WO2022230966A1 - タマリンド分解物、酪酸産生菌増殖促進剤、腸内酪酸産生用組成物、並びに、タマリンド分解物の製造方法 - Google Patents

タマリンド分解物、酪酸産生菌増殖促進剤、腸内酪酸産生用組成物、並びに、タマリンド分解物の製造方法 Download PDF

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WO
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tamarind
decomposition product
butyric acid
decomposition
molecular weight
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健太 山西
新 栗原
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住友ファーマフード＆ケミカル株式会社
学校法人近畿大学
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    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/125—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives containing carbohydrate syrups; containing sugars; containing sugar alcohols; containing starch hydrolysates
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    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof

Definitions

  • the present invention provides a tamarind decomposition product that is a decomposition product of tamarind gum, a butyric acid-producing bacterium growth promoter containing the tamarind decomposition product, a composition for producing intestinal butyric acid containing the tamarind decomposition product, and the production of the tamarind decomposition product. Regarding the method.
  • Patent Document 1 proposes using polysaccharides such as agarose to proliferate specific bacteria in the intestine and improve the intestinal environment with the metabolites produced by these bacteria.
  • the present invention provides a tamarind hydrolyzate excellent in the growth of butyric acid-producing bacteria, a butyric acid-producing bacterium growth promoter and intestinal butyric acid-producing composition containing such a tamarind hydrolyzate, and a method for producing such a tamarind hydrolyzate.
  • the task is to provide Another object of the present invention is to provide a tamarind decomposition product that has little effect on taste and flavor (viscosity) when added to foods, beverages, pharmaceuticals, supplements, and the like.
  • the tamarind decomposition product according to the present invention is It is a decomposition product of tamarind gum and has a weight average molecular weight of 70,000 or less.
  • butyric acid-producing bacterium growth promoter contains the tamarind decomposition product.
  • composition for producing intestinal butyric acid according to the present invention contains the above-mentioned tamarind hydrolyzate.
  • tamarind gum is decomposed until the weight average molecular weight becomes 70,000 or less to produce a tamarind decomposition product, which is a decomposition product of tamarind gum.
  • FIG. 1 shows the structure of a sugar chain contained in a tamarind decomposition product according to one embodiment.
  • 2 is a GPC chromatogram of tamarind gum according to Comparative Example 1.
  • FIG. 4 is a GPC chromatogram of a decomposition product of tamarind gum according to Comparative Example 2.
  • FIG. 1 is a GPC chromatogram of a tamarind decomposition product according to Example 1.
  • FIG. 3 is a GPC chromatogram of a tamarind decomposition product according to Example 3.
  • FIG. 4 is a GPC chromatogram of a tamarind decomposition product according to Example 4.
  • FIG. 4 is a GPC chromatogram of a tamarind decomposition product according to Example 5.
  • FIG. 1 shows the structure of a sugar chain contained in a tamarind decomposition product according to one embodiment.
  • 2 is a GPC chromatogram of tamarind gum according to Comparative Example 1.
  • FIG. 4 is a GPC chromatogram of
  • FIG. 2 is a graph showing the growth-promoting effect of intestinal bacteria by tamarind gum (weight average molecular weight of 6,360,000) according to Comparative Example 1.
  • FIG. 10 is a graph showing the growth-promoting effect of intestinal bacteria by a decomposition product of tamarind gum (weight average molecular weight: 1,310,000) according to Comparative Example 2.
  • FIG. 1 is a graph showing the growth-promoting effect of intestinal bacteria by a tamarind decomposition product (weight average molecular weight: 67,300) according to Example 1.
  • FIG. 2 is a graph showing the effect of promoting the growth of intestinal bacteria by the tamarind decomposition product (weight average molecular weight: 29,000) according to Example 2.
  • FIG. 10 is a graph showing the growth-promoting effect of intestinal bacteria by a tamarind decomposition product (weight average molecular weight: 16,700) according to Example 3.
  • FIG. 10 is a graph showing the effect of promoting the growth of intestinal bacteria by a tamarind decomposition product (weight average molecular weight: 11,700) according to Example 4.
  • FIG. 10 is a graph showing the growth-promoting effect of intestinal bacteria by a tamarind decomposition product (weight average molecular weight: 973) according to Example 5.
  • FIG. 2 is a graph showing the growth-promoting effect of inulin on intestinal bacteria according to Reference Example 1.
