AT17831U1

AT17831U1 - Hcg-zyklustestpapierstreifen, kit, herstellungsverfahren und verwendung davon

Info

Publication number: AT17831U1
Application number: ATGM50254/2021U
Authority: AT
Original assignee: Nantong Egens Biotechnology Co Ltd
Priority date: 2017-03-24
Filing date: 2018-07-12
Publication date: 2023-04-15
Also published as: RU2738061C1; AU2018412729B2; EP3667324A1; EP3667324A4; CN108761099A; CN106932598A; RU2738061C9; DE202018006692U1; AU2018412729A1; WO2019174165A1; CA3076528A1

Abstract

Ein hCG-Zyklus-Testpapierstreifen, der einen ersten Testpapierstreifen (1) und einen zweiten Testpapierstreifen (2) umfasst. Der erste Testpapierstreifen (1) und der zweite Testpapierstreifen (2) umfassen jeweils: ein Substrat und ein Probenkissen, ein Adsorptionskissen für kolloidales Gold, einen Antikörper tragenden Film und ein Wasseradsorptionskissen, die nacheinander an dem Substrat haften. Der Antikörper tragende Film ist mit einer Nachweislinie und einer Qualitätskontrolllinie versehen, die voneinander getrennt sind. Auf dem kolloidalen Gold-Adsorptionskissen (16) des ersten Testpapierstreifens (1) ist ein monoklonales Antikörperkonjugat aus kolloidalem Gold und Anti-humanem Choriongonadotropin β-hCG adsorbiert. Ein kolloidales Gold-Anti-Human-Chorion-Gonadotropin β-hCG monoklonales Antikörperkonjugat und ein freier β-Antikörper werden auf dem kolloidalen Gold-Adsorptionskissen (26) des zweiten Testpapierstreifens (2) adsorbiert. Die Nachweislinie ist mit dem monoklonalen α-hCG-Antikörper beschichtet, und die Kontrolllinie ist mit dem polyklonalen Anti-Maus-IgG-Antikörper beschichtet. Der Testpapierstreifen kann für eine Urinprobe verwendet werden, die nicht aufbereitet werden muss, die Bedienung und die Nachweismethode sind einfach, und somit eignet sich das Testpapier für den Vor-Ort-, Sofort- und Schnellnachweis und ist geeignet für den Nachweis der Anzahl der Schwangerschaftswochen in einer Familie.

Description

Beschreibung

HCG-ZYKLUSTESTPAPIERSTREIFEN, KIT, HERSTELLUNGSVERFAHREN UND VERWENDUNG DAVON

TECHNISCHES GEBIET

[0001] Die vorliegende Anmeldung bezieht sich auf ein Gebiet des biologischen Nachweises und insbesondere auf einen hCG-Zyklus-Testpapierstreifen, ein Kit, ein Zubereitungsverfahren dafür und seine Verwendung.

STAND DER TECHNIK

[0002] Humanes Choriongonadotropin (hCG) ist ein Glykoprotein-Hormon, das während der Schwangerschaft von den Trophoblastenzellen der Plazenta ausgeschieden wird. Es besteht aus zwei verschiedenen Untereinheiten, a und ß, die durch eine nicht-kovalente Bindung verbunden sind. Während der Produktion, der Sekretion und des Metabolismus der Hormone durchlaufen die hCG-Moleküle verschiedene Veränderungen wie Ruptur und Dissoziation, so dass sie in verschiedenen molekularen Formen im Blut und Urin vorliegen. hCG ist das einzige Plazentahormon, das nicht mit der Zunahme des Plazentagewichts zunimmt. Referenzwerte für hCG bei schwangeren Frauen sind in den "Chinese Clinical Test Operating Procedures" beschrieben. Der Referenzwert für hCG liegt bei 5-50 IU/ml für die 0,2-1 Schwangerschaftswoche, der Referenzwert von hCG ist 50-500 IU/ml für 1-2 Schwangerschaftswochen, der Referenzwert von hCG ist 100-5000 IU/ml für 2-3 Schwangerschaftswochen, der Referenzwert von hCG ist 500-10000 IU/ml für 3-4 Schwangerschaftswochen, der Referenzwert von hCG ist 1000-50.000 IU/ml für 45 Schwangerschaftswochen, der Referenzwert von hCG ist 10.000-100.000 IU/ml für 5-6 Schwangerschaftswochen, der Referenzwert von hCG ist 15.000-200.000 IU/ml für 6-8 Schwangerschaftswochen, der Referenzwert von hCG ist 10.000-100.000 IU/ml für 8-12 Wochen der Schwangerschaft. Die hCG-Konzentration beträgt 5-50 mmIU/ml im Blut und >25 mIU/ml im Urin nach der ersten Schwangerschaftswoche, erreicht um die 8-10 Schwangerschaftswoche einen Spitzenwert und nimmt in den nächsten 1-2 Wochen rasch ab, um dann allmählich zu sinken und bis zur Entbindung bei etwa 1/5-1/10 des Spitzenwertes zu bleiben. Daher kann eine frühe Schwangerschaft durch den Nachweis der hCG-Konzentration in Blut und Urin nachgewiesen werden.

[0003] Gegenwärtig wird ein Testpapier in einem allgemeinen Frühschwangerschaftsteststift meist nach der Doppelantikörper-Sandwich-Methode verwendet, bei der kolloidales Gold als Indikator für den Nachweis der hCG-Konzentration im Urin verwendet wird, und es kann nur festgestellt werden, ob eine Schwangerschaft vorliegt oder nicht, nicht aber die Anzahl der Schwangerschaftstage. Die Anzahl der Schwangerschaftstage wird nach einer traditionellen Methode berechnet. In der Frühschwangerschaft beginnt die Anzahl der Schwangerschaftstage mit dem ersten Tag nach der letzten Regelblutung. Diese Methode ist jedoch nicht genau. Die genauere Methode zur Bestimmung der Anzahl der Schwangerschaftstage ist derzeit vor allem die Blutuntersuchung, die Ultraschalluntersuchung und die Kombination aus HCG-Bestimmung und Ultraschalluntersuchung, bei der Fachleute nach einer langen Testphase ein Ergebnis erhalten müssen und die kompliziert ist.

[0004] Das chinesische Patent CN101294966A offenbart ein Mittel zum Nachweis von Eileiterschwangerschaft und schwangeren Tagen mit Kolloidgold und ein Herstellungsverfahren dafür. Es offenbart ein Stück Nachweistestpapierstreifen und eine Urinprobenbehandlungslösung; wobei das Nachweistestpapier aus einer Grundplatte, einem Probenkissen, einer goldmarkierten Anti-B-hCG-Monoklon-Antikörperschicht und einem Zellulosenitratfilm besteht, der mit einem Absorptionspunkt überlappt und daran haftet und mit der Grundplatte verbunden ist; Die a-hCGmonoklonale Antikörperlinie und eine polyklonale Schaf-Anti-Ratten-Antikörperlinie sind auf dem Zellulosenitratfilm angeordnet, und die a-hCG-monoklonale Antikörperlinie befindet sich in der Nähe der goldmarkierten Anti-B-hCG-monoklonalen Antikörperschicht. Wenn dieser Nachweis-

papierstreifen zur Bestimmung der Anzahl der Schwangerschaftstage verwendet wird, sind drei Testpapierstreifen und eine Verarbeitung der Urinprobe erforderlich, was zu einer komplizierten Arbeitsweise und Nachweismethode führt, so dass dieses Nachweismittel nicht zur Bestimmung der Anzahl der Schwangerschaftstage in einer Familie geeignet ist.

AUFGABE DER ERFINDUNG

[0005] Daher, um Mängel zu überwinden, dass die kolloidales Gold-Nachweismittel im Stand der Technik erfordert drei Testpapierstreifen und die Verarbeitung von Urin, um die Anzahl der Tage der Schwangerschaft zu erkennen, was zu komplizierten Betriebsverfahren und Nachweisverfahren. Die vorliegende Anwendung stellt einen hCG-Zyklus-Testpapierstreifen, ein Kit, eine Zubereitungsmethode dafür und deren Verwendung zur Verfügung, die nur wenige Teststreifen benötigen und für eine Urinprobe verwendet werden können, die nicht verarbeitet werden muss, wobei der Betrieb und die Nachweismethode einfach sind, und somit für die Feststellung der Anzahl der Schwangerschaftstage in einer Familie geeignet sind.

[0006] Daher stellt die vorliegende Anwendung einen hCG-Zyklus-Testpapierstreifen bereit, der einen ersten Testpapierstreifen und einen zweiten Testpapierstreifen umfasst, wobei der erste Testpapierstreifen und der zweite Testpapierstreifen jeweils Folgendes umfassen: ein Substrat und ein Probenkissen, ein kolloidales Goldadsorptionskissen, einen Antikörper tragenden Film und ein Wasserabsorptionskissen, die nacheinander an das Substrat geklebt sind; wobei das Probenkissen, das kolloidale Goldadsorptionskissen, der Antikörper tragende Film und das Wasserabsorptionskissen nur mit einem benachbarten Kissen davon in Kontakt sind und sich nur teilweise überlappen; der Antikörper tragende Film eine Qualitätskontrolllinie und eine Nachweislinie hat, die in einem Abstand angeordnet sind, die Qualitätskontrolllinie nahe dem Wasserabsorptionskissen ist und die Nachweislinie nahe dem kolloidalen Goldadsorptionskissen ist.

[0007] Vorzugsweise wird das Konjugat aus kolloidalem Gold und monoklonalem Antikörper gegen menschliches Choriongonadotropin B-hCG in dem Adsorptionskissen aus kolloidalem Gold des ersten Testpapierstreifens adsorbiert, und das Konjugat aus kolloidalem Gold und monoklonalem Antikörper gegen menschliches Choriongonadotropin B-hCG sowie ein freier B-Antikörper werden in dem Adsorptionskissen aus kolloidalem Gold des zweiten Testpapierstreifens absorbiert.

[0008] Vorzugsweise ist die Nachweislinie mit einem monoklonalen Antikörper gegen menschliches Choriongonadotropin a-hCG beschichtet; die Qualitätskontrolllinie ist mit einem polyklonalen Antikörper gegen Maus-IgG beschichtet.

[0009] Der freie B-Antikörper ist ein freier humaner Choriongonadotropin-B-hCG-Antikörper.

[0010] Vorzugsweise ist die Antikörper tragende Folie eine Nitrocellulosefolie mit einer Porengröße von 3-10 um.

[0011] Vorzugsweise sind das Probenkissen und das Wasseraufnahmekissen jeweils mit einer Schutzfolie versehen.

[0012] Die vorliegende Anmeldung stellt auch ein Verfahren zur Herstellung eines hCG-ZyklusTestpapierstreifens bereit, das die folgenden Schritte umfasst:

S10: Beschichten einer Antikörper tragenden Folie mit einer Nachweislinie und einer Qualitätskontrolllinie, die in einem Abstand von 0,3-0,7 cm parallel angeordnet sind, und Trocknen bei einer konstanten Temperatur von 4-35 °C;

S20: Eintauchen des in Schritt S10 erhaltenen antikörpertragenden Films in eine PBS-Pufferlösung und anschließendes Eintauchen in eine Blocking-Behandlungslösung und Trocknen bei einer Temperatur von 18-28 °C und einer relativen Feuchtigkeit von <40%;

S30: Herstellen einer kolloidalen Goldkomplexiösung und Einstellen des pH-Werts auf 6,5-7,0, Zugeben eines monoklonalen Antikörpers gegen menschliches Choriongonadotropin B-hCG und dann Zugeben eines Stabilisators, um gut zu mischen, Zentrifugieren und Sammeln eines Präzipitats, Verwenden der kolloidalen Goldkomplexiösung, um das Präzipitat zu rekonstituieren, Gießen auf ein kolloidales Goldadsorptionskissen eines ersten Testpapierstreifens und anschließen-

des Trocknen, Versiegeln und Lagern;

S40: Herstellen einer kolloidalen Goldkomplexiösung und Einstellen des pH-Werts auf 6,5-7,0, Zugeben eines monoklonalen Antikörpers gegen menschliches Choriongonadotropin B-hCG und dann Zugeben eines Stabilisators, um gut zu mischen, Zentrifugieren und Sammeln eines Niederschlags, Verwenden der kolloidalen Goldkomplexiösung, um den Niederschlag wiederherzustellen, und dann Zugeben eines freien ßB-Antikörpers, um gut zu mischen, Gießen auf ein kolloidales Goldadsorptionskissen eines zweiten Testpapierstreifens und anschließendes Trocknen, Versiegeln und Aufbewahren;

S50: Aufkleben eines Probenkissens, des kolloidalen Goldadsorptionskissens des ersten Testpapierstreifens, des Antikörper tragenden Films und eines Wasseradsorptionskissens nacheinander entlang einer Längsrichtung eines Substrats, um einen ersten Testpapierstreifen zu erhalten; und Aufkleben des kolloidalen Goldadsorptionskissens des zweiten Testpapierstreifens, des Antikörper tragenden Films und eines Wasseradsorptionskissens nacheinander entlang einer Längsrichtung eines Substrats, um einen zweiten Testpapierstreifen zu erhalten.

[0013] Vorzugsweise beträgt die Konzentration des monoklonalen Anti-Human-Chorion-Gonadotropin-a-hCG-Antikörpers, der zur Beschichtung der Nachweislinie verwendet wird, 1,1-1,5 mg/ml, vorzugsweise 1,3 mg/ml; die Konzentration des polyklonalen Anti-Maus-IgG-Antikörpers, der zur Beschichtung der Qualitätskontrolllinie verwendet wird, beträgt 1,5-2,5 mg/ml, vorzugsweise 2 mg/ml.

[0014] Vorzugsweise umfasst die Blockierungslösung 0,08-0,12 Mol Pufferlösung, 0,3-0,7 Gewichtsprozent Zucker und 0,8-1,2 Gewichtsprozent Blockierungsprotein sowie 0,03-0,08 Gewichtsprozent Konservierungsmittel, vorzugsweise 0,1 Mol Pufferlösung, 0,5 Gewichtsprozent Zucker, 1 Gewichtsprozent Blockierungsprotein und 0,05 Gewichtsprozent Konservierungsmittel.

[0015] Vorzugsweise handelt es sich bei der Pufferlösung um einen Phosphatpuffer, bei dem Zucker um Saccharose oder Trehalose, bei dem Konservierungsmittel um NaNs oder Thimerosal und bei dem blockierenden Protein um Kasein oder Rinderserumalbumin.

[0016] Vorzugsweise beträgt die Konzentration des monoklonalen Antikörpers gegen humanes Choriongonadotropin B-hCG in Schritt S30 5 ug/ml.

[0017] Vorzugsweise beträgt die Konzentration des monoklonalen Anti-Human-Chorion-Gonadotropin-B-hCG-Antikörpers in Schritt S40 5 ug/mL, und das Gewichtsverhältnis des freien ßAntikörpers zum monoklonalen Anti-Human-Chorion-Gonadotropin-B-hCG-Antikörper beträgt 10: 1.

[0018] Vorzugsweise wird das Konjugat aus kolloidalem Gold und monoklonalem Anti-humanem Choriongonadotropin-B-hCG-Antikörper auf das kolloidale Goldadsorptionskissen des ersten Testpapierstreifens mit einer Gießmenge von 50 ul/cm? gegossen.

[0019] Vorzugsweise werden das kolloidale Gold-Anti-Human-Chorion-Gonadotropin-B-hCG-Antikörper-Konjugat und der freie B-Antikörper auf das kolloidale Gold-Adsorptionskissen des zweiten Testpapierstreifens mit einer Gießmenge von 50 ul/cm? gegossen. Die vorliegende Anmeldung stellt auch ein hCG-Zyklustest-Kit bereit, das den hCG-Zyklus-Testpapierstreifen oder den nach dem Verfahren hergestellten hCG-Zyklus-Testpapierstreifen umfasst.

[0020] Vorzugsweise umfasst das hCG-Zyklustest-Kit ferner ein Gehäuse, wobei das Gehäuse mit zwei parallel angeordneten Nuten versehen ist, die zum Anbringen des ersten Testpapierstreifens bzw. des zweiten Testpapierstreifens dienen.

[0021] Vorzugsweise umfasst das hCG-Zyklustestkit ferner einen Abdeckkörper, wobei der Abdeckkörper mit zwei parallelen Fenstern versehen und abnehmbar auf dem Gehäuse abgedeckt ist, und die Nachweislinie und die Qualitätskontrolllinie des ersten Testpapierstreifens und des zweiten Testpapierstreifens durch die Fenster beobachtet werden können.

