BR112015000615B1 - Purinas macrocíclicas para o tratamento de infecções virais e composição farmacêutica que as compreende - Google Patents

Abstract

PURINAS MACROCÍCLICAS PARA O TRATAMENTO DE INFECÇÕES VIRAIS. A presente invenção refere-se aos derivados purínicos macrocíclicos apresentando fórmula (I) processos para sua preparação, composições farmacêuticas, e seu uso no tratamento de infecções virais.

Description

[001] A presente invenção refere-se a derivados purínicos macrocíclicos, processos para sua preparação, composições farmacêuticas, e seu uso no tratamento de infecções virais.

[002] A presente invenção refere-se ao uso de derivados purínicos macrocíclicos no tratamento de infecções virais, distúrbios imunológicos ou inflamatórios, envolvendo a modulação, ou agonismo, de receptores do tipo Toll (TLRs do inglês "toll-like-receptors"). Os receptores do tipo Toll são proteínas transmembrânicas primárias caracterizadas por um domínio extracelular rico em leucina e uma extensão citoplasmática que contém uma região conservada. O sistema imunológico inato pode reconhecer padrões moleculares associados a patógenos através desses TLRs expressos na superfície celular de certos tipos de células imunológicas. O reconhecimento de patógenos estranhos ativa a produção de citocinas e um aumento da expressão de moléculas coestimulatórias em fagócitos. Isso resulta na modulação do comportamento de linfócitos T.

[003] Foi estimado que a maioria das espécies de mamíferos tem entre dez e quinze tipos de receptores do tipo Toll. Treze TLRs (denominados TLR1 a TLR13) foram identificados em humanos e camundongos juntos, e formas equivalentes de vários desses foram encontradas em outras espécies de mamíferos. Entretanto, equivalentes de certos TLRs encontrados em humanos não estão presentes em todos os mamíferos. Por exemplo, um gene que codifica uma proteína análoga a TLR10 em humanos está presente em camundongos mas parece ter sido danificado em alguma época no passado por um retrovírus. Por outro lado, camundongos expressam os TLRs 11, 12 e 13, nenhum dos quais é representado nos humanos. Outros mamíferos podem expressar TLRs que não são encontrados nos humanos. Outras espécies que não incluem os mamíferos podem ter TLRs distintos dos mamíferos, como demonstrado por TLR14, que é encontrado no peixe-balão Takifugu. Isso pode complicar o processo de uso de animais experimentais como modelos da imunidade inata humana.

[004] Para revisões detalhadas sobre receptores do tipo Toll, ver os seguintes artigos de revistas. Hoffmann, J.A., Nature, 426, p33-38, 2003; Akira, S., Takeda, K., e Kaisho, T., Annual Rev. Immunology, 21, p335-376, 2003; Ulevitch, R. J., Nature Reviews: Immunology, 4, p512520, 2004.

[005] Compostos que indicam atividade em receptores do tipo Toll foram previamente descritos tal como derivados purínicos em WO 2006/117670, derivados de adenina em WO 98/01448 e WO 99/28321, e pirimidinas em WO 2009/067081.

[006] Todavia, existe uma grande necessidade de moduladores de receptores do tipo Toll novos que possuam uma seletividade preferida, maior potência, maior estabilidade metabólica e um perfil de segurança aperfeiçoado em comparação aos compostos do estado da técnica.

[007] No tratamento de certas infecções virais, podem ser administradas injeções regulares de interferon (IFN-alfa), como é o caso para o vírus da hepatite C (HCV). Para mais informações consultar Fried et. al. Peginterferon-alfa plus ribavirin for chronic hepatitis C virus infection, N Engl J Med 2002; 347: 975-82. Os indutores IFN de pequenas moléculas oralmente disponíveis oferecem as vantagens potenciais de imunogenicidade reduzida e conveniência de administração. Assim, novos indutores IFN são uma nova classe de fármacos potencialmente eficazes para tratar infecções por vírus. Para um exemplo na literatura de um indutor IFN de pequena molécula com um efeito antiviral ver De Clercq, E.; Descamps, J.; De Somer, P. Science 1978, 200, 563-565.

[008] IFN-alfa é também dado em combinação com outros fármacos no tratamento de certos tipos de câncer (ver Eur. J. Cancer 46, 2849-57, e Cancer Res. 1992, 52, 1056 para exemplos). Os agonistas de TLR 7/8 são também de interesse como adjuvantes de vacina devido à sua capacidade para induzir resposta de Th1 pronunciada (ver Hum. Vaccines 2010, 6, 1-14, e Hum. Vaccines 2009, 5, 381-394 para exemplos).

[009] De acordo com a presente invenção, é proporcionado um composto da fórmula (I)

[0010] e seus sais farmaceuticamente aceitáveis, em que

[0011] X é oxigênio, nitrogênio, enxofre ou

[0012] Y representa um anel aromático ou anel heterocíclico compreendendo pelo menos um nitrogênio, opcionalmente substituído por um ou mais substituintes independentemente selecionado de C1- 6alquila, C1-4alcoxi, trifluorometila ou halogênio,

[0013] Z representa alquila C1-10 saturada ou insaturada opcionalmente substituída por uma alquila ou alquil-hidroxila;

[0014] ou Z representa C1-6alquila -NH-C(O)- C1-6alquila- ou C1- 6alquila -NH-C(O)- C1-6alquil-O-;

[0015] ou Z representa C1-10alquil -O- em que a referida alquila é saturada ou insaturada e pode ser opcionalmente substituída por uma alquila ou alquil-hidroxila,

[0016] ou Z representa C1-6alquila-O-C1-6alquila- em que a referida alquila é saturada ou insaturada e pode ser opcionalmente substituída por uma alquila ou alquil-hidroxila,

[0017] ou Z representa C1-6alquila-O-C1-6alquil -O- em que a referida alquila é saturada ou insaturada e pode ser opcionalmente substituída por uma alquila ou alquil-hidroxila,

[0018] Parte da invenção são também os compostos de fórmula (I) em que

[0019] X é O, N-C1-4alquila, NH, S ou

[0020] Y representa um anel aromático ou anel heterocíclico compreendendo pelo menos um nitrogênio opcionalmente substituído por um ou mais substituintes independentemente selecionados de C1- 6alquila, C1-4alcoxi, trifluorometila, halogênio, C(O)NH- C1-6alquila, NH(CO)-C1-6alquila, CN, NH-C1-6alquila, N-(C1-6alquila)2, C(O)-C1- 6alquila ou OH,

[0021] Z representa alquila C1-10 saturada ou insaturada opcionalmente substituída por uma alquila ou alquil-hidroxila ou OH;

[0022] ou Z representa C1-6alquila -NH-C(O)- C1-6alquila- ou C1- 6alquila -NH-C(O)- C1-6alquil-O-;

[0023] ou Z representa Ci-6alquila -NCH3-C(O)- Ci-6alquila- ou Ci— 6alquila -NCH3-C(O)- Ci-βalquil -O-;

[0024] ou Z representa C1-6alquila -C(O)-NH- C1-6alquila- ou CI- 6alquila -C(O)-NH- Ci-6alquil -O-;

[0025] ou Z representa C1-6alquila -C(O)-NCH3- C1-6alquila- ou C1- 6alquila -C(O)-NCHs- Ci-6alquila -O-;

[0026] ou Z representa C1-10alquila-O- em que a referida alquila é saturada ou insaturada e pode ser opcionalmente substituída por uma alquila ou alquil-hidroxila ou OH;

[0027] ou Z representa C1-10alquila-NH- em que a referida alquila é saturada ou insaturada e pode ser opcionalmente substituída por uma alquila ou alquil-hidroxila ou OH;

[0028] ou Z representa C1-6alquila-O-C1-6alquila- em que a referida alquila é saturada ou insaturada e pode ser opcionalmente substituída por uma alquila ou alquil-hidroxila ou OH;

[0029] ou Z representa C1-6alquila-O-C1-6alquila-O- em que a referida alquila é saturada ou insaturada e pode ser opcionalmente substituída por uma alquila ou alquil-hidroxila ou OH;

[0030] Compostos preferenciais tendo uma das seguintes fórmulas de acordo com a invenção foram selecionados do grupo de:

ou

[0031] Outros compostos preferenciais de acordo com a invenção são compostos com os seguintes números (como mencionado nas Tabelas 1 e 2, respectivamente): 32, 45, 60, 64, 65, 68, 75, 87, 90, 91 e 92.

[0032] Parte da invenção é também uma composição farmacêutica compreendendo um composto da fórmula (I) ou um seu sal, solvato ou polimorfo farmaceuticamente aceitável em conjunto com um ou mais excipientes, diluentes ou veículos farmaceuticamente aceitáveis.

[0033] Além disso, à invenção pertence um composto da fórmula (I) ou um seu sal, solvato ou polimorfo farmaceuticamente aceitável ou uma composição farmacêutica mencionada acima para uso como um medicamento.

[0034] A invenção também se refere a um composto da fórmula (I) ou um seu sal, solvato ou polimorfo farmaceuticamente aceitável ou uma composição farmacêutica mencionada acima para uso no tratamento de um distúrbio que envolve a modulação do TLR7.

[0035] O termo "alquila" se refere a um hidrocarboneto alifático principalmente saturado de cadeia linear ou ramificada (mas em compostos específicos de acordo com a invenção sendo insaturado) contendo o número especificado de átomos de carbono.

[0036] O termo "halogênio" se refere a flúor, cloro, bromo ou iodo.

[0037] O termo "alcóxi" se refere a um grupo alquila (cadeia de carbono e hidrogênio) ligado por ligação simples a oxigênio como, por exemplo, um grupo metóxi ou etóxi.

[0038] Os sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos da fórmula (I) incluem seus sais de adição de ácido e básicos. Os sais de adição de ácido apropriados são formados a partir de ácidos que formam sais que não são tóxicos. Os sais de adição de ácido apropriados são formados a partir de ácidos que formam sais que não são tóxicos.

[0039] Os compostos da invenção podem também existir nas formas solvatadas e não solvatadas. O termo "solvato" é usado no presente documento para descrever um complexo molecular compreendendo o composto da invenção e uma ou mais moléculas de solvente farmaceuticamente aceitável como, por exemplo, etanol.

[0040] O termo "polimorfo" se refere à capacidade do composto da invenção de existir em mais de uma forma ou estrutura cristalina.

[0041] Os compostos da invenção podem estar presentes na forma denominada "tautômero(s)", se referindo a isômeros de compostos orgânicos que se interconvertem facilmente por uma reação química denominada tautomeria. Esta reação resulta na migração formal de um próton ou átomo de hidrogênio, acompanhada por uma troca entre uma ligação simples e uma ligação dupla adjacente.

[0042] Os compostos da presente invenção podem ser administrados como produtos cristalinos ou amorfos. Podem ser obtidos por exemplo como tampões sólidos, pós ou filmes por métodos como precipitação, cristalização, liofilização, secagem por pulverização ou secagem por evaporação. Podem ser administrados isoladamente ou em combinação com um ou mais dos outros compostos da invenção ou em combinação com uma ou mais de outras drogas. Geralmente serão administrados na forma de uma formulação em combinação com um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis. O termo "excipiente" é usado no presente documento para descrever qualquer ingrediente que não seja o(s) composto(s) da invenção. A escolha do excipiente depende muito de fatores como o modo particular de administração, o efeito do excipiente na solubilidade e estabilidade, e a natureza da forma de dosagem.

[0043] Os compostos da presente invenção ou qualquer subgrupo desses podem ser formulados em várias formas farmacêuticas para a finalidade de administração. Como composições apropriadas podem ser citadas todas as composições normalmente utilizadas para a administração sistêmica de fármacos. Para preparar as composições farmacêuticas desta invenção, uma quantidade eficaz do composto particular, opcionalmente na forma de um sal de adição, como o ingrediente ativo é combinada em mistura íntima com um veículo farmaceuticamente aceitável, que pode tomar uma ampla variedade de formas dependendo da forma de preparação desejada para administração. Estas composições farmacêuticas estão preferencialmente na forma de dosagens unitárias, que são apropriadas, por exemplo, para administração oral, retal ou percutânea. Por exemplo, na preparação das composições na forma de dosagem oral, qualquer um dos meios farmacêuticos usuais pode ser empregue, tal como, por exemplo, água, glicois, óleos, alcoóis e similares no caso de preparações líquidas orais tais como suspensões, xaropes, elixires, emulsões e soluções; ou veículos sólidos tais como amidos, açúcares, caulim, diluentes lubrificantes, ligantes, agentes desintegrantes e similares no caso de pós, pílulas, cápsulas e comprimidos. Devido à sua facilidade na administração, os comprimidos e as cápsulas representam a mais vantajosa forma unitária de dosagem oral, caso em que são obviamente empregues veículos farmacêuticos sólidos. Também estão inclusas preparações em forma sólida que podem ser convertidas, logo antes do uso, em formas líquidas. Nas composições adequadas para administração percutânea, o veículo compreende opcionalmente um agente potencializador da penetração e/ou um agente molhante adequado, opcionalmente combinado com aditivos adequados de qualquer natureza em proporções mínimas, cujos aditivos não introduzem efeitos deletérios significativos na pele. Os referidos aditivos podem facilitar a administração à pele e/ou podem ser úteis para preparação das composições desejadas. Estas composições podem ser administradas de várias maneiras, por exemplo, como um penso transdérmico, como um líquido para aplicação local, como uma pomada. Os compostos da presente invenção também podem ser administrados por inalação ou insuflação por meio de métodos e formulações empregues na técnica de administração por esta via. Assim, em geral os compostos da presente invenção podem ser administrados aos pulmões na forma de uma solução, suspensão ou pó seco.

[0044] É especialmente vantajoso formular as composições farmacêuticas acima mencionadas na forma de dosagem unitária para facilidade de administração e uniformidade de dosagem. A forma de dosagem unitária conforme usada neste documento se refere a unidades fisicamente discretas adequadas como dosagens unitárias, contendo cada unidade uma quantidade pré-determinada de ingrediente ativo calculada de forma a produzir o efeito terapêutico desejado em combinação com o veículo farmacêutico requerido. Exemplos de tais formas de dosagem unitária são comprimidos (incluindo comprimidos sulcados ou revestidos), cápsulas, pílulas, pacotes de pós, bolachas, supositórios, soluções ou suspensões injetáveis e similares, e seus múltiplos segregados.

[0045] Os especialistas no tratamento de doenças infecciosas saberão determinar a quantidade eficaz a partir dos resultados de testes mostrados mais adiante. Em geral é contemplado que uma quantidade diária eficaz seria de 0,01 mg/kg a 50 mg/kg de peso corporal, mais preferencialmente de 0,1 mg/kg a 10 mg/kg de peso corporal. Pode ser apropriado administrar a dose requerida como duas, três, quatro ou mais subdoses em intervalos apropriados durante o dia. Tais subdoses podem ser formuladas na forma de dosagem unitária, por exemplo, contendo 1 a 1000 mg, e em particular 5 a 200 mg de ingrediente ativo por forma de dosagem unitária.

[0046] A dosagem e frequência de administração exatas dependem do composto particular da fórmula (I) usado, da condição particular sendo tratada, da gravidade da condição sendo tratada, da idade, do peso e da condição física geral do paciente particular bem como de outra medicação que o indivíduo possa estar a tomar, como é bem conhecido daqueles especialistas na técnica. Além do mais, é evidente que a quantidade eficaz pode ser baixada ou aumentada dependendo da resposta do sujeito tratado e/ou dependendo da avaliação do médico prescrevendo os compostos da presente invenção. As faixas de quantidade eficaz mencionadas acima são apenas para orientação e não pretendem de nenhuma forma limitar o âmbito ou uso da invenção. ESQUEMA GERAL DA PREPARAÇÃO DE PRODUTOS FINAIS: MÉTODO 1

Síntese do intermediário D-1

[0047] A 10 °C, 3-bromobenzilamina (11,9 g, 63,96 mmol) foi adicionada gota a gota a uma mistura de A1 (10 g, 60,91 mmol) e C1 (125 mg, 0,97 mmol) em EtOH (100 mL). A mistura foi agitada à T.A. por uma noite. 120 mL de NaOH 1N foram adicionados gota a gota e a mistura foi agitada à T.A. durante 1h. O precipitado foi filtrado, lavado com um mínimo de EtOH frio e seco para prover 12,74 g (75% de rendimento) de intermediário D1.

Síntese do intermediário E1

[0048] N-Bromosuccinimida (7,56 g, 42,47 mmol) foi adicionado em porções a uma suspensão de D1 (10,7 g, 38,61 mmol) em THF (100 mL) mantendo a temperatura a 15 °C, e depois a mistura foi agitada a 15 °C durante 10 minutos. A mistura foi derramada em uma solução aquosa de NaHCO3 e EtOAc. As camadas foram decantadas e separadas. A camada orgânica foi seca em MgSO4, foi filtrada e o solvente foi evaporado. O composto bruto foi coletado em CH3CN, o precipitado foi filtrado e seco para prover 7,5 g (55% de rendimento) de uma parte do intermediário E1. O filtrado foi evaporado e purificado por cromatografia sobre sílica gel (Irregular SiOH 20 a 45 μm; fase móvel (99% CH2Cl2, 1% CH3OH). As frações puras foram coletadas e concentrados sob pressão reduzida para prover 2,8 g (20% de rendimento) de uma segunda batelada de intermediário E1.

Síntese do intermediário F1

[0049] Uma mistura de E1 (8,3 g, 23,31 mmol) em ureia (14 g, 233,1 mmol) foi aquecida a 160 °C durante 4h. Foi adicionada novamente ureia (14 g, 233,1 mmol) e a mistura foi agitada a 160 °C durante 2h. A mistura foi resfriada até à T.A., e foi adicionada água. O precipitado foi triturado e filtrado, lavado com água e seco sob vácuo a 60 °C para prover 9,25 g (99% de rendimento) de intermediário F1.

Síntese do intermediário G1

[0050] Uma mistura de F1 (3 g, 7,52 mmol), 4-Bromo-1-buteno (2,29 mL, 22,55 mmol), K2CO3 (3,11 g, 22,55 mmol) em DMF seco (40 mL) foi agitada a 50 °C durante 12h. O solvente foi evaporado. O resíduo foi coletado em EtOAc. A camada orgânica foi lavada com água, seca sobre MgSO4, filtrada e o solvente foi evaporado. O produto bruto foi purificado por cromatografia em flash sobre sílica gel (15 a 40 μm, 50g, CH2Cl2/CH3OH: 98-2). As frações puras foram coletadas e evaporadas até estarem secas para fornecer 1,95 g (rendimento de 57%) do intermediário G1.

Síntese do intermediário H1

[0051] A T.A., metóxido de sódio (solução de 30% em peso em CH3OH) (8,4 mL, 45,24 mmol) foi adicionado gota a gota a uma mistura de G1 (4,1 g, 9,05 mmol) em CH3OH (100 mL). A mistura foi agitada a 60 °C durante 6 horas. A mistura foi vertida para dentro de água. A camada aquosa foi extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com solução salina, seca com MgSO4, filtrada e o solvente foi evaporado para prover 3,8 g (100% de rendimento) de intermediário H1. O composto bruto foi usado diretamente na próxima etapa.

Síntese do intermediário I1

[0052] A reação foi realizada duas vezes em paralelo.

[0053] Uma mistura de H1 (2*1,75 g, 8,66 mmol), aliltri-N-butiltina (2*1,32 mL, 8,66 mmol) e tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0) (2*500 mg, 0,87 mmol) em dioxano (2*17,5 mL) foi agitada a 140 °C durante 1h. A mistura foi refrigerada até à T.A. e foi vertida para dentro de uma solução de água KF (1g/100mL). A mistura foi agitada por 10 minutos à T.A. Foi adicionado EtOAc e a mistura foi filtrada através de um leito de celite®. A celite® foi lavada com EtOAc. As camadas foram decantadas. A camada orgânica foi seca em MgSO4, foi filtrada e o solvente foi evaporado. O produto bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica gel (15 a 40 μm, 120 g, CH2CI2/CH3OH/NH4OH: 98,5/1,5/0,1). As frações puras foram coletadas e concentradas sob pressão reduzida para prover 1,76 g (56% de rendimento) do intermediário I1.

Síntese do intermediário J1

[0054] I1 (950 mg, 2,6 mmol) foi adicionado a CH2Cl2 extra seco (760 mL) e a mistura resultante foi desgasificada fazendo borbulhar N2 na solução por 30min. Catalisador de Grubbs de 2a geração (222 mg, 0,26 mmol) foi adicionado em uma porção e a mistura foi agitada sob fluxo N2 por 24h. O solvente foi evaporado e o produto bruto foi imediatamente purificado por cromatografia flash sobre sílica gel (15 a 40 μm, 10g, CH2Cl2/CH3OH/NH4OH: 98,5/1,5/0,1). As frações puras foram coletadas e concentradas sob pressão reduzida para prover 280 mg de intermediário I1 e 200 mg (23% de rendimento) do intermediário J1 (como uma mistura de dois isômeros E e Z).

