento.
15. Uso do peptídeo conforme definido em qualquer uma das reivindicações de 1 a 3 ou da composição conforme definida na reivindicação 4 ou 6, caracterizado pelo fato de ser na fabricação de um fármaco para o cuidado da pele, membranas mucosas, coro cabeludo e/ou cabelo.
16. Uso do peptídeo conforme definido em qualquer uma das reivindicações de 1 a 3 ou da composição conforme definida na reivindicação 4 ou 6, caracterizado pelo fato de ser na fabricação de um fármaco para melhorar a fotoproteção tanto contra raios UVA quanto UVB ou contra qualquer agente que induza estresse.
17. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 14 a 16, caracterizado pelo fato do referido fármaco ser administrado topicamente, oralmente ou parentericamente.
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