CN1276733A

CN1276733A - 纤维蛋白海绵

Info

Publication number: CN1276733A
Application number: CN98810323A
Authority: CN
Inventors: T·西利克; E·谢尔; J·奥达; Y·A·德尔莫特
Original assignee: Baxter AG; Baxter International Inc
Current assignee: Baxter AG; Baxter International Inc
Priority date: 1997-09-19
Filing date: 1998-09-18
Publication date: 2000-12-13
Also published as: KR20010024172A; DE69817594D1; WO1999015209A3; BR9812228A; AT407117B; ATA159397A; JP2001517492A; EP1017429B1; EP1017429A2; US6548729B1; AU9627098A; CA2303536A1; DE69817594T2; IL134983A0; WO1999015209A2; JP3602441B2

Abstract

本发明涉及残余湿含量至少为3%、优选3～35%、特别是10～20%并优选含有凝血激活物或原激活物的纤维蛋白海绵、此纤维蛋白海绵的制备方法以及包含此纤维蛋白海绵和含凝血因子组份的伤口粘合用用具。本发明海绵适用于止血、粘合组织和辅助伤口愈合。

Description

纤维蛋白海绵

本发明涉及一种有确定残余湿度的纤维蛋白海绵、其制备方法、在止血、粘合组织和辅助伤口愈合中的用途以及借以实施的用具。

现有技术中描述了数量众多的止血性伤口包覆材料，也都是基于纤维蛋白的，比如纤维蛋白海绵、纤维蛋白膜或纤维蛋白凝胶，并且有些也获得了应用。

目前最为盛行的观点是，就止血而言，纤维蛋白原与凝血酶或相应凝血酶原激活物的配合是不可或缺的。因此，现有技术已知的就是，比如以含纤维蛋白原和凝血酶的胶原蛋白为基的羊毛状薄片(TachoComb^)、含有纤维蛋白原和激活的因子X的薄片(AT 0 359653，IMMUNO AG)或者是含有纤维蛋白原和凝血酶的干制剂式薄片(EP 0 748 633，IMMUNO AG)。但是，这种基于纤维蛋白原和激活的因子X的羊毛状薄片过于松软和柔韧，而其它的薄片则要求绝对干燥的贮存条件，以避免纤维蛋白原与其中所含的凝血酶或其它凝血激活物过早地发生反应。

Bering E.A.jr.(J.Clin.Invest.Vol.23，1944，p.596)对纤维蛋白泡沫领域的发展概况及其作为止血剂的用途作了论述。

对各种纤维对纤维蛋白基材料如纤维蛋白粉、纤维蛋白膜和纤维蛋白泡沫的概述可参见K.Laki(ed.)Fibrinogen，M.Dekker，NewYork，1968的Gerendas M.“Fibrin products as aids in hemostasisand wound healing”，pp.277。

而且，从现有技术还可分别了解到纤维蛋白箔或纤维蛋白膜(参见EP 0 485 210-A2)。这种材料太过单薄且不具吸收功能，因此止血用途也就仅此而已。与纤维蛋白海绵相反的是，这些材料在制备过程中经过比如施加重物而进行过刻意的压制。因此，这些材料其特征首先在于，与泡沫相比其密度较高。

本发明的目的是从纤维蛋白出发提供一种用于止血、粘合组织和辅助伤口愈合的方法，与常用的方法相比，它具有良好、特别是有所改进的效果，操作简单，同时组合物简单因而低成本制备有望，并且也具有宽的应用前景。鉴于此，应该很容易就能够得到含有其它活性及辅助性物质的纤维蛋白材料。

根据本发明，通过提供以残余湿度至少为3％、优选3～35％、特别是10～20％并且贮存稳定的的纤维蛋白海绵，而达到此目的。优选对水份或残余湿度分别进行调整，以使纤维蛋白海绵质地松软平滑，进而大大改进其操作性和效用。

