Composition pharmaceutique contenant du 24,25-dihydroxycholécalciférol Selon un premier aspect de la présente invention, celle-ci a pour objet une composition pharmaceutique
sous forme de dose unitaire, caractérisée en ce qu'elle est constituée par une dose efficace convenant au traitement de la douleur et de la pyrexie, de l'hypertension, de l'hypotension, de l'hyperlipémie, de maladies inflammatoires, de maladies dues à une accentuation fonctionnelle des thrombocytes ou de la myodystrophie, d'un composé formé du 24,25-dihydroxycholécalciférol et d'un. excipient (véhicule ou diluant) pharmaceutiquement acceptable.
Selon une seconde caractéristique de la présente invention, celle-ci a pour objet un procédé pour le traitement de la douleur et de la pyrexie, de l'hypertension, de l'hypotension, de l'hyperlipémie, de maladies inflammatoires, de maladies dues à une accentuation fonctionnelle des thrombocytes ou de la myodystrophie, caractérisé en
ce que l'on administre à un patient qui souffre d'une douleur et d'une pyrexie, d'hypertension, d'hypotension, d'hyperlipémie, d'une maladie inflammatoire, d'une mala-
<EMI ID=1.1>
d'une myodystrophie, une quantité efficace d'un composé formé du 24,25-dihydroxycholécalciférol.
La présente invention se rapporte à une composition pharmaceutique contenant le 24,25-dihydroxycholécalciférol à titre d'ingrédient actif pour le traitement de la douleur et de la pyrexie, de l'hypertension, de l'hypotension, de l'hyperlipémie, de maladies inflammatoires, de maladies dues à une accentuation fonctionnelle des thombocytes ou de la myodystrophie et concerne un procédé pour le traitement des douleurs et
de la pyrexie, de l'hypertension, de l'hypotension, de l'hyperlipémie, de maladies inflammatoires, de maladies dues à une accentuation fonctionnelle des thrombocytes
ou de la myodystrophie, caractérisé en ce que l'on administre à un patient souffrant d'une douleur et de pyrexie, d'hypertension, d'hypotension, d'hyperlipémie, d'une maladie inflammatoire, d'une maladie due à une accentuation fonctionnelle des thrombocytes ou d'une myodystrophie, une quantité efficace du composé formé par
le 24,25-dihydroxycholécalciférol.
Concernant les maladies dues à une accentuatim fonctionnelle des thrombocytes, on constate que, récemment,
le nombre de cas d'accentuation fonctionnelle des thrombocytes a tendance à s'élever du fait de l'accroissement
du nombre de personnes âgées et de l'européanisation et de l'américanisation des habitudes alimentaires et de l'environnement social en tant que facteurs principaux
et, parmi les traitements prévus pour les maladies dues
à l'accentuation fonctionnelle des thrombocytes, on a appliqué un traitement antithrombotique.
Les maladies auxquelles le traitement antithrombotique s'applique sont les maladies cérébralo-vasculaires, comme l'infarctus cérébral et l'ischémie cérébrale paroxystique transitoire, des maladies cardiaques ischémiques, comme l'infarctus du myocarde, la thrombose due à l'utilisation de matériaux et d'organes artificiels, comme le coeur artificiel, le poumon artificiel, le shunt A-V artificiel, les valvules cardiaques artificielles, les cathéters et des vaisseaux artificiels, les troubles des petits vaisseaux, comme le purpura thrombotique thrombocytopénique et l'anémie hémolytique due aux troubles des petits vaisseaux et l'hyperthrombocytémie.
En outre, le traitement antithrombotique s'applique aux maladies avec l'état desquelles l'élévation fonctionnelle de thrombocytes a une certaine relation, ces maladies étant le diabète sucré, la néphrite chronique, le syndrome néphrotique, l'hypertension, la sclérose multiple, la toxicose gestationnelle, les cancers, l'hémoglobinurie nocturne paroxystique, la maladie de Kawasaki, la maladie de Raynaud et divers troubles induits par vibration.
Bien qu'à titre de traitement antithrombotique, on
ait procédé à l'administrationde certaines compositions pharmaceutiques comprenant le dipyridamole, le trapidil
ou la ticlopidine, il se pose un problème du point de
vue des effets secondaires de ces substances médicameneuses.
De même, la myodystrophie est un syndrome myopatique qui se caractérise par la dégénérescence progressive des muscles du squelette et elle est provoquée par des facteurs héréditaires. Depuis qu'un cas infantile de myodystrophie du type pseudohypertrophique a été rapporté
de manière précise en 1868 par Duchenne, on a relaté, les uns après les autres, divers cas cliniques sub-typiques
de cette maladie. Par conséquent, on a acquis la conviction que la myodystrophie est un syndrome d'une diversité particulièrement riche.