  • FIG. 1 is a graph showing growth-promoting effects of common oligosaccharides on various types of bacteria. 1 is a graph comparing the contents of organic acids in culture supernatants of Rosebria intestinalis, which is a butyric acid-producing bacterium.
  • a tamarind decomposition product according to one embodiment will be described below.
  • the tamarind decomposition product according to the present embodiment is a decomposition product of tamarind gum and has a weight average molecular weight of 70,000 or less. Such a weight-average molecular weight tamarind hydrolyzate is excellent for growing butyric acid-producing bacteria.
  • the butyric acid-producing bacterium is a bacterium that feeds on the tamarind decomposition product of the present embodiment and produces butyric acid.
  • the butyric acid-producing bacterium that grows on the tamarind decomposition product of the present embodiment is, for example, a bacterium of the genus Rosebria, more specifically, Roseburia Intestinalis.
  • the tamarind gum is a thickening polysaccharide obtained from tamarind (Tamarindus Indica L.) seeds.
  • the tamarind gum contains a sugar chain having a structure called xyloglucan.
  • Xyloglucan in the tamarind gum has a main chain composed of ⁇ -glucose and side chains composed of ⁇ -xylose and galactose.
  • the weight average molecular weight of the tamarind gum, which is the raw material for the tamarind decomposition product may be, for example, 200,000 or more, 400,000 or more, or 800,000 or more.
  • the weight average molecular weight of the tamarind gum obtained from the seeds is usually about 500,000.
  • the weight average molecular weight can be measured by gel permeation chromatography (GPC) as described in the Examples. It is important that the weight average molecular weight of the decomposed product of tamarind is 70,000 or less, preferably 60,000 or less, more preferably 50,000 or less, and 40,000 or less. is more preferable, 30,000 or less is even more preferable, and 20,000 or less is particularly preferable. Moreover, the weight average molecular weight of the tamarind decomposition product is preferably 900 or more. The weight average molecular weight of the decomposed product of tamarind may be 500 or more, 600 or more, 700 or more, 800 or more, 5,000 or more, 8,000 or more, 10,000 or more, or 12,000 or more.
  • the tamarind decomposition product is excellent in increasing the growth of butyric acid-producing bacteria more than other bacteria other than butyric acid-producing bacteria. . That is, the tamarind decomposition product is excellent in selectively growing butyric acid-producing bacteria.
  • the weight average molecular weight of the tamarind decomposition product is preferably 500 or more and 25,000 or less (preferably 500 or more and 20,000 or less), and 600 or more and 25,000 or less (preferably 600 20,000 or less), more preferably 700 or more and 25,000 or less (preferably 700 or more and 20,000 or less), 800 or more and 25,000 or less (preferably 800 or more and 20,000 or less) below) is even more preferable.
  • each peak of the tamarind degradation product preferably has a peak top molecular weight of 850 to 50,000.
  • the tamarind decomposition product preferably exhibits a first peak P1 with a peak top molecular weight of 30,000 to 50,000 in the chromatogram, and a peak top molecular weight of 3,100 to 8,000. It is more preferable to exhibit a second peak P2 of 000, more preferably a third peak P3 having a peak top molecular weight of 2,000 to 3,000, and a fourth peak P3 having a peak top molecular weight of 850 to 1,500. It is even more preferable to show the peak P4 of
  • the peak top molecular weight of the second peak P2 is preferably 3,500 to 7,500. Further, the peak top molecular weight of the third peak P3 is preferably 2,000 to 2,300. The peak top molecular weight of the fourth peak P4 is preferably 900 to 1,100, more preferably 950 to 1,100.
  • the tamarind decomposition product preferably shows a first peak P1 in the chromatogram, more preferably shows a first peak P1 and a second peak P2, and the first peak P1 and the second peak It is more preferred to show P2 and a third peak P3, and even more preferred to show at least a fourth peak P4.
  • the decomposed product of tamarind preferably contains a sugar chain having a molecular structure in which one or more repeating units consisting of 7 to 9 sugars are bonded.
  • the repeating unit has a backbone composed of four ⁇ -glucoses linked by 1,4-glycosidic bonds.
