BR112013026319B1

BR112013026319B1 - método e aparelho para o monitoramento de um tratamento de um paciente, preferivelmente para o monitoramento da hemodiálise, hemodiafiltração e/ou diálise peritoneal

Info

Publication number: BR112013026319B1
Application number: BR112013026319-9A
Authority: BR
Inventors: Malte Gross; Pascal Kopperschmidt; Andreas Maierhofer; Alfred Gagel
Original assignee: Fresenius Medical Care Deutschland Gmbh
Priority date: 2011-04-11
Filing date: 2012-04-10
Publication date: 2021-05-04
Also published as: CA2832144C; KR20140051167A; CN103533972A; AU2012241983A1; AU2012241983B2; EA027703B1; BR112013026319A2; WO2012140022A1; CN103533972B; KR101980389B1; CA2832144A1; JP2014518517A; EP2510958B2; JP6552820B2; EP2510958A1; EP2510958B1; EA201391216A1; US20140098359A1; US9215985B2

Abstract

MÉTODO E APARELHO PARA O MONITORAMENTO DE UM TRATAMENTO DE UM PACIENTE, PREFERIVELMENTE PARA O MONITORAMENTO DA HEMODIÁLISE, HEMODIAFILTRAÇÃO E/OU DIÁLISE PERITONEAL. A presente invenção refere-se a um método para c) monitoramento de um tratamento de um paciente, preferivelmente para o monitoramento da hemodiálise, hemodiafiltração e/ou diálise peritoneal, o método compreendendo as etapas de irradiação de uma amostra de um líquido de diálise usado no tratamento com irradiação de luz de pelo menos um primeiro comprimento de onda de irradiação, detecção da luz emitida pela amostra irradiada em pelo menos um primeiro comprimento de onda de detecção, o comprimento de onda de detecção sendo diferente do primeiro comprimento de onda de irradiação e determinação da presença e/ou concentração de pelo menos um analito na amostra ria base da luz detectada.

Description

Campo Técnico

A presente invenção refere-se a um método e a um aparelho para o monitoramento de um tratamento de um paciente, preferivelmente para o monitoramento da hemodiálise, hemodiafiltração e/ou diálise peritoneal.

Técnica Anterior

Os métodos de tratamento extracorporais têm sido usados por um longo tempo para o tratamento de diferentes condições. A diálise é o método de tratamento extracorporal mais comumente conhecido e usado que é destinado a substituir a função dos rins quando uma falência renal dos rins ocorre em um paciente.

Quando os rins falham, se torna necessário dialisar um paciente para remover resíduos tais como ureia, creatinina e toxinas urêmicas do sangue do paciente. Além disso, durante a diálise, água em excesso e outras substâncias as quais são geralmente eliminadas pela urina são removidas do corpo do paciente. O método mais comumente usado de diálise é a hemodiálise na qual o sangue do paciente flui ao longo de uma membrana de diálise, em que no outro lado desta membrana de diálise, um líquido de diálise é provido. Consequentemente, sangue e líquido de diálise são separados pela membrana porosa.

Através desta membrana, as substâncias que devem ser removidas do sangue do paciente difundem devido a um gradiente de concentração entre o sangue e o líquido de diálise. Moléculas maiores, cuja velocidade de difusão é muito lenta, também podem ser transportadas por convecção por meio de um fluxo líquido do lado do sangue para o lado do líquido de diálise da membrana.

O líquido de diálise é preparado para apresentar uma concentração que provê um gradiente de concentração a partir da lateral do sangue para o líquido de diálise para certas substâncias, mas não necessariamente para todas as substâncias. De fato, a remoção de ureia e creatinina bem como de outros produtos residuais no corpo humano é desejada, mas, por exemplo, a remoção ou mudança de concentração de eletrólitos tais como, sódio ou bicarbonato não é completamente desejada, mas é considerada prejudicial.

Consequentemente, o líquido de diálise tipicamente contém uma concentração dos eletrólitos que se assemelha à concentração de eletrólitos no plasma sanguíneo do paciente, visto que um gradiente de concentração não está presente para estas substâncias.

Além da hemodiálise, a diálise peritoneal é outro método para diálise que também utiliza uma membrana e um líquido de diálise de modo a obter uma difusão do produto residual através da membrana dentro do líquido de diálise. A membrana, contudo, é uma membrana natural denominada de peritônio e o líquido de diálise é introduzido diretamente dentro da cavidade abdominal.

Durante a diálise, a eliminação de excesso de água e substancias urêmicas moleculares pequenas, tais como ureia e creatinina, acontece tipicamente sem problemas, moléculas maiores, contudo, são mais difíceis de remover através da membrana porosa. De modo a enfrentar isto, membranas de diálise específicas de alto fluxo são fornecidas em combinação com métodos altamente convectivos, tal como hemodiafiltração. Isto resulta em melhoramentos na liberação de moléculas de massa molecular maior do que 1 kDa, que está na faixa das então chamadas moléculas de tamanho médio. Na hemodiafiltração, um método de difusão que utiliza o líquido de diálise na forma como descrita acima é combinado com hemofiltração, no qual o sangue de um paciente é submetido a um gradiente de pressão através de um filtro. Consequentemente, o processo de filtração ao longo do gradiente de pressão leva um a um fluxo de líquido aumentado e é, portanto, considerado um método altamente convectivo que possibilita a remoção de uma parte considerável de moléculas de tamanho médio. Contudo, devido ao gradiente de pressão, água bem como eletrólitos e açúcares são também removidos do sangue do paciente em uma taxa alta de modo que estes constituintes do sangue têm de ser substituídos por meio de infusão de um fluxo de substituição.

A introdução das membranas de diálise de alto fluxo em combinação com métodos altamente convectivos melhora a liberação de moléculas de tamanhos médios e grandes.

As moléculas maiores são tipicamente proteínas, em que, por exemplo, beta2-microglobulina apresenta um tamanho de cerca de 11 kDa, em que esta molécula pode induzir uma amiloidose se não for suficientemente removida. As moléculas menores as quais são tóxicas podem também ser difíceis de dialisar se as moléculas estiverem ligadas às proteínas. Por exemplo, toxinas urêmicas que são ligadas às proteínas são p-cresil sulfato e sulfato de indoxila.

Consequentemente, deseja-se ter tamanhos de poros nas membranas de diálise que sejam grandes o suficiente para deixar passar essas moléculas de tamanho médio. Por outro lado, o tamanho de poro da membrana não pode ser infinitamente estendido, uma vez que quanto maior for o tamanho de poro da membrana, maior é o risco com que os componentes vitais do sangue são da mesma forma perdidos. Consequentemente, a permeabilidade da membrana é tipicamente limitadas em tamanhos em torno de 60 kDa. Contudo, este valor é apenas ligeiramente abaixo da massa molecular de albumina de plasma humano que apresenta um tamanho em torno de 66 kDa. Na prática, perdas clinicamente significativas de albumina podem acontecer em que estas perdas dependem significativamente dos respectivos parâmetros do método, tais como as respectivas pressões e as respectivas concentrações no líquido de diálise. Em particular, uma membrana de alto fluxo em combinação com o gradiente de pressão aplicado durante a hemofiltração aumenta a liberação de albumina humana. Outra razão para a perda de albumina humana pode ser o múltiplo uso das membranas, visto que a liberação da membrana a qual é necessária entre diferentes tratamentos tende a aumentar os tamanhos dos poros na membrana. Isto desloca a permeabilidade da membrana em direção às moléculas maiores. Consequentemente, mesmo sob condições normais em hemodiálise normal, a albumina de soro humano pode penetrar através da membrana.

