WO2024035028A1 - 풀빅산 및 미녹시딜 함유 고분자 하이드로겔 및 이를 유효성분으로 포함하는 발모 촉진용 조성물 - Google Patents

풀빅산 및 미녹시딜 함유 고분자 하이드로겔 및 이를 유효성분으로 포함하는 발모 촉진용 조성물 Download PDF

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WO2024035028A1
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fulvic acid
polymer
solution
hydrogel
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전종록
윤호영
백지민
이예솔
박정은
권수민
응우옌탄퐁
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Definitions

  • the present invention relates to a composition for promoting hair growth, and more specifically, to a polymer hydrogel containing fulvic acid and minoxidil, a composition for promoting hair growth containing the same as an active ingredient, and a method for producing the same.
  • the cause of hair loss has not yet been clearly identified, but it is known to be caused by poor blood circulation in the scalp, excessive action of male hormones, excessive sebum secretion, heredity, aging, and stress. As of 2020, the number of hair loss patients in Korea is estimated to be approximately 233,000, and various research and efforts are continuing to treat and prevent hair loss.
  • Minoxidil is a representative topical drug approved by the U.S. Food and Drug Administration (FDA) to date. Minoxidil was developed and began to be used as a hair growth agent in 1979 when hirsutism was accidentally observed as a side effect during clinical trials as a treatment for high blood pressure.
  • FDA U.S. Food and Drug Administration
  • minoxidil must be continuously applied to the scalp twice a day for more than 6 to 8 months to confirm its effectiveness. Otherwise, there is a problem that it is difficult to expect a sufficient hair growth effect. Accordingly, research to improve the ease of use of minoxidil has recently been called for.
  • the technical problem to be solved by the present invention is to improve the convenience of use by dramatically reducing the number of applications by showing a hair growth effect greater than that of daily application for 3 days with just one application, and to use fulvic acid and minoxidil, which can further promote hair growth.
  • the present invention provides a polymer hydrogel, a composition for promoting hair growth containing the same as an active ingredient, and a method for producing the same.
  • the polymer hydrogel according to an embodiment of the present invention for achieving the above technical problem includes minoxidil and a fulvic acid-containing polymer containing minoxidil, and is characterized by slow release of minoxidil and fulvic acid at the same time.
  • the fulvic acid-containing polymer is characterized in that it contains minoxidil by being in the form of a hydrogel.
  • the polymer of the fulvic acid-containing polymer is characterized in that it is carboxymethyl cellulose.
  • the release rate of minoxidil is controlled by fulvic acid released from the polymer hydrogel.
  • the present invention further includes a composition for promoting hair growth containing the above-mentioned fulvic acid and minoxidil-containing polymer hydrogel as active ingredients.
  • the present invention further includes a method for producing a composition for promoting hair growth, characterized in that it contains the above-mentioned fulvic acid and minoxidil-containing polymer hydrogel as an active ingredient.
  • the method for producing a composition for promoting hair growth includes the steps of (a) preparing a first solution by mixing fulvic acid and a polymer, which is a raw material of a polymer hydrogel, in distilled water, (b) mixing minoxidil preparing a second solution by dissolving it in a solvent, (c) mixing the first solution and the second solution to prepare a mixed solution, and (d) adding iron sulfate (FeSO 4 ) to the prepared mixed solution. ) is carried out by adding and mixing a third solution prepared by dissolving in distilled water, and the composition for promoting hair growth prepared in this way includes a polymer hydrogel containing fulvic acid and minoxidil.
  • step (d) the steps of (e) adding and mixing more potassium hydroxide (KOH) solution and (f) adding and mixing more glycerin may be further included.
  • KOH potassium hydroxide
  • the polymer hydrogel containing fulvic acid and minoxidil according to an embodiment of the present invention and the composition for hair growth promotion containing the same as an active ingredient enable the slow release of minoxidil for 3 days with just one application. It has a hair growth effect that exceeds that of daily application, dramatically reducing the number of applications, thereby increasing convenience of use.
  • fulvic acid which is effective in promoting hair growth along with minoxidil, it has the effect of further promoting hair growth due to the hair growth synergy effect of the two ingredients.
  • the hair growth effect in addition to the hair growth effect, it can have the effect of preventing hair loss by delaying hair loss.
  • Figure 1 is a graph showing the difference in release rate of minoxidil under different conditions of presence and content of fulvic acid.
  • Figure 2 is a photograph showing the compositions prepared according to Comparative Example 1 and Examples. On the left is a composition containing fulvic acid-CMC hydrogel prepared according to Comparative Example 1, and on the right is a composition containing fulvic acid-CMC- prepared according to Examples. This photo corresponds to a composition containing minoxidil hydrogel.
  • Figure 3 is a graph showing the results of a sustained release test of minoxidil on the compositions prepared in Comparative Example 1 and Examples.
  • Figure 4 is a graph showing the results of a slow release test of fulvic acid for the compositions prepared in Comparative Example 2 and Examples.
  • Figure 5 is a photograph showing the preparation process of mice used for hair growth promotion experiments.
  • Figure 6 is a photograph showing the results of a hair growth promotion experiment.
  • Figure 7 is a flow chart showing a method of manufacturing a composition for promoting hair growth containing a polymer hydrogel containing fulvic acid and minoxidil as an active ingredient according to an embodiment of the present invention.
  • Figure 8 is a flowchart showing the experimental method for hydrogel formation and robustness evaluation according to CMC, fulvic, and iron with/without iron according to an embodiment of the present invention.
  • Figure 9 is a graph showing the weight ratio of residual hydrogel by period according to hydrogel formation and robustness evaluation according to CMC, fulvic, and iron presence/absence according to an embodiment of the present invention.
  • Figure 10 is a schematic diagram of Franz Cell testing equipment.
  • Figure 11 is a flowchart showing an experimental method for verifying whether fulvic acid penetrates the skin through a transdermal permeation test according to an embodiment of the present invention.
  • Figure 12 is a photo of the appearance (left) and an absorbance graph (right) at a wavelength of 450 nm according to the presence or absence of fulvic acid as a result of an experiment to verify whether fulvic acid penetrates the skin through a transdermal permeation test according to an embodiment of the present invention.
  • Figure 13 is a graph showing the results of quantitative analysis of minoxidil concentration in rat blood according to treatment with free minoxidil and gel minoxidil according to an embodiment of the present invention.
  • Figure 14 shows the results of an experiment confirming the cytotoxicity reduction effect of an organic solvent and evaluating cell viability according to fulvic acid treatment according to an embodiment of the present invention.
  • Figure 14a is the S1 sample
  • Figure 14b is the S2 sample
  • Figure 14c is the S3 sample. This is the result graph.
  • Figure 15 is an image showing the results of an experiment to check whether fulvic acid self-assembles using a TEM transmission microscope according to an embodiment of the present invention.
  • the present invention relates to a polymer hydrogel containing fulvic acid and minoxidil, a composition for promoting hair growth containing the same as an active ingredient, and a method for producing the same.
  • the polymer hydrogel according to an embodiment of the present invention includes minoxidil and a fulvic acid-containing polymer containing minoxidil.
  • Minoxidil included in the polymer hydrogel, is a representative topical agent approved by the U.S. Food and Drug Administration (FDA) for the treatment and prevention of hair loss, as previously explained in the background technology of the invention, and acts on hair cells through vasodilation. It is effective in treating and preventing hair loss and promoting hair growth by inducing hair growth through increased nutrient supply and potassium channel opening effect.
  • FDA U.S. Food and Drug Administration
  • the effect may be minimal, so it has the disadvantage of having to be continuously applied to the scalp twice a day for more than 6 to 8 months to confirm its effectiveness.
  • the present invention produced a polymer hydrogel by hydrogelating minoxidil with a polymer.
  • the polymer hydrogel of the present invention prepared in this way enables the slow release of minoxidil, and as a result, allows minoxidil to remain on the scalp for a longer period of time. can help
  • the polymer hydrogel of the present invention contains fulvic acid along with minoxidil, and the polymer containing minoxidil contains fulvic acid.
  • Fulvic acid included in polymer hydrogel, is a natural substance produced by plants such as mosses deposited underground for a long time and the process of fermentation, decomposition, and synthesis by numerous microorganisms in the soil is repeated countless times, and it is non-degradable. It is a visible natural polymer material.
  • This fulvic acid contains ingredients that exhibit antioxidant, anti-inflammatory, and antiviral activities, and has both hydrophilic and hydrophobic functional groups, so it has the ability to easily form supramolecular bonds with specific active ingredients.
  • fulvic acid Due to the physiological activity of fulvic acid itself, it can not only serve as an auxiliary function or booster of the active ingredient, but also play a role in improving the mobility of the active ingredient within the skin.
  • the polymer hydrogel of the present invention contains both minoxidil and fulvic acid, and when supplied to the scalp, minoxidil is more easily absorbed into hair follicle cells by fulvic acid, thereby further enhancing the hair growth promotion effect.
  • minoxidil when supplied to the scalp, minoxidil is more easily absorbed into hair follicle cells by fulvic acid, thereby further enhancing the hair growth promotion effect.
  • it can suppress inflammation or allergic reactions that occur in hair follicle cells, and the hair growth promoting effect of minoxidil and the hair growth promoting effect of fulvic acid act simultaneously in synergy, making it more effective in promoting hair growth.
  • it can also have the effect of preventing hair loss by delaying hair loss.
  • fulvic acid more specifically, fulvic acid released from the polymer hydrogel
  • minoxidil is contained to enable the slow release of minoxidil so that minoxidil is retained on the scalp for a longer period of time.
  • the polymer hydrogel of the present invention can prevent this by controlling the release rate of minoxidil by fulvic acid.