[0022] Die vorliegende Anwendung sieht auch die Verwendung des hCG-Zyklus-Testpapierstreifens oder des hCG-Zyklus-Testpapierstreifens, der durch das Verfahren oder das hCG-ZyklusTestkit hergestellt wurde, zur Bestimmung der menschlichen Schwangerschaftszeit vor.

[0023] Die vorliegende Anwendung stellt auch ein Verfahren zur Bestimmung der menschlichen Schwangerschaftszeit unter Verwendung des hCG-Zyklus- Testpapierstreifens bereit, das die folgenden Schritte umfasst:

a) Entnahme von Urin einer zu untersuchenden Person und anschließendes vollständiges Eintauchen der Probenpads des ersten Testpapierstreifens und des zweiten Testpapierstreifens in den Urin für 3-10 Sekunden und anschließendes Herausnehmen und Flachlegen der Probenpads, Beobachtung eines Ergebnisses innerhalb von 3-5 Minuten, nach 5 Minuten ist das Ergebnis ungültig;

b) Beobachtung der Farbtiefe der Nachweislinien T1 und T2 des ersten Testpapierstreifens und des zweiten Testpapierstreifens und ob die Qualitätskontrolllinie C1 des ersten Testpapierstreifens und die Qualitätskontrolllinie C2 des zweiten Testpapierstreifens farbig sind oder nicht: Wenn die Qualitätskontrolllinien C1 und C2 Farbe entwickeln und die Nachweislinien T1 und T2 keine Farbe entwickeln, bedeutet dies, dass die getestete Person nicht schwanger ist;

Wenn die Qualitätskontrolllinien C1 und C2 Farbe entwickeln und die Nachweislinie T1 Farbe entwickelt und die Nachweislinie T2 keine Farbe entwickelt, bedeutet dies, dass die getestete Person schwanger ist und eine Schwangerschaftszeit von 1-2 Wochen hat;

Wenn die Qualitätskontrolllinien C1 und C2 Farbe entwickeln, die Nachweislinie T1 Farbe entwickelt und die Nachweislinie T2 eine hellere Farbe als die Nachweislinie T1 entwickelt, deutet dies darauf hin, dass die getestete Person schwanger ist und eine Schwangerschaftszeit von 2-3 Wochen hat;

wenn die Qualitätskontrolllinien C1 und C2 sich verfärben, die Nachweislinie T1 sich verfärbt, die Nachweislinie T2 sich heller oder näher an der Nachweislinie T1 entwickelt, deutet dies darauf hin, dass die getestete Person schwanger ist und eine Schwangerschaftszeit von mehr als 3 Wochen hat; und

wenn weder die Qualitätskontrolllinien C1 und C2 noch die Erkennungslinien T1 und T2 einen Prunosus zeigen, oder keine der Qualitätskontrolllinien C1 und C2 einen Prunosus zeigen, zeigt dies an, dass der hCG-Zyklustestpapierstreifen ungültig ist.

[0024] Die technischen Lösungen der vorliegenden Anmeldung haben im Vergleich zum Stand der Technik folgende Vorteile.

(1) Der hCG-Zyklus-Testpapierstreifen, der in der vorliegenden Anmeldung bereitgestellt wird, umfasst einen ersten Testpapierstreifen und einen zweiten Testpapierstreifen, wobei der erste Testpapierstreifen und der zweite Testpapierstreifen jeweils Folgendes umfassen: ein Substrat und ein Probenkissen, ein kolloidales Goldadsorptionskissen, einen Antikörper-tragenden Film und ein Wasserabsorptionskissen, die nacheinander an dem Substrat haften; wobei das Probenkissen, das kolloidale Goldadsorptionskissen, der Antikörper-tragende Film und das Wasserabsorptionskissen nur in Kontakt mit einem benachbarten Kissen davon sind und sich nur teilweise überlappen; der Antikörper-tragende Film eine Qualitätskontrolllinie und eine Nachweislinie hat, die in einem Abstand angeordnet sind, die Qualitätskontrolllinie nahe dem Wasserabsorptionskissen ist und die Nachweislinie nahe dem kolloidalen Goldadsorptionskissen ist; ein kolloidales Gold-anti-humanes Choriongonadotropin-B-hCG-monoklonales Antikörperkonjugat in dem kolloidalen Goldadsorptionskissen des ersten Testpapierstreifens adsorbiert wird und ein kolloidales Gold-anti-humanes Choriongonadotropin-B-hCG-monoklonales Antikörperkonjugat und ein freier B-Antikörper in dem kolloidalen Goldadsorptionskissen des zweiten Testpapierstreifens absorbiert werden; die Nachweislinie ist mit einem monoklonalen Antikörper gegen menschliches Choriongonadotropin a-hCG beschichtet; die Qualitätskontrolllinie ist mit einem polyklonalen Antikörper gegen Maus-IgG beschichtet. Der obige hCG-Zyklus-Testpapierstreifen besteht nur aus zwei Testpapierstreifen und kann für eine Urinprobe verwendet werden, die nicht aufbereitet werden muss, die Bedienung und die Nachweismethode sind einfach und haben eine gute Spezifität, Wiederholbarkeit, Stabilität und Empfindlichkeit. Da die minimale nachweisbare Menge des ersten Testpapierstreifens nicht höher als 25 mIU/ml ist und die minimale nachweisbare Menge des zweiten Testpapierstreifens nicht höher als 100 mIU/ml ist, kann der obige hCG-Zyklus-Testpapierstreifen die Anzahl der Schwangerschaftstage genau nachweisen, und der Nachweisprozess dauert nur 5 Minuten, und somit ist er für den Vor-Ort-, Sofort- und Schnellnachweis geeignet und auch für den Nachweis der Anzahl der Schwangerschaftstage in einer Familie geeignet.

(2) hCG-Zyklus-Testkit in der vorliegenden Anwendung kann verwendet werden, um qualitativ die Anzahl der Tage der Schwangerschaft durch eine einfache Methode, geeignet für Vor-Ort-, Instant-, und Schnellnachweis zu erkennen. Verglichen mit dem bestehenden Testpapierstreifen hat er offensichtliche Vorteile in Bezug auf die Nachweisgeschwindigkeit, die Tragbarkeit und die Anwendbarkeit vor Ort und kann die Anzahl der Schwangerschaftstage genau bestimmen.

(3) Die Methode zur Bestimmung der Anzahl der Schwangerschaftstage unter Verwendung eines hCG-Zyklus-Teststreifens oder eines hCG-Zyklus-Testkits, die in der vorliegenden Anwendung vorgesehen ist, ist einfach und leicht zu handhaben und kann verwendet werden, um die Anzahl der Schwangerschaftstage qualitativ zu bestimmen, und ist somit für die Vor-Ort-, Sofortund Schnellbestimmung geeignet. Verglichen mit dem bestehenden Testpapierstreifen hat es offensichtliche Vorteile in Bezug auf die Nachweisgeschwindigkeit, die Tragbarkeit und die Anwendbarkeit vor Ort.

KURZEBESCHREIBUNG DER ZEICHNUNGEN

[0025] Fig. 1 ist eine schematische Ansicht, die einen ersten Testpapierstreifen eines hCGZyklus-Testpapierstreifens gemäß der vorliegenden Anwendung zeigt;

[0026] Fig. 2 ist eine schematische Darstellung eines zweiten Testpapierstreifens eines hCG-Zyklus-Testpapierstreifens gemäß der vorliegenden Anmeldung;

[0027] Fig. 3 (a) ist eine schematische Ansicht, die ein hCG-Zyklus-Detektionskit gemäß Beispiel 5 der vorliegenden Anmeldung zeigt;

[0028] Fig. 3 (b) ist eine schematische Ansicht eines hCG-Zyklusnachweis-Kits gemäß Beispiel 5 der vorliegenden Anmeldung;

[0029] Fig. 4 ist eine schematische Ansicht der Verwendung eines hCG-ZyklusnachweisKits gemäß Beispiel 9 der vorliegenden Anmeldung;

[0030] Fig. 5 ist eine schematische Ansicht, die ein hCG-Zyklusdetektionskit gemäß Beispiel 7 der vorliegenden Anmeldung zeigt;

[0031] Fig. 6 ist eine schematische Ansicht, die ein hCG-Zyklusdetektionskit gemäß Bei-

spiel 9 der vorliegenden Anmeldung zeigt;

[0032] Fig. 7 ist eine schematische Darstellung eines hCG-Zyklusdetektionskits gemäß Beispiel 8 der vorliegenden Anmeldung.

DETAILLIERTE BESCHREIBUNG DER AUSFÜHRUNGSFORMEN

[0033] Um die Ziele, technischen Lösungen und Vorteile der vorliegenden Anmeldung zu verdeutlichen, werden die Ausführungsformen der vorliegenden Anmeldung anhand der folgenden spezifischen Beispiele erläutert. Die in der vorliegenden Anmeldung beschriebenen Versuchsmethoden beruhen, sofern nicht anders angegeben, auf den üblichen Techniken des Fachs.

BEISPIEL 1

[0034] Beispiel 1 liefert einen hCG-Zyklus-Testpapierstreifen, der einen ersten Testpapierstreifen 1 und einen zweiten Testpapierstreifen 2 umfasst. Der erste Testpapierstreifen 1 bzw. der zweite Testpapierstreifen 2 umfasst: ein Substrat und ein Probenkissen, ein kolloidales Goldadsorptionskissen, einen Antikörper tragenden Film und ein Wasserabsorptionskissen, die nacheinander auf das Substrat geklebt sind. Das Probenkissen, das kolloidale Goldadsorptionskissen, der Antikörper tragende Film und das Wasserabsorptionskissen stehen nur mit einem benachbarten Kissen in Kontakt und überlappen dieses nur teilweise. Der Antikörper tragende Film ist an einem mittleren Teil des Substrats befestigt und hat eine Qualitätskontrolllinie und eine Nachweislinie, die in einem Abstand angeordnet sind. Die Qualitätskontrolllinie befindet sich in der Nähe des Wasserabsorptionskissens, und die Nachweislinie befindet sich in der Nähe des Adsorptionskissens für kolloidales Gold. Das Konjugat aus kolloidalem Gold und monoklonalem Antikörper gegen menschliches Choriongonadotropin B-hCG wird in dem Adsorptionskissen aus kolloidalem

Gold des ersten Testpapierstreifens adsorbiert, und das Konjugat aus kolloidalem Gold und monoklonalem Antikörper gegen menschliches Choriongonadotropin B-hCG sowie ein freier B-Antikörper werden in dem Adsorptionskissen aus kolloidalem Gold des zweiten Testpapierstreifens absorbiert. Die Nachweislinie ist mit einem monoklonalen Antikörper gegen menschliches Choriongonadotropin a-hCG beschichtet; die Qualitätskontrolllinie ist mit einem polyklonalen Antikörper gegen Maus-IgG beschichtet.

[0035] In dem in Fig. 1 gezeigten Beispiel 1 umfasst der erste Testpapierstreifen 1 ein erstes Kunststoffsubstrat 11 und ein erstes Probenkissen 12, ein erstes Adsorptionskissen aus kolloidalem Gold 16, einen ersten Antikörper tragenden Film und ein erstes Wasseradsorptionskissen 13, die nacheinander an dem ersten Kunststoffsubstrat 11 haften. Bei der ersten Antikörper tragenden Folie handelt es sich um eine erste Nitrocellulosefolie 15, die sich zwischen und unter dem ersten Probenkissen 12 und dem ersten Wasseradsorptionskissen 13 befindet. Der erste Nitrocellulosefilm 15 ist mit dem ersten Wasseradsorptionskissen 13 überlappt, ein Ende des ersten Probenkissens 12 ist mit dem ersten kolloidalen Goldadsorptionskissen 16 überlappt, und das erste kolloidale Goldadsorptionskissen 16 ist mit dem ersten Nitrocellulosefilm 15 überlappt. Der erste Nitrocellulosefilm 15 ist mit einer ersten Nachweislinie T1 und einer ersten Qualitätskontrolllinie C1 beschichtet, die in einem Abstand angeordnet sind, wobei sich die Nachweislinie T1 in der Nähe des ersten Probenkissens 12 und die erste Qualitätskontrolllinie C1 in der Nähe des ersten Wasseradsorptionskissens 13 befindet. Das Konjugat aus kolloidalem Gold und monoklonalem Antikörper gegen humanes Choriongonadotropin B-hCG ist in dem ersten Adsorptionskissen 16 aus kolloidalem Gold adsorbiert. Die erste Nachweislinie T1 ist mit einem monoklonalen Antikörper gegen menschliches Choriongonadotropin a-hCG beschichtet; die erste Qualitätskontrolllinie C1 ist mit einem polyklonalen Antikörper gegen Maus-IgG beschichtet.

[0036] Wie in Fig. 2 gezeigt, umfasst der zweite Testpapierstreifen 2 ein zweites Kunststoffsubstrat 21 und ein zweites Probenkissen 22, ein zweites kolloidales Goldadsorptionskissen 26, einen zweiten Antikörper tragenden Film und ein zweites Wasseradsorptionskissen 23, die nacheinander auf das zweite Kunststoffsubstrat 21 aufgeklebt sind. Bei der zweiten Antikörper tragenden Folie handelt es sich um eine zweite Nitrocellulosefolie 25, die sich zwischen und unter dem zweiten Probenkissen 22 und dem zweiten Wasseradsorptionskissen 23 befindet. Die zweite Nitrocellulosefolie 25 ist mit dem zweiten Wasseradsorptionskissen 23 überlappt, ein Ende des zweiten Probenkissens 22 ist mit dem zweiten kolloidalen Goldadsorptionskissen 26 überlappt, und das zweite kolloidale Goldadsorptionskissen 26 ist mit der zweiten Nitrocellulosefolie 25 überlappt. Der zweite Nitrocellulosefilm 25 ist mit einer zweiten Detektionslinie T2 und einer zweiten Qualitätskontrolllinie C2 beschichtet, die in einem Abstand angeordnet sind, wobei die Detektionslinie T2 in der Nähe des zweiten Probenkissens 22 und die zweite Qualitätskontrolllinie C2 in der Nähe des zweiten Wasseradsorptionskissens 23 liegt. Das zweite Adsorptionskissen 26 aus kolloidalem Gold ist mit einem Konjugat aus kolloidalem Gold und einem monoklonalen Antikörper gegen humanes Choriongonadotropin B-HCG sowie einem freien ßB-Antikörper beschichtet. Die zweite Nachweislinie T2 ist mit einem monoklonalen Anti-Human-Chorion-Gonadotropin-aHCG-Antikörper beschichtet; die zweite Qualitätskontrolllinie C2 ist mit einem polyklonalen AntiMaus-IgG-Antikörper beschichtet.

[0037] Außerdem sind das erste Probenkissen 12 und das erste Wasserabsorptionskissen 13 jeweils mit einer ersten Schutzfolie 14 versehen, und das zweite Probenkissen 22 und das zweite Wasserabsorptionskissen 23 sind jeweils mit einer zweiten Schutzfolie 24 versehen.

[0038] Außerdem sind die erste Qualitätskontrolllinie C1 und die erste Nachweislinie T1 parallel zueinander und in einem Abstand von 0,3-0,7 cm angeordnet. In diesem Beispiel sind die erste Qualitätskontrolllinie C1 und die erste Detektionslinie T1 in einem Abstand von 0,5 cm angeordnet. Die zweite Qualitätskontrolllinie C2 und die zweite Detektionslinie T2 sind parallel zueinander und mit einem Abstand von 0,3-0,7 cm angeordnet. In diesem Beispiel ist die zweite Qualitätskontrolllinie C2 0,5 cm von der zweiten Detektionslinie T2 entfernt.

[0039] Außerdem sind die erste Nitrocellulosefolie 15 und die zweite Nitrocellulosefolie 25 eine Nitrocellulosefolie mit einer Porengröße von 3-10 um.

BEISPIEL 2

[0040] Beispiel 2 stellt ein Verfahren zur Herstellung eines hCG-Zyklus-Testpapierstreifens von Beispiel 1 bereit, das die folgenden Schritte umfasst:

1. Herstellung eines Nitrocellulosefilms:

[0041] (1) Ein Nitrocellulosefilm mit einer Porengröße von 3-10 um wird in einen Film mit Spezifikationen mit einer Breite größer oder gleich 2,0 cm und einer Länge von 30,5 cm, wie benötigt, geschnitten.

