CN105007933A - 选择性Nox1抑制剂肽及其用途 - Google Patents

选择性Nox1抑制剂肽及其用途 Download PDF

Info

Publication number
CN105007933A
CN105007933A CN201480003978.1A CN201480003978A CN105007933A CN 105007933 A CN105007933 A CN 105007933A CN 201480003978 A CN201480003978 A CN 201480003978A CN 105007933 A CN105007933 A CN 105007933A
Authority
CN
China
Prior art keywords
peptide
seq
skin
compositions
disease
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201480003978.1A
Other languages
English (en)
Inventor
H·R·雷兹瓦尼
F·梅祖里哀
A·泰伊伯
L·G·阿尔富什
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Bordeaux, University of
Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale INSERM
Universite de Bordeaux
Original Assignee
Bordeaux, University of
Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale INSERM
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=47458818&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=CN105007933(A) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Bordeaux, University of, Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale INSERM filed Critical Bordeaux, University of
Publication of CN105007933A publication Critical patent/CN105007933A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/08—Peptides having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/005—Enzyme inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/44—Oxidoreductases (1)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/645—Polycationic or polyanionic oligopeptides, polypeptides or polyamino acids, e.g. polylysine, polyarginine, polyglutamic acid or peptide TAT
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/64—Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/08—Drugs for disorders of the urinary system of the prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/16—Emollients or protectives, e.g. against radiation
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/18—Antioxidants, e.g. antiradicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q17/00—Barrier preparations; Preparations brought into direct contact with the skin for affording protection against external influences, e.g. sunlight, X-rays or other harmful rays, corrosive materials, bacteria or insect stings
    • A61Q17/04—Topical preparations for affording protection against sunlight or other radiation; Topical sun tanning preparations
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/08—Anti-ageing preparations
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
    • C12N9/0012—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.6, 1.7)
    • C12N9/0036—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.6, 1.7) acting on NADH or NADPH (1.6)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y106/00—Oxidoreductases acting on NADH or NADPH (1.6)
    • C12Y106/03—Oxidoreductases acting on NADH or NADPH (1.6) with oxygen as acceptor (1.6.3)
    • C12Y106/03001—NAD(P)H oxidase (1.6.3.1), i.e. NOX1
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/74—Biological properties of particular ingredients
    • A61K2800/78—Enzyme modulators, e.g. Enzyme agonists
    • A61K2800/782—Enzyme inhibitors; Enzyme antagonists

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Toxicology (AREA)

Abstract

本发明涉及用于预防和/或治疗与NADPH氧化酶1(Nox1)活性和/或活性氧簇(ROS)产生增加相关的病理学病症和疾病的新型肽、组合物和方法。因此，所述新型肽特别适用于治疗和/或预防癌症、动脉粥样硬化、血管发生和衰老。

