WO2024070524A1

WO2024070524A1 - 細胞組織の製造方法、塗布方法および塗布装置

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Publication number: WO2024070524A1
Application number: PCT/JP2023/032319
Authority: WO
Inventors: ▲祥▼平近江; 佳也塚本; 淳志小田
Original assignee: Ntn株式会社
Priority date: 2022-09-27
Filing date: 2023-09-05
Publication date: 2024-04-04

Abstract

細胞組織の製造方法での、第２塗布液（ＢＢ）を供給する工程においては、Ｎ個の第１塗布液（ＡＡ）のそれぞれの第１寸法をｒ１ｎ（１≦ｎ≦Ｎの自然数）、Ｍ個の第２塗布液のそれぞれの第２寸法をｒ２ｍ（１≦ｍ≦Ｍの自然数）とし、Ｎ個の中から選択された任意の第１寸法がｒ１ｎの第１塗布液の中心と、Ｍ個の中から選択された任意の第２寸法がｒ２ｍの第２塗布液の中心との距離をＤｎ，ｍとすれば、任意の第１塗布液（ＡＡ）と任意の第２塗布液（ＢＢ）との間で　（数１）Ｄｎ，ｍ＜ｒ２ｍ－ｒ１ｎ・・・（１）および　（数２）Ｄｎ，ｍ＞ｒ２ｍ＋ｒ１ｎ・・・（２）のいずれかが成立するように供給される。

Description

細胞組織の製造方法、塗布方法および塗布装置

　本開示は、細胞組織の製造方法、塗布方法および塗布装置に関する。

　１つの容器内に、異種の細胞および組織を近接して培養することで、生体と類似した極性のある細胞・組織を形成する技術が、たとえば特開２０２０－１７８６１２号公報（特許文献１）に開示されている。特開２０２０－１７８６１２号公報には、１つの容器内に複数の細胞組織を塗布針方式により形成する方法が開示されている。

特開２０２０－１７８６１２号公報

　特開２０２０－１７８６１２号公報では、たとえば段落００９６および図１７にて、塗布対象物であるウェルと、その中に供給される第１塗布液としての細胞組織との組み合わせについて例示されている。

　しかし特開２０２０－１７８６１２号公報には、細胞を含む第１塗布液の半径と、それを覆う第２塗布液との半径と、ウェルの大きさとの３つのパラメータの間の関係について開示されていない。仮に特開２０２０－１７８６１２号公報の図１７（ａ）において、ウェルの内壁に近い位置に第２塗布液をディスペンサを用いて滴下すれば、静電気により第２塗布液がウェルの内壁に付着したり、目的の位置からずれたりすることがある。結果として、第２塗布液が第１塗布液を完全に覆うことが出来ず、第１塗布液が崩壊する可能性がある。

　本開示は上記の課題に鑑みなされたものである。本開示の目的は、寸法および中心位置を考慮しつつ塗布液を高い位置精度で供給することにより、小スケールかつハイスループットで作用を再現性高く高精度に評価可能な細胞組織の製造方法を提供することである。

　本開示の他の目的は、細胞組織の作製に要する総時間をいっそう短縮できる塗布方法および塗布装置を提供することである。

　本開示に従った細胞組織の製造方法では、塗布対象物内に第１塗布液がＮ個（Ｎ≧１の自然数）供給され、細胞が配置される。Ｎ個の第１塗布液のうち少なくとも１個を覆うように、塗布対象物内に第２塗布液がＭ個（Ｍ≧１の自然数）供給される。第２塗布液を供給する工程においては、Ｎ個の第１塗布液のそれぞれの中心から外縁までの寸法の最大値である第１寸法をｒ_１ｎ（１≦ｎ≦Ｎの自然数）、Ｍ個の第２塗布液のそれぞれの中心から外縁までの寸法の最大値である第２寸法をｒ_２ｍ（１≦ｍ≦Ｍの自然数）とし、Ｎ個の中から選択された任意の第１寸法がｒ_１ｎの第１塗布液の中心と、Ｍ個の中から選択された任意の第２寸法がｒ_２ｍの第２塗布液の中心との距離をＤ_ｎ，ｍとすれば、任意の第１塗布液と任意の第２塗布液との間で
　　（数１）Ｄ_ｎ，ｍ＜ｒ_２ｍ－ｒ_１ｎ・・・（１）
および
　　（数２）Ｄ_ｎ，ｍ＞ｒ_２ｍ＋ｒ_１ｎ・・・（２）
のいずれかが成立するように供給される。

　本開示に従った塗布方法では、塗布材料を受け入れ可能な複数の容器を有するプレートに含まれる第１容器に、第１塗布機構を用いて塗布材料としての第１塗布材料を供給する工程がなされる。プレートを載置するステージを移動する同時供給前移動工程がなされる。プレートの第１容器と間隔をあけて配置される第２容器に第１塗布機構を用いて第１塗布材料を供給すると同時に、第１容器に、第１塗布機構と間隔をあけて配置される第２塗布機構を用いて塗布材料としての第２塗布材料を供給する同時供給工程がなされる。同時供給前移動工程および同時供給工程がなされる毎に、第１容器および第２容器に相当する容器がステージの移動方向に沿って変更される。

　本開示に従った塗布装置は、塗布機構と、ステージとを備える。塗布機構は、塗布されるべき塗布材料を供給可能である。ステージは、塗布材料が供給されるべきプレートを載置可能である。塗布機構は、第１塗布機構と、第１塗布機構に隣接する第２塗布機構とを含む。第１塗布機構と第２塗布機構との間隔は、塗布機構による１回目の塗布時と２回目の塗布時との間でのステージの移動量に等しい。

　本開示によれば、寸法および中心位置を考慮しつつ塗布液を高い位置精度で供給することにより、小スケールかつハイスループットで作用を再現性高く高精度に評価可能な細胞組織の製造方法を提供できる。

　本開示によれば、細胞組織の作製に要する総時間をいっそう短縮できる。

実施の形態１に従った塗布装置の模式図である。図１に示した塗布装置の塗布機構を示す模式図である。試料塗布セットの概略斜視図である。実施の形態１の細胞組織の製造方法の各工程において供給される各塗布液の中心および寸法を示す概略図である。２個の第１塗布液の配置関係を示す概略図である。第１塗布液と、これを覆う第１仮想曲線との中心、寸法、位置の関係を示す概略図である。第１仮想曲線と第２塗布液との関係を示す概略図である。第１塗布液と第２塗布液との位置関係の第１例を示す概略図である。第１塗布液と第２塗布液との位置関係の第２例を示す概略図である。２個の第２塗布液の配置関係を示す概略図である。第２塗布液と、これを覆う第２仮想曲線との中心、寸法、位置の関係を示す概略図である。第２仮想曲線とウェルとの関係を示す概略図である。実施例１における位相差顕微鏡像である。実施例２における位相差顕微鏡像である。実施例３において供給された各塗布液の位置および寸法を示す概略平面図である。図１５と同一の各塗布液の中心位置および中心間の距離を示す概略平面図である。実施例３における位相差顕微鏡像である。実施例４における位相差顕微鏡像である。第２塗布液のウェル内における塗布位置を変化させたときの、塗布されると想定される位置と、実際に塗布された位置とを示す模式図および写真である。実施の形態２における第１塗布液が塗布される前の態様を示す概略図である。実施の形態２における第１塗布液の組成を示す概略図である。実施の形態２における第１塗布液が塗布される工程を示す概略図である。実施の形態２における第１塗布液が塗布された後の態様を示す概略図である。実施の形態２における第２塗布液が供給される工程を示す概略図である。図２４の工程がなされた後のウェル内の態様を示す概略図である。実施の形態２における培地が供給される工程を示す概略図である。培養前の第１塗布液内の細胞の態様を示す概略図である。培養後の第１塗布液内の細胞の態様を示す概略図である。ウェル内に塗布液が供給された直後の位相差顕微鏡像（左）、および６日間培養後の位相差顕微鏡像（右）である。塗布組織の実験におけるＣａ^２＋トランジエント波形を示すグラフである。塗布組織および２Ｄ組織のそれぞれにイソプロテレノールを添加した際のＢＰＭの変化を示すグラフである。塗布組織および２Ｄ組織のそれぞれにイソプロテレノールを添加した際のＡＭＰの変化を示すグラフである。実施の形態３に係る塗布装置の第１例を示す概略正面図である。実施の形態３に係る塗布装置の第２例を示す概略正面図である。図３３に示した塗布装置の針塗布機構を示す模式図である。プレートの概略斜視図である。実施の形態３の塗布方法を示すフローチャートである。実施の形態３の塗布方法に用いられる塗布装置の、塗布機構および設置されるプレートの一部を示す概略断面図である。実施の形態３の塗布方法の第１工程を示す概略断面図である。実施の形態３の塗布方法の第２工程を示す概略断面図である。実施の形態３の塗布方法の第３工程を示す概略断面図である。実施の形態３の塗布方法の第４工程を示す概略断面図である。三次元細胞組織の作製方法の一例を示す概略図である。図４３の作製方法により得られた三次元細胞組織の写真である。プレートに含まれる１つの容器内に細胞組織が作製された結果を示す概略図である。図４５中の（Ｃ）のように単一の容器内に複数形成された細胞組織の例を示す概略図である。直径が３３０μｍである塗布針を用いた細胞組織の作製例である。実施の形態３の塗布方法と比較例の塗布方法との塗布がなされるタイミングを比較するための概略図である。実施の形態４に係る塗布装置の例を示す概略正面図である。実施の形態４の塗布方法を示すフローチャートである。実施の形態４の塗布方法に用いられる塗布装置の、塗布機構および設置されるプレートの一部を示す概略断面図である。実施の形態４の塗布方法の第１工程を示す概略断面図である。実施の形態４の塗布方法の第２工程を示す概略断面図である。実施の形態４の塗布方法の第３工程を示す概略断面図である。実施の形態４の塗布方法の第４工程を示す概略断面図である。実施の形態４の塗布方法の第５工程を示す概略断面図である。実施の形態４の塗布方法と比較例の塗布方法との塗布がなされるタイミングを比較するための概略図である。実施の形態５の第１例に係る塗布方法を示すフローチャートである。実施の形態５の第１例に係る塗布方法に用いられる塗布装置の、塗布機構および設置されるプレートの一部を示す概略断面図である。実施の形態５の第１例に係る塗布方法の第１工程を示す概略断面図である。実施の形態５の第１例に係る塗布方法の第２工程を示す概略断面図である。実施の形態５の第１例に係る塗布方法の第３工程を示す概略断面図である。実施の形態５の第１例に係る塗布方法の第４工程を示す概略断面図である。実施の形態５の第２例に係る塗布方法の他の例を示すフローチャートである。実施の形態６における一の容器内に形成される塗布材料の態様を示す平面図である。実施の形態７の塗布方法に用いられる塗布装置の、塗布機構および設置されるプレートの一部の第１例を示す概略断面図である。実施の形態７の塗布方法に用いられる塗布装置の、塗布機構および設置されるプレートの一部の第２例を示す概略断面図である。実施の形態７の塗布方法に用いられる塗布装置の、塗布機構および設置されるプレートの一部の第３例を示す概略断面図である。

　（はじめに）
　はじめに、実施の形態１の細胞組織の製造方法の特徴について簡単に説明する。図８を参照して、（Ａ）のように、供給される第１寸法ｒ_１ｎの第１塗布液ＡＡの中心と、それを覆う第２寸法ｒ_２ｍの第２塗布液ＢＢの中心との距離Ｄ_ｎ，ｍは、
　　（数１）Ｄ_ｎ，ｍ＜ｒ_２ｍ－ｒ_１ｎ・・・（１）
である。あるいは（Ｂ）のように、
　　（数２）Ｄ_ｎ，ｍ＞ｒ_２ｍ＋ｒ_１ｎ・・・（２）
である。以下、実施の形態１の細胞組織の製造方法について、図に基づいて説明する。

　（実施の形態１）
　（装置構成）
　図１は、実施の形態１に従った塗布装置の模式図である。図１を用いて、本実施形態に従った塗布装置を説明する。なお、説明の便宜のため、Ｘ方向、Ｙ方向、Ｚ方向が導入されている。図１を参照して、本実施形態である塗布装置は、処理室と、当該処理室の内部に配置されたＹ軸テーブル２と、Ｘ軸テーブル１と、Ｚ軸テーブル３と、塗布機構４と、観察光学系６と、当該観察光学系６に接続されたＣＣＤカメラ７と、制御部とを主に備えている。制御部は、モニタ９と、制御用コンピュータ１０と、操作パネル８とを含む。

　処理室の内部においては、当該処理室の底部上にＹ軸テーブル２が設置されている。このＹ軸テーブル２は、Ｙ軸方向に移動可能になっている。具体的には、Ｙ軸テーブル２の下面にガイド部が設置されている。当該ガイド部は、処理室の底面に設置されたガイドレールに摺動可能に接続されている。また、Ｙ軸テーブル２の下面にはボールねじが接続されている。当該ボールねじをモータなどの駆動部材により動作させることにより、Ｙ軸テーブル２はガイドレールに沿って（Ｙ軸方向に）移動可能になっている。また、Ｙ軸テーブル２の上部表面上は、後述の試料塗布セット１１を搭載する搭載面となっている。つまりＹ軸テーブル２は、液体材料を塗布される対象物である試料塗布セット１１を保持する保持台としての機能を有している。

　Ｙ軸テーブル２上には、Ｘ軸テーブル１が設置されている。Ｘ軸テーブル１は、Ｙ軸テーブル２をＸ軸方向に跨ぐように設置された構造体上に配置されている。Ｘ軸テーブル１には、Ｚ軸テーブル３が接続された移動体がＸ軸方向に移動可能に設置されている。移動体は、たとえばボールねじを用いてＸ軸方向に移動可能となっている。なお、Ｘ軸テーブル１は上記構造体を介して処理室の底面に固定されている。そのため、上述したＹ軸テーブル２は、Ｘ軸テーブル１に対してＹ軸方向に移動可能になっている。

　Ｘ軸テーブル１に接続された移動体には、上述のようにＺ軸テーブル３が設置されている。Ｚ軸テーブル３には、観察光学系６および塗布機構４が接続されている。観察光学系６は塗布される対象物である試料塗布セット１１の塗布位置を観察するためのものである。ＣＣＤカメラ７は、観察した画像を電気信号に変換する。Ｚ軸テーブル３は、これらの観察光学系６および塗布機構４をＺ軸方向に移動可能に保持している。

　これらのＹ軸テーブル２、Ｘ軸テーブル１、Ｚ軸テーブル３、観察光学系６および塗布機構４を制御するための制御用コンピュータ１０および操作パネル８、さらに制御用コンピュータに付随するモニタ９は、処理室の外部に設置されている。モニタ９は、上述したＣＣＤカメラ７で変換された画像データや、制御用コンピュータ１０からの出力データを表示する。操作パネル８は、制御用コンピュータ１０への指令を入力するために用いられる。

　図２は、図１に示した塗布装置の塗布機構を示す模式図である。図２を参照して、本実施の形態の塗布機構４は、サーボモータ４１、カム４３、当該カム４３のカム面に接触した状態で保持されている軸受４４、カム連結板４５、可動部４６、塗布針ホルダ２０を保持する可動ベース３５、および塗布材料容器２１を主に含む。塗布針ホルダ２０は可動ベース３５と着脱可能になっている。言い換えれば、ベース体としての可動ベース３５は、塗布針ホルダ２０を着脱可能に保持する。

　塗布機構４において、サーボモータ４１は、図１に示したＺ軸方向に沿った方向に中心軸が延びるように設置されている。サーボモータ４１の回転軸にはカム４３が接続されている。カム４３は、サーボモータ４１の中心軸を中心として回転可能になっている。カム４３は、サーボモータ４１の回転軸に接続された中心部と、当該中心部の一方端部に接続されたフランジ部とを含む。フランジ部の上部表面（サーボモータ４１側の表面）はカム面となっている。このカム面は、中心部の外周に沿って円環状に形成されているとともに、フランジ部の底面からの距離が変動するようにスロープ状に形成されている。具体的には、カム面は底面からの距離が最も遠くなっている（厚みの厚い）上端フラット領域と、この上端フラット領域から間隔を隔てて配置された下端フラット領域と、この上端フラット領域と下端フラット領域との間を滑らかに接続するスロープ部とを含む。下端フラット領域は、底面からの距離が最も近くなっている（厚みの薄い）領域である。

　このカム４３のカム面に接するように軸受４４が配置されている。この軸受４４にカム連結板４５が接続されている。カム連結板４５において、軸受４４と接続された一方端部と反対側の他方端部は可動部４６に固定されている。この可動部４６には、ベース体としての可動ベース３５が接続されている。この可動ベース３５に塗布針ホルダ２０が設置されている。塗布針ホルダ２０は塗布針２４を含む。塗布針２４は、試料塗布セット１１のたとえばウェル１２に液体材料を塗布可能である。塗布針２４は、塗布針ホルダ２０の下面（サーボモータ４１が位置する側と反対側である下側）において塗布針ホルダ２０から突出するように配置されている。塗布針ホルダ２０下には塗布材料容器２１が配置されている。塗布材料容器２１に塗布針２４は挿入された状態で保持されている。

　可動部４６には固定ピンが固定されている。また、サーボモータ４１を保持している架台には他方の固定ピンが固定されている。この固定ピンの間を繋ぐようにバネが設置されている。このバネにより、可動部４６は塗布材料容器２１側に向けた力を受けた状態になっている。また、このバネの力によって、軸受４４はカム４３のカム面に押圧された状態を維持している。

　また、可動部４６、可動ベース３５は、サーボモータ４１を保持する架台に設置されたリニアガイドに接続され、Ｚ軸方向に沿って移動可能になっている。

　上述した塗布機構４においては、サーボモータ４１を駆動することにより当該サーボモータ４１の回転軸を回転させてカム４３を回転させる。この結果、カム４３のカム面に接触している軸受４４のＺ軸方向における位置がサーボモータ４１の回転軸の回転に応じて変動する。そして、この軸受４４のＺ軸方向での位置変動に応じて、可動部４６、可動ベース３５がＺ軸方向に移動することにより、塗布針２４のＺ軸方向における位置を変化させることができる。つまり塗布針２４をＺ軸方向に往復運動させることができる。この動作により、塗布針２４がＺ軸方向の上方にある時には、液体材料が収納された塗布材料容器２１内に塗布針２４の先端が浸漬される。この状態に対し、塗布針２４は塗布材料容器２１の底面の先端穴から下方に突出することで塗布動作がなされる。塗布針２４の先端に液体材料が付着した状態で、塗布針２４の先端が塗布材料容器２１の先端穴から突出し、塗布材料容器２１の外に出る。このとき、表面張力によって液体材料が上方に引き上げられ、塗布針２４の先端にはほぼ一定量の液体材料が付着した状態となる。このように付着した液体材料が試料塗布セット１１に転写されることで、再現性の高い塗布工程が実現できる。

　より詳しくは、図１および図２を参照して、操作パネル８から出力された塗布速度指令値は、制御用コンピュータ１０の記憶装置に保管される。塗布動作時には、記憶装置から読みだされた塗布速度指令値が、塗布機構４の制御プログラムに送信される。塗布機構４の制御プログラムは、塗布速度指令値に基づいて、サーボモータ４１の回転速度を決定し回転させる。これにより塗布針２４をＺ軸方向に往復運動させながら塗布動作がなされる。制御用コンピュータ１０が図示されない上位の制御システムと通信している場合には、塗布速度指令値は上位の制御システムから塗布機構４の制御プログラムに送信されてもよい。また、塗布される液体材料の種類に応じたパラメータが、制御用コンピュータ１０の記憶装置に保管されてもよい。指定された液体材料の種類、塗布量、塗布寸法に応じて塗布速度指令値が算出されてもよい。

　（製造方法の特徴）
　図３は、試料塗布セットの概略斜視図である。図３を参照して、本実施の形態では、液体材料としての塗布液は、試料塗布セット１１に複数形成されたウェル１２の内部に塗布供給される。ただし塗布液が供給される塗布対象物はこれに限られない。試料塗布セット１１はＺ軸方向に厚みを有し、その最上面に複数のウェル１２が形成されている。複数のウェル１２は、試料塗布セット１１の上面がくぼんだ凹形状の部分である。複数のウェル１２は互いに間隔をあけて、たとえば図３のＹ軸方向に８列、Ｘ軸方向に１２列で合計９６個形成されてもよい。ウェル１２の平面形状はたとえば円形など任意である。

　図４は、実施の形態１の細胞組織の製造方法の各工程において供給される各塗布液の中心および寸法を示す概略図である。図４以降の各図の塗布液は、Ｚ方向から平面視した形状を示す。図４を参照して、本実施の形態においては、たとえば平面視にて円形の塗布液が供給されることが好ましい。ただしこれに限らず、塗布液は完全な円形からやや崩れたものであったり、やや一方に大きくずれた形状の楕円形の平面形状であったりしてもよい。さらに塗布液は円形、楕円形のいずれとも異なる、たとえば八角形、十二角形などの多角形の平面形状（またはこれらの多角形に近似する平面形状）であってもよい。いずれにしても、以降に述べる塗布液の寸法とは、中心（図心）から外縁までの寸法の最大値を意味することとする。塗布液の平面形状が円形であれば、寸法は図４中の（Ａ）における半径としてのｒ_１ｎを意味し、楕円形であれば寸法は図４中の（Ａ）における長半径としてのｒ_１ｎを意味する。

　まず試料塗布セット１１の複数のウェル１２から選ばれた１つのウェル１２に、第１塗布液がＮ個供給される。Ｎは１以上の自然数であり、（Ａ）に示す第１塗布液ＡＡが少なくとも１個供給される。なお複数の第１塗布液ＡＡは、１つの塗布機構により時間的に連続して供給された液体によるものを１個とする。１つの塗布機構により時間的に分断されながら供給された液体による第１塗布液ＡＡは互いに別個のものとする。また時間的に同時であっても、互いに異なる塗布機構から供給された液体による第１塗布液ＡＡは互いに別個のものとする。複数個の第１塗布液ＡＡが供給される場合、そのうち少なくとも１個に培養すべき細胞が含まれる。このため第１塗布液ＡＡの供給により、ウェル１２内には培養すべき細胞が配置される。

　第１塗布液ＡＡの寸法を第１寸法ｒ_１ｎ（１≦ｎ≦Ｎ）とする。すなわちＮ個の第１塗布液ＡＡのうち１個目の第１寸法はｒ_１１で表記され、２個目の第１寸法はｒ_１２で表記される。

　図５は、２個の第１塗布液の配置関係を示す概略図である。図５を参照して、Ｎ個（Ｎは２以上の自然数）のうち任意に選択された２個の第１塗布液ＡＡのそれぞれの寸法をｒ_１ｎ、ｒ_{１（ｎ＋１）}とする。２個の第１塗布液ＡＡのそれぞれの中心（図心）間の距離をｄ_{ｎ，ｎ＋１}とする。このとき２個の第１塗布液の配置関係は、図５中の（Ａ）のように互いに重ならない場合と、（Ｂ）のように一方が他方の内部に完全に収まる場合と、（Ｃ）のように両者が部分的に重なる場合とがある。（Ａ）には両者が互いに外接する場合を含む。（Ｂ）には一方が他方に内接する場合を含む。