  • the repeating unit includes three ⁇ -xyloses linked by 1,6-glycosidic bonds to the 6-position hydroxyl groups of three ⁇ -glucoses out of the four ⁇ -glucoses in the main chain, and one or two It has a side chain composed of one or two galactoses linked by a 1,2-glycosidic bond to the 2-hydroxyl group of ⁇ -xylose.
  • the side chain may be composed only of ⁇ -xylose.
  • the said tamarind degradation product may contain the sugar chain which consists of one said repeating unit. That is, the tamarind degradation product may contain a sugar chain consisting of a main chain composed of four ⁇ -glucoses and side chains composed of 3 to 5 ⁇ -xylose and galactose.
  • the tamarind decomposition product of the present embodiment preferably constitutes a composition for producing intestinal butyric acid containing it as an active ingredient.
  • the tamarind decomposition product of the present embodiment is preferably contained in various products to constitute food and drink compositions.
  • Such products are preferably those that are orally ingested, and examples include foods such as various beverages, jellies, jams, sweets, frozen desserts, sauces, sprinkles, breads, cooked rice, side dishes, retort foods, and foods for people with difficulty in chewing or swallowing. mentioned.
  • these products are food and drink compositions for producing intestinal butyric acid containing the tamarind degradation product of the present embodiment as an active ingredient.
  • the tamarind decomposition product of the present embodiment has little effect on the taste and flavor of food and drink, the above-mentioned products retain their original taste and flavor.
  • the food and drink composition for producing intestinal butyric acid may be feed for reared animals.
  • the tamarind decomposition product since the tamarind decomposition product does not exhibit thickening properties unlike polysaccharides such as tamarind gum, it can be contained in various products at high concentrations. More specifically, the viscosity (E-type viscosity, temperature 20°C, shear rate 50 [1/ s]) is 50 mPa ⁇ s or less. As a result, even when the tamarind decomposition product is contained in the food composition at a high concentration, the fluidity of the food composition can be prevented from lowering.
  • the viscosity is preferably 40 mPa ⁇ s or less, more preferably 20 mPa ⁇ s or less, and even more preferably 15 mPa ⁇ s or less.
  • the content of the tamarind decomposition product relative to the total mass of the food and drink composition may be 1% by mass or more, 3% by mass or more, or 10% by mass or more. Moreover, the content may be 70% by mass or less, 50% by mass or less, and usually 20% by mass or less.
  • the tamarind decomposition product of the present embodiment functions as food for butyric acid-producing bacteria in the intestine and causes the butyric acid-producing bacteria to grow.
  • intestinal butyric acid increases, and the intestinal environment can be improved. Therefore, the tamarind decomposition product of the present embodiment is suitable for use as an agent for promoting the growth of butyric acid-producing bacteria.
  • the tamarind decomposition product of the present embodiment is excellent in growing more butyric acid-producing bacteria than other bacteria other than butyric acid-producing bacteria. Therefore, the tamarind decomposition product of the present embodiment is suitable for use as a selective growth promoter for butyric acid-producing bacteria.
  • the intake of the tamarind decomposition product is preferably 0.05 g/kg body weight or more, more preferably 0.1 g to 2 g/kg body weight, and 0.2 to 1 g/kg body weight per day. more preferably 0.2 to 0.4 g/kg body weight.
  • the subject to be ingested with the tamarind decomposition product is preferably a human.
  • the subject may be mammals such as monkeys, rabbits, dogs, cats, cows, horses, and pigs.
  • the butyric acid production growth promoter is preferably, for example, a food or drink additive for preparing the food or drink composition.
  • the butyric acid production growth promoter may be a drug such as a drug or a supplement.
  • the ratio of the tamarind decomposition product to the total mass of polysaccharides contained in the agent for promoting the growth of butyric acid-producing bacteria is preferably 90% by mass or more, more preferably 95% by mass or more. It is preferable that the butyric acid-producing bacteria growth promoter does not substantially contain polysaccharides other than the tamarind decomposition product. This makes the agent for promoting the growth of butyric acid-producing bacteria excellent in selectively growing butyric acid-producing bacteria.
  • the decomposed product of tamarind contained in the agent for promoting the growth of butyric acid-producing bacteria preferably exhibits at least the fourth peak P4 in the chromatogram. This further makes it excellent for selectively growing butyric acid-producing bacteria.
  • the agent for promoting the growth of butyric acid-producing bacteria may contain a carrier that supports the decomposed product of tamarind and a diluent that dilutes the decomposed product of tamarind.