Síntese do composto final 1

[0055] Uma mistura de J1 (200 mg, 0,59 mmol) em HCl 6N (2 ml) e dioxano (5 ml) foi agitada à temperatura ambiente durante 16 horas. A mistura foi lavada com EtOAc (15mL) depois a mistura foi alcalinizada a 0 °C com K2CO3 (aparece um precipitado) e foi extraída muitas vezes com EtOAc e CH3OH. A camada orgânica foi seca em MgSO4, foi filtrada e o solvente foi evaporado. O resíduo foi recristalizado a partir de CH3CN, o precipitado foi filtrado e seco para prover 108 mg (56% de rendimento) de composto 1 (mistura de isômeros E/Z 55/45). ESQUEMA GERAL DA PREPARAÇÃO DE PRODUTOS FINAIS: MÉTODO 2

Síntese do intermediário K1

[0056] A mistura de J1 (130 mg, 0,39 mmol), Pd/C (10%) (20 mg, 0,02 mmol) em CH3OH (30 mL) foi hidrogenada sob pressão atmosférica de H2 por 4h. O catalisador foi removido por filtragem através de celite®. A celite® foi lavada com CH3OH. O filtrado foi evaporado para prover 126 mg (96% de rendimento) de intermediário K1, usado como tal na próxima etapa. Síntese do composto final 2

[0057] À temperatura ambiente, uma mistura de K1 (110 mg, 0,32 mmol) em HCl 6N (1 ml) e dioxano (2 ml) foi agitada durante 6 horas. A mistura foi vertida em gelo e neutralizada com NaOH 3N. O precipitado foi filtrado, lavado com água, EtOH depois com éter dietílico e seco para prover 79 mg (75% de rendimento) de composto 2. ESQUEMA GERAL DA PREPARAÇÃO DE PRODUTOS FINAIS: MÉTODO 3

Síntese do intermediário M1

[0058] L1 (3,0 g, 32,23 mmol), 5-Bromo-1-penteno (4,8g mL, 32,23 mmol) e K2CO3 (5,34 g, 38,67 mmol) em DMF (75 mL) foi agitado a 60 °C durante 12h. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi coletado em EtOAc. A camada orgânica foi lavada com água, seca com MgSO4, filtrada e o solvente foi evaporado para prover 4,6 g (89% de rendimento) de intermediário M1 usado como tal na próxima etapa.

Síntese do intermediário N1

[0059] Sob um fluxo N2, sódio (1,42 g, 62,03 mmol) foi dissolvido em EtOH (80 mL) à temperatura ambiente. M1 (2,0 g, 12,41 mmol), E1 (4,42 g, 12,41 mmol) em EtOH (20 mL) foram adicionados gota a gota e a mistura resultante foi agitada a 90 °C por 5h sob um fluxo de N2. O solvente foi evaporado. Adicionaram-se EtOAc e água. A mistura foi extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com solução salina, seca sobre MgSO4, filtrada e o solvente foi evaporado. O produto bruto foi purificado por cromatografia sobre sílica gel (Irregular SiOH 20 a 45 μm; fase móvel (0,5% NH4OH, 94% CH2CI2, 6% CH3OH). As frações puras foram coletadas e concentradas sob pressão reduzida para prover 3,15 g (53% de rendimento) do intermediário N1.

Síntese do intermediário O1

[0060] Uma mistura de N1 (0,50 g, 1,04 mmol), aliltri-N-butiltina (0,32 mL, 1,04 mmol) e tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0) (120 mg, 0,10 mmol) em dioxano (4 mL) foi agitada a 140 °C durante 1h. A mistura foi refrigerada até à T.A. e vertida para dentro de uma solução de água KF (5 g/100mL). A mistura foi agitada por 10 minutos à T.A. Foi adicionado EtOAc e as camadas foram decantadas. A camada orgânica foi lavada com solução salina, seca sobre MgSO4, filtrada e o solvente foi evaporado. O produto bruto foi purificado por cromatografia sobre sílica gel (Irregular SiOH 15 a 40 μm; fase móvel (0,5% NH4OH, 95% CH2Cl2, 5% CH3OH). As frações puras foram coletadas e concentradas sob pressão reduzida para prover 300 mg (65% de rendimento) do intermediário O1.

Síntese do intermediário P1

[0061] O1 (1,80 g, 4,06 mmol) foi adicionado a CH2Cl2 extra seco (1080 mL) e a mistura resultante foi desgasificada fazendo borbulhar N2 na solução por 30min. Catalisador de Grubbs de 2a geração (346 mg, 0,41 mmol) foi adicionado em uma porção e a mistura foi agitada à T.A. sob fluxo de N2 por 24h. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica gel (15 a 40 μm, 120 g, CH2CI2/CH3OH/NH4OH: 96/4/0,5). As frações puras foram coletadas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer 1,47 mg de produto bruto. O resíduo foi purificado por cromatografia de fase reversa em (X-Bridge-C18 5μm 30*150mm), fase móvel (gradiente de 80% tampão NH4HCO3 0,5% pH10, 20% CH3CN para 0% tampão NH4HCO3 0,5% pH10, 100% CH3CN). As frações puras foram coletadas e concentradas sob pressão reduzida para prover 83 mg (5% de rendimento) do intermediário P1 (como uma mistura de dois isômeros E e Z) e 800 mg do intermediário O1.

Síntese do composto final 3

[0062] P1 (40 mg, 0,10 mmol) em HCl 6N (2 ml) e dioxano (2 ml) foi agitado à temperatura ambiente durante 18 horas. A 0 °C, a mistura foi alcalinizada com K2CO3 e extraída com EtOAc e CH3OH. A camada orgânica foi seca em MgSO4, foi filtrada e o solvente foi evaporado. O produto bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica gel (15 a 40 μm, 12 g, CH2Cl2/CH3OH/NH4OH: 90/10/0,5). As frações puras foram coletadas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer 23 mg. O composto foi coletado em éter dietílico, o precipitado foi filtrado e seco para fornecer 15 mg (40% de rendimento) de composto 3 (como uma mistura de dois isômeros E/Z 70/30). ESQUEMA GERAL DA PREPARAÇÃO DE PRODUTOS FINAIS: MÉTODO 4

Síntese do intermediário Q1

[0063] A mistura de P1 (70 mg, 0,17 mmol), Pd/C 10% (18 mg, 0,02 mmol) em CH3OH (5 mL) foi hidrogenada sob pressão atmosférica de H2 por 4h. O catalisador foi removido por filtragem através de um leito de celite®. A celite® foi lavada com CH3OH e o filtrado foi evaporado. O produto bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica gel (15 a 40 μm, 10 g, CH2CI2/CH3OH/NH4OH: 96/4/0,5). As frações puras foram coletadas e concentradas sob pressão reduzida para prover 50 mg (71% de rendimento) do intermediário Q1. Síntese do composto final 4

[0064] Q1 (50 mg, 0,12 mmol) em HCl 6N (1 ml) e dioxano (1 ml) foi agitado à temperatura ambiente durante 18 horas. O precipitado foi filtrado, lavado com dioxano e seco para prover 38 mg (71% de rendimento) de composto 4 (1HCl, 1H2O). ESQUEMA GERAL DA PREPARAÇÃO DE PRODUTOS FINAIS: MÉTODO 5

Síntese do intermediário S1

[0065] A 10 °C, R1 (7,70 g, 34,79 mmol) em EtOH (30 mL) foi adicionada gota a gota a uma mistura de A1 (5,44 g, 33,14 mmol), C1 (68 mg, 0,53 mmol) em EtOH (25 mL). A mistura foi agitada à T.A. por uma noite. 60 mL de NaOH 1N foram adicionados gota a gota e a mistura foi agitada à T.A. durante 1h. A mistura foi extraída com CH2Cl2 (3 vezes). As camadas orgânicas foram lavadas com solução salina, secas em MgSO4, filtradas e o solvente foi evaporado. O produto bruto foi purificado por cromatografia sobre sílica gel (Irregular SiOH 20 a 45 μm; fase móvel (0,1% NH4OH, 98% CH2CI2, 2% CH3OH). As frações puras foram coletadas e concentradas sob pressão reduzida para prover 5,1 g (49% de rendimento) do intermediário S1.

Síntese do intermediário T1

[0066] A 10 °C, sob um fluxo N2, N-bromossuccinimida (2,90 g, 16,33 mmol) foi adicionada em porções a uma mistura de S1 (5,1 g, 16,33 mmol) em THF (100 mL). A mistura foi agitada durante 10 min a 10 °C. A mistura foi vertida para uma solução de NaHCO3 a 10% em água e EtOAc. As camadas foram decantadas. A camada orgânica foi seca em MgSO4, foi filtrada e o solvente foi evaporado. O produto bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica gel (15 a 40 μm, 80 g, CH2Cl2/CH3OH 99-1). As frações puras foram coletadas e concentradas sob pressão reduzida para prover 3,75 g (59% de rendimento) do intermediário T1.

Síntese do intermediário U1

[0067] Isocianato de benzoíla (7,05 g, 47,92 mmol) foi adicionado a uma mistura de T1 (3,75 g, 9,58 mmol) em CH3CN (80 mL) sob agitação à T.A. A mistura foi agitada à T.A. por uma noite. O solvente foi evaporado, o resíduo foi dissolvido em 2-propanol/25% aquoso NH3 1:1 (200 mL) e a solução resultante foi agitada à T.A. por 72h. O solvente foi evaporado e a mistura resultante foi vertida em água, neutralizada com HCl diluído e extraída com EtOAc. As camadas foram filtradas através de um leito de celite®, a celite® foi lavada com EtOAc. O filtrado foi decantado. A camada orgânica foi seca em MgSO4, foi filtrada e o solvente foi evaporado. O composto bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica gel (15 a 40 μm, 80 g, CH2Cl2/CH3OH/NH4OH: 98/2/0.1). As frações puras foram coletadas e concentradas sob pressão reduzida para prover 1,70 g (33% de rendimento) do intermediário U1.

Síntese do intermediário V1

[0068] Uma mistura de U1 (1,6 g, 2,97 mmol) em NH4OH 25% (160 mL) e iPrOH (160 mL) foi agitada à temperatura ambiente por 72h. iPrOH foi evaporado e água foi adicionada. A mistura foi extraída com EtOAc. Apareceu um precipitado entre as duas fases. O precipitado foi filtrado e seco para prover 880 mg (68% de rendimento) de intermediário V1. A camada orgânica foi seca em MgSO4, filtrada e o solvente foi evaporado para fornecer 680 g do intermediário U1.

Síntese do intermediário W1

[0069] Uma mistura de V1 (520 mg, 1,20 mmol), tercbutila N-(3- bromopropil)carbamato (570 mg mL, 2,40 mmol) e K2CO3 (496 mg, 3,59 mmol) em DMF (20 mL) foi agitada a 80 °C durante 5h. Após arrefecer até à temperatura ambiente, a mistura foi vertida em água e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com água, solução salina, seca com MgSO4, filtrada e o solvente foi evaporado para prover 800 mg (>100% de rendimento) de intermediário W1. O composto bruto foi usado diretamente na próxima etapa.

Síntese do intermediário X1

[0070] Uma mistura de W1 (0,60 g, 1,01 mmol), cloreto de benziltrietilamônio (11,5 mg, 0,05 mmol) em NaOH 30% (15 mL) e EtOH (15 mL) foi agitada a 60 °C por 4h. A mistura foi meio- concentrada. O pH foi ajustado para 5 com HCI 3N. A mistura foi extraída com EtOAc (duas vezes). As camadas orgânicas combinadas foram secas em MgSO4, filtradas e o solvente foi evaporado para fornecer 500 mg (rendimento de 98%) do intermediário X1.

Síntese do intermediário Y1

[0071] A 0 °C, HCl 4N em dioxano (1,25 mL, 4,99 mmol) foi adicionado gota a gota a uma mistura de X1 (0,50 g, 1 mmol) em dioxano (2,5 mL). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 12 horas. A mistura foi evaporada até estar seca para prover 450 mg (>100% de rendimento) de intermediário Y1. O composto bruto foi usado na próxima etapa sem qualquer outra purificação.

Síntese do composto final 5

[0072] Hidrocloreto 1-(3-Dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (520 mg, 2,72 mmol) e 1-hidroxibenzotriazol (367 mg, 2,72 mmol) foram adicionados lentamente a uma mistura de Y1 (370 mg, 0,91 mmol), diisopropiletilamina (0,78 mL, 4,53 mmol) em DMF (270 mL). A mistura foi agitada à T.A. por 24h. O solvente foi evaporado até estar seco. O resíduo foi coletado em CH2Cl2-CH3OH (90-10) e foi lavado com água. Apareceu um precipitado no funil de decantação. O precipitado foi filtrado para prover 103 mg. Esse precipitado foi coletado em EtOH quente, agitado em refluxo por 1h, arrefecido até à T.A. e filtrado. O produto bruto foi purificado por fase reversa em (X- Bridge-C18 5μm 30*150 mm), fase móvel (gradiente de 75% tampão NH4HCO3 0,5% pH10, 25% CH3CN para 0% tampão NH4HCO3 0,5% pH10, 100% CH3CN). As frações puras foram coletadas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer 8 mg (puro) e 50 mg (produto bruto). O produto bruto foi purificado por fase reversa em (X-Bridge-C18 5μm 30*150 mm), fase móvel (gradiente de 90% de ácido trifluoracético a 0,05%, 10% CH3OH para 0% ácido trifluoracético a 0,05%, 100% CH3OH). As frações puras foram coletadas e concentradas sob pressão reduzida para prover 20 mg. As duas frações (8 mg e 20 mg) foram combinadas, coletadas em dioxano e CH3CN e foram adicionados 0,50 mL de HCl 4N em dioxano. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas. O precipitado foi filtrado e seco para prover 28 mg (7% de rendimento) de composto 5 (sal HCI). ESQUEMA GERAL DA PREPARAÇÃO DE PRODUTOS FINAIS: MÉTODO 6

Síntese do intermediário B2

[0073] Uma solução de glicolato de etila (10,0 g, 96,06 mmol) em dimetilamina (40% de solução em água) (100 mL) foi agitada à temperatura ambiente por 16h e concentrada sob vácuo. O resíduo foi coletado em EtOH e novamente concentrado. O ciclo foi realizado 3 vezes para prover 9,75 g (98% de rendimento) de intermediário B2.

Síntese do intermediário D2

[0074] A 0 °C, sob um fluxo N2, NaH (2,16 g, 54,13 mmol) foi adicionado a uma solução de B2 (4,09 g, 39,69 mmol) em DMF (36 mL) à temperatura ambiente. A mistura foi agitada à T.A. por 30 minutos e 6-cloroniconitrila C2 (5,0 g, 36,09 mmol) foi adicionado (exotérmico) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 16 horas. Uma solução aquosa a 10% de NaHCO3 (150 mL) foi adicionada, e depois foi adicionada uma solução salina. A camada aquosa foi extraída com EtOAc (duas vezes). A camada orgânica foi seca em MgSO4, filtrada e o solvente foi evaporado para fornecer 7,0 g (rendimento de 95%) do intermediário D2.

Síntese do intermediário E2

[0075] Pd/C a 10 % (2,0 g) foi adicionado a uma solução de D2 (7,0 g, 34,11 mmol) em MeOH (140 mL). A mistura de reação foi agitada por 16h à T.A. sob atmosfera de H2 (1 atm). Pd/C a 10% (1,5 g, 0,04 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada com as mesmas condições por 4h. O catalisador foi filtrado com um leito de celite®. A celite® foi lavada com CH3OH e o filtrado foi concentrado sob vácuo. Essa fração foi combinada com outra batelada antes da purificação.

[0076] O resíduo foi purificado por cromatografia flash sobre sílica gel (15 a 40 μm, 120 g, CH2CI2/CH3OH/NH4OH: 92/8/0,5). As frações puras foram coletadas e concentradas sob pressão reduzida para prover 2,2 g (27% de rendimento) do intermediário E2.

Síntese do intermediário G2

[0077] E2 (2,2 g, 10,51 mmol) em EtOH (10 mL) foi adicionado gota a gota a uma solução de F2 (1,64 g, 10,01 mmol) e hidrocloreto de anilina (20 mg, 0,16 mmol) em EtOH (10 mL) a 10 °C. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente por 20h. Uma solução aquosa de NaOH 1M (25 mL) foi adicionada gota a gota à solução a 10 °C e a mistura resultante foi agitada à T.A. durante 1h. O precipitado foi filtrado, lavado com um mínimo de EtOH frio e seco sob vácuo para prover 2,25 g (75% de rendimento) de intermediário G2. G2 foi usado diretamente na próxima etapa sem purificação adicional.

Síntese do intermediário H2

[0078] Uma solução de N-bromossuccinimida (1,47 g, 8,24 mmol) em THF (50 mL) foi adicionada gota a gota durante 25 minutos a uma solução de G2 (2,25 g, 7,49 mmol) em THF (80 mL) a 0 °C. A mistura foi agitada a 0 °C por 30 minutos e depois à T.A. por 45 min. A mistura foi coletada em CH2Cl2, lavada com uma solução aquosa saturada de NaHCO3, depois com solução salina, seca com MgSO4, filtrada e concentrada. O composto bruto foi cristalizado a partir de CH3CN, o precipitado foi filtrado e seco para prover 0,79 g (27% de rendimento) de intermediário H2. O filtrado foi evaporado e o resíduo foi purificado por cromatografia flash sobre sílica gel (15 a 40 μm, 50 g, CH2CI2/CH3OH/NH4OH: 97/3/0.1). As frações puras foram coletadas e concentradas para fornecer 0,71 g (rendimento de 25%) do intermediário H2.

Síntese do intermediário I2

[0079] Uma mistura de H2 (1,4 g, 3,69 mmol) em ureia (13,3 g, 221,51 mmol) foi aquecida a 160 °C durante 6h. A mistura foi resfriada até à T.A., e foi adicionada água. O precipitado foi triturado e filtrado, lavado com água e seco sob vácuo a 60°C para prover 1,05 g (67% de rendimento) de intermediário I2.

Síntese do intermediário K2

[0080] Uma mistura de I2 (1,23 g, 2,91 mmol), tercbutila N-(3- bromopropil)carbamato J2 (1,04 g mL, 4,37 mmol) e K2CO3 (604 mg, 4,37 mmol) em DMF (20 mL) foi agitada a 50 °C durante 12h. O solvente foi evaporado. O resíduo foi coletado em EtOAc. A camada orgânica foi lavada com água, seca sobre MgSO4, filtrada e o solvente foi evaporado. O resíduo foi purificado por cromatografia flash sobre sílica gel (15 a 40 μm, 80 g, CH2CI2/CH3OH/NH4OH: 95/5/0,5). As frações puras foram coletadas e concentradas para fornecer 0,97 g (rendimento de 57%) do intermediário K2.

Síntese do intermediário L2

[0081] À T.A., foi adicionado sódio (446 mg, 19,42 mmol) a MeOH (30 mL). A mistura foi agitada até o sódio estar em solução (exotérmico). Foi adicionado K2 (750 mg, 1,29 mmol) e a mistura foi agitada a 50 °C durante 16h sob um fluxo N2. Foi adicionada água e o pH foi ajustado para 5-6. A camada aquosa foi extraída com EtOAc. A camada orgânica foi seca em MgSO4, filtrada e o solvente foi evaporado para fornecer 0,54 g (rendimento de 83%) do intermediário L2.

Síntese do intermediário M2

[0082] A 0 °C, HCl 4M em dioxano (2,68 mL, 10,73 mmol) foi adicionado gota a gota a uma mistura de L2 (0,54 g, 1,07 mmol) em dioxano (20 mL). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 12 horas. A mistura foi evaporada até estar seca para prover 0,74 g (>100% de rendimento). O composto bruto foi usado na próxima etapa sem purificação adicional.

Síntese do composto final 6

[0083] Hidrocloreto 1-(3-Dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (675 mg, 3,52 mmol) e hidroxibenzotriazol (476 mg, 3,52 mmol) foram adicionados lentamente a uma mistura de M2 (500 mg, 1,17 mmol), diisopropiletilamina (1,01 mL, 5,87 mmol) em DMF (360 mL). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 24 horas. O solvente foi evaporado até estar seco. O resíduo foi coletado em água. O precipitado foi filtrado, lavado com água e seco. O resíduo foi purificado por cromatografia de fase reversa em (X-Bridge-C18 5μm 30*150 mm), fase móvel (gradiente de 90% de ácido trifluoracético a 0,05%, 10% MeOH para 0% ácido trifluoracético a 0,05%, 100% MeOH). As frações puras foram coletadas e concentradas para prover 75 mg de composto 6 e 100 mg (precipitado bruto). A fração pura (75 mg) foi coletada em dioxano e foi adicionado CH3CN e 1mL de HCl 4N em dioxano. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas. O precipitado foi filtrado e seco para prover 57 mg (12% de rendimento) de composto 6 (sal HCI). ESQUEMA GERAL DA PREPARAÇÃO DE PRODUTOS FINAIS: MÉTODO 7

Síntese do intermediário O2

[0084] 4-Bromo-1-buteno (8,6 mL, 84,17 mmol) foi adicionado a uma mistura de N2 (15 g, 56,11 mmol), K2CO3 (23,3 g, 168,33 mmol), brometo de tetrabutilamônio (1,81 g, 5,61 mmol) em CH3CN (75 mL). A mistura resultante foi agitada em refluxo durante 18 horas. A mistura foi arrefecida até à T.A. O solvente foi evaporado. Água e EtOAc foram adicionados. As camadas foram decantadas. A camada orgânica foi seca em MgSO4, foi filtrada e o solvente foi evaporado. O resíduo foi purificado por cromatografia flash sobre sílica gel (15 a 40 μm, 120 g, Heptano/EtOAc: 93-7). As frações puras foram coletadas e concentradas para fornecer 14,8 g (rendimento de 82%) do intermediário O2.

Síntese do intermediário P2

[0085] A 0 °C, HCl 1N (120 mL, 119,47 mmol) foi adicionado gota a gota a uma mistura de O2 (19,2 g, 59,74 mmol) em Et2O (250 mL). A mistura foi agitada a 0 °C por 30 minutos e depois agitada vigorosamente à temperatura ambiente por 12h. As camadas resultantes foram decantadas. A camada aquosa foi alcalinizada até ao pH 8 com K2CO3 (pó) e depois extraída com Et2O (3 vezes). A camada aquosa foi saturada com K2CO3 depois extraída novamente com CH2Cl2 (2 vezes). As camadas orgânicas foram combinadas, secas com MgSO4, filtradas e o solvente foi evaporado para fornecer 7,9 g (rendimento de 84%) do intermediário P2.

