BR112013018602A2 - composto, uso de um composto, composição farmacêutica, e, produto farmacêutico - Google Patents

Abstract

  COMPOSTO, USO DE UM COMPOSTO, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, E, PRODUTO FARMACÊUTICO A presente invenção diz respeito a um derivado de aminodiidrotiazina fundida da fórmula (I): em que X é hidrogênio ou flúor; A é CH ou N; Y é metila, etila, monofluorometila, trifluorometila, difluoroetila, metóxi, etóxi, metoximetila ou -C<154>N e seus sais farmaceuticamente aceitáveis; cujo composto tem um efeito inibidor da produção de Aß ou um inibidor de BACE1 e é útil como um agente profilático ou terapêutico contra uma doença neurodegenerativa causada por Aß e tipificada pela demência do tipo Alzheimer.

Description

DECLARAÇÃO Referente AO Documento DE Prioridade A Requerente declara, para os fins do artigo 16, § 2° da Lei 9.279 de 14/05/96 e, de acordo com o item 3.1 da lnstrução Normativa 17/2013 ou, se aplicável, de acordo com o artigo 25 da Resolução 77/2013, ou, ainda, com o artigo 8 da Instrução Normativa 13/2013, que os dados identificadores do documento prioritário são os seguintes: Requerente EISAI LIMITED, European Knowledge Centre, Mosquito Way, Hatfield, Herts AL 9SN, Reino Unido.

Data do Depósito 21 de janeiro de 2011.

País do Depósito REINO UNIDO.

Número do Pedido 1101l40.0 Títuto DERIVADOS DE AMINODIIDROTIAZINA FUNDIDA.

Outrossim, a Requerente declara que as informações acima são verdadeiras.

Rio de Janeiro, T[iqAAns)m p/p Kasznar Leonardos Propriedade lntelectual P119190 HGPassos Tatiana Almeida Silvelra Agente da Pmpriedade Mustriai MaWcda n° 1677103

"COMPOSTO, USO DE UM COMPOSTO, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, E, PRODUTO FARMACÊUTICO"

A presente invenção diz respeito a um derivado de aminodi- idrotiazina fúndida e seu uso farrnacêutico.

Mais particularmente, a presente

5 invenção diz respeito a um derivado de aminodi-idrotiazina fündida tendo um efeito inibidor da produção de proteína de amiloide-[3' (referido a seguir como Aj3) ou um efeito inibidor de enzima de cjivagem de proteína precursora de amiloide-B de local beta 1 (referido a seguir como BACEI ou beta-secretase) e é eficaz para o tratamento de uma doença neurodegenerativa causada pela proteína Aj3, em particular, demência do tipo Alzheimer, síndrome de Down ou semelhante e a uma composição farmacêutica que compreende o derivado de aminodi-idrotiazina fúndida como um ingrediente ativo.

A doença de Akheimer é uma doença caracterizada pela degeneração e perda de neurônios bem como a formação de placas senis e emaranhados neurofibrilares.

Correntemente, apenas os sintomas da doença de Ahheimer são tratados usando-se um agente melhorador de sintoma tipificado por um inibidor de acetilcolinesterase e um remédio nlndamenta} para inibir a progressão da doença ainda não foi desenvolvido.

É necessário desenvolver um método para o controle da causa do início da patologia a íim de criar um remédio fündamental contra a doença de Alzheimer.

É assumido que as Af3-proteínas como produtos de quebra de proteínas precursoras de amiloide (referido a seguir como APP) estão altamente envojvidas na degeneração e perda de neurônios e início de sintomas de demência.

As Af3-proteínas têm, como componentes principais, Af340 consistindo de 40 aminoácidos e Af342 com dois aminoácidos adicionados no terminal C.

O A{340 e AB42 são conhecidos serem altamente propensos à agregação e são os componentes principais de placas senis.

Além disso, é conhecido que o Aj340 e o AÍJsão aumentados por mutações em APP e genes de presenilina que é observado na doença de Alzheimer familiar.

consequentemente, um composto que reduz a produção de AB40 e A)342 é esperado ser um inibidor de progressão de doença ou agente profilático contra a doença de Alzheimer. : A|3 é produzido pela cIivagem de APP pela beta-secretase ' 5 (BACEI) e subsequentemente pela gama-secretase. Por esta razão, tentativas foram feitas para criar inibidores de gama-secretase e beta-secretase a fim de inibir a produção de Af3. O pedido de patente intemacional publicado WO2011/005738 (Eli Lilly and Company) descreve compostos da fórmula (A) e seu uso como lO inibidores de BACE: "O'" 'xSí"' '^' (R3)p onde R', Rj R3, X, m, n e p são definidos neste.

Compostos de aminodi-idrotiazina fimdida da fórmula (B) já foram divulgados no pedido de patente Intemacional publicado WO2009/09l016 (Eisai R&D Management Co., Ltd.): l A )—L-( B ) :)jj)R' (B) R4 'R3 15 em que o anel A representa um grupo arila C6-14 ou semelhante; L representa NR'CO- [em que R' representa um átomo de hidrogênio ou semelhante] ou semelhante; o anel B representa um grupo arila C6-l4 ou semelhante; X representa um grupo alquileno Cl-3 ou semelhante; Y representa uma ligação simples ou semejhante; Z representa um gmpo alquileno Cl-3 ou semelhante; RJ e R2 representa independentemente um átomo de hidrogênio ou semelbante; e R3, R4, R5 e R6 representa independentemente um átomo de hidrogênio, um átomo halógeno ou semelhante.

5 Os compostos de aminodi-idrazida fúndida adicionais da fómula (C) foram divulgados no pedido de patente Intemacional publicado WO20l0/038686 (Eisai R&D Management Co., Ltd.): ( A )—L—j b ) R5 R6l R1 ,)'U-,2 (C) Y),À R4 'R3 em que o anel A representa um grupo arila C6J4 ou semelhante; L representa —NR'CO- [em que R" representa um átomo de hidrogênio ou semelhante] ou semelhante; o anel B representa um grupo arila C6-14 ou semelhante; X representa um grupo alquileno Cl-3 ou semelhante; Y representa uma ligação simples ou semelbante; Z representa um átomo de oxigênio ou semelhante; Rl e R2 cada um representa independentemente a um átomo de hidrogênio ou semelhante; e R3, RJ, R5 e R6 cada um representa independentemente um átomo de hidrogênio, um átomo halógeno ou semelhante.

A presente invenção representa uma seleção do gênero de compostos divulgados no WO2009/09l016.

Um objetivo da presente invenção é fomecer compostos adicionais tendo um efeito inibidor de produção de Afil ou um efeito inibidor de BACEI e são úteis como agente pronlático ou terapêuticos contra uma doença neurodegenerativa causada por Af3 e tipificada pela demência do tipo Ahheimer, cujos compostos são derivados de aminodi-idrotiazina fimdida.

Desta maneira, a presente invenção fomece o composto da

) fórmula (1)· 4 . XNH oQjÍ' )!):"' "' ~ F,Ê ' em que X é hidrogênio ou fiúor; AéCHouN; 5 Y é metila, etila, &&monofluorometila, difluorometila, trifluorometila, difluoroetila, metóxi, etóxi, metoximetila ou -C"N; e seus sais farmaceuticamente aceitáveis.

Em uma forma de realização da presente invenção, X é hidrogênio.

10 Em uma outra forma de realização da presente invenção, A é N.

Em uma outra forma de realização da presente invenção, Y é metila, monofluorometila, diRuorometila, trifluorometila ou metóxi.

Um grupo favorecido de compostos da presente invenção é o 15 composto da fÓrmula (Ia) e seus sais farmaceuticamente aceitáveis: OyjÍ' ',,l))'NH2"" F,È ' onde Y C como anteriormente definido. Preferivelmente, Y é metila, monofluorometila, difhiorometila, trifluorometila, difluoroetila, metóxi, etóxi ou metoximetila. Em uma forma de realização, a presente invenção fomece um

Z composto da fómula (Ia) em que Y é metoxi ou monofluorometila.

' 5 Um outro grupo favorecido de compostos da presente invenção é o composto da fórmula (lb) e seus sais farmaceuticamente aceitáveis: ojÍ' :,l)'NH,"" F,Ê i: onde Y é como anteriormente definido. Preferivelmente, Y é metila, monofluorometila, difluorometila ou metóxi.

lO Um outro grupo favorecido de compostos da presente invenção e o composto da fórmula (Ic) e seus sais farmaceuticamente aceitáveis: o ~Á ,| ' 1'NH2 "" ,,È À onde Y é como anteriormente definido. Preferivelmente, Y é metila, etila, trifluorometila, metóxi ou -C*N. 15 Os compostos preferidos da presente invenção são: N-(3-((4aS,5S,7aS)-2-mino-5-(tnnuorometil)-4a,5,7,7a- tetraidro-4HAlro[3,4-d][1,3]tiazin-7a-il)-4-nuorofenil)-5-metoxipirazino-2-

carboxamida:

o,u°" )N)'NH, FÂ ' ÈF ?

N-(3-((4aS,5S,7aS)-2-amino-5-(Oduorometil)-4a,5,7,7a- tetraidro-4H-mro[3,4-d][l,3]tiazin-7a-i])-4-nuorofenil)-5-cianopicolMamida:

jt7""' Ílj)'NH2 jF' :

N{3-((4aS,5S,7aS)-2-amino-5-(trifluorometil)-4a,5,7,7a- tetraidro-4H-hro[3,4-d][1,3]ti=in-7a-il)-4-nuorofenil)-5- (difluorometil)pirazino-2-carboxamida: f jIíj ' :l)H2 'Qf' N-(3-((4aS,5S,7aS)-2-amino-5-(trifluorometil)-4a,5,7,7a- tetrai&o-4H-hro[3,4-d][l,3]tiazin-7a-il)-4-nuorofem])-5- (trifluorometil)picolinamida:

Ç'

F O ~ N^| J<; .

Ú)"" FÁ ' È' . > N{3-((4aS,5S,7aS)-2-amino-5-(trifluorometil)-4a,5,7,7a- tetraidro-4H-hro[3,4-d][1,3]tiuin-7a-il)-4-nuorofeni!)-5-meti]pirazino-2- carboxamida: o)U ',l)'NH2 '/'F' ? N-(3-((4aS,5 S,7aS)-2-amino-5-(triMorometil)-4a,5,7,7a- teÜaidro-4H-Nro[3,4-d][l,3]tiazin-7a-il)-4-nuorofenil)-5-metilpicolinamida: o>7 F !>j)HNH, O' ,S FÂ ' ÈF . > N{3-((4aS,5S,7aS)-2-amino-5-(trifluorometii)-4a,5,7,7a- tetraidro-4HA]ro[3,4-d]ijl,3]tiazin-7a-il)-4-fluorofenil)-5-eti1picolinamida: ojj ',JJNH, 'ÇF'

N-(3-((4aS,5 S,7aS)-2-amino-5-(trifluorometil)-4a,5,7,7a- teWaidro-4H-hrol3,4-d][l,3]tiazin-7a-il)-4-nuorofeni])-5- (nuorometil)pirazino-2-carboxamida: Og)'

jjNH, FÂ ' ÈF .? N-(3-((4aS,5 S,7aS)-2-amino-5-(tMuorometil)-4a,5,7,7a- teUaidro-4H-hro[3,4-d][l,3]tiam-7a-iI)-4-nuorofenil)-5- metoxipicolinamida:

oj"°"

)N)'NH, FÃ ' éF . :

N-(3-((4aS,5 S,7aS)-2-aÍnino-5-(trinuorometi])-4a,5,7,7a- tetraidro-4HAüro[3,4-d][l ,3]tiazinja-il)-4Auorofenil)-5-etoxipirazino-2- carboxamida: oyjC{om

F CN)HNH2

O' rS

FÃ ' ÈF .? - N-(3-((4aS,5 S,7aS)-2-amino-5-(trifluorometil)-4a,5,7,7a- tetraidro-4H-hro[3,4-d][l,3]tiazin-7a-il)-4-nuorofenil)-5-(l,1- difluoroetil)pirazino-2-carboxamida:

F\ ,F ojj f i>:N)HNH, O' S '¢F' .

? N{3-((4aS,5S,7aS)-2-amino-5-(trifluorometil)-4a,5,7,7a- teUaidro-4H-Wro[3,4-d][1,3]tiazin-7a-il)-4-nuorofeni])-5- (triAuorometil)pirazino-2-carboxamida: F\ ,F o)ü^'

F C NH °jj"' 'ÇF' > N-(3-((4aS,5S,7aS)-2-=ino-5-(tnnuorometil)-4a,5,7,7a- tetraidro-4H-hro[3,4-d][1,3]tiazin-7a-i|)-4-nuorofeml)-5- (metoximetil)pirazino-2-carboxamida: °)ü^°" F CN)HNH, O' ,S 'ÇF' ? N-{3-[(4aS,5S,7aS)-2-amino-5-(tnnuorometil)-4a,5-di-i&o- 4H-fiiro[3,4 d1[1,3]tiazin-7a(7H)-yl]-4-nuorofenil}-5-[(2H3)metilóxi]pirazino- 2-carboxamida:

lO o,u2iH' :J))'nh2 'Gf' ? N-(3-((4aS,5S,7aS)-2-amino-5-(tnnuorometil)-4a,5,7,7a- tehaidro-4H-Nro{3,4-d][l ,3]tiazin-7a-i!)-4,5-difluorofenil)-5- (dif1uorometil)pirazino-2-carboxamida:

F OyXj' ' ))',,, FÀ ' Èf .7 N-(3-((4aS,5S,7aS)-2-amino-5-(trièuorometil)-4a,5,7,7a- tetraidro-4HAi]ro[3,4-d][l3]tiazin-7a-il)-4,5-difluorofenil)-5-metoxipirazino- 2-carboxamida: o%u°"" :,I)),, FÀ '

ÈF 7 N-(3-((4aS,5 S,7aS)-2-amino-5-(triAuorometil)-4a,5,7,7a- teUaidro-4H-Hro[3,4-d][l,3]tiazin-7a-il)-4,5-dinuorofenil)-5-metilpirazMo-2- carboxamida:

ç3t"' ))NH, "t f-{ ' ff .? N{3-((4aS,5S,7aS)-2-amino-5-(trifluorometil)-4a,5,7,7a- tetraidro-4H-hro[3,4-d][l,3]tiazin-7a-il)-4,5-dinuorofenil)-5-(nuorometil)- pirazino-2-carboxamida: F) 7 e seus sais farmaceuticamente aceitáveis.

5 Em uma forma de realização, a presente invenção fomece um composto que é N-(3-((4aS,5S,7aS)-2-amino-5-(trifluorometil)-4a,5,7,7a- tetraidro-4H-füro[3,4-d][l ,3]tiazin-7a-i|)-4-nuorofenil)-5-metoxipirazino-2- carboxamida ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.

Em uma outra forma de realização, a presente invenção 10 fomec.e um composto que é N-(3-((4aS,5S,7aS)-2-amino-5-(trifluorometil)- 4a,5,7,7a-tetraidro-4HAüro[3,4-d] [1,3]tiazin-7a-il)-4-fluorofenil)-5- (fluorometil)pirazino-2-carboxamida, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste. Os compostos específicos dentro do escopo desta invenção i5 incluem aqueles denominados nos Exemplos abaixo e seus sais farmac.euticamente aceitáveis.

Como usado aqui, o termo "difluoroetila" refere-se áum grupo alquila tendo dois átomos de carbono e substituído por dois átomos de flúor. Os exempplos do grupo são CH,-CF,-, CH,F-CHF- e CHF,-CH,-. Na presente invenção, o grupo é preferivehnente CH3-CF2-.

O composto da fómula (I) não é limitado a um isômero específico e inclui todos os isômeros possíveis (tal como um isômero ceto- enol, um isômero de imina-enamina e um rotâmero) e misturas destes. Por 5 exemplo, o composto da fórmula (I) inclui os seguintes tautômeros: ojjÍ" oj;í' xnh x ), \ Nh ))j"' " ))Í:" O compostos da presente invenção contém três centros quirais licalizados no anel de tetraidrofúro-tiazinila dentro da fórmula (J). A configuração estereoquímica em cada um destes centros quirais é preferivelmente S, isto é, estes são estereoisômeros (4aS,5S,7aS). Para evitar dúvidas os estereoisômeros (4aS,5S,7aS) da presente invenção podem estar presentes como uma mistura com um ou mais dos outros estereoisômeros possíveis, por exemplo, em uma mistura racêmica. Em uma forma de realização, a presente invenção fomece um composto da fórrnula (I) que é estereoquimicamente puros nos centros quirais ' (4aS,5S,7aS). No contexto da presente especificação, o termo estereoquimicamente puros indica um composto tendo 80 °/) ou maior pelo peso do estereoisômero (4aS,5S,7aS) e 20°4 ou menos em peso dos outros estereoisômeros. Em uma forma de realização adicional, o composto da fórmula (J) tem 90 "/, ou maior em peso do estereoisômero (4aS,5S,7aS) e 10 °/) ou menos em peso dos outros estereoisômeros. Ainda em uma outra forma de realização adicionaj, o composto da fórmula (I) tem 95 °/, ou maior em peso do estereoisômero (4aS,5S,7aS) e 5 °/) ou menos em peso dos outros estereoisômeros. Ainda, em uma forma de realização adicional, o composto da fórmula (I) tem 97 °/) ou maior em peso do estereoisômero (4aS,5S,7aS) e . 3°/0 ou menos em peso dos outros estereoisômeros. No presente relatório descritivo, embora os polimorfos cristalinos do composto pode estar presente, o composto é simialrmente não " 5 Jimitado a este e podem estar presentes como uma forma de cristaj simples ou uma mistura de formas cristalinas simples. O composto pode ser um anidrido ou um hidrato. Qualquer uma destas formas está incluída nas reivihdicações do presente relatório descritivo. A presente invenção também inclui os compostos 10 isotopicamente rotulados, que são idênticos aos compostos da fórmuja (I)> exceto um ou mais átomos são substituídos por um átomo tendo uma massa atômica ou número de massa diferente da massa atômica ou número de massa observado em estado natural. Os exemplos de isótopos que pode.m ser incoiporados em compostos da invenção incluem isótopos de hidrogênio, 15 carbono, nitrogênio, oxigênio, flúor, fósforo, cloro, tecnécio e iodo, tal como 2H, 3H, llç, l4ç, !3N, 15O, l8F, 32p, 99mTC, l23j e 13lj.

Os compostos da da presente invenção e os derivados farmaceuticamente aceitáveis (por exemplo, sais) dos ditos compostos que contêm os isótopos já mencionados e/ou outros isótopos de outros átomos 20 estão dentro do escopo da presente invenção. Os compostos isotopicamente rotulados da presente invenção, por exemplo, aqueles em que os isótopos radioativos, tais como 3H e/ou l4C são incorjporados, são puteis em medicamento e/ou ensaios de distribuição de tecido de substrato. 3H e l4C são considerados úteis devido à sua facilidade de preparação e detectabilidade. Os 25 isótopos 'lç, l'O e l8F são considerados úteis em PET (tomografia de emissão de pósitron) e os isótopos 99"TC, 123I e l3j são considerados úteis em SPECT - - (tomografia computadorizada de. emissão de fóton simples), todos úteis na formação de imagem cerebral. A substituição com os isótopos mais pesados tais como 2H podem produzir certas vantagens terapêuticas que resultam de estabilidade metabólica maior, por exemplo, vida média in vivo aumentada ou requerimentos de dosagem reduzidas e, consequentemente, são considerados úteis em algumas circunstâncias. Os compostos isotopicamente rotulados da fórmula (I) desta invenção podem ser, em gera!, preparados pela realização .

" 5 dos procedimentos divulgados nos Esquemas e/ou nos Exemplos abaixo, pela substituição de um reagente isotopicamente rotulado facilmente disponível para um reagente não isotopicamente rotulado. O derivado de aminodi-idrotiazina íúndida da fórmuja (I) de acordo com a presente invenção pode ser um sal farmaceuticamente aceitáve!. 10 Os sais farmaceuticamente aceitáveis incluem aqueles descritos por Berge, Bighley and Monkhouse, J. Pharm. Sci., 1977, 766, 1-19. Os exemplos específicos dos sais farmaceuticamente aceitáveis incluem sais de ácidos orgânicos (tais como sulfatos, nitratos, percloratos, fosfatos, carbonatos, bicarbonatos, fluoridretos, cloridretos, bromidretos e iodidretos), carboxilatos 15 orgânicos (tais como acetatos, oxalatos, maleatos, tartaratos, fümaratos, citratos, malonatos e lac.tatos), sulfonatos orgânicos (tais como metanossulfonatos, trifluorometanossulfonatos, etanossulfonatos, benzenossulfonatos, toluenossulfonatos e canforsulfonatos), sais de aminoácido (tais c.omo aspartatos e glutamatos), sais de amina quatemária, 20 sais de metal alcalino (tais como sais de sódioe sais de potássio) e sais de metal alcalino terroso (tais como sais de magnésio e sais de cálcio). O composto da fórmula (I) de acordo com a presente invenção pode ser convertido a um sal farmaceuticamente aceitável por um método convencional "quando necessário. O sal pode ser preparado por um método em 25 que os métodos tipicamente usados no campo da química sintética orgânica e os outros são apropriadamente combinados. Os exempjos específicos do método inclui titulàção de neutralização de uma solução livre do composto da presente invenção com uma solução ácida. O derivado de aminodi-idrotiazina fimdida da fórmula (I) ou sal farmaceuticamente aceitável de acordo com a presente invenção pode ser um solvato deste. Os exemplos de um solvato incluem um hidrato. O composto da fórmula (I) de acordo com a presente invenção pode ser convertido a um solvato submetendo-se o composto a uma reação ' 5 formadora de soIvato eonhecida per se quando necessário. A presente invenção ainda fomece um composto da fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável deste para o uso na terapia.

O derivado de aminodi-idrotiazina fúndida ou sai farmaceuticamente aceitável deste ou solvato deste de acordo com a presente 10 invenção tem um efeito inibidor da produção de AB ou efeito inibidor de BACEI excelentes e é útil como um agente profilático ou terapêutico contra uma doença neurodegenerativa causada por Ajj e tipificada pela demência do tipo Alzheimer. O compostos da invenção reduz tanto Aj340 quanto A|342. Além disso, os compostos da presente invenção podem ter um efeito inibidor 15 de BACE 2. ' Desta maneira, em um outro aspecto, a presente invenção fomece um composto da fórmula (I) como definido acima, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, para inibir a produção de proteína de amiloide-B protein.

20 Em um outro aspecto, a presente invenção fomece um composto da fórmula (I) como definido acima, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, para inibir enzima de clivagem de proteína de precursor de amiioide-|3 de loca) beta 1 (BACE 1). Em um outro aspecto, a presente invenção fomece um 25 composto da fórmula (I) como definido acima, ou um saj farmaceuticamente aceitável deste, para o tratamento de uma doença neurodegenerativa. Os · exemplos de doenças neurodegenerativas include demência do tipo Alzheimer (AD), síndrome de Down, angiopatia amiloide cerebrovascular (CAA), deterioração cognitiva branda (MCI), perda de memória, demência pré-senil,

demência senil, hemorragia cerebral hereditária com amiloidose e outras demências degenerativas tais c.omo demências de origem vascular de degenerativa mistas, tais como demências de origem vascular de degenerativa mistas, demência associada com a degeneração basal cortical, demência ' 5 associada com Doença de Parkinson (PD) e demência associada com corpo de Lewy difúso tipo AD. Em uma forma de realização, a doença neurodegenerativa é demência do tipo Ahheimer (AD). Em um outro aspecto, a invenção fomece o uso de um composto da fómula (I) como definido acima, ou um sal farmaceuticamente lO aceitável deste, para a fabricação de um medicamento para o tratmento ou prevenção de uma doença neurodegenerativa, tal como demência do tipo AlZheimer (AD), sindrome de Down, angiopatia amiloide cerebrovascular (CAA), deterioração cognitiva branda (MCI), perda de memória, demência pré-senil, demência senil, hemorragia cerebral hereditária com amiloidose e i5 outras demências degenerativas tais como demências de origem vascular de degenerativa mistas, tais como demências de origem vascular de degenerativa mistas, demência associada com a degeneração basal cortical, demência associada com Doença de Parkinson (PD) e demência associada com corpo de Lewy difuso tipo AD. Em uma forma de reajização, a doença 20 neurodegenerativa é demência do tipo Alzheimer (AD). Em um outro aspecto, a invenção fomece um método de inibir a produção de proteína amiloide-B e/ou de tratamento ou prevenção da doença neurodegenerativa, tal como demência do tipo Alzheimer (AD), síndrome de

P Down, angiopatia amiloide cerebrovascular (CAA), deterioração cognitiva 25 branda (MCI), perda de memória, demência pré-senil, demência senil, hemorragia cerebral hereditária com amiloidose e outras demências degenerativas tais como demências de origem vascular de degenerativa mistas, tais como demências de origem vascular de degenerativa mistas, demência associada com a degeneração basal cortical, demência associada com Doença de Parkinson (PD) e demência associada com corpo de Lewy difúso tipo AD, que envolve a administração a um paciente humano em nece.ssidade deste uma quantidade terapêutica ou profijaticamente eficaz de > um composto da fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável deste. Os - 5 exemplos de doenças neurodegenerativas incluem aqueles listados acima. Em uma forma de realização, a doença neurodegenerativa é demência do tipo Akheimer (AD). "Quantidade eficaz" significa uma quantidade sunciente para causar um beneficio ao paciente ou pelo menos para causar uma mudança na condição do paciente.

10 As condições adicionais que podem ser tratadas pelos compostos da presente invenção incluem diabete tipo 2, Doença de Creutzfield-jakob (CJD), dano de nervo periférico, neuropatia periférica, paralisia supra-nuclear progressiva, acidente vasc.ular cerebral, escjerose lateral amiotrófica (ALS), doenças autoimunes , inflamação, trombose 15 arterial, distúrbios de ansiedade, distúrbios psicóticos, epilepsia, ataques, convulsões, distúrbios de tensão, amiloidose vascular, dor, sindrome de Gerstmann-Straeussler-Scheinker, scrapie, encefalopatia, ataxia espino cerebelar, doença de Wilson, doença de Graves, doença de Huntington, doença de Whipple, doença de Kostmann, glaucoma, hemorragia cerebral 20 hereditária com amiloidose, hemorragia cerebralcom amiloidose, amiloidose vascular, inflamação cerebral, síndrome X Eágil, acidente vascular cerebral, síndrome de Tourette, miosite do corpo de inclusão, distúrbios de tensão, depressão, distúrbio bipolar e distúrbio compulsivo obsessivo. Em um aspecto a presente invenção ainda fomece um 25 composto da fórmuia (I) como definido acima, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, para o tratamento de diabete tipo 2. Em um outro aspecto a presente invenção ainda fomece o uso de um composto da fórmula (I) como definido acima, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, para a fabricação de um medicamento para

J'"

18 o tratamento ou prevenção de diabete tipo 2. Ainda, em um outro aspecto, a presente invenção ainda fomece um método de inibir a produção de proteína alniloide-B e/ou de tratamento ou prevenção diabete tipo 2 que envolve a administração a um

"' 5 pac.iente humano em necessidade deste uma quantidade terapêutica ou profilaticamente eficaz de um composto da fÓrmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.

Um outro aspecto da invenção fornece uma composição farmacêutica que compreende um composto da fórmula (I) como definido lO acima, ou um sal famaceuticamente aceitável deste, como o ingrediente ativo em associação com um carregador farmaceuticamente aceitávei. a composição pode estar em qualquer forma adequada, dependendo do método pretendido de administração.

Por exemplo, esta pode estar na forma de um tablete, cápsula ou líquido para a administração oral ou de uma solução ou 15 suspensão para a administração parenteral.

O derivado de aminodi-idrotiazina fundida ou sal farmaceuticamente aceitável deste de acordo com a presente invenção pode ser fonnulado por um método convencional.

Os exemplos preferíveis da forma de dosagem incluem tabletes, tabletes revestidos, tais como tabletes de 20 película e tabletes revestidos com açúcar, grânulos fmos, grânulos, pós, cápsulas, xaropes, pastilhas, inalantes, supositórios, injeções, unguentos, gotas oculares, gotas nasais, gotas para o ouvido, cataplasmas e loções.

Estas preparações sólidas, tais como tabletes, cápsulas, grânulos e pós podem conter, em geral, de 0,01 a 100 °/) em peso e 25 preferivelmente de 0,1 a l00 °/) em peso do derivado de aminodi-idrotiazina fündida ou sal farmaceuticamente aceitável deste de acordo com a presente invenção como um ingrediente ativo.

O ingrediente ativo é fomulado pela combinação de ingredientes geralmente usados como materiais para uma preparaç.ão farmacêutica e adição de um excipiente, um desintegrante, um agjutinante,

um lubrificante, um corante e um corretivo tipicamente usado e adicionar um estabilizante, um emulsificador, um indutor de absorç.ão, um tensoativo, um ajustador de pH, um preservante e um antioxidante quando necessário, por

' 5 exemplo, usando-se um método convencional.

Os exemplos de tais ingredientes incluem Óleos animais e vegetais, tais como óleo de soja, sebo bovino e glicerídeo sintético; hidrocarbonetos, tais como parafina líquida,

esqualano e parafina sÓlida; Óleos de éster, tais como octildodecil miristato e isopropil miristato; alcoóis superiores, tais como as ájcool cetostearílico e

10 álcooi behenílico; uma resina de silicona; óleo de silicona; tensoativos, tais como éster de ácido graxo de polioxietileno, éster de ácido graxo de "

sorbitano, éster de ácido graxo de glicerol, polioxietileno éster de ácido graxo de sorbitano, polioxietileno Óleo de mamona hidrogenado e uni copolímero de bloco de polioxietileno-polioxipropileno; poIimeros solúveis em água, tais

15 como hidroxietilcelulose, ácido poIiacrílico, um polímero de carboxivinija,

polietileno glicol, polivinilpirrolidona e metilcelulose; álcois inferiores, tais como etanol e isopropanol; alcoóis poliídricos, tais como glicerol, propileno glicol, dipropileno glicol e sorbitol; açúcares, tais como glicose e sacarose;

pós inorgânicos, tais como anidrido silícico, silicato de alumínio magnésio e

20 silicato de alumínio e água puriíicada.

Os exemplos do excipiente usado inclui lactose, amido de mijho, sacarose, glicose, manitol, sorbitol, celulose cristalina e dióxido de silício.

Os exemplos do aglutinante usado incluem álcool polivinílico, éter polivílico, metilcelulose, etilcelulose, goma arábica,

tragacanto, gelatina, goma-laca, hidroxipropilmetilcelulose,

25 hidroxipropilcelulose, polivinilpirrolidona, um copolímero de bloco de polipropileno glicol-polioxietileno" e meglumina.

Os exemplos dos desintegrantes incluem amido, ágar, pó de gelatina, celulose cristalina,

carbonato de cálcio, bicarbonato de sódio, citrato de c.ákio, dextrina, pectina e /)

carboximetilcelulose cálcio.

Os exemplos dos lubrificantes usados incluem estearato de magnésio, talco, polietileno glicol, sílica e Óleo vegetal hidrogenado.

Os exemplos do corante usado incluem aqueles permitidos serem adicionados a produtos farmacêuticos.

Os exemplos dos corretivos q usados inc.luem pó de cacau, mentol, empasm, óleo de menta, bomeol e pÓ de

' 5 canela.

Obviamente, os ingredientes não são limitados aos ingredientes aditivos acima.

Por exemplo, uma preparação oral é preparada pela adição do derivado de aminodi-idrotiazina fúndida ou sal farmaceuticamente aceitável deste de acordo com a presente invenção como um ingrediente ativo, um lO excipiente e, quando necessário, um aglutinante, um desintegrante, um Jubrificante, um corante, um corretivo e outros e então formação da mistura em pó, grânulos finos, grânulos, tabletes, tabletes revestidos, cápsulas ou semelhante por um método convencional. obviamente, os tabletes ou grânulos podem ser apropriadamente revestido, por exemplo, revestidos com açúcar

15 quando necessário.

Por exemplo, um xarope ou uma preparação para injeção é preparada pela adição de um ajustador de pH, um solubilizador, um agente de ionização e outros e um agente solubilizador, um estabilizador e outros quando necessário por um método convencional.

A injeção pode ser uma

20 solução previamente preparada ou pode ser pó por si só ou pó contendo um aditivo adequado, que é dissolvido antes do uso.

A injeção pode conter usuaimente de 0,01 a 100 °/) em peso e, preferivelmente de 0,1 a 100 °4 em peso do ingrediente ativo.

Ainda, uma preparação líquida para a administração oral tai como uma suspensão ou um xarope podem conter

25 usualmente de 0,01 a 100 °/) em peso e preferivehnente de 0,1 a 100 °/) em peso do ingrediente ativo.

Por exemplo, uma preparação extema pode ser preparada por qualquer método convencional sem as limitações específicas.

Como um material de base, qualquer um de vários materiais usualmente usados para um produto farmacêutico, um quase medicamento, um cosmético ou semelhantes podem ser usados. Os exemplos do material de base incluem materiais, tais

C como óleos animais e vegetais, óIeos minerais, óleos"de éster, ceras, alcoÓis superiores, ácidos graxos, Óleos de silicona, tensoativos, fosfolipídeos, ' 5 alcoóis, alcoóis poliídricos, tais como, polímeros solúveis em água, minerais de argila e água purificada. Um ajustador de pH, um antioxidante, um quelador, um preservante e füngicida, um corante, um Üavorizante ou semelhante podem ser adicionados quando necessário. Além disso, os ingredientes, tais como um ingrediente tendo um efeito indutor de 10 diferenciação, um intensificador de fluxo sanguíneo, um bactericida, um antiflogístico, um ativador de célula, vitamina, aminoácido, um umectante e um agente ceratolítico podem ser combinados quando necessário. A dose do derivado de aminodi-idrotiazina fúndida ou sal farmaceuticamente aceitável deste de acordo com a presente invenção varias 15 de acordo com o grau de sintomas, idade, sexo, peso corporal, modo de administração, tipo de sal e tipo específico de doença, por exemplo. Tipicamente, o ingrediente ativo é oralmente administrado a um adulto em tomo de 30 µg a 10 g, preferivelmente l00 µg a 5 g e, mais preferivelmente, 100 µg a l g por dia ou é administrado a um adulto por injeção em tomo de 20 30 µg a 1 g, preferivelmente 100 µg a 500 mg, mais preferivelmente, 100 µg a 300 mg por dia, em uma ou diversas doses, respectivamente. Os compostos da fórmula (I) podem ser usados em combinação com outros agentes terapêuticos, por exempjo, medicamentos reivindicados serem úteis como modificador de doençaou tratamentos 25 sintomáticos de uma doença neurodegenerativa, tal como doença de Alzheimer. Desta maneira, em um outro aspecto, a prese.nte invenção fomece um produto farmacêutico que compreende, em combinação, um primeiro ingrediente ativo que é um composto da fÓrmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável deste e pelo menos um ingrediente ativo adicional útil no tratamento de uma doença neurodegenerativa.

