CN106841605A - 一种促甲状腺激素检测试纸及其制备方法 - Google Patents

一种促甲状腺激素检测试纸及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种促甲状腺激素检测试纸，包括塑料基片，塑料基片上设有上样垫和吸水垫，上样垫和吸水垫上均设有保护膜，上样垫和吸水垫之间下方设有硝酸纤维素膜，上样垫的连接端设有固相化胶体金，固相化胶体金的一端与硝酸纤维素膜的一端搭接在一起，硝酸纤维素膜上依次包被有检测线和质控线；其制造方法步骤包括：硝酸纤维素膜的制备；聚酯纤维条的标记及固相；组装及裁切。本发明应用双抗体夹心法及免疫层析法的原理定性检测尿液中人促甲状腺激素（TSH），检测步骤较为简单，10分钟内就可以观察到结果，一般使用者可以自己进行检测。本发明通过检测线与所配比色卡颜色深浅比较，从而判断是否有甲减的风险。

Description

一种促甲状腺激素检测试纸及其制备方法
技术领域
本发明属于医学检验试剂领域，涉及一种促甲状腺激素检测试纸及其制备方法。
背景技术
促甲状腺激素是调控甲状腺细胞生长和甲状腺激素合成、分泌的主要因子，由垂体促甲状腺激素细胞合成和分泌，并受甲状腺激素的负反馈性调节。甲状腺功能改变时，促甲状腺激素的波动较甲状腺激素更迅速且显著，是反映下丘脑—垂体—甲状腺轴功能的敏感指标，因此检测促甲状腺激素水平可以反映甲状腺功能状态。促甲状腺激素的检测具有重要的临床意义，如甲状腺疾病的筛查、甲状腺疾病治疗效果的监测、非甲状腺疾病时垂体-甲状腺轴功能的判断、亚临床甲状腺疾病的诊断及其治疗指导、毒性弥漫性甲状腺肿（格雷夫斯病）药物治疗的预后判断等。对妊娠期妇女促甲状腺激素的检测较非妊娠人群更有必要。在妊娠期间，甲状腺激素会发生显著变化，通过促甲状腺激素测定及时监测妊娠前以及妊娠期甲状腺功能状况，指导生育时机选择，减少流产、早产、胎儿宫内发育迟缓、死胎、死产、子代内分泌及神经系统发育不全、智力低下等都有重大意义，能避免不良妊娠结局的发生，可降低孕产妇死亡率，减轻社会及家庭的负担，以达到优生优育、提高出生人口素质的目的。
甲状腺功能状态的监测及甲状腺功能紊乱治疗的复查均需定期检测甲状腺功能相关激素水平。但目前，TSH水平的检测均需到医院进行多次抽血检测，有创，患者依从性差；而尿液是重要的体液成分之一，可以无创、大量、反复取样，患者配合度高。血液循环中游离甲状腺激素发挥生物学功能后，部分经尿液排出体外，二者间存在密切相关性。鉴于促甲状腺激素检测结果的重要临床意义，其检测方法有很多，主要有放射免疫分析法（RIA）、酶联免疫吸附（ELISA）、时间分辨免疫荧光测定技术（TRIFMA）、化学发光测定技术等，而这些方法都需要有昂贵的仪器和专业的操作，所需费用较高。
发明内容
本发明的目的是为了克服以上的不足，提供一种检测方便、检测速度快、检测效率高、价格便宜的促甲状腺激素检测试纸及其制备方法。
本发明的目的通过以下技术方案来实现：一种促甲状腺激素检测试纸，包括塑料基片，塑料基片上设有上样垫和吸水垫，上样垫和吸水垫上均设有保护膜，上样垫和吸水垫之间下方设有硝酸纤维素膜，上样垫的连接端设有固相化胶体金，固相化胶体金的一端与硝酸纤维素膜的一端搭接在一起，硝酸纤维素膜上依次包被有检测线和质控线；
促甲状腺激素检测试纸的制备方法，包括以下步骤：
A、硝酸纤维素膜的制备：