Síntese do intermediário Q2

[0086] Sob um fluxo de N2, LiAlH4 (4,4 g, 114,50 mmol) foi suspenso em THF (150 mL) a 10 °C. P2 (9 g, 57,25 mmol) em THF (150 mL) foi adicionado gota a gota. Foi permitido que a reação aquecesse até à temperatura ambiente e foi agitada à temperatura ambiente durante 30 minutos. A reação foi arrefecida até -10 °C e foi interrompida pela adição de água (5 mL), NaOH 3N (5 mL) e novamente água (14 mL). A suspensão foi filtrada através de um leito de celite®. A celite® foi lavada com THF e o filtrado foi concentrado sob vácuo. O resíduo foi coletado em EtOAc, seco em MgSO4, filtrado e o solvente foi evaporado para fornecer 5,3 g (rendimento de 80 %) do intermediário Q2.

Síntese do intermediário R2

[0087] A 0 °C, foi adicionado cloreto de tercbutildimetilsilila (1,31 g, 8,68 mmol) a uma mistura de Q2 (1,0 g, 8,68 mmol), Et3N (1,33 mL, 9,55 mmol), 4-dimetilaminopiridina (106 mg, 0,87 mmol) em CH2Cl2 (30 mL). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 24 horas. Adicionou-se água e as camadas foram decantadas. A camada orgânica foi seca em MgSO4, filtrada e o solvente foi evaporado para fornecer 1,70 g (rendimento de 85%) do intermediário R2.

Síntese do intermediário S2

[0088] Uma solução de 4,6-dihidroxi-2-metiltiopirimidina (50 g, 316,09 mmol) em ácido trifluoracético (210 ml) foi agitada à temperatura ambiente durante 30 minutos. A mistura foi resfriada até 5 °C e depois HNO3 fumegante (19,5 ml, 426,73 mmol) foi adicionado gota a gota a 5 °C. A temperatura foi mantida a 10 a 15 °C durante a adição. O banho de gelo foi removido e quando a temperatura atingiu 20 °C, um evento exotérmico violento ocorreu (de 20 °C a 45 °C em 5 segundos). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 16 horas. A mistura foi despejada em uma mistura de água e gelo. O precipitado foi removido por filtração e lavado com água. O precipitado foi seco sob vácuo a 50 °C para fornecer 42 g (rendimento de 65%) do intermediário S2. Este intermediário foi usado diretamente na próxima etapa sem qualquer purificação adicional.

Síntese do intermediário T2

[0089] N,N-dimetilanilina (76,7 ml, 0,61 mol) foi adicionado de gota em gota a POCl3 (93,7 ml, 1,01 mol) a 0 °C. S2 (41 g, 201,79 mmol) foi adicionado em porções a 0 °C e a mistura foi então aquecida a 100 °C por 2h. A solução foi concentrada sob vácuo e o POCl3 residual foi removido por evaporação azeotrópica com tolueno (3 vezes). Uma solução de CH2Cl2-Heptano (70-30) foi adicionada ao óleo resultante e o óleo foi filtrado por um filtro de vidro de SiO2. O filtrado foi concentrado e o resíduo foi purificado por LC preparativa em (1000 g de SiOH irregular de 20 a 45 μm da DAVISIL), fase móvel (80% de Heptano, 20% de CH2Cl2). As frações puras foram coletadas e concentradas para fornecer 37,8 g (rendimento de 78%) do intermediário T2.

Síntese do intermediário U2

[0090] Uma solução de NH3 2 M em iPrOH (115 ml, 229,31 mmol) foi adicionada de gota em gota a uma solução de T2 (36,7 g, 152,87 mmol) e Et3N (23,4 ml, 168,16 mmol) em THF (360 ml) (a temperatura foi mantida à temperatura ambiente com um banho de gelo e água durante a adição). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 5 horas. A mistura foi evaporada até secar. Água e EtOAc foram adicionados ao resíduo. As camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraída com EtOAc (duas vezes). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre MgSO4, filtradas e o solvente foi removido sob pressão reduzida para fornecer 34,5 g (rendimento de 100%) do intermediário U2.

Síntese do intermediário V2

[0091] Cloroformato de etila (13,5 ml; 138,90 mmol) foi adicionado a uma solução de U2 (39,8 g; 126,27 mmol) e Et3N (26,5 ml; 189,40 mmol) em THF (1300 ml). A mistura foi agitada à temperatura ambiente por 6 horas e o solvente foi parcialmente evaporado sob pressão reduzida. CH2Cl2 e água foram adicionados ao resíduo. As camadas foram separadas; a camada aquosa foi extraída com CH2Cl2 (duas vezes). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre MgSO4, filtradas e o solvente foi removido sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por LC preparativa em (1000 g de SiOH irregular de 20 a 45 μm da DAVISIL), fase móvel (gradiente de 85% de heptano, 15% de AcOEt até 80% de heptano, 20% de AcOEt). As frações puras foram coletadas e concentradas para fornecer 35 g (rendimento de 95%) do intermediário V2.

Síntese do intermediário X2

[0092] Uma mistura de V2 (5,0 g, 17,08 mmol), W2 (2,85 g, 17,08 mmol), K2CO3 (3,54 g, 25,6 mmol) e NaI (2,56 g, 17,08 mmol) em acetona (200 mL) foram agitados à temperatura ambiente durante 48h. A mistura foi filtrada e o filtrado foi evaporado até à secura. O resíduo foi purificado por cromatografia flash sobre sílica gel (15 a 40 μm, 220 g, CH2Cl2/heptano 50-50). As frações puras foram coletadas e concentradas para fornecer 7,4 g (rendimento de 100%) do intermediário X2.

Síntese do intermediário Y2

[0093] Uma solução de X2 (7,20 g, 17,03 mmol) e NH3 30% em água (100 mL) em THF (100 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 2h. O solvente foi removido sob pressão reduzida. O resíduo foi suspenso em água e extraído com CH2Cl2. A camada orgânica foi lavada com água e seca com MgSO4, filtrada e o solvente foi evaporado sob vácuo para prover 7,1 g (100% de rendimento) de intermediário Y2 (um óleo amarelo). O intermediário foi diretamente usado na próxima etapa.

Síntese do intermediário Z2

[0094] Ácido 3-cloroperoxibenzóico (2,44 g, 9,91 mmol) em CH2Cl2 (20 mL) foi adicionado gota a gota a uma solução de Y2 (2,0 g, 4,96 mmol) em CH2Cl2 (100 mL) à temperatura ambiente. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 20 horas. Uma solução aquosa de Na2S2O3 (5eq) foi adicionada à mistura. As camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraída com CH2Cl2 (duas vezes). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com uma solução aquosa saturada de NaHCO3, secas sobre MgSO4, filtradas e o solvente foi removido sob pressão reduzida para fornecer 2,70 g (>100% de rendimento) do intermediário Z2. Este intermediário foi usado diretamente na próxima etapa sem purificação adicional.

Síntese do intermediário A3

[0095] Uma mistura de Z2 (2,16 g, 4,96 mmol), R2 (1,70 g, 7,44 mmol) e Et3N (1,04 mL, 7,44 mmol) em CH3CN (70 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 2h. Adicionou-se água e a mistura foi extraída com EtOAc (duas vezes). A camada orgânica foi lavada com solução salina, seca sobre MgSO4, filtrada e o solvente foi evaporado. O resíduo foi purificado por cromatografia flash sobre sílica gel (15 a 40 μm, 90 g, CH2Cl2/CH3OH/99,5-0,5). As frações puras foram coletadas e concentradas para fornecer 1,10 g (rendimento de 38%) do intermediário A3.

Síntese do intermediário B3

[0096] A3 (1,05 g, 1,80 mmol) foi adicionado a CH2Cl2 extra seco (230 mL) e a mistura resultante foi desgasificada fazendo borbulhar N2 na solução por 30 min. Foi adicionado catalisador de Grubbs de 2a geração (153 mg, 0,18 mmol) em uma porção e a mistura foi agitada à temperatura ambiente sob fluxo N2 por 24h. A mistura foi concentrada. O resíduo foi purificado por LC preparativa em (300 g de SiOH irregular de 15 a 40 μm 300 g MERCK), fase móvel (80% de heptano, 20% de AcOEt). As frações puras foram coletadas e concentradas para fornecer 0,70 g (rendimento de 70%) do intermediário B3.

Síntese do composto final 7

[0097] Fe (385 mg; 6,90 mmol) foi adicionado a uma mistura de B3 (640 mg; 1,15 mmol) em AcOH (6,8 ml) e água (1,36 ml). A mistura foi aquecida a 100 °C usando um microondas de modo simples (Biotage Initiator) com uma potência entre 0 a 400 W por 40 minutos. A mistura foi filtrada em um leito de celite® e enxaguada com AcOH. O filtrado foi concentrado sob vácuo e co-evaporado com tolueno (duas vezes) até secar. O resíduo foi coletado em CH2Cl2/MeOH/NH4OH 90-10-0.5. Um precipitado foi filtrado (o precipitado (1,0 g) continha o composto esperado) e o filtrado foi evaporado para ser purificado por cromatografia.

[0098] O resíduo (de filtrado) foi purificado por cromatografia flash sobre sílica gel (15 a 40 μm, 80 g, CH2CI2/CH3OH/NH4OH: 90-10-0,5). As frações puras foram coletadas e evaporadas para fornecer 52 mg de fração 1.

[0099] O precipitado obtido anteriormente foi purificado por cromatografia (o composto e SiO2 foram misturados antes de eluição). O resíduo foi purificado por cromatografia flash sobre sílica gel (15 a 40 μm, 25 g, CH2Cl2/CH3OH/NH4OH: 90-10-0,5). As frações puras foram coletadas e concentradas para fornecer 80 mg de fração 2.

[00100] A fração 1 e a fração 2 foram combinadas, e depois solidificadas de CH3CN para prover 95 mg (23% de rendimento) de composto 7 (isômero E com 3,5% do isômero Z). ESQUEMA GERAL DA PREPARAÇÃO DE PRODUTOS FINAIS: MÉTODO 8

Síntese do intermediário C3

[00101] V2 (1,7 g, 5,8 mmol), cloreto 3-metoxibenzil (0,93 mL, 6,4 mmol), K2CO3 (2 g, 14,5 mmol) e iodeto de sódio (0,87 g, 5,8 mmol) em acetona (60 mL) foram agitados à temperatura ambiente durante 16h. A solução foi filtrada e o filtrado foi evaporado sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por LC preparativa (80 g de SiOH irregular de 15 a 40 μm da MERCK), fase móvel de heptano/ CH2CI27O/3O). As frações puras foram coletadas e concentradas para fornecer 1,4 g (rendimento de 58%) do intermediário C3.

Síntese do intermediário D3

[00102] C3 (1,4 g, 3,4 mmol) foi agitado em NH3 30% em água (30 mL) e THF (30 mL) à temperatura ambiente por 16h. A mistura foi concentrada e o resíduo foi seco por evaporação azeotrópica com EtOH (duas vezes) para fornecer 1,3 g (97% de rendimento). O produto bruto foi usado sem purificação adicional na próxima etapa.

Síntese do intermediário E3

[00103] Ácido 3-cloroperoxibenzóico (2,04 g, 8,3 mmol) foi adicionado a uma solução de D3 (1,3 g, 3,3 mmol) em CH2Cl2 (80 mL) à temperatura ambiente. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 20 horas. Uma solução aquosa de Na2S2O3 (2,61 g, 16,52 mmol) foi adicionada à mistura. As camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraída com CH2Cl2 (duas vezes). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com uma solução aquosa saturada de NaHCO3, secas sobre MgSO4, filtradas e o solvente foi evaporado para fornecer 1,4 g (100% de rendimento) do intermediário E3.

Síntese do intermediário F3

[00104] Uma mistura de E3 (1,4 g, 3,3 mmol), 4-amino-1-butanol (0,45 mL, 3 mmol) e K2CO3 (414 mg, 4,9 mmol) em CH3CN (65 mL) foi agitada a 80 °C durante 1h30. Os sais foram filtrados e foi adicionada água ao filtrado. A mistura foi extraída com CH2Cl2 (2 vezes). A camada orgânica foi seca em MgSO4, foi filtrada e o solvente foi evaporado. O produto bruto foi purificado por LC preparativa (80 g de SiOH irregular de 15 a 40 μm da MERCK, fase móvel H2Ck/MeOH/NH4OH 98/2/0.1). As frações puras foram coletadas e concentradas para fornecer 1,2 g (rendimento de 84%) do intermediário F3.

Síntese do intermediário G3

[00105] Fe (1,54 g; 27,6 mmol) foi adicionado a uma mistura de F3 (1,2 g; 2,76 mmol) em AcOH (24 ml) e água (8,6 mL). A mistura foi agitada vigorosamente à temperatura ambiente durante 24 horas. A mistura reacional foi concentrada sob vácuo e o resíduo foi diluído com EtOAc e água. A mistura foi filtrada em um leito de celite® e enxaguado com EtOAc. As camadas foram separadas e a camada orgânica foi lavada com uma solução aquosa saturada de NaHCO3 (duas vezes), depois solução salina, seca com MgSO4, filtrada e concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílicaca gel (15 a 40 μm, 40 g) em CH2Ck/MeOH/NH4OH (90/10/0,5). As frações puras foram recolhidas e concentradas. Essa fração foi solidificada a partir de CH3CN/diisopropileter para fornecer 0,70 g (71% de rendimento) do intermediário G3.

Síntese do intermediário H3

[00106] A -60°C, sob um fluxo N2, BBr3 (5,6 mL, 5,6 mmol) foi adicionada gota a gota a uma mistura de G3 (400 mg, 1,1 mmol) em CH2Cl2 (40 mL). A mistura foi agitada a -60 °C por 1h, e depois à T.A. por 12h, sob um fluxo de N2. 1mL de CH3OH foi adicionado gota a gota a 0 °C. A mistura foi então vertida para uma solução saturada K2CO3 em água. A mistura foi extraída com uma solução de CH2Cl2/MeOH. A camada orgânica foi seca em MgSO4, foi filtrada e o solvente foi evaporado. O composto bruto foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica gel (15 a 40 μm, 40 g) em CH2Cl2/MeOH/NH4OH (90/10/0,5). As frações puras foram recolhidas e evaporadas. O resíduo foi solidificado a partir de CH3CN/diisopropileter para fornecer 265 mg (69% de rendimento) do intermediário H3.

Síntese do composto final 8

[00107] À T.A., sob um fluxo de N2, uma solução de diisopropilazodicarboxilato (0,27 mL, 1,36 mmol) em THF (5 mL) foi lentamente adicionada a uma mistura de H3 (235 mg, 0,68 mmol), PPh3 (358 mg, 1,36 mmol) em THF (50 mL). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 6 horas. A mistura de reação foi vertida para água gelada e adicionou-se EtOAc. A mistura foi alcalinizada com uma solução aquosa de NaHCO3 10% em água, depois a camada orgânica foi separada, seca com MgSO4, filtrada e os solventes foram evaporados até estarem secos. O composto bruto foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica gel (15 a 40 μm, 40 g) em CH2Cl2/MeOH/NH4OH (95/5/0,1). As frações puras foram recolhidas e evaporadas. O resíduo foi solidificado a partir de CH3CN/diisopropileter para fornecer 75 mg (34% de rendimento) do composto 8. ESQUEMA GERAL DA PREPARAÇÃO DE PRODUTOS FINAIS: MÉTODO 9

Síntese do intermediário J3

[00108] A 0°C, sob um fluxo N2, NaH (3,28 g, 82 mmol) foi adicionado a uma solução de B2 (7,32 g, 71 mmol) em DMF (80 mL). A mistura foi agitada à T.A. por 30 minutos e I3 (10 g, 54,6 mmol) foi adicionado (exotérmico) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 4 horas. Uma solução aquosa a 10% de NaHCO3 (150 mL) foi adicionada, e depois foi adicionada uma solução salina (150 mL). A mistura resultante foi extraída com EtOAc (duas vezes). A camada orgânica foi seca em MgSO4, foi filtrada e o solvente foi evaporado. O resíduo foi coletado no mínimo de AcOEt, o precipitado foi filtrado e seco para fornecer o intermediário J3 (9,04 g, 81% de rendimento).

Síntese do intermediário K3

[00109] A 0 °C, sob um fluxo N2, BH3/THF (110 mL, 39 mmol) foi adicionado gota a gota a uma mistura de J3 (9,0 g, 43,9 mmol) em THF (60 mL). A mistura foi agitada durante à temperatura ambiente durante 2h e depois interrompida com HCI 2M e agitada à temperatura ambiente por 12h. A mistura reacional foi evaporada até à secura. O resíduo foi coletado em CH2Cl2-CH3OH-NH4OH 90-10-1. O precipitado foi filtrado (minerais) e o filtrado foi concentrado. Foi realizada purificação por cromatografia flash sobre sílica gel (15 a 40 μm, 330 g, CH2Cl2/CH3OH/NH4OH: 96/4/0,5 a 90/10/0,5). As frações puras foram coletadas e evaporadas até estarem secas para fornecer o intermediário K3 (6,2 g, 73% de rendimento).

Síntese do intermediário L3

[00110] K3 (6,2 g, 29,5 mmol) em EtOH (30 mL) foi adicionado gota a gota a uma solução de F2 (4,6 g, 28 mmol) e hidrocloreto de anilina (56 mg, 0,43 mmol) em EtOH (25 mL) a 10°C. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente por 20h. Uma solução aquosa de NaOH 1M (25 mL) foi adicionada gota a gota à solução a 10 °C e a mistura resultante foi agitada à T.A. durante 1h. O precipitado foi filtrado, lavado com um mínimo de EtOH frio e seco sob vácuo. As camadas maternas são concentradas, um segundo precipitado foi obtido em CH2Cl2, filtrado e seco sob vácuo. As duas bateladas foram combinadas para dar o intermediário L3 (2,44 g, 29 % de rendimento).

Síntese do intermediário M3

[00111] Uma solução de NNS (0,326 g, 1,83 mmol) em THF (15 mL) foi adicionada gota a gota durante 25 minutos a uma solução de L3 (0,5 g, 1,67 mmol) em THF (15 mL) a 0 °C. A mistura foi agitada a 0 °C por 30 minutos e depois à T.A. por 45 min. A mistura foi coletada em CH2Cl2, lavada com uma solução aquosa saturada de NaHCO3, seca com MgSO4, filtrada e evaporada sob vácuo. Esse composto bruto foi solidificado a partir de CH3CN. O precipitado foi filtrado e seco para prover o intermediário M3 (216 mg, 34% de rendimento).

Síntese do intermediário N3

[00112] Uma mistura de M3 (1,04 g, 2,74 mmol) em ureia (4,9 g, 82,28 mmol) foi aquecida a 160 °C durante 4h. Foi adicionada novamente ureia (3 g, 2,64 mmol) e a mistura foi agitada a 160 °C durante 12h. A mistura foi resfriada até à T.A., e foi adicionada água. O precipitado foi triturado e filtrado, lavado com água e seco sob vácuo a 60 °C para prover o intermediário N3. O composto bruto foi usado diretamente na próxima etapa.

Síntese do intermediário O3

[00113] Uma mistura de N3 (bruto), J2 (1,557 g mL, 6,54 mmol), K2CO3 (904 mg, 6,54 mmol) em DMF (30 mL) foi agitada a 50 °C durante 12h. O solvente foi evaporado. O resíduo foi coletado em EtOAc. A camada orgânica foi lavada com água, seca sobre MgSO4, filtrada e o solvente foi evaporado. O composto bruto foi purificado por LC preparativa (300 g de SiOH irregular de 15 a 40 μm da MERCK), em fase móvel: 0,3% NH4OH, 97% CH2Cl2, 3% MeOH para prover o intermediário O3 (280 mg, 11% de rendimento).

Síntese do intermediário P3

[00114] À T.A., foi adicionado Na (167 mg, 7,25 mmol) a MeOH (11 mL). A mistura foi agitada até o Na estar em solução (exotérmico). Foi adicionado O3 (280 mg, 0,48 mmol) e a mistura foi agitada a 50 °C durante 16h sob um fluxo N2. Foi adicionada água e o pH foi ajustado (com HCI 1N) para 5-6. A camada aquosa foi extraída com EtOAc. A fase aquosa foi saturada com pó K2CO3 e extraída com AcOEt. As camadas orgânicas combinadas foram secas em MgSO4, filtradas e o solvente foi evaporado para fornecer o intermediário P3 (140 mg, 58% de rendimento).

Síntese do intermediário Q3

[00115] A 0 °C, HCl 4M em dioxano (0,7 mL, 2,78 mmol) foi adicionado gota a gota a uma mistura de P3 (140 mg, 2,78 mmol) em dioxano (5 mL). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 12 horas. O solvente foi evaporado até estar seco para prover o intermediário Q3. O composto bruto foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional.