  • Such carriers or diluents include excipients, diluents, bulking agents, disintegrants, stabilizers, preservatives, buffers, emulsifiers, flavoring agents, coloring agents, sweeteners, thickening agents, flavoring agents, solubilizing agents. agents and the like.
  • the dosage form is preferably granules, powders, tablets, pills, capsules, liquids, and the like.
  • the dosage form is preferably an oral drug such as tablets, capsules, granules, powders, fine granules, drops, and liquids for internal use.
  • the dosage form may be an injection.
  • the content of the tamarind decomposition product relative to the total mass of the butyric acid-producing bacteria growth promoter may be 50% by mass or more, 60% by mass or more, or 70% by mass or more, It may be 80% by mass or more, or 90% by mass or more.
  • the method for producing the tamarind decomposition product comprises a decomposition step of decomposing the tamarind gum to obtain the tamarind decomposition product, and a purification step of purifying the tamarind decomposition product.
  • pulverized material obtained by pulverizing tamarind seeds may be used, or tamarind seed extract obtained by extracting the tamarind gum from tamarind seeds or pulverized material may be used. good. Also, a highly purified product obtained by separating and purifying the pulverized product or the tamarind seed extract may be used.
  • the weight average molecular weight is preferably 60,000 or less, more preferably 50,000 or less, still more preferably 40,000 or less, still more preferably 30,000 or less.
  • the tamarind gum is decomposed to a molecular weight of 20,000 or less, particularly preferably to 20,000 or less.
  • the decomposition step it is preferable to decompose the tamarind gum until a peak with a peak top molecular weight of 50,000 or less appears in the chromatogram. More specifically, in the decomposition step, in the chromatogram, preferably until at least the first peak P1 appears, more preferably until the first peak P1 and the second peak P2 appear, still more preferably until the first peak P1 and the second peak P2 appear. Decomposing the tamarind gum until one peak P1, a second peak P2 and a third peak P3 appear, more preferably until a fourth peak P4 appears.
  • the decomposition step it is preferable to decompose the tamarind gum with an enzyme to obtain the tamarind decomposition product.
  • the enzyme preferably decomposes the glycosidic bond ( ⁇ -1,4-glycosidic bond) of the main chain of the tamarind gum. Cellulases are preferred as such enzymes.
  • the tamarind gum may be decomposed by hydrolysis with an acid. That is, the tamarind decomposition product may be an enzymatic decomposition product obtained by decomposing the tamarind gum with the enzyme, or an acid hydrolyzate obtained by acid hydrolysis.
  • the decomposition step it is preferable to decompose the tamarind gum in water in which the enzyme can stably exist and exhibit activity. Specifically, in the decomposition step, it is preferable to decompose the tamarind gum in a dispersion liquid in which the tamarind gum and the enzyme are dispersed and maintained at a pH of 3 to 7 and a temperature of 25 to 60°C.
  • the concentration of the tamarind gum in the dispersion is preferably 60% by mass or less.
  • the decomposition time in the decomposition step is preferably set to 1 hour or longer, more preferably 3 hours or longer, and even more preferably 5 hours or longer.
  • the enzyme is preferably deactivated by heating the dispersion to 80°C or higher, preferably 90°C or higher. That is, the decomposition time in the present embodiment can be adjusted by changing the time from preparation of the dispersion to heating of the dispersion to the above temperature to deactivate the enzyme.
  • the dispersion containing the tamarind decomposition product may be freeze-dried, and the dried product may be pulverized using a mill or the like and sieved to obtain the tamarind decomposition product as an unrefined product. .
  • the unpurified product is purified with an aqueous solution containing a water-soluble organic solvent to obtain the tamarind decomposition product as a purified product.
  • aqueous solution containing a water-soluble organic solvent
  • the purification step of the present embodiment a low-decomposition tamarind decomposition product as a precipitate deposited in the aqueous solution and a high-decomposition tamarind decomposition product as a dissolved product dissolved in the aqueous solution are obtained as purified products.
  • the aqueous solution is preferably selected so that the low-decomposition tamarind decomposition product has a weight-average molecular weight of 10,000 or more. Further, it is preferable to select the aqueous solution so that the weight average molecular weight of the highly decomposed tamarind decomposition product is 1,500 or less, preferably 1,000 or less. From this point of view, lower alcohols such as methanol, ethanol, n-propanol or iso-propanol, and ketone solvents such as acetone are preferable as the water-soluble organic solvent contained in the aqueous solution.