Não é necessário dizer que no caso da diálise peritoneal os tamanhos dos poros da membrana não podem ser influenciados, mas são dados pela condição do peritônio do respectivo paciente. Contudo, uma perda de albumina humana dentro do líquido de diálise pode, todavia, acontecer, uma vez que o peritônio foi debilitado, por exemplo, por uma inflamação.

De modo a determinar a liberação de um analito durante a diálise, um método de espectroscopia de Raman é descrito no documento norte-americano N° 2008/0158544 A1, em que as medidas espectrais de Raman são realizadas sobre o sangue após ele ter passado pelo dialisador de modo a utilizar a única assinatura espectroscópica de Raman de um ou mais analitos, por exemplo, ureia, para identificar e quantificar tais analito contra todo um antecedente sanguíneo.

O documento WO 2010/091 826 A1 refere-se a um aparelho para o tratamento extracorpóreo de sangue, em que a absorção de radiação eletromagnética no líquido de diálise é medida de modo a determinar o valor de Kt/V, denominada como a liberação de K do volume de fluxo das substâncias limpas, em que t é o tempo de tratamento e V o volume de distribuição do paciente. Em terapia de substituição renal, a ureia é tipicamente utilizada como uma substância indicadora para o tratamento de mensuração de eficiência de ácido úrico, tal como K é a liberação de ácido úrico e V o volume de distribuição de ureia do paciente, que corresponde, em principio, à água do corpo do paciente. Contudo, através da mensuração da absorção total, a liberação em geral para uma molécula específica não pode ser determinada. WO 2008/136548 A1 refere-se a um dispositivo de medir e monitorar um valor de hemoglobina através de um tubo de sangue.

Sumário da Descrição

Consequentemente, é um objeto da presente invenção prover um método e um aparelho para monitoramento de um tratamento de um paciente.

A proteção é solicitada para o método e o aparelho, conforme reivindicado.

De acordo com a presente invenção, um método para monitoramento de um tratamento de um paciente, preferivelmente para monitoramento de hemodiálise, hemodiafiltração e/ou diálise peritoneal, é sugerido. O método compreende as etapas de irradiação de uma amostra de um líquido de diálise utilizado no tratamento com irradiação de luz de pelo menos um primeiro comprimento de onda de irradiação, luz de detecção emitida pela amostra irradiada em pelo menos uma primeira detecção de comprimento de onda, a detecção de comprimento de onda sendo diferente do primeiro comprimento de onda de irradiação e determinando a presença e/ou concentração de pelo menos um analito na amostra com base na luz de emissão detectada.

Por meio da irradiação da amostra de líquido de diálise com luz de pelo menos uma primeira comprimento de onda de irradiação e a detecção de luz de pelo menos uma primeira comprimento de onda de detecção, em que a detecção de comprimento de onda é diferente do primeiro comprimento de onda de irradiação, torna-se possível determinar a resposta de emissão de um analito no líquido de diálise. A presença e/ou concentração de analitos específicos, tal como albumina humana, pode ser monitorada no líquido de diálise de modo a monitorar o tratamento do paciente. Em caso, por exemplo, que a concentração da albumina humana no líquido de diálise excede uma concentração predeterminada, um alarme pode ser liberado e a substituição da membrana de diálise pode ser exigida. Por outro lado, a concentração de toxinas urêmicas tais como beta2-microglobulina podem ser utilizadas para monitorar e otimizar a eficiência do tratamento através do ajuste das modalidades de tratamento.

A luz detectada inclui luz fluorescente e a presença e/ou concentração de pelo menos um analito na amostra é determinada com base na luz fluorescente detectada.

Para ilustrar isto, em espectroscopia de fluorescência, uma amostra é irradiada com irradiação de luz de um comprimento de onda predeterminado. O feixe de luz da irradiação de luz, normalmente luz ultravioleta, excita os elétrons de certos analito para um nível de energia mais alto. Através da absorção de um fóton, a molécula é excitada a partir de seu estado eletrônico fundamental para um dos vários estados vibracionais no estado eletrônico excitado. Quando, após um curto período de tempo, a molécula relaxa novamente para o estado eletrônico fundamental, um fóton é emitido. Visto que uma parte da energia é dissipada por meios de transições de não irradiação, por exemplo, colisões com outras moléculas que causam a perda de energia vibracional à molécula excitada, o fóton emitido no processo apresenta uma energia inferior e, portanto, um comprimento de onda maior do que o do fóton excitado. Consequentemente, a comprimento de onda de irradiação da luz que excita a molécula é diferente da detecção de comprimento de onda do fóton emitido de modo que a irradiação de luz e a luz emitida podem ser facilmente distinguidas de forma espectroscópica.

Uma vez que a excitação de comprimento de onda, bem como a emissão de comprimento de onda pode ser escolhida relativamente livre em comparação à espectroscopia de absorção, mais informações detalhadas sobre os analito dissolvidos no líquido de diálise podem ser obtidas através do método. Além disso, visto que a intensidade da luz detectada é tipicamente proporcional à concentração do analito ou, especificamente, do fluoróforo no líquido de diálise, a intensidade da luz detectada pode servir como uma medida para a concentração atual do respectivo analito no líquido de diálise.

A detecção de comprimento de onda é diferente de cada um dos comprimentos de ondas de irradiação. Isto apresenta uma vantagem que a configuração para detecção da luz pode ser simplificada, pois a detecção é sempre realizada em comprimentos de ondas diferentes da irradiação de modo que a irradiação de luz pode ser impedida de entrar no detector por meio dos dispositivos conhecidos na técnica.

Por exemplo, a intensidade de fluorescência é proporcional ao produto do coeficiente de absorção ε no comprimento de onda de excitação e o rendimento quântico ΦF. O último se refere à razão dos fótons absorvidos para o número de fótons emitidos por meio de fluorescência.

Através da determinação da presença e/ou concentração de pelo menos um analito na amostra com base na luz detectada, com base na fluorescência do respectivo analito, a presença e/ou concentração de moléculas específicas pode ser determinada. Com relação à mensuração de absorção convencional, é vantajoso que apenas um pequeno número de moléculas que estão presentes no líquido de diálise seja ativo com relação à emissão de luz, por exemplo, fluorescência. Em particular, as substâncias tais como ácido úrico, que estão presentes no líquido de diálise em concentrações muito altas, não mostram qualquer florescência e não atrapalham, portanto, a mensuração das moléculas específicas. As proteínas e as toxinas urêmicas supramencionadas, contudo, podem ser particularmente bem determinadas por meio de uma mensuração de fluorescência.

Em comparação com a espectroscopia de absorção, a espectroscopia de fluorescência é muito mais sensível. De fato, ao comparar o presente método à espectroscopia de absorção onde concentrações muito baixas de certos componentes levam apenas a uma absorção menor e, portanto, a atenuações bem pequenas de luz enviada através da amostra, o presente método tem a vantagem de que a intensidade da luz fluorescente é diretamente proporcional à concentração do respectivo analito na amostra de modo que a sensibilidade de um sensor/detector pode ser utilizada em uma ótima maneira.

