AT407117B

AT407117B - Fibrinschwamm

Info

Publication number: AT407117B
Application number: AT0159397A
Authority: AT
Inventors: Thomas Dr Seelich; Edgar Dr Scheel; Johann Dr Odar; Yves Alain Dr Delmotte
Original assignee: Immuno Ag; Baxter Int
Priority date: 1997-09-19
Filing date: 1997-09-19
Publication date: 2000-12-27
Also published as: WO1999015209A2; EP1017429A2; JP2001517492A; WO1999015209A3; AU9627098A; CA2303536A1; US6548729B1; IL134983A0; BR9812228A; DE69817594D1; KR20010024172A; ATA159397A; JP3602441B2; EP1017429B1; DE69817594T2; CN1276733A

Description


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   Die vorliegende Erfindung betrifft einen Fibrinschwamm mit einer definierten Restfeuchte, ein Verfahren zu dessen Herstellung, seine Verwendung zur Blutstillung, Gewebeklebung und Unterstützung der Wundheilung sowie ein Set zu dessen Anwendung 
Im Stand der Technik wurden schon verschiedenste blutstillende Wundabdeckungsmaterialien auch auf Basis von Fibrin, beispielsweise Fibrinschwämme, Fibrinmembranen oder Fibringele beschrieben und teilweise auch verwendet 
Bisher herrschte die Meinung vor, dass zur Blutstillung eine Kombination von   Fibrinogen   und Thrombin oder entsprechender Prothrombinaktivatoren notwendig ist So sind beispielsweise aus dem Stand der Technik Vliese auf Basis von Collagen enthaltend Fibrinogen und Thrombin   (TachoComb,   Vliese enthaltend Fibrinogen und aktivierten Faktor X (AT 0 359 653, IMMUNO AG)

   oder Vliese enthaltend Fibrinogen und Thrombin als Trockenpräparat (EP 0 748 633, IMMUNO AG) bekannt Während die Vliese auf Basis von Fibrinogen und aktiviertem Faktor X bereits weich und biegsam sind, ist es bei den anderen Vliesen notwendig, sie absolut trocken zu lagern, um eine vorzeitige Reaktion des enthaltenen Fibrinogens mit dem Thrombin oder anderer Blutgerinnungsaktivatoren auszuschliessen 
Bering E.A.jr. (J. Clin. Invest Vol. 23,1944, p 586) diskutiert allgemeine Entwicklungen auf dem Gebiet der Fibrinschäume sowie deren Verwendung als hämostyptische Agentien. 



   Eine Übersicht zu verschiedensten Materialien auf Fibrinbasis, beispielsweise Fibrinpulver, Fibrinfilme und Fibrinschäume wird beispielsweise in Gerendas M. "Fibrin products as aids in hemostasis and wound healing", p. 277 ff, in K.Laki (ed ) Fibrinogen, M.Dekker, Ney York, 1968, gegeben. 



   Aus dem Stand der Technik sind weiters   Fibnnfolien   bzw Fibrinmembranen bekannt (siehe z. B. EP 0485 210-A2) Derartige Stoffe sind extrem dünn, nicht saugfähig und daher zur Blutstillung nur begrenzt einsetzbar. Im Gegensatz zu Fibrinschwämmen werden diese Materialien bei der Herstellung bewusst komprimiert, beispielsweise durch Auflegen von Gewichten Daher zeichnen sich diese Stoffe v. a.

   durch ihre, im Vergleich zu Schäumen, hohe Dichte aus 
Die vorliegende Erfindung stellt sich zur Aufgabe, ein Mittel zur Blutstillung, Gewebeklebung und Unterstützung der Wundheilung auf Basis von Fibrin zur Verfügung zu stellen, welches im Vergleich zu herkömmlichen Mitteln eine gute, insbesondere eine verbesserte Wirksamkeit, eine einfache Handhabung bei gleichzeitig einfacher Zusammensetzung, die eine preisgünstige Herstellung erlaubt, sowie ein breites Anwendungsgebiet besitzt Darüber hinaus soll das   Fibrinmaterial   leicht mit anderen Wirk- und Hilfssubstanzen versehen werden können 
Diese Aufgabe wird erfindungsgemäss dadurch gelöst, dass ein Fibrinschwamm mit einer Restfeuchte von mindestens 3%, vorzugsweise im Bereich von 3 bis 35%, insbesondere 10 bis 20%, zur Verfügung gestellt wird, welcher lagerstabil ist Dabei wird der Wassergehalt bzw.

   die Restfeuchte vorzugsweise so eingestellt, dass der Fibrinschwamm eine weiche und anschmiegsame Konsistenz erhält, wodurch seine Handhabung und Wirksamkeit wesentlich verbessert wird. 



   Aus dem Stand der Technik war zwar die Tatsache bekannt, dass trockene, Fibrin enthaltende Präparate, die von harter, spröder Konsistenz sind, durch Erhöhen der Restfeuchte weich und biegsam werden Es bestand allerdings ein allgemeines Vorurteil hinsichtlich der Stabilität derartiger Protein-Präparate mit erhöhter Restfeuchte, insbesondere wenn diese ein empfindliches Enzym wie Thrombin oder einen anderen Aktivator oder Proaktivator der Blutgerinnung enthalten. 