  • a water-insoluble organic solvent such as hexane may be used, or the lower alcohol, the ketone solvent, and the water-insoluble organic solvent may be used in combination.
  • the low-decomposition tamarind decomposition product and the high-decomposition tamarind decomposition product are separated by separating the low-decomposition tamarind decomposition product as a precipitate from the aqueous solution.
  • a conventionally known method can be employed as the separation method, and examples thereof include centrifugation and vacuum filtration.
  • the high-decomposition tamarind decomposition product as a solid is obtained from the aqueous solution.
  • a method for obtaining the high-decomposition tamarind decomposition product as a solid a method of adding water to the residue obtained by concentrating the aqueous solution and freeze-drying is preferable.
  • the high-decomposition tamarind decomposition product has a smaller weight-average molecular weight than the low-decomposition tamarind decomposition product.
  • the high-decomposition tamarind hydrolyzate is excellent in selectively growing butyric acid-producing bacteria.
  • the low-decomposition tamarind decomposition product and the high-decomposition tamarind decomposition product are further freeze-dried, pulverized, and sieved. That is, in the purification step, it is preferable to obtain the low-decomposition tamarind decomposition product and the high-decomposition tamarind decomposition product as solids such as powders.
  • the tamarind decomposition product according to the above embodiment is It is a decomposition product of tamarind gum and has a weight average molecular weight of 70,000 or less.
  • the weight average molecular weight is 70,000 or less, so that the growth of butyric acid-producing bacteria is excellent.
  • butyric acid-producing bacterium growth promoter contains the tamarind decomposition product.
  • the tamarind decomposition product when contained, it is excellent in the growth of intestinal butyric acid-producing bacteria when ingested by animals such as humans.
  • composition for producing intestinal butyric acid according to the above embodiment contains the tamarind hydrolyzate.
  • tamarind gum is decomposed until the weight average molecular weight becomes 70,000 or less to produce a tamarind decomposition product, which is a decomposition product of tamarind gum.
  • tamarind decomposition product that is excellent in the growth of butyric acid-producing bacteria can be produced.
  • the tamarind decomposition product, butyric acid-producing bacterium growth promoter, composition for producing intestinal butyric acid, and the method for producing a tamarind decomposition product according to the present invention are the above-described implementations. It is not limited to the configuration of the form.
  • the tamarind decomposition product, butyric acid-producing bacterium growth promoter, intestinal butyric acid-producing composition, and method for producing tamarind decomposition product according to the present invention are not limited by the above effects.
  • the tamarind decomposition product, butyric acid-producing bacterium growth promoter, intestinal butyric acid-producing composition, and tamarind decomposition product production method according to the present invention can be modified in various ways without departing from the gist of the present invention.
  • the precipitate was washed once with 50 mL of 70% iso-propanol aqueous solution. While loosening the precipitate with a spatula, it was dissolved in deionized water in a centrifuge tube and frozen in a deep freezer set at -35°C overnight or longer. It was freeze-dried and the resulting dried product was ground in a mortar to obtain a powdery low-decomposition tamarind decomposition product. Also, the separated iso-propanol aqueous solution was concentrated by an evaporator, dissolved again in 30 g of distilled water, and frozen overnight or more in a deep freezer set at -35°C. It was freeze-dried in a freeze-dryer, and the resulting dried product was ground in a mortar to obtain a powdery high-decomposition tamarind decomposition product.
  • ⁇ GPC measurement conditions > Sample: 0.1% concentration sample solution (solvent: 0.2M sodium nitrate aqueous solution) Pretreatment: 0.45 ⁇ m membrane filter (DISMIC-13CP) Guard column: Shodex OHpak SB-G Column: Shodex OHpak SB-806M HQ (8.0mmID x 300mmL, 2 columns used in series) Column temperature: 40°C Mobile phase: 0.2 M sodium nitrate aqueous solution Flow rate: 0.8 mL/min Detector: RI Standard product: Dextran and glucose approximation formula: Exponential approximation
  • Example preparation method Weighed 198.0 g of deionized water into a 500 mL beaker. 2.0 g of the sample was dispersed while being stirred at a stirring speed of 600 to 800 rpm with a stirrer equipped with a clover-shaped stirring blade, and completely dissolved by stirring at room temperature for 15 minutes to prepare a 1.0% sample solution.