　図５中の（Ａ）の場合には以下の式（３）が、（Ｂ）の場合には以下の式（４）が、（Ｃ）の場合には以下の式（５）が、それぞれ成立する。式（３）中の等号は図５の（Ａ）にて２つの第１塗布液ＡＡが互いに外接する場合である。式（４）中の等号は図５の（Ｂ）にて一方の第１塗布液ＡＡが他方に内接する場合である。式（５）にてｒ_１ｎ＝ｒ_{１（ｎ＋１）}であれば、ｄ_{ｎ，ｎ＋１}＜ｒ_１ｎ＋ｒ_{１（ｎ＋１）}のみ成立する。

　　（数３）ｄ_{ｎ，ｎ＋１}≧ｒ_１ｎ＋ｒ_{１（ｎ＋１）}・・・（３）
　　（数４）ｄ_{ｎ，ｎ＋１}≦ｒ_{１（ｎ＋１）}－ｒ_１ｎ・・・（４）
　　（数５）ｒ_{１（ｎ＋１）}－ｒ_１ｎ＜ｄ_{ｎ，ｎ＋１}＜ｒ_１ｎ＋ｒ_{１（ｎ＋１）}・・・（５）
　第２塗布液ＢＢ（図４中の（Ｃ）参照）は、Ｎ個の第１塗布液ＡＡのうち少なくとも１個をＺ軸方向の上側から覆うようにＭ個（Ｍ≧１の自然数）だけ、ウェル１２内に供給される。つまりたとえば、複数の第２塗布液ＢＢのうち１個は複数の第１塗布液ＡＡのうち一部を覆い、第２塗布液ＢＢのうち他の１個は複数の第１塗布液ＡＡのうち他の一部を覆ってもよい。図６は、第１塗布液と、これを覆う第１仮想曲線との中心、寸法、位置の関係を示す概略図である。図６および図４中の（Ｂ）を参照して、第１仮想曲線Ａ’は、第１塗布液ＡＡと重なる１個の第２塗布液ＢＢの寸法を決めるために用いられる仮想の図形（たとえば円形）である。仮想曲線は曲線でない（直線となる）こともあり得るが、以下ではその場合もまとめて仮想曲線と呼称する。Ｎ個の第１塗布液ＡＡのうち、１個の第２塗布液ＢＢと重なる１個以上の第１塗布液ＡＡが選ばれる。それら１個以上の第１塗布液ＡＡのそれぞれの中心（図心）から、それらの第１塗布液ＡＡの図心が、第１仮想曲線Ａ’の第１図心Ｇ１として求められる。

　たとえばＮ個の第１塗布液ＡＡの全てを覆う１個の第２塗布液ＢＢが供給される場合、図６に示すように、Ｎ個の第１塗布液ＡＡのそれぞれの中心を考える。１個の第１塗布液ＡＡの中心の位置は、それぞれの第１塗布液ＡＡの図心を決める。図心は、その位置を支点にすることにより、塗布液が釣り合う点を意味する。たとえば円形または楕円形などの、重量が均一に作用する第１塗布液ＡＡであれば、その図心は中心に等しくなる。

　１個目の第１塗布液ＡＡの中心の位置座標を（ｘ_１，ｙ_１）とし、同様にＮ個目の第１塗布液ＡＡの中心を（ｘ_Ｎ，ｙ_Ｎ）とする。この中心位置（中心の座標）は、第１塗布液ＡＡが円形または楕円形の場合には当該第１塗布液ＡＡの図心の座標に等しい。当該中心の座標は、塗布装置の制御部に含まれるモニタ９の出力などから求められる。このとき第１図心Ｇ１の座標（Ｘ_１，Ｙ_１）は、Ｎ＝３のときは、各中心点の座標を３で除することにより、各中心点の座標を結んでなる三角形の図心として得られる。Ｎ≧４のときは、各中心を結んでなるＮ角形を（Ｎ－２）個の三角形に分割し、それぞれの三角形の面積ｓ_ｎに三角形の図心座標ｇｘ_ｎ（ｇｙ_ｎ）を乗じたものを合計し、Ｎ角形の全面積で割ることにより得られる。すなわち

となる。第１塗布液ＡＡを全て覆うよう、第１仮想曲線Ａ’の第１仮想寸法ｒ_１ｖが求められる。第１仮想寸法ｒ_１ｖは、図６のように最も第１図心Ｇ１から離れたたとえばｎ＝３およびｎ＝Ｎの第１塗布液ＡＡが第１仮想曲線Ａ’の円形に内接するときの第１仮想曲線Ａ’の（円形の）寸法として求められる。すなわち第１仮想曲線Ａ’は、複数の第１塗布液ＡＡのうち最も第１図心Ｇ１から見て外側にあり、それと内接することにより他の第１塗布液ＡＡと内接するよりも寸法が大きくなる（最大寸法を生じる）ように形成される。つまり第１塗布液の寸法ｒ_１ｎと第１仮想曲線Ａ’の第１仮想寸法ｒ_１ｖとの間には、
　　（数８）ｒ_１ｖ≧ｒ_１ｎ・・・（８）
の関係が成り立ち、特に第１塗布液ＡＡが１個の場合は上記の式（８）は等式となる。

　また第１図心Ｇ１と、ｎ＝３（３個目）であり寸法がｒ_１３の第１塗布液ＡＡ（第１仮想曲線Ａ’に内接）の中心との距離Ｌ１は、
　　（数９）Ｌ１＝ｒ_１ｖ－ｒ_１３・・・（９）
となる。

　なお図６のように、単一の第１仮想曲線Ａ’内における複数の第１塗布液ＡＡ間の配置状態は、図５中の（Ａ），（Ｂ），（Ｃ）のいかなる態様であってもよい。すなわち（次に述べる）第２塗布液ＢＢが覆う複数の第１塗布液ＡＡ同士は、互いに離れていてもよいし、一方が他方の内部に収まってもよいし、部分的に交わるように配置されてもよい。

　このようにして形成された第１仮想曲線Ａ’の第１仮想寸法ｒ_１ｖよりも、第２塗布液ＢＢの第２寸法ｒ_２ｍの方が大きい。先述した通り、第２塗布液ＢＢの第２寸法は、中心（図心）から外縁までの寸法の最大値を意味する。そのことを図７に示す。図７は、第１仮想曲線と第２塗布液との関係を示す概略図である。図７および図４中の（Ｃ）を参照して、第２塗布液ＢＢは第１仮想曲線Ａ’の全体を覆うように供給される。また第２塗布液ＢＢは第１仮想曲線Ａ’を内接せずにその全体が第２塗布液ＢＢと重なるように供給される。このため、Ｍ個の中から選ばれたｍ個目の第２塗布液ＢＢの寸法をｒ_２ｍ（１≦ｍ≦Ｍ）とすれば、当然に
　　（数１０）ｒ_２ｍ＞ｒ_１ｖ・・・（１０）
が成り立つ。また図７において第１図心Ｇ１と、寸法がｒ_２ｍの第２塗布液ＢＢの中心との距離Ｌ２は、
　　（数１１）Ｌ２＜ｒ_２ｍ－ｒ_１ｖ・・・（１１）
で表される。

　なお、第１仮想寸法ｒ_１ｖよりも大きい寸法ｒ_１ｖ’＝α×ｒ_１ｖ（α＞１．０）を基準寸法とし、当該基準寸法ｒ_１ｖ’よりも大きくなるように第２塗布液ＢＢの第２寸法ｒ_２ｍが決定されてもよい。αは１．１以上であることがより好ましい。αを大きくすれば、第１塗布液ＡＡと第２塗布液ＢＢとの外縁同士の隙間を広くできる。このことと、第２寸法ｒ_２ｍが第１仮想寸法ｒ_１ｖ（上記のα＝１．０）よりも大きくなるように決定されることとを全てまとめれば、第１仮想寸法ｒ_１ｖ以上の基準寸法ｒ_１ｖ’よりも、第２寸法ｒ_２ｍの方が大きい。

　図８は、第１塗布液と第２塗布液との位置関係の第１例を示す概略図である。図８を参照して、たとえば（Ａ）のように、第１塗布液ＡＡが第２塗布液ＢＢに内接することなくその内側に完全に収まるように第２塗布液ＢＢに覆われてもよい。あるいは（Ｂ）のように、第１塗布液ＡＡが第２塗布液ＢＢに外接することも重なることもなく第２塗布液ＢＢの外側に完全に外れてもよい。（Ｂ）の場合には、第１塗布液ＡＡは図示される第２塗布液ＢＢの左側に存在する図示されない他の第２塗布液に内接しないように完全に覆われる。

　図８各図の第１塗布液ＡＡ、第２塗布液ＢＢはいずれも１個以上の中から選択された任意のものである。このため、ｎ番目の第１塗布液ＡＡの中心とｍ番目の第２塗布液の中心との距離をＤ_ｎ，ｍとすれば、（Ａ），（Ｂ）いずれの場合も当然に
　　（数１２）ｒ_２ｍ＞ｒ_１ｎ・・・（１２）
が成り立つ。その上で、（Ａ）の場合には
　　（数１３）Ｄ_ｎ，ｍ＜ｒ_２ｍ－ｒ_１ｎ・・・（１）
が成り立つ。また（Ｂ）の場合には
　　（数１４）Ｄ_ｎ，ｍ＞ｒ_２ｍ＋ｒ_１ｎ・・・（２）
が成り立つ。上記の式（１）と（２）とのいずれかが成立するように、第２塗布液ＢＢが供給される。

　図９は、第１塗布液と第２塗布液との位置関係の第２例を示す概略図である。図９を参照して、本実施の形態では、第２塗布液ＢＢに内接、外接のいずれもしないように第１塗布液ＡＡが配置されればよい。図９では、左側の第１塗布液Ａ１ｏ、右側の第１塗布液Ａ２ｏのいずれも第２塗布液Ｂ１ｏ，Ｂ２ｏのいずれとも内接、外接しない。このため図９のように、第２塗布液Ｂ１ｏと第２塗布液Ｂ２ｏとが部分的に重なってもよい。図９の場合、第１塗布液Ａ１ｏと第２塗布液Ｂ１ｏとの間には式（１）が成立し、第１塗布液Ａ１ｏと第２塗布液Ｂ２ｏとの間には式（２）が成立する。また第１塗布液Ａ２ｏと第２塗布液Ｂ２ｏとの間には式（１）が成立し、第１塗布液Ａ２ｏと第２塗布液Ｂ１ｏとの間には式（２）が成立する。

　図１０は、２個の第２塗布液の配置関係を示す概略図である。図１０を参照して、Ｍ個（Ｍは２以上の自然数）のうち任意に選択された２個の第２塗布液ＢＢのそれぞれの寸法をｒ_２ｍ、ｒ_{２（ｍ＋１）}とする。２個の第２塗布液ＢＢのそれぞれの中心（図心）間の距離をｐ_{ｍ，ｍ＋１}とする。このとき２個の第２塗布液の配置関係は、図１０中の（Ａ）のように互いに重ならない場合と、（Ｂ）のように一方が他方の内部に完全に収まる場合と、（Ｃ）のように両者が部分的に重なる場合とがある。（Ａ）には両者が互いに外接する場合を含む。（Ｂ）には一方が他方に内接する場合を含む。

　図１０中の（Ａ）の場合には以下の式（１３）が、（Ｂ）の場合には以下の式（１４）が、（Ｃ）の場合には以下の式（１５）が、それぞれ成立する。式（１３）中の等号は図１０の（Ａ）にて２つの第２塗布液ＢＢが互いに外接する場合である。式（１４）中の等号は図１０の（Ｂ）にて一方の第２塗布液ＢＢが他方に内接する場合である。式（１５）にてｒ_２ｍ＝ｒ_{２（ｍ＋１）}であれば、ｐ_{ｍ，ｍ＋１}＜ｒ_２ｍ＋ｒ_{２（ｍ＋１）}のみ成立する。

　　（数１５）ｐ_{ｍ，ｍ＋１}≧ｒ_２ｍ＋ｒ_{２（ｍ＋１）}・・・（１３）
　　（数１６）ｐ_{ｍ，ｍ＋１}≦ｒ_{２（ｍ＋１）}－ｒ_２ｍ・・・（１４）
　　（数１７）ｒ_{２（ｍ＋１）}－ｒ_２ｍ＜ｐ_{ｍ，ｍ＋１}＜ｒ_２ｍ＋ｒ_{２（ｍ＋１）}・・・（１５）
　次に第２塗布液ＢＢと、これらが供給されるウェル１２との寸法の関係を考える。第２塗布液ＢＢはすべて同一（単一）のウェル１２内に供給される。図１１は、第２塗布液と、これを覆う第２仮想曲線との中心、寸法、位置の関係を示す概略図である。図１１および図４中の（Ｄ）を参照して、第２仮想曲線Ｂ’は、第２塗布液ＢＢを供給すべきウェル１２の寸法を決めるために用いられる仮想の図形（たとえば円形）である。ウェル１２内に供給されるＭ個の第２塗布液ＢＢのそれぞれの中心（図心）から、それらＭ個の第２塗布液ＢＢ全体の図心が、第２仮想曲線Ｂ’の第２図心Ｇ２として求められる。

　たとえば図１１に示すように、Ｍ個の第２塗布液ＢＢのそれぞれをｍ＝１，２，・・・，Ｍとする。なお第２塗布液ＢＢの中心位置の測定方法は第１塗布液ＡＡと同様である。

　１個目の第２塗布液ＢＢの中心の位置座標を（ｘ_１，ｙ_１）とし、同様にＭ個目の第２塗布液ＢＢの中心を（ｘ_Ｍ，ｙ_Ｍ）とする。この中心位置（中心の座標）は、第２塗布液ＢＢが円形または楕円形の場合には当該第２塗布液ＢＢの図心の座標に等しい。当該中心の座標は、塗布装置の制御部に含まれるモニタ９の出力などから求められる。このとき第２図心Ｇ２の座標（Ｘ_２，Ｙ_２）は、Ｍ＝３のときは、各中心点の座標を３で除することにより、各中心点の座標を結んでなる三角形の図心として得られる。Ｍ≧４のときは、各中心を結んでなるＭ角形を（Ｍ－２）個の三角形に分割し、それぞれの三角形の面積ｓ_ｍに三角形の図心座標ｇｘ_ｍ（ｇｙ_ｍ）を乗じたものを合計し、Ｍ角形の全面積で割ることにより得られる。すなわち

となる。Ｍ個の第２塗布液ＢＢを全て覆うよう、第２仮想曲線Ｂ’の第２仮想寸法ｒ_２ｖが求められる。第２仮想寸法ｒ_２ｖは、図１１のように最も第２図心Ｇ２から離れたたとえばｍ＝３およびｍ＝Ｍの第２塗布液ＢＢが第２仮想曲線Ｂ’の円形に内接するときの第２仮想曲線Ｂ’の（円形の）寸法として求められる。すなわち第２仮想曲線Ｂ’は、複数の第２塗布液ＢＢのうち最も第２図心Ｇ２から見て外側にあり、それと内接することにより他の第２塗布液ＢＢと内接するよりも寸法が大きくなる（最大寸法を生じる）ように形成される。つまり第２塗布液の寸法ｒ_２ｍと第２仮想曲線Ｂ’の第２仮想寸法ｒ_２ｖとの間には、
　　（数２０）ｒ_２ｖ≧ｒ_２ｍ・・・（１８）
の関係が成り立ち、特に第２塗布液ＢＢが１個の場合は上記の式（１８）は等式となる。

　また第２図心Ｇ２と、ｍ＝３（３個目）であり寸法がｒ_２３の第２塗布液ＢＢ（第２仮想曲線Ｂ’に内接）の中心との距離Ｌ２は、
　　（数２１）Ｌ２＝ｒ_２ｖ－ｒ_２３・・・（１９）
となる。

　なお図１１のように、第２仮想曲線Ｂ’内における複数の第２塗布液ＢＢ間の配置状態は、図１０中の（Ａ），（Ｂ），（Ｃ）のいかなる態様であってもよい。すなわち（次に述べる）ウェル１２内に供給される複数の第２塗布液ＢＢ同士は、互いに離れていてもよいし、一方が他方の内部に収まってもよいし、部分的に交わるように配置されてもよい。

　このようにして形成された第２仮想曲線Ｂ’の第２仮想寸法ｒ_２ｖよりも、ウェル１２の第３寸法ｒ_３の方が大きい。そのことを図１２に示す。図１２は、第２仮想曲線とウェルとの関係を示す概略図である。図１２および図４中の（Ｅ）を参照して、ウェル１２は第２仮想曲線Ｂ’を内接することなく収納する。このため、ウェル１２の寸法をｒ_３とすれば、当然に
　　（数２２）ｒ_３＞ｒ_２ｖ・・・（２０）が成り立つ。また図１２において第２図心Ｇ２と、寸法がｒ_３のウェル１２の中心との距離Ｌ３は、
　　（数２３）Ｌ３＜ｒ_３－ｒ_２ｖ・・・（２１）
で表される。

　なお、第２仮想寸法ｒ_２ｖよりも大きい寸法ｒ_２ｖ’＝β×ｒ_２ｖ（β＞１．０）を基準寸法とし、当該基準寸法ｒ_２ｖ’よりもウェル１２の第３寸法ｒ_３の方が大きくなってもよい。βは１．１以上であることがより好ましい。βを大きくすれば、第２塗布液ＢＢの外縁とウェル１２の内壁面との隙間を広くできる。このことと、第３寸法ｒ_３が第２仮想寸法ｒ_２ｖ（上記のβ＝１．０）よりも大きいこととを全てまとめれば、第２仮想寸法ｒ_２ｖ以上の基準寸法ｒ_２ｖ’よりも、第３寸法ｒ_３の方が大きい。

　（作用効果）
　本実施の形態に係る細胞組織の製造方法では、塗布対象物としてのウェル１２内に第１塗布液ＡＡがＮ個（Ｎ≧１の自然数）供給され、細胞が配置される。Ｎ個の第１塗布液ＡＡのうち少なくとも１個を覆うように、ウェル１２内に第２塗布液ＢＢがＭ個（Ｍ≧１の自然数）供給される。第２塗布液ＢＢを供給する工程においては、Ｎ個の第１塗布液ＡＡのそれぞれの中心から外縁までの寸法の最大値である第１寸法をｒ_１ｎ（１≦ｎ≦Ｎの自然数）、Ｍ個の第２塗布液ＢＢのそれぞれの中心から外縁までの寸法の最大値である第２寸法をｒ_２ｍ（１≦ｍ≦Ｍの自然数）とし、Ｎ個の中から選択された任意の第１寸法がｒ_１ｎの第１塗布液ＡＡの中心と、Ｍ個の中から選択された任意の第２寸法がｒ_２ｍの第２塗布液ＢＢの中心との距離をＤ_ｎ，ｍとすれば、任意の第１塗布液ＡＡと任意の第２塗布液ＢＢとの間で
　　（数２４）Ｄ_ｎ，ｍ＜ｒ_２ｍ－ｒ_１ｎ・・・（１）
および
　　（数２５）Ｄ_ｎ，ｍ＞ｒ_２ｍ＋ｒ_１ｎ・・・（２）
のいずれかが成立するように供給される。

　式（１）が成立すれば、図８中の（Ａ）のように、第１塗布液ＡＡは第２塗布液ＢＢと内接することなく収納される。このため第２塗布液ＢＢを第１塗布液ＡＡ上に滴下する際における第１塗布液ＡＡの崩壊が抑制できる。式（２）が成立すれば、図８中の（Ｂ）のように、第１塗布液ＡＡは第２塗布液ＢＢと全く接触しないため、第２塗布液ＢＢを第１塗布液ＡＡ上に滴下する際における第１塗布液ＡＡの崩壊が抑制できる。このため寸法および中心位置を考慮しつつ塗布液を高い位置精度で供給することにより、小スケールかつハイスループットで作用を再現性高く高精度に評価可能な細胞組織の製造方法を提供できる。

　上記細胞組織の製造方法において、Ｎ個の第１塗布液ＡＡのうち第２塗布液ＢＢと重なる１個以上の第１塗布液ＡＡの第１図心Ｇ１を中心とし１個以上の第１塗布液ＡＡを全て覆い１個以上の第１塗布液ＡＡのいずれかと内接するよう求められた第１仮想曲線Ａ’の最大寸法である第１仮想寸法ｒ_１ｖ以上の基準寸法よりも、第２寸法ｒ_２ｍの方が大きい。第１図心Ｇ１は、第２塗布液ＢＢと重なる１個以上の第１塗布液ＡＡのそれぞれの中心位置から求められる。

　いずれかの第１塗布液ＡＡと第１仮想曲線Ａ’とが内接し得る最大寸法が第１仮想寸法ｒ_１ｖであるため、それよりも第２寸法ｒ_２ｍを大きくすれば、第１塗布液ＡＡと重なる第２塗布液ＢＢは第１塗布液ＡＡと内接しない。このため第２塗布液ＢＢを第１塗布液ＡＡ上に滴下する際における第１塗布液ＡＡの崩壊が抑制できる。

　上記細胞組織の製造方法において、Ｍ個の第２塗布液ＢＢの第２図心Ｇ２を中心とし、Ｍ個の第２塗布液ＢＢを全て覆いＭ個の第２塗布液のいずれかと内接するよう求められた第２仮想曲線Ｂ’の最大寸法である第２仮想寸法ｒ_２ｖ以上の基準寸法よりも、ウェル１２の第３寸法ｒ_３の方が大きい。第２図心Ｇ２は、Ｍ個の第２塗布液ＢＢのそれぞれの中心位置から求められる。

　いずれかの第２塗布液ＢＢと第２仮想曲線Ｂ’とが内接し得る最大寸法が第２仮想寸法ｒ_２ｖであるため、それよりも第３寸法ｒ_３を大きくすれば、第２塗布液ＢＢはウェル１２の内壁面に付着しない。このため第２塗布液ＢＢを第１塗布液ＡＡ上に滴下する際における第１塗布液ＡＡの崩壊が抑制できる。

　（塗布液供給方法の変形例）
　本実施の形態の細胞組織の製造方法において、図１、図２の塗布装置を用いて上記の塗布工程（塗布液の供給）を行なう場合、第１塗布液ＡＡを供給する工程において塗布針方式が用いられる。これにより、第１塗布液ＡＡをウェル１２内に微小量、すなわち非常に小さい寸法となるように塗布することができる。また塗布針方式によれば、第１塗布液ＡＡが高粘度であっても塗布可能である。