   Nicht umsonst werden derartige empfindliche Proteinpräparate üblicherweise durch Lyophilisieren haltbar gemacht, wobei eine Restfeuchte von weniger als 3%, meistens sogar von weniger als 1 % erreicht wird 
Es war deshalb überraschend, dass ein Fibrinschwamm vorzugsweise mit einem Gehalt an Thrombin und einer erhöhten Restfeuchte bzw. einem erhöhten Wassergehalt trotzdem lagerstabil ist. 



   Unter lagerstabil wird gemäss der vorliegenden Erfindung ein Fibrinschwamm verstanden, der auch nach einer Lagerung von 6 Monaten, in der Regel jedoch selbst nach einer Lagerung von 2 oder mehreren Jahren bei Raumtemperatur, immer noch vorzüglich zur Anwendung geeignet ist und die gegebenenfalls enthaltende Thrombinaktivität bzw Blutgerinnungsaktivator- oder Proaktivator-Aktivität im wesentlichen erhalten bleibt. Vorzugsweise bleibt mehr als 70% der Aktivität über einen Zeitraum von mindestens 6 Monaten, vorzugsweise 2 oder mehreren Jahren, 

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 bei Raumtemperatur erhalten.

   Sogar bei einer Temperatur von 37 C zeigte sich, dass der erfindungsgemässe Fibrinschwamm bei einer Restfeuchte von 15% für wenigstens 3 Monate, vorzugsweise mehr als 6 Monate, unter Erhalt der vollen Thrombinaktivität stabil ist 
Das erfindungsgemässe Präparat wird insbesondere den vielfältigen Anforderungen an ein Mittel zur Blutstillung, Gewebeverklebung und Unterstützung der Wundheilung gerecht, beispielsweise können durch das erfindungsgemässe Präparat Eigenschaften wie gute und andauernde Wirksamkeit, d h rasche Blutstillung bzw klebende Wirkung, keine 
Nachblutungen bzw nachträgliche Loslösung verklebter Gewebeteile, gute Verträglichkeit auch bei mehrfacher Anwendung (keine Sensibilisierung) - vollkommene Resorption während des Wundheilungsprozesses, glatte und ungestörte Wundheilung,

   höchstmögliche Sicherheit hinsichtlich der Übertragung viraler oder anderer Krankheits- erreger (wie z. B von Pnonen, den Erregern der bovinen spongiformen Enzephalitis, 
BSE), - einfache Anwendung sowie die bereits erwähnte - Lagerstabilität des gebrauchsfertigen Produktes gewährleistet werden 
Der erfindungsgemässe Fibrinschwamm ist vorzugsweise ein Fibrinvlies oder ein Fibnnschaum mit einer geringen Dichte und hohen Saugfähigkeit 
Unter einem   Fibnnvlies   ist gemäss der vorliegenden Erfindung ein Fibrinschwamm zu verstehen, der eine poröse, insbesondere feinporige, im wesentlichen nicht mit Luftblasen durchsetzte Struktur aufweist wie sie durch Lyophilisieren von nicht-geschäumten Fibrin-Clots erfindungsgemäss erhalten werden kann.

   Unter einem Fibrinschaum wird hingegen ein Material verstanden, das erhalten wird durch Aufschäumen einer Fibrinogenlösung, Versetzen mit einer Thrombinlösung, und Lyophilisieren des so erhaltenen aufgeschäumten Fibrin-Clots Das Aufschäumen kann auch unmittelbar nach Zugabe des Thrombins erfolgen. 



   Der erfindungsgemässe Fibrinschwamm kann als solcher verwendet werden Er kann im wesentlichen nur aus Fibrin und dem zur Herstellung des Fibrins aus Fibrinogen benötigtem Thrombin bestehen, wobei überraschenderweise bereits diese einfache Ausführung ausgezeichnete blutstillende und klebende Wirkung zeigt. 



   Er kann aber auch mit weiteren Zusätzen, vorzugsweise einem Blutgerinnungsaktivator oder   -proaktivator   imprägniert werden. Derartige Zusätze sind in dem erfindungsgemässen Präparat vor- zugsweise homogen verteilt. 



   Der blutgerinnungsaktivator oder-proaktivator ist vorzugsweise ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Thrombin, Prothrombin, aktiviertem Faktor X, Prothrombinkomplex, aktiviertem Prothrombinkomplex, FEIBA, Calciumionen und Mischungen davon 
Insbesondere wird dem Präparat gemäss der vorliegenden Erfindung Thrombin zugesetzt, vorzugsweise in einer Menge zwischen 1 bis 300   E/cm3,   mehr bevorzugt zwischen 5 bis 100   E/cm3,  am meisten bevorzugt zwischen 10 und 50   E/cm3.   