  • Comparative Example 1 weight average molecular weight 6,360,000
  • Comparative Example 2 weight average molecular weight 1,310,000 having a weight average molecular weight larger than those of Examples were used. In this case, little change was observed in the turbidity of Rosebria intestinalis.
  • FIGS. 10, 11, 12, 13, and 14 when Examples 1 to 5 with a weight average molecular weight of 70,000 or less were used, Rosebria inte An increase in turbidity of Stinaris was observed.
  • Example 2 with a weight average molecular weight of 30,000 or less (weight average molecular weight of 29,000) and Examples 3 to 5 with a weight average molecular weight of 20,000 or less (weight average molecular weights of 16,700, 11,700, 973 ), a prominent increase in turbidity of Rosebria intestinalis compared to that of other bacteria was observed. Therefore, they are considered to have a selective growth-promoting effect on Rosebria intestinalis.
  • FIG. 16 shows the effect of promoting the growth of various bacteria when using raffinose, 1-kestose, and lactulose, which are oligosaccharides commonly used in the food field.
  • oligosaccharides are those that grow multiple bacteria.
  • common oligosaccharides do not have the function of selectively proliferating specific bacteria.
  • Citric acid, tartaric acid, malic acid, succinic acid, lactic acid, fumaric acid, formic acid, acetic acid, propionic acid, iso-butyric acid, n-butyric acid, iso-valeric acid, and n-valeric acid were analyzed.
  • the pretreatment method, measuring apparatus and measuring conditions are as follows. ⁇ HPLC measurement conditions> Sample pretreatment: The culture solution was filtered through a membrane filter with a pore size of 0.20 ⁇ m to obtain a sample solution.
  • Example 1 weight average molecular weight 67,300
  • Example 4 weight average molecular weight 11,700
  • Comparative Example 1 weight average molecular weight 6,360,000
  • Comparative Example 2 weight average molecular weight of 1,310,000
  • Examples of the use of the tamarind decomposition products according to Examples 1 to 5 are as follows.
  • the drug (supplement) as Use Example 1 and the food and drink compositions of Use Examples 2 to 13 below can be ingested without problems, and it is considered that the addition of tamarind decomposition products does not affect the taste and flavor.