  • the CMC-minoxidil hydrogel used in the experiment was manufactured using the following manufacturing method.
  • a first solution was prepared by mixing 15 mg of carboxymethyl cellulose (CMC) in 0.25 ml distilled water.
  • a second solution was prepared by dissolving 12 mg of minoxidil in 0.2 ml of a solvent containing propylene glycol:ethanol:distilled water in a volume ratio of 5:3:2, followed by vortexing for 30 seconds and ultrasonicating for 1 minute. Afterwards, the first solution and the second solution were mixed to prepare a mixed solution.
  • 0.1 ml of a third solution prepared by dissolving 30 mg of FeSO 4 in 1 ml of distilled water was added to the mixed solution and mixed.
  • 0.1ml of 0.1N KOH was additionally added and vortexed for 30 seconds.
  • 170 mg of glycerin was additionally added and vortexed to complete the process.
  • the fulvic acid solution was prepared by completely dissolving fulvic acid in 15 ml of distilled water according to the respective contents described above and then filtering the solution through a 0.45 ⁇ m filter using a syringe.
  • Figure 1 is a graph showing the results according to the above experimental method, and more specifically, a graph showing the difference in the release rate of minoxidil when the presence or absence and content conditions of fulvic acid were varied.
  • the graph of Figure 1 the
  • fulvic acid not only helps promote the absorption of minoxidil, suppresses inflammation or allergic reactions, promotes hair growth, and prevents hair loss, but also plays a role in increasing the release rate so that the hydrogelated minoxidil is not released too slowly.
  • the release rate of minoxidil can be adjusted by the content of fulvic acid.
  • the polymer containing fulvic acid is characterized in that it contains minoxidil by being in the form of a hydrogel. More specifically, the polymer containing fulvic acid is characterized by containing minoxidil by having a hydrogel form created by hydrogen bonding or dipole-dipole interaction between fulvic acid and the polymer, or chelating bond between metal ions such as iron. do.
  • the polymer is capable of gelation and can contain minoxidil.
  • minoxidil is a polymer that can contain minoxidil through hydrogen bonding with fulvic acid, dipole-dipole interaction, or chelating between metal ions such as iron. It can be selected from polymers that can form a hydrogel by bonding, and specifically, carboxymethyl cellulose (also called Carboxymethyl cellulose, CMC), a natural polymer, is preferable.
  • carboxymethyl cellulose also called Carboxymethyl cellulose, CMC
  • CMC Carboxymethyl cellulose
  • the polymer hydrogel of the present invention which contains minoxidil due to the fulvic acid-containing polymer having such a hydrogel form, enables the slow-release release of fulvic acid along with the slow-release release of minoxidil, and as a result, minoxidil and fulvic acid remain on the scalp for a longer period of time. It has the effect of improving the convenience of use by dramatically reducing the number of applications by helping it to retain hair and showing a hair growth effect greater than that of applying it every day for 3 days with just one application.
  • the present invention further includes a composition for promoting hair growth containing the polymer hydrogel containing fulvic acid and minoxidil described so far as active ingredients.
  • the present invention further includes a method for producing a composition for promoting hair growth containing the polymer hydrogel containing fulvic acid and minoxidil described so far as active ingredients.
  • Figure 7 is a flow chart showing a method of manufacturing a composition for promoting hair growth containing a polymer hydrogel containing fulvic acid and minoxidil as an active ingredient according to an embodiment of the present invention.
  • the method for producing a composition for promoting hair growth according to an embodiment of the present invention is,
  • the process includes adding and mixing a third solution prepared by dissolving iron sulfate (FeSO 4 ) in distilled water to the prepared mixed solution.
  • the solvent is preferably a solvent prepared by mixing propylene glycol, ethanol, and distilled water, and more specifically, a solvent prepared by mixing propylene glycol:ethanol:distilled water in a volume ratio of 5:3:2. This is most preferable in terms of solubility of minoxidil.
  • fulvic acid may be included in an amount of 0.1 to 1% by weight based on the mixed solution, and more specifically, it is preferably included in an amount of 0.1 to 0.5% by weight. If the content of fulvic acid is too low, the effects of fulvic acid, such as promoting the absorption of minoxidil and promoting hair growth, may not be sufficient. Conversely, if it is too excessive, the release rate of minoxidil may be too fast, as seen in Experimental Example 1. This is because it may inhibit the slow release of minoxidil.
  • the polymer may be included in an amount of 1 to 5% by weight based on the mixed solution, and more specifically, it is preferably included in an amount of 1 to 3% by weight. This is because if the polymer content is too low, hydrogelation of minoxidil may be limited, and if the polymer content is too excessive, a severe cross-linked structure may be formed, which may limit the slow release of minoxidil.
  • minoxidil is preferably dissolved at a concentration of 1% or more based on the mixed solution. This is because if the minoxidil content is too low, the hair growth promotion effect may not be sufficient. Meanwhile, a concentration of 5% or less is appropriate, and if it is contained in excess than this, side effects such as skin itching may occur.
  • iron sulfate (FeSO 4 ) is preferably dissolved at a concentration of 2 to 4% relative to the third solution.
  • This serves as a cross-linking agent that determines the hydrogel shape by combining iron sulfate with the polymer. Therefore, if the content of iron sulfate is too low, hydrogelation of minoxidil may be limited. Conversely, if it is too excessive, a severe cross-linking structure is formed, thereby damaging minoxidil. This is because it can limit slow release.
  • the mixed solution and the third solution may be mixed at a weight ratio of 5:1 to 10:1, which is particularly useful for producing a polymer hydrogel for slow release of fulvic acid and minoxidil. This is because the polymer has a hydrogel form, which is desirable for producing a polymer hydrogel containing minoxidil.
  • the process further includes the step of adding and mixing glycerin.
  • step (e) The reason for adding the potassium hydroxide solution in step (e) above is that the metal chelate bond reacts well in an alkaline environment where the pH is above a certain level, and as a result, it is easy to produce a polymer hydrogel containing minoxidil.
  • step (f) The reason for adding glycerin in step (f) above is to improve the skin (scalp) applicability of the prepared composition for promoting hair growth.
  • Comparative Example 1 Preparation of a composition containing fulvic acid-CMC hydrogel
  • a first solution was prepared by mixing 2.5 mg of fulvic acid and 15 mg of carboxymethyl cellulose (CMC) in 0.25 ml distilled water.
  • a second solution was prepared by vortexing 0.2 ml of a solvent mixture of propylene glycol:ethanol:distilled water in a volume ratio of 5:3:2 for 30 seconds. Afterwards, the first solution and the second solution were mixed to prepare a mixed solution. Afterwards, 0.1 ml of a third solution prepared by dissolving 30 mg of FeSO 4 in 1 ml of distilled water was added to the mixed solution and mixed. Afterwards, 0.1ml of 0.1N KOH was additionally added and vortexed for 30 seconds. Afterwards, 170 mg of glycerin was additionally added and vortexed to complete the process.
  • a first solution was prepared by adding 15 mg of carboxymethyl cellulose (CMC) to 0.25 ml distilled water and mixing.
  • a second solution was prepared by dissolving 12 mg of minoxidil in 0.2 ml of a solvent containing propylene glycol:ethanol:distilled water in a volume ratio of 5:3:2, followed by vortexing for 30 seconds and ultrasonicating for 1 minute. Afterwards, the first solution and the second solution were mixed to prepare a mixed solution.
  • 0.1 ml of a third solution prepared by dissolving 30 mg of FeSO 4 in 1 ml of distilled water was added to the mixed solution and mixed.
  • 0.1ml of 0.1N KOH was additionally added and vortexed for 30 seconds.
  • 170 mg of glycerin was additionally added and vortexed to complete the process.
  • a first solution was prepared by mixing 2.5 mg of fulvic acid and 15 mg of carboxymethyl cellulose (CMC) in 0.25 ml distilled water.
  • a second solution was prepared by dissolving 12 mg of minoxidil in 0.2 ml of a solvent containing propylene glycol:ethanol:distilled water in a volume ratio of 5:3:2, followed by vortexing for 30 seconds and ultrasonicating for 1 minute. Afterwards, the first solution and the second solution were mixed to prepare a mixed solution.
  • 0.1 ml of a third solution prepared by dissolving 30 mg of FeSO 4 in 1 ml of distilled water was added to the mixed solution and mixed.
  • 0.1ml of 0.1N KOH was additionally added and vortexed for 30 seconds.
  • 170 mg of glycerin was additionally added and vortexed to complete the process.
  • Figure 2 is a photograph showing the compositions prepared according to Comparative Example 1 and Examples, where the left (Control) is the composition containing fulvic acid-CMC hydrogel prepared by Comparative Example 1, and the right (Capsule) is the composition prepared by Example. This is a photo corresponding to the composition containing the prepared fulvic acid-CMC-minoxidil hydrogel.
  • a composition containing fulvic acid-CMC hydrogel prepared as in Comparative Example 1 and a composition containing fulvic acid-CMC-minoxidil hydrogel prepared as in Example were prepared.
  • Figure 3 is a graph showing the results according to the above experimental method, and more specifically, a graph showing the results of a slow release test of minoxidil on the compositions prepared according to Comparative Example 1 and Examples.
  • the graph of Figure 3 the
  • a composition containing CMC-minoxidil hydrogel prepared as in Comparative Example 2 and a composition containing fulvic acid-CMC-minoxidil hydrogel prepared as in Example were prepared.
  • Figure 4 is a graph of the results according to the above experimental method, and more specifically, a graph of the results of a slow release test of fulvic acid for the compositions prepared in Comparative Example 2 and Example.
