AT364453B - Verfahren zur herstellung eines neuen ringpeptids - Google Patents

Description

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   Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung des neuen Ringpeptids Cyclosporin C der Formel 
 EMI1.1 
 
Cyclosporin C ist verwendbar zur Herstellung von Dihydro-Cyclosporin C. Letztere Verbindung zeichnet sich durch interessante chemotherapeutische und pharmakologische Eigenschaften aus und kann daher als Heilmittelwirkstoff verwendet werden. 



   Erfindungsgemäss gelangt man zum Cyclosporin C, indem man den Stamm NRRL 8044 der Pilzspecies Trichoderma polysporum (Link ex   Pers.)   Rifai züchtet und Cyclosporin C aus der Kulturbrühe isoliert. Die Züchtung erfolgt auf an sich bekannte Weise (s. z. B. DE-OS 2455859). Eine Kultur dieses Stammes ist beim United States Department of Agriculture (Northern Research and Development Division), Peoria,   111.,   U. S. A., deponiert. Cyclosporin C kann auf chromatographischem Wege isoliert werden als ein gegen Aspergillus niger aktives Produkt mit polarerer Wirkung als Cyclosporin A und B (in der DE-OS 2455859 werden Cyclosporin A und B als S   7481/F-1   und S 7481/F-2 bezeichnet). 



   In dem nachfolgenden Beispiel, das die Erfindung näher erläutern, ihren Umfang aber in keiner Weise einschränken soll, erfolgen alle Temperaturangaben in Celsiusgraden. 



   Beispiel :
Eine durch aerobe Submerszüchtung von Trichoderma polysporum (Link ex Pers.) Rifai (NRRL 8044) erhaltene Kulturbrühe (400   L ;   s. Beispiel 3 von DE-OS 2455859) wurde mit 400   l   n-Butylacetat ausgerührt. Nach Auftrennung in einem Westfalia-Separator wurde die organische Phase im Vakuum konzentriert, und der Rohextrakt durch 3stufige Verteilung zwischen Petrol äther und Methanol/Wasser (9 : 1) entfettet. Das anfallende Material löste man in Chloroform und chromatographierte an 4, 5 kg Kieselgel 60"Merck", Korngrösse 0, 2 bis 0, 5 mm), wobei Chloroform mit steigenden Anteilen Methanol als Elutionsmittel diente. Die mit Chloroform + 1, 5% Methanol erhaltenen Fraktionen enthielten vorwiegend Cyclosporin A und B, die späteren, mit Chloroform + 3% Methanol eluierten Anteile vorwiegend Cyclosporin C.

   Ihr Nachweis in den Eluatfraktionen erfolgt mit Hilfe der Dünnschichtchromatographie, wobei sie einen wesentlich niedrigeren RF-Wert aufweist als die beiden erstgenannten Substanzen,   z. B.   auf Silicagel-Fertigfolien ("Polygram" (hergestellt durch Fa. Marcherey und Nagel, Düren, BRD) mit Chloroform-Methanol   (95 :   5) als Fliessmittel, RF = 0, 26 (RF von Cyclosporin A : 0, 44, von Cyclosporin B : 0, 37). Nach Vereinigung und Eindampfen der 

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 Eluatfraktionen, die nach der   dünnschichtchromatographischen   Prüfung ganz oder vorwiegend aus Cyclosporin C bestehen, wird die chromatographische Reinigung wiederholt.

   Die Eluatfraktionen werden wie oben im Dünnschichtchromatogramm auf ihre Zusammensetzung geprüft und diejenigen von ihnen, die ganz aus Cyclosporin C bestehen, vereinigt und im Vakuum bei 20 bis 40  zur Trockne verdampft. Den Rückstand behandelt man nach Lösen in der 10fachen Menge Alkohol mit 5   Gew.-%   Aktivkohle, dampft nach dem Abfiltrieren der Kohle das Filtrat bei 20 bis 40  im Vakuum ein und trocknet den Rückstand im Hochvakuum bei   550.   



   Der letzte Reinigungsschritt besteht darin, dass man den Rückstand in der 5fachen Menge Äther löst und durch langsames Zufügen der 30fachen Menge Hexan unter Schütteln die feste Substanz ausfällt und sie nach Abkühlen des Gemisches auf 0 bis 50 abfiltriert, mit kaltem Hexan wäscht und im Hochvakuum bei   55    trocknet. Aus der 2, 5fachen Menge Aceton werden bei-15  farblose, prismatische Nadeln von kristallinem Cyclosporin C erhalten. 



   Smp. 152 bis 1550. 
 EMI2.1 

Claims (1)

1. : : -PATENTANSPRUCH: Verfahren zur Herstellung des neuen Ringpeptids Cyclosporin C der Formel EMI2.2 dadurch gekennzeichnet, dass man den Stamm NRRL 8044 der Pilzspecies Trichoderma polysporum (Link ex Pers.) Rifai züchtet und Cyclosporin C aus der Kulturbrühe isoliert.