Em uma forma de realização da invenção, a doença neurodegenerativa é demência do tipo Alzheimer (AD). Os exemplos adequados de tais ingredientes ativos adicionais podem ser agentes sintomáticos, por exemplo, aqueles conhecidos ' 5 por Inodinc.ar a transmissão colinérgica ta! como agonistas do receptor muscarínico Ml e M3 ou moduladores alostéricos, antagonistas muscarínicos M2, agonistas M4 ou moduladores alostéricos positivos (PAMs), inibidores de acetilcolinesterase (tais como tetraidroaminoacridina, cloridreto de donepezila e rivastigmina), agonistas do receptor nicotínico ou moduladores 10 alostéricos (tais como agonistas de Ct7 ou moduladores alostéricos ou agonistas a4j32 ou moduladores alostéricos), agonistas de PPAR (tais como agonistas de PPARy), agonistas de receptor de 5-HT4 ou agonistas parciais, agonistas de histamina H3, antagonistas do receptor de 5-HT6 ou ligandos do receptor de 5HT1a e antagonistas ou moduladores do receptor de NMDA, 15 antagonistas de 5-HT2a, antagonistas de 5-HT7, agonistas de Dl ou PAMS, agonistas de D4 ou PAMS, agonistas de D5 ou PAMS, agonistas inversos GABA-A a5 ou moduladores alostéricos negativos (NAMs), agonistas de GABA-A a2/3 ou PAMS, moduladores de mGluR2 (PAMs ou NAMs), mGluR3 PAMS, mGluR5 PAMs, inibidores de PDE 1, inibidores de PDE 2, 20 inibidores de PDE 4, inibidores de PDE 5, inibidores de PDE 9, inibidores de PDE 10, inibidores de GlyTl, inibidores de DAAO, inibidores de ASCl, moduladores de AMPA, ativadores ou inibidores de SIRTI, antagonistas de AT4, antagonistas de GalRI, ligandos de GalR3, antagónistas de adenosina Al, antagonistas de adenosina A2a, antagonistas ou agonistas de a2A, 25 inibidores da reabsorção de norepinefPina seletiva ou não seletiva (SNRIs) ou agentes modificadores de doença" potenciais, tais como inibidores ou moduladores de gama secretase, ativadores ou moduladores de alfa secretase, inibidores da agregação de amiloide, anticorpos de amiloide, inibidores da agregação de tau ou inibidores da fosforilaç.ão de tau/cinase, desfosforilação de tau/ativadores de fosfatase, inibidores da proteína ativada por mitogênio cinase cinase 4 (MKK4/MEK4/MAP2K4), inibidores da cinase de terminal N c-jun (JNK), inibidores de caseína cinase, inibidores de MK2 (proteína ativada por mitogênio proteína cinase ativada por proteína cinase 2),

" 5 inibidores de MARK (cinase reguladora de afinidade de microtúbulo), inibidores de CDK5 (cinase 5 dependente de ciclina), inibidores de GSK-3 (glicogênio sintase cinase-3) e inibidores da tau-tubulin cinase-l (TTBKI). Os exemplos adicionais de tais outros agentes terapêuticos podem ser bloqueadores do canal de cálcio, inibidores de HMG-CoA (3-hidroxi-3-metil- IO giutaril-CoA) reductase (estatinas) a agentes redutores de lipídeo, imitações de NGF (fatores de desenvolvimento de nervo), antioxidantes, ligandos de ") GPR3, ativadores de plasmina, ativadores de neprilisina (NEP), ativadores de IDE (enzima de degradação de insulina), melatonina agonistas de MTI e/ou MT2, ligandos de TLX/NR2E1 (receptor X sem cauda), ligandos GluRl, 15 antagonistas de RAGE (receptor para produtos finais de glicações avançados, inibidores de EGFR (receptor do fator de desenvolvimento epidérmico), ligandos de FPRL-I (receptor-l semejhante ao peptídeo de formila), antagonistas GABA e inibidores de MICAL (molécula que interage com casL), por exemplo oxorredutase, antagonistas CBl/agonistas inversos, 20 medicamentos anti-inflamatórios não esteroidais (NSAIDs), agentes anti- inflamatórios (por exemplo, agentes que podem ser usados para tratar a neuroinflamação pela intensificação ou redução de neuroinflamação), ligandos de proteína precusora de amiioide (APP), vacinas anti-amiloide e/ou anticorpos, agentes que promovem ou intensificam o efkixo de'amiloide e/ou 25 liberação, inibidores de histona desacetilase (HDAC), antagonistas de EP2, inibidores de ll-beta HSDI (hidroxisteroide desidrogenase), agonistas do receptor X do figado (LXR) ou PAMs, imitações de proteína relacionada com o receptor de lipoproteína (LRP) e/ou ligandos e/ou intensificadores e/ou inibidores, inibidores de butiril colinesterase, antagonistas de ácido cinurínico e/ou inibidores de cinurenina aminotransferease (KAT), antagonistas de orfanina FQ/nociceptina (NOP)/receptor semelhantea a agonistas l (ORLI), ligandos de transportador de aminoácido excitador (EAAT) (ativadores ou inibidores) e inibidores do inibidor-l ativador de plasminogênio (PAl-l),

niacina e/ou agonistas de GPR109 ou PAMs em combinação com agentes redutores de colesterol e/ou inibidores de HMGCoA redutase (estatinas), dimebolina ou agentes similares, anti-histaminas, agentes de ligação/quelação de metal, antibióticos, secretagogos de hormônio de desenvolvimento, agentes redutores de colesterol, vitamina E, inibidores de absorção de colesterol,

promotores do efluxo de colesterol e/ou ativadores e agentes super- reguladores de insulina.

Em uma forma de realização, a presente invenção fomec.e um produto farmacêutico que compreende, em combinação, um primeiro ingrediente ativo que é um composto da fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável deste e pelo menos um outro ingrediente ativo selecionado de:-

0 Inibidores de colinesterase, por exemplo, donepezila, galantamina, rivastigamina, tetraidroaminoacridina e seus sais farmaceuticamente aceitáveis, 0 Antagonistas de 5-HT6, por exemplo, SB-742457 e seus sais farmaceuticamente aceitáveis,

0 Inibidores da HMGCoA redutase, por exemplo, lovastatina, rosuvastatina, atorvastatina, simvastatina, fluvastatina, pitavastatina, pravastatina e seus sais farmaceuticamente aceitáveis.

Os componentes individuais de tais combinações podem ser administrados de maneira sequencial ou simultânea em formulações farmacêuticas separadas ou combinadas.

Consequentemente, o produto farmacêutico pode, por exemplo, ser uma composição farmacêutica que compreende o primeiro e outros ingredientes ativos em mistura.

e ,, Altemativamente, o produto farmacêutico pode, por exemplo, compreender o primeiro e outros ingredientes ativos em preparações farmacêuticas separadas adequadas para a administração simultânea, sequencial ou separada a um paciente em necessidade deste. ) ' 5 As combinações referidas acima podem ser convenientemente apresentadas para o uso na forma de uma formulação farmacêutica e, desta maneira formulações farmacêuticas que compreendem uma combinação como definido acima junto com um carregador ou excipiente farmaceuticamente aceitáveis compreendem um outro aspecto da invenção. 10 Quando um composto da fórmula (I) ou um sal —- farmaceuticamente aceitável deste é usado em combinação com um segundo agente terapêutico ativo, a dose de cada composto pode diferir daquela quando o composto é usado sozinho. As doses apropriadas serão facilmente estimadas por aqueles habilitados na técnica.

15 Desta maneira, um aspecto adicional da invenção fomece um método de preparação de uma composição farmacêutica, que envolve misturar pelo menos um composto da fórmula (I) como definido acima ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, com um ou mais adjuvantes, diluentes ou carregadores farmaceuticamente aceitáveis e/ou com um ou mais outros 20 agentes terapêutica ou profilaticamente ativos- Em uma forma de realização, a presente invenção fomece uma composição farmacêutica que compreende um composto da fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, um ou mais outros agentes para o tratamento de doença de Ahheimer, tal como um agonista do receptor 25 muscarínico Ml e M3 ou modulador alostérico, um antagonista muscarínico M2, um inibidor de acetilcolinesterase, um agonista do receptor nicotínico ou modulador alostérico, um agonista de PPAR, um agonista do receptor de 5- HT4 ou agonista parcial, um agonista de histamina H3, um agonista do receptor de 5-HT6, um ligando do receptor de 5HTlA, um antagonista ou

-" ""~

26 modulador do receptor de NMDA, um antagonista de 5-nT2A, um antagonista de 5-HT7, um agonista de DI ou modulador alostérico positivo (PAM), um agonista de D4 ou PAM, um agonista inverso de GABA-A ct5 inverse ou &'

modulador alostérico negativo (NAM), um agonista de GABA-A a2/3 ou

' 5 PAM, um modulador de mGluR2 (PAM ou NAM), um mGlulü PAM, um mGluR5 PAM, um inibidor de PDE l, um inibidor de PDE 2, um inibidor de PDE 4, um inibidor de PDE 5, um inibidor de PDE 9, um inibidor de PDE 10, um inibidor de GlyTl, um inibidor de DAAO, um inibidor de ASCl, um modulador de AMPA, um ativador ou inibidor de SIRTI, um antagonista de 10 AT4, um antagonista de GalRl, um íigando de GaiR3, um antagonista de adenosina Al, um antagonista de adenosina A2a, um antagonista ou agonista de a2A, um inibidor da reabsorção de norepinehina seletivas ou não seletivas (SNRI), um inibidor ou modulador de gama secretase, um ativador ou modulador de alfa secretase, um inibidor da agregação de amiloide, um

15 anticoipo de amiloide, um inibidor da agregação de tau, um inibidor da fosforilação de tau, um inibidor de MK2 (proteína cinase 2 ativada por proteína cinase ativada por itogênio), um inibidor de MARK (cinase reguladora de afinidade de microtúbulo), inibidores de CDK5 (cinase 5 dependente de ciclina), inibidores de GSK-3 (glicogênio sintase cinase-3) e

20 inibidores da tau-tubulin cinase-l (TTBKI). Os exemplos adicionais de tais outros agentes terapêuticos podem ser bloqueadores do canal de cálcio,

inibidores de HMG-CoA (3-hidroxi-3-metil-glutaril-CoA) reductase (estatinas) a agentes redutores de lipídeo, imitações de NGF (fatores de desenvolvimento de nervo), antioxidantes, ligandos de GPR3, ativadores de 25 plasmina, ativadores de neprilisina (NEP), ativadores de IDE (enzima de degradação de insulina), melatonina agonistas de MTI e/ou MT2, ligandos de TLX/NR2E1 (receptor X sem cauda), lig,andos GluRl, antagonistas de RAGE (receptor para produtos finais de glicações avançados, inibidores de EGFR (receptor do fator de desenvolvimento epidérmico), ligandos de FPRL-I

(receptor-l semelhante ao peptídeo de formila), antagonistas GABA e inibidores de MICAL (mojécula que interage com casL), por exemplo oxorredutase, antagonistas CB l/agonistas inversos, em associação com um e carregador farrnaeeuticamente aceitável. Em uma forma de realização " 5 adicional a presente invenção fomece uma combinação que compreende um composto da fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, junto com um agente terapêutic.o como descrito anteriormente para a administração sequencial ou simultânea em fonnulações farmacêuticas separadas ou combinadas.

10 Em um outro aspecto, a invenção fomece um método de inibir a produção de proteína aÍniloide-B e/ou de tratamento ou prevenção da doença neurodegenerativa, tal como demência do tipo Akheimer (AD), síndrome de Down, angiopatia amiloide cerebrovascular (CAA), deterioração cognitiva branda (MCI), perda de memória, demência pré-senil, demência senil, 15 hemorragia cerebral hereditária com amiloidose e outras demências degenerativas tais como . demências de origem vascular de degenerativa mistas, tais como demências de origem vascular de degenerativa mistas, demência associada coín a degeneração basal cortical, demência associada com Doença de Parkinson (PD) e demência associada com corpo de· Lewy 20 difúso tipo AD, o método envolvendo a administração a um paciente humano que sofre da condição, uma quantidade terapêutica ou profilaticamente eficaz da composição farmacêutica descrita ac.ima ou de um composto da fórmula (I) como definido acima, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste. "Quantidade eficaz" significa uma quantidade suficiente para causar um 25 benefício ao paciente ou pelo menos para causar uma mudança na condição do paciente. A doença de Alzheimer (AD) é caracterizada patologicamente pela presença de emaranhados neurofibrilares (NFTs) e placas, consistindo de peptídeos amiloides (Aj3) peptídeos de comprimentos variantes, por exemplo

42 aminoácidos (A|342) e 40 aminoácidos (Aj340). Além destes marcadores patológicos, a atrofia cerebral tainbém está evidente. A formação de placas é acreditada ocorrer devido à agregação de peptídeos Afl. Os peptídeos AB são 2 formados no cérebro pela clivagem sequencial de proteína precursora de ' 5 amiloide (APP) por f3-secretase (BACE-I) e Y-secretase. Portanto, os medicamentos contra AD potenciais visam a inibição da formação de amiloide pela inibição de BACE-I ou y-secretase, deve ser capaz de atingir a exposição adequada no cérebro, a fim de exercer um efeito em AD.

Embora o BACE-I represente um alvo altemativo para lO interromper ou diminuir a produção de peptídeos amiloides, vários grupos observaram desafiador identificar os inibidores de BACE-I que podem penetrar no sistema nervoso central (CNS) e, desta maneira, inibir a enzima no local de ação. O cérebro é protegido por diversas barreiras incluindo a 15 barreira sangue cérebro (BBB) and transporters (Hitchcock and Pennington, J Med Chem 2006, 29, 7559; Ueno, Curr. Med. Chem. 2007, i4, 1199; Gloor et al., Brain Res. Rev. 2001, 36, 258). Diversos transportadores de efkíxo foram caracterizados evitando que os compostos entrem no cérebro. Um dos melhores caracterizados e mais proeminentes na prevenção da penetração do 20 CNS de xenobióticos é a P-glicoproteína (Pgp) (Kusuhara and Sugiyama, Drug Discovery Today, 2001, 6, 150; Mahar Doan et al., J. Pharm. Expt. Ther. 2002, 303, 1029; Lin, Drugs of Today 2004, 40, 5; Lin & Yamazaki, ' Clin Pharmacokinet. 2003, 42, 59; Schirikel, Adv. Drug Deliv. Rev. 1999, 36, 179). Foi mostrado que o efluxo de Pgp é importante para os inibidores de 25 BACE-I (Hussain et al., J. Neurochem. 2007, 100, 802). Desta maneira, o controle do efluxo de Pgp é importante. Aqueles habilitados na técnica estimarão que existem diversas maneiras de medir ou predizer a penetração do CNS in vitro ou in vivo. O potencial para a penetração do CNS pode ser estimada in vitro peja determinação de se um composto pode ser subinetidos ao efluxo de Pgp, isto é, pela condução de um ensaio de Pgp in vitro. Aqueles habilitados an técnica estimarão que diversas linhas celulares podem ser usadas e que estas linhas celulares podem ou não afetar os resultados do ensaio. Um tal ensaio é ' 5 descrito abaixo (Cyprotex UK). O seguinte ensaio de MDR-I MDCK foi usado para estimar o ej7uxo de Pgp. O ensaio foi conduzido em Cyprotex Discovery Ltd. 15 Beeçh Lane, Maccles/íe/d, Cheshire, UK, SK/O 2DR Permeabilidade de MDRI-MDCK (Bi-direcional; pH lO 7,4/pH 7,4) Esumo do protocojo As células de MDCK são uma linha celular epitelial de origem renal canina. Estas células podem ser transfectadas para expressar estavelmente a P-glicoproteína ativa (MDRI-MDCK) e são ideais para o 15 estudo do efluxo de medicamento. O composto de teste foi adicionado à iateral apical ou basolateral de uma monocamada confluente de células MDRI-MDCK e a permeabilidade foi medida pelo monitoramento do aparecimento do composto de teste na lateral oposta da membrana usando-se using LC-MS/MS. Para isto, um coe/iciente de permeabi/idade aparente 20 (Pa,,) e razão de e/7uro foram medidas/calculadas. objetivo Para medir a permabilidade do composto de teste na direção apical a basolateral (A-B) e basolateral a apical (B-A) através das células MDRI-MDCK. Uma razão de permeabilidade B-A e A-B foi calculada (razão 25 de efluxo) para mostrar se o composto sofre o efluxo de P-glicoproteína. Os compostos foram fomecidos como uma solução de 200 µL de 10 niM de composto de teste em DMSO.

Procedimento Experimental As células MDRI-MDCK obtidas a partir do NIH (Rockvijle,

MD, USA) oram usadas.

Seguindo a cultura até a confluência, as monocamadas foram preparadas enxaguando-se tanto as superficies apicais quanto basolaterais duas vezes eom tampão em pH 7,4 a 37°C.

As células Z"

foram entá incubadas com tampão em pH 7,4 em compartimentos tanto

' 5 apicais quanto basolaterais por 40 minutos para estabilizar os parâmetros fisiológicos.

O tampão em pH 7,4 foi então removido do companimento apical e substituído com as soluções de dosagem de composto de teste.

As soluções foram preparadas diluindo-se lO niM de composto de teste em 10 DMSO com tampão para dar uma concentração de composto de teste final de 10 µM (concentração final de DMSO ajustada a 1 °/0). O marcador de integridade fluorescente amarelo Lucifer também foi incluído na solução de dosagem.

As inserções do compmimento apical foram então colocadas em placas de 'companhia' contendo tampão Eesco em pH 7,4. Os padrões

15 analíticos foram feito a partir de soluções de dosagem.

Para experimentos basolaterais a apicais (B-A) o experimento foi iniciado substituindo-se o tampão nas inserções, então colocando-os nas placas de companhia contendo soluções de dosagem.

As incubações foram realizadas em uma atmosfera de 5 °/) de CO2 com uma unidade relativa de 95

20 °/0 a 37°C por 60 minutos.

Após o período de incubação, a placa de companhia foi removida e as amostras apicais e basolaterais diluidas para a análise por LC- MS/MS.

A permeabilidade do composto de teste foi estimada em duplicata.

Em cada placa, compostos de características de penneabilidade conhecidos 25 foram realziados como controle.

Os compostos de teste de controle foram quantificados por análise do cassete de LC-MS/MS usando-se uma calibração de 5 pontos com dissolução apropriada das amostras.

Condições analíticas genéricas Cyprotex foram usadas.

A concentração inicial (C0) foi detemiinada a partir da solução m de dosagem e a recuperação experimental calculada a partir de Cq e concentrações de compartimento tanto apicais quanto basolaterais. A integridade das monocamadas por todo o experimento foi verifiada pelo monitoramento da pemreação de amarelo Lucifer usando-se a ' 5 análise fluorométrica. A permeação de amarelo Lucifer é baixa se as monocamadas não forem danificadas. Se um valor P,pp de amarelo Lucifer estiver acima dos limites de QC em um reservatório de composto de teste individual, então um resultado n = l foi relatado. Se os valores de P,pp de · amarelo Lucifer estiveram acima dos limites QC em ambos os reservatórios 10 de réplica para um composto de teste, o composto foi testado novamente. Se na repetição, a permeação e amarelo Lucifer alta foi observada em ambos os reservatórios então a toxicidade ou fluorescência inerentes do composto de teste foi assumida. Nenhum experimento adiciona! foi realizado neste exemplo.

15 Análise de Dados O coeficiente de permeabilidade para cada composto (Papp) foi calculado a partir da seguinte equação: Pa,, = (dQ dt) (Co x A) Quando dQ/dt é a taxa de pemeação do medicamento através das células, Cq é a concentração de compartimento doador em período zero e 20 A é a área da monocamada celular. C0 foi obtido a partir da análise da solução de dosagem no início do experimento. Além disso, uma razão de efluxo (ER) foi calculado a partir da média dos dados A-B e B-A. Isto é derivado de: ER = ((Papp (B - A)) " ((Papp (A - B)) Dois compostos de controle foram avaliados ao lado dos 25 compostos de teste, propranolol (altamente permeável) e prazosina (um substrato para P-giicoproteína). Surpreendentemente, os compostos da presente invenção foram observados apresentar uma razão de efluxo de Pgp menor do que os compostos exemplificados no WO2009/091016 indicando que estes têm potencia! para mostrar penetração de CNS maior. Os dados para os exemplos

G selecionados são mostrados na Tabela 1 abaixo. " 5 Tabela 1: Dados de Ensaio MDR-I MZ)CkPgp Exemplo P% ER Exemplo Comparativo 1 26,2 Exemplo Comparativo 2 16,6 Exemplo Comparativo 3 24,0 Exemplo Comparativo 4 20,7 2 1,7 3 1,4 4 1,0 1 0,7 Exemplo Comparativo 5 4,7 Exempb Comparativo 6 4,5 lO 0,6 5 1,5 6 1,0 7 0,8 8 1,7 9 1.2 ll 1,0 I ]2 I 0.8 13 1,7 15 1.6 16 l,l 17 1.4 18 1,1 Nota: Exempto 14 é, intencionahnente, não incluído.

Os Exemplo Comparativos l to 6 são abrangidos pelo pedido de patente Intemacional publicado WO2009/091016; os Exemplo Comparativos l a 4 são especificamente descritos no WO2009/091016 como Exemplos 32, 35, 54 e 73 respectivamente.

. 10 Os Exemplo Comparativos 5 e 6 são N{3-((4aS,5S,7aS)-2-amino-5-(fluorometil)-4a,5,7,7a- tetraidro-4HAlro[3,4-d][1,3]tiazin-7a-ii)-4-f1uorofenil)-5-etoxipicolinamida e N-(3-((4aS,5R,7aS)-2-amino-5-metil-4a,5,7,7a-tetraidro-4H- filro[3,4A][l,3]tiazin-7a-il)-4Auorofenil)-5-etoxipicolinamida . 15 respectivamente. Os dados demonstram que os compostos da presente invenção e os exemplos específicos 1 a 13 e 15 a 18 têm efluxo de Pgp menor e portanto penetração do CNS potenciahnente maior do que os exemplos representativos do WO2009/0910l6 usando-se o método reconhecido já mencionado de penetração do CNS estimada.

Por exemplo, os Exemplo Comparativos Í a 6 têm razões de efluxo de Pgp mais altas do que os compostos da presente invenção.

Além disso, os Exemplos Comparativos 5 e ' 5 6 têm razões de efluxo de Pgp mais altas do que um análogo próximo, o Exemplo 10 da presente invenção, que demonstra claramente o efeito que o grupo trifluorometija no anel de tetraidrofúrano exerce no efluxo de Pgp, isto é, o grupo trifluorometila reduz o efluxo de Pgp.

Aqueles habijitados an técnica estimarão que o ensaio de Pgp lO in vivo descrito acima é um ensaio preditivo de penetração do CNS in vivo. desta maneira também é desejável de o efluxo mediado por pgp diminuído traduzir à situação in vivo. aqueles habilitados na técnica estimarão que existam muitas maneiras de estimar a penetração do CNS de compostos in vivo.

Por exemplo, pode-se quantificar as concentrações de composto no 15 sangue ou plasma e cérebro e calcular uma razão de cérebro:sangue (Br:Bl) ou cérebro:plasma (Br:Pl). Este método foi usado historicamente e foi ampjamente aceito como um método de determinar a penetração do CNS (Summerfield et al., J Phannacol.

Expt.

Ther. 2007, 322, 205). Aqueles habilitados na técnica estimarão que este tipo de ensaio pode ser conduzido

20 em estado fixo, um ponto de tempo simples, ou pode ser realizado cotando-se as razões da área sob a curva (AUC). Todos os métodos são igualmente válidos mas cada um pode ter certos advertências que serão estimadas por aqueles habilitados na técnica.

Literatura recente foi publicada para sugerir que é importante considerar as três concentrações in vivo e que quando o

25 efluxo ocorre a partir do cérebro, a concentração isenta de plasma deve ser a mesma ou equivalente à concentração cerebral livre (Kalvass and Maurer, Biopharmaceutics & Drug Disposition 2002, 23, 327; Mauer et al, Drug Metab.

Disposition 2005, 33, i75; Trainor Expert Opin.

Drug Discov. 2007, 2, 5 1). Desta maneira, um composto que pode penetrar livremente o CNS e não está submetido ao efluxo ativo, por exemplo, por Pgp ou um outro transportador, deve demonstrar um cérebro livre:plasma livre (BrE : PÍ&) ou um cérebro não ligado:plasma não ligado (Br, : Plj de aproximadamente 1:1.

Aqueles habilitados na técnica estimarão que as concentrações iivres ou não " 5 ligadas podem ser pela mujtiplicação da concentração cerebral total ou de plasma total pela Hação não Iigada no tecido cerebral ou plasma, que pode ser medido pelo ensaio descrito abaixo. Aqueles habilitados na técnica estimarão que a Eação não ligada pode mudar com os atores experimentais, por exemplo, concentração ou temperatura, etc. Aqueles habilitados na técnica 10 serão capazes de estimar isto e selecionar o ajuste mais apropriado de condições. Aqueles habilitados na técnica também estimarão que por mais que as condições sejam as mesmas para cada composto avaliado, então o ensaio dará dados consistentes para a faixa de compostos testados, desta maneira, minimizando quaisquer discrepâncias. Também foi proposto que as 15 concentrações de medicamento no fluido cerebroespinhal (CSF) sejam · equivalentes às concentrações cerebrais livres para os compostos que não são ativamente submetidos ao efiuxo a partir do cérebro (He et al., Xenobiotica 2009, 39, 687). Desta maneira, um outro método de determinar a penetração do CNS deve ser estimar CSF:plasma livre (CSF : P|r) ou CSF:plasma não 20 ligado (CSF : PJ,). Se o medicamento livre no plasma for capaz de permear no CNS e não for influxo ou efluxo então o CSF:Plf, ou CSF:P!u devem ser de aproximadamente l:l. Aqueles habilitados na técnica estimarão que os tecidos associados com os objetivos associados com a determinação das concentrações de medicamento CSF e extraindo CSF, por exemplo o CSF 25 pode ser contaminado por sangue dependendo do método de retirada, também as concentrações de CSF podem ser de precisão inferior, dependendo da dose usada.

Desta maneira, foi observado que um inibidor de BACE da GlaxoSmithKline (GSKl88909), BACE-Í IC50 5 nM, tendo exposição a CNS baixa foi ineficaz na dimunição da produção de Afj40 nos cérebros de camundongos TASTPM (que superexpressam tanto AppsweK595N/M596j humano quanto PS 1m]46v) na administração aguda (Hussain et a!., J.

Neurochem. 2007, 100, 802 - 809). Seguindo uma dose oral de 250 mg/kg a 5 cocnentração cerebral de GSKl88909 em camundongos TASTPM foi de 0,62 uM. Quando um inibidor de Pgp (GFl20918) foi dosado 5 horas antes da administração oral de GSK188909, a concentração cerebral de GSK188909 foi observada ser de 5,43 ÚM seguindo uma dose oral de 250 mg/kg, isto é, a co-administração de um inibidor de Pgp causou um aumento de quase 9 vezes iO na penetração de CNS, apresentando efluxo de Pgp é um mecanismo importante evitando-se que inibidores de BACE penetrem no CNS. Além disso, na ausência de um inibidor de Pgp, uma dose oral de 250 mg/kg de GSK188909 não tem qualquer efeito nos níveis de AÜ40 cerebrais em camundongos TASTPM, visto que quando um inibidor de Pgp foi co- l5 administrado (5 horas antes da administração de GSK188909) uma redução de 68 °/) nos níveis de Af340 no cérebro com relação aos camundongos tratados c.om veículo foi observado. Um outro documento relatou um efeito similar com três inibidores de BACEJ da Bristol-Myers Squibb (Meredith et al., J. Pharm. Expt. Ther. 2008, 326, 502-513). Os três compostos relatados foram observados serem substratos de Pgp in vitro. Quando dosado aos camundongos, os três compostos apresentaram penetração no CNS baixa e não diminuíram os níveis de amiloide no cérebro, mas foram capazes de diminuir os níveis de amiloide no plasma. Quando os mesmos três compostos foram adicionados aos camundongos de nocaute (KO) de Pgp, o nível de penetração no CNS aumentou e os compostos foram capazes de diminuir os níveis de amijoide no cérebro.

Pesquisadores da Schering-Plough também publicaram documentos (Iserloh et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 2008, 18, 418) para msotrar que os inibidores de BACE-I de sua série (por exemplo, 11 da referência mencionada acima), estão sujeitos ao efluxo de Pgp, como um resujtado cujo composto foi observado apresentar um Br:Pl baixo (<0,1) no rato. ' 5 A literatura citada acima enfatiza as dificujdades na identificação de inibidores BACE-I que não são subme.tidos ao efluxo de Pgp.

Tais inibidores devem ser altamente desejáveis e muitos grupos de pesquisa tentaram descobrir tais como sem sucesso.

Desta maneira os inibidores de BACE-I que não são substratos de Pgp e podem, portanto, penetrar

10 facilmente no CNS amiloide inferior no cérebro deve desejável.

Mais recentemente, os pesqusiadores de Wyeth relataram trabalho e.xtensivo para superar o efluxo de Pgp em uma série de inibidores de BACE-I de acilguanidina cíclica (Malamas et al, Bioorg.

Med.

Chem.

Lett. 2010, 20, 6597). Os compsotos foram descobertos sendo substratos de Pgp 15 Hacos e com Br:Pl aproximando-se de l:í. entretanto, dois exemplos principais dom efluxo de Pgp reduzido (84 e 89 da referência já mencionada), não diminui A|340 no cérebro de camundongos Tg2576 8 horas após uma dose oral de 30 mg/kg.

A perda de eficácia foi atribuída ao fato que os compostos apresentaram ligação de tecido cerebral ajta.

Desta maneira, é 20 importante descobrir os inibidores de BACE-I que não são substratos de Pgp mas aina têm uma &ação não ligada razoáve! no tecido cerebral e são capazes de dominuir amiloide no cérebro.

Tarnbém foi mostrado que os inibidores de BACE que não são substratos de Pgp in vitro podem penetrar o CNS (jpor exemplo, TC-l da 25 Merck) e podem diminuir os níveis de AB40 no cérebro de camundongos APP-YAC e macacos (Sankaranarayanan et al., J.

Pharmacol.

Expt.

Ther. 2009, 328, 13 1-140). Desta maneira, os ensaios pgp in vitro apresentaram TC- l não devem ser uín substrato de Pgp e então TC-l foi dosado aos camundongos APP-YAC (100 mg/kg i.p.) foi capaz de penetrar

N,

modestamente o CNS como mostrado pelas concentrações cerebrais e a razão de cérebro:plasma e sua capacidade resultou na diminição moderada de amiloide c.erebral.

Tempo Conc. De plasma Conc. Cerebral Br:Pl Redução em AB40 ! (µM) ) (µM) I I cerebral (%) I 2h ! 25 ! 1,6 I 0,06 I 26 I 4h | 13 l 1,8 I 0,14 I 29 A concentração cerebral e de plasma de TC-l seguindo a dose 5 de 100 mg/kg e efeitos correspondentes nos níveis de Ab40 cerebrais em camundongos APP-YAC.

Em experimentos separados foi mostrado que o TC-l pode penetrar o CSF de macacos quando co-administrados com um inibidor de CYP3A4 (ritonavir). Nestes experimentos, a concentração de plasma média de TC-l foi observada ser de 2,7 uM, enquanto a concentração de CSF foi observada ser de 0,025 uM. Entretanto, quando o TC-l é -99 °/) ligado às proteínas do plasma, a concentração de plasma livre foi calculada ser -0,027 nNI. Foi observado que os níveis de CSF Afl40 mostraram uma diminuição de 42 °/, com relação a um grupo de controle tratado com veículo. Desta maneira, um inibidor de BACE que pode penetrar livremente o CNS deve ser esperado ser capaz de diminuir os níveis de amiloide no CNS. Deve ser benéfico não ser co-dosado com um inibidor de CYP3A4.

Os compostos da presente invenção foram mostrados diminuir a produção de Aj3 em ensaios celulares q ue correlacionam com sua capacidade de diminuir a produção de Aj3 em animais. Desta maneira, os compostos da presente invenção terão utilidade na diminuição da produção de N em seres humanos e, desta maneira, serão úteis no tratamento de doenças neurodegenerativas tais como doença de Alzheimer.

Penetração de CNS in vivo em rato Ratos machos Sprague Dawley foram "adquiridos da Charles River UK Ltd. (Margate, UK) e alojados de acordo com as instruções da UK Home Office. Os me.dicamentos foram fabricados na sconcentrações apropriadas em metil celulose a 0,5 °/). Os animais foram dosados oralmente (2 mL/kg) por gavagem em doses resumidas na Tabelas 2 a 4 abaixo.

Nos pontos de tempo pós dosagem, especificados nas Tabelas 2 a 4 abaixo, os animais foram administrados por uma injeção i.p. de " 5 pentobarbitona sÓdica (aproximadamente 330 mg/kg para anestesia terminal). Usando-se uma guilhotina, os animais foram decapitados e o sangue do tronco coletado em tubos Falcon de 15 mj contendo l00 IU de heparina. Os sangue foi submetido ao turbilhonamento seguido por centrifügação a 6000 rpm, 4°C por 5 minutos. O plasma foi coletado por 10 DMPK e ensaios de ELISA e armazenados a -80°C até o uso. Os cérebros foram dissecados e divididos ao longo da linha média, pesados e armazenados a -80°C até outro uso. Mé,t,o,do para a Análise de Amostras de Plasma, Cérebro e

CSF 15 Preparação de Soluções de Trabaçho de Acetonitrila O composto de teste foi preparado como uma solução de 1 mg isenta da solução de base/mL em DMSO, submetido ao turbilhonamento e sonificado por 5 minutos. A solução de DMSO l mg/niL foi diluída a estoques de acetonitrila de 10 e 30 µg/mL, pela adição de lO µL a 990 µL de 20 acetonitrila e 30 µL a 970 µL de acetonitrila, respectivamente. Os estoques de acetonitrila de 10 e 30 µg/niL foram então diluídos serialmente 1:9 (V/V) (estoque de 100 µL em 900 µL de acetonitrila) para dar as seguintes soluções: 0,003, 0,01, 0,03, 0,1, 0,3, !, 3, 10 e 30 µg/rnL de acetonitrila. Preparação de Padrões, Brancos e Amostras de Plasma 25 Plasma de rato Sprague Dawley macho de controle e as amostras de plasma do estudo foram armazenados a -80° C até o dia da análise usando estes foram descongelados em temperatura ambiente. O plasma de controle foi centrifügado (2.000 g por lO minutos) e divididas (90 µL) em tubos de eppendorf para a preparação de padrões e amostras em branco.

