AT389516B - Neue oxiran-pseudooligosaccharide, verfahren zu ihrer herstellung, ihre verwendung und sie enthaltende pharmazeutische praeparate - Google Patents
Neue oxiran-pseudooligosaccharide, verfahren zu ihrer herstellung, ihre verwendung und sie enthaltende pharmazeutische praeparateInfo
- Publication number
- AT389516B AT389516B AT258887A AT258887A AT389516B AT 389516 B AT389516 B AT 389516B AT 258887 A AT258887 A AT 258887A AT 258887 A AT258887 A AT 258887A AT 389516 B AT389516 B AT 389516B
- Authority
- AT
- Austria
- Prior art keywords
- sep
- pseudooligosaccharides
- oxirane
- acids
- alpha
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 19
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 title claims abstract description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 7
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 title abstract 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 23
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims abstract description 18
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 claims abstract description 17
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 16
- 102100024295 Maltase-glucoamylase Human genes 0.000 claims abstract description 13
- 108010028144 alpha-Glucosidases Proteins 0.000 claims abstract description 13
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims description 50
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical compound C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 12
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 11
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 11
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 claims description 10
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 claims description 10
- 239000008107 starch Substances 0.000 claims description 10
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 claims description 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 9
- 229940077274 Alpha glucosidase inhibitor Drugs 0.000 claims description 7
- 239000003888 alpha glucosidase inhibitor Substances 0.000 claims description 7
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 7
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 7
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 6
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 6
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 claims description 5
- 241001467541 Streptomyces galbus Species 0.000 claims description 5
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims description 5
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 claims description 5
- 206010018429 Glucose tolerance impaired Diseases 0.000 claims description 4
- 208000001280 Prediabetic State Diseases 0.000 claims description 4
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 claims description 4
- 208000002925 dental caries Diseases 0.000 claims description 4
- 201000009104 prediabetes syndrome Diseases 0.000 claims description 4
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 3
- 235000019728 animal nutrition Nutrition 0.000 claims description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 abstract description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 15
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 14
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 14
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 10
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 10
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 9
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 9
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 102000004139 alpha-Amylases Human genes 0.000 description 8
- 108090000637 alpha-Amylases Proteins 0.000 description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 7
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 6
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 6
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 6
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 6
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229940024171 alpha-amylase Drugs 0.000 description 6
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 6
- 229960004793 sucrose Drugs 0.000 description 6
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 6
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 5
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 5
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 4
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010051210 beta-Fructofuranosidase Proteins 0.000 description 4
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 4
- 239000012458 free base Substances 0.000 description 4
- 235000011073 invertase Nutrition 0.000 description 4
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 4
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 3
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 3
- 150000001720 carbohydrates Chemical group 0.000 description 3
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 3
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 3
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 3
- 201000001421 hyperglycemia Diseases 0.000 description 3
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 3
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 3
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 3
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 3
- 230000001603 reducing effect Effects 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 3
- PKDBCJSWQUOKDO-UHFFFAOYSA-M 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC=CC=C1C(N=[N+]1C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=CC=C1 PKDBCJSWQUOKDO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- WDMUXYQIMRDWRC-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxy-3,4-dinitrobenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C([N+]([O-])=O)=C1O WDMUXYQIMRDWRC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 2
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000004593 Epoxy Substances 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- 239000003392 amylase inhibitor Substances 0.000 description 2
- 229940025131 amylases Drugs 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 2
- 238000010612 desalination reaction Methods 0.000 description 2
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 2
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 2
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 2
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 2
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 2
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 101710171801 Alpha-amylase inhibitor Proteins 0.000 description 1
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 1
- 229940122816 Amylase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 241000194108 Bacillus licheniformis Species 0.000 description 1
- AEMOLEFTQBMNLQ-AQKNRBDQSA-N D-glucopyranuronic acid Chemical compound OC1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-AQKNRBDQSA-N 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 108010001394 Disaccharidases Proteins 0.000 description 1
- IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N Galacturonsaeure Natural products O=CC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004366 Glucosidases Human genes 0.000 description 1
- 108010056771 Glucosidases Proteins 0.000 description 1
- 102000004157 Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000604 Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 206010060378 Hyperinsulinaemia Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 101000693006 Sus scrofa Pancreatic alpha-amylase Proteins 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 1
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 230000003178 anti-diabetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003472 antidiabetic agent Substances 0.000 description 1
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 1
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 1
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 229930182478 glucoside Natural products 0.000 description 1
- 125000002791 glucosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 1
- 229940097042 glucuronate Drugs 0.000 description 1
- 229940097043 glucuronic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000003451 hyperinsulinaemic effect Effects 0.000 description 1
- 201000008980 hyperinsulinism Diseases 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000003914 insulin secretion Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 230000005923 long-lasting effect Effects 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- YLGXILFCIXHCMC-JHGZEJCSSA-N methyl cellulose Chemical compound COC1C(OC)C(OC)C(COC)O[C@H]1O[C@H]1C(OC)C(OC)C(OC)OC1COC YLGXILFCIXHCMC-JHGZEJCSSA-N 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 150000002924 oxiranes Chemical class 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 108010009004 proteose-peptone Proteins 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- -1 sulfopropyl Chemical group 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H17/00—Compounds containing heterocyclic radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
- C07H17/04—Heterocyclic radicals containing only oxygen as ring hetero atoms
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Description
<Desc/Clms Page number 1>
Die Erfindung betrifft neue, biologisch aktive Oxiran-Pseudooligosaccharide und ihre physiologisch verträglichen Salze mit Säuren. Sie besitzen Alpha-Glukosidase, d. h. z. B. Alpha-Amylase- und Disaccharidase-, hemmende Eigenschaften. Die Erfindung betrifft ferner pharmazeutische Präparate, welche diese neuen OxiranPseudooligosaccharide oder ihre physiologisch verträglichen Salze mit Säuren enthalten, sowie die Verwendung dieser Verbindungen zur Hemmung von Alpha-Glukosidase, wobei die therapeutische Behandlung des Menschen ausgeschlossen ist.
