CN105572394A - 一种尿液hcg定量检测试纸条的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种检测尿液样本中HCG浓度的胶体金免疫侧向层析试纸条的制备方法，其采用HCG抗原作为质控线C的材料，发生的反应是质控线C上的HCG抗原和与检测线T反应后剩余的金标抗体。随样本中HCG浓度的增加，检测线T出现典型的HOOK效应，而发生HOOK效应的浓度范围，质控线C条带的颜色随之变浅。本发明通过T线和C线两个条带的颜色变化，可实现对0-200000mIU/mL浓度范围的HCG尿液样本进行定量检测，并避免了因HOOK效应而导致的假阴性现象，提高了临床诊断的准确度。
Description
技术领域
本发明涉及免疫诊断领域，具体地说，特别涉及到一种尿液HCG定量检测试纸条的制备方法。
背景技术
人绒毛膜促性腺激素(HCG)是妇女受精卵着床后由胎盘绒毛膜细胞分泌的一种糖蛋白激素，可通过血液循环进入血液和尿液。HCG在受精后第6日开始分泌，受精后第7日，就能在孕妇血清中和尿中测出，可用于早期妊娠的诊断。至妊娠8～10周血清浓度达到高峰，约50000-20000mIU/L，持续10日后迅速下降，持续至分娩。因此，还可根据尿液或血清中HCG的浓度，对妊娠正常与否进行辅助诊断。
样本中待检抗原的含量很高时，过量抗原和金标抗体结合，与检测线位置上的抗体不再形成"夹心复合物"。此时，如按常法测读，所得结果将低于实际的含量，这种现象被称为HOOK效应(钩状效应)，因为标准曲线到达高峰后呈钩状弯落。HOOK效应严重时，反应甚至可不显色，而出现假阴性的临床结果。这在早孕试纸条中较常见，测试高值的HCG样品时，结果反而呈阴性。
市场上现有的HCG体外诊断试剂很多，包括定性和定量检测试剂，定量的检测试剂主要包括放射性免疫方法，酶联免疫吸附方法，化学发光法和免疫荧光法等，但定量试剂都需要配备专用的仪器，适合医院和诊所等，不适合患者家庭自测。而定性的试纸条只能判断妊娠与否，无法满足妊娠后的监控。
目前，已有一些专利对HCG进行了定量的研究，在一定程度上，能满足患者自测的需要。如CN203275417U通过利用数码相机和电脑，进行像素比较，可测得HCG线性到600ng/ml(约12720mIU/ml)。专利CN203551567U涉及的HCG浓度比较装置，对HCG浓度小于1000mIU/ml、约等于1000mIU/ml和大于1000mIU/ml的样本，能进行初步的判断，无法对妊娠进行跟细致的判断。CN2442271Y和CN2443378Y仅对HCG浓度小于25mIU/ml，HCG浓度在25～1250mIU/ml之间，或者在1250～10000mIU/ml之间或者大于10000mIU/ml的范围的样本进行了粗略的定量。上述几种方法多是通过质控线C包被羊抗鼠IgG实现的，对样本的浓度只能定量在某个浓度范围内，而且该范围太宽，并且没有对HOOK效应以上的浓度进行定量，因此对于大于15000mIU/ml的样本不能定量，所以难以对妊娠进行详细的监控。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术中的不足，提供了一种检测尿液样本中HCG浓度的胶体金免疫侧向层析试纸条，该试纸条用HCG抗原作为质控线，发生的反应是质控线上的HCG抗原和与检测线反应后剩余的金标抗体。随样本中HCG浓度的增加，检测线T出现典型的HOOK效应，而发生HOOK效应的浓度范围，质控线C条带的颜色随之变浅。本发明通过T线和C线两个条带的颜色变化，可实现对0-200000mIU/mL浓度范围的HCG尿液样本进行定量检测，并避免了因HOOK效应而导致的假阴性现象，提高了临床诊断的准确度。
本发明所解决的技术问题可以采用以下技术方案来实现：
一种尿液HCG定量检测试纸条的制备方法，包括如下步骤：
1)划膜；
2)处理结合垫；
3)处理样品垫；
4)制备胶体金结合垫；
5)组装大卡；
6)切割装袋；
7)制备标准比色卡；其包括如下步骤：
先将HCG抗原标准品稀释，配置成系列浓度标准品，将试纸条标记MAX线的一端浸入所述标准品，液面不得超过MAX线，待样本上到硝酸纤维素膜时，将试纸放平，反应完毕后，利用像素分析软件分析一系列试纸条上的C和T两个条带，模拟出与C和T两个色素相同的两个红色条带，从而得出一系列HCG标准品浓度的标准比色卡。
进一步的，所述步骤1)的工艺为在带有背胶的PVC底板上粘贴硝酸纤维素膜，然后用划膜仪将检测线T溶液和质控线C溶液同时划在在硝酸纤维素膜上，烘干，切割，与干燥剂装袋，备用。
进一步的，所述一系列HCG标准品浓度的标准比色卡包括浓度为0、25、50、100、250、500、1000、2500、5000、10000、25000、50000、100000和200000mIU/mL的标准比色卡。
与现有技术相比，本发明的有益效果如下：
1.本发明制备的试纸条可克服HOOK效应导致的假阴性现象，提高了临床诊断的准确度。
2.通过C和T线两个条带组合实现了对高浓度HCG的定量，范围达到了0-200000mIU/ml。