Description

选择性Nox1抑制剂肽及其用途
技术领域
本发明涉及用于预防和/或治疗与NADPH氧化酶1(Nox1)活性和/或活性氧簇(reactive oxygen species)(ROS)产生增加相关的病理学病症和疾病的新型肽、组合物和方法。因此，所述新型肽特别适用于治疗和/或预防癌症、动脉粥样硬化、血管发生和衰老。
背景技术
Nox1在生理条件下和一些病理学病症中生成ROS。已知ROS在生物体内导致损伤，因此与许多不同的病症相关。还已知NADPH氧化酶为氧化应激的来源，其导致了许多病症的病因。已知Nox1的表达与许多不同的病症(包括癌症)相关。
没有毒性的治疗选择性显然对治疗剂而言是重要的。具体而言，在癌症治疗中，优先杀死癌症细胞而对正常细胞没有毒性是最重要的考虑因素之一。
在本发明之前，已鉴定了若干NADPH氧化酶(Nox)的抑制剂，但是迄今为止尚未开发出特异性的Nox抑制剂。
还已经测试了若干可穿透细胞的肽抑制剂，例如gp91ds-tat肽、PR-39，以及Rac肽抑制剂。gp91ds-tat肽被设计为通过模拟Nox2序列来特异性抑制Nox2，所述Nox2序列被认为对与p47phox的相互作用而言是重要的。但是，由于所述肽靶向的区域在其他Nox同工型中是同源的，因此，所述肽缺少特异性。此外，所述肽是低效抑制剂，其在50mM时抑制嗜中性粒细胞的ROS生成达25％。
最近，GenKyoTex公司使用吡唑并-吡啶并-二氮杂卓、-吡嗪和-噁嗪二酮衍生物开发了更特异性的Nox抑制剂，其具体靶向Nox1和Nox4酶。GenKyoTex目前正在使用小分子GKT137831进行I期临床试验，用于治疗糖尿病肾病。还进行了临床前试验用于治疗糖尿病肾病、动脉粥样硬化、特发性肺纤维化、肝纤维化和血管发生的模型。但是，尽管GKT137831是特异性针对Nox1/Nox4的，但其也对Nox2、Nox3和Nox5表现出亲和性，因此具有低选择性。
其他化合物已被使用多年，包括夹竹桃麻素(apocynin)、二亚苯基碘鎓(DPI)、4-(2-氨基乙基)-苯磺酰氟盐酸盐(AEBSF)和新蝶呤。
夹竹桃麻素是从胡黄连(Picrorhiza kurroa)中提取的，其能够阻止活性氧化酶复合体的形成。但是，夹竹桃麻素的抑制作用是有争议的。实际上，已证明夹竹桃麻素并非特异性针对NADPH氧化酶，而是影响其他事件，例如血栓素A2形成和AP-1转录因子的诱导，并且夹竹桃麻素是抗氧化剂而非Nox抑制剂。
二亚苯基碘鎓(DPI)是所有黄素酶的非特异性抑制剂，因此能够抑制Nox酶，但是也能够抑制黄嘌呤氧化酶和细胞色素P450酶。除了是非选择性的，还已经证明DPI具有毒性。它还是乙酰胆碱酯酶和丁酰胆碱酯酶以及内部Ca2+泵的抑制剂，除了其固有的毒性之外这也引起了对其应用的主要忧虑。
已证明氨基乙基-苯磺酰氟(AEBSF)阻止黄素细胞色素b558与p47phox结合、NADPH氧化酶的激活以及巨噬细胞中O·-2产生的激发。但是AEBSF主要是丝氨酸蛋白酶抑制剂；因此它能够以更高效率抑制蛋白酶(例如糜蛋白酶、激肽释放酶、纤溶酶、凝血酶和胰蛋白酶)，并具有许多其他作用。
已证明一些其他非特异性分子——其被误导性地命名为间接Nox抑制剂——干扰影响Nox酶的上游信号转导通路。这些分子包括抑制Nox酶的PDGF-依赖性Src激活的硫代三唑并嘧啶化合物VAS2870、血管紧张素转化酶抑制剂(ACE抑制剂)、Ang II受体阻断剂(ARB)、磷酸二酯酶、类花生酸、皮质类固醇、MAP激酶、蛋白激酶C的抑制剂(例如苯并(b)吡喃-4-酮衍生物，Shionogi Pharma的S17834)。
还有越来越多对使用针对Nox酶的siRNA方法的报道。具体而言，已经开发一些RNAi来降低Nox1表达。但是，使用RNAi作为人类的治疗干预仍处于初级阶段，并且可能需要数年时间来优化。不幸的是，仅真正测试了少量siRNA对Nox同工型的特异性。没有任何令人满意的用于选择性抑制Nox，特别是Nox1的siRNA方法。
因此，迄今为止已开发的化合物无法直接发挥作用阻断所述酶，而是干扰上游转导通路或作为抗氧化剂或ROS清除剂起作用。然而，能够直接阻断所述酶的唯一一类化合物缺少选择性并抑制其他酶活性。它们还具有低效力和生物利用度，从而无法在药理学上证明它们在体内以Nox作为治疗靶标。Nox酶的若干小分子和肽抑制剂已经被用在实验研究中，但是特异性和毒性的问题限制了任何现有化合物作为药物开发的候选者。
考虑到在最近的研究中记载的大量疾病靶标，找到Nox酶的新型临床上有用的抑制剂是至关重要的。但是，最大的挑战是发现能够特异地作用于单个Nox同工型的肽抑制剂。
申请人已接受并成功解决了这一挑战。事实上，本发明提供了直接并特异性阻断NADPH氧化酶1(Nox1)装配的新型肽抑制剂，其不抑制其他NADPH氧化酶，特别是Nox2、Nox4、Nox5、Duox1和Duox2。Nox1涉及广谱疾病的发生和发展，所述疾病包括癌症、衰老、神经变性疾病和心血管疾病，因此Nox1代表了重要的治疗靶标。因此，本发明的新型肽也是特别有利的，因为其不具有非特异性ROS清除或抗氧化活性并且它们不抑制其他ROS来源。与RNAi技术相比，所述肽抑制剂非常特异性地针对其靶蛋白，从而降低了脱靶效应的可能性。与化学抑制剂相比，本发明的肽在体内未表现出毒性作用。此外，本发明的肽易于设计和生产。
发明内容
因此，本发明提供本身包括氨基酸序列的肽，所述氨基酸序列包括至少7至35个连续氨基酸，包括以下氨基酸通用序列的一部分：X1-P-X2-X3-P-X4-R(SEQ ID NO:1)，其中X1是A、P或Q；X2是P、T、V、A、S、C、M或K；X3是L、I、V或A；X4是T、V、S、A、M。所述肽特别适用于预防和/或治疗与Nox1活性和/或活性氧簇(ROS)产生增加相关的病理学病症或疾病的方法。
本发明涉及能够选择性抑制Nox1激活的新型选择性肽，在下文中将其称为Nox1抑制剂肽。因此这些新型肽适合用作药物、用作光保护试剂和/或用作抗衰老试剂。它们可任选地缀合至细胞穿透肽或增加所述肽在细胞中积累的试剂(细胞载体)。
根据第一实施方案，本发明涉及包含有效量的本发明的Nox1抑制剂肽的组合物，以及包含治疗有效量的Nox1抑制剂肽和药学上可接受的赋形剂(vehicle或excipient)的药物组合物，以及化妆品组合物。
本发明的新型Nox1抑制剂肽和组合物可有利地用于治疗和/或预防氧自由基介导的疾病——更具体而言是NADPH氧化酶1/Nox1相关疾病——的方法中，所述疾病包括心血管疾病、血管发生依赖性疾病、呼吸系统疾病、皮肤疾病、神经变性疾病、过敏和自身免疫疾病、胃肠疾病、癌症和与受损的代谢相关的疾病。最特别地，它们适用于治疗和/或预防血管和心血管疾病、癌症疾病(例如结肠癌和皮肤癌)以及皮肤疾病、UV皮肤损伤、因衰老导致的皮肤病症、ROS诱导的皮肤损伤、过早衰老和/或紫外线(UV A或UV B)暴露后的皮肤肿瘤生成的方法中。
根据第二实施方案，本发明涉及在有需要的受试者中降低活性氧簇(ROS)的水平和/或抑制活性氧簇(ROS)的产生的方法，特别是选择性降低和/或抑制NADPH氧化酶1(Nox1)活性的方法，其包括给予治疗有效量的新型Nox1抑制剂肽或组合物。
根据第三实施方案，本发明涉及治疗和/或预防氧自由基介导的疾病——更具体而言是NADPH氧化酶1/Nox1相关疾病——的方法，所述疾病包括心血管疾病、血管发生依赖性疾病、呼吸系统疾病、皮肤疾病、神经变性疾病、过敏和自身免疫疾病、胃肠疾病、癌症(例如结肠癌和皮肤癌)和与受损的代谢相关的疾病。本发明的方法还适用于治疗和/或预防皮肤疾病、UV皮肤损伤、由衰老导致的皮肤病症、ROS诱导的皮肤损伤、过早衰老和/或紫外线(UV A或UV B)暴露后的皮肤肿瘤生成。
根据第四实施方案，本发明涉及制备所述新型肽以及任选地缀合至细胞穿透肽或细胞载体的肽的方法。
附图说明
图1A和1B：示出了使用台盼蓝拒染测定和MTT测定在正常的原代人角质形成细胞上测试的每种肽的细胞毒性效应。如图1A和1B所示，采用不同浓度的肽A(SEQ ID NO:41)、肽B(SEQ ID NO:42)和肽C(SEQ ID NO:43)处理人角质形成细胞，并使用台盼蓝染料(A)和MTT测定(B)来测量处理后24、48和72小时的生活力(viability)。相对于未处理的细胞(NTC)，对经处理的角质形成细胞的生活力百分数进行归一化处理。
图2A和2B：示出了使用CM-H2DCF-DA探针，在采用10或50μΜ肽抑制剂处理的原代人角质形成细胞和HT29(人结肠腺癌细胞系)中测量的相对ROS水平。采用10μΜ肽A(SEQ ID NO:41)、肽B(SEQ ID NO:42)和肽C(SEQ ID NO:43)处理细胞，并在处理后24小时测量ROS水平。相对于未处理的细胞(NTC)，对ROS水平进行归一化处理(*P<0.05)。根据图2A，在采用肽A(SEQ IDNO:41)和肽B(SEQ ID NO:42)处理的细胞中观察到ROS水平显著降低。根据图2B，在HT29细胞中ROS水平的测量表明，采用肽A和B的处理导致ROS水平显著降低，表明这些肽对Nox1活性的特异性抑制作用。
图3A、3B和3C：示出了使用针对Nox1和Nox2的慢病毒介导的shRNA表达对内源性Nox1和Nox2蛋白质表达的抑制。采用不同的shRNA(shNox1、shNox2和对照shCtrl)转导角质形成细胞。通过蛋白质印迹分析检查转导效率。图3A示出了shNox1和shNox2分别稳定地抑制80％以上的Nox1和Nox2表达。通过蛋白质印迹分析检查转导效率。在采用Nox1抑制剂肽A和对照肽C处理后24小时，测量相对ROS水平(3B)和Nox活性(3C)。相对于对应的肽C处理的细胞，对ROS水平进行归一化处理。通过每微克蛋白质的相对发光单位(RLU)测量NADPH氧化酶活性。*P<0.05。根据图3B，ROS水平的测量表明，在shNox1转导的细胞中采用抑制剂肽A的处理对ROS的稳态水平没有作用，表明肽A以非常高(接近100％)的效率和特异性阻断了Nox1依赖性的ROS生成。在图3C中，在使用或不使用Nox1抑制剂肽A处理的shCtrl和shNox1转导的细胞中测量NADPH氧化酶活性。
图4A、4B和4C：示出了Nox1抑制剂肽A对ROS产生和NADPH氧化酶活性的抑制，以及因此对人和鼠角质形成细胞的光保护作用。采用10μΜNox1抑制剂肽A或对照乱序肽(scramble peptide)C处理从人活组织检查样品(Ker人)和小鼠表皮(Ker小鼠)分离的角质形成细胞。在处理后24小时测量ROS水平(4A)和NADPH氧化酶活性(4B)。强制将采用对照乱序肽C处理的人和小鼠角质形成细胞中的NADPH氧化酶活性设定为100％。然后评估采用Nox1抑制剂肽A处理后NADPH氧化酶活性的抑制百分数(4C)。
图5A和5B：示出了在小鼠皮肤中肽A对Nox1活性的作用。采用以下不同剂量局部处理SKH-1小鼠：0.4、3和12mg/kg(每剂量3只小鼠)Nox1抑制剂肽A。在处理后2h、24h、48h和72h采集皮肤活组织检查样品，并测量NADPH氧化酶活性(RLU/μg蛋白质)。相对于未处理的(NT)小鼠对结果进行归一化处理并将其表示为Nox活性的抑制百分数(％)。(B)采用3和12mg/kg肽A(每剂量2只小鼠)局部处理小鼠。处理后10min，使小鼠暴露于UVB(150mJ/cm2)。在2h、24h采集皮肤活组织检查样品。在初次处理后46h，采用相同浓度的肽A再次处理小鼠并在处理后10min使小鼠暴露于UVB。然后在2h、24h(即分别为初次处理后48h和72h)采集皮肤活组织检查样品。测量NADPH氧化酶活性(RLU/μg蛋白质)，并相对于未处理的(NT)和未照射的小鼠进行归一化处理。
图6A、6B和6C：示出了肽A对使用SKH-1无毛小鼠进行的UVB诱导的鳞状细胞癌(SCC)诱导的光保护作用。采用3mg/kg肽A或对照肽局部处理小鼠并在10min后用UVB照射小鼠，每周3次。在29周中(6C)每周一次评估肿瘤的数量(6A)和大小(6B)。在第29周时评估肿瘤体积分布。显然，在局部给予了肽A的SKH-1小鼠中UVB诱导的肿瘤的数量和大小显著降低。
图7：示出了在采用肽A和对照肽处理的SKH-1小鼠中，非荷瘤皮肤和UVB诱导的肿瘤中NADPH氧化酶活性都显著降低。在处理后29周时处死小鼠。从采用肽A或赋形剂(vehicle)处理的经照射小鼠中采集非荷瘤皮肤和肿瘤。测量非荷瘤皮肤和UVB诱导的肿瘤中的NADPH氧化酶活性(表示为RLU/μg蛋白质)。强制将取自赋形剂(vehicle)处理的小鼠的非荷瘤皮肤和肿瘤中的Nox活性设定为100％，然后评估在非荷瘤皮肤和肿瘤中Nox活性的相对抑制。然后，将结果表示为经赋形剂(vehicle)处理的小鼠的平均百分数。
图8A和8B：示出了不具有tat的肽A能够与肽A一样有效地抑制Nox活性。此外，衍生自肽A的较小肽有效地抑制NADPH氧化酶活性。采用10μΜ的以下所标示的肽处理角质形成细胞：乱序对照肽P1(SEQ ID NO:57)、具有tat序列的肽A(SEQ ID NO:41)或不具有tat序列的肽A(SEQ ID NO:20)、较短肽P7(SEQ ID NO:2)和P8(SEQ ID NO:56)(图8A)。在处理后24h测量NADPH氧化酶活性(RLU/μg蛋白质)，并且相对于乱序处理的细胞对其进行归一化处理(图8B)。