A cet égard, bien qu'une classification de la myodystrophie ait été effectuée à maintes reprises du point
de vue clinique sur base de l'âge au début de la maladie,
de la répartition des muscles attaqués, de la différence des sexes des patients, des types héréditaires de la maladie et du degré de gravité du progrès de la maladie, suivant la classification opérée en 1968 par le World Neurological Union, la myodystrophie peut être grosso-
modo classifiée comme étant une maladie héréditaire, (1) du type Duchenne (pseudohyperatrophique), (2) du type facio-scapula-brachial, (3) du type en ceinture, (4)
du type distal, (5) du type des muscles oculaires (6)
et du type pharyngo- oculaire. En outre, Walton et Gardner-Medwin ont classifié tant le type Duchenne que
le type en ceinture suivant le mode héréditaire de 1969
et ont affirmé que le nom du premier type devait être
d'un emploi limité à ceux du type à chromosome X et,
par conséquent, ils incluèrent la myotonie dans la classification de la myodystrophie, tout en classant la myotonie en les trois types suivants : (i) type congénital,
(ii) type aggravé par la froidure et (iii) type myotonique atrophique.
Les particularités caractéristiques du type Duchenne, à titre d'exemple illustratif de myodystrophie, sont les suivantes.
(A) A l'exception du très rare déclenchement du syndrome de Turner uniquement chez la femelle, le déclenchement du type Duchenne n'est observé que chez le mâle, suggérant ainsi le caractère récessif lié au sexe de la maladie (B) son déclenchement s'observe chez des enfants âgés de 2 à 5 ans, (C) en premier lieu, apparaît la réduction de la résistance des muscles de l'arche pelvienne suivie de l'attaque symétrique des muscles, (D) on observe nécessairement une pseudohypertrophie principalement sur les muscles de la cuisse inférieure, (E)
les symptômes sont habituellement progressifs et s'aggravent et le patient devient incapable de marcher dans les dix ans qui suivent le début de l'apparition de la maladie,
(F) la perturbation des muscles cardiaques est fréquemment observée chez le patient, (G) une lordose au niveau des hanches et une scoliose apparaissent, aggravant enocre davantage la maladie et (H) nombre des patients attaqués par une myodystrophie meurent de malnutrition, de maladie respiratoire infectieuse et de défaillance cardiaque
à l'âge d'approximativement 20 ans.
La myodystrophie est une des maladies dites réfractaires et jusqu'à présent, on n'a trouvé aucun traitement ni médicament qui permettent de guérir complètement la maladie et, par conséquent, la découverte d'un traitement ou d'un médicament dont on prévoit qu'il prolongera la durée de vie du patient souffrant de myodystrophie peut être important et se révéler être un grand progrès.
En résultat de recherches et d'études effectuées
par la demanderesse sur l'activité physiologique du
24,25-(OH)2-D3, on a constaté que ce produit possédait une activité antipyrétique et une activité sédative, une activité de régulation de la pression sanguine, une activité antihyperlipémique et une activité anti-inflammatoire, une activité d'inhibition de l'accentuation fonctionnelle des thrombocytes et une activité antimyodystrophique, activités non accompagnées d'effets secondaires et, par conséquent, la demanderesse est ainsi parvenue à la présente invention.
Le 24,25-(OH)2-D3 est de haute sécurité, possède une activité suppressive sur le système nerveux central, une activité régulatrice de la pression sanguine, une activité antihyperlipémique, une activité anti-inflammatoire, une activité d'inhibition de l'accentuation fonctionnelle
des thrombocytes et une activité antimyodystrophique, et, par conséquent, ce produit est extrêmement efficace à titre d'ingrédient actif d'une composition pharmaceutique convenant au traitement de la douleur et de la pyrexie,
de l'hypertension, de l'hypotension, de l'hyperlipémie, des maladies inflammatoires, des maladies dues à une accentuation fonctionnelle des thrombocytes ou la myodystrophie.
Chacun des 24,25(OH)2-D3 est une substance bien connue et représentée par l'une des formules qui suivent et se trouve décrit, par exemple, dans l'ouvrage :
''Vitamin D; Molecular Biology and Clinical Nutrition" par Anthony W. Norman, pages 1 à 92 (1980).