a、选择3um～10um孔径的硝酸纤维素膜，根据需要将膜分切成宽度为大于等于2.0cm,长度为30.5cm的规格备用；
b、用0.1M磷酸盐缓冲液配制供检测线包被使用的TSH-α单克隆抗体1.5 mg/ml及用质量百分含量0.85%的氯化钠缓冲液配制供质控线包被使用的抗鼠IgG多克隆抗体1.5mg/ml；
c、选择硝酸纤维素膜的抗体包被面并作标记，将需包被的检测线和质控线平行均匀的包被在膜片上，且检测线与质控线的间距控制在0.5cm，硝酸纤维素膜在4℃～35℃的恒温条件下干燥备用；
d、配置封闭处理浸泡液，向配液罐加入实际生产量的纯化水；用电子分析天平称量0.1Mol缓冲液、质量百分含量0.5%糖份、质量百分含量1%封闭蛋白、质量百分含量0.05％防腐剂，直接加入到配液罐中搅拌，搅拌直至完全溶解，加纯化水定容至所需体积，充分搅拌均匀，搅拌时间不少于10分钟，备用；
e、将包被膜放于处理槽中，加入配好的温度大约在36℃0.01M的PBS缓冲液，确保每条膜完全浸没在0.01M的PBS缓冲液中5分钟，并且膜不移动、不重叠，5分钟后将膜从处理槽中取出，将0.01M的PBS缓冲液倒掉；再将第一次用0.01M的PBS缓冲液浸泡过5分钟的膜放入处理槽中，加入配好的0.01M的PBS缓冲液，确保每条膜完全浸没在0.01M的PBS缓冲液中30分钟，并且膜不移动、不重叠，30分钟后将膜从处理槽中取出，将0.01M的PBS缓冲液倒掉；然后将用0.01M的PBS缓冲液浸泡过两次的膜放于处理槽中，用配好的封闭处理浸泡液浸泡，确保每条膜完全浸没在处理液中15分钟，并且膜不移动、不重叠，15分钟后将膜从处理槽中取出，用镊子将每框的膜重新拉一边，确保膜没有已到框子外面和没有膜重叠后，再将框子和膜放入处理液中继续浸泡20分钟，20分钟后将膜从处理槽中取出，用镊子将膜拉在纱布上晾稍干；
f、贴板干燥：撕去胶板双面胶上切割线中间的白纸，用镊子将膜正好放在胶板中央空白位置并使切角在右上方，且胶板右边与膜右边平齐，避免在生产过程中误差，确保显色位置相对准确，贴板时全部顶C线一头贴，膜贴在胶板上后，隔着双面胶纸抹平膜面，避免有气泡。控制室内的温度18～28℃、相对湿度≤40％，并保证干燥间空气能循环流通且除湿机风不会直接吹到膜面上，干燥时间≥4小时，后备用；
B、聚酯纤维条的标记及固相：
a、胶体金复溶液的配制：向配液罐加入实际生产量的纯化水；用电子分析天平称量质量百分含量5%海藻糖、质量百分含量2%牛血清白蛋白、质量百分含量0.5%柠檬酸三钠、质量百分含量0.05%聚乙二醇、质量百分含量0.05％NaN3，直接加入到配液罐中搅拌，搅拌直至完全溶解，加纯化水定容至所需体积，充分搅拌均匀，搅拌时间不少于30分钟，备用；
b、用量筒量取需要标记量的胶体金，按pH7.0-7.3进行调节，即加入体积百分含量0.45% 0.2mol/L的碳酸钾溶液，于磁力搅拌器上搅拌15分钟后，取TSH-β单克隆抗体按10ug/ml标记胶体金体积体积百分含量5%的双蒸水中稀释并混合均匀，加入胶体金中，于磁力搅拌器上搅拌30分钟后加入0.5‰稳定剂后搅拌30分钟后离心，收集沉淀，用胶体金复溶液按3%复溶，于磁力搅拌器上搅拌至混合均匀，备用；
c、取上述b 体积百分含量3%复溶的胶体金，用胶体金复溶液按体积百分含量40%复溶，于磁力搅拌器上混合均匀，将混合均匀的胶体金溶液按照50μl/cm2的浓度浇于胶体金吸附垫上，置于干燥室晾干≥4个小时，干燥室控制温度18-28℃，相对湿度≤40%，并保证空气畅通且气流不能直接吹于聚酯纤维条上，将干燥好的标记金放入到装有干燥剂的铝箔袋中，密封保存，备用；
