BR112013022908B1

BR112013022908B1 - Método para utilização de resíduos da extração de extratos de levedura

Info

Publication number: BR112013022908B1
Application number: BR112013022908-0A
Authority: BR
Inventors: Toshiya Sato; Tomohiro Nakagawa; Naoto Kaji
Original assignee: Kohjin Life Sciences Co., Ltd
Priority date: 2011-05-02
Filing date: 2012-04-24
Publication date: 2021-06-01
Also published as: EP2705763B1; JP2012246287A; WO2012150683A1; EP2705763A1; EP2705763A4; BR112013022908A2; JP5967754B2; CA2834422C; TWI558722B; CA2834422A1; US20140228305A1; CN103338659A; TW201249859A

Abstract

método para utilização de resíduos da extração de extratos de levedura objeto produção de uma composição de glicosilceramida adequada para um alimento funcional ou medicamento que é estável e livre de contaminantes, tal como glicosídeos de esteróis. um objetivo é produzir uma composição de glicosilceramida a baixo custo a partir de uma matéria-prima segura, que foi consumida por seres humanos e que está prontamente disponível. meios para alcançar o objetivo uma composição contendo glicosilceramida é produzida por extração de uma matéria-prima de resíduo de levedura por um solvente orgânico, tal como um álcool, tal resíduo de levedura sendo obtido após a extração do extrato de levedura torula ou similar.

Description

CAMPO TÉCNICO

[0001] A presente invenção se refere a um método de produção de uma composição de glicosilceramida a partir de um material derivado de levedura, sendo a composição de glicosilceramida adequada para um alimento funcional, um produto cosmético, um medicamento e artigos similares. Além disso, a presente invenção se refere a uma composição de glicosilceramida produzida a partir de um resíduo de levedura do qual é extraído um extrato de levedura e a um alimento e similares contendo tal composição de glicosilceramida.

ESTADO DA TÉCNICA

[0002] A glicosilceramida é um tipo de glicoesfingolipídeo, no qual uma molécula de glicose se liga a uma estrutura principal de ceramida composta de uma base esfingóide e um ácido graxo, ligados por uma ligação amida. A glicosilceramida, que se encontra amplamente disseminada em animais, plantas e microrganismos, é eficaz na melhoria das funções da pele ou na prevenção do câncer do intestino grosso quando tomada como suplemento. Desta forma, recentemente a glicosilceramida vêm chamando a atenção como um material para alimentos saudáveis, produtos cosméticos e produtos medicinais (medicamentos).

[0003] A glicosilceramida originalmente era extraída do cérebro de bovino. No entanto, desde o surto de BSE (sigla em inglês da encefalopatia espongiforme bovina, vulgarmente conhecida como doença da vaca louca) têm sido utilizados materiais vegetais mais seguros. Atualmente, a glicosilceramida é extraída de vários materiais, incluindo farinha de konjac, farelo de arroz, farelo de trigo e germe de trigo e é vendida comercialmente como um extrato contendo ceramida. No entanto, as preocupações sobre o uso de tais materiais vegetais incluem a qualidade, que é suscetível às condições meteorológicas ou de armazenamento após a colheita, o potencial de instabilidade da oferta e flutuação do preço dependendo do rendimento das colheitas e um enorme custo de aquisição de material devido à minúscula quantidade de glicosilceramida contida nas matérias-primas que, por conta disso, são necessárias em grandes quantidades.

[0004] Neste contexto, têm sido estudados métodos para a produção de glicosilceramida usando levedura como matéria-prima, que é mais estável em termos de qualidade e oferta. Materiais potenciais estudados incluem leveduras de panificação e as leveduras de fermentação (Saccharomyces cerevisiae) que são produzidas industrialmente em grande quantidade e corpos celulares de leveduras do resíduo de cerveja. Estas Saccharomyces cerevisiae, no entanto, não podem produzir glicosilceramida. Portanto, foram realizados estudos sobre outras Saccharomyces, Zygosaccharomyces, leveduras Kluyveromyces, Pseudozyma, Candida e leveduras Pichia e foram propostos métodos de produção. Estas leveduras podem ser produzidas em larga escala em um mesmo local em um sistema fechado e, assim, o controle de qualidade e a aquisição de materiais são considerados como sendo fáceis, em comparação com materiais vegetais.