In der Europäischen Patentanmeldung mit der Veröffentlichungs-Nr. 0 173 948 (EP-A2-0 173 948, entspr.
US-PS 4 632 917) werden Pseudooligosaccharide mit Alpha-Glukosidase-hemmender Wirkung und der Formel m
EMI1.1
in welcher I = 1 oder 2 m 1, 2 oder 3 n = eine ganze Zahl von 1 bis 20 bedeutet, beansprucht.
Bei den beschriebenen Verbindungen handelt es sich um potente Inhibitoren, im folgenden auch als Inhibitoren vom W-46 Typ bezeichnet, die aufgrund ihrer Wirkung auf Glukosid-Hydrolasen des Verdauungsextraktes als Resorptionsverzögerer von Glukose bei den Behandlungen von Diabetes, Adipositas u. a. eingesetzt werden können. Sie werden aus den Kulturflüssigkeit. en von Inhibitor W-46 bildenden Organismen wie z. B. Streptomyces galbus subsp. FH 1716 (DSM 3007) gewonnen. Man erhält nur nach einem aufwendigen Verfahren einheitliche Substanzen, vielfach gewinnt man eine Mischung von verschiedenen Inhibitoren, die sich in der Länge der Glukose-enthaltenden Ketten unterscheiden. Diese Uneinheitlichkeit ist für eine sichere Dosierung und Standardisierung hinderlich, sie ist bei der Anwendung des Präparats von Nachteil.
Es ist nun gefunden worden, das sich durch saure Hydrolyse oder enzymatische Glukoseabspaltung aus dem nativen Inhibitorgemisch entsprechend der EP-A2-0 173 948 neue, hochaktive Abbauprodukte gewinnen lassen, die mit geeigneten Methoden leicht voneinander getrennt und in reiner Form hergestellt werden können. Der vorliegende Erfindungsgegenstand ergibt sich nicht in naheliegender Weise aus der vorstehend genannten Europäischen Patentanmeldung, weil nicht zu erwarten war, dass die Spaltprodukte der bekannten Pseudooligosaccharide hochaktive Glukosidase-Inhibitoren sind.
Gegenstand der Erfindung sind daher neue Oxiran-Pseudooligosaccharide der Formel I
EMI1.2
worin z = Null oder 1 ist, sowie deren physiologisch verträgliche Salze mit Säuren. Die beiden unter die Formel I fallenden Inhibitoren weisen die folgenden Formeln Ia und Ib
<Desc/Clms Page number 2>
EMI2.1
auf. Das neue Pseudooligosaccharid der Formel Ia und seine Salze werden in den folgenden Ausführungen auch als Inhibitor W-46-H und das neue Pseudooligosaccharid der Formel Ib sowie seine Salze als Inhibitor W-46 P bezeichnet.
Die Erfindung hat ferner Verfahfen zur Herstellung der neuen Oxiran-Pseudooligosaccharide I und ihrer physiologisch verträglichen Salze mit Säuren, pharmazeutische Präparate, die diese Verbindungen enthalten, und die Verwendung dieser Verbindungen zur Hemmung von Alpha-Glukosidase, wobei die therapeutische Behandlung des Menschen ausgeschlossen ist, zur Hemmung von Alpha-Glukosidase in der Tiermedizin, zur Hemmung von Alpha-Glukosidase in der Tieremährung zur Hemmung von Alpha-Glukosidase in der Biotechnologie der Stärke, zur Herstellung von pharmazeutischen Präparaten für die Behandlung von Diabetes, Prädiabetes und Adipositas, sowie bei der Herstellung von Diagnostika oder Reagenzien gegen Karies zum Gegenstand.
Das erfmdungsgemässe Verfahren zur Herstellung der neuen Oxiran-Pseudooligosaecharide und ihrer physiologisch verträglichen Salze mit Säuren ist dadurch gekennzeichnet, dass man a) von einem Alpha-Glukosidaseinhibitor der Formel 11
EMI2.2
<Desc/Clms Page number 3>
in welcher m = 2 oder 3 n = eine ganze Zahl von 1 bis 20 bedeutet, oder von einem Gemisch dieser Inhibitoren unter Bildung einer Verbindung der Formel I durch saure Hydrolyse oder durch Anwendung von Glukoid-spaltenden enzymen Zucker abspaltet, oder b) den Pseudooligosaccaride der Formel I erzeugenden Mikroorganismus Streptomyces galbus subsp.
FH 1716 (DSM 3007) in einem Fermentationsmedium in geeignetem Submersverfahren kultiviert, die Pseudooligosaccaride aus dem Mycel oder dem Kultufiltrat in an sich bekannter Weise isoliert und die erhaltenen Verbindungen der Fomel I gegebenenfalls in ein physiologisch verträgliches Salz überführt.
Der bei der Durchführung des erfindungsgemässen Verfahrens eingesetzte Stamm Streptomyces galbus subsp.
FH 1716 ist bei der Deutschen Sammlung von Mikroorganismen (DMS) unter der Registrier-Nr. DSM 3007 hinterlegt und in EP-A2-0 173 948 beschrieben. Es können aber auch die Varianten und Mutanten dieses Stammes zur Gewinnung der neuen Oxiran-Pseudooligosaccharide und ihrer Salze mit Säuren eingesetzt werden.
Inhibitoren der Formel 11 und Verfahren zu ihrer Gewinnung sind in EP-A2-0 173 948 beschrieben. Durch Abspaltung von Zucker wie z. B. Glukose entstehen nach dem erfindungsgemässen Verfahren an der Saccharidkette verkürzte, einheitliche Inhibitoren.
Die neuen Oxiran-Pseudooligosaccharide und ihre Salze mit Säuren werden vorzugsweise nach Methode a) gewonnen.