注：胶体金为浇制，是因为浇制的胶体金可以自由的裁切宽度，从而方便调节产品的深浅显色。
C、组装及裁切：
a、取已粘贴硝酸纤维素膜的透明基片半成品，将固相了的固相化胶体金按0.5cm宽度裁切成0.5cm×30cm的条状后粘贴在透明基片上，并保持与硝酸纤维素膜呈搭接约1mm，将吸水纸复合在硝酸纤维素膜的透明基片膜上端并与膜搭接约1mm，将吸样载体复合在固相了的胶体金下端并与其搭接约1mm，备用；
b、根据相应的反应装置，将已组装备用的基片，切割成条状试纸，备用。
本发明的进一步改进在于：硝酸纤维素膜制备d步骤和e步骤中的封闭处理浸泡液含有的缓冲液为磷酸盐。
本发明的进一步改进在于：硝酸纤维素膜制备d步骤和e步骤中的封闭处理浸泡液含有的糖份为蔗糖或海藻糖。
本发明的进一步改进在于：硝酸纤维素膜制备d步骤和e步骤中的封闭处理浸泡液含有的封闭蛋白为络蛋白或牛血清白蛋白。
本发明的进一步改进在于：硝酸纤维素膜制备d步骤和e步骤中的封闭处理浸泡液含有的防腐剂为NaN3或硫柳汞。
本发明与现有技术相比具有以下优点：本发明应用双抗体夹心法及免疫层析法的原理定性检测尿液中人促甲状腺激素（TSH），检测步骤较为简单，10分钟内就可以观察到结果，一般使用者可以自己进行检测。本发明通过检测线与所配比色卡颜色深浅比较，从而判断是否有甲减的风险。
附图说明：
图1为本发明的结构示意图；
图中标号：1-塑料基片、2-上样垫、3-吸水垫、4-保护膜、5-硝酸纤维素膜、6-固相化胶体金、T-检测线、C-质控线。
具体实施方式：
为了加深对本发明的理解，下面将结合实施例和附图对本发明作进一步详述，该实施例仅用于解释本发明，并不构成对本发明保护范围的限定。
如图1示出了本发明一种促甲状腺激素检测试纸的一种实施方式，包括塑料基片1，塑料基片1上设有上样垫2和吸水垫3，上样垫2和吸水垫3上均设有保护膜4，上样垫2和吸水垫3之间下方设有硝酸纤维素膜5，上样垫2的连接端设有固相化胶体金6，固相化胶体金6的一端与硝酸纤维素膜5的一端搭接在一起，硝酸纤维素膜5上依次包被有检测线T和质控线C；固相化胶体金为TSH-β单克隆抗体；检测线T包被TSH-α单克隆抗体；质控线C包被抗鼠IgG多克隆抗体。
促甲状腺激素检测试纸的制备方法，包括以下步骤：
A、硝酸纤维素膜的制备：
a、选择3um～10um孔径的硝酸纤维素膜，根据需要将膜分切成宽度为大于等于2.0cm,长度为30.5cm的规格备用；
b、用0.1M磷酸盐缓冲液配制供检测线包被使用的TSH-α单克隆抗体1.5 mg/ml及用质量百分含量0.85%的氯化钠缓冲液配制供质控线包被使用的抗鼠IgG多克隆抗体1.5mg/ml；
c、选择硝酸纤维素膜的抗体包被面并作标记，将需包被的检测线和质控线平行均匀的包被在膜片上，且检测线与质控线的间距控制在0.5cm，硝酸纤维素膜在4℃～35℃的恒温条件下干燥备用；
d、配置封闭处理浸泡液，向配液罐加入实际生产量的纯化水；用电子分析天平称量0.1Mol缓冲液、质量百分含量0.5%糖份、质量百分含量1%封闭蛋白、质量百分含量0.05％防腐剂，直接加入到配液罐中搅拌，搅拌直至完全溶解，加纯化水定容至所需体积，充分搅拌均匀，搅拌时间不少于10分钟，备用；