Grupos exemplares de proteínas que são ativas em fluorescência são as cadeias laterais aromáticas dos aminoácidos de fenilalanina, tirosina e triptofano.

Ao considerar a atividade de fluorescência destes aminoácidos, a tirosina e triptofano dominam a fluorescência das proteínas. Com um comprimento de onda de excitação suficientemente longo, isto é, um comprimento de onda de excitação de Xθx^295nm, o triptofano é o único aminoácido que é ativo em fluorescência. Embora o triptofano seja um aminoácido que é relativamente raro, a molécula de albumina inclui uma unidade de triptofano. Devido à alta eficiência de fluorescência do triptofano, a albumina pode, portanto, ser detectada com suficiente eficiência.

De modo a aumentar a precisão do método, a luz de detecção é detectada em pelo menos um primeiro comprimento de onda de detecção e um segundo comprimento de onda de detecção, o primeiro e o segundo comprimentos de ondas de detecção sendo diferentes um do outro. Preferivelmente, a luz de detecção é detectada através da detecção de uma parte ou de todo o espectro da luz da amostra emitida. Através da detecção, mais de um comprimento de onda da luz emitida, a correlação da luz de detecção e uma impressão digital de emissão correspondente, em particular uma identificação fluorescente, de um analito específico se torna ainda mais precisa. O espectro de emissão para uma comprimento de onda de irradiação específica pode ser comparado com identificações de emissão específicas dos analito que são relevantes, em particular com a identificação de emissão de moléculas específicas de interesse que são pretendidas para serem monitoradas no método de tratamento extracorpóreo. De fato, é interessante monitorar, no líquido de diálise, a presença e/ou concentração aminoácidos fluorescentes livres, de albumina, de sulfato de indoxila e de quaisquer toxinas urêmicas fluorescentes de modo a determinar a liberação para as respectivas moléculas.

Como um suplemento para a análise de luz fluorescente, luz dispersa de Raman pode ser utilizada para a determinação da presença e/ou concentração de um certo analito na amostra. Para esta finalidade, a emissão de Raman da amostra é mensurada tanto sobre todo o espectro de Raman, sobre uma parte do mesmo quanto sobre certos comprimentos de ondas de detecção e as respectivas intensidades ou espectros são comparados às Identificações de Raman dos respectivos analitos de interesse.

De modo a aumentar adicionalmente a precisão da determinação da presença e/ou concentração do analito, a amostra é irradiada por uma irradiação de luz na faixa UV, com irradiação de luz que apresenta um comprimento de onda entre 180nm e 400nm, mais preferivelmente de 250nm a 300nm, mais preferida de 280nm e/ou 295nm. Preferivelmente, a amostra é irradiada com irradiação de luz de pelo menos dois comprimentos de ondas de irradiação separados e distintos, preferivelmente de 280nm e 295nm. Os dois espectros de emissão diferentes induzidos pelos dois comprimentos de ondas de irradiação podem ser comparados e a eficiência e precisão da determinação do analito ser ainda mais aumentada.

De modo a compensar a absorção da irradiação de luz na amostra, a intensidade da irradiação de luz na amostra é preferivelmente determinada e a determinação da presença e/ou concentração do analito na amostra é compensada pela intensidade da irradiação de luz. Preferivelmente a absorção da irradiação de luz na amostra é mensurada e a intensidade da irradiação de luz é determinada com base na absorção mensurada, em que preferivelmente a absorção na amostra é mensurada por meio de um detector de foto a que detecta a irradiação de luz transmitida através da amostra.

Alternativamente, a intensidade da luz de Raman dispersa da amostra é mensurada e é utilizada para determinar a intensidade da irradiação de luz. Esta mensuração da luz dispersa de Raman pode ser realizada no pico de intensidade da luz dispersa de Raman em água.

A etapa de compensação da absorção de luz na amostra se importa com o fato de que o líquido de diálise possa apresentar uma absorção diferente, dependendo da eficiência do processo de diálise bem como com base nas diferentes condições do respectivo paciente. De fato, no início de uma sessão de diálise, o líquido de diálise pode conter uma porção significativamente mais alta de ácido úrico, creatinina e outros produtos residuais que apresentam uma maior absorção para a luz de excitação do que em u último estado do processo de diálise. De modo a estar em uma posição para seguramente determinar a presença e/ou concentração do respectivo analito na amostra, é importante determinar a respectiva absorção da amostra de modo que seja evidente que é a intensidade de excitação efetiva que resulta no respectivo espectro fluorescente e na respectiva intensidade de fluorescência.

Informações adicionais sobre a presença e/ou concentração de um analito na amostra podem ser obtidas quando, preferivelmente, se detecta a luz fluorescente em um tempo de forma resolvida, preferivelmente em que a irradiação de luz é pulsada.

Outras formas de análise dos analitos podem estar presentes pela irradiação da amostra com luz polarizada, preferivelmente com luz circularmente polarizada para a esquerda e/ou luz circularmente polarizada para a direita.

De modo a melhorar adicionalmente o método, a luz fluorescente da amostra é preferivelmente detectada pelo menos duas vezes, em que entre a primeira e segunda detecções a amostra é física e/ou quimicamente tratada e a presença e/ou concentração do analito é determinada levando-se em conta a diferença entre as primeira e segunda detecções, em que a amostra é preferivelmente tratada por aquecimento, por adição e/ou remoção de reagentes e/ou por adição e/ou remoção de um ácido, de uma base química e/ou de um sal.

Para estar em uma posição para realizar mensurações mais complexas, a amostra pode ser separada do fluxo de líquido de diálise para realizar a determinação da presença e/ou concentração do analito.

Em uma alternativa, a determinação da presença e/ou concentração do analito pode ser realizada de forma contínua sobre o fluxo de líquido de diálise.

Ainda em outra versão preferida, antes da irradiação da amostra com a irradiação de luz, a amostra é separada em duas frações diferentes, preferivelmente por meio de uma ultrafiltração, eletroforese, cromatografia, a adição de absorvedor e/ou a adição de um indicador fluorescente e pelo menos uma das frações da amostra é irradiada com a irradiação de luz.

Ao monitorar o analito no líquido de diálise, em particular ao monitorar a presença e/ou ausência de albumina, pode ser visto que a albumina humana emite uma luz fluorescente que apresenta um máximo de 340nm quando é excitada a cerca de 280nm.

O sulfato de indoxila (indican), que é um produto residual de triptofano, é conhecido por estar presente em pacientes urêmicos em uma concentração significativa no soro de sangue. O sulfato de indoxila é conhecido por ser uma toxina urêmica. Os espectros fluorescentes de triptofano e sulfato de indoxila são consideravelmente similares de modo que apesar das proteínas da diálise a liberação de sulfato de indoxila é interessante em aspectos de diagnósticos. Como uma alternativa, os indicadores fluorescentes que se ligam a certas moléculas podem ser utilizados para determinar a presença e/ou concentração das respectivas moléculas.