Síntese do composto final 9

[00116] Hidrocloreto 1-(3-Dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (318 mg, 1,66 mmol) e hidroxibenzotriazol (224 mg, 1,66 mmol) foram adicionados lentamente a uma mistura de Q3 (bruto), diisopropiletilamina (0,476 mL, 2,76 mmol) em DMF (170 mL). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 24 horas. O solvente foi evaporado até estar seco. O resíduo foi coletado em água. O precipitado foi filtrado, lavado com água e seco. O composto bruto foi purificado por fase reversa em (X-Bridge-C18 5μm 30*150mm), fase móvel (gradiente de 90% NH4HCO3 0,5% 10% CH3CN para 0% NH4HCO3 0,5% pH10, 100% CH3CN) para dar o composto final 9 (37 mg, 18% de rendimento). ESQUEMA GERAL DA PREPARAÇÃO DE PRODUTOS FINAIS: MÉTODO 10

Síntese do composto final 10:

[00117] A mistura de composto 7 (100 mg, 0,27 mmol), Pd/C 10% (14,5 mg, 0,014 mmol) em CH3OH/THF 50/50 (10 mL) foi hidrogenada sob pressão atmosférica de H2 por 4h. O catalisador foi removido por filtração através de um filtro (chromafil Xtra 0,45μm). O filtrado foi concentrado. Essa fração foi solidificada a partir de CH3CN, o precipitado foi filtrado e seco para o composto final 10 (81 mg, 81% de rendimento). ESQUEMA GERAL DA PREPARAÇÃO DE PRODUTOS FINAIS: MÉTODO 11

Síntese do intermediário R3

[00118] A 0°C, sob um fluxo de N2, NaH (705 mg, 17,6 mmol) foi adicionado a uma solução de 1,4-butanodiol (3,2 g, 35,26 mmol) em DMF (30 mL). A mistura foi agitada durante 30 min à T.A. e depois foi adicionado E3 (2,5 mL, 5,87 mmol). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. Adicionou-se gelo e a mistura foi extraída com EtOAc. A camada orgânica foi seca em MgSO4, foi filtrada e o solvente foi evaporado. Foi realizada purificação por cromatografia flash sobre sílica gel (15 a 40 μm, 80g, CH2CI2/CH3OH/NH4OH: 97/3/0,1). As frações puras foram coletadas e evaporadas até estarem secas para fornecer o intermediário R3 (1,78 g, 70% de rendimento).

Síntese do intermediário S3

[00119] Pó de ferro (2,27 g; 40,65 mmol) foi adicionado a uma mistura de R3 (1,77 g; 4,07 mmol) em AcOH (35 ml) e água (11 mL). A mistura foi agitada a 50 °C durante 8 horas. A mistura reacional foi diluída com água e alcalinizada com K2CO3 10% em água. Foram adicionados EtOAc e CH3OH e a mistura resultante foi filtrada através de um leito de celite®. A celite® foi lavada com CH2Cl2/CH3OH (80/20). O filtrado foi decantado. A camada orgânica foi seca em MgSO4, foi filtrada e o solvente foi evaporado. A fração foi coletada em CH3CN, o precipitado foi filtrado e seco para fornecer o intermediário S3 (1,2 g, 82% de rendimento).

Síntese do intermediário T3

[00120] A -60 °C, sob um fluxo N2, BBr3 (13,6 mL, 13,6 mmol) foi adicionada gota a gota a uma mistura de S3 (980 mg, 2,727mmol) em CH2Cl2 (40 mL). A mistura foi agitada a -60 °C por 1 h sob fluxo de N2. A mistura foi agitada 5h a 0 °C. 5mL de CH3OH foram adicionados gota a gota a -60 °C. A mistura foi então vertida para uma solução saturada K2CO3. A mistura foi extraída com CH2Cl2/CH3OH. A camada orgânica foi seca com MgSO4, filtrada e o solvente foi evaporado para prover o intermediário T3 (0,55 g, 49% de rendimento), que foi diretamente usado na etapa seguinte sem mais purificação.

Síntese do composto final 11

[00121] Uma mistura de T3 (537 mg mL, 1,32 mmol), K2CO3 (182 mg, 1,32 mmol) em DMF (71 mL) foi agitada a 80 °C durante 12h. A mistura bruta foi filtrada e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi coletado no mínimo de DMF e foram adicionados 5 g de SiO2 35 a 70μm. A suspensão resultante foi evaporada até estar seca e colocada no topo de uma coluna de cromatografia de 50 g e eluída com um gradiente de CH2Cl2-CH3OH-NH4OH 95-5-0,5 para 90-10-0,5. As frações contendo os compostos esperados foram combinadas e concentradas sob pressão reduzida. O sólido foi cristalizado a partir de CH3CN, o precipitado foi filtrado e seco para o composto final 11 (33 mg, 8% de rendimento). ESQUEMA GERAL DA PREPARAÇÃO DE PRODUTOS FINAIS: MÉTODO 12

Síntese do intermediário V3

[00122] V2 (1,4 g, 4,8 mmol), U3 (1,44 g, 4,8 mmol), K2CO3 (1,65 g, 12 mmol) e NaI (0,72 g, 4,8 mmol) em acetona (60 mL) foram agitados à temperatura ambiente durante 16h. A solução foi filtrada e o filtrado foi evaporado sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por LC preparativa (80 g de SiOH irregular de 15 a 40 μm da MERCK, fase móvel de heptano/ CH2Cl285/15) para prover o intermediário V3 (2,3 g, 94% de rendimento).

Síntese do intermediário W3

[00123] V3 (2,3 g, 4,5 mmol) foi agitado em NH3 30% em água (40 mL) e THF (40 mL) à temperatura ambiente por 16h. A mistura foi concentrada sob vácuo e o resíduo foi seco por evaporação azeotrópica de EtOH (duas vezes). O produto bruto foi purificado por LC preparativa (40 g de SiOH irregular de 15 a 40 μm da MERCK, fase móvel de heptano/ AcOEt 85/15) para prover o intermediário W3 (1,25 g, 56% de rendimento).

Síntese do intermediário X3

[00124] Ácido 3-cloroperoxibenzóico (2,04 g, 8,2 mmol) foi adicionado a uma solução de W3 (1,3 g, 3,3 mmol) em CH2Cl2 (70 mL) à temperatura ambiente. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 20 horas. Uma solução aquosa de Na2S2O3 (5 eq) foi adicionada à mistura. As duas camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraída com CH2Cl2 (duas vezes). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com uma solução aquosa saturada de NaHCO3, secas sobre MgSO4, filtradas e o solvente foi removido sob pressão reduzida. O produto bruto foi usado diretamente na etapa seguinte sem purificação adicional.

Síntese do intermediário Z3

[00125] A 0°C, sob um fluxo N2, NaH (457 mg, 11,4 mmol) foi adicionado a uma solução de Y3 (2,1 ml g, 22,8 mmol) em THF (100 mL). A mistura foi agitada durante 30 min à T.A., depois foi adicionado a 0 °C X3 (2 g, 3,8 mmol) em solução para dentro de 20 ml de THF. A mistura foi agitada a 5 °C por 15 min. Foi adicionado gelo e a mistura foi extraída com EtOAc. O composto bruto foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica gel (15 a 40 μm, 80g) em CH2Ch/MeOH/NH4OH (98/2/0.1) para prover o intermediário Z3 (1 g, 48% de rendimento).

Síntese do intermediário A4

[00126] Adicionou-se, à T.A., gota a gota fluoreto tetrabutilamônio (0,653 mL, 0,65 mmol) a uma solução de Z3 (0,3 g, 0,544 mmol) em THF (10 mL). A reação foi agitada à temperatura ambiente durante 3 horas. A mistura foi diluída com EtOAc e vertida para dentro de água. A camada orgânica foi separada, lavada com solução salina, seca com MgSO4, filtrada e o solvente foi evaporado para prover o intermediário A4 (220 mg,100% de rendimento).

Síntese do intermediário B4

[00127] À T.A., sob um fluxo de N2, uma solução de ditercbutil azodicarboxilato (0,72 ml, 3,2 mmol) em THF (10 mL) foi lentamente adicionada gota a gota a uma mistura de A4 (0,7 g, 1,6 mmol), PPh3 (0,84 g, 3,2 mmol) em THF (120 mL). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 12 horas. A mistura de reação foi vertida para água gelada e adicionou-se EtOAc. A mistura foi alcalinizada com uma solução aquosa a 10% de NaHCO3, depois a camada orgânica foi separada, seca com MgSO4, filtrada e os solventes foram evaporados até estarem secos para proverem o intermediário B4 (60 mg, 9% de rendimento).

Síntese do composto final 12

[00128] Pó de ferro (80 mg; 1,43 mmol) foi adicionado a uma mistura de B4 (60 mg; 0,143 mmol) em AcOH (1,3 ml) e água (0,5 mL). A mistura foi agitada vigorosamente à temperatura ambiente durante 6 horas. A mistura reacional foi concentrada sob vácuo e o resíduo foi diluído com CH2Cl2/MeOH 90/10 e água. A camada aquosa foi saturada com K2CO3 depois extraída novamente com CH2Cl2/MeOH 90/10. As camadas orgânicas foram secas com MgSO4, filtradas e concentradas sob vácuo. O composto bruto foi purificado por cromatografia sobre sílica gel (15 a 40 μm, 40 g) em CH2Cl2/MeOH/NH4OH (90/10/0,5). A cristalização de CH3CN/Diisopropileter deu um composto final 12 (14 mg, 29% de rendimento). ESQUEMA GERAL DA PREPARAÇÃO DE PRODUTOS FINAIS: MÉTODO 13

Síntese do intermediário C4

[00129] Uma solução de Z2 (2,12 g, 4,87 mmol) e NEt3 (677 μL, 4,87 mmol) em 4-penten-1-ol (75 mL) foi agitada à temperatura ambiente por 48 h. O solvente foi removido sob vácuo. O composto bruto foi purificado por LC preparativa (90 g de SiOH irregular de 15 a 40 μm da MERCK, gradiente de fase móvel: heptano/ CH2Cl2 50/50 para 0/100) para prover o intermediário C4 (1,6 g, 66% de rendimento) como um óleo amarelo.

Síntese do intermediário D4

[00130] Catalizador de Grubbs de 2a geração (41 mg, 48,47 mmol) foi adicionado a uma solução desgasificada de C4 (208 mg, 0,47 mmol) em CH2Cl2 (150 mL) à temperatura ambiente. A solução foi agitada à temperatura ambiente por 2 h. SiliaBond® DMT (agente de captura Ru da Silicycle®) (298 mg, 0,388 mmol) foi adicionado e a mistura foi agitada à temperatura ambiente por 6 h e a solução foi filtrada com celite®. O filtrado foi concentrado sob vácuo. O composto bruto foi purificado por LC preparativa (90 g de SiOH irregular de 15 a 40 μm da MERCK, gradiente de fase móvel: de heptano/ AcOEt 100/0 para 70/30). As frações contendo o produto esperado foram coletadas e parcialmente evaporadas e o precipitado foi filtrado para prover 736 mg de intermediário D4 (73% de rendimento, contendo 6% de isômero Z). 297 mg dessa batelada foram purificados por LC preparativa (Stability Silica 5μm 150x30,0mm, gradiente de fase móvel: de Heptano/AcOEt 85/15 para 0/100) para prover 195 mg de intermediário D4 como um sólido branco (isômero puro E). A pureza do isômero E foi verificada por cromatografia analítica de fase reversa (Column Nucleodur Sphinx 150X4,6mm, fase móvel: Gradiente de 70% MeOH, 30% HCOOH 0,1% para 100% MeOH). Essa batelada de isômero puro E foi usada na etapa seguinte.

Síntese do composto final 16

[00131] Pó de ferro (158 mg; 2,83 mmol) foi adicionado a uma solução de D4 (195 mg, 0,47 mmol) em AcOH (8 ml) e água (741 μL). A mistura foi aquecida a 100 °C usando um microondas de modo simples (Biotage Initiator EXP 60) com uma potência entre 0 a 400 W por 1h. A mistura foi filtrada em um leito de celite® e enxaguada com DMF (250 mL). O filtrado foi concentrado sob vácuo e o resíduo foi triturado em CH2Cl2/MeOH (80:20). O precipitado foi filtrado, enxaguado com CH2Cl2/MeOH (80:20). O sólido amarelo resultante foi solubilizado em DMF e filtrado em um leito de celite®. O filtrado foi concentrada sob vácuo e o resíduo foi triturado em CH2Cl2/MeOH (90:10). O precipitado foi filtrado dando origem ao composto final 16 na forma de um sólido branco (17 mg, 10 % de rendimento). ESQUEMA GERAL DA PREPARAÇÃO DE PRODUTOS FINAIS: MÉTODO 14

Síntese do intermediário E4

[00132] Uma solução de Z2 (3,8 g, 5,06 mmol) e NEts (844 μL, 6,07 mmol) em 3-buten-1-ol (68 mL) foi agitada à temperatura ambiente por 20 h, depois agitada a 30 °C por 1 h. O solvente foi removido sob vácuo para dar 5 g de óleo amarelo. O produto bruto foi purificado por LC preparativa (120 g de SiOH irregular de 15 a 40 μm da Grace, gradiente de fase móvel: Heptano/CH2Cl2 de 50/50 a 10/90). As frações contendo o produto esperado foram combinadas e o solvente foi removido sob vácuo para fornecer 2,2 g de intermediário E4 na forma de um óleo amarelo.

Síntese de intermediários F4 e G4:

[00133] E4 (1,34 g, 3,14 mmol) foi adicionado a CH2Cl2 seco (1 L) e a mistura resultante foi desgasificada fazendo borbulhar N2 através da solução por 30 min. Foi adicionado um catalisador Grubbs de 2a geração (134 mg, 0,157 mmol) em uma porção e a mistura foi agitada à temperatura ambiente sob atmosfera N2 por 16 h. SiliaBond® DMT (0,965 g, 1,25 mmol) foi adicionado e a mistura foi agitada à T.A. por 16 h e a solução foi filtrada por celite®. O filtrado foi evaporado sob vácuo para dar 1,89 g de sólido amarelo. O produto bruto foi purificado por LC preparativa (50 g de SiOH irregular de 15 a 40 μm da Merck, gradiente de fase móvel: Heptano/AcOEt de 100/0 a 80/20). As frações contendo o produto esperado foram parcialmente evaporadas (AcOEt), o produto foi precipitado e filtrado para dar 162 mg de intermediário F4 (13% de rendimento, isômero E) como um sólido amarelo. As outras frações contendo os produtos esperados foram combinadas e o solvente foi removido sob vácuo para fornecer 244 mg de sólido branco (mistura de F4 (isômero E) e G4 (isômero Z).

[00134] A mesma reação foi realizada em paralelo começando a partir de 895 mg de E4. A partir dessa reação, foi isolado uma batelada de 110 mg de F4 (13% de rendimento, isômero E). Foi obtida uma segunda batelada de 184 mg (mistura de F4 (isômero E) e G4 (isômero Z)).

[00135] As duas bateladas contendo uma mistura de isômeros E e Z foram combinadas (428 mg) e foram purificadas por LC preparativa (Stability Silica 5μm 150x30,0mm, gradiente de fase móvel: de CH2Cl2/MeOH 100/0 a 98/2) para prover 175 mg de F4 (14% de rendimento, isômero E) como um sólido amarelo e 130 mg de G4 (10% de rendimento, isômero Z) como um sólido branco.

[00136] No total, foram obtidos 447 mg de intermediário F4 (isômero E) e 130 mg de intermediário G4 (isômero Z).

Síntese do composto final 15:

[00137] Ferro (93 mg; 1,67 mmol) foi adicionado a uma solução de F4 (111 mg, 0,278 mmol) em ácido acético (5 ml) e água destilada (330 μL). A mistura foi aquecida a 100 °C usando um microondas de modo simples (Biotage Initiator EXP 60) com uma potência entre 0 a 400 W por 1 h. A mistura foi concentrada sob vácuo e triturada em AcOH/H2O (50:50). O precipitado foi filtrado para prover um sólido cinzento que foi solubilizado em DMF e filtrado em um leito de celite®. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para prover um sólido branco-castanho. Esse sólido foi triturado em AcOH/H2O (50:50); o precipitado foi filtrado para prover 40 mg de composto final 15 (45% de rendimento) como um sólido branco.

Síntese do composto final 17:

[00138] Ferro (109 mg; 1,95 mmol) foi adicionado a uma solução de G4 (130 mg, 0,325 mmol) em ácido acético (6 ml) e água destilada (390 μL). A mistura foi aquecida a 100 °C usando um microondas de modo simples (Biotage Initiator EXP 60) com uma potência entre 0 a 400 W por 1h 30. A mistura foi concentrada sob vácuo e triturada em uma solução de AcOH/H2O (50:50). O precipitado foi filtrado para prover um sólido cinzento que foi triturado em AcOH/H2O (50:50); o precipitado foi filtrado e solubilizado em DMF. A mistura foi filtrada em um leito de celite® e o filtrado foi concentrado sob vácuo para prover um sólido branco. Esse sólido foi triturado em uma solução fria de AcOH/H2O (50:50); o precipitado foi filtrado para prover 18 mg de composto final 17 (17% de rendimento) como um sólido branco. ESQUEMA GERAL DA PREPARAÇÃO DE PRODUTOS FINAIS: MÉTODO 15

Síntese do intermediário I4:

[00139] Uma mistura de X3 (4 g, 7,61 mmol), H4 (1,1 g, 9,13 mmol) e K2CO3 (1,3 g, 9,13 mmol) em CH3CN (120 mL) foi agitada a 80°C por 1.5 h. Foi adicionada água e a mistura foi extraída com EtOAc (duas vezes). A camada orgânica foi seca em MgSO4, foi filtrada e o solvente foi evaporado sob pressão reduzida. O material bruto foi purificado por cromatografia sobre sílica gel (15 a 40 μm, 120 g) em CH2Cl2/MeOH/NH4OH 98/2/0,1 para prover 2,7g (63% de rendimento) de intermediário I4.

Síntese do intermediário J4:

[00140] Foi adicionado fluoreto de tetrabutilamônio (5,6 mL, 5,56 mmol) gota a gota a uma solução de I4 (2,6 g, 4,64 mmol) em THF (125 mL) à temperatura ambiente. A reação foi agitada à temperatura ambiente por 3 horas. A mistura foi diluída com EtOAc e vertida para dentro de água. A camada orgânica foi lavada com solução salina, seca com MgSO4, filtrada e o solvente foi removido sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por LC preparativa (80 g de SiOH irregular de 15 a 40 μm da Grace, fase móvel: CH2Cl2/MeOH/NH4OH 96/4/0,1) para prover 1,82 g de intermediário J4. O composto bruto foi usado na próxima etapa.

Síntese do intermediário K4:

[00141] Uma mistura de J4 (1,82 g, 4,08 mmol), Cs2CO3 (1,47 g, 4,49 mmol), brometo de alila (0,39 mL, 4,49 mmol) em CH3CN (60 ml) foi agitada à T.A. por 5 h e depois a 50°C por 1h. A mistura de reação foi vertida para água gelada e adicionou-se EtOAc. A mistura foi alcalinizada com uma solução aquosa de NaHCO3 10% em água. A camada orgânica foi separada, seca com MgSO4, filtrada e os solventes foram evaporados até estarem secos para prover 1,94 g de intermediário K4. O composto bruto foi usado diretamente na próxima etapa.

Síntese do intermediário L4:

[00142] Catalizador de Grubbs de 2a geração (100 mg, 0,117 mmol) foi adicionado a uma solução desgasificada de K4 (570 mg, 1,17 mmol) em CH2Cl2 (225 mL) à temperatura ambiente. A solução foi agitada à T.A. por 36 horas.

[00143] Foi adicionado SiliaBond® DMT (1,8 g) à mistura reacional que foi agitada à T.A. por 18 horas. A mistura foi filtrada através de um leito de celite®. A celite® foi lavada com CH2Cl2. O filtrado foi evaporado sob pressão reduzida. Foi realizada purificação por cromatografia flash sobre sílica gel (15 a 40 μm, 40 g, CH2CI2/CH3OH/NH4OH: 97,5/2,5/0,1). As frações puras foram recolhidas e evaporadas até à secura. O sólido seco foi novamente purificado por SFC aquiral em (AMINO 6μm 150x21,2mm), fase móvel (80% CO2, 20% MeOH) para prover 182 mg (34% de rendimento) de intermediário L4 (isômero E).

Síntese do composto final 18:

[00144] Ferro (200 mg; 3,58 mmol) foi adicionado a uma mistura de L4 (182 mg, 0,40 mmol) em ácido acético (4,3 ml) e água destilada (0,85 mL). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 12 horas. Foram adicionados 6,5 mL de ácido acético e a mistura foi agitada a 50 °C por 3h, e depois a 80 °C por 2h.

[00145] O produto bruto foi purificado por fase reversa em (X-Bridge- C18 5μm 30*150mm), fase móvel (gradiente de 90% de ácido fórmico a 0,1%, 10% CH3OH para 0% ácido fórmico a 0,1%, 100% CH3CN) para prover 44 mg (29% de rendimento) de composto final 18. Esquema geral da preparação de produtos finais: método 16

Síntese do intermediário M4:

[00146] Uma solução de X3 (1,4 g, 2,66 mmol) e NEt3 (0,44 mL, 0,46 mmol) em álcool alílico (14 mL) foi agitada a 80 °C por 1 h. CH2Cl2 e H2O foram adicionados e a mistura foi decantada. A camada orgânica foi seca sobre MgSO4 e concentrada sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por LC preparativa (80 g de SiOH irregular de 15 a 40 μm da MERCK, fase móvel de heptano/ AcOEt 85/15) para prover 500 mg (37% de rendimento) de intermediário M4.

Síntese do intermediário N4:

[00147] Foi adicionado fluoreto de tetrabutilamônio (4,5 mL, 4,5 mmol) gota a gota a uma solução de M4 (1,9 g, 3,77 mmol) em THF (90 mL) à temperatura ambiente. A reação foi agitada à temperatura ambiente por 3 horas. A mistura reacional foi diluída com EtOAc e vertida para dentro de água. A camada orgânica foi lavada com solução salina e seca com MgSO4, filtrada e o solvente foi removido sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por LC preparativa (40 g de SiOH irregular de 15 a 40 μm da MERCK, fase móvel de heptano/ AcOEt 70/30) para prover 900 mg (61% de rendimento) de intermediário N4.