   Überraschenderweise hat sich herausgestellt, dass die erfindungsgemässen Präparate auf Basis von festem Fibrin auch mit einem zusätzlichen Gehalt an Thrombin dennoch über lange Zeit bei Lagerung bei Kühlschrank- oder Raumtemperatur oder sogar bei 37 C (in einem beschleunigten Stabilitätstest) stabil sind Insbesondere bleibt die enthaltende Thrombinaktivität über lange Zeit im wesentlichen erhalten Die enthaltende Thrombinaktivität kann beispielsweise nach Extraktion mit 1 M NaCI-Lösung nach an sich bekannten Methoden, z B mit einem chromogenen Substrat (Th-1, Pentapharm), bestimmt werden 
Neben Stoffen wie Blutgerinnungsaktivatoren oder-proaktivatoren können in dem erfindungsgemässen Fibrinschwamm auch Stabilisierungsmittel, Konservierungsmittel, Antibiotika, therapeutische Mittel,   antifibrinolytische   Mittel, Wachstumsfaktoren,

   weitere Plasmaproteine, Enzyme, Inhibitoren oder Mischungen derartiger Mittel enthalten sein. 



   Als Stabilisatoren werden vorzugsweise Thrombinstabilisatoren, insbesondere Polyole, Polysaccharide, Polyalkylenglykole, Aminosäuren oder Mischungen daraus, oder den Wasser- gehalt stabilisierende Substanzen, insbesondere Polysaccharide oder Polyole verwendet Die Verwendung von Sorbit, Glycerin, Polyethylenglykol, Polypropylenglykol, Mono- oder Disacchariden, wie Glukose oder Saccharose oder jeglicher Zucker oder Aminosäuren, die die 

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   Thromblnakttvität   bzw die Restfeuchte stabilisieren, ist dabei bevorzugt 
Ebenso kann die gewünschte Weichheit der Präparate durch   Inkorponeren   von Substanzen,

   beispielsweise von hydro-stabilisierend wirkenden Stoffen wie   Glycenn   erreicht bzw verbessert werden Nach Lyophilisierung in Gegenwart derartiger Substanzen können erhöhte Restfeuchte- Werte erhalten werden 
Ein bevorzugtes Antifibrinolytikum ist ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Aprotinin, Aprotinindenvat, Ó-2-Makroglobulin, a-2-Plasmin-Inhibitor, Ó-1-Plasmin-linhibitor, Plasminogenakti- vator-Inhibitor, Inhibitor oder Inaktivator von aktiviertem Protein C, eine Plasmin-bindende Substanz oder Mischungen dieser Substanzen.

   Es können auch synthetische Substanzen, insbe- sondere synthetische Fibrinolyse-Inhibitoren, z.B.   E-Aminocapronsäure   oder Tranexamsäure, eingesetzt werden Auch nicht-plasmatische, beispielsweise pflanzliche Antifibrinolytika können erfindungsgemäss eingesetzt werden 
Bevorzugte Wachstumsfaktoren sind beispielsweise Zytokine 
Als weitere Plasmaproteine werden vorzugsweise Albumin, Faktor XIII oder Fibronektin vorgesehen. 



   Weiters können dem erfindungsgemässen Fibrinschwamm auch spezifische Proenzyme, Enzyme oder Enzym-Inhibitoren zugesetzt werden, z. B. um die Resorption des Fibrinschwammes im Körper zu regulieren, d h entweder zu beschleunigen oder zu inhibieren Zu diesen Stoffen zählen beispielsweise Plasminogen, Collagenase, Plasminogenaktivatoren, Plasminogenaktivator- Inhibitoren, Plasmin-Inhibitoren oder Elastase-Inhibitoren. 



   Die erfindungsgemässen Präparationen weisen an sich schon eine gute Saugfähigkeit auf. 



  Vorzugsweise wird zusätzlich noch eine geringe Menge eines Tensides, wie Tween 80 (Polyoxy- ethylensorbitanmonooleat) inkorporiert, wodurch die Saugfähigkeit der erfindungsgemässen Präparationen noch weiter gesteigert werden kann 
Das Präparat gemäss der vorliegenden Erfindung zeichnet sich somit insbesondere durch die folgenden Eigenschaften aus 
Es besitzt eine hohe Weichheit bzw. Anschmiegsamkeit, sodass es problemlos an eine unregelmässig geformte Wundfläche aufgebracht werden kann Weiters besitzt es eine hohe Saugfähigkeit, wodurch das austretende Blut verzögerungsfrei aufgenommen wird. 



   Der erfindungsgemässe Fibrinschwamm weist bevorzugterweise eine Flüssigkeitsaufnahme- kapazität von mindestens dem 2-fachen, vorzugsweise mehr als dem 4-fachen des Eigenge- wichtes auf 
In einer bevorzugten Ausführungsform weist das Material eine homogene Verteilung der gerinnungsfördernden Eigenschaften in solcher Stärke auf, dass das aufgesaugte Blut innerhalb weniger Sekunden, vorzugsweise innerhalb weniger als 30 Sekunden, im erfindungsgemässen Präparat gennnt. 