从现有技术可知，通过提高其残余湿度，质地硬脆的含纤维蛋白的干制剂就会变得松软且平滑(柔韧)。但是，一般会对这种残余湿度有所提高的蛋白质制剂的稳定性产生顾虑，特别是在其含有敏感性酶如凝血酶或其它凝血激活物或原激活物的情况下。

这并不是没有原因的，这种敏感性蛋白质制剂一般都是经过冷冻干燥而加以稳定的，保留的残余湿度小于3％，多数情况下甚至小于1％。

因此，令人惊奇的就是，优选含有凝血酶并且湿度或水份提高的纤维蛋白海绵竟然是贮存稳定的。

本发明中贮存稳定指的是，可将纤维蛋白海绵理解为，一般地即使是在室温下贮存6个月、而且即便是贮存2或更多年后，仍旧是应用的最宜之选，并且可选含有的凝血酶或者凝血激活物或原激活物的活性基本都保持不变。优选地，在室温下经过至少6个月、优选2或更多年后，保留高于70％的活性。甚至在37℃温度下，残余湿度为15％的本发明纤维蛋白海绵至少在3个月内，优选超过6个月，是稳定的，其凝血酶的活性完全保留下来。

本发明制剂尤其迎合了对止血、粘合组织及辅助伤口愈合手段的多方需求，借以本发明的制剂能实现如下的性能，比如-良好和持续的效用，即快速的止血或粘合效果，避免了二次出血或粘接组织部位的后期拆分，-良好的耐受性，即便是重复使用(不过敏)，-伤口愈合过程中完全得到吸收，-伤口的平滑和无扰愈合，-最大可能地避免了病毒或其它病原(比如脘病毒、牛海绵状脑炎病原和BSE)的传播，-如所述般使用方便，-制品贮存稳定，即开即用。

本发明纤维蛋白海绵优选是一种低密度和高吸收容量的纤维蛋白羊毛状薄片或纤维蛋白泡沫。

本发明中纤维蛋白羊毛状薄片指的是，可将纤维蛋白海绵看作是具有几乎不搀空气泡的多孔、特别是细孔结构，可借助本发明非发泡纤维蛋白凝块的冷冻干燥而得到。另一方面，纤维蛋白泡沫指的是，可将一种材料理解为是通过将纤维蛋白原溶液发泡、与凝血酶溶液混合并冷冻干燥所得的发泡纤维蛋白凝块而制备的。也可在添加凝血酶之后立即进行发泡。

本发明的纤维蛋白海绵也可如此。它基本上由纤维蛋白和从纤维蛋白原生成纤维蛋白所必需的凝血酶构成，而且令人惊奇的是，就是这么简单的一个实施方案都能显示出优异的止血和粘合效果。

而且可经过进一步的添加剂的浸渍，优选凝血激活物或原激活物。添加剂优选均匀分散于本发明的制剂中。

凝血激活物或原激活物优选选择自凝血酶、凝血酶原、激活的因子X、凝血酶原复合体、激活的凝血酶原复合体、FEIBA、钙离子及其混合物。

特别地，本发明制剂可含有进一步的凝血酶，优选量为1～300U/cm³，更优选5～100U/cm³，最优选10～50U/cm³。

一个令人惊奇的发现是，以固体纤维蛋白为基另外也含有凝血酶的本发明制剂，在冰箱或室温、甚至是在37℃(稳定性加速试验中)下也能长时间贮存而保持稳定。特别是所含凝血酶的活性在长时间后也能基本上保持不变。所含凝血酶的活性比如可在以1M NaCl溶液萃取后，利用就其本身已知的方法进行测定，比如借助显色性底物(Th-1，Pentapharm)。

除了凝血激活物或原激活物等物质之外，本发明的纤维蛋白海绵也可含有稳定剂、防腐剂、杀菌剂、治疗剂、抗纤维蛋白溶解剂、生长因子、进一步的血浆蛋白、酶、抑制物或这些制剂的混合物。