[0005] No entanto, embora tenha que ser introduzida uma grande quantidade de uma fonte de nutrientes para a cultura de leveduras, o teor de glicosilceramida ainda é baixo nos corpos celulares das leveduras, do mesmo modo que nas plantas. Assim, existem problemas, incluindo o alto custo de produção e a geração de uma grande quantidade de resíduos industriais. Além disso, as composições de glicosilceramida produzidas a partir de leveduras por um método convencional contêm uma grande quantidade de contaminantes, incluindo glicosídeos de esteróis, que são difíceis de remover. Além disso, extratos contendo glicosilceramida disponíveis comercialmente atualmente são utilizados, principalmente, em alimentos e, portanto, as leveduras utilizadas como matéria-prima devem poder ser consumidas por seres humanos e, portanto, devem ter sido consumidas por seres humanos e devem pertencer às espécies seguras para o consumo humano. Portanto, a produção de glicosilceramida a partir de leveduras é difícil e apresenta muitos problemas.

LISTA DE CITAÇÕES REFERÊNCIAS PATENTÁRIAS

[0006] Referência Patentária 1: Patente japonesa publicada para análise n° 2004-89047

[0007] Referência Patentária 2: Patente japonesa publicada para análise n° 2005-312372

[0008] Referência Patentária 3: Patente japonesa publicada para análise n° 2005-187392

[0009] Referência Patentária 4: Patente japonesa publicada para análise n° 2006-55070

[0010] Referência Patentária 5: Patente japonesa publicada para análise n° 2008-245607

[0011] Referência Patentária 6: Patente japonesa publicada para análise n° 2010-22217

[0012] Referência Patentária 7: Patente japonesa publicada para análise n° 2010-22218

[0013] Referência Patentária 8: Patente japonesa publicada para análise n° 2002-519070

[0014] Referência Patentária 9: Patente japonesa publicada para análise n° 2003-221592

RESUMO DA INVENÇÃO PROBLEMA TÉCNICO

[0015] Um objetivo da presente invenção é produzir uma composição de glicosilceramida de alta qualidade a partir de uma matéria-prima que tenha sido consumida por seres humanos e que seja estável em termos de qualidade, fornecimento e preço. Outro objetivo é produzir uma composição de glicosilceramida a baixo custo por um método que gere pouco resíduo industrial.

SOLUÇÃO PARA O PROBLEMA

[0016] Os inventores da presente invenção realizaram uma pesquisa para solucionar os problemas descritos acima, associados ao uso de materiais vegetais e de materiais de leveduras. Como resultado, os inventores descobriram que uma composição contendo glicosilceramida tem poucos contaminantes quando a composição contendo glicosilceramida é extraída de uma matéria-prima oriunda de um resíduo de levedura utilizando um solvente orgânico, tal resíduo de levedura sendo gerado em um processo de produção de extrato de levedura, após a extração do extrato, produzido atualmente em larga escala, para uso em alimentos. Assim, os inventores alcançaram a presente invenção.

[0017] A levedura usada como matéria-prima para o extrato de levedura é, de preferência, a levedura Torula (Candida utilis), visto que a mesma tem a sua segurança confirmada, uma vez que já foi consumida por seres humanos e visto que contém uma grande quantidade de glicosilceramida.

[0018] Especificamente, são incluídos: 1) Uma composição de glicosilceramida extraída de um resíduo de levedura após a extração do extrato de levedura; 2) A composição de glicosilceramida do item (1) acima, na qual a levedura é a levedura Torula; 3) Um alimento funcional incluindo glicosilceramida extraída de um resíduo de levedura após a extração do extrato de levedura; 4) Um medicamento incluindo glicosilceramida extraída de um resíduo de levedura após a extração do extrato de levedura; e 5) Um método de produção de uma composição de glicosilceramida usando um solvente orgânico para extrair a composição de glicosilceramida de um resíduo de levedura após a extração do extrato de levedura.