   Die vorliegende Erfindung betrifft auch ein Verfahren zur Herstellung eines   Fibnnschwammes   auf Basis von Fibrin, welches durch die folgenden Schritte gekennzeichnet ist- 
Herstellen eines Fibrin-Clots durch Mischen von Fibrinogen und Thrombin und inkubieren des Gemisches bei einer Temperatur, vorzugsweise bei 20 - 37 C, fur eine Zeitdauer, die ausreicht, um die Bildung des Fibrin-Clots zu ermöglichen, und insbesondere die Fibrin- vernetzung zu vervollständigen, vorzugsweise 10 min- 24 h, - (Tieffrieren und) Lyophilisieren des Fibrin-Clots, und 
Einstellen einer Restfeuchte von mindestens 3%, vorzugsweise 3 bis 35%,

   insbesondere zwischen 10 und 20% 
In einer bevorzugten Ausführungsform erfolgt die Einstellung des Wassergehalts während der Lyophilisierung Die Restfeuchte kann jedoch auch nach der Lyophilisierung durch Inkubation in einer feuchten Kammer auf den gewünschten Wert eingestellt werden. 



   Bei der Herstellung eines erfindungsgemässen Präparates ist vorzugsweise auch ein Waschschritt und/oder Inkubationsschritt vorgesehen. Dadurch können insbesondere lösliche Bestandteile wie z B Salze entfernt werden, während der Gehalt an Thrombin, der aufgrund des Herstellungsverfahrens gegeben ist, überraschenderweise weitgehend erhalten bleibt 
Das Waschen kann mit destilliertem Wasser durchgeführt werden, es können aber auch Lösungen, die weitere Wirk- oder Zusatzstoffe enthalten, verwendet werden Somit ist es möglich, die Zusammensetzung des Endproduktes gezielt einzustellen bzw.

   zu variieren 

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Insbesondere wurde gefunden, dass das im Fibrin-Clot enthaltene Thrombin durch Waschen mit einer isotonen Kochsalzlosung praktisch nicht eluierbar ist Beispielsweise werden nach 4-stündi- gem Waschen mit dem 10-fachen Volumen isotoner Kochsalzlösung erst etwa 4% des Gesamt- thrombins in der Waschlösung gefunden. Hingegen werden andere Plasmaproteine, wie z.B. 



  Albumin, unter den gleichen Bedingungen vergleichsweise rasch (ca. 25% in 4 Stunden, ca 50% in 8 Stunden) eluiert 
Schliesslich kann die an sich erstaunlich hohe Stabilität des im erfindungsgemässen Präparat vorzugsweise homogen verteilten Blutgerinnungsaktivators oder-proaktivators durch an sich bekannte Stabilisatoren wie z B. Zucker, Zuckeralkohole, Polyole, Aminosäuren, etc., bzw. 



  Mischungen davon, noch weiter erhöht werden. 



   In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform wird der Fibrinschwamm im Zuge der Herstellung mit weiteren Substanzen, wie bereits an früherer Stelle erwähnt, gewaschen und/oder imprägniert. Vorzugsweise wird der Fibrin-Clot vor der Lyophilisierung imprägniert Es ist aber auch möglich, das Waschen bzw Inkubieren nach der Lyophilisierung durchzuführen, woran dann ein weiterer Lyophilisationsschritt anschliesst. 



   Ein Fibrinschaum kann dadurch hergestellt werden, dass die Fibrinogenlösung vor oder unmittelbar nach dem Mischen mit Thrombin, jedoch vor Eintritt der Gerinnung, aufgeschäumt wird. 



  Für das Aufschäumen können alle hiefür aus dem Stand der Technik gängigen Mittel eingesetzt werden Beispielsweise handelt es sich dabei um chemische, physikalische und/oder mechanische Mittel oder Methoden Gase können eingebracht oder genenert werden, insbesondere wird Luft durch intensives, mechanisches Rühren (Ultraturrax-Behandlung oder ähnliches) eingebracht. Als Beispiel für eine physikalische Methode sei das Anlegen eines Vakuums erwähnt. 



   Es wurde aber weiters gefunden, dass es im Gegensatz zu den bisher beschriebenen Methoden zur Herstellung von Fibrinschwämmen nicht unbedingt notwendig ist, die Fibrinogenlösung bzw das Fibrinogen-Thrombin-Gemisch vor Einsetzen der Gerinnung aufzu- schäumen. 



   Im Gegensatz zu den bisher beschriebenen Methoden zur Herstellung von Fibrinschwämmen werden aus Fibrin-Clots, die ohne Aufschäumen hergestellt worden sind, nach Lyophilisierung ohne wesentliche Schrumpfung besonders feinporige und saugfähige Präparationen erhalten 
Bevorzugterweise weist der Fibrin-Clot vor dem Einfrieren und Lyophilisieren einen relativ niedrigen Salzgehalt bzw eine niedrige lonenstärke, vorzugsweise weniger als 0,15, auf, vorzugsweise ist er im wesentlichen frei von Salzen. 



   Die Vermeidung des Aufschäumens bedeutet eine wesentliche Vereinfachung und Erleichterung des Herstellungsverfahrens, besonders wenn dieses unter sterilen Bedingungen durchgeführt werden soll. 