<EMI ID=2.1>
Le 24,25-dihydroxycholecalciférol peut notamment être le 24R,25-(OH)2-D3, 24S,25-(OH)2-D3 ou un mélange
de ces substances, cependant, de manière plus particulière il est, de préférence, le 24R,25-(OH)2-D3. La composition pharmaceutique suivant la présente invention pour le traitement de douleurs et de la pyrexie, de l'hypertension,
de l'hypotension, de l'hyperlipémie, des maladies inflammatoires, des maladies dues à l'accentuation fonctionnelle des thrombocytes ou de la myodystrophie comprend une quantité efficace de la substance susmentionnée à titre d'ingrédient actif et un excipient (le terme excipient désignant tant un véhicule qu'un diluant) et s'utilise sous la forme d'une dose unitaire avec divers types de formules et peut s'administrer par la voie orale ou parentérale (y compris la voie rectale) cependant l'administration par la voie orale est préférable.
La composition pharmaceutique contenant du 24,25-
(OH)2-D3 à titre d'ingrédient actif s'utilise sous une forme destinée à l'administration, telle que les comprimés, les poudres, les granules, les suppositoires, les capsules, les solutions en milieu alcoolique ou en milieu huileux et les suspensions aqueuses. A titre de milieu huileux, on peut utiliser, de préférence, des triglycé-
<EMI ID=3.1>
l'huile de graine de coton, l'huile d'arachide, l'huile de foie de poisson, l'huile de fèves de cacao ou le glycérol.
En outre, à titre d'autres constituants, on peut également mélanger du lactose, de l'amidon, du talc,
du stéarate de magnésium, de l'acide sorbique, des sels du type sorbate, des sucres et des sucres-alcools, une solution saline physiologique, ou des surfactifs, un antioxygène ou tout autre médicament au 24,25-(OH)2-D3.
La composition pharmaceutique suivant la présente invention peut contenir, sous forme de dose unitaire,
<EMI ID=4.1>
en poids de 24,25-(OH)2-D3 et le 24,25-(0H)2-D3 s'administre à un patient adulte à la dose quotidienne de
<EMI ID=5.1>
Les résultats de l'examen de la toxicité aiguë du
24,25-(OH)2-D3 sont présentés ci-dessous.
Une solution éthanolique de 24R,25-(OH)2-D3 ou de
24S,25-(OH)2-D3 fut dissoute dans un triglycéride
<EMI ID=6.1>
contenant 2 % en poids d'éthanol.
On a administré l'échantillon ainsi préparé à chacun des animaux d'un groupe de 10 souris ICR mâles
<EMI ID=7.1>
de poids corporel. L'observation des souris ainsi traitées quant à leurs symptomes d'intoxication, pendant une durée de 2 semaines suivant l'administration, ne fut suivie d'aucune découverte anormale chez les souris dont aucune ne mourut.
Les résultats des examens effectués après le sacrifice de chacune des souris, y compris l'examen sanguin, l'examen biochimique, l'autopsie et l'examen pathohistologique, furent les mêmes que ceux obtenus avec des souris auxquelles on avait seulement administré le triglycéride de l'acide gras contenant 2 % en poids d'éthanol.
<EMI ID=8.1>
<EMI ID=9.1>
100 mg/kg de poids corporel pour chacune des souris et que les mêmes résultats furent obtenus lors de l'administration du 24S,25-(OH)2-D3 de la même manière que celle décrite plus haut, on peut dire que la présente substance est extrêmement sûre en comparaison du
<EMI ID=10.1> <EMI ID=11.1>
de poids corporel. La présente invention sera à présent expliquée plus en détail en se référant aux exemples qui suivent, dans lesquels on a utilisé le 24R,25-(OH)2-D3, la confirmation de la structure de l'isomère optique due
<EMI ID=12.1>
Letters", N[deg.] 6, pages 2203 à 2206, 1975.
Les exemples qui suivent illustrent la présente invention de manière plus détaillée; cependant, il faut bien comprendre que la portée de la présente invention n'est nullement limitée par les exemples en question.
EXEMPLE 1
Activité antipyrétique et sédative de la substance suivant l'invention
Activité sédative
<EMI ID=13.1>
On a choisi des animaux d'essai parmi des souris
ICR femelles, en opérant une pression sur la racine de
la queue de chaque animal et tout en utilisant un appareil de stimulation par pression de Takagi et Kameyama (fabriqué par la société Natsume Works) et en prenant les individus qui manifestèrent une valeur seuil de la douleur dans la gamme de 50 à 80 mm de Hg. On a divisé les animaux d'essai ainsi choisis en groupes constitués chacun de 10 animaux.