As amostras de estudo foram previamente divididas (lOO µL) em tubos de eppendorf seguindo imediatamente a coleta do plasma.

Uma alíquota de (lO µL) do estoque de acetonitrila apropriado foi adicionado ao plasma de controle (para dar um volume final de 100 µL)

" 5 para dar os padrões de calibração requeridosque abrangem a faixa de 1 a 3000 ng/niL.

Branco duplo e amostras em branco foram preparadas pela adição de 10 µL de acetonitrila a 90 µL de plasma em branc.o.

Preparação de Padrões, Brancos e Amostras de Cérebro cCrebro de rato Sprague Dawley macho de controle e as 10 amostras de cérebro do estudo foram pesadas após a coIeta e armazenadas a - 80" C até o dia da análise quando estas foram descongeladas em temperatura ambiente.

Os cérebros uma vez descongelados foram diluídos com água (4 niL por grama de tecido) e homogeneizados usando-se um homogeneizador mecânic.o.

Uma alíquota (100 µL) de cada amostra de estudo foi feita em 15 tubos Micronics prontos para a análise e alíquotas suficientes (90 µL) de homogenado de cérebro controle preparado para a preparação de padrões e brancos.

Uma alíquota (10 µL) dos estoques de acetonitrila apropriados foi adicionado ao homogenado de cérebro controle (para dar um volume final 20 de 100 µL) para dar o padrões de calibração requeridos cobrindo a faixa de 1,5 a 5000 ng/g.

Branco duplo e amostras em branco foram preparadas pela adição de lO µL de acetonitrilae a 90 µL de homogenado cerebral em branco.

Extração de Plasma e Amostras, Padrões e Brancos de Cérebro Cada amostra, padrão e branco de homogenado de plasma e 25 cérebro (100 µL) foi extraído com uma alíquota de (300 µL) de acetonitrila (contendo ácido fórmico a 0,1 °/) e 100 ng/mL de um padrão intemo apropriado). Os brancos duplos foram extraídos com uma alíquota (300 µL) de acetonitrija contendo ácido fórmico a 0,1 °4). Todas as amostras, padrões e brancos foram então submetidos ao turbilhonamento misturados e centrifúgados (2000 g por 15 minutos). Uma alíquota (50 µL) do sobrenadante resultante foi então usado em uma placa de 96 reservatórios profündos de 2 ml e diluidos com acetonitrila:água (50:50 v/v) (150 µL) prontas para a análise por um método de LC-MS/MS específico.

' 5 Preparação de Amostras, Padrões e Brancos de CSF CSF de rato maje Sprague Dawley controle e amostras de CSF de estudo foram armazenadas a -80°C até o dia da análise quando estas foram descongeladas em temperatura ambiente. Uma alíquota (50 µL) de cada amostra de estudo foi usada em tubos Micronics prontos para análise e lO alíquotas suficientes (45 µL) de CSF controle preparados a partir de padrões e brancos. Uma alíquota (5 µL) dos estoques de acetonitrila apropriados foi adicionada ao CSF controle (para dar um volume final de 50 µL) para dar os padrões de calibração requeridos que abrangem a faixa de 1 a 1000 ng/niL.

15 Branco duplo e amostras em branco foram preparadas pela adição de 5 µL de acetonitrila a 45 µL de CSF em branco. Extração de Amostras, Padrão e Brancos de CSF Cada amostra, padrão e branco de CSF (50 µL) foi extraída com uma alíquota (150 µL) de acetonitrila (contendo 0,1 °/) de ácido fÓrmico 20 e 100 ng/mL de um padrão intemo apropriado). Os brancos duplos foram extraídos com uma alíquota (150 µL) de acetonitrila contendo 0,1 °/0 de ácido fÓrmico. Todas as amostras foram então submetidas ao turbilhonamento mistas e uma alíquota (50 µL) de cada um ainda foi diluída em 150 µL de acetonitrila:água (50/50 v/v) em um bloco de 96 reservatórios profúndos de 2 25 mL prontos para a análise de LC-MSMS. Todas as amostras foram então analisadas usando-Se um Waters Acquity UPLC ligado a um espectrômetro de massa Waters Xevo TQ. Condições de LC:

P Coluna: Acquity UPLC BEFI Cl8, 1,7 um, 2,1 x 50 mm,

mantida a 40° C Fase Móvel: A = 95 °/) de água : 5 °/) de McOH contendo acetato de amônio 0,01 M B = 5 °/) de água : 95 °/) de MeOlil contendo acetato de amônio

' 5 0,01 M Gradiente: Tempo (minuto) B (°/0) 0 I ' 1,2 I 95 1,5 I 95 1,7' I 5 2,0 i 5

Taxa de fluxo: 0,6 mljminuto; volume de injeção 5 µL;

temperatura do auto-amostrador 6° C

O Mxo de LC foi desviado para desperdiçar os primeiros 0,3 lO min de cada injeção

As transições de MS/MS foram otimizadas de maneira automática pelo software Waters QuanOptimise

Detecção de Amiloide

Extração de DEA/NaCl de peptídeos AB de cérebro de

15 coelho:

100 ml de dietil amina a 0,2 °4 eshiado (DEA) em 50 niM de NaCl (pH lO) foi recentemente preparado e l ml/25 mg de tecido cerebral foi adicionado a cada hemisfério (isto é, 40x o volume cerebral). Os cérebros foram imediatamente homogeneizados usando-se um Politron PT 1200 por 20 1,5 minutos e as amostras deixadas incubar em gelo por uma hora após a homogeneização. 3 ml do homogenado foi transferido a um tubo de polialômero (Beckman #362333) e rotacionado em 133000 x g (55.000 íjpm) por 45 minutos a 4°C.

O sobrenadante foi então neutralizado ao pH 8 a 8,3 pela adição de 1/10 de volume 0,5 M de Tris/HCl, pH 6,8. As amostras 25 podem ser usadas &escas ou congeladas em gelo seco e armazenadas a -80° C até requerido para a análise fAmiloide Human/Rato (40) ELISA (Wako Kit) O Kit Wako Af340 ELISA (Código N° 294-62501) usa o 4 anticorpo monoclona! BNT77, elevado contra o epítopo Af3(jL28) e o anticorpo monoclona! BA27, que detecta especificamente a porção de ' 5 terminal C de AB40. O kit usado para a determinação quantitativa de Af3(1- 40) humano ou de rato e também espécies A|340 N-terminalmente truncado (Aj3(x-40)) em matrizes biológicas, tais como meio de cultura de tecido, homogenado de tecido, CSF e plasma.

Para análise, amostras de plasma e de cérebro são diluídas l:l 10 com o diluente padrão contido no kit e amostras de CSF são diluídas 1:8 com o diluente padrão contido no kit. O ensaio é realizado acordo com as instruções do fabricante e as amostras são analisadas em duplicata. Os dados são analisados suando-se Microsofí Excel 2003 e análise estatistica é realizada usando-se Genstat 9° Edição.

15 Desta maneira, quando o Exemplo Comparativo 4 foi administrado em uma dose de 10 mg/kg p.o. e amostras de plasma, cérebro e CSF foram coletadas 2, 4, 6 e 8 horas pós-dosagem seguindo as seguintes concentrações foram medidas (Tabela 2): Tabela 2: Dados para o Exemplo Comparativo 4 Time (h) {Pl] ('ÍM) '[Plj (nh4) [B'] ('ÍM) '[B',,] (nM) [CSF] (nM) Br,,,:Pl,,, Br,:Pl, CSF:Pl, 2 1257 440 971 65 104 0,8 0,15 0,24 4 1162 4()7 874 59 88 0.7 0,14 0.22 6 834 292 570 38 63 0,7 0,13 0,22 8 484 169 368 25 26 0,8 0,15 0,15 L Calculado pela multiplicação de [Pl] por Pl Fu. 2 Calculado pela multiplicação de [Br] por Br Fu.

20 A partir do estudo acima, o Exemplo Comparativo 4 apresentou uma redução de 59 °/) e 64 °/) de A|340 no cérebro em 4 e 6 horas respectivamente e uma redução de 76 °/) e 70 °/) de AB40 no CSF em 4 e 6 horas respectivamente.

Certos compostos da presente invenção foram estimados in 25 vivo no rato para corroborar os níveis de penetração em CNS; estes dados são apresentados nas tabelas abaixo.

Surjpreendentemente, foi observado que os compostos da presente invenção apresentam penetração de CNS aumentada no rato com 4 relação aos compostos do WO2009/091016 por qualquer um dos métodos 2 reconhecidos já mencionados de determinar a penetração de CNS. Desta " 5 maneira, os compostos da presente invenção podem apresentar perfis melhorados em que estes alvejam facihnente o local de ação, o cérebro e, portanto, podem mostra eficácia melhorada ou eficácia em concentrações ou doses inferiores ou efeitos colaterais mediados perifericamente diminuídos, por meio de divisão de CNS preferencial ou uma combinação de qualquer um 10 ou de todos estes aspectos.

Desta maneira, quando o Exemplo 8 da presente invenção foi administrado em uma dose de 10 mg/kg p.o. e amostras de plasma, cérebro e CSF foram coletadas 2, 4, 6 e 8 horas pós dosagem das seguintes concentrações medidas (Tabela 3): 15 Tabela 3: Dados para o Exemplo 8 Time (h) [plj ('ÍM) '{Pl,] (nM) [B') ('ÍM) '[B'J_ ('ÍM) [CSF] (nM) Br,,,:Pl,,, Br,:Pl,, CSF:Pl, 2 1189 124 3961 87 65 3,3 0,7 0,5 4 657 68 2582 57 39 3,9 0,8 0,6 6 229 24 845 i9 12 3,7 0,8 0,5 8 186 19 709 16 'n-q. 3,8 0,8 'n.d. 1 Caiculado pela rriultiplicação de [Pl] por Pl Fu 2 Calculado pda multiplicação de [Br] por Br Fu.

3. não quantificável. As concentrações próximas a ou abaixo do iimite inferior de quantifieação e podem não ser precisamente quantificados.

4. Não determinado.

A partir do estudo acima, o Exemplo 8 apresentou uma reduç.ão de 68 °4 e 72 °/) de Afl40 no cérebro em 4 e 6 horas respectivamente e uma redução de 82 °/) e 74 °4 de AB40 no CSF em 4 e 6 horas respectivamente. Desta maneira, os compostos da presente invenção mostram 20 efluxo de Pgp diminuído com relação às divulgações prévias enquanto demonstra-se a eficácia no CNS. A eficácia é, desta maneira, atingida com concentrações de plasma circulante inferior.

Quando o Exemplo 1 da presente invenção foi administrado em uma dose de 10 mg/kg p.o. e amostras de plasma, cérebro e CSF foram coletadas 2, 4, 6 e 8 horas pós-dose, as seguintes concentrações foram medidas (Tabela 4): è Tabela 4: Dados para o Exemplo 1'

à Time (h) {Pl] ('ÍM) '[Pl,,] (nhí) [B'j (nM) '[B',] (nM) [csFj (nM) Br,,,:Pl,,, Br,,:P1, CSF:Pl,, 2 462 23 2338 30 23 5,1 1,3 1,0 4 298 15 1550 20 18 5,2 1,3 1,2 6 401 20 1492 19 10 3.7 1.0 0,5 8 228 ll 1194 16 18 5,2 1,5 1,6 I Calculado pela multiplicação de [jpl] por Pl Fu. 2 Calculado pela multiplicação de [Br] por Br Fu.

A partir do estudo acima, o Exemplo ] apresentou uma 5 redução de 64 °/) e 70 °/) de Aj340 no cérebro em 4 e 6 horas respectivamente e uma redução de 80 °/) e 85 °'6 de AB40 no CSF em 4 e 6 horas respectivamente. Desta maneira, os compostos da presente invenção apresntou efluxo de Pgp diminuído com relação às invenções prévias enquanto demonstra-se a eficácia do CNS. A eficácia é, desta maneira 10 atingida com concentrações de plasma circulantes inferiores.

Método Para a Determinação de Ligação de Proteína de Plasma (PPB) e Ligação do Tecido Cerebral (BTB) Preparação de Composto Os compostos foram dissolvidos em DMSO para dar um 1 mg 15 de base livre/mL de soIução, após a dissolução adicional de 100 µg/niL em acetonitrila (100 µL de 1 mg/mL em 900 µL de acetonitrila).

Preparação de Matriz Na manhã da diálise, plasma e cérebro de rato Sprague Dawley macho, previamente armazenado a -80°C foram descongelados em 20 temperatura ambiente. O plasma foi chegado quanto ao pH e se necessário, ajustado ao pH 7,4 com 1M HCl. O plasma foi então centrifügado (2000 g por lO min) e os cérebros diluidos coin 2 nilj de soIução salina tamponada com fosfato (pH 7,4) por grama de tecido e homogeneizado usando-se um homogeneizador mecânico. Uma alíquota (10 µL) da solução de composto de 25 acetonitrila 100 µg/niL foi então adicionada a 1 niL de homogenado de plasma e cérebro e submetido ao turbilhonamento misto para dar uma concentração de composto fmal de 1 µg/mL na matriz.

Preparação de Placa RED A placa de Diálise de Equilíbrio Rápido (RED) (Thermo Scientific) foi preparada de acordo com as instruções do fabricante, isto é, a ' 5 placa de base foi embebida em 20 °/) (V/V) de etanol por 10 minutos e então enxaguada duas vezes com água desionizada antes de ser deixado secar.

A placa de base foi então enchida com o número apropriado de inserções descartáveis (n = 3 por composto) (Thermo Scientific) e matriz contendo 1 µg/mL de composto adicionado na câmara de matriz das inserções (200 µL) e

10 uma alíquota (350 µL) de PBS adicionado à câmara do tampão.

A placa foi então coberta com um adesivo e incubado em ar a 37° C por 6 h com agitação ern 130 rjpm.

Amostragem Seguindo a incubação de 6 h, o selo foi removido e uma

15 alíquota (50 µL) retirada das câmaras de PBS e dispensadas em tubos Micronics.

Também, uma ajíquota (50 µL) foi removida das câmaras de matriz e colcoadas em tubos Micronics separados.

Plasma e cérebro foram então comparados na matriz com 50 µL de PBS isento de medicamento e as amostras de PBS com 50 µL da matriz isenta de medicamento

- 20 correspondente, para dar composições e volumes tinais iguais (100 µL). Análise de amostra As amostras foram vortex misturadas e uma alíquota (300 µL) de acetonitrila contendo 0,1 °/) de ácido fórmico e I00 ng/mL de um padrão intemo apropriado adicionado.

As amostras foram então misturadas e 25 centrifúgadas 2000 g por 15 min) e uma alíquota do sobrenadante (100 µL) removida em uma placa de 96 resevatórios e diluída com um volume igual de água pronta para a análise por LC-MS/MS.

O seguinte dado foi obtido pelos seguintes compostos no ensaio acima (Tabela 5).

Tabela 5: Composto PPB de rato (°/0) Plasma de k de rato BTB de rato (%) Fu de cérebro de rato ) Exempio Comparativo 4 I 65,0 l 0,350 I 93,3 I 0,067 . : Exemplo 1 I 95,1 I 0,049 ) 98,7 I 0,013 I Exemplo 8 I 89,6 | 0,104 I 97,8 I 0,022 Os dados representam uma média cie n=3 replicados fü _ fração não ligada í A partir dos dados apresentados neste acima serão aparentes aquela pessoa habilitada na técnica que os compostos dos Exemplos 1 e 8 . atingem uma redução similar do cérebro Af340 aqueie do Exempjo 5 Comparativo 4, mas com uma concentração de plasma inferior e concentração de plasma livre. Este é vantajosós e indica que os compostos da invenção terão melhor eficácia ou similar em concentrações menores do que os compostos do WO2009/091016 e consequentemente serão menos semelhante para causar os efeitos colaterais perifericamente mediados indesejados, ta! 10 como efeitos cardiovasculares, fosfolipidose, toxicidade de figado, toxicidade renal e toxicidade gastrointestinal.

Avaliação dos efeitos no intervalo QTc nos porquinhos-da- índia Os porquinhos da índia Dunkin-Hartley machos foram pesados 15 e anestesiados usando 4 °/) de isoflurano em carbogênio. A anestesia foi mantida a 1,5 °/, de isoflurano e os animais foram mantidos sob anestesia para a duração do estudo. Xilazina a 2mg/kg i.m. foi administrada no membro traseiro como um agente bradicárdico para capacitar a detecção da prolongação QTC pelo sofiware.

20 A artéria carótida e veia jugular foram canuiadas com as linhas contendo solução salina heparinizada e um 3-lead ECG conectado e monitorado usando o software LabCbm Pro. Os animais foram deixados estabilizar por 30 minutos após a finalização do procedimento cirúrgico, antes da iniciação de um veículo de infúsão i.v. (5 °/) de DMSO/90 °'6 de MilliQ/5 25 °4 de O,IN de HCl) a partir do tempo zero (taxa de infúsão = 0,2 ml/kg/min). Em 10 mins, uma amostra de sangue periférica foi coletada pela análise PK

(150 ul; todas as seringas de coIeção foram heparinizados). Em 12 mins, infüsão de medicamento foi iniciado @ 2,0 mg/kg/lOmin i.v.. A dosagem foi aumentada a 6,0 mg/kg/lO min, então 20mg/kg/lOmin i.v., com um período . de infúsão de 10 minutos e dois minutos de amostragem de sangue em cada " 5 dosagem. Após a dosagem final, uma amostra sanguínea foi tirada e um segundo veículo de infijsão iniciado. Oito minutos depois urna amostra de sangue terminal foi coletada pela análise de plasma PK e o animal morto por um método de lista 1. As mudanças QTc (Bazett's) foram analisadas usando o lO sofware LabChart Pro. QTc não foi mudado até a dosagem/concentração maior testada, que corresponde a uma concentração de piasma não ligada de 9503 nM para o exemplo 8 e 296 nNl para o exemplo l. Avaliação dos efeitos no intervalo QTc em cães beagle Os cães beagle machos foram pesados e injetados com

K 15 tiopental sódico para a indução da anestesia. A anestesia foi mantida com uma mistura de 1-J,5 °/) de isoflurano e oxigênio e os animais mantidos sob respiração artificial e anestesia usando isoflurano para a duração do estudo. A artéria carótida e veia safena foram canuladas com linhas contendo solução salina heparinizada e um LII ECG conectado e monitorada 20 usando o sistema de polígrafo. Os animais foram deixados estabilizar por 30 minutos antes da infüsão da solução de composto ea infúsão por intermédio da cânula foi iniciado a partir do tempo zero com I mg/kg/lO min. A dosagem foi aumentada a 3 mg/kg/lO min, então lO mg/kg/lO min. Uma amostra sangumea arterial foi coletada após cada dosagem pela análise PK. 25 QTc não foi mudado até a concentração/dosagem maior testada, que correspondente a uma concentração de plasma não ligado de 4128 nMporexemplo 8 e 1329 nMporexemplo 1. A seguir, os métodos para a preparação do composto da fÓrmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável deste de acordo com a

) 48 presente invenção será descrita.

A. Método A de preparação gera!: í^j

I Fj° ^(') °;°r A(") °J""°" A(--) °QL-A, « ':,,,' ":jj '7j ':J ,,,,", ~ j t'^c,

E , ,,, " :jj, O 'O ,,,,,, Jí:NH2 . :7 F'è '-i: ' F"j H i

F F

F OH A-(5) A-(6) A-(7) U'jjNrhj ^,))ÍÚ "j Ijjhz

H Fè OH f f A-(8) F F A-(9) A-(1O) X i ,i NO, X i l NO2 X i ,| NH, A-(x) F^r A-(xi) fAY A-(xii) FA~, ":j>f"' ':í7sÀ'"°' ":,Ár'°' A-(11) A-(12) F A-(13) o¶A::]r" oÁy" X (<1 NH ' X i I NH A-(xiii) F ^ } A-(xiv) FA~l . 'Y q rN~

S NHBOC " F, , C"Y'"r"" S A-(15) F | H F A-(14) F F, H Na fórmula, X, Y e A são como definidos acima.

O método de preparação geral A é um método para a 5 preparação de um composto A-(l5) que corresponde ao composto (I) de acordo com a presente invenção a partir do composto A-(l) como um material bruto através das etapas múltiplas da etapa A-(i) a etapa A-(xiv).

O composto A-(1) é comerciahnente disponível.

Etapa A-(i):

Esta etapa e uma etapa para obter um composto A-(2) pela abertura do epÓxido A-(l) com um sulfônio ilida para gerar um alcóxido alílico intermediário que é então alquilado para dar o composto A-(2). Aquela pessoa habilitada na técnica apreciará que esta transfomação pode ser " 5 conduzida em um pote ou como duas reações individuais. Aquela pessoa habilitada na técnica apreciará os beneficios e descontos de uma reação de pote comparado para conduzir duas reações separadas e escolhe o melhor método para seus requerimentos consequentemente.

Especificamente, o epóxido A-(l) pode ser aberto pelo ânion 10 de iodeto de thmetilsulfÔnio e perda resultante de dimetilsulfeto para dar o alcóxido alilico correspondente. Iodeto de trimetilsulfônio pode ser desprotonado com uma base adequada, por exemplo, butil lítio. O sojvente usado na reação não é particularmente limitado a medida que este não interfere com a reação. Exemplos de solventes adequados incluem THF.

15 Aquela pessoa habilitada na técnica apreciará que a palavra solvente neste exemplo é usada para indicar o líquido em que a reação é efetuada e que os reagentes não podem ser dissolvidos. Preferivelmente a reação deve ser conduzida abaixo da temperatura ambiente, preferivelmente -30 a 20°C. Na adição da reação pode ser aquecida em temperatura ambiente à reação de 20 filtração. Um tempo de reação não é particularmente limitado e é usualmente 5 minutos a 24 horas, preferivelmente 1 a 6 horas. Aquela pessoa habilitada na técnica apreciará que o alcÓxido gerado a partir desta reação pode ser reagido com um agente de alquilação diretamente, tal como bromoacetato de terc-butila e que esta reação pode 25 proceder com ou sem solventes adicionais. Se os solventes adicionais são requeridos à reação de filtração, então os soIventes, tais como DMF ou NMP são adequados. A temperatura de reação não é particularmente limitada. As Temperaturas de reação adequadas incluem temperatura ambiente a 80°C, preferivehnente temperatura ambiente. Um tempo de reação não é particuiarmente limitado e é usualmente 5 minutos a 1 semana, preferivelmente i - 48 horas.

Aquela pessoa habilitada na técnica apreciará que o alcóxido . intemediário deve ser extinto, isolado e purificado então submetido às ' 5 condições de alquilação independentes. Esta reação pode ser realizada sob as mesmas condições como aqueles usualmente usados na reação de O- alquilação de um c.omposto de álcool (tal como as condições descritas em · Tetrahedron Lett. 46 (2005) 45, 7751-7755). Nesta reação, o composto A-(2) pode ser obtido pela adição de uma base tal como hidreto de sódio em uma 10 solução do álcool intermediário em THF para preparar um alcóxido e então reagindo o alcóxido com o bromoacetato de terc-butila, por exemplo. O ' solvente usado na reação não é particularmente limitado a medida que este não inibe a reação e permite o material de partida a ser dissolvido neste em uma certa extensão. Exemplos do solvente incluem solventes tal como THF, 15 DMF e sulfÓxido de dimetija. A reação pode ser realizada por causar 1 a 3 equivalentes de uma base apropriada para atuar na presença de um tal solvente. Exemplos da base usada incluem hidreto de sódio, hidreto de potássio e t-butoxipotássio. Um tempo de reação não é particularmente limitado e é usualmente 0,5 a 72 horas e preferivelmente 0,5 a 12 horas. A 20 temperatura de reação é usualmente -20°C a 50°C.

Um resultado mais preferido tal como um rendimento meihorado jpode ser atingido pela adição de um sal tal como iodeto de tetrabutilamônio nesta reação.

Etapa A-(ii): 25 Esta etapa é uma reação sequencias de duas etapas para obter o composto A-(3) a partir do composto A-(2) pela desproteção do grupo de éster então formando um Weinreb amida.

Especificamente, o éster de terc-butílico do composto A-(2) pode ser desprotegido sob as mesmas condições como aqueles geralmente usados na desproteção de um composto de éster de terc-butílico (tal como as condições descritas em um documento tal como T. W. Greene and P. G. M. Wuts, "Protective Groups in Organic Chemistry, Third Edition", John Wiley ± & Sons (1999), p. 404-408). Nesta reação, o composto A-(2) pode ser reagido ' 5 com um ácido apropriado em um solvente adequado, tal corno ácido fÓrmico, como solvente e ácido, por exemplo. O solvente usado na reação não é particularmente' limitado a medida que este não inibe a reação e pennite o material de partida a ser dissolvido neste em uma certa extensão. Um tempo . de reação não é particularmente limitado e é usualmente 0,5 a 72 horas e lO preferivelmente 0,5 a 24 horas. A temperatura de reação é usualmente temperatura gelada a 60°C. O ácido intermediário pode então ser transformado ao Weinreb amida (Tetrahedron Lett. 1981, 22, 3815) pela reação de Cloridreto de N,O- dimetilidroxilamina sob as condições de formação de amida padrão, isto é 15 pela condensação do ácido intermediário com cloridreto de N,O- dimetilidroxilamina usando um agente de condensaç.ão. Altemativamente, esta etapa e uma etapa para obter um composto A-(3) pela condensação do ácido intermediário com cloridreto de N,O-dimetilidroxilamina pela reação de acilação. 20 A reação de condensação do ácido intermediário - com cloridreto de N,O-dimetilidroxilamina usando um agente de condensação pode ser realizado sob as mesmas condições como aquejes usualmente usados e descritos nos seguintes documentos. Exemplos do método conhecido inclui aquele em Rosowsky et al.; J. Med. Chem., 34 (1), 227-234 (1991), 25 Brzostwska et al.; Heterocycles, 32 (10), 1968-1972 (1991) e Romero et al.; J. Med. Chem., 37 (7), 998-1014 (1994). O cloridreto de N,O-dimetilidroxilamina pode ser uma forma livre ou um saj.

O solvente nesta reação não é particularmente limitado a medida que este não inibe a reação. Exemplos do soIvente incluem tetraidrofúrano, 1,4-dioxano, acetato de etila, acetato de metila, diclorometano, clorofórmio, N,N-dimetilfomamida, tolueno, acetonitrila e 2 [ xileno. Exemplos do agente de condensação incluem CDT (N)N'-carbonildi- ' 5 imidazol), Bop (hexafluorofosfato de 1H-1,2,3-benzotriazol-1- ilóxi(tri(dimetilan1ino))fosfÔnio), WSC (cloridreto de l-etil-3-(3- dimetilaminopropil)carbodi-imida), DCC (N,N-dicicloexilcarbodi-imida), dietilfosforil cianida, PyBOP (benzotriazolj-ilóxitris(pirrolidino)fosfônio hexafluorofosfato) e EDC·HC1 (cloridreto de l-etil-3-(3- 10 dimetilaminopropil)carbodi-imida). As condições adequadas incluem um agente que ativa o ácido, tal como N,N'-carbonil di-imidazo!. Um equivalente em um excesso amplo de cloridreto de N,O-dimetilidroxilamina é usado com relação ao ácido intermediário. Um equivalente em um excesso amplo de uma base orgânica tal como üietilamina pode ser adicionada onde necessário.

15 Um tempo de reação não é particularmente limitado e é usualmente 0,5 a 72 horas e preferiveimente 0,5 a 24 horas. A temperatura de reação varia de acordo com um material bruto usado, o solvente e outros e não é particularmente Jimitado. A temperatura, de gelada até a temperatura de refluxo do solvente é aceitável, de gelada até a temperatura ambiente é 20 preferível. Etapa A-(iii): Esta etapa e uma etapa para obter um composto A-(4) pela reação de um reagente organometálico (reagente de arillítio ou um reagente de Grignard) com o composto A-(3) como descrito em Tetrahedron Lett.

25 1981,22,3815. A reação nesta etapa pode ser realizada sob as mesmas condições aquela descrita em Tetrahedron Lett. 1981,"22, 3815, por exemplo.

O reagente de arillítio (incluindo heterocíclico) ou o reagente de Grignard (incluindo heterociclico) pode ser preparado por um método conhecido em uma pessoa habilitada na técnica.

Especincamente, o reagente de lítio de fenil correspondente ou reagente de fenil magnésio (Grignard) pode ser preparado peja troca de metal halogênio entre um composto de . ' haleto arila e reagente organometálico A comercialmente disponível ta! como

" 5' um reagente de alquilítio tal como n-, sec- ou terc-butillítio ou uín reagente de Grignard tal como brometo de isopropilmagnésio, ou magnésio metálico, por exemplo.

O solvente usado nesta etapa varia de acordo com um material de partida e o reagente usado e não é particulamente limitado a medida que 10 este não inibe a reação, permite o material de partida a ser dissolvido neste em uma certa extensão e é sempre inerte durante a reação.

Os Exemplos preferidos do solvente incluem solventes orgânicos tal como éter dietílico, tetraidrofürano, 1,4-dioxano, l,2-dimetoxietano, benzeno e tolueno e solventes misturados destes.

Um tempo de reação não é particularmente 15 limitado e é usualmente 0,1 a 48 horas e preferivelmente 0,1 a 12 horas.

A temperatura de reação varia de acordo com um material de partida, o reagente usado e outros e é preferivelmente mantido a ser baixo, por exemplo, a -78 a - 60°C.

Etapa A-(iv):

20 Esta etapa e uma etapa para obter um composto A-(5) pela oximação do composto A-(4). A reação nesta etapa pode ser realizada sob as mesmas condições como aqueles usualmente usados na reação de oximação de um composto de carbonila tal como as condições descritas em Org.

Lett. 9 (2007) 25 5, 753-756, Tetrahedron: Asymmetry 5 (1994) 6, 1018-1028 and Tetrahedron 54 (1998) 22, 5868-5882. Especificamente, o composto A-(5) pode ser obtido pela reação do composto A-(4) com hidroxilamina ou um sal de hidroxilamina (tal como cloridreto de hidroxilamina ou sulfato de hidroxilamina) na presença de uma base ou na ausência de uma base, por exemplo. O solvente usado nesta reação não é particularmente limitado a medida que este não inibe a reação. Exemplos preferidos do solvente incluem

Z solventes orgânicos tal como etanol, metanol, tetraidrofúrano, 1,4-dioxano, ' 5 l,2-dimetoxietano e diclorometano e misturas destes solventes e água. Exemplos da base usada inclueín acetato de sódio, piridina, hidrÓxido de sódio, hidróxido de césio, hidrÓxido de bário e 2,6-lutidina. Um tempo de reação não é particularmente limitado e é usualmente 5 minutos a 24 horas e preferivelmente 5 minutos a 12 horas. A temperatura de reação é usualmente - lO 20°C a temperatura de reíluxo de solvente e mais preferivehnente O°C em temperatura de refluxo de solvente. Etapa A-(v): Esta etapa e uma etapa para obter um composto A-(6) por uma cicloadição iíntramolecular térmico de alquenij oxima A-(5). 15 A reação é conduzida na presença de um aditivo, por exemplo, hidroquinona. O solvente usado nesta reação não é particularmente limitado a medida que este não inibe a reação. Os solventes de reação adequados incluem solventes de ebulição alta tal como xilenos. A temperatura de reação 20 não é particularmente limitada e é usualmente 80 a 200°C ou temperatura de refluxo de solvente. Um tempo de reação não é particularmente limitado e é usualmente 0,5 a 48 horas e preferivelmente 0,5 a 24 horas. Etapa A-(vi): Esta etapa e uma etapa para obter um composto A-(7) para 25 submeter o composto A-(6) pela reação de clivagem redutiva da ligação deN-O. A reação de clivagem redutiva da ligação de N-O pode ser realizada sob as condições usando ácido ac.ético-zinco, um catalisador metálico tal como óxido de hidrogênio-platina, ou hidreto de lítio alumínio,

por exemplo.

A reação usando zinco tal como ácido acético-zinco pode ser realizada sob as mesmas condições aquela descrita em J. Org. Chem. 2003, . 68, !207-1215 and Org. Lett. 7 (2005) 25, 5741-5742, por exemplo.

" 5 Exemplos do ácido usado incluem ácido acético, ácido fórmico e ácido clorídrico. O solvente usado na reação não é particulannente limitado a medida que este não inibe a reação e permite o material de partida a ser dissolvido neste em uma certa extensão. Exemplos do soivente incluem h metanol, etanol, l,4-dioxano, THF e água. O ácido acima também pode ser lO usado como um solvente. A temperatura de reação é usualmente -20°C a temperatura de refluxo de solvente e preferivelmente temperatura gejada a temperatura de refluxo de solvente. Um tempo de reação não é particularmente limitado e é usualmente 5 minutos a 48 horas e preferivelmente 5 niinutos a 24 horas. 15 A reação usando um catalisador metálico tal como óxido de hidrogênio-platina pode ser realizada sob as ínesmas condições aquela descrita em Tetrahedron: Asymmetry 5 (1994) 6, 1018-1028 and Tetrahedron, Vol. 53, No. 16, pp 5752-5746, 1997, por exemplo. O composto A-(7) pode ser obtido pela hidrogenação do composto A-(6) usando óxido de platina 20 como um catalisador em um solvente tal como metanol, por exemplo. A reação usando hidreto de lítio alumínio pode ser realizada sob as mesmas condições aquela descrita em Bull. Chern. Soc. Jpn., 66, 2730- 2737 (1993), por exemplo. O composto A-(7) pode ser obtido pela redução do composto A-(6) usando hidreto de iitio alumínio em um sojvente tal como 25 éter, por exemplo. Etapa A-(vii): Esta etapa e uma etapa para obter um composto A-(8) a partir do composto A-(7). O derivado de tiouréia A-(8) pode ser obtido a partir do composto A-(7) por um método conhecido em uma pessoa habilitada na técnica. O composto A-(8) pode ser obtido nesta etapa pela reação do composto A-(7) com isotiocianato de benzoila em um soivente ta! como 4 ' diclorometano ou tolueno. Esta reação pode ser realizada sob as mesmas " 5 condições aquela descrita em J. Med. Chem. 1990, 33, 2393-2407, por . exemplo. O solvente usado na reação não é particularmente limitado a medida que este não inibe a reação e permite o material de partida a ser dissolvido neste em uma certa extensão. Exemplos do solvente incluem diclorometano, cIorofórmio, tolueno, 1,4-dioxano e THF. A temperatura de reação é 10 usualmente -20°C a temperatura de refluxo de solvente e preferivehnente temperatura gelada a temperatura de reíluxo de solvente. Um tempo de reação não é particularmente limitado e é usuajmente 5 minutos a 48 horas e preferivehnente 5 minutos a 24 horas.