   In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform wird der Fibrinschwamm, also insbesondere das Fibrinvlies oder der Fibrinschaum, nach entsprechender Herstellung geschnitten. Vorzugs- weise   Wird   er derart geschnitten, dass nach dem Schneiden eine möglichst grosse Schnittfläche vorliegt, die dann für die Wundabdeckung nutzbar ist Es zeigte sich überraschenderweise, dass die Saugfähigkeit dieser geschnittenen Flächen noch höher ist als der ungeschnittenen, sozusagen "nativen" Oberflächen unmittelbar nach der Lyophilisierung 
Die gute Verträglichkeit auch bei mehrfacher Anwendung, insbebesondere die Vermeidung allergischer Reaktionen wird vorzugsweise durch die ausschliessliche Verwendung von humanen Proteinen sowie durch die Vermeidung von Verfahren, beispielsweise Sterilisierungsverfahren, durch die Proteine denaturiert werden können (wie z B.

   durch y-Bestrahlung), erreicht. 



   Die Herstellung der erfindungsgemässen Wundauflage erfolgt in einer besonders bevorzugten Ausführungsform aus einem sterilen Ausgangsmaterial unter Beibehaltung steriler Bedingungen bis zum Endprodukt 
Vorzugsweise wird das erfindungsgemässe Präparat aus Humanplasmaproteinfraktionen hergestellt, die nach geeigneten Virusinaktivierungsverfahren für empfindliche Plasmaproteine behandelt worden sind 
Die Inaktivierungsbehandlung wird vorzugsweise mit einer Tensid- und/oder Hitzebehandfung gewährleistet, beispielsweise durch eine Hitzebehandlung im festen Zustand, insbesondere eine 
Dampfbehandlung gemäss der EP 0 159 311, der EP 0 519 901 oder der EP 0 674 531. 



   Weitere Schritte zur Inaktivierung von Viren umfassen auch die Behandlung mit chemischen 

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 oder chemisch/physikalischen Methoden, z B. mit chaotropen Stoffen gemäss der WO 94/13 329, der DE 44 34 538 oder der EP 0 131 740   (Losungsmittet)   oder die   Photoinaktivierung   
Vorzugsweise werden zwei voneinander unabhängige Virusinaktivierungsverfahren durchgefuhrt. 



   Die Nanofiltration stellt ebenfalls ein bevorzugtes Verfahren zur Abreicherung von Viren im Rahmen der vorliegenden Erfindung dar 
Eine andere Moglichkeit, die Virussicherheit zu erhohen, besteht darin, von vornherein ausschliesslich von weitgehend virussicheren Ausgangssubstanzen bei der Herstellung auszugehen und dann im Rahmen des Herstellungsprozesses alle Kontaminationsrisiken auszuschalten Die höchstmögliche Sicherheit hinsichtlich der Übertragung viraler oder anderer Krankheitserreger wird bei Herstellung aus Humanplasma zusätzlich dadurch gewährleistet, dass eine sorgfältige Auswahl und Überwachung der Plasmaspender erfolgt, das Ausgangsplasma einer Testung auf pathogene Viren unterzogen wird (vorzugsweise Einzelspenden Testung), insbeson- dere mit PCR-Methoden. 



   Das erfindungsgemässe Präparat kann aber grundsätzlich auch aus rekombinantem bzw transgenem Material hergestellt werden, wobei ebenfalls die dort erforderlichen Sicherheits- massnahmen einzuhalten sind. 



   Vorzugsweise erfolgt die Herstellung ausgehend von sterilen Zwischenprodukten (sterilfilt- rierten Lösungen) bis zum steril verpackten Endprodukt unter sterilen Bedingungen, sodass eine   nachtragliche   Sterilisierung im Endbehälter, wie beispielsweise durch y-Bestrahlung, nicht mehr notwendig ist 
Die vollkommene Resorption während des Wundheilungsprozesses, sowie die glatte und ungestörte Wundheilung wird durch die Verwendung von Fibrin und gegebenenfalls weiteren Plasmaproteinen wie beispielsweise Fibronektin als Matrix erreicht, wobei die Bildung des Fibrins vorzugsweise bei etwa physiologischer lonenstarke, bei etwa physiologischem pH und in Gegen- wart von Faktor XIII erfolgt, sodass ein vemetzter Fibrin-Clot mit physiologischer Fibrinstruktur erhalten wird,

   die für das Einsprossen von Fibroblasten und damit für eine rasche und glatte Wundheilung wesentlich ist (vgl dazu auch Redl et al, Med Welt,   36,   p 769-776,1985). 



   Die Länge und Breite des erfindungsgemässen Fibrinschwammes ist je nach Art des Einsatzes frei wählbar Die Dicke liegt vorzugsweise in einem praktikablen Bereich zwischen 1 und 20 mm je nach Indikation, wobei Dicken zwischen 3 und 15 bzw. 5 und 10 mm bevorzugt sind 
Der erfindungsgemasse Fibnnschwamm kann auch als eine Kombination mit anderen Materialien vorliegen. 