EFEITOS VANTAJOSOS DA INVENÇÃO

[0019] De acordo com a presente invenção, uma composição de glicosilceramida de alta qualidade contendo poucos contaminantes pode ser produzida a partir de um resíduo de levedura Torula ou semelhante, que tenha sido consumida por seres humanos e, portanto, que seja reconhecidamente segura. A composição de glicosilceramida é particularmente excelente por ter poucos contaminantes, tal como glicosídeos de esteróis, que existem em grande quantidade em materiais vegetais e que são difíceis de remover.

[0020] O extrato da levedura Torula é adequado como um agente aromatizante e é produzido em larga escala. Com a utilização eficaz do seu resíduo, o método da presente invenção também é muito vantajoso no que diz respeito ao custo e à redução dos rejeitos industriais. Ao contrário do caso da utilização de culturas agrícolas como matérias-primas, há pouco risco de instabilidade no fornecimento, flutuação de preços e variação da qualidade.

DESCRIÇÃO DE CONFIGURAÇÕES

[0021] A levedura utilizada na presente invenção pode ser uma levedura contendo glicosilceramida. É preferida, em particular, a levedura Cândida utilis que é chamada, em geral, de Torula. Um método para a cultura da levedura pode ser em lotes ou contínuo. Um meio de cultura pode ter a composição de um meio de cultura comum. Especificamente, exemplos de uma fonte de carbono podem incluir glicose, ácido acético, etanol, glicerol, melaço e licor de sulfito residual. Exemplos de fonte de nitrogênio podem incluir ureia, amônia, sulfato de amônio, cloreto de amônio e nitratos. Como fontes de ácido fosfórico, potássio e magnésio, podem ser utilizados materiais industriais normais, incluindo superfosfato de cálcio, fosfato de amônio, cloreto de potássio, hidróxido de potássio, sulfato de magnésio e cloreto de magnésio. Além disso, podem ser adicionados sais inorgânicos tal como zinco, cobre, manganês e podem ser adicionados íons ferro. Adicionalmente, podem ser adicionadas vitaminas, aminoácidos e substâncias relacionadas ao ácido nucleico; ou podem ser adicionados materiais orgânicos, tal como caseína, extrato de levedura, extrato de carne e peptona. A temperatura de cultura varia de 21° até 37° C, de preferência de 25° a 34° C; e o pH está entre 3,0 a 8,0, sendo 3,5 a 7,0 particularmente preferido. A produtividade de aminoácidos ou ácidos nucleicos é variável e depende das condições de cultura. Assim, as condições são definidas de modo a atender às especificações de produto de um extrato de levedura alvo.

[0022] O extrato é extraído após a cultura de um corpo celular. No presente pedido, a levedura a partir da qual foi extraído um extrato é referida como um resíduo de levedura. O método de extração não é particularmente limitado. Em geral, a extração pode ser realizada por um método de autólise, um método de extração com água quente, um método de extração enzimática, um método de extração ácido ou alcalino, ou uma combinação destes métodos.

[0023] Para a extração de um extrato de levedura por autólise, é realizada uma agitação durante quatro horas a uma temperatura de 55° C, por exemplo. No método de extração enzimática, a agitação e a extração são realizadas com uma enzima lítica da parede celular, uma protease, ou similar. No método de extração ácida, a extração é realizada após a acidificação com ácido sulfúrico ou produto similar. No método de extração alcalina, a extração é realizada após a alcalinização. Alternativamente, pode ser empregada uma combinação de autólise (agitação durante quatro horas a 55° C, por exemplo) e em seguida extração enzimática. A fração solúvel em água extraída e separada conforme acima é o extrato de levedura, que é convenientemente utilizado como um agente aromatizante. O que resta após a separação e remoção do extrato de levedura é um resíduo de levedura.

