CN105116153B - 促黄体生成素的半定量检测系统及其检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种促黄体生成素的半定量检测系统及其检测方法，该系统由试条阅读仪和金标试条组成，试条阅读仪能够对促黄体生成素规则分子与总分子的金标试条上的检测线颜色深浅进行半定量检测，并将一段时间内每次测试的结果，在检测仪的LCD显示器上将这些结果绘制成一种曲线，提示促黄体生成素峰值期，准确判断排卵的时间，试条阅读仪包括电源开关、单片机、电机、发光二极管、光电传感器、功率放大器、A/D转换器、LCD显示器、存储器、按键。本发明不需要目测，使检测结果更加的准确，不受周围光线强弱、视力的影响，自动化，测试精确，同时能够将颜色深浅的记录通过检测仪上的LCD显示器进行绘制曲线，从而进行一个排卵日期的判断。

Description

促黄体生成素的半定量检测系统及其检测方法
技术领域
本发明属于医学检验试剂领域，涉及一种促黄体生成素的半定量检测系统及其检测方法。
背景技术
促黄体生成激素（luteotropic hormone），英文缩写为LH，是脑垂体前叶嗜碱性细胞分泌的糖蛋白激素，和FSH一起被称为促性腺激素。LH的主要生理作用是对育龄妇女可促进成熟卵泡破裂、排卵，在月经中期即排卵前约24小时可观测到一个LH分泌高峰，其值比滤泡期高8~10倍，排卵后LH水平迅速下降。卵泡排卵后LH可促进黄体生成，并使黄体分泌雌激素和孕激素；对男性而言主要是促进睾丸的间质细胞增生，故又称为间质细胞刺激素（ICSH），它能促使间质细胞合成并分泌雄激素（睾酮，T），并协同FSH和T促进精子的成熟。黄体生成素的测定可用于预测排卵和排卵异常的诊断,但在口服避孕药、超排卵药、潋素替代治疗、卵巢切除术等时也可影响黄体生成素水平。血LH的浓度，在排卵前期为2～15mIU/ml，医学教育网收集整理排卵期为30～100mIU/ml，排卵后期为4～10mIU/ml。一般在非排卵期的正常值是5～25mIU/ml。低于5mIU/ml提示促性腺激素功能不足，见于席汉综合征；高FSH如再加高LH，则说明卵巢功能已经衰竭。LH /FSH≥3则是诊断多囊卵巢综合征的依据之一。促黄体激素检测异常的临床意义：1）、LH水平增高见于：多囊卵巢综合征（持续无排卵及雄性激素过多等）、TUYN-ER综合征、原发性性腺功能低下、卵巢功能早衰、卵巢切除术后，以及更年期综合征或绝经期妇女。2）、LH水平降低见于：下丘脑-垂体促性腺功能不足，如下丘脑性闭经；长期服用避孕药；使用激素替代治疗后，LH和FSH可下降。
正常女性体内保持微量的黄体生成素（LH），在月经中期LH的分泌量快速增加，形成一个LH峰，并在此后的28小时内，刺激成熟卵子的释放，即排卵。排卵预测试纸能准确地检测出LH的峰值水平，使女性能预知最佳的受孕或避孕时间。女性在检测前应首先确定自己的月经周期。算法是从这次来月经第一天到下次来月经的前一天为一个周期（初血当天为第一天），多数妇女的排卵是在下次月经前14天左右，因此在排卵前2-3天及排卵后1-2天为易受孕期，亦即推算排卵日前后共4-5天内为易受孕期，故开始检测后应每天定时检测，当将要出现接近高峰值的颜色时应每隔12小时测试一次直至检测出LH峰值。就目前而言，检测黄体生成素的方法主要有以下几种：（1）、放射免疫法、宫颈粘液、基础体温、阴道B超等。几种方法各有一定的适应性。