Síntese do intermediário O4:

[00148] Uma mistura de N4 (2,5 g, 6,42 mmol), Cs2CO3 (3,14 g, 9,63 mmol), brometo de alila (0,83 mL, 9,63 mmol) em CH3CN (100 ml) foi agitada a 70 °C por 1h. A mistura de reação foi vertida para água gelada e adicionou-se EtOAc. A mistura foi alcalinizada com uma solução aquosa saturada de NaHCO3. A camada orgânica foi então separada, seca em MgSO4, filtrada e os solventes foram evaporados até à secura. O produto bruto foi purificado por cromatografia sobre sílica gel (15 a 40 μm, 80g) em heptano/ AcOEt 80/20) para prover 1,47 g (53% de rendimento) de intermediário O4.

Síntese de intermediários P4 e Q4:

[00149] Uma solução de O4 (400 mg, 0,93 mol) e solução de clorociclohexilborano 1 M em hexano (186 μL, 0,19 mmol) em dicloroetano seco (220 mL) foi agitada a 80 °C e sob atmosfera de N2 por 1 h. 0,033 eq de catalisador de Grubbs-Hoveyda de 2a geração (20 mg, 0,031 mmol) foi adicionada e a mistura foi agitada em um tubo selado a 120 °C por 1 h. O tubo foi então aberto, 0,033 eq de catalisador de Grubbs-Hoveyda de 2a geração (20mg, 0,031 mmol) foram adicionados e a mistura foi agitada no tubo selado a 120 °C por 1 h. O tubo foi então aberto, 0,033 eq de catalisador de Grubbs-Hoveyda de 2a geração (20mg, 0,031 mmol) foram adicionados e a mistura foi agitada no tubo selado a 120 °C por 2 h. Foi adicionado SiliaBond® DMT (1,43g, 0,745 mmol) à mistura, que foi agitada à T.A. por 12h. A mistura foi filtrada através de um leito de celite® e concentrada sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado primeiro por LC preparativa (SiOH irregular 15 a 40 μm, 40 g Merck, fase móvel heptano/AcOEt 80/20) e depois por SFC aquiral em (Amino 6μm 150x21,2mm), fase móvel (83% CO2, 17% MeOH) para prover 55 mg (15%) de intermediário P4 (isômero E) e 80 mg (21% de rendimento) de intermediário Q4 (isômero Z).

Síntese do composto final 23:

[00150] Ferro (264 mg; 4,73 mmol) foi adicionado a uma mistura de P4 (190 mg, 0,47 mmol) em ácido acético (10 ml) e água destilada (2 mL). A mistura foi agitada vigorosamente a 50 °C durante 5 horas. A mistura reacional foi concentrada sob vácuo e o resíduo foi diluído com CH2Cl2/MeOH 90/10 e água. A mistura foi saturada com K2CO3 depois extraída com CH2Cl2/MeOH 90/10. As camadas orgânicas foram secas com MgSO4, filtradas e concentradas sob vácuo. O composto bruto foi purificado por cromatografia sobre sílica gel (15 a 40 μm, 40 g) em CH2Cl2/MeOH/NH4OH 90/10/0,5 para prover 40 mg (26% de rendimento) de composto final 23.

Síntese do composto final 22:

[00151] Ferro (334 mg; 5,98 mmol) foi adicionado a uma mistura de Q4 (240 mg, 0,6 mmol) em ácido acético (12 ml) e água (2,5 mL). A mistura foi agitada vigorosamente a 50 °C durante 5 horas. A mistura reacional foi concentrada sob vácuo e o resíduo foi diluído com CH2Cl2/MeOH 90/10 e água. A mistura foi saturada com K2CO3 depois extraída com CH2Cl2/MeOH 90/10. As camadas orgânicas foram secas com MgSO4, filtradas e concentradas sob vácuo. O composto bruto foi purificado por cromatografia sobre sílica gel (15 a 40 μm, 40 g) em CH2Cl2/MeOH/NH4OH 90/10/0,5 para prover 70 mg (36% de rendimento) de composto final 22. ESQUEMA GERAL DA PREPARAÇÃO DE PRODUTOS FINAIS: MÉTODO 17

Síntese do intermediário T4:

[00152] A 0 °C, NaH (695 mg, 17,36 mmol) foi adicionado em porções a uma mistura de S4 (1,52 g, 8,68 mmol) em THF (70 mL). A mistura foi agitada a 0 °C por 30 min e depois adicionada gota a gota a 0 °C a R4 (4,6 g, 17,36 mmol) em THF (45 mL). A reação foi agitada à T.A. por uma noite. Foi extraída uma quantidade muito pequena de gelo e o composto esperado foi extraído com AcOEt. O solvente foi evaporado sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia sobre sílica gel (15 a 40 μm, 220 g) em heptano/ AcOEt 80/20 a 60/40) para prover 1,44 g (23% de rendimento) de intermediário T4.

Síntese do intermediário U4:

[00153] Uma mistura de V2 (1 g, 3,42 mmol), T4 (1,35 g, 3,76 mmol), K2CO3 (1,18 g, 8,54 mmol) e NaI (512 mg, 3,42 mmol) em acetona (25 mL) foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. O precipitado foi filtrado, lavado com acetona e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (15 a 41 μm, 40 g) em heptano/ AcOEt 80/20 para prover 1,4 g (72% de rendimento) de intermediário U4.

Síntese do intermediário V4:

[00154] U4 (1,5 g, 2,63 mmol) foi agitado em NH3 30% em água (30 mL) e THF (30 mL) à temperatura ambiente por 2h. A mistura foi concentrada sob vácuo e o resíduo foi seco por destilação azeotrópica com EtOH (duas vezes). O produto bruto (1,3 g, 89% de rendimento) foi usado sem purificação adicional na próxima etapa.

Síntese do intermediário W4:

[00155] À temperatura ambiente, monoidrato de ácido para-tolueno (81 mg; 0,47 mmol) foi adicionado a uma mistura de V4 (2,60 g; 4,72 mmol) em MeOH (26 ml) e água (2,60 mL). A mistura foi agitada à temperatura ambiente e depois a 60 °C durante 12 horas. A mistura reacional foi diluída com EtOAc e alcalinizada com K2CO3 10% em água. A camada orgânica foi separada, seca em MgSO4, filtrada e o solvente foi evaporado sob pressão reduzida para fornecer 2 g (rendimento de 90%) do intermediário W4.

Síntese do intermediário X4:

[00156] Ácido metacloroperoxibenzóico (951 mg, 3,86 mmol) em CH2Cl2 (40 mL) foi adicionado gota a gota a uma solução de W4 (1,80 g, 3,86 mmol) em CH2Cl2 (10 mL) à temperatura ambiente. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 6 horas. Uma solução aquosa de Na2S2O3 (2 eq) foi adicionada à mistura. As duas camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraída com CH2Cl2 (duas vezes). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre MgSO4, filtradas e o solvente foi removido sob pressão reduzida. Foi realizada purificação por cromatografia flash sobre sílica gel (15 a 40 μm, 80 g, CH2Cl2/CH3OH: 95/5. As frações puras foram coletadas e evaporadas até estarem secas para fornecer 1,4 g (rendimento de 75%) do intermediário X4.

Síntese do intermediário Y4:

[00157] A 0°C, sob um fluxo N2, tBuOK (577 mg, 5,14 mmol) foi adicionado a uma solução de X4 (1,24 g, 2,57 mmol) em THF (418 mL). A mistura foi agitada a 80 °C por uma noite. Adicionou-se água e a mistura foi extraída com EtOAc. A camada orgânica foi seca em MgSO4, foi filtrada e o solvente foi evaporado. Foi realizada purificação por cromatografia flash sobre sílica gel (15 a 40 μm, 50g, CH2CI2/CH3OH 98/2). As frações puras foram coletadas e evaporadas até estarem secas para fornecer 85 mg (rendimento de 7%) do intermediário Y4.

Síntese do composto final 24:

[00158] Ferro (68 mg; 1,22 mmol) foi adicionado a uma mistura de Y4 (85 mg, 0,21 mmol) em ácido acético (2,2 ml) e água (0,24 mL). A mistura foi agitada a 50 °C durante 3 horas. A mistura foi filtrada, lavada com AcOH e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O composto bruto foi coletado em DMF e foram adicionados 2 g de SiO2 63-200 μm. A suspensão resultante foi evaporada até à secura e colocada no topo de um cartucho de purificação de 25 g.

[00159] Foi realizada purificação por cromatografia flash sobre sílica gel (15 a 40 μm, 25 g, CH2Cl2/CH3OH/NH4OH: 95/5/0,5). As frações puras foram coletadas e evaporadas até à secura para fornecer 31 mg. O composto foi solidificado a partir de CH3CN, o precipitado foi filtrado e seco para fornecer 22 mg (32% de rendimento) de composto final 24. ESQUEMA GERAL DA PREPARAÇÃO DE PRODUTOS FINAIS: MÉTODO 18

Síntese do intermediário A5:

[00160] A 0 °C, diisopropilazodicarboxilato (20,4 mL; 102,5 mmol) foi adicionado gota a gota a uma mistura de V2 (20 g, 68,33 mmol), Z4 (12,2 g; 68,33 mmol) e PPh3 (27 g; 102,5 mmol) em THF (500 mL). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 12 horas. Adicionaram-se EtOAc e água. As camadas foram decantadas. A camada orgânica foi lavada com água, seca sobre MgSO4, filtrada e o solvente foi evaporado. O composto bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica gel (15 a 40 μm, 330 g, CH2Ch/heptano 70/30). As frações puras foram coletadas e evaporadas até estarem secas para fornecer 12 g (rendimento de 39%) do intermediário A5.

Síntese do intermediário B5:

[00161] Uma mistura de A5 (5,4 g, 11,92 mmol) em NH3 a 30% em água (100 ml) e THF (100 ml) foi agitada à temperatura ambiente durante 1,3 horas. A mistura foi concentrada. O resíduo foi coletado com tolueno e concentrado (o processo foi repetido duas vezes) para prover 5,15 g de intermediário B5.

Síntese do intermediário C5:

[00162] A 0°C, ácido 3-cloroperoxibenzóico (2,93 g, 11,86 mmol) em CH2Cl2 (20 mL) foi adicionado a uma mistura de B5 (5,14 g, 11,86 mmol) em CH2Cl2 (100 mL). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 3 horas. Uma solução aquosa de Na2S2O3 (2 eq) foi adicionada à mistura. Duas camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraída com CH2Cl2. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com uma solução aquosa saturada de NaHCO3, secas sobre MgSO4, filtradas e o solvente foi removido sob pressão reduzida para fornecer 6,7 mg do intermediário C5 (contendo análogo de sulfona) que foi diretamente usado na etapa seguinte.

Síntese do intermediário D5:

[00163] Uma mistura de C5 (5,6 g; 12,46 mmol), NEt3 (2,6 mL; 18,69 mmol) em álcool alílico (47,6 mL) foi agitada a 100 °C por 30 min. A mistura foi concentrada e o composto bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica gel (15 a 40 μm, 330 g, Heptano/AcOEt 80/20). As frações puras foram coletadas e evaporadas até estarem secas para fornecer 3,45 g de intermediário D5 (62% de rendimento).

Síntese de intermediários E5 e F5:

[00164] A experiência foi realizada em quatro bateladas de 2 g de D5.

[00165] Catalisador de Grubbs de 2a geração (1,54 g; 1,80 mmol) foi adicionado em 3 vezes (3*514 mg) (a t = 0, t = 12 h, t = 24 h) para uma mistura de D5 (8 g; 18,04 mmol) em CH2Cl2 extra seco (3470 mL). A mistura foi agitada à T.A. por 36 h. Foi adicionado SiliaBond® DMT (24 g; 14,43 mmol) e a mistura foi agitada 24 horas à temperatura ambiente. O sólido foi filtrado e o solvente foi evaporado para prover 8,2 g. Foi realizada purificação por cromatografia flash sobre sílica gel (15 a 40 μm, 330 g, CH2Ch/MeOH 99,5/0,5) As frações puras foram coletadas e evaporadas até à secura para prover 4,55 g de uma mistura de E5 e F5 após filtração e secagem de um sólido em CH2Cl2/Diisopropileter. Os dois isômeros foram separados por SFC aquiral (fase estacionária: Chiralpak IA 5 μm 250*20 mm), fase móvel: 70% CO2, 30% MeOH) para prover 4,07 g de intermediário E5 (isômero E, 54% de rendimento) e 187 mg de intermediário F5 (isômero Z, 2,5% de rendimento).

Síntese do composto final 84:

[00166] À T.A., TiCl3 (5,5 mL; 6,45 mmol) foi adicionado gota a gota a uma mistura de F5 (134 mg, 0,32 mmol) em THF (20 mL). A mistura foi agitada à T.A. por uma noite. A 0 °C, a mistura foi alcalinizada com pó K2CO3. A resultante mistura lamacenta foi filtrada através de um leito de celite® e a celite® foi lavada com uma solução de AcOEt/CH3OH 8/2. O filtrado foi seco em MgSO4, filtrado e o solvente foi evaporado para fornecer 182 mg de um composto bruto. Foi adicionado MeOH, apareceu um sólido, foi filtrado e seco sob vácuo a 90°C para 66 mg de composto final 84 (60% de rendimento).

Síntese do composto final 32:

[00167] À T.A., TiCl3 (60 mL; 69,811 mmol) foi adicionado gota a gota a uma mistura de E5 (1,45 g, 3,49 mmol) em THF (130 mL). A mistura foi agitada à T.A. por uma noite. A 0°C, a mistura foi alcalinizada com pó K2CO3. A resultante mistura lamacenta foi filtrada através de um leito de celite® e a celite® foi lavada com uma solução de AcOEt/CH3OH 8/2. O filtrado foi parcialmente evaporado para prover 1,1 g de composto bruto após filtração de um sólido branco e secagem sob vácuo. O composto bruto foi purificado por LC preparativa (fase estacionária: carga seca de 220 g + 10 g 15 a 40 μm da Grace), fase móvel: 0,5% NH4OH, 97% CH2Cl2, 3% MeOH para 0.5% NH4OH, 90% CH2Cl2, 10% MeOH) para prover 730 mg de composto final 32 após evaporação do solvente e secagem sob vácuo (62% de rendimento). ESQUEMA GERAL DA PREPARAÇÃO DE PRODUTOS FINAIS: MÉTODO 19

Síntese do intermediário H5:

[00168] O intermediário G5 foi sintetizado usando o procedimento descrito para o intermediário P4.

[00169] Uma mistura de G5 (250 mg, 0,60 mmol), PtO2 (25 mg) em CH3OH/THF 50/50 (20 mL) foi hidrogenada sob uma pressão atmosférica de H2 por 30 minutos. O catalisador foi removido por filtragem. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O composto bruto foi purificado por LC preparativa em (30 g de SiOH irregular de 15 a 40 μm da MERCK), fase móvel (80% de heptano, 20% de AcOEt). >O composto resultante foi adicionalmente purificado por SFC aquiral em (2-Etilpiridina 6μm 150x30mm), fase móvel (70% CO2, 30% CH3OH) para prover 113 mg de intermediário H5 (45% de rendimento). Síntese do composto final 38:

[00170] Ferro (147 mg; 2,63 mmol) foi adicionado a uma mistura de H5 (110 mg; 0,26 mmol) em ácido acético (7 ml) e água (1,5 mL). A mistura foi agitada vigorosamente à temperatura ambiente por 6 h a 50 °C. A mistura reacional foi concentrada em vácuo e o resíduo foi coletado por uma mistura de DMF/THF, filtrado através de um leito de celite® e evaporado. O produto bruto foi diluído com ácido acético/água, um precipitado foi filtrado, lavado com CH3OH e seco para prover 55 mg de composto final 38 (61% de rendimento). ESQUEMA GERAL DA PREPARAÇÃO DE PRODUTOS FINAIS: MÉTODO 20

Síntese do intermediário I5:

[00171] A reação foi realizada em duas bateladas de 15 g de V2.

[00172] Aqui está o protocolo para uma batelada de 15 g:

[00173] NH3 (2M em isopropanol) (51 mL; 102 mmol) foi adicionado a uma solução de V2 (15 g; 51,2 mmol) em THF (250 mL) à T.A. por 2 h. As duas bateladas foram misturadas. A suspensão foi concentrada até à secura. O sólido foi dissolvido em CH2Cl2. A camada orgânica foi lavada com água (uma vez), seca em MgSO4, filtrada e o solvente foi removido sob pressão reduzida para fornecer 28,5 g de intermediário I5 (rendimento de 100%) como um sólido branco.

Síntese do intermediário J5:

[00174] A reação foi realizada em duas bateladas de 14 g de I5.

[00175] Aqui está o protocolo para uma batelada de 14 g:

[00176] Uma solução de ácido metacloroperoxibenzóico (9,58 g, 40,0 mmol) em CH2Cl2 (500 mL) foi adicionada gota a gota a uma solução de I5 (14 g, 33,3 mmol) em CH2Cl2 (2 L) à temperatura ambiente. A mistura foi agitada à T.A. por 16 horas. A solução foi filtrada para prover 18 g de fração 1.

[00177] Uma solução aquosa a 10% de Na2S2O3 e uma solução aquosa saturada de NaHCO3 foram adicionadas ao filtrado. As camadas foram separadas e a camada orgânica foi seca sobre MgSO4, filtrada e o solvente foi removido em vácuo para fornecer 14 mg de intermediário J5 como um sólido amarelo. O composto bruto foi usado diretamente na próxima etapa da reação.

Síntese do intermediário K5:

[00178] Uma solução de J5 (6 g, 20,7 mmol) e NEt3 (3,2 mL, 22,8 mmol) em álcool alílico (120 mL) foi agitada à temperatura ambiente por 16 h. O solvente foi removido em vácuo para prover um sólido amarelo. O composto bruto foi purificado por LC preparativa (120 g de SiOH irregular de 15 a 40 μm da Grace, gradiente da fase móvel: de CH2Cl2/EtOAc, 100/0 a 85/15) para fornecer 4 g do intermediário K5 como um sólido branco (rendimento de 68%).

Síntese do intermediário M5:

[00179] A uma suspensão de L5 (5,2 g; 32,2 mmol) e K2CO3 (11,1 g; 80,5 mmol) em acetona (250 mL) foi adicionado 4-bromo-1-buteno (4,1 mL; 40,2 mmol), e a mistura foi aquecida a 60 °C durante16 h. 4-bromo- 1-buteno (4,1 mL; 40,2 mmol) e NaI (0,965 g; 6,43 mmol) foram adicionados e a mistura foi aquecida a 60 °C durante 5 dias, durante o que foram realizadas sucessivas adições de 4-bromo-1-buteno (2x4.1 mL; 80,4 mmol), K2CO3 (2x2,22 g; 32,2 mmol), e NaI (3,86 g; 25,7 mmol) de forma a atingir a conversão completa, como observada por TLC. A mistura foi filtrada e o filtrado foi concentrado em vácuo para prover um óleo castanho. O composto bruto foi purificado por LC preparativa em (450 g de SiOH Irregular 20 a 45 μm da Matrex), fase móvel (0,7% NH4OH, 85% Heptano, 15% iPrOH) para prover 3,6 g de intermediário M5 como um óleo cor de laranja (62% de rendimento).

Síntese do intermediário N5:

[00180] A reação foi realizada em três bateladas.

[00181] Procedimento típico para uma batelada:

[00182] Sob nitrogênio, uma solução de K5 (667 mg; 2,35 mmol), M5 (633 mg; 3,53 mmol), PPh3 (926 mg; 3,53 mmol) e ditercbutilazodicarboxilato (813 mg; 3,53 mmol) em THF seco (20 mL) foi aquecida a 130°C usando um microondas de modo simples (Biotage Initiator EXP 60) com uma potência de 0 a 400 W por 1 h.

[00183] As três bateladas foram combinadas e evaporadas sob vácuo para dar 9,8 g de um sólido castanho. O composto bruto foi purificado por LC preparativa em (450 g de SiOH irregular de 20 a 45 μm da Matrex), fase móvel (gradiente de 60% de heptano, 40% de AcOEt para 50% de heptano, 50% de AcOEt) para prover 1,1 g de intermediário N5 (22 de rendimento) como um sólido amarelo.

Síntese de intermediários O5 e P5:

[00184] Uma solução de N5 (950 mg; 1,35 mmol) e clorodiciclohexilborano (1 M em hexano) (270 μL; 270 μmol) em dicloroetano seco (452 mL) foi agitada a 80°C por 1 h. Foi adicionado catalisador de Grubbs-Hoveyda de 2a geração (35 mg; 56,2 μmol) e a mistura foi agitada a 120°C por 1 h e depois foi adicionado mais catalisador (35 mg; 56,2 μmol). A mistura foi agitada a 120 °C por 24 h. Foi novamente adicionado catalisador de Grubbs-Hoveyda de 2a geração (57 mg; 90,9 mmol) e a mistura foi agitada a 120 °C por 6 h. Foi adicionado SiliaBond® DMT (3,11 g; 1,62 mmol) e a mistura foi agitada à T.A. por 24 h, depois o sólido escuro foi filtrado e o filtrado foi evaporado em vácuo. O composto bruto foi purificado por LC preparativa (90 g de SiOH irregular 15 a 40 μm, da Merck; gradiente de fase móvel: de heptano/iPrOH 90/10 a 65/35) para prover 0,12 g de intermediário O5 (13% de rendimento), 0,47 g de uma mistura de intermediários O5 e P5 (52% de rendimento) e 28 mg de intermediário P5 (3% de rendimento).