就稳定剂而言，优选凝血酶稳定剂，特别是多元醇、多糖、聚亚烷基二醇、氨基酸及其混合物，或者是保水的物质，特别可采用多糖或多元醇。山梨醇、甘油、聚乙二醇、聚丙二醇、单或二糖如葡萄糖或蔗糖或者是能够保住凝血酶活性或残余湿度的任何糖或氨基酸，都可分别优选选用。

同样地，借助物质比如保活性物质如甘油的添加，可达到或改进制剂所需的松软度。在这些物质的存在下进行冷冻干燥，继而就可实现较高的残余湿度。

优选的抗纤维蛋白溶解剂选择自抑肽酶、抑肽酶衍生物、α-2-巨球蛋白、α-2-纤溶酶抑制物、α-1-纤溶酶抑制物、纤溶酶原激活物抑制物、激活蛋白质C的抑制物或失活物、纤溶酶结合物以及这些物质的混合物。也可选用合成的物质，特别是合成的纤维蛋白溶解抑制物如ε-氨基己酸或凝血酸。按照本发明，比如也可采用取自蔬菜的非血浆蛋白类抗纤维蛋白溶解剂。

优选的生长因子比如是细胞分裂素。对进一步的血浆蛋白而言，优选考虑清蛋白、因子XIII或纤连蛋白。

而且，特定的酶原、酶或酶抑制物也可与本发明的纤维蛋白海绵进行混合，比如用以调控纤维蛋白海绵在机体中的吸收，即令其加速或减缓。这些物质中比如可以是纤溶酶原、胶原酶、纤溶酶原激活物、纤溶酶原激活物抑制物、纤溶酶抑制物或弹性蛋白酶抑制物。

本发明制剂本身的吸收容量很高。优选再添加少量的表面活性剂如吐温-80(聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯)，借以进一步提高本发明制剂的吸收容量。

因此，本发明制剂其特征尤其在于如下的性能：

其松软度或适应性大，因而可以毫不费力地施用到不规则伤损的表面上。并且吸收容量高，从而能够及时地吸收渗血。

优选地，本发明纤维蛋白海绵的液体吸收能力是其自身重量的至少2倍、优选超过4倍。

在一个优选的实施方案中，材料促凝性能的均匀分布令得本发明制剂所吸收的血液在几秒、优选少于30秒内凝固。

本发明也涉及纤维蛋白基纤维蛋白海绵的制备方法，其特征在于以下步骤：-制备纤维蛋白凝块，将纤维蛋白原与凝血酶混合并且混合物在优选20～37℃的温度下温育足够长的时间，以形成纤维蛋白凝块尤其是让纤维蛋白交联完全，优选10分钟～24小时，-(深度冷冻并)冷冻干燥纤维蛋白凝块，和-将残余湿度调节为至少3％，优选3～35％，特别是10～20％，

在一个优选的实施方案中，在冷冻干燥过程中对水含量进行调节。但是，也可在冷冻干燥之后借温室内温育将残余湿度调至所需大小。

在制备本发明的制剂时，也优选加以洗涤和/或温育的步骤。借此尤其可除掉可溶性组份如盐，然而令人惊奇的是，由制备方法所要求的凝血酶含量在很大程度上得到保留。

洗涤可借助蒸馏水来实现，但也可采用含有进一步的活性物质或添加剂的溶液。因此，可以有针对性地调整或改变最终制品的组成。

特别已经发现，纤维蛋白凝块内含的凝血酶实际上是以等渗盐水溶液洗涤所洗脱不掉的。比如以10倍体积的等渗盐水溶液洗涤4小时后，洗脱溶液中总共只发现约4％的凝血酶。另一方面，进一步的血浆蛋白如清蛋白，在相同的条件下则洗脱得较快(4小时后约25％，8小时后约50％)。