准确灵敏的放射免疫法由于同位素放射试剂的使用，而带来一系列的不便和限制；宫颈粘液、基础体温由于操作复杂及缺乏客观性限制了其使用；B超显像是目前生殖学家们首推的监测排卵方法,，我们认为在指导人工授精时机上, 特别对于单侧输卵管阻塞患者在行人工授精时具有特殊意义。当B超显示健侧输卵管所对应的卵巢排卵时行人工授精才具备较高的成功率, 是其它监测排卵方法所不能代替的。但是,成熟的卵泡因个体差异超出其最大正常范围或卵巢位置异常以及肠气干扰时将给B超诊断带来困难,阴道B超在不孕妇女监测排卵中，能够清晰对卵泡的形态、数目、大小进行连续动态监测，被认为是最可靠的监测排卵方法，可避免肥胖、肠腔胀气的干扰，重复性好，安全无创，操作简单，但是由于每个人卵泡发育时间、大小相差悬殊，所以阴道B超不能根据卵泡直径准确预测排卵时间。以上方法均因操作复杂或需要大型仪器而不能在家庭进行自我测试使用。
现有用于检测排卵期的大都是反应试纸条，通过每天对检测线的颜色深浅比对来判断排卵日期。由于试纸反应膜上的检测线和质控线直接与空气接触，会使测试溶液挥发，同时外带液体容易渗透到反应层上，影响测试结果，目测误差大，影响到测试结果，同时不能够将颜色深浅的结果记录下来绘制成曲线，进行一个排卵期的判断。
发明内容
本发明的目的是为了克服以上的不足，提供一种检测方便、检测速度快、检测效率高的的促黄体生成素的半定量检测系统及其检测方法。
本发明的目的通过以下技术方案来实现：一种促黄体生成素的半定量检测系统，该系统由促黄体生成素的胶体金免疫层析试条阅读仪和促黄体生成素规则分子与总分子的金标试条组成，所述胶体金免疫层析试条阅读仪能够对促黄体生成素规则分子与总分子的金标试条上的检测线颜色深浅进行半定量检测，并将一段时间内每次测试的结果，在检测仪的LCD显示器上将这些结果绘制成一种曲线，提示促黄体生成素排卵期和峰值期，准确判断排卵的时间。
本发明的进一步改进在于：促黄体生成素的胶体金免疫层析试条阅读仪包括电源开关、单片机、电机、发光二极管、光电传感器、功率放大器、A/D转换器、LCD显示器、存储器、按键。
一种促黄体生成素的半定量检测系统的检测方法，促黄体生成素的胶体金免疫层析试条阅读仪开机后，将促黄体生成素规则分子与总分子的金标试条塞入促黄体生成素的胶体金免疫层析试条阅读仪的卡槽中，按键选择检测方式后进行检测，单片机控制电机转动使金标试条的检测区域在发光二极管的光源下进行扫描，光电传感器的工作原理就是光伏特效应，将检测区域检测线颜色深浅的光电信号通过功率放大器后再经过A/D转换器传送给单片机，单片机控制LCD显示器，并在LCD显示器上显示出检测结果，同时将检测结果存储到存储器当中，通过按键的查询选择，我们将一段时间的检测结果在LCD显示器上绘制成一段曲线。
促黄体生成素规则分子与总分子的金标试条包括塑料基片，塑料基片上设有上样垫和吸水垫，上样垫和吸水垫上均设有保护膜，上样垫和吸水垫之间下方设有硝酸纤维素膜，上样垫的连接端设有固相化胶体金，固相化胶体金的一端与硝酸纤维素膜的一端搭接在一起，硝酸纤维素膜上依次包被有第一检测线、第二检测线和质控线；
促黄体生成素规则分子与总分子的金标试条的制备方法，包括以下步骤：
A、硝酸纤维素膜的制备：
a、选择3um～10um孔径的硝酸纤维素膜，根据需要将膜分切成宽度为大于等于2.0cm,长度为30.5cm的规格备；
b、用0.1MTris-Hcl缓冲液配制供第二检测线包被使用的抗α-LH抗体2.0mg/ml、供第一检测线包被使用的LH总分子抗体1.5mg/ml及供质控线包被使用的抗鼠IgG抗体1.0mg/ml；