  • Tamarind decomposition product 1.0 Gelling agent (manufactured by DSP Gokyo Food & Chemical Co., Ltd., Gelmate NB): 0.8 Dietary fiber (manufactured by DSP Gokyo Food & Chemical Co., Ltd., Herbacell) 2% solution: 25.0 Sugar: 11.0 1/5 concentrated apple clear juice: 12.0 Fructose glucose liquid sugar: 8.0 20% (w/w) citric acid solution: 0.25 20% (w/w) trisodium citrate solution: 0.5 Perfume: 0.1 Water: 41.35 Total 100 (%)
  • Tamarind decomposition product 5.0 Thickener (Gryloid 2A manufactured by DSP Gokyo Food & Chemical Co., Ltd.): 1.6 Chocolate (bitter): 150.0 Whole egg: 130.0 Unsalted butter: 100.0 Granulated sugar: 100.0 Soft flour: 80.0 Total 566.6g
  • Tamarind decomposition product 1.0 Thickener (Kelcogel DGA manufactured by DSP Gokyo Food & Chemical Co., Ltd.): 0.3 Fish (grilled salmon, boiled mackerel, etc.): 50.0 Dashi: 48.7 Total 100 (%)
  • Tamarind decomposition product 1.0 Amido pectin: 0.7 Thickener (Gryloid 2A manufactured by DSP Gokyo Food & Chemical Co., Ltd.): 0.1 Frozen strawberry: 40.0 Granulated sugar: 26.0 Water: Remaining amount 50% Citric acid: Appropriate amount Total 100 (%)
  • Tamarind decomposition product 1.0 Thickener (Gryloid CS-3 manufactured by DSP Gokyo Food & Chemical Co., Ltd.): 0.3 Sugar: 12.0 Skim milk powder: 8.0 Coconut oil: 6.0 Emulsifier: 0.3 Starch syrup (Brix 85°): 5.0 Perfume: 0.1 Pigment: Appropriate amount Water: Remaining total 100 (%)
  • Tamarind decomposition product 1.00 Minced chicken meat: 77.00 Chopped onion: 13.00 Lard: 5.00 Dark soy sauce: 2.00
  • White sugar 1.00 Dietary fiber (manufactured by DSP Gokyo Food & Chemical Co., Ltd., Herbacell): 1.00 Salt: 0.70 White pepper: 0.15 Garlic powder: 0.15 Total 100 (%)
  • Tamarind decomposition product 1.0 Thickener (Gryloid 2A manufactured by DSP Gokyo Food & Chemical Co., Ltd.): 0.2 Beef tallow: 10.0 Cornstarch: 5.0 Salt: 2.6 Sugar: 4.0 Sodium glutamate: 0.2 Skim milk powder: 3.0
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Abstract

タマリンドガムの分解物であり、重量平均分子量が７０，０００以下である、タマリンド分解物。

Description

タマリンド分解物、酪酸産生菌増殖促進剤、腸内酪酸産生用組成物、並びに、タマリンド分解物の製造方法 関連出願の相互参照
　本願は、日本国特願２０２１－０７６１１９号の優先権を主張し、引用によって本願明細書の記載に組み込まれる。
　本発明は、タマリンドガムの分解物であるタマリンド分解物、該タマリンド分解物を含む酪酸産生菌増殖促進剤、該タマリンド分解物を含む腸内酪酸産生用組成物、及び、該タマリンド分解物の製造方法に関する。
　従来、腸内環境を改善するための取り組みがなされている。
　近年の腸内環境に関する研究では、腸内細菌叢（腸内フローラ）における細菌の構成が、老化、免疫、各種疾病などに影響していることが明らかにされている。そこで、腸内細菌叢における特定の細菌を増殖させることが提案されている。
　例えば、特許文献１では、アガロースなどの多糖類を用いることによって腸内の特定の細菌を増殖させ、この細菌が産生する代謝物により腸内環境を改善することが提案されている。
　かかる代謝物として短鎖脂肪酸を産生する腸内細菌が存在する。例えば、特許文献２に記載されているように、短鎖脂肪酸のなかでも酪酸は大腸上皮細胞の主要なエネルギー源となることから、酪酸産生菌を増殖させることにより、腸内環境を改善できることが知られている。また、最近の研究では、酪酸による腸内環境の改善が、大腸がんや自己免疫疾患の予防、感染症やアレルギーの予防及びこれらの症状の軽減に寄与することが報告されている。
日本国特開２０１７－１６３９８０号公報 日本国特開２００４－３４６０４３号公報