[0042] (2) 1,3mg/ml monoklonaler Anti-a-HCG-Antikörper wird mit 0,1M Phosphatpuffer zur Beschichtung der Nachweislinie hergestellt, und 2,0 mg/ml polyklonaler Anti-Maus-IgG-Antikörper wird mit 0,85 Gewichtsprozent Natriumchloridpuffer zur Beschichtung der Qualitätskontrolllinie hergestellt.

[0043] (3) Eine Antikörperbeschichtungsoberfläche des Nitrocellulosefilms wird markiert. Die Antikörperlösung der zu beschichtenden Nachweislinie und die Antikörperlösung der zu beschichtenden Qualitätskontrolllinie sollten gleichmäßig und parallel auf den Film aufgetragen werden, und die Nachweislinie und die Qualitätskontrolllinie sollten beschichtet werden. Die Nachweisspur und die Qualitätskontrollspur sind in einem Abstand von 0,5 cm angeordnet. Der Nitrocellulosefilm wird bei einer konstanten Temperatur von 4 -35 ° C getrocknet.

[0044] (4) Es wird eine Lösung zum Einweichen für die Blockierungsbehandlung hergestellt. Ein tatsächliches Produktionsvolumen von gereinigtem Wasser wird in einen Mischtank gegeben; und dann werden 0,1 Mol Phosphatpuffer, 0,5 Gewichtsprozent Zucker und 1 Gewichtsprozent Blocking-Protein und 0,05 Gewichtsprozent Konservierungsmittel mit einer elektronischen analytischen Waage gewogen und dann direkt in einen Mischtank unter Rühren zugegeben, bis sie vollständig aufgelöst sind, gereinigtes Wasser wird zugegeben, um ein erforderliches Volumen zu erreichen, gefolgt von gutem Rühren für nicht weniger als 10 Minuten.

[0045] (5) Der Beschichtungsfilm wird in einen Verarbeitungstank gegeben, und der vorbereitete 0,01M PBS-Puffer mit einer Temperatur von etwa 36°C wird hinzugefügt. Es ist darauf zu achten, dass jeder Film 5 Minuten lang vollständig in den 0,01M PBS-Puffer eingetaucht ist (der Film darf sich nicht bewegen und überlappen). Der Film wird aus dem Verarbeitungstank entnommen, und der 0,01M PBS-Puffer wird verworfen. Dann wird der Film, der einmal 5 Minuten lang in den 0,01M-PBS-Puffer getaucht wurde, in den Verarbeitungstank gelegt, dann wird der vorbereitete 0,01M-PBS-Puffer hinzugefügt, um sicherzustellen, dass jeder Film 30 Minuten lang vollständig in die 0,01M-PBS-Pufferlösung eingetaucht ist (der Film bewegt sich nicht und überlappt nicht). Danach wird der Film aus dem Verarbeitungstank genommen und die 0,01M PBS-Pufferlösung verworfen. Dann wird der Film, der zweimal in die 0,01M PBS-Pufferlösung getaucht wurde, in den Verarbeitungstank gelegt und in die vorbereitete Blockierungslösung getaucht, um sicherzustellen, dass jeder Film 15 Minuten lang vollständig in die Behandlungslösung getaucht wird (der Film bewegt sich nicht und überlappt nicht). Danach wird der Film aus dem Verarbeitungstank entnommen und der Film jedes Rahmens mit einer Pinzette zur Seite gezogen, um sicherzustellen, dass der Film nicht aus dem Rahmen herausrutscht und sich nicht überschneidet, und anschließend werden der Rahmen und der Film erneut 20 Minuten lang in die Behandlungslösung getaucht. Danach wird der Film aus dem Behandlungstank genommen und mit einer Pinzette auf eine Gaze gezogen, um ihn ein wenig zu trocknen (achten Sie darauf, dass der Film beim Trocknen nicht reißt oder sich verformt, achten Sie auf den Trocknungsgrad des Films).

[0046] (6) Auf ein Brett geklebt und getrocknet

[0047] Ein weißes Papier in der Mitte einer Schnittlinie auf einem doppelseitigen Klebeband eines Klebebretts wird entfernt. Ein Bediener sollte Einweghandschuhe in der linken Hand tragen und eine Pinzette in der rechten Hand halten und den Film in den leeren Raum in der Mitte des Klebebretts legen und sicherstellen, dass sich ein Eckschnitt an der oberen rechten Seite des Bretts befindet und die rechte Seite des Klebebretts mit der rechten Seite des Films bündig ist. Um Fehler im Produktionsprozess zu vermeiden, muss sichergestellt werden, dass die Position der Farbentwicklung relativ genau ist. Der Film wird auf das Brett geklebt, indem er mit der Oberseite

eines Endes der Qualitätskontrolllinie ausgerichtet wird. Nach dem Aufkleben des Films auf die Klebebandplatte wird die Filmoberfläche mit doppelseitigem Klebeband geglättet, um Luftblasen zu vermeiden. Die Raumtemperatur wird auf 18-28 °C geregelt, und die relative Luftfeuchtigkeit beträgt <40 %. Es muss auch sichergestellt werden, dass die Luft im Trockenraum zirkulieren kann und der Wind eines Entfeuchters nicht direkt auf die Folienoberfläche bläst. Die Trocknungszeit beträgt =z4 Stunden.

2. Herstellung des ersten Adsorptionskissens aus kolloidalem Gold

[0048] (1) Herstellung der kolloidalen Goldkomplexiösung

Die tatsächliche Produktionsmenge an gereinigtem Wasser wird in den Mischbehälter gegeben; dann werden 5 Gewichtsprozent Trehalose, 2 Gewichtsprozent Rinderserumalbumin, 0,5 Gewichtsprozent Trinatriumcitrat, 0,05 Gewichtsprozent Polyethylenglykol und 0.05 Gewichtsprozent NaNzs werden mit einer elektronischen Analysenwaage gewogen und dann direkt in den Mischtank unter Rühren zugegeben, bis sie vollständig gelöst sind, gereinigtes Wasser wird zugegeben, um ein erforderliches Volumen zu erreichen, gefolgt von gutem Rühren für nicht weniger als 30 Minuten, wodurch eine kolloidale Goldkomplexlösung hergestellt wird.

[0049] (2) Die benötigte Menge an kolloidalem Gold wird mit einem Messzylinder abgemessen und der PH-Wert auf 6,5-7,0 eingestellt, indem 0,2 mol/L Kaliumcarbonatlösung mit 0,53 Vol.-% des kolloidalen Goldes unter Rühren auf einem Magnetrührer 15 Minuten lang zugegeben wird, wodurch ein eingestelltes kolloidales Gold erhalten wird. Der monoklonale Antikörper gegen humanes Choriongonadotropin B-hCG wird mit dem eingestellten kolloidalen Gold in einer Konzentration von 5 ug/ml markiert, d. h. der monoklonale Anti-Human-Chorion-Gonadotropin-B-hCGAntikörper wird mit doppelt destilliertem Wasser auf 5 Vol.-% verdünnt, wobei gut gemischt wird, um eine Lösung des monoklonalen Anti-Human-Chorion-Gonadotropin-B-hCG-Antikörpers mit einer Konzentration von 5 ug/ml zu erhalten, die in das angepasste kolloidale Gold gegeben wird, gefolgt von einem 30-minütigen Rühren auf einem Magnetrührer, und dann werden 0,5 Vol.-% Stabilisator wird unter Rühren für 30 Minuten zugegeben, gefolgt von Zentrifugieren, Sammeln eines markierten kolloidalen Goldniederschlags, der mit der kolloidalen Goldkomplexlösung bei 3 Vol.-% wieder aufgelöst wird, und Rühren auf einem Magnetrührer, bis die Mischung homogen ist, wodurch eine wiedergelöste kolloidale Goldlösung erhalten wird.

[0050] (3) 3 Vol.-% der wiederaufgelösten kolloidalen Goldlösung aus dem obigen Schritt (2) werden entnommen und mit der kolloidalen Goldkomplexlösung mit 40 Vol.-% wiederaufgelöst und anschließend mit einem Magnetrührer gemischt. Die gleichmäßig gemischte kolloidale Goldlösung wird mit 50 ul/cm? auf das vorbereitete kolloidale Goldadsorptionskissen gegossen und anschließend zum Trocknen für > 4 Stunden in einen Trockenraum gebracht, wobei die Temperatur im Trockenraum auf 18-28 °C und die relative Luftfeuchtigkeit auf <= 40 % geregelt wird. Es ist darauf zu achten, dass die Luft nicht behindert wird und der Luftstrom nicht direkt auf das kolloidale Goldadsorptionskissen geblasen werden kann. Das getrocknete kolloidale Goldadsorptionskissen wird in einen Alufolienbeutel mit Trockenmittel gelegt, zur Lagerung versiegelt und als erstes kolloidales Goldadsorptionskissen gekennzeichnet. Anmerkungen: Die kolloidale Goldlösung ist gegossen, weil das gegossene kolloidale Gold frei geschnitten werden kann, so dass es einfach ist, die Farbtiefe des Produkts einzustellen.

3. Herstellung des zweiten kolloidalen Goldadsorptionskissens

[0051] (1) Die benötigte Menge an kolloidalem Gold wird mit einem Messzylinder abgemessen und der PH-Wert auf 6,5-7,0 eingestellt, indem 0,2 mol/L Kaliumcarbonatlösung mit 0,53 Volumenprozent des kolloidalen Goldes unter Rühren auf einem Magnetrührer 15 Minuten lang zugegeben wird, wodurch ein eingestelltes kolloidales Gold erhalten wird. Der monoklonale Antikörper gegen menschliches Choriongonadotropin B-hCG wird mit dem eingestellten kolloidalen Gold in einer Konzentration von 5 ug/ml markiert und dann mit doppelt destilliertem Wasser in einer Konzentration von 5 Vol.-% verdünnt, wobei gut gemischt wird, um eine Lösung des monoklonalen Antikörpers gegen menschliches Choriongonadotropin B-hCG mit einer Konzentration von 5 ug/ml zu erhalten, die in das eingestellte kolloidale Gold gegeben wird, gefolgt von einem 30-minütigen Rühren auf einem Magnetrührer, und dann 0,5 Vol.-% Stabilisator unter Rühren 30 Minuten lang

zugegeben, anschließend zentrifugiert, wobei ein markierter kolloidaler Goldniederschlag gesammelt wird, der mit der kolloidalen Goldkomplexiösung wieder aufgelöst wird, und anschließend auf einem Magnetrührer gerührt wird, bis das Gemisch homogen ist, wodurch eine wieder aufgelöste kolloidale Goldlösung erhalten wird. Der Volumenprozentsatz des markierten kolloidalen Goldniederschlags in der kolloidalen Goldkomplexiösung beträgt 3 %.

[0052] (2) 3 Vol.-% des im obigen Schritt (1) wieder aufgelösten kolloidalen Goldes werden entnommen und mit der kolloidalen Goldkomplexiösung zu 40 Vol.-% wieder aufgelöst, und dann wird freier B-Antikörper gemäß einem Massenverhältnis von anti-humanem Choriongonadotropin B-hCG monoklonalem Antikörper zu freiem ß-Antikörper von 1:10 zugegeben, gefolgt von Mischen auf einem Magnetrührer. Die gleichmäßig gemischte kolloidale Goldilösung wird mit 50 Wl/cm? auf das vorbereitete kolloidale Goldadsorptionskissen gegossen und anschließend zum Trocknen für = 4 Stunden in einen Trockenraum gestellt, wobei die Temperatur im Trockenraum auf 18-28 °C und die relative Luftfeuchtigkeit auf <= 40 % eingestellt wird. Es ist darauf zu achten, dass die Luft nicht behindert wird und der Luftstrom nicht direkt auf das kolloidale Goldadsorptionskissen geblasen werden kann. Das getrocknete, markierte Gold wird in einen Alufolienbeutel mit einem Trockenmittel gegeben, zur Lagerung versiegelt und als zweites kolloidales Goldadsorptionskissen gekennzeichnet.

Anmerkungen: Die kolloidale Goldlösung ist gegossen, weil das gegossene kolloidale Gold frei geschnitten werden kann, so dass es einfach ist, die Farbtiefe des Produkts einzustellen.

4. Zusammenbau und Schneiden:

[0053] (1) Ein transparentes Substrat-Halbzeug, das mit dem Nitrocellulose-Film beklebt wurde, wird entnommen, und das immobilisierte erste kolloidale Gold-Adsorptionskissen wird in einen 0,5 cm x 30 cm breiten Streifen geschnitten mit einer Breite von 0,5 cm, der auf das transparente Substrat geklebt und mit dem Nitrocellulose-Film auf einer Dicke von etwa 1 mm gehalten wird. Das erste Wasseradsorptionskissen wird auf das obere Ende des transparenten Substratfilms des Nitrocellulosefilms geklebt und etwa 1 mm mit dem Film überlappt. Das erste Probenkissen wird auf das untere Ende des immobilisierten ersten Adsorptionskissens aus kolloidalem Gold aufgeklebt und mit diesem etwa 1 mm überlappt, wobei es zur Verwendung gekennzeichnet wird.

[0054] (2) Gemäß der entsprechenden Reaktionsvorrichtung wird das zusammengesetzte Substrat in einen Testpapierstreifen geschnitten, der als erster Testpapierstreifen gekennzeichnet ist.

[0055] (3) Ein transparentes Substrat-Halbzeug, das mit dem Nitrocellulose-Film beklebt wurde, wird entnommen, und das immobilisierte zweite kolloidale Gold-Adsorptionskissen wird in einen 0,5 cm x 30 cm breiten Streifen geschnitten mit einer Breite von 0,5 cm, der auf das transparente Substrat geklebt wird und mit dem Nitrocellulose-Film etwa 1 mm überlappt. Das zweite Wasseradsorptionskissen wird auf das obere Ende des transparenten Substratfilms des Nitrocellulosefilms geklebt und etwa 1 mm mit dem Film überlappt. Das zweite Probenkissen wird auf das untere Ende des immobilisierten zweiten Adsorptionskissens aus kolloidalem Gold aufgebracht und mit diesem etwa 1 mm überlappt, wobei es zur Verwendung gekennzeichnet wird.

[0056] (4) Gemäß der entsprechenden Reaktionsvorrichtung wird das zusammengesetzte Substrat in einen Testpapierstreifen geschnitten, der als zweiter Testpapierstreifen gekennzeichnet ist.

BEISPIEL 3

[0057] Beispiel 3 stellt ein Verfahren zur Herstellung eines hCG-Zyklus-Testpapierstreifens von Beispiel 1 bereit, das die folgenden Schritte umfasst:

1. Herstellung eines Nitrocellulosefilms:

[0058] (1) Ein Nitrocellulosefilm mit einer Porengröße von 3-0 um wird in einen Film mit Spezifikationen mit einer Breite größer oder gleich 2,0 cm und einer Länge von 30,5 cm, wie benötigt, geschnitten.

[0059] (2) 1,1mg/ml monoklonaler Anti-a-HCG-Antikörper wird mit 0,1M Phosphatpuffer zur Beschichtung der Nachweislinie hergestellt, und 2,5 mg/ml polyklonaler Anti-Maus-IgG-Antikörper

wird mit 0,85 Gewichtsprozent Natriumchloridpuffer zur Beschichtung der Qualitätskontrolllinie hergestellt.

[0060] (3) Eine Antikörperbeschichtungsoberfläche des Nitrocellulosefilms wird markiert. Die Antikörperlösung der zu beschichtenden Nachweislinie und die Antikörperlösung der zu beschichtenden Qualitätskontrolllinie sollten gleichmäßig und parallel auf den Film aufgetragen werden, und die Nachweislinie und die Qualitätskontrolllinie sollten beschichtet werden. Die Nachweisspur und die Qualitätskontrollspur sind in einem Abstand von 0,5 cm angeordnet. Der Nitrocellulosefilm wird bei einer konstanten Temperatur von 4 -35 °C getrocknet.