c、选择硝酸纤维素膜的抗体包被面并作标记，将需包被的第一检测线、第二检测线和质控线平行均匀的包被在膜片上，且第一检测线与第二检测线距离0.4cm、第二检测线与质控线的间距控制在距离0.8cm，硝酸纤维素膜在2℃～30℃的恒温条件下干燥备用；
d、配置封闭处理浸泡液，向配液罐加入实际生产量的纯化水；用电子分析天平称量0.1Mol缓冲液、0.5%糖份、1%封闭蛋白、0.05％防腐剂，直接加入到配液罐中搅拌，搅拌直至完全溶解，加纯化水定容至所需体积，充分搅拌均匀，搅拌时间不少于10分钟，备用；
e、将硝酸纤维素膜用0.01Mol磷酸盐浸泡洗涤后，浸泡于封闭处理液中30min，取出晾干备用；
B、胶体金吸附垫的标记及固相：
a、胶体金复溶液的配制：向配液罐加入实际生产量的纯化水；用电子分析天平称量5%海藻糖、2%牛血清白蛋白、0.5%柠檬酸三钠、0.05%聚乙二醇、0.05％NaN3，直接加入到配液罐中搅拌，搅拌直至完全溶解，加纯化水定容至所需体积，充分搅拌均匀，搅拌时间不少于30分钟，备用；
b、用量筒量取需要标记量的胶体金，按PH6.5-7.0进行调节，即加入0.4% 0.2mol/L的碳酸钾溶液，于磁力搅拌器上搅拌15分钟后，取LH-β单克隆抗体按3ug/ml标记胶体金体积5%的双蒸水中稀释并混合均匀，加入胶体金中，于磁力搅拌器上搅拌30分钟后加入0.5‰稳定剂后搅拌30分钟后离心，收集沉淀，用胶体金复溶液按3%复溶，于磁力搅拌器上搅拌至混合均匀，备用；
c、取上述3%复溶的胶体金，用胶体金复溶液按4%复溶，于磁力搅拌器上混合均匀。将混合均匀的胶体金溶液用喷金机按照3.5ul/cm的线浓度喷于胶体金吸附垫上，置于干燥室晾干≥4个小时，干燥室控制温度18-28℃，相对湿度≤40%，保证空气畅通且气流不能直接吹于胶体金吸附垫上，将干燥好的标记金放入到装有干燥剂的铝箔袋中，密封保存，备用；
C、组装及裁切：
a、取已粘贴硝酸纤维素膜的透明基片半成品，将固相了的胶体金吸附垫粘贴在透明基片上，并保持与硝酸纤维素膜呈搭接约1mm，将吸水纸复合在硝酸纤维素膜的透明基片膜上端并与膜搭接约1mm，将吸样载体复合在固相了的胶体金吸附垫下端并与其搭接约1mm，备用；
b、根据相应的反应装置，将已组装备用的基片，切割成条状试纸，备用。
本发明的进一步改进在于：硝酸纤维素膜制备d步骤和e步骤中的封闭处理浸泡液含有的缓冲液为磷酸盐或Tris盐。
本发明的进一步改进在于：硝酸纤维素膜制备d步骤和e步骤中的封闭处理浸泡液含有的糖份为蔗糖或海藻糖。
本发明的进一步改进在于：硝酸纤维素膜制备d步骤和e步骤中的封闭处理浸泡液含有的封闭蛋白为络蛋白或牛血清白蛋白。
本发明的进一步改进在于：硝酸纤维素膜制备d步骤和e步骤中的封闭处理浸泡液含有的防腐剂为NaN3或硫柳汞。
本发明与现有技术相比具有以下优点：本发明不需要目测，利用检测仪代替目测，使检测结果更加的准确，不受周围光线强弱、视力的影响，自动化，测试精确，同时能够将颜色深浅的记录通过检测仪上的LCD显示器进行绘制曲线，从而进行一个排卵日期的判断。当T1与T2区的检测结果都为零时，表示并没有排卵；当T1区的检测结果呈现低等水平时，T2区的检测结果为零时，表示尿液中的LH含量不在高峰水平；当T1区的检测结果呈现高等水平时，T2区的检测结果为低等水平时，表明进入排卵期；当T1区与T2区的检测结果为高等水平时，表示接近或处于高峰期，预计将于12-28小时内排卵。本发明应用双抗体夹心法及免疫层析法的原理检测育龄期妇女尿液中的促黄体生成素规则分子与总分子分泌水平，检测步骤较为简单，10分钟内就可以观察到结果，一般使用者可以自己进行检测，本发明通过比较检测T1和T2色带颜色与色标颜色的差异，找出与检测区颜色最接近的色标，确定出数值，经过曲线绘制提示LH排卵期和峰值期，准确判断排卵时间。