Bei der Gewinnung geht man zwecksmässigerweise wie folgt vor
Als Ausgangsmaterial dienen Inhibitoren der Formel 11 (vergl. EP-A2-0 173 948) entweder in angereicherter oder in chemisch gereinigter Form. Es können aber auch die rohen, ungereinigten Fermentationslösungen von W- 46 bildenden Organismen verwendet werden. Die Abspaltung der verschieden langen Glukoseketten der Inhibitoren erfolgt z. B. durch saure Hydrolyse mit Schwefelsäure, Salzsäure, Trifluoressigsäure u. a. im Temperaturbreich 0 bis 120 C, vorzugsweise 80-105 C. Die Hydrolysedauer beträgt in Abhängigkeit von der Temperatur einige Minuten bis mehrere Tage. Vorzugsweise arbeitet man im Bereich von 20 - 200 Minuten.
Eine andere Möglichkeit zur Abspaltung von Neutralzuckem wie z. B. Maltose und Glukose von den Inhibitoren des Gemisches gemäss EP-A2-0 173 948 besteht in der Anwendung von Alpha-Glukosid-spaltenden Enzymen. Es ist gefunden worden, dass im Gegensatz zu Warmblüterenzymen einige mikrobielle AlphaAmylasen sehr wohl in der Lage sind, die Inhibitoren vom W-46 Typ wie z. B. W-46 A, W-46 B oder W-46 C u. a. mehr (vergl. EP-A2-0 173 948) durch Neutralzuckerabspaltung zu verkürzen und damit zu vereinheitlichen.
Solche Enzyme sind z. B. die Alpha-Amylase aus Bacillus subtilis oder Bacillus licheniformis (beide besonders geeignet für die Gewinnung von W-46 H), es können aber auch Amylasen aus anderen geeigneten Mikroorganismen verwendet werden. Bevorzugt eingesetzt werden Alpha-Amylasen aus thermophilen oder thermotolerablen Mikroorganismen, deren Enzyme auch ein höheres Temperaturoptimum haben. Solche Amylasen führen bei den erhöhten Temperaturen zu höheren Reaktionsraten, d. h. zu vorteilhaften, kürzeren Reaktionszeiten. Mit Hilfe solcher geeigneter Enzyme lassen sich 0. 01 bis 20, vorzugsweise 0. 5-5 prozentiger Inhibitorlösungen in guter Ausbeute umsetzen. Der pH-Wert und die Temperatur werden hierbei in Abhängigkeit von den Enzymeigenschaften gewählt. Gearbeitet werden kann zwischen 0 und 100 C, bevorzugt wird der Bereich zwischen 30 und 80 C.
Durch Steuerung der Permentationszeit bei der mikrobiellen Herstellung (gemäss Verfahren b) oder Variation der Glukoseabspaltung oder der Hydrolysezeit (gemäss Verfahren a) kann entweder der Inhibitor W-46 H oder W-46 P bevorzugt gewonnen werden. Aus den Fermentations- oder Reaktionslösungen können die Inhibitoren durch an sich bekannte Verfahren isoliert und gereinigt werden.
Hierzu eignet sich eine grosse Zahl von Verfahren, wie beispielsweise Chromatographie an Ionenaustauschern, Molekularsieben oder Adsorptionsharzen, darüberhinaus Lösungsmittelfällungen, Ultrafiltration, Craig-Verteilung u. a.
Ein bevorzugtes Verfahren zur Isolierung und Reinigung der Inhibitoren W-46 H bzw. P besteht darin, dass man die Inhibitoren aus dem-z. B. wie vorstehend beschrieben-behandelten Kulturfiltrat oder der Reaktionslösung an ein geeignetes Harz z. B. auf Polystyrolbasis adsorbiert, dieses beladene Harz abtrennt und die genannten Inhibitoren durch Elution mit geeigneten Pufferlösungen wie z. B. Phosphat- oder Na-acetatPufferlösung oder mit ggfs. wasserhaltigen organischen Lösungsmitteln, wie z. B. Methanol, Ethanol, Aceton, vorzugsweise aber mit wässrigem Isopropanol, isoliert. Die inhibitorhaltigen Eluate konzentriert man durch Ultrafiltration in an sich bekannter Weise, wobei gleichzeitig eine Entsalzung vorgenommen wird. Die ionenarme wässrige Lösung der erwähnten Inhibitoren wird dann auf einer Ionenaustauscher-Säule chromatographisch in an sich bekannter Weise aufgetrennt.
Vorzugsweise verwendet man stark oder schwach saure Kationenaustauscher z. B. auf Styrol-Divinylbenzol-Copolymerisatbasis, welche als funktionelle Gruppen S03H oder-COOH Gruppen tragen (RDowex 50 W, RAmberlite CG 120) oder auf Basis modifizierter
EMI3.1
käufliche Kationenaustauscher. Der letzte Schritt der Isolierung ist die Anwendung eines Molekularsiebes, z. B. auf Polyacrylamid-Gel-Basis (RBiogel P-6) oder auf Basis modifizierter Cellulose (RSephadex). Die resultierenden wässrigen Lösungen des reinen Materials werden dann z. B. durch Lyophilisierung getrocknet.
Die reinen Inhibitoren W-46 H und W-46 P sind farblose, amorphe Pseudooligosaccharide. Sie enthalten
<Desc/Clms Page number 4>
Stickstoff und haben schwach basischen Charakter. So wandern die Inhibitoren W-46 H und P in der Hochspannungselektrophorse in sauren Puffern, wie z. B. wässrigen Ameisensäure/Essigsäure Mischungen als Kationen in Richtung Kathode. Die erfindungsmässigen Substanzen besitzen reduzierende Eigenschaften, die, wie in der Zuckerchemie üblich, z. B. mit Triphenyltetrazoliumchlorid (TCC) nachgewiesen werden können.
Die durch FAB-Massenspektrometrie bestimmten Molekulargewichte der reinen Verbindungen betragen : 981 m/z (M + H+) entsprechend der Summenformel C38H64N2027 des Inhibitors W-46 H (freie Base), bzw.