[0024] Através da extração do extrato de levedura conforme acima, proteínas e ácidos nucleicos dos corpos celulares são extraídos e removidos e são removidos alguns contaminantes solúveis em gordura, tal como glicosídeos de esteróis. Assim, é produzido um resíduo de levedura enriquecido com glicosilceramida. No presente pedido, a glicosilceramida é extraída de tal resíduo de levedura e em seguida uma composição de glicosilceramida da qual foram removidos os contaminantes, como por exemplo, glicosídeos de esteróis, é produzida sem tratamento especial. No presente pedido, são realizadas nos contaminantes e na glicosilceramida a análise qualitativa por TLC (do inglês Thin Layer Cromatography - Cromatografia em Camada Delgada) e a análise quantitativa por HPLC-ELSD (do inglês, High Performace Liquid Cromatography - Evaporative Light Scatering Detection; Cromatografia Líquida de Alta Eficiência - Detecção por Espalhamento de Luz Evaporativo).

[0025] Após a extração do extrato, o resíduo de levedura é separado por centrifugação. Em seguida, o resíduo é lavado por suspensão em água destilada e separado por centrifugação repetidas vezes. O resíduo limpo pode ser liofilizado ou seco com ar quente, quando necessário. O resíduo de levedura produzido é uma matéria-prima de glicosilceramida derivada da levedura Torula.

[0026] Em seguida, a glicosilceramida é extraída da matéria-prima acima. O método de extração não é limitado, mas é preferido um método de extração para a utilização em alimentos. Especificamente, um método divulgado na Patente Japonesa publicada para análise n° 2002-281936 pode ser utilizado para o refino. Por exemplo, um solvente orgânico é usado na extração de um resíduo de levedura como matéria-prima. Considerando a utilização em alimentos, de preferência o solvente orgânico é etanol, acetona ou hexano, sendo etanol particularmente preferido. Além disso, pode ser adicionada água ou um agente tensoativo ao solvente orgânico para melhorar a eficiência da extração. A quantidade do solvente para extração é, de preferência, de 1 a 30 vezes a quantidade de matéria-prima. Mais especificamente, é utilizado etanol 90% a 100% em uma quantidade igual a duas vezes a quantidade do resíduo de levedura derivado da levedura Torula e a agitação é realizada durante 1 a 24 horas para extrair a glicosilceramida. Após a extração, o líquido de extração é separado por centrifugação e, em seguida, é concentrado e liofilizado ou seco com ar quente para produzir uma composição de glicosilceramida.

[0027] A composição de glicosilceramida pode ser ainda mais refinada, quando necessário, para produzir uma composição tendo um elevado teor de glicosilceramida ou para produzir glicosilceramida. Pode ser utilizado um método de refino conhecido, incluindo extração em coluna com gel de sílica ou resina de troca iônica, por exemplo.

[0028] A composição de glicosilceramida e os seus materiais refinados, que são a composição com um teor elevado de glicosilceramida e a glicosilceramida, de acordo com a presente invenção são extraídas de uma levedura altamente segura e, portanto, podem ser utilizadas como um alimento saudável, um alimento funcional tal como um suplemento alimentício, um produto cosmético ou um medicamento.

[0029] A presente invenção é descrita em detalhe nas configurações abaixo. No entanto, a presente invenção não está limitada a estas configurações.

[0030] Condições da TLC

[0031] Como pré-tratamento, 20 mg de uma amostra de uma composição de glicosilceramida foram dissolvidos em 2 ml de KOH EtOH 0,4 N e em seguida forma incubados durante duas horas a uma temperatura de 37° C. Após a incubação, foram adicionados 2 ml de HCl EtOH 0,4 N para neutralização e em seguida, após separação por centrifugação, foram fornecidos 4 μl do sobrenadante para TLC. A TLC foi realizada em uma placa de gel de sílica (Merck Sílica Gel 60; espessura de camada de 0,25 mm) e eluída com clorofórmio/etanol/água na proporção de 65:16:2. Após a eluição, a placa de gel de sílica foi seca e em seguida pulverizada com uma solução de teste de ácido sulfúrico e anisaldeído e aquecida para o desenvolvimento da cor.