　上記細胞組織の製造方法では、第２塗布液ＢＢを供給する工程において、塗布針方式、インクジェット方式、ディスペンサ方式、レーザープリント方式、ピペット方式からなる群から選択されるいずれかが用いられてもよい。第２塗布液ＢＢの粘度が高い（高粘度溶液である）場合には、塗布針方式が用いられてもよい。ただし第２塗布液ＢＢは塗布針方式以外の、インクジェット方式、ディスペンサ方式、レーザープリント方式、ピペット方式が用いられることにより、第２塗布液ＢＢは滴下により第１塗布液ＡＡ上に供給される。このためたとえば塗布針を有する塗布装置の第２塗布液ＢＢを収納する塗布材料容器内に、第１塗布液ＡＡが混入し汚染されるなどの不具合を抑制できる。

　上記細胞組織の製造方法では、第２塗布液ＢＢをＭ個供給する工程において、Ｍ個のうち少なくとも１個の第２塗布液ＢＢは塗布針方式、インクジェット方式、ディスペンサ方式、レーザープリント方式、ピペット方式からなる群から選択される第１方式により供給され、Ｍ個のうち少なくとも１個とは異なる他の第２塗布液ＢＢは第１方式とは異なる第２方式により供給されてもよい。つまり第１塗布液ＡＡは塗布針方式により、第２塗布液ＢＢはインクジェット方式により供給されてもよい。あるいは第１塗布液ＡＡは塗布針方式により、第２塗布液ＢＢはディスペンサ方式により供給されてもよい。このように、塗布される塗布液の性質および順序に応じて適宜好ましい方式を用いることで、塗布工程の効率および形成される塗布液の品質を高めることができる。

　なお塗布針方式以外の方式を用いる場合には、図１、図２の塗布装置に、方式に応じたインクジェット方式用の装置、ディスペンサ方式用の装置等が組み合わされることが好ましい。あるいはたとえば第１塗布液ＡＡが塗布針方式、第２塗布液ＢＢがディスペンサ方式により供給される場合、第１塗布液ＡＡは図１、図２の塗布装置により供給され、第２塗布液ＢＢはこれとは異なるディスペンサ方式用の塗布装置により供給されてもよい。さらに、たとえば図１、図２の塗布装置においては単一の塗布機構４のみを有するが、複数の塗布機構４を有する塗布装置が用いられることにより、複数の塗布液のすべてが単一の塗布装置内の異なる塗布機構４により供給されてもよい。

　（細胞組織）
　形成される細胞組織の第１例は次の通りである。第１塗布液ＡＡは培養すべき細胞とゲル化剤とを含み、第２塗布液ＢＢは高粘度溶液である。高粘度溶液とはゲル化剤よりも粘度の高い溶液である。これにより、ウェル１２内への第２塗布液ＢＢおよび培地の添加時に第１塗布液の保形性が向上するという効果が得られる。さらに細胞組織としては、コラーゲンゲルのスキャホールドを含む細胞組織を構築することができる効果が得られる。具体的には、第１塗布液ＡＡとして、細胞と、ゲル化剤としてのコラーゲン溶液とを混合したものが準備され、ウェル１２内に供給される。第２塗布液ＢＢとして、コラーゲン溶液よりも粘度が高いメチルセルロースが用いられ、第１塗布液ＡＡを覆うように供給される。さらに、ウェル１２内の第１塗布液ＡＡおよび第２塗布液ＢＢの上に培地を滴下することにより、細胞組織が形成される。細胞組織においては、培地の中に第１塗布液ＡＡおよび第２塗布液ＢＢが浸漬される。

　上記細胞組織は、たとえば３７℃、５％ＣＯ_２の環境下で培養される。これによりコラーゲン溶液がゲル化し、塗布した組織がウェル１２内に固定される。また、第２塗布液ＢＢとしての高粘度溶液は培地交換をすることにより除去が可能である。

　形成される細胞組織の第２例は次の通りである。第１塗布液ＡＡは培養すべき細胞を含み、第２塗布液ＢＢはゲル化剤を含む。これにより、ゲル化剤は第１塗布液ＡＡと第２塗布液ＢＢとの界面でゲル化し、ゲルドーム内にスキャホールドフリーの細胞組織を形成することができるという効果が得られる。具体的には、第１塗布液ＡＡとして、細胞と、ゲル化開始剤であるトロンビンと、高粘度高分子であるヒアルロン酸ナトリウムとが混合される。ゲル化剤であるフィブリノゲンを含有する第２塗布液ＢＢが第１塗布液ＡＡを覆うように滴下される。これにより第１塗布液ＡＡと第２塗布液ＢＢとの界面がゲル化され、いわゆるゲルドームが形成される。やがて第２塗布液ＢＢは全体がゲル化される。ゲルドーム内で第１塗布液ＡＡ内の細胞が沈殿することで、細胞組織が形成される。その後、第１例と同様に培地が滴下され、第１例と同様の環境下で培養される。第１塗布液ＡＡを供給する工程以降にゲル化剤を用いて、ウェル１２内に供給された細胞から細胞組織が形成される。ただし仮に第１塗布液ＡＡにフィブリノゲンが含まれれば、ゲルドームは形成されない。

　以上をまとめると、第１塗布液ＡＡおよび第２塗布液ＢＢの少なくともいずれかに、ゲル化剤としてのコラーゲンとフィブリノゲンとの少なくともいずれかが含まれる。つまり第１塗布液ＡＡおよび第２塗布液ＢＢの少なくともいずれかに、ゲル化剤としてのコラーゲンとフィブリノゲンとの一方が含まれてもよい。あるいは上記しないが、第１塗布液ＡＡおよび第２塗布液ＢＢの少なくともいずれかに、ゲル化剤としてのコラーゲンとフィブリノゲンとの双方が含まれてもよい。

　（ゲル化剤について）
　上記の細胞組織の第２例のように、本実施の形態において、２液混合方式によりウェル１２内に第１塗布液ＡＡおよび第２塗布液ＢＢが供給されてもよい。なお２液混合方式とは、第１塗布液と第２塗布液との双方がゲル化剤およびゲル化開始剤の少なくともいずれかを含むことである。すなわち第１塗布液ＡＡは細胞とゲル化開始剤とを含み、第２塗布液ＢＢはゲル化剤を含んでもよい。この場合、スキャホールドフリーの細胞組織を構築することができる。第１塗布液ＡＡは細胞とゲル化剤とを含み、第２塗布液ＢＢはゲル化開始剤を含んでもよい。この場合、スキャホールドを含む細胞組織を構築することができる。あるいは第１塗布液ＡＡと第２塗布液ＢＢとの双方がゲル化剤を含んでもよい。

　ゲル化剤は特に限定されるものではなく、２液混合方式に用いられるゲル化剤の他に、温度応答性のゲル化剤を用いることができる。たとえばゲル化剤に、タンパク質、糖鎖、天然高分子、合成高分子、ペプチド等が含まれてもよい。より具体的には、ゲル化剤に、コラーゲン、フィブリノゲン、ゼラチン、ＧｅｌＭＡ、アルギン酸ナトリウム、ポリアミノ酸、ポリエチレングリコール、感熱応答性高分子、マトリゲル等が含まれてもよい。また、上記のゲル化剤から適宜選ばれた複数種を組み合わせて細胞組織を構築することができる。

　２液混合方式においてゲル化剤が用いられる場合、ゲル化剤に対応したゲル化開始剤が含まれる必要がある。たとえば、ゲル化剤がフィブリノゲンであればゲル化開始剤はトロンビンが用いられる。またゲル化剤がアルギン酸ナトリウムであればゲル化開始剤は塩化カルシウムである。

　ゲル化剤よりも粘度の高い高粘度溶液は特に限定されるものではない。具体的には、高粘度溶液は、アルギン酸ナトリウム、ヒアルロン酸ナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシブチルセルロース、セルロースナノファイバーからなる群から選択されるいずれかが用いられる。また、上記の高粘度溶液から適宜選ばれた複数種を組み合わせて用いることができる。

　（ゲル化剤以外の材料について）
　本実施の形態で使用できる細胞は特に限定されるものではない。ただし当該細胞は、たとえば心筋細胞、神経細胞、肝細胞、癌細胞、血管内皮細胞、線維芽細胞からなる群から選択されるいずれかであってもよい。より詳しくは、当該細胞は、心筋細胞、神経細胞、肝細胞、血管内皮細胞、線維芽細胞、表皮細胞、平滑筋細胞、消化管細胞、腎細胞、膵細胞などの各種初代細胞、幹細胞由来（ｉＰＳおよびＥＳ等）の分化細胞、および各種癌細胞等のうちのいずれかであってもよい。

　細胞は、疾患様のものであるか、正常様のものであるかを問わず、複数の細胞を混合したものが培養されてもよい。つまり、Ｎ個の第１塗布液ＡＡのうち１個の第１塗布液ＡＡ中に、細胞として、第３細胞と、当該第３細胞とは異なる第４細胞とが含まれるように共培養されてもよい。第３細胞は次に述べる第１細胞と同一でもよいし異なってもよい。第４細胞は次に述べる第２細胞と同一でもよいし異なってもよい。

　第１塗布液ＡＡ中に含まれる細胞の体積の割合を第１塗布液ＡＡの細胞体積濃度とする。つまり細胞体積濃度は、第１塗布液ＡＡ全体の体積に対する細胞の体積の割合を示すものである。第１塗布液ＡＡの細胞体積濃度は０．００１ｖｏｌ％以上５０ｖｏｌ％以下であることが好ましい。本明細書では細胞体積濃度は体積百分率（単位ｖｏｌ％）で表記される。たとえば５０ｖｏｌ％は５０ｖ／ｖ％に等しい。また５０ｖｏｌ／％は体積の割合が５０％であることとも等しい。このため体積百分率は単位ｖ／ｖ％で表記されてもよい。あるいは体積百分率は本明細書では単位％で表記されてもよい。つまり単位ｖｏｌ％で表される体積百分率の数値は、単位ｖ／ｖ％で表される体積百分率の数値、および単位％で表される百分率の数値に等しい。上記の中でも第１塗布液ＡＡの細胞体積濃度は１ｖｏｌ％以上３０ｖｏｌ％以下であることがより好ましい。その中でも第１塗布液ＡＡの細胞体積濃度は２５ｖｏｌ％であることが最も好ましい。

　ウェル１２内に第１塗布液ＡＡがＮ個（Ｎ≧２の自然数）供給されるとき、ウェル１２内に供給されるＮ個の第１塗布液ＡＡのうち少なくとも１個に細胞が含まれ、上記少なくとも１個とは異なる他の少なくとも１個の第１塗布液ＡＡには細胞を含まずサイトカイン、薬剤、ＥＣＭおよび添加因子からなる群から選択される少なくともいずれかが含まれてもよい。つまり第１塗布液ＡＡにサイトカイン、ＥＣＭおよび添加因子からなる群から選択される少なくともいずれかが含まれてもよいし、これらのうち複数が混合されてもよい。上記サイトカイン、薬剤、ＥＣＭ、添加因子は、少なくとも１個の第１塗布液ＡＡに含まれる細胞に作用する。

　さらに、１つのウェル１２内に第１塗布液ＡＡを複数個塗布する場合に、たとえばそのうちの１個が心筋細胞であり、他の１個が癌細胞であるように、第１塗布液ＡＡ間で異なる種類の細胞が含まれてもよい。あるいは複数個の第１塗布液ＡＡのうちの１個に心筋細胞が含まれ、他の１個にも同種の心筋細胞が含まれてもよい。つまりウェル１２内に供給されるＮ個の第１塗布液ＡＡのうち少なくとも１個に含まれる細胞は第１細胞であり、少なくとも１個とは異なる他の少なくとも１個の第１塗布液ＡＡに含まれる細胞は第２細胞である。第２細胞は第１細胞と同種でも異種でもよい。なお、第１細胞または第２細胞を含む第１塗布液ＡＡには、フィブロネクチン、ゼラチン、コラーゲン、ラミニン、エラスチン、マトリゲルなどの細胞外マトリックス成分、線維芽細胞増殖因子、血小板由来成長因子などの細胞増殖因子等の添加剤が含まれてもよい。これにより、当該第１塗布液ＡＡに内包される細胞が安定して接着および増殖できる環境が与えられる。

　培地は特に限定されるものではない。培地として、ＤＭＥＭ、ＲＰＭＩ１６４０、Ｍ１９９、ＭＥＭからなる群から選択されるいずれかを用いることができる。培地には、抗生物質、ＦＢＳ、各種成長因子等、特に限定されるものではなく種々の添加物を添加できる。また培地と第２塗布液ＢＢとは同じ溶液を使用することができる。ただし培地と第２塗布液ＢＢとに同じ溶液を用いる場合には、培地は高粘度溶液とする必要がある。

　培地を滴下する位置は、第２塗布液ＢＢの中心と平面的に重なる位置であることが好ましいが、これに限られない。培地は第２塗布液ＢＢと同じ溶液としてもよい。ただし培地を形成するための溶液は第２塗布液ＢＢとは独立に、第２塗布液ＢＢを浸漬するように供給される。

　さらに、たとえば上記の細胞組織の第１例または第２例において、第１塗布液ＡＡおよび第２塗布液ＢＢの少なくともいずれかに増粘多糖類が混合されてもよい。増粘多糖類として、具体的にはアルギン酸ナトリウム、ヒアルロン酸ナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシブチルセルロース、セルロースナノファイバーからなる群から選択されるいずれかが用いられてもよい。増粘多糖類の混合により、第１塗布液ＡＡの保形性の向上という効果が得られる。

　第１塗布液ＡＡが１個のみ形成され、ゲル化剤が第１塗布液ＡＡに含まれる実施例について説明する。

　第１塗布液として、ｉＰＳ心筋細胞（iCell　cardiomyocyte2）と心臓線維芽細胞とが４：１の個数比で含まれたものに、１．０５ｍｇ／ｍＬのコラーゲン溶液が混合されたものが用いられた。ｉＰＳ心筋細胞と心臓線維芽細胞とが４：１の個数比で含まれたものの細胞体積濃度は２５ｖｏｌ％であった。第２塗布液として、溶液１００ｍＬ中に０．７５ｇのメチルセルロースが溶解され、カルシウムイオンおよびマグネシウムイオンを含むＰＢＳ（＋）の溶液が用いられた。培地として、iCell播種培地が用いられた。塗布対象物は、９６個のウェル１２を有する試料塗布セット１１（図３参照。９６ウェルプレートと称する）に含まれる１つのウェル１２が用いられた。９６ウェルプレートの直径６．５ｍｍの円形のウェルの中心に、針径が７００μｍの塗布針を用いて、第１塗布液が供給された。第１塗布液の中心の真上に、直径４．５ｍｍの第２塗布液が、ディスペンサにより滴下された。さらに、ピペットを用いて、１００μＬの培地が、第１塗布液および第２塗布液の上に滴下された。

　図１３は、実施例１における位相差顕微鏡像である。図１３を参照して、第１塗布液が崩壊することなく組織を形成できた。なお、本実施例における上記の各パラメータの数値は以下の通りであり、上記の数式を全て満足する。
ｒ_１１＝ｒ_１ｖ＝０．７ｍｍ、Ｌ１＝０ｍｍ、ｒ_２１＝ｒ_２ｖ＝４．５ｍｍ、Ｌ２＝０ｍｍ、Ｄ_ｎ，ｍ＝０ｍｍ、ｒ_３＝６．５ｍｍ、Ｌ３＝０ｍｍ。

　第１塗布液ＡＡが１個のみ形成され、ゲル化剤が第２塗布液ＢＢに含まれる実施例について説明する。

　第１塗布液として、ｉＰＳ心筋細胞（iCell　cardiomyocyte2）と心臓線維芽細胞とが４：１の個数比で含まれたものに、３ｍｇ／ｍＬのヒアルロン酸ナトリウム溶液と、２６０unit／ｍＬのトロンビン溶液とが混合されたものが用いられた。ｉＰＳ心筋細胞と心臓線維芽細胞とが４：１の個数比で含まれたものの細胞体積濃度は１０ｖｏｌ％であった。第２塗布液として、５ｍｇ／ｍＬのヒアルロン酸ナトリウム溶液と、５ｍｇ／ｍＬのフィブリノゲン溶液とが混合され、カルシウムイオンおよびマグネシウムイオンを含むＰＢＳ（＋）の溶液が準備された。培地として、iCell播種培地が用いられた。塗布対象物は、９６ウェルプレートの１つのウェルが用いられた。９６ウェルプレートの直径６．５ｍｍの円形のウェルの中心に、針径が７００μｍの塗布針を用いて、第１塗布液が供給された。第１塗布液の中心の真上に、直径３．５ｍｍの第２塗布液が、ディスペンサにより滴下された。さらに、ピペットを用いて、１００μＬの培地が、第１塗布液および第２塗布液の上に滴下された。

　図１４は、実施例２における位相差顕微鏡像である。図１４を参照して、第１塗布液が崩壊することなく組織を形成できた。なお、本実施例における上記の各パラメータの数値は以下の通りであり、上記の数式を全て満足する。
ｒ_１１＝ｒ_１ｖ＝０．７ｍｍ、Ｌ１＝０ｍｍ、ｒ_２１＝ｒ_２ｖ＝３．５ｍｍ、Ｌ２＝０ｍｍ、Ｄ_１，１＝０ｍｍ、ｒ_３＝６．５ｍｍ、Ｌ３＝０ｍｍ。

　第１塗布液ＡＡが２個形成され、第２塗布液ＢＢが１個形成され、ゲル化剤が第１塗布液ＡＡに含まれる実施例について説明する。

　第１塗布液として、ｉＰＳ心筋細胞（iCell　cardiomyocyte2）と心臓線維芽細胞とが４：１の個数比で含まれたものに、１．０５ｍｇ／ｍＬのコラーゲン溶液が混合されたものが用いられた。ｉＰＳ心筋細胞と心臓線維芽細胞とが４：１の個数比で含まれたものの細胞体積濃度は２５ｖｏｌ％であった。第２塗布液として、溶液１００ｍＬ中に０．７５ｇのメチルセルロースが溶解され、カルシウムイオンおよびマグネシウムイオンを含むＰＢＳ（＋）の溶液が用いられた。培地として、iCell播種培地が用いられた。塗布対象物は、９６ウェルプレートの１つのウェルが用いられた。

　図１５は、実施例３において供給された各塗布液の位置および寸法を示す概略平面図である。図１６は、図１５と同一の各塗布液の中心位置および中心間の距離を示す概略平面図である。図１５および図１６を参照して、９６ウェルプレートの直径６．５ｍｍの円形のウェルの中心から１．０ｍｍずれた位置に、針径１０００μｍの塗布針を用いて、１個目の第１塗布液Ａ１ｏが供給された。第１塗布液Ａ１ｏの中心から２．０ｍｍずれた位置に、針径７００μｍの塗布針を用いて、２個目の第１塗布液Ａ２ｏが供給された。２個の第１塗布液Ａ１ｏ，Ａ２ｏの中心を結んだ直線上における、第１塗布液Ａ１ｏの中心から０．５ｍｍずれた位置（第１塗布液Ａ１ｏの外縁）を中心として、直径４．５ｍｍの第２塗布液ＢＢが、ディスペンサにより滴下された。さらに、ピペットを用いて、１００μＬの培地が、第１塗布液および第２塗布液の上に滴下された。

　図１７は、実施例３における位相差顕微鏡像である。図１７を参照して、２個の第１塗布液が崩壊することなく組織を形成できた。なお、本実施例における上記の各パラメータの数値は以下の通りであり、上記の数式を全て満足する。
ｒ_１１＝０．７ｍｍ、ｒ_１２＝１．０ｍｍ、ｄ_１，１＝２．０ｍｍ、ｒ_１ｖ＝１．４２５ｍｍ、ｒ_２１＝ｒ_２ｖ＝４．５ｍｍ、Ｌ２＝０ｍｍ、Ｄ_１，１＝０ｍｍ、Ｐ_１，１＝０ｍｍ、ｒ_３＝６．５ｍｍ、Ｌ３＝０．５ｍｍ。

　第１塗布液ＡＡが多数個（３個以上）形成され、第２塗布液ＢＢが１個形成され、ゲル化剤が第２塗布液ＢＢに含まれる実施例について説明する。

　第１塗布液として、ｉＰＳ心筋細胞（iCell　cardiomyocyte2）と心臓線維芽細胞とが４：１の個数比で含まれたものに、３ｍｇ／ｍＬのヒアルロン酸ナトリウム溶液と、２６０unit／ｍＬのトロンビン溶液とが混合されたものが用いられた。ｉＰＳ心筋細胞と心臓線維芽細胞とが４：１の個数比で含まれたものの細胞体積濃度は１０ｖｏｌ％であった。第２塗布液として、５ｍｇ／ｍＬのヒアルロン酸ナトリウム溶液と、５ｍｇ／ｍＬのフィブリノゲン溶液とが混合され、カルシウムイオンおよびマグネシウムイオンを含むＰＢＳ（＋）の溶液が準備された。培地として、iCell播種培地が用いられた。塗布対象物は、９６ウェルプレートの１つのウェルが用いられた。

　図１８は、実施例４における位相差顕微鏡像である。図１８を参照して、図中の丸印はいずれも第１塗布液の外縁を示す。すなわち図１８の左上の写真は互いに接触しないように間隔をあけて４個の第１塗布液が塗布された細胞組織である。図１８の右上の写真は部分的に接触するように５個の第１塗布液が一直線状に塗布された細胞組織である。図１８の左下の写真は部分的に接触するように８個の第１塗布液が四角形の周を形成するように並べられた細胞組織である。図１８の右下の写真は部分的に接触するように６個の第１塗布液が中実の三角形を形成するように並べられた細胞組織である。

　図１８に示されないが、第１塗布液と内接も外接もせず、第１仮想曲線の第１仮想寸法ｒ_１ｖよりも十分に大きい第２寸法ｒ_２ｍを有する第２塗布液が供給された。このため第１塗布液が崩壊することなく組織を形成できた。いずれの写真の例も、第１塗布液の寸法ｒ_１ｎは０．２ｍｍである。ｄ_ｎ，ｍの値は、左上の写真のみ０．３ｍｍ、左上以外の写真はいずれも０．１５ｍｍである。

　塗布位置を変えながら、第２塗布液ＢＢのみをウェル１２内に塗布する実施例について説明する。

　図１９は、第２塗布液のウェル内における塗布位置を変化させたときの、塗布されると想定される位置と、実際に塗布された位置とを示す模式図および写真である。図１９の上段は塗布されると想定される位置を示す模式図である。図１９の中段は実際に塗布された位置を示す模式図である。図１９の下段は図１９の中段に示す模式図についての実際の写真である。第２塗布液としては、溶液１００ｍＬ中に０．７５ｇのメチルセルロースが溶解され、カルシウムイオンおよびマグネシウムイオンを含むＰＢＳ（＋）の溶液が用いられた。第２塗布液の寸法は４．５ｍｍであり、ウェルの直径は６．５ｍｍである。