De modo a determinar ainda mais precisamente a composição do líquido de diálise utilizado, a presença e/ou concentração de pelo menos dois analitos diferentes pode ser determinada com base na luz detectada.

Preferivelmente, após a excitação com um comprimento de onda específico através da irradiação da amostra com a irradiação de luz, a luz detectada pode ser analisada devido à presença de pelo menos N analitos diferentes. Isto é feito através da análise do espectro detectado f(À), isto é, as intensidades no respectivo comprimento de onda de emissão À, que é assumido para ser dado na forma de uma superposição linear dos espectros de emissão dos N analitos:

Ci sendo a concentração não conhecida do ienésimo analito e si (X) sendo a sensibilidade de emissão conhecida do ienésimo analito como uma função do respectivo comprimento de onda de emissão X. Esta equação é preferivelmente resolvida para as concentrações não conhecidas ci, através da determinação do espectro em M comprimentos de ondas de emissão discretos e diferentes Xj, considerando a equação acima na forma do seguinte sistema de M equações com N não conhecidos:

Este sistema é resolvido numericamente, preferivelmente através da consideração como a melhor solução para o sistema de equações acima o único que prover, quando é inserido na matriz acima, o espectro de superposição que apresenta o menor desvio quadrado a partir do espectro medido efetivamente. Por meio desta análise, torna-se possível determinar a composição do fluido de diálise pela análise da luz de emissão detectada e em particular pela análise do respectivo espectro da luz de emissão detectada. Em particular, as concentrações não conhecidas ci, são determinadas e, portanto, a composição do fluido de diálise com relação às concentrações ci, do respectivo analitos pode ser determinada.

Este método pode ser estendido a mais de um, isto é P, comprimentos de ondas de irradiação Xirr, P sendo maior do que um, quando para cada comprimento de onda de irradiação Àirr um espectro de emissão separado f(Àirr, À) é detectado no respectivo comprimento de onda de emissão À. Consequentemente, o espectro detectado f(Àirr, À) para um comprimento de onda de irradiação Àirr é assumido, de novo, a ser dado na forma de uma superposição linear dos espectros de emissão dos N analitos:

Ci sendo a concentração não conhecida do ienésimo analito e Si (ÀirrÀ) sendo a sensibilidade de emissão conhecida do ienésimo analito como uma função do comprimento de onda de emissão À na respectiva comprimento de onda de irradiação Àirr.

Pela adição das respectivas equações ao sistema de equação linear fornecido acima, lê-se:

Pela resolução do sistema de equação acima, preferivelmente no mesmo modo conforme indicado acima, uma 30 solução para as concentrações ci, pode ser determinada e, portanto, as concentrações dos respectivos analitos no líquido de diálise utilizado podem ser determinadas.

O objetivo fornecido acima é também resolvido por meio de um aparelho para monitoramento de um tratamento de um paciente, preferivelmente para monitoramento de hemodiálise, hemodiafiltração e/ou diálise peritoneal, com as características da reivindicação 1.

Consequentemente, o aparelho para monitorar um tratamento de um paciente, preferivelmente para monitoramento de hemodiálise, hemodiafiltração e/ou diálise peritoneal, o aparelho compreende uma fonte de luz para irradiar uma amostra de um líquido de diálise utilizado no tratamento com irradiação de luz de pelo menos um primeiro comprimento de onda de irradiação, um detector para detectar luz emitida pela amostra irradiada em pelo menos um primeiro comprimento de onda de detecção, o comprimento de onda de detecção sendo diferente de cada comprimento de onda de irradiação e uma unidade de controle e análise para determinação da presença e/ou concentração de pelo menos um analito na amostra com base na luz detectada.

Modalidades preferidas adicionais do aparelho são fornecidas nas reivindicações dependentes do aparelho da reivindicação independente 12.

Breve Descrição dos Desenhos

A presente descrição será mais prontamente apreciada através de referência à descrição detalhada a seguir quando sendo considerada em conexão com os desenhos acompanhantes no quais: A figura 1 é uma vista esquemática de um aparelho para monitoramento de um analito em um tratamento extracorpóreo; A figura 2 é uma vista esquemática detalhada de uma peça do aparelho de acordo com a figura 1; A figura 3 é um diagrama esquemático que mostra o espectro fluorescente de albumina humana em diferentes concentrações após excitação em um comprimento de onda de irradiação de 280nm; A figura 4 é um diagrama esquemático que mostra a intensidade de fluorescência de albumina em um comprimento de onda de luz detectada de 340nm em dois diferentes comprimentos de ondas de irradiação, isto é, de 280nm e de 295nm; e A figura 5 é um diagrama esquemático que mostra o espectro de absorção de ácido úrico.

DESCRIÇÃO DETALHADA DAS MODALIDADES PREFERIDAS

A seguir, a descrição será explicada em mais detalhes com referência às figuras acompanhantes. Nas figuras, elementos similares são denotados por números referenciais idênticos e a descrição repetida dos mesmos pode ser omitida de modo a evitar redundâncias.

A figura 1 é uma vista esquemática de um system para tratamento de um paciente, em particular um aparelho para diálise. O sistema inclui um aparelho para monitoramento do tratamento de um paciente.

Em particular, a figura 1 mostra um dialisador que compreende uma membrana semipermeável e porosa 3. No lado direito da figura 1 a circulação de sangue do paciente é conectada à membrana 3 e no lado esquerdo a circulação do líquido de diálise é conectada à membrana 3. O princípio da hemodiálise é bem conhecido e envolve a difusão de solutos no sangue através da membrana semipermeável 3. A difusão é induzida por um gradiente de concentração de certas substâncias através da membrana 3.

O sangue do paciente é transportado através de um tubo 1 à membrana 3 e passa ao longo da membrana em um lado da mesma em direção ao tubo 2, a partir do qual o sangue é transportado de volta para o paciente.

O liquido de diálise é transportado através de um tubo 4 à membrana 3 e é descartado através do tubo 5. A partir da figura 1, torna-se imediatamente aparente que, nesta modalidade específica, a circulação de sangue a e a circulação do líquido de diálise envolvem correntes de fluidos opostas na membrana 3. O método utiliza fluxos de correntes opostas de modo que o líquido de diálise fresco entra em contato com o sangue do paciente que irá ser transportado de volta ao paciente de novo e o sangue fresco do paciente entra em contato com o líquido de diálise que está para ser descartado. Esta é uma prática-padrão para aumentar a eficiência do processo de diálise, uma vez que o fluxo de corrente oposta mantém o gradiente de concentração através da membrana a um máximo e aumenta a eficiência da diálise. Contudo, em soluções alternativas um fluxo paralelo de sangue e um fluxo de diálise também podem ser utilizados, dependendo das necessidades terapêuticas do paciente.

A membrana 3 é uma membrana semipermeável e porosa, visto que é habitual quando em aparelho de diálise. Devido ao gradiente de concentração entre o lado do paciente e o lado do líquido de diálise da membrana 3, as moléculas se difundem do lado do sangue através da membrana semipermeável 3 para lado do líquido de diálise e são, desta forma, removidas do sangue.