Etapa A-(viii): 15 Esta etapa é um método de obter um composto A-(9) pela ciclização do composto A-(8). Nesta reação, o composto A-(8) pode ser submetidos à ciclização sob várias condições para obter o composto A-(9) pela ativação do álcooj do composto A-(8). 20 Por exemplo, o composto A-(9) pode ser obtido nesta reação pelo aquecimento do composto A-(8) em um solvente tal como metanol na presença de um ácido ta! como ácido ctorídrico concentrado, por exemplo. O solvente usado na reação não é particularmente limitado a medida que este não inibe a reação e permite o material de partida a ser dissolvido neste em 25 uma certa extensão. Exemplos do 'solvente incluem solventes tal como metanol, etanoj, l-propanol e água, solventes misturados destes, e ácidos usados como um solvente. A reação pode ser realizada pelo uso de um equivaiente em um excesso amplo de um ácido apropriado para atuar na presença ou ausência de um tal solvente. Exemplos do ácido usado incluem ácido cloridrico concentrado, ácido bromídrico, ácido sulfúrico, ácido triAuoroacético, ácido metanossulfònico, ácido trifluorometanossulfônico e misturas destes. Um tempo de reação não é particularmente limitado e é h usualmente 0,5 a 72 horas e preferivelmente 0,5 a 24 horas. A temperatura de ' 5 reação é usualmente temperatura gelada a temperatura de refluxo de solvente. Altemativamente, o composto A-(9) pode ser obtido peia reação do composto A-(8) com anidrido trinuorometanossulfônico em um solvente tal como diclorometano na presença de uma base tal como piridina.

O solvente usado na reação não é particularrnente limitado a medida que este 10 não inibe a reação e pemite o material de partida a ser dissolvido neste em uma certa extensão. Aquela pessoa habilitada na técnica apreciará que um solvente não é sempre requerido e a reação também pode ser conduzida na ausência de um solvente, por exemplo, quando a base é piridina. Exemplos do solvente incluem solventes tal como diclorometano, clorofórmio, 1,2- 15 dicloroetano, THF, 1,2-dimetoxietano e tolueno e solventes misturados destes. A reação pode ser realizada usando 1 a 20 equivalentes de uma base apropriada em um tal solvente. Exemplos da base usada incluem piridina, 2,6- lutidina, carbonato de sódio, carbonato de potássio e misturas destes. Um tempo de reação não é particularmente limitado e é usualmente 0,5 a 24 horas 20 e preferivelmente 0,5 a 12 horas. A temperatura de reação é usualmente -78°C em temperatura ambiente. Etapa A-(ix): Esta etapa é um é um método de obter o composto A-(l0) pela desproteção do gmpo de proteção do composto A-(9). O composto A-(l0) 25 pode ser obtido sob condições de desproteção conhecidas em uma pessoa habilitada na técnica.

Quando o grupo de proteção é um grupo de benzoila, o composto A-(1O) pode ser obtido nesta reação pelo aquecimento do composto A-(9) em um solvente tal como metanol na jpresença de uma base tal como

DBU, por exemplo.

Esta reação pode ser realizada sob as mesmas condições aquela descrita em Synth.

Commun. 32 (2), 265-272 (2002), por exempjo.

O - solvente usado na reação não é particulmnente limitado a medida que este

. não inibe a reação e permite o material de partida a ser dissolvido neste em

" 5 uma certa extensão.

Exemplos do solvente incluem soiventes tal como metanol, etanol e l-propanol.

A reação pode ser realizada usando l a 20 equivalentes de uma base apropriada em um tal solvente.

Exemplos da base usada incluem DBU.

Um tempo de reação não é particularmente limitado e é usualmente 0,5 a 2À horas e preferivelmente 0,5 a 12 horas.

A temperatura de lO reação é usualmente temperatura ambiente em temperatura de refluxo de solvente.

Altemativamente, o composto A-(l0) pode ser obtido nesta reação pelo aquecimento do composto A-(9) com uma base inorgânica tal como carbonato de potássio, por exemplo.

O solvente usado na reação não é 15 particulannente limitado a medida que este não inibe a reação e permite o material de partida a ser dissolvido neste em uma certa extensão.

Exemplos do solvente incjuem solventes tal como metanol, etano! e l-propanol.

A reação pode ser realizada usando 1 a 20 equivalentes de uma base apropriada em um tal solvente e preferivelme.nte um excesso leve é usado.

Exemplos da 20 base usada incluem carbonato de potássio.

Um tempo de reação não é particularmente limitado e é usualmente 0,5 a 24 horas e preferivelmente 0,5 a 12 horas.

A temperatura de reação é usualmente temperatura ambiente em temperatura de refluxo de solvente e preferivelmente 50 a 1OO°C.

Aquela pessoa habilitada na técnica apreciará que o solvente selecionado limitará a 25 temperatura de reação por sua temperatura de refluxo.

Exemplos de solventes adequados incluem submeter em refluxo o metanol.

Etapa A-(x): Esta etapa e uma etapa para obter o composto A-(l1) pela reação de nitração do composto A-(1O). Nesta reação de nitração, o composto

A-(l1) pode ser obtido a partir do composto A-(l0) por um método conhecido em uma pessoa habilitada na técnica. Exemplos do agente de nitração usado

Y na reação incluem nitrato de potássio/ácido sulfürico concentrado, fúmigação de ácido nitrico/ácido sulfürico concentrado e fümigação de ácido " 5 nitrico/anidrido acético. Os solventes adequados para a reação incluem ácido triffuoroacético. A temperatura de reação não C particularmente limitada e é usualmente -20°C em temperatura ambiente e temperaturas de reação preferíveis incluem 0 a l0°C. Etapa A-(xi): 10 Esta etapa e uma etapa para obter um composto A-(l2) por t- butoxicarbonilação do grupo amino do composto A-(l1). A reação pode ser realizada sob as mesmas condições como aqueles geralmente usados em t-butoxicarbonilação de um composto amino tal como as condições descritas em um documento tal como T. W. Greene and 15 P. G. M. Wuts, "Protective Groups in Organic Chemistry, Third Edition", John Wiley & Sons (1999), P. 518-525. O composto A-(12) pode ser obtido pela reação do composto A-(1l) com dicarbonato de di-terc-butila usando em um solvente tal como tetraidrofúrano, por exemplo. Os Solventes altemativos incluem acetonitrila e DMF. Aquela pessoa habijitada na técnica apreciará . 20 que uma base também pode ser adicionada em uma mistura de reação, embora não seja essencial. Os exemplos adequados de uma base incluein, mas não limitado a trietilamina e di-isopropiletilarnina. A temperatura de reação não é particularmente limitado e é usualmente em temperatura ambiente em refluxo e preferivelmente temperatura ambiente a 60°C. 25 Etapa A-(xii): Esta etapa e uma etapa para obter um composto A-(13) a partir do composto A-(12). O composto A-(l3) é sintetizado pela redução do composto nitro A-(l2) por um método de síntese conhecido em uma pessoa habilitada na técnica.

Exemplos do método incluem redução pela hidrogenação catalitica usando um catalisador metálico nobre tal como niquel de Raney, paládio, rutênio, rÓdio ou platina.

Outros agentes de redução incluem cloreto de estanho, por exemplo.

Exempjos do solvente incluem solventes alcoólicos tal

" 5 como metanol, etanol e l-propanol, preferivelmente etanol.

Um tempo de reação não é particularmente limitado e é usualmente 0,5 a 24 horas e preferivelmente 0,5 a 18 horas.

A temperatura de reação é usualmente temperatura ambiente.

Condições de reação de redução altemativa incluem reação com o ferro com um aditivo tal como cloreto de amônio ou ácido

10 clorídrico, em um solvente alcoójico tal como etanol, em uma temperatura de reação apropriada, por exemplo, 65°C.

Etapa A-(xiii): Esta e uma etapa para obter um composto A-(14) a partir do composto A-(13) pela condensação do composto A-(13) com um ácido 15 carboxílico e um agente de condensação.

A reação de condensação pode ser realizada sob as mesmas condições como aqueles usualmente usados e descritos nos seguintes documentos.

Exemplos do método conhecido inclui aquele em Rosowsky et al.; J.

Med.

Chem., 34 (1), 227-234 (1991), Brzostwska et al.; Heterocycles, 32 (10), 1968-1972 (1991) e Romero et al.; J. 20 Med.

Chem., 37 (7), 998-1014 (1994). O composto A-(13) pode ser uma forma livre ou um saj.

O solvente nesta reação não é particularmente limitado a medida que este não inibe a reação.

Exemplos do solvente incluem tetraidrofürano, l,4-dioxano, acetato de etila, acetato de metila, 25 diclorometano, clorofórmio, N,N-dimetilfomamida, tolueno, acetonitrila e xileno.

Exemplos do agente de condensação incluem CDl (N,N'-carbonildi- imidazol), Bop . (hexafluorofosfato de 1H-l,2,3-benzotriazol-l- ilóxi(tri(dimetilamino))fosfônio), WSC (cloridreto de l-etil-3-(3- dimetilaminopropil)carbodi-imida), DCC (N,N-dicicloexilcarbodi-Mida),

6i dietilfosforil cianida, PyBOP (hexafluorofosfato de benzotriazol-l- ilóxitri(pirrolidino)fosfônio) e EDC·HC1 (cloridreto de 1-etil-3-(3- dimetilaminopropil)carbodi-imida). As condições adequadas incluem um t agente que ativa o ácido, tal como N,N'-carbonil di-imidazol. Um equivalente "' 5 em um excesso amplo do ácido pode ser usado com relação ao composto A- (13). Um equivalente em um excesso amplo de uma base orgânica tal como trietilamina ou N,N-di-isopropiletilaminy " pode ser adicionada onde necessário.

Um tempo de reação não é particulannente limitado e é 10 usualmente 0,5 a 72 horas e preferivelmente 0,5 a 24 horas. A temperatura de reação varia de acordo com um material bruto usado, o solvente e outros e não é particularmente limitado. A temperatura gelada a temperatura de refluxo de solvente é aceitável, gelada a temperatura ambiente é preferível. Altemativamente, o composto A-(l4) pode ser obtido pela 15 conversão do ácido carboxílico desejado ao cloreto do ácido correspondente e então reagudo com o cloreto ácido com o composto A-(l3). O cloreto ácido pode ser sintetizado por meios conhecidos em uma pessoa habijitada na técnica. Por exemplo, o ácido carboxílico desejado pode converter ao cloreto do ácido correspondente pela reação com cloreto de tionila na presença ou 20 ausência de um solvente, por exemplo, diclorometano, N,N'- dimetilimidazolina-2-ona, NMP ou DMF. Um a dois equivalentes ou um excesso amplo de cloreto de tionila pode ser usado com reiação ao ácido carboxílico desejado. A temperatura de reação é -30°C ao refluxo e preferivelmente -1O°C em temperatura ambiente. O cloreto ácido também 25 pode ser formado pelo tratamento do ácido com o cloreto de oxalila em um solvente tal como diclorometano na presença de DMF. A temperatura de reação é -30°C em temperatura ambiente e preferivelmente -l0°C em temperatura ambiente Altemativamente, o composto A-(l4) pode ser obtido pela conversão do ácido carboxílico desejado em um anidrido ácido misturado e então reagido pelo anidrido ácido misturado com o composto A-(J3). O anidrido ácido misturado pode ser sintetizado por meios conhecidos em uma pessoa habilitada na técnica. A síntese é realizada pela reação do ácido " 5 carboxílico desejado com um cloroformioato tal como cloroformioato de etila na presença de uma base tal como trietijamina, por exemplo. Um a dois equivalentes do clorofonnioato e a base são usados com relação ao ácido carboxílico desejado. A temperatura de reação é -30°C em temperatura ambiente e preferivejmente -20°C em temperatura ambiente. 10 A etapa de condensação do anidrido ácido misturado com o composto 1-(13) é realizada pela reação do anidrido ácido misturado com o composto 1-(13) em um solvente tal como diclorometano, tetraidrofúrano ou N,N-dimeti1fonnamida, por exemplo. Um equivalente em um excesso amplo do ácido carboxilico desejado é usado com relação ao composto A-(13).

15 Um tempo de reação não é particularmente limitado e é usuahnente 0,5 a 48 horas e preferivelmente 0,5 a 12 horas. A temperatura de reação é -20°C a 50°C e preferivelmente -20°C em temperatura ambiente. Altemativamente, o composto A-(i4) pode ser obtido pela conversão do ácido carboxílico desejado em um éster ativado e então 20 reagindo o éster ativo com o coinposto A-(13). A etapa de obter o éster ativo é realizada pela reação do ácido carboxílico desejado com um reagente da síntese ativa do éster em um solvente tal como l,4-dioxano, tetraidrofúrano ou N,N-dimetilforrnamida na presença de um agente de condensação tal como DCC, por exemplo. Exemplos do reagente de síntese do éster ativo incluem 25 N-hidroxisuccinimida. Um a 1,5 equivalentes do reagente de síntese do éster ' ativo e o agente de condensação são usados com relação ao composto A-(l3). Um tempo de reação não C particularmente limitado e é usualmente 0,5 a 48 horas e preferivelmente 0,5 a 24 horas. A ternperatura de reação é -20°C a 50°C e preferivelmente -

20°C em temperatwa ambiente. A etapa de condensação do éster ativo com o composto A-(13) . é realizada peja reação do éster ativo com o composto A-(13) em um solvente tal como diclorometano, tetraidroíürano ou N,N-dimetilformamida, por · 5 exemplo. Um equivalente em um excesso amplo do éster ativo é usado com relação ao composto A-(13). Um tempo de reação não é particularmente limitado e é usualmente 0,5 a 48 horas e preferivelmente 0,5 a 24 horas. A temperatura de reação é -20°C a 50°C e preferivelmente -20°C em temperatura ambiente.

10 Etapa A-(xiv): Esta etapa e uma etapa para obter o composto A-(15) pela desproteção do grupo t-butoxicarbonila do composto A-(14)- A reação pode ser realizada sob as mesmas condições como aqueles gerahnente usados na reação de desproteção de um grupo de t- 15 butoxicarbonila tal como as condições descritas em um documento tal como T. W. Greene and P. G. M. Wuts, "Protective Groups in Organic Chemistry, Third Edition", Jobn Wiley & Sons (1999), P. 518-525. O composto A-(i5) pode ser obtido pela reação do composto 1-(14) com um ácido forte, por exemplo, ácido trifluoroacético na presença ou ausência de um soIvente. Os 20 solventes adequados incluem diclorometano. Os ácidos altemativos incluem ácido clorídrico em solventes adequados, tal como diclorometano ou dioxano, por exemplo. A temperatura de reação é normalmente gelada a 80°C, preferivelmente temperatura ambiente. Um tempo de reação não C 25 particularmente limitado e é usualmente 5 minutos a 48 horas e preferivelmente 5 minutos a 12 horas.

B. Método de preparação geral B: Na fónnula, X, Y e A são como definidos acima.

O método de preparação geral B é um método altemativo para a preparação de um composto A-(15) que corresponde ao composto (I) de acordo com a presente invenção a partir do composto A-(l1) como um material bruto atravCs das etapas múltiplas da etapa B-(i) a etapa B-(ii). O composto A-(l1) pode ser preparado como descrito em " 5 Método de preparação geral A ou os exemplos. o Ü"~^X' x / I no, x i I nh2 Í n fAV b () FA"d b (") xY^rNH f:j!7"' ' ÇJÀ"' ' :)JNH, 'é ' f , h '1h)s a-(15) a-(11) f a-(16) f f

Etapa B-(i): Esta etapa e uma etapa para obter um composto A-(l6) a partir do composto A-(1l). O composto A-(16) é sintetizado pela redução do composto

10 nitro A-(1l) por um método de síntese conhecido em uma pessoa habilitada na técnica.

Exemplos do método incluem redução pela hidrogenação catalítica usando um catalisador metálico nobre tal como níquel de Raney, paládio, rutênio, ródio ou platina.

Outros agentes de redução incluem cloreto de estanho, por exemplo.

Exemplos do solvente incluem solventes alcoólicos tal

15 como metanol, etanol e l-propanol, preferivelmente etanol.

Um tempo de reação não é particularmente limitado e é usualmente 0,5 a 24 horas e preferivelmente 0,5 a 18 horas.

A temperatura de reação é usualmente temperatura ambiente.

Condições de reação de redução altemativa incluem reação com o ferro com um aditivo tal como cloreto de amônio ou ácido

20 clorídrico, em um solvente alcoólico tal como etanol, em uma temperatura de reação apropriada, por exemplo, 65°C.

Etapa B-(ii): Este e uma etapa para obter um composto A-(15) a partir do composto A-(16) pela condensação do composto A-(13) com um ácido carboxílico e um agente de condensação.

A reação de condensação pode ser realizada sob as mesmas condições como aqueles usualmente usados e descritos nos seguintes documentos.

Exemplos do método conhecido inclui aquele em Rosowsky et al.; J.

Med.

Chein., 34 (1), 227-234 (1991), ' 5 Brzostwska et al.; Heterocycles, 32 (lO), 1968-1972 (1991) e Romero et al.; J.

Med.

Chem., 37 (7), 998-1014 (1994). O composto A-(15) pode ser obtido pela conversão do ácido carboxílico desejado ao cloreto do ácido correspondente e então reagudo com o cioreto ácido com o composto A-(16). O cloreto ácido pode ser sintetizado iO por meios conhecidos em uma pessoa habilitada na técnica.

Por exemplo, o ácido carboxílico desejado pode converter ao cloreto do ácido correspondente pela reação com cloreto de tionila na presença ou ausência de um solvente, por exemplo, diclorometano, N,N'-dimetilimidazolina-2-ona, NMP ou DMF.

Um a dois equivalentes ou um excesso amplo de cloreto de tionila pode ser

15 usado com relação ao ácido carboxílico desejado.

Aquela pessoa habilitada na técnica apreciará que a escolha das condições de reação utilizadas pode afetar o resultado da reação, por exemplo, as condições podem afetar se o cloreto ácido reage com as porções de anilina ou a isotiouréia.

Aquela pessoa habilitada na técnica aprec.iará que reação de cloreto de tionila com um ácido 20 carboxíiico resulta na formação concomitante de 1 equivalente do ácido clorídrico além da formação do cloreto ácido desejado.

Aquela pessoa habilitada na técnica apreciará que as condições correntes não utilizam um método de remover deste modo ácido clorídrico formado.

O ácido clorídrico formado nesta reação pode ou não pode afetar a seletividade da reação que 25 pode ou não pode resultar em um resultado benéfico.

Um tempo de reação não é particularmente limitado e é usualmente 0,5 a 48 horas e preferivelmente 0,5 a 12 horas.

A temperatura de reação é -30°C ao reüuxo e preferivelmente -1O°C em temperatura ambiente.

O cloreto ácido também pode ser formado pelo tratamento do ácido com cloreto de oxalila em um solvente tal como diclorometano na presença de DMF. A temperatura de reação é -30°C em temperatura ambiente e preferivehnente -l0°C em temperatura ambiente. C. Método de preparação geraj C: " 5 O método de preparação geral C é um métòdo altemativo para a preparação de um composto A-(2) que é um intermediário sintético do composto (I) de acordo com a presente invenção a partir do composto A-(l7) como um material bruto através da etapa C-(i). O composto A-(17) é comercialmente disponível.

O "" . )7°Y A(17) 'lj, 10 Etapa i: Esta etapa e uma etapa para obter um composto A-(2a) de A- (!7) pela adição de um ânion de trifluorometila ao composto A-(l7) para gerar um alcóxido alílico intennediário ou intermediário do éter trimetilsílico que é então alquilado para dar o composto A-(2a). Aquela pessoa habilitada 15 na técnica apreciará que esta transformação pode ser conduzida em um pote ou como duas reações individuais. Aquela pessoa habilitada na técnica apreciará os benefícios e descontos de uma reação de pote comparado para conduzir duas reações separadas e escolhe o melhor método para seus requerimentos consequentemente.

20 Especificamente, acroleína A-(17) pode reagir com um ânion de trifluorometila que pode ser gerado pela ação dos reagentes de fluoreto tal como (triMorometil)trimetilsilano para gerar o alcÓxido alílico correspondente ou éter timetilsilil alíjico. O solvente usado na reação não é ' -.

particularmente limitado a medida que este não interfere com a reação.

25 Exemplos de solventes adequados incluem THF. As faixas de temperatura aceitáveis para a reação incluem -l0°C ao refluxo do solvente,

l 67 preferivelmente abaixo da temperatura ambiente. Aquela pessoa habijitada na técnica apreciará que certas reações químicas podem ser exotérmica e que as medições de controle devem ser colocadas no lugar do controle destas exotermias. Aquela pessoa habilitada na técnica também ajpreciará que a " 5 exotermia de reação pode ser controlada por permitir o solvente ao refluxo. Os precursores adequados para gerar ânion de triüuorometila incluem, mas não limitado a, (tnnuorometil)trimetilsilano (reagente de Rupert, Chem Rev ' 1997, 97, 757) e fontes de fluoreto adequadas incluem, mas não limitado a, fluoreto de tetrabutilamônio (TBAF), difluorotrifenilsilicato de 10 tetrabutilamônio (TBAT) e fluoreto de césio. Embora a temperatura de reação inicial pode estar abaixo da temperatura ambiente é aceitável permitir a temperatura de reação emergir o refluxo do solvente durante o curso da reação à reação de filtração. Um tempo de reação não é particularmente limitado e é usualmente 5 minutos a 24 horas, preferivelmente 1 a 6 horas.

15 Aquela pessoa habilitada na técnica apreciará que o alcÓxido gerado a partir desta reação pode ser reagido com um agente de alquilação diretamente, tal como bromoacetato de terc-butila e que esta reação pode proceder com ou sem solventes adicionais. Se os solventes adicionais são requeridos à reação de filtração, então os solventes tal como DMF ou NMP 20 são adequados. A temperatura de reação não é particulamente limitado. As temperaturas de reação adequadas incluem temperatura ambiente a 80°C, preferivelmente temperatura ambiente. Um tempo de reação não é particularmente Iimitado e é usualmente 5 minutos a l semana, preferivelmente 1 a 48 horas. Altemativamente, a reação de alquilação pode 25 ser conduzida sob as condições de transferência de fase, por exemplo, pela adição de uma base aquosa, por exemplo, hidróxido de sódio aquoso. Aquela pessoa habilitada na técnica apreciará quando estas condições forem aplicadas ao uso de um catalisador de transferência de fase ser requerida. Os catalisadores de transferência de fase adequados incluem, mas não limitado a,

sulfato de hidrogênio de tetrabutilamônio.

Aquela pessoa habilitada na técnica apreciará que o alcóxido intermediário deve ser extinto, isolado e purificado então submetido às condições de alquilação independentes. Esta reação pode ser realizada sob as " 5 mesmas condições como aqueles usualmente usados na reação de O- alquilação de um composto de álcool (tal como as condições descritas em Tetrahedron Lett. 46 (2005) 45, 7751-7755). Nesta reação, o composto A-(2a) pode ser obtido pela adição de uma base tal como hidreto de sódio em uma solução do álcool intennediário em THF para preparar um alcóxido e então 10 reagindo o alcóxido com o bromoacetato de terc-butila, por exempjo. O solvente usado na reação não é particularmente limitado a medida que este não inibe a reação e permite o material de partida a ser dissolvido neste em uma certa extensão. Exemplos do solvente incluem solventes tal como THF, DMF e sulfÓxido de dimetila. A reação pode ser realizada por causar ] a 3 15 equivalentes de uma base apropriada para atuar na presença de um tal solvente. Exemplos da base usada incjuem hidreto de sódio, hidreto de potássio e t-butoxipotássio. Um tempo de reação não é particulannente limitado e é usualmente 0,5 a 72 horas e preferivelmente 0,5 a 12 horas. A temperatura de reação é usualmente -20°C a 50°C.

20 Um resultado mais preferido tal como um rendimento melhorado pode ser atingido pela adição de um sal tal como iodeto de tetrabutijamônio nesta reação. Aquela pessoa habilitada na técnica aprêciará que esta reação gera um novo centro quiral no composto A-(2a) e que composto A-(2a) é o 25 mesmo como composto A-(2) exceto que o composto A-(2) seja enantiomericamente puro considerando composto A-(2a) ser racêmico. Será apreciado por aquela pessoa habilitada na técnica o compostos enantiomericamente puro A-(2) e o - composto racêmico A-(2a) são indistinguíveis pelas técnicas analíticas tal como RMN e cromatografia líquida, entretanto estes são distinguíveis pelo HPLC quiral. Aquela pessoa habilitada na técnica apreciará que os métodos mais apropriados para obter o . enantiômero desejado a partir do composto A-(2a) ou um intermediário sintético mais avançado ou composto final. Os métodos apropriados e ' 5 estágios apropriados da purificação enantiomérica incluem aqueles como detálhados nos exemplos.

Ainda em um aspecto, a presente invenção fomece um processo de preparação de um composto da fórmula (T), que compreende reagir um composto da fónnula A-(!6), em que X é definido na fórmula (I), lO com um composto da fórmula (IT) em que A e Y são como definidos na fórmula (I), ou um Éster alquílico Cl-6, anidrido ácido ou haleto ácido deste, para produzir um composto da fórmula (I) e opcionajmente convener o composto em um composto adicional da fórmula (I) ou fonnação de um sal farrnaceuticamente aceitável deste.

'y"N-N'2 Hojj' X)À :j' Jz"' ° "" . I'J)),, f,G H A-(16) f,G H 15 A reação de A-(16) e (II) pode ser convenientemente .

conduzido em um solvente (tal como tetraidrofúrano, 1,4-dioxano, acetato de etila, acetato de metila, diclorometano, cIorofórmio, N,N-dimetijformamida, tolueno, acetonitrila ou xileno) em uma temperatura na faixa de -30°C a 1OO°C. Em uma forma de realizaçào da invenção, o composto (II) pode 20 convenientemente tomar a forma de um haleto ácido (por exemplo, cloreto) como pode ser preparado pela reação do ácido com um reagente adequado (por exemplo,- cloreto de tionila) Será apreciado por aquela pessoa habilitada na técnica que no processo da presente invenção certos grupos füncionais tal como grupos de 25 hidroxila, carboxiia ou amino nos reagentes de partida pode ser necessário j 70 ser protegidos pelos grupos de proteção. Deste modo a preparação dos compostos da fórmula (I) podem adicionalmente envolver a incorjporação e rernoção de um ou mais grupos de proteção. A proteção e desproteção dos . grupos füncionais é por exemplo, descrita em T. W. Greene and P. G. M.

" 5 Wuts, "Protective Groups in Organic Chemistry, Third Edition", John Wiley & Sons (1999). A presente invenção será descrita mais especificamente abaixo com referência aos Exemplos, Exemplos de preparação e Exemplos de teste. Entretanto, a presente invenção não é limitada a este. As abreviações usadas lO nos Exemplos são abreviações convencionais conhecidas em uma pessoa habilitada na técnica. Algumas abreviações estão abaixo: LCMS, LC/MS & LC-MS (cromatografia iíquida/espectrometria de massa); MS (espectroInetria de massa); MDAP (autopurificação direcionada à massa); RMN (ressonância magnética 15 nuclear); s, d, t, dd, m, br (singleto, dupleto, tripleto, dupleto de dupletos, multipleto, amplo); Ph, Me, Et, Pr, Bu, Bn (fenila, metila, etila, propila, butila, benzila); THF (tetraidrofürano); DCM (diclorometano); DMF ÇN,N- dimetilformamida); h, hr, hrs (horas); EDC & EDAC (cloridreto de N-3- (dimetilaminopropil)-N'etilcarbodi-imida); DMAP (4-N,N- 20 dimetilaminopiridina); DMSO (dimetilsulfóxido); UV (ultravioleta); RT & rt (temperatura ambiente); Rt (tempo de retenção); min & mins (minutos); EtOAc (acetato de etiía); Et2O (éter dietílico); McCN (acetonitrila); EtOH (etanol); MeOH (metanol); PhCH3 & P11Me (tolueno); tlc (cromatograna de camada fina); TFA (ácido trifluoroáctico); NaOH (hidrÓxido de sódio); HCl 25 (ácido clorídrico); NMP (N-metilpirrolidinona ou l-metil-2-pirrolidinona); HPLC (cromatografia líquida de desempenho alto); TBAF (fluoreto de tetrabutilamônio); BuLi (n-butil lítio); PyBOP: hexafluorofosfato de benzotriazolj-ilóxitris(phrolidino)fosfÔnio; Pd2dba3: úis(dibenzilidenoacetona)dipaládio; Pd(t-Bu3P)2: bis(tri-t-

butilfosfino)paládio; TFA: ácido trifluoroacético; pTLC: cromatografia de camada fina preparativa; HRMS (espectrometria de massa de resolução alta); Tr ou Trt (tritil ou trifenilmetil). r Espectro de lH RMN foram registrados espectrômetro Bruker " 5 AM series operando em uma Eequência (relacionada) de 400 MHz. Mudanç.as químicas no espectro de ressonância magnética nuclear de próton são registradas em Ô unidades (ppm) relativo ao tetrametilsilano e constantes de ligação (J) são registradas em Hertz (Hz). Os padrões são indicados eomo s: singleto, d: dupleto, t; tripleto, br; amplo.

10 A "temperatura ambiente" nos seguintes Exemplos e Exemplos de preparação tipicamente refere-se a cerca de lO°C a cerca de 35°C. " °/)" indica °/) em peso a não ser de outra maneira especificada.

Os nomes químicos foram gerados a partir das estruturas químicas usando ChemBioDraw Ultra 11,0 e 12,0.

15 Descrição das figuras: A ngura 1 é um cromatograma típico de um isolamento quiral de HPLC do composto 1-(20). Exemplo de preparação 1 Síntese de ((4aS,5S,7aS)-7a-(5-amino-2-fluorofenil)-5- 20 (trifluorometil)-4a,5,7,7a-tetraidro-4HAúro[3,4-d] [1,3]tiazin-2-il)carbamato de terc-butila 1-(13) 1-(2) Síntese de {K2S)JJJ-trinuorobut-3-en-2-i]]óxi}acetato de terc-butila A uma suspensão de iodeto de trimetilsulfônio (1 íO g) em 25 THF (500 ML) a -30°C foi adicionada hexametildisilazida de lítio (530 mL, IN em THF) em porções durante 45 mins. Após agitação a -20°C por 20 mins, (S)-2-trifluorometijoxirano (37,97 g) foi adicionada na mesma temperatura durante 15 mins e a mistura foi deixada aquecer em RT e agitada por 3 horas. A pasta foi então adicionada em porções em uma solução gelada de bromoacetato de terc-butila (105,68 g) em NMP (200 niL). A mistura resultante foi deixada aquecer em RT e agitada por 2 dias, antes da diluição . com EtOAc (l L). A camada orgânic.a foi Iavada com bicarbonato de sódio (sat., aq., 4 x 400 mL), secada em MgSO4 e evaporada. O resíduo foi " 5 purificado pela cromatografia de coluna em gel de sílica (5 °/) de EtOAc em hexanos) para obter o composto do título (70,1 g) que foi usado na purificação sem a etapa subsequente. 'H-RMN (400 MHZ, CDCl,) Ô (ppm): 1,30 (s, 9 H) 3,83 -3,96 (m, 2 H) 4,14 -4,2! (m, I H) 5,34 -5,48 (m, 2 H) 5,56 - 5,71 (m, IH) 'r' d)j' _, jjl" fj :jJ F"é 1-(4) 1-(1) F 1-(2) F 1-(3) i; '-) O) é Fjj, , ÁJ fj O,""!_"" f'E '-{F F' 'F7ylH 1-(5) 1-(6) ,:)ÍZ C _ jjj _, :^iyNH2 F ,1 H H Fè H OH FF

FF 1-(8) 1-(9) 1-(10) / | NO2 / l NO2 i I NH, 'fjjjÍ"' 'F :'^jj""°' '>jY"°'

F I H F I H

F F 1-(11) 1-(12) F 1-(13) 10 1-(3) Síntese de (S)-N-metóxi-N-meti[-2-((1,l,]-tnnuorobut- 3-en-2-il)Óxi)acetamida {[(2S)-l,l,l-trif1uorobut-3-en-2-il]Óxi}acetato de terc-Butila (70,1 g, bruto) foi dissolvido em ácido fórmico gelado (200 mL). A mistura foi deixada aquecer em RT e agitar durante a noite. A mistura de reação foi então concentrada sob pressão reduzida, tolueno (200 mlj) foi adicionada, a mistura concentrada, antes da segunda adição de tolueno (200 mlj) e concentração em um Óleo.

O resíduo foi dissolvido em DCM (600 niL), esfíiado em um banho de gelo e N,N'-carbonil di-imidazol (35 g) foi

_ 5 adicionada em porções durante 20 mins.

ApÓs agitação por 45 mins, N, Cloridreto de O-dimetil hidroxilamina (22 g) foi adicionada e a mistura de

· reação foi deixada aquecer em RT e agitar durante a noite.

NaHCO3 saturado (500 niL) e salmoura (250 mL) foram então adicionados e a mistura extraída com EtOAC (3 x 750 mL). As porções orgânicas combinadas foram secadas 10 em MgSO4 e evaporadas.