[0032] Condições da HPLC-ELSD

[0033] Como pré-tratamento, 20 mg de uma amostra de composição de glicosilceramida foram dissolvidos em 2 ml de KOH EtOH 0,4 N, e em seguida foram incubados durante duas horas a uma temperatura de 37° C. Após a incubação foram adicionados 2 ml de HCl EtOH 0,4 N para neutralização e, em seguida, os sais foram removidos por filtração, para adequar para à HPLC. Foi utilizada uma coluna Inertsil 100A da GL Science. A glicosilceramida foi detectada com um detector por espalhamento de luz evaporativo (Shimadzu ELSD-LTII). Foram utilizados clorofórmio e um gradiente de metanol/água em uma proporção de 95:5 como eluente. A temperatura da coluna era de 35° C. A vazão foi de 1 ml/min. A temperatura de tubo era de 40° C e a pressão do nitrogênio gás era de 350 kPa.

[0034] Cultura de levedura

[0035] A cepa CS 7529 da levedura Candida utilis (FERM BP-1656) foi semeada-cultivada previamente em um meio de cultura YPD (1% de extrato de levedura, 2% de polipeptona, 2% de glicose) em um frasco cônico e, em seguida, 1% a 2% desta cultura foi inoculada em 18 L de meio de cultura em um tanque de fermentação de 30 L. A composição do meio de cultura era 4% de glicose, 0,3% de di-hidrogênio-tetraoxofosfato de amônio, 0,161% de sulfato de amônio, 0,137% de cloreto de potássio, 0,08% de sulfato de magnésio, 1,6 ppm de sulfato de cobre, 14 ppm de sulfato de ferro, 16 ppm de sulfato de manganês e 14 ppm sulfato de zinco. As condições de cultura foram as seguintes: pH = 4,0, temperatura da cultura de 30° C, taxa de aeração de 1 vvm e velocidade de agitação de 600 rpm. Foi adicionada amônia para controlar o pH. Após o corpo celular ter sido cultivado durante 16 horas, a solução de cultura foi recolhida e, em seguida, o corpo celular foi separado por centrifugação para produzir 180 g de corpo celular de levedura úmido.

[0036] Extração do Extrato de Levedura

[0037] O corpo celular da levedura úmido obtido após a cultura foi lavado repetidamente pela suspensão em água destilada e separação por centrifugação. Após a lavagem, o corpo celular úmido foi novamente suspenso em água destilada no estado, ou foi liofilizado ou seco com ar quente para produzir um corpo celular seco. Depois disso, o corpo celular foi suspenso em água destilada e então extraído nas condições abaixo.

[0038] Autólise: o pH foi controlado a 5,0 com HCl 1 N e, em seguida, a solução foi agitada durante quatro horas a uma temperatura de 55° C.

[0039] Extração enzimática: o pH foi controlado a 7 com NaOH 1 N e, em seguida, a extração foi realizada com agitação e com uma enzima lítica da parede celular (Amano Enzyme Tunicase) ou com uma protease durante quatro horas a uma temperatura de 55° C.

[0040] Extração ácida: o pH foi controlado a 2 ou menos com ácido sulfúrico 1 N e, em seguida, foi realizada a extração com agitação durante dois minutos a uma temperatura de 65° C.

[0041] Extração alcalina: o pH foi controlado a 13 com NaOH 2 N e, em seguida, a extração foi realizada com agitação durante 20 minutos a uma temperatura de 70° C.