最后，虽然优选在本发明制剂中均匀分布的凝血激活物或原激活物都分别具有不可思议高的稳定性，但仍可利用本身已知的稳定剂如糖、糖醇、多元醇、氨基酸等或其混合物而实现进一步的提高。

在一个更为优选的实施方案中，纤维蛋白海绵可如前所述般在制备过程中以进一步的物质洗涤和/或浸渍。纤维蛋白凝块优选在冷冻干燥之前进行浸渍。但是，也可在冷冻干燥后再分别进行洗涤或温育，接着是再次冷冻干燥的步骤。

纤维蛋白泡沫的制备是，在与凝血酶混合之前或刚刚混合后，但赶在凝固开始之前将纤维蛋白原溶液发泡。现有技术常用的所有方法都可用来发泡。比如化学、物理和/或机械的手段或方法。气体可以是引入的也可以是生成的，特别是可以借强的机械搅拌(Ultraturrax处理等)来引入空气。借助真空可视为物理方法的一个例子。

而且已经发现，与迄今所知制备纤维蛋白海绵的方法相反，不一定非得赶在凝固开始前将纤维蛋白原溶液或纤维蛋白原凝血酶混合物发泡。

与迄今所知制备纤维蛋白海绵的方法相反，在冷冻干燥之后从非发泡法制备的纤维蛋白凝块可以几乎无收缩地制备出孔度特细且具吸收性能的制剂。

在冷冻或冷冻干燥之前，纤维蛋白凝块优选分别具有相对较低的盐含量或低的离子强度，优选小于0.15，优选其基本上不含盐。

省却发泡则大大简化并对制备方法有利，特别是如果后者在无菌的条件下进行时。

在一个更为优选的实施方案中，将纤维蛋白海绵，特别指的是纤维蛋白薄片或纤维蛋白泡沫，在制备后切开。优选地，将其切开的目的在于切开后，继而用作伤口包覆物的切割面要尽可能地大。令人惊奇地发现，同未切开的于冷冻干燥之后即刻形成的所谓的“自然”表面相比，切割表面的吸收容量甚至还要高。

有赖于对人类蛋白的专用并加以免沾染的方法，比如蛋白质会因之变性(比如γ-射线法)的消毒法，而优选达到良好的耐受性，即使是在多次使用之后，特别是能消除过敏反应。

在一个特简单的实施方案中，经由无菌起始物制备出本发明的伤口包覆物，而无菌条件一直保持直至最终的制品。

优选从人类血浆蛋白级份来制备本发明的制剂，以对敏感性血浆蛋白适宜的病毒失活方法进行处理。

失活处理优选借表面活性剂和/或热处理来实现，比如以固态形式进行热处理，特别是蒸汽处理，参见EP 0 159 311，EP 0 519 901或EP 0 674 531。

在一个优选的实施方案中，热处理按热蒸汽处理来进行，而残余湿度为6～15％，优选约12％。当海绵含有凝血酶时，令人惊奇地发现即使是在这些条件下，几乎所有凝血酶的活性都能保留。

病毒失活的进一步的步骤也包括以化学或化学/物理手段进行处理，比如借助离液序列高的物质，参见WO 94/13 329、DE 44 34 538或EP 0 131 740(溶剂)或光失活。

优选采用两个独立的病毒失活方法。

在本发明的范围内，超微过滤也构成灭除病毒的优选方法。

提高病毒安全性再一个可能的途径是，首先别无它选地从——尽最大可能——病毒无染的起始物开始制备，并随后在制备工艺过程中杜绝所有可能的沾污。在从人类血浆蛋白制备的过程中旨在最大可能地防范病毒或其它病原传播的安全措施，可通过对血浆蛋白捐献者的认真挑选和检验而进一步得到加强，特别是可利用PCR法对起始血浆蛋白进行病原性病毒测试(优选对捐献者进行个体测试)。