　図１９を参照して、左列のようにウェルの中心を狙って第２塗布液が塗布された場合には、想定通りの結果となった。中列のようにウェルの中心から０．５ｍｍ上側に離れた位置を狙って第２塗布液が塗布された場合にも、想定通りの塗布結果が得られた。しかし右列のようにウェルの中心から１．０ｍｍ上側に離れた位置を狙って第２塗布液が塗布された場合、想定模式図とは異なり、ウェルの上側の内壁に第２塗布液が付着し、楕円形の第２塗布液となった。このことから、第２塗布液がウェルの内壁に内接するように塗布されれば、第２塗布液の位置および形状が想定とは異なり、第１塗布液に対してずれた位置に配置される可能性がある。このため第１塗布液が崩壊する可能性が高くなる。したがって第２塗布液はウェルの内壁に接しないように供給することが求められる。

　（実施の形態２）
　本実施の形態の技術分野は、塗布装置（バイオプリンター）を用いて心筋細胞から心筋組織を製造する方法（心筋組織の製造方法）に関する。具体的には、実施の形態１の塗布装置と同一の塗布装置を用いた心筋組織の作製に関するものである。

　図２０は、実施の形態２における第１塗布液が塗布される前の態様を示す概略図である。図２０を参照して、まずバイオプリンターを構成する塗布針２４の先端が、第１塗布液ＡＡ（第１バイオインク）に浸漬され、第１塗布液ＡＡが塗布針２４の先端に付着される。図２１は、実施の形態２における第１塗布液の組成を示す概略図である。図２１を参照して、第１塗布液ＡＡは、培養すべき細胞Ｃと、ゲル化剤としてのコラーゲンと、第１溶媒ｍとの混合により得られる。図２１の細胞ＣはＣ１とＣ２とを含むが、これらについては後述する。図２２は、実施の形態２における第１塗布液が塗布される工程を示す概略図である。図２２を参照して、第１塗布液ＡＡが付着された塗布針２４の先端が、ウェル１２（図３参照）のたとえば底部（ウェル底部１２ａ）に接触する。これは第１塗布液ＡＡが付着された塗布針２４が図２０の矢印Ｍ１に示すように下方に移動することによりなされる。これによりウェル底部１２ａに第１塗布液ＡＡが塗布される。図２３は、実施の形態２における第１塗布液が塗布された後の態様を示す概略図である。図２３を参照して、その後塗布針２４が矢印Ｍ２に示すように上方に移動する。このように、第１塗布液ＡＡはいわゆるピン方式のバイオプリンターを用いてウェル１２などの容器に塗布される。

　図２４は、実施の形態２における第２塗布液が供給される工程を示す概略図である。図２５は、図２４の工程がなされた後のウェル内の態様を示す概略図である。図２４および図２５を参照して、ウェル１２内に塗布された第１塗布液ＡＡを覆うように、ウェル１２内に第２塗布液ＢＢ（第２バイオインク）が供給される。第２塗布液ＢＢはたとえばディスペンサにより滴下されてもよいが、第２塗布液ＢＢの供給方法はこれに限られない。第２塗布液ＢＢは、ピン方式、インクジェット方式、ディスペンサ方式、ピペットを用いた手動からなる群から選択されるいずれかにより供給されてもよい。

　図２６は、実施の形態２における培地が供給される工程を示す概略図である。図２６を参照して、第２塗布液ＢＢを供給する工程の後に、培地Ｍがウェル１２内に供給される。培地Ｍは第１塗布液ＡＡおよび第２塗布液ＢＢが浸され覆われるように供給される。培地Ｍの滴下方法は特に限定されない。培地Ｍは、ピン方式、インクジェット方式、ディスペンサ方式、ピペットを用いた手動からなる群から選択されるいずれかにより供給されてもよい。あるいは培地Ｍは、分注機またはマイクロポンプにより供給されてもよい。

　図２７は、培養前の第１塗布液内の細胞の態様を示す概略図である。図２８は、培養後の第１塗布液内の細胞の態様を示す概略図である。図２７、図２８（および図２１）を参照して、培養前の第１塗布液ＡＡ内の細胞Ｃは、心筋細胞Ｃ１と、心臓線維芽細胞Ｃ２とを含んでいる。細胞Ｃ中の心筋細胞Ｃ１の個数の比率は７５％以上であるが、８０％以上であることが好ましい。細胞Ｃ中の心臓線維芽細胞Ｃ２の個数の比率は２０％以下である。したがって、最も心筋細胞Ｃ１の個数の比率が低い場合はＣ１：Ｃ２＝８０：２０であり、最も心筋細胞Ｃ１の個数の比率が高い場合はＣ１：Ｃ２＝１００：０である。言い換えれば、上記の比例式において、細胞Ｃ中の個数比率（％）は８０≦Ｃ１≦１００（または７５≦Ｃ１≦１００）であり、０≦Ｃ２≦２０である。第１塗布液ＡＡ中に含まれる心筋細胞Ｃ１と心臓線維芽細胞Ｃ２との細胞体積濃度は０．００１ｖｏｌ％以上５０ｖｏｌ％以下であることが好ましい。その中でも細胞体積濃度は１ｖｏｌ％以上３０ｖｏｌ％以下であることがより好ましい。その中でも細胞体積濃度は２５ｖｏｌ％であることが最も好ましい。心筋細胞Ｃ１と心臓線維芽細胞Ｃ２との個数の比率および細胞体積濃度を上記のようにすることにより、後述の実施例６のように、細胞を培養させることによる細胞組織を安定的に形成できる。培養により、心筋細胞Ｃ１および心臓線維芽細胞Ｃ２はいずれも図２７の状態から図２８のように成長し、心筋組織が形成される。

　（材料）
　ここで、本実施の形態にて各塗布液などに使用可能な材料について説明する。

　第１塗布液ＡＡ（第１バイオタンク）は、上記のように細胞Ｃと、コラーゲンと、第１溶媒ｍとが混合される。第１塗布液ＡＡは、上記の混合液に各種添加物が加えられてもよい。

　細胞Ｃに含まれる心筋細胞Ｃ１は、正常心筋細胞および疾患由来の心筋細胞の少なくともいずれかであってもよい。正常心筋細胞はたとえばヒトｉＰＳ細胞由来心筋細胞であり、疾患由来の心筋細胞はたとえば疾患由来ヒトｉＰＳ細胞由来心筋細胞である。また心筋細胞Ｃ１は、初代心筋細胞および幹細胞由来心筋細胞のいずれかであってもよい。初代心筋細胞は、ヒト、マウス、ラットなど各種動物種由来であってもよい。幹細胞由来心筋細胞としては、（上記の）ｉＰＳ細胞由来心筋細胞、ＥＳ細胞由来心筋細胞、ダイレクトリプログラミング細胞由来心筋細胞などが挙げられる。疾患由来の心筋細胞としては、疾患を有する動物種から採取した細胞、疾患を発症した動物種から採取した細胞から作製した幹細胞を分化誘導した細胞、および遺伝子改変が行なわれた細胞などが挙げられる。また細胞Ｃには心筋細胞Ｃ１以外に、心臓線維芽細胞Ｃ２、血管内皮細胞、神経細胞などが混合されてもよい。心筋細胞以外の上記細胞についても、心筋細胞と同様に動物由来のものまたは疾患由来のものなどを用いることができる。これらを用いれば、培養により得られる細胞組織をより心筋組織に酷似したものにできる。

　ゲル化剤としてのコラーゲンは、コラーゲンｔｙｐｅＩ、ｔｙｐｅＩＩ、ｔｙｐｅＩＩＩ、ｔｙｐｅＶが用いられる。しかし本実施の形態ではコラーゲンｔｙｐｅＩが用いられることが好ましく、コラーゲンｔｙｐｅＩ－Ａが用いられることが特に好ましい。コラーゲンの中でもコラーゲンｔｙｐｅＩ－Ａは心臓に最も多く発現するためである。コラーゲンｔｙｐｅＩ－Ａの濃度は０．０１ｍｇ／ｍＬ以上２．１ｍｇ／ｍＬ以下であり、その中でも０．１ｍｇ／ｍＬ以上２．１ｍｇ／ｍＬ以下が好ましい。さらにその中でも０．５ｍｇ／ｍＬ以上２．１ｍｇ／ｍＬ以下が特に好ましい。第１塗布液ＡＡ内のコラーゲンのゲルには、フィブリンゲル、マトリゲル、ゼラチン、ＧｅｌＭＡ（ゼラチンメタクリロイル）などが任意に比率で混合されてもよい。

　第１塗布液ＡＡ中の第１溶媒ｍの材料は特に限定されるものではない。ただし第１溶媒ｍには培地または緩衝液を用いることが好ましい。たとえば第１溶媒ｍとしての培地は、ＤＭＥＭ、ＤＭＥＭ／Ｈａｍ　Ｆ－１２、αＭＥＭ、ＲＰＭＩ１６４０（たとえばLonza製、Thermo製、ナカライテスク製、Wako製の培地。型番はたとえば３０２６４－８５（ナカライテスク株式会社））、ウィリアム培地、Ｍ１９９、市販の心筋細胞専用培地（ｉＣｅｌｌ心筋細胞解凍用培地、ｉＣｅｌｌ心筋細胞維持培地など）および市販の線維芽細胞専用培地（ＦＧＭ－３）からなる群から選択される少なくともいずれかを用いることが好ましい。また第１溶媒ｍの緩衝液は、ＰＢＳ（＋／－）、トリス緩衝液およびタイロード緩衝液からなる群から選択される少なくともいずれかを用いることが好ましい。第１溶媒ｍとして、上記の各種培地および各種緩衝液の少なくともいずれかから２種類以上が選択されそれらが混合されたものが用いられてもよく、その場合に２種類以上が混合される比率は任意であってもよい。

　第１塗布液ＡＡ中の各種添加物は特に限定されるものではない。ただし第１塗布液ＡＡ中の各種添加物として、増粘剤、細胞成長因子、タンパク質、薬剤などが添加されてもよい。第１塗布液ＡＡの増粘剤は、セルロース、セルロースナノファイバー、キチン、キトサン、キチンナノファイバー、キトサンナノファイバー、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシブチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ヒアルロン酸ナトリウム、ポリエチレングリコール、ジェランガム、カラギーナン、ペクチン、キサンタンガム、ゼラチン、アガロース、ポリビニルアルコールからなる群から選択される１つ以上の物質を含んでもよい。

　第１塗布液ＡＡ中の各種添加物としての細胞成長因子、タンパク質、薬剤などは、ＦＧＦ（線維芽細胞増殖因子）、Ｂ２７（登録商標）サプリメント、トリヨードチロニン、デキサメタゾン、インシュリン用成長因子（ＩＧＦ－Ｉ）、インシュリン、神経成長因子（ＮＧＦ）、イソプロテレノール、上皮成長因子（ＥＧＦ）、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、ラミニン、フィブロネクチン、コラーゲン、ゼラチン、ヒアルロン酸ナトリウム、プロテオグリカン、ニドゲン、Ｒｈｏキナーゼ阻害物質（Rock　Inhibitor）、マトリゲルからなる群から選択されてもよい。

　第２塗布液ＢＢ（第２バイオタンク）は、増粘剤と第２溶媒との混合溶液として構成される。第２塗布液ＢＢは、上記の混合液に各種添加物が加えられてもよい。

　第２塗布液ＢＢの増粘剤は、セルロース、セルロースナノファイバー、キチン、キトサン、キチンナノファイバー、キトサンナノファイバー、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシブチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ヒアルロン酸ナトリウム、ポリエチレングリコール、ジェランガム、カラギーナン、ペクチン、キサンタンガム、ゼラチン、アガロース、ポリビニルアルコールからなる群から選択される１つ以上の物質を含んでもよい。これらを用いれば、第１塗布液ＡＡを覆う第２塗布液ＢＢの保形性を向上でき、第２塗布液ＢＢが第１塗布液ＡＡを覆う位置以外のずれた位置に配置される不具合を抑制できる。

　第２溶媒の材料は特に限定されるものではない。ただし当該溶媒には培地または緩衝液を用いることが好ましい。第２溶媒としての培地、緩衝液は、上記の第１溶媒ｍとしての培地、緩衝液と同様の材料群から選択され、第１溶媒ｍと同様の比率で混合使用されてもよいため、その説明を繰り返さない。第２溶媒（第２塗布液ＢＢ）への各種添加物は、上記の第１塗布液ＡＡ（第１溶媒ｍ）への各種添加物と同様の材料群から選択されてもよいため、その説明を繰り返さない。

　第２塗布液ＢＢの後に供給される培地Ｍは、上記第１溶媒ｍ、第２溶媒に用いられる培地と同様の材料群から選択され、第１溶媒ｍ、第２溶媒と同様の比率で混合使用されてもよいため、その説明を繰り返さない。また培地Ｍに追加される各種添加物は、上記第１塗布液ＡＡ、第２塗布液ＢＢへの各種添加物と同様の材料群から選択されてもよいため、その説明を繰り返さない。ただし一例として、後述の実施例６のように、培地ＭはＲＰＭＩ１６４０であり、培地Ｍへの添加因子（添加物）は、Ｂ２７（登録商標）サプリメント、トリヨードチロニン、デキサメタゾン、インシュリン様成長因子からなる群から選択される１つ以上（これら４種すべて）であることが好ましい。これにより後述の実施例６のように、細胞を培養させることによる細胞組織を安定的に形成できる。

　（実施の形態２の背景技術および解決しようとする課題）
　国際公開第２０１９／０８８２２４号には、ピン方式のバイオプリンターを用いて細胞含有溶液を塗布する技術が開示されている。ただし国際公開第２０１９／０８８２２４号の技術によれば、塗布針等のバイオプリンティング技術における塗布工程において、塗布工程を実行する前の塗布液容器内部にて、塗布液が意図せずゲル化および目詰まりを起こす可能性がある。このような現象は、特に心筋細胞をフィブリノゲンに分散させた塗布液において起こりやすい。そこで特開２０２０－１４１５９９号公報には、そのような塗布工程を実行する前の塗布溶液の意図しないゲル化を抑制する技術が開示されている。具体的には、特開２０２０－１４１５９９号公報では、細胞とゲル化開始剤と増粘剤とが第１塗布液として塗布され、ゲル化剤が第２塗布液として滴下されることによりいわゆるゲルドームが形成される。

　特開２０２０－１４１５９９号公報では第１塗布液が塗布前から意図せずゲル化する不具合を抑制する技術が提案されるが、いわゆる２液混合方式により塗布液が供給されるため、塗布後は細胞組織が収容される塗布液の外殻としてゲルドームが存在する。このため塗布液の外部から供給される薬剤およびタンパク等が、当該外殻としてのゲルドームの網目を通り抜けることが困難となる。その結果、薬剤およびタンパク等が細胞組織に浸透および作用しにくくなるという課題がある。また特開２０２０－１４１５９９号公報には、成体の心臓に最も多く存在するタンパク質をゲル化剤として用いた例が開示されていない。このためにより構築される心筋組織は、成体の心臓を高機能に再現できていない可能性がある。

　本開示は上記の課題に鑑みなされたものである。本開示の目的は、外部から細胞組織への薬剤などの浸透および作用が阻害されず、より成体の心臓に近く高機能な心筋組織を形成可能な心筋組織の製造方法を提供することである。

　そこで本開示に従った心筋組織の製造方法では、塗布装置に含まれる塗布針２４の先端を第１塗布液ＡＡに浸漬させることにより、第１塗布液ＡＡが塗布針２４の先端に付着される。塗布針２４の先端に付着された第１塗布液ＡＡが塗布対象物であるウェル１２内に塗布される。第１塗布液ＡＡは、培養すべき細胞と、ゲル化剤としてのコラーゲンと、第１溶媒ｍの混合溶液である。

　本開示の心筋組織の製造方法によれば、いわゆる２液混合方式を適用しないため、２液混合方式にて生じるゲルドームが形成されない。このため、ゲルドームに起因する細胞組織への薬剤およびタンパクなどの浸透および作用の阻害が起こりにくくなる。したがって、薬剤およびタンパクを容易に浸透および作用させることが可能な細胞組織を構築できる。またコラーゲン（特にコラーゲンｔｙｐｅＩ－Ａ）は成体の心臓に最も多く存在するタンパク質である。このため第１塗布液ＡＡにゲル化剤としてのコラーゲンを含めることで、より成体の心臓に近い高機能な心筋組織を構築できる。さらに上記の心筋組織の製造方法によれば、第２塗布液ＢＢおよび培地（ＲＰＭＩ１６４０など）が供給され、塗布液がゲル化可能な温度（たとえば３７℃）に制御されない限り、コラーゲンはゲル化されない。このため塗布液の供給が完了する前の時点での、第１塗布液ＡＡの意図せぬゲル化を防ぐことができる。

　（心筋組織の形成）
　実施の形態２の心筋組織の製造方法に基づき実際に心筋組織を形成する実験がなされた。当該実験では、塗布装置（図１参照）を用いて、次のように塗布液が準備された。第１塗布液ＡＡに含まれる細胞Ｃは、心筋細胞Ｃ１としてのｉＰＳ心筋細胞（iCell　Cardiomyocyte2）と、心臓線維芽細胞Ｃ２としての正常ヒト心臓線維芽細胞とが、個数の比率で４：１とされた。第１塗布液ＡＡ中の細胞Ｃの細胞体積濃度は２５ｖｏｌ％とされた。

　第１塗布液ＡＡに含まれるゲル化剤はコラーゲンとし、濃度が０．７ｍｇ／ｍＬのコラーゲンｔｙｐｅＩ－Ａとされた。第１塗布液ＡＡに含まれる第１溶媒ｍは、ＲＰＭＩ１６４０とされた。

　次に、第２塗布液ＢＢは増粘剤と第２溶媒との混合溶液とされた。具体的には、第２塗布液ＢＢの保形成を向上するための増粘剤としてメチルセルロースが用いられた。第２溶媒はリン酸緩衝生理食塩水（＋）（ＰＢＳ（＋））とされた。

　第２塗布液ＢＢの供給後に供給された培地はＲＰＭＩ１６４０とされた。当該培地への添加因子は、Ｂ２７（登録商標）サプリメントと、７５ｎＭのトリヨードチロニンと、１μＭのデキサメタゾンと、１００ｎｇ／ｍＬのインシュリン様成長因子（ＩＧＦ－Ｉ）とからなるものとされた。

　本実施例において、図２０の工程では、先端部以外の針径が一定である領域の、延在方向に直交するよう切られた断面が直径１０００μｍの円形である塗布針２４が用いられた。第１塗布液ＡＡが９６ウェルプレートの１つのウェル１２（図３参照）に塗布された。第１塗布液ＡＡを覆うように、ディスペンサーを用いて第２塗布液ＢＢが滴下された。さらに当該ウェル１２内に添加された培地ＲＰＭＩ１６４０は、２，３日に一度培地交換され、６日間～７日間培養することにより細胞組織すなわち心筋組織が構築された。培養日数は６日以上が好ましい。培養日数は２週間以上であってもよい。

　図２９は、ウェル内に塗布液が供給された直後の位相差顕微鏡像（左）、および６日間培養後の位相差顕微鏡像（右）である。図２９を参照して、５６個の第２塗布液ＢＢの塗布直径は１０９５±４２μｍであった。このように、安定的に心筋組織が形成できた。

　（Ｃａ^２＋トランジエント測定）
　７日間の培養後の心筋組織が染色された後、心筋収縮の機能を調査する観点から、Ｃａ^２＋トランジエント測定がなされた。測定は、本実施例の図２９に示す培養後の心筋組織（以下「塗布組織」と記す）と、比較例としての平面培養された組織（以下「２Ｄ組織」と記す）とについてなされた。比較例の心筋組織は、ｉＰＳ心筋細胞（iCell　Cardiomyocyte2）と、正常ヒト心臓線維芽細胞とが個数の比率で４：１とされた。比較例の心筋組織は、１ウェルあたり５００００個の細胞が播種され、実施の形態２と同じ塗布装置で得られた塗布組織と同様の培地で平面培養された。その結果を次の表１に示す。

　表１に示すように、得られた心筋組織の拍動数（ＢＰＭ）は、塗布組織の方が２Ｄ組織の約２倍であった。また心筋組織の収縮により検出されるＣａ^２＋トランジエント波形の蛍光強度のピーク幅は、塗布組織が２Ｄ組織の約半分であった。なお蛍光強度のピーク幅とは、次の図３０に示すＣａ^２＋トランジエント波形の時間幅を意味する。このことから、塗布組織の方が２Ｄ組織よりも安定した組織であることが確認できた。

　図３０は、塗布組織の実験におけるＣａ^２＋トランジエント波形を示すグラフである。図３０の横軸は経過時間を示し、縦軸は検出される蛍光強度を示している。図３０を参照して、塗布組織における蛍光強度のピーク幅は９４５ｍｓｅｃ程度であることがわかる。なお図３０のグラフ中、Ｃａ^２＋トランジエント波形の蛍光強度はＡＭＰで示され、蛍光強度のピーク幅はＰＷＤ９０で示される。

　次に、βアドレナリン受容体アゴニストであるイソプロテレノールを添加した際のＣａ^２＋トランジエント波形の変化が評価された。イソプロテレノールは一般的に心筋細胞の拍動数と収縮力を上昇させる。心筋細胞の収縮力はＣａ^２＋トランジエント測定の蛍光強度（ＡＭＰ）と相関がある。つまり成熟した心筋細胞であれば蛍光強度が上昇するのに対し、未成熟な心筋細胞では蛍光強度が上昇しない。

　図３１は、塗布組織および２Ｄ組織のそれぞれにイソプロテレノールを添加した際のＢＰＭの変化を示すグラフである。図３１の横軸はイソプロテレノールの添加量を単位ｎＭで示し、縦軸はＢＰＭの変化量を単位％で示す。図３１を参照して、ＢＰＭの値は塗布組織、２Ｄ組織ともにイソプロテレノール濃度の増加に伴い上昇した。

　図３２は、塗布組織および２Ｄ組織のそれぞれにイソプロテレノールを添加した際のＡＭＰの変化を示すグラフである。図３２の横軸はイソプロテレノールの添加量を単位ｎＭで示し、縦軸はＡＭＰの変化量を単位％で示す。図３２を参照して、ＡＭＰの値は塗布組織においてはイソプロテレノールの濃度に依存して上昇したが、２Ｄ組織においてはイソプロテレノールの濃度が増加してもあまり上昇しなかった。この結果より、塗布組織は２Ｄ組織と比較して心筋細胞が成熟化すなわち高機能化している可能性が示された。

　以上を総合的に考察して、ゲルが混ざらず細胞だけが平面培養された比較例に比べて、ゲル化剤としてのコラーゲンが細胞に混合された溶液が塗布装置で供給された本実施例の方が優れた効果が得られた。