On a administré une solution de 24R,25-(OH)2-D3 dans
<EMI ID=14.1>
orale à chaque animal soumis à l'essai, à la dose de
100 microgrammes/kg de poids corporel et on a soumis l'animal ainsi traité à la stimulation mécanique susmentionnée en répétant la stimulation au fur et à mesure de l'écoulement du temps, tout en augmentant la pression jusqu'à ce que l'animal soumis à l'essai manifestât la réaction de pseudo-échappement. La pression appliquée au moment du pseudo-échappement et la durée (secondes) jusqu'à la manifestation de la réaction de pseudoéchappement furent enregistrées et sont rapportées dans le tableau 1 et on les a utilisées comme facteur pour juger l'effet sédatif du 24R,25-(OH)2-D3.
TABLEAU 1
<EMI ID=15.1>
On a réparti des souris ICR femelles, 5 à 6 semaines après leur naissance, en groupes constitués chacun de
10 animaux et on les a soumises à un test suivant le procédé de Kostet et coll. (1959) comme suit.
6 heures après l'administration par la voie orale
<EMI ID=16.1>
groupe, à la dose de 100 microgrammes/kg de poids corporel, on a injecté une solution aqueuse à 0,6 % d'acide acétique par la voie intrapéritcnéale à chacune des souris ainsi traitées, à la dose de 0,1 ml/10 g de poids corporel. 10 minutes après l'injection, on a compté le nombre des souris se contorsionnant pendant 10 minutes et on a obtenu le taux (pourcent) d'inhibition de la stimulation par l'acide acétique en utilisant la formule suivante, en comparaison du nombre de contorsions observées sur chaque souris du groupe témoin, souris témoins auxquelles on n'avait administré que le triglycéride et la solution de l'acide acétique.
Le taux de suppression de la stimulation (%) =
(1-T/C) x 100 où T représente le nombre moyen de contorsionsdu groupe soumis à l'essai et C représente le nombre moyen de contorsions du groupe témoin.
Les résultats du test sont rassemblés dans le tableau 2, où le taux de suppression de la stimulation est indiqué par I.R.(%).
TABLEAU 2
<EMI ID=17.1>
Activité antipyrétique
On a procédé à l'essai suivant le procédé de Winter et collo. (1961) comme suit.
A chacun de 6 rats constituant un groupe, on a administré par la voie sous-cutanée, une suspension aqueuse à 20 % de levure de bière et, après 19 heures de jeune, on a administré par la voie orale, une solution de 24R,25-(OH)2-D3 dans un triglycéride d'acide
<EMI ID=18.1>
100 microgrammes/kg de poids corporel.
A chacun de 6 rats constituant un autre groupe, on
a administré la même solution aqueuse de levure de bière, cependant, après un jeune de 19 heures, on n'a administré que le même triglycéride pour faire servir ces animaux de témoins traités et on a utilisé un autre groupe de
6 rats à titre de témoin sans traitement spécifique.
On a mesuré la température rectale de chacun des animaux des trois groupes susmentionnés en fonction de l'écoulement du temps et on a enregistré la température rectale minimale de l'animal soumis à l'essai,montrée
au moment où l'activité du 24R,25-(OH)2-D3 manifesta
la valeur maximale. On a également enregistré la température rectale des témoins traités et celle des témoins au moment susmentionné.
Le taux de suppression de l'élévation de la température rectale, c'est-à-dire le taux de suppression de la
<EMI ID=19.1>
suivante :
<EMI ID=20.1>
dans laquelle T représente la température rectale moyenne
<EMI ID=21.1>
température rectale moyenne du groupe d'animaux témoins traités et C2 représente la température rectale moyenne des animaux témoins non spécifiquement traités.
Le taux ainsi obtenu de suppression de la pyrexie provoquée par la levure de bière et supprimé par le
<EMI ID=22.1>
EXEMPLE 2
Activité réductrice de la pression sanguine
Par la voie orale, on a administré une solution de
24R,25-(OH)2-D3 dans un triglycéride d'un acide gras en
<EMI ID=23.1>
animaux souffraient d'hypertension spontanée, l'administration s'effectuant à la dose de 100 microgrammes/kg de poids corporel. Après 6 heures et 12 heures suivant l'administration, on a mesuré la pression sanguine de chacun des rats ainsi traités en utilisant un tonomètre
(fabriqué par Ueda Works, modèle USM-105R) et on a évalué la différence entre la pression sanguine avant l'administration et celle après 9 et 12 heures suivant l'adminis-
<EMI ID=24.1>
titre d'hypotenseur, tout en utilisant des rats auxquels on avait seulement administré le triglycéride à titre de témoin.
Les résultats de l'essai sont rapportés ci-dessous dans le tableau 3.
TABLEAU 3
<EMI ID=25.1>
De même, dans le test effectué de manière similaire en utilisant du 24S,25-(OH)2-D3, on a obtenu un résultat approximativement identique.
Notamment, chacun des 24,25-(OH)2-D3 manifesta clairement une activité réductrice de la pression sanguine, démontrant ainsi leur efficacité à titre d'hypotenseur.