Dependendo das condições atuais do paciente e dependendo do efeito o qual se deseja alcançar, o líquido de diálise inclui concentrações de diferentes substâncias que são pretendidas para corresponder às concentrações no sangue, de modo que um gradiente de concentração não esteja presente. Isto pode ser o caso de, por exemplo, para eletrólitos que consequentemente não se difundem através da membrana 3. Contudo, outras substâncias podem não estar totalmente presentes no líquido de diálise fresco de modo que um forte gradiente de concentração é induzido. Este forte gradiente de concentração é desejado, em particular, para substâncias que são normalmente eliminadas através da urina tal como ácido úrico, creatinina e as toxinas urêmicas. Pretende-se também remover o excesso de água no sangue. Dependendo dos tamanhos dos poros da membrana 3, contudo, a difusão de moléculas maiores tais como, por exemplo, albumina humana pode também ocorrer. Isto é, contudo, não desejado.

Uma amostra do líquido de diálise utilizado, que é descartado através do tubo 5, é analisado em uma célula 6 com relação à presença e/ou concentração de pelo menos um analito. Para esta finalidade, uma fonte de luz 7 está presente a qual irradia a amostra de líquido de diálise presente na célula 6 com uma luz de excitação. A fonte de luz 7 preferivelmente emite pelo menos um primeiro comprimento de onda, preferivelmente um comprimento de onda de luz na faixa ultravioleta, ou seja, em uma faixa entre 180nm e 400nm. Na modalidade específica mostrada na figura 1, a fonte de luz 7 é um semicondutor baseado na fonte de luz para a faixa ultravioleta, em particular um diodo de AllnGaN que emite luz em um comprimento de onda de 280nm. Contudo, qualquer outra fonte de luz pode ser utilizada.

A amostra de líquido de diálise presente na célula 6 é iluminada pela luz que colide com ela e que é emitida da fonte de luz 7. Os fótons da luz excitam certas moléculas presentes no líquido de diálise de modo que a emissão de luz fluorescente pode ser induzida na amostra. A presença, o comprimento de onda e a intensidade da luz fluorescente são detectados por meio de um detector na forma de um espectrômetro 9 em uma direção perpendicular à direção de iluminação da luz emitida a partir da fonte de luz 7. Qualquer outra direção que seja diferente de ser coaxial com a direção de iluminação da fonte de luz 7 poderia ser utilizada para a detecção da luz fluorescente induzida nas moléculas selecionadas no líquido de diálise na célula 6. Uma disposição coaxial do espectrômetro resultaria tipicamente em uma forte distorção pela irradiação de luz, mas isso poderia ser também possível pelo uso de filtros, grades de reflexão ou um comprimento de onda dependente de divisores de feixe para dividir a luz detectada emitida a partir da amostra a partir da luz de iluminação. Visto que os comprimentos de ondas da luz de iluminação e a luz detectada são diferentes um do outro, muitos dispositivos para a divisão de feixes de luz diferentes entre si são conhecidos na técnica.

A intensidade da luz fluorescente emitida e, em uma modalidade preferida, uma parte ou todo o espectro fluorescente é detectado por meio do espectrômetro 9. Em uma alternativa, quando apenas os comprimentos de ondas de emissão selecionados são de interesse, filtros ou outros dispositivos seletivos de comprimento de onda poderiam também estar presentes no lugar do espectrômetro 9 de modo a selecionar comprimentos de ondas específicos a serem analisados quanto à sua intensidade.

Visto que, em uma modalidade preferida, o comprimento de onda de detecção é diferente de cada um dos comprimentos de ondas de irradiação, a luz emitida a partir da amostra pode ser detectada facilmente pelo simples fato de impedir que a irradiação de luz entre no detector por meio de dispositivos conhecidos na técnica.

Estes dados de intensidade da luz emitida e detectada são comunicados para uma unidade de controle e análise 11. Na unidade de controle e análise 11, a presença e/ou concentração de pelo menos um analito na amostra presente na célula 6 é determinada com base nas informações quanto ao comprimento de onda de irradiação e intensidade da irradiação, assim como a intensidade e o comprimento de onda da luz de fluorescência detectada detectados pelo espectrômetro 9. Cada molécula fluorescente tem uma identificação específica quanto ao seu espectro de luz fluorescente para um comprimento de onda de irradiação específica.

Esta determinação pode ser realizada em diferentes formas, uma das quais é descrita adicionalmente abaixo.

No aparelho mostrado na figura 1, adicionalmente, um detector de foto 8 está presente o qual está localizado de uma maneira coaxial com o feixe de irradiação de luz emitido da fonte de luz 7. O detector de foto 8 está situado em um lado oposto ao da fonte de luz 7 com a célula 6 entre eles e, consequentemente, recebe a irradiação de luz da fonte de luz 7 que passou através da célula 6. Em outras palavras, o detector de foto 8 é destinado a detectar a intensidade de luz da luz que foi transmitida através da célula 6 e, assim, que foi parcialmente absorvida e é, assim, atenuada pela amostra presente na célula 6. A intensidade de luz recebida pelo detector de foto 8 também é comunicado para a unidade de controle e análise 11.

A fim de estar em uma posição de realizar uma calibração do relacionamento da fonte de luz 7 e do detector de foto 8, assim como uma calibração do espectrômetro 9, a válvula de derivação 10 está presente a qual pode ser controlada por meio da unidade de controle e análise 11. Pela abertura da válvula de derivação 10, o líquido de diálise fresco pode ser distribuído para a célula 6 tal que apenas o líquido de diálise fresco está presente na célula 6. Assim que a válvula de derivação 10 estiver fechada novamente, o líquido de diálise circula através do filtro 3 e a célula 6 recebe o líquido de diálise usado novamente.

A unidade de controle e análise 11 pode determinar a presença e/ou concentração de um analito específico, por exemplo, a albumina humana, no líquido de diálise com base na luz fluorescente recebida pelo espectrômetro 9. Isto pode ser feito, por exemplo, pela comparação do espectro de fluorescência medido pelo espectrômetro 9 com um espectro de fluorescência de uma molécula específica - um assim chamada identificação de fluorescência - que pode ser armazenada em um armazenamento 12 na figura 1. Ao comparar o espectro de fluorescência medido com uma identificação de uma molécula específica, a presença de um analito específico pode ser determinada.

A fim de estar em uma posição para determinar a concentração do analito, a intensidade atual do espectro também é de relevância.

Embora na presente descrição das modalidades preferidas, o foco seja na análise da luz fluorescente como a luz detectada, a análise de outras formas de emissão de luz de uma amostra excitada também é contemplada, tal que a análise de luz dispersa Raman para a determinação da presença e/ou concentração de pelo menos um analito no fluido de diálise usado. Os princípios desta determinação são comparáveis aos princípios delineados acima com relação à análise da luz fluorescente.

Neste aspecto, a figura 3 mostra os espectros de fluorescência para a albumina humana de diferentes concentrações ao serem excitados com a luz de um comprimento de onda de 280 nm. Quatro diferentes concentrações da albumina humana são medidas na figura 3, a saber, concentrações de 7 mg/l, 23 mg/l, 45 mg/l e 98 mg/l. É imediatamente aparente da figura 3 que o pico de fluorescência máximo é em aproximadamente 340 nm, mas que as intensidades variam de acordo com as respectivas concentrações.