[00185] A mistura de intermediários O5 e P5 foi adicionalmente purificada por LC preparativa (Stability silica 5 μm 150x30,0 mm, gradiente de fase móvel: de heptano/AcOEt 85/15 a 0/100) para prover 120 mg de intermediário O5 e 224 mg de intermediário P5.

[00186] Rendimento global: 54% (isômero E O5: 28%, isômero Z P5: 26%).

Síntese do composto final 39:

[00187] Uma mistura de O5 (240 mg; 0,355 mmol) e ferro (119 mg; 2,13 mmol) em ácido acético (4,3 mL) e água (0,4 mL) foi aquecida a 100°C usando um microondas de modo simples (Biotage Initiator EXP 60) com uma potência entre 0 a 400 W por 1 h. O solvente foi removido sob vácuo e o resíduo foi coletado com DMF. A mistura foi filtrada com celite® e o filtrado foi evaporado em vácuo para prover a fração 1. Foi adicionado SiliaBond® imidazol (agente de captura Fe da Silicycle®) (3,67 g; 4,25 mmol) à fração 1 em DMF (50 mL). A mistura foi agitada à T.A. por 16 h e filtrada com celite® e o filtrado foi evaporado em vácuo para prover 100 mg da fração 2. A fração 2 foi purificada por LC preparativa (25 g de SiOH irregular de 15 a 40 μm da Merck, carga seca, gradiente da fase móvel: de CH2Cl2/MeOH/NH3aq 95/5/0,5 a 85/15/1,5) para fornecer 9 mg do composto final 39 como um sólido branco (rendimento de 7%). ESQUEMA GERAL DA PREPARAÇÃO DE PRODUTOS FINAIS: MÉTODO 21

Síntese do intermediário Q5:

[00188] A reação foi realizada em 3 bateladas de 20 g de intermediário J5.

[00189] Eis o protocolo para uma batelada de 20 g:

[00190] Uma solução de J5 (20 g, 69,1 mmol) e NEt3 (11,5 mL, 83,0 mmol) em 3-buten-1-ol (500 mL) foi agitada à temperatura ambiente por 16 h. O solvente foi removido em vácuo para prover um sólido amarelo. As três reações combinadas foram purificadas por LC preparativa (750 g de SiOH irregular de 15 a 40 μm da Grace, gradiente de fase móvel: CH2Cl2/EtOAc de 100/0 a 80/20). As frações contendo o produto foram combinadas e o solvente foi removido sob vácuo para fornecer 39 g de intermediário Q5 (63% de rendimento).

Síntese do intermediário S5:

[00191] Q5 (12,8 g, 43,2 mmol), R5 (16,1 g, 77,8 mmol), K2CO3 (14,9 g, 108 mmol) e NaI (6,48 g, 43,2 mmol) em acetona (690 ml) foram agitados à temperatura ambiente por 1 hora e então a mistura foi aquecida a 75 °C por 16 h. A mistura foi arrefecida até à T.A. e foi filtrada através de um leito de celite®. O filtrado foi evaporado em vácuo para prover a fração 1. A fração 1 foi combinada com outra batelada (reação com 67,46 mmol de Q5) para ser purificada por LC preparativa (2 cromatografia em série, 220 g de SiOH irregular, 15 a 40 μm, da Grace, injeção líquida, gradiente de fase móvel: de CH2Cl2/EtOAc 100/0 a 50/50) para prover 1,97 g da fração 2 como um sólido castanho e 10,7 g da fração 3 como um sólido castanho.

[00192] As duas frações foram coletadas e diluídas com CH2Cl2. Foi adicionado heptano e a mistura foi parcialmente evaporada em vácuo para prover um precipitado castanho claro que foi filtrado para prover 11,26 g de intermediário S5 como um sólido esbranquiçado (59% de rendimento).

Síntese de intermediário T5 e U5:

[00193] A reação foi realizada em duas bateladas usando respectivamente 2,75 g e 1,51 g de intermediário S5.

[00194] Procedimento típico para uma batelada:

[00195] Uma solução de S5 (1,51 g; 3,40 mmol) e clorodiciclohexilborano (1M em hexano) (0,679 mL; 0,679 mmol) em dicloroetano seco (908 mL) desgasificada fazendo borbulhar N2 por 15 min foi agitada a 80 °C sob atmosfera de N2 por 1 h. Foi adicionado um catalisador de Grubbs-Hoveyda de 2a geração (213 mg; 0,340 mmol) e a mistura foi agitada a 80 °C por 1 h. Foi adicionado SiliaBond® DMT (4,45 g; 2,72 mmol) e a mistura resultante foi agitada à T.A. por 20 h. As duas bateladas foram combinadas e filtradas através de um leito de celite®. O filtrado foi evaporado em vácuo para dar 4,2 g de um sólido castanho. O sólido foi purificado por LC preparativa (200 g de SiOH regular de 30 μm da Interchim, gradiente da fase móvel: de CH2Cl2/AcOEt 100/0 a 25/75) para fornecer 2,5 g de fração 1 e 1,3 g do intermediário T5 (32%, isômero E). A fração 1 foi coletada com CH2Cl2, depois foi adicionado heptano. CH2Cl2 foi parcialmente evaporado em vácuo e o precipitado resultante foi filtrado e seco sob vácuo para prover 1,52 g do intermediário U5 (38% de rendimento, isômero Z).

Síntese do composto final 45:

[00196] Essa reação foi realizada em cinco bateladas usando respectivamente 0,5 g, 3 vezes 1 g e duas vezes 1,45 g de intermediário U5.

[00197] Eis o procedimento para duas bateladas de 1,45 g:

[00198] Sob atmosfera N2, foi adicionado U5 (1,45 g; 3,48 mmol) em porções a uma solução de ácido acético (193 mL) e água (19 mL) aquecida a 70 °C. Após dissolução completa, foi adicionado ferro (1,17 g; 20,9 mmol) em uma porção e a mistura foi agitada a 70 °C por 4 h. As 2 bateladas foram combinadas e filtradas a quente através de um leito de celite® e a celite® foi enxaguada com ácido acético quente. O filtrado resultante foi concentrado para prover um resíduo castanho que foi coletado com MeOH, sonicado e aquecido para prover um precipitado amarelo que foi filtrado para dar a fração 1 como um sólido amarelo. A fração 1 foi coletada com ácido acético (30 mL) e sonicada até à dissolução parcial. Foi adicionada água (700 mL) e a mistura resultante foi sonicada por 1 h, arrefecida até 0°C (banho de gelo) para prover um precipitado que foi filtrado (frita de vidro n°5) para prover um sólido esbranquiçado. O sólido foi coletado com MeOH, misturado com 3 outras bateladas (obtidas com 0,5 g e 2 vezes 1 g de U5). A mistura resultante foi sonicada, aquecida e arrefecida até 0 °C (banho de gelo) e o sólido resultante foi filtrado (frita de vidro n°4) para prover 3,5 g de fração 2 como um sólido esbranquiçado. A fração 2 foi misturada com a última batelada (obtida com 1 g de U5), foi adicionado DMSO (280 mL) e a mistura foi aquecida a 100 °C até à dissolução completa. A solução resultante foi filtrada e o filtrado foi adicionada a água (1,7 L). O precipitado resultante foi agitado à T.A. por 16 horas. O precipitado foi filtrado para prover 4,1 g de fração 3 como um sólido esbranquiçado.

[00199] A fração 3 foi coletada com EtOH e foi sonicada a 45 °C por 2 h. A mistura resultante foi diretamente filtrada (frita de vidro n°4) para prover 3,63 g de fração 4 como um sólido esbranquiçado. A fração 4 foi coletada com MeOH (180 mL) e a mistura foi agitada a 60 °C por 1 h. A mistura foi filtrada quente para prover 3,47 g de composto final 45 como um sólido esbranquiçado (54% de rendimento). ESQUEMA GERAL DA PREPARAÇÃO DE PRODUTOS FINAIS: MÉTODO 22

Síntese do intermediário W5:

[00200] A reação foi realizada em 3 bateladas usando respectivamente 0,2 g, 1,5 g e 4 g de intermediário V5.

[00201] Eis o procedimento para a batelada de 4 g:

[00202] V5 (4 g; 15,8 mmol), NaOH (2,52 g; 63,1 mmol) e 3-buten-1- ol (100 mL) foram agitados a 90 °C por 24 h. O solvente foi removido sob pressão reduzida para prover a fração 1 como um óleo castanho. A fração 1 foi combinada com duas outras bateladas para prover a fração 2. A fração 2 foi purificada por LC preparativa (80 g de SiOH irregular de 15 a 40 μm da Grace, carga seca, gradiente de fase móvel: CH2Cl2/MeOH/NH3aq de 97/3/0,03 a 80/20/2) para prover 3,88 g de intermediário W5 como um sólido cor de laranja (60% de rendimento).

Síntese do intermediário X5:

[00203] Adicionou-se HCI (1 M em água) (2 mL) a uma solução agitada de W5 (3,88 g, 13,4 mmol) em MeOH (160 mL) à temperatura ambiente. A mistura foi agitada a 60 °C por 4 h. depois foi adicionado HCl (3 M em água) (2 mL) e a mistura foi agitada a 60 °C por 64 h. A mistura reacional foi concentrada em vácuo, o resíduo resultante foi coletada com CH2Cl2, filtrada e seca sob pressão reduzida para prover 2,72 g de intermediário X5 como um sólido castanho claro (84% de rendimento). O composto foi usado diretamente na próxima etapa da reação.

Síntese do intermediário Y5:

[00204] W2 (2,34 g; 14,0 mmol) foi adicionado a uma solução agitada de W5 (2,62 mg, 12,8 mmol) e K2CO3 (3,9 g; 28,1 mmol) em DMF (40 mL). A mistura foi agitada à T.A. por 1 h e depois a 70 °C por 3 h. A mistura reacional foi arrefecida até à T.A., diluída com MeOH e filtrada em um leito de celite®. O filtrado resultante foi concentrado em vácuo para prover a fração 1. A fração 1 foi purificada por LC preparativa (80 g de SiOH irregular de 15 a 40 μm da Grace, carga seca, gradiente de fase móvel: CH2Cl2/MeOH/NH3aq de 100/0/0 a 80/20/2) para prover 4,6 g de um sólido cor de laranja. O sólido foi purificado por LC preparativa (80 g de SiOH irregular de 15 a 40 μm da Grace, carga seca, gradiente de fase móvel: Heptano/CH2Cl2/MeOH de 100/0/0 a 0/90/10) para prover 3 g de intermediário Y5 de um sólido cor de laranja. O composto foi usado como tal na próxima etapa da reação.

Síntese do composto final 52:

[00205] A reação foi realizada em 2 bateladas de 250 mg de intermediário Y5.

[00206] Aqui é reportado o procedimento para uma batelada de 250 mg:

[00207] Em um frasco schlenk, Y5 (250 mg; 0,745 mmol) foi dissolvido em dicloroetano (250 mL) e a solução foi desgasificada fazendo borbulhar N2 através da solução por 20 min. Foi adicionado clorodiciclohexilborano (1 M em hexano) (150 μL; 150 μmol) e a solução resultante foi agitada a 70 °C por 1 h. Foi adicionado catalisador de Grubbs-Hoveyda de 2a geração (23 mg; 37,3 μmol) e a mistura foi agitada a 120 °C por 16 h. Foi novamente adicionado catalisador (23 mg; 37,3 μmol) e a mistura foi agitada a 120 °C por 4 h. Foi novamente adicionado catalisador (9 mg; 14,9 μmol) e a mistura foi agitada a 120 °C por 3 h. Foi adicionado SiliaBond® DMT (1,19 g; 0,716 mmol) e a mistura foi agitada à T.A. por 16 h. As duas bateladas foram misturadas e filtradas através de um leito de celite®. O filtrado resultante foi concentrado para prover um resíduo castanho. O resíduo foi purificado por LC preparativa (40 g de SiOH irregular de 15 a 40 μm da Merck, carga seca, gradiente de fase móvel: CH2Cl2/MeOH/NH3aq de100/0/0 a 80/20/0,2)para prover 155 mg de composto final 52 como um sólido esbranquiçado (mistura E/Z, 34% de rendimento). ESQUEMA GERAL DA PREPARAÇÃO DE PRODUTOS FINAIS: MÉTODO 23

Síntese de intermediário A6:

[00208] K5 (3,0 g, 10,6 mmol), Z5 (2,5 g, 11,7 mmol), K2CO3 (2,93 g, 21,2 mmol) e NaI (1,6 g, 10,6 mmol) em acetona (150 ml) foram agitados a 75 °C por 16 horas. A solução foi filtrada e o filtrado foi evaporado sob pressão reduzida para prover fração 1. A fração 1 foi purificada por LC preparativa (90 g de SiOH irregular de 15 a 40 μm da MERCK, gradiente de fase móvel: de Heptano/CH2Cl2/EtOAc 100/0/0 a 0/90/10). As frações contendo o produto foram combinadas e o solvente foi removido em vácuo para fornecer 4,4 g de intermediário A6 (90% de rendimento) como um sólido amarelo.

Síntese de intermediários B6 e C6:

[00209] A reação foi realizada em 2 bateladas de 1,5 g e uma batelada de 1,2 g de intermediário A6.

[00210] Aqui é reportado o procedimento para uma batelada de 1,5 g:

[00211] A6 (1,5 g, 3,27 mmol) foi adicionado a CH2Cl2 seco (900 mL) e a mistura resultante foi desgasificada fazendo borbulhar N2 através da solução por 30 min. Foi adicionado catalisador de Grubbs de 2a geração (92 mg, 108 μmol) em uma porção e a mistura foi agitada à temperatura ambiente sob atmosfera N2 por 2 h. Foi adicionado novamente catalisador (92 mg, 108 μmol) em uma porção e a mistura foi agitada à temperatura ambiente sob atmosfera N2 por 16 h. Foi adicionado novamente catalisador (92 mg, 108 μmol) em uma porção e a mistura foi agitada à temperatura ambiente sob atmosfera N2 por 48 h.

[00212] As 3 bateladas foram misturadas, foi adicionado SiliaBond® DMT (12 g; 7,31 mmol) e a mistura foi agitada à T.A. por 16 h. A mistura reacional foi filtrada através de um leito de celite® e o filtrado foi evaporado em vácuo para prover a fração 1 como um sólido castanho. A fração 1 foi purificada por LC preparativa (70 g de SiOH irregular de 15 a 40 μm da Merck, gradiente de fase móvel: CH2Cl2/EtOAc de 100/0 a 80/20). As frações contendo o produto foram combinadas e o solvente foi removido em vácuo para fornecer a fração 2 e a fração 3. A fração 2 foi solubilizada em EtOH/Acetona. A mistura foi deixada a arrefecer até à T.A. Então o precipitado foi filtrado, lavado ((3 vezes) com 20 mL de EtOH e seco em vácuo para prover 800 mg de intermediário B6 (mistura E/Z) como um sólido amarelo.

[00213] A fração 3 foi solubilizada em EtOH/Acetona. A mistura foi deixada arrefecer até à T.A. Então o precipitado foi filtrado, lavado ((3 vezes) com 15 mL de EtOH e seco em vácuo para prover 300 mg de intermediário B6 (mistura E/Z) como um sólido amarelo.

[00214] Parte do intermediário B6 (100 mg ) foi purificada por SFC aquiral (fase estacionária: AMINO 6μm 150x21,2 mm, fase móvel: CO2/MeOH; 75/25) para prover 78 mg de intermediário C6 (isômero E) como um sólido amarelo.

Síntese do composto final 57:

[00215] Uma mistura de B6 (150 mg; 348 μmol) e ferro (117 mg; 2,09 mmol) em ácido acético (10 mL) e água (1 mL) foi agitada a 80°C por 2 h. A mistura foi filtrada através de um leito de celite® e o filtrado foi evaporado em vácuo para prover a fração 1. A fração 1 foi coletada com DMF. Foi adicionado SiliaBond® imidazol (3,6 g; 4,17 mmol) e a reação foi agitada à temperatura ambiente por 16 h. A solução foi filtrada através de um leito de celite®. O filtrado foi evaporado em vácuo. O resíduo foi coletado com ácido acético e água (30:70). O precipitado foi filtrado e seco sob vácuo para prover a fração 2. A fração 2 foi coletada com MeOH. O precipitado foi filtrado e seco sob vácuo para prover a fração 3. A fração 3 foi filtrada através de um leito de sílica (fase móvel: DMF), as frações contendo o produto foram combinadas e o solvente foi removido em vácuo para fornecer a fração 4. A fração 4 foi coletada com DMF. Foi adicionado SiliaBond® imidazol (3,6 g; 4,17 mmol) e a reação foi agitada à temperatura ambiente por 16 h. A solução foi filtrada através de um leito de celite®. O filtrado foi evaporado em vácuo para prover a fração 5. A fração 5 foi coletada com ácido acético e água (70:30). O precipitado foi filtrado e seco sob vácuo para prover a fração 6. A fração 6 foi purificada por LC preparativa (10 g de SiOH irregular de 15 a 40 μm da Merck, gradiente de fase móvel: CH2Ch/MeOH/NH3aq de 97/3/0,1 a 80/20/3). As frações contendo o produto foram combinadas e o solvente foi removido em vácuo para fornecer 35 mg de fração 7 como um sólido branco. A fração 7 foi coletada com água. O precipitado foi filtrado, lavado (duas vezes) com EtOH e Et2O, seco sob vácuo para fornecer 26 mg do composto final 57 como um sólido branco (rendimento de 21%).

Síntese do intermediário D6:

[00216] Uma mistura de B6 (300 mg; 695 μmol), catalisador de Wilkinson (64 mg; 69,5 μmol) em THF/MeOH (50/50) (60 mL) foi hidrogenada sob 700 KPa (7 bars) de pressão à temperatura ambiente por 20 h. A mistura foi filtrada através de um leito de celite® e o filtrado foi evaporado em vácuo para prover um sólido castanho. O composto bruto foi purificado por LC preparativa (25 g de SiOH irregular de 15 a 40 μm da Merck, gradiente de fase móvel: CH2Cl2/EtOAc de 100/0 a 80/20). As frações contendo o produto foram combinadas e o solvente foi removido em vácuo para fornecer 305 mg de intermediário D (rendimento quantitativo) como um sólido amarelo.

Síntese do composto final 56:

[00217] Uma mistura de D6 (250 mg; 577 μmol) e ferro (193 mg; 3,46 mmol) em ácido acético (30 mL) e água (3 mL) foi agitada a 120 °C por 6 h, depois 2 h a 140°C. A mistura foi evaporada em vácuo para prover a fração 1. A fração 1 foi coletada com DMF e filtrada através de um leito de celite® e o filtrado foi evaporado em vácuo para prover a fração 2. A fração 2 foi coletada com AcOH e água (30:70). A solução foi extraída com CH2Cl2/MeOH (9:1) (2 vezes). A camada orgânica foi seca em MgSO4, filtrada e o solvente foi removido sob pressão reduzida para prover a fração 3. A fração 3 foi purificada por LC preparativa (12 g de SiOH irregular de 15 a 40 μm da Grace, gradiente de fase móvel: CH2Cl2/MeOH/NH3aq de 97/3/0,1 a 80/20/3). As frações contendo o produto foram combinadas e o solvente foi removido em vácuo para fornecer 90 mg de composto final 56 (44% de rendimento) como um sólido branco.

Síntese do composto final 60:

[00218] Uma mistura de C6 (70 mg; 162 μmol) e ferro (54 mg; 974 μmol) em ácido acético (10 mL) e água (1 mL) foi agitada a 120 °C por 5 h. A mistura foi evaporada em vácuo para prover a fração 1. A fração 1 foi coletada com DMF e filtrada através de um leito de celite® e o filtrado foi evaporado em vácuo para prover a fração 2. A fração 2 foi coletada com AcOH e água (30:70). O precipitado foi filtrado, lavado (duas vezes) com EtOH depois Et2O e seco sob vácuo para fornecer 46 mg do composto final 60 (80% de rendimento) como um sólido branco. ESQUEMA GERAL DA PREPARAÇÃO DE PRODUTOS FINAIS: MÉTODO 24

Síntese do intermediário E6:

[00219] Intermediário E6 (mistura de isômeros E e Z, 90 mg, 17% de rendimento) foi sintetizado usando o procedimento descrito para os intermediários T5 e U5. Síntese do intermediário F6:

[00220] Uma solução de E6 (90 mg; 216 μmol) e catalisador de Wilkinson (20 mg; 21,6 μmol) em THF (7 mL) e MeOH (7 mL) foi desgasificada fazendo borbulhar N2 por 10 min. A mistura foi hidrogenada sob pressão de 500 KPa (5 bars) à T.A. por 16 h. A mistura foi desgasificada fazendo borbulhar N2 por 10 min e foi adicionado catalisador de Wilkinson (40 mg; 43,2 μmol). A mistura foi hidrogenada sob pressão de 1 MPa (10 bars) à temperatura ambiente por 16 h. A mistura foi desgasificada fazendo borbulhar N2 por 10 min e foi adicionado catalisador de Wilkinson (20 mg; 21,6 μmol). A mistura foi hidrogenada sob pressão de 1 MPa (10 bars) à temperatura ambiente por 16 h. A mistura foi filtrada com celite® e o filtrado foi concentrado em vácuo para prover 140 mg de um óleo verde. O composto bruto foi purificado por LC preparativa (4 g de SiOH irregular de 15 a 40 μm da Grace, gradiente de fase móvel: de CH2Cl2/EtOAc 100/0 a 80/20). As frações contendo o produto foram combinadas e o solvente foi removido em vácuo para fornecer 60 mg de intermediário F6 (66% de rendimento) como um óleo amarelo. Síntese do composto final 58:

[00221] Uma mistura de F6 (76 mg; 0,182 mmol) e ferro (81 mg; 1,45 mmol) em ácido acético (4,2 mL) e água (0,21 mL) foi agitada a 80 °C por 6 h, depois 100 °C por 16h. A mistura foi filtrada através de celite® e o filtrado foi evaporado em vácuo. O composto bruto foi purificado por LC preparativa (25 g de SiOH irregular de 15 a 40 μm da Merck, carga seca, gradiente da fase móvel: de CH2Cl2/MeOH/NH3aq 97/3/0,3 a 85/15/1,5) para fornecer 21 mg do composto final 58 (rendimento de 34%). ESQUEMA GERAL DA PREPARAÇÃO DE PRODUTOS FINAIS: MÉTODO 25

Síntese do intermediário I6:

[00222] A uma solução de G6 (21,11 g; 95,0 mmol) em THF (500 mL) a 0 °C foi adicionado gota a gota bis hidreto de alumínio de lítio (THF) (1M em tolueno) (190 mmol; 190 mL). A solução foi agitada por 1h30 a 0 °C, e depois à temperatura ambiente por 1h30. A mistura foi arrefecida até 0 °C e foi extinta por adição gota a gota cautelosa de 7,5 mL de água, depois 7,5 mL de NaOH aquoso (5%) e finalmente 15 mL de água. Após 30 minutos de agitação adicional, a mistura foi filtrada através de um leito de celite®. A celite® foi lavada com EtOAc, o filtrado foi evaporado sob vácuo para prover 19,64 g (99% de rendimento) de intermediário H6 como um óleo amarelo claro.