   Die Anwendung des Fibrinschaumes erfolgt beispielsweise derart, dass er auf die blutende Wunde aufgelegt und für kurze Zeit (etwa 30 Sekunden) leicht angedrückt wird Der Schwamm saugt das Blut sehr rasch auf, wobei das aufgesaugte Blut im Schwamm gerinnt Dadurch wird eine feste Verankerung des Fibrinschwammes auf der Wundflache erreicht, worauf letztlich die blutstillende und klebende Wirkung beruht 
Das Präparat kann auch als sogenannter Trockenkleber, vorzugsweise als relativ dünner Schwamm, verwendet werden Zur Verklebung von zwei (weichen) blutenden Gewebeteilen wird ein passendes Stuck des   "Trockenklebers"   auf eine   Wundfläche   aufgebracht und anschliessend die zweite Wundfläche (der zweite Gewebeteil)

   adaptiert und kurz angedrückt 
Das medizinische Indikationsgebiet fur den erfindungsgemässen Fibrinschwamm ist ziemlich umfassend Der Schwamm kann nicht nur zum Stoppen einer Sickerblutung verwendet werden, sondern auch zum Stoppen einer Blutung bei sehr grossen blutenden Flächen mit hohem Blutdruck. 



  Folgende innere und äussere chirurgische Eingriffe konnen unter Verwendung des erfindungsgemässen Fibrinschwammes erfolgreich durchgeführt werden Allgemeine Chirurgie, beispielsweise Operationen parenchymatoser Organe (Leber, Niere, Milz usw. ), kardiovaskuläre Operationen, Thoraxoperationen, Transplantationsoperationen, orthopädische Operationen, Operationen in der Knochenchirurgie und plastischen Chirurgie, Ohren-, Nasen- und Halsoperationen, Operationen in der Neurochirurgie, Operationen im urologischen und gynakologischen Bereich, sowie allgemein zur Hämostase, wie zur Behandlung von herkömmlichen Wunden 
Gemäss einem weiteren Aspekt der vorliegenden Erfindung wird auch ein Set zur Wundverklebung zur Verfügung gestellt, welches sich dadurch auszeichnet, dass es einen 

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 erfindungsgemässen Fibrinschwamm und eine Komponente umfasst,

   die einen Blutgerinnungsfaktor enthält. 



   Dieser Blutgerinnungsfaktor ist vorzugsweise Fibrinogen, Faktor XIII, Fibronektin, Thrombin oder Mischungen dieser Faktoren, wobei eine Fibrinogenkomponente vorzugsweise in lagerstabiler Form, etwa ein handelsübliches Produkt eines Gewebeklebers auf Basis von Fibrinogen, besonders bevorzugt wird 
Die Erfindung wird durch das nachfolgende Beispiel noch näher erläutert ohne sie jedoch auf dieses zu beschränken 
Beispiel 1 :   Fibrinvhes   aus vemetztem Fibrin mit einem (relativ niedrigen) Gehalt an Thrombin. 



   1. 1 Herstellung 
Als Ausgangsmaterial zur Herstellung einer Fibrinogenlösung mit einem Gehalt an Faktor XIII und Fibronektin diente ein käufliches, durch Dampfbehandlung virusinaktiviertes, lyophilisiertes Gewebeklebstoff-Präparat   (Tissucol,   IMMUNO AG) Das Präparat wurde It Angabe des Herstellers mit einer wässrigen Aprotininlösung (3000 KIE/ml) gelöst und mit destilliertem H2 0 1 4 weiterverdunnt, sodass eine Fibrinogenkonzentration von etwa 20   mg/mi   erhalten wurde 20 ml dieser Lösung wurden mit 20 ml einer Thrombin-CaCl2 -Lösung (Humanes Thrombin, ca.

   10 e/ml 5 mM   CaCI2)   rasch gemischt und in eine Petrischale (ID=8,4 cm) ausgegossen, zunächst etwa 30 min in Ruhe bei Raumtemperatur stehengelassen und danach noch etwa 16 h in einer feuchten Kammer bei 37 C inkubiert Der Clot in Form einer runden Scheibe von etwa 7 mm Dicke wurde sodann tiefgefroren und lyophilisiert Das entstandene Lyophilisat (Vlies) hatte ein leichtes,   feinporöses   Aussehen und im wesentlichen die Form des Clots vor Lyophilisierung beibehalten Allerdings war das Material zur optimalen Anwendung noch zu spröde.