[0061] (4) Es wird eine Lösung zum Einweichen für die Blockierungsbehandlung hergestellt. Eine tatsächliche Produktionsmenge an gereinigtem Wasser wird in einen Mischtank gegeben; dann werden Phosphatpuffer, Zucker, Rinderserumalbumin und Thimerosal mit einer elektronischen Analysenwaage gewogen und dann direkt in den Mischtank unter Rühren zugegeben, bis sie sich vollständig aufgelöst haben, dann wird gereinigtes Wasser zugegeben, um das erforderliche Volumen zu erreichen, und anschließend wird mindestens 10 Minuten lang gut gerührt. In der vorbereiteten Lösung für die Blockierungsbehandlung beträgt die Konzentration der Phosphatpufferlösung 0,08 Mol, der Gewichtsprozentanteil des Zuckers 0,7 %, der Gewichtsprozentanteil des Rinderserumalbumins 0,8 % und der Gewichtsprozentanteil von Thimerosal 0,08 %.

[0062] (5) Der Beschichtungsfilm wird in einen Verarbeitungstank gegeben, und der vorbereitete 0,01M PBS-Puffer mit einer Temperatur von etwa 36 °C wird hinzugefügt. Es ist darauf zu achten, dass jeder Film 5 Minuten lang vollständig in den 0,01M PBS-Puffer eingetaucht ist (der Film darf sich nicht bewegen und überlappen). Der Film wird aus dem Verarbeitungstank entnommen, und der 0,01M PBS-Puffer wird verworfen. Dann wird der Film, der einmal 5 Minuten lang in den 0,01M-PBS-Puffer getaucht wurde, in den Verarbeitungstank gelegt, dann wird der vorbereitete 0,01M-PBS-Puffer hinzugefügt, um sicherzustellen, dass jeder Film 30 Minuten lang vollständig in die 0,01M-PBS-Pufferlösung eingetaucht ist (der Film bewegt sich nicht und überlappt nicht). Danach wird der Film aus dem Verarbeitungstank genommen und die 0,01M PBS-Pufferlösung verworfen. Dann wird der Film, der zweimal in die 0,01M PBS-Pufferlösung getaucht wurde, in den Verarbeitungstank gelegt und in die vorbereitete Blockierungslösung getaucht, um sicherzustellen, dass jeder Film 15 Minuten lang vollständig in die Behandlungslösung getaucht wird (der Film bewegt sich nicht und überlappt nicht). Danach wird der Film aus dem Verarbeitungstank entnommen und der Film jedes Rahmens mit einer Pinzette zur Seite gezogen, um sicherzustellen, dass der Film nicht aus dem Rahmen herausrutscht und sich nicht überschneidet, und anschließend werden der Rahmen und der Film erneut 20 Minuten lang in die Behandlungslösung getaucht. Danach wird der Film aus dem Behandlungstank genommen und mit einer Pinzette auf eine Gaze gezogen, um ihn ein wenig zu trocknen (achten Sie darauf, dass der Film beim Trocknen nicht reißt oder sich verformt, achten Sie auf den Trocknungsgrad des Films).

[0063] (6) Auf ein Brett geklebt und getrocknet

[0064] Ein weißes Papier in der Mitte einer Schnittlinie auf einem doppelseitigen Klebeband eines Klebebretts wird entfernt. Ein Bediener sollte Einweghandschuhe in der linken Hand tragen und eine Pinzette in der rechten Hand halten und den Film in den leeren Raum in der Mitte des Klebebretts legen und sicherstellen, dass sich ein Eckschnitt an der oberen rechten Seite des Bretts befindet und die rechte Seite des Klebebretts mit der rechten Seite des Films bündig ist. Um Fehler im Produktionsprozess zu vermeiden, muss sichergestellt werden, dass die Position der Farbentwicklung relativ genau ist. Der Film wird auf das Brett geklebt, indem er mit der Oberseite eines Endes der Qualitätskontrolllinie ausgerichtet wird. Nach dem Aufkleben des Films auf die Klebebandplatte wird die Filmoberfläche mit doppelseitigem Klebeband geglättet, um Luftblasen zu vermeiden. Die Raumtemperatur wird auf 18-28 °C geregelt, und die relative Luftfeuchtigkeit beträgt <= 40 %. Es muss auch sichergestellt werden, dass die Luft im Trockenraum zirkulieren kann und der Wind eines Entfeuchters nicht direkt auf die Folienoberfläche bläst. Die Trocknungszeit beträgt = 4 Stunden.

2. Herstellung des ersten Adsorptionskissens aus kolloidalem Gold [0065] (1) Herstellung der kolloidalen Goldkomplexiösung: Die tatsächliche Produktionsmenge

an gereinigtem Wasser wird in den Mischtank gegeben; dann werden Trehalose, Rinderserumalbumin, Trinatriumeitrat, Polyethylenglykol und NaNs mit einer elektronischen Analysenwaage gewogen und direkt in den Mischtank gegeben, wobei gereinigtes Wasser zugegeben wird, um das erforderliche Volumen zu erreichen, und anschließend mindestens 30 Minuten lang gut gerührt, um eine kolloidale Goldkomplexiösung herzustellen. Die hergestellte kolloidale Goldkomplexiösung enthält 5 Gewichtsprozent Trehalose, 2 Gewichtsprozent Rinderserumalbumin, 0,5 Gewichtsprozent Trinatriumeitrat, 0,05 Gewichtsprozent Polyethylenglykol und 0,05 Gewichtsprozent NaNs.

[0066] (2) Die benötigte Menge an kolloidalem Gold wird mit einem Messzylinder abgemessen und der PH-Wert auf 6,5-7,0 eingestellt, indem 0,2 mol/L Kaliumcarbonatlösung mit 0,53 Vol.-% des kolloidalen Goldes unter Rühren auf einem Magnetrührer 15 Minuten lang zugegeben wird, wodurch ein eingestelltes kolloidales Gold erhalten wird. Der monoklonale Antikörper gegen humanes Choriongonadotropin B-hCG wird mit dem eingestellten kolloidalen Gold in einer Menge von 5 ug/ml markiert, d. h. eine geeignete Menge an monoklonalem Anti-humanem Choriongonadotropin-B-hCG-Antikörper wird mit bidestilliertem Wasser auf 5 Vol.-% verdünnt, wobei gut gemischt wird, um eine monoklonale Anti-humanem Choriongonadotropin-B-hCG-Antikörperlösung mit einer Konzentration von 5 ug/ml zu erhalten, die in das eingestellte kolloidale Gold gegeben wird, gefolgt von einem 30-minütigen Rühren auf einem Magnetrührer, und dann werden 0,5 Vol.-% Stabilisator zugegeben und 30 Minuten lang gerührt, anschließend zentrifugiert, wobei ein markierter kolloidaler Goldniederschlag gesammelt wird, der mit der kolloidalen Goldkomplexlösung wieder aufgelöst wird, und anschließend mit einem Magnetrührer gerührt wird, bis die Mischung homogen ist, wodurch eine wieder aufgelöste kolloidale Goldlösung erhalten wird. Der Volumenprozentsatz des markierten kolloidalen Goldpräzipitats in der kolloidalen Goldkomplexlösung beträgt 3 %.

[0067] (3) 3 Vol.-% der wiederaufgelösten kolloidalen Goldlösung aus dem obigen Schritt (2) werden entnommen und mit der kolloidalen Goldkomplexliösung mit 40 Vol.-% wiederaufgelöst und anschließend mit einem Magnetrührer gemischt. Die gleichmäßig gemischte kolloidale Goldlösung wird mit 50 ml/cm? auf das vorbereitete kolloidale Goldadsorptionskissen gegossen und anschließend zum Trocknen für = 4 Stunden in einen Trockenraum gebracht, wobei die Temperatur im Trockenraum auf 18-28 °C und die relative Luftfeuchtigkeit auf <= 40 % geregelt wird. Es ist darauf zu achten, dass die Luft nicht behindert wird und der Luftstrom nicht direkt auf das kolloidale Goldadsorptionskissen geblasen werden kann. Das getrocknete kolloidale Goldadsorptionskissen wird in einen Alufolienbeutel mit Trockenmittel gelegt, zur Lagerung versiegelt und als erstes kolloidales Goldadsorptionskissen gekennzeichnet. Anmerkungen: Die kolloidale Goldlösung ist gegossen, weil das gegossene kolloidale Gold frei geschnitten werden kann, so dass es einfach ist, die Farbtiefe des Produkts einzustellen.

3. Herstellung des zweiten kolloidalen Goldadsorptionskissens

[0068] (1) Die benötigte Menge an kolloidalem Gold wird mit einem Messzylinder abgemessen und der PH-Wert auf 6,5-7,0 eingestellt, indem 0,2 mol/L Kaliumcarbonatlösung mit 0,53 Vol.-% des kolloidalen Goldes unter Rühren auf einem Magnetrührer 15 Minuten lang zugegeben wird, wodurch ein eingestelltes kolloidales Gold erhalten wird. Der monoklonale Antikörper gegen humanes Choriongonadotropin B-hCG wird mit dem eingestellten kolloidalen Gold in einer Menge von 5 ug/ml markiert, d. h. eine geeignete Menge an monoklonalem Anti-humanem Choriongonadotropin-B-hCG-Antikörper wird mit bidestilliertem Wasser auf 5 Vol.-% verdünnt, wobei gut gemischt wird, um eine monoklonale Anti-humanem Choriongonadotropin-B-hCG-Antikörperlösung mit einer Konzentration von 5 ug/ml zu erhalten, die in das eingestellte kolloidale Gold gegeben wird, gefolgt von einem 30-minütigen Rühren auf einem Magnetrührer, und dann werden 0,5 Vol.-% Stabilisator zugegeben und 30 Minuten lang gerührt, anschließend zentrifugiert, wobei ein markierter kolloidaler Goldniederschlag gesammelt wird, der mit der kolloidalen Goldkomplexlösung wieder aufgelöst wird, und anschließend mit einem Magnetrührer gerührt wird, bis die Mischung homogen ist, wodurch eine wieder aufgelöste kolloidale Goldlösung erhalten wird. Der Volumenprozentsatz des markierten kolloidalen Goldpräzipitats in der kolloidalen Goldkomplexlösung beträgt 3 %.

[0069] (2) 3 Vol.-% die wieder aufgelöste kolloidale Goldlösung des obigen Schritts (1) wird entnommen und mit der kolloidalen Goldkomplexiösung zu 40 Vol.-% wieder aufgelöst, und dann wird freier B-Antikörper entsprechend einem Massenverhältnis von anti-humanem Choriongonadotropin B-hCG monoklonalem Antikörper zu freiem ß-Antikörper von 1:10 zugegeben, gefolgt von Mischen auf einem Magnetrührer. Die gleichmäßig gemischte kolloidale Goldlösung wird mit 50 ul/cm? auf das vorbereitete kolloidale Goldadsorptionskissen gegossen und anschließend zum Trocknen für = 4 Stunden in einen Trockenraum gestellt, wobei die Temperatur im Trockenraum auf 18-28 °C und die relative Luftfeuchtigkeit auf <= 40 % eingestellt wird. Es ist darauf zu achten, dass die Luft nicht behindert wird und der Luftstrom nicht direkt auf das kolloidale Goldadsorptionskissen geblasen werden kann. Das getrocknete kolloidale Goldadsorptionskissen wird in einen Alufolienbeutel mit Trockenmittel gelegt, zur Lagerung versiegelt und als zweites kolloidales Goldadsorptionskissen gekennzeichnet. Anmerkungen: Die kolloidale Goldlösung ist gegossen, weil das gegossene kolloidale Gold frei geschnitten werden kann, so dass es einfach ist, die Farbtiefe des Produkts einzustellen.

4. Zusammenbau und Schneiden:

[0070] (1) Ein transparentes Substrat-Halbzeug, das mit dem Nitrocellulose-Film beklebt wurde, wird entnommen, und das immobilisierte ersten kolloidale Gold-Adsorptionskissen wird in einen 0,5 cm x 30 cm breiten Streifen geschnitten mit einer Breite von 0,5 cm, der auf das transparente Substrat geklebt wird und mit dem Nitrocellulose-Film etwa 1 mm überlappt. Das erste Wasseradsorptionskissen wird auf das obere Ende des transparenten Substratfilms des Nitrocellulosefilms geklebt und etwa 1 mm mit dem Film überlappt. Das erste Probenkissen wird auf das untere Ende des immobilisierten ersten Adsorptionskissens aus kolloidalem Gold aufgeklebt und mit diesem etwa 1 mm überlappt, wobei es zur Verwendung gekennzeichnet wird.

[0071] (2) Gemäß der entsprechenden Reaktionsvorrichtung wird das zusammengesetzte Substrat in einen Testpapierstreifen geschnitten, der als erster Testpapierstreifen gekennzeichnet ist.

[0072] (3) Ein transparentes Substrat-Halbzeug, das mit dem Nitrocellulose-Film beklebt wurde, wird entnommen, und das immobilisierte zweite kolloidale Gold-Adsorptionskissen wird in einen 0,5 cm x 30 cm breiten Streifen geschnitten mit einer Breite von 0,5 cm, der auf das transparente Substrat geklebt wird und mit dem Nitrocellulose-Film etwa 1 mm überlappt. Das zweite Wasseradsorptionskissen wird auf das obere Ende des transparenten Substratfilms des Nitrocellulosefilms geklebt und etwa 1 mm mit dem Film überlappt. Das zweite Probenkissen wird auf das untere Ende des immobilisierten zweiten Adsorptionskissens aus kolloidalem Gold aufgebracht und mit diesem etwa 1 mm überlappt, wobei es zur Verwendung gekennzeichnet wird.

[0073] (4) Gemäß der entsprechenden Reaktionsvorrichtung wird das zusammengesetzte Substrat in einen Testpapierstreifen geschnitten, der als zweiter Testpapierstreifen gekennzeichnet ist.

BEISPIEL 4

[0074] Beispiel 4 stellt ein Verfahren zur Herstellung eines hCG-Zyklus-Testpapierstreifens von Beispiel 1 bereit, das die folgenden Schritte umfasst:

1. Herstellung eines Nitrocellulosefilms:

[0075] (1) Ein Nitrocellulosefilm mit einer Porengröße von 3-10 um wird in einen Film mit Spezifikationen mit einer Breite größer oder gleich 2,0 cm und einer Länge von 30,5 cm, wie benötigt, geschnitten.

[0076] (2) 1,5mg/ml monoklonaler Anti-a-HCG-Antikörper wird mit 0,1M Phosphatpuffer zur Beschichtung der Nachweislinie hergestellt, und 1,5 mg/ml polyklonaler Anti-Maus-IgG-Antikörper wird mit 0,85 Gewichtsprozent Natriumchloridpuffer zur Beschichtung der Qualitätskontrolllinie hergestellt.

[0077] (3) Eine Antikörperbeschichtungsoberfläche des Nitrocellulosefilms wird markiert. Die Antikörperlösung der zu beschichtenden Nachweislinie und die Antikörperlösung der zu beschichtenden Qualitätskontrolllinie sollten gleichmäßig und parallel auf den Film aufgetragen werden,

und die Nachweislinie und die Qualitätskontrolllinie sollten beschichtet werden. Die Nachweisspur und die Qualitätskontrollspur sind in einem Abstand von 0,5 cm angeordnet. Der Nitrocellulosefilm wird bei einer konstanten Temperatur von 4 -35 ° C getrocknet.

[0078] (4) Es wird eine Lösung zum Einweichen für die Blockierungsbehandlung hergestellt. Eine tatsächliche Produktionsmenge an gereinigtem Wasser wird in einen Mischtank gegeben; dann werden Phosphatpuffer, Zucker, Rinderserumalbumin und Thimerosal mit einer elektronischen Analysenwaage gewogen und dann direkt in den Mischtank unter Rühren zugegeben, bis sie sich vollständig aufgelöst haben, dann wird gereinigtes Wasser zugegeben, um das erforderliche Volumen zu erreichen, und anschließend wird mindestens 10 Minuten lang gut gerührt. In der vorbereiteten Lösung für die Blockierungsbehandlung beträgt die Konzentration der Phosphatpufferlösung 0,12 Mol, der Gewichtsprozentanteil des Zuckers 0,3 %, der Gewichtsprozentanteil des Rinderserumalbumins 1,2 % und der Gewichtsprozentanteil von Thimerosal 0,03 %.