e、将包被膜放于处理槽中，加入配好的温度大约在36℃0.01M的PBS缓冲液，确保每条膜完全浸没在0.01M的PBS缓冲液中5分钟，并且膜不移动、不重叠，5分钟后将膜从处理槽中取出，将0.01M的PBS缓冲液倒掉；再将第一次用0.01M的PBS缓冲液浸泡过5分钟的膜放入处理槽中，加入配好的0.01M的PBS缓冲液，确保每条膜完全浸没在0.01M的PBS缓冲液中30分钟，并且膜不移动、不重叠，30分钟后将膜从处理槽中取出，将0.01M的PBS缓冲液倒掉；然后将用0.01M的PBS缓冲液浸泡过两次的膜放于处理槽中，用配好的封闭处理浸泡液浸泡，确保每条膜完全浸没在处理液中15分钟，并且膜不移动、不重叠，15分钟后将膜从处理槽中取出，用镊子将每框的膜重新拉一边，确保膜没有已到框子外面和没有膜重叠后，再将框子和膜放入处理液中继续浸泡20分钟，20分钟后将膜从处理槽中取出，用镊子将膜拉在纱布上晾稍干；
f、贴板干燥：撕去胶板双面胶上切割线中间的白纸，用镊子将膜正好放在胶板中央空白位置并使切角在右上方，且胶板右边与膜右边平齐，避免在生产过程中误差，确保显色位置相对准确，贴板时全部顶C线一头贴，膜贴在胶板上后，隔着双面胶纸抹平膜面，避免有气泡。控制室内的温度18～28℃、相对湿度≤40％，并保证干燥间空气能循环流通且除湿机风不会直接吹到膜面上，干燥时间≥4小时，后备用；
B、聚酯纤维条的标记及固相：
a、胶体金复溶液的配制：向配液罐加入实际生产量的纯化水；用电子分析天平称量质量百分含量5%海藻糖、质量百分含量2%牛血清白蛋白、质量百分含量0.5%柠檬酸三钠、质量百分含量0.05%聚乙二醇、质量百分含量0.05％NaN3，直接加入到配液罐中搅拌，搅拌直至完全溶解，加纯化水定容至所需体积，充分搅拌均匀，搅拌时间不少于30分钟，备用；
b、用量筒量取需要标记量的胶体金，按pH7.0-7.3进行调节，即加入体积百分含量0.45% 0.2mol/L的碳酸钾溶液，于磁力搅拌器上搅拌15分钟后，取TSH-β单克隆抗体按10ug/ml标记胶体金体积体积百分含量5%的双蒸水中稀释并混合均匀，加入胶体金中，于磁力搅拌器上搅拌30分钟后加入0.5‰稳定剂后搅拌30分钟后离心，收集沉淀，用胶体金复溶液按3%复溶，于磁力搅拌器上搅拌至混合均匀，备用；
c、取上述b 体积百分含量3%复溶的胶体金，用胶体金复溶液按体积百分含量40%复溶，于磁力搅拌器上混合均匀，将混合均匀的胶体金溶液按照50μl/cm2的浓度浇于胶体金吸附垫上，置于干燥室晾干≥4个小时，干燥室控制温度18-28℃，相对湿度≤40%，并保证空气畅通且气流不能直接吹于聚酯纤维条上，将干燥好的标记金放入到装有干燥剂的铝箔袋中，密封保存，备用；
注：胶体金为浇制，是因为浇制的胶体金可以自由的裁切宽度，从而方便调节产品的深浅显色。
C、组装及裁切：
a、取已粘贴硝酸纤维素膜的透明基片半成品，将固相了的固相化胶体金按0.5cm宽度裁切成0.5cm×30cm的条状后粘贴在透明基片上，并保持与硝酸纤维素膜呈搭接约1mm，将吸水纸复合在硝酸纤维素膜的透明基片膜上端并与膜搭接约1mm，将吸样载体复合在固相了的胶体金下端并与其搭接约1mm，备用；
b、根据相应的反应装置，将已组装备用的基片，切割成条状试纸，备用。
本发明的应用为：本产品系由在硝酸纤维素膜上检测线T位置包被TSH-α单克隆抗体，质控线C位置包被抗鼠IgG多克隆抗体，及在聚酯纤维膜上吸附的胶体金TSH-β单克隆抗体结合物组成，应用双抗体夹心法及免疫层析法的原理定性检测人尿液中促甲状腺激素含量。