图9A和9B：示出了在年轻和年老的XPC健全(proficient)(XPC+/+)和XPC缺陷(XPC-/-)小鼠的皮肤活组织检查样品中的早衰蛋白(progerin)表达。年轻小鼠为4月龄，年老小鼠为1.5岁龄。(A)通过蛋白质印迹分析来评估皮肤活组织检查样品的总蛋白提取物中的早衰蛋白。使用β-肌动蛋白作为上样对照(loading control)。(B)采用β-肌动蛋白将对应于早衰蛋白的蛋白质条带进行定量和归一化处理。将来自每组中6只小鼠的平均密度±SD表示为相对于年轻野生型小鼠中密度的相对值。
图10A、10B和10C：示出了XPC缺陷对Nox活性和OXPHOS复合体表达的作用。(A)测量年轻和年老XPC+/+和XPC-/-小鼠的皮肤活组织检查样品中Nox活性(RLU/μg蛋白质)。相对于年轻野生型小鼠对结果进行归一化处理。(B)在年轻和年老的XPC健全和缺陷小鼠中通过蛋白质印迹分析来评估OXPHOS复合体的表达。(C)采用β-肌动蛋白对相应于不同OXPHOS复合体的条带进行定量和归一化处理。将来自每组中6只小鼠的平均密度±SD表示为相对于年轻野生型小鼠中密度的相对值。
图11A和11B：示出了Nox1抑制剂肽A(InhNOX)对年轻XPC+/+和XPC-/-小鼠的皮肤活组织检查样品中早衰蛋白表达的作用。采用3mg/kg Nox1抑制剂肽A(InhNOX)或对照肽(赋形剂(vehicle))局部处理1月龄小鼠(每组6只小鼠)，每周处理3次，持续3个月。(A)通过蛋白质印迹分析来评估皮肤活组织检查样品的总蛋白提取物中的早衰蛋白。使用β-肌动蛋白作为上样对照。(B)采用β-肌动蛋白对将对应于早衰蛋白的蛋白质条带进行定量和归一化处理。将来自每组中6只小鼠的平均密度±SD表示为相对于年轻野生型小鼠中密度的相对值。
图12A和12B：示出了Nox1抑制剂肽A(InhNOX)对年轻XPC+/+和XPC-/-小鼠的皮肤活组织检查样品中OXPHOS复合体蛋白质表达的作用。采用3mg/kg Nox1抑制剂肽A(InhNOX)或对照肽(赋形剂(vehicle))局部处理1月龄小鼠(每组6只小鼠)，每周处理3次，持续3个月。(A)通过蛋白质印迹分析来评估OXPHOS复合体的表达。使用β-肌动蛋白作为上样对照。(B)采用β-肌动蛋白将对应于不同OXPHOS复合体的条带进行定量和归一化处理。将来自每组中6只小鼠的平均密度±SD表示为相对于年轻野生型小鼠中密度的相对值。
具体实施方式
本发明涉及新型选择性肽，其能够通过特异性阻断NADPH氧化酶1组装并因此阻断NADPH氧化酶1激活而选择性地抑制Nox1激活，以及其作为药物和光保护试剂的应用。本发明因此涉及治疗和美容两种方法。在下文中将所述肽称为Nox1抑制剂酶。
为了以细胞溶胶中的蛋白质作为靶，额外的修饰可使肽穿透进入细胞。成功方法的实例是添加富含精氨酸的序列或tat序列。已经基于它们的通过与Nox1相互作用而与Nox1组装竞争的潜在能力选出了本发明的肽。
待治疗的个体包括人和动物，优选哺乳动物，例如啮齿类动物和灵长类动物。所述个体可以是非人动物或非人哺乳动物。所述个体可患有本文所提及的任何病症，或处于发展所述病症的风险中。对于人类个体而言，其至少为50岁龄，例如至少为60或70岁龄。
本发明的肽来自SEQ ID NO:44(NoxO1的PRR区域)或SEQ IDNO:45(NoxA1的SH3区域)。它们通常包括来自SEQ ID NO:44或SEQ ID NO:45的5-35个氨基酸，或5-20个氨基酸，或7-20个连续氨基酸。SEQ ID NO:44为PPTVPTRPSPGAIQSRCCTVTRRAL，SEQ ID NO:45为QVVAQHSYSAQGPEDLGFRQGDTVDVLCEEPDVPLAVDQAWLEGHCDGRIGIFPKCFVVPAGPRM。
本发明的肽通常包括两个不同的序列。这些中的一个在本文中通常被称为“部分”，其负责本文所述肽的治疗活性。所述部分通常长度为5-20个氨基酸，或7-20个氨基酸，例如7-19、7-18、7-17、7-16、7-15、7-14、7-13、7-12、7-11、7-10；优选7-18、7-15、7-10；约7个氨基酸；或8-18、8-15、8-10个氨基酸。
所述肽中的第二个不同的序列，或所述序列的剩余部分，可为所述肽提供其他有利的特性。所述肽的该第二部分可不存在，并且因此在一个实施方案中，所述肽仅由上文所述赋予治疗特性的“部分”序列组成，即所述“部分”的长度和所述肽的长度相同。所述第二序列的通常长度为0-31个氨基酸，例如长度为5-30、7-30、10-25或15-20个氨基酸。所述第二序列可以是与本文所提及的任何具体的细胞穿透肽相同或同源的细胞穿透肽。显然，在所述“部分”的N末端和C端侧都可存在额外的“第二”序列。
所述肽的通常长度为7-35个氨基酸，或7-30、或7-20、或7-15或7-10，或约7、8、9或10个氨基酸，优选长度为7、8或9个氨基酸，最优选长度为7个氨基酸。
所述肽或部分可以是或可包括以下列氨基酸通式表示的序列：
X1-P-X2-X3-P-X4-R(SEQ ID NO:1)，
其中X1是A、P或Q；
X2是P、T、V、A、S、C、M或K；
X3是L、I、V或A；以及
X4是T、V、S、A或M。
所述肽或部分可以是或可包括下表1中所列出的任何序列，或可以是其同源物：
表1
PPTVPTR(SEQ ID NO：2)
PPSVPTR(SEQ ID NO：3)
PPMVPTR(SEQ ID NO：4)
PPCVPTR(SEQ ID NO：5)
PPPVPTR(SEQ ID NO：6)
PPAVPTR(SEQ ID NO：7)
PPVVPTR(SEQ ID NO：8)
PPTVPSR(SEQ ID NO：9)
PPTVPMR(SEQ ID NO：10)
PPTVPVR(SEQ ID NO：11)
PPTVPAR(SEQ ID NO：12)
QPTAPTR(SEQ ID NO：13)
PPTLPTR(SEQ ID NO：14)
PPTIPTR(SEQ ID NO：15)
PPTAPTR(SEQ ID NO：16)
PPKVPTR(SEQ ID NO：17)
QPTVPTR(SEQ ID NO：18)
APTVPTR(SEQ ID NO：19)
根据另一实施方案，所述肽或部分可以是或可包括下表2和表3中所列出的任何序列，或可以是其同源物：
表2
PPTVPTRPS(SEQ ID NO：20)
IQSRCCTVT(SEQ ID NO：21)
PTVPTRP(SEQ ID NO：22)
TVPTRPS(SEQ ID NO：23)
RPSPGAI(SEQ ID NO：24)
SPGAIQS(SEQ ID NO：25)
PGAIQSR(SEQ ID NO：26)
GAIQSRC(SEQ ID NO：27)
AIQSRCC(SEQ ID NO：28)
IQSRCCT(SEQ ID NO：29)
QSRCCTV(SEQ ID NO：30)
SRCCTVT(SEQ ID NO：31)
表3
QVVAQHSYSA(SEQ ID NO:32)
QGPEDLGFRQ(SEQ ID NO:33)
LGFRQGDTVD(SEQ ID NO:34)
GDTVDVLCEE(SEQ ID NO:35)
VLCEEPDVPL(SEQ ID NO:36)
PDVPLAVDQA(SEQ ID NO:37)
AVDQAWLEGH(SEQ ID NO:38)
根据另一实施方案，本发明还提供了包括至少7-35个连续氨基酸、7-30个连续氨基酸或7-20个连续氨基酸的氨基酸序列的肽或部分，所述氨基酸序列可以与SEQ ID NO:44(NoxO1的PRR区域)或SEQ ID NO:45(NoxA1的SH3区域)的片段相同或具有同源性。适合的同源性水平将在以下关于同源性的部分中讨论，并且适合的同源性水平包括例如其类似物或保守性变体。治疗部分或肽的序列优选地与SEQ ID NO:44或SEQ ID NO:45具有75％、80％、85％、87％、90％、93％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性。所述肽任选地用于预防和/或治疗与Nox1活性和/或活性氧簇(ROS)产生增加相关的病理学病症或疾病的方法。所述肽的长度优选地为7-15个氨基酸和/或所述部分的长度优选地为7-10个氨基酸，更优选长度约为7个氨基酸。最优选地，所述肽与SEQ ID NO:44(NoxO1的PRR区域)或SEQ ID NO:45(NoxA1的SH3区域)的至少7个连续氨基酸相同，或与SEQ ID NO:44或SEQ ID NO:45具有至少80％或85％或90％或95％的同一性。
同源序列
本文提及了同源序列。所述同源序列可代表所述肽中的治疗“部分”序列或是本发明的肽中的第二(剩余)序列。所述同源序列可以与本文所提及的任何具体序列同源。与原始序列相比，同源物具有一个或多个(例如至少2、3、4或5个)添加和/或缺失和/或置换。所述同源序列可在原始序列的整个长度上或原始序列的4、6、10、15或20个氨基酸上包括至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少87％、至少90％、至少95％、96％、97％、98％或至少99％的氨基酸同一性。
术语“序列同一性”通常是指使用ClustalW(Thompson et al.，1994，上述)及以下参数进行评估时具有所示值的序列：配对比对参数(Pairwise alignment parameters)——方法：精确，矩阵：PAM，空位开放罚分(Gap open penalty)：10.00，空位扩展罚分(Gapextension penalty)：0.10；多比对参数(Multiple alignmentparameters)——矩阵：PAM，空位开放罚分：10.00，延迟同一性百分数：30，末端空位罚分：开，空位分隔距离：0；负矩阵：无，空位扩展罚分：0.20，残基特异性空位罚分：开，亲水空位罚分：开，亲水残基：G、P、S、N、D、Q、E、K。在特定残基位置的序列同一性意欲包括已经被简单衍生的相同残基。
与原始序列相比，同源序列可具有1、2、3、4、5或更多或最多达10个氨基酸置换。所述置换优选地为保守性置换。这些可根据以下表4进行。在第2列相同格中的氨基酸，优选第3列相同行中的氨基酸可相互置换。
表4
可通过本领域中已知的任何适合的方法，例如化学合成和/或重组DNA技术，来制备本发明的肽。例如，可使用固相肽合成技术(例如，Fmoc)合成本发明的肽。此外，可使用重组DNA技术(例如，使用细菌或真核生物表达系统)合成所述肽。通过分离或合成编码所述亲本肽(parent peptide)的核苷酸序列然后改变所述核苷酸序列以实现相关氨基酸残基的引入(即，插入或置换)或移除(即，缺失或置换)，可构建编码本发明的多肽的核苷酸序列。固态蛋白质合成和重组蛋白质合成的方法为本领域中公知的。例如，MolecularCloning,A Laboratory Manual(Sambrook et al.，3d Edition，ColdSpring Harmor Press)是公知的参考文献，其中详述了多肽的重组制备的许多适合的技术。肽的变体可以是天然的或可以是未被知晓是天然存在的变体。可通过直接合成来制备肽的非天然变体，或例如根据常规方法通过饱和诱变或定点诱变在本发明的肽的全部或部分中随机引入突变。不依赖于制备方法，能够筛选所获得的变体的抑制Nox1和/或ROS的能力以鉴定本发明的变体。
可分离和/或纯化(或基本上分离和/或基本上纯化)所述新型肽。因此，本发明提供分离或基本上分离的形式(例如，从其他肽或杂质中基本上分离的)的本发明第一方面的肽。例如，可从因固相蛋白质合成法产生的其他肽中分离出所述肽。此外，可从来自重组体生产的细胞溶解后的其他蛋白质中基本上分离出所述肽。可使用蛋白质纯化的标准方法(例如，HPLC)以基本上纯化本发明的肽。因此，本发明的肽的制品优选地为至少90％(按重量计)不含其他肽和/或污染物，更优选至少约95％(按重量计)不含其他肽和/或污染物(例如至少约97％或98％(按重量计)不含其他肽和/或污染物)。
术语“肽”不仅包括其中的氨基酸残基是通过肽键(-CO-NH-)结合在一起的分子，还包括其中肽键被反转的分子。可使用本领域中已知的方法制备所述逆反向肽模拟物(retro-inversopeptidomimetic)。这种方法包括制备包含改变的伪肽，所述改变涉及主链而非支链的取向。包含NH-CO键而非CO-NH肽键的逆反向肽(Retro-inverse peptide)对蛋白酶解的抗性强得多。同样，可以完全不用肽键，条件是使用合适的接头部分，所述合适的接头部分保留氨基酸残基的碳原子之间的间距；特别优选与肽键具有基本上相同的电荷分布和基本上相同的平面性的接头部分。还应理解，可在其N末端或C末端便利地阻断所述肽以帮助降低对外部蛋白水解消化(exoproteolytic digestion)的易感性。例如，通过与羧酸反应可保护所述肽的N末端氨基，通过与胺反应可保护所述肽的C端羧基。其他修饰的实例包括糖基化和磷酸化。另一种可能的修饰是，可采用亚甲基基团置换R或K支链胺上的氢(-NH2-"-NH(Me)或-N(Me)2)。