  • the graph of Figure 4 the
  • mice used in the hair growth promotion experiment are C57BL/6 mice, which have black body hair and are histologically and immunologically similar to human conditions. Since the hair cycle enters the telogen phase from 7 weeks of age, 7-week-old mice are mainly used for testing. It is known to do so. Accordingly, 6-week-old C57BL/6 female mice were obtained from Samtaco (Osan, Korea) and used in the experiment when they reached 7 weeks of age after a 7-day adaptation period. After removing the hair on the back using a clipper, a depilator was applied to remove hair follicles and fine hairs remaining in the skin, left on for 10 minutes, and then wiped off with distilled water three times. After a 24-hour recovery period, mice with no wounds on the area to be applied were selected and used in the experiment.
  • Figure 5 is a photograph showing the above process.
  • the experiment start date was set to day 0, and pictures were taken after anesthesia to check the hair growth on days 8, 11, and 14, and are shown in Figure 6.
  • the polymer hydrogel containing minoxidil and a fulvic acid-containing polymer containing minoxidil not only has a superior hair growth promoting effect compared to liquid minoxidil by simultaneously releasing minoxidil and fulvic acid, but also has a superior hair growth promoting effect compared to liquid minoxidil.
  • a single application has a hair growth effect greater than that achieved by applying it every day for 3 days, dramatically reducing the number of applications, thereby increasing convenience of use.
  • Y2 Excluding the process of “adding 0.1 ml of a third solution prepared by dissolving 30 mg of FeSO 4 in 1 ml of distilled water to the mixed solution” in the manufacturing process of Y1 above ⁇ CMC-Fulvic-Minoxidil>
  • Y1 to Y4 in the form of hydrogels were prepared, dissolved in 10 ml of distilled water, incubated for 8 hours, centrifuged for 5 minutes at 3,500 rpm, the supernatant was discarded, and the weight of the pellet was measured. Add 10ml more distilled water and repeat the 8-hour incubation process to measure the weight of the pellet.
  • the Y1 sample according to a preferred embodiment of the present invention maintained its shape over time and minimized weight loss. (The weight increase after the first 8 hours is a result of moisture absorption).
  • FIG 10 is a schematic diagram of the Franz Cell equipment, which is a test equipment for measuring the skin absorption-permeability of ingredients such as drugs or cosmetics that show effects by applying or attaching to the skin over time. From the Donor Chamber, the drug penetrates the membrane and diffuses into the receptor solution, and the temperature is maintained at 32 ⁇ 1°C, similar to that of the skin.
  • the S1 and S2 samples were each introduced into the Donor chamber, and a solvent mixture of 4 ml of distilled water and 4 ml of ethanol was added to the Receptor chamber to configure Franz cell equipment for each sample, and a cellulose membrane was used.
  • the reaction was conducted at 37°C for 12 hours, and approximately 7ml of the receptor solution was collected and condensed on a hot plate at 95°C for 2 days to harvest a 1.5ml result.
  • the left photo in Figure 12 is a photo showing the appearance of the S1 result and the S2 result, and the three samples on the right side of the photo are the results of an experiment conducted with the S2 sample containing fulvic acid. Even with the naked eye, it can be confirmed that fulvic acid is contained (indicated by a yellow color). I was able to.
  • the right graph in Figure 12 is a graph showing the absorbance at a wavelength of 450 nm for the experimental results for the S1 sample (left graph) and the experimental results for the S2 sample (right graph), showing that the S2 sample results contain a large amount of fulvic acid. I was able to confirm. As a result, it was confirmed that fulvic acid shows high skin permeability even though it is a polymer material.
  • UV wavelength 229 nm
  • Ion source gas 1 50 psi
  • Ion source gas 2 50 psi
  • Minoxidil fragment ion (1) 164.1341, DP: 125 V, CE: 20 V
  • S2 A mixture of 5 ml of mixed solvent from S1 and 10 mg of fulvic acid.
  • S3 A mixture of 5 ml of mixed solvent from S1 and 30 mg of fulvic acid.
  • Cell line L929 was received from the Korea Cell Line Bank (KCLB), and MEM growth medium containing 10% Fetal Bovine Serum (FBS, Gibco) and 5% Antibiotics/antimycotics (Sigma Aldrich) was used.
  • KCLB Korea Cell Line Bank
  • FBS Fetal Bovine Serum
  • Antibiotics/antimycotics Sigma Aldrich
  • Cell lines were cultured in an incubator controlled at 5% CO2, 37°C, and humidity. When the flask is about 80% filled with cells, wash with Pohsphate-buffered saline (PBS), add 1ml Trypsin/EDTA (Sigma Aldrich) to the culture dish, react at 37°C for 5 minutes, dilute 10 times with growth medium, and centrifuge. Afterwards, they were subcultured. The medium was changed every 48 hours to culture the cells.
  • PBS Pohsphate-buffered saline
  • Trypsin/EDTA Sigma Aldrich
  • L929 cells were suspended in MEM growth medium, dispensed into a 96 well microplate at 1 ⁇ 104 cells/500 ⁇ l growth medium/well (3 repetitions of 200 ⁇ l per well), and cultured in a CO2 incubator for 24 hours.
  • TEM Tecnai G2 spirit twin (FEI, Netherlands) images were taken under accelerating voltage conditions of 120 kV.
  • fulvic acid will serve as a vehicle for minoxidil to perform its functions such as skin absorption and slow release through self-assembly.

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Abstract

본 발명은 풀빅산과 미녹시딜을 함유하는 고분자 하이드로겔 및 이를 유효성분으로 포함하는 발모 촉진용 조성물, 그리고 이의 제조방법에 관한 것으로, 본 발명의 일 실시 예에 따른 고분자 하이드로겔은 미녹시딜 및 상기 미녹시딜을 함유하고 있는 풀빅산 함유 고분자를 포함하며, 미녹시딜과 풀빅산을 동시에 완효성 방출하는 것을 특징으로 한다.

Description

풀빅산 및 미녹시딜 함유 고분자 하이드로겔 및 이를 유효성분으로 포함하는 발모 촉진용 조성물
본 발명은 발모 촉진용 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 풀빅산과 미녹시딜을 함유하는 고분자 하이드로겔 및 이를 유효성분으로 포함하는 발모 촉진용 조성물, 그리고 이의 제조방법에 관한 것이다.
인체의 정상적인 모발은 대략 10만개 정도이며, 각각의 모발은 서로 다른 주기를 가지며 성장기, 퇴행기 및 휴지기를 거쳐 성장 및 탈락한다. 이러한 주기는 3~6년에 걸쳐 반복되는데, 모발이 가장 활발하게 성장하는 시기를 성장기라고 하고, 매우 불안정하고 일시적인 상태를 퇴행기라고 하며, 모발의 성장이 멈추고 탈락하는 시기를 휴지기라고 한다. 이러한 주기에 따라 정상인의 경우 1일 평균 20~100개 가량의 모발이 탈락하는데, 이러한 모발의 주기 중에서 성장기의 모발 비율이 줄어들고, 퇴행기 또는 휴지기의 모발 비율이 늘어남에 따라 비정상적으로 탈락하는 모발이 많아지는 현상을 탈모라고 한다.
탈모의 원인은 아직까지 명확하게 밝혀지지 않았으나 두피 내 혈액순환 불량, 남성 호르몬의 과잉작용, 피지분비의 과잉, 유전, 노화 및 스트레스 등에 의해 발생되는 것으로 알려져 있다. 2020년 기준, 국내 탈모 환자는 약 23.3만 명으로 추정되고 있으며, 탈모의 치료와 예방을 위해 다양한 연구와 노력들이 계속되고 있다.
현재까지 미국 식품의약품안전청(FDA)의 승인을 받은 대표적인 외용제로는 미녹시딜(Minoxidil)이 있다. 미녹시딜은 1979년 고혈압 치료제로서의 임상시험 중 한 부작용으로 우연히 다모증이 관찰되면서 발모제로 개발되어 사용되기 시작하였다.
다만, 의학 전문의들의 의견에 따르면, 미녹시딜을 하루에 두 차례씩 매일 6~8개월 이상 지속적으로 두피에 발라줘야 그 효능을 확인할 수 있으며, 그렇지 않을 경우 충분한 발모 효과를 기대하기는 어렵다는 문제가 있다. 이에 최근 미녹시딜의 사용 편의성을 높이는 연구가 요구되고 있다.
본 발명이 해결하고자 하는 기술적 과제는 1회 도포만으로 3일간 매일 도포한 것 이상의 발모 효과를 나타냄으로써 도포 횟수를 획기적으로 줄여 사용 편의성을 높이고, 나아가 더욱 촉진된 발모 효과를 나타낼 수 있는 풀빅산 및 미녹시딜 함유 고분자 하이드로겔 및 이를 유효성분으로 포함하는 발모 촉진용 조성물, 그리고 이의 제조방법을 제공하는 것이다.
상기 기술적 과제를 달성하기 위한 본 발명의 일 실시 예에 따른 고분자 하이드로겔은, 미녹시딜 및 상기 미녹시딜을 함유하고 있는 풀빅산 함유 고분자를 포함하며, 미녹시딜과 풀빅산을 동시에 완효성 방출하는 것을 특징으로 한다.
상기 풀빅산 함유 고분자는, 하이드로겔 형태를 가짐으로써 미녹시딜을 함유하고 있는 것을 특징으로 한다.
상기 풀빅산 함유 고분자의 고분자는, 카복시메틸셀룰로오스인 것을 특징으로 한다.
상기 고분자 하이드로겔로부터 방출되는 풀빅산에 의해 미녹시딜의 방출 속도가 조절되는 것을 특징으로 한다.
한편, 본 발명은 상기와 같은 풀빅산 및 미녹시딜 함유 고분자 하이드로겔을 유효성분으로 포함하는 발모 촉진용 조성물을 더 포함한다.