具体检测步骤为：（1）被检样品、试剂盒及其他所用器材均在室温平衡；（2）除去试剂盒外包装，标明被检样品或对照品；（3）取出试纸上样端浸入待测尿样中；（4）10分钟内观察结果，将检测线和所配比色卡比对颜色深浅。
本发明通过将检测线和所配比色卡比对颜色深浅，从而判断是否有甲减的风险。
检验结果如下：（1）阴性(-)：质控线C显色，检测线T无显色或低于“2”的显色，表明TSH含量未超过2μIU/ml，无甲减风险；（2）阳性(+)：质控线C显色，检测线T显色处于“2”和“5”之间，包括“2”和“5” 的显色，表明TSH含量未超过甲减临界值5μIU/ml，此时要注意防止甲减的发生；（3）强阳性(++)：质控线C显色，检测线T高于“5” 的显色，表明TSH含量超过甲减临界值5μIU/ml，存在甲减；（4）无效：质控线C无紫红色线出现，表明不正确的操作或该试纸已经失效。
本发明应用双抗体夹心法及免疫层析法的原理定性检测尿液中人促甲状腺激素，检测步骤较为简单，10分钟内就可以观察到结果，一般使用者可以自己进行检测。本发明通过检测线与所配比色卡颜色深浅比较，从而判断是否有甲减的风险。
实施例1：
从同一批中随机抽样，最低抽样量不得少于检测用量的3倍。
取样后将待检品置于黄色待检区，能当天检验的当天检验，不能的情况下必须于第二天检验完毕。检验合格剩下的纸条可作为留样，暂置于合格品区，然后根据产量以及留样要求再从生产上抽取一定的数量进行成品的留样。
1、所需试剂如下:(1) 0μIU/ml的样品液: 含蛋白的磷酸盐缓冲液（PBS）即为0μIU/ml的TSH样品液；(2)1μIU/ml、2μIU/ml和5μIU/ml的TSH样品液:将促甲状腺激素(TSH)标准品用含蛋白的磷酸盐缓冲液（0.01M PBS）配制成相应浓度；(3)1000mIU/ml人绒毛膜促性腺激素（HCG）：将HCG标准品用磷酸盐缓冲液（PBS）复溶后，用0μIU/ml的TSH样品液将其配制成浓度为1000mIU/ml；(4)200mIU/ml人促黄体生成素（hLH）：将hLH标准品用磷酸盐缓冲液（PBS）复溶后，用0μIU/ml的TSH样品液将其配制成浓度为200mIU/ml；(5) 200mIU/ml人卵泡刺激素（hFSH）：将hFSH标准品用磷酸盐缓冲液（PBS）复溶后，用0μIU/ml的TSH样品液将其配制成浓度为200mIU/ml；
2、物理性状：检验外观性状：取出试纸条，用目力观察，纸条应整洁完整、无毛刺、无破损、无污染；材料附着牢固。如果是笔、卡或棒型的还要检查其装配是否正确。膜条宽度：取3人份纸条用量尺测量纸条上膜的宽度。液体移行速度：取3人份纸条按说明书进行操作，从上样垫浸入样品液开始用秒表（精度为0.01s）计时，直至液体达到下图所示的E区与F区之间的交界线时停止计时，所用的时间记为（t），用游标卡尺（精密度0.02mm）测量（A区+B区+E区）的长度，记为（L），计算L/t即为移行速度，重复测量3条试纸，取平均值，结果应符合液体移行速度不低于10mm/min。层析状态：规则，胶金不与水分层，10分钟内本底基本清晰。
3、检验临界值：用国家级促甲状腺激素标准品检验，配成浓度分别为1μIU/ml、2μIU/ml和5μIU/ml的标准液，抽取待检品3人份进行检测，10分钟内观察结果，临界值为2μIU/ml。
4、特异性：将浓度为1000mIU/mlHCG液、200mIU/ml hLH 液和200mIU/ml hFSH液分别进行检测，各重复3次，各溶液的3次结果检测线T均为阴性才可判为此浓度的结果为阴性。