[00223] SOCl2 (73 mL; 1,01 mol) foi adicionado gota a gota a uma mistura de H6 (19,6 g; 101 mmol) em CH2Cl2 (450 mL) a 0 °C. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 3 h. O solvente foi evaporado e o resíduo foi seco por destilação azeotrópica com tolueno (duas vezes) para prover 23,6 g de um óleo castanho. O óleo castanho foi dissolvido em CH2Cl2, lavado com 2 x 100 mL de NaOH aquoso a 5%, seco com MgSO4, filtrado e evaporado sob vácuo para prover 20,5 g de um óleo castanho. O produto bruto foi purificado por LC preparativa (fase estacionária: 450g de SiOH Irregular de 20 a 45 μm da Matrex), fase móvel: Gradiente de 50% de Heptano, 50% de CH2Cl2 a 0% Heptano, 100% CH2Cl2) para prover o intermediário I6 (4,77 g; 22% de rendimento) como um óleo amarelo.

Síntese do intermediário J6:

[00224] I6 (2,7 g; 12,7 mmol) foi adicionado a uma solução de K5 (3 g; 10,6 mmol), K2CO3 (2,93 g; 21,2 mmol) e NaI (1,59 g; 10,6 mmol) em acetona (180 mL) foi agitado a 70°C por 16 h. A reação foi combinada com outra batelada (de 200 mg de K5). A mistura foi filtrada e o filtrado foi concentrado em vácuo para prover um óleo amarelo. O sólido foi coletado em CH2Cl2. O precipitado foi filtradao e o filtrado foi concentrado em vácuo para prover 4,14 g de um óleo amarelo. O produto bruto foi purificado por LC preparativa (120 g de SiOH irregular de 15 a 40 μm da Grace, gradiente de fase móvel: de heptano/ EtOAc 100/0 a 50/50). As frações contendo produto foram combinadas e o solvente foi removido em vácuo para prover 3,83 g de um óleo amarelo que foi re-purificado por LC preparativo (80 g de SiOH Irregular de 15 a 40 μm, da Grace, gradiente de fase móvel: de CH2Cl2/EtOAc 100/0 a 95/5). As frações contendo o produto foram combinadas e o solvente foi removido em vácuo para fornecer 2,3 g (44% de rendimento) de intermediário J6 como um óleo amarelo.

Síntese de intermediários K6 e L6:

[00225] A reação foi realizada em 2 bateladas.

[00226] Procedimento típico para uma batelada:

[00227] Uma solução de J6 (940 mg; 2,05 mmol) e clorodiciclohexilborano (1M em hexano) (409 μL; 409 μmol) em dicloroetano seco (564 mL) foi agitada a 80 °C e sob atmosfera de N2 por1 h. Foi adicionado catalisador de Grubbs-Hoveyda de 2a geração (85 mg; 136 μmol) e a mistura foi agitada a 120°C por 1 h. Foi adicionado mais catalisador (85 mg; 136 μmol) e a mistura foi agitada a 120 °C por 1 h. Foi adicionado novamente catalisador (85 mg; 136 μmol) e a mistura foi agitada a 120 °C por 16 h. As 2 bateladas foram combinadas, foi adicionada SiliaBond® diamina (agente de captura Ru de Silicycle®) (2,48 g; 3,97 mmol) e a mistura foi agitada à T.A. por 16 h. A mistura foi filtrada e o filtrado foi concentrado em vácuo para prover 1,75 g de um óleo negro. Essa batelada foi combinada com outra (escala 0,48 mmol) para prover 2,03 g de um óleo negro. O óleo negro foi purificado por LC preparativa (50 g de SiOH Irregular 15 a 40 μm da Merck, gradiente de fase móvel: de CH2Cl2/EtOAc 100/0 a 98/2). As frações contendo produto foram combinadas e o solvente foi removido em vácuo para prover 70 mg da fração 1 (intermediário K6, isômero Z), 160 mg de fração 2 (mistura de intermediários K6 e L6 (75/25)) e 116 mg de fração 3 (mistura de intermediários K6 e L6 (94/6)). A fração 2 foi purificada por SFC aquiral (fase estacionária: AMINO 6 μm 150x21,2 mm, fase móvel: 85% CO2, 15% MeOH) para prover 45 mg de intermediário L6 (4% de rendimento, isômero E) como um óleo amarelo e 176 mg de intermediário K6 (16% de rendimento, isômero Z) como um sólido branco (rendimento global: 27%).

Síntese do composto final 65:

[00228] Ferro (182 mg; 3,26 mmol) foi adicionado a uma solução de K6 (176 mg, 0,408 mmol) em ácido acético (10 ml) e água (480 μL). A mistura foi agitada a 70 °C durante 1 hora e depois concentrada em vácuo até à secura. Foi adicionado DMF, a mistura foi aquecida e filtrada quente através de celite® e a celite® foi enxaguada com DMF. SiliaBond® imidazol (5,63 g; 26,6 mmol) foi adicionado ao filtrado e a mistura foi agitada à T.A. por 16 h. A mistura foi filtrada através de celite®, a celite® foi enxaguada com DMF e o filtrado foi concentrado em vácuo. O resíduo foi coletado com ácido acético (1 mL) depois foi adicionada água e a mistura foi arrefecida até 0°C, conduzindo a precipitação. O precipitado foi filtrado para prover um sólido esbranquiçado. O sólido foi coletado em EtOH e aquecido a 80°C. Permitiu-se que a mistura arrefecesse até à T.A. e o precipitado foi filtrado para prover 50 mg de um sólido branco. O sólido foi seco em vácuo de um dia para o outro e depois solubilizado em DMF quente e foi adicionado SiliaBond® imidazol (2 g; 2,32 mmol). A mistura foi agitada à T.A. por 16 h. A mistura foi filtrada através de celite®, a celite® foi enxaguada com DMF e o filtrado foi concentrado em vácuo para prover 44 mg de composto final 65 (30% de rendimento) como um sólido branco.

Síntese do composto final 75:

[00229] Composto final 75 (11 mg, 30% de rendimento) foi obtido usando o procedimento descrito para o composto final 65, começando a partir de 45 mg de intermediário L6. ESQUEMA GERAL DA PREPARAÇÃO DE PRODUTOS FINAIS: MÉTODO 26

Síntese de intermediários N6 e O6:

[00230] R5 (8,7 g; 47,6 mmol) em DMF (50 mL) foi adicionado gota a gota durante 1 h a uma mistura de M6 (5 g; 26,5 mmol) e K2CO3 (14,6 g; 106 mmol) em DMF (50 mL) à T.A. e sob atmosfera de N2. A mistura foi agitada à t.a. por 72 horas. A mistura foi evaporada e foi adicionado água/EtOAc. As camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraída com EtOAc (duas vezes). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água (duas vezes), foram secas em MgSO4, filtradas e secas em vácuo para prover um sólido castanho. O sólido foi purificado juntamente com outra batelada (escala de 1 mmol) por LC preparativa (150 g de SiOH Irregular 15 a 40 μm da Merck, gradiente de fase móvel: de CH2Cl2/EtOAc 100/0 a 90/10). As frações contendo o produto foram combinadas e o solvente foi removido em vácuo para fornecer 2,11 g de intermediário N6 (24% de rendimento) como um óleo cor de laranja e 2,64 g de uma segunda fração (mistura de N6 e O6 (83/17).

Síntese do intermediário P6:

[00231] A reação foi realizada em autoclave.

[00232] A solução de N6 (1,9 g, 5,65 mmol) em NH3 (7M em isopropanol) (40 mL) foi agitada a 120 °C durante 16 h. A mistura foi arrefecida até à t.a. e o precipitado foi filtrado. O precipitado foi lavado com Et2O e seco em vácuo para fornecer 1,42 g de intermediário P6 (79% de rendimento) como um sólido castanho.

Síntese do intermediário Q6:

[00233] Uma solução de P6 (1,42 g, 4,48 mmol) e NaH (60% em óleo) (412 mg; 10,3 mmol) em 3-buten-1-ol (29 mL) foi agitada a 90 °C por 16 h. O solvente foi removido em vácuo para prover um sólido castanho. O sólido foi purificado por LC preparativa (50 g de SiOH irregular de 15 a 40 μm da Merck, fase móvel: CH2Ch/MeOH 95/5). As frações contendo o produto foram combinadas e o solvente foi removido em vácuo para fornecer 1,26 g de um sólido castanho. O sólido foi coletado em Et2O conduzindo a precipitação, o precipitado foi filtrado e seco em vácuo para fornecer 920 mg de intermediário Q6 (58% de rendimento) como um sólido branco.

Síntese dos compostos finais 78 e 79:

[00234] Uma solução de Q6 (460 mg; 1,31 mmol) e clorodiciclohexilborano (1M em hexano) (261 μL; 261 μmol) em dicloroetano seco (430 mL) foi agitada a 80°C sob atmosfera de N2 por 1 h. Foi adicionado catalisador de Grubbs-Hoveyda de 2a geração (82 mg; 131 μmol) e a mistura foi agitada em um tubo selado a 120 °C por 8 h. Foi adicionado clorodiciclohexilborano (1M em hexano) (261 μL; 261 μmol) e a mistura foi agitada a 80 °C sob atmosfera de N2 durante 1 hora. Foi adicionado catalisador de Grubbs-Hoveyda de 2a geração (82 mg; 131 μmol) e a mistura foi agitada a 120 °C por 2 h. Foi adicionado SiliaBond® DMT (3,48 g; 2,08 mmol) e a mistura foi agitada à T.A. por 16 h. A mistura foi filtrada através de celite® e o filtrado foi concentrado em vácuo para prover 640 mg de um sólido negro. O sólido foi purificado juntamente com outra batelada (escala de 1,3 mmol) por LC preparativa (40 g de SiOH Irregular 15 a 40 μm da Grace, gradiente de fase móvel: de CH2Cl2/MeOH 100/0 a 90/10). As frações contendo o produto foram combinadas e o solvente foi removido em vácuo para fornecer 463 mg de um sólido castanho. O sólido foi purificado por SFC aquiral (fase estacionária: AMINO 6 μm 150x21,2 mm, fase móvel: 82% CO2, 18% MeOH(0.3% iPrNH2)) para prover 36 mg de composto final 78 (isômero E, 4% de rendimento) como um sólido branco e um precipitado. Esse precipitado foi purificado por LC preparativa (fase estacionária: Sílica esférica nua 5 μm 150x30,0 mm, gradiente de fase móvel: de Heptano/EtOAc/MeOH (10% NH3) 71/28/1 a 0/80/20) para prover 10 mg de composto final 79 (isômero Z, 1% de rendimento) como um sólido branco. ESQUEMA GERAL DA PREPARAÇÃO DE PRODUTOS FINAIS: MÉTODO 27

Síntese do intermediário T6:

[00235] Uma mistura de V2 (7,04 g; 24,04 mmol), R6 (5,16 g; 24,04 mmol), K2CO3 (4,98 g; 36,06 mmol) e NaI (3,6 g; 24,04 mmol) em acetona (240 ml) foram agitados à temperatura ambiente por 24 horas. O precipitado foi filtrado, enxaguado com acetona. O filtrado foi evaporado para prover 18,7 g. O composto bruto foi dissolvido em CH2Cl2. O precipitado foi eliminado por filtração e o filtrado foi concentrado em vácuo. O composto bruto foi purificado por LC preparativa (fase estacionária: 450 g de SiOH Irregular de 20 a 45 μm da Matrex), fase móvel: 75% heptano, 25% AcOEt) para prover 7,4 g de intermediário T6 (65% de rendimento).

Síntese do intermediário U6:

[00236] Uma mistura de T6 (7,25 g, 15,396mmol) em solução aquosa de NH3 (30%) (110 ml) e THF (110 ml) foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. A mistura foi concentrada. O resíduo foi coletado com tolueno e concentrado (o processo foi repetido duas vezes). O resíduo foi coletado em CH2Cl2, seco em MgSO4, filtrado e o solvente foi evaporado para fornecer 7,5 g do intermediário U6. O composto bruto foi usado diretamente na próxima etapa da reação.

[00237] A 0°C, ácido metacloroperoxibenzóico (1,36 g, 5,54 mmol) em CH2Cl2 (25 mL) foi adicionado a uma mistura de U6 (2,5 g, 5,54 mmol) em CH2Cl2 (25 mL). A mistura foi agitada à T.A. por 3 h. Uma solução aquosa de Na2S2O3 (2 eq) foi adicionada à mistura. Duas camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraída com CH2Cl2. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com uma solução aquosa saturada de NaHCO3, secas sobre MgSO4, filtradas e o solvente foi removido sob pressão reduzida para fornecer 4,0 g do intermediário V6 como um óleo amarelo que foi diretamente usado na etapa seguinte.

Síntese do intermediário X6:

[00238] Uma mistura de V6 (2,58 g, 5,52 mmol) e NEt3 (1,53 mL, 11,04 mmol) em W6 (28 mL) foi agitada a 100°C por 2.5 h. Foi adicionada água e a mistura foi extraída com CH2Cl2. A camada orgânica foi lavada com HCl 0,5N (6 vezes), seca sobre MgSO4, filtrada e o solvente foi evaporado. O produto bruto foi purificado por LC preparativa (fase estacionária: 450 g de SiOH Irregular de 20 a 45 μm da Matrex), fase móvel: 98% de CH2Cl2, 2% de iPrOH) para prover 1,3 g de intermediário X6 (41% de rendimento).

Síntese do intermediário Y6:

[00239] A 0°C, TFA (1,72 mL, 22,47 mmol) foi adicionado gota a gota a uma mistura de X6 (1,30 g, 2,25 mmol) em CH2Cl2 (25 mL). A mistura foi agitada à t.a. por 12 horas. A 0 °C, foi adicionada água. A mistura foi alcalinizada com K2CO3 10% em água e foi extraída com CH2Cl2. A camada orgânica foi seca com MgSO4, filtrada e o solvente foi evaporado para prover 1,1 g de intermediário Y6, que foi diretamente usado na etapa seguinte.

Síntese de intermediário Z6:

[00240] A 0 °C, monoidrato LiOH (289 mg, 6,89 mmol) foi adicionado a uma mistura de Y6 (1,1 g, 2,3 mmol) em THF/água (50/50) (10 mL). A mistura foi agitada à T.A. por 12 h. A 0°C, foi adicionada água e a mistura foi acidificada com HCl 3N até pH 2-3. A mistura foi extraída com EtOAc. A camada orgânica foi seca sobre MgSO4, filtrada e o solvente foi evaporado para fornecer 0,85 g do intermediário Z6 (80% de rendimento).

Síntese do intermediário A7:

[00241] Hidrocloreto 1-Etil-3-[3-dimetilaminopropil]carbodiimida (941 mg, 4,91 mmol) e hidroxibenzotriazol (663 mg, 4,91 mmol) foram adicionados lentamente a uma mistura de Z6 (760 mg, 1,64 mmol), diisopropiletilamina (1,41 mL, 8,18 mmol) em DMF (380 mL). A mistura foi agitada à T.A. por 24 horas. O solvente foi evaporado até à secura. O resíduo foi coletado com CH2Cl2 e foi lavado com água, depois com solução salina. A camada orgânica foi seca em MgSO4, foi filtrada e o solvente foi evaporado. Foi realizada purificação por cromatografia flash sobre sílica gel (15 a 40 μm, 40 g, CH2CI2/CH3OH/NH4OH: 99/1/0.1). As frações puras foram coletadas e evaporadas até estarem secas para prover 0,61 g de intermediário A7 (84% de rendimento).

Síntese do composto final 80:

[00242] Ferro (1,4 g; 25,09 mmol) foi adicionado a uma mistura de A7 (560 mg; 1,25 mmol) em ácido acético (14,4 ml) e água (1,47 mL). A mistura foi agitada a 50 °C por 6 h. A mistura foi filtrada através de celite®, lavada com ácido acético e depois o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O composto bruto foi dissolvido para dentro de DMF com 4 g de SiO2 60-200 μm e a suspensão resultante foi evaporada até à secura e postos no topo de uma coluna de cromatografia em coluna de 25 g. Foi realizada purificação por cromatografia flash sobre sílica gel (15 a 40 μm, 25 g, CH2Cl2/CH3OH/NH4OH: 95/5/0,5). As frações puras foram coletadas e evaporadas até à secura e depois coletadas com CH3OH. O precipitado resultante foi filtrado e seco para para prover 152 mg de composto final como a base livre (33% de rendimento). O hidrocloreto de sal foi preparado com 10 eq de HCl 4N em dioxano, que foi adicionado à suspensão do composto em CH3OH. O precipitado foi agitado por 1 h, filtrado e depois seco sob vácuo para prover 109 mg de composto final como um sal HCl. ESQUEMA GERAL DA PREPARAÇÃO DE PRODUTOS FINAIS: MÉTODO 28

Síntese de intermediário C7:

[00243] Uma mistura de V2 (7,5 g; 25,6 mmol), B7 (7,25 g; 28,2 mmol), K2CO3 (8 g; 64 mmol) e NaI (3,85 g; 25,6 mmol) em acetona (220 ml) foi agitada à temperatura ambiente por 16 horas. A solução foi filtrada através de um leito de celite® e o filtrado foi evaporado em vácuo para prover um óleo amarelo. O produto bruto foi purificado por LC preparativa (120 g de SiOH irregular de 15 a 40 μm da Merck, gradiente de fase móvel: CH2Cl2/Heptano 70/30). As frações contendo o produto foram combinadas e o solvente foi removido em vácuo. O produto foi cristalizado a partir de diisopropileter para prover 11,4 g de intermediário C7 (95% de rendimento).

Síntese do intermediário D7:

[00244] Uma solução de C7 (11,3 g, 24,1 mmol) e NH3 (30% H2O) 170 mL) em THF (170 mL) foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura de solvente foi removida em vácuo e o resíduo foi coletado por CH2Cl2 decantado, seco com MgSO4 e concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi coletado com diisopropileter e o precipitado foi filtrado e seco ao ar para prover 10,5 g de intermediário D7 (97% de rendimento).

Síntese do intermediário E7:

[00245] Ácido metacloroperbenzóico (6,33 g, 26 mmol) foi adicionado gota a gota a uma solução de D7 (10,5 g, 23,3 mmol) em CH2Cl2 (300 mL) à temperatura ambiente. A mistura foi agitada à T.A. por 16 h. Foram adicionadas uma solução aquosa a 10% de Na2S2O3 (4 eq) e uma solução aquosa de NaHCO3. As camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraída com CH2Cl2 (duas vezes). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre MgSO4, filtradas e o solvente foi removido sob vácuo para fornecer 10,8 g do intermediário E7 (rendimento de 99%).

Síntese do intermediário G7:

[00246] E7 (3,5 g; 7,54 mmol) foi adicionado em porções a uma solução de NEt3 (1,15 mL; 8,3 mmol) e F7 (13,2g; 75,3 mmol) e a mistura resultante foi agitada à T.A. por 16 h. Foi adicionada água e CH2Cl2, e camada orgânica foi decantada, seca com MgSO4 e concentrada. O produto bruto foi purificado por LC preparativa (40 g de SiOH irregular de 15 a 40 μm da Merck, (MeOH/CH2Cl2, 0,5/99,5) para prover o intermediário G7a (3,6 g).

[00247] A uma solução G7a (3,6 g, 6,2 mmol) em CH2Cl2 (120 mL) foi adicionado ácido trifluoracético (9,5 mL; 41,6 mL) à T.A.. A mistura reacional foi agitada à T.A. por 12 h. A mistura reacional foi diluída com CH2Cl2 e foi tratada com uma solução aquosa saturada de NaHCO3. As camadas foram separadas e a camada orgânica foi seca em MgSO4, foi filtrada e o solvente foi removido sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por LC preparativa (40 g de SiOH irregular de 15 a 40 μm da Grace, carga seca, gradiente da fase móvel: de CH2Cl2/MeOH/NH4OH 98/2/0,1) para fornecer 1,7 g do intermediário G7 (rendimento de 57%).