可通过其他方式来修饰所述肽，例如以增加或减少所述肽的体内半衰期。因此可使用类肽类似物、D-氨基酸衍生物和肽-类肽杂交体。本发明所使用的变体多肽的其他实施方案包括多肽的D-氨基酸形式。使用D-氨基酸而非L-氨基酸的多肽制品极大地减少了正常代谢过程对这类试剂的不合需要的降解，减少了需要给予的试剂的量以及试剂的给药频率。
本发明的肽能够降低Nox1活性，例如降低至少20％，或至少30％，或至少35％、40％、45％、50％、54％、55％、56％、57％、58％、59％或60％。优选地，所述肽选择性地降低和/或抑制Nox1活性，但不抑制选自Nox2、Nox4、Nox5、Duox1和Duox2的人NADPH氧化酶。更优选地，本发明的肽通过特异性阻止NoxO1和NoxA1之间的相互作用而非p47phox和p67phox之间的相互作用，而选择性地降低和/或抑制Nox1活性。因此，如上文所述的本发明的肽是Nox1特异性抑制肽。
本发明还涉及减轻对受试者的皮肤或粘膜的NADPH氧化酶或NOX诱导的ROS介导的损伤的方法和组合物。本发明的一个实施方案是抑制和减轻对受试者的皮肤或粘膜的NADPH氧化酶或NOX诱导的ROS介导的损伤的方法，其包括将在药学上可接受的的载体中的有效剂量的本发明的肽递送至受试者，所述受试者遭受对其皮肤或粘膜的NADPH氧化酶或NOX诱导的ROS介导的损伤。本发明还提供调节NADPH氧化酶或NOX诱导的ROS介导的自由基的方法，所述自由基导致与早衰相关的氧化性组织损伤。本发明通常还包括将本发明的肽作为营养品和/或药物试剂加入到适当的组合物中。术语“调节(modulate)”、“调节(modulation)”或“调节(modulating)”包括NADPH氧化酶或NOX系统的任何成分(特别是Nox1)的活性的升高或降低。由于ROS是高度反应性分子并且能够在细胞中产生多种损伤，因此，ROS恶性循环被认为导致衰老过程中氧化性损伤的指数级增加，这导致作为衰老过程特征的逐渐的功能性衰退。
在优选的实施方案中，所述肽及其组合物作为光保护试剂非常有效。阳光对皮肤有重要作用，导致过早的皮肤衰老、皮肤癌和许多皮肤改变。暴露于紫外线(特别是UVA或UVB)导致90％的过早的皮肤衰老症状。皮肤癌是长期紫外线暴露的严重后果。来自太阳的紫外线辐射是皮肤癌的主要病因。紫外线损伤DNA，即组成基因的遗传物质。基因控制皮肤细胞的生长和总体健康。如果遗传损伤严重，正常的皮肤细胞可能开始以不受控的、紊乱的方式生长，成为癌性的。紫外线还导致晒伤以及使皮肤看起来过早衰老和有皱纹的其他损伤。根据发生皮肤癌的皮肤细胞类型，有不同类型的皮肤癌。皮肤癌可以是基底细胞癌、鳞状细胞癌或恶性黑色素瘤。
根据本发明，描述了基于本发明的肽的组合物，其增强对UVA和UVB两种辐射的光保护。所述组合物可用于治疗易于处于急性或慢性UV暴露相关的皮肤损伤的风险的受试者。所述组合物可通过局部、口服或皮内途径来给予。所述组合物可被容易地纳入局部施用的赋形剂(vehicle)中，作为将活性试剂直接给予到需要的皮肤区域的方法，所述赋形剂(vehicle)例如溶液、悬液、乳剂、油、乳膏、软膏、粉剂、搽剂、药膏(salve)等。此外，所述组合物还可被纳入口服剂型中，例如胶囊、片剂、糖浆剂、太妃糖、巧克力、功能性饮料等。
在优选的实施方案中，本发明提供涉及治疗和/或预防长期UV暴露(UVA或UVB)后的皮肤肿瘤发生的方法。在其他实施方案中，本发明涉及处理皮肤以提供保护避免UV辐射的方法，其包括：将包括治疗有效量的上文所述Nox1抑制剂肽或其类似物或其保守性变体的组合物施用到皮肤，其中所述肽任选地缀合至或连接至增加所述肽在细胞中积累的试剂。最优选地，可使用具有根据SEQ ID NO:1的氨基酸通式的序列或如SEQ ID NOs:2至42(优选SEQ ID NOs:2至19)中所示的任何氨基酸序列的肽。
在其他优选的实施方案中，本发明涉及皮肤、粘膜、头皮和/或毛发的治疗和/或护理方法，其包括给予美容或药物有效量的上述Nox1抑制剂肽或其类似物或保守性变体，其中所述肽任选地缀合至或连接至增加所述肽在细胞中积累的试剂。所述肽优选地具有SEQID NO:1至42的序列。在优选的实施方案中，本发明涉及治疗和/护理因ROS生成所导致的皮肤、粘膜、头皮和/或毛发的病症、疾病和/或病状的方法。更具体地，由本发明的方法和组合物提供的治疗和/或护理是光保护，对皮肤、粘膜、头皮和/或毛发的细胞DNA的保护和/或细胞DNA的修复。
根据其他实施方案，进行采用本发明的组合物的治疗和/或皮肤护理以减轻、推迟和/或预防衰老、光老化等的体征。具体地，可治疗的疾病病症包括由于衰老和过早衰老导致的皮肤病症，其中本发明的肽作为抗衰老试剂或光保护剂给予。
本发明还提供增强对UVA和UVB二者诱导的皮肤损伤的光保护的组合物，所述组合物包括治疗有效量的上述Nox1抑制剂肽或其类似物或保守性变体。所述肽可任选地缀合至或连接至增加所述肽在细胞中积累的试剂。在优选的实施方案中，所述组合物为需要增强的对UVA和UVB两种射线的光保护的受试者提供安全、长期的治疗方案。具体地，可将所述组合物给予由于长期UVA和UVB暴露而易于处于皮肤癌风险中的受试者。
本发明涉及在有需要的受试者中选择性降低或抑制或调节NOX/NADPH氧化酶(特别是Nox1)活性、功能或水平的方法。所述方法包括给予所述受试者有效量的本文所描述的Nox1抑制剂肽，其中所述肽任选地缀合至或连接至增加所述肽在细胞中积累的试剂。
本发明还提供在有需要的受试者中降低活性氧簇(ROS)水平或抑制活性氧簇(ROS)产生的方法，其包括给予所述受试者有效量的本文所描述的Nox1抑制剂肽，所述肽任选地缀合至或连接至增加所述肽在细胞中积累的试剂。
所述肽任选地缀合至或连接至增加所述肽在细胞中积累的试剂。所述与适合的试剂的缀合将使所述肽更容易透过膜，所述试剂例如可穿透细胞膜的载体。所述试剂可以是可穿透细胞膜的载体，例如富含荷正电氨基酸的肽，例如，富含精氨酸的肽。例如，富含精氨酸的肽可以是具有序列RRRRRRRRR(SEQ ID NO:46)的多聚精氨酸标签。其他细胞穿透肽可选自：衍生自氨肽酶(CD13)N配体的NGR肽(CNGRCG:SEQ ID NO:47)、触角足前导肽(Antennapedia Leaderpeptide)(CT)(KKWKMRRNQFWVKVQRG:SEQ ID NO:48)、Bcl-2结合肽(癸酰-KNLWAAQRYGRELRRMSDEFEGSFKGL:SEQ ID NO:49)、tat序列(RKKRRQRRR:SEQ ID NO:50)、蟾蜍抗菌肽(buforin)(TRSSRAGLQFPVGRVHRLLRK:SEQ ID NO:51)、人嗜T淋巴细胞病毒(HTLV)II型Rex的肽片段(TRRQRTRRARRNR:SEQ ID NO:52)、脂膜转位肽(KKAAAVLLPVLLAAP:SEQ ID NO:53)、吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)的NRP-1靶向肽(RPARPAR:SEQ IDNO:54)和穿透素(penetratin)(RQIKIWFQNRRMKWKKGG:SEQID NO:55)。
本发明的肽可用于预防和/或治疗任何NADPH氧化酶相关疾病，其可包括心血管疾病和病症，包括但不限于：高血压、动脉粥样硬化、心脏肥大、心力衰竭、心肌梗死、再狭窄、糖尿病、糖尿病肾病、肠粘膜损伤(特别是炎性肠病的粘膜损伤)、新生内膜增生(neointimalhyperplasia)和心绞痛；其他与NADPH酶介导的过氧化物产生增加同时发生的疾病和病症，包括但不限于：关节炎、慢性炎性肠病(IBD)、败血症和其他炎性疾病、支气管哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)、肺传染病、肺纤维化、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、癌症、自身免疫疾病、再灌注损伤、肾病、中风、阿尔茨海默病、帕金森病和其他神经变性疾病、囊性纤维化、器官排斥和肺动脉高压。广义而言，本发明的肽可用于预防或治疗任何活性氧簇(ROS)介导的炎性疾病，包括但不限于：磷酸化介导的疾病、多形核白细胞介导的疾病、巨噬细胞介导的疾病、脂多糖介导的疾病、肿瘤坏死因子-α介导的疾病、细胞因子IFN-γ介导的疾病、白细胞介素-2介导的疾病、炎性关节炎、过氧铬酸钾关节炎(potassium peroxochromatearthritis)、类风湿性关节炎、骨关节炎或阿尔茨海默病。在优选的实施方案中，本发明涉及治疗或预防，其中NADPH氧化酶1(Nox1)活性或ROS活性导致选自以下的疾病：心血管疾病、呼吸系统疾病、代谢疾病、皮肤疾病、骨疾病、CNS疾病、神经炎性和/或神经变性疾病、肾疾病、睡眠障碍、生殖疾病、影响眼睛和/或晶状体的疾病、炎性疾病、肝疾病、疼痛、癌症、肿瘤、急性肾衰竭(ARF)、过敏性疾病、皮肤疾病、UV损伤、由衰老导致的皮肤疾病、皮肤的光损伤、ROS诱导的皮肤损伤、过早衰老、衰老相关疾病或病症、胃肠系统疾病、血管发生疾病、动脉粥样硬化、支架插入后的再狭窄和/或高血压等。
在优选的实施方案中，本发明提供了在需要的受试者中抑制肿瘤细胞生长的方法，所述方法包括给予治疗有效量的本发明的Nox1抑制剂肽、其类似物或保守性变体。所述肽可任选地缀合至或连接至增加所述肽在细胞中积累的试剂。在最优选的实施方案中，所述肿瘤细胞生长的抑制是对致瘤的角质形成细胞生长的抑制。在另一优选实施方案中，所述为在长期UV(UVA或UVB)暴露之后治疗和/或预防皮肤肿瘤发生的方法。
在优选的方面中，本发明的方法适用于多种选自以下的病症：癌症、ROS诱导的皮肤损伤、皮肤衰老和其他衰老相关疾病的预防、动脉粥样硬化、支架插入后的再狭窄和/或高血压等。在非常优选的实施方案中，可通过本发明的方法来治疗的癌症选自皮肤癌、恶变前皮肤损伤、结肠癌、结肠腺癌、前列腺癌、良性和恶性乳头状瘤等。所述癌症可以是黑色素瘤或血液恶性肿瘤，例如急性淋巴细胞白血病(ALL)、骨髓增生异常综合征(MDS)或髓样白血病，例如慢性髓样白血病(CML)或急性髓样白血病(AML)。所述癌症可以是胰腺癌。
所述癌症可以是Ras诱导的致癌性细胞转化，例如结直肠癌。所述癌症可以是腺癌或幽门螺杆菌感染诱导的胃肠肿瘤。所述癌症可以是由乳头瘤病毒导致。所述癌症可以是由着色性干皮病C型(XPC)基因沉默导致。
广义上，本发明包括美容或药物组合物，其包括化妆或药物或治疗有效量的至少一种本发明的肽或本发明的肽的混合物以及药学上可接受的的盐，以及通常包括至少一种美容学上或药学上可接受的赋形剂(excipient)或佐剂。
本发明还提供了在受试者中抑制或调节Nox1活性的药物或营养组合物，其包括本发明的肽。在其他更优选的实施方案中，本发明提供在需要其的受试者中选择性降低和/或抑制Nox1活性的组合物，或在需要其的受试者中选择性降低活性氧簇(ROS)水平或抑制活性氧簇(ROS)产生的组合物，其中所述组合物包括有效量的本发明的Nox1抑制剂肽。在最优选的实施方案中，本发明提供用于在需要其的受试者中选择性降低和/或抑制Nox1活性，和/或降低活性氧簇(ROS)水平或抑制活性氧簇(ROS)产生的组合物，其包括有效量的具有选自SEQ ID NO:1至42——优选SEQ ID NO:1至19——的氨基酸序列的肽、其类似物或保守性变体，其中所述肽任选地缀合至或连接至增加所述肽在细胞中积累的试剂。
在又一方面，本发明涉及包括本发明的肽的组合物，其中所述组合物还包括药学上可接受的赋形剂(excipient)或载体。具体地，本发明涉及本发明的Nox1抑制剂肽作为活性成分，至少一种药学上可接受的载体、赋形剂(excipient)和/或稀释剂，用于制备治疗和/或预防本文公开的疾病的药物组合物的用途。所述药物组合物包括Nox1抑制剂肽，以及至少一种药学上可接受的载体、赋形剂(excipient)、粘合剂、崩解剂、助流剂(glident)、稀释剂、润滑剂、着色剂、甜味剂、调味剂、防腐剂等。本发明的药物组合物可通过已知方式，在适合的剂量水平下在常规的固体或液体载体或稀释剂和常规药品级佐剂中制备。给药形式包括，例如，丸剂、片剂、薄膜片剂、包衣片剂、胶囊、脂质体制剂、微米制剂和纳米制剂、粉剂和沉淀物(deposit)。此外，本发明还包括用于胃肠外施用的药物制品，包括皮肤、真皮内、胃内、皮内、血管内、静脉内、肌肉内、腹膜内、鼻内、阴道内、颊内、经皮、直肠、皮下、舌下、局部或经皮施用，所述制品除了常规赋形剂(vehicle)和/或稀释剂以外还包含本发明的新型肽。用于本发明的肽的制剂和给药的技术可参见“Remington'sPharmaceutical Sciences”Mack Publishing Co.,Easton PA。