[0079] (5) Der Beschichtungsfilm wird in einen Verarbeitungstank gegeben, und der vorbereitete 0,01M PBS-Puffer mit einer Temperatur von etwa 36°C wird hinzugefügt. Es ist darauf zu achten, dass jeder Film 5 Minuten lang vollständig in den 0,01M PBS-Puffer eingetaucht ist (der Film darf sich nicht bewegen und überlappen). Der Film wird aus dem Verarbeitungstank entnommen, und der 0,01M PBS-Puffer wird verworfen. Dann wird der Film, der einmal 5 Minuten lang in den 0,01M-PBS-Puffer getaucht wurde, in den Verarbeitungstank gelegt, dann wird der vorbereitete 0,01M-PBS-Puffer hinzugefügt, um sicherzustellen, dass jeder Film 30 Minuten lang vollständig in die 0,01M-PBS-Pufferlösung eingetaucht ist (der Film bewegt sich nicht und überlappt nicht). Danach wird der Film aus dem Verarbeitungstank genommen und die 0,01M PBS-Pufferlösung verworfen. Dann wird der Film, der zweimal in die 0,01M PBS-Pufferlösung getaucht wurde, in den Verarbeitungstank gelegt und in die vorbereitete Blockierungslösung getaucht, um sicherzustellen, dass jeder Film 15 Minuten lang vollständig in die Behandlungslösung getaucht wird (der Film bewegt sich nicht und überlappt nicht). Danach wird der Film aus dem Verarbeitungstank entnommen und der Film jedes Rahmens mit einer Pinzette zur Seite gezogen, um sicherzustellen, dass der Film nicht aus dem Rahmen herausrutscht und sich nicht überschneidet, und anschließend werden der Rahmen und der Film erneut 20 Minuten lang in die Behandlungslösung getaucht. Danach wird der Film aus dem Behandlungstank genommen und mit einer Pinzette auf eine Gaze gezogen, um ihn ein wenig zu trocknen (achten Sie darauf, dass der Film beim Trocknen nicht reißt oder sich verformt, achten Sie auf den Trocknungsgrad des Films).

[0080] (6) Auf ein Brett geklebt und getrocknet

[0081] Ein weißes Papier in der Mitte einer Schnittlinie auf einem doppelseitigen Klebeband eines Klebebretts wird entfernt. Ein Bediener sollte Einweghandschuhe in der linken Hand tragen und eine Pinzette in der rechten Hand halten und den Film in den leeren Raum in der Mitte des Klebebretts legen und sicherstellen, dass sich ein Eckschnitt an der oberen rechten Seite des Bretts befindet und die rechte Seite des Klebebretts mit der rechten Seite des Films bündig ist. Um Fehler im Produktionsprozess zu vermeiden, muss sichergestellt werden, dass die Position der Farbentwicklung relativ genau ist. Der Film wird auf das Brett geklebt, indem er mit der Oberseite eines Endes der Qualitätskontrolllinie ausgerichtet wird. Nach dem Aufkleben des Films auf die Klebebandplatte wird die Filmoberfläche mit doppelseitigem Klebeband geglättet, um Luftblasen zu vermeiden. Die Raumtemperatur wird auf 18-28 °C geregelt, und die relative Luftfeuchtigkeit beträgt = 40 %. Es muss auch sichergestellt werden, dass die Luft im Trockenraum zirkulieren kann und der Wind eines Entfeuchters nicht direkt auf die Folienoberfläche bläst. Die Trocknungszeit beträgt = 4 Stunden.

2. Herstellung des ersten Adsorptionskissens aus kolloidalem Gold

[0082] (1) Herstellung der kolloidalen Goldkomplexiösung: Die tatsächliche Produktionsmenge an gereinigtem Wasser wird in den Mischtank gegeben; dann werden Trehalose, Rinderserumalbumin, Trinatriumeitrat, Polyethylenglykol und NaNs mit einer elektronischen Analysenwaage gewogen und direkt in den Mischtank gegeben, wobei gereinigtes Wasser zugegeben wird, um das erforderliche Volumen zu erreichen, und anschließend mindestens 30 Minuten lang gut gerührt, um eine kolloidale Goldkomplexiösung herzustellen. Die hergestellte kolloidale Goldkom-

plexlösung enthält 5 Gewichtsprozent Trehalose, 2 Gewichtsprozent Rinderserumalbumin, 0,5 Gewichtsprozent Trinatriumeitrat, 0,05 Gewichtsprozent Polyethylenglykol und 0,05 Gewichtsprozent NaNs.

[0083] (2) Die benötigte Menge an kolloidalem Gold wird mit einem Messzylinder abgemessen und der PH-Wert auf 6,5-7,0 eingestellt, indem 0,2 mol/L Kaliumcarbonatlösung mit 0,53 Vol.-% des kolloidalen Goldes unter Rühren auf einem Magnetrührer 15 Minuten lang zugegeben wird, wodurch ein eingestelltes kolloidales Gold erhalten wird. Der monoklonale Antikörper gegen humanes Choriongonadotropin B-hCG wird mit dem eingestellten kolloidalen Gold in einer Menge von 5 ug/ml markiert, d. h. eine geeignete Menge an monoklonalem Anti-humanem Choriongonadotropin-B-hCG-Antikörper wird mit bidestilliertem Wasser auf 5 Vol.-% verdünnt, wobei gut gemischt wird, um eine monoklonale Anti-humanem Choriongonadotropin-B-hCG-Antikörperlösung mit einer Konzentration von 5 ug/ml zu erhalten, die in das eingestellte kolloidale Gold gegeben wird, gefolgt von einem 30-minütigen Rühren auf einem Magnetrührer, und dann werden 0,5 Vol.-% Stabilisator zugegeben und 30 Minuten lang gerührt, anschließend zentrifugiert, wobei ein markierter kolloidaler Goldniederschlag gesammelt wird, der mit der kolloidalen Goldkomplexlösung wieder aufgelöst wird, und anschließend mit einem Magnetrührer gerührt wird, bis die Mischung homogen ist, wodurch eine wieder aufgelöste kolloidale Goldlösung erhalten wird. Der Volumenprozentsatz des markierten kolloidalen Goldpräzipitats in der kolloidalen Goldkomplexlösung beträgt 3 %.

[0084] (3) 3 Vol.-% der wiederaufgelösten kolloidalen Goldlösung aus dem obigen Schritt (2) werden entnommen und mit der kolloidalen Goldkomplexlösung mit 40 Vol.-% wiederaufgelöst und anschließend mit einem Magnetrührer gemischt. Die gleichmäßig gemischte kolloidale Goldlösung wird mit 50 ul/cm? auf das vorbereitete kolloidale Goldadsorptionskissen gegossen und anschließend zum Trocknen für = 4 Stunden in einen Trockenraum gestellt, wobei die Temperatur im Trockenraum auf 18-28 °C und die relative Luftfeuchtigkeit auf <= 40 % eingestellt wird. Es ist darauf zu achten, dass die Luft nicht behindert wird und der Luftstrom nicht direkt auf das kolloidale Goldadsorptionskissen geblasen werden kann. Das getrocknete kolloidale Goldadsorptionskissen wird in einen Aluminiumfolienbeutel mit Trockenmittel gelegt, zur Lagerung versiegelt und als erstes kolloidales Goldadsorptionskissen gekennzeichnet. Anmerkungen: Die kolloidale Goldlösung ist gegossen, weil das gegossene kolloidale Gold frei geschnitten werden kann, so dass es einfach ist, die Farbtiefe des Produkts einzustellen.

3. Herstellung des zweiten kolloidalen Goldadsorptionskissens

[0085] (1) Die benötigte Menge an kolloidalem Gold wird mit einem Messzylinder abgemessen und der PH-Wert auf 6,5-7,0 eingestellt, indem 0,2 mol/L Kaliumcarbonatlösung mit 0,53 Vol.-% des kolloidalen Goldes unter Rühren auf einem Magnetrührer 15 Minuten lang zugegeben wird, wodurch ein eingestelltes kolloidales Gold erhalten wird. Der monoklonale Antikörper gegen humanes Choriongonadotropin B-hCG wird mit dem eingestellten kolloidalen Gold in einer Menge von 5 ug/ml markiert, d. h. eine geeignete Menge an monoklonalem Anti-humanem Choriongonadotropin-B-hCG-Antikörper wird mit bidestilliertem Wasser auf 5 Vol.-% verdünnt, wobei gut gemischt wird, um eine monoklonale Anti-humanem Choriongonadotropin-B-hCG-Antikörperlösung mit einer Konzentration von 5 ug/ml zu erhalten, die in das eingestellte kolloidale Gold gegeben wird, gefolgt von einem 30-minütigen Rühren auf einem Magnetrührer, und dann werden 0,5 Vol.-% Stabilisator zugegeben und 30 Minuten lang gerührt, anschließend zentrifugiert, wobei ein markierter kolloidaler Goldniederschlag gesammelt wird, der mit der kolloidalen Goldkomplexlösung wieder aufgelöst wird, und anschließend mit einem Magnetrührer gerührt wird, bis die Mischung homogen ist, wodurch eine wieder aufgelöste kolloidale Goldlösung erhalten wird. Der Volumenprozentsatz des markierten kolloidalen Goldpräzipitats in der kolloidalen Goldkomplexlösung beträgt 3 %.

[0086] (2) 3 Vol.-% des im obigen Schritt (1) wieder aufgelösten kolloidalen Goldes werden entnommen und mit der kolloidalen Goldkomplexiösung zu 40 Vol.-% wieder aufgelöst, und dann wird freier B-Antikörper gemäß einem Massenverhältnis von anti-humanem Choriongonadotropin B-hCG monoklonalem Antikörper zu freiem ß-Antikörper von 1:10 zugegeben, gefolgt von Mischen auf einem Magnetrührer. Die gleichmäßig gemischte kolloidale Goldlösung wird mit 50

Wl/cm? auf das vorbereitete kolloidale Goldadsorptionskissen gegossen und anschließend zum Trocknen für = 4 Stunden in einen Trockenraum gestellt, wobei die Temperatur im Trockenraum auf 18-28 °C und die relative Luftfeuchtigkeit auf < 40 % eingestellt wird. Es ist darauf zu achten, dass die Luft nicht behindert wird und der Luftstrom nicht direkt auf das kolloidale Goldadsorptionskissen geblasen werden kann. Das getrocknete kolloidale Goldadsorptionskissen wird in einen Alufolienbeutel mit Trockenmittel gelegt, zur Lagerung versiegelt und als zweites kolloidales Goldadsorptionskissen gekennzeichnet. Anmerkungen: Die kolloidale Goldlösung ist gegossen, weil das gegossene kolloidale Gold frei geschnitten werden kann, so dass es einfach ist, die Farbtiefe des Produkts einzustellen.

4. Zusammenbau und Schneiden:

[0087] (1) Ein transparentes Substrat-Halbzeug, das mit dem Nitrocellulose-Film beklebt wurde, wird entnommen, und das immobilisierte ersten kolloidale Gold-Adsorptionskissen wird in einen 0,5 cm x 30 cm breiten Streifen geschnitten mit einer Breite von 0,5 cm, der auf das transparente Substrat geklebt wird und mit dem Nitrocellulose-Film etwa 1 mm überlappt. Das erste Wasseradsorptionskissen wird auf das obere Ende des transparenten Substratfilms des Nitrocellulosefilms geklebt und etwa 1 mm mit dem Film überlappt. Das erste Probenkissen wird auf das untere Ende des immobilisierten ersten Adsorptionskissens aus kolloidalem Gold aufgeklebt und mit diesem etwa 1 mm überlappt, wobei es zur Verwendung gekennzeichnet wird.

[0088] (2) Gemäß der entsprechenden Reaktionsvorrichtung wird das zusammengesetzte Substrat in einen Testpapierstreifen geschnitten, der als erster Testpapierstreifen gekennzeichnet ist.

[0089] (3) Ein transparentes Substrat-Halbzeug, das mit dem Nitrocellulose-Film beklebt wurde, wird entnommen, und das immobilisierte zweite kolloidale Gold-Adsorptionskissen wird in einen 0,5 cm x 30 cm breiten Streifen geschnitten mit einer Breite von 0,5 cm, der auf das transparente Substrat geklebt wird und mit dem Nitrocellulose-Film etwa 1 mm überlappt. Das zweite Wasseradsorptionskissen wird auf das obere Ende des transparenten Substratfilms des Nitrocellulosefilms geklebt und etwa 1 mm mit dem Film überlappt. Das zweite Probenkissen wird auf das untere Ende des immobilisierten zweiten Adsorptionskissens aus kolloidalem Gold aufgebracht und mit diesem etwa 1 mm überlappt, wobei es zur Verwendung gekennzeichnet wird.

[0090] (4) Gemäß der entsprechenden Reaktionsvorrichtung wird das zusammengesetzte Substrat in einen Testpapierstreifen geschnitten, der als zweiter Testpapierstreifen gekennzeichnet ist.

BEISPIEL 5

[0091] Beispiel 5 stellt ein hCG-Zyklus-Testkit bereit, wie in Fig. 3 (a) gezeigt, das einen ersten Testpapierstreifen 1 und einen zweiten Testpapierstreifen 2 enthält. Wie in Fig. 1 gezeigt, umfasst der erste Testpapierstreifen 1 ein erstes Kunststoffsubstrat 11 und ein erstes Probenkissen 12, ein erstes Adsorptionskissen für kolloidales Gold 16, einen ersten Nitrocellulosefilm 15 und ein erstes Wasseradsorptionskissen 13, die nacheinander übereinander gelegt und aneinander geklebt werden und dann auf dem ersten Kunststoffsubstrat 11 fixiert werden. Der erste Nitrocellulosefilm 15 ist nacheinander mit einer ersten Nachweislinie T1 und einer ersten Qualitätskontrolllinie C1 beschichtet, die parallel angeordnet sind, und die erste Nachweislinie T1 ist auf einer Seite in der Nähe des ersten kolloidalen Adsorptionskissens 16 vorgesehen. Die erste Nachweislinie T1 und die erste Qualitätskontrolllinie C1 sind in einem Abstand von 0,5 cm angeordnet. Das erste kolloidale Goldadsorptionskissen 16 ist mit einem monoklonalen Anti-B-hCG-Antikörper gegen menschliches Choriongonadotropin mit einer Beschichtungskonzentration von 5 ug/Ml beschichtet, die erste Nachweislinie T1 ist mit einem monoklonalen Anti-a-HCG-Antikörper beschichtet, und die erste Qualitätskontrolllinie C1 ist mit einem polyklonalen Anti-Maus-IgG-Antikörper beschichtet.

[0092] Wie in Fig. 2 gezeigt, umfasst der zweite Testpapierstreifen 2 ein zweites Kunststoffsubstrat 21 und ein zweites Probenkissen 22, ein zweites kolloidales Goldadsorptionskissen 26, einen zweiten Nitrocellulosefilm 25 und ein zweites Wasseradsorptionskissen 23, die nacheinander überlappt und aneinander geklebt werden und dann auf dem zweiten Kunststoffsubstrat 21 fixiert

werden. Der zweite Nitrocellulosefilm 25 ist nacheinander mit einer zweiten Nachweislinie T2 und einer zweiten Qualitätskontrolllinie C2 beschichtet, die parallel angeordnet sind, und die zweite Nachweislinie T2 ist auf einer Seite in der Nähe des zweiten kolloidalen Adsorptionskissens 26 vorgesehen. Die zweite Detektionslinie T2 und die zweite Qualitätskontrolllinie C2 sind in einem Abstand von 0,5 cm angeordnet. Das zweite kolloidale Goldadsorptionskissen 26 ist mit einem monoklonalen Anti-B-HCG-Antikörper gegen menschliches Choriongonadotropin und einem freien B-Antikörper beschichtet, die zweite Nachweislinie T2 ist mit einem monoklonalen Anti-aHCG-Antikörper beschichtet, und die zweite Qualitätskontrolllinie C2 ist mit einem polyklonalen Anti-Maus-IgG-Antikörper beschichtet;

[0093] Wie in den Abb. gezeigt. 3 (a) und 3 (b) zeigt, umfasst das hCG-Zyklustest-Kit auch einen Abdeckkörper 3 und ein Gehäuse 4. Das Gehäuse 4 ist mit zwei parallel angeordneten Nuten versehen, in die eine ist ein erster Testpapierstreifen 1 eingesetzt, das erste Probenkissen 12 erstreckt sich außerhalb des Gehäuses 4, und in die andere ist ein zweiter Testpapierstreifen 2 eingesetzt, und das zweite Probenkissen 22 erstreckt sich außerhalb des Gehäuses 4. Der Abdeckkörper 3 ist mit zwei parallelen Fenstern versehen und auf dem Gehäuse 4 abgedeckt. Die erste Nachweislinie T1 und die erste Qualitätskontrolllinie C1 können durch das linke Fenster des Abdeckkörpers 3 beobachtet werden, und die zweite Nachweislinie T2 und die zweite Qualitätskontrolllinie C2 können durch das rechte Fenster des Abdeckkörpers 3 beobachtet werden,

BEISPIEL 6

[0094] Beispiel 6 stellt ein Verfahren zur Herstellung eines hCG-Zyklustest-Kits bereit, das die folgenden Schritte umfasst:

1. Herstellung eines Nitrocellulosefilms:

[0095] (1) Ein Nitrocellulosefilm mit einer Porengröße von 3-10 um wird in einen Film mit Spezifikationen mit einer Breite größer oder gleich 2,0 cm und einer Länge von 30,5 cm, wie benötigt, geschnitten.