EXEMPLE 3
Activité de réduction de la teneur en lipides du sang
Après avoir alimenté un groupe de lapins blancs du Japon, mâles, d'une nourriture solide (CR-1) contenant 1 % de cholestérol pendant environ 3 mois, l'alimentation s'effectuant ad libitum et confirmation de l'élévation
de la teneur en lipides du sang de ces animaux, on a procédé à l'essai suivant, cependant que l'on utilisait les animaux ainsi traités à titre d'animaux modèles d'hyperlipémie.
Par la voie orale, on a administré une solution de
<EMI ID=26.1>
<EMI ID=27.1>
grammes/kg de poids corporel et on a prélevé un échantillon de sang en fonction de l'écoulement du temps en vue de l'analyser quant à la teneur en liquides du sérum, à savoir le taux de cholestérol total du sérum par mise en oeuvre d'un procédé enzymatique et des �-lipoprotéines s'y trouvant, par le procédé turbidimétrique. Les résultats obtenus sont présentés dans le tableau 4 qui suit.
TABLEAU 4
<EMI ID=28.1>
Notes : * durée après l'administration
** les groupes alimentés par CR-1, mais non
soumis à l'administration
*** le signe de(-) montre l'accroissement du
taux.
A partir des propriétés toxicologiques et des résultats pharmacologiques décrits plus haut, on comprend que le 24R,25-(OH)2-D3 peut être utilisé de manière pratique comme ingrédient actif de la composition pharmaceutique antilipémique et de la composition pharmaceutique pour le traitement de l'artériosclérose.
EXEMPLE 4
Activité anti-inflammatoire de la substance suivant l'invention
Activité de suppression de l'oedème provoqué par la carraghénine
Après 6 heures d'administration forcée d'une solution de 24R,25-(OH)2-D3 dans un triglycéride d'acide gras en
<EMI ID=29.1>
groupe constitué de 10 rats à la dose de 100 microgrammes/ kg, en suivant le procédé de van Arman et coll. (1963), on a injecté une suspension aqueuse à 1 % de carraghénine dans une solution saline aqueuse physiologique dans la plante de la patte arrière droite de chacun des rats. On
a déterminé le volume de la plante ainsi traitée en fonction de l'écoulement du temps après l'injection de façon à obtenir le taux de suppression de l'oedème dû
à l'injection de la carraghénine,tout en se servant de
la formule suivante:
<EMI ID=30.1>
où T représente le volume moyen de la plante de la patte et C représente le volume moyen de la plante de la patte du rat témoin auquel on avait administré le triglycéride au lieu de la solution de 24R,25-(OH)2-D3 dans le triglycéride.
En résultat de cette expérience, on a constaté que le taux de suppression de l'oedème dû à la carraghénine <EMI ID=31.1>
Activité de suppression de la formation de granulome
Après injection d'air par la voie sous-cutanée, dans le dos de chacun de 6 rats, constituant un groupe, pour former une poche, on a injecté 0,5 ml d'une solution de 1 % d'huile de croton dans de l'huile de sésame dans la poche. Ensuite, on a administré par la voie orale une solution de 24R,25-(OH)2-D3 dans un trigly-
<EMI ID=32.1>
ainsi traités, de manière continue, pendant 5 jours, à
la dose quotidienne de 10 microgrammes/kg de poids corporel. Le 6ème jour, on a mesuré la quantité du liquide ayant exsudé dans la poche et on a appliqué les données en même temps que les données obtenues sur les animaux témoins auxquels on avait injecté le triglycéride au
lieu de la solution dans le triglycéride, à la même formule, on a obtenu le taux de suppression de la formation du granulome. Le taux de suppression par le 24R,25-(OH)2D3 était de 17,8 %, montrant l'efficacité de cette substance médicamenteuse à titre d'agent anti-inflammatoire.
EXEMPLE 5
Activité inhibitrice de la vitesse d'agglutination des thrombocytes
L'effet du 24R,25-(OH)2-D3 sur l'agglutination des thrombocytes induite par l'adénosine diphosphate (que l'on appellera dans la suite du présent mémoire ADP) fut examiné in vitro, tout en utilisant un plasma riche en plaquettes (appelé dans la suite du présent mémoire PRP) obtenu à partir de rats Wistar mâles normaux, 20 semaines après la naissance, de la manière suivante.
On a procédé à la collecte de sang avec addition de citrate en la proportion de 1/9 du sang total recueilli des rats, et on a soumis l'échantillon de sang ainsi recueilli à une centrifugation pendant 6 minutes à
1500 tpm, de façon à obtenir un liquide surnageant que l'on a utilisé à titre de PRP.