但是，基本上本发明制剂也可制备自重组或转基因物质，其中也得满足必要的安全级别。

优选在无菌的条件下进行制备，起始自无菌的中间产物(无菌过滤的溶液)直至最终制品被无菌包装，这样就免去了随后在制品容器中借γ-射线等消毒的麻烦。

以血纤维和可选进一步的血浆蛋白如纤连蛋白为基质，实现了伤口愈合过程中的完全吸收以及伤口的平滑和无扰愈合，优选在接近生理离子强度并接近生理pH值以及在因子XIII存在的条件下形成纤维蛋白，以得到具有生理纤维结构的交联纤维蛋凝块，其是成纤细胞生长所必不可少的，从而会使伤口快速而平滑地愈合(也参见Redl等的Med.Welt，36，pp.769-776，1985)。

根据用法的不同，可随意选择本发明纤维蛋白海绵的长和宽。优选厚度的适用范围为1～20mm，因要求而异，分别优选厚度3～15mm或5～10mm。

本发明的纤维蛋白海绵也可以与其它物质配合使用。

在一个特定的实施方案中，海绵由几层构成以形成多层材料。优选至少有一层具备止血功能。各层可由同种材料构成，或者是在材质和/或组成上相异。

海绵材料的特征在于材料或各层的比重。在一个优选的实施方案中，比重为0.005～0.15g/cm³，更优选0.01～0.09g/cm³，最优选0.02～0.05g/cm³。

在另一个优选的实施方案中，各层由同种材料构成但各自的物理性能如比重却不同。通过改变各层的物理性能，可得到一种海绵，其特征在于海绵的一侧是光滑的，吸收容量高，而海绵的另一侧则相对密实且较硬。通过改变成层物质或者用以浸渍各层的物质的用量或浓度，可作为改变各层性能的另一途径。比如说，每层中的凝血酶浓度可以是不同的。

纤维蛋白泡沫的用途，比如可这样，将其施用到出血的伤口上并在上面轻按一会儿(约30秒)。海绵吸血的速度极快，吸收的血液在海绵内凝固。从而将纤维蛋白海绵紧密地附着在伤口表面上，这就为最终的止血和粘合效果奠定了基础。

制剂也可当作所谓的干性胶来使用，优选超薄绵。为了让两侧(柔软的)组织出血部位粘在一起，将适当一片的“干性胶”放在伤口表面上，接着调整伤口对侧的表面(对侧组织部位)并迅速按在上面。

本发明纤维蛋白海绵所能触及的药物领域是相当宽的。海绵不仅可用于止住渗血，也可用于止住流血面非常大而血压又高情况下的出血。利用本发明的纤维蛋白海绵可成功进行如下的体内和体外外科手术：柔软器官组织外科(肝肾脾等)等一般性外科、心血管外科、胸腔外科、移植外科、矫形外科、骨外科和整形外科领域的外科手术、耳鼻喉外科、神经外科领域的手术、泌尿道和妇科手术，以及一般性止血和普通伤口的处理。