A figura 4 mostra a intensidade de fluorescência em 340 nm para a albumina humana em dois diferentes comprimentos de onda de excitação, a saber, em 280 nm e em 295 nm.

É contemplado que no aparelho da figura 1 para excitar a amostra presente na célula 6 em mais do que um comprimento de onda, por exemplo, em dois diferentes comprimentos de onda, a fim de estar ainda mais precisamente em uma posição para determinar a presença de uma molécula específica, por exemplo, a albumina humana e também estar em uma posição para determinar a concentração atual desta molécula no líquido de diálise presente na célula 6.

Ao considerar o mecanismo de diálise, também se torna aparente que não é apenas a albumina que estará presente no líquido de diálise no tubo 5 após ele ter passado ao longo da membrana semipermeável 3, mas muitos outros produtos residuais estarão presentes no líquido de diálise. Um é, por exemplo, o ácido úrico.

O ácido úrico, no entanto, tem um espectro de absorção específico que é mostrado, esquematicamente, na figura 5. A figura 5 é tirada de "Photoelectric Spectrometry Group, London; Institut fur Spektrochemie und Angewandte Spektroskopie, Dortmund 99.9 68): DMS UV Atlas of Organic Compounds. 5 Volumes. Weinheim, London: Verlag Chemie; Butterworths".

Ao considerar a figura 5, torna-se aparente que um pico de absorção de ácido úrico é em cerca de 280 nm o que corresponde ao comprimento de onda de excitação usado para a medição da intensidade de fluorescência da albumina humana mostrada na figura 3. Consequentemente, quanto maior a concentração de ácido úrico no líquido de diálise, maior é a absorção da irradiação de luz. Quando o comprimento de onda de excitação é ajustado em 280 nm, a intensidade que é atualmente aplicada em certo volume do líquido de diálise na célula 6 é fortemente atenuada por meio da presença do ácido úrico no líquido de diálise. O ácido úrico, no entanto, não emite qualquer luz fluorescente. No entanto, a fim de estar em uma posição para determinar confiavelmente a intensidade da luz fluorescente emitida com base na intensidade da luz emitida pela fonte de luz 7, a atenuação atual deve ser determinada. A figura 2 mostra uma disposição para a compensação da absorção da luz de excitação na amostra presente na célula 6. A intensidade da fonte de luz 7 pode ser facilmente determinada pela medição da intensidade da luz na célula 6. No entanto, visto que a concentração de ácido úrico no líquido de diálise varia amplamente durante uma sessão de diálise, ela precisa ser compensada.

Consequentemente, a intensidade da luz no volume de excitação pode ser calculada com base na lei de LambertBeer, lidando com a absorção de luz no material através do qual a luz está atravessando:

Aqui, IO é a intensidade inicial da luz que interfere na célula, I(x) é a intensidade após a luz ter viajado por uma distância x através da célula 6 e o coeficiente α é uma medida para a resistência de absorção.

Consequentemente, após a luz ter passado através da célula inteira 6 do comprimento L, a intensidade é:

Consequentemente, assumindo que a amostra da qual a luz fluorescente é emitida é distanciada pela distância I

da entrada de luz dentro da célula, a intensidade na amostra é:

O detector de foto 8 mede continuamente a intensidade I(L), a saber a intensidade da luz que viajou através da célula inteira 6. Contanto que a intensidade inicial IO da fonte de luz 7 permaneça constante, o coeficiente α pode ser determinado tal que a intensidade da luz I(I) na amostra que emite a luz fluorescente pode ser calculada em qualquer momento. Consequentemente, todos os espectros de fluorescência ou luz fluorescente podem ser compensados pela absorção no líquido de diálise presente na célula 6. Em outras palavras, a concentração do respectivo analito pode ser determinada devido à intensidade 1(1) da irradiação de luz na amostra ser conhecida.

Em uma alternativa ou em adição à medição da absorção, a intensidade da excitação da luz emitida pela fonte de luz 7 pode ser determinada pela análise da dispersão de Raman em moléculas de água presentes na amostra na célula 6. Com este fim, preferivelmente um espectro de Raman da amostra é obtido. Em uma alternativa, pode ser suficiente se apenas a intensidade do pico de luz dispersa de Raman em água para a respectiva irradiação de luz for medida. Em outras palavras, é suficiente medir o pico de Raman de água para a respectiva irradiação de luz a fim de determinar o amortecimento da irradiação de luz na água.

A intensidade da dispersão de Raman é substancialmente proporcional à intensidade da luz de excitação e da densidade das moléculas de água na amostra.

A densidade das moléculas de água na amostra é, no entanto, substancialmente constante no líquido de diálise. Consequentemente, pela obtenção do espectro de Raman da amostra que também emite a luz fluorescente, torna-se possível determinar a intensidade da excitação presente na amostra. O espectro de Raman pode ser obtido usando o espectrômetro 9 da mesma forma.

O espectrômetro 9 usado pode ser um espectrômetro convencional que é prontamente disponível no mercado. Tal espectrômetro compreende, tipicamente, uma lente de entrada para focar a luz incidente, uma grade de difração e uma câmera CCD (linha) para a detecção da luz.

Espectros de fluorescência em um líquido de diálise real são, no entanto, tipicamente não emitidos por uma única molécula fluorescente apenas, mas compreendem geralmente pelo menos dois espectros que são superpostos. Pelo menos as moléculas de albumina e sulfato de indoxila devem ser consideradas aqui.

Para o propósito de um monitoramento confiável de um tratamento de um paciente, no entanto, é desejável saber sobre a presença e/ou concentração de mais do que um analito no líquido de diálise usado. Por exemplo, o médico está interessado na presença ou não de albumina humana e/ou sulfato de indoxila no líquido de diálise usado e se qualquer um destes analitos está presente, o médico gosta de saber a concentração dos mesmos.

Para a análise a seguir, assume-se que o espectro de fluorescência que é emitido da amostra após a excitação em um comprimento de onda de irradiação específica é atualmente medido por meio do espectrômetro 9. O espectro de fluorescência significava f(A) e é considerado como sendo representado pela superposição linear dos diferentes espectros de fluorescência de N fluoróforos simples:

Nesta equação, ci é a concentração do ienésimo fluoróforo e si (À) é a respectiva sensibilidade à fluorescência do ienésimo fluoróforo como uma função do respectivo comprimento de onda de emissão À. Se o espectro for registrado em M diferentes comprimentos de onda Àj, a equação acima pode ser dada como um sistema de M equações com N desconhecidas:

Consequentemente, as concentrações desconhecidas ci podem ser calculadas das intensidades espectrais medidas f(Àj) levando em consideração os elementos de matriz conhecidos si(Àj) . Os elementos de matriz si(Àj) pode ser considerados representativos da "identificação de fluorescência” dos respectivos analitos. O sistema de equações acima pode ser solucionado, em particular, numericamente. Por exemplo, a melhor solução para o sistema de equações acima é considerada a única que provê,quando inserida na matriz acima, o espectro de superposição (teórico) que tem o menor desvio quadrado do espectro atualmente medido. Por meio desta análise, torna- se possível determinar a composição do fluido de diálise pela análise da luz fluorescente detectada e, em particular, pela análise do respectivo espectro da luz de fluorescência detectada. Em particular, as concentrações desconhecidas ci são determinadas e, assim, a composição do fluido de diálise usado com relação às concentrações ci dos 5 respectivos analitos pode ser determinada.