3.可以定性，判断受检者是否妊娠。HCG的量≥25mIU/ml，可初步判断为妊娠。
4.尿液的取样方便，无创取样，对孕妇安全性高。
5.如使用羊抗鼠IgG做C线，其制备需要饲养动物，消耗资源较多。而本发明使用HCG抗原做C线，HCG抗原是从孕妇尿液中提取，可变废为宝，符合国家低碳环保的倡议。
6.适合家庭自检，比较方便的建立个体化检验诊断。
7.检测时，将试纸条直接插入待测尿液样本中，操作简单，方便，检测成本低。
附图说明
图1为本发明所述的尿液HCG定量检测试纸条的结构示意图。
图2为本发明所述的标准比色卡的示意图。
具体实施方式
为使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施方式，进一步阐述本发明。
参见图1，本发明所述的一种尿液HCG定量检测试纸条的制备方法，包括如下步骤：
1)划膜
在带有背胶的PVC底板上粘贴硝酸纤维素膜，然后用划膜仪将检测线T溶液和质控线C溶液同时划在在硝酸纤维素膜上，在恒温烘箱37℃烘干12-24小时；所述T线溶液中HCG抗体的终浓度为1-2mg/ml，C线溶液抗原的终浓度为1-2mg/ml，T线溶液和C线溶液的喷膜量为0.5-1μl/cm。
2)处理结合垫
将聚酯膜通过结合垫处理液浸润后，切成1cm±0.1cm的宽度，在恒温烘箱37℃烘干12-24小时；所述结合垫处理液的组分为BSA0.5～1％，蔗糖1％～20％，NaN30.15％。
3)处理样品垫
将样品垫处理液浸润后，切成2.0cm±0.1cm的宽度，恒温烘箱中37℃烘干12-24小时。
4)制备胶体金结合垫
将待标记的HCG单克隆抗体加入空白胶体金溶液中，颠倒混匀后，离心去除上清液，沉淀物中加入含有浓度为0.2％-0.5％的BSA水溶液封闭，离心去除上清液，然后用恢复液浓缩至原体积的1/10-1/5，制得金贮，然后将金贮用喷膜仪喷在结合垫上制取胶体金结合垫，金贮喷量为1～10μl/cm；然后在恒温烘箱37℃烘干12-24小时；
所述HCG单克隆抗体与空白胶体金溶液的配比为0.005-0.02mgHCG单抗/毫升胶体金溶液，空白胶体金溶液的溶质平均粒径15-60nm；恢复液为磷酸缓冲液，其pH值为7.2-7.6，浓度为0.01-0.02mol/L，所述恢复液中还含有0.5-2％的BSA和1-10％的蔗糖。
5)组装大卡
取出喷好检测线T溶液和质控线C溶液的PVC底板，在硝酸纤维素膜的两端粘贴的胶体金结合垫、样品垫和吸水垫，将一端的胶体金结合垫、样品垫以及一部分硝酸纤维素膜通过标有MAX线的免疫层析专用胶带包住，将另一端的另一部分硝酸纤维素膜和吸水垫通过免疫层析专用胶带包住。
6)切割装袋
用切条机切成3～5mm宽度的试纸条，装入铝箔袋，封口。
7)制备标准比色卡
先将HCG抗原标准品稀释，配置成系列浓度标准品，将试纸条标记MAX线的一端浸入所述标准品，液面不得超过MAX线，待样本上到硝酸纤维素膜时，将试纸放平，反应完毕后，利用像素分析软件分析一系列试纸条上的C和T两个条带，模拟出与C和T两个色素相同的两个红色条带，从而得出一系列HCG标准品浓度的标准比色卡。
参见图2，所述一系列HCG标准品浓度的标准比色卡包括浓度为0、25、50、100、250、500、1000、2500、5000、10000、25000、50000、100000和200000mIU/mL的标准比色卡。
本发明的使用过程如下:
撕开铝箔袋，取出试纸条，将试纸条标记MAX的一端浸入尿液样本，液面不得超过MAX线，保持10秒钟，将试纸放平，10分钟后，与标准比色卡比对，根据检测线T和质控线C两条线的条带对HCG的浓度进行定量，从而对妊娠状态进行判断。
以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。
Claims (3)
1.一种尿液HCG定量检测试纸条的制备方法，包括如下步骤：
1)划膜；
2)处理结合垫；
3)处理样品垫；
4)制备胶体金结合垫；
5)组装大卡；
6)切割装袋；
7)制备标准比色卡，其包括如下步骤：
先将HCG抗原标准品稀释，配置成系列浓度标准品，将试纸条标记MAX线的一端浸入所述标准品，液面不得超过MAX线，待样本上到硝酸纤维素膜时，将试纸放平，反应完毕后，利用像素分析软件分析一系列试纸条上的C和T两个条带，模拟出与C和T两个色素相同的两个红色条带，从而得出一系列HCG标准品浓度的标准比色卡。
2.根据权利要求1所述的尿液HCG定量检测试纸条的制备方法，其特征在于，所述步骤1)的工艺为在带有背胶的PVC底板上粘贴硝酸纤维素膜，然后用划膜仪将检测线T溶液和质控线C溶液同时划在在硝酸纤维素膜上，烘干，切割，与干燥剂装袋，备用。
3.根据权利要求1所述的尿液HCG定量检测试纸条的制备方法，其特征在于，所述一系列HCG标准品浓度的标准比色卡包括浓度为0、25、50、100、250、500、1000、2500、5000、10000、25000、50000、100000和200000mIU/mL的标准比色卡。
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