819 m/z (M + W) entsprechend der Summenformel C32H54N2022 des Inhibitors W-46 P (freie Base). Durch spektroskopische, insbesondere kernresonanzspektroskopische Untersuchungen wurden den Verbindungen W-46 H die Formel Ia und W-46 P die Formel Ib zugeordnet.
In der Literatur sind bereits mehrere Alpha-Glukosidaseinhibitoren beschrieben worden, jedoch nur die von H.
Takeda et al. (Japan KOKAI 83-172. 400 (11. Oktober 1983)) beschriebene Verbindungsreihe : NS 1 bis NS 17 enthält Epoxydringe (Oxirane) in den Strukturformeln. Die Epoxid-Strukturen kommen jeweils nur einmal vor.
Durch die Formeln Ia und Ib, in denen die wirksamen Epoxyd-pseudoaminozucker-Strukturen zweifach vorhanden sind, unterscheiden sich die erfindungsgemässen Verbindungen von den Inhibitoren der Reihe NS 1 bis NS 17. Gegenüber den Pseudooligosacchariden mit Alpha-Glukosidase-hemmender Wirkung gemäss EP-A2-0 173 948 sind W-46 H und W-46 P durch die verkürzten Saccharidketten (geringeres Molekulargewicht) unterscheidbar.
Somit liegen hier neue Substanzen vor, die eine einheitliche Struktur aufweisen.
EMI4.1
104Amylasetest
Eine Amylase-Inhibitoreinheit (AIE) ist definiert als die Inhibitormenge, die unter den Testbedingungen zwei Amylase-Einheiten (AE) zu 50 % zu hemmen vermag. Eine Amylase-Einheit ist nach internationaler Übereinkunft die Enzymmenge, die in einer Minute 1 J. 1 Äquivalent glucosidischer Bindungen in der Stärke spaltet. Die J. 1Val gespaltener glucosidischer Bindungen werden als J. 1Val reduzierender Zucker photomerisch mit Dinitrosalizylsäure bestimmt. Die Angaben sind als J. 1Mole Maltose berechnet, die anhand einer MaltoseEichgeraden ermittelt werden.
Die Tests werden folgendermassen durchgeführt :
Alpha-Amylase aus Schweinepankreas und die zu testenden Lösungen werden gemeinsam in 1, 0 ml 20 mM Phosphatpuffer, pH 6, 9 + 10 mM NaCl 10-20 min. bei 37 C vorinkubiert. Die enzymatische Reaktion wird durch Zugabe von 1, 0 ml löslicher Stärke (0, 25 % in dem angegebenen Puffer) nach Zulkowski gestartet. Nach genau 10 min. wird die Reaktion mit 2, 0 ml Dinitrosalizylsäure-Farbreagenz (nach Boehringer Mannheim : Biochemica-Information II) abgestoppt und zur Farbentwicklung 5 min. im siedenden Wasserbad erhitzt. Nach dem Abkühlen wird die Extinktion bei 546 nm gegen den Reagentienleerwert gemessen. Die 50 %ige Hemmung wird im Vergleich zur ungehemmten Enzymreaktion durch Einsatz verschiedener Inhibitormengen graphisch mittels der Wahrscheinlichkeitsauftragung bestimmt.
Saccharase-Test
Eine Saccharase-Inhibitoreinheit (SIE) ist definiert als die Inhibitormenge, die unter den Testbedingungen zwei Saccharase-Einheiten (SE) zu 50 % zu hemmen vermag. Eine SE ist nach internationaler Übereinkunft die Enzymmenge, die in einer Minute 1 p. Äquivalent glycosidischer Bindungen der Saccharose spaltet. Die J. 1 Val
EMI4.2
Glukose Eichgeraden ermittelt werden.
Die Tests wurden nach H. U. Bergmeyer, beschrieben in "Methods of Enzymatic Analysis", 3rd edition, Verlag Chemie, Weinheim, 1984, Seite 96 - 103, durchgeführt.
Die Eigenschaften der erfmdungsgemässen Inhibitoren sind im Hinblick auf die Anwendung als Therapeutikum gegen Diabetes und Prädiabetes sowie Adipositas und Unterstützung von Diät interessant. Aufgrund ihrer Eigenschaften sind sie auch bei der Herstellung von Reagenzien für diagnostische Zwecke wertvoll. Die Erfindung betrifft daher auch Arzneimittel, insbesondere solche zur Behandlung der genannten Krankheiten, sowie die Verwendung als Arzneimittel, insbesondere als Antidiabetikum, sowie bei der Herstellung von Reagenzien.
Stärke- und rohrzuckerhaltige Nahrungs- und Genussmittel führen bei Tier und Mensch zu einem Anstieg des Blutzuckers und dadurch auch zu einer vermehrten Insulinsekretion des Pankreas. Die Hyperglykämie kommt durch die Aufspaltung der Stärke und des Rohrzuckers im Verdauungstrakt unter Einwirkung von Amylase und Saccharase zu Glukose zustande.
Bei Diabetikern ist die Hyperglykämie besonders ausgeprägt und lang anhaltend.
<Desc/Clms Page number 5>
Die alimentäre Hyperglykämie sowie die Hyperinsulinämie nach Stärke- und Rohrzuckeraufnahme lässt sich durch die erfindungsgemässen Inhibitoren W-46 H und W-46 P vermindern. Diese Wirkung ist dosisabhängig. Die erfindungsgemässen Alpha-Glukosidase-inhibitoren lassen sich daher als Therapeutikum einsetzen bei Diabetes, Prädiabetes und Adipositas sowie zur Unterstützung von Diät. Zu diesem Zweck empfiehlt sich eine Verabreicherung, insbesondere zu den Mahlzeiten. Die Dosierung, die sich nach dem Gewicht des Patienten sowie dem individuellen Bedarf ausrichten soll, beträgt 5 - 500 mg pro Dosis, die zweckmässig zu jeder Mahlzeit genommen wird. Die Dosierung kann jedoch in begründeten Einzelfällen auch darüber oder darunter liegen.
Die erfindungsgemässen Alpha-Glukosidase-Inhibitoren eignen sich insbesondere zur oralen Verabreichung.