[0096] (2) 1,3mg/ml monoklonaler Anti-a-HCG-Antikörper wird mit 0,1M Phosphatpuffer zur Beschichtung der Nachweislinie hergestellt, und 2,0 mg/ml polyklonaler Anti-Maus-IgG-Antikörper wird mit 0,85 Gewichtsprozent Natriumchloridpuffer zur Beschichtung der Qualitätskontrolllinie hergestellt.

[0097] (3) Eine Antikörperbeschichtungsoberfläche des Nitrocellulosefilms wird markiert. Die Antikörperlösung der zu beschichtenden Nachweislinie und die Antikörperlösung der zu beschichtenden Qualitätskontrolllinie sollten gleichmäßig und parallel auf den Film aufgetragen werden, und die Nachweislinie und die Qualitätskontrolllinie sollten beschichtet werden. Die Nachweisspur und die Qualitätskontrollspur sind in einem Abstand von 0,5 cm angeordnet. Der Nitrocellulosefilm wird bei einer konstanten Temperatur von 4 -35 ° C getrocknet.

[0098] (4) Es wird eine Lösung zum Einweichen für die Blockierungsbehandlung hergestellt. Eine tatsächliche Produktionsmenge an gereinigtem Wasser wird in einen Mischtank gegeben; dann werden Phosphatpuffer, Zucker, Rinderserumalbumin und Thimerosal mit einer elektronischen Analysenwaage gewogen und dann direkt in den Mischtank unter Rühren zugegeben, bis sie sich vollständig aufgelöst haben, dann wird gereinigtes Wasser zugegeben, um das erforderliche Volumen zu erreichen, und anschließend wird mindestens 10 Minuten lang gut gerührt. In der vorbereiteten Lösung für die Blockierungsbehandlung beträgt die Konzentration der Phosphatpufferlösung 0,1 Mol, der Gewichtsprozentanteil des Zuckers 0,5 %, der Gewichtsprozentanteil des Rinderserumalbumins 1 % und der Gewichtsprozentanteil von NaNs 0,05 %.

[0099] (5) Der Beschichtungsfilm wird in einen Verarbeitungstank gegeben, und der vorbereitete 0,01M PBS-Puffer mit einer Temperatur von etwa 36°C wird hinzugefügt. Es ist darauf zu achten, dass jeder Film 5 Minuten lang vollständig in den 0,01M PBS-Puffer eingetaucht ist (der Film darf sich nicht bewegen und überlappen). Der Film wird aus dem Verarbeitungstank entnommen, und der 0,01M PBS-Puffer wird verworfen. Dann wird der Film, der einmal 5 Minuten lang in den 0,01M-PBS-Puffer getaucht wurde, in den Verarbeitungstank gelegt, dann wird der vorbereitete 0,01M-PBS-Puffer hinzugefügt, um sicherzustellen, dass jeder Film 30 Minuten lang vollständig

in die 0,01M-PBS-Pufferlösung eingetaucht ist (der Film bewegt sich nicht und überlappt nicht). Danach wird der Film aus dem Verarbeitungstank genommen und die 0,01M PBS-Pufferlösung verworfen. Dann wird der Film, der zweimal in die 0,01M PBS-Pufferlösung getaucht wurde, in den Verarbeitungstank gelegt und in die vorbereitete Blockierungslösung getaucht, um sicherzustellen, dass jeder Film 15 Minuten lang vollständig in die Behandlungslösung getaucht wird (der Film bewegt sich nicht und überlappt nicht). Danach wird der Film aus dem Verarbeitungstank entnommen und der Film jedes Rahmens mit einer Pinzette zur Seite gezogen, um sicherzustellen, dass der Film nicht aus dem Rahmen herausrutscht und sich nicht überschneidet, und anschließend werden der Rahmen und der Film erneut 20 Minuten lang in die Behandlungslösung getaucht. Danach wird der Film aus dem Behandlungstank genommen und mit einer Pinzette auf eine Gaze gezogen, um ihn ein wenig zu trocknen (achten Sie darauf, dass der Film beim Trocknen nicht reißt oder sich verformt, achten Sie auf den Trocknungsgrad des Films).

[00100] (6) Auf ein Brett geklebt und getrocknet

[00101] Ein weißes Papier in der Mitte einer Schnittlinie auf einem doppelseitigen Klebeband eines Klebebretts wird entfernt. Ein Bediener sollte Einweghandschuhe in der linken Hand tragen und eine Pinzette in der rechten Hand halten und den Film in den leeren Raum in der Mitte des Klebebretts legen und sicherstellen, dass sich ein Eckschnitt an der oberen rechten Seite des Bretts befindet und die rechte Seite des Klebebretts mit der rechten Seite des Films bündig ist. Um Fehler im Produktionsprozess zu vermeiden, muss sichergestellt werden, dass die Position der Farbentwicklung relativ genau ist. Der Film wird auf das Brett geklebt, indem er mit der Oberseite eines Endes der Qualitätskontrolllinie ausgerichtet wird. Nach dem Aufkleben des Films auf die Klebebandplatte wird die Filmoberfläche mit doppelseitigem Klebeband geglättet, um Luftblasen zu vermeiden. Die Raumtemperatur wird auf 18-28 °C geregelt, und die relative Luftfeuchtigkeit beträgt <= 40 %. Es muss auch sichergestellt werden, dass die Luft im Trockenraum zirkulieren kann und der Wind eines Entfeuchters nicht direkt auf die Folienoberfläche bläst. Die Trocknungszeit beträgt = 4 Stunden.

2. Herstellung des ersten Adsorptionskissens aus kolloidalem Gold

[00102] (1) Herstellung der kolloidalen Goldkomplexiösung: Die tatsächliche Produktionsmenge an gereinigtem Wasser wird in den Mischtank gegeben; dann werden Trehalose, Rinderserumalbumin, Trinatriumeitrat, Polyethylenglykol und NaNs mit einer elektronischen Analysenwaage gewogen und direkt in den Mischtank gegeben, wobei gereinigtes Wasser zugegeben wird, um das erforderliche Volumen zu erreichen, und anschließend mindestens 30 Minuten lang gut gerührt, um eine kolloidale Goldkomplexiösung herzustellen. Die hergestellte kolloidale Goldkomplexlösung enthält 5 Gewichtsprozent Trehalose, 2 Gewichtsprozent Rinderserumalbumin, 0,5 Gewichtsprozent Trinatriumeitrat, 0,05 Gewichtsprozent Polyethylenglykol und 0,05 Gewichtsprozent NaNs.

[00103] (2) Die benötigte Menge an kolloidalem Gold wird mit einem Messzylinder abgemessen und der PH-Wert auf 6,5-7,0 eingestellt, indem 0,2 mol/L Kaliumcarbonatlösung mit 0,53 Vol.-% des kolloidalen Goldes unter Rühren auf einem Magnetrührer 15 Minuten lang zugegeben wird, wodurch ein eingestelltes kolloidales Gold erhalten wird. Der monoklonale Antikörper gegen humanes Choriongonadotropin B-hCG wird mit dem eingestellten kolloidalen Gold in einer Konzentration von 5 ug/ml markiert, d. h. eine geeignete Menge des monoklonalen Anti-Chorion-Gonadotropin-B-hCG-Antikörpers wird mit doppelt destilliertem Wasser auf 5 Vol.-% verdünnt, wobei gut gemischt wird, um eine Lösung des monoklonalen Anti-Chorion-Gonadotropin-B-hCG-Antikörpers mit einer Konzentration von 5 ug/ml zu erhalten, die in das eingestellte kolloidale Gold gegeben wird, gefolgt von einem 30-minütigen Rühren auf einem Magnetrührer, und dann werden 0,5 Vol.-% Stabilisator zugegeben und 30 Minuten lang gerührt, anschließend zentrifugiert, wobei ein markierter kolloidaler Goldniederschlag gesammelt wird, der mit der kolloidalen Goldkomplexlösung wieder aufgelöst wird, und anschließend mit einem Magnetrührer gerührt wird, bis die Mischung homogen ist, wodurch eine wieder aufgelöste kolloidale Goldlösung erhalten wird. Der Volumenprozentsatz des markierten kolloidalen Goldpräzipitats in der kolloidalen Goldkomplexlösung beträgt 3 %.

[00104] (3) Die wieder aufgelöste kolloidale Goldlösung aus dem obigen Schritt (2) wird entnommen und mit der kolloidalen Goldkomplexiösung zu 40 Vol.-% wieder aufgelöst und anschließend mit einem Magnetrührer gemischt. Die gleichmäßig gemischte kolloidale Goldlösung wird mit 50 Wl/cm? auf das vorbereitete kolloidale Goldadsorptionskissen gegossen und anschließend zum Trocknen für = 4 Stunden in einen Trockenraum gestellt, wobei die Temperatur im Trockenraum auf 18-28 °C und die relative Luftfeuchtigkeit auf <= 40 % eingestellt wird. Es ist darauf zu achten, dass die Luft nicht behindert wird und der Luftstrom nicht direkt auf das kolloidale Goldadsorptionskissen geblasen werden kann. Das getrocknete kolloidale Goldadsorptionskissen wird in einen Alufolienbeutel mit Trockenmittel gelegt, zur Lagerung versiegelt und als erstes kolloidales Goldadsorptionskissen gekennzeichnet. Anmerkungen: Die kolloidale Goldlösung ist gegossen, weil das gegossene kolloidale Gold frei geschnitten werden kann, so dass es einfach ist, die Farbtiefe des Produkts einzustellen.

3. Herstellung des zweiten kolloidalen Goldadsorptionskissens

[00105] (1) Die benötigte Menge an kolloidalem Gold wird mit einem Messzylinder abgemessen und der PH-Wert auf 6,5-7,0 eingestellt, indem 0,2 mol/L Kaliumcarbonatlösung mit 0,53 Vol.-% des kolloidalen Goldes unter Rühren auf einem Magnetrührer 15 Minuten lang zugegeben wird, wodurch ein eingestelltes kolloidales Gold erhalten wird. Der monoklonale Antikörper gegen humanes Choriongonadotropin B-hCG wird mit dem eingestellten kolloidalen Gold in einer Menge von 5 ug/ml markiert, d. h. eine geeignete Menge an monoklonalem Anti-humanem Choriongonadotropin-B-hCG-Antikörper wird mit bidestilliertem Wasser auf 5 Vol.-% verdünnt, wobei gut gemischt wird, um eine monoklonale Anti-humanem Choriongonadotropin-B-hCG-Antikörperlösung mit einer Konzentration von 5 ug/ml zu erhalten, die in das eingestellte kolloidale Gold gegeben wird, gefolgt von einem 30-minütigen Rühren auf einem Magnetrührer, und dann werden 0,5 Vol.-% Stabilisator zugegeben und 30 Minuten lang gerührt, anschließend zentrifugiert, wobei ein markierter kolloidaler Goldniederschlag gesammelt wird, der mit der kolloidalen Goldkomplexlösung wieder aufgelöst wird, und anschließend mit einem Magnetrührer gerührt wird, bis die Mischung homogen ist, wodurch eine wieder aufgelöste kolloidale Goldlösung erhalten wird. Der Volumenprozentsatz des markierten kolloidalen Goldpräzipitats in der kolloidalen Goldkomplexlösung beträgt 3 %.

[00106] (2) 3 Vol.-% des im obigen Schritt (1) wieder aufgelösten kolloidalen Goldes werden entnommen und mit der kolloidalen Goldkomplexiösung zu 40 Vol.-% wieder aufgelöst, und dann wird freier B-Antikörper gemäß einem Massenverhältnis von anti-humanem Choriongonadotropin B-hCG monoklonalem Antikörper zu freiem ß-Antikörper von 1:10 zugegeben, gefolgt von Mischen auf einem Magnetrührer. Die gleichmäßig gemischte kolloidale Goldilösung wird mit 50 Wl/cm? auf das vorbereitete kolloidale Goldadsorptionskissen gegossen und anschließend für > 4 Stunden getrocknet, wobei die Temperatur im Trockenraum auf 18-28 °C und die relative Luftfeuchtigkeit auf <= 40 % eingestellt wird. Es ist darauf zu achten, dass die Luft nicht behindert wird und der Luftstrom nicht direkt auf das kolloidale Goldadsorptionskissen geblasen werden kann. Das getrocknete kolloidale Goldadsorptionskissen wird in einen Alufolienbeutel mit Trockenmittel gelegt, zur Lagerung versiegelt und als zweites kolloidales Goldadsorptionskissen gekennzeichnet. Anmerkungen: Die kolloidale Goldlösung ist gegossen, weil das gegossene kolloidale Gold frei geschnitten werden kann, so dass es einfach ist, die Farbtiefe des Produkts einzustellen.

4. Zusammenbau und Schneiden:

[00107] (1) Ein transparentes Substrat-Halbzeug, das mit dem Nitrocellulose-Film beklebt wurde, wird entnommen, und das immobilisierte ersten kolloidale Gold-Adsorptionskissen wird in einen 0,5 cm x 30 cm breiten Streifen geschnitten mit einer Breite von 0,5 cm, der auf das transparente Substrat geklebt wird und mit dem Nitrocellulose-Film etwa 1 mm überlappt. Das erste Wasseradsorptionskissen wird auf das obere Ende des transparenten Substratfilms des Nitrocellulosefilms geklebt und etwa 1 mm mit dem Film überlappt. Das erste Probenkissen wird auf das untere Ende des immobilisierten ersten Adsorptionskissens aus kolloidalem Gold aufgeklebt und mit diesem etwa 1 mm überlappt, wobei es zur Verwendung gekennzeichnet wird.

[00108] (2) Gemäß der entsprechenden Reaktionsvorrichtung wird das zusammengesetzte Sub-

strat in einen Testpapierstreifen geschnitten, der als erster Testpapierstreifen gekennzeichnet ist.

[00109] (3) Ein transparentes Substrat-Halbzeug, das mit dem Nitrocellulose-Film beklebt wurde, wird entnommen, und das immobilisierte zweite kolloidale Gold-Adsorptionskissen wird in einen 0,5 cm x 30 cm breiten Streifen geschnitten mit einer Breite von 0,5 cm, der auf das transparente Substrat geklebt wird und mit dem Nitrocellulose-Film etwa 1 mm überlappt. Das zweite Wasseradsorptionskissen wird auf das obere Ende des transparenten Substratfilms des Nitrocellulosefilms geklebt und etwa 1 mm mit dem Film überlappt. Das zweite Probenkissen wird auf das untere Ende des immobilisierten zweiten Adsorptionskissens aus kolloidalem Gold aufgebracht und mit diesem etwa 1 mm überlappt, wobei es zur Verwendung gekennzeichnet wird.

[00110] (4) Gemäß der entsprechenden Reaktionsvorrichtung wird das zusammengesetzte Substrat in einen Testpapierstreifen geschnitten, der als zweiter Testpapierstreifen gekennzeichnet ist.

[00111] (5) Der qualifizierte erste Testpapierstreifen 1 wird in die linke Rille des qualifizierten Gehäuses 4 eingelegt. Das Griffpapier ist darüber angeordnet. Dann wird der qualifizierte zweite Testpapierstreifen 2 in die rechte Nut des Gehäuses 4 eingelegt. Der Deckelkörper 3 wird fest verschlossen. Der Text auf dem Deckelkörper 3 sollte mit dem Teststreifen übereinstimmen.