Em uma alternativa, mais do que um comprimento de onda de irradiação são usados na irradiação de luz. Em particular, P comprimentos de onda de irradiação diferentes Àirr são usados neste método - por exemplo, pela provisão de diferentes diodos de irradiação de luz. Para cada comprimento de onda de irradiação Àirr, as intensidades f(Àirr,À) são registradas para os respectivos comprimentos de onda de emissão À. O assim chamado espectro detectado f(Àirr,À) para um comprimento de onda de irradiação é assumido novamente como sendo dado na forma de uma superposição linear dos espectros de fluorescência dos analitos N:

Ci sendo a concentração desconhecida do ienésimo analito e si(Àirr,À) sendo a sensibilidade à fluorescência desconhecida do ienésimo analito como uma função do comprimento de onda de fluorescência À no respectivo comprimento de onda de irradiação Àirr. Pela adição das respectivas equações ao sistema de equação linear dado acima, lê-se:

Ao solucionar o sistema de equação acima, preferivelmente da mesma maneira que a indicada acima, uma solução para as concentrações c, pode ser determinada e, assim, as concentrações dos respectivos analitos no líquido de diálise usado podem ser determinadas.

Em outras modalidades preferidas, os espectros de fluorescência são medidos por meio do espectrômetro 9 com prazos determinados. A fim de realizar isto, a luz de excitação emitida da fonte de luz 7 é, preferivelmente, provida de uma maneira não contínua, por exemplo, de uma maneira pulsada. Por exemplo, um laser pulsado pode ser usado para testar a amostra. Por meio da provisão dos espectros de fluorescência com prazos determinados, informações adicionais quanto à presença e/ou concentração de certos analitos podem ser derivadas da amostra.

A fim de separar vários fluoróforos em um líquido de diálise, também é possível, além da análise numérica do espectro de fluorescência como delineado acima, usar técnicas para separar a amostra em diferentes frações. Este fracionamento pode ser feito, por exemplo, pela ultrafiltração de proteínas que podem ser separadas devido a seu alto número de massa de substâncias com menor teor de massa tais como sulfato de indoxila. Para alcançar a filtração, a solução de diálise que será analisada é alimentada através de um filtro com um tamanho de poro adequado. O filtrado e/ou o concentrado podem ser então analisados irradiando o mesmo com luz de pelo menos o primeiro comprimento de onda e detectando a luz fluorescente emitida pela respectiva fração.

Para a análise do líquido de diálise na amostra, é contemplado analisá-lo seja em um campo separado do aparelho de diálise ou armazená-lo em um volume separado, onde ele é tratado e a seguir é alimentado novamente através da célula de medição 6.

A figura 6 mostra esquematicamente um layout de um aparelho que é disposto para a realização da análise no fluido de diálise usado separado do fluxo principal do fluido de diálise usado. Com este fim, um tubo de derivação 13 é mostrado através do qual a porção maior do fluido de diálise usado passa. Consequentemente, apenas uma fração do fluxo da saída de fluido de diálise usado, após ter passado pela membrana 3, flui através da célula 6.

Preferivelmente, uma válvula 14 está presente antes da célula 6 tal que as amostras podem ser separadas do fluxo constante do analito usado. Os fluxos separados podem ser analisados durante um tempo longo o suficiente tal que a análise com prazo determinado na amostra idêntica também possa ser realizada antes dela ser descarregada novamente. Por meio da válvula 14, também é possível trocar entre um modo de fluxo constante na célula 6 quando a válvula 14 está sempre aberta ou um modo de amostra separada quando a válvula 14 está apenas aberta para deixar algum fluido de diálise usado fluir para dentro da célula 6 e então fechar a válvula visto que a respectiva amostra é analisada na célula 6.

Uma separação de diferentes frações da amostra também pode ser alcançada em e antes da célula 6 por meio de eletroforese, cromatografia, cascatas de filtragem, pelo uso de absorvedores específicos ou pela marcação de substâncias ou moléculas específicas por meio de marcadores ativos de fluorescência. Um aparelho respectivo para a realização dos tratamentos respectivos na amostra antes dela ser analisada na célula 6 é esquematicamente mostrado no numeral de referência 15.

Em uma modalidade adicional preferida, a amostra pode ser medida pelo menos duas vezes em que a segunda medição é realizada após a amostra ser física e/ou quimicamente tratada. O tratamento atual pode ser realizado pelo aquecimento, pela adição e/ou remoção de reagentes tais como um ácido, uma base química ou um sal ou por qualquer outro tratamento adequado. A presença e/ou concentração de um analito específico é a seguir determinado levando em consideração a diferença entre as pelo menos duas medições, a saber, a medição antes do tratamento e a medição após o tratamento. A combinação da diferença dos dois espectros de fluorescência e do espectro de fluorescência como tais pode prover informações adicionais quanto ao respectivo analito - ou a composição de diferentes analitos - no líquido de diálise.

O respectivo aparelho para o tratamento da amostra é mostrado esquematicamente na figura 6 no numeral de referência 16, que pode ser um aparelho de dosagem para a adição de produtos químicos à amostra e nenhum numeral de referência 17, que é um a aparelho para o tratamento físico tal como um aquecedor.

Quanto à fonte de luz 7, também é contemplado o uso, em uma modalidade preferida, de luz polarizada para a excitação do líquido de diálise, em particular, a luz circularmente polarizada para a esquerda e/ou luz 5 polarizada circularmente para a direita.

Claims

1. Método para o monitoramento de um tratamento de um paciente, preferivelmente para o monitoramento da hemodiálise, hemodiafiltração e/ou diálise peritoneal, o método compreende as etapas de: - irradiação de uma amostra de um líquido usado no tratamento com irradiação de luz de pelo menos um primeiro comprimento de onda de irradiação; - detecção da luz emitida pela amostra irradiada em pelo menos um primeiro comprimento de onda de detecção em que o comprimento de onda de detecção é diferente do primeiro comprimento de onda de irradiação e; - determinação da presença e/ou concentração de pelo menos um analito na amostra com base na luz detectada, caracterizado pelo fato do líquido ser um líquido de diálise e a luz detectada inclui luz fluorescente e a presença e/ou concentração de pelo menos um analito na amostra é determinada com base na luz de fluorescência detectada, em que a luz de irradiação é luz UV com comprimento de onda compreendido entre 180 nm e 400 nm.

2. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a presença e/ou concentração do analito na amostra é determinada com base na luz detectada de pelo menos um primeiro comprimento de onda de detecção e um segundo comprimento de onda de detecção, os primeiro e segundo comprimentos de onda de detecção sendo diferentes um do outro e/ou; em que a presença e/ou concentração do analito na amostra é determinada com base no espectro de uma luz detectada da amostra.

3. Método, de acordo com reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que a irradiação de luz é luz UV tendo um comprimento de onda entre 250 nm e 300 nm, preferivelmente luz tendo um comprimento de onda de 280 nm e/ou 295 nm, e/ou em que a amostra é irradiada com irradiação de luz de pelo menos dois comprimentos de onda separados, distintos, preferivelmente em um comprimento de onda de 280 nm e 295 nm.

4. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2 ou 3, caracterizado pelo fato de que a intensidade da irradiação de luz na amostra é determinada e a determinação da presença e/ou a concentração do analito na amostra é compensada para a intensidade da irradiação de luz, em que preferivelmente a absorção da irradiação de luz na amostra é medida e a intensidade da irradiação de luz é determinada com base na absorção medida, em que preferivelmente a absorção na amostra é medida por meio de um detector de foto detectando a irradiação de luz transmitida através da amostra e/ou em que a luz dispersa de Raman da amostra é obtida e a intensidade da irradiação de luz na amostra é determinada com base na luz dispersa de Raman obtida e/ou; em que preferivelmente um espectro de Raman da amostra e/ou a intensidade em um pico de Raman de água da luz dispersa de Raman é obtido.

5. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3 ou 4, caracterizado pelo fato de que a luz detectada é detectada com prazo determinado, preferivelmente em que a irradiação de luz é pulsada.

6. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores 1, 2, 3, 4 ou 5, caracterizado pelo fato de que a amostra é irradiada com irradiação de luz polarizada, preferivelmente com irradiação de luz circularmente polarizada para a esquerda e/ou irradiação de luz circularmente polarizada para a direita.

7. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3, 4, 5 ou 6, caracterizado pelo fato de que a luz emitida pela amostra é detectada pelo menos duas vezes, em que, entre as primeira e segunda detecções, a amostra é tratada física e/ou quimicamente e a presença e/ou concentração do analito é determinada levando em consideração a diferença entre as primeira e segunda detecções, em que a amostra é preferivelmente tratada pelo aquecimento, pela adição e/ou remoção de reagentes e/ou pela adição e/ou remoção de um ácido, de uma base química e/ou de um sal.

8. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6 ou 7, caracterizado pelo fato de que a amostra é separada do fluxo de líquido de diálise para a realização da determinação da presença e/ou concentração do analito ou em que a determinação da presença e/ou concentração do analito é realizada continuamente no fluxo de líquido de diálise.

9. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8, caracterizado pelo fato de que antes da irradiação da amostra com a irradiação de luz, a amostra é separada em diferentes frações, preferivelmente por meio de ultrafiltração, eletroforese, cromatografia, a adição de absorvedor e/ou a adição de um marcador fluorescente e pelo menos uma das frações da amostra é irradiada com a irradiação de luz.

10. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 ou 9, caracterizado pelo fato de que a presença e/ou concentração de pelo menos dois analitos diferentes é determinada com base na luz detectada, em que preferivelmente após a excitação em um comprimento de onda de irradiação específica, uma luz detectada é analisada quanto à presença de pelo menos N diferentes analitos pela análise de uma luz detectada f(À) a ser dada na forma de uma superposição linear dos espectros dos N analitos:

Ci sendo uma concentração desconhecida do ienésimo analito e si (À) sendo uma sensibilidade desconhecida do ienésimo analito como uma função do respectivo comprimento de onda de emissão À, em que esta equação é preferivelmente solucionada para as concentrações desconhecidas ci pela determinação do espectro em M diferentes comprimentos de onda Àj, considerando a equação acima na forma do sistema a seguir de M equações com N

e solucionando-as numericamente, preferivelmente, considerando como a melhor solução para o sistema de equações acima aquela que provê, quando inserida na matriz acima, o espectro de superposição que tem o menor desvio quadrado do espectro medido atualmente.

11. Aparelho para o monitoramento de um tratamento de um paciente, preferivelmente para o monitoramento da hemodiálise, hemodiafiltração e/ou diálise peritoneal, o aparelho que compreende: - uma fonte de luz (7) para a irradiação de uma amostra de um líquido usado no tratamento com irradiação de luz de pelo menos um primeiro comprimento de onda de irradiação; - um detector (9) para a detecção da luz emitida pela amostra irradiada em pelo menos um primeiro comprimento de onda de detecção em que o comprimento de onda de detecção é diferente do primeiro comprimento de onda de irradiação e; - uma unidade de controle e análise (11) para a determinação da presença e/ou concentração de pelo menos um analito na amostra com base na luz detectada, caracterizado pelo fato do líquido ser um líquido de diálise e o detector (9) estar disposto para detectar luz que inclui luz fluorescente e a unidade de controle e análise (11) estar disposto para determinar a presença e/ou concentração de pelo menos um analito na amostra com base na luz de fluorescência detectada, em que a fonte de emite luz de irradiação na faixa do UV tendo um comprimento de onda entre 180 nm e 400 nm.

12. Aparelho, de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que a fonte de luz emite irradiação de luz na faixa de UV entre 250 nm e 300 nm, preferívelmente em 280 nm e/ou 295 nm, e/ou em que a fonte de luz preferivelmente é um diodo AllnGaN e/ou; em que a fonte de luz é ajustada para prover luz de iluminação em pelo menos dois comprimentos de onda separados, distintos, preferivelmente em 280nm e 295nm.

13. Aparelho, de acordo com a reivindicação 11 ou 12, caracterizado pelo fato de que os meios para a determinação da intensidade da irradiação de luz na amostra são providos, em que os meios preferivelmente compreendem um detector de foto (8) para a determinação da absorção da irradiação de luz na amostra de líquido de diálise e/ou compreendem meios para a obtenção de um espetro de Raman e/ou a intensidade da luz dispersa de Raman em pelo menos um comprimento de onda específico.

14. Aparelho de acordo com qualquer uma das reivindicações 11 a 13, caracterizado pelo fato de que os meios (16, 17) para o tratamento da amostra física e/ou quimicamente estão presentes, preferivelmente para o tratamento da amostra pelo aquecimento, pela adição e/ou remoção de reagentes e/ou pela adição e/ou remoção de um ácido, de uma base química e/ou de um sal e/ou; em que os meios (15) para a separação da amostra em frações diferentes são dados, preferivelmente ultrafiltração, eletroforese e/ou equipamento de cromatografia e/ou meios para a adição de um absorvedor e/ou um marcador fluorescente.

15. Aparelho, de acordo com qualquer uma das reivindicações 11 a 14, caracterizado pelo fato de que a unidade de controle e análise (11) está disposta para determinar a presença e/ou concentração de pelo menos dois diferentes analitos com base na luz detectada, em que preferivelmente a unidade de controle e análise (11) está disposta para analisar a luz detectada, após a excitação em um comprimento de onda de irradiação específica, quanto à presença de pelo menos N diferentes analitos pela análise da luz detectada f(À) que é assumida como sendo dada na forma de uma superposição linear dos espectros dos N analitos:

Ci sendo a concentração desconhecida do ienésimo analito e si (À) sendo a sensibilidade desconhecida do ienésimo analito como uma função do respectivo comprimento de onda de emissão À, em que a unidade de controle e análise (11) é preferivelmente disposta para solucionar esta equação para as concentrações desconhecidas ci pela determinação do espectro em M diferentes comprimentos de onda Àj, considerando a equação acima na forma do seguinte sistema de M equações com N desconhecidas:

e solucionando-as numericamente, preferivelmente considerando como a melhor solução para o sistema de equações acima aquela que provê, quando inserida na matriz acima, o espectro de superposição que tem o menor desvio quadrado do espectro medido atualmente.