Sie können als Substanz per se, als ihre physiologisch verträglichen Salze mit Säuren, aber auch in Form einer pharmazeutischen Zubereitung unter Verwendung der üblichen Hilfs- und Trägerstoffe angewandt werden. Auch eine kombinierte Anwendung mit anderen Arzneimitteln, wie blutzuckersenkenden oeer lipidsenkenden Substanzen, kann von Vorteil sein. Da höhermolekulare Saccharide als solche nicht oder nicht nennenswert aus dem Verdauungstrakt resorbiert werden, sind von den erfindungsgemässen Substanzen keine toxikologisch bedenklichen Nebenwirkungen zu erwarten.
Dementsprechend konnten nach oraler Gabe auch hoher Dosen der Inhibitoren W-46 H und P an Versuchstieren keine auffälligen Symptome erkannt werden.
Zur Prüfung der pharmakologischen Wirkung der Alpha-Glukosidase-Inhibitoren erhielten nüchterne, männliche Wistar-Ratten mit einem Gewicht zwischen 200 und 250 g einen erfindungsgemässen Hemmstoff W-46 H oder W-46 P zusammen mit 2 g Stärke bzw. Rohrzucker pro kg Körpergewicht als Suspension in @Tylose (Methyl-hgdroxyethyl-cellulose) oral verabreicht. Durch Bestimmung von Blutzuckerkonzentrationen in Blutproben, die vor, während und nach p. o. Applikation der Alpha-Glukosidase-Inhibitoren entnommen worden sind, wurde die Wirksamkeit der Präparate bewiesen.
In diesen Untersuchungen wurden für den Inhibitor W-46 H die in den Tabellen 1 (Wirkung auf Blutglukosekonzentration der Stärke-belasteten Ratte) und 2 (Wirkung auf die Blutglukosekonzentration der
EMI5.1
EMI5.2
<tb>
<tb> Zeit <SEP> in <SEP> Blutglukose <SEP> in <SEP> mmo <SEP> !/l <SEP> ( <SEP> ? <SEP> SEM, <SEP> n <SEP> = <SEP> 7) <SEP>
<tb> Stunden <SEP> p. <SEP> o. <SEP> Dosis <SEP> p. <SEP> o. <SEP> Dosis <SEP> Kontrolle
<tb> nach <SEP> der
<tb> Behandlung <SEP> 0. <SEP> 3 <SEP> mg/kg <SEP> 1.0 <SEP> mg/kg
<tb> 0 <SEP> 3. <SEP> 770. <SEP> 09 <SEP> 3. <SEP> 93 <SEP> 0. <SEP> 10 <SEP> 3. <SEP> 790. <SEP> 14 <SEP>
<tb> 0. <SEP> 5 <SEP> 5.53 <SEP> ¯ <SEP> 0.17 <SEP> 5.04 <SEP> ¯ <SEP> 0.08 <SEP> 5.56 <SEP> ¯ <SEP> 0.16
<tb> 1 <SEP> 5. <SEP> 590. <SEP> 06 <SEP> 5. <SEP> 070. <SEP> 09 <SEP> 6. <SEP> 360. <SEP> 17 <SEP>
<tb> 2 <SEP> 5. <SEP> 670. <SEP> 13 <SEP> 4.
<SEP> 9910. <SEP> 14 <SEP> 5. <SEP> 180. <SEP> 17 <SEP>
<tb> 3 <SEP> 4. <SEP> 860. <SEP> 18 <SEP> 4. <SEP> 570. <SEP> 10 <SEP> 4. <SEP> 9410. <SEP> 16 <SEP>
<tb> 5 <SEP> 4. <SEP> 39 <SEP> ¯ <SEP> 0.13 <SEP> 4.13 <SEP> ¯ <SEP> 0.08 <SEP> 4.19 <SEP> ¯ <SEP> 0.14
<tb>
Tabelle 2
EMI5.3
<tb>
<tb> Zeit <SEP> Blutglukose <SEP> in <SEP> mmoi/i <SEP> (X <SEP> i <SEP> SEM, <SEP> n <SEP> = <SEP> 7)
<tb> in <SEP> Minuten <SEP> p. <SEP> o. <SEP> Dosis <SEP> p. <SEP> o. <SEP> Dosis <SEP> p. <SEP> o. <SEP> Dosis <SEP> Kontrolle
<tb> nach <SEP> der
<tb> Behandlung <SEP> 1 <SEP> mg/kg3 <SEP> mg/kgIQmg/kg <SEP>
<tb> 0 <SEP> 3.99 <SEP> ¯ <SEP> 0.10 <SEP> 3.94 <SEP> ¯ <SEP> 0.14 <SEP> 4.01 <SEP> ¯ <SEP> 0.15 <SEP> 4.08 <SEP> ¯ <SEP> 0.12
<tb> 15 <SEP> 6.07 <SEP> ¯ <SEP> 0.28 <SEP> 5.71¯0.23 <SEP> 5.06¯0.20 <SEP> 6.65¯0.40
<tb> 30 <SEP> 6. <SEP> 01 <SEP> 0. <SEP> 22 <SEP> 5.
<SEP> 53 <SEP> 0. <SEP> 19 <SEP> 5. <SEP> 11 <SEP> 0. <SEP> 10 <SEP> 6. <SEP> 630. <SEP> 10 <SEP>
<tb> 60 <SEP> 6. <SEP> 34¯0.14 <SEP> 5.47¯0.15 <SEP> 4.82¯0.09 <SEP> 7.18¯0.30
<tb> 120 <SEP> 5. <SEP> 45¯0.13 <SEP> 5.20¯0.16 <SEP> 4.50¯0.11 <SEP> 5.50¯0.09
<tb> 240 <SEP> 4. <SEP> 57¯0.07 <SEP> 4.83¯0.15 <SEP> 4.29¯0.22 <SEP> 4.90¯0.07
<tb>
Aus den in Tabelle I angegebenen Werten errechnet sich ein Grenzwert von 0, 27 mg/kg Ratte und aus den in Tabelle 2 angegebenen Werten ein Grenzwert von 1, 29 mg/kg Ratte (unter Grenzwert der Wirksubstanz wird diejenige Menge pro kg Versuchstier verstanden, bei deren Verabreichung nach einer Stunde noch eine deutliche Wirkung festzustellen ist).