　（実施の形態３）
　以降において、培養容器を「プレート」、そこに形成される個々のウェルを「容器」と記載する場合がある。

　最初に本実施の形態の特徴について簡単に説明する。図３９を参照して、塗布材料を受け入れ可能な複数の容器１１２Ａを有するプレート１１１に含まれる第１容器１１２Ａ－１に、第１塗布機構１０４を用いて塗布材料としての第１塗布材料Ａ１を供給する工程を備える。図３３および図４０を参照して、プレート１１１を載置するステージ１０１が移動する工程を備える。図４０を参照して、プレート１１１の第１容器１１２Ａ－１に隣接する第２容器１１２Ａ－２に第１塗布機構１０４を用いて第１塗布材料Ａ１を供給すると同時に、第１容器１１２Ａ－１に、第１塗布機構１０４に隣接する第２塗布機構１０５を用いて塗布材料としての第２塗布材料Ｂを供給する工程とを備える。以下にこれについて詳細に説明する。

　（塗布装置の構成）
　図３３は、実施の形態３に係る塗布装置の第１例を示す概略正面図である。なお説明の便宜上、Ｘ方向、Ｙ方向およびＺ方向が導入される。図３３を参照して、塗布装置１００は、塗布されるべき塗布材料を供給可能な塗布機構１０７として、針塗布機構１０４と、滴下機構１０５とを備えている。このように本明細書では「塗布」とは、後述する塗布針を用いた塗布材料の供給と、塗布材料の滴下による供給との双方を含めるものとする。このため前者の塗布針を用いた供給を本明細書では「針塗布」と称する場合がある。図３３の塗布装置１００は、１つの針塗布機構１０４と、２つの滴下機構１０５とを備えている。２つの滴下機構１０５は、滴下機構１０５－１と、滴下機構１０５－２とであり、Ｘ方向に間隔をあけて並んでいる。また針塗布機構１０４と滴下機構１０５とは、Ｘ方向に間隔をあけて並んでいる。これらの相互のＸ方向間隔は一定であり変化しない。

　Ｘ軸ステージ１０１（ステージ）は、水平方向であるＸ方向に沿って移動可能である。またＹ軸ステージ１０２は、水平方向であるＹ方向に沿って移動可能である。具体的には、たとえばＸ軸ステージ１０１またはＹ軸ステージ１０２の下面にガイド部が設置されている。当該ガイド部は、図示されないガイドレールに摺動可能に接続されている。たとえばＸ軸ステージ１０１の上側の表面は、プレート１１１を載置可能な搭載面となっている。図３３ではＹ軸ステージ１０２の上にＸ軸ステージ１０１が配置され、Ｘ軸ステージ１０１の上にプレート１１１が載置される。しかし逆に、Ｙ軸ステージ１０２の上にＸ軸ステージ１０１が配置され、Ｘ軸ステージ１０１の上にプレート１１１が載置されてもよい。

　針塗布機構１０４、滴下機構１０５および観察光学系１０６は、Ｚ方向に移動可能な部材であるたとえばＺ軸テーブルに接続されている。つまり針塗布機構１０４、滴下機構１０５および観察光学系１０６は、塗布装置１００内において、Ｚ方向に移動可能に保持されている。観察光学系１０６はプレート１１１上の塗布材料を塗布すべき位置などを観察し測定する。観察光学系１０６には、観察した画像を電気信号に変換するＣＣＤカメラが設置されていてもよい。観察光学系１０６によるプレート１１１などの観察は、可視光によりなされてもよい。しかしプレート１１１などの観察は、可視光に限らず、赤外線、Ｘ線、超音波などによりなされてもよく、プレート１１１の材質によっては磁気を用いてプレート１１１の観察が可能である。可視光以外の手段により観察されるプレート１１１は、透明または半透明である必要はなく、不透明であってもよい。

　図３４は、実施の形態３に係る塗布装置の第２例を示す概略正面図である。図３４を参照して、第２例に係る塗布装置１００は、第１例に係る塗布装置１００と基本的に同様の構成を備えるため、同一の構成要素には同一の符号を付し、機能等が同一である限り説明を繰り返さない。図３４の塗布装置１００は、３つの針塗布機構１０４と、２つの滴下機構１０５とを備えている。３つの針塗布機構１０４は、針塗布機構１０４－１と、針塗布機構１０４－２と、針塗布機構１０４－３とである。これら３つの針塗布機構は、Ｘ方向に間隔をあけて並んでいるが、相互のＸ方向間隔は一定であり変化しない。たとえばこれらの３つの針塗布機構１０４－１～１０４－３と、２つの滴下機構１０５－１，１０５－２とのそれぞれの互いに隣り合う機構間（貫通孔の中心間）のＸ方向間隔は、全て後述の容器１１２Ａ間の第１間隔Ｄ１に等しくてもよい。以降の実施の形態３の説明では、図３３の単一の針塗布機構１０４のみを有する塗布装置１００が用いられる。

　図３５は、図３３に示した塗布装置の針塗布機構を示す模式図である。図３５を参照して、本実施の形態の針塗布機構１０４（図３４の針塗布機構１０４－１、針塗布機構１０４－２もこれと同じ）は、サーボモータ４１、カム４３、当該カム４３のカム面に接触した状態で保持されている軸受４４、カム連結板４５、可動部４６、塗布針ホルダ２０を保持する可動ベース３５、および塗布材料容器２１を主に含む。塗布針ホルダ２０は可動ベース３５と着脱可能になっている。言い換えれば、ベース体としての可動ベース３５は、塗布針ホルダ２０を着脱可能に保持する。

　図３６は、プレートの概略斜視図である。図３６を参照して、本実施の形態では、液体材料としての塗布材料は、プレート１１１に複数形成された容器１１２Ａの内部に塗布供給される。ただし塗布材料が供給される塗布対象物はこれに限られない。プレート１１１はＺ軸方向に厚みを有し、その最上面に複数の容器１１２Ａが形成されている。複数の容器１１２Ａは、プレート１１１の上面がくぼんだ凹形状の部分である。複数の容器１１２Ａは互いに間隔をあけて、たとえば図３６のＹ軸方向に８列、Ｘ軸方向に１２列で合計９６個形成されてもよい。容器１１２Ａの平面形状はたとえば円形など任意である。

　（塗布方法）
　図３７は、実施の形態３の塗布方法を示すフローチャートである。図３７を参照して、まず塗布機構１０７のＺ軸が下降される（Ｓ１）。

　図３８は、実施の形態３の塗布方法に用いられる塗布装置の、塗布機構および設置されるプレートの一部を示す概略断面図である。図３８を参照して、工程（Ｓ１）により、図３８の針塗布機構１０４（第１塗布機構）と、これとのＸ方向の間隔が第１間隔Ｄ１である滴下機構１０５（第２塗布機構）とが下降される。針塗布機構１０４（図３３での針塗布機構１０４）には第１塗布材料Ａ１が入った第１塗布材料容器２１Ａ－１が含まれる。滴下機構１０５（図３３での滴下機構１０５－１）には第２塗布材料Ｂが入った第２塗布材料容器２１Ｂが含まれる。これらの各塗布材料容器２１の底部には、塗布材料を供給するための貫通孔２５が形成されている。これらの貫通孔２５の中心間の間隔が、針塗布機構１０４と滴下機構１０５との第１間隔Ｄ１である。

　再度図３７を参照して、次に、第１塗布針２４Ａ－１が下降される（Ｓ２）。第１塗布針２４Ａ－１の下降は、塗布装置１００に含まれるＺ軸ステージ１０３（図３３参照）を動作させることによりなされる。これにより、シンプルな制御によるステージの移動が可能となる。

　図３９は、実施の形態３の塗布方法の第１工程を示す概略断面図である。図３７および図３９を参照して、工程（Ｓ２）では、針塗布機構１０４に含まれる塗布針２４（図３５参照）としての第１塗布針２４Ａ－１が図中矢印の方向に下降する。

　第１塗布針２４Ａ－１は、第１塗布材料容器２１Ａ－１内に少なくとも先端部（最下部）が収まっている。第１塗布材料容器２１Ａ－１内には、塗布材料としての第１塗布材料Ａ１が配置されている。このため第１塗布針２４Ａ－１の少なくとも先端部は第１塗布材料Ａ１内に浸漬している。

　塗布装置１００（図３３参照）に設置されたプレート１１１（図３６参照）には、複数の容器１１２Ａが形成される。図３９には容器１１２Ａとして容器１１２Ａ－１と、それのＸ方向左側に隣接する容器１１２Ａ－２と、容器１１２Ａ－２のＸ方向左側に隣接する容器１１２Ａ－３とが示される。これらのＸ方向に沿う第１間隔は、針塗布機構１０４と滴下機構１０５との第１間隔Ｄ１に等しい。なお第１間隔Ｄ１は、Ｘ方向について互いに隣り合う容器１１２Ａのそれぞれの中心間の距離である。初期状態では、たとえば図３９のように、第１塗布針２４Ａ－１と平面的に重なる位置に、容器１１２Ａ－１が配置される。

　次に、第１塗布針２４Ａ－１（第１塗布機構の一部）により第１塗布材料Ａ１（第１塗布材料）が塗布される（Ｓ３）。具体的には、図３９に示すように、第１塗布針２４Ａ－１の下降により、容器１１２Ａ－１（第１容器）内に、第１塗布針２４Ａ－１の先端部に付着した第１塗布材料Ａ１が供給される。

　その後、第１塗布針２４Ａ－１が上昇する（Ｓ４）。次に、プレート１１１が第１間隔Ｄ１だけ移動する（Ｓ５）。

　図４０は、実施の形態３の塗布方法の第２工程を示す概略断面図である。図３７および図４０を参照して、工程（Ｓ５）では、プレート１１１を載置するたとえばＸ軸ステージ１０１が、矢印Ｍに示すように、Ｘ方向のたとえば右側に移動する、同時供給前移動工程がなされる。これによりＸ軸ステージ１０１およびその上のプレート１１１がＸ方向のたとえば右側に移動する。ただし後述のようにＹ軸ステージ１０２をＹ方向に移動させてもよい。このときはＹ軸ステージ１０２、Ｘ軸ステージ１０１およびプレート１１１がＹ方向に移動する。以上により、シンプルな制御によるステージの移動が可能となる。

　図４０にてＸ軸ステージ１０１がＸ方向の右側に移動する距離は、第１間隔Ｄ１に等しい。また上記のように、針塗布機構１０４と滴下機構１０５－１の貫通孔２５の中心間の距離は第１間隔Ｄ１に等しい。したがって針塗布機構１０４と滴下機構１０５－１との第１間隔Ｄ１は、Ｘ軸ステージ１０１の移動量に等しい。このため図４０では、第１塗布針２４Ａ－１と平面的に重なる位置に、容器１１２Ａ－２が配置される。また図４０では、滴下機構１０５の貫通孔２５と平面的に重なる位置に、容器１１２Ａ－１が配置される。

　次に図４０では、図３９と同様に工程（Ｓ２）～（Ｓ４）が繰り返される。つまり容器１１２Ａ－２（第２容器）内に、第１塗布針２４Ａ－１の先端部に付着した第１塗布材料Ａ１が供給される。これと同時に、容器１１２Ａ－１（第１容器）内には、第２塗布材料容器２１Ｂの貫通孔２５から滴下される第２塗布材料Ｂが供給される、同時供給工程がなされる（Ｓ２１）。第２塗布材料Ｂは第１塗布材料Ａ１を覆うように供給される。

　図４１は、実施の形態３の塗布方法の第３工程を示す概略断面図である。図３７および図４１を参照して、第１塗布材料Ａ１を供給すべき領域のすべてに供給し終えたか否かが判定される（Ｓ１００）。図４１においては容器１１２Ａ－３において未だ第１塗布材料Ａ１が供給されていない。そこで（Ｓ１００）からＮの方へ進行し、再度、図中の矢印Ｍに示すように、プレート１１１が第１間隔Ｄ１だけ移動する（Ｓ５）。これにより、第１塗布針２４Ａ－１と平面的に重なる位置に、容器１１２Ａ－３が配置される。また図４１では、滴下機構１０５の貫通孔２５と平面的に重なる位置に、容器１１２Ａ－２が配置される。その後、図３９、図４０と同様に、容器１１２Ａ－３内に、第１塗布針２４Ａ－１の先端部に付着した第１塗布材料Ａ１が供給される。これと同時に、容器１１２Ａ－２内には、図４０と同様に、第２塗布材料容器２１Ｂの貫通孔２５から滴下される第２塗布材料Ｂが供給される、同時供給工程がなされる（Ｓ２１）。図４１の同時供給工程は、たとえばＸ方向に１列に並ぶ、第１塗布材料Ａ１を供給すべき容器１１２Ａが存在しなくなるまで繰り返される。Ｙ軸ステージ１０２がＹ方向に移動することにより、図３３にてその上にあるＸ軸ステージ１０１およびプレート１１１もＹ方向に移動する。その後、Ｙ方向に隣り合い１列に並ぶ容器１１２Ａにも上記と同様の供給がなされてもよい。

　図４０の工程では、容器１１２Ａ－２が第１容器であり、容器１１２Ａ－１が第２容器である。これに対し、図４１の工程では、容器１１２Ａ－３が第１容器であり、容器１１２Ａ－２が第２容器である。このように、同時供給前移動工程および同時供給工程がなされる毎に、第１容器および第２容器に相当する容器は、Ｘ軸ステージ１０１の移動方向（Ｘ方向）に沿ってたとえば１つずつずれるように変更される。

　図４２は、実施の形態３の塗布方法の第４工程を示す概略断面図である。図３７および図４２を参照して、第１塗布材料Ａ１を供給すべき領域のすべてに供給し追えたか否かが判定される（Ｓ１００）。図４２においては容器１１２Ａ－１から容器１１２Ａ－３までの全てに第１塗布材料Ａ１が塗布され終えている。そこで（Ｓ１００）からＹの方へ進行し、再度、プレート１１１が第１間隔Ｄ１だけ図中の矢印Ｍのように移動する（Ｓ５）。これにより、図４２では、滴下機構１０５の貫通孔２５と平面的に重なる位置に、容器１１２Ａ－３が配置される。その後、図４０、図４１と同様に、容器１１２Ａ－３（第２容器）内に、第２塗布材料容器２１Ｂの貫通孔２５から第２塗布材料Ｂが滴下される（Ｓ２１）。その後、塗布機構１０７のＺ軸が上昇し（Ｓ２２）、工程が終了する。

　なお第１塗布材料Ａ１および第２塗布材料Ｂを供給し終えた後の適切なタイミングで、滴下機構１０５－２から培地が、各容器１１２Ａ内に供給される。培地は、容器１１２Ａ内の大部分を占め、第１塗布材料Ａ１および第２塗布材料Ｂが浸漬されるように供給される。

　（供給される塗布材料について）
　第１塗布材料Ａ１は、培養すべき細胞と、ゲル化開始剤であるトロンビンとが混合されている。一例として、第１塗布材料Ａ１には、８×１０^－７ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度で、たとえばｉＰＳ細胞由来の心筋細胞と、ヒト心臓繊維芽細胞とが３：１の個数比で混合される。トロンビンの濃度は、たとえば８００ｕｎｉｔ／ｍＬである。また第１塗布材料Ａ１には、１３ｍｇ／ｍＬのヒアルロン酸ナトリウムが混合されてもよい。さらに第１塗布材料Ａ１には、ＰＢＳ溶液が混合されてもよい。最終的に得られる第１塗布材料の粘度は、たとえば１．５×１０^－４ｍＰａ・ｓであってもよい。

　第２塗布材料Ｂは、ゲル化剤であるフィブリノーゲンを主成分とするが、ヒアルロン酸ナトリウムおよびＰＢＳ溶液が混合されてもよい。一例として、第２塗布材料Ｂには、１０ｍｇ／ｍＬのフィブリノーゲンと、０．５ｍｇ／ｍＬのヒアルロン酸ナトリウムとが混合される。これらにより、第１塗布材料Ａ１に含まれる細胞Ｃの培養ができる。

　（三次元細胞組織の作製方法）
　図４３は、三次元細胞組織の作製方法の一例を示す概略図である。図４３を参照して、（Ａ）（Ｂ）のように、培養すべき細胞Ｃがトロンビンを含むＰＢＳ溶液などに懸濁された第１塗布材料Ａ（第１塗布材料Ａ１と同じ）が準備される。これが（Ｃ）のようにたとえば塗布装置の塗布材料容器２１内に配置され、塗布針２４により基板１１２Ｂなどの上に供給される。その後、（Ｅ）のように、たとえばマイクロピペット１８による手動で、第１塗布材料Ａを覆うように第２塗布材料Ｂが供給される。これにより、第１塗布材料Ａと第２塗布材料Ｂとの接触面からその外周（第２塗布材料Ｂ）がゲル化（固化）される。これが（Ｆ）のように容器１１２Ａ内に設置され、容器１１２Ａ内にはこれらを浸漬する培地Ｍが供給される。すると時間の経過に伴い、第１塗布材料Ａ内の細胞Ｃが沈殿し堆積する。これにより高密度の三次元細胞組織が得られる。第１塗布材料Ａ内は液体の状態で保持されるため、第１塗布材料Ａ内の細胞Ｃの乾燥が抑制される。図４４は、図４３の作製方法により得られた三次元細胞組織の写真である。図４４を参照して、得られた三次元細胞組織は、５０μｍ～２００μｍ程度の厚みを有し、細胞が密に積層されている。さらに、細胞核、アクチン、トロポニン染色の結果、図４４の三次元細胞組織には細胞が生存していることが確認され、心筋細胞に特徴的なアクチンとトロポニンの発現が確認された。

　図４５は、プレートに含まれる１つの容器内に細胞組織が作製された結果を示す概略図である。図４５を参照して、（Ａ）に示すように、従来のマイクロピペットを用いた細胞播種方法では、容器１１２Ａ内の全体に細胞Ｃが拡がる。しかし図４３に示す方法を用いれば、（Ｂ）に示すように、たとえば直径が６．５ｍｍの容器１１２Ａのうち直径が１．０ｍｍの範囲内に第１塗布材料Ａおよび第２塗布材料Ｂを供給し、細胞組織を作製できる。さらに（Ｃ）のように、（Ｂ）のような細胞組織を容器１１２Ａ内に複数、互いに間隔をあけて形成することもできる。図４６は、図４５中の（Ｃ）のように単一の容器内に複数形成された細胞組織の例を示す概略図である。図４６を参照して、たとえば（Ａ）のように円形の容器１１２Ａ内に、周方向に沿って複数（たとえば８つ）の細胞Ｃを含む組織を得ることもできる。たとえば（Ｂ）のように正方形の容器１１２Ａ内の各角部に複数（たとえば４つ）の細胞Ｃを含む組織を得ることもできる。（Ｃ）のように、いっそう多数の細胞組織を得ることもできる。

　図４６のように、単一の容器１１２Ａ内の複数箇所に独立して細胞Ｃの組織を作製することにより、創薬プロセスにおける薬効薬理評価、および安全性評価における薬剤評価が効率的に行なえる。図４６のような手法を用いず、たとえば図４５（Ａ）のように形成した場合、当該容器１１２Ａ内の細胞組織からは単一の解析結果しか取得できない。しかし図４６の手法により、容器１１２Ａ内の複数の細胞組織から複数の解析結果を取得できる。このためハイスループットで評価効率の高い細胞組織が得られる。

　図４７は、直径が３３０μｍである塗布針を用いた細胞組織の作製例である。図４７を参照して、（Ａ）は塗布直後の態様であり、（Ｂ）は塗布の６日後の態様である。図４７に示すように、太い塗布針を用いても、写真のように互いに間隔をあけて細胞組織を作製可能である。

　（作用効果）
　本実施の形態に係る塗布方法によれば、塗布材料を受け入れ可能な複数の容器１１２Ａを有するプレート１１１に含まれる第１容器に、第１塗布機構（針塗布機構１０４）を用いて塗布材料としての第１塗布材料Ａ１を供給する工程がなされる。プレート１１１を載置するステージ（たとえばＸ軸ステージ１０１）が移動する同時供給前移動工程（Ｓ５）がなされる。プレート１１１の第１容器と間隔をあけて配置される第２容器に第１塗布機構（針塗布機構１０４）を用いて第１塗布材料Ａ１を供給すると同時に、第１容器（たとえば容器１１２Ａ－１）に、第１塗布機構（針塗布機構１０４）と間隔をあけて配置される第２塗布機構（滴下機構１０５－１）を用いて塗布材料としての第２塗布材料Ｂを供給する同時供給工程（Ｓ３，Ｓ２１）とを備える。同時供給前移動工程および同時供給工程がなされる毎に、第１容器および第２容器に相当する容器がステージの移動方向（Ｘ方向）に沿って変更される。つまり第１容器、第２容器のいずれも、容器１１２Ａ－１から容器１１２Ａ－２、容器１１２Ａ－３へと順次移動する。

　図４８は、実施の形態３の塗布方法と比較例の塗布方法との塗布がなされるタイミングを比較するための概略図である。図４８を参照して、比較例においては、たとえば容器１１２Ａ－１に第１塗布材料Ａ１を供給した後、Ｘ軸ステージ１０１が移動し、容器１１２Ａ－１の真上に滴下機構１０５が設置され、容器１１２Ａ－１に第２塗布材料Ｂが供給される。その後、Ｘ軸ステージ１０１が再度移動して容器１１２Ａ－２の真上に針塗布機構１０４が設置され、容器１１２Ａ－２に第１塗布材料Ａ１が供給される。その後、上記と同様に移動工程と供給工程が繰り返される。すなわち、容器１１２Ａ－２に第２塗布材料Ｂが供給され、ＸＹステージ１０１が移動し、容器１１２Ａ－３に第１塗布材料Ａ１が供給され、ＸＹステージ１０１が移動し、容器１１２Ａ－３に第２塗布材料Ｂが供給される。この場合、全ての容器１１２Ａに塗布材料を供給し終えるのに要する時間Ｔ１が長くなる。

　そこで本実施の形態の方法を適用すれば、たとえば容器１１２Ａ－１に第１塗布材料Ａ１を供給した後、同時供給前移動工程により、容器１１２Ａ－１の真上に滴下機構１０５－１が設置され、容器１１２Ａ－２の真上に針塗布機構１０４が設置される。そして、容器１１２Ａ－１に第２塗布材料Ｂが、容器１１２Ａ－２に第１塗布材料Ａ１が、同時に供給される。その後、同時供給前移動工程と同時供給工程とが繰り返され、第１塗布材料Ａ１と第２塗布材料Ｂとが繰り返し同時に供給される。このように、大部分の塗布工程において、複数箇所への同時供給が可能である。このため、全ての容器１１２Ａに塗布材料を供給し終えるのに要する時間Ｔ２が比較例での時間Ｔ１よりも大幅に短縮できる。たとえば、第１塗布材料Ａ１の塗布時間を１秒、第２塗布材料Ｂの滴下時間を１秒、ＸＹステージ１０１の移動時間を２秒とする。このとき、５つの容器１１２Ａに塗布材料の供給をし終えるのに要する時間は、比較例では３０秒であるのに対し、本実施の形態では１８秒である。