A 250 ml de PRP, on a ajouté 1,5 microlitre d'une solution éthanolique de 24R,25-(OH)2-D3, à la concentration de 2 mg/ml et, après incubation du mélange pendant 2 minutes à 37[deg.]C, on a ajouté 30 micromoles d'ADP au mélange incubé et on a soumis le mélange ainsi obtenu à une détermination de la vitesse d'agglutination, en se servant d'un module de Lumiagglutination de Payton, modèle 1000, comme appareil pour l'observation de cette fonction, la concentration final: en 24R,25-(OH)2-D3 atteignant 12 microgrammes/ml du mélange de PRP et de la
<EMI ID=33.1>
de l'éthanol dans le mélange étant de 0,6 %. A titre de témoin, on a utilisé un mélange de 250 ml de PRP et de 1,5 microlitre d'éthanol contenant 0,6 % d'éthanol. Le
<EMI ID=34.1>
l'agglutination des thrombocytes dans le PRP induite par l'ADP fut obtenu à partir de la formule suivante :
<EMI ID=35.1>
où C représente le taux maximum d'agglutination chez les témoins et T représente le taux maximum d'agglutination dans l'échantillon auquel on avait ajouté le 24R,25-(OH)2D3.
Dans l'essai en question, C était de 44,5 % et T
<EMI ID=36.1>
(OH)2-D3 était d'environ 0 %.
EXEMPLE 6
Activité inhibitrice sur l'agglutination de thrombocytes humains
<EMI ID=37.1>
tination de thrombocytes humains induite à l'ADP, d'une manière similaire à celle décrite à l'exemple 5, en utilisant cependant du PRP obtenu à partir de sang frais provenant de la veine d'une personne en bonne santé, la concentration finale de 24R,25-(OH)2-D3 dans l'échantillon traité étant de 1 microgramme/ml et la quantité d'ADP étant de 5 micromoles.
En résultat de cet examen, on a constaté que le
<EMI ID=38.1>
tion des thrombocytes humains induite par l'ADP était
de 37,6 %.
EXEMPLE 7
Activité inhibitrice de l'agglutination des thrombocytes d'un rat souffrant de diabète sucré induit par la STZ
L'effet inhibiteur du 24R,25-(OH)2-D3 sur l'agglutination des thrombocytes dans du PRP prélevé de rat souffrant de diabète sucré artificiel induit à la streptozocine et sur celle dans du PRP prélevé de rats normaux fut examiné comme suit.
Après avoir fait jeûner des rats Wistar mâles dans la 6ème semaine après leur naissance pendant 48 heures, on a administré de la streptozocine à chaque rat, à la dose de 65 mg/kg de poids corporel et, une semaine après l'administration, on a prélevé un échantillon de sang de la veine codale de chaque rat, en vue de tester la concentration de sucre sanguin s'y trouvant et on a également mesuré la concentration du glucose dans l'urine des rats.
Les rats manifestant un taux de sucre sanguin de
500 à 600 mg/kg et une excrétion urinaire de glucose de ++++(2 %) sur du papier d'essai Hemaconbistiz III
(Miles.Sankyo Co., Ltd.) furent pris comme animaux d'essai souffrant du diabète sucré et on a recueilli
le sang de ces rats, ainsi que celui des rats normaux
(auxquels on n'avait pas administré de streptozocine), tout en utilisant du citrate lors de la collecte du sang.
Le PRP préparé à partir du sang recueilli ainsi obtenu de la même manière que celle décrite à l'exemple 7 fut davantage dilué par addition de PPP (plasma pauvre
en plaquettes, obtenu en soumettant le reste de la préparation du PRP à une séparation par centrifugation d'une durée de 10 minutes à 3.000 tpm), pour obtenir le PRP dilué contenant 300.000 thrombocytes/mm<3>. La quantité d'ADP (coagulant) était de 30 micromoles.
Le résultat de l'examen est présenté au tableau 5.
A titre de référence, dans le présent essai, la concentration finale en 24R,25-(OH)2-D3 dans le mélange du
PRP dilué et de la solution éthanolique de 24R,25-(OH)2D3 est également présentée dans le tableau 5. En témoin, on a utilisé le mélange du PRP dilué et d'éthanol.
TABLEAU 5
Effet du 24R,25-(OH) -D sur les thrombocytes dans le PRP prélevé de rats soutirant de diabète sucré artificiel
<EMI ID=39.1>
Note : * Témoin, PRP contenant 0,6 % d'éthanol.