本发明进一步而言也提供了一种伤口粘合用具，其特征在于其包含有本发明的纤维蛋白海绵以及一种含有凝血因子的组份。

凝血因子优选纤维蛋白原、因子XIII、纤连蛋白、凝血酶或这些因子的混合物，优选贮存稳定型的纤维蛋白原组份，比如特别优选一种基于纤维蛋白原的市售组织粘合制品。

本发明海绵也可用作细胞培养物的生物载体，特别是哺乳动物细胞比如角膜细胞、上皮细胞、表皮细胞、成纤细胞、软骨细胞等。

因此根据本发明，也提供了一种包含本发明纤维蛋白海绵的无菌型用具，用作细胞培养物的生物载体。

进一步的添加剂如灭菌剂、各种氨基酸以及/或者各种生长因子，可以是绵中所含的或者是向所用介质中后期添加的。

如果把本发明的纤维蛋白海绵作为细胞成长基体，可能会相应形成皮肤、骨骼、软骨和/或神经等的更新组织。

本发明会就如下的实施例作更为具体的说明，但并不因此而受限。实施例1

交联纤维蛋白的纤维蛋白羊毛状薄片，含有(相当少的)凝血酶。1.1制备

市售的组织粘合制剂，借蒸汽处理实现病毒失活并且冷冻干燥(Tissucol^，IMMUMO AG)，作为制备含有因子XIII和纤连蛋白的纤维蛋白原溶液的起始物。将制剂按制造商的说明溶解在抑肽酶的水溶液(3000KIU/ml)中并再以蒸馏水1∶4稀释，最终血纤维蛋白原的浓度约为20mg/ml。取20ml溶液与20ml的凝血酶-CaCl₂溶液(人类凝血酶，约10U/ml 5mM CaCl₂)迅速混合并倒入Petri盘中(ID＝8.4cm)，首先让它在室温下静置约30分钟并随后再于湿室中37℃温育约16小时。接着将厚度约为7mm的圆盘形凝块深度冷冻并且冷冻干燥。冷冻干燥形成(羊毛状薄片)的质地轻且多细孔，并且基本保持了冷冻干燥前的凝块形状。但是材料相对理想的应用而言仍旧太脆。为改善所需的松软度和柔韧度，将薄片在湿室中于室温下温育约3小时，从而得到松软、适应能力强并且吸收能力高的材料。1.2：分析，体外测试：

残余湿度：约15％

柔韧度：＞90°，在平均曲率半径等于半层厚的

条件下

纤维蛋白交联：

γ-链：100％

α-链：约80％

凝血酶含量： 1.4U/cm³，以1M NaCl萃取后测定

吸水容量：约为其自身重量的6倍

吸水速率：放在薄片表面上的水滴(50μl)在约

25秒内被全部吸收(在其它条件相同的情况下，薄片切割表面上的水一瞬间就被吸收，即小于5秒)。1.3效用：

在所谓的肾尖切除模型中，利用兔子测试1.1制制剂的粘合和止血效果。

为此，将以kedamin和赛拉嗪(在服用戊巴比妥后)麻醉的试验动物的肾暴露在外，以手术刀切除肾尖。形成血流强度均匀并且直径约为1～1.5cm的环形面。将测试制剂施用到血流面上，用手指在上面轻按30秒整，然后放开。观察制剂的粘合情况并记录完全止血所用的时间。以擦拭纱布收集可能的渗血，并且经氨水萃取测试材料和擦拭纱布后比色测定血液流失量。

以两个兔子对1.1制制剂进行测试。结果：

两种情况下制剂都能良好地粘接在强出血的表面上，并且一瞬间就能达到完全止血(少于30秒)。在1个小时的后期观察过程中没再流过血。

血液流失总量(完全为测试材料所吸收，再无其它渗血)分别为0.01和0.18ml。

相比而言，在通常以纱布止血并不经任何处理的情况下，此模型在流血时间3分钟后的血液流失约为5ml，而流血时间9分钟后约为27ml。

因此，同常用的方法相比，可明显看出1.1制制剂的效果大大地改进了。

Claims

1.一种贮存稳定的纤维蛋白海绵，其特征在于其残余湿度至少为3％，优选3～35％，特别是10～20％。

2.权利要求1的纤维蛋白海绵，其特征在于其包含凝血激活物或原激活物。

3.权利要求2的纤维蛋白海绵，其特征在于凝血激活物或原激活物选择自凝血酶、凝血酶原、激活的因子X、激活的凝血酶原复合体、FEIBA、钙离子及其混合物。

4.权利要求2或3的纤维蛋白海绵，其特征在于其包含1～300U/cm³的凝血酶，优选5～100U/cm³，最优选10～50U/cm³。

5.权利要求1～4任意一项的纤维蛋白海绵，其特征在于其包含稳定剂、防腐剂、杀菌剂、治疗剂、抗纤维蛋白溶解剂、生长因子、进一步的血浆蛋白、酶、抑制物或这些试剂的混合物。