5、重复性：随机抽取同一批号的试纸30条，用浓度为1μIU/ml、2μIU/ml和5μIU/ml的TSH样品液各检测10次，每种浓度的10次反应结果一致，显色均一。
6、检验稳定性：将试纸于37℃放置21天后，或者取产品有效期后一个月的产品进行检测，按照2项、3项、4项、5项的规定要求检验，结果应符合要求。
7、检验批间差：取3个批号的试纸各10人份，共30人份，用5μIU/ml的TSH标准品进行检测，各重复测定10次，检测线全部为阳性显色，且显色强度一致。
促甲状腺激素(TSH)由脑垂体前叶的嗜碱性细胞分泌，以游离的形式存在于血液中，含量很低，性质稳定的一种糖蛋白激素。血液循环中游离甲状腺激素发挥生物学功能后，部分经尿液排出体外，二者间存在密切相关性。在甲状腺功能检测中，先考虑促甲状腺激素的测试结果，再结合其余甲状腺激素的测试结果进行疾病的诊断,并且通过促甲状腺激素的精确测定能排除众多非甲状腺疾病的干扰。目前国内大多数实验室的TSH正常值范围是0.3-5.0μIU/ml。本发明应用双抗体夹心法及免疫层析法的原理定性检测尿液中人促甲状腺激素，检测步骤较为简单，10分钟内就可以观察到结果，一般使用者可以自己进行检测。本发明通过检测线与所配比色卡颜色深浅比较，从而判断是否有甲减的风险。

Claims (6)

1.一种促甲状腺激素检测试纸，其特征在于：包括塑料基片（1），所述塑料基片（1）上设有上样垫（2）和吸水垫（3），所述上样垫（2）和所述吸水垫（3）上均设有保护膜（4），所述上样垫（2）和所述吸水垫（3）之间下方设有硝酸纤维素膜（5），所述上样垫（2）的连接端设有固相化胶体金（6），所述固相化胶体金（6）的一端与所述硝酸纤维素膜（5）的一端搭接在一起，所述硝酸纤维素膜（5）上依次包被有检测线（T）和质控线（C）。
2.一种促甲状腺激素检测试纸的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
A、硝酸纤维素膜的制备：
a、选择3um～10um孔径的硝酸纤维素膜，根据需要将膜分切成宽度为大于等于2.0cm,长度为30.5cm的规格备用；
b、用0.1M磷酸盐缓冲液配制供检测线包被使用的TSH-α单克隆抗体1.5 mg/ml及用质量百分含量0.85%的氯化钠缓冲液配制供质控线包被使用的抗鼠IgG多克隆抗体1.5mg/ml；
c、选择硝酸纤维素膜的抗体包被面并作标记，将需包被的检测线和质控线平行均匀的包被在膜片上，且检测线与质控线的间距控制在0.5cm，硝酸纤维素膜在4℃～35℃的恒温条件下干燥备用；
d、配置封闭处理浸泡液，向配液罐加入实际生产量的纯化水；用电子分析天平称量0.1Mol缓冲液、质量百分含量0.5%糖份、质量百分含量1%封闭蛋白、质量百分含量0.05％防腐剂，直接加入到配液罐中搅拌，搅拌直至完全溶解，加纯化水定容至所需体积，充分搅拌均匀，搅拌时间不少于10分钟，备用；
e、将包被膜放于处理槽中，加入配好的温度大约在36℃0.01M的PBS缓冲液，确保每条膜完全浸没在0.01M的PBS缓冲液中5分钟，并且膜不移动、不重叠，5分钟后将膜从处理槽中取出，将0.01M的PBS缓冲液倒掉；再将第一次用0.01M的PBS缓冲液浸泡过5分钟的膜放入处理槽中，加入配好的0.01M的PBS缓冲液，确保每条膜完全浸没在0.01M的PBS缓冲液中30分钟，并且膜不移动、不重叠，30分钟后将膜从处理槽中取出，将0.01M的PBS缓冲液倒掉；然后将用0.01M的PBS缓冲液浸泡过两次的膜放于处理槽中，用配好的封闭处理浸泡液浸泡，确保每条膜完全浸没在处理液中15分钟，并且膜不移动、不重叠，15分钟后将膜从处理槽中取出，用镊子将每框的膜重新拉一边，确保膜没有已到框子外面和没有膜重叠后，再将框子和膜放入处理液中继续浸泡20分钟，20分钟后将膜从处理槽中取出，用镊子将膜拉在纱布上晾稍干；