　上記塗布方法では、第２塗布材料Ｂは第１塗布材料Ａを覆うように供給される。第１塗布機構（針塗布機構１０４）と第２塗布機構（滴下機構１０５－１）との間隔（それぞれの貫通孔２５の中心の間隔：第１間隔Ｄ１）は、プレート１１１の第１容器（たとえば容器１１２Ａ－１）と、第１容器１１２Ａ－１と隣り合う隣接容器との（Ｘ方向の中心間の）第１間隔Ｄ１の自然数ｎ倍（ｎ≧１）に等しい。実施の形態３では容器１１２Ａ－１の隣接容器は容器１１２Ａ－２であり、Ｘ方向について隣り合う容器の双方に塗布材料が供給されるため、ｎ＝１である。このような特徴を有するため、上記のように、針塗布機構１０４で容器１１２Ａ－１に第１塗布材料Ａ１を供給後、ＸＹステージ１０１を第１間隔Ｄ１だけ移動させることで、容器１１２Ａ－２と容器１１２Ａ－１とへの同時供給工程が可能となる。このため全体の細胞組織作製時間を短縮し、ハイスループットで細胞組織を作製できる。

　本実施の形態に係る塗布装置１００は、塗布されるべき塗布材料（第１塗布材料Ａ１および第２塗布材料Ｂ）を供給可能な塗布機構１０７と、塗布材料が供給されるべきプレート１１１を載置可能なステージ（ＸＹステージ１０１）とを備える。塗布機構１０７は、第１塗布機構（針塗布機構１０４）と、第１塗布機構に隣接する第２塗布機構（滴下機構１０５－１）とを含む。第１塗布機構（針塗布機構１０４）と第２塗布機構（滴下機構１０５－１）との間隔（第１間隔Ｄ１）は、塗布機構１０７による１回目の塗布時（上記での容器１１２Ａ－１への第１塗布材料Ａ１の塗布時）と２回目の塗布時（上記での容器１１２Ａ－２への第１塗布材料Ａ１の塗布と容器１１２Ａ－１への第２塗布材料Ｂの滴下との同時供給工程時）との間でのＸＹステージ１０１の移動量に等しい（第１間隔Ｄ１）。このような特徴を有するため、上記のように、針塗布機構１０４で容器１１２Ａ－１に第１塗布材料Ａ１を供給後、ＸＹステージ１０１を第１間隔Ｄ１だけ移動させることで、容器１１２Ａ－２と容器１１２Ａ－１とへの同時供給工程が可能となる。

　（実施の形態４）
　（塗布装置の構成）
　図４９は、実施の形態４に係る塗布装置の例を示す概略正面図である。図４９を参照して、実施の形態４に係る塗布装置１００は、実施の形態３の各例に係る塗布装置１００と基本的に同様の構成を備えるため、同一の構成要素には同一の符号を付し、機能等が同一である限り説明を繰り返さない。図４９の塗布装置１００は、２つの針塗布機構１０４と、２つの滴下機構１０５とを備えている。２つの針塗布機構１０４は、針塗布機構１０４－１と、針塗布機構１０４－２とである。これら２つの針塗布機構１０４と２つの滴下機構１０５とのそれぞれは、Ｘ方向に間隔をあけて並んでいるが、相互のＸ方向間隔は一定であり変化しない。当該Ｘ方向間隔は図３４の塗布装置１００におけるＸ方向間隔に等しい。このような構成であってもよい。

　図５０は、実施の形態４の塗布方法を示すフローチャートである。図５０を参照して、まず塗布機構のＺ軸が下降される（Ｓ１）。

　図５１は、実施の形態４の塗布方法に用いられる塗布装置の、塗布機構および設置されるプレートの一部を示す概略断面図である。図５１を参照して、図３８と同様事項については説明を繰り返さない。工程（Ｓ１）により、図５１の針塗布機構１０４－１（第１塗布機構）、針塗布機構１０４－２（他の第１塗布機構）と、滴下機構１０５（第２塗布機構）とが下降される。針塗布機構１０４－２は針塗布機構１０４－１と滴下機構１０５（１０５－１）との間に配置される。針塗布機構１０４－２には他の第１塗布材料Ａ２が入った他の第１塗布材料容器２１Ａ－２が含まれ、初期状態にて第２塗布針２４Ａ－２の先端部が他の第１塗布材料Ａ２に浸漬される。他の第１塗布材料Ａ２は、第１塗布材料容器２１Ａ－１内の第１塗布材料Ａ１とは、懸濁される細胞の種類が異なってもよい。他の第１塗布材料容器２１Ａ－２の底部には、塗布材料を供給するための貫通孔２５が形成されている。各塗布機構の貫通孔２５の中心間の間隔が、各塗布機構間の間隔である。

　再度図５０を参照して、次に、第１塗布針２４Ａ－１が下降される（Ｓ２）。図５２は、実施の形態４の塗布方法の第１工程を示す概略断面図である。図５０および図５２を参照して、工程（Ｓ２）～工程（Ｓ４）については基本的に図３９の工程と同様である。

　図５３は、実施の形態４の塗布方法の第２工程を示す概略断面図である。図５０および図５３を参照して、工程（Ｓ５）についても基本的に図４０の工程と同様である。つまりプレート１１１を載置するＸＹステージ１０１が、図中の矢印Ｍに示すようにＤ１だけＸ方向の右側に移動する工程がなされる。

　ここで、再度図５１を参照して、針塗布機構１０４－１（の貫通孔２５の中心）と針塗布機構１０４－２（の貫通孔２５の中心）との間隔は、容器１１２Ａ－１と容器１１２Ａ－２との第１間隔Ｄ１と、容器１１２Ａ－１内に供給される第１塗布材料Ａ１（第１塗布材料）と他の第１塗布材料Ａ２（他の第１塗布材料）との第２間隔Ｄ２との和Ｄ１＋Ｄ２に等しい。このため図５３では、第１塗布針２４Ａ－１と平面的に重なる位置に容器１１２Ａ－２が配置され、第２塗布針２４Ａ－２と平面的に重なる位置に、容器１１２Ａ－１が配置される。また図５１では、針塗布機構１０４－１（の貫通孔２５の中心）と滴下機構１０５（の貫通孔２５の中心）との間隔は、第１間隔Ｄ１の２倍と第２間隔Ｄ２の１／２倍との和、すなわち２Ｄ１＋Ｄ２／２に等しい。

　第２間隔Ｄ２は、第１塗布材料Ａ１と他の第１塗布材料Ａ２とのたとえばＸ方向の中心間の塗布間隔である。ただし第２間隔Ｄ２は、第１塗布材料Ａ１のＸ方向の中心位置に対する他の第１塗布材料Ａ２のＸ方向の相対位置を示すものでもある。したがって、たとえば図５３では第１塗布材料Ａ１よりも他の第１塗布材料Ａ２が右側（Ｘ方向の正側）にあるためＤ２の値は正である。しかしたとえば図示されないが第１塗布材料Ａ１よりも他の第１塗布材料Ａ２が左側（Ｘ方向の負側）にある場合はＤ２の値は負となる。

　次に図５３では、図５２と同様に工程（Ｓ２）～（Ｓ４）が繰り返される。つまり容器１１２Ａ－２内に第１塗布材料Ａ１が供給される。これと同時に、容器１１２Ａ－１内には他の第１塗布材料Ａ２が供給される。このとき第１塗布針２４Ａ－１と同様に第２塗布針２４Ａ－２が動作する。すなわち第２塗布針２４Ａ－２が図中矢印の方向に下降する（Ｓ１１）。第２塗布針２４Ａ－２により他の第１塗布材料Ａ２が塗布される（Ｓ１２）。その後、第２塗布針２４Ａ－２が上昇する（Ｓ１３）。ここで容器１１２Ａ－１内に供給される他の第１塗布材料Ａ２は、容器１１２Ａ－１内に供給される第１塗布材料Ａ１との塗布間隔がＤ２となる。

　図５４は、実施の形態４の塗布方法の第３工程を示す概略断面図である。図５０および図５４を参照して、再度、プレート１１１を載置するＸＹステージ１０１が、図中の矢印Ｍに示すようにＤ１だけＸ方向の右側に移動する、同時供給前移動工程（Ｓ５）がなされる。これにより、第１塗布針２４Ａ－１と平面的に重なる位置に、容器１１２Ａ－３が配置される。第２塗布針２４Ａ－２と平面的に重なる位置に、容器１１２Ａ－２が配置される。滴下機構１０５の貫通孔２５と平面的に重なる位置に、容器１１２Ａ－１が配置される。

　その後、図５４では、図５２、図５３と同様に工程（Ｓ２）～（Ｓ４）が繰り返される。つまり容器１１２Ａ－３（第１容器）内に第１塗布材料Ａ１が供給される。これと同時に、図５３と同様に工程（Ｓ１１）～（Ｓ１３）が繰り返される。つまり容器１１２Ａ－２内（第３容器）に他の第１塗布材料Ａ２が供給される。さらにこれらと同時に、図４０と同様に工程（Ｓ２１）がなされる。つまり容器１１２Ａ－１（第２容器）内に第２塗布材料Ｂが滴下される。図５４に示すように、他の第１塗布材料Ａ２は容器１１２Ａ－２内にて既に供給された第１塗布材料Ａ１と間隔Ｄ２をあけて隣接するように供給される。第２塗布材料Ｂは容器１１２Ａ－１内にて第１塗布材料Ａ１および他の第１塗布材料Ａ２を覆うように供給される。

　図５５は、実施の形態４の塗布方法の第４工程を示す概略断面図である。図５０および図５５を参照して、第１塗布材料Ａ１を供給すべき領域のすべてに供給し追えたか否かが判定される（Ｓ１００）。仮に未だ第１塗布材料Ａ１が供給されていない場合には（Ｓ１００）からＮの方へ進行し、プレート１１１が第１間隔Ｄ１だけ移動した（Ｓ５）上で再度、図５４と同様の工程が繰り返される。図５５においては容器１１２Ａ－１から容器１１２Ａ－３までのすべてに第１塗布材料Ａ１が塗布され終えている。そこで（Ｓ１００）からＹの方へ進行し、再度、プレート１１１が第１間隔Ｄ１だけ図中の矢印Ｍのように移動する（Ｓ５）。これにより、図５５では、第２塗布針２４Ａ－２と平面的に重なる位置に、容器１１２Ａ－３が配置される。また図４１では、滴下機構１０５の貫通孔２５と平面的に重なる位置に、容器１１２Ａ－２が配置される。

　その後、図５５では、図５３、図５４と同様に工程（Ｓ１１）～（Ｓ１３）が繰り返される。つまり容器１１２Ａ－３内に他の第１塗布材料Ａ２が供給される。これと同時に、図５４と同様に工程（Ｓ２１）が繰り返される。つまり容器１１２Ａ－２内に第２塗布材料Ｂが滴下される。

　図５６は、実施の形態４の塗布方法の第５工程を示す概略断面図である。図５０および図５６を参照して、再度、プレート１１１が第１間隔Ｄ１だけ図中の矢印Ｍのように移動する（Ｓ５）。これにより、図５６では、滴下機構１０５の貫通孔２５と平面的に重なる位置に、容器１１２Ａ－３が配置される。その後、図５４、図５５と同様に、容器１１２Ａ－３内に第２塗布材料Ｂが滴下される（Ｓ２１）。その後、塗布機構１０７のＺ軸が上昇し（Ｓ２２）、工程が終了する。

　（作用効果）
　本実施の形態に係る塗布方法によれば、同時供給工程においては、第１塗布材料Ａ１および第２塗布材料Ｂと同時に、塗布材料としての他の第１塗布材料Ａ２を供給する工程がなされる。他の第１塗布材料Ａ２を供給する工程は、第１容器と第２容器との間に配置される第３容器に、第１塗布機構（針塗布機構１０４－１）および第２塗布機構（滴下機構１０５）の間に配置される他の第１塗布機構（針塗布機構１０４－２）を用いてなされる。他の第１塗布材料Ａ２は、第３容器に第１塗布材料Ａ１と隣接するように供給される。第２塗布材料Ｂは第１塗布材料Ａ１および他の第１塗布材料Ａ２を覆うように供給される。上記のように第１容器および第２容器は都度Ｘ方向に移動するため、それらの間に配置される第３容器も同様にＸ方向に移動する。

　図５７は、実施の形態４の塗布方法と比較例の塗布方法との塗布がなされるタイミングを比較するための概略図である。図５７を参照して、比較例においては、たとえば容器１１２Ａ－１に第１塗布材料Ａ１を供給した後、ＸＹステージ１０１が移動し、容器１１２Ａ－１の真上に針塗布機構１０４－２が設置され、容器１１２Ａ－１に他の第１塗布材料Ａ２が供給される。その後、ＸＹステージ１０１が再度移動して容器１１２Ａ－１の真上に滴下機構１０５が設置され、容器１１２Ａ－１に第２塗布材料Ｂが供給される。その後、上記と同様に移動工程と供給工程が繰り返される。すなわち、容器１１２Ａ－２に第１塗布材料Ａ１が供給され、ＸＹステージ１０１が移動し、容器１１２Ａ－２に他の第１塗布材料Ａ２が供給され、ＸＹステージ１０１が移動し、容器１１２Ａ－２に第２塗布材料Ｂが供給される。この場合、全ての容器１１２Ａに塗布材料を供給し終えるのに要する時間Ｔ１が長くなる。

　そこで本実施の形態の方法を適用すれば、たとえば容器１１２Ａ－１に第１塗布材料Ａ１を供給した後、同時供給前移動工程により、容器１１２Ａ－１の真上に針塗布機構１０４－２が設置され、容器１１２Ａ－２の真上に針塗布機構１０４－１が設置される。そして、容器１１２Ａ－１に他の第１塗布材料Ａ２が、容器１１２Ａ－２に第１塗布材料Ａ１が、同時に供給される。次に、同時供給前移動工程と同時供給工程とにより、容器１１２Ａ－１に第２塗布材料Ｂが、容器１１２Ａ－２に他の第１塗布材料Ａ２が、容器１１２Ａ－３に第１塗布材料Ａ１が、同時に供給される。その後、同時供給前移動工程と同時供給工程とが繰り返され、第１塗布材料Ａ１と第２塗布材料Ｂとが繰り返し同時に供給される。このように、大部分の塗布工程において、複数箇所への同時供給が可能である。このため、全ての容器１１２Ａに塗布材料を供給し終えるのに要する時間Ｔ２が比較例での時間Ｔ１よりも大幅に短縮できる。たとえば、第１塗布材料Ａ１および他の第１塗布材料Ａ２の塗布時間を１秒、第２塗布材料Ｂの滴下時間を１秒、ＸＹステージ１０１の移動時間を２秒とする。このとき、５つの容器１１２Ａに塗布材料の供給をし終えるのに要する時間は、比較例では４５秒であるのに対し、本実施の形態では２１秒である。

　上記塗布方法では、第１塗布機構（針塗布機構１０４－１）と他の第１塗布機構（針塗布機構１０４－２）との間隔は、プレート１１１の第１容器と、第１容器に隣り合う隣接容器との第１間隔Ｄ１の自然数ｎ倍（ｎ≧１）と、第１容器内に供給される第１塗布材料と他の第１塗布材料との第２間隔Ｄ２との和に等しい。実施の形態４では容器１１２Ａ－１の隣接容器は容器１１２Ａ－２であり、Ｘ方向について隣り合う容器の双方に塗布材料が供給されるため、ｎ＝１である。このような特徴を有するため、上記のように、同時供給前移動工程と、同時供給工程とを繰り返すことが可能となる。

　本実施の形態では、塗布機構１０７の各針塗布機構１０４と滴下機構１０５との間隔が、容器１１２Ａの間隔Ｄ１と、実際に塗布しようとする第１塗布材料Ａ１と他の第１塗布材料Ａ２とのＸ方向の間隔Ｄ２を考慮して決定（設計）されている。このため図５２～図５６の実動作時に容器１１２Ａのステージを容器１１２Ａの間隔Ｄ１分ずつ移動させるだけで、容易に所望の位置に塗布材料を塗布することができる。

　（実施の形態５）
　図５８は、実施の形態５の第１例に係る塗布方法を示すフローチャートである。図５８を参照して、まず塗布機構１０７のＺ軸が下降される（Ｓ１）。

　図５９は、実施の形態５の第１例に係る塗布方法に用いられる塗布装置の、塗布機構および設置されるプレートの一部を示す概略断面図である。図５９を参照して、本実施の形態で用いられる塗布装置１００は、基本的に実施の形態４で用いられる塗布装置１００と同様である。すなわち、本実施の形態の塗布装置１００は、２つの針塗布機構１０４と、２つの滴下機構１０５とを備えている。２つの針塗布機構１０４は、針塗布機構１０４－１と、針塗布機構１０４－２とである。これら２つの針塗布機構１０４と２つの滴下機構１０５とのそれぞれのＸ方向の間隔は、実施の形態４のそれと同様である。つまり図５９では図５１と同様に、針塗布機構１０４－１（の貫通孔２５の中心）と針塗布機構１０４－２（の貫通孔２５の中心）との間隔はＤ１＋Ｄ２である。また図５９では図５１と同様に、針塗布機構１０４－１（の貫通孔２５の中心）と滴下機構１０５（の貫通孔２５の中心）との間隔は、第１間隔Ｄ１の２倍と第２間隔Ｄ２の１／２倍との和、すなわち２Ｄ１＋Ｄ２／２に等しい。また本実施の形態においても他の実施の形態と同様に、隣り合う１対の容器１１２Ａの間隔はＤ１である。

　ただし図５９に示すように、本実施の形態では、第１塗布材料Ａ１と他の第１塗布材料Ａ２との（Ｘ方向の中心間の）塗布間隔が、実施の形態４でのＤ２とは異なり、Ｄ３である。この場合、塗布工程は次のようになる。

　図６０は、実施の形態５の第１例に係る塗布方法の第１工程を示す概略断面図である。図５８および図６０を参照して、最初の工程（Ｓ２）～（Ｓ４）により、図５２と同様に、容器１１２Ａ－１に第１塗布材料Ａ１が供給される。次に工程（Ｓ５）により、図５３と同様に、プレート１１１を載置するＸＹステージ１０１が、図中の矢印Ｍに示すようにＤ１だけＸ方向の右側に移動する工程がなされる。その後、再度工程（Ｓ２）～（Ｓ４）がなされ、容器１１２Ａ－２に第１塗布材料Ａ１が供給される。

　図６１は、実施の形態５の第１例に係る塗布方法の第２工程を示す概略断面図である。図５８および図６１を参照して、次に、プレート１１１がＸ方向の右側に、（Ｄ２－Ｄ３）だけ移動する（Ｓ６）。これは実施の形態４のように塗布間隔がＤ２となるように他の第１塗布材料Ａ２を塗布する場合と、本実施の形態のように塗布間隔がＤ３となるように他の第１塗布材料Ａ２を塗布する場合との他の第１塗布材料Ａ２の距離の差に基づく。その後、第２塗布針２４Ａ－２が下降し（Ｓ１１）、第１塗布材料Ａ２が塗布され（Ｓ１２）、第２塗布針２４Ａ－２が上昇する（Ｓ１３）。これにより、中心間のＸ方向の間隔が第３間隔Ｄ３となるように、第３間隔Ｄ３は、たとえば実施の形態４の第２間隔Ｄ２よりも小さい正の値とされる。

　また第３間隔Ｄ３は第２間隔Ｄ２と同様に、第１塗布材料Ａ１のＸ方向の中心位置に対する他の第１塗布材料Ａ２のＸ方向の相対位置を示すものでもある。したがって、たとえば図６１では第３間隔Ｄ３は正の値であるが、たとえば図示されないが第１塗布材料Ａ１よりも他の第１塗布材料Ａ２が左側（Ｘ方向の負側）にある場合はＤ３の値は負となる。またＤ３がＤ２よりも大きい正の値となる場合もある。以上のように第３間隔Ｄ３は任意に選択可能な値である。このため各図ではプレート１１１の移動方向はＸ方向右向きであるが、これがＸ方向左向きとなる場合もある。

　図６２は、実施の形態５の第１例に係る塗布方法の第３工程を示す概略断面図である。図５８および図６２を参照して、次にプレート１１１が（Ｄ１－Ｄ２＋Ｄ３）だけＸ方向の右側に移動する（Ｓ７）。これは以下の理由に基づく。容器１１２Ａ－２内と容器１１２Ａ－３内との双方にて、Ｘ方向についての同じ位置に第１塗布材料Ａ１を供給する必要がある。このため本来、容器１１２Ａ－２への第１塗布材料Ａ１の塗布工程から容器１１２Ａ－３への第１塗布材料Ａ１の塗布工程までの間に、Ｄ１だけプレート１１１が移動すべきである。しかし図６１において既に（Ｄ２－Ｄ３）だけ移動しているため、これらの差分であるＤ１－（Ｄ２－Ｄ３）だけ移動すべきであるためである。

　その後、図６２では、図４０と同様に、工程（Ｓ２）～（Ｓ４）と、工程（Ｓ２１）とが同時になされる。これにより、第１塗布材料Ａ１と第２塗布材料Ｂとが同時に供給される。具体的には、容器１１２Ａ－３に第１塗布材料Ａ１が、容器１１２Ａ－１に第２塗布材料Ｂが供給される。第２塗布材料Ｂは第１塗布材料Ａ１および他の第１塗布材料Ａ２を覆うように供給される。

　図６３は、実施の形態５の第１例に係る塗布方法の第４工程を示す概略断面図である。図５８および図６３を参照して、次に図６１と同様に、プレート１１１が（Ｄ２－Ｄ３）だけＸ方向の右側に移動し（Ｓ６）、工程（Ｓ１１）～（Ｓ１３）により他の第１塗布材料Ａ２が容器１１２Ａ－２に供給される。

　図５８を参照して、上記実施の形態と同様に、工程（Ｓ１００）での判定により、ステージが移動しながら図６２および図６３の工程が、第１塗布材料Ａ１を塗布すべき容器１１２Ａが存在しなくなるまで繰り返される。

　図６４は、実施の形態５の第２例に係る塗布方法を示すフローチャートである。図６４を参照して、この例では、最初に実施の形態４の図５０の最初に示す工程（Ｓ１）～（Ｓ４）および図５２と同様に、第１塗布材料Ａ１が供給される。次に、図５０の続く工程（Ｓ５）、工程（Ｓ２）～（Ｓ４）、工程（Ｓ１１）～（Ｓ１３）、および図５３と同様に、第１塗布材料Ａ１と他の第１塗布材料Ａ２とが同時に供給される。その後、たとえばプレート１１１が距離Ｄ４だけ移動され（Ｓ８）、その後第２塗布材料Ｂがたとえば図５３の容器１１２Ａ－１に供給される（Ｓ２１）。これはたとえば、第１塗布材料Ａ１および他の第１塗布材料Ａ２については実施の形態４と同様に同時に供給するが、第２塗布材料Ｂのみ実施の形態４における供給位置からＸ方向に第４間隔Ｄ４だけずれた位置に供給したい場合に用いられる方法である。プレート１１１が（Ｄ１－Ｄ４）だけＸ方向の右側に移動した（Ｓ９）後、工程（Ｓ１００）にてＮの方へ進んだ場合には、上記の工程が繰り返される。