O resíduo foi purificado pela cromatografia de coluna em gel de silica (1 °/) a 30 °/) de EtOAc em hexanos) para obter o composto do título (25,17 g). 'H-RMN (400 MHZ, CDCl,) Õ (ppm) 3,21 (s, 3

H), 3,71 (m, 3 H), 4,36 - 4,51 (m, 3 H), 5,54 - 5,69 (m, 2 H), 5,84 (ddd, j = 17,7, 10,4, 7,3 Hz, 1 H) 15 1-(4) Síntese de (S)J{2Auorofenil)-2-((1,l,l-trifluorobut-3- en-2-il)óxi)etanona Uma solução de n-butillítio em hexano (2,50 M; 90 niL) foi adicionada às gotas durante 25 mins em uma solução de 2- bromofluorobenzeno (40,35 g) em THF (250 niL) sob uma atmosfera N2 a - 20 78°C.

A solução de reação foi deixada aquecer em -60°C e agitada por 60 min. (S)-N-metóxi-N-metil-2-((1,l,l-trinuorobut-3-en-2-il)óxi)acetamida (40 g) em THF (25 niL) foi adicionada às gotas em uma solução de reação, e após agitação a -60°C por 2 h, NH,CI aquoso (100 mL) foi adicionada a uma solução de reação, seguido pelo aquecimento em RT.

Salmoura (200 mL) foi 25 adicionada a uma solução de reação e a mistura foi extraída com EtOAc (3 x 400 mL). As porções orgânicas combinadas foram secadas em MgSO4, evaporadas e o resíduo foi purincado pela cromatograna de coluna em gel de sílica (1 °/) a 10 °4 de EtOAc em hexanos) para obter o composto do título (33,59 g). 'H-RMN (400 MHz, CDCl,) lij (ppm): 4,40 (penteto, J 6,3 Hz, 1 H)

(3aR,4S,6aS)-6a-(2-nuorofenil)-4-(trinuorometil)hexaidronlro [3,4-c]isoxazol (28,76 g) foi dissolvido em ácido acético (200 niL) e a soiução foi esfíiada a O°C. Zinco (50 g) foi adicionado e a mistura de reação foi deixada aquecer e agitar em RT por 16 h. A mistura de reação foi então " 5 diluida com EtOAc (500 mlj) e filtrada através de celite, lavagem com 500 mL adicional de EtOAc. As porções orgânicas combinadas foram evaporadas, dissolvidas em clorofómio (200 mL), e Amônia (28 °/) aq., 250 rríL) foi lentamente adicionada. As camadas foram separadas e a porção aquosa ainda foi extraída com clorofórmio (2 x 250 mL). Os extratos orgânicos combinados 10 foram sec.ados em MgSO4 anidro e evaporada para produzir o composto do título (3 1,12 g) que foi usado na etapa subsequente sem purificação adicional.

'H-RMN (400 MHz, CDCl,) ô (ppm): 2,93 (ddd, j = 7,7, 4,9, 2,5 Hz, 1 H), 3,84 (dd,j = 12,4, 4,8 HZ, 1 H), 4,05 (dd, J= 9,2, 3,2 Hz, 1 H), 4,17 (dd, J= ]2,4,2,3Hz,1Hj),43l(d,j=93Hz,1Fn,4,72(quin,j=7,3Hz, IH),7,13 15 (ddd,j=13,1,8,8,1,3 Hz, IH), 7,22(td,j=7,6, 1,3 Hz, 1H),7,31-7,40 (mjH),7,5l(td,j=8,0,1,6Hz,1H) 1-(8) Síntese de N-(((3S,4R,5S)-3-(2-nuorofenil)-4- (hidroximatil)-5-(hinuorometil)tetraidromrmo-3-il)cMbamotioil)bemamida Isoticianato de benzoila (19,0 mL) foi adicionada em uma 20 solução contendo ((2S,3R,4S)-4-mino-4-(2-Quorofenil)-2-(WiRuorometil) tetraidrofúrano-3-il)metanol (28,72 g) em DCM (150 mlj) e a mistura foi agitada em RT por J8 h. Bicarbonato de sódio (sat., aq., 200 mlj) foi então adicionado, a mistura extraída com EtOAc (3 x 300 rnL), secada em MgSO4 e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado pela cromatografia 25 de coluna em gel de sílica (5 °/) a 30 °4 de EtOAc em hexanos) para obter o composto do título (37,07 g). 'H-RMN (400 MHz, CDCJ,) Ô (ppm): 3,22 (dd, J=8,lA5HL1H),331(td,j=8,0,3,0HL1H),3,94-4,07(m,lH),4,3l -4,46 (m, 1 H), 4,53 (d,j=9,9 Hz, IH), 4,83 (d,j= 9,9 HZ, IH), 6,97- 7,14 (m, 1 H), 7,22 (td, J = 7,7, 1,3 HZ, 1 H), 7,31 - 7,45 (m, 1 H), 7,49 - 7,61 (m,

2 H), 7,61-7,70 (m, IH), 7,75 (td,j= 8,1, 1,5 Hz, IH), 7,79-7,93 (m,2H),

8,90(s,1H),11,85(s,1H)

1-(9) Síntese de N{(4aS,5S,7aS)-7a-(2-fluorofenil)-5-

(trinuorometil)-4a,5,7,7a-tetraidro-4H-Wo[3,4-d][1,3]tiwin-2-il)benzamida

" 5 N-(((3 S,4R,5S)-3-(2-Fluorofenil)-4-(hidroximatil)-5- (triíluorometil)tetraidroàrano-3-il)carbamotioil)benzamida (3l,l g) foi dissolvido em piridina (150 mL) e a mistura esfiiada a -20°C.

O anidrido trifluorometanossulfônico (14,0 inlj) foi adicionado às gotas durante '30 minutos e a reação foi deixada aquecer em O°C.

Após agitação por 2 h, a

10 reação foi extinta pela adição de cloreto de amônio (sat., aq., 400 niL) e extraída com EtOAc (3 x 500 mL). Os extratos orgânicos combinados foram secados em MgSO4, concentrados à vácuo e purificados peja cromatografia de coluna em gel de sílica (2 °4) a 30 °/) de EtOí\c/hex) para obter o composto do título (18,50 g). 'H RMN (400 MHz, CDCl3) 6 ppm 2,86 (dd, J = 13,9, 3,5

15 Hz, 1 FI), 3,25 (d, J= 13,6 Hz, l H), 3,61 (br, s,, 1 H), 4,00 -4,10 (m, 1 H), 4,66 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 4,78 - 4,87 (m, 1 H), 7,12 - 7,60 (m, 6 H), 7,68 -

7,73 (m, 1 H), 7,99 - 8,16 (br, s,, 2 H), 8,62 - 8,66 (m, 1 H)

1-(10) Síntese de N-((4aS,5S,7aS)-7a-(2-fluorofenil)-5-

(triMorometil)-4aSj,7a-tetraidro-4H-nlro[3,4-d][l3]tiazin-2-il)benzamida

20 N-((4aS,5 S,7aS)Àa{2-Fluorofenil)-5-(tMuorometil)- 4a5,7,7a-tetraidro-4HAúro[3,4-d][l,3]tiazin-2-il)benzamida (21,5 g) foi dissolvido em metanol (160 mL), 1,8-diazabiciclo[5.4,0]undec-7-eno (16,29 g) foi adicionada e a solução foi aquecida ao refluxo (aquecimento da temperatura de bloco 80°C). Após 16 h, a mistura de reação foi concentrada

25 sob pressão reduzida e o resíduo purificado pela cromatografia de coluna em gel de sílica (lO °/) a 60 °'6 de EtOAc em hexanos) para produzir o composto do título (13,82 g). 'H RMN(400 MHZ, CDCl3) 6 ppm 2,85 (dd, J= 13,6, 3,8

Hz, 1 H), 3,14 (dd, J = 13,5, 3,2 HZ, 1 H), 3,33 - 3,45 (m, 1 H), 3,92 (dd, J =

8,1, 2,0 Hz, 1 H), 4,49 (br, s,, 2 H), 4,63 - 4,76 (m, 2 H), 7,08 (ddd, J = 12,6,

8,1, 1,0 Hz, l H), 7,13 - 7,22 (m, l H), 7,25 -7,36 (m, 1 H), 7,44 (td, J = 8,0, 1,9Hz, IH) 1-(ll) Síntese de (4aS,5S,7aS)-7a-(2-nuoro-5-nitrofenil)-5- (trinuorometil)-4a,5,7,7a-tetraidro-4H-hro[3,4-dl[1,3]ti&in-2-amina

" 5 N-((4aS,5 S,7aS)-7a{2-Fluorofenil)-5-(trifluorometil)- 4a,5,7,7a-tetraidro-4H-hro[3,4-d][1,3]tiazin-2-il)benzamida (5,15 g) foi dissolvido em TFA (75 mlj) e a soIução foi esfiiada a O°C.

O ácido sulhirico (conc., 20 niL) foi adicionada, seguido pela fümigação do ácido nítrico (2 mlj) às gotas durante 20 mins.

Após agitação a O°C por 90 mins, a mistura de

10 reação foi vertida em gelo (200 g) e basificada ao pFI 12 com 6N de NaOlil (aq.). Após permitir o gelo para fúndir, a mistura foi extraída com EtOAc (3 x 500 rríL) e as porções orgânicas combinadas secadas em MgSO4 e evaporadas para produzir o composto do título (22,1 g, pureza aproximadamente 71 °4) que foi usado na purificação sem a etapa subsequente.

È RMN (400 MHz,

15 CDCl,) ç; ppm 2,89 (d, J = 3,8 Hz, 1 H), 3,09 (br, s,, 1 H), 3,28 - 3,54 (m, 1 H), 3,80 - 4,03 (m, 1 H), 4,50 - 4,70 (m, 3 H), 4,71 - 4,86 (m, ] H), 7,21 - 7,30 (m, 1 H), 8,18 -8,28 (m, í H), 8,45 (dd, J= 6,8,2,8 Hz, IH) 1-(12) Síntese de ((4aS,5S,7aS)-7a-(241uoro-5-nitrofenil)-5- (trifluorometil)-4a,5,7,7a-tetraidro-4H-nlro[3,4-d][1,3]tiazin-2-ij)carbamato

20 de terc-butila (4aS,5 S,7aS)-7a{2-Fluoro4-nitrofenil)-5-(trifluorometil)- 4a,5,7,7a-tetraidro-4H-Wo[3,4-d][1,3]tiwin-2-mina (20,6 g, brutó) foi dissolvido em THF (300 mL), dicarbonato de di-terc-butila (12 g) foi adicionada em porções durante 20 mins e a mistura de reação foi aquecida a 25 60°C.

Ainda as porções de dicarbonato de di-terc-butila (lO g) foram adicionados até o material de partida foi consumido por TLC.

A mistura de reação foi esfiiada e bicarbonato de sódio (sat., aq., 200 mlj) e salmoura (200 niL) foram adicionados.

A mistura foi então extraída com EtOAc (3 x 500 mL) e as porções orgânicas combinadas foram secadas em MgSO4 e r - 78 evaporada.

O resíduo foi puriíicado pela cromatografia de coluna em gel de sílica (10 °/) a 25 °/) de EtOAc em hexanos) para produzir o composto do título (16,62 g). 'H RMN (400 MHz, CDCl,) Õ ppm 1,55 (s, 9 H), 2,73 - 2,84

(m, I H), 2,92 - 3,05 (m, 1 H), 3,43 - 3,55 (m, 1 H), 3,81 - 3,94 (m, 1 H), 4,57

" 5 (d, J = 8,3 Hz, 1 H), 4,73 - 4,83 (m, 1 H), 7,19 - 7,39 (m, 2 H), 8,20 - 8,29 (m, 1H),8,32(d,j=6,8Hz,1H) 1-(13) Síntese de ((4aS,5S,7aS)-7a-(5-amino-2Auorofenil)-5- (trinuorometil)-4a,5,7,7a-tetraidro-4H-Wo[3,4-d][1,3]tiazin-2-il)carbamato de terc-butila 10 ((4aS,5S,7aS)-7a{2Auoro-5-nitrofenil)-5-(trifluorometil)- 4a,5,7,7a-tetrai&o-4H-mro[3,4-d][l,3]tiwin-2-il)cMbamato de terc-Butila (!6,61 g) foi dissolvido em etanol (250 niL) e cIoreto de di-idrato de estanho (25,0 g) foi adicionada.

Após agitação em RT por 18 h, a solução foi vertida em NaOifl (2N aq., 300 niL) e ceiite® (-50 g) foi adicionada.

A mistura

15 resultante foi filtrada através de mais celite® e extraida com EtOAC (2 x 500 mL). As porções orgânicas combinadas foram secadas em MgSO4 e evaporadas para produzir o composto do título (15,52 g). Este material deve ser usado bruto mas uma porção foi purificado pela cromatografia de coluna em gel de sílica (20 °/) a 50 °/) de EtOAc em hexanos) para produzir material 20 puro (recuperação de 79 °4). 'H RMN (400 MHz, CDClj Ô ppm 1,53 (s, 9 H), 2,77 (d, J = 14,4 Hz, 1 H), 3,09 (br, s,, 1 H), 3,46 (br, s,, 1 H), 3,62 (br, s,, 2 H),3,87 (br, s,, 1H),4,6l (d,j= 8,6 HZ, 1H),4,71 (br, s,, IH), 6,61 (br, S,,2 H), 6,85 6,95 (m, IH) Exemplo de preparação 2 25 Síntese de ((4aS,5S,7aS)-7a-(5-mino-2-duorofenil)-5- (hinuorometil)-4a,5,7,7a-tetraidro-4H-hro[3,4-d][l',3]tiazin-2-il)carb=ato de terc-butila 2-(10)

)j'"°" . :jj . jjjj :í f 1-(3) 'i ff 2-(1) :f" 2-(2) ' f i I " f f A J] ,^U A ,1] h ¢n n f ^ l " ° b " G^> °: í!""' O, r'jç i- j) '7( ' F"j ' 6h '>rú> ' ó f f 2-(4) ff oh 2-(3) 2-(5) _,)J'3_, JNH2 —, j)) f f 'È f 2-(6) 2-(7) 2-(8) :J,J no2 : :;,j mh2 '>ÁY"°" "ÀJ'"°" f 2-(9) f 2-(10) 2-(1) Síntese de (S)-1-(2,3-dinuorofenil)-2-((l,1,1- trifluorobut-3-en-2-il)óxi)etanona Uma solução de n-butillítio em hexano (2,50 M, 13,5 mL) foi adicionada às gotas durante 20 mins em uma solução contendo 1-bromo-2,3- 5 difluorobenzeno (6,50 g) em Et2O (50 inlj) sob uma atmosfera N2 a -78°C. A solução de reação foi deixada agitar por 60 mins. (S)-N-metóxi-N-metil-2- .

((l,lj-tMuorobut-3-en-2-ii)óxi)acetamida) (5,20 g) em Et2O (lO niL) foi então adicionado às gotas em uma solução de reação, e após agitação a -78°C por 1 h, yci aquoso (50 mjj) foi adicionada a uma solução de reação, seguido pelo aquecimento em RT. NaHCO3 (sat. aq., 100 mlj) foi adicionada a uma solução de reação e a mistura foi extraída com EtOAc (3 x 100 niL).

As porções orgânicas combinadas foram secadas em MgSO4, evaporadas e o resíduo foi purificado pela cromatografia de coluna em gel de sílica (l °/) a i 0 °/) de EtOAc em hexanos) para obter o composto do título (3,91 g). 1H RMN (400 MHz, CDCl,) Ô ppm: 4,33 - 4,43 (m, 1 H), 4,80 - 4,84 (m, 2 H), 5,55 -

5,67 (m, 2 H), 5,76 - 5,94 (m, 1 H), 7,18 - 7,28 (m, 1 H), 7,37 - 7,47 (m, 1 H), 7,70 (ddt, j = 7,9, 6,0, 1,7 Hz, l H) 2-(2) Síntese de (S)-1-(2,3-dinuorofeni])-2-((l,í,1- triàuorobut-3-en-2-il)óxi)etanona oxima " 5 (S)-1-(2,3-diAuorofenil)-2-((1,l,l-trinuorobut-3-en-2-il)óxi) etanona (3,91 g) foi dissolvido em metanol anidro (40 mlj) e cloridreto de hidroxilamina (1,25 g) e acetato de sódio (1,68 g) foram adicionados. A mistura de reação foi aquecida a 50°C por 90 min, então csEiado em RT, concentrado à vácuo e o resíduo purificado pela cromatografia em gel de 10 sílica (2 °/0 a 20 °/) de EtOAc em hexanos) para produzir o composto do título como uma mistura de isômeros geométricos (4,10 g). lH-RMN (400 MHz, CDCl,) Ô (ppm): 4,04 - 4,26 (m 1 H), 4,43 - 4,55 (m, 0,4 H) 4,80 - 4,89 (m, 1,6 H) 5,39 - 5,55 (m, 2 H) 5,64-5,80 (m, 1 H) 7,05 - 7,30 (m, 3 H), 7,76 (br s, 0,2H),8,30(brs,0,8H).

J5 2-(3) Síntese de (4S)-6a-(2,3-difluorofenil)-4-(triBuorometil) hexaidrofúro[3,4-c]isoxazol (S)-l-(2,3-dinuorofenil)-2-((1,l,l-trinuorobut-3-en-2-il)óxi) etanona oxima (4,10 g) foi dissolvido em xilenos (40 mL) e hidroquinona (380 mg) foi adicionada. A mistura de reação foi aquecida ao refluxo 20 (aquecimento da temperatura de bloco l40°C) por 20 h, então eshiado e evaporada. O resíduo foi purificado pela cromatograna de cojuna em gel de sílica (1 °/) a 25 °/) de EtOAC em hexanos) para obter o composto do título (3,16 g). 'H RMN (400 MHz, CDCl,) Õ ppm 3,77 (br, s,, I H), 3,99 - 4,16 (m, 1 H),4,!6- 4,22 (m, 1H),4,22 -4,44 (m,2 H),4,51 (d,j=9,9Hz, IH), 5,44 25 (s, 1 H), 7,07 - 7,24 (m, 2 H), 7,38 (br, s,, IH) 2-(4) Síntese de ((2S,3R,4S)-4-amino-4-(2,3-difluorofenii)-2- (trif1uorometil)tetrai&oWrano-3-il)metanol (4S)-6a-(2,3-dinuorofenil)-4-(trinuorometij)hexaidrohro[3,4- cjisoxazol (3,16 g) foi dissolvido em ácido acético (20 rnlj) e a mistura de

8i reação es&iada a O°C.

Zinco (5,0 g) foi adicionada e a reação foi deixada aquecer e agitar em RT por 20 h.

A mistura de reação foi então diluída com

EtOAc (50 mL) e filtrada através de celite®, lavando com l00 niL adicional de EtOAc.

As porções orgânicas combinadas foram evaporadas, dissolvidas

" 5. em CHCl3 (20 mlj), e Amônia (28 °/) aq., 25 mlj) foi lentamente adicionada.

As camadas foram separadas e a porção aquosa ainda foi extraída com CHCl3

(2 x 25 mL). Os extratos orgânicos combinados foram secados em MgSO4 anidro e evaporados para produzir o composto do título (3,12 g) que foi usado na etapa subsequente sem purificação adicional. 'H RMN (400 MHZ, CDC!3)

10 6 ppm 2,93 (ddd, j= 7,8, 5,1, 2,8 Hz, 1 H), 3,85 (dd, J = 12,4, 5,1 Hz, 1 H),

4,03 (dd, J= 9,1, 2,8 Hz, 1 H), 4,14 (dd, J= 12,3, 2,7 Hz, 1 H), 4,35 (d, J=

9,1 Hz, 1 H), 4,68 (quin, J = 7,3 Hz, 1 H), 7,09 - 7,25 (m, 2 H), 7,25 - 7,34

(m, 1 H)

2-(5) Síntese de N-(((3 S,4R,5S)-3-(2,3-dinuorofenil)-4-

i5 (hidroximatil)-5-(trinuorometil)tetraidrohrano-3-il)carb=otioil)benzamida

Isoticianato de benzoila (2,0 mlj) foi adicionada em uma solução contendo ((2S,3R,4S)-4-amino-4-(2,3-dinuorofenil)-2-(trinuorometil)

tetraidroWrano-3-il)metanol (3,12 g) em DCM (20 mlj) e a mistura foi agitada em RT por 18 h.

Bicarbonato de sódio (sat., aq., 50 niL) foi então adicionado,

20 a mistura extraída com EtOAc (3 x 75 niL), secada em MgSO4 e concentrada sob pressão reduzida.

O resíduo foi purificado pela cromatografia de coluna em gel de sílica (5 °/) a 40 % de EtOAc em hexanos) para obter o composto do título (4,18 g). 'H RMN (400 MHZ, CDCl,) Ô ppm 3,12 (dd, J = 7,6, 4,3

Hz, 1 H), 3,18 - 3,29 (m, 1 H), 4,03 (ddd, j = 12,3, 7,2, 4,5 Hz, 1 H), 4,35 -

25 4,49 (m, IH), 4,59(d, J= 9,9 Hz, 1 H), 4,81 (d,j= 9,6 Hz, 1 H), 7,07- 7,23

- (m,2H),7,49(t,j=7,2HL1H),7,56(t,j=7,7Hz,2H),7,67(t,j=7,5 W,lH),7,88(d,j=7,lW,2H),8,92(s,lW,11,89(s,1H

2-(6) Síntese de N{(4aS,5SjaS)-7a-(2,3-difluorofenil)-5-

(trifluorometil)-4a,5,7,7a-tetraidro-4H-füro[3,4-d][i ,3]tiazin-2-il)benzamida

N{((3S,4R,5S)-3{2,3-Difluorofenil)-4-(hidroximatil)-5- (trifluorometil)tetrai&ohrano-3-il)carbamotioil)benzamida (2,99 g) foi dissolvido em piridina (14 mL) e a mistura eshiada a -20°C.

O anidrido trifluorometanossulfônico (1,55 mlj) foi adicionada às gotas durante 10 min e ' 5 a mistura de reação foi deixada aquecer em -1O°C.

Após agitação por 2 h, uma porção adicional de anidrido trifluorometanossulfônico (1,0 mL) foi adicionada às gotas durante 10 min, a reação foi adicionada por 2 horas adicionais e foi então extinto pela adição de cIoreto de amônio (sat., aq., 50 ml-) e extraída com EtOAc (3 x 100 mL). Os extratos orgânicos combinados 10 foram secados em MgSO4, concentrados à vácuo e puriücados pela cromatografia de coluna em gel de sílica (5 °/0 a 20 °4) de EtOAc/hex) para obter o composto do título (1,20 g). 'H RMN (400 MHz, CDCl3) Õ ppm 2,86

(d, J = 10,6 Hz, 1 H), 3,20 (br, s,, 1 H), 3,55 (br, s,, 1 H), 4,04 (br, s,, IH), 4,65 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 4,81 (br, s,, i H), 7,06 - 7,24 (m, 3 H), 7,40 - 7,64 15 (m, 3 H), 7,82 - 8,21 (m, 2 H) 2-(7) Síntese de (4aS,5S,7aS)-7a-(2,3-difluorofenil)-5- (trif1uorometil)-4a,5,7,7a-tetraidro-4H-njro[3,4-d][1,3]tiazin-2-amina N-((4aS,5S,7aS)-7a-(2,3-DiQuorofeni])-5-(trinuorometil)- 4a5j,7a-tetraidro-4HAijro[3,4-d][i,3]tiazin-2-il)benzamida (2,00 g) foi

20 dissolvido em metanol (250 niL), l,8-diazabiciclo[5.4,0]undec-7-eno (1,53 g) foi adicionado e a solução foi aquecida ao refluxo (aquecimento da temperatura de bloco 80°C). Após 3 h, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida, diluída com água (100 niL) e extraida com EtOAc (3 x 100 rriL). As porções orgânicas combinadas foram secadas em MgSO4,

25 evaporadas e o resíduo purificado pela cromatografia de coluna em gel de sílica (0 °/) a 50 °4 de EtOAc em hexanos) para produzir o composto do título (1,42 g). 'H RMN (400 MHz, CDCl,) 15 ppm 2,86 (dd, J = 13,6, 3,8 Hz, l H),

3,15 (dd, J = 13,8, 3,2 Hz, 1 H), 3,27 - 3,42 (m, 1 H), 3,93 (dd, J = 8,2, 1,9 Hz, 1 H), 4,39 - 4,78 (m, 4 H), 6,96 - 7,25 (m, 3 H)

2-(8) Síntese de (4aS,5S,7aS)-7a-(2,3-dinuoro-5-nitrofenil)-5- (trif1uorometi])-4a,5,7,7a-tetraidro-4H-n]ro[3,4-d][l,3]tiazin-2-amina (4aS,5S,7aS)-7a-(2,3-Dinuorofenil)-5-(trinuorometil)- 4a,5,7,7a-tetraidro-4HAlro[3,4-d][l,3]tiazin-2-amina (1,42 g) foi dissolvido " 5 em TFA (6 rnL) e a soiução foi esEiada a O°C. O ácido sulfürico (conc., i mjj) foi adicionado, seguido pela fümigação do ácido nítrico (0,30 ML) às gotas durante 20 mins. Após agitação a O°C por 1 h, a mistura de reação foi vertida em gelo (50 g) e basiíicada ao pH 12 com 2 N de NaOH (aq.). Após permitir o gelo para fündir, a mistura foi extraída com EtOAc (3 x 75 nilj) e 10 as porções orgânicas combinadas secadas em MgSO4 e evaporadas para produzir o composto do título (1,91 g, pureza aproximadamente 80 °4) que foi usado na purificação sem a etapa subsequente. 'H RMN (400 MHz, CDCl3) Ô ppm 2,88 (dd, J= 13,8, 3,9 HZ, 1 H), 3,11 (dd, J= 13,6, 2,8 FIz, 1 H), 3,37 (dt, J = 7,4, 3,5 Hz, 1 H), 3,93 (d, J = 7,8 Hz, 1 H), 4,53 - 4,83 (m, 4 H), 8,09 15 (ddd, j = 9,0, 6,3, 2,9 Hz, l H), 8,27 (dt, J = 5,2, 2,6 FLz, 1 H) 2-(9) Síntese de ((4aS,5S,7aS)-7a-(2,3-dinuoro-5-nitrofenil)-5- (triAuorometil)-4a,5,7,7a-teuaidro-4H-hro[3,4-d][l,3]tiazin-2-il)carbamato de terc-butila (4aS,5 S,7aS)-7a-(2,3-Dinuoro-5-nitrofenil)-5-(mnuorometil)- 20 4a,5,7,7a-tetraidro-4H-hro[3,4-d][1,3]tiwin-2-amina (1,91 g, bruto) foi dissolvido em THF (10 mL), dicarbonato de di-terc-butila (1,3 g) foi adicionada em porções durante 20 mins e a mistura de reação foi aquecida a 65°C. Após 3 h, a mistura de reação foi esfiiada e bicarbonato de sódio (sat., aq., 50 niL) foi adicionada. A mistura foi então extraida com EtOAc (3 x 750 25 mL) e as porções orgânicas combinadas foram secadas em MgSO4 e evaporadas. O resíduo foi purificado pela cromatografia de coluna em gel de . sílica (0 °/) a 20 °/) de EtOAc em hexanos) para produzir o composto do título (1,43g bruto, em uma mistura com a versão bis-boc).

2-(10) Síntese de ((4aS,5S,7aS)-7a-(5-amino-2,3-

dinuorofenil)-5-(trinuorometil)-4a,5,7,7a-teKaidro-4H-hro[3,4-d][l,3]tiazm- 2-il)carbamato de terc-butila A mistura bruta obtida no exemplo de preparação 2-(9) contendo ((4aS,5S,7aS)-7a-(2,3-dinuoro-5-nitrofenil)-5-(trinuorometil)- " 5 4a,5,7,7a-tetraidro-4n-hro[3,4-d][1,3]ti=in-2-il)cMbamato de terc-Butila) (1,43 g) foi dissolvido em etanol (25 mlj) e cloreto de di-idrato de estanho (2,50 g) foi adicionada. Após agitação por 18 h, a solução foi vertida em NaOlil (2N aq., 100 mL) e extraída com EtOAc (3 x 100 niL). As porções orgânicas combinadas foram secadas em MgSO4, evaporadas e purificadas 10 pela cromatografia de coluna em gel de sílica (0 °/) a 30 °/) de EtOAc em hexanos) para produzir primeiramente o produto bis-boc (730 mg) e em segundo lugar o composto do título (300 mg). 'H RMN (400 MHz, CDCIJ 15 ppm 1,53 (s, 9H),2,76 (dd,j= 13,9,3,8 Hz, 1 H), 3,08 (d,j= 13,6 HZ, IH), 3,36 -3,45 (m, 1 H), 3,71 (br, s,, 2 H), 3,90 (d, J = 8,3 Hz, 1 H), 4,57 (d, J= 15 8,6 Hz, 1 FI), 4,68 -4,79 (m, 1 H), 6,30 - 6,37 (m, 1 H), 6,42 - 6,49 (m, l H) Exemplo de preparação 3: Síntese do ácido 5-etoxipirazina-2- carboxilico (3-(2)) ,, :j" · c , ;)°í · ,0 :J ° Õ Õ 3-(1) 3-(2) Síntese de 5-etoxipirazina-2-carboxi!ato de etija 3-(1) Uma solução agitada de 5-cloropirazina-2-carboxilato de 20 metila (0,50 g) em etanol (10 ML) foi eshiada a O°C e etóxido de sódio (21 °/, p/p da solução em etanol, 1 mL) foi adicionada durante lO mins. Após permitir aquecer em RT e agitada por 2 h, água (100 mlj) foi adicionada e a mistura extraída coni EtOAc (2 x 150 mL). As porções orgânicas combinadas foram secadas em MgSO4 e evaporadas para produzir o composto do título.

25 (0,65 g, pureza aproximadamente 85 °/,). 'H RMN (400 MHz, CDCl3) 6 ppm 1,45(t,j=7,lW,3H),l,46(t,j=7,lW,3H),4,48(q,j=7,lW,2H),

4,49(q,j=7,lHz,2Hi),8,28(d,j=1,3Hz,lH),8,88(d,j=l,3Hz,íH) Síntese do ácido 5-etoxipirazina-2-carboxílico 3-(2) 5-etoxipirazina-2-carbonlato de etila (0,65 g, aproximadamente 85 °/} de pureza) foi dissolvido em dioxano (3 mL) e água

" 5 (3 mL) foi adicionada, seguido pelo monoidrato de hidróxido de lítio (255 mg, em porções durante 10 mins). Após agitação em RT por 24 h, Et2O (25 mlj) e NaHCO3 (sat., aq., 25 mlj) foram adic.ionados.

As camadas foram separadas e a camada orgânica foi extraída com NaOH (1 N, aq., 25 mL). As porções aquosas combinadas foram acidificadas com 6N de HCl ao pH 2 e a 10 mistura extraída com EtOAc (3 x 40 niL). Os extratos de EtOAc combinados foram secados em MgSO4 e evaporados para produzir o composto do titulo como um pó branco-amarelado. 'H RMN (400 MHz, CDCl3) Ô pprn 1,47 (t, J

=7,1W,3H),4,53(q,j=7,1&,2H),8,16(d,j=l,2W,lH),8,98(d,j= 1,2Hz, IH) 15 Exempjo de preparaç.ão 4: Síntese do ácido 5-etoxipirazina-2- carboxílico (4-(3)) O O F\ ,F F, ,F

H,N ::r" -—> ;jA — ,0 :^— HO 7" d Ô Ó Õ 4-(1) 4-(2) 4-(3)

Metil 5-acetilpirazina-2-carboxilato 4-(1) 5-Acetilpirazina-2-carboxamida (3,275 g) foi dissolvido em HCl metanólico (1,25 N, 150 mlj) e a mistura de reação foi aquecida ao 20 refluxo e agitada durante a noite.

Após eshiamento, bicarbonato de sódio foi adicionado e a mistura foi extraída com EtOAc.

A camada EtOAc foi secada em MgSO4 e evaporada para produzir o composto do título (3,79 g, aproximadamente 90 °/) de pureza). 'H RMN (400 MHz, CDC]3) Õ ppm 2,78 (s,3H),4,l0(s,3H),9,33(d,j=l,5w,1H),9,36(d,j=1,5m,lH) 25 5-(1,l-difIuoroetil)pirazina-2-carboxilato de metila 4-(2) 5-acetilpirazina-2-carboxilato de metila (300 mg,

"T 86 aproximadamente 90 °/) de pureza) foi dissolvido em DCM (15 mL) e csEiado a O°C sob nitrogênio.

Trifluoreto de Bis(2-metoxietil)aminoenxoEe (0,61 mlj) foi adicionada às gotas e a mistura de reação deixada aquecer em RT e agitar >

" durante a noite.

Bicarbonato de sódio (sat., aq.) foi adicionada " 5 cuidadosamente e a mistura extraída com DCM.

As porções orgânicas foram secadas em MgSO4, evaporadas e purificadas pela cromatografia em gel de sílica (35 °4 de EtOAC em hexano) para produzir o composto do título (155 mg) como um sóIido branco, 'H RMN (400 MHz, CDC]3) Ô ppm 2,00 (t, J = l8,8Hz,3H),4,01(s,3Hj)N,98(d,j=1sI1z,1H),9,24(d,j=l,5Hz, lO IH) ácido 5-(1 ,1-Difluoroetii)pirazina-2-carboxílico 4-(3) 5{1,l-difluoroetil)pirazina-2-carboxilato de metila (0,65 g, aproximadamente 85 °/) de pureza) foi dissolvido em dioxano (2 níL) e água (2 nilj) foi adicionada, seguido pelo monoidrato de hidróxido de Jítio (54 mg, 15 em porções). Após agitação em RT por 90 mins, a mistura foi concentrada a 2 mL e Et2O (20 niL) adicionado.

A mistura foi então extraida com NaOll (1 N, aq., 20 niL) e As porções aquosas acidificada com 6N de HCI ao pH 2. A :

porção aquosa foi então extraída com EtOAc, secada em MgSO4 e evaporada para produzir o composto do título como um sólido branco (119 mg). lH

20 RMN (400 MHZ, CDCl,) 15 ppm 2,11 (t, J = 18,8 Ilz, 3 H), 9,01 (d, J = 1,3

HL1Hj),9,47(d,j=1,3Hz,1Hj)

. Exemplo de preparação 5: Síntese do ácido 5- (fluorometil)pirazina-2-carboxílico (5-(3))

,,,, jj )j ,,,, jí"° — jO :>c HO tj^' o o o o 5-(1) 5-(2) 5-(3)

5-(hidroximatil)pirazina-2-carboxilato de metila 5-(1) 25 Em uma solução de 5-formilpirazina-2-carboxilato de metila (2,47 g) em THF (20 mlj) foi adicionada boroidreto de sódio (170 mg) em porções durante lO mins.