附图说明：
图1为本发明的结构示意图；
图2为促黄体生成素规则分子与总分子的金标试条的结构示意图；
图3为检测结果的曲线绘制图；
图中标号：1-促黄体生成素规则分子与总分子的金标试条、2-电源开关、3-单片机、4-电机、5-发光二极管、6-光电传感器、7-功率放大器、8-A/D转换器、9-LCD显示器、10-按键、11-存储器、1-1-塑料基片、1-2-上样垫、1-3-吸水垫、1-4-保护膜、1-5-硝酸纤维素膜、1-6-固相化胶体金、T2-第二检测线、T1-第一检测线、C-质控线。
具体实施方式：
为了加深对本发明的理解，下面将结合实施例和附图对本发明作进一步详述，该实施例仅用于解释本发明，并不构成对本发明保护范围的限定。
如图1示出了本发明一种促黄体生成素的半定量检测系统的一种实施方式，该系统由促黄体生成素的胶体金免疫层析试条阅读仪和促黄体生成素规则分子与总分子的金标试条组成，所述胶体金免疫层析试条阅读仪能够对促黄体生成素规则分子与总分子的金标试条上的检测线颜色深浅进行半定量检测，并将一段时间内每次测试的结果，在检测仪的LCD显示器上将这些结果绘制成一种曲线，提示促黄体生成素峰值期，准确判断排卵的时间；所述促黄体生成素的胶体金免疫层析试条阅读仪包括电源开关2、单片机3、电机4、发光二极管5、光电传感器6、功率放大器7、A/D转换器8、LCD显示器9、存储器11、按键10。
一种促黄体生成素的半定量检测系统的检测方法，促黄体生成素的胶体金免疫层析试条阅读仪开机后，将促黄体生成素规则分子与总分子的金标试条1塞入促黄体生成素的胶体金免疫层析试条阅读仪的卡槽中，按键10选择检测方式后进行检测，单片机3控制电机4转动使金标试条的检测区域在发光二极管5的光源下进行扫描，光电传感器6的工作原理就是光伏特效应，将检测区域检测线颜色深浅的光电信号通过功率放大器7后再经过A/D转换器8传送给单片机3，单片机3控制LCD显示器9，并在LCD显示器9上显示出检测结果，同时将检测结果存储到存储器11当中，通过按键10的查询选择，我们将一段时间的检测结果在LCD显示器9上绘制成一段曲线。 本发明不需要目测，通过光检测，不受周围光线强弱、视力的影响，自动化，测试精确，能将每次结果在LCD液晶显示屏上绘制出一段曲线功能，从而进行一个排卵日期的判断。
如图2所示，促黄体生成素规则分子与总分子的金标试条包括塑料基片1-1，塑料基片1-1上设有上样垫1-2和吸水垫1-3，上样垫1-2和吸水垫1-3上均设有保护膜1-4，上样垫1-2和吸水垫1-3之间下方设有硝酸纤维素膜1-5，上样垫1-2的连接端设有固相化胶体金1-6，固相化胶体金1-6的一端与硝酸纤维素膜1-5的一端搭接在一起，硝酸纤维素膜1-5上依次包被有第二检测线T2、第一检测线T1和质控线C；固相化胶体金为抗β-LH，第二检测线T2包被抗α-LH抗体；第一检测线T1包被LH总分子；质控线C包被抗鼠IgG抗体。
促黄体生成素规则分子与总分子的金标试条的制备方法包括以下步骤：
A、硝酸纤维素膜的制备：
a、选择3um～10um孔径的硝酸纤维素膜，根据需要将膜分切成宽度为大于等于2.0cm,长度为30.5cm的规格备；