Neben der Blutglukoseregulation kann man die erfindungsgemässen Oligosaccharide auch zur Hemmung der Speichel Alpha-Amylase verwenden. Dieses Enzym bewirkt die Verdauung der Stärke im Mund und der so gebildete Zucker fördert den Kariesbefall der Zähne. Die erfindungsgemässen Verbindungen können daher zur
<Desc/Clms Page number 6>
Verhütung oder Verminderung der Ausbildung von Karies angewandt werden.
Weiterhin können sie als biochemische Reagenzien sowie als diagnostische Mittel verwendet werden.
Beispiel l : 5, 0 g Inhibitorgemisch mit den Komponenten W-46 A, W-46 B und W-46 C, gewonnen entsprechend den nachstehenden Vorschriften A und B werden in 80 ml 2 N Trifluoressigsäure gelöst und während 10 Minuten unter Sauerstoffausschluss auf 100 C erhitzt. Nach Ablauf dieser Zeit wird das Reaktionsgefäss unter Rühren rasch abgekühlt und die wässrige Trifluoressigsäure im Vakuum bis zur Trockene abdestilliert.
Zur Gewinnung der verkürzten Inhibitoren wird der feste Destillationsrückstand in destilliertem Wasser gelöst und auf eine, mit dem Ionenaustauscher SP-SephadexR C-25 gefüllte und auf pH 3 äquilibrierte Säule von 3 l Inhalt aufgetragen. Die Elution der Wirksubstanz erfolgt durch Anlegen eines ansteigenden 50 mM NaCI- Gradienten. Während die Kochsalzkonzentration mit einer Leitfähigkeit von 3. 0 mS den Inhibitor W-46 H von der Säule löst, geschieht die Elution der Verbindung W-46 P bei einer Leitfähigkeit von 4 mS. Die getrennt gesammelten Eluate werden zur Entsalzung durch Ultrafiltration bei > 35 bar konzentriert und anschliessend gefriergetrocknet. Es resultieren 0, 7 g des Inhibitors W-46 H und 1. 6 g des Inibitors W-46 P (jeweils als Hydrochloride).
Vorschrift A :
Zur Gewinnung von W-46 erfolgte die Impfstoffanzucht (Anzucht des Mikroorganismus) - wie in der mikrobiologischen Praxis üblich - aus einer gefriergetrockneten Dauerform des Organismus Streptomyces galbus, PH 1716 DSM 3007, über Einzelkoloniepassage und Schrägröhrchen. Die für die Fermentation notwendige Massenproduktion an Sporen wurde ebenfalls auf festem Nährboden in Roux-Flaschen durchgeführt.
Agarmedium für Platte. Schrägröhrchen und Roux-Flasche :
Dextrin 15, 0 g/l
Rohrzucker 3, 0 g/l
Fleischextrakt 1, 0 g/l
Hefeextrakt 2, 0 g/l
EMI6.1
5 g/lpH-Wert 7, 3
Sterilisation bei 1200C 20 min.
Inkubation bei 300C 9 Tage.
Das beimpfte Röhrchen und die Roux-Flasche wurden 7 Tage bei 300C bebrütet und danach bei +4 C gehalten. Die Sporen wurden mit 10 ml sterilisiertem Aqua dest. oder physiologischer Kochsalzlösung von dem festen Nährboden abgeschwemmt. 5 ml der Suspension dienten zur Beimpfung eines 2000 ml Erlenmeyerkolbens, der mit 500 ml sterilisierter wässriger Nährlösung mit einem pH-Wert von 7, 7 und folgender Zusammensetzung beschickt war (Angaben in Gew.-%).
1, 00 % Glukose
0, 40 % Caseinpepton
0, 40 % Fleischextrakt
0, 25 % NaCl
0, 05 % Hefeextrakt
0, 05 % Leberpulver.
Der Kolben wurde bei 220 Upm 48 Stunden bei +30 C auf einer Schüttelmaschine geschüttelt. Danach wurde diese Vorkultur in ein 121-Fermenter überführt, der mit 9 I sterilisierter wässriger Nährlösung beschickt war und einen pH-Wert von 7, 4 hatte. Die Zusammensetzung der Nährlösung für die Hauptkultur war folgende (Angaben in Gewichts-%).
2, 0 % Fleischextrakt
2, 0 % Malzextrakt
1, 0 % Calciumcarbonat
0, 1 % Antischaummittel, ad 100 % Wasser.
<Desc/Clms Page number 7>
Die Hauptkultur wurde bei 28 C, 2 Tage mit 850 Upm gerührt, die Luftzufuhr betrug 4201 pro Stunde. Nach 18,24, 30,36, 40,44 und 48 Stunden wurde der Gehalt an Alpha-Amylaseinhibitor gemäss der Vorschrift von R.
Bender et al., Anal. Biochem, 131, 307-312 (1984) bestimmt. Der Stamm Str. galbus FH 1716 lieferte unter den beschriebenen Versuchs-und Kulturbedingungen durchschnittlich 5 x 10"AlE/ml bei einem End-pH von 9, 0.
Vorschrift B :
8 I Fermentationslösung gemäss Vorschrift A wurden mit Hilfe einer Zentrifuge von der Zellmasse befreit und die klare flüssige Phase wurde auf pH 9, 5 eingestellt. Anschliessend trug man die Lösung auf eine 0, 8 I Polystyrol-Adsorptionsharz (Diaion@ HP-20) beinhaltende Säule auf, wusch mit 1, 5 I Wasser nach und eluierte mit Wasser, dem steigende Mengen Isopropanol hinzugefügt worden war. Die Mischung, die 10 % Isopropanol enthielt, löste den Inhibitor W-46 von der Säule. Diese aktiven Eluate (1, 2 I) wurden durch Ultrafiltration konzentriert und unter Wasserzugabe sowie weitere Ultrafiltration solange entsalzt, bis das Retenat keine nachweisbaren Salze mehr enthielt.