BEISPIEL 7

[00112] Beispiel 7 bietet ein hCG-Zyklustestkit, das sich von dem des Beispiels 5 dadurch unterscheidet, dass, wie in Fig. 5 gezeigt, das erste Probenkissen 12 und das zweite Probenkissen 22 nicht aus dem Gehäuse 4 herausragen. Der Abdeckkörper 3 ist mit vier Fenstern versehen, von denen zwei mit den am Gehäuse 4 angeordneten Nuten korrespondieren, so dass die erste Detektionslinie T1, die erste Qualitätskontrolllinie C1, die zweite Detektionslinie T2 und die zweite Qualitätskontrolllinie C2 auf dem Abdeckkörper 3 sichtbar sind. Die beiden Fenster entsprechen dem ersten Probenkissen 12 und dem zweiten Probenkissen 22, so dass das erste Probenkissen 12 und das zweite Probenkissen 22 auf dem Abdeckkörper 3 freiliegen. Die Probe wird mit Hilfe eines Tropfers auf das erste Probenkissen 12 und das zweite Probenkissen 22 getropft.

BEISPIEL 8

[00113] Beispiel 8 stellt einen hCG-Zyklustest zur Verfügung, der sich von dem des Beispiels 5 oder 3 dadurch unterscheidet, dass, wie in Fig. 7 gezeigt, das Gehäuse 4 die Form eines langen Stiftes hat. Der erste Testpapierstreifen 1 und der zweite Testpapierstreifen 2 sind in dem Gehäuse 4 installiert, das erste Probenkissen 12 und das zweite Probenkissen 22 erstrecken sich außerhalb des Gehäuses 4, und der Abdeckkörper 3 ist mit zwei Fenstern zur Beobachtung der Nachweislinie und der Qualitätskontrolllinie versehen.

BEISPIEL 9

[00114] Beispiel 9 stellt einen hCG-Zyklustest zur Verfügung, der sich von dem der Beispiele 5, 3 oder 8 dadurch unterscheidet, dass, wie in Fig. 6 gezeigt, das Gehäuse 4 die Form eines langen Stiftes hat. Der erste Testpapierstreiften 1 und der zweite Testpapierstreifen 2 sind in das Gehäuse 4 eingesetzt. Das Gehäuse 4 ist mit einem Vorsprung versehen, der sich in seiner Mitte in axialer Richtung erstreckt, um den ersten Testpapierstreifen 1 vom zweiten Testpapierstreifen 2 zu trennen, und das Gehäuse 4 ist auch mit einer vorstehenden Struktur an seiner Oberseite versehen, um das erste Probenkissen 12 und das zweite Probenkissen 22 zu platzieren. Der Abdeckkörper 3 ist mit zwei Fenstern zur Beobachtung der Nachweislinie und der Qualitätskontrolllinie versehen. Der Abdeckkörper 3 ist mit zwei Reihen von parallelen Fenstern versehen, die dem ersten Probenkissen 12 und dem zweiten Probenkissen 22 entsprechen. Jede Reihe ist mit drei Fenstern versehen. Die Probe wird mit Hilfe eines Tropfers auf das erste Probenkissen 12 und das zweite Probenkissen 22 getropft oder das erste Probenkissen 12 und das zweite Probenkissen 22 werden zum Testen in die Probe eingetaucht. Mit dem stiftförmigen Kit können die Proben getrennt eingelegt werden, so dass der erste Testpapierstreifen 1 und der zweite Testpapierstreifen 2 sich nicht gegenseitig stören.

BEISPIEL 10

[00115] Beispiel 10 zeigt ein Verfahren zur Bestimmung des Zeitpunkts der menschlichen Schwangerschaft unter Verwendung des hCG-Zyklus-Testpapiersets aus Beispiel 5. Der Test beginnt an dem Tag, an dem die Menstruation kommen sollte, aber nicht kommt. Wenn der Test im Voraus beginnt, sollte er am Tag der erwarteten Menstruation wiederholt werden. Wenn sich die Menstruation verzögert, sollte der Test nach 3 Tagen erneut durchgeführt werden. Bei einem unregelmäßigen Menstruationszyklus sollte vor dem Test der längste Zyklus des letzten Monats berechnet werden. Wenn eine Anwenderin nicht weiß, wann ihr Menstruationszyklus voraussichtlich einsetzen wird, sollte der Test mindestens 19 Tage nach dem letzten ungeschützten Geschlechtsverkehr durchgeführt werden. Der Test wird in den folgenden Schritten durchgeführt: (1) eine getestete Probe, ein Testkit und andere Geräte werden bei Raumtemperatur ins Gleichgewicht gebracht; (2) eine äußere Verpackung des Testkits wird entfernt, und die Testprobe oder die Referenzprobe werden auf dem Testkit markiert; (3) das Probenkissen des ersten Testpapierstreifens und das Probenkissen des zweiten Testpapierstreifens des Testkits werden in eine Urinprobe eingeführt, wie in Fig. 4 gezeigt, müssen das erste Probenkissen 12 und das zweite Probenkissen 22 vollständig in den Urin eingetaucht werden; (4) das erste Probenkissen 12 und das zweite Probenkissen 22 werden nach 3-10 Sekunden herausgenommen und flach hingelegt. Die Ergebnisse der Farbtiefen der ersten Nachweislinie T1 und der zweiten Nachweislinie T2 sollten innerhalb von 3-5 Minuten erfasst werden und sind nach 5 Minuten ungültig.

[00116] Anhand der Farbtiefe der ersten Erkennungslinie T1 und der zweiten Erkennungslinie T2 kann die Anzahl der Schwangerschaftswochen und der Zeitpunkt der Empfängnis geschätzt werden. Die Testergebnisse sind wie folgt: (1) negativ (-): nur die Qualitätskontrolllinien C1 und C2 entwickeln Farbe, und die erste Erkennungslinie T1 und die zweite Erkennungslinie T2 entwickeln keine Farbe, was darauf hinweist, dass sie nicht schwanger sind; (2) positiv (+): die Qualitätskontrolllinien C1 und C2 entwickeln immer Farbe; die Farben der ersten Erkennungslinie T1 und der zweiten Erkennungslinie T2 sind in der folgenden Tabelle 1 dargestellt:

00117] Tabelle 1: Interpretation der Testergebnisse

Ergebnisse Schwangerschaftszeit Vom Arzt festgelegte Schwangerschaftszeit (28 Tage des Menstruationszyklus) Erste Nachweislinie T Das Testergebnis ist 3-4 Wochen

entwickelt Farbe, zweite |"schwanger" (+) und hat Nachweislinie T2 entwi- |eine Schwangerschaftszeit ckelt keine Farbe von etwa 1-2 Wochen

Die zweite Nachweislinie |Das Testergebnis ist 4-5 Wochen

T2 entwickelt eine hellere |"schwanger" (+) und hat Farbe als die erste Nach- | eine Schwangerschaftszeit

weislinie T1 von etwa 2-3 Wochen

Zweite Nachweislinie T2 |Das Testergebnis ist über 5 Wochen entwickelt sich heller oder |"schwanger"(+) und hat eine

näher an der ersten Schwangerschaftszeit von

Nachweislinie T1 mehr als 3 Wochen

[00118] (3) Ungültig: wenn weder der T-Bereich (die erste Nachweislinie T1 und die zweite Nachweislinie T2) noch der C-Kontrollbereich (die erste Qualitätskontrolllinie C1 und die zweite Qualitätskontrolllinie C2) eine Prunosus-Linie aufweisen oder der C-Kontrollbereich (Qualitätskontrolllinie) des Teststreifens keine Prunosus-Linie aufweist, was bedeutet, dass der Teststreifen ungültig ist. (4) Anhand der vorgeschlagenen Schwangerschaftszeit können Sie abschätzen, wann Sie schwanger werden. Der Arzt berechnet den Zeitpunkt der Schwangerschaft jedoch auf der Grundlage des ersten Tages des letzten Menstruationszyklus.

[00119] Die vorliegende Anwendung verwendet das Prinzip der doppelten Antikörper-Sandwich-

Methode und der Immunochromatographie zum qualitativen Nachweis von humanem Choriongonadotropin im Urin, was den Schwangerschaftszyklus anzeigt, und hat einen relativ einfachen Nachweisschritt, und die Ergebnisse können innerhalb von 3-5 Minuten beobachtet werden, und allgemeine Benutzer können selbst testen, die Testergebnisse sind genauer. Gemäß der vorliegenden Erfindung kann die Farbtiefe der ersten Nachweislinie und der zweiten Nachweislinie verwendet werden, um die Anzahl der Schwangerschaftswochen und den Zeitpunkt der Schwangerschaft zu schätzen.

EXPERIMENTELLES BEISPIEL 1

[00120] Aus demselben Probenstapel wird eine Zufallsstichprobe entnommen, wobei das Mindestprobenvolumen nicht weniger als das Dreifache des erforderlichen Testvolumens beträgt.

[00121] Nach der Probenahme wird die zu untersuchende Probe in den gelben Bereich gelegt, der getestet werden soll. Kann sie noch am selben Tag getestet werden, wird sie noch am selben Tag getestet. Kann sie nicht an diesem Tag getestet werden, muss der Test am nächsten Tag durchgeführt werden. Die Papierstreifen, die den Test bestehen, können vorübergehend als Rückstellmuster in den Bereich für qualifizierte Produkte gelegt werden, und dann wird eine bestimmte Menge von Produkten aus der Produktionslinie für das Rückstellmuster des Produkts entsprechend den Anforderungen an die Leistung und das Rückstellmuster entnommen.

1. Die erforderlichen Reagenzien sind wie folgt:

[00122] 0 mIU/ml Probenlösung: Der proteinhaltige Phosphatpuffer (PBS) ist 0 mIU/ml der HCGProbenlösung, wobei das Protein im proteinhaltigen Phosphatpuffer Rinderserumalbumin ist, das 0,5 - 1 Gewichtsprozent des Phosphatpuffers ausmacht.

[00123] 50 mIU/ml, 25 mIU/ml, 12,5 mIU/ml humane Choriongonadotropin (hCG)-Probenlösung, hergestellt aus humanem Choriongonadotropin (hCG)-Standard und dem proteinhaltigen Phosphatpuffer (0,01M PBS), um jeweils eine entsprechende Konzentration zu erreichen.

[00124] 400m IU/ml, 200 mIU/ml, 100 mIU/ml humanes Choriongonadotropin (hCG): Probenlösung, hergestellt aus humanem Choriongonadotropin (hCG)-Standard und proteinhaltigem Phosphatpuffer (PBS), um eine entsprechende Konzentration zu erreichen.

[00125] 500m IU/ml humanes luteinisierendes Hormon (hLH): Nachdem der hLH-Standard mit dem proteinhaltigen Phosphatpuffer (PBS) wieder aufgelöst wurde, werden 0m IU/ml HCG-Probenlösung verwendet, um eine hLH-A-Lösung mit einer Konzentration von 500m IU/ml herzustellen; 25m IU/ml humane Choriongonadotropin-Probenlösung wird zur Herstellung von hLH B-Lösung mit einer Konzentration von 500m IU/ml verwendet; 200m IU/ml humane Choriongonadotropin-Probenlösung wird zur Herstellung von hLH C-Lösung mit einer Konzentration von 500m IU/ml verwendet.

[00126] 1000m IU/ml humanes follikelstimulierendes Hormon (hFSH): Nachdem der hFSH-Standard mit dem proteinhaltigen Phosphatpuffer (PBS) wieder aufgelöst wurde, wird aus 0m IU/ml HCG-Probenlösung hFSH A-Lösung mit einer Konzentration von 1000m IU/ml hergestellt; aus 25m IU/ml humaner Choriongonadotropin-Probenlösung wird hFSH B-Lösung mit einer Konzentration von 1000m IU/ml hergestellt; aus der humanen Choriongonadotropin-Probenlösung wird hFSH C-Lösung mit einer Konzentration von 1000m IU/ml hergestellt.

[00127] 1000u IU/ml humanes schilddrüsenstimulierendes Hormon (hTSH): Nachdem der hTSHStandard mit dem proteinhaltigen Phosphatpuffer (PBS) wieder aufgelöst wurde, werden 0m IU/ml HCG-Probenlösung verwendet, um hTSH A-Lösung mit einer Konzentration von 1000u IU/ml herzustellen; 25m IU/ml humane Choriongonadotropin-Probenlösung wird zur Herstellung von hTSH B-Lösung mit einer Konzentration von 10004 IU/ml verwendet; 200m IU/ml humane Choriongonadotropin-Probenlösung wird zur Herstellung von hTSH C-Lösung mit einer Konzentration von 1000u IU/ml verwendet.

2, Physikalische Eigenschaften:

[00128] Prüfung der optischen Eigenschaften: Der Testpapierstreifen wird entnommen und mit dem Auge betrachtet. Der Papierstreifen sollte sauber und vollständig sein, keine Grate, keine Beschädigung und keine Verschmutzung aufweisen und fest mit dem Material verbunden sein. Wenn es sich um einen Teststift, eine Karte oder einen Stock handelt, muss auch geprüft werden, ob er richtig zusammengesetzt ist.

Breite des Filmstreifens: Papierstreifen für drei Personen werden entnommen, um die Breite des Films auf den Streifen mit einem Lineal zu messen. Chromatographischer Status: regelmäßig, das Kolloid Gold nicht mit Wasser beschichtet, und ein Hintergrund ist im Grunde klar innerhalb von 3-5 Minuten.

3. Die minimale nachweisbare Menge des Tests: Ein nationaler Standard für humanes Choriongonadotropin wird in Standardlösungen mit Konzentrationen von 12,5 mIU/ml, 25 mIU/ml und 50 mIU/ml hergestellt. Die Proben von drei Personen werden extrahiert und getestet. Die Ergebnisse werden innerhalb von 3 bis 5 Minuten beobachtet und zeigen, dass die minimal nachweisbare Menge der ersten Nachweislinie 25 mIU/ml beträgt. Außerdem wird ein nationaler Standard für humanes Choriongonadotropin in Standardlösungen mit Konzentrationen von 100 mIU/ml, 200 mIU/ml und 400 mIU/ml hergestellt. Die Proben von drei Personen werden extrahiert und getestet. Die Ergebnisse werden innerhalb von 3-5 Minuten ermittelt, wobei die minimal nachweisbare Menge der zweiten Nachweislinie 100 mIU/ml beträgt.

4. Spezifität:

[00129] Negative Spezifität: 500m IU/ml hLH A-Lösung, 1000m IU/mI hFSH A-Lösung, 1000uL IU/ml HhTSH A-Lösung werden jeweils 3 mal getestet. Wenn die Ergebnisse der dreimaligen Prüfung jeder Lösung zeigen, dass sowohl die erste als auch die zweite Nachweislinie negativ sind, kann man davon ausgehen, dass das Ergebnis dieser Lösung negativ ist.

Positive Spezifität: 500m IU/ml hLH B-Lösung, 1000m IU/ml hFSH B-Lösung und 100014 IU/ml hTSH B-Lösung werden jeweils 3 mal getestet. Die Ergebnisse der dreimaligen Prüfung jeder Lösung zeigen, dass die erste Nachweislinie positiv ist, während die zweite Nachweislinie keine Farbe entwickelt und somit negativ ist. 500 mIU/mIl hLH C-Lösung, 1000 mIU/mI hFSH C-Lösung und 1000 plU/ml hTSH C-Lösung werden jeweils 3 mal getestet. Die Ergebnisse der dreimaligen Prüfung jeder Lösung zeigen, dass sowohl die erste als auch die zweite Nachweislinie positiv sind, wobei die Farbe der zweiten Nachweislinie deutlich heller ist als die der ersten Nachweislinie.

5. Reproduzierbarkeit:

[00130] 10 Streifen derselben Charge von Teststreifen werden zufällig ausgewählt und mit einem Standard von 25 mIU/ml humanem Choriongonadotropin gemessen. Die Ergebnisse von 10 mal zeigen, dass alle ersten Nachweislinien positiv sind und eine Farbe mit gleichbleibender Intensität haben, und die zweiten Nachweislinien entwickeln keine Farbe und sind negativ. 10 Streifen derselben Charge von Teststreifen werden zufällig ausgewählt und mit einem Standard von 200 mIU/ml humanem Choriongonadotropin gemessen. Die Ergebnisse von 10 mal zeigen, dass die erste und die zweite Nachweislinie positiv sind, wobei die Farbe der zweiten Nachweislinie deutlich heller ist als die der ersten Nachweislinie.