   Zur Verbesserung der gewünschten Weichheit und Biegsamkeit wurde das Vlies für etwa 3 h in einer feuchten Kammer bei Raumtemperatur inkubiert, wodurch ein weiches anschmiegsames und sehr saugfähiges Material erhalten wurde 
1.2 : Analyse, in vitro Testungen: 
 EMI6.1 
 
<tb> Restfeuchte <SEP> : <SEP> ca. <SEP> 15% <SEP> 
<tb> 
<tb> 
<tb> Biegsamkeit:

   <SEP> > <SEP> 90  <SEP> bei <SEP> einem <SEP> mittleren <SEP> Krümmungsradius
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> entsprechend <SEP> der <SEP> halben <SEP> Schichtdicke
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> Fibrinvernetzung- <SEP> y-Ketten <SEP> 100%
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> a-Ketten <SEP> ca <SEP> 80%
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> Thrombingehalt- <SEP> Bestimmung <SEP> nach <SEP> Extraktion <SEP> mit <SEP> 1M <SEP> NaCI. <SEP> 1,4 <SEP> E/cm3
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> Wasseraufnahmevermögen- <SEP> ca <SEP> 6-faches <SEP> Eigengewicht
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> Wasseraufnahmegeschwindigkeit: <SEP> ein <SEP> auf <SEP> die <SEP> Oberfläche <SEP> des <SEP> Vlieses <SEP> aufgesetzter <SEP> Wasser-
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> tropfen <SEP> (50 l) <SEP> wird <SEP> in <SEP> ca <SEP> 25 <SEP> s <SEP> vollkommen <SEP> aufgesaugt.
<tb> 
 



   (Auf geschnittenen Flächen des Vlieses erfolgt unter sonst gleichen Bedingungen die Wasseraufnahme praktisch sofort, d. h. in weniger als 5 s) 
1. 3 Wirksamkeit 
Die klebende und blutstillende Wirkung des nach 1.1 hergestellten Präparates wurde im sogenannten Nierenpol-Resektionsmodell am Kaninchen getestet. 



   Dabei wird dem Versuchstier unter Narkose mit Kedamin und Xylazin (Nachdosierung Pentobarbital) eine Niere freigelegt und mit dem Skalpell der Nierenpol entfernt Es entsteht eine etwa kreisrunde, gleichmässig stark blutende Fläche von ca 1 bis 1,5 cm Durchmesser Das Testpräparat wird auf die blutende Fläche aufgelegt, genau 30 s mit dem Finger leicht angedrückt und danach losgelassen Die Haftung des Präparates wird beobachtet und die Zeit bis zum 

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 vollständigen Stillstand der Blutung gemessen Etwa ausgetretenes Blut wird mit Gazetupfern aufgenommen und der Blutverlust nach Extraktion mit Ammoniak aus dem   Testmatenal   und den Gazetupfern kolorimetrisch bestimmt 
Der Test wurde mit dem nach 1.1erhaltenen Präparat an zwei Kaninchen durchgeführt 
Ergebnisse :

   
In beiden Fallen haftete das Präparat gut auf der stark blutenden Fläche und wurde ein vollständiger Stillstand der Blutung praktisch sofort (in weniger als 30 s) erreicht Während einer Nachbeobachtungszeit von 1 h traten keine Nachblutungen auf. 



   Der totale Blutverlust (im Testmatenal aufgesaugt, sonst kein ausgetretenes Blut) betrug 0,10 bzw   0,18 ml   
Zum Vergleich beträgt in diesem Modell der Blutverlust bei konventioneller Blutstillung mit Gaze etwa 5 ml bei einer Blutungszeit von 3 min, bzw ohne Behandlung etwa 27 ml bei einer Blu- tungszeit von 9 min 
Die gegenüber herkömmlichen Mitteln wesentlich verbesserte Wirksamkeit des nach 1 1 erhaltenen Präparates wurde somit eindrucksvoll demonstriert.

Claims

PATENTANSPRÜCHE: 1. Lagerstabiler Fibrinschwamm, dadurch gekennzeichnet, dass er eine Restfeuchte von mindestens 3%, vorzugsweise im Bereich von 3 bis 35%, insbesondere 10 bis 20%, aufweist 2 Fibrinschwamm nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass er einen Blutgennnungs- aktivator oder-proaktivator enthält 3 Fibrinschwamm nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, dass der Blutgermnungs- aktivator oder -proaktivator ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Thrombin, Prothrombin, aktiviertem Faktor X, aktiviertem Prothrombinkomplex, FEIBA, Calciumionen und Mischungen davon 4 Fibrinschwamm nach Anspruch 2 oder 3 dadurch gekennzeichnet, dass er 1 bis 300 E/cm3 Thrombin, vorzugsweise 5 bis 100 Eiern , insbesondere 10 bis 50 E/cm3, enthält 5.

Fibrinschwamm nach einem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, dass er Stabilisierungsmittel, Konservierungsmittel, Antibiotika, therapeutische Mittel, antifibrino- lytische Mittel, Wachstumsfaktoren, weitere Plasmaproteine, Enzyme, Inhibitoren oder Mischungen dieser Mittel enthält.

6 Fibrinschwamm nach einem der Anspruche 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet, dass er eine Flüssigkeitsaufnahmekapazität von mindestens dem 2-fachen, vorzugsweise dem 4-fachen, des Eigengewichtes aufweist.