Síntese do intermediário H7:

[00248] Ferro (2,8 g; 50,3 mmol) foi adicionado a uma mistura de G7 (4 g; 8,4 mmol) em ácido acético (2 ml) e água (3 mL). A mistura foi agitada vigorosamente a 50 °C por 5h. A mistura reacional foi diluída com CH2Cl2, filtrada através de um leito de celite® e o filtrado foi concentrado sob vácuo. O composto bruto foi coletado com uma mistura de CH2Cl2/MeOH (90/10) e foi filtrado um precipitado. O filtrado foi purificado por LC preparativa (80 g de SiOH irregular de 15 a 40 μm da Grace, fase móvel CH2Cl2/MeOH 98/2). O produto foi cristalizado a partir de diisopropileter para prover 2,1 g de intermediário H7 (62,5% de rendimento).

Síntese do intermediário I7:

[00249] A 0 °C, monoidrato LiOH (157 mg, 3,75 mmol) foi adicionado a uma mistura de H7 (0,5 g, 1,25mmol) em THF/H2O (50/50) (10 mL). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 12 horas. A 0 °C, foi adicionada água e a mistura foi acidificada com HCl 3N até pH 2-3. A mistura foi extraída com EtOAc. A camada orgânica foi seca sobre MgSO4, filtrada e o solvente foi evaporado para prover 460 mg do intermediário I7 (99% de rendimento). O composto bruto foi usado diretamente na próxima etapa da reação.

Síntese do composto final 85:

[00250] 3-Dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (1 g, 3 mmol) e 1- hidroxibenzotriazol (720 mg, 5,3 mmol) foram adicionados lentamente a uma mistura de I7 (660 mg, 1,77 mmol), diisopropiletilamina (1,5 mL, 8,86 mmol) em DMF (400 mL). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 24 horas. O solvente foi evaporado até estar seco. O resíduo foi coletado com CH2Cl2 e foi lavado com água, depois com solução salina. A camada orgânica foi seca em MgSO4, foi filtrada e o solvente foi evaporado. Foi realizada purificação por cromatografia flash sobre sílica gel (15 a 40 μm, 80 g, CH2CI2/CH3OH/NH4OH: 95/5/0,5). As frações puras foram coletadas e evaporadas até estarem secas para fornecer 47 mg de composto final 85 (7,5% de rendimento). ESQUEMA GERAL DA PREPARAÇÃO DE PRODUTOS FINAIS: MÉTODO 29

Síntese do intermediário J7:

[00251] A 0 °C, diisopropilazodicarboxilato (0,9 mL; 4,541 mmol) foi adicionado gota a gota a uma mistura de Q5 (0,9 g, 3,028 mmol), Z4 (0,54 g; 3,028 mmol) e PPh3 (1,19 g; 4,541 mmol) em THF (45 mL). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas. Adicionaram-se EtOAc e água. As camadas foram decantadas. A camada orgânica foi lavada com água, seca sobre MgSO4, filtrada e o solvente foi evaporado. O composto bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica gel (15 a 40 μm, 120 g, Heptano-EtOAc 85-15 a 70/30). As frações puras foram coletadas e evaporadas até à secura para prover o intermediário J7 após cristalização com diisopropileter (520 mg, 38% de rendimento).

Síntese do intermediário K7:

[00252] Catalizador de Grubbs de 2a geração (91 mg, 0,107 mmol) foi adicionado a uma mistura de J7 (0,488 g, 1,067 mmol) em CH2Cl2 (205 mL). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 7 horas. Após 7 horas, adicionou-se SiliaBond® DMT (1,42 g, 0,853 mmol) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. A reação foi filtrada através de um leito de celite®, lavada com CH2Cl2 e o solvente foi evaporado. O produto bruto foi purificado juntamente com outra batelada (escala de 0,12 mmol) por cromatografia flash sobre sílica gel (15 a 40 μm, 40 g, CH2Cl2/MeOH 99,75/0,25). As frações puras foram coletadas e evaporadas até à secura para prover a fração 1, que foi então purificada por SFC aquiral (fase estacionária: Chiralpak IA 5 μm 250*20 mm), fase móvel: 70% de CO2, 30% de MeOH) para prover 240 mg de intermediário K7 (isômero E, 52% de rendimento).

Síntese do composto final 86:

[00253] Ferro (0,52 g; 9,315 mmol) foi adicionado a uma mistura de K7 (0,2 g; 0,466 mmol) em ácido acético (5,4 ml) e água (550 μL). A mistura foi agitada a 50 °C durante 5 horas. A mistura foi filtrada através de celite®, lavada com AcOH, e depois o filtrado foi concentrado. O composto bruto foi dissolvido para dentro de DMF com 5 g de SiO2 60-200 μm e a suspensão resultante foi evaporada até à secura e colocada no topo de uma coluna de cromatografia em coluna de 25 g. Foi realizada purificação por cromatografia flash sobre sílica gel (15 a 40 μm, 25 g, CH2Cl2/CH3OH/NH4OH: 95/5/0,5 a 90/10/0,5). As frações puras foram recolhidas e evaporadas até à secura. Esta batelada foi cristalizada a partir de CH3OH, o precipitado foi filtrado, seco sob vácuo a 90 °C para prover o composto final 86 (68 mg, 41% de rendimento). ESQUEMA GERAL DA PREPARAÇÃO DE PRODUTOS FINAIS: MÉTODO 30

Síntese do intermediário M7:

[00254] Uma mistura de V2 (10,0 g, 34,16 mmol), L7 (6,85 g, 34,16 mmol), Nal (5,12 g, 34,16 mmol) e K2CO3 (7,08 g, 51,24 mmol) em acetona (370 mL) foram agitados à temperatura ambiente durante 24h. O precipitado foi filtrado, enxaguado com acetona. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O composto bruto foi coletado com CH2Cl2, o precipitado (intermediário residual V2) foi filtrado, lavado com o mínimo de CH2Cl2 e o filtrado foi concentrado para prover 16,8 g de intermediário M7, que foi usado diretamente na etapa seguinte.

Síntese do intermediário N7:

[00255] Uma mistura de M7 (16,8 g, 36,77 mmol) em NH3 em água (30%) (100 mL) e THF (100 ml) foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. A mistura foi diluída com água e foi extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com solução salina, seca com MgSO4, filtrada e o solvente foi evaporado para prover 15,7 g do intermediário N7 (98% de rendimento).

Síntese do intermediário O7:

[00256] A 0°C, ácido 3-cloroperoxibenzóico (8,8 g, 35,66 mmol) em CH2Cl2 (100 mL) foi adicionado a uma mistura de N7 (15,6 g, 35,66 mmol) em CH2Cl2 (100 mL). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 3 horas. Uma solução aquosa de Na2S2O3 (2 eq) foi adicionada à mistura. As duas camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraída com CH2Cl2 (duas vezes). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com uma solução aquosa saturada de NaHCO3, secas sobre MgSO4, filtradas e o solvente foi removido sob pressão reduzida para fornecer 16 mg do intermediário O7 como um óleo amarelo (rendimento de 99%).

Síntese do intermediário P7:

[00257] Uma mistura de O7 (8,0 g, 17,642 mmol) em álcool alílico (90 mL) e NEt3 (4,9 ml, 35,285 mmol) foi agitada a 90 °C durante 1 hora. A mistura foi evaporada até à secura e purificada por cromatografia flash sobre sílica gel (15 a 40 μm, 120 g, CH2CI2/CH3OH/NH4OH: 99,5/0,5). As frações puras foram coletadas e evaporadas até estarem secas para fornecer 6,3 g de intermediário P7 (80% de rendimento).

Síntese de intermediários Q7 e R7:

[00258] O solvente foi desgaseificado fazendo-o borbulhar por N2. A reação foi dividida em 2 porções iguais de 750 mg de P7:

[00259] Uma solução de P7 (750 mg; 1,676 mol) e clorodiciclohexilborano (1M em hexano) (335 μL; 0,335 μmol) em dicloroetano (330 mL) foi agitada a 80 °C e sob atmosfera N2 por 1 h. 0,033 eq de catalisador de Grubbs-Hoveyda de 2a geração (35 mg; 56μmol) foram adicionados e a mistura foi agitada em tubo selado a 120 °C por 1 h. Depois o tubo foi aberto, foram novamente adicionados 0,033 eq de catalisador (35 mg; 56 μmol) e a mistura foi agitada em tubo selado a 120 °C por 1 h (sequência repetida duas vezes). Foi adicionado SiliaBond® DMT (1,72 g; 0,894 mmol) à mistura, que foi agitada à T.A. de um dia para o outro. A mistura reacional foi filtrada através de um leito de celite®, a celite®foi lavada com CH2Cl2 e o filtrado foi evaporado. O composto foi coletado com CH2Cl2, o precipitado foi filtrado (0,82 g, fração 1). O filtrado foi purificado por cromatografia flash sobre sílica gel (15 a 40 μm, 80 g, CH2CI2/CH3OH/NH4OH: 99,5/0,5/0,5). As frações puras foram coletadas e evaporadas até à secura (0,11 g, fração 2). As frações 1 e 2 foram combinadas (0,93 g) e foram purificadas por SFC aquiral (fase estacionária: AMINO 6μm 150x21,2 mm), fase móvel: 80% de CO2, 20% de MeOH) para prover 0,25 g de intermediário R7 (18% de rendimento, isômero E) e 0,566 g de intermediário Q7 (40% de rendimento, isômero Z).

Síntese do composto final 87:

[00260] A 0°C, TiCl3 (10,2 mL; 11,923 mmol) foi adicionado gota a gota a uma mistura de R7 (250 mg, 0,596 mmol) em THF (30 mL). A mistura foi agitada a 0 °C durante 4 horas e depois à temperatura ambiente de um dia para o outro. Adicionou-se água e a mistura foi alcalinizada com K2CO3. A mistura foi filtrada através de um leito de celite®. A celite® foi lavada com EtOAc/CH3OH 70/30. As camadas foram decantadas e a camada orgânica foi evaporada até à secura. O composto bruto foi dissolvido em DMF, depois 2 g de SiO2 foram adicionados e a mistura resultante foi evaporada até à secura. Foi realizada purificação por cromatografia flash sobre sílica gel (depósito sólido) (15 a 40 μm, 25 g, CH2Cl2/CH3OH/NH4OH: 95/5/0,5). As frações puras foram coletadas e evaporadas até estarem secas para fornecer 20 mg de composto final 87 após cristalização de CH3CN (17% de rendimento).

Síntese do composto final 88:

[00261] O composto final 88 foi obtido do intermediário Q7 (250 mg, 0,596 mmol) com o procedimento descrito para o composto final 87, rendimento de 9 mg (4% de rendimento). ESQUEMA GERAL DA PREPARAÇÃO DE PRODUTOS FINAIS: MÉTODO 31

Síntese do intermediário S7:

[00262] A 0 °C, alilamina (1,46 mL; 19,407 mmol) foi adicionada gota a gota a uma mistura de Q7 (8,0 g, 17,642 mmol), e NEt3 (4,905 mL, 35,285 mmol) em THF (100 mL). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 3 horas. Água e EtOAc foram adicionados. As camadas foram decantadas. A mistura foi extraída com EtOAc. A camada orgânica foi seca em MgSO4, foi filtrada e o solvente foi evaporado. O produto bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica gel (15 a 40 μm, 120 g, CH2CI2/CH3OH/NH4OH: 99,5/0,5). As frações puras foram coletadas e evaporadas até estarem secas para fornecer 5,8 g de intermediário S7 (74% de rendimento).

Síntese de intermediários T7 e U7:

[00263] Os intermediários T7 e U7 foram sintetizados com o método descrito para os intermediários Q7 e R7.

Síntese dos compostos finais 89 e 90:

[00264] Compostos finais 89 e 90 foram sintetizados com o método descrito para compostos finais 87 e 88. ESQUEMA GERAL DA PREPARAÇÃO DE PRODUTOS FINAIS: MÉTODO 32

Síntese do intermediário V7:

[00265] Uma mistura de Q7 (200 mg, 0,477 mmol) e catalisador de Wilkinson (88,2 mg, 0,0954 mmol) em THF/MeOH (50/50) (30mL) foi agitada à temperatura ambiente sob uma pressão de 800 KPa (8 bar) de H2 por 20h. A mistura foi evaporada até à secura para prover 0,30 g de intermediário V7 diretamente usada na próxima etapa. Síntese do composto final 91:

[00266] O composto final 91 foi sintetizado com o método descrito para os compostos finais 87 e 88. Métodos LCMS: Procedimento geral VDR2 (para os métodos V300xV30xx.olp)

[00267] A medição por LC foi realizada usando um sistema UPLC (Cromatografia Líquida de Ultra Desempenho) Acquity (Waters) compreendendo uma bomba binária com desgaseificador, um amostrador automático, um detector de arranjo de díodos (DAD) e uma coluna como especificada nos métodos respectivos abaixo, a coluna é mantida a uma temperatura de 40°C. O fluxo a partir da coluna foi conduzido para um detector de MS. O detector de MS foi configurado com uma fonte de ionização por eletrospray. A voltagem na agulha capilar foi de 3 kV e a temperatura da fonte foi mantida a 130 °C no Quattro (espectrômetro de massas de triplo quadrupolo da Waters). Foi usado nitrogênio como o gás de nebulização. A aquisição dos dados foi realizada com um sistema de dados Waters-Micromass MassLynxOpenlynx. Método V3014V3001

[00268] Adicionalmente ao procedimento geral VDR2: UPLC de fase reversa foi realizada em uma coluna T3 HSS ("High Strength Silica"; com sílica muito resistente) da Waters (1,8 μm, 2,1 x 100 mm) com uma vazão de 0,35 ml/min. Duas fases móveis (fase móvel A: 95 % de acetato de amônio 7 mM/5 % de acetonitrila; fase móvel B: 100% de acetonitrila) foram empregues para correr uma condição de gradiente desde 99% de A (manter por 0,5 minuto) até 15% de A e 85% de B por 4,5 minutos, manter por 2 minutos e voltar para as condições iniciais em 0,5 minuto, manter por 1,5 minutos. Foi usado um volume de injeção de 2 μL. A voltagem no cone foi de 20 V para os modos de ionização positiva e negativa. Os espectros de massa foram adquiridos por varredura de 100 a 1000 em 0,2 segundos usando um tempo de retardamento entre canais de 0,1 segundos. Método V3018V3001

[00269] Adicionalmente ao procedimento geral VDR2: UPLC de fase reversa foi realizada em uma coluna C18 Acquity BEH (híbrido de etilsiloxano/sílica em ponte) da Waters (1,7 μm, 2,1 x 100 mm) com uma vazão de 0,343 ml/min. Duas fases móveis (fase móvel A: 95 % de acetato de amônio 7 mM/5 % de acetonitrila; fase móvel B: 100 % de acetonitrila) foram empregues para correr uma condição de gradiente desde 84,2 % de A e 15,8 % de B (mantido por 0,49 minutos) até 10,5 % de A e 89,5 % de B em 2,18 minutos, mantido por 1,94 minutos e voltar para as condições iniciais em 0,73 minutos, mantido por 0,73 minutos. Foi usado um volume de injeção de 2 μL. A voltagem no cone foi de 20V para os modos de ionização positiva e negativa. Os espectros de massa foram adquiridos por varredura de 100 a 1000 em 0,2 segundos usando um tempo de retardamento entre canais de 0,1 segundos. TABELA 1. COMPOSTOS DA FÓRMULA (I).

ATIVIDADE BIOLÓGICA DOS COMPOSTOS DA FÓRMULA (I) Descrição dos ensaios biológicos Avaliação da atividade de TLR7 e TLR8

[00270] A capacidade dos compostos de ativarem o TLR7 e TLR8 humano foi avaliada em um ensaio celular de gene repórter usando células HEK293 transfectadas transientemente com um vetor de expressão do TLR7 ou TLR8 e uma construção de gene repórter NFKB- luc. Brevemente, células HEK293 foram cultivadas em meio de cultura (DMEM suplementado com FCS a 10 % e Glutamina a 2 mM). Para a transfecção de células em placas de 10 cm, as células foram soltas com tripsina-EDTA, transfectadas com uma mistura de CMV-TLR7 ou plasmídeo do TLR8 (750 ng), plasmídeo do NFKB-IUC (375 ng) e um reagente de transfecção e incubadas por 48 horas a 37 °C em uma atmosfera de CO2 5% umidificada. As células transfectadas foram então soltas com tripsina-EDTA, lavadas com PBS e ressuspendidas em meio para uma densidade de 1,67 x 105 células/ml. Trinta microlitros de células foram então adicionados a cada poço de placas de 384 poços, onde já havia 10 μl do composto em DMSO 4%. Após 6 horas de incubação a 37 °C, CO2 5%, a atividade da luciferase foi determinada adicionando 15 μl de substrato Steady Lite Plus (Perkin Elmer) a cada poço e fazendo a leitura em um ViewLux ultraHTS microplate imager (Perkin Elmer). Curvas dose-resposta foram geradas a partir das medições realizadas em quadruplicata. Os valores das concentrações mínimas efetivas (CME), definidas como a concentração que induz um efeito que é pelo menos duas vezes maior que o desvio padrão do ensaio, foram determinados para cada composto.

[00271] Em paralelo, foi usada uma série de diluição de composto semelhante (10 μL de composto em DMSO a 4% ) com 30 μL por poço de células transfectadas com constructo de repórter NFKB-IUC sozinho (1,67 x 105 células/mL). 6 horas após a incubação a 37 °C, CO2 5%, a atividade da luciferase foi determinada adicionando 15 μl de substrato Steady Lite Plus (Perkin Elmer) a cada poço e fazendo a leitura em um ViewLux ultraHTS microplate imager (Perkin Elmer). Os dados de rastreio reverso são reportados como LEC. Medição da produção de interferon em PBMCs humanas

[00272] A ativação do TLR7 humano resulta na produção robusta de interferon por células dendríticas plasmocitoides presentes no sangue humano. O potencial dos compostos de induzirem interferon foi avaliado por determinação de interferon no meio condicionado de células mononucleares do sangue periférico (PBMCs). A presença de interferon nas amostras foi determinada utilizando uma linhagem celular contendo gene repórter para interferon que expressa estavelmente uma construção de gene repórter de elementos responsivos à estimulação por interferon (ISRE; "interferon-stimulated responsive elements")-luc O elemento ISRE com a sequência GAAACTGAAACT é altamente responsivo ao fator de transcrição STAT1-STAT2-IRF9, que é ativado com a ligação de IFN-I ao receptor de IFN. Resumidamente, PBMCs foram preparadas a partir das camadas leucoplaquetárias de pelo menos dois doadores utilizando um protocolo de centrifugação em Ficoll padrão. PBMCs isoladas foram ressuspendidas em meio RPMI suplementado com 10% de soro AB humano e foram adicionadas 2 x 105 células/poço em placas de 384 poços contendo os compostos (volume total de 70 μl). Após incubação das PBMCs com os compostos ao longo da noite, 10 μl do sobrenadante foram transferidos para placas com 384 poços contendo 5 x 103 células HEK-ISRE-luc/poço em 30 μl (plaqueadas no dia anterior). Após 24 horas de incubação, a ativação dos elementos ISRE foi medida avaliando a atividade da luciferase utilizando 40 μl/poço do substrato Steady Lite Plus (Perkin Elmer) e fazendo a leitura em um ViewLux ultraHTS microplate imager (Perkin Elmer). A atividade estimulatória de cada composto nas células HEK- ISRE-luc foi relatada como LEC. O LEC por sua vez indica o grau de ativação de ISRE com a transferência de uma quantidade determinada de meio de cultura de PBMCs. Interferon alfa-2a recombinante (Roferon-A) foi usado como um composto controle padrão.

[00273] Os valores LEC para o compostos da tabela 2 em HEK293 TLR8-NFKB-IUC foram >10 μM para o composto 6, 20,46 μM para o composto 39, >19,49 μM para o composto 40, 11,16 μM para o composto 41, >10 μM para o composto 44, 5,48 μM para o composto 47, >10 μM para o composto 63, 0,27 μM para o composto 75 e >25 μM para todos os outros compostos.

[00274] Os valores da LEC para os compostos na tabela 2 em HEK293 NFkB-luc foram maiores do que a maior concentração testada (> 10 μM para os compostos 6, 44 e 63 e > 25 μM para todos os outros compostos). TABELA 2. COMPOSTOS DA FÓRMULA (I)

Claims (4)

1. Composto, caracterizado pelo fato de que apresenta a fórmula (I):

e sais farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, em que

X é oxigênio, nitrogênio, enxofre ou Y representa um anel aromático ou anel heterocíclico compreendendo um nitrogênio, opcionalmente substituído por um substituinte selecionado dentre C1-6alquila, C1-4alcoxi, trifluorometila ou halogênio, Z representa C1-10 alquila saturada ou insaturada opcionalmente substituída por uma alquila ou alquil-hidroxila; ou Z representa C1-6alquila -NH-C(O)-C1-6alquila- ou C1-6alquila -NH-C(O)-C1-6alquil-O-; ou Z representa C1-10alquila-O-, em que a referida alquila é saturada ou insaturada e pode ser opcionalmente substituída por uma alquila ou alquil-hidroxila, ou Z representa C1-6alquila-O-C1-6alquila-, em que a referida alquila é saturada ou insaturada e pode ser opcionalmente substituída por uma alquila ou alquil-hidroxila, ou Z representa C1-6alquila-O-C1-6alquila-O-, em que a referida alquila é saturada ou insaturada e pode ser opcionalmente substituída por uma alquila ou alquil-hidroxila.

2. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que apresenta uma das seguintes fórmulas selecionada do grupo dentre:

3. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende um composto da fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, como definido na reivindicação 1 ou 2, em conjunto com excipientes, diluentes ou veículos farmaceuticamente aceitáveis.

4. Composto da fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, de acordo com a a reivindicação 1 ou 2, ou uma composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 3, caracterizado(a) pelo fato de ser para uso como um medicamento.