本发明的肽还可以以其药物活性盐的形式给予。适合的药物活性盐包括酸加成盐和碱金属或碱土金属盐。例如，可获得钠、钾、锂、镁或钙的盐。本发明的Nox1抑制剂肽或肽组合物与有机酸和无机酸形成药学上可接受的的盐。用于所述酸加成盐形成的适合的酸的实例是盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、乙酸、柠檬酸、草酸、丙二酸、水杨酸、对氨基水杨酸、苹果酸、富马酸、琥珀酸、抗坏血酸、马来酸、磺酸、膦酸、高氯酸、硝酸、甲酸、丙酸、葡糖酸、乳酸、酒石酸、羟基马来酸、丙酮酸、苯乙酸、苯甲酸、对氨基苯甲酸、对羟基苯甲酸、甲磺酸、乙磺酸、亚硝酸、羟基乙磺酸、乙二磺酸(ethylenesulfonicacid)、对甲苯磺酸、萘磺酸、对氨基苯磺酸、樟脑磺酸、china acid、苦杏仁酸、邻甲基苦杏仁酸、氢-苯磺酸、苦味酸、脂肪酸、D-邻甲苯基酒石酸、羟基丙二酸、α-甲苯甲酸、(邻、间、对)甲苯甲酸、萘胺磺酸，以及其他本领域技术人员所公知的无机酸或羧酸。所述盐是通过将游离碱与足量的所需酸接触从而以常规方式生成盐而制备的。
在本发明的该方面的一个实施方案中，本发明的Nox1抑制剂肽可与非肽部分缀合。待与所述肽偶联的聚合物分子可以是任何适合的聚合物分子，例如天然或合成的均聚物或杂聚物，其通常的分子量范围为约300-100000Da，例如约500-20000Da。适合的聚合物分子的实例包括选自以下的聚合物分子：聚环氧烷(polyalkylene oxide，PAO)(包括聚烷撑二醇(PAG)，例如聚乙二醇(PEG)和聚丙二醇(PPG)、分枝型PEG、聚乙烯醇(PVA))、聚羧酸、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯-共-马来酸酐、聚苯乙烯-共-马来酸酐、葡聚糖(包括羧甲基葡聚糖)，或任何其他适于减小免疫原性和/或增加功能性体内半衰期和/或血清半衰期的生物聚合物。聚合物分子的另一实例是人白蛋白或另一种丰富的血浆蛋白。聚烷撑二醇衍生的聚合物通常是生物相容的、无毒、无抗原性、无免疫原性的，具有多种水溶性特性并且易于从活的生物体中分泌。
还可将本发明的Nox1抑制剂肽加入到药物递送系统和/或缓释系统中，术语“递送系统”涉及与本发明的肽一起给予的稀释剂、佐剂、赋形剂(excipient)或载体。这些美容或药物载体可以是液体，例如水、油或表面活性剂，包括石油、动物、植物或合成来源的那些，例如但不限于花生油、大豆油、矿物油、芝麻油、蓖麻油、聚山梨醇酯、脱水山梨醇酯、醚硫酸酯(ether sulfate)、硫酸酯、甜菜碱、糖苷、麦芽糖苷、脂肪醇、壬苯醇醚、泊洛沙姆、聚氧乙烯、聚乙二醇、右旋糖、甘油、毛地黄皂苷和类似物。在E.W.Martin的"Remington's Pharmaceutical Sciences"中，描述了稀释剂、佐剂或赋形剂为合适的载体。术语“缓释”以涉及化合物的递送系统的常规含义使用，其在一段时间内提供该化合物的逐渐释放，优选地，尽管并非必然地，在一段时间内保持相对恒定的化合物释放水平。递送或缓释系统的实例是脂质体、混合脂质体、油质体、类脂质体(niosome)、含醇脂质体(ethosome)、毫米粒子(milliparticle)、微米粒子(microparticle)、纳米粒子和固态脂质纳米粒子、纳米结构的脂质载体、海绵、环糊精、泡囊(vesicle)、胶束、表面活性剂的混合胶束、表面活性剂-磷脂混合的胶束、毫米球(millisphere)、微米球(microsphere)和纳米球、脂球体(liposphere)、毫米胶囊(millicapsule)、微米胶囊(microcapsule)和纳米胶囊，以及微乳(micro-emulsion)和纳米乳，可添加它们以实现Nox1抑制剂肽的更大渗透性和/或改善其药物代谢动力学和药效学性质。优选的递送或缓释系统是脂质体、表面活性剂-磷脂混合的胶束和微乳，更优选具有反胶束的内部结构的油包水微乳。
当本发明的组合物被用作光保护剂或抗衰老试剂时，其还包括常规化妆品添加剂和佐剂，特别是选自脂质(fatty substance)、有机溶剂、增稠剂、软化剂、抗氧化剂、遮光剂、稳定剂、柔润剂(emollient)、羟酸、消泡剂、湿润剂、维生素、香料(fragrance)、防腐剂、表面活性剂、填充剂、多价螯合剂(sequestering agent)、聚合物、喷射剂、碱化或酸化剂、染料、着色剂或通常配制成化妆品的任何其他成分，特别是用于制备乳剂形式的抗日光/防晒组合物。
本发明的方法和组合物可与用于治疗疾病的其他组合物和方法结合使用。例如，常规上可采用手术、放射、化学疗法或免疫疗法，结合本发明的方法和组合物来治疗肿瘤。然后，可将本发明的方法和组合物在此后给予患者以延长微小转移的休眠，并且稳定和抑制任何残留的原发性肿瘤的生长。还可将本发明的组合物与其他抗血管发生化合物、或蛋白质、片段、抗血清，其他抗血管发生蛋白质的受体激动剂、受体拮抗剂结合。此外，本发明的新型Nox1抑制剂肽可以与药学上可接受的赋形剂(excipient)和任选的缓释基质(例如，生物可降解聚合物)结合，以形成治疗组合物。
此外，本发明的组合物可与其他治疗同时给予，例如，与化学疗法或放射治疗方案同时进行。能够与本发明的新型Nox1抑制剂肽结合使用的化学治疗剂的实例包括烷化剂，例如氮芥、乙撑亚胺化合物、烷基磺酸盐和其他具有烷基化作用的化合物，例如亚硝基脲、顺铂、达卡巴嗪；抗代谢药，例如叶酸、嘌呤或嘧啶拮抗剂；有丝分裂抑制剂，例如长春花生物碱和鬼臼毒素衍生物；细胞毒性抗生素和喜树碱衍生物。优选的化学治疗剂或化学疗法包括氨磷汀(阿密磷定)、顺铂和/或其他铂化合物(优选包括卡铂和/或奥沙利铂)、达卡巴嗪(DTIC)、更生霉素、双氯乙基甲胺(氮芥)、链脲菌素、环磷酰胺、卡氮芥(carrnustine)(BCNU)、洛莫司汀(CCNU)、多柔比星(阿霉素)、多柔比星脂质体(盐酸多柔比星脂质体(doxil))、吉西他滨(健择)、柔红霉素、柔红霉素脂质体(枸橼酸柔红霉素脂质体)、丙卡巴肼、丝裂霉素、阿糖胞苷、依托泊苷、甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶(5-FU)、长春碱、长春新碱、博来霉素、紫杉醇(泰素)、多西他赛(泰索帝)、阿地白介素、天冬酰胺酶、白消安、卡铂、克拉屈滨、喜树碱、CPT-11、10-羟基-7-乙基-喜树碱(SN38)、达卡巴嗪、氟尿苷、氟达拉滨、羟基脲、异环磷酰胺、伊达比星、美司钠、干扰素α、干扰素β、伊立替康、米托蒽醌、托泊替坎、亮丙瑞林、甲地孕酮、美法仑、巯基嘌呤、普卡霉素、米托坦、培门冬酶、喷司他丁、哌泊溴烷、普卡霉素、链脲菌素、他莫昔芬、替尼泊苷、睾内酯、硫鸟嘌呤、塞替派、尿嘧啶氮芥、长春瑞滨、苯丁酸氮芥，以及它们的组合。
当用于治疗或处理动脉粥样硬化、支架插入后的再狭窄和/或高血压时，可单独使用本发明的Nox1抑制剂肽或与用于治疗和/或处理动脉粥样硬化、支架插入后的再狭窄和/或高血压的其他药物结合使用。所述其他药物可包括但不限于血栓溶解剂(例如链激酶)、组织纤溶酶原激活剂、纤溶酶和尿激酶、抗血栓剂(例如组织因子蛋白酶抑制剂(TFPI))、从线虫提取的抗凝蛋白(NAPs)等、金属蛋白酶抑制剂、抗炎剂、抗糖尿病剂或抗高血糖剂(包括胰岛素、胰岛素促分泌剂或胰岛素致敏剂)、SGLT-2抑制剂、AT1受体拮抗剂、HMG-CoA还原酶抑制剂、血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂、钙通道阻断剂、醛固酮合酶抑制剂、醛固酮拮抗剂、血管紧张素转换酶/中性内肽酶(ACE/NEP)双重抑制剂、内皮缩血管肽拮抗剂、利尿剂等。
当用作抗衰老剂或光保护剂时，本发明的Nox1抑制剂肽可与下列一种或多种结合：植物的/植物提取物；硫二丙酸(TDPA)及其酯；维生素A酸(例如，全反式维生素A酸、9-顺式维生素A酸、植烷酸及其他)；羟酸(包括α-羟酸和β-羟酸)、水杨酸和水杨酸盐；去角质剂(例如，羟乙酸、3,6,9-三噁十一烷二酸等)；雌激素合成酶刺激化合物(例如，咖啡因及衍生物)；能够抑制5α还原酶活性的化合物(例如，亚麻酸、亚油酸、非那雄胺及其混合物)；屏障功能增强剂(例如，神经酰胺、甘油酯、胆固醇及其酯、α-羟基和ω-羟基脂肪酸及其酯等)；胶原酶抑制剂；以及弹性蛋白酶抑制剂等。
所述抗衰老或光保护组合物还可包括一种或多种以下试剂：透皮吸收促进剂、柔润剂、皮肤丰润剂(skin plumper)、光学扩散剂(opticaldiffuser)、防晒剂、去角质剂和抗氧化剂。柔润剂提供增强皮肤光滑度和减少细纹和粗糙皱纹出现的功能益处。这些包括，例如，豆蔻酸异丙酯、矿脂、羊毛脂酸异丙酯、硅酮(例如，甲基硅油、二甲基硅油)、油、矿物油、脂肪酸酯，或其任何混合物。优选地，柔润剂占组合物总重量的约0.1％重量至约50％重量。
皮肤丰润剂作为皮肤的胶原蛋白增强剂。适合且优选的皮肤丰润剂的实例是棕榈酰寡肽。其他皮肤丰润剂是胶原蛋白和/或其他糖胺聚糖(GAG)增强剂。当存在所述皮肤丰润剂时，其可占所述组合物总重量的约0.1％重量至约20％重量。光学扩散剂是改变皮肤表面验光(optometrics)、导致例如细纹和皱纹的视觉模糊和软化的颗粒。可用于本发明中的光学扩散剂的实例包括但不限于氮化硼、云母、尼龙、聚甲基甲丙烯酸盐(PMMA)、聚氨酯粉末、绢云母、二氧化硅、硅酮粉末、滑石、特氟隆、二氧化钛、氧化锌，或其任何混合物。当存在所述光学扩散剂时，其可占所述组合物总重量的约0.01％重量至约20％重量。
还可包括保护皮肤避免损伤性紫外线的防晒剂。优选的防晒剂是提供广泛的UVB和UVA保护的那些，例如氰双苯丙烯酸辛酯、阿伏苯宗(Parsol 1789)、甲氧肉桂酸辛酯、水杨酸辛酯、羟苯甲酮、胡莫柳酯(homosylate)、二苯甲酮、樟脑衍生物、氧化锌和二氧化钛。当存在所述防晒剂时，其可占所述组合物的约0.01％重量至约70％重量。
适合的去角质剂包括，例如，α-羟酸、β-羟酸、含氧酸(oxaacid)、含氧二酸(oxadiacid)，以及其衍生物例如其酯、酐和盐。适合的羟酸尤其包括羟乙酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、2-羟基烷酸、苦杏仁酸、水杨酸及其衍生物。优选的去角质剂是羟乙酸。当存在所述去角质剂时，其可占所述组合物的约0.1％重量至约80％重量。
在其他作用中，抗氧化剂的主要作用是从皮肤中清除自由基以保护皮肤抵御环境攻击者。本发明的组合物中可使用的抗氧化剂的实例包括具有酚羟基官能团的化合物，例如抗坏血酸及其衍生物/酯、β-胡萝卜素、儿茶素、姜黄素、阿魏酸衍生物(例如，阿魏酸乙酯、阿魏酸钠)、没食子酸衍生物(例如，没食子酸丙酯)、番茄红素、还原酸、迷迭香酸、鞣酸、四氢姜黄素、生育酚及其衍生物、尿酸，或其任何混合物。其他适合的抗氧化剂是具有一个或多个巯基官能团(-SH)的那些(还原或非还原形式)，例如谷胱甘肽、硫辛酸、巯基乙酸和其他巯基化合物。抗氧化剂可以是无机物，例如亚硫酸氢盐、偏亚硫酸氢盐、亚硫酸盐或其他包含硫的无机盐和酸。
其他常规的添加剂包括维生素，例如生育酚和抗坏血酸；维生素衍生物，例如抗坏血酸单棕榈酸酯；增稠剂，例如羟烷基纤维素；胶凝剂；构造剂(structuring agent)，例如膨润土、蒙脱石、硅酸镁铝和硅酸锂镁；金属螯合试剂，例如EDTA；色素，例如氧化锌和二氧化钛；着色剂；柔润剂；以及湿润剂。
本发明还扩展至Nox1基因或其mRNA的部分或片段，特别是NADPH氧化酶1同工型长变体、NADPH氧化酶激活剂1同工型3、NADPH氧化酶形成体(organizer)1同工型。本发明特别涉及编码本发明的肽的核酸序列。“部分或片段”被定义为具有至少约8个核苷酸或优选约12-17个核苷酸或更优选至少约18-25个核苷酸的最小长度并且具有至少约5000个核苷酸的最大长度。还可使用多于5000个核苷酸的基因组等价物(equivalent)。该定义包括8-5000个核苷酸范围内的所有长度。因此，该定义包括至少12、15、20、25、40、60、80、100、200、300、400、500或1000个核苷酸的核酸，或具有在这些数值内的任何数目的核苷酸的核酸(例如，13、16、23、30、28、50、72、121个核苷酸等)，或具有多于500个核苷酸或500之间任何数目的核苷酸的核酸。本发明包括所有新型核酸、其互补核酸或功能等价核酸，所述新型核酸其具有至少8个源自编码本发明的Nox1抑制剂肽的核酸的核苷酸。在最优选的实施方案中，本发明提供编码SEQ ID NO:2至42的肽、其类似物或保守性变体的核酸。此外，本发明涉及包含编码本发明的Nox1抑制剂肽的核酸的质粒或载体。本发明的核酸、质粒和载体可用于治疗本文所提及的任何病症。
可采用一个或多个可检测标记物来标记本发明的肽。所述标记物可直接或通过接头缀合至所述肽。当本发明的肽与直接标记物缀合时，所述直接标记物合适地为在天然状态下可检测的实体。例如，当所述直接标记物是有色颗粒(例如染料溶胶(dye sol)、金属溶胶(metallic sol)(例如，胶体金))和有色胶乳颗粒时，其可为裸眼可见或在光滤波器(optical filter)的辅助下是可见的。当所述直接标记物是荧光标记物时，可使其接受施加的刺激(例如，紫外光)以提升荧光。适合的可检测物质包括多种酶、辅基、荧光材料、发光材料和放射性材料。