Após agitação por l h, metanol (10 rríL) foi adicionada.

A mistura de reação foi adicionada por 20 minutos adicionais e então de HCl (1 N, aq., 20 niL) e salmoura (20 mL) foram adicionados.

A "" mistura foi extraída com EtOAc (3 x 40 mL) e as porções orgânicas

" 5 combinadas secadas em MgSO4 e evaporadas para produzir o composto do ' título (1,31 g). 'H RMN (400 MHz, CDCl,) l5 ppm 4,07 (s, 3 H), 4,98 (br, s,, 2

H), 8,80 (s, l H), 9,27 (s, 1 H) 5-(fluorometil)pirazina-2-carboxilato de metila 5-(2) Em uma solução de 5-(hidroximatil)pirazina-2-carboxilato de 10 metila (0,64 g) em THF (20 mlj) foi adicionada trietilamina (2,30 g) e a solução foi esfiiada a O°C.

Triidrofluoreto de Trietilamina (1,22 g) foi então adicionado seguido pelo fluoreto de nonafluorobutanossulfonila (2,28 g) às gotas durante 5 mins.

Após aquecimento em RT e agitação por 2 h, NaHCO3 (sat., aq., 100 niL) foi adicionada e a mistura foi extraída com EtOAc (2 x 50 15 mL). As porções orgânicas combinadas foram secadas em MgSO4, evaporadas e purificadas pela cromatografia em gel de sílica (5 °/) a 50 °/) de EtOAc em hexano) para produzir o composto do título (94 mg). lH RMN

(400 MHz, CDCl,) 15 ppm 4,07 (s, 3 H), 5,67 (d, J = 46,5 HZ, 2 H), 8,89 (s, 1 H), 9,28 (s, 1 H) 20 Ácido 5-(Fluorometil)pirazina-2-carboxílico 5-(3) 5-(fluorometil)pirazina-2-carboxilato de metila (94 mg) foi dissolvido em dioxano (1 nilj) e água (1 niL) foi adicionada, seguido pelo monoidrato de hidróxido de litio (60 mg). Após agitação em RT por 18 h, Et2O (20 mL) foi adicionada e a mistura foi então extraída com NaOH (I N, 25 aq., 2 x 20 mL). As porções aquosas foram acidificadas com 6N de HCl ao pH 1, extraída com EtOAc (2 x 40 mL), as porções orgânicas combinadas secadas em MgSO4 e evaporadas para produzir o composto do título como um sólido branco (71 mg). 'H RMN (400 MHz, CDCl,) Ô ppm 5,70 (d, J = 46,2 Hz, 2 H),

8,85(s,1H),9,40(s,1H) Exemplo de preparação 6: Síntese do ácido 5- difjuorometilpirazina-2-carboxílico (6-(5) H° ))í " y j;j" " y Jn" 6-(1) 6-(2)

F F ho~,j::jL — y jr" — y Ij"' O 643) 6-(4) 6-(5) Síntese de 5-metilpirazina-2-carboxilato de t-butila 6-(1) Um complexo de éter dietílico-trifluoreto de boro (91,7 µL) foi adicionada às gotas a uma suspensão do ácido 2-metilpirazina-5-carboxílico (I g) e 2,2,2-tricloroacetimidato de terc-butila (4,75 g) em THF (20 mL) sob esEiamento em gelo. A solução de reação foi aquecida em RT, seguido pela agitação por 2 h. A solução de NaCl saturada e EtOAc foram adicionadas a uma solução de reação e a camada orgânica foi separada. A camada orgânica foi secada em MgSO4 anidro e a substância insolúvej foi separada pela filtração. O filtrado foi concentrado e purincado pela cromatografia de coluna em gel de sílica para obter o composto do título (1,4 g). 'H-RMN (CDCj3) Ô (ppm): 1,65 (s, 9 H), 2,65 (s, 3 H), 8,57 (d, J = 1,2 Hz, 1 H), 9,10 (d, J = 1,6 FIZ, IH). Síntese de 5{(E)-2-dimetilamino-vinil)-pirazina-2-carboxilato de t-butila 6-(2) Uma mistura de 5-metilpirazina-2-carboxilato de t-butila (1,35 g), DMF (25 niL) e N,N-dimetilformaniida dimetilacetal (25 mL) foi agitada em l30°C por 5 h." A solução de reação foi esEiada em RT e diluída com EtOAc. A mistura foi Iavada com a solução de NaCl saturada três vezes. A camada orgânica foi secada em MgSO4 anidro e a substância insolúvel foi separada pela filtração. O filtrado foi concentrado e o resíduo foi purificado pela cromatografia de coluna em gel de sílica para obter o composto do título (648 mg). 'H-RMN (CDCl,) Ô (jppm): 1,63 (s, 9 H), 3,00 (s, 6 H), 5,16 (d, J = l2,8HznH),7,72(d,j=l2Mlz,1H),8,16(d,j=1,2Hz,1H),8,8l(d,j ? = 1,6 IJz, IH).

' 5 Síntese de 5-formilpirazina-2-carboxilato de t-butila 6-(3) Periodato de sódio (1,67 g) foi adicionado em uma solução de 5-((E)-2-dimetilamino-vinil)-pirazina-2-carboxilato de t-butila (645 mg) em 50 °/) de TW-água (26 mlj) e a mistura foi agitada em RT por 4 h. A solução de NaHCO3 saturada e EtOAc foram adicionados a uma solução de reação e a 10 camada orgânica foi separada. A camada orgânica foi Iavada com a solução de NaCl saturada e secada em MgSO4 anidro. A substância insolúvel foi separada pela filtração e o filtrado foi concentrado. O resíduo foi purificado jpela cromatografia de coluna em gel de sílica para obter o composto do título (249 mg). 'H-RMN (CDCl,) Ô (jppm): 1,68 (s, 9 H), 9,25 (d, J = 1,2 Hz, 1 H), 15 9,36(d,j= 1,6HZ, IH), 10,2(S, IH). Síntese de 5-difluorometilpirazina-2-carboxilato de t-butila 6- (4) Trifluoreto de [Bis(2-metoxietil)amino]enxo&e (662 µL) foi adicionada às gotas em uma sojução de 5-formilpirazina-2-carboxilato de t- 20 butila (249 mg) em CH2C!2 (12 mlj) sob uma atmosfera N, sob esíiiamento em gelo- A solução de reação foi adicionada por 2 h enquanto retoma gradualmente em RT. A solução de NaHCO3 saturada e EtOAc foram adicionados a uma solução de reação e a camada orgânica foi separada. A · camada orgânica foi lavada com a soIução de NaCl saturada e secada em 25 MgSO4 anidro. A substância insolúvel foi separada pela filtração e o filtrado foi concentrado. O resíduo foi purificado pela cromatografia de coluna em gel de sílica para obter o composto do título (175 mg). lH-RMN (CDClj 6 ' (ppm): 1,67 (s, 9 H), 6,75 (t, J = 54,4 Hz, 1 H), 9,02 (d, J = 0,8 Hz, l H), 9,25 (d,j = 0,8 HZ, IH).

Sintese do ácido 5-difluorometilpirazina-2-carboxí1ico 6-(5) O ácido tMuoroac-ético (1 ml-) foi adicionada em uma solução de 5-difluorometilpirazina-2-carboxilato de t-butila (175 mg) em diclorometano (1 ml-) e a niistura foi agitada em RT por 5 h.

Éter e 5 N de

' 5 NaOlil foram adicionados a uma solução de reação.

A camada aquosa foi separada e feita ácida com 5 N do ácido clorídrico.

EtOAc foi adicionado em uma camada aquosa e a camada orgânica foi separada.

A camada orgânica foi secada em MgSO4 anidro e a substância insolúvel foi separada peja filtração.

O filtrado foi concentrado para obter o composto do título (íOO mg). lH-RMN lO (CDCl,) Ô (ppm): 6,80 (t, J = 54,4 Hz, I H), 9,02 (s, 1 H), 9,47 (s, IH). Exemplo de preparação 7: Síntese do ácido 5-cianopiridina-2- carboxilico (7-(2)) " cn jCN io]1A,N-l] " jOyjj " '°"f""N"

o o 7-(1) 7-(2) Síntese de 5-cianopiridina-2-carboxilato de metila 7 (1) Uma mistura de 5-bromopiridina-2-carboxilato de metila (2,8

15 g) e cianeto de cobre (3,6 g) em NMP (30 mL) foi aquecido com agitação a 170°C por 1,5 h.

Água foi adicionada a uma solução de reação em RT e a substância insolúve! foi removida pela filtração.

O filtrado foi extraído com EtOAC.

O extrato foi lavado com a solução de NaCl saturada e então secada em MgSO4 anidro.

O agente de secagem foi removido pela filtração e o

20 Mrado foi concentrado sob pressão reduzida.

O produto bruto resultante foi purificado pela cromatografia de coluna em gel de sílica (Sistema de EtOAc- heptano) para' obter o composto do titulo (920 mg). lH-RMjN (400 MHz,

CDCl,) iij (ppm): 4,06 (s, 3 H), 8,16 (dd, J = 2,0, 8,0 Hz, 1 H), 8,27 (d, J = 8,0 Hz, 1H),9,0l(d,j=2,OHz, ÍH). 25 Síntese do ácido 5-cianopiridina-2-carboxílico 7-(2) Uma solução do composto do Exemplo de preparação 13-(1)

(920 mg) e uma solução de 5 N de NaOH (2,26 mL) em etanol (30 mL) foi agitada em RT por lO min. 5 N do ácido cIorídrico (5,2 mL) foi adicionada a uma solução de reação em RT, seguido pela extração com EtOAc. O extrato foi secado em MgSO4 anidro. O agente de secagem foi removida pela ' 5 filtração e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter o composto do título (800 mg). 'H-RMN (400 MHz, DMSOd,;) Õ (ppm): 8,18 (d,j=8,OHz, IH), 8,5l(dd,j=2,0, 8,OHz, 1H),9,J2-9,18 (m, IH).

Exemplo de preparação 8: Síntese do ácido 5- (metoximatil)pirazina-2-carboxílico (8-(2)) é')"° · iO ,, :>°"' · ho ,, :>°"' lO-KÁ"NA o o o 5-(1) 8-(1) 8-(2) Síntese de 5-(metoximatil)pirazina-2-carboxilato de metila 8- 10 (1) O composto obtido no exemplo de preparação 5-(1) (279 mg) foi dissolvido em DMF e a solução foi esEiada a O°C. O hidreto de sódio (60 % em Óleo mineral, 70 mg) foi adicionado, seguido pelo iodometano (250 15 mg). Após 2 dias, água (25 rnL) foi adicionada e a solução extraída com EtOAc (100 mL). A camada aquosa foi saturada com NaCl e ainda extraída com EtOAc (2 x 50 mlj). As porções orgânicas combinadas foram secadas em MgSO4, evaporadas e purificadas pela cromatografia em gel de sílica (30 °/) a 50 °/, de EtOAc em hexanos) para produzir o composto do título (55 mg, aproximadamente 65 °/) de pureza). 'H RMN (400 MHz, CDCl3) B ppm 3,55 20 (s, 3 H), 4,05 (s, 3 H), 4,72 (s, 2 H), 8,84 (d, J = 1,0 Hz, 1 H), 9,25 (d, J = 1,0 HZ, 1 H) Síntese do ácido 5-(metoximatil)pirazina-2-carboxílico 8-(2) ' 5-(metoximatil)pirazina-2-carboxilato de metila, 8-(1), (55 mg, 25 bruto) foi dissolvido em ],4-dioxano (1 niL) e água (l niL) foi adicionada seguido pelo monoidrato de hidróxido de Iítio (50 mg). Após agitação em RT por 1 h, água (20 mL) foi adicionada e a mistura foi extraída com éter (20 mL). A pórção aquosa foi acidificada ao pH 2 e extraída com EtOAc (2 x 25 . mL). As camadas EtOAc combinadas foram secadas em MgSO4 e evaporadas para produzir o composto do título (19 mg). 'H RMN (400 MHz, CDCl3) 6 ' 5 ppm 3,58 (s, 3 H), 4,77 (s, 2 H), 8,80 (br, s,, ] H), 9,38 (br, s,, 1 H) Exemplo de preparação 9: ácido 5-Metoxipirazina-2- carboxílico

1. mcoh, h,so, rNmc| 2. NaOH

2. NaOMe NUOMe ho},j ' hoj,j o o Ácido 5-Cloropirazina-2-carboxílico (5,0 g, 0,032 mol) foi carregado em um fi:asco de fündo redondo equipado com uma termoligação, 10 agitador suspensos e condensador em refluxo. Metanol (37,5 mL, 0,926 mol) foi carregado seguido pelo ácido sulfiirico concentrado (0,2 mL, 0,004 mol).

O hasco de 3 bocas foi equipado com urn manto de aquecimento e então a mistura de reação foi aquecida a ca. 65,0°C (T intemo). A mistura de reação contínua para agitar a ca. 65,0°C (T intemo) por ca. 4 h. A mistura de reação 15 esfriada a ca. 25,8°C (T intemo). Metanol (12 niL, 0,31 mol) foi carregado e a pasta continua para agitar a ca. 22,3°C (T intemo) por ca. 15 min então eshiado em ca. lO,0°C (T intemo) sob uma atmosfera de nitrogênio 25 °/) de Metóxido de sódio em metanol (1:3, MetÓxido de sódio:Metanol, 7,7 mL) foi carregado ao ffasco enquanto a temperatura permanece abaixo de 30,O°C (T 20 intemo). A mistura de reação foi ajustada a 20,4"C (T intemo). Após 30 min., hidróxido de sódio (2,0 g, 0,04 mol) e água (37,5 mL, 2,08 mol) foram combinados para formar uma solução e então a solução foi carregada em uma mistura de reação. Água (50,0 mL, 2,78 mo!) foi carregado e então a mistura de reação foi aquecida a 40,O°C (T intemo) por ca. 60 mins. O manto de 25 aquecimento foi removido e então a mistura de reação es&iada a ca. 25,4°C (T intemo). 38 °/) de solução de HCl aquoso (38:62, cloreto de hidrogênio:água, 4,0 niL) foi adicionada em uma taxa (ca. 5 min.) tal que a temperatura permaneceu abaixo de 30,O°C (T intemo). A pasta espessa foi agitada por 1 h a ca. 2l,4°C (T intemo) e então filtrada em um fiinil sinterizado.

Os sólidos foram enxaguados com água (10,0 mL, 0,555 mol) e

' 5 secados sob vácuo durante a noite para produzir ácido 5-metoxipirazina-2- carboxílico (3,59 g). 'H RMN (500 MHz, DMSO) 15 13,24 (IH, br S), 8,79 (IH, d, J' - 1,2 HZ), 8,37 (IH, d, J - 1,2 Hz), 3,98 (s, 3H); "C RMN (125

MHz, DMSO) 6 165,36, 161,88, 143,88, 136,82, 135,55, 54,69. Procedimento geral para a ligação de anilinas preparados nos 10 exemplos de preparação 1-(13) e 2-(10) com ácidos de aril carboxílicos: Preparação de N-(3-((4aS,5S,7aS)-2-mino-5-(tnnuorometi|)-4a,5,7,7a- tetraidro-4HAlro[3,4-d][l3]tiazin-7a-il)-4-nuorofenil)-5-metoxipirazina-2- carboxamida (Exemplo 1)

°YiC" Ç'NH,

FÂ-' Èf

((4aS,5S,7aS)-7a-(5-amino-2-nuorofenil)-5-(trinuorometil)- 15 4a,5,7,7a-tetraidro-4H@ro[3,4-d][i,3]tiazin-2-il)carbamato de terc-butila (Exemplo de preparação 1, 56 mg) foi dissojvido em DCM (2 mL) e ácido 5- metoxipirazina-2-carboxílico (40 mg), N,N-di-isopropiletilamina (80 mg) e hexafluorofosfato (1FPbenzotriazolj-ilóxi)tripinolidinj-il)fosfònio (135 mg) foram adicionados.

A mistura de reação foi agitada em RT por 18 h e 20 bicarbonato de sódio (sat., aq., 25 niL) foi adicionada.

A mistura foi extraída com EtOAc (2 x 40 niL), as porções orgânicas combinadas foram secadas em MgSO4, evaporadas e purificadas pela cromatografia em gel de sílica ' (Gradiente de EtOAc/hexanos) para produzir a amida (40 mg) como um sólido branco.

A amida foi dissolvida em DCM (2 niL) e TFA (1 mL) foi adicionada. ApÓs agitação em RT por 2 h, a mistura de reação foi evaporada e bicarbonato de sódio (sat., aq., 25 mlj) foi adicionada. A mistura foi extraída com EtOAc (2 x 25 mL) e as porções orgânicas combinadas secadas em MgSO4 e evaporadas para produzir o composto do título como um sóIido ' 5 branco (34 mg). 'H RMN (400 MHz, CDCl,) 6 ppm 2,78 - 2,87 (m, 1 H), 3,11 - 3,21 (m, 1 H), 3,38 - 3,48 (m, 1 H), 3,82 - 4,06 (m, 4 H), 4,48 - 4,72 (m, 2 H), 6,96- 7,10 (m, 1 H), 7,52 (d,j= 4,8 Hz, IH), 7,87 (d, J= 8,8 HZ, 1 H), 8,09 (s, 1 H), 8,95 (s, 1 H), 9,46 (br, s,, ! H) Exemplo 2: N-(3-((4aS,5 S,7aS)-2-amino-5-(üif1uorometil)- lO 4a,5,7,7a-tetraidro-4H-Wo[3,4-d]lí,3]tiwin-7a-i|)-4-nuorofenil)-5- cianopicolinamida

JLJ j)N)'NH, '(F' Sintetizado de [(4aS,5S,7aS)-7a-(5-amino-2-nuorofenil)-5- trinuorometil-4aS,7,7a-tetraidro-4HAiIro[3,4-d][1,3]tiazin-2-il]carbamato de terc-butila e ácido 5-cianopirazina-2-carboxílico de acordo com um 15 procedimento geral. 'H RMN (400 MHZ, CDCl,) jj; ppm 2,82 (dd, J = 13,6, 3,5 Hz, 1H),3,14-3,21 (m, 1 H), 3,37-3,45 (m, 1 H),3,91 (d,j=9,1 Hz, 1 H), 4,50 - 4,71 (m, 2 H), 7,08 (dd, J = 11,9, 8,8 Hz, 1 H), 7,46 - 7,57 (m, ! H), 7,92 (dt, J= 8,8, 3,4 Hz, ] H), 8,17 (dd, J= 8,3, 2,0 Hz, l H), 8,34 (d, J= 8,1 Hz, IH), 8,81-8,92(m, IH) 20 Exemplo 3: N-(3-((4aS,5 S,7aS)-2-amino-5-(trifluorometil)- 4a,5,7,7a-tetraidro-4H-hro[3,4-d][1,3]tiwin-7a-il)-4-Auorofeml)-5- (difluorometil)pirazina-2-carboxamida

F ojj ' )N)'NH, 'ÇF' Sintetizado de [(4aS,5S,7aS)-7a-(5-amino-2-fluorofenil)-5- Mnuorometil-4a,5,7,7a-tetraidro-4H-hro[3,4-d][l,3]tiwin-2-il]carbamato de terc-butila e ácido 5-difluorometil-piraúna-2-carboxílico de acordo com um procedimento géral. 'H RMN (400 MHZ, CDCl,) Ô ppm 2,80 (dd, J = 13,8, 3,7W,1H),3,1l(dd,j=l3,6,2,8W,1H),3,31-3,41(m,lH),3,86(d,j =8,3W,1H),4,57(d,j=8,3k,lH),4,64(dt,j=l4,7,7,lW,1H),4,75 (brs,2H),6,69(t,j=56,3m,1W,7,07(dd,j=11,6,8,8w,1W,7,57 (dd,j=7,l,2,8Hz,lH),7,87(dt,j=8,5,3,6m,1H),8,85(s,lH),9,45(s, 1 H), 9,58 (br, s,, 1 H) Exemplo 4: N{3-((4aS,5S,7aS)-2-amino-5-(trifluorometil)- 4a,5j,7a-tetraidro-4HAilro[3,4-d][l,3]tiazin-7a-i])-4-nuorofenií)-5- (trifluorometi1)picolinamida

F , ,jO tj 'ÇF' Sintetizado de [(4aS,5S,7aS)-7a-(5-amino-2Auorofenil)-5- trif1uorometi]Aa,5,7,7a-tetraidro-4H-nlro[3,4-dj[1,3]tiazin-2-il]carbamato de terc-butila e ácido 5-trifluorometil-piridina-2-carboxílico de acordo com um procedimento geral. 'H RMN (400 MHz, CDCl,) Ô ppm 2,88 (dd, J = 13,6, 3,8 Hz, IH), 3,20(dd,j= 13,6, 3,0 Hz, IH), 3,37 -3,53 (m, 1 H), 3,94 (dd,j =8,3,2,3Hzmg,4,40-4,89(m,4H),7j4(dd,j=ll,9,8,8Hz,1H),7,66

(dd, J = 6,8, 2,8 Hz, 1 H), 7,98 (ddd, J = 8,8, 4,0, 3,0 Hz, 1 H), 8,20 (dd, J = 8,2,l,6Hz,1H),8,45(d,j=83HLnlj),8,90(s,!H),9,95(s,lH) Exemplo 5: N-(3-((4aS,5 S,7aS)-2-amino-5-(trinuorometij)- 4a,5,7,7a-tetraidro-4H-hro[3,4-d1[1,3]tiwin-7a-il)-4-nuorofeml)-5- metilpirazina-2-carboxamida om:3" :Í))"" FÁ ' Èf Sintetizado de [(4aS,5S,7aS)-7a-(5-amino-2-fluorofenil)-5- tnRuorometil-4a,5,7,7a-teWaidro-4H-hro[3,4-d][1,3]ti=in-2-il]cwbamato de terc-butila e ácido 5-metil-pirazina-2-carboxílico de acordo com um procedimento geral. 'H RMN (400 MHZ, CDCl,) Ô ppm 2,72 (s, 3 H), 2,88 (dd, J = 13,6, 3,8 Hz, 1 H), 3,21 (dd, J= 13,6, 3,0 Hz, 1 H), 3,42 -3,49 (m, 1 H), 3,94 (d, J = 8,3 Hz, 1 H), 4,39 - 4,80 (m, 4 H), 7,14 (dd, J = 11,9, 8,8 Hz, l H), 7,62 (dd, J = 7,1, 2,8 Hz, l H), 7,93 - 7,99 (m, l H), 8,46 (d, J = 1,0 Hz, 1H),9,39(d,j=13Hz,lH),9,65(s,lH) Exemplo 6: N-(3-((4aS,5S,7aS)-2-mino-5-(trinuorometil)- 4aS,7,7a-tetraidro-4HAi1ro[3,4-d][1,3]tiazin-7a-il)-4-f1uorofenil)-5- metilpicolinamida oj-Ç tj FÂ '

ÉF Sintetizado de [(4aS,5 S,7aS)-7a-(5-amino-2-fluorofenil)-5- trifluorometil-4a,5,7,7a-tetraidro-4H-nlro[3,4-d][1,3]tiazin-2-il]carbamato de terc-butila e ácido 5-metil-piridina-2-carboxílico de acordo com um procedimento geral. 'H RMN (400 MHz, CDCl3) Ô ppm 2,37 (s, 3 H), 2,78 (dd, J= 13,6,3,8 Hz, 1 H), 3,12 (dd, J= 13,6, 2,8 FIz, 1 H), 3,28 -3,40 (m, 1 H), 3,87 (d, J = 8,1 Hz, 1 H), 4,28 - 5,02 (m, 4 H), 7,02 (dd, J = 11,9, 8,8 Hz, 1m,7,55(dd,j=7,1,2,8w,1m,7,63(dd,j=8,0,1,4w,lH),7,88

" 5 (ddd,j=8,8,4,0,2,9W,lW,8,10(d,j=8,1Hz,1H),8,31-8,40(m,1W, 9,90 (s, IH) Exemplo 7: N-(3-((4aS,5S,7aS)-2-amino-5-(trifjuorometil)- 4a,5,7,7a-tetraidro-4H-Wof3,4-d][l,3]ti&.in-7a-il)-4-Ruorofenil)-5- etilpicolinamida

%ÁÍ

10 Sintetizado de ,))J"' [(4aS,5S,7aS)-7a-(5-amino-24uorofenil)-5- trinuorometil-4aS,7,7a-tetraidro-4H-nlro[3,4-d][l,3]tiazin-2-il]carbamato de terc-butila e ácido 5-etil-piridina-2-carboxílico de acordo com um procedimento geral. 'H RMN (400 MHZ, CDClj Ô ppm 1,33 (t, J = 7,6 Hz, 3 H), 2,78 (q, J = 7,6 Hz, 2 H), 2,88 (dd, J = 13,5, 3,7 Hz, 1 H), 3,22 (dd, J = 15 13,6,2,8 Hz, 1H),3,42-3,48 (m, 1H),3,96(d,j= 7,3 Hz, IH),4,44-4,95 (m,4H),7j2(dd,j=]1,6,8,8HZ,lH),7:62(dd,j=6,9,2,7Hz,lH),7,74 (dd,j= 8,1, 1,8 JJz, IH), 7,98 (dt,j= 8,7, 3,5 Hz, l H), 8,21 (d,j= 8,1 Hz, l H), 8,44 - 8,48 (m, l H), 10,00 (s, l H) Exemplo 8: N-(3-((4aS,5S,7aS)-2-amino-5-(trifluorometil)- 20 4a,5,7,7a-tetraidro-4H-hro[3,4-dj[1,3]tiam-7a-i|)-4-nuorofenil)-5- (Ruorometil)pirazina-2-carboxamida

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j))2 'íf Sintetizado de [(4aS,5S,7aS)-7a-(5-amino-2-fluorofenil)-5- trifluorometil-4a,5,7,7a-tetraidro-4H-n]ro[3,4-d][],3]tiazin-2-il]carbamato de terc-butila e ácido 5Auorometil-pirazina-2-carboxílico de acordo com um procedimento geral.

Detalhes de uma preparação atual são como seguem: ((4aS,5 S,7aS)-7a-(5-amino-2-nuorofenil)-5-(trinuorometil)-4a,5,7,7a- tetrai&o-4H-hro[3,4-d][1,3]úwin-2-il)carbmato de terc-Butila (500 mg) foi dissolvido em DCM (iO niL) e ác.ido 5-fluorometil-pirazina-2-carboxílico (223 mg), N,N-di-isopropiletilamina (521 mg) e hexafluorofosfato (1H- benzotriazol-l-ilÓxi)tripirrolidin-1-il)fosfônio (750 mg) foram adicionados.

A mistura de reação foi agitada em RT por 1 h e bicarbonato de sódio (sat., aq., 50 niL) foi adicionada.

A mistura foi extraída com EtOAc (2 x 75 inlj), as porções orgânicas combinadas foram secadas em MgSO4, evaporadas e purificadas pela cromatografía em ge! de sílica (0 °4 a 30 °/) de Gradiente de EtOAc/hexanos) para produzir a amida (613 mg) como um sólido branco.

A amida foi dissolvida em DCM (2 mL) e TFA (1 mL) foi adicionada.

Após agitação em RT por 2 h, a mistura de reação foi evaporada e bicarbonato de sódio (sat., aq., 25 niL) foi adicionado.

A mistura foi extraída com EtOAc (3 x 25 mL) e as porções orgânicas combinadas secadas em MgSO4 e evaporadas para produzir o composto do titulo como um sólido branco 'H RMN (400 MHz, CDCl,) 6 ppm 2,89 (dd, J = 13,8, 3,7 Hz, ] H), 3,21 (dd,j= 13,9,2,5 Hz, IH), 3,40 -3,51 (m, 1 H), 3,96 (d,j=7,3 Hz,lH),4,42-4,85(m,4H),5,69(d,j= 46,5W,2H),7,15(dd,j=ll,9, 8,8Hz,1W,7,64(dd,j=7,1,2,8W,1H),7,94-8,00(m,lW,8,77(s,l H), 9,47 (s, 1 H), 9,68 (s, 1 H)

, Exemplo 9: N-(3-((4aS,5S,7aS)-2-amino-5-(trifluorometil)- 4aS,7,7a-tetraidro-4HAilro[3,4-d][1,3]tiazin-7a-il)-4-nuorofenil)-5- metoxipicolinamida OJ: I l O"

F ij; NH c1:"' 'jF' Sintetizado de [(4aS,5S,7aS)-7a{5-amino-2-fluorofenil)-5- 5 trifIuorometil-4a,5,7,7a-tetraidro-4Hjilro[3,4-d][1,3]tiujn-2-il]carbamato de terc-butila e ácido 5-metoxipiridina-2-carboxílico de acordo com um procedimento geral. 'H RMN (400 MHz, CDC]3) 6 ppm 2,88 (dd, J = 13,8, 3,7HzmgÁ,23(dd,j=13À2,4HL1H),3,46(dj=7,3Hz,1H),3,89- 4,02 (m, 4 H), 4,54- 5,00 (m, 4 H), 7,1l(dd, j= 11,9, 8,8 Hz, 1 H), 7,36 (dd, lO j=8,8,2,8W,1H),7,6l(dd,j=7,l,2,8W,lW,7,97(dt,j=8,5,3,6W, IH), 8,23 - 8,30 (m, 2 H), 9,86 (s, l H) Exemplo 10: N{3-((4aS,5S,7aS)-2-amino-5-(trifluorometil)- 4a,5,7,7a-tetraidro-4H-füro[3,4-d][l ,3]tiazin-7a-il)-4-fluorofenil)-5- etoxipirazina-2-carboxamida ojj;oj

,,,),)',,, FÂ ' Èf ' 15 Sintetizado de [(4aS,5 S,7aS)-7a-(5-amino-2-fluorofenil)-5-

trinuorometil-4a,5,7,7a-tetraidro-4HAlro[3,4-d][l,3]tiazin-2-il]carbamato de terc-butila e ácido 5-etoxipirimidina-2-carboxí!ico de acordo com um procedimento geral. 'H RNIN (400 MHz, CDCl3) Ô ppm 1,47 (t, J = 7,1 Hz, 3

H), 2,87 (dd, J = 13,6, 3,5 FIz, ] H), 3,20 (d, J = 13,6 Hz, 1 H), 3,40 - 3,50 (m,1H),3,94(d,j=7,8w,1H),4,46-4,95(m,6m,7,1](dd,j=l1,5, 9,OHz, 1H),7,54-7,63 (m, 1H),7,90-8,0l(m, IH), 8,13 (S,1H),9,0O(S, 1H),9,52(br,s,,lH) Exemplo 11: N-(3-((4aS,5S,7aS)-2-amino-5-(tnnuorometil)- 4a,5,7,7a-tetraidro-4HAijro[3,4-d][1,3]tiazin-7a-il)-4-fluorofenil)-5-(l,1- difluoroetil)pirazina-2-carboxamida f\ ,f o)K" f |)N)HN h,

o' s

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Sintetizado de [(4aS,5S,7aS)-7a{5-amino-2-fluorofenil)-5- trinuorometil-4a,5,7,7a-teWai&o-4H-hro[3,4-d][1,3]tiazin-2-iljcarbamato de terc-butila e ácido 5-(1,1-Difluoroetil)pirazina-2-carboxíjico de acordo com um procedimento geral. 'H RMN (600 MHZ, CDCl3) Õ ppm 2,03 (t, J = 18,8

Hz, 3 H), 2,82 (d, J= 12,0 Hz, 1 H), 3,14 (d, J = 12,4 Hz, 1 H), 3,35 - 3,46 (m, 1 H), 3,77 - 4,07 (m, 1 H), 4,20 - 4,93 (m, 4 H), 7,08 (dd, J = 11,7, 9,0 Hz, 1H),7,56(d,j=4,5W,lH),7,80-7,93(m,lH),8,87(s,1H),9,43(s,j

H), 9,59 (br, s,, 1 H) Exemplo 12: N-(3-((4aS,5 S,7aS)-2-amino-5-(tMuorometil)- 4aÁ7,7a-tetraidro-4HmIro[3,4-d1[l,3]tiazin-7a-il)-4-fluorofenil)-5- (trifluorometil)pirazina-2-carboxamida

F\ ,F oM7m U

Ç'NHZ

·ÇF' Sintetizado de [(4aS,5 S,7aS)-7a-(5-anIino-2-nuorofeni!)-5- trinuorometil-4a,5,7,7a-tetraidro-4H-furo[3,4-dj[l,3]ti&in-2-il]cwbmato de terc-butila e ácido 5-trinuorometilpirazina-2-carboxílico de acordo com um procedimento geral. 'H RMN (400 MHz, CDClj Ô ppm 2,80 (dd, J = 13,6, 3,8w,1H),3,ll(dd,j=]3,8,2,9w,1n),3,30-3,44(m,lW,3,87(d,j = 8,3 Hz, IH), 4,25 -5,14 (m, 4 H), 7,07 (dd,j= 1!,9, 8,8 Hz, IH), 7,57 (dd, J=6,8,2,8W,1W,7,86(dt,j=8,4,3,6R,lH),8,89(s,1W, 9,53 (s,2H) Exemplo 13: N-(3-((4aS,5S,7aS)-2-mino-5-(tri8uorometil)- lO 4aS,7,7a-tetrai&o-4HAlro[3,4-d][l,3]tiazin-7a-il)-4-fluorofenil)-5- (metoximatil)pirazina-2-carboxamida

Ç3^°" Ü)"" '(F' Sintetizado de [(4aS,5 S,7aS)-7a-(5-amino-2Auorofenil)-5- trinuorometil-4a,5,7,7a-tetrai&o-4H-hro[3,4-d][l,3]tiwin-2-il]cmbmato de terc-butila e ácido 5-(metoximatil)pinmidMa-2-carbonlico de acordo com um procedimento geral. 'H RMN (400 MHz, CDCl,) Ô ppm 2,79 (dd, J = 13,6, 3,8Hz,1H),3,11(dd,j=13,6,2,8N,lH),3,32-3,39(m,lW,3,49(s,3 m,3,84(d,j=8,3w,1m,4,34-4,73(m,6w,7,05(dd,j=ll,6,8,8w, 1W,7,55(dd,j=6,8,2,8W,lH),7,88(dt,j=8,4,3,6W,lH),8,63(s,1 H),934(d,j=1,0Hz,1H),9,60(s,1H)

Exempio 14: N-{3-[(4aS,5S,7aS)-2-amino-5-(tnnuorometil)- 4a,5-di-idro-4HAIro[3,4d][1,3]tiazin-7a(7H)-il]-4-fluorofenil}-5-[('H,) metilÓxi]pirazina-2-carboxamida Sintese de ácido 14-(2) 5-[(2H3)metilóxi]pirazina-2-carboxílico MeO,C Á'1^'

N " D,CO,C jíi'j"°"'

N ' HO,C jíi'j"°"'

N Parte (I): 5-[(2H3)metilóxi]pirazina-2-carboxilato de (2H3)metila Metal sódico recentemente cortado (160 mg) foi adicionado em porções durante 10 mins a ('H3)metan(2Hj)ol (5 mL) e a solução foi adicionada até o sódio ser dissolvido. Esta solução foi então adicionada ao 5- cloropirazina 2 carboxilato de metila (1,02 g) em (2H3)metan(2H)ol (5 naL) e a solução foi deixada agitar em RT por 1 hr. A solução foi então concentrada sob pressão reduzida em um volume de cerca de 2 mL e água (50 mL) foi adicionada. A mistura foi extraida com EtOAc (2 x 50 niL), as porções orgânicas c.ombinadas foram secadas em MgSO4 e evaporadas para produzir o composto do título (745 mg). 'H RMN (400 MHz, CDCl,) a ppm 8,30 (d, J = 1,3Hz,lH),8,9l(d,j=1,3Hz,1H) Parte (II): ácido 5-[(2H3)metilóxi]pirazina-2-carboxílico A' uma solução agitada de 5 [(2H3)meti]Óxi]pirazina 2 carboxilato de (2H3)metila em l,4-dioxano (5 mL) foi adicionado água (5 mL) seguido pelo monoidrato de hidrÓxido de lítio (300 mg). Após agitação por 1 hr, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida a cerca de 5 mL e extraída com éter dietílico (25 niL). A camada orgânica foi extraída com IN de NaOlil (aq., 10 niL) e as porções aquosas combinadas foram acidificadas ao pH 2 com 6N de ácido clorídrico. Após esúiamento em uín reEigerador, a mistura foi filtrada para produzir o composto do título Como um pó marrom claro (660 mg). 'H RMN (400 MHz, CDCl,) 6 ppm 8,21 (d, J = 1,3 Hz, l H), 9,0l(d,j=l,3Hz,1W,l0,l2©rs,,lH)

Parte (III): N-{3-[(4aS,5S,7aS)-2-amino-5-(tnnuorometi!)- 4a,5-di-idro-4HAúro[3,4 d][13]tiazin-7a(7Hj)-il]-4-nuorofenil}-5- [('H,)metilóxi]pirazina 2 carboxamida o,ug: )N)NH,

' 'ÇF' ((4aS,5S,7aS)-7a-(5-amino-2-nuorofenil)-5-(Onuorometil)- 5 4a,5,7,7a-tetraidro-4H-hro[3,4-dj[l,3]tiwin-2-il)carbamato de terc-Butila (100 mg) foi dissolvido em DCM (2 mL) e ácido 5-[('H,)metilóxi]pirazina-2- carboxílico (55 mg), N,N-di-isopropiletilamina (112 mg) e hexafluorofosfato de (1H-benzotriazolj-ilóxi)tripirrolidinj-il)fosfônio (180 mg) foram adicionados.