[0042] Configuração 1 (Autólise)

[0043] Sessenta gramas de corpo celular seco de levedura Torula, que foram limpos e secos após a cultura dos corpos celulares conforme o método acima, foram suspensos em 1 L de água destilada e o pH controlado em 5,0 com HCl 1 N. O extrato foi extraído por agitação durante quatro horas a uma temperatura de 55° C. O resíduo de levedura foi separado por centrifugação e, em seguida, foi lavado três vezes via suspensão em água destilada e separação por centrifugação. Em seguida, o resíduo de levedura limpo foi seco a vácuo para produzir 10,9 g de um resíduo de levedura seco, que foi fornecido como matéria-prima de glicosilceramida derivada de levedura Torula. A totalidade do resíduo de levedura seco produzido foi suspensa em uma quantidade de etanol 90% igual a duas vezes a quantidade do resíduo e, em seguida, foi agitada durante 12 horas a uma temperatura de 60° C para a extração da glicosilceramida. O líquido de extração foi separado por centrifugação e foi, em seguida, misturado com o etanol usado em três lavagens do resíduo, sendo então condensado. Assim, foram produzidos 0,6 g de um material de extração como composição de glicosilceramida. Com base na análise por HPLC-ELSD, a composição de glicosilceramida continha 2,0% de glicosilceramida. Além disso, na análise por TLC foi identificada apenas uma mancha de glicosilceramida próxima a um valor de Rf de 0,42 e não foram observados glicosídeos de esteróis, que são contaminantes. Os resultados das análises mostraram que o teor de glicosilceramida na matéria-prima de glicosilceramida derivada de levedura Torula era de 0,11%.

[0044] Configuração 2 (Extração Enzimática)

[0045] Sessenta gramas de corpo celular seco de levedura Torula, que foram limpos e secos em ar quente após a cultura dos corpos celulares, foi suspenso em 1 L de água destilada e teve o pH controlado em 7,0 com NaOH 1 N. Em seguida, o extrato de levedura foi extraído com protease durante quatro horas a uma temperatura de 55° C. Após a extração, o resíduo de levedura foi separado por centrifugação e, em seguida, foi lavado três vezes via suspensão em água destilada e separação por centrifugação. O resíduo de levedura limpo foi então seco a vácuo para produzir 12,8 g de um resíduo de levedura seco, que foi fornecido como matéria-prima de glicosilceramida derivada de levedura Torula. A totalidade do resíduo de levedura seco produzido foi suspensa em uma quantidade de etanol 90% igual a duas vezes a quantidade do resíduo e, em seguida, foi agitada durante 12 horas a uma temperatura de 60° C para a extração da glicosilceramida. O líquido de extração foi separado por centrifugação e foi, em seguida, misturado com o etanol usado em três lavagens do resíduo, sendo então condensado. Assim, foram produzidos 0,8 g de um material de extração como uma composição de glicosilceramida. Com base na análise por HPLC-ELSD, a composição de glicosilceramida continha 1,6% de glicosilceramida. Além disso, pela análise por TLC, foi identificada apenas uma mancha de glicosilceramida próxima a um valor de Rf de 0,42 e não foram observados glicosídeos de esteróis, que são contaminantes. Os resultados das análises mostraram que o teor de glicosilceramida na matéria- prima de glicosilceramida derivada de levedura Torula era de 0,10%.

[0046] Configuração 3 (Extração Ácida)

[0047] Sessenta gramas de um corpo celular seco de levedura Torula, que foram limpos e secos em ar quente após a cultura dos corpos celulares, foi suspenso em 1 L de água destilada e teve o pH controlado em 2,0 com ácido sulfúrico 2 N. Em seguida, o extrato de levedura foi extraído durante dois minutos a uma temperatura de 65° C. Após a extração, o resíduo de levedura foi separado por centrifugação e, em seguida, foi lavado três vezes via suspensão em água destilada e separação por centrifugação. O resíduo de levedura limpo foi então seco a vácuo para produzir 11,3 g de um resíduo de levedura seco, que foi fornecido como matéria-prima de glicosilceramida derivada de levedura Torula. A totalidade do resíduo de levedura seco produzido foi suspensa em uma quantidade de etanol 90% igual a duas vezes a quantidade do resíduo e, em seguida, foi agitada durante 12 horas a uma temperatura de 60° C para a extração da glicosilceramida. O líquido de extração foi separado por centrifugação e foi, em seguida, misturado com o etanol usado em três lavagens do resíduo, sendo então condensado. Assim, foram produzidos 0,6 g de um material de extração como uma composição contendo glicosilceramida. Com base na análise por HPLC-ELSD, a composição de glicosilceramida continha 1,9% de glicosilceramida. Além disso, pela análise por TLC, foi identificada apenas uma mancha de glicosilceramida próxima a um valor de Rf de 0,42 e não foram observados glicosídeos de esteróis, que são contaminantes. Os resultados das análises mostraram que o teor de glicosilceramida na matéria-prima era de 0,10%.