在本发明的一个实施方案中，本发明的Nox1抑制剂肽可缀合至一种或多种检测、诊断或治疗剂以选择性递送到疾病部位(例如癌细胞，特别是人体中的癌细胞)。所述缀合可以是直接的或是通过使用接头，类似于上述缀。相应的疾病检测、诊断和治疗方法是本发明的相应方面，如同用于所述检测、诊断和治疗方法中的所述肽。检测、诊断和治疗剂可以是天然存在的、经修饰的或合成的。治疗剂可促进或抑制人疾病通路中所涉及的任何生物过程。使用缀合至一种或多种检测、诊断或治疗剂以选择性递送到疾病部位的本发明的肽，所述检测、诊断和疗法可在体外实施，特别是在从受试者获得的样品上实施，或者在待测试或治疗的受试者(患者)的体内实施。例如，其他试剂可以是本领域中公认的适用于治疗癌症的治疗剂。所述肽和细胞之间的特异性结合相互作用使所述治疗剂能够被精确地靶向于哺乳动物患者体内的癌细胞。适用于此用途的治疗剂可包括诱导细胞凋亡、细胞死亡、细胞分化、细胞停滞(cell stasis)和/或抗血管发生，或影响癌细胞存活和/或生长速率的任何化合物。
本发明还提供通过固相或液相合成来制备本发明的Nox1抑制剂肽的方法，其中所述方法任选地包括与增加所述肽在细胞中积累的试剂缀合或连接的步骤。
递送方法
一旦被制成制剂，可使用多种已知的途径和技术将本发明的组合物(包含本发明的肽或多聚核苷酸)递送到受试者体内。例如，组合物可作为可注射溶液、悬液或乳剂形式提供，并且通过使用常规的针头和注射器或使用液体喷射系统(liquid jet injection system)的胃肠外、皮下、表皮、真皮内、肌肉内、动脉内、腹膜内、静脉注射给予。还可将组合物局部给予所至皮肤或粘膜组织，例如进行经鼻、气管内、经肠、直肠或阴道给药，或者以适用于呼吸或肺给药的细分散的喷雾剂形式提供。其他给药方式包括口服给药、栓剂、舌下给药，以及主动或被动透皮递送技术。
递送方案
可通过上述任何适合的方法来给予所述肽/多聚核苷酸。可通过经验确定所述肽的适合量，但通常位于下面给出的范围内。每种肽的单次给药足以对患者产生有益效果，但是应了解超过一次地给予所述肽是有益的，在这种情况下的通常给药方案可以是，例如，每6个月的2-4周内每周一次或两次，或者每4-6个月的一周内每天一次。应了解，可将每种肽或多聚核苷酸，或肽和/或多聚核苷酸的组合物单独地或组合地给予患者。
给药剂量取决于多种因素，包括所述组合物的性质、给药途径，以及给药方案的时间表和时机。本发明的分子或分子的组合的适合剂量可为以下次序：每次给药1μg并最高达10μg、最高达15μg、最高达20μg、最高达25μg、最高达30μg、最高达35μg、最高达50μg、最高达100μg、最高达500μg或更多。适合的剂量可以少于15μg，但至少是1ng、或至少2ng、或至少5ng、或至少50ng、或至少100ng、或至少500ng、或至少1μg、或至少10μg。对于本发明的一些分子而言，所使用的剂量可以更高，例如最高达1mg、最高达2mg、最高达3mg、最高达4mg、最高达5mg或更高。所述剂量可以液体制剂的形式以适合的浓度提供，以允许适合于以所选择途径给药的体积。
实施例
已经测试了本发明的另外两种肽A和B，并与对照肽C进行了比较，如下面的表5所列出的。
肽A(SEQ ID NO:41)包含在序列SEQ ID NO:20N末端的tat序列。肽B(SEQ ID NO:42)包含在序列SEQ ID NO:21N末端的tat序列。肽C(SEQ ID NO:43)是对照肽(或乱序肽)。
表5：抑制肽的靶标和序列
肽 肽的靶标 序列
A SH3-NoxA1 tat-P-P-T-V-P-T-R-P-S(SEQ ID No:41)
B SH3-NoxA1 tat-I-Q-S-R-C-C-T-V-T(SEQ ID No:42)
C 乱序的 tat-C-L-R-I-T-R-Q-S-R(SEQ ID No:43)
首先使用台盼蓝拒染测定和MTT测定在正常的原代人角质形成细胞上测试每种肽的细胞毒性作用。如图1A和1B中所示，采用小于50μΜ的肽处理后未观察到显著的毒性。
发现Nox1抑制剂肽有效地降低细胞内ROS水平，如以下结果所证明的。
使用CM-H2DCF-DA探针测定采用10或50μΜ肽A、B和C处理24h的原代人角质形成细胞中的ROS水平(图2A)。在采用Nox1抑制剂肽A和B处理的细胞中观察到ROS水平的显著下降。为了检验这些肽的特异性，在人结肠腺癌HT29细胞系中评估ROS水平，在所述细胞系中Nox1是Nox家族中的唯一活性成员。在HT29细胞系中ROS水平的测量表明，采用Nox1抑制剂肽A和B的处理导致ROS水平的显著降低，表明这些肽对Nox1活性的特异性抑制作用(图2B)。
为了检验这些肽的特异性，使用针对Nox1和Nox2的慢病毒介导的shRNA表达来抑制内源Nox1和Nox2蛋白质的表达。shNox1和shNox2两者分别稳定地抑制80％以上的Nox1和Nox2表达(图3A)。然后采用肽A处理shCtrl、shNox1或shNox2转导的角质形成细胞。ROS水平的测量揭示采用肽A的处理对shNox1转导的细胞中ROS稳态水平没有作用，因此证明肽A以非常高(接近100％)的有效性和特异性阻断Nox1依赖性的ROS生成(图3B)。此外，在采用或未采用肽A处理的shCtrl和shNox1转导的细胞中测量NADPH氧化酶活性(图3C)。在shNox1转导的细胞、肽A处理的细胞和采用肽A处理的shNox1转导的细胞中发现NADPH氧化酶活性同样降低，因此说明了肽A阻断Nox1激活的有效性和特异性。
实施例1——Nox1抑制剂肽的体内评估
为了评估Nox1抑制剂肽A的光保护作用，首先检验该肽是否对小鼠和人角质形成细胞中Nox1诱导的ROS生成具有抑制作用(图4)。结果表明，在小鼠和人角质形成细胞中，肽A对Nox1诱导的ROS生成和Nox活性具有类似的抑制作用。
为了检验肽A对小鼠皮肤中Nox1活性的作用，采用不同剂量的肽A局部处理SKH-1小鼠(图5A)。结果表明，当以3和12mg/kg给予肽A时，肽A有效抑制Nox活性最长达3天。然后测试肽A对UVB照射的小鼠的作用(图5B)。结果表明，在照射前10分钟采用3和12mg/kg肽A的局部处理在小鼠中有效地阻断UVB诱导的Nox激活。
为了检验肽A的光保护作用，使用SKH-1无毛小鼠测量肽A给药对UVB诱导的鳞状细胞癌(SCC)诱导的作用，所述SKH-1无毛小鼠是用于研究发生皮肤肿瘤(包括良性乳头状瘤和恶性SCC)的光致癌的定义明确的鼠模型。通过这些小鼠中UVB诱导的致癌作用和人皮肤中UV致癌作用通路之间的显著相似性来说明此模型的有效性。SKH-1无毛小鼠已在用于长期UVB照射之后的皮肤肿瘤发生的剂量、时间进程和作用谱方面产生了非常有价值的数据。在此研究中，每周给予肽A(3mg/kg)3次，并且在各次UVB暴露之前10分钟给予。结果表明，采用肽A的处理分别使肿瘤数量和肿瘤大小减少2.3和2.9倍(图6A和6B)。此外，在肽A处理的小鼠中57％的肿瘤体积小于5mm3，相比之下，采用对照肽C处理的小鼠中仅有8％的肿瘤体积小于5mm3(图6C)。
在小鼠肿瘤中NADPH氧化酶活性的测量表明肽A在抑制Nox活性方面的显著有效性(图7)。与赋形剂(vehicle)处理的小鼠相比，从肽A处理的小鼠中分离出的非荷瘤皮肤和肿瘤中NADPH氧化酶活性分别降低70％和54％(图7)。
实施例2——Nox1抑制剂肽在癌症治疗中的作用
表6
实施例2.1：对癌细胞系的体外作用
在表6中列出的不同细胞系上评估Nox1抑制的作用。比较未处理的细胞和采用Nox1抑制剂肽处理的细胞之间的细胞增殖、细胞周期进展和细胞凋亡。
实施例2.2：细胞向NOD/SCID小鼠的异种移植
对细胞进行胰蛋白酶处理，在DPBS中冲洗，并重新悬浮于含25％基质胶(BD Biosciences)的DPBS中。将2×106个细胞皮下注射于6-8周龄NOD/SCID小鼠(The Jackson Laboratory)中。对于每种细胞系，将小鼠分成两组：一组用赋形剂(vehicle)处理，另一组用Nox1抑制剂肽处理。在最长达2个月的时间内监测肿瘤形成和肿瘤生长。将每种肿瘤解剖、测量、固定于4％低聚甲醛中、包埋于石蜡中，并处理用于H&E染色。评估增殖率和细胞凋亡率。
实施例2.3：小鼠模型
使用以下模型测试Nox1抑制剂肽对皮肤肿瘤的作用：Patch+/-小鼠中自发性和UVB诱导的BCC；SKH-1小鼠中UVB诱导的SCC；BRAF小鼠中自发性黑色素瘤形成。对于每种模型，将小鼠分成两组：一组用赋形剂(vehicle)处理，另一组用Nox1抑制剂肽处理。
实施例3——Nox1抑制剂肽对炎性和自身免疫疾病的作用
表7
实施例3.1：体外作用
在关节炎上检测Nox1抑制剂肽，在Nox1抑制剂肽存在和不存在时激活来自周围血液淋巴细胞(PBL)的巨噬细胞。检测不同炎症介质(TNF-a、IL-6、IL-1β、IL-8、IL-10)的分泌。
通过评估存在和不存在Nox1抑制剂肽时IgE-DNP诱导的炎症反应来测试Nox1抑制剂肽对哮喘的作用。
实施例3.2：体内作用
采用不同剂量的Nox1抑制剂肽处理关节炎的大鼠模型以评估肽对临床评分的改善和骨组织破坏的预防。
此外，在存在和不存在Nox1抑制剂肽时测试Nox1抑制剂肽在哮喘和大鼠耳超敏反应中的有效性。
实施例4——Nox1抑制剂肽对血管发生的作用
表8
为评估Nox1抑制剂肽对正常血管发生的体外作用，测试了使用HUVEC的内皮细胞迁移和管状结构形成。
为评估Nox1抑制剂肽对正常血管发生的体内作用，检验采用赋形剂(vehicle)或Nox1抑制剂肽处理的C57BL/6和SKH-1小鼠模型中的皮肤血管发生。
为评估Nox1抑制剂肽对肿瘤血管发生的作用，可使用基质胶血管发生测定和异种移植模型。将表6中所列出的多种细胞系注入小鼠中，然后在采用赋形剂(vehicle)和Nox1抑制剂肽处理的小鼠之间比较血管发生。
实施例5——Nox1抑制剂肽对血管疾病和心血管疾病的作用
表9
在存在和不存在Nox1抑制剂肽时测试Nox1抑制剂肽对血管瘤——通过鼠多瘤病毒中间T抗原(PymT)进行的内皮细胞转化——的作用。
在存在和不存在Nox1抑制剂肽时评估Nox1抑制剂肽对高血压——输注血管紧张素II之后的高血压诱导——的作用。
实施例6——Nox1抑制剂肽对神经变性疾病的作用
表10
为评估Nox1抑制剂肽对帕金森病和阿尔茨海默病的作用，使用通过iPS技术的衍生自皮肤细胞的神经元细胞。还测试了Nox1抑制剂肽对来自患者和健康皮肤的神经元细胞中ROS水平的作用。
评估Nox1抑制剂肽对多发性硬化——实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的小鼠模型——的作用。实际上使用了SJL小鼠中PLP139-151肽诱导的EAE模型。
实施例7——Nox1抑制剂对皮肤疾病的作用
表11
在存在和不存在Nox1抑制剂肽时评估Nox1抑制剂肽对通过IgE诱导激活的角质形成细胞的特应性皮炎、炎症介质分泌的作用。还测试了在存在和不存在Nox1抑制剂肽时IgE诱导的耳超敏反应。
为评估Nox1抑制剂肽对白癜风的作用，可使用重建的表皮和原代黑色素细胞来测试黑色素细胞脱附。
最后，在原代角质形成细胞和重建的表皮上测试了Nox1抑制剂肽的抗衰老作用。在采用赋形剂(vehicle)或Nox1抑制剂肽处理的细胞之间比较分化和衰老标记物。
实施例8——Nox1抑制剂肽对皮肤衰老的作用
为评估Nox1抑制剂肽A(SEQ ID NO:41)的抗衰老作用，首先评估XPC缺陷小鼠中的加速衰老。为此，已在4月龄(年轻)和1.5岁龄(年老)XPC健全和缺陷小鼠(分别为XPC+/+和XPC-/-)中评估了与早老综合征有关的核纤层蛋白A的截短版本早衰蛋白的表达(图9A和9B)。结果表明，早衰蛋白水平随年龄而升高，并且其在XPC-/-小鼠中的表达比在野生型小鼠中更高。
为检验这种表型是否与NADPH氧化酶的过度激活相关，首先在小鼠皮肤中测量NADPH氧化酶的活性(图10A)。结果表明，NOX活性随年龄而升高，并且其在XPC-/-小鼠中比在野生型小鼠中更高。由于若干研究揭示出线粒体和线粒体DNA(mtDNA)随着衰老的广谱改变，包括线粒体结构的瓦解增加、线粒体氧化磷酸化(OXPHOS)功能的衰退和mtDNA突变的积累，之后在年轻和年老的XPC+/+和XPC-/-小鼠之间比较OXPHOS蛋白质的表达水平(图10B)。结果表明，与年轻的野生型小鼠相比，年老的野生型小鼠中复合体I、II、III的表达显著降低。此外，这些复合体在年轻的XPC-/-小鼠中的表达水平和在年老的野生型小鼠中一样低，这与XPC-/-小鼠的过早衰老相关。
为研究NADPH氧化酶活性对XPC缺陷小鼠中的过早衰老的作用，已采用Nox1抑制剂肽或赋形剂(vehicle)处理了1月龄XPC+/+和XPC-/-小鼠，在3个月内每周处理3次。然后评估鼠表皮细胞中早衰蛋白表达(图11)、OXPHOS蛋白质表达(图12)和代谢特征。结果表明，对Nox1活性的抑制减少了XPC缺陷小鼠中的加速衰老。事实上，Nox1抑制阻断了早衰蛋白的蛋白质表达的增加(图11)并且阻止OXPHOS复合体I、II和III的表达的降低(图12)。为了总体了解Nox1抑制剂肽对XPC敲低(knockdown)诱导的代谢改变的作用，已使用了蛋白质组学方法。结果表明，戊糖磷酸途径、TCA循环、线粒体OXPHOS和脂肪酸β-氧化中所涉及的若干蛋白质的表达显著降低。采用Nox1抑制剂肽处理小鼠消除了XPC缺陷对代谢改变的作用。
已采用如SEQ ID NO:2中所示的Nox1抑制剂肽进行了这些实验并获得相同的结果。
这些结果一起证明了，Nox1抑制剂肽A以及如SEQ ID NO:2中所示的Nox1抑制剂肽能够阻断XPC缺陷诱导的过早衰老。