6. Stabilität:

[00131] Die Testpapierstreifen werden 21 Tage lang bei 37 °C oder einen Monat nach Ablauf des Verfallsdatums des Produkts gemäß den Anforderungen der Punkte 2, 3, 4 und 5 getestet. Die Ergebnisse sollten den Anforderungen entsprechen.

7. Unterschied zwischen den Chargen:

[00132] 3 Chargen von Testpapierstreifen werden 10 mal mit 25 mIU/ml humanem Choriongonadotropin-Standard getestet. Die Ergebnisse zeigen, dass alle ersten Nachweislinien positiv

sind und eine einheitliche Farbe entwickeln, während die zweiten Nachweislinien keine Farbe entwickeln und negativ sind. 3 Chargen von Testpapieren werden 10 mal mit 200 mIU/ml humanem Choriongonadotropin-Standard getestet. Die Ergebnisse zeigen, dass die erste Nachweislinie und die zweite Nachweislinie positiv sein sollten, und die Farbe der zweiten Nachweislinie ist deutlich heller als die der ersten Nachweislinie.

8. Hakeneffekt: Wenn die hCG-Konzentration 50.000 mIU/ml überschreitet, kann ein Hakeneffekt auftreten.

[00133] Das Testpapier für den humanen Choriongonadotropin-Zyklus wird zum qualitativen Nachweis von humanem Choriongonadotropin (hCG) im Urin von Schwangeren verwendet und gibt Hinweise auf den Schwangerschaftszyklus.

[00134] Humanes Choriongonadotropin (hCG) ist ein Glykoprotein-Hormon, das während der Schwangerschaft von den Trophoblastenzellen der Plazenta ausgeschieden wird. Det bestär af to forskellige underenheder, a und ß, der er forbundet ved en ikke-kovalent binding. Während der Produktion, der Sekretion und des Metabolismus der Hormone durchlaufen die hCG-Moleküle verschiedene Veränderungen wie Ruptur und Dissoziation, so dass sie in verschiedenen molekularen Formen im Blut und Urin vorliegen. hCG ist das einzige Plazentahormon, das nicht mit der Zunahme des Plazentagewichts zunimmt. Die hCG-Konzentration beträgt 5-50 mmlU/ml im Blut und >25 mIU/ml im Urin nach der ersten Schwangerschaftswoche, erreicht ihren Höchststand nach etwa 8-10 Wochen und nimmt nach den nächsten 1-2 Wochen rasch ab, um dann allmählich zu sinken und bis zur Entbindung bei etwa 1/5-1/10 des Höchststandes zu bleiben. Die vorliegende Anwendung verwendet das Prinzip der doppelten Antikörper-Sandwich-Methode und der Immunochromatographie zum qualitativen Nachweis von menschlichem Choriongonadotropin im Urin, was auf den Schwangerschaftszyklus hinweist, mit relativ einfachem Nachweisschritt, und die Ergebnisse können innerhalb von 3-5 Minuten beobachtet werden, und allgemeine Benutzer können selbst testen, die Testergebnisse sind genauer. Gemäß der vorliegenden Erfindung kann die Farbtiefe der ersten Nachweislinie und der zweiten Nachweislinie verwendet werden, um die Anzahl der Schwangerschaftswochen und den Zeitpunkt der Schwangerschaft zu schätzen.

[00135] Es ist offensichtlich, dass die oben genannten Ausführungsformen lediglich Beispiele für die Klarheit der Darstellung sind, und sind nicht beabsichtigt, die Ausführungsformen zu begrenzen. Andere Variationen oder Modifikationen in verschiedenen Formen können von Fachleuten im Hinblick auf die obige Beschreibung vorgenommen werden. Es besteht keine Notwendigkeit und keine Möglichkeit, alle Ausführungsformen hier darzustellen. Die offensichtlichen Variationen oder Modifikationen, die sich daraus ergeben, fallen noch in den Schutzbereich der vorliegenden Anmeldung.

BEZUGSZEICHENLISTE

1-Erster Testpapierstreifen

2-Zweiter Testpapierstreifen 3-Deckelkörper

4-Gehäuse

11-erstes Kunststoffsubstrat

12-erstes Probenkissen

13-erstes Wasseradsorptionskissen 14-erste Schutzfolie

15-erste Nitrocellulosefolie

16-erstes Kolloidgoldadsorptionskissen T1-erste Nachweislinie

C1 - erste Qualitätskontrolllinie

21 - zweites Kunststoffsubstrat

22 - zweites Probenkissen

23 - zweites Wasseradsorptionskissen 24 - zweiter Schutzfilm

25 - zweiter Nitrocellulosefilm

26 - zweites kolloidales Goldadsorptionskissen T2 - zweite Nachweislinie

C2 - zweite Qualitätskontrolllinie.

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Claims

Ansprüche

1. hCG-Zyklus-Testpapierstreifen, dadurch gekennzeichnet, dass dieser einen ersten Testpapierstreifen und einen zweiten Testpapierstreifen umfasst, wobei der erste Testpapierstreifen und der zweite Testpapierstreifen jeweils folgende Komponenten umfassen : ein Substrat, und ein Probekissen, ein kolloidales Goldadsorptionskissen, eine Antikörper-Tragfolie sowie ein Wasserabsorptionskissen, die nacheinander auf das Substrat geklebt sind; wobei das Probekissen, das kolloidale Goldadsorptionskissen, die Antikörper-Tragfolie und das Wasserabsorptionskissen nur mit dem dazu benachbarten Kissen davon in Kontakt stehen und sich nur teilweise damit überlappen, die Antikörper-Tragfolie eine Qualitätskontrolllinie und eine Nachweislinie aufweist, die sich in einem gewissen Abstand voneinander befinden, wobei die Qualitätskontrolllinie in der Nähe des Wasserabsorptionskissens angeordnet ist und die Nachweislinie sich in der Nähe des kolloidalen Goldadsorptionskissens befindet; wobei eine Monoklonal-Antikörper-Konjugation aus antihumanem Choriongonadotropin ßhCG und kolloidalem Gold am kolloidalen Goldadsorptionskissen des ersten Testpapierstreifens adsorbiert wird, und eine Monoklonal-Antikörper-Konjugation aus antihumanem Choriongonadotropin B-hCG und kolloidalem Gold sowie ein freier B-Antikörper am kolloidalen Goldadsorptionskissen des zweiten Testpapierstreifens absorbiert werden; wobei die Nachweislinie mit einem antihumanen Choriongonadotropin a-hCG MonoklonalAntikörpern beschichtet ist; wobei die Qualitätskontrolllinie mit einem Anti-Maus IgG-PoIyklonal-Antikörpern beschichtet ist.

2. hCG-Zyklus-Testpapierstreifen nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die Antikörper-Tragfolie eine Nitrocellulosefolie mit einer Porengröße von 3-10 um ist.

3. hCG-Zyklus-Testpapierstreifen nach Ansprüche 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, dass das Probekissen und das Wasserabsorptionskissen jeweils mit einer Schutzfolie versehen sind.

4. Verfahren zur Vorbereitung eines hCG-Zyklus-Testpapierstreifens nach einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, dass es folgende Schritte umfasst: S10: Beschichten einer Antikörper-Trägerfolie mit einer Nachweislinie und einer Qualitätskontrolllinie, parallel konfiguriert im Abstand von 0,3-0,7 cm, und Trocknen bei einer konstanten Temperatur von 4-35 °C; S20: Eintauchen der in Schritt S10 erhaltenen Antikörper-Trägerfolie in einen PBS-Puffer, und anschließend Eintauchen in eine blockierende Behandlungslösung und Trocknen bei einer Temperatur von 18-28 °C sowie einer relativen Feuchtigkeit von < 40 %; S30: Vorbereiten einer Lösung aus einem Komplex von kolloidalem Gold und Einstellen des pH-Wertes auf 6,5-7,0, Hinzufügen antihumanes Choriongonadotropin B-hCG MonoklonalAntikörpers, und anschließend Hinzufügen eines Stabilisators für eine gute Mischfähigkeit, Zentrifugieren und Auffangen eines Niederschlags, Verwenden der Lösung aus einem Komplex von kolloidalem Gold, um den Niederschlag erneut zu auflösen, Aufgießen auf ein kolloidales Goldadsorptionskissen eines ersten Testpapierstreifens, und anschließend Trocknen, Versiegeln und Lagern; S40: Vorbereiten einer Lösung aus einem Komplex von kolloidalem Gold und Einstellen des pH-Wertes auf 6,5-7,0, Hinzufügen antihumanes Choriongonadotropin B-hCG MonoklonalAntikörpers, und anschließend Hinzufügen eines Stabilisators für eine gute Mischfähigkeit, Zentrifugieren und Auffangen eines Niederschlags, Verwenden der Lösung aus einem Komplex von kolloidalem Gold, um den Niederschlag zu rekonstituieren, und anschließend Hinzufügen freies B-Antikörpers für eine gute Mischfähigkeit, Aufgießen auf ein kolloidales Goldadsorptionskissen eines zweiten Testpapierstreifens, und anschließend Trocknen, Versiegeln und Lagern; S50: Kleben eines Probekissens, des kolloidalen Goldadsorptionskissens des ersten Testpapierstreifens, der Antikörper-Tragfolie und eines Wasseradsorptionskissens sequenziell entlang einer Längsrichtung eines Substrates, um einen ersten Testpapierstreifen zu erhal-

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ten, und Kleben des kolloidalen Goldadsorptionskissens des zweiten Testpapierstreifens, der Antikörper-Tragfolie und eines Wasseradsorptionskissens sequenziell entlang einer Längsrichtung eines Substrates, um einen zweiten Testpapierstreifen zu erhalten.

Verfahren nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, dass die Konzentration von zur Beschichtung der Nachweislinie verwendetem antihumanem Choriongonadotropin-a-hCG-Monoklonal-Antikörpern 1,1-1,5 mg/mL beträgt, vorzugsweise 1,3 mg/mL; und die Konzentration von zur Beschichtung der Qualitätskontrolllinie verwendetem Anti-Maus-IgG-PolyklonalAntikörpern 1,5-2,5 mg/mL beträgt, vorzugsweise 2 mg/mL.

Verfahren nach Ansprüche 4 oder 5, dadurch gekennzeichnet, dass die blockierende Behandlungslösung 0,08-0,12 Mol Pufferlösung, zu 0,3-0,7 Gewichtsprozent Zucker und zu 0,8-1,2 Gewichtsprozent blockierendes Protein sowie zu 0,03-0,08 Gewichtsprozent Konservierungsmittel, vorzugsweise 0,1 Mol Pufferlösung, zu 0,5 Gewichtsprozent Zucker, zu 1 Gewichtsprozent blockierendes Protein und zu 0,05 Gewichtsprozent Konservierungsmittel umfasst.

Verfahren nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, dass die Pufferlösung-Phosphatpuffer ist, der Zucker Saccharose oder Trehalose ist, das Konservierungsmittel NaNs oder Thimerosal ist, und das blockierende Protein Kasein oder Rinderserumalbumin ist.

Verfahren nach einem der Ansprüche 4 bis 7, dadurch gekennzeichnet, dass die Konzentration des antihumanen Choriongonadotropin-B-hCG-Monoklonal-Antikörpers aus Schritt S30 5 ug/mL beträgt.

Verfahren nach einem der Ansprüche 4 bis 8, dadurch gekennzeichnet, dass die Konzentration antihumanes Choriongonadotropin-B-hCG-Monoklonal-Antikörpers aus Schritt S40 5 uUg/mL beträgt und das Gewichtsverhältnis des freien ßB-Antikörpers zu dem antihumanen Choriongonadotropin-B-hCG-Monoklonal-Antikörpern 10:1 beträgt.

Verfahren nach einem der Ansprüche 4 bis 9, dadurch gekennzeichnet, dass die Monoklonal-Antikörper-Konjugation aus antihumanem Choriongonadotropin-B-hCG und kolloidalem Gold auf das kolloidale Goldadsorptionskissen des ersten Testpapierstreifens gegossen wird, mit einer Gussmenge von 50 ul/cm®;

die Monoklonal-Antikörper-Konjugation aus antihumanem Choriongonadotropin B-hCG und der freie B-Antikörper werden auf das kolloidale Goldadsorptionskissen des zweiten Testpapierstreifens gegossen, mit einer Gussmenge von 50 ul/cm?.

hCG-Zyklus-Test-Kit, dadurch gekennzeichnet, dass dieses einen hCG-Zyklus-Testpapierstreifen nach einem der Ansprüche 1 bis 3 oder einen mittels des Verfahrens nach einem der Ansprüche 4 bis 10 vorbereiteten hCG-Zyklus-Testpapierstreifen umfasst.

hCG-Zyklus-Test-Kit nach Anspruch 11, dadurch gekennzeichnet, dass dieses ferner ein Gehäuse aufweist, wobei das Gehäuse mit zwei Nuten versehen ist, die parallel angeordnet sind und jeweils zur Positionierung des ersten Testpapierstreifens und des zweiten Testpapierstreifens benutzt werden.

hCG-Zyklus-Test-Kit nach Anspruch 12, dadurch gekennzeichnet, dass es ferner einen Deckelkörper umfasst, wobei der Deckelkörper mit zwei parallel angeordneten Fenstern versehen und am Gehäuse lösbar abgedeckt ist, und die Nachweislinie sowie die Qualitätskontrolllinie des ersten Testpapierstreifens bzw. des zweiten Testpapierstreifens durch die Fenster beobachtet werden können.

Verwendung des hCG-Zyklus-Test-Papierstreifens nach einem der Ansprüche 1 bis 3 oder des mittels des Verfahrens nach einem der Ansprüche 4 bis 10 vorbereiteten hCG-ZyklusTestpapierstreifens oder des hCG-Zyklus-Test-Kits nach einem der Ansprüche 11 bis 13 zum Nachweis der menschlichen Schwangerschaft.

Verfahren zum Nachweis der menschlichen Schwangerschaft unter Verwendung des hCGZyklus-Testpapierstreifens nach einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, dass dieses die folgenden Schritte umfasst:

a) _Entnehmen einer Urin von einer zu testenden Person, und anschließend komplettem Eintauchen der Probekissen des ersten Testpapierstreifens und des zweiten Testpapierstreifens in die Urin für 3 bis 10 Sekunden und anschließend Entnehmen der Probekissen und flachem Hinlegen derselben, danach Beobachten des Ergebnisses für 3 bis 5 Minuten, wobei das Ergebnis nach 5 Minuten nicht mehr gültig ist;

b) Beobachten der Farbtiefe der Nachweislinien T1 und T2 des ersten Testpapierstreifens und des zweiten Testpapierstreifens sowie ob die Qualitätskontrolllinie C1 des ersten Testpapierstreifens und die Qualitätskontrolllinie C2 des zweiten Testpapierstreifens verfärbt sind oder nicht: wobei, falls die Qualitätskontrolllinien C1 und C2 sich eine Farbe entwickeln und die Nachweislinien T1 und T2 sich keine Farbe entwickeln, dies bedeutet, dass die getestete Person nicht schwanger ist;

falls die Qualitätskontrolllinien C1 und C2 sich eine Farbe entwickeln und die Nachweislinie T1 ebenfalls sich eine Farbe entwickelt, die Nachweislinie T2 jedoch sich keine Farbe entwickelt, dies bedeutet, dass die getestete Person schwanger ist, und zwar seit 1 bis 2 Wochen; falls die Qualitätskontrolllinien C1 und C2 sich eine Farbe entwickeln, die Nachweislinie T1 ebenfalls sich eine Farbe entwickelt, und die Nachweislinie T2 sich eine hellere Farbe als die Nachweislinie T1 entwickelt, dies bedeutet, dass die getestete Person schwanger ist, und zwar seit 2 bis 3 Wochen;

falls die Qualitätskontrolllinien C1 und C2 sich eine Farbe entwickeln, die Nachweislinie T1 ebenfalls sich eine Farbe entwickeln, und die Nachweislinie T2 sich eine hellere oder nähere Farbe als die Nachweislinie T1 entwickelt, dies bedeutet, dass die getestete Person schwanger ist, und zwar schon seit mehr als 3 Wochen; und

falls weder die Qualitätskontrolllinien C1 und C2 noch die Nachweislinien T1 und T2 purpurrot zeigen oder keine Qualitätskontrolllinien C1 und C2 purpurrot zeigen, dies bedeutet, dass der hCG-Zyklus-Testpapierstreifen ungültig ist.

Hierzu 4 Blatt Zeichnungen