En outre, on a examiné l'effet du 24R,25-(OH)2-D3 sur l'inhibition de l'agglutination des thrombocytes induites par 30 micromoles d'ADP dans le PRP dilué
(contenant 300.000 thrombocytes/mm<3> de ce PRP dilué)
préparé à partir du sang prélevé de rats normaux, pour montrer que le taux maximal d'agglutination des throm-
<EMI ID=40.1>
concentration du 24R,25-(OH)2-D3.
Ainsi qu'il ressort du tableau 5, l'effet inhibiteur du 24R,25-(OH)2-D3 sur l'agglutination des thrombocytes induites par l'ADP dans le PRP préparé à partir du sang prélevé de rat souffrant de diabète sucré induit à la streptozocine, a manifesté une élévation avec l'augmentation de la concentration en 24R,25-(OH)2-D3 après avoir présenté un pic (non représenté dans le tableau 5), puis qu'il a graduellement diminué, mais en demeurant cependant important, par exemple, le taux d'inhibition de l'agglutination des thrombocytes était de 25,1 % à la
<EMI ID=41.1>
EXEMPLE 8
Activité inhibitrice sur l'agglutination de thrombocytes chez le rat souffrant d'hypertension héréditaire
On a examiné comme suit l'effet du 24R,25-(OH)2-D3 sur l'inhibition de l'agglutination des thrombocytes dans du PRP recueilli à partir du sang prélevé de rat souffrant d'hypertension héréditaire (l'animal modèle d'hypertension spontanée, appelé dans la suite du présent mémoire rats RHS).
Du sang fut recueilli de chaque aorte abdominale des rats RHS de 7 à 8 semaines après leur naissance, en se servant de citrate et du PRP fut préparé à partir du sang ainsi recueilli afin d'examiner l'agglutination des thrombocytes dans le PRP de la manière décrite à l'exemple 8, la concentration finale du 24R,25-(OH)2-D3 étant de 1 ng/ml de PRP prélevé de l'animal soumis à l'essai et de l'éthanol étant ajouté au PRP prélevé d'animaux normaux au lieu de la solution éthanolique
de 24R,25-(OH)2-D3.
<EMI ID=42.1>
l'agglutination des thrombocytes induite à l'ADP était de 8,3 % par comparaison aux témoins.
EXEMPLE 9
Activité inhibitrice sur l'agglutination de thrombocytes de lapins souffrant d'hyperlipémie et d'arthériosclérose expérimentale
On a alimenté des lapins blancs mâles du Japon d'une nourriture solide contenant 1 % en poids de cholestérol, ad libitum, pendant 3 mois et après confirmation de l'élévation de la concentration en lipides de leur sérum, on a examiné les effets du 24R,25-(OH)2-D3 sur l'agglutination des thrombocytes dans du PRP des lapins ainsi alimentés, induite à l'ADP, tout en suivant le procédé de préparation du PRP et de détermination du degré d'agglutination présentés à l'exemple 9. La
<EMI ID=43.1>
était de 1 ng/ml et la quantité d'ADP était de 30 micromoles. On a mélangé de l'éthanol au lieu de la solution
<EMI ID=44.1>
sang prélevé d'animaux témoins (normaux).
En résultat, on a constaté que le 24R,25-(OH)2-D3 manifestait un taux d'inhibition de 15,8 % sur l'agglutination de thrombocytes dans du PRP préparé à partir des lapins traités induits à l'ADP.
EXEMPLE 10
Fonction inhibitrice sur l'agglutination de thrombocytes des animaux modèles souffrant de défaillance rénale
On a soumis des rats Wistar mâles, 6 semaines après leur naissance, à une néphrectomie totale et après confirmation de la notable élévation du BUN (azote d'urée dans le sérum) sérique de ces animaux, le troisième jour après l'intervention, on a examiné l'effet du 24R,25-(OH)2-D3 sur l'agglutination des thrombocytes dans du PRP préparé
à partir du sang des rats ainsi traités induits à l'ADP, tout en utilisant les rats ainsi traités comme animaux modèles de défaillance rénale et en suivant les procédés de préparation du PRP et de détermination du degré d'agglutination des thrombocytes présentés à l'exemple 10.
La concentration finale en 24R,25-(OH)2-D3 dans le PRP traité était de 1 ng/ml et la quantité d'ADP était de
30 micromoles. On a mélangé le PRP d'animaux témoins
à de l'éthanol au lieu de la solution éthanolique de
24R,25-(OH)2-D3.
En résultat, on a constaté que le 24R,25-(OH)2-D3 manifestait un effet d'inhibition de l'agglutination des thrombocytes dans le PRP des animaux ainsi traités de
17,3 %.