Claims (22)

1.一种长度为7至35个氨基酸的肽，其包括以下通式的一部分：X1-P-X2-X3-P-X4-R(SEQ ID NO：1)，其中
X1是A、P或Q；
X2是P、T、V、A、S、C、M或K；
X3是L、I、V或A；以及
X4是T、V、S、A或M，
其用于预防和/或治疗与Nox1活性和/或活性氧簇产生增加相关的病理学病症或疾病的方法。
2.权利要求1的方法所使用的肽，其中所述肽或部分任选地为下表1中的任何以下序列或包括下表1中的任何以下序列：
表1：
PPTVPTR(SEQ ID NO：2) PPSVPTR(SEQ ID NO：3) PPMVPTR(SEQ ID NO：4) PPCVPTR(SEQ ID NO：5) PPPVPTR(SEQ ID NO：6) PPAVPTR(SEQ ID NO：7) PPVVPTR(SEQ ID NO：8) PPTVPSR(SEQ ID NO：9) PPTVPMR(SEQ ID NO：10) PPTVPVR(SEQ ID NO：11) PPTVPAR(SEQ ID NO：12) QPTAPTR(SEQ ID NO：13) PPTLPTR(SEQ ID NO：14) PPTIPTR(SEQ ID NO：15) PPTAPTR(SEQ ID NO：16) PPKVPTR(SEQ ID NO：17) QPTVPTR(SEQ ID NO：18) APTVPTR(SEQ ID NO：19)
。
3.前述权利要求中任一项所使用的肽，所述肽是通过共价键或非共价键缀合至细胞穿透肽或增加所述肽在细胞中积累的试剂，其中任选地所述细胞穿透肽形成所述肽的序列的一部分。
4.权利要求3所使用的肽，其中所述细胞穿透肽选自具有序列RRRRRRRRR(SEQ ID NO：46)的多聚精氨酸标签、衍生自氨肽酶(CD13)N配体的NGR肽(CNGRCG：SEQ ID NO：47)或触角足前导肽(CT)(KKWKMRRNQFWVKVQRG：SEQ ID NO：48)、Bcl-2结合肽(癸酰-KNLWAAQRYGRELRRMSDEFEGSFKGL：SEQ ID NO：49)、tat序列(RKKRRQRRR：SEQ ID NO：50)、蟾蜍抗菌肽(TRSSRAGLQFPVGRVHRLLRK：SEQ ID NO：51)、人嗜T淋巴细胞病毒(HTLV)II型Rex的肽片段(TRRQRTRRARRNR：SEQ ID NO：52)、脂膜转位肽(KKAAAVLLPVLLAAP：SEQ ID NO：53)、吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)的NRP-1靶向肽(RPARPAR：SEQ ID NO：54)和穿透素(RQIKIWFQNRRMKWKKGG：SEQ ID NO：55)。
5.前述权利要求中任一项所使用的肽，所述肽具有序列tat-PPTVPTR(SEQ ID NO：39)或序列(R)9-PPTVPTR(SEQ ID NO：40)。
6.一种组合物，其包括治疗有效量的权利要求1或5中任一项的肽。
7.一种药物组合物，其包括权利要求6的组合物以及一种或多种药学上可接受的的载体。
8.权利要求1-5中任一项的肽，或权利要求6或7的组合物，用于治疗和/或预防血管或心血管疾病、癌症、与UV辐射相关的病症、呼吸系统疾病、神经变性疾病、炎性疾病或胃肠疾病的方法，和/或其中所述肽用于抗衰老或作为光保护试剂。
9.权利要求8所使用的肽或组合物，其中所述疾病选自血管发生依赖性疾病、皮肤疾病、过敏和自身免疫疾病、血液疾病、肌肉疾病、骨关节疾病、胃肠疾病和与受损的代谢相关的疾病。
10.用于权利要求8的肽或组合物，其中所述癌症是皮肤癌、恶变前皮肤损伤、鳞状细胞癌、结肠癌、结肠腺癌、前列腺癌、白血病、SMP、成神经细胞瘤、神经节瘤、良性或恶性乳头状瘤。
11.权利要求1-5中任一项的肽，或权利要求6或7的组合物，用于治疗和/或预防皮肤疾病、UV皮肤损伤、由衰老导致的皮肤疾病、ROS诱导的皮肤损伤、过早衰老、UV(UV A或UV B)暴露后的皮肤肿瘤发生或由任何产物(例如导致ROS增加或导致炎症的产物)导致的皮肤损伤的方法。
12.权利要求1-5中任一项的肽，或权利要求6或7的组合物，其中NADPH氧化酶1(Nox1)活性降低至少20％、或至少30％、或至少35％、40％、45％、50％、54％、55％、56％、57％、58％、59％或60％，和/或其中所述肽选择性降低和/或抑制NADPH氧化酶1(Nox1)活性。
13.权利要求1-5中任一项的肽，或权利要求6或7的组合物，用于抵御UV辐射的保护方法或用于增强对UVA和UVB两种射线的光保护的方法，其包括将有效量的所述肽或所述组合物给予或施用到受试者的皮肤。
14.权利要求13的肽或组合物，其中所述受试者易于处于因长期UVA和UVB暴露而导致的皮肤癌的风险。
15.权利要求1-5中任一项的肽，或权利要求6或7的组合物，用于治疗和/或修复和/或护理受试者的皮肤、粘膜、头皮和/或毛发的方法。
16.权利要求1-5中任一项的肽，或权利要求6或7的组合物，用于减少、推迟和/或预防衰老、光老化和因过早衰老导致的皮肤疾病的体征的方法，其包括将所述肽或组合物给予或施用到皮肤。
17.权利要求1-5中任一项的肽，或权利要求6或7的组合物，用于(i)护理、修复和保护皮肤、粘膜、头皮和/或毛发以抵御UV辐射、UV损伤、衰老，或者抵御任何例如通过ROS增加或炎症增加而诱导应激、炎症、皮肤损伤的试剂；或(ii)减少、推迟和/或预防衰老、光老化和因过早衰老导致的皮肤疾病的体征的方法。
18.一种用于在有需要的受试者中降低活性氧簇的水平和/或抑制活性氧簇的产生，和/或选择性降低和/或抑制NADPH氧化酶1(Nox1)活性的方法，其包括给予权利要求1-5中任一项所限定的肽或权利要求6或7所限定的组合物。
19.权利要求18的方法，其中NADPH氧化酶1(Nox1)活性被选择性降低至少20％、或至少30％、或至少35％、40％、45％、50％、54％、55％、56％、57％、58％、59％或60％。
20.一种用于提供抵御UV辐射的保护或增强针对UVA和UVB两种射线的光保护的方法，其包括将有效量的权利要求1-5中任一项所限定的肽或权利要求6或7所限定的组合物给予或施用到受试者的皮肤。
21.一种治疗和/或修复和/或护理受试者的皮肤、粘膜、头皮和/或毛发的方法，其包括将权利要求1-5中任一项所限定的肽或权利要求6或7所限定的组合物给予或施用到皮肤。
22.一种减少、推迟和/或预防衰老、光老化和因过早衰老导致的皮肤疾病的体征的方法，其包括将权利要求1-5中任一项所限定的肽或权利要求6或7所限定的组合物给予或施用到皮肤。
CN201480003978.1A 2013-01-03 2014-01-03 选择性Nox1抑制剂肽及其用途 Pending CN105007933A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP13150187.6A EP2752196A1 (en) 2013-01-03 2013-01-03 Selective nox-1 inhibitor peptides and uses thereof
EP13150187.6 2013-01-03
PCT/EP2014/050063 WO2014106649A1 (en) 2013-01-03 2014-01-03 Selective nox-1 inhibitor peptides and uses thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN105007933A true CN105007933A (zh) 2015-10-28