b、用0.1MTris-Hcl缓冲液配制供第二检测线包被使用的抗α-LH抗体2.0mg/ml、供第一检测线包被使用的LH总分子抗体1.5mg/ml及供质控线包被使用的抗鼠IgG抗体1.0mg/ml；
c、选择硝酸纤维素膜的抗体包被面并作标记，将需包被的第一检测线、第二检测线和质控线平行均匀的包被在膜片上，且第一检测线与第二检测线距离0.4cm、第二检测线与质控线的间距控制在距离0.8cm，硝酸纤维素膜在2℃～30℃的恒温条件下干燥备用；
d、配置封闭处理浸泡液，向配液罐加入实际生产量的纯化水；用电子分析天平称量0.1Mol缓冲液、0.5%糖份、1%封闭蛋白、0.05％防腐剂，直接加入到配液罐中搅拌，搅拌直至完全溶解，加纯化水定容至所需体积，充分搅拌均匀，搅拌时间不少于10分钟，备用；
e、将硝酸纤维素膜用0.01Mol磷酸盐浸泡洗涤后，浸泡于封闭处理液中30min，取出晾干备用；
封闭处理浸泡液含有的缓冲液为磷酸盐或Tris盐、糖份为蔗糖或海藻糖、封闭蛋白为络蛋白或牛血清白蛋白、防腐剂为NaN3或硫柳汞；
B、胶体金吸附垫的标记及固相：
a、胶体金复溶液的配制：向配液罐加入实际生产量的纯化水；用电子分析天平称量5%海藻糖、2%牛血清白蛋白、0.5%柠檬酸三钠、0.05%聚乙二醇、0.05％NaN3，直接加入到配液罐中搅拌，搅拌直至完全溶解，加纯化水定容至所需体积，充分搅拌均匀，搅拌时间不少于30分钟，备用；
b、用量筒量取需要标记量的胶体金，按PH6.5-7.0进行调节，即加入0.4% 0.2mol/L的碳酸钾溶液，于磁力搅拌器上搅拌15分钟后，取LH-β单克隆抗体按3ug/ml标记胶体金体积5%的双蒸水中稀释并混合均匀，加入胶体金中，于磁力搅拌器上搅拌30分钟后加入0.5‰稳定剂后搅拌30分钟后离心，收集沉淀，用胶体金复溶液按3%复溶，于磁力搅拌器上搅拌至混合均匀，备用；
c、取上述3%复溶的胶体金，用胶体金复溶液按4%复溶，于磁力搅拌器上混合均匀。将混合均匀的胶体金溶液用喷金机按照3.5ul/cm的线浓度喷于胶体金吸附垫上，置于干燥室晾干≥4个小时，干燥室控制温度18-28℃，相对湿度≤40%，保证空气畅通且气流不能直接吹于胶体金吸附垫上，将干燥好的标记金放入到装有干燥剂的铝箔袋中，密封保存，备用；
C、组装及裁切：
a、取已粘贴硝酸纤维素膜的透明基片半成品，将固相了的胶体金吸附垫粘贴在透明基片上，并保持与硝酸纤维素膜呈搭接约1mm，将吸水纸复合在硝酸纤维素膜的透明基片膜上端并与膜搭接约1mm，将吸样载体复合在固相了的胶体金吸附垫下端并与其搭接约1mm，备用；
b、根据相应的反应装置，将已组装备用的基片，切割成条状试纸，备用。
本发明的应用为：本产品系由在硝酸纤维素膜上第二检测线T2位置包被抗α-LH抗体，第一检测线T1位置包被LH总分子抗体和质控线C位置包被抗鼠IgG抗体，及在胶体金吸附垫上吸附的胶体金-抗β-LH单克隆抗体结合物组成，应用双抗体夹心法及免疫层析法的原理定性检测育龄期妇女尿液中的促黄体生成素规则分子与总分子分泌水平。
确定检测开始时间：育龄期女性在检测前应首先确定自己的月经周期，即以末次 月经的第一天为一个周期的开始。由于每一位女性的月经周期天数不同，在检测时可参考 周期检测表所列时间，作为开始第一天检测的日期。每日应选取早、中、晚三个不同的时间 段，进行检测，连续检测5天或至出现LH峰值时，比较检测结果，找出峰值期，预测排卵期。如 果月经周期少于21天或长于38天，被检者应遵医嘱进行检测。