한편, 본 발명은 상기와 같은 풀빅산 및 미녹시딜 함유 고분자 하이드로겔을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 발모 촉진용 조성물의 제조방법을 더 포함한다.
구체적으로 본 발명의 일 실시 예에 따른 발모 촉진용 조성물의 제조방법은, (a) 풀빅산과 고분자 하이드로겔의 원료인 고분자를 증류수에 넣고 혼합하여 제1 용액을 제조하는 단계, (b) 미녹시딜을 용매에 넣고 용해시켜 제2 용액을 제조하는 단계, (c) 상기 제조된 제1 용액과 제2 용액을 혼합하여 혼합용액을 제조하는 단계 및 (d) 상기 제조된 혼합용액에 황산철(FeSO4)을 증류수에 용해시켜 제조한 제3 용액을 첨가하여 혼합해주는 단계를 포함하여 진행되며, 이렇게 제조된 발모 촉진용 조성물은 풀빅산 및 미녹시딜을 함유하는 고분자 하이드로겔을 포함한다.
상기 (d) 단계 이후, (e) 수산화칼륨(KOH) 용액을 더 첨가하여 혼합해주는 단계 및 (f) 글리세린을 더 첨가하여 혼합해주는 단계를 더 포함할 수 있다.
상기와 같은 본 발명에 따르면, 본 발명의 일 실시 예에 따른 풀빅산 및 미녹시딜 함유 고분자 하이드로겔 및 이를 유효성분으로 포함하는 발모 촉진용 조성물은 미녹시딜의 완효성 방출을 가능하게 하여 1회 도포만으로 3일간 매일 도포한 것 이상의 발모 효과를 나타냄으로써 도포 횟수를 획기적으로 줄여 사용의 편의성을 높인 효과를 갖는다.
또한, 미녹시딜과 함께 발모 촉진에 효과적인 풀빅산을 함유함으로써, 두 성분의 발모 시너지 효과로 더욱 촉진된 발모 효과를 나타낼 수 있는 효과가 있다.
또한, 발모 효과와 더불어 모발의 손실을 지연시켜 탈모를 방지하는 효과를 가질 수 있다.
본 발명의 효과는 이상에서 언급한 것으로 제한되지 않으며, 명세서 전반의 기재로부터 통상의 기술자에게 명확하게 이해될 수 있으나 명시적으로 언급되지 않은 다른 효과들 역시 포함한다.
도 1은 풀빅산의 유무 및 함량 조건을 달리하였을 때 미녹시딜의 방출 속도 차이를 보여주는 그래프이다.
도 2는 비교예 1과 실시예에 의해 제조된 조성물을 보여주는 사진으로, 왼쪽이 비교예 1에 의해 제조된 풀빅산-CMC 하이드로겔 포함 조성물, 오른쪽이 실시예에 의해 제조된 풀빅산-CMC-미녹시딜 하이드로겔 포함 조성물에 해당하는 사진이다.
도 3은 비교예 1과 실시예에 의해 제조된 조성물을 대상으로 미녹시딜의 완효성 방출 실험을 실시한 결과 그래프이다.
도 4는 비교예 2와 실시예에 의해 제조된 조성물을 대상으로 풀빅산의 완효성 방출 실험을 실시한 결과 그래프이다.
도 5는 발모 촉진 실험을 위해 사용한 쥐의 준비 과정을 보여주는 사진이다.
도 6은 발모 촉진 실험 결과를 보여주는 사진이다.
도 7은 본 발명의 일 실시 예에 따른 풀빅산 및 미녹시딜 함유 고분자 하이드로겔을 유효성분으로 포함하는 발모 촉진용 조성물의 제조방법을 보여주는 순서도이다.
도 8은 본 발명의 일 실시 예에 따른 CMC, 풀빅, 철 유/무에 따른 하이드로젤 형성과 견고성 평가 실험방법을 나타낸 순서도이다.
도 9는 본 발명의 일 실시 예에 따른 CMC, 풀빅, 철 유/무에 따른 하이드로젤 형성과 견고성 평가에 따른 시기별 잔류 하이드로젤의 중량비를 나타낸 그래프이다.
도 10은 Franz Cell 시험장비의 모식도이다.
도 11은 본 발명의 일 실시 예에 따른 경피투과실험을 통한 풀빅산의 피부 투과 여부 검증 실험방법을 나타낸 순서도이다.
도 12는 본 발명의 일 실시 예에 따른 경피투과실험을 통한 풀빅산의 피부 투과 여부 검증 실험결과로서 풀빅산 포함 여부에 따른 외관 사진(좌)과 450nm 파장에 대한 흡광도 그래프(우)이다.
도 13은 본 발명의 일 실시 예에 따른 Free minoxidil, gel minoxidil 처리에 따른 쥐 혈중 미녹시딜 농도 정량 분석 결과 그래프이다.
도 14는 본 발명의 일 실시 예에 따른 풀빅산 처리에 따른 유기 용매의 세포 독성 감소 효과 확인 및 세포생존성 평가 실험결과로서, 도 14a는 S1 샘플, 도 14b는 S2 샘플, 도 14c는 S3 샘플에 대한 결과 그래프이다.
도 15는 본 발명의 일 실시 예에 따른 TEM 투과 현미경을 활용한 풀빅산의 자가조립 여부 확인 실험 결과 이미지이다.
이하, 첨부된 도면을 참조하여 본 발명의 바람직한 실시 예를 상세히 설명한다. 본 발명의 이점 및 특징, 그리고 그것들을 달성하는 방법은 첨부되는 도면과 함께 상세하게 후술되어 있는 실시 예들을 참조하면 명확해질 것이다. 그러나 본 발명은 이하에서 게시되는 실시 예에 한정되는 것이 아니라 서로 다른 다양한 형태로 구현될 수 있으며, 단지 본 실시 예들은 본 발명의 게시가 완전하도록 하고, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 발명의 범주를 완전하게 알려주기 위해 제공되는 것이며, 본 발명은 청구항의 범주에 의해 정의될 뿐이다. 명세서 전체에 걸쳐 동일 참조 부호는 동일 구성 요소를 지칭한다.
다른 정의가 없다면, 본 명세서에서 사용되는 모든 용어(기술 및 과학적 용어를 포함)는 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 공통적으로 이해될 수 있는 의미로 사용될 수 있을 것이다. 또 일반적으로 사용되는 사전에 정의되어 있는 용어들은 명백하게 특별히 정의되어 있지 않는 한 이상적으로 또는 과도하게 해석되지 않는다. 본 명세서에서 사용된 용어는 실시 예들을 설명하기 위한 것이며 본 발명을 제한하고자 하는 것은 아니다. 본 명세서에서, 단수형은 문구에서 특별히 언급하지 않는 한 복수형도 포함한다.
명세서에서 사용되는 "포함한다 (comprises)" 및/또는 "포함하는 (comprising)"은 언급된 구성 요소, 단계, 동작 및/또는 소자는 하나 이상의 다른 구성 요소, 단계, 동작 및/또는 소자의 존재 또는 추가를 배제하지 않는다.
본 발명은 풀빅산과 미녹시딜을 함유하는 고분자 하이드로겔 및 이를 유효성분으로 포함하는 발모 촉진용 조성물, 그리고 이의 제조방법에 관한 것이다.
이하, 본 발명을 보다 구체적으로 설명한다.
본 발명의 일 실시 예에 따른 고분자 하이드로겔은, 미녹시딜 및 상기 미녹시딜을 함유하고 있는 풀빅산 함유 고분자를 포함하여 구성된다.
고분자 하이드로겔에 포함되는 미녹시딜(Minoxidil)은 앞서 발명의 배경이 되는 기술에서 설명한 바와 같이 탈모의 치료 및 예방에 있어 미국 식품의약품안전청(FDA)의 승인을 받은 대표적인 외용제로, 혈관확장을 통한 모세포에 영양공급 증가 및 칼륨 채널 개방 효과(potassium channel opening effect) 등을 통해 모발의 성장을 유도하여 탈모의 치료 및 예방, 발모 촉진에 효과를 갖는다.
다만, 두피에 도포한 후 지속적으로 두피에 저류하지 않을 경우 효과가 미비할 수 있어 하루에 두 차례씩 매일 6~8개월 이상 지속적으로 두피에 도포하여줘야 그 효능을 확인할 수 있는 단점이 있다.
이를 해결하고자 본 발명은 미녹시딜을 고분자로 하이드로겔화하여 고분자 하이드로겔을 제조하였으며, 이렇게 제조된 본 발명의 고분자 하이드로겔은 미녹시딜의 완효성 방출을 가능하게 하여 결과적으로 미녹시딜이 두피에 보다 오래 저류할 수 있도록 도울 수 있다.
한편, 본 발명의 고분자 하이드로겔은 미녹시딜과 함께 풀빅산을 포함하고 있으며, 미녹시딜을 함유하고 있는 고분자가 풀빅산을 함유하는 것을 특징으로 한다.
고분자 하이드로겔에 포함되는 풀빅산(Fulvic acid)은 이끼류와 같은 식물들이 지하에 오랫동안 퇴적되어 토양의 수많은 미생물에 의해 발효, 분해, 합성되는 과정이 수 없이 반복되어 생성된 천연물질로, 난분해성을 보이는 천연 고분자 물질이다.
이러한 풀빅산은 항산화, 항염, 항바이러스 등의 활성을 보이는 성분을 함유하고 있으며, 친수성과 소수성 작용기를 동시에 보유하여 특정 유효 성분과 초분자적 결합을 쉽게 할 수 있는 능력을 갖는다.