Family

ID=47458818

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201480003978.1A Pending CN105007933A (zh) 2013-01-03 2014-01-03 选择性Nox1抑制剂肽及其用途

Country Status (14)

Country Link
US (2) US20170000842A9 (zh)
EP (2) EP2752196A1 (zh)
JP (1) JP6488237B2 (zh)
CN (1) CN105007933A (zh)
AU (1) AU2014204309B2 (zh)
BR (1) BR112015015242B1 (zh)
CA (1) CA2894576A1 (zh)
DK (1) DK2941268T3 (zh)
HU (1) HUE050715T2 (zh)
IL (1) IL239762B (zh)
MA (1) MA38296B2 (zh)
RU (1) RU2699726C2 (zh)
TN (1) TN2015000295A1 (zh)
WO (1) WO2014106649A1 (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113773394A (zh) * 2020-06-10 2021-12-10 山东大学 一种融合肽及在制备抗肿瘤制剂中的应用
EP4140488A4 (en) * 2020-04-20 2024-05-15 Kyungpook Nat Univ Ind Academic Coop Found COMPOSITION FOR PREVENTING OR TREATING ISCHEMIA-REPERFUSION INJURY COMPRISING A NADPH OXIDASE 1 INHIBITOR AS ACTIVE SUBSTANCE

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3034500A1 (en) 2014-12-17 2016-06-22 Genkyotex Sa Amido thiazole derivatives as NADPH oxidase inhibitors
JP6472693B2 (ja) * 2015-03-24 2019-02-20 株式会社荏原製作所 基板処理装置
US20170110622A1 (en) * 2015-10-14 2017-04-20 Solarcity Corporation Apparatus for electroplating of electrodes on photovoltaic structures
WO2019023263A1 (en) * 2017-07-25 2019-01-31 Immune Pharmaceuticals, Inc. METHODS AND COMPOSITIONS FOR TREATING TUMORS COMPRISING A BCR-ABL1 FUSION GENE
EP3628669A1 (en) 2018-09-28 2020-04-01 GenKyoTex Suisse SA Novel compounds as nadph oxidase inhibitors
BR112021005870B1 (pt) * 2018-10-05 2024-01-09 Pfizer Inc Inibidores de pde4 contendo boro

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5593966A (en) * 1989-03-31 1997-01-14 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Peptide derivatives of cytochrome b558 and their use as medicaments
US5726155A (en) * 1993-08-02 1998-03-10 The Scripps Research Institute Regulation of oxidative burst using LMWG-derived peptides and analogs
GB2285047B (en) * 1993-12-21 1998-04-15 Yamanouchi U K Ltd Polypeptides which inhibit the NADPH oxidase complex
EP0750630A4 (en) * 1994-03-11 1998-01-07 Ariad Pharma Inc METHOD AND MATERIALS FOR IDENTIFYING INHIBITORS OF MOLECULAR INTERACTIONS, WHICH ARE BROUGHT BY THE SH3 DOMAINS
WO1996003649A1 (en) * 1994-07-22 1996-02-08 The University Of North Carolina At Chapel Hill Src SH3 BINDING PEPTIDES AND METHODS OF ISOLATING AND USING SAME
US6184205B1 (en) * 1994-07-22 2001-02-06 University Of North Carolina At Chapel Hill GRB2 SH3 binding peptides and methods of isolating and using same
US6713605B1 (en) * 1996-04-10 2004-03-30 Kansas State University Research Foundation Synthetic peptides that inhibit leukocyte superoxide anion production and/or attract leukocytes
US6551795B1 (en) * 1998-02-18 2003-04-22 Genome Therapeutics Corporation Nucleic acid and amino acid sequences relating to pseudomonas aeruginosa for diagnostics and therapeutics
JP2005168329A (ja) * 2003-12-08 2005-06-30 Hokkaido Univ Ｎａｄｐｈオキシダーゼ活性を阻害するポリペプチド
US7582606B2 (en) * 2005-11-03 2009-09-01 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Nadph oxidase cytosolic cofactor mutant
WO2008109833A2 (en) * 2007-03-07 2008-09-12 University Of Florida Research Foundation, Inc. Polynucleotides and polypeptides identified by iviat screening and methods of use
CA2719833A1 (en) * 2008-03-28 2009-10-01 Nu Skin International, Inc. Compositions comprising anrnox-inhibitors for the inhibition of reactive oxygen species
WO2013074816A2 (en) 2011-11-15 2013-05-23 University Of Pittsburgh - Of The Commonwealth System Of Higher Education Novel inhibitors of nox1

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP4140488A4 (en) * 2020-04-20 2024-05-15 Kyungpook Nat Univ Ind Academic Coop Found COMPOSITION FOR PREVENTING OR TREATING ISCHEMIA-REPERFUSION INJURY COMPRISING A NADPH OXIDASE 1 INHIBITOR AS ACTIVE SUBSTANCE
CN113773394A (zh) * 2020-06-10 2021-12-10 山东大学 一种融合肽及在制备抗肿瘤制剂中的应用
CN113773394B (zh) * 2020-06-10 2023-10-27 山东大学 一种融合肽及在制备抗肿瘤制剂中的应用

Also Published As

Publication number Publication date
BR112015015242B1 (pt) 2020-10-27
US10517919B2 (en) 2019-12-31
US20170340697A1 (en) 2017-11-30
EP2941268A1 (en) 2015-11-11
IL239762B (en) 2020-04-30
JP2016505612A (ja) 2016-02-25
HUE050715T2 (hu) 2021-01-28
AU2014204309B2 (en) 2018-03-01
AU2014204309A1 (en) 2015-07-09
WO2014106649A1 (en) 2014-07-10
EP2941268B1 (en) 2020-06-24
IL239762A0 (en) 2015-08-31
RU2015132087A (ru) 2017-02-06
DK2941268T3 (da) 2020-09-28
US20170000842A9 (en) 2017-01-05
US20160030503A1 (en) 2016-02-04
JP6488237B2 (ja) 2019-03-20
TN2015000295A1 (en) 2016-10-03
EP2752196A1 (en) 2014-07-09
MA38296B2 (fr) 2019-10-31
CA2894576A1 (en) 2014-07-10
RU2699726C2 (ru) 2019-09-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN105007933A (zh) 选择性Nox1抑制剂肽及其用途
US9364413B2 (en) Method for anti-aging treatment by surfactin in cosmetics via enhancing sirtuin
JP2014159443A (ja) 環状ペプチドを含む組成物および使用方法
TW200918099A (en) Drug carriers
WO2016049867A1 (zh) 以外源性线粒体为有效成份的组合物、其用途及修复细胞的方法
EP3548058B1 (en) Compositions comprising peptide wkdeagkplvk
CN109248310B (zh) 利用θ-防御素的炎性蛋白酶的阻断
US7306944B2 (en) Advanced cell-transducing transport domain-target protein-transport domain fusion protein and uses thereof
JP2015028036A (ja) Ｌｏｘタンパク質とｎｒａｇｅタンパク質との通常の共発現と相互作用を復元させる物質
Zhang et al. Enhanced glioma-targeting and stability of LGICP peptide coupled with stabilized peptide DA7R
TWI426082B (zh) 癌症轉移的抑制
CN102498127A (zh) 用于治疗氧化应激相关障碍的肽类
Deng et al. Synthesis and pharmacological evaluation of a novel synthetic peptide CWHTH based on the Styela clava-derived natural peptide LWHTH with improved antioxidant, hepatoprotective and angiotensin converting enzyme inhibitory activities
US20110107443A1 (en) Novel protein transduction domains derived from secretory leukocyte protease inhibitor
US10793601B2 (en) Therapeutic spalt-like transcription factor 4 (SALL4) peptide
TWI672147B (zh) 以外源性粒線體爲有效成份之組合物、其用途及修復細胞之方法
EP2963053A1 (en) Peptides for promoting angiogenesis and an use thereof
WO2014015338A1 (en) Acetylated crystallin polypeptides and mimetics thereof as therapeutics agents
ES2281278B1 (es) Empleo de un polipeptido que comprende el dominio c-terminal de la cadena pesada de la toxina tetanica en el tratamiento del parkinsonismo.
CN109666064A (zh) SALL4-RBBp4复合物阻断多肽和衍生抗肿瘤多肽及其应用
CN104507957B (zh) 用于治疗关节病的羟基他汀衍生物
JP5940542B2 (ja) 細胞導入ペプチドと皮膚導入促進剤とを組み合わせた皮膚導入システムおよび美白剤

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20151028