[0048] Configuração 4 (Extração Alcalina)

[0049] Sessenta gramas de um corpo celular seco de levedura Torula, que foram limpos e secos em ar quente após a cultura dos corpos celulares, foi suspenso em 1 L de água destilada e teve o pH controlado em 13,0 com NaOH 2 N. Em seguida, o extrato de levedura foi extraído durante 30 minutos a uma temperatura de 70° C. Após a extração, o resíduo de levedura foi separado por centrifugação e, em seguida, foi lavado três vezes via suspensão em água destilada e separação por centrifugação. O resíduo de levedura limpo foi então seco a vácuo para produzir 12,3 g de um resíduo de levedura seco, que foi fornecido como matéria-prima de glicosilceramida derivada de levedura Torula. A totalidade do resíduo de levedura seco produzido foi suspensa em uma quantidade de etanol 90% igual a duas vezes a quantidade do resíduo e, em seguida, foi agitada durante 12 horas a uma temperatura de 60° C para a extração da glicosilceramida. O líquido de extração foi separado por centrifugação e foi, em seguida, misturado com o etanol usado em três lavagens do resíduo, sendo então condensado. Assim, foram produzidos 0,7 g de um material de extração como uma composição contendo glicosilceramida. Com base na análise por HPLC-ELSD, a composição contendo glicosilceramida continha 2,1% de glicosilceramida. Além disso, pela análise por TLC, foi identificada apenas uma mancha de glicosilceramida próxima a um valor de Rf de 0,42 e não foram observados glicosídeos de esteróis, que são contaminantes. Os resultados das análises mostraram que o teor de glicosilceramida na matéria-prima era de 0,12%.

[0050] Exemplo Comparativo 1

[0051] Vinte gramas de um corpo celular seco de levedura Torula, que foram limpos e secos em ar quente após a cultura dos corpos celulares, foram suspensos em uma quantidade de etanol 90% igual a duas vezes a quantidade dos corpos celulares e, em seguida, a solução foi agitada durante 10 horas a uma temperatura de 60° C para a extração da glicosilceramida. O líquido de extração foi separado por centrifugação e foi, em seguida, misturado com o etanol utilizado em três etapas de lavagem do conteúdo sólido, sendo então condensado. Assim, foram produzidos 0,9 g de um material de extração como uma composição contendo glicosilceramida. Com base na análise por HPLC-ELSD, a composição contendo glicosilceramida continha 1,4% de glicosilceramida. Além disso, pela análise por TLC, foi identificada uma mancha de glicosilceramida próxima a um valor de Rf de 0,42. Adicionalmente, foram observados glicosídeos de esteróis, que são contaminantes, próximos a um valor de Rf de 0,48 e também foram identificadas uma mancha de lipídeos e outras. Os resultados das análises demonstraram que o teor de glicosilceramida na matéria- prima constituída por corpos celulares de levedura Torula era de 0,06%.

[0052] Aplicabilidade Industrial

[0053] A composição de glicosilceramida contendo poucos contaminantes de acordo com a presente invenção é adequada como material para um alimento funcional ou um produto cosmético, no estado ou após refino adicional. Além disso, desde que sejam reconhecidos benefícios medicinais no futuro, a composição de glicosilceramida também é adequada como matéria-prima para um medicamento.

Claims

1. Método de produção de uma composição de glicosilceramida, caracterizado pelo fato de que compreende o uso de um solvente orgânico para extração da composição de glicosilceramida de um resíduo de levedura após a extração de extrato de levedura, em que a levedura é CANDIDA UTILIS.