A mistura de reação foi agitada em RT por 18 h e bicarbonato de 10 sódio (sat., aq., 25 mL) foi adicionada.

A mistura foi extraídà com EtOAC (2 x 40 mL), as porções orgânicas combinadas foram secadas em MgSO4, evaporadas e purificadas pela cromatografia em gel de silica (2 °/) a 25 °/) de EtOAc em hexanos) para produzir a amida (127 mg) como um sóIido branco.

A amida foi dissolvida em DCM (2 mL) e TFA (1 mL) foi adicionada.

Após 15 agitação em RT por 2 h, a mistura de reação foi evaporada e bicarbonato de sódio (sat., aq., 25 niL) foi adicionada.

A mistura foi extraída com EtOAc (2 x 40 mL) e as porções orgânicas combinadas secadas em MgSO4 e evaporadas para produzir o composto do título como um sóIido branco (104 mg). jÍJ RMN (400 MHZ, CDCl,) Õ ppm 2,87 (dd, J = 13,6, 3,8 Hz, I H), 3,21 (dd, J = 20 ]3,6,2,8w,1H,3,39-3,53(m,lm,3,95(d,j=8,3w,1H),4,65(d,j= 8,3W,1W,4,72(quin,j=7,2W,1W,4,87(brs,2W,7,l2(dd,j=1l,9, 8,8W,1W,7,60(dd,j=6,9,2,7W,lH),7,95(dt,j=8,5,3,6W,lH), 8J6(d,j=l,0HzjH),9,02(d,j=l,0Hz,1H),9,52(s,1H) Exemplo 15: N-(3-((4aS,5 S,7aS)-2-amino-5-(tMuorometil)-

L} .

"T 4a,5,7,7a-tetraidro-4H-Nro[3,4-d][1,3]tiazin-7a-il)-4,5-dinuorofenil)-5- (diMorometii)pirazina-2-carboxamida

F oÇj' ' ))',,, FÂ ' Èf Sintetizado de [(4aS,5S,7aS)-7a-(5-amino-2,3-diíluorofenil)-5- trifluorometi]-4a,5,7,7a-tetraidroAH-n]ro[3A-d][1,3]tiazin-2-il1carbamato de terc-butila e ácido 5-dinuorometil-pirazina-2-carboxí]ico de acordo com um procedimento geral. 'H RMN (400 MHz, CDCI,) Õ ppm 2,90 (dd, J = 13,8, 3,7 Hz, IH), 3,19 (dd, J= 13,8,2,7 Hz, ! H), 3,31 - 3,49 (m, l H), 3,95 (d,j = 7,6Hz, IH),4,44-5,15 (m,4H),6,81 (t,j= 55,8 Hz,4H), 7,22 -7,35 (m, ]H),8,08(ddd,j=l1,2,6,8,2,7R,1H),8,94(s,lm,9,53(s,1H),9,67 lO (s, 1 H) Exemplo 16: N-(3-((4aS,5S,7aS)-2-a§o-5-(trinuorometil)- 4a,5,7,7a-teKaidro-4H-hro[3,4-d][l,3]tiazin-7a-il)-4,5-dinuorofenil)-5- metoxipirazina-2-carboxamida O"1{OMe ))',,, '"y Sintetizado de [(4aS,5S,7aS)-7a-(5-amino-2,3-difluorofenil)-5- trifIuorometij-4aS,7,7a-tetraidro-4H-füro[3,4-d][l,3]tiazin-2-i1]carbamato de terc-butila e ácido 5-metoxipirazina-2-carboxílico de acordo com um procedimento geral. 'Il RMN (400 MHz, CDCl, + MeOlj) Ô ppm 2,83 (dd, J = 13,9, 3,8 Hz, 1 H), 3,14 (dd, J = 13,9, 3,0 Hz, i H), 3,29 -3,39 (m, 1 H),

3,87(dj=8,3HLlH),4,04(s,3H),4,60(d,j=8,3Hz,1Fn,4,67(quin,j =6,3w,1H),7,ll-7,2l(m,1H),8,03(ddd,j=11,6,6,9,2,7m,lH), 8,15(d,j=l,3W,lH),8,96(d,j=j,3W,lH) Exemplo 17: N{3{(4aS,5S,7aS)-2-amino-5-(tMuorometil)- 4a,5,7,7a-tetraidro-4H-hro[3,4-d][1,3]ti&in-7a-il)-4,5-dinuorofenil)-5- metilpirazina-2-carboxamida om23"'

O" 'Qf' Sintetizado de [(4aS,5 S,7aS)-7a{5-amino-2,3-difluorofenil)-5- trinuorometil-4a,5,7,7a-tetraidro-4H-hro[3,4-d][1,3]tiwin-2-il]carb=ato de terc-butila e ácido 5-metilpirazina-2-carboxílico de acordo com um procedimento geral. 'H RMN (400 MHz, CDCl, + MeOD) (3 ppm 2,68 (s, 3 H), 2,84 (dd, J = 13,6, 3,8 Hz, 1 Il), 3,15 (dd, J = 13,9, 3,0 Hz, I H), 3,30 - 3,42(m,lH),3,88(d,j=l0,4W,1H),4,6l(d,j=8,6W,1W,4,68(quin, J=7,2Hz,1H),7,13-7,25 (m,lH),8,05(ddd,j=1i,6,6,8,2,8Hz,1H), 8,46(s,1H),9,30(d,j=j,3Hz,!H) Exemplo 18: N-(3-((4aS,5S,7aS)-2-mino-5-(tnnuorometil)- 4a,5,7,7a-tetrai&o-4H-hro[3,4-d][1,3]ti=in-7a-il)-4,5-dinuorofenil)-5- (nuorometil)-pirazina-2-carboxamida

1) '(F' Sintetizado de [(4aS,5S,7aS)-7a-(5-amino-2,3-diüuorofenil)-5-

trifluorometil-4a,5,7,7a-tehaidro-4H-fúro[3,4-d][1,3]tiazin-2-il]carbamato de terc-butila e ácido 5-(fluorometil)pirazina-2-carboxílico de acordo com um procedimento geral. 'H RMN (400 MHZ, CDCl,) i5 ppm 2,89 (dd, J = 13,6, 3,8 Hz, 1 H), 3,19 (dd, J= 13,6, 3,0 Hz, l H), 3,43 (dd, J= 7,5, 3,4 llz, 1 H), 5 3,86 - 3,99 (m, 1 H), 4,39 - 4,67 (m, 3 H), 4,74 (quin, J = 7,1 Hz, 1 H), 5,76 (d,j=45,5 Hz, 2H), 8,10 (ddd, j= 11,4, 6,8,2,8 Hz, IH), 8,77(s, 1H),9,46 (s, 1 H), 9,69 (s, 1 H) As preparações altemadas dos compostos dos Exemplos 1 e 8 são descritos neste abaixo. Para estas preparações altemadas lH RMN e espectro '3C RMN foram registrados em um instrumento Varian 400 MHz ou 500 MHz com o sofWare vRMN 6.1C. Preparação altemativa de N-(3-((4aS,5S,7aS)-2-amino-5- (tMuorometi])-4a5j,7a-tetraidro-4H-nIro[3,4-d][1,3]tiazin-7a-il)-4- fluorofenil)-5-metoxipirazina-2-carboxamida (Exemplo 1) 1-(14) Síntese de 2-(1,l,l-trifluorobut-3-en-2-ilóxi)acetato de terc-Butila OHC) ,,M, "jji< / NaOH aq. , Iy U 1<

O cfjms y f CF, cat. TBAF 3C Bu,N HSO4 tolueno 0 °C Um recipiente de reação foi carregado com tolueno (3,2 L), THF (0,60 L) e Acroleína (0,40 L, 5,985 mol) em temperatura ambiente sob nitrogênio. (Trifluorometil)trimetilsilano (1,003 kg, 7,059 mol) foi adicionado a 17°C. A mistura de reação foi eshiada a 2,5°C e TBAF (0,01 M em THF, 0,400 L, 0,004 mol) foi adicionada durante 2 h. Durante a adição de TBAF, a temperatura da mistura de reação aumenta a 65°C. A mistura de reação foi esfíiada a O°C, e Após 2h, sulfato de hidrogênio de tetra-n-butilamônio (0,171 kg, 0,503 mol) foi adicionada, seguido pelo bromoacetato de terc-butila (0,987 kg, 5,064 mol). Hidróxido de sódio (50 °/, de peso em água, 4,2 kg, 52,6 mol) foi adicionada durante 2h enquanto mantém uma temperatura sob i0°C.

Após 2h a 0-5°C, em uma mistura de reação foi adicionada água (2,9 L) e éter metil terc-butílico (6,0 L). A fase aquosa foi extraída uma vez mais com éter metil terc-butílic.o (6,0 L). As fases orgânicas foram combinadas e lavadas com 14 °/) de NaCj aquoso (3 x 1,6 L). Os orgânicos foram 5 concentrados sob vácuo para produzir o composto do título como um ÓIeo (1,150 kg, 94,5 °/0) que foi usado no estágio subsequente sem purificação adicional. 'H RMN (500 MHz, CDC!,) Õ ppm 5,86 - 5,74 (m, l H), 5,59 (d, J =17,5m,lW,5,56(d,j=10,9w,1W,4,37-4,30(m,lH),4,1l(d,j= 16,5 HZ, 1 H), 4,06 (d, J = 16,4 Hz, 1 H), 1,40 (s, 9H); "C RMN (125 MHZ,

CDCl,) D ppm 168,51, 128,49 (d, J = 1,7 Hz), 123,86, 123,71 (q, J = 281,8 Hz), 82,22, 78,67 (q, J = 31,5 Hz), 66,60, 28,02. 1-(15) Síntese de Nmetóxi-N-metil-2-(l,l,l-tMuorobut-3-en- 2-ilóxi)acetamida

)Uoj< HCOOH('V) )°jjijA' CF3 MeONHMe-HCl" CF, CDl, DCM Estágio 2

A um reator contendo 2-(1,1,1 -trifluorobut-3-en-2- ilóxi)acetato de terc-butila (1,150 kg, 4,788 mol) foi adicionado ácido fórmico (6,2 kg) em temperatura ambiente.

A mistura de reação foi aquecida a 55- 60°C por 4-5 h.

O ácido fórmico foi evaporado sob vácuo (T = 40 a 45°C) e desafiado com tolueno (2 x 3,0 L). Ao resíduo foi adicionado CH2Cl2 (2,0 L) e ainda concentrado sob vácuo.

Ao residuo resultante foi adicionado CH2C12

(4,6 L) e a soIução foi esfíiada a O°C, seguido pelo N,N-carbonildi-imidazol (1,05 kg, 6,49 mol) em cinco porções.

A mistura foi adicionada por 30 mins e cloridreto de N,O-dimetili&oxilamina (0,67 kg, 6,72 mol) foi adieionada em porções enquanto mantém a temperatura abaixo de l0°C.

A mistura de reação foi aquecida em rt e agitada durante 14 h.

A mistura de reação foi eshiada a 3,2°C e imidazol (100,7 g, 1,48 mol) foi carregado em duas porções.

A mistura de reação foi aquecida em rt e água (1,4 kg) foi adicionada, seguido pelo éter metil terc-butílico (14,0 L). A fase orgânica foi lavada com 2,0 N de HCl aquoso (1,0 L e 0,7 L), seguido pelo NáHCO, sat. aq. (1,2 L) e NaCl sat. aq. (1,20 L). Os orgânicos foram concentrados para produzir o composto do título como um Óleo (0,95 kg, 87,2 °/,). 'H RMN (500 MHz, cDclj) Ô ppm

5 5,85 -5,76 (m, IH), 5,62 (d, J= 17,2 Hz, 1 H), 5,56 (d, J= 10,4 Hz, IH), 4,49-4,34 (m, 3 H), 3,68 (S,3 H), 3,67 (s, IH), 3,18 (s, 3 H), 3,08 (s, IH); "C RMN (126 MHz, cdcl,) Ô ppm 169,9*, !63,4*, 128,61, !23,87 (d, J =

282,0 Hz), 123,82, 78,54 (q, J = 31,3 Hz), 66,12, 6í,52, 60,56, 36,20, 32,24. Nota-se: este composto é uma mistura 3:1 dos rotâmeros de ligação de amida. lO * mudanças químicas de carbonila estimadas' indiretamente através de iH_ 13ç HMBC (correlação de ligação múltipla heteronuclear). HRMS Calculado por C,H,,F,NO, [M+H]" 228,0848; observado 228,0836. 1-(16) Síntese de 1{2-Fluorofenil)-2-(l,1,l-trif1uorobut-3-en- 2-ilóxi)etanona

)ojji>'j ,): ° ) CF3 nBuLi, THF

Estágio 3

Em uma solução l-bromo-2-fluorobenzeno (0,967 kg, 5,527 mol) em THF (6,2 L) a -75°C, foi adicionado n-butillítio (2,50 M em hexano, 2,09 L, 5,22 mol) enquanto mantém a temjperatura abaixo de -65°C (ca. 100 min.). Após 15 mins, uma solução de N-metÓxiN-metil-2-(1,l,l-trifluorobut- 3-en-2-ilóxi)acetamida (0,949 kg, 4,178 mol) em THF (1,6 L) foi adicionada enquanto mantém a temperatura abaixo de -65°C (ca. 70 min.). Após 2,5 h a - 78°C, a reação foi extinta pela adição de NH4CI sat. aq. (3,0 L) e éter metil terc-butílico (9,0 L). A mistura de reação foi aquecida em rt, a fase aquosa foi extraída novamente com éter metil terc-butílico (2,5 L). As fases orgânicas foram combinadas, Iavadas com NaCl sat. aq. (2 x 0,3 L) e concentradas sob vácuo para produzir o composto do titulo como um óleo (1,007 kg, 80,0 °4).

'H RMN (500 MHz, CDCl,) çj ppm 7,96 (td, J = 7,6, 1,8 Hz, l H), 7,62 - 7,54 + (m, l H), 7,33 - 7,25 (m, l H), 7,20 - 7,12 (m, 1 H), 5,86 (ddd, j= 17,5, 10,4, 7,3 Hz, IH), 5,60(dd,j=20,5, 13,8 Hz, 2 H),4,91-4,76 (m, 2 H),4,39(dq, 5 J = 12,8, 6,4 Hz, IH); "C RMN (125 MHz, CDCl,) ô ppm 193,55, 162,14 (d, Jc, = 254,1 Hz), 135,36 (d, Jc, = 9,2 Hz), 130,62 (d, Jcf = 3,2 Hz), 128,49, 124,85 (d, Jcf = 3,3 Hz), 123,89, 122,93, 122,72 (d, Jc, = 24,5 Hz), 116,50 (d, Jc, = 23,7 Hz), 78,97 (q, Jcf = 31,4 Hz), 74,56 (d, Jc, = 12,4 Hz).

HRMS Calculado por C,,H,0F4O, [M+H]" 263,0695; 10 observado 263,0709.

1-(17) Sintese de 1{2-Fluorofenij)-2-(1,l,j-triMorobut-3-en- 2-ilóxi)etanona oxima o f NH,OH HCl, ho-n f NaOAc )o / ! MeOH . ,C^yO " ,| CF3 C/ Estágio 4 CF3 C, A um reator foi adicionado cloridreto de hidroxilamina (0,34 kg, 4,95 niol), acetato de sódio (0,47 kg, 5,70 mol) e MeOH (2,68 L). A esta 15 suspensão foi carregado uma solução de 1{2Auorofenil)-2-(l,1j- trifluorobut-3-en-2-ilóxi)etanona (0,998 kg, 3,806 mo!) em McOH (1,8 L) e a mistura de reação foi aquecida a 40 a 50°C- Na finalização (ca- 2 h) a mistura de reação foi esfíiada em RT e filtrada em Celite (0,5 Wt) e enxaguada com EtOAc (3,0 L). O filtrado foi concentrado sob vácuo e ao resíduo resultante 20 foi adicionado éter metil terc-butilico (6,3 L), água (0,94 L) e NaHCO3 sat.

aq. (2,5 L). A fase orgânica foi lavada uma vez com água (1,6 L) e NaCl sat.

aq. (0,1 .L). A fase orgânica foi concentrada sob vácuo para produzir o composto do título como um óleo (1,03 kg, 95,0 °/,), 'H RMN (500 MHz, CDCl,) tj ppm 7,49 - 7,35 (m, 2 Il), 7,24 - 7,06 (m, 2 H), 5,78 - 5,65 (m, l 25 H), 5,54 - 5,40 (m, 2 Hj), 4,89 - 4,81 (m, 1 H), 4,53 (d, J = 12,6 HZ, 1 H), 4,47 (d,j= 12,6 Hz, 0,5 H), 4,27 -4,18 (m, ] H),4,13 -4,05 (m, 0,5H).

llO HRMS Calculado por C,,H,,F,NO2 [M+H]" 278,0804; observado 278,0780.

Nota-se: 1-(2-F!uorofenil)-2-(1,!,j-MAuorobut-3-en-2-ilóxi) etanona oxima existe como um equilíbrio dos isômeros estruturais, que leva 5 em conta os valores integrais menores do que o número total.

1-(18) Síntese de (3aR*,4S*,6aS*)-6a-(2-fluorofenil)-4- (triàuorometil)hexaidroàro[3,4-c]isoxazol '°"? ' fjh hidroquinona · )o"-""" ") /-j-N cf, C/ " o, J, ;O xilenos 130 °C F3cr A Em uma solução de 1{2Auorofenil)-2-(1,l,l-trifluorobut-3- en-2-ilóxi)etmona oxima (1,085 kg, 3,328 mol) em xilenos (6,9 L) foi adicionada hidroquinona (86,2 g, 0,8 mol) em rt. A solução foi aquecida a l28°C (temperatura intema) por J8 h. A solução foi es&iada em RT e hexanos (7,0 L) foi adicionada, seguido peio 4,0 M aq. HCl (2,4 L). A mistura de reação foi adicionada por 1 h e filtrada. Ao sólido foi adicionado água (2,0 L), éter metil terc-butílico (7,0 L) e 25 °4 em peso de NaOlil aq. (0,4 L). A camada aquosa foi extraída uma vez com éter metil terc-butílico (7,0 L), os orgânicos foram combinados, lavados com 27 °4) de NaCl aquoso (2,0 L) e concentrados sob vácuo em um óleo preto (512,0 g, 56 °/,). lH RMN (500 MHz, CDCl,) 6 ppm 7,64 - 7,52 (m, 1 H), 7,39 - 7,31 (m, 1 H), 7,19 (td, J = 7,7,1,2W,1H),7,1l(ddd,j=11,9,8,2,1,0W,lH),4,54(d,j=l0,lHz, IH),4,34-4,23 (m, IH), 4,26-4,17 (m, 1 H),4,l6 (d, J= 10,2 FIz, IH), 4,10 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 3,71 (d, J"= 20,2 Hz, IH); "C RMN (125 MHZ, CDC!,) Õ ppm 160,59 (d, Jcf = 247,0 Hz), 130,50 (d, Jcf = 8,7 Hz), 128,72, 124,69 (d, Jc, = 3,3 Hz), 124,45 (q, Jcf = 281,8 Hz), 124,43 (d, Jcf = 11,9 Hz), 116,66 (d, Jcf = 22,7 Hz), 83,70 (q, Jcf = 32,1 FIZ), 78,17 (d, Jc, = 3,1 HZ), 77,63, 54,53.

lll HRMS Calculado por C,,H,,F,NO2 [M+H]" 278,0804; observado 278,0802.

1-(19) Síntese de) ((2S*,3R*,4S*)-4-amino-4-(2Auorofenil)- 2{trifluorometil)tetraidrohrano-3-il)metanol Á . ,,,,,,, ,J)lÍ,, O 'O THF, água " O, —^W, F,Ê Êi F,i oh racêmico 5 Zinc-o (389,2 g, 5,95 mol) foi colocado em um recipiente de reação e água foi adicionada (893 niL). O ácido acético (135 niL, 2,38 mol) foi adicionado enquanto mantém uma temperatura abaixo de l0°C. Após 15 min, 6a-(2-nuorofenil)-4-(winuorometil)hexaidroMo[3,4-c]isoxazol (550,0 g, 1,98 mol) foi adicionado como uma solução em THF (665 mL). A mistura de lO reação foi adicionada durante 16 h em rt. Cloreto de metileno (1,89 L) foi adicionado, seguido pelo 28 °/) de NjH4oH aq. (552 mL) enquanto a temperatura foi mantida abaixo de 30°C. A mistura foi adicionada por 30 min e então filtrada em Celite (80 g) enxaguando com cloreto de metileno (378 niL). A camada aquosa foi extraída com cloreto de metileno (i,89 L). Os orgânicos foram combinados, lavados com NaCl sat. aq. (1,0 L) e concentrados sob vácuo para produzir um Óleo (502 g, 90,6 °4). O resíduo bruto foi usado na seguinte etapa sem purificação adicional- HRMS Calculado por C,,H,,F,NO2 [M+H]" 280,0961; observado 280,0972.

1-(20) Síntese de ((2SÀR,4S)-4^nino-4-(2-f1uorofenil)-2- (trifluorometil)tetraidroíúrano-3-il)metanol (2S, 3S)-2,3-bis(benzoilóxi) succinato

)nhz D-DB'A , ),,, Hojj' -·PI,, EtOH, ág" r ""| F3C OH F3C OH

Em uma solução de 4-amino-4-(2-fluorofenil)-2- (trifluorometil)tetrai&o&rano-3-il)metanol (0,502 kg, 1,798 mol) em etanol (4,865 L) foi adicionado ácido dibenzoil-D-tartárico (0,642 kg, 1,798 mol). A suspensão resultante foi aquecida a 67°C.

A água (94,0 mL, 5,2 mol) foi adicionada durante 15 min enquanto mantém a temperatura >66°C.

A sojução resultante foi esfiiada a 45°C enquanto precipitação ocorrida.

A pasta foi re- aquecida a 60°C e então eshiada em temperatura ambiente a 5°C/hora.

A pasta foi nltrada e o sólido foi enxaguado com solução esfiiada e pré- misturada de etanol (950 mL) e água (20 mlj). O sólido foi secado até peso lO constante sob vácuo (370 g, 97,6 °/) ee). 'H RMN (500 MHZ, CD,OD) Ô ppm 8,13 (d, J = 7,2 IIz, 4 H), 7,66 - 7,58 (m, 3 H), 7,54 - 7,45 (m, 5 H), 7,36 - 7,20 (m, 2 H), 5,92 (s, 2 H), 4,79 - 4,66 (m, 1 H), 4,40 - 4,28 (m, I H), 4,04 (dd, j Á 12,1, 3,4 IIZ, 1 H), 3,92 (dd, J = 12,1, 5,4 Hz, 1 H), 3,30 - 3,24 (m, IH); "C RMN (125 MHz, DMSO) D ppm 169,61, 165,81, 160,23 (d, J = lS 246,1 Hz), 133,00, 131,34 (d, J = 9,1 Hz), 129,65, 129,55, 128,08, 127,97 (d, J = 3,5 Hz), 124,95 (d, J = 3,3 Hz), 116,56 (d, J = 23,5 Hz), 77,48 (q, Jcf = 31,0 Hz), 76,33, 73,20, 65,61 (d,j = 3,1 Hz), 57,11. HRMS Calculado por C,,H,,F,NO, [M+H]" 280,0961;

observado 280,0967 (para álcool amino). A estereoquímica absoluta do composto do título foiindicada pela comparação com uma amostra de partida preparada de enantioenriquecido por (S)-2-(Üifluorometil)oxirano.

Parâmetros quirais HPLC: Equipamento, Reagentes e fase móvel: Equipamento:

"T 113 Coluna de HPLC: Cbiralcel OD, 4,6 x 250 mm, ] 0 µm, Daicel Chemical Industries, Ltd., catálogo N°. 14025. Sistema de liberação de solvente: botnba temária Agilent llOO HPLC, mistura de pressão baixa com desgaseificador em im ou equivalente. Autoamostrador: autoamostrador A$ilent 1100, 0,1 a 100 µL da faixZ ou equivalmte. Detector: detector de comprimento de onda variável A*]ent i 100 ou equivalente. Software crQmatogránco: Sofware Agilent ChemStation versão A.09.03 ou rnaior por HPLC, Waters Empower 2 Build 2154 ou equivaknte. vidro volumétrico: Classe A. Pipeta volumétrica: CIasse A. pipeta Volume qjustáwd Eppendorf calibrado, ou equivalente. Balança: Balança analitic& capaz de pesagem de ± 0,1 mg.

Reagentes: Heptano: Grau HPLC. Baker (catálogo N°. 9177-03) ou equivalente. 2-Propanol: Grau HPLC, Baker (catá]oeo n'. 9095-03) ou equivalente. Trietilamina: Z 99 °/,, SiQma-Aldrich (catáloÉo N°. T0886) Oll equivalente.

Fase móvel: Adicionar 70 niL de 2-propanol e 930 mL de heptano (medido separadamente com 100 mL e 1000-ML de cilindros graduados) e 1,0 niL de 5 trietilamina (medido com pipeta de vidro vojumétrico) em um Easco e mistura apropriada. Desgaseificar em linha durante o uso.

Solução de diluição: 2-Propanol Parâmetros HPLC: Coluna HPLC: Chiralcel OD, 4,6 x 250 mm. 10 µm, Daicel Chemical Tndustries. Ltd., catálogo N°. 14025.

Temperatura: 35"C Taxa de fluxo*: 0,8 mljmin Gradiente: NA VoIume de injeção: 5 µL Detecção: 262 nm UV Tempo de aquisição dos dados: 30 min Tempo de realização total: 30 min Pressão máxima de coluna: 35 Bar Lavagem de agulha: 2-propanol ! *"I'axa de tluxo pode se' qjustada ± 0,2 ml/min para nbter ternpos de retenção especiticados.

Tempos de retenção para Analitos e impurezas: Pico de composto Tempo de retenção (Tempo de retenção relativo, RRT) | \ 20,6min±lO% f JJ)H, (RRT 1,00) F,C OH 19,2 min (RRT 0,93) Jm °;jj;"' F,C "ÓH (Enantiômero 10 Um cromatograma típico de um isolamento quiral HPLC do E- .

composto 1-(20) é apresentado na figura 1.

1-(21) Síntese de N-((3S,4R,5g-3-(2-nuorofeni])-4- (hidroximatil)-5-(trinuorometil)-tetraidrohrmo-3-ilcarbamotioil)benz=ida F' ),,, Hojçj' cj'". )J-,, O>J·tt,j EtOAc, 1N NaOH r b] S FÉ OH F,C H OH Ao sal quiral ((2S,3R,43-4-=ino-4-(2-nuorofenil)-2- 5 (trinuorometi])tetraidronlrano-3-il)metanol (2S, 3S)-2,3-bis(benzoilóxi) succinato (0,361 kg, 0,556 mo!) foi adicionada EtOAc (1,08 L) e a suspensão foi eshiada a -3°C. 1,0 N de NaOlil aq. (1,30 L) foi adicionada durante 20 mins enquanto mantém T < 5°C. Após 5 mins, isoticianato de benzoila (80,0 mL, 594 mmol) foi adicionada durante 8 mins enquanto mantém T < 5°C.

Após ] h, EtOAc (722 mL) foi carregado. A camada aquosa foi removida e os orgânicos foram lavados com NálilCO3 sat. aq. (361 mL) e NaCl sat. aq. (361 mL). Os orgânicos foram filtrados em celite (90 g) e enxaguadaos com EtOAc (360 mL). Os orgânicos foram concentrados sob vácuo para produzir um resíduo que foi redissolvido em CH2C|2 (1,1 L) e concentrados para produzir o composto do título como espuma amarela (261 g, 99 °/) de rendimento levando em conta os solventes residuais) que foi usada na seguinte etapa. Yh RMN (500 MHz, DMSO) Ô ppm 12,04 (s, 2 H), 11,20 (s, 2 H), 7,95 (d, J = 7,4 Hz, 2 H), 7,69 - 7,60 (m, ] H), 7,56 - 7,42 (m, 2 H), 7,37 - 7,28 (m, 1 H), 7,24 - 7,12 (m, 2H), 5,59 (t, J = 4,5 Hz, 1 H), 5,03 (d, J = 9,7 Hz, 1 H), 4,92 (d, J = 9,7 Hz, 1 H), 4,75 - 4,63 (m, l H), 3,92 - 3,74 (m, 2 H), 2,77 - 2,66 (m, IH); "C RMN (125 MHZ, DMSO) Õ ppm 179,98, 167,85, 159,75 (d, Jcf = 245,0 Hz), 133,44, 132,58, 129,88, 129,81, 129,04, 128,85, 126,31 (d, Jcf = 9,8 Hz), 124,36, 116,83 (d, Jc, = 23,4 Hz), 76,11 (q, Jc, = 31,0 Hz), 74,37 (d, Jc, = 6,1 Hz), 68,77 (d, Jcf = 3,4 Hz), 57,03, 52,23. HRMS Calculado por C20Hl8F4N2O3S [M+H]" 441,0896;

observado 441,0818.

1-(22) Síntese de N-((4aS, 5SJaS)"7a{2Auorofenil)-5- (trifluorometil)-4a,5,7,7a-tetraidro-4HAüro[3,4-d][1 ,3]tiazin-2-il)benzamida "J-,, ,,,,,,,,,,,,. )Nj-,, O) s CH,Cl, F,Ô 'ÔH F,Ê A Uma solução de N-((3S, 4R,5S[)-3-(2Auorofenil)-4- 5 (hidroximatil)-5-(tnnuorometil)-tetraidromrano-3-i]carbmotioil)bem=ida (258,3 g, 583,8 mmol) em CH,Cl2 (1,55 L) foi esfriada a -19,4°C. Piridina (1 18 niL, 1,46 mol) foi adicionada enquanto mantém a temperatura a -20°C e então a mistura de reação foi esEiada a -24°C. Em outro recipiente purgado por nitrogênio, CH2Cl2 (258 mL) foi adicionado seguido pelo anidrido lO trif1uoroníetanossulfônico (108,0 niL, 642,2 mmol). A solução resultante foi adicionada em uma mistura de reação durante 30 min, enquanto mantém a temperatura < -19,7°C. Na adição completa, a mistura de reação foi adicionada por 30 min a -20°C a -15°C e então aquecida em -1l°C durante 20 min. NH4Cl saturado aq. (646 niL) e água (390 mL) foi adicionada. A mistura foi aquecida em temperatura ambiente e a camada aquosa foi reinovida. Os orgânicos foram lavados com NjH4c] saturado aq. pré-misturado (646 mlj) e água (390 niL). As camadas aquosas foram combinadas e extraídas uma vez com CH2Cl2 (520 niL). Os orgânicos foram combinados e concentrados sob vácuo para produzir uma espuma laranja clara (250 g, l00 °/0). O resíduo foi usado no próximo estágio sem purificação. 'H RMN (500 MHz, CDC]3) Ô ppm8,03 (d,j=6,7Hz,2H),7,52(t,j=7,OHz, 1H),7,48-7,31(m,4H), 7,20 (t,j= 7,4 Hz, IH), 7,12 (dd, J= 12,0, 8,4Hz, 1H),4,82-4,73 (m, l H),4,60(d,j=8,9N,1H),4,03(d,j=8,3W,lH),3,57(d,j=2,7Hz,l H), 3,20 (d, J= 13,6 Hz, 1 H), 2,81 (dd, J= 13,8, 2,5 Hz, IH); "CRMN(125 MHz, CDCl,) t: ppm 171,50, 159,57 (d, Jcf = 247,2 Hz), 134,62, 132,49,

il6

130,65 (d, Jc, J= 8,8 Hz), 129,77, 128,51, 128,45, 125,14 (q, Jc,= 281,8 Hz), 124,97 (d, Jc, = 3,0 Hz), 124,66 (d, Jc, = 10,3 Hz), 117,05 (d, Jc, = 23,5 Hz), 66,81 (d, Jc, = 5,2 Hz), 38,90, 23,20. HRMS Calculado por C20HiS4N,O2S [M+H]" 425,0947; 5 observado425,0945. 1-(23) Síntese de (4aS,5S,7aS)-7a-(2-nuorofenil)-5-

(trif1uorometil)-4aS,7,7a-tetraidro-4H-nIro[3,4-d][1,3]tiazin-2-amina

,I)'"b' ::· . jj" Em uma solução de N-((4aS, 5S,7aS)-7a-(2-Auorofenil)-5- (triRuorometil)-4a,5,7,7a-tetraidro-4H-mro[3,4-d][l,3]tiazin-2-il)benzmida (250,2 g, 589,5 mmol) em metanol (1,25 L) foi adicionada K,CO3 (81,5 g, 590,0 rnmol). A suspensão foi aquecida a 65°C por 6 h.