月经周期 检测开始时间 月经周期 检测开始时间 月经周期 检测开始时间 月经周期 检测开始时间
21-22天 第6天 27天 第10天 31天 第14天 35天 第18天
23-24天 第7天 28天 第11天 32天 第15天 36天 第19天
25天 第8天 29天 第12天 33天 第16天 37天 第20天
26天 第9天 30天 第13天 34天 第17天 38天 第21天
具体检测步骤为：（1）被检样品、试剂盒及其他所用器材均在室温平衡；（2）除去试剂盒外包装，在试纸卡上标明被检样品或对照品；（3）用滴管取尿样后，在加样孔内加入2-3滴尿样；（4）10分钟内观察结果，检测15 分钟后的结果无临床意义。（4）加样后如使用阅读仪，打开阅读仪，并设置阅读仪的定时检测时间为600秒，将该试剂盒置于检测仪中，等待阅读仪检测读取结果，并在显示屏上显示检测结果。
本发明通过比较检测T1和T2色带颜色与色标颜色的差异，找出与检测区颜色最接近的色标，确定出数值，经过曲线绘制提示LH排卵期和峰值期，准确判断排卵时间。检验结果如下：1.在试纸对照C区仅出现一条紫红色线（对照线），T1区和T2区（检测线）均不出现紫红色线，代表促黄体生成素和β亚单位垂体促黄体生成素检测结果均为0档。可在LH检测比对色卡背面的记录表中记录当次结果均为0档。
2.试纸检测T1区、T2区和对照C区各出现一条紫红色线，此时请将检测T1区、T2区和比对色卡上的色标，比对颜色深浅。与所附色卡比色时，将试纸平放于色卡上，试纸垂直于色标，让检测T1区或T2区色带与色标重合。比较检测T1区或T2区色带颜色与色标颜色的差异，找出与检测区颜色最接近的色标，确定出色标的档数，将测试时间与结果记录在比对色卡背面的记录表中。
注意：比色时，如果检测T1区或T2区色带颜色深浅处于某两个相连色标颜色之间，可取两色标数值中间值，或根据其颜色接近色标的程度，取估计值。（如果色带颜色未达到1档，记为0档；如果色带颜色等于或深于1档，未达到2档，记为1档或1.5档；如果色带颜色等于或深于2档，未达到3档，记为2档或2.5档；如果色带颜色等于或深于3档，未达到4档，记为3档或3.5档；如果色带颜色等于或深于4档，未达到5档，记为4档或4.5档；如果色带颜色等于或深于5档，记为5档。）
同时，比对色卡背面印有坐标图，横轴为测定时间，用来填写测定的时间。纵轴是测定的色标的档数，可以将每次的测定结果描点在坐标图中（T1区与T2区的结果分别描在坐标图中，可以不同的符号代替，例如T1区的结果可用▲，T2区的颜色可用●来代替）。（见图3）
3.若试纸卡无红色反应线出现或对照C区（对照线）不出现紫红色线，表明试验失败或试纸卡失效。请更换试纸条重新检测。
本发明应用双抗体夹心法及免疫层析法的原理检测育龄期妇女尿液中的促黄体生成素规则分子与总分子分泌水平，检测步骤较为简单，10分钟内就可以观察到结果，一般使用者可以自己进行检测，检测结果较为精确。
实施例1：
从同一批中随机抽样，最低抽样量不得少于检测用量的3倍。
取样后将待检品置于黄色待检区，能当天检验的当天检验，不能的情况下必须于第二天检验完毕。检验合格剩下的纸条可作为留样，暂置于合格品区，然后根据产量以及留样要求再从生产上抽取一定的数量进行成品的留样。
1、物理性状：检验外观性状：取出试纸条，用目力观察，试纸卡应整洁完整、无毛刺、无破损、无污染；材料附着牢固，其装配是否正确。膜条宽度：取3人份纸条用量尺测量纸条上膜的宽度。液体移行速度：取3人份纸条按说明书进行操作，卡型用加样器滴加生理盐水，用秒表记录液体从反应区下端移行至反应区上端所需时间，结果应符合液体移行速度不低于10mm/min，层析状态：规则，胶金不与水分层，5分钟内本底基本清晰。