6.权利要求1～5任意一项的纤维蛋白海绵，其特征在于其液体吸收容量至少为其自身重量的2倍，优选4倍。

7.权利要求1～6任意一项的纤维蛋白海绵，其特征在于其进行过病毒失活。

8.权利要求7的纤维蛋白海绵，其特征在于借助两个独立的病毒失活步骤达到病毒失活。

9.权利要求1～8任意一项的纤维蛋白海绵，其特征在于其不含能洗脱的血浆蛋白，特别是不含能洗脱的凝血酶。

10.权利要求1～9任意一项的纤维蛋白海绵，其特征在于其制备自病毒无染的起始物。

11.权利要求1～10任意一项的纤维蛋白海绵，其特征在于将其储存在无菌的包装中并且是即开即用型的。

12.权利要求1～11任意一项的纤维蛋白海绵，其特征在于其厚度为至少1mm，优选5～10mm。

13.权利要求1～12任意一项的纤维蛋白海绵，其特征在于其是多层的，优选至少有一层具备止血功能。

14.权利要求1～13任意一项的纤维蛋白海绵，其特征在于其比重为0.005～0.15g/cm³，优选0.01～0.09g/cm³，最优选0.02～0.05g/cm³。

15.一种伤口包覆用具，其特征在于其包含权利要求1～14任意一项的纤维蛋白海绵以及一种含凝血因子的组份。

16.权利要求15的用具，其特征在于凝血因子是纤维蛋白原、因子XIII、纤连蛋白、凝血酶或这些因子的混合物。

17.权利要求1～14任意一项的纤维蛋白海绵的制备方法，包含如下的步骤：

a)制备纤维蛋白凝块，是通过将优选含有因子XIII的纤维蛋白原溶液与优选含有Ca²⁺离子的凝血酶溶液混合，并在优选20～37℃的温度下温育足够长的时间以形成纤维蛋白凝块并可选让纤维蛋白交联，优选10分钟～24小时，

b)深度冷冻并冷冻干燥纤维蛋白凝块，和

c)将残余湿度调节为至少3％，优选3～35％，特别是10～20％，

d)可选将纤维蛋白海绵包装在适宜的容器中，特别是气和/或水封的容器。

18.权利要求17的方法，其特征在于纤维蛋白原溶液和/或凝血酶溶液中含有进一步的血浆蛋白和/或进一步的活性物质和/或添加剂。

19.权利要求17或18的方法，其特征在于纤维蛋白原溶液或其与凝血酶溶液的混合物在凝固开始前进行发泡。

20.权利要求17～19任意一项的方法，其特征在于以水或水溶液洗涤纤维蛋白凝块并且/或者再以含有凝血酶和/或进一步的血浆蛋白和/或进一步的活性物质的溶液温育。

21.权利要求17～20任意一项的方法，其特征在于进一步的血浆蛋白选择自纤维蛋白原、纤维蛋白溶解抑制物、纤溶酶原和清蛋白，进一步的活性物质选择自非血浆蛋白类或合成型纤维蛋白溶解抑制物之一、灭菌剂及生长激素。

22.权利要求17～21任意一项的方法，其特征在于添加剂或助剂选择自糖、糖醇、多元醇、氨基酸、表面活性剂、增塑剂和润湿剂，特别是甘油。

23.权利要求17～22任意一项的方法，其特征在于冷冻干燥后以含有权利要求20物质的溶液洗涤和/或温育并随后深度冷冻和再次冷冻干燥。

24.权利要求17～23任意一项的方法，其特征在于将冷冻干燥制得的制品切开。

25.权利要求17～24任意一项的方法，其特征在于从无菌的起始物进行制备，而无菌条件一直保持直至最终的制品。

26.权利要求1纤维蛋白海绵用于止血、粘合组织、细胞培养物和/或辅助伤口愈合的用途。

27.包含权利要求1纤维蛋白海绵的无菌型用具，用作细胞培养物的生物载体。