Das resultierende Konzentrat (0, 2 I) trennte man auf Sulfopropyl modif.
Cellulose (SP-Sephadex@, die in die Säureform (H+-Form) überführt war. Durch Anlegen eines Ammoniumacetatgradienten, pH 5 (0-0, 5 molar), wurden die die Alpha-Amylase-hemmende Aktivität enthaltenden Fraktionen eluiert. Die entsprechenden Fraktionen wurden in Ultrafiltrationszellen (OAmicon) konzentriert und entsalzt. Die Endreinigung geschah an Polyacrylamid-Gel (BiogelO P-6) mit reinem Wasser als Laufmittel. Die W-46-haltigen Fraktionen dieser Säule wurden gesammelt und gefriergetrocknet. Es resultierten 1, 5 g einen hellbeigen amorphen Pulvers mit einer Alpha-Amylase-hemmenden Wirksamkeit von 4 x 104 AIE pro mg Substanz.
Beispiele
65 g Inhibitorgemisch, gewonnen nach Beispiel 1, werden in 6, 51 Wasser gelöst und der pH-Wert wird auf 7. 5 eingestellt. Anschliessend wird 1 g Alpha-Amylase aus Bacillus subtilis 130 U/mg hinzugegeben und 18 Stunden bei 60 C gerührt. Während dieser Zeit achtet man darauf, dass der pH-Wert konstant bleibt. Nach Ablauf der Reaktionszeit wird die resultierende Lösung bei Raumtemperatur über 4 I 20 Polystyrol-Adsorptionsharz (@Diaion HP-20) filtriert. Während der sogenannte Durchlauf die unerwünschten Verunreinigungen, Neutralzucker und Salze enthält, gewinnt man den Inhibitor W-46 H durch Waschen der Säule mit 20110 % iger Isopropanollösung. Die Trocknung führt zum gewünschten Inhibitor.
Sollte an dieser Stelle die Verbindung W-46 H nicht rein genug anfallen, so kann eine Weiterreinigung an Ionenaustauschern erfolgen, wie in Beispiel 1 beschrieben.
Beispiel 3:
10 g des Inhibitors W-46 H, gewonnen nach Beispiel 1, werden in 200 ml Wasser gelöst und über 200 ml Anionenaustauscher IRA-68, OH-Form, welches in eine Glassäule gefüllt wird, filtriert. Anschliessend wird mit 200 ml Wasser nachgewaschen. Die Eluate werden gereinigt. Sie enthalten den Inhibitor in Form der freien Base.
Die Lösung wird nun in 4 gleiche Teile geteilt. Je ein viertel wird mit Glukuronsäure bzw. mit Schwefelsäure bzw. mit Salzsäure auf pH 6 gestellt und gefriergetrocknet ebenso wie das 4. Viertel, welches nicht neutralisiert wird. Die letzte Lösung ergibt nach der Trocknung 2,3 g W-46 H (freie Base) mit 4 x 104 AlE/mg und 1 x 104
EMI7.1
62. 6 g W-46 P-Glucuronat, 2. 3 g W-46 P-Sulfat, 2. 3gW-46P-Chlorid.
Claims (1)
- PATENTANSPRÜCHE 1. Neue Oxiran-Pseudooligosaccharide der Formel I EMI8.1 worin z = Null oder 1 ist, sowie deren physiologisch verträgliche Salze mit Säuren.2. Verfahren zur Herstellung der Oxiran-Pseudooligosaccharide gemäss Anspruch l, dadurch gekennzeichnet, dass man a) von einem Alpha-Glukosidaseinhibitor der Formel II EMI8.2 in welcher m = 2 oder 3 n = eine ganze Zahl von 1 bis 20 bedeutet, oder von einem Gemisch dieser Inhibitoren unter Bildung einer Verbindung der Formel I durch saure Hydrolyse oder durch Anwendung von Glukosid-spaltenden Enzymen Zucker abspaltet, oder <Desc/Clms Page number 9> b) den Pseudooligosaccharide der Formel I erzeugenden Mikroorganismus Streptomyces galbus subsp.FH 1716 (DSM 3007) in einem Fermentationsmedium in geeignetem Submersverfahren kultiviert, die Pseudooligosaccharide aus dem Mycel oder dem Kulturfiltrat in an sich bekannter Weise isoliert und die erhaltenen Verbindungen der Formel I gegebenenfalls in ein physiologisch verträgliches Salz überführt.3. Pharmazeutisches Präparat, gekennzeichnet durch einen Gehalt an einem Oxiran-Pseudooligosaccharid gemäss Anspruch 1, oder einem seiner physiologisch verträglichen Salze mit Säuren.4. Verwendung von Oxiran-Pseudooligosacchariden der allgemeinen Formel I sowie ihren physiologisch verträglichen Salzen mit Säuren zur Hemmung von Alpha-Glukosidase, wobei die therapeutische Behandlung des Menschen ausgeschlossen ist.5. Verwendung von Oxiran-Pseudooligosacchariden der allgemeinen Formel I sowie ihren physiologisch verträglichen Salzen mit Säuren zur Hemmung von Alpha-Glukosidase in der Tiermedizin.6. Verwendung von Oxiran-Pseudooligosacchariden der allgemeinen Formel I sowie ihren physiologisch verträglichen Salzen mit Säuren zur Hemmung von Alpha-Glukosidase in der Tieremährung.7. Verwendung von Oxiran-Pseudooligosacchariden der allgemeinen Formel I sowie ihren physiologisch verträglichen Salzen mit Säuren zur Hemmung von Alpha-Glukosidase in der Biotechnologie der Stärke.8. Verwendung von Oxiran-Pseudooligosacchariden der allgemeinen Formel I sowie ihren physiologisch verträglichen Salzen mit Säuren zur Herstellung von pharmazeutischen Präparaten für die Behandlung von Diabetes, Prädiabetes und Adipositas.9. Verwendung von Oxiran-Pseudooligosacchariden der allgemeinen Formel I sowie ihren physiologisch verträglichen Salzen mit Säuren bei der Herstellung von Diagnostika oder Reagenzien gegen Karies.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| AT258887A AT389516B (de) | 1987-10-08 | 1987-10-08 | Neue oxiran-pseudooligosaccharide, verfahren zu ihrer herstellung, ihre verwendung und sie enthaltende pharmazeutische praeparate |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| AT258887A AT389516B (de) | 1987-10-08 | 1987-10-08 | Neue oxiran-pseudooligosaccharide, verfahren zu ihrer herstellung, ihre verwendung und sie enthaltende pharmazeutische praeparate |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ATA258887A ATA258887A (de) | 1989-05-15 |