이러한 풀빅산 자체의 생리 활성 능력으로 유효 성분의 보조 기능 내지 부스터 역할을 수행할 수 있을 뿐 아니라, 유효 성분의 피부 내 이동성을 향상시키는 역할을 수행할 수 있다.
즉, 본 발명의 고분자 하이드로겔은 미녹시딜과 풀빅산을 모두 포함하고 있어 두피에 공급하는 경우 풀빅산에 의해 미녹시딜이 모낭세포에 보다 쉽게 흡수됨으로써 발모 촉진 효과를 더욱 높이는 효과를 갖는다. 더불어 앞서 설명한 바와 같이 모낭세포에서 발생하는 염증 또는 알레르기성 반응을 억제할 수 있으며, 미녹시딜에 의한 발모 촉진 효과와 풀빅산에 의한 발모 촉진 효과가 시너지로 동시에 작용함으로써, 발모 촉진에 더욱 효과적이며, 발모 촉진과 함께 모발의 손실도 지연시켜 탈모를 방지하는 효과도 가질 수 있다.
한편, 이 외에도 풀빅산, 보다 구체적으로는 고분자 하이드로겔로부터 방출된 풀빅산은 미녹시딜의 방출 속도를 조절하는 역할을 수행할 수 있다. 본 발명에서 미녹시딜의 완효성 방출을 가능하게 하여 미녹시딜이 두피에 보다 오래 저류하도록 미녹시딜을 함유하였으나, 또 미녹시딜이 너무 과도하게 느리게 방출되는 경우 발모 촉진 효과가 더디게 나타나 감소한 사용횟수가 다시 증가할 수 있는데, 본 발명의 고분자 하이드로겔은 풀빅산에 의해 미녹시딜의 방출 속도가 조절됨으로써 이를 방지할 수 있다. 이하, 실험예를 들어 보다 구체적으로 설명한다.
실험예1: 풀빅산의 미녹시딜 방출 속도 조절 실험
(1) 샘플준비
Control: CMC-미녹시딜 하이드로겔 + 증류수15ml
R1: CMC-미녹시딜 하이드로겔 + 풀빅산 용액(풀빅산0.05g) 15ml
R2: CMC-미녹시딜 하이드로겔 + 풀빅산 용액(풀빅산0.1g) 15ml
R3: CMC-미녹시딜 하이드로겔 + 풀빅산 용액(풀빅산0.2g) 15ml
실험에서 사용한 CMC-미녹시딜 하이드로겔은 다음의 제조방법에 의해 제조된 것을 사용하였다.
카복시메틸셀룰로오스(CMC) 15mg을 0.25ml 증류수에 넣고 섞어 제1용액을 제조하였다. 미녹시딜 12mg을 프로필렌글리콜:에탄올:증류수를 5:3:2의 부피비로 혼합한 용매 0.2ml에 녹인 뒤, 30초간 볼텍싱 처리 및 1분간 초음파 처리하여 제2 용액을 제조하였다. 이후, 제1용액과 제2 용액을 혼합하여 혼합용액을 제조하였다. 이후, 혼합용액에 FeSO4 30mg을 1ml 증류수에 용해시켜 제조한 제3용액 0.1ml을 첨가한 후 혼합시켜주었다. 이후, 0.1N KOH 0.1ml을 추가로 첨가한 후 30초간 볼텍싱 처리해주었으며, 이후, 글리세린 170 mg을 추가로 첨가한 후 볼텍싱 처리하여 완성하였다.
그리고 풀빅산 용액은 증류수 15ml에 풀빅산을 상기 기재한 각각의 함량대로 완전히 녹인 후, 실린지를 이용하여 0.45㎛ 필터로 여과한 용액을 사용하였다.
(2) 실험방법
각 샘플들을 롤러 믹서 위에서 24시간 배양한 후, 상등액 1.0ml를 13,000rpm으로 5분간 원심 분리하였다. 이후, 상등액을 에탄올로 200배 희석하고, 실린지를 이용하여 0.45㎛ 필터로 여과한 뒤 고성능 액체크로마토그래피(HPLC)로 분석하였다. HPLC로부터 검출된 미녹시딜의 peak area를 기반으로 검량선을 통해 농도로 변환하여 그래프로 나타내었다.
(3) 실험결과
도 1은 상기 실험방법에 따른 결과 그래프로, 보다 상세하게는 풀빅산의 유무 및 함량 조건을 달리하였을 때 미녹시딜의 방출 속도 차이를 보여주는 그래프이다. 도 1의 그래프에서 X축은 각각의 샘플, Y축은 미녹시딜의 검출량에 해당하며, 검출량이 많을수록 미녹시딜의 방출 속도가 빠르다는 것으로 해석할 수 있다.
도 1에 나타난 바와 같이, 풀빅산을 포함하지 않는 Control 샘플 대비 풀빅산을 포함하는 R1~R3 샘플의 경우 미녹시딜의 방출 속도가 증가한 것을 볼 수 있으며, 풀빅산의 함량이 증가할수록(R1→R2→R3) 미녹시딜의 방출 속도도 빨라진 것을 확인할 수 있었다. 이는 캡슐로부터 방출된 풀빅산이 CMC-철-미녹시딜 구조에서 철 이온을 빼냄에 따라 구조를 붕괴시켜 미녹시딜의 방출을 증가시키는 것으로 보여진다.
결론적으로 풀빅산은 미녹시딜의 흡수 촉진, 염증 또는 알레르기성 반응 억제, 발모 촉진 및 탈모 방지에 도움을 줄 수 있을 뿐 아니라, 하이드로겔화된 미녹시딜이 너무 과도하게 느리게 방출되지 않도록 방출 속도를 증가시키는 역할을 수행할 수 있으며, 풀빅산의 함량에 의해 미녹시딜의 방출 속도가 조절될 수 있다.
한편, 풀빅산을 함유하는 고분자는 하이드로겔(Hydrogel) 형태를 가짐으로써 미녹시딜을 함유하고 있는 것을 특징으로 한다. 보다 구체적으로 풀빅산을 함유하는 고분자는, 풀빅산과 고분자 간의 수소결합 내지는 쌍극자 쌍극자 상호작용 또는 철 등의 금속 이온 간의 킬레이팅 결합에 의해 생성되는 하이드로겔 형태를 가짐으로써, 미녹시딜을 함유하는 것을 특징으로 한다.
고분자 하이드로겔의 주 성분인 풀빅산 함유 고분자에서 고분자는 겔화가 가능함으로써 미녹시딜을 함유할 수 있는 고분자로, 앞서 설명한 바와 같이 풀빅산과의 수소결합 내지는 쌍극자 쌍극자 상호작용 또는 철 등의 금속 이온 간의 킬레이팅 결합에 의해 하이드로겔 형태를 가질 수 있는 고분자 중에서 선택될 수 있으며, 구체적으로 천연 고분자인 카복시메틸 셀룰로오스(Carboxymethyl cellulose, CMC라고도 함)인 것이 바람직하다.
이와 같은 하이드로겔 형태를 갖는 풀빅산 함유 고분자에 의해 미녹시딜이 함유된 본 발명의 고분자 하이드로겔은, 미녹시딜의 완효성 방출과 함께 풀빅산의 완효성 방출도 가능하게 하여 결과적으로 미녹시딜과 풀빅산이 두피에 보다 오래 저류할 수 있도록 도와 1회 도포만으로 3일간 매일 도포한 것 이상의 발모 효과를 나타냄으로써 도포 횟수를 획기적으로 줄여 사용의 편의성을 높인 효과를 갖는다.
본 발명은 지금까지 설명한 풀빅산 및 미녹시딜 함유 고분자 하이드로겔을 유효성분으로 포함하는 발모 촉진용 조성물을 더 포함한다.
한편, 본 발명은 지금까지 설명한 풀빅산 및 미녹시딜 함유 고분자 하이드로겔을 유효성분으로 포함하는 발모 촉진용 조성물의 제조방법을 더 포함한다.
도 7은 본 발명의 일 실시 예에 따른 풀빅산 및 미녹시딜 함유 고분자 하이드로겔을 유효성분으로 포함하는 발모 촉진용 조성물의 제조방법을 보여주는 순서도이다.
도 7에 도시된 바와 같이, 본 발명의 일 실시 예에 따른 발모 촉진용 조성물의 제조방법은,
(a) 풀빅산과 고분자 하이드로겔의 원료인 고분자를 증류수에 넣고 혼합하여 제1 용액을 제조하는 단계,
(b) 미녹시딜을 용매에 넣고 용해시켜 제2 용액을 제조하는 단계,
(c) 상기 제조된 제1 용액과 제2 용액을 혼합하여 혼합용액을 제조하는 단계 및
(d) 상기 제조된 혼합용액에 황산철(FeSO4)을 증류수에 용해시켜 제조한 제3 용액을 첨가하여 혼합해주는 단계를 포함하여 진행된다.
상기 (b) 단계에서, 용매는 프로필렌글리콜, 에탄올 및 증류수를 혼합하여 제조한 용매인 것이 바람직하며, 보다 구체적으로 프로필렌글리콜:에탄올:증류수를 5:3:2의 부피비로 혼합하여 제조한 용매인 것이 미녹시딜의 용해성 측면에서 가장 바람직하다.
상기 (c) 단계에서, 풀빅산은 혼합용액에 대하여 0.1 내지 1중량%로 포함될 수 있으며, 보다 구체적으로 0.1 내지 0.5중량%로 포함되는 것이 바람직하다. 이는 풀빅산의 함량이 너무 적은 경우 미녹시딜의 흡수촉진 및 발모 촉진 등 풀빅산으로 인한 효과가 충분하지 않을 수 있고, 반대로 너무 과도한 경우 앞서 실험예1을 통해 살펴본 바와 같이 미녹시딜의 방출 속도를 너무 빠르게 하여 미녹시딜의 완효성 방출을 저해할 수 있기 때문이다.