3、检验临界值：用β亚单位垂体促黄体生成素标准品检验，配成浓度分别为5mIU/ml、10mIU/ml、25mIU/ml的标准液，抽取待检品3人份，进行检测，10分钟内观察结果，T1检测线临界值为10mIU/ml，应为3档显色。用促黄体生成素标准品检验，配成浓度分别为、10mIU/ml、25 mIU/ml、50 mIU/ml的标准液，抽取待检品3人份，进行检测，5分钟内观察结果，T2检测线临界值25 mIU/ml，应为3档显色。
4、特异性：阴性特异性：将浓度为200mIU/ml的促卵泡激素（FSH）进行检测，重复3次，结果T1检测线和T2检测线均应不高于2档显色。将浓度为250μIU/ml的促甲状腺激素（TSH）进行检测，重复3次，结果T1检测线和T2检测线均结果应不高于2档显色。
5、重复性：随机抽取同一批号的试纸10条，以浓度为10mIU/mlβ亚单位垂体促黄体生成素标准品测定，10次结果应符合T1检测线全部为3档显色，且显色强度一致，T2检测线不高于2档显色。随机抽取同一批号的试纸10条，以浓度为25mIU/ml促黄体生成素标准品测定，10次结果应符合T2检测线全部为为3档显色，且显色强度一致，T1检测线不高于2档显色。
6、检验稳定性：将试纸于37℃放置21天后，或者取产品有效期后一个月的产品进行检测，按照2、3项、4项、5项的规定要求检验，结果应符合要求。
7、检验批间差：取3个批号的试纸，用10mIU/mlβ亚单位垂体促黄体生成素标准品进行检测，重复测定10次，T1检测线全部为3档显色，且显色强度一致，T2检测线不高于2档显色。取3个批号的试纸，用25mIU/ml促黄体生成素标准品进行检测，每个批号各重复测定10次，T2检测线全部为为3档显色，且显色强度一致，T1检测线不高于2档显色。
用检测育龄期妇女尿液中的促黄体生成素规则分子与总分子分泌水平，作为用户判断相关疾病，诸如：无排卵型患者和多囊卵巢综合症患者或卵泡黄素化患者的依据，并经过曲线绘制提示LH峰值期，准确判断排卵时间，帮助受孕及优生优育。
有调查显示：20年前，我国育龄人群中的有调查显示：20年前，我国育龄人群中的不孕不育率仅为3%，处于全世界较低水平。而如今，全国平均每8对育龄夫妇中就有1对面临生育方面的困难，不孕不育率攀升到12.5%～15%，接近发达国家15%～20％的比率，且我国不孕不育者以25岁至30岁人数最多，呈年轻化趋势。因此开发更好的为不孕不育和不易受孕人群及以优生优育为目的的辅助工具，是社会所需用的。
本发明应用双抗体夹心法及免疫层析法的原理育龄期妇女尿液中的促黄体生成素规则分子与总分子分泌水平，检测步骤较为简单，10分钟内就可以观察到结果，一般使用者可以自己进行检测，检测结果较为精确。本发明通过比较检测T1和T2色带颜色与色标颜色的差异，找出与检测区颜色最接近的色标，确定出数值，经过曲线绘制提示LH排卵期和峰值期，准确判断排卵时间。

Claims (1)