f、贴板干燥：撕去胶板双面胶上切割线中间的白纸，用镊子将膜正好放在胶板中央空白位置并使切角在右上方，且胶板右边与膜右边平齐，避免在生产过程中误差，确保显色位置相对准确，贴板时全部顶C线一头贴，膜贴在胶板上后，隔着双面胶纸抹平膜面，避免有气泡；
控制室内的温度18～28℃、相对湿度≤40％，并保证干燥间空气能循环流通且除湿机风不会直接吹到膜面上，干燥时间≥4小时，后备用；
B、聚酯纤维条的标记及固相：
a、胶体金复溶液的配制：向配液罐加入实际生产量的纯化水；用电子分析天平称量质量百分含量5%海藻糖、质量百分含量2%牛血清白蛋白、质量百分含量0.5%柠檬酸三钠、质量百分含量0.05%聚乙二醇、质量百分含量0.05％NaN3，直接加入到配液罐中搅拌，搅拌直至完全溶解，加纯化水定容至所需体积，充分搅拌均匀，搅拌时间不少于30分钟，备用；
b、用量筒量取需要标记量的胶体金，按pH7.0-7.3进行调节，即加入体积百分含量0.45% 0.2mol/L的碳酸钾溶液，于磁力搅拌器上搅拌15分钟后，取TSH-β单克隆抗体按10ug/ml标记胶体金体积体积百分含量5%的双蒸水中稀释并混合均匀，加入胶体金中，于磁力搅拌器上搅拌30分钟后加入0.5‰稳定剂后搅拌30分钟后离心，收集沉淀，用胶体金复溶液按3%复溶，于磁力搅拌器上搅拌至混合均匀，备用；
c、取上述b 体积百分含量3%复溶的胶体金，用胶体金复溶液按体积百分含量40%复溶，于磁力搅拌器上混合均匀，将混合均匀的胶体金溶液按照50μl/cm2的浓度浇于胶体金吸附垫上，置于干燥室晾干≥4个小时，干燥室控制温度18-28℃，相对湿度≤40%，并保证空气畅通且气流不能直接吹于聚酯纤维条上，将干燥好的标记金放入到装有干燥剂的铝箔袋中，密封保存，备用；
C、组装及裁切：
a、取已粘贴硝酸纤维素膜的透明基片半成品，将固相了的固相化胶体金按0.5cm宽度裁切成0.5cm×30cm的条状后粘贴在透明基片上，并保持与硝酸纤维素膜呈搭接约1mm，将吸水纸复合在硝酸纤维素膜的透明基片膜上端并与膜搭接约1mm，将吸样载体复合在固相了的胶体金下端并与其搭接约1mm，备用；
b、根据相应的反应装置，将已组装备用的基片，切割成条状试纸，备用。
3.根据权利要求2所述一种促甲状腺激素检测试纸的制备方法，其特征在于：硝酸纤维素膜制备d步骤和e步骤中的封闭处理浸泡液含有的缓冲液为磷酸盐。
4.根据权利要求2所述一种促甲状腺激素检测试纸的制备方法，其特征在于：硝酸纤维素膜制备d步骤和e步骤中的封闭处理浸泡液含有的糖份为蔗糖或海藻糖。
5.根据权利要求2所述一种促甲状腺激素检测试纸的制备方法，其特征在于：硝酸纤维素膜制备d步骤和e步骤中的封闭处理浸泡液含有的封闭蛋白为络蛋白或牛血清白蛋白。
6.根据权利要求2所述一种促甲状腺激素检测试纸的制备方法，其特征在于：硝酸纤维素膜制备d步骤和e步骤中的封闭处理浸泡液含有的防腐剂为NaN3或硫柳汞。
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