상기 (c) 단계에서, 고분자는 혼합용액에 대하여 1 내지 5중량%로 포함될 수 있으며, 보다 구체적으로 1 내지 3중량%로 포함되는 것이 바람직하다. 이는 고분자의 함량이 너무 적은 경우 미녹시딜을 하이드로겔화함에 있어 제한적일 수 있고, 반대로 너무 과도한 경우 심한 가교구조가 형성되어 미녹시딜의 완효성 방출을 제한할 수 있기 때문이다.
상기 (c) 단계에서, 미녹시딜은 혼합용액에 대하여 1% 이상의 농도로 용해되어 있는 것이 바람직하다. 이는 미녹시딜의 함량이 너무 적은 경우 발모 촉진 효과가 충분하지 않을 수 있기 때문이다. 한편 5% 이하 농도인 것이 적절하며, 이보다 과량 함유하는 경우 피부 가려움 등의 부작용이 발생할 가능성이 있다.
상기 (d) 단계에서, 황산철(FeSO4)은 제3 용액에 대하여 2 내지 4%의 농도로 용해되어 있는 것이 바람직하다. 이는 황산철이 고분자와 결합하여 하이드로겔 형태를 결정짓는 가교제 역할을 수행하는데, 따라서 황산철의 함량이 너무 적은 경우 미녹시딜을 하이드로겔화함에 있어 제한적일 수 있고, 반대로 너무 과도한 경우 심한 가교구조가 형성되어 미녹시딜의 완효성 방출을 제한할 수 있기 때문이다.
상기 (d) 단계에서, 혼합용액과 제3 용액은 5:1 내지 10:1의 중량비로 혼합될 수 있으며, 이는 풀빅산 및 미녹시딜의 완효성 방출을 위한 고분자 하이드로겔을 제조함에 있어 특히 풀빅산 함유 고분자가 하이드로겔 형태를 가짐으로써 미녹시딜을 함유하고 있는 고분자 하이드로겔을 제조함에 있어 바람직하기 때문이다.
상기 (d) 단계 이후,
(e) 수산화칼륨(KOH) 용액을 더 첨가하여 혼합해주는 단계 및
(f) 글리세린을 더 첨가하여 혼합해주는 단계를 더 포함하여 진행된다.
상기 (e) 단계와 같이 수산화칼륨 용액을 첨가해주는 이유는 금속 킬레이트 결합이 pH가 일정수준 이상인 알칼리 환경에서 반응이 잘 일어나 결과적으로 미녹시딜을 함유하고 있는 고분자 하이드로겔을 제조함에 있어 용이하기 때문이다.
상기 (f) 단계와 같이 글리세린을 첨가해주는 이유는 제조된 발모 촉진용 조성물의 피부(두피) 발림성을 향상시키기 위함이다.
이하, 본 발명을 실시 예 및 비교 예를 이용하여 더욱 상세하게 설명하고자 한다. 그러나 하기의 실시 예 및 비교 예는 본 발명의 예증을 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이에 국한되는 것은 아니다.
비교예 1: 풀빅산-CMC 하이드로겔 포함 조성물의 제조
풀빅산 2.5mg과 카복시메틸셀룰로오스(CMC) 15mg을 0.25ml 증류수에 넣고 혼합하여 제1용액을 제조하였다. 프로필렌글리콜:에탄올:증류수를 5:3:2의 부피비로 혼합한 용매 0.2ml을 30초간 볼텍싱 처리하여 제2 용액을 제조하였다. 이후, 제1용액과 제2 용액을 혼합하여 혼합용액을 제조하였다. 이후, 혼합용액에 FeSO4 30mg을 1ml 증류수에 용해시켜 제조한 제3용액 0.1ml을 첨가한 후 혼합시켜주었다. 이후, 0.1N KOH 0.1ml을 추가로 첨가한 후 30초간 볼텍싱 처리해주었으며, 이후, 글리세린 170 mg 을 추가로 첨가한 후 볼텍싱 처리하여 완성하였다.
비교예 2: CMC-미녹시딜 하이드로겔 포함 조성물의 제조
카복시메틸셀룰로오스(CMC) 15mg을 0.25ml 증류수에 넣고 혼합하여 제1용액을 제조하였다. 미녹시딜 12mg을 프로필렌글리콜:에탄올:증류수를 5:3:2의 부피비로 혼합한 용매 0.2ml에 녹인 뒤, 30초간 볼텍싱 처리 및 1분간 초음파 처리하여 제2 용액을 제조하였다. 이후, 제1용액과 제2 용액을 혼합하여 혼합용액을 제조하였다. 이후, 혼합용액에 FeSO4 30mg을 1ml 증류수에 용해시켜 제조한 제3용액 0.1ml을 첨가한 후 혼합시켜주었다. 이후, 0.1N KOH 0.1ml을 추가로 첨가한 후 30초간 볼텍싱 처리해주었으며, 이후, 글리세린 170 mg 을 추가로 첨가한 후 볼텍싱 처리하여 완성하였다.
실시예: 풀빅산-CMC-미녹시딜 하이드로겔 포함 조성물의 제조
풀빅산 2.5mg과 카복시메틸셀룰로오스(CMC) 15mg을 0.25ml 증류수에 넣고 섞어 제1용액을 제조하였다. 미녹시딜 12mg을 프로필렌글리콜:에탄올:증류수를 5:3:2의 부피비로 혼합한 용매 0.2ml에 녹인 뒤, 30초간 볼텍싱 처리 및 1분간 초음파 처리하여 제2 용액을 제조하였다. 이후, 제1용액과 제2 용액을 혼합하여 혼합용액을 제조하였다. 이후, 혼합용액에 FeSO4 30mg을 1ml 증류수에 용해시켜 제조한 제3용액 0.1ml을 첨가한 후 혼합시켜주었다. 이후, 0.1N KOH 0.1ml을 추가로 첨가한 후 30초간 볼텍싱 처리해주었으며, 이후, 글리세린 170 mg을 추가로 첨가한 후 볼텍싱 처리하여 완성하였다.
도 2는 앞서 비교예 1과 실시예에 의해 제조된 조성물을 보여주는 사진으로, 왼쪽(Control)이 비교예 1에 의해 제조된 풀빅산-CMC 하이드로겔 포함 조성물, 오른쪽(Capsule)이 실시예에 의해 제조된 풀빅산-CMC-미녹시딜 하이드로겔 포함 조성물에 해당하는 사진이다.
실험예2: 미녹시딜의 완효성 방출 실험
(1) 샘플준비
비교예 1과 같이 제조된 풀빅산-CMC 하이드로겔 포함 조성물과 실시예와 같이 제조된 풀빅산-CMC-미녹시딜 하이드로겔 포함 조성물을 준비하였다.
(2) 실험방법
각 샘플들을 증류수 10ml에 넣은 후, 롤러 믹서 위에서 배양하였다. 이후 8시간마다 3,500rpm으로 5분간 원심 분리하여 상등액을 분리하였으며, 증류수 10ml를 새롭게 넣어 다시 배양하는 과정을 총 4회 반복하였다(8시간, 16시간, 24시간, 32시간). 이후 4회의 분리를 통해 확보한 상등액 1ml 를 100% 에탄올로 5배 희석한 뒤, 실린지를 이용하여 0.45㎛ 필터로 여과하여 고성능 액체크로마토그래피(HPLC)로 분석하였다. HPLC로부터 검출된 미녹시딜의 peak area를 기반으로 검량선을 통해 농도로 변환하여 그래프로 나타내었다.
(3) 실험결과
도 3은 상기 실험방법에 따른 결과 그래프로, 보다 상세하게는 비교예 1과 실시예에 의해 제조된 조성물을 대상으로 미녹시딜의 완효성 방출 실험을 실시한 결과 그래프이다. 도 3의 그래프에서 X축은 8시간마다 상등액을 분리하고 새로운 증류수를 넣은 회차이고, Y축은 방출된 미녹시딜의 농도에 해당한다.
도 3에 나타난 바와 같이, 비교예 1 대비 본 발명 실시예에 따른 조성물의 경우 미녹시딜이 방출되어 그 농도가 증가하고 있는 것을 볼 수 있으며, 회차가 지남에 따라 서서히 완효성 방출되는 것을 확인하였다.
실험예3 : 풀빅산의 완효성 방출 실험
(1) 샘플준비
비교예 2와 같이 제조된 CMC-미녹시딜 하이드로겔 포함 조성물과 실시예와 같이 제조된 풀빅산-CMC-미녹시딜 하이드로겔 포함 조성물을 준비하였다.
(2) 실험방법
각 샘플들을 증류수 10ml에 넣은 후, 롤러 믹서 위에서 배양하였다. 이후 8시간마다 3,500rpm으로 5분간 원심 분리하여 상등액을 분리하였으며, 증류수 10ml를 새롭게 넣어 다시 배양하는 과정을 총 4회 반복하였다(8시간, 16시간, 24시간, 32시간). 4회의 분리를 통해 확보한 상등액은 실린지를 이용하여 0.45㎛ 필터로 여과한 뒤 1ml 용액을 확보하여 UV-Vis spectrophotometer를 활용하여 파장 450nm에서 측정하여 얻어진 흡광값을 통해 풀빅산을 판단하여 그래프로 나타내었다.
(3) 실험결과
도 4는 상기 실험방법에 따른 결과 그래프로, 보다 상세하게는 비교예 2와 실시예에 의해 제조된 조성물을 대상으로 풀빅산의 완효성 방출 실험을 실시한 결과 그래프이다. 도 4의 그래프에서 X축은 8시간마다 상등액을 분리하고 새로운 증류수를 넣은 회차이고, Y축은 방출된 풀빅산에 의한 흡광값에 해당한다.