1.一种促黄体生成素的半定量检测系统，其特征在于：所述系统由促黄体生成素的胶体金免疫层析试条阅读仪和促黄体生成素规则分子与总分子的金标试条组成，所述胶体金免疫层析试条阅读仪能够对促黄体生成素规则分子与总分子的金标试条上的检测线颜色深浅进行半定量检测，并将一段时间内每次测试的结果，在检测仪的LCD显示器上将这些结果绘制成一种曲线，提示促黄体生成素排卵期和峰值期，准确判断排卵的时间，所述促黄体生成素的胶体金免疫层析试条阅读仪包括电源开关（2）、单片机（3）、电机（4）、发光二极管（5）、光电传感器（6）、功率放大器（7）、A/D转换器（8）、LCD显示器（9）、存储器（11）、按键（10），所述促黄体生成素规则分子与总分子的金标试条包括塑料基片（1-1），所述塑料基片（1-1）上设有上样垫（1-2）和吸水垫（1-3），所述上样垫（1-2）和所述吸水垫（1-3）上均设有保护膜（1-4），所述上样垫（1-2）和所述吸水垫（1-3）之间下方设有硝酸纤维素膜（1-5），所述上样垫（1-2）的连接端设有固相化胶体金（1-6），所述固相化胶体金（1-6）的一端与所述硝酸纤维素膜（1-5）的一端搭接在一起，所述硝酸纤维素膜（1-5）上依次包被有第二检测线（T2）、第一检测线（T1）和质控线（C）；
所述促黄体生成素规则分子与总分子的金标试条的制备方法，包括以下步骤：
A、硝酸纤维素膜的制备：
a、选择3μm～10μm孔径的硝酸纤维素膜，根据需要将膜分切成宽度为大于等于2.0cm,长度为30.5cm的规格备用；
b、用0.1MTris-HCl缓冲液配制供第二检测线包被使用的抗α-LH抗体2.0mg/ml、供第一检测线包被使用的 LH总分子抗体1.5mg/ml及供质控线包被使用的抗鼠IgG抗体1.0mg/ml；
c、选择硝酸纤维素膜的抗体包被面并作标记，将需包被的第一检测线、第二检测线和质控线平行均匀的包被在膜片上，且第一检测线与第二检测线距离0.4cm、第二检测线与质控线的间距控制在距离0.8cm，硝酸纤维素膜在2℃～30℃的恒温条件下干燥备用；
d、配置封闭处理浸泡液，向配液罐加入纯化水；按照0.1M磷酸盐缓冲液、0.5%糖分、1%封闭蛋白、0.05％防腐剂的配比用电子分析天平称量相应物质，直接加入到配液罐中搅拌，搅拌直至完全溶解，加纯化水定容至所需体积，充分搅拌均匀，搅拌时间不少于10分钟，备用，所述糖分为蔗糖或海藻糖，所述封闭蛋白为络蛋白或牛血清白蛋白，所述防腐剂为NaN3或硫柳汞；
e、将硝酸纤维素膜用0.01M磷酸盐缓冲液浸泡洗涤后，浸泡于封闭处理液中30min，取出晾干备用；
B、胶体金吸附垫的标记及固相：
a、胶体金复溶液的配制：向配液罐加入纯化水；按照5%海藻糖、2%牛血清白蛋白、0.5%柠檬酸三钠、0.05%聚乙二醇、0.05％NaN3的配比用电子分析天平称量相应物质，直接加入到配液罐中搅拌，搅拌直至完全溶解，加纯化水定容至所需体积，充分搅拌均匀，搅拌时间不少于30分钟，备用；
b、用量筒量取需要标记量的胶体金，按pH6.5-7.0进行调节，即加入0.4% 0.2mol/L的碳酸钾溶液，于磁力搅拌器上搅拌15分钟后，取LH-β单克隆抗体加入胶体金中，于磁力搅拌器上搅拌30分钟后加入0.5‰稳定剂后搅拌30分钟后离心，收集沉淀，用胶体金复溶液按3%复溶，于磁力搅拌器上搅拌至混合均匀，备用；
c、取上述3%复溶的胶体金标记抗体，用胶体金复溶液按4%复溶，于磁力搅拌器上混合均匀；将混合均匀的胶体金标记抗体溶液用喷金机按照3.5μl/cm的线浓度喷于胶体金吸附垫上，置于干燥室晾干≥4个小时，干燥室控制温度18-28℃，相对湿度≤40%，保证空气畅通且气流不能直接吹于胶体金吸附垫上，将干燥好的胶体金吸附垫放入到装有干燥剂的铝箔袋中，密封保存，备用；
C、组装及裁切。
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