| AT389516B true AT389516B (de) | 1989-12-27 |
Family
ID=3536986
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| AT258887A AT389516B (de) | 1987-10-08 | 1987-10-08 | Neue oxiran-pseudooligosaccharide, verfahren zu ihrer herstellung, ihre verwendung und sie enthaltende pharmazeutische praeparate |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| AT (1) | AT389516B (de) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0173948A2 (de) * | 1984-09-04 | 1986-03-12 | Hoechst Aktiengesellschaft | Neue Pseudooligosaccharide mit alpha-Glukosidase-hemmender Wirkung, Verfahren zur deren Herstellung, deren Verwendung und pharmazeutische Präparate |
| US4618602A (en) * | 1984-09-04 | 1986-10-21 | Hoechst Aktiengesellschaft | Amine containing pseudooligosaccharide, pharmaceutical composition and method of use |
-
1987
- 1987-10-08 AT AT258887A patent/AT389516B/de not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0173948A2 (de) * | 1984-09-04 | 1986-03-12 | Hoechst Aktiengesellschaft | Neue Pseudooligosaccharide mit alpha-Glukosidase-hemmender Wirkung, Verfahren zur deren Herstellung, deren Verwendung und pharmazeutische Präparate |
| US4618602A (en) * | 1984-09-04 | 1986-10-21 | Hoechst Aktiengesellschaft | Amine containing pseudooligosaccharide, pharmaceutical composition and method of use |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ATA258887A (de) | 1989-05-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0151246B1 (de) | Neue Polypeptide mit alpha-Amylase-hemmender Wirkung, Verfahren zu deren Herstellung, deren Verwendung und pharmazeutische Präparate | |
| EP0049847B1 (de) | Alpha-Amylaseinaktivator, Verfahren zu seiner Herstellung, Mittel auf Basis dieses Inaktivators sowie dieser Inaktivator zur Regulierung des Blutzuckerspiegels | |
| EP0003616B1 (de) | Neue Aminozucker-Derivate, ihre Herstellung und Amylase-hemmende Mittel | |
| EP0366060B1 (de) | Glykosidase-Inhibitor Salbostatin, Verfahren zu seiner Herstellung und seine Verwendung | |
| DE2347782C3 (de) | Aminozuckerderivate, Verfahren zu ihrer Herstellung sowie diese Verbindungen enthaltende Arzneimittel | |
| DE3436137C2 (de) | Antibiotika BBM-2478A und BBM-2478B, Verfahren zu deren Herstellung und diese enthaltende pharmazeutische Mittel | |
| DE3035193C2 (de) | Antibiotikum SF-1130-x&darr;3&darr;, Verfahren zu dessen Herstellung und dieses Antibiotikum enthaltende Arzneimittel | |
| DE2701890A1 (de) | Alpha-amylase-inhibitor aus einem streptomyceten und verfahren zu seiner gewinnung | |
| EP0173950A2 (de) | Neuer alpha-Glukosidase Inhibitor, Verfahren zur seiner Herstellung, seine Verwendung und pharmazeutische Präparate | |
| DE2911353A1 (de) | 3-o-( beta -d-glucoronpyranosyl)- sojasapogenol b, verfahren zu deren herstellung und arzneimittel, welche diese enthalten | |
| DE2614393C3 (de) | Aminozucker-Derivate und diese Verbindungen enthaltende Arzneimittel | |
| EP0257418B1 (de) | Oxiran-Pseudooligosaccharide, Verfahren zu deren Herstellung, deren Verwendung und pharmazeutische Präparate | |
| DE3634496C2 (de) | Glukosylmoranolinderivate und ihre Herstellung | |
| AT389516B (de) | Neue oxiran-pseudooligosaccharide, verfahren zu ihrer herstellung, ihre verwendung und sie enthaltende pharmazeutische praeparate | |
| EP0173948A2 (de) | Neue Pseudooligosaccharide mit alpha-Glukosidase-hemmender Wirkung, Verfahren zur deren Herstellung, deren Verwendung und pharmazeutische Präparate | |
| EP0236894B1 (de) | Efomycin G, seine Herstellung und seine Verwendung als Leistungsförderer bei Tieren | |
| DE2658563C2 (de) | ||
| DE69223883T2 (de) | Antibiotikum LL-E19020 Alpha | |
| DE69217597T2 (de) | Antibiotikum LL-E19020 Epsilon und LL-E19029 Epsilon 1 | |
| DE2950980C2 (de) | Antibiotikum BN-183B und Arzneimittel, welche dieses enthalten | |
| EP0167954A2 (de) | 1-Hydroxy-Cytorhodine, ein mikrobiologisches Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung als Cytostatika | |
| DE69219841T2 (de) | Antibiotikum LL-E19020 Zeta und Antibiotikum LL-E19020 Eta | |
| DE69720101T2 (de) | Makrolid Verbindung 0406 | |
| DE69223302T2 (de) | Antibiotikum LL-E19020 Gamma | |
| DE2209018A1 (de) | Neues Antibioticum A-4696 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| ELJ | Ceased due to non-payment of the annual fee |