도 4에 나타난 바와 같이, 비교예 2 대비 본 발명 실시예에 따른 조성물의 경우 풀빅산이 방출되는 것을 볼 수 있으며, 회차가 지남에 따라 서서히 완효성 방출되는 것을 확인하였다.
실험예4 : 발모 촉진 실험
(1) 샘플준비
S1: 프로필렌글리콜:에탄올:증류수를 5:3:2의 부피비로 혼합한 용액(용매대조)
S2: 미녹시딜 4mg을 프로필렌글리콜:에탄올:증류수를 5:3:2의 부피비로 혼합한 용액 0.2ml에 녹인 뒤, 30초간 볼텍싱 처리 및 1분간 초음파 처리한 용액(액상 미녹시딜 2%)
S3: 비교예1과 같이 제조된 풀빅산-CMC 하이드로겔 포함 조성물(미녹시딜X)
S4: 실시예와 같이 제조된 풀빅산-CMC-미녹시딜 하이드로겔 포함 조성물(미녹시딜 12mg)
(2) 실험방법
발모 촉진 실험에 사용한 쥐는 C57BL/6 마우스로, 체모가 검은색이고 조직학, 면역학적으로 사람의 조건과 유사하며, 7주령부터 모발 주기가 휴지기로 접어드는 특성이 있어 7주령의 마우스를 시험에 주로 사용하는 것으로 알려져 있다. 이에 따라 6주령의 C57BL/6 암컷마우스를 샘타코(오산, 한국)에서 입수하였으며, 7일간의 적응기간 후 7주령이 되었을 때 실험에 사용하였다. 이발기를 이용해 등 부위의 털을 제거한 후, 피부 속에 남아있는 모낭과 미세한 털을 제거하기 위해 제모제를 도포하여 10분간 방치한 후 3회 증류수로 닦아내었고. 24시간의 회복기를 거친 뒤, 도포할 부위에 상처가 없는 쥐를 선택하여 실험에 사용하였다. 도 5는 위와 같은 과정을 보여주는 사진이다.
상기와 같이 준비한 쥐를 대상으로 실험시작일 샘플을 도포하기 시작하였다. S1(용매대조)과 S2(액상 미녹시딜 2%)의 경우 1일 단위로 쥐 1마리당 0.2ml씩 도포해주었고, S3 (풀빅산-CMC 하이드로겔 포함 조성물) 와 S4(풀빅산-CMC-미녹시딜 하이드로겔 포함 조성물)의 경우 3일에 한번씩 도포해주었다. 모든 경우 정해진 시간에 도포해주었으며, 샘플이 흡수될 때까지 잘 도포해주었다.
(3) 실험결과
실험시작일을 0일로 설정하여 8일, 11일, 14일째 털이 자라는 상태를 확인하기 위해 마취 후 사진을 촬영하였으며, 도 6에 나타내었다.
도 6에 나타난 바와 같이, 8일째부터 새로운 모낭이 생성됨에 따라 쥐의 등이 서서히 검게 변하는 것을 볼 수 있었다. 특히 S4(풀빅산-CMC-미녹시딜 하이드로겔 포함 조성물)의 경우가 평균적으로 다른 샘플들의 경우보다 더 검게 변하는 것을 볼 수 있었다. 이러한 차이는 시간이 경과할수록 더욱 크게 나타났으며, 14일째 결과를 보면 S4(풀빅산-CMC-미녹시딜 하이드로겔 포함 조성물)의 경우만 5마리의 쥐 모두 등이 완전히 새로 생성된 털로 검게 뒤덮인 것을 확인할 수 있었다.
결과적으로 본 발명에 따른 발모 촉진용 조성물의 경우 미녹시딜 및 이를 함유하고 있는 풀빅산 함유 고분자를 포함하여 이루어진 고분자 하이드로겔이 미녹시딜과 풀빅산을 동시에 방출함으로써 액상 미녹시딜 대비 발모 촉진 효과가 우수할 뿐 아니라 미녹시딜과 풀빅산의 완효성 방출이 가능함으로써 1회 도포만으로 3일간 매일 도포한 것 이상의 발모 효과를 나타내어 도포 횟수를 획기적으로 줄여 사용 편의성을 높인 효과를 갖는다.
실험예5 : CMC, 풀빅산, 철 유/무에 따른 하이드로젤 형성과 견고성 평가
(1) 샘플준비
Y1: 실시예와 같이 제조된 풀빅산-CMC-미녹시딜 하이드로겔 포함 조성물(미녹시딜 12mg) <CMC-Fulvic-Fe-Minoxidil>
Y2: 상기 Y1의 제조과정에서 “혼합용액에 FeSO4 30mg을 1ml 증류수에 용해시켜 제조한 제3용액 0.1ml을 첨가”하는 과정 제외 <CMC-Fulvic-Minoxidil>
Y3: 상기 Y1의 제조과정에서 “카복시메틸셀룰로오스(CMC) 15mg”를 섞는 과정 제외 <Fulvic-Fe-Minoxidil>
Y4: 상기 Y1의 제조과정에서 “풀빅산 2.5mg”를 섞는 과정 제외 <CMC-Fe-Minoxidil>
(2) 실험방법
도 8을 참고하면, 하이드로젤 형태의 Y1 내지 Y4를 제조하여 증류수 10ml에 녹인 뒤 8시간 인큐베이팅하고 3,500 rpm 조건 하에서 5분간 원심분리한 뒤에, 상등액을 버린 후 펠렛의 무게를 측정한다. 10ml 증류수를 더 가하여 8시간 인큐베이팅 과정으로 순서를 반복하면서 펠렛 무게를 측정한다.
(3) 실험결과
도 9를 참고하면, 초기값(0)을 기준으로 8시간 단위로 펠렛의 중량을 측정하였을 때 본 발명의 바람직한 실시예에 따른 Y1 샘플의 경우 시간이 경과하더라도 형태가 유지되면서 중량의 손실이 최소화되는 것을 볼 수 있었다(최초 8시간 경과 후의 중량 증가는 수분 흡수에 따른 결과임).
반면, Y2 및 Y3 샘플은 시간 경과에 따라 급격한 중량 손실이 발생되었으며, Y4의 경우에는 미녹시딜의 완효성 방출이 이루어지지 못할 정도로 젤이 너무 단단한 것을 확인할 수 있었다.
실험예6 : 경피투과실험을 통한 풀빅산의 피부 투과 여부 검증
(1) 샘플준비
S1: 5%의 Free 미녹시딜 0.25ml를 증류수 0.5ml에 혼합
S2: 5%의 Free 미녹시딜 0.25ml와 풀빅산 10mg를 0.5ml 증류수에 녹인 수용액을 혼합
(2) 실험방법
도 10은 Franz Cell 장비의 모식도로서, 이는 피부에 바르거나 붙임으로써 효과를 나타내는 약품이나 화장품 등의 성분에 대한 피부 흡수-투과도를 시간대별로 측정하기 위한 시험장비이다. Donor Chamber로부터 약물이 membrane을 투과하여 Receptor 용액으로 확산되며, 온도는 피부와 비슷한 32±1℃로 유지한다.
도 11을 참고할 때, S1 및 S2 샘플을 각각 Donor chamber에 투입하고 Receptor chamber에는 모두 4ml의 증류수와 4ml의 에탄올이 혼합된 용매를 투입하여 샘플별 Franz cell 장비를 구성하였고 셀룰로오스 멤브레인을 사용하였다.
37℃ 조건 하에서 12시간 동안 반응시켰으며 receptor 용액을 약 7ml 수집하여 2일간 95℃ 조건 하의 핫 플레이트에서 응결시켜 1.5ml 결과물을 수확하였다.
(3) 실험결과
도 12의 좌측 사진은 S1 결과물과 S2 결과물의 외관을 나타내는 사진이며 사진의 우측 3개 시료가 풀빅산이 포함된 S2 샘플로 진행된 실험 결과물로서 육안으로 보더라도 풀빅산이 함유된 모습(노란색을 나타냄)을 확인할 수 있었다.
도 12의 우측 그래프는 S1 샘플에 대한 실험 결과물(좌측 그래프)과 S2 샘플에 대한 실험 결과물(우측 그래프)의 450nm 파장에 대한 흡광도를 나타낸 그래프로서, S2 샘플 결과물의 경우 풀빅산이 다량 함유되어 있다는 것을 확인할 수 있었다. 결과적으로, 풀빅산은 고분자 물질임에도 불구하고 높은 피부 투과도를 보인다는 것을 확인할 수 있었다.
실험예7 : Free minoxidil, gel minoxidil 처리에 따른 쥐 혈중 미녹시딜 농도 정량 분석 결과
(1) 샘플준비
S1: 미녹시딜 12mg을 프로필렌글리콜, 에탄올 및 증류수가 5:3:2의 부피비로 혼합된 혼합용매 0.2ml에 섞은 조성물 <Free minoxidil>
S2: 실시예와 같이 제조된 풀빅산-CMC-미녹시딜 캡슐 포함 조성물(미녹시딜 12mg) <Hydrogel minoxidil>
(2) 실험방법
일반적인 실험용 생쥐보다 몸집이 크고 꼬리가 긴 쥐(rat) 10마리를 사용하였으며 5마리는 S1 샘플을, 나머지 5마리는 S2 샘플을 적용하였다.