　図６４の第２例は、以上のように、第２塗布材料Ｂのみ、第１塗布材料Ａ１および他の第１塗布材料Ａ２とは異なるタイミングで供給される。第２例はこの点において、他の第１塗布材料Ａ２のみ第１塗布材料Ａ１および第２塗布材料Ｂとは異なるタイミングで供給される図５８～図６３の第１例とは異なる。図６４のように、第２塗布材料Ｂのみ、実施の形態４とは異なる位置に滴下する場合にも、上記のようにプレート１１１の移動量を制御することで、任意の位置への滴下が可能となる。また上記していないが、たとえば他の第１塗布材料Ａ２と第２塗布材料Ｂとを同時に供給し、第１塗布材料Ａ１のみを任意の位置に供給することも、第１塗布材料Ａ１の供給時に別途、任意の移動量だけプレート１１１を移動させることで可能となる。

　（作用効果）
　本実施の形態に係る塗布方法によれば、第２塗布材料Ｂは第１塗布材料（第１塗布材料Ａ１および他の第１塗布材料Ａ２）を覆うように供給される。同時供給前移動工程（図５８の工程（Ｓ６）、（Ｓ７））においては、第１容器内に供給されるべき第１塗布材料Ａ１と、他の第１塗布機構（針塗布機構１０４－２）から供給される他の第１塗布材料Ａ２との第３間隔Ｄ３を考慮して、任意のＸＹステージ１０１の移動量を選択可能である。すなわち図５８の工程（Ｓ６）および図６１での（Ｄ２－Ｄ３）、および図５８の工程（Ｓ７）および図６２での（Ｄ１－Ｄ２＋Ｄ３）は、第１塗布材料Ａ１と他の第１塗布材料Ａ２との容器１１２Ａ内での任意の間隔Ｄ３に応じて選択された値である。

　本実施の形態では、塗布機構１０７の各針塗布機構１０４と滴下機構１０５との間隔が、実際に塗布しようとする第１塗布材料Ａ１と他の第１塗布材料Ａ２とのＸ方向の間隔Ｄ３とは無関係な値Ｄ２となるように決定（設計）されている。このため図５８～図６３のように、第１塗布材料Ａ１と第２塗布材料Ｂとのみ同時に供給され、他の第１塗布材料Ａ２については、別途位置を調整する必要があるため、第１塗布材料Ａ１および第２塗布材料Ｂとは別のタイミングで供給される。しかし少しの時間を用いてＸＹステージ１０１で塗布位置を調整すれば、少なくとも第１塗布材料Ａ１および第２塗布材料Ｂが同時に供給されることによる時間短縮の効果は期待できる。また少しの時間を用いて塗布位置を調整すれば、第１塗布材料Ａ１と他の第１塗布材料Ａ２との距離をたとえばＤ３のように任意の値とすることができる。

　実施の形態４では第２塗布材料Ｂは、第１塗布材料Ａ１と他の第１塗布材料Ａ２との中央の位置に供給される。塗布機構１０７における針塗布機構１０４－１と滴下機構１０５との間隔４Ｄ１＋Ｄ２／２のうちＤ２／２の項は、そのことを考慮して決められている。しかし実施の形態５では図６２のように第２塗布材料Ｂは、第１塗布材料Ａ１と他の第１塗布材料Ａ２との中央からやや右側にずれた位置に供給される。実施の形態５では実施の形態４とは第１塗布材料Ａ１と他の第１塗布材料Ａ２との中央の位置が異なるが、実施の形態５の塗布機構１０７は実施の形態４のものと同一であるためである。ただし第２塗布材料Ｂは第１塗布材料Ａの全体を覆うように広範囲に供給されるため、図６２のように中央の位置がずれても大きな問題は生じない。

　なお塗布装置１００において、塗布機構１０７における針塗布機構１０４－１と滴下機構１０５との間隔を、４Ｄ１＋Ｄ２／２から変更可能な間隔調整機構を有する場合には、図６２において第２塗布材料Ｂを第１塗布材料Ａ１と他の第１塗布材料Ａ２との中央に供給可能となる。具体的には、間隔調整機構は、電動であってもよく、手動であってもよい。手動の間隔調整機構としては、たとえばベース板材にねじで位置をずらしながら固定可能なスライド機構が用いられてもよい。あるいは手動の間隔調整機構としては、ストッパ付きの直動案内（転がり案内、滑り案内など）が用いられてもよい。また電動の間隔調整機構としては、たとえば直動案内、またはボールネジが組み込まれた小型電動ステージが用いられてもよい。

　上記塗布方法では、第１塗布機構（針塗布機構１０４－１）と他の第１塗布機構（針塗布機構１０４－２）との間隔は、プレート１１１の第１容器と、第１容器に隣り合う隣接容器との第１間隔Ｄ１の自然数ｎ倍（ｎ≧１）以上であり、第３間隔Ｄ３の想定し得る最大値と上記第１間隔Ｄ１の自然数ｎ倍との和以下の任意の値である。第３間隔Ｄ３の想定し得る最大値は、たとえば個々の容器１１２ＡのＸ方向寸法である。実施の形態５では容器１１２Ａ－１の隣接容器は容器１１２Ａ－２であり、Ｘ方向について隣り合う容器の双方に塗布材料が供給されるため、ｎ＝１である。このようにすれば、第３間隔Ｄ３を任意に決定すれば、それに応じてＸＹステージ１０１の移動量を任意に決めることで、任意の第３間隔Ｄ３を有する三次元細胞組織を作製できる。

　（実施の形態６）
　図６５は、実施の形態６における一の容器内に形成される塗布材料の態様を示す平面図である。図６５を参照して、ここでは容器１１２Ａ内に第１塗布材料として、第１塗布材料Ａ１、他の第１塗布材料Ａ２、およびさらに他の第１塗布材料Ａ３が塗布されている。これらの各第１塗布材料が第２塗布材料Ｂに覆われている。

　上記の実施の形態３～３においては、ＸＹステージ１０１が、図３３などに示されないＸ軸ステージ（Ｘ方向にＸＹステージ１０１を移動させる機構）によりＸ方向に移動することを想定して説明がなされている。しかし実際には、プレート１１１のＸ方向のみならずＹ方向にも複数の容器１１２Ａが並んでいる。このため実施の形態３～３に示すプレート１１１のＸ方向の動作に、Ｙ軸ステージによるＸＹステージ１０１のＹ方向の動作を組み合わせることがより好ましい。このようにすれば、図６５のように、１つの容器１１２Ａ内においてＸ方向のみならずＹ方向に並ぶように第１塗布材料が塗布された三次元細胞組織を形成できる。図６５において、第１塗布材料Ａ１、他の第１塗布材料Ａ２および第２塗布材料Ｂは、実施の形態４，３と同様にＸＹステージ１０１のＸ方向移動のみにより供給されている。このためこれらの各塗布材料の中心はＸ方向に沿って一直線上に並んでいる。これに対し、他の第１塗布材料Ａ３のみ他の各塗布材料よりもＹ方向の正の側に塗布されている。これは他の第１塗布材料Ａ３は、ＸＹステージ１０１を、第１塗布材料Ａ１などの供給時に対してＹ方向に移動させた際に供給されたためである。

　（実施の形態７）
　図６６は、実施の形態７の塗布方法に用いられる塗布装置の、塗布機構および設置されるプレートの一部の第１例を示す概略断面図である。図６６を参照して、実施の形態７の第１例における塗布装置１００の塗布機構１０７は、図３８に示す塗布装置１００の塗布機構１０７とすべて同様である。ただし図６６では、用いられるプレート１１１に形成された容器１１２Ａの間隔が異なっている。具体的には、液体材料が供給されるべき容器１１２Ａ－１と容器１１２Ａ－２とは隣り合っておらず、それらの間に容器１１２Ａ－１に隣接する、液体材料が供給されない容器が１つ配置される。隣接する容器同士の中心間のＸ方向に沿う第１間隔Ｄ１は、針塗布機構１０４と滴下機構１０５との（貫通孔２５の中心間の）間隔の１／２である。つまり図６６での容器の中心間距離は図３８よりも小さい。このため図３８と比較する観点から実際には、針塗布機構１０４と滴下機構１０５との間隔がＤ１であり、容器１１２Ａの中心間の間隔がＤ１／２である。しかしここでは説明の便宜上、前者を２Ｄ１、後者をＤ１と示す（後述の図６７，３６についても同様）。

　図６７は、実施の形態７の塗布方法に用いられる塗布装置の、塗布機構および設置されるプレートの一部の第２例を示す概略断面図である。図６７を参照して、実施の形態７の第２例における塗布装置１００の塗布機構１０７は、図５１に示す塗布装置１００の塗布機構１０７とすべて同様である。ただし図６７では、図６６と同様に、液体材料が供給されるべき容器１１２Ａ－１と容器１１２Ａ－２とは隣り合わず、両者間に液体材料が供給されない容器を１つ有する。つまり図６７での容器の中心間距離は図５１よりも小さい。このため容器１１２Ａの中心間距離をＤ１とすれば、針塗布機構１０４－１（の貫通孔２５の中心）と針塗布機構１０４－２（の貫通孔２５の中心）との間隔は、Ｄ１の２倍とＤ２との和、すなわち２Ｄ１＋Ｄ２に等しい。これにより図６７では、針塗布機構１０４－１（の貫通孔２５の中心）と滴下機構１０５（の貫通孔２５の中心）との間隔は、第１間隔Ｄ１の４倍と第２間隔Ｄ２の１／２倍との和、すなわち４Ｄ１＋Ｄ２／２に等しい。

　図６８は、実施の形態７の塗布方法に用いられる塗布装置の、塗布機構および設置されるプレートの一部の第３例を示す概略断面図である。図６８を参照して、実施の形態７の第３例における塗布装置１００の塗布機構１０７およびプレート１１１は、図５９に示すそれらと全く同一である。ただし図６８では、図６６と同様に、液体材料が供給されるべき容器１１２Ａ－１と容器１１２Ａ－２とは隣り合わず、両者間に液体材料が供給されない容器を１つ有する。つまり図６８での容器の中心間距離は図５９よりも小さい。また図６８では、図５９（実施の形態５）と同様に、各容器１１２Ａ内に塗布される第１塗布材料Ａ１と他の第１塗布材料Ａ２との間隔Ｄ３が、塗布機構１０７における各機構間の距離とは無関係に任意に定められたものである。

　（作用効果）
　本実施の形態の第１例（図６６）の塗布方法では、第２塗布材料Ｂは第１塗布材料Ａを覆うように供給される。第１塗布機構（針塗布機構１０４）と第２塗布機構（滴下機構１０５－１）との間隔（それぞれの貫通孔２５の中心の間隔：第１間隔Ｄ１）は、プレート１１１の第１容器（たとえば容器１１２Ａ－１）と、第１容器１１２Ａ－１と隣り合う隣接容器との（Ｘ方向の中心間の）第１間隔Ｄ１の自然数ｎ倍（ｎ≧１）に等しい。実施の形態７の第１例では容器１１２Ａ－１の隣接容器は容器１１２Ａ－２ではなく、Ｘ方向に並ぶ容器１１２Ａは１つずつ間欠的に塗布材料が供給されるため、ｎ＝２である。したがって、たとえば容器１１２Ａの２つずつ間欠的に塗布材料が供給される場合には、ｎ＝３であり、以下（ｋ－１）個ずつ間欠的に供給される場合、ｎ＝ｋである。このような特徴を有するため、上記のように、針塗布機構１０４で容器１１２Ａ－１に第１塗布材料Ａ１を供給後、ＸＹステージ１０１を第１間隔Ｄ１のたとえば２倍だけ移動させることで、容器１１２Ａ－２と容器１１２Ａ－１とへの同時供給工程が可能となる。

　本実施の形態の第２例（図６７）の塗布方法では、第１塗布機構（針塗布機構１０４－１）と他の第１塗布機構（針塗布機構１０４－２）との間隔は、プレート１１１の第１容器と、第１容器に隣り合う隣接容器との第１間隔Ｄ１の自然数ｎ倍（ｎ≧１）と、第１容器内に供給される第１塗布材料と他の第１塗布材料との第２間隔Ｄ２との和に等しい。実施の形態７の第２例では容器１１２Ａ－１の隣接容器は容器１１２Ａ－２ではなく、Ｘ方向に並ぶ容器１１２Ａは１つずつ間欠的に塗布材料が供給されるため、ｎ＝２である。上記第１例と同様に、（ｋ－１）個ずつ間欠的に塗布材料が供給される場合、ｎ＝ｋである。このような特徴を有するため、上記のように、同時供給前移動工程と、同時供給工程とを繰り返すことが可能となる。

　本実施の形態の第３例（図６８）の塗布方法では、第１塗布機構（針塗布機構１０４－１）と他の第１塗布機構（針塗布機構１０４－２）との間隔は、プレート１１１の第１容器と、第１容器に隣り合う隣接容器との第１間隔Ｄ１の自然数ｎ倍（ｎ≧１）以上であり、第３間隔Ｄ３の想定し得る最大値と上記第１間隔Ｄ１の自然数ｎ倍との和以下の任意の値である。図６６、図６７と同様に図６８ではｎ＝２であるが、（ｋ－１）個ずつ間欠的に塗布材料が供給される場合、ｎ＝ｋである。第３間隔Ｄ３の想定し得る最大値は、たとえば個々の容器１１２ＡのＸ方向寸法である。このようにすれば、第３間隔Ｄ３を任意に決定すれば、それに応じてＸＹステージ１０１の移動量を任意に決めることで、任意の第３間隔Ｄ３を有する三次元細胞組織を作製できる。

　プレート１１１には、９６個の容器１１２Ａが形成されたもの（９６ウェル：８×１２ウェル）の他に、容器１１２Ａが６個（６ウェル：２×３ウェル）、１２個（１２ウェル：３×４ウェル）、２４個（２４ウェル：４×６ウェル）、４８個（４８ウェル：６×８ウェル）、３８４個（３８４ウェル：１６×２４ウェル）、１５３６個（１５３６ウェル：３２×４８ウェル）形成されたものがある。それぞれの一般的な隣接する容器１１２Ａ間の第１間隔Ｄ１は、６ウェルで３９ｍｍ、１２ウェルで２６ｍｍ、２４ウェルで１８ｍｍ、４８ウェルで１３ｍｍ、９６ウェルで９ｍｍ、３８４ウェルで４．５ｍｍ、１５３６ウェルで２．２５ｍｍである。このように、プレート１１１のウェル数が増えるほどその間隔Ｄ１が小さくなる。このため間隔Ｄ１が小さくなれば、非常にスペースが狭いためにそのスペース内に針塗布機構１０４および滴下機構１０５を設置できない場合がある。この場合、本実施の形態のように、ウェル間の間隔Ｄ１の自然数倍を新たなスペースとすることが好ましい。このようにすれば、その新たなスペース内に針塗布機構１０４および滴下機構１０５を設置できる。

　特に本実施の形態では、容器１１２ＡのＸ方向の幅が他の実施の形態に比べて狭い。このため、図６７の様に１つの容器内にて間隔Ｄ２を有するように２つの塗布材料を塗布することができない場合がある。このような場合、図６８のように、Ｄ２より小さい間隔Ｄ３となるように塗布する方法が有用である。

　（各実施の形態に対するその他の変形例）
　上記の各実施の形態３～７においては、以下のような変形例が適用されてもよい。

　１）本実施の形態３～７では、第１塗布材料Ａ（Ａ１，Ａ２）の塗布には塗布針２４が用いられ、第２塗布材料Ｂの滴下には滴下機構１０５（エアー式またはシリンダ式のディスペンサ）が用いられる。しかし逆に、第１塗布材料Ａ（Ａ１，Ａ２）が滴下機構により、第２塗布材料Ｂが塗布針２４により供給されてもよい。あるいは第１塗布材料Ａおよび第２塗布材料Ｂの少なくともいずれかが、インクジェット装置またはマイクロポンプにより供給されてもよい。インクジェット装置は微細な滴下が可能であり、高速性に優れる。一方、マイクロポンプは装置が安価で、大量の滴下に優れる。一方で塗布針２４を用いた塗布は、インクジェット装置を用いた場合に懸念されるノズル詰まりを排除でき、広範な種類の液体材料に適用可能である。さらに塗布針２４によれば微細な塗布が可能である。またディスペンサはインクジェット装置よりも広範な種類の液体材料に適用可能であり、比較的量の多い滴下に適する。以上のように各種の液体材料供給装置の特徴を生かして、適宜使い分けたり組み合わせたりされることが好ましい。そのようにすれば、品質の良い細胞組織が効率的に生産される。

　２）本実施の形態３～７では、塗布針２４（２４Ａ－１，２４Ａ－２）で塗布材料を供給する場合、塗布針２４の先端部と、容器１１２Ａ内の平坦な培養面（各容器１１２Ａの底面）とのＺ方向の距離を一定に保つ必要がある。当該距離が、供給された塗布材料の液量および直径に影響するためである。このため、塗布工程の前に、プレート１１１の多数の容器１１２Ａのうち少なくとも一部の容器１１２Ａの培養面と、初期状態での塗布針２４の先端部とのＺ方向の距離を測定して塗布装置１００に記憶させることが好ましい。その上で、当該測定がなされた容器１１２Ａ内に塗布する際には、Ｚ軸ステージを調整して、培養面と塗布針２４先端との距離を一定に保つことが好ましい。なお上記の培養面と塗布針２４の先端部とのＺ方向の距離の測定は、レーザまたは赤外線によりなされてもよいし、実体顕微鏡または位相差顕微鏡によりなされてもよい。レーザまたは赤外線を出力する装置、実体顕微鏡、位相差顕微鏡などが塗布装置１００内に組み込まれてもよい。

　３）本実施の形態３～７では、各塗布材料には細胞を含む細胞組織が用いられる。しかしこれに限らず、たとえば一般的な生体材料または化学材料が各塗布材料に用いられてもよい。

　４）本実施の形態３～７では、第１塗布材料Ａ１に含まれる細胞の種類として、ｉＰＳ細胞由来の心筋細胞と、ヒト心臓繊維芽細胞とが３：１の個数比で混合されたものが用いられる。しかし他の細胞が用いられてもよい。他の細胞についても、塗布装置１００を用いて、個々の容器１１２Ａの平坦な培養面上の複数箇所に塗布される。これにより、全体の細胞数を低減しつつ、独立して存在し、大きさのばらつきの少ない細胞組織が、簡単な工程で作製される（図４５（Ｃ）参照）。

　５）第１塗布材料Ａ（第１塗布材料Ａ１，Ａ２。以下同じ）に含まれるゲル化開始剤と、第２塗布材料Ｂに含まれるゲル化剤との組合せは、上述したトロンビンおよびフィブリノーゲンの他に、塩化カルシウムおよびアルギン酸ナトリウム、塩化カルシウムおよびカラギーナン、アルコール類およびタマリンドシードガムなどが用いられてもよい。なお上記と逆に、本実施の形態では、第１塗布材料Ａにゲル化剤が含まれ、第２塗布材料Ｂにゲル化開始剤が含まれてもよい。

　６）本実施の形態３～７では、第１塗布材料Ａ１（または第１塗布材料Ａ２。以下同じ）として培養すべき細胞とゲル化開始剤とを含み、第２塗布材料Ｂとしてゲル化剤を含む例を示している。しかし代替例として、第１塗布材料Ａ１に細胞とゲル化剤とを含み、第２塗布材料Ｂとしてゲル化開始剤を含んでもよい。代替例のようにすれば、短時間で細胞を包埋した固体のゲルが形成される。このため形状安定性が高く、より目的の形状（特に目的の平面形状）に近い形状の細胞組織を作製できる。

　７）また、第１塗布材料Ａ１としていわゆる２液混合式のゲル化剤が用いられてもよい。なお２液混合式のゲル化剤とは、たとえばゲル化剤であるフィブリノーゲンにゲル化開始剤であるトロンビンを混合したうえでゲル化される液剤を意味する。しかし第１塗布材料Ａ１には、２液混合式の代わりに、温度依存方式または光硬化方式などが用いられてもよい。温度依存方式のゲル化剤には、コラーゲン、ゼラチン、ジェランガム、アガロース、キトサンなどがある。また光硬化方式のゲル化剤には、光架橋ゼラチンなどがある。塗布材料に用いられるゲル化剤の種類は、細胞および塗布材料の特性に応じて適切に選択される。特に温度依存方式または光硬化方式のゲル化剤を用いる場合には、第２塗布材料Ｂが使用されなくてもよい。あるいは第２塗布材料Ｂとして、メチルセルロース、ヒアルロン酸ナトリウム、アルギン酸ナトリウムなどの増粘多糖類に代表される生体適合性を示す材料が用いられてもよい。これにより塗布後の保形性が確保される。

　以上に述べた各実施の形態（各実施例）に記載した特徴を、技術的に矛盾のない範囲で適宜組み合わせるように適用してもよい。

　今回開示された実施の形態はすべての点で例示であって制限的なものではないと考えられるべきである。本発明の範囲は上記した説明ではなくて請求の範囲によって示され、請求の範囲と均等の意味および範囲内でのすべての変更が含まれることが意図される。

　以下、本開示の諸態様を付記としてまとめて記載する。
　（付記１）
塗布対象物内に第１塗布液をＮ個（Ｎ≧１の自然数）供給し、細胞を配置する工程と、前記Ｎ個の第１塗布液のうち少なくとも１個を覆うように、前記塗布対象物内に第２塗布液をＭ個（Ｍ≧１の自然数）供給する工程とを備え、前記第２塗布液を供給する工程においては、前記Ｎ個の第１塗布液のそれぞれの中心から外縁までの寸法の最大値である第１寸法をｒ_１ｎ（１≦ｎ≦Ｎの自然数）、前記Ｍ個の第２塗布液のそれぞれの中心から外縁までの寸法の最大値である第２寸法をｒ_２ｍ（１≦ｍ≦Ｍの自然数）とし、Ｎ個の中から選択された任意の前記第１寸法がｒ_１ｎの前記第１塗布液の中心と、Ｍ個の中から選択された任意の前記第２寸法がｒ_２ｍの前記第２塗布液の中心との距離をＤ_ｎ，ｍとすれば、任意の前記第１塗布液と任意の前記第２塗布液との間で
（数１）Ｄ_ｎ，ｍ＜ｒ_２ｍ－ｒ_１ｎ・・・（１）
および
（数２）Ｄ_ｎ，ｍ＞ｒ_２ｍ＋ｒ_１ｎ・・・（２）
のいずれかが成立するように供給される、細胞組織の製造方法。