No esEiamento em temperatura ambiente, o solvente foi evaporado sob vácuo.

Ao resíduo resultante, foi adicionado 1,0 N de NaOH aq. (1,18 L) e THF (502 mL). A mistura heterogênea foi aquecida a 45°C por 1 h.

A mistura foi esfriada a temperatura ambiente e EtOAc (1,38 L) foi adicionada.

A camada aquosa foi extraída com EtOAc (0,75 L). Os orgânicos foram combinados, lavados com NaljCO, saturado aq. (500 niL) e NaCl saturado aq. (500 mL). Os orgânicos foram concentrados sob vácuo para produzir o composto do título como um Óleo marrom (184,1 g, 91,6 °/) rendimento levando em conta os solventes residuais). |H RMN (500 MHz, DMSO) 6 ppm 7,49 - 7,42 (m, 1 H), 7,40 - 7,33 (m, I H), 7,26 - 7,15 (m, 2 H), 6,26 (s, 2 H), 4,77 - 4,54 (m, 1 H), 4,40 (d, J= 8,0 HZ, IH), 3,80 (dd,j= 7,9,2,3 Hz, 1 H), 3,24 - 3,17 (m, 1 H), 3,00 (dd, J = 13,9, 3,2 Hz, 1 H), 2,85 (dd, J = 13,9, 3,9 Hz, IH); "C RMN (125 MFIz, DMSO) 6 ppm 159,75 (d, Jc, = 245,1 Hz), 149,51, 131,31 (d, Jc, = 3,9 Hz), J30,l3 (d, Jcf = 8,8 HZ), 128,08 (d, Jc, = 10,4 Hz), 128,28 (q, Jcf = 282,1 Hz), 124,87 (d, J,, = 3,0 Hz), 116,80 (d, J = 23,8 Hz), 78,77, 76,80 (q,

J,, = 30,8 Hz), 66,31, 36,37, 23,27. HRMS Calculado por C,,H,,F,N,OS [M+H]" 321,0685; observado 321,0677. 1-(24) Síntese de cloridreto de (4aS,5S,7aS)-7a-(2Auoro-5- - 5 nitrofenil)-5-(triBuorometil)-4a,5,7,7a-tetraidro-4H-hro[3,4-d][i,3]ti&in-2- amina I~ 1. hno,,

V 'A"'y"' h2so4 "^ t)))°:H2Hc °A~' f,G H '""' µ F,t H Ao recipiente esfriado contendo (4aS,5S,7ag-7a-(2- nuorofenil)-5-(trinuorometil)-4a,5,7,7a-tetrai&o-4H-hro[3,4-d][1,3]tiazin-2- amina (184,1 g, 574,8 mmol) foi adicionado ácido triijuoroacético (0,954 kg) 10 em porções enquanto a temperatura foi mantida abaixo de 20°C. A mistura foi eshiada a 3,5°C e ácido sulhirico (146 niL, 2,73 mol) foi adicionada durante 20 min enquanto a temperatura foi mantida abaixo de 5°C. A fumigação do ácido níthco (39,8 mL, 0,948 mol) foi adicionada durante 30 min, enquanto a temperatura foi mantida abaixo de l0°C. Após 1,5 h a O-l0°C, a mistura de 15 reação foi lentamente extinta pela transferência em uma solução aq. de NaOH (575 g, 14,4 mol) em água (4,6 L) eshiada a 5°C. A suspensão resultante foi adicionada por l h a 2l°C. A suspensão foi então filtrada e o sólido enxaguado com água fria (920 mL). O sójido foi secado sob vácuo até o peso constante e então dissolvido em etanol (1,05 L). A solução foi aquecida a 20 35°C e HCl conc. (55,6 rríL, 0,690 mol) foi adicionada enquanto mantém a temperatura abaixo de 40°C. A suspensão foi então esfriado em -5°C, mantida por 1 br e filtrada. O sólido foi enxaguado com etanol frio (420 mL) e secado até o peso constante para obter o composto do título (185,0 g, 87,3 °4,). lH RMN (500 MHZ, DMSO) tj ppm 11,80 (s, 2 H), 8,45 - 8,36 (m, 1 H), 8,31 25 (dd, J = 6,6, 2,5 Hz, 1 H), 7,66 (dd, J = 1l,l, 9,3 Hz, l H), 4,96 - 4,72 (m, 1

H),4,58(d,j= lO,Ol1z, 1H),4,27(d,j=9,9W, 1H),3,76-3,66 (m, IH), 3,39 (dd, J = 14,9, 3,6 Hz, 1 H), 3,24 (dd, J = 14,3, 4,6 Hz, IH); "C RMN (125 MHz, DMSO) õ ppm 168,34, 163,33 (d, Jc, = 257,8 Hz), 144,58, 127,61 (d, Jc, = 11,6 Hz), 125,84, 124,10, 119,28 (d, Jc, = 26,5 HZ), 77,38 (q, 5 Jc, = 31,5 Hz), 75,99, 65,88 (d, Jc,= 4,8 Hz), 40,36, 23,98.

HRMS Calculado por C,,H,,F,N,O,S [M+H]" 366,0536; observado 366,0523.

1-(25) Síntese de (4U,5S,7©-7a-(5-amino-2-Auorofenil)-5- (trif1uorometil)-4a,5,7,7a-tetraidro-4H-fúro[3,4-d] [1,3]tiazin-2-amina a jj),, ,,, ,,, ,,, , jj'ÍH, °JÁ> ,,OH f,C h f,G h O etanol (0,975 L) foi adicionada ao pó de ferro (62,5g, 1,12 mol) sob atmosfera de nitrogênio. HCl concentrado (9,03 mL) foi adicionado em temperatura ambiente e a suspensão foi aquecida a 65°C por 1,5 h. A suspensão foi então esfriada em 50°C e NH4CI sat. aq. (299 g) foram adicionados. A temperatura da mistura de reação foi deixada atingir 50°C e cloridreto de (4^,5S,7©-7a-(2-nuoro-5-nitrofeml)-5-(tnnuorometil)- 4a,5,7,7a-tetraidro-4HAtro[3,4-d][1,3]tiazin-2-amina (75,0 g, 187,0 mol) foi adicionada em porções enquanto mantendo a temperatura abaixo de 68°C.

Após 30 min, etanol (0,45 L) foi adicionado e a mistura de reação foi eshiada a 20-25°C durante L h. A suspensão foi adicionada por 2 h e filtrada em Celite (75 g) enxaguando com etanol (0,972 L). A solução foi concentrada sob vácuo em um sólido marrom. A água (0,9 L) foi adicionada seguido pelo 3,0 N de NaOlil (0,187 L, 560 mmol) enquanto mantém a temperatura abaixo de 35°C. A suspensão resultante foi adicionada por 1 h a 20-25°C. A suspensão foi filtrada e o sólido foi enxaguado com água Ria (0,38 L). O sólido foi secado sob vácuo a 40-45°C durante 24 h para obter o composto do título ll9 (57,7 g, 95,5 °4). 'H RMN (500 MHz, DMSO) ô ppm 6,81 (dd, J = 12,5, 8,6 w,lm,6,62(dd,j=7,0,2,9w,1H),6,50-6,42(m,lm,6,l6(s,2H), 4,96 (s, 2 H), 4,72-4,54 (m, IH), 4,35 (d,j= 7,8 Hz, IH), 3,74 (dd,j= 7,8, 2,5 Hz, 1 H), 3,18-3,08 (m, I H), 3,01 (dd,j = 13,9, 3,0 Hz, 1H),2,84 (dd,j 5 = 13,8, 3,8 Hz, IH); "C RMN (125 MHz, DMSO) D ppm 156,20 (d, Jcf = 243,0 Hz), 148,73, 145,49, 127,86 (d, Jc, = 11,0 Hz), 116,79 (d, J,, = 24,8 Hz), 116,10 (d, Jc, = 3,3 Hz), 114,10 (d, Jcf = 8,0 Hz), 78,89, 76,57 (q, Jcf = 31,OHz), 66,35,36,35,23,11.

HRMS Calculado por C,,H,,F,N,OS [M+H]" 336,0794; 10 observado 336,0789.

O composto do título foi submetido a um teste Ames (cepas examinadas Salmonella Nphimurium TA98, TAIOO, TA1535 e TA1537 e cepa examinada Escherichia coli WP2 uv. Mutation Research 1975, 31, 347; Mútation Research 1976, 38, 3; Proc. Nat. Acad. Sci. USA 1976, 73, 950; 15 Proc. Nat. Acad. Sci. USA 1975, 72, 5135) na ausência e presença do figado de rato S9. O composto foi negativo até à concentração testada/dosagem maior (5000 ug/placa).

1-(26) Síntese de N-(3-((4aS,5S,7aS)-2-amino-5- " (trinuorometil)-4a,5,7,7a-tetraidro-4H-hro[3,4-d][l,3]tiazin-7a-il)-4- 20 nuorofenil)-5-metoxipirazina-2-carboxamida < N~yOMe H ,c'NmoMe "' '°jj"Nj í)r'íj"NA 'À:'"r""' "4'y"' CÁ s SOCl,, " o s f,C h dmi F3C h Uma suspensão de ácido 5-metoxipirazina-2-carboxílic.o (26,29 g, 0,17 mol) em N,W-dimetilimidazolina-2-ona (160 mL) foi agitada em temperatura ambiente por 15 min, então es&iado em 2,2°C. Cloreto de tionila (14,7 niL, 0,202 mol) foi adicionada enquanto mantém a temperatura 25 sob 5°C. A suspensão resultante foi agitada em 0-lO°C' por 2 h enquanto it j 120 transitioned em uma solução clara.

Em outro recipiente, (4aS,5S,7aS)-7a-(5- amino-2-nuorofenil)-5-(trinuorometil)-4a,5,7,7a-teKai&o-4H-hro[3,4- . d][l ,3]tiazin-2-amina (52,0 g, 0,155 mol) foi dissolvido em N,N'- dimetilimidazolina-2-ona (160 mL). A solução resultante foi adicionada em 5 uma solução de cIoreto de acila enquanto mantém a temperatura abaixo de 1O°C.

A mistura de reação foi adicionada por 30 min.

A água (780 mL) foi carregado enquanto mantém a temperatura abaixo de 30°C.

A mistura resultante foi adicionada por 30 min e então EtOAc (780 mL) foi adicionada.

A esta mistura foi adicionada, 50 °/) de NaOlil aq. (84,8 g) até o pH da camada 10 aquosa atingir ll.

A camada aquosa foi extraida com EtOAc (260 niL). Os orgânicos foram combinados, lavados com NaCl sat. aq. (260 mL) e água (260 mlj). Os orgânicos foram filtrados em almofada de Celite (26 g) e enxaguados com EtOAc (260 rnL). Os orgânicos foram concentrados sob vácuo para produzir um sólido.

Ao sólido foi adicionada l-propanol (728 ML)

15 e a suspensão foi aquecida a 75°C até uma solução clara fonnada.

A solução foi esfíiada a -l0°C e mantida por l h.

O sólido foi filtrado, enxaguado com l-propanol Eio (104 niL) e secado sob vácuo (35°C) até o peso constante para produzir o composto do título (62,1 g, 84,9 °4). 'H RMN (500 MHz, DMSO)

4 Dppm10,56(s,2W,8,88(d,j=1,2W,!W,8,39(d,j=1,2W,1H),7,95 20 - 7,83 (m, 2 H), 7,18 (dd, J = i2,0, 8,8 Hz, 1 H), 6,25 (s, 2 H), 4,76 - 4,60 (m, 1H),4,36(d,j=8,1&,1H),4,01(s,3m,3,88(dd,j=7,9,2,3w,]m,

3,23 3,Íl(m, 2 H), 2,91 (dd, J 13,8, 3,6 Hz, IH); "C RMN (125 MHz, DMSO) a ppm 162,11, 161,93, 156,13 (d, Jc, = 242,9 Hz), 149,38, 142,01, 138,35, 135,09, 133,98, 128,53 (d, Jc, = 11,6 Hz), 126,06 (q, Jc, " 282,0 HZ),

25 123,32, 121,93 (d, Jc, = 8,6 Hz), 116,76 (d, Jc, = 25,1 Hz), 78,86 (d, Jc, = 6,9 Hz), 76,94 (q, Jcf = 30,5 FIZ), 66,37, 54,75, 36,44, 23,53. HRMS Calculado por C,,H,,F,N,O,S [M+H]" 472,1066;

observado 472,1052. Rotação Óptica específica Md +110,5 (c 0,519, MeOH)

Parâmetros de rotação óptico específico: Equipamento: Polarímetro: Perkin Elmer, modelo 341 ou equivalente. Célula: Célula Microglass, l00 mm de path/ength, 5 1,0 mL de capacidade, Perkin-Elmer Cat. # BOO1-7047. Balança: Baiança analítica calibrada de pesagem ± 0,1 mg Banho de água: NESLAB RTE 1121 Chiller ou JO equivalente. Artigos de vidro volumétricos: Classe A. Padrão Quartz Número JD 098799, ou equivalente.

Polarímetro: Perkin Elmer, modelo 341 ou equivalente.

Reagentes: Metanol: Grau HPLC, Baker (catálogo N°. 9093-03) ou equivalente Parâmetros de instrumento: Lâmpada: Na/Hal, Perkin-Elmer Cat. # BOO0-8754.

Célula: Microcélula (lOOmm), Perkin-Elmer Cat.

#BO04-1693.

Caminho celular: 100 mm (1 decímetro) Modo: OROT Comprimento de onda: 589 nm Temperatura celular: 20°C Tempo de integração: 2 segundos Abertura: MICRO Temperatura de banho de água: 20± rc

Preparação altemativa de N-(3-((4aS,5 S,7aS)-2-amino-5- (trif]uorometil)-4a,5,7,7a-tetrai&o-4H-nlro[3,4-d][1,3]tiazin-7a-il)-4- fluorofenil)-5-(nuorometi])pirazina-2-carboxamida (Exemplo 8) f fjh, '°]'"' ÁJJ °j—Á' ,,O,,,,,, " o'jjj y f,C h f, !" i\"s Ácido 5-(Fluorometil)pirazina-2-carboxílico (32,6 g, 1,05

5 equiv) e (4aS,5S,7aS)-7a-(5-amino-2-Ruorofenil)-5-(tnnuorometil)-4a,5,7,7a- tetraidro-4H-hro[3,4-d][l,3]tiazin-2-amina (70,0 g, 1,0 equiv)' foram carregados em um reator e acetato de etila (EtOAc, 630 níL) foi adicionado em uma mistura para dar umà suspensão.

Uma solução de anidrido do ácido n-propano fosfÔnico (T3P, 146 g, 1,10 equiv, 50 °/) em peso em EtOAc) foi 10 adicionado em temperatura ambiente enquanto controla a temperatura intema abaixo de 30°C.

A mistura de reaçào foi agitada em 40-45°C >3 horas e monitorada por HPLC.

A mistura de reação foi esEiada a 15-20°C e água (140 niL) foi carregada.

Após 10-15 minutos carregada 28 °/, de hidróxido de . amônio (175 mL) enquanto controla a temperatura abaixo de 30°C.

EtOAc

15 (245 niL foi adicionado e a mistura de reação foi adicionada por 30 minutos em temperatura ambiente.

A fase aquosa foi separada e extraida novamente com EtOAc (490 mL). As fases orgânicas foram combinadas e lavadas com 15 °/) de NaCl aquoso (140 mL) e água (140 niL). A camada orgânica foi filtrada em Celite (1,0 Wt) e enxaguada com EtOAc (140 niL). A solução foi 20 concentrada sob vácuo para obter um sólido bege (rendimento bruto quantitativo) que foi recristalizado a partir de l-propanol para produzir N-(3- ((4aS,5S,7aS)-2-mino-5-(tnnuorometil)-4a,5,7,7a-teÜaidro-4H-mro[3,4- d][l,3]tiazin-7a-il)-4-nuorofeni])-5-(Huorometil)phazina-2-cmboxmida como um sólido branco (70,0 g).

,,, 'H RMN (500 MHz, DMSO) (j 10,89 (s, í H), 9,30 (s, 1 H), 8,89 (s, 1 H), 7,95 (dd, J= 7,3,2,7 Hz, IH),7,94-7,89 (m, IH), 7,21 (dd,j j = 12,0, 8,8 Hz, IH), 6,22 (S,2 H), 5,71 (d, J= 46,3 Hz, 2 H), 4,77-4,61 (m, 1Hj),437(d,j=8,lHL1H),3,87(dd,j=8,0,2,7Hz,lH),3,20(dt,j= 5 7,0,3,5 Hz, 1H),3,15 (dd,j= 13,9,3,1 Hz, 1H),2,91 (àd,j=l3,8,3,8Hjz, 1H),"C RMN (126 MHZ, DMSO) Ô 161,32 (S), 155,82 (d, J = 243,4 Hz), 153,71 (d, J= 18,7 Hz), 148,77 (S), 144,71 (d, J= 1,9 Hz), 143,30 (S), 141,01 (d, J = 5,6 Hz), 134,36 (d, J = 2,0 Hz), 128,20 (d, J = 12,1 Hz), 125,57 (q, J = 283,0 Hz), 123,12 (d, J = 3,6 Hz), 121,64 (d, J= 8,6 Hz), 116,35 (d, J= 25,2 Hz), 82,55 (d, J = 165,8 HZ), 78,37 (S), 76,44 (q, J = 30,6 Hz), 65,89 (d, J = 5,3 Hz), 35,89 (S), 23,01 (S). HRMS Calculado por C,,H,,F,N,O,S [M+H]" 474,1023; observado 474,1032. Rotação óptica específica" [a]D20 - +1 02,4 ' A preparação de (4aS5S,7aS)-7a{5-amino-2-f1uorofenil)-5- (trinuorometi!)-4a,5,7,7a-tetraidro-4H-hro[3,4-d][l,3]tiuin-2-amina é descrita neste acima na etapa 1-(25) na preparação altemativa de N-(3- ((4aS,5S,7aS)-2-amino-5-(trinuorometil)-4aÁ7,7a-tetrai&o-4H-nlro[3,4- d][1,3]tiazin-7a-il)-4-f1uorofenil)-5-metoxipirazina-2-carboxamida (Exemplo 1).

Ensaio celular in vitro: Quantificação do peptídeo AÍ3 na cultura dos neurônicos do cérebro de feto de rato (1) Cultura neuronal primária de rato As culturas neuronais primárias foram preparadas a partir do córtex cerebral de ratos Wistar de 18 dias embriônicos (Charles River, UK). Especincamente, os embriões foram assepticamente removidos a partir dos ratos prenhes sob anestesia de éter. O cérebro foi isolado a partir do embrião e submetidos à imersão em HBSS (Sigma Aldrich #H9269) contendo 10 niM de HEPES (Gibco #15630-056). O córtex cerebral foi coletado a partir do cérebro isolado sob um microscópio estereoscÓpico.

Os Eagmentos do córtex cerebral coletados foram enzimaticamente tratados em uma solução de enzima contendo 0,05 °/} de solução de tripsina-EDTA (GIBCO, #25300) a 5 37°C por 20 minutos para dispersar as células.

As células foram então lavadas duas vezes e então gentilmente recojocadas em suspensão no meio Neurobasal (Gibco #21103) supiementado com 2 °/) de suplemento B27 (GIBCO #17504-044), 0,5 mM de L-glutainina (GIBCO #25030), )x N2 (GTBCO #17502-048), 100 ug/ml de Pen/Strep (GIBCO l5140-i22) e 5 °') de lO FCS inativado por calor (PAA #A15-70l). A dispersão celular foi filtrada através de uma trama de náilon de 40-µm (BD Falcon #352340) para remover a massa celular remanescente e deste modo uma suspensão celujar neuronal foi obtida.

A suspensão celular neuronal foi diluída com o meio acima e então colocada em um volume de 100 µL/reservatório em uma densaidade da célula

15 iniciai de 3,25 x 105 céiuías/ml na placa de cultura de 96 reservatórios revestidos por po11-D-lisina (Greiner #655940). As células colocadas foram cultivadas na placa de cultura a 37°C em 5 °/) de CO2-95 °/) de ar por 24 hrs.

A quantidade total do meio foi substituída com 'meio Neurobasal de ensaio' (como acima excluindo o FCS inativado por calor) e então as células foram

I, 20 cultivadas por cinco dias adicionais. (2) Adição do composto O medicamento foi adicionado à placa de cultura no dia 6 da cultura como seguem. 8 pontos de diluições seriais do composto foram gerados em DMSO em uma concentração de xlOOO da concentração do 25 ensaio final (FAC). As soluções do composto foram então preparadas pela adição de 999 ul do 'meio Neurobasal do ensaio' (como descrito na seção acima) a 1 ul do estoque de composto DMSO.

A quantidade total do meio foi " removida a partir de cada um dos reseservatórios de placa celular e 140µL/reservatório de 'meio Neurobasal de ensaio' foi adicionado seguido

!25 pelo 60 ul da solução do composto.

A concentração DMSO final foi de 0,1 °/,. (3) Amostragem As células foram cultivadas por 1 ou 3 dias após adição do composto pelos ensaios ABx-40 e ABx-42 respectivamente. !50 µ1 do meio 5 de amostra foi coletado e usado como a amostra ELISA. (4) Avaliação da sobrevivência celular A sobrevivência celular foi avaliada usando um ensaio AJamar de acordo com o seguinte procedimento.

Após coIeta da amostra a ser usada no ensaio ELISA, 50 µ1 de 20 °/) da soIução Alamar blue (Invitrogen 10 #DAL11OO) no meio Neurobasai de ensaio, foi adicionada a 50 µ1 da amostra remanescente dentro de cada reservatório.

As células foram então incubadas a 37°C em 5 °4) deCO,-95 °4) de arpor lhr.

A medição da intensidade de fluorescência para cada reservatório foi realizado em 540/590 nm usando um leitor de placa Pherastar

15 plus (BMG labtech). Na medição, os reservatórios não tendo as células colocadas e contendo apenas o meio e solução Alamar foram apresentados c.omo fúndamento (bkg). (5) Af3 ELJSA O amiloide humano/Rato B (42) ELISA Kit Wako (#290-

. 20 62601) e amiloide Humano/Rato B (40) ELISA Kit Wako (#294-62501) de Wako Pure Chemical Industries, Ltd. foram usados por Aj3 ELISA.

Aj3 ELISA foi reaiizado de ac.ordo com os protocolos recomendados peios fabricantes, descritos nos documentos que ac.ompanham os kits.

Os resultados foram mostrados como porcentagem dos grupos de controle e os valores IC50

25 para cada composto foram determinados usando quatro modelo de ajuste logístico de parâmetro usando a embalagem de software XLFIT5 (JDBS). Os compostos da presente invenção tem um efeito de redução da produção Afj42. O composto da fómula geral (I) ou sal farmaceuticamente aceitável deste de acordo com a presente invenção tem um efeito de redução de produção A|342. Deste modo, a presente invenção pode panicularÍnente fomecer um agente profilático ou terapêutico por uma doença " neurodegenerativa causada por Aj3 tal como demência de tipo Alzheimer ou 5 síndrome de Down.

Como medido pelo ensaio in vitro acima, os compostos do exemplos 1 a 18 mostrou os valores IC50 de menos do que 0,1 µM como mostrado na tabela 5: Tabela 5: Exemplo ÍC,q (uM) Exemplo IC,q (ulld) l ! 0,008 I ll ) 0,010 2 ! 0.004 I 12 I 0,006 3 ! 0.004 I 13 ! O,G44 4 i 0,008 I 14 : 0,002 5 | 0,012 I 15 ! 0,007 6 ! 0.006 I 16 I 0,009 7 ! 0,008 I 17 I 0,051 8 l 0,006 ! 18 l 0,015 9 l 0,007 ío I 0,010

Claims (14)

1. REIVINDICAÇÕES l. Composto, caracterizado pelo fato de que é da fórmula (I): YÂ)/ O)"N-J

   XNH IJ)' "' F,Ê ' ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, em que X é hidrogênio ou flúor; AéCHouN; Y é metila, etila, monofluorometila, difluorometila, trifluorometila, difluoroetila, metóxi, etóxi, metoximetila ou -C"N.
2. 2. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado lO pelo fato de que X é hidrogênio, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.
3. 3. Composto de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que A é N ou um sal famaceuticamente aceitável deste.
4. 4. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 3, caracterizado pelo fato de que Y é metila, monofluorometila, difluorometila, trifluorometila ou metóxi ou um sal farmaceuticamente aceitáve! deste.
5. 5. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações de ! a 4, caracterizado pelo fato de que o composto é seleeionado de: N{3-((4aS,5S,7aS)-2-amino-5-(trifluorometil)-4a,5,7,7a- teUaidro-4H-Wro[3,4-d1[I,3]tiuin-7a-il)-4-nuorofenil)-5-metonpirazino-2- carboxamida;

   N-(3-((4aS,5S,7aS)-2-amino-5-(triQuorometil)-4a,5,7,7a- tetrai&o-4H-Nro[3,4-d][1,3]ti=in-7a-il)-4-nuorofenil)-5-cimopicolinamida;

   N-(3-((4aS,5 S,7aS)-2-aInino-5-(triíluorometil)-4a,5,7,7a- teUai&o-4H-mro[3,4-d][1,3]ti^-7a-il)-4-nuorofeml)-5-

   (difluorometil)pirazino-2-carboxamida; N-(3-((4aS,5S,7aS)-2-amino-5-(tnfluorometil)-4a,5,7,7a- tetraidro-4H-Nro[3,4-d][l,3]ti=in-7a-il)-4-nuorofenij)-5- (triRuorometil)picolinamida; N-(3-((4aS,5S,7aS)-2-=ino-5-(trinuorometil)-4a,5,7,7a-

   lO tetraidro-4H-fiiro[3,4-d] [l,3]tiwin-7a-il)-4-nuorofeml)-5-meti]pirazino-2- carboxamida; N-(3-((4aS,5S,7aS)-2-amino-5-(tnnuorometil)-4a,5,7,7a- tetraidro-4H-hro[3,4-d][l,3]tiazin-7a-il)-4-nuorofenil)-5-metilpicolinamida; N{3-((4aS,5S,7aS)-2-amino-5-(trifluorometil)-4a,5,7,7a-

   tetraidro-4H-mro[3,4-d][l,3]tiazin-7a-il)-4-AuorofeMl)-5-etilpicolin=ida; N-(3-((4aS,5S,7aS)-2-amino-5-(trinuorometil)-4a,5,7,7a- tetraidro-4H-füro[3,4-d] [l,3]tiazin-7a-il)-4muorofeni])-5-

   (nuorometil)pirazino-2-carboxa1nida; N-(3-((4aS,5S,7aS)-2-amino-5-(triAuorometil)-4a,5,7,7a-

   tetraidro-4HAi]ro[3,4-d][L3]tiazin-7a-il)-4-nuorofenil)-5- metoxipicolinamida; N-(3-((4aS,5 S,7aS)-2-amino-5-(trifluorometil)-4a,5,7,7a- tetraidro-4FLfúro[3,4-djj 1 ,3jtiuin-7a-il)-4-nuorofeni|)-5-etoxipirazino-2-

   carboxamida;

   N{3-((4aS,5S,7aS)-2-amino-5-(trifluorometil)-4a,5,7,7a- tetraidro-4HAüro[3,4-d] [l,3]ti=in-7a-il)-4-nuorofenil)-5-(1,l- difluoroetil)pirazino-2-carboxamida; N{3{(4aS,5S,7aS)-2-amino-5-(trifluorometil)-4a,5,7,7a- tetraidro-4H^lro[3,4-d][1,3]tiazin-7a-il)-4-f1uorofenil)-5-

   (trinuorometil)pirazino-2-carboxamida; N-(3-((4aS,5S,7aS)-2-amino4-(triMorometij)-4a,5,7,7a- teuaidro-4H-Hro[3,4-d][l,3]ti=in-7a-il)-4-nuorofeM!)-5- (metoximetil)pirazino-2-carboxamida; N-{3-[(4aS,5S,7aS)-2-amino-5-(tnnuorometil)-4a,5-di-i&o- 4H-füro[3,4 d][l,3]tiazin-7a(7H) yl]-4-nuorofenil}-5-[('H,)metilón]piruino- 2-carboxamida; N{3{(4aS,5S,7aS)-2-amino-5{tMuorometil)-4a,5,7,7a- tetraidro-4HAlro[3,4-d][L3]tiazin-7a-il)-4,5-dinuorofenil)-5- (dif1uorometil)pirazino-2-carboxamida; N{3-((4aS,5S,7aS)-2-amino-5-(trifluorometil)-4a,5,7,7a- tetrai&o-4H-hro[3,4-d][1,3]tiwin-7a-il)-4,5-dinuorofenil)-5-metonpirazino- 2-carboxamida; N{3{(4aS,5S,7aS)-2-amino-5-(tMuorometij)-4a,5,7,7a- tetrai&o-4H-mro[3,4-d][1,3]tiwin-7a-il)-4,5-dinuorofenil)-5-metilpirazino-2- carboxamida; N-(3-((4aS,5S,7aS)-2-amino-5-(trinuorometi])-4a,5,7,7a- teÚaidro-4H-hro[3,4-d][1,3]ti&in-7a-il)-4,5-dinuorofenil)-5-(Auorometil)- pirazino-2-carboxamida; ou um sal famaceuticamente aceitável deste.
6. 6. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que é N-(3-((4aS,5S,7aS)-2-=ino-5-(ünuorometil)-4a,5,7,7a- tetraidro 4H-fiiro[3,4-d][1 ,3]tiazin-7a il) 4-fluorofenil)-5 metoxipirazino-2- carboxamida, ou um sal famaceuticamente aceitável deste.
7. 7. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado peio fato de que é N{3-((4aS,5S,7aS)-2-amino-5-(trifluorometil)-4a,5,7,7a- tetraidro-4H-Wro[3,4-d][l,3]tiain-7a-il)-4-nuorofenil)-5- (f1uorometil)pirazino-2-carboxamida ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.

   · ' , e 4
8. 8. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 7, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, caracterizado pelo fato de que é para o uso na terapia.
9. 9. Composto de acordo Com qualquer uma das reivindicações 5 de 1 a 7, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, caracterizado pelo fato de que é para inibir enzima de clivagem de proteína precursora de amiloide-j3 de Jocal beta 1 (BACEI).
10. 10. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 7, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, caracterizado pelo fato 10 de que é para o tratamento de uma doença neurodegenerativa tal como demência do tipo Alzheimer (AD), síndrome de Down, angiopatia amiloide cerebrovascular (CAA), deterioração cognitiva branda (MCI), perda de memória, demência pré-senil, demência senil, hemorragia cerebral hereditária com amiloidose e outras demências degenerativas tais como demências de 15 origem vascular de degenerativas mistas, tais como demências de origem vascular de degenerativas mistas, demência associada com a degeneração basal cortical, demência associada com Doença de Parkinson (PD) e demência associada com corpo de Lewy difúso tipo AD.
11. 11. Uso de um composto como definido em qualquer uma das 20 reivindicações de 1 a 7, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, caracterizado pelo fato de que é para a fabricação de um medicamento para o tratamento ou prevenção de uma doença neurodegenerativa tal como demência do tipo Alzheimer (AD), síndrome de Down, angiopatia amiloide cerebrovascular (CAA), deterioração cognitiva branda (MCI), perda de 25 memória, demência pré-senil, demência senil, hemorragia cerebral hereditária com amiloidose e outras demências degenerativas tais como demências de origem vascular de degenerativa mistas, tais como demências de origem , vascular de degenerativa mistas, demência associada com a degeneração basal cortical, demência associada com Doença de Parkinson (PD) e demência

    ' · T 5 associada com coipo de Lewy difúso tipo AD.
12. 12. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações : de l a 7, ou um sal farmac.euticamente aceitável deste, caracterizado pelo fato de que é para o tratamento de diabete tipo 2.
13. 5 13. Uso de um composto como definido em qualquer uma das reivindicações de 1 a 7, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, caracterizado pelo fato de que é para a fabricação de um medicamento para o tratamento ou prevenção de diabete tipo 2.
14. 14. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que lO compreende o composto como definido em qualquer uma das reivindicações de 1 a 7, ou um sal farmaceuticamente aceitávei deste, corno um ingrediente ativo em associação com um carregador farmaceuticamente aceitável. i5. Produto farmacêutico, caracterizado pelo fato de que compreende, em combinação, um primeiro ingrediente ativo que é composto 15 como definido em qualquer uma .das reivindicações de 1 a 7 ou um sal farmaceuticamente aceitável deste e pelo menos um ingrediente ativo adicionaj útil no tratamento de doença neurodegenerativa.

    ~ r P 1/1 "" , Figura 1: Um 1-(20) do Composto cromatograma típico de um lsolamento de HPLC Quiral u # = = o6 ~

    S c:cS ~ C> => ·Kr Ç'KI = C> Ri = = =: ~ COZ"6P q = = Q¢S = =J u5 " 8 — = = ¥= = "m" — = = c·j — e =i — @ cD <> <> <C - <> = a 2 cN a G> Z5 <b ,b = ^ <> & ct> = . , , L.CJ a S <5 "G = <> Z " D Ó = D =: q = Í q mv