EXEMPLE 11
Fonction antithrombotique de la substance suivant l'invention
On a réparti 20 rats Wistar mâles 10 semaines après leur naissance en deux groupes égaux et on a administré de force une solution de 24R,25-(0H)2-D3 dans du tri-
<EMI ID=45.1>
du premier groupe et on a administré uniquement du triglycéride aux animaux de l'autre groupe pour les faire servir de témoins.
On a injecté de l'ADP par la voie intraveineuse à tous les rats 6 heures après l'administration précitée.
En résultat, tous les rats du groupe témoin moururent, cependant la mortalité de ceux du premier groupe
<EMI ID=46.1>
de 63 %. Ces résultats prouvent la fonction antithrombotique du 24R,25-(OH)2-D3.
EXEMPLE 12
Traitement des animaux modèles souffrant de dystrophie
Après l'obtention de souris mâles C57BL/6J dy/dy
(que l'on appellera dans la suite du présent mémoire présents animaux) âgées de 4 semaines à partir de la Japan Clea Co. et confirmation que ces animaux souffraient du myodystrophie, on a donné ad libitum une solution de 24R,25-(OH)2-D3, préparée en dissolvant ce composé dans une solution aqueuse à 0,001 % d'alcool isopropylique (contenant du 24R,25-(OH)2-D3 correspondant à la dose quotidienne
de 0,1 �g/kg de poids du corps ou 1 �g/kg de poids du corps) aux groupes I et II des présents animaux, à titre d'eau de boisson depuis la cinquième semaine suivant la naissance. En outre, au groupe témoin des présents animaux, on a donné ad libitum une solution aqueuse à 0,001 % d'alcool isopropylique à titre d'eau de boisson. Ensuite, au groupe non traité des présents animaux, on a administré de l'eau de robinet ad libitum à titre d'eau de boisson.
En résultat des essais de l'exemple 12, on donne dans le tableau 6 ci-dessous le taux de survie des
souris de chaque groupe, 150 jours après l'administration de l'eau de boisson spécifiée (150 jours correspondent
à la durée de vie moyenne des présents animaux de 4 à
5 mois décrite dans l'ouvrage ''Handbook for Model Animals of Diseases " Ed. by ISHIYAKU Publishing Co., page 421).
TABLEAU 6
<EMI ID=47.1>
Les résultats présentés dans le tableau 6 démontrent l'efficacité de la substance suivant l'invention pour allonger la vie des animaux malades.
EXEMPLE 13
Préparation d'une composition pharmaceutique contenant la substance suivant l'invention à titre d'ingrédient actif
<EMI ID=48.1>
C10, dans lequel on avait barboter de l'argon gazeux pendant 72 heures sous irradiation par une lampe à mercure
à pression élevée de 400 W, de manière à ainsi éliminer les peroxydes qui y étaient contenus à l'origine, on a dissous 5 mg de 24R,25-(OH)2-D3. On a introduit la solution ainsi obtenue et la composante pour paroi, préparée en combinant les composantes suivantes sous chauffage, dans une machine de production de gélules molles, de façon à obtenir la composition pharmaceutique encapsulée dans des gélules molles contenant 1,2,5 ou 10 microgrammes de 24R,25-(OH)2-D3 dans une gélule.
Composantes pour la paroi des gélules molles
10 parties en poids de gélatine,
2 parties en poids de glycérol,
0,05 partie en poids de parahydroxybenzoate d'éthyle
a titre d'antiseptique,
0,2 partie en poids de blanc de titane et
0,2 partie en poids d'eau dans la gélule achevée.
REVENDICATIONS
1. Composition pharmaceutique sous la forme d'une dose unitaire, caractérisée en ce qu'elle comprend une dose efficace pour le traitement de la douleur et de la pyrexie, de l'hypertension, de l'hypotension, de l'hyperlipémie, de maladies inflammatoires, de maladies dues à l'accentuation fonctionnelle des thrombocytes ou de la myodystrophie, d'un composé du 24,25-dihydroxycholécalciférol et un excipient (véhicule ou diluant) pharmaceutiquement acceptable.
2. Composition pharmaceutique suivant la revendication 2, caractérisée en ce que le composé est le 24R,25dihydroxycholécalciférol.
3. Procédé pour le traitement de la douleur et de la pyrexie, l'hypertension, l'hypotension, l'hyperlipémie, de maladies inflammatoires, de maladies dues à l'accentuation fonctionnelle des thrombocytes ou de la myodystrophie, caractérisé en ce que l'on administre à un patient souffrant de douleurs et de pyrexie, d'hypertension, d'hypotension, d'hyperlipémie, de maladies inflammatoires, de maladies dues à l'accentuation fonctionnelle de thrombocytes ou de myodystrophie, une quantité efficace d'un composé du 24,25-dihydroxycholécalciférol.