　（付記２）
前記Ｎ個の第１塗布液のうち前記第２塗布液と重なる１個以上の前記第１塗布液の第１図心を中心とし前記１個以上の第１塗布液を全て覆い前記１個以上の前記第１塗布液のいずれかと内接するよう求められた第１仮想曲線の最大寸法である第１仮想寸法ｒ_１ｖ以上の基準寸法よりも、前記第２寸法ｒ_２ｍの方が大きく、前記第１図心は、前記第２塗布液と重なる１個以上の前記第１塗布液のそれぞれの中心位置から求められる、付記１に記載の細胞組織の製造方法。

　（付記３）
前記Ｍ個の第２塗布液の第２図心を中心とし、前記Ｍ個の第２塗布液を全て覆い前記Ｍ個の第２塗布液のいずれかと内接するよう求められた第２仮想曲線の最大寸法である第２仮想寸法ｒ_２ｖ以上の基準寸法よりも、前記塗布対象物の第３寸法ｒ_３の方が大きく、前記第２図心は、前記Ｍ個の前記第２塗布液のそれぞれの中心位置から求められる、付記１または２に記載の細胞組織の製造方法。

　（付記４）
前記塗布対象物内に供給される前記Ｎ個の第１塗布液のうち少なくとも１個に含まれる前記細胞は第１細胞であり、前記少なくとも１個とは異なる他の少なくとも１個の前記第１塗布液に含まれる前記細胞は第２細胞である、付記１～３のいずれか１項に記載の細胞組織の製造方法。

　（付記５）
前記塗布対象物内に供給される前記Ｎ個の第１塗布液のうち少なくとも１個に前記細胞が含まれ、前記少なくとも１個とは異なる他の少なくとも１個の前記第１塗布液には前記細胞を含まずサイトカイン、薬剤、ＥＣＭおよび添加因子からなる群から選択される少なくともいずれかが含まれる、付記１～４のいずれか１項に記載の細胞組織の製造方法。

　（付記６）
前記第１塗布液にサイトカイン、ＥＣＭおよび添加因子からなる群から選択される少なくともいずれかが含まれる、付記１～５のいずれか１項に記載の細胞組織の製造方法。

　（付記７）
前記第１塗布液を供給する工程以降にゲル化剤を用いて、前記塗布対象物内に供給された前記細胞から細胞組織が形成される、付記１～６のいずれか１項に記載の細胞組織の製造方法。

　（付記８）
前記第１塗布液は前記細胞とゲル化剤とを含み、前記第２塗布液は前記ゲル化剤よりも粘度の高い溶液である、付記７に記載の細胞組織の製造方法。

　（付記９）
前記第１塗布液は前記細胞を含み、前記第２塗布液はゲル化剤を含む、付記７に記載の細胞組織の製造方法。

　（付記１０）
２液混合方式により前記塗布対象物内に前記第１塗布液および前記第２塗布液が供給される、付記１～９のいずれか１項に記載の細胞組織の製造方法。

　（付記１１）
前記第１塗布液は前記細胞とゲル化開始剤とを含み、前記第２塗布液はゲル化剤を含む、付記１０に記載の細胞組織の製造方法。

　（付記１２）
前記第１塗布液は前記細胞とゲル化剤とを含み、前記第２塗布液はゲル化開始剤を含む、付記１０に記載の細胞組織の製造方法。

　（付記１３）
前記第１塗布液および前記第２塗布液の少なくともいずれかに、ゲル化剤としてのコラーゲンとフィブリノゲンとの少なくともいずれかが含まれる、付記１～１２のいずれか１項に記載の細胞組織の製造方法。

　（付記１４）
前記第１塗布液および前記第２塗布液の少なくともいずれかに増粘多糖類が混合された、付記１～１３のいずれか１項に記載の細胞組織の製造方法。

　（付記１５）
前記細胞は心筋細胞、神経細胞、肝細胞、癌細胞、血管内皮細胞および線維芽細胞からなる群から選択されるいずれかである、付記１～１４のいずれか１項に記載の細胞組織の製造方法。

　（付記１６）
前記第１塗布液の細胞体積濃度が１ｖｏｌ％以上３０ｖｏｌ％以下である、付記１～１５のいずれか１項に記載の細胞組織の製造方法。

　（付記１７）
前記Ｎ個の第１塗布液のうち１個の前記第１塗布液中に、前記細胞として、第３細胞と、前記第３細胞とは異なる第４細胞とが含まれるように共培養される、付記１～１６のいずれか１項に記載の細胞組織の製造方法。

　（付記１８）
前記第１塗布液を供給する工程において塗布針方式が用いられる、付記１～１７のいずれか１項に記載の細胞組織の製造方法。

　（付記１９）
前記第２塗布液を供給する工程において、塗布針方式、インクジェット方式、ディスペンサ方式、レーザープリント方式、ピペット方式からなる群から選択されるいずれかが用いられる、付記１～１８のいずれか１項に記載の細胞組織の製造方法。

　（付記２０）
前記第２塗布液をＭ個供給する工程において、前記Ｍ個のうち少なくとも１個の前記第２塗布液は塗布針方式、インクジェット方式、ディスペンサ方式、レーザープリント方式、ピペット方式からなる群から選択される第１方式により供給され、前記Ｍ個のうち少なくとも１個とは異なる他の前記第２塗布液は前記第１方式とは異なる第２方式により供給される、付記１～１９のいずれか１項に記載の細胞組織の製造方法。

　（付記２１）
塗布装置に含まれる塗布針の先端を第１塗布液に浸漬させることにより、前記第１塗布液を前記塗布針の先端に付着させる工程と、
前記塗布針の先端に付着された前記第１塗布液を塗布対象物内に塗布する工程とを備え、
前記第１塗布液は、培養すべき細胞と、ゲル化剤としてのコラーゲンと、第１溶媒との混合溶液である、心筋組織の製造方法。

　（付記２２）
前記第１塗布液を覆うように、前記塗布対象物内に第２塗布液を供給する工程をさらに備え、
前記第２塗布液は、増粘剤と第２溶媒との混合溶液である、付記２１に記載の心筋組織の製造方法。

　（付記２３）
前記増粘剤は、セルロース、セルロースナノファイバー、キチン、キトサン、キチンナノファイバー、メチルセルロース、ヒドロキシブチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ヒアルロン酸ナトリウム、ポリエチレングリコール、ジェランガム、カラギーナン、ペクチン、キサンタンガム、ゼラチン、アガロース、ポリビニルアルコールからなる群から選択される１つ以上の物質を含む、付記２２に記載の心筋組織の製造方法。

　（付記２４）
前記第２塗布液を供給する工程の後に、前記細胞を培養させるための培地を前記塗布対象物内に供給する工程をさらに備え、
前記培地はＲＰＭＩ１６４０であり、
前記培地への添加因子は、Ｂ２７（登録商標）サプリメント、トリヨードチロニン、デキサメタゾン、インシュリン様成長因子からなる群から選択される１つ以上である、付記２２または２３に記載の心筋組織の製造方法。

　（付記２５）
前記コラーゲンはコラーゲンｔｙｐｅＩ－Ａである、付記２１～２４のいずれか１項に記載の心筋組織の製造方法。

　（付記２６）
前記第１塗布液の細胞体積濃度が１ｖｏｌ％以上３０ｖｏｌ％以下である、付記２１～２５のいずれか１項に記載の細胞組織の製造方法。

　（付記２７）
前記細胞は少なくとも心筋細胞を含み、
前記細胞を構成する前記心筋細胞の個数の比率は８０％以上であり、
前記細胞を構成する心臓線維芽細胞の個数の比率は２０％以下である、付記２１～２６のいずれか１項に記載の心筋組織の製造方法。

　（付記２８）
前記心筋細胞は、正常ヒトｉＰＳ細胞由来心筋細胞および疾患由来ヒトｉＰＳ細胞由来心筋細胞の少なくともいずれかを有する、付記２７に記載の心筋組織の製造方法。

　（付記１０１）
塗布材料を受け入れ可能な複数の容器を有するプレートに含まれる第１容器に、第１塗布機構を用いて前記塗布材料としての第１塗布材料を供給する工程と、
前記プレートを載置するステージが移動する同時供給前移動工程と、
前記プレートの前記第１容器と間隔をあけて配置される第２容器に前記第１塗布機構を用いて前記第１塗布材料を供給すると同時に、前記第１容器に、前記第１塗布機構と間隔をあけて配置される第２塗布機構を用いて前記塗布材料としての第２塗布材料を供給する同時供給工程とを備え、
前記同時供給前移動工程および前記同時供給工程がなされる毎に、前記第１容器および前記第２容器に相当する前記容器が前記ステージの移動方向に沿って変更される、塗布方法。

　（付記１０２）
前記第２塗布材料は前記第１塗布材料を覆うように供給され、
前記第１塗布機構と前記第２塗布機構との間隔は、前記プレートの前記第１容器と、前記第１容器と隣り合う隣接容器との第１間隔の自然数ｎ倍（ｎ≧１）に等しい、付記１０１に記載の塗布方法。

　（付記１０３）
前記同時供給工程においては、前記第１塗布材料および前記第２塗布材料と同時に、前記塗布材料としての他の第１塗布材料を供給する工程がなされ、
前記他の第１塗布材料を供給する工程は、前記第１容器と前記第２容器との間に配置される第３容器に、前記第１塗布機構および前記第２塗布機構の間に配置される他の第１塗布機構を用いてなされ、
前記他の第１塗布材料は、前記第３容器に前記第１塗布材料と隣接するように供給され、
前記第２塗布材料は前記第１塗布材料および前記他の第１塗布材料を覆うように供給される、付記１０１に記載の塗布方法。

　（付記１０４）
前記第１塗布機構と前記他の第１塗布機構との間隔は、前記プレートの前記第１容器と、前記第１容器に隣り合う隣接容器との第１間隔の自然数ｎ倍（ｎ≧１）と、前記第１容器内に供給される前記第１塗布材料と前記他の第１塗布材料との第２間隔との和に等しい、付記１０３に記載の塗布方法。

　（付記１０５）
前記第２塗布材料は前記第１塗布材料を覆うように供給され、
前記同時供給前移動工程においては、前記第１容器内に供給されるべき前記第１塗布材料と、他の第１塗布機構から供給される前記塗布材料としての他の第１塗布材料との第３間隔を考慮して、任意の前記ステージの移動量を選択可能である、付記１０１に記載の塗布方法。

　（付記１０６）
前記第１塗布機構と前記他の第１塗布機構との間隔は、前記プレートの前記第１容器と、前記第１容器に隣り合う隣接容器との第１間隔の自然数ｎ倍（ｎ≧１）以上であり、前記第３間隔の想定し得る最大値と前記第１間隔の自然数ｎ倍との和以下の任意の値である、付記１０５に記載の塗布方法。

　（付記１０７）
前記同時供給前移動工程は、前記ステージを動作させることによりなされる、付記１０１～１０６のいずれか１項に記載の塗布方法。

　（付記１０８）
前記供給する工程および前記同時供給工程は、Ｚ軸ステージを動作させることによりなされる、付記１０１～１０７のいずれか１項に記載の塗布方法。

　（付記１０９）
前記塗布材料は培養すべき細胞を含む、付記１０１～１０８のいずれか１項に記載の塗布方法。

　（付記１１０）
塗布されるべき塗布材料を供給可能な塗布機構と、
前記塗布材料が供給されるべきプレートを載置可能なステージとを備える塗布装置であって、
前記塗布機構は、第１塗布機構と、前記第１塗布機構に隣接する第２塗布機構とを含み、
前記第１塗布機構と前記第２塗布機構との間隔は、前記塗布機構による１回目の塗布時と２回目の塗布時との間での前記ステージの移動量に等しい、塗布装置。

　１　Ｘ軸テーブル、２　Ｙ軸テーブル、３　Ｚ軸テーブル、４，１０７　塗布機構、６，１０６　観察光学系、７　ＣＣＤカメラ、８　操作パネル、９　モニタ、１０　制御用コンピュータ、１１　試料塗布セット、１２　ウェル、１２ａ　ウェル底部、１８　マイクロピペット、２０　塗布針ホルダ、２１　塗布材料容器、２１Ａ－１　第１塗布材料容器、２１Ａ－２　他の第１塗布材料容器、２１Ｂ　第２塗布材料容器、２４　塗布針、２４Ａ－１　第１塗布針、２４Ａ－２　第２塗布針、３５　可動ベース、４１　サーボモータ、４３　カム、４４　軸受、４５　カム連結板、４６　可動部、１００　塗布装置、１０１　Ｘ軸ステージ、１０２　Ｙ軸ステージ、１０３　Ｚ軸ステージ、１０４，１０４－１，１０４－２，１０４－３　針塗布機構、１０５，１０５－１，１０５－２　滴下機構、１０６　観察光学系、１０７　塗布機構、１１１　プレート、１１２Ａ，１１２Ａ－１，１１２Ａ－２，１１２Ａ－３　容器、１１２Ｂ　基板、ＡＡ，Ａ１ｏ，Ａ２ｏ　第１塗布液、Ａ，Ａ１　第１塗布材料、Ａ２，Ａ３　他の第１塗布材料、ＢＢ，Ｂ１ｏ，Ｂ２ｏ　第２塗布液、Ｂ　第２塗布材料、Ｃ　細胞、Ｃ１　心筋細胞、Ｃ２　心臓線維芽細胞、Ｇ１　第１図心、Ｇ２　第２図心、ｍ　第１溶媒、Ｍ　培地。

Claims

　塗布対象物内に第１塗布液をＮ個（Ｎ≧１の自然数）供給し、細胞を配置する工程と、
　前記Ｎ個の第１塗布液のうち少なくとも１個を覆うように、前記塗布対象物内に第２塗布液をＭ個（Ｍ≧１の自然数）供給する工程とを備え、
　前記第２塗布液を供給する工程においては、前記Ｎ個の第１塗布液のそれぞれの中心から外縁までの寸法の最大値である第１寸法をｒ_１ｎ（１≦ｎ≦Ｎの自然数）、前記Ｍ個の第２塗布液のそれぞれの中心から外縁までの寸法の最大値である第２寸法をｒ_２ｍ（１≦ｍ≦Ｍの自然数）とし、Ｎ個の中から選択された任意の前記第１寸法がｒ_１ｎの前記第１塗布液の中心と、Ｍ個の中から選択された任意の前記第２寸法がｒ_２ｍの前記第２塗布液の中心との距離をＤ_ｎ，ｍとすれば、任意の前記第１塗布液と任意の前記第２塗布液との間で
　　（数１）Ｄ_ｎ，ｍ＜ｒ_２ｍ－ｒ_１ｎ・・・（１）
および
　　（数２）Ｄ_ｎ，ｍ＞ｒ_２ｍ＋ｒ_１ｎ・・・（２）
のいずれかが成立するように供給される、細胞組織の製造方法。
　前記Ｎ個の第１塗布液のうち前記第２塗布液と重なる１個以上の前記第１塗布液の第１図心を中心とし前記１個以上の第１塗布液を全て覆い前記１個以上の前記第１塗布液のいずれかと内接するよう求められた第１仮想曲線の最大寸法である第１仮想寸法ｒ_１ｖ以上の基準寸法よりも、前記第２寸法ｒ_２ｍの方が大きく、
　前記第１図心は、前記第２塗布液と重なる１個以上の前記第１塗布液のそれぞれの中心位置から求められる、請求項１に記載の細胞組織の製造方法。
　前記Ｍ個の第２塗布液の第２図心を中心とし、前記Ｍ個の第２塗布液を全て覆い前記Ｍ個の第２塗布液のいずれかと内接するよう求められた第２仮想曲線の最大寸法である第２仮想寸法ｒ_２ｖ以上の基準寸法よりも、前記塗布対象物の第３寸法ｒ_３の方が大きく、
　前記第２図心は、前記Ｍ個の前記第２塗布液のそれぞれの中心位置から求められる、請求項１に記載の細胞組織の製造方法。
　前記塗布対象物内に供給される前記Ｎ個の第１塗布液のうち少なくとも１個に含まれる前記細胞は第１細胞であり、前記少なくとも１個とは異なる他の少なくとも１個の前記第１塗布液に含まれる前記細胞は第２細胞である、請求項１または２に記載の細胞組織の製造方法。
　前記塗布対象物内に供給される前記Ｎ個の第１塗布液のうち少なくとも１個に前記細胞が含まれ、前記少なくとも１個とは異なる他の少なくとも１個の前記第１塗布液には前記細胞を含まずサイトカイン、薬剤、ＥＣＭおよび添加因子からなる群から選択される少なくともいずれかが含まれる、請求項１または２に記載の細胞組織の製造方法。
　前記第１塗布液にサイトカイン、ＥＣＭおよび添加因子からなる群から選択される少なくともいずれかが含まれる、請求項１または２に記載の細胞組織の製造方法。
　前記第１塗布液を供給する工程以降にゲル化剤を用いて、前記塗布対象物内に供給された前記細胞から細胞組織が形成される、請求項１または２に記載の細胞組織の製造方法。
　前記第１塗布液は前記細胞とゲル化剤とを含み、前記第２塗布液は前記ゲル化剤よりも粘度の高い溶液である、請求項７に記載の細胞組織の製造方法。
　前記第１塗布液は前記細胞を含み、前記第２塗布液はゲル化剤を含む、請求項７に記載
の細胞組織の製造方法。
　２液混合方式により前記塗布対象物内に前記第１塗布液および前記第２塗布液が供給される、請求項１または２に記載の細胞組織の製造方法。
　前記第１塗布液は前記細胞とゲル化開始剤とを含み、前記第２塗布液はゲル化剤を含む、請求項１０に記載の細胞組織の製造方法。
　前記第１塗布液は前記細胞とゲル化剤とを含み、前記第２塗布液はゲル化開始剤を含む、請求項１０に記載の細胞組織の製造方法。
　前記第１塗布液および前記第２塗布液の少なくともいずれかに、ゲル化剤としてのコラーゲンとフィブリノゲンとの少なくともいずれかが含まれる、請求項１または２に記載の細胞組織の製造方法。
　前記第１塗布液および前記第２塗布液の少なくともいずれかに増粘多糖類が混合された、請求項１または２に記載の細胞組織の製造方法。
　前記細胞は心筋細胞、神経細胞、肝細胞、癌細胞、血管内皮細胞および線維芽細胞からなる群から選択されるいずれかである、請求項１または２に記載の細胞組織の製造方法。
　前記第１塗布液の細胞体積濃度が１ｖｏｌ％以上３０ｖｏｌ％以下である、請求項１または２に記載の細胞組織の製造方法。
　前記Ｎ個の第１塗布液のうち１個の前記第１塗布液中に、前記細胞として、第３細胞と、前記第３細胞とは異なる第４細胞とが含まれるように共培養される、請求項１または２に記載の細胞組織の製造方法。
　前記第１塗布液を供給する工程において塗布針方式が用いられる、請求項１または２に記載の細胞組織の製造方法。
　前記第２塗布液を供給する工程において、塗布針方式、インクジェット方式、ディスペンサ方式、レーザープリント方式、ピペット方式からなる群から選択されるいずれかが用いられる、請求項１または２に記載の細胞組織の製造方法。
　前記第２塗布液をＭ個供給する工程において、前記Ｍ個のうち少なくとも１個の前記第２塗布液は塗布針方式、インクジェット方式、ディスペンサ方式、レーザープリント方式、ピペット方式からなる群から選択される第１方式により供給され、前記Ｍ個のうち少なくとも１個とは異なる他の前記第２塗布液は前記第１方式とは異なる第２方式により供給される、請求項１９に記載の細胞組織の製造方法。
　塗布材料を受け入れ可能な複数の容器を有するプレートに含まれる第１容器に、第１塗布機構を用いて前記塗布材料としての第１塗布材料を供給する工程と、
　前記プレートを載置するステージが移動する同時供給前移動工程と、
　前記プレートの前記第１容器と間隔をあけて配置される第２容器に前記第１塗布機構を用いて前記第１塗布材料を供給すると同時に、前記第１容器に、前記第１塗布機構と間隔をあけて配置される第２塗布機構を用いて前記塗布材料としての第２塗布材料を供給する同時供給工程とを備え、
　前記同時供給前移動工程および前記同時供給工程がなされる毎に、前記第１容器および前記第２容器に相当する前記容器が前記ステージの移動方向に沿って変更される、塗布方法。
　前記第２塗布材料は前記第１塗布材料を覆うように供給され、
　前記第１塗布機構と前記第２塗布機構との間隔は、前記プレートの前記第１容器と、前記第１容器と隣り合う隣接容器との第１間隔の自然数ｎ倍（ｎ≧１）に等しい、請求項２１に記載の塗布方法。
　前記同時供給工程においては、前記第１塗布材料および前記第２塗布材料と同時に、前記塗布材料としての他の第１塗布材料を供給する工程がなされ、
　前記他の第１塗布材料を供給する工程は、前記第１容器と前記第２容器との間に配置される第３容器に、前記第１塗布機構および前記第２塗布機構の間に配置される他の第１塗布機構を用いてなされ、
　前記他の第１塗布材料は、前記第３容器に前記第１塗布材料と隣接するように供給され、
　前記第２塗布材料は前記第１塗布材料および前記他の第１塗布材料を覆うように供給される、請求項２１に記載の塗布方法。
　前記第１塗布機構と前記他の第１塗布機構との間隔は、前記プレートの前記第１容器と、前記第１容器に隣り合う隣接容器との第１間隔の自然数ｎ倍（ｎ≧１）と、前記第１容器内に供給される前記第１塗布材料と前記他の第１塗布材料との第２間隔との和に等しい、請求項２３に記載の塗布方法。
　前記第２塗布材料は前記第１塗布材料を覆うように供給され、
　前記同時供給前移動工程においては、前記第１容器内に供給されるべき前記第１塗布材料と、他の第１塗布機構から供給される前記塗布材料としての他の第１塗布材料との第３間隔を考慮して、任意の前記ステージの移動量を選択可能である、請求項２１に記載の塗布方法。
　前記第１塗布機構と前記他の第１塗布機構との間隔は、前記プレートの前記第１容器と、前記第１容器に隣り合う隣接容器との第１間隔の自然数ｎ倍（ｎ≧１）以上であり、前記第３間隔の想定し得る最大値と前記第１間隔の自然数ｎ倍との和以下の任意の値である、請求項２５に記載の塗布方法。
　前記同時供給前移動工程は、前記ステージを動作させることによりなされる、請求項２１～２６のいずれか１項に記載の塗布方法。
　前記供給する工程および前記同時供給工程は、Ｚ軸ステージを動作させることによりなされる、請求項２１または２２に記載の塗布方法。
　前記塗布材料は培養すべき細胞を含む、請求項２１または２２に記載の塗布方法。
　塗布されるべき塗布材料を供給可能な塗布機構と、
　前記塗布材料が供給されるべきプレートを載置可能なステージとを備える塗布装置であって、
　前記塗布機構は、第１塗布機構と、前記第１塗布機構に隣接する第２塗布機構とを含み、
　前記第１塗布機構と前記第２塗布機構との間隔は、前記塗布機構による１回目の塗布時と２回目の塗布時との間での前記ステージの移動量に等しい、塗布装置。