7 Fibrinschwamm nach einem der Ansprüche 1 bis 6, dadurch gekennzeichnet, dass er virusinaktiviert ist 8 Fibrinschwamm nach einem der Anspruche 1 bis 7, dadurch gekennzeichnet, dass er frei von eluierbaren Plasmaproteinen, insbesondere frei von eluierbarem Thrombin, ist 9 Fibrinschwamm nach einem der Anspruche 1 bis 8, dadurch gekennzeichnet, dass er aus virussicheren Ausgangssubstanzen hergestellt ist 10 Fibrinschwamm nach einem der Ansprüche 1 bis 9, dadurch gekennzeichnet, dass er in einer aseptischen Verpackung und in gebrauchsfertiger Form vorliegt.

11 Fibrinschwamm nach einem der Ansprüche 1 bis 10, dadurch gekennzeichnet, dass er eine Dicke von mindestens 1 mm, vorzugsweise zwischen 5 und 10 mm, aufweist 12 Fibrinschwamm nach einem der Anspruche 1 bis 11, dadurch gekennzeichnet, dass er mehrschichtig aufgebaut ist, wobei vorzugsweise mindestens eine Schicht blutstillende Eigenschaften aufweist 13 Fibrinschwamm nach einem der Ansprüche 1 bis 12, dadurch gekennzeichnet, dass er ein spezifisches Gewicht zwischen 0,005 bis 0,15 g/cm3 aufweist, vorzugsweise 0,01 bis 0,09 g/cm3 , insbesondere 0,02 bis 0,05 g/cm3. <Desc/Clms Page number 8>

14 Set zur Wundverklebung, dadurch gekennzeichnet, dass es einen Fibrinschwamm nach einem der Ansprüche 1 bis 13 und eine Komponente, die einen Blutgerinnungsfaktor enthält, umfasst.

15. Set nach Anspruch 14, dadurch gekennzeichnet, dass der Blutgerinnungsfaktor Fibrinogen, Faktor XIII, Fibronektin, Thrombin oder eine Mischung dieser Faktoren ist.

16. Verfahren zur Herstellung eines Fibrinschwammes nach einem der Anspruche 1 bis 13, gekennzeichnet durch die folgenden Schritte a) Herstellen eines Fibrin-Clots durch Mischen einer Fibrinogenlösung, die vorzugsweise Faktor XIII enthält, mit einer Thrombinlösung, die vorzugsweise Ca2 + -Ionen enthält, und Inkubieren bei einer Temperatur, vorzugsweise bei 20 bis 37 C, für eine Zeit, die für die Bildung des Fibrin-Clots und gegebenenfalls für die Vernetzung des Fibrins ausreicht, vorzugsweise 10 min bis 24 h, b) Tieffrieren und Lyophilisieren des Fibrin-Clots und c) Einstellen einer Restfeuchte auf mindestens 3%, vorzugsweise 3 bis 35%, insbesondere auf 10 bis 20%, d) gegebenenfalls Verpacken der Präparation in einem geeigneten,

insbesondere luft- und/oder wasserdichten Behalter 17 Verfahren nach Anspruch 16, dadurch gekennzeichnet, dass in der Fibrinogenlösung und/oder der Thrombinlösung weitere Plasmaproteine und/oder weitere Wirkstoffe und/oder Zusatzstoffe enthalten sind.

18 Verfahren nach Anspruch 16 oder 17, dadurch gekennzeichnet, dass die Fibrinogenlösung bzw deren Mischung mit der Thrombinlösung vor Einsetzen der Gerinnung aufgeschäumt wird.

19 Verfahren nach einem der Ansprüche 17 bis 18, dadurch gekennzeichnet, dass eine Virusinaktivierung vorgesehen wird, vorzugsweise durch zwei voneinander unabhängige Virusinaktivierungsschritte.

20. Verfahren nach einem der Ansprüche 16 bis 19, dadurch gekennzeichnet, dass der Fibrin- Clot mit Wasser oder einer wässerigen Lösung gewaschen und/oder mit einer weiteren Lösung, die Thrombin und/oder weitere Plasmaproteine und/oder weitere Wirkstoffe enthalt, inkubiert wird.

21 Verfahren nach einem der Ansprüche 16 bis 20, dadurch gekennzeichnet, dass die weiteren Plasmaproteine ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Fibronektin, Fibrinolyse-Inhibitor, Plasminogen und Albumin, die weiteren Wirkstoffe ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus nicht-plasmatischem bzw. synthetischem Fibrinolyse- Inhibitor, Antibiotikum und Wachstumshormon 22. Verfahren nach einem der Ansprüche 16 bis 21, dadurch gekennzeichnet, dass die Zusatz- bzw.

Hilfsstoffe ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Zucker, Zuckeralkohol, Polyol, Aminosäure, Tensid, Weichmacher und Feuchthaltemittel, und dass insbesondere Glycerin eingesetzt wird 23 Verfahren nach einem der Ansprüche 16 bis 22, dadurch gekennzeichnet, dass das Waschen bzw die Inkubation mit einer Lösung enthaltend Stoffe nach Anspruch 20 nach der Lyophilisierung erfolgt und anschliessend nochmals tiefgefroren und lyophilisiert wird.

24 Verwendung des Fibnnschwammes nach Anspruch 1 bis 13 zur Herstellung eines Mittels zur Blutstillung, Gewebeklebung und Unterstützung der Wundheilung