쥐의 등에 난 털을 제거한 후 S1 및 S2 샘플을 도포하였다. 도포 후 24시간 및 48시간 간격을 두고 쇄골하정맥에서 약 0.2ml의 피를 채혈하였다. 채혈한 피는 0.5 M의 EDTA 10㎕와 섞어 10초간 볼텍싱하였고, 이후 13,000 rpm, 4'C에서 15분간 원심분리하여 혈장을 분리한 다음 혈장 50㎕와 메탄올 149㎕를 혼합하였다. 여기에 타이레놀(=internal standard)을 1ppm이 되도록하여 1㎕를 스파이킹하였다.
혈장-메탄올-타이레놀 200㎕ 용액을 20초씩 볼텍싱한 다음 13,000 rpm, 4'C에서 15분간 원심분리한 다음, 펠렛을 제외한 상등액 180㎕을 수집하여 LC-Vial에 옮겨 담았다.
미녹시딜 검량선을 그리기 위해, S1 또는 S2 샘플을 도포하지 않은 쥐로부터 채혈한 공혈장 48㎕에 메탄올 149㎕을 섞은 다음, 타이레놀 1 ppm이 되도록 1㎕을 스파이킹하고, 미녹시딜은 각 0.0001, 0.0005, 0.001, 0.001, 0.01, 0.05, 0.1, 0.5, 1, 2.5 ppm이 되도록 1㎕을 스파이킹 하였다.
공혈장-메탄올-타이레놀-미녹시딜 200㎕ 용액을 20초씩 볼텍싱한 다음, 13,000 rpm, 4'C에서 15분간 원심분리한 후, 펠렛을 제외한 상등액 180㎕을 수집하여 LC-Vial에 옮겨 담았다.
전처리가 끝난 모든 샘플에 대해 ESI-LC-Q-TOF MS 분석을 실시하였다.
<LC 분석 조건>
Mobile phase: DW (0.1% Formic acid) / ACN (0.1% Formic acid)
Flow rate: 0.4 ml/min
Analyzing time: 10 min
Mode: Isocratic
UV wavelength: 229 nm
<Mass 분석 조건>
Polarity: Positive
Spray voltage: 5500 V
Analyzing time: 10 min
Ion source gas 1: 50 psi
Ion source gas 2: 50 psi
Curtain gas: 30 psi
CAD gas: 7
Temperature: 450'C
TOF start mass: 50 Da
TOF stop mass: 500 Da
Declustering potential (DP): 80 V
Collision energy (CE): 10 V
<Mass Mass 분석 조건>
Mode: MRM
Minoxidil precursor ion: 210.14
Minoxidil fragment ion: (1) 164.1341, DP: 125 V, CE: 20 V
Minoxidil fragment ion: (2) 110.0851, DP: 125 V, CE: 30 V
Paraceptamol precursor ion: 152.07
Paraceptamol fragment ion: (1) 110.0624, DP: 90 V, CE: 20 V
Paraceptamol fragment ion: (2) 65.0395, DP: 90 V, CE: 40 V
(3) 실험결과
도 13을 참고할 때, 24시간 경과되었을 때 쥐 혈중 미녹시딜 농도는 Free 미녹시딜(S1) 샘플 대비 Hydrogel 미녹시딜(S2) 샘플이 상당 수준 높은 것을 확인할 수 있었으며, 48시간이 경과되었을 땐 S2 샘플에 한하여 혈중 미녹시딜이 검출되었다.
쥐의 등 표면에 도포된 후 오랜 기간 잔류하면서 완효성 방출을 통해 미녹시딜을 제공하기 때문에 장기간 혈중 미녹시딜 농도가 높은 수준을 유지하는 것으로 판단된다.
실험예8 : 풀빅산 처리에 따른 유기 용매의 세포 독성 감소 효과 확인 및 세포생존성 평가
(1) 샘플준비
S1: 프로필렌글리콜, 에탄올 및 증류수를 5:3:2 부피비로 혼합한 혼합용매 5ml
S2: S1의 혼합용매 5ml에 풀빅산 10mg을 섞은 혼합물
S3: S1의 혼합용매 5ml에 풀빅산 30mg을 섞은 혼합물
(2) 실험방법
한국세포주은행(KCLB)에서 세포주 L929를 분양 받았고, 10% Fetal Bovine Serum (FBS, Gibco) 및 5% Antibiotics/antimycotics (Sigma Aldrich)을 함유한 MEM 성장배지를 사용하였다.
세포주는 5% CO2, 37℃ 및 습도가 조절된 배양기에서 배양하였다. 세포가 플라스크에 80% 정도 차게 되면 Pohsphate-buffered saline (PBS)로 세척한 후 1ml Trypsin/EDTA (Sigma Aldrich)를 배양 접시에 넣고 37℃에서 5분 동안 반응시킨 후 성장배지로 10배 희석하여 centrifuge한 뒤에 계대 배양하였다. 배지는 48시간마다 교환하여 세포를 배양하였다.
희석하여 준비한 시료를 100㎕씩 처리한 후 CO2 배양기(37℃, humidified)에. L929 세포는 MEM 성장배지에 현탁하여 96 well microplate에 1 Х 104 cells/500 ㎕ 성장배지/well (well 당 200 ㎕씩 세반복)로 분주 후 CO2 배양기에서 24 시간 배양하였다.
24 시간 배양 후 플레이트의 배양액 제거 후 각 well에 농도별 서 24 시간 배양하였고, WST-1 시약을 각 well에 처리 후 CO2 배양기에서 25분 간 반응시켰다.
반응 완료된 배지를 Microplate reader를 이용하여 420 nm 파장 흡광도 측정 결과를 산출하였다.(세포생존율 (%) = (시험군 OD420 / 공시험액 대조군 OD420) × 100)
(3) 실험결과
도 14a를 보면 미녹시딜 용해도 증가를 위해 용매로서 첨가되는 유기용매에 의한 세포 독성이 확인되었다. 다만, 미녹시딜을 일정량 첨가한 도 14b 및 도14c의 그래프를 참고할 때, 풀빅산 존재 하에서는 유기용매에 의한 세포독성이 저감되는 것을 확인할 수 있었다.
실험예9 : TEM 투과 현미경을 활용한 풀빅산의 자가조립 여부 확인
(1) 샘플준비
S1: 풀빅산 100mg을 2ml의 증류수에 혼합한 직후에 0.45㎛ 시린지 필터를 통과한 여과액
S2: 풀빅산 100mg을 2ml 증류수에 혼합한 후 1주일 이후에 0.45㎛ 시린지 필터를 통과한 여과액
(2) 실험방법
S1 및 S2 샘플 각 20㎕을 5분간 formvar/carbon 코팅된 니켈 그리드에 위치시킨 뒤, 5%의 아세트산우라닐(uranyl acetate)로 3분간 염색하고, 세척 후 에어 건조를 30분간 실시한다.
각 샘플에 대해 120 kV의 Accelerating voltage 조건에서 TEM(Tecnai G2 spirit twin (FEI, Netherlands)) 이미지를 촬영하였다.
(3) 실험결과
도 15를 참고하면, 용매 혼합 직후의 풀빅산(S1) 샘플과 대비하여 1주일이 경과된 이후의 풀빅산(S2) 샘플에서 입자들이 자가조립(self-assembly)을 통해 일정한 구조체를 형성한 모습을 확인할 수 있었다.
이를 통해 풀빅산이 자가조립을 통해 미녹시딜의 피부 흡수와 완효성 방출 등 기능을 발휘하기 위한 매개체(vehicle) 역할을 수행할 것을 예상할 수 있다.
이상 첨부된 도면을 참조하여 본 발명의 실시 예들을 설명하였지만, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 그 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시 예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다.

Claims (7)

  1. 미녹시딜; 및
    상기 미녹시딜을 함유하고 있는 풀빅산 함유 고분자;를 포함하며,
    미녹시딜과 풀빅산을 동시에 완효성 방출하는 것을 특징으로 하는,
    풀빅산 및 미녹시딜 함유 고분자 하이드로겔.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 풀빅산 함유 고분자는,
    하이드로겔 형태를 가짐으로써 미녹시딜을 함유하고 있는 것을 특징으로 하는,
    풀빅산 및 미녹시딜 함유 고분자 하이드로겔.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 풀빅산 함유 고분자의 고분자는,
    카복시메틸셀룰로오스인 것을 특징으로 하는,
    풀빅산 및 미녹시딜 함유 고분자 하이드로겔.
  4. 제1항에 있어서,
    고분자 하이드로겔로부터 방출되는 풀빅산에 의해 미녹시딜의 방출 속도가 조절되는 것을 특징으로 하는,
    풀빅산 및 미녹시딜 함유 고분자 하이드로겔.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 풀빅산 및 미녹시딜 함유 고분자 하이드로겔을 유효성분으로 포함하는, 발모 촉진용 조성물.
  6. (a) 풀빅산과 고분자 하이드로겔의 원료인 고분자를 증류수에 넣고 혼합하여 제1 용액을 제조하는 단계;
    (b) 미녹시딜을 용매에 넣고 용해시켜 제2 용액을 제조하는 단계;
    (c) 상기 제조된 제1 용액과 제2 용액을 혼합하여 혼합용액을 제조하는 단계; 및
    (d) 상기 제조된 혼합용액에 황산철(FeSO4)을 증류수에 용해시켜 제조한 제3 용액을 첨가하여 혼합해주는 단계;를 포함하는,
    풀빅산 및 미녹시딜 함유 고분자 하이드로겔을 유효성분으로 포함하는 발모 촉진용 조성물의 제조방법.
  7. 제6항에 있어서,
    상기 (d) 단계 이후,
    (e) 수산화칼륨(KOH) 용액을 더 첨가하여 혼합해주는 단계; 및
    (f) 글리세린을 더 첨가하여 혼합해주는 단계;를 더 포함하는 것을 특징으로 하는,
    발모 촉진용 조성물의 제조방법.
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