　従来、酪酸産生菌自体を含有する薬剤等を服用し、外部から取り入れた菌により腸内の菌数を増やすことが行われている。一方で、腸内の酪酸産生菌の増殖を図る取り組みは十分になされているとは言い難く、その有効な手段が見出されてはいない。
　上記事情に鑑み、本発明は、酪酸産生菌の増殖に優れるタマリンド分解物、かかるタマリンド分解物を含む酪酸産生菌増殖促進剤及び腸内酪酸産生用組成物、並びに、かかるタマリンド分解物の製造方法を提供することを課題とする。また、本発明は、飲食品、医薬品、サプリメント等に加えられた場合に、味や風味（粘性）への影響が少ないタマリンド分解物を提供することを課題としている。
　本発明に係るタマリンド分解物は、
　タマリンドガムの分解物であり、重量平均分子量が７０，０００以下である。
　また、本発明に係る酪酸産生菌増殖促進剤は、前記タマリンド分解物を含有する。
　また、本発明に係る腸内酪酸産生用組成物は、前記タマリンド分解物を含有する。
　また、本発明に係るタマリンド分解物の製造方法は、重量平均分子量が７０，０００以下になるまでタマリンドガムを分解してタマリンドガムの分解物であるタマリンド分解物を製造する。
一実施形態に係るタマリンド分解物が含有する糖鎖の構造を示す。 比較例１に係るタマリンドガムのＧＰＣのクロマトグラムである。 比較例２に係るタマリンドガムの分解物のＧＰＣのクロマトグラムである。 実施例１に係るタマリンド分解物のＧＰＣのクロマトグラムである。 実施例３に係るタマリンド分解物のＧＰＣのクロマトグラムである。 実施例４に係るタマリンド分解物のＧＰＣのクロマトグラムである。 実施例５に係るタマリンド分解物のＧＰＣのクロマトグラムである。 比較例１に係るタマリンドガム（重量平均分子量６，３６０，０００）による腸内細菌の増殖促進効果を示すグラフである。 比較例２に係るタマリンドガムの分解物（重量平均分子量１，３１０，０００）による腸内細菌の増殖促進効果を示すグラフである。 実施例１に係るタマリンド分解物（重量平均分子量６７，３００）による腸内細菌の増殖促進効果を示すグラフである。 実施例２に係るタマリンド分解物（重量平均分子量２９，０００）による腸内細菌の増殖促進効果を示すグラフである。 実施例３に係るタマリンド分解物（重量平均分子量１６，７００）による腸内細菌の増殖促進効果を示すグラフである。 実施例４に係るタマリンド分解物（重量平均分子量１１，７００）による腸内細菌の増殖促進効果を示すグラフである。 実施例５に係るタマリンド分解物（重量平均分子量９７３）による腸内細菌の増殖促進効果を示すグラフである。 参考例１に係るイヌリンによる腸内細菌の増殖促進効果を示すグラフである。 一般的なオリゴ糖による各種細菌の増殖促進効果を示すグラフである。 酪酸産生菌であるロゼブリア・インテスティナリスの培養上清中の有機酸の含有量を比較するグラフである。
　以下、一実施形態に係るタマリンド分解物について説明する。
　本実施形態に係るタマリンド分解物は、タマリンドガムの分解物であり、重量平均分子量が７０，０００以下である。かかる重量平均分子量のタマリンド分解物は、酪酸産生菌を増殖させることに優れる。前記酪酸産生菌は、本実施形態のタマリンド分解物を餌にして酪酸を産生する菌である。
　本実施形態のタマリンド分解物を餌にして増殖する前記酪酸産生菌は、例えば、ロゼブリア属の細菌であり、より具体的には、ロゼブリア・インテスティナリス（Roseburia Intestinalis）である。
　前記タマリンドガムは、タマリンド（Tamarindus Indica L.）の種子から得られる増粘性の多糖類である。前記タマリンドガムは、キシログルカンと呼ばれる構造を有する糖鎖を含有する。前記タマリンドガムにおけるキシログルカンは、β－グルコースにより構成される主鎖と、α－キシロース及びガラクトースにより構成される側鎖とを有する。タマリンド分解物の原料となる前記タマリンドガムの重量平均分子量は、例えば、２００，０００以上であってもよく、４００，０００以上であってもよく、８００，０００以上であってもよい。前記種子より得られる前記タマリンドガムの重量平均分子量は、通常、５００，０００程度である。
　重量平均分子量は、実施例に記載のように、ゲル浸透クロマトグラフィ（ＧＰＣ）によって測定することができる。前記タマリンド分解物の重量平均分子量は、７０，０００以下であることが重要であり、６０，０００以下であることが好ましく、５０，０００以下であることがより好ましく、４０，０００以下であることがさらに好ましく、３０，０００以下であることがより一層好ましく、２０，０００以下であることがとりわけ好ましい。また、前記タマリンド分解物の重量平均分子量は、９００以上であることが好ましい。なお、前記タマリンド分解物の重量平均分子量は、５００以上、６００以上、７００以上、８００以上、５，０００以上、８，０００以上、１０，０００以上、又は１２，０００以上であってもよい。さらに、重量平均分子量が９００～２０，０００であることによって、前記タマリンド分解物が、酪酸産生菌以外の他の細菌の増殖量よりも多くの酪酸産生菌を増殖させることに優れたものとなる。すなわち、前記タマリンド分解物が、選択的に酪酸産生菌を増殖させることに優れたものとなる。かかる選択性を高める上では、前記タマリンド分解物の重量平均分子量は、５００以上２５，０００以下（好ましくは５００以上２０，０００以下）であることが好ましく、６００以上２５，０００以下（好ましくは６００以上２０，０００以下）であることがより好ましく、７００以上２５，０００以下（好ましくは７００以上２０，０００以下）であることがさらに好ましく、８００以上２５，０００以下（好ましくは８００以上２０，０００以下）であることがより一層好ましい。
　図４～図７に示されるように、ＧＰＣ測定により取得されるクロマトグラムは、前記タマリンド分解物の分子量分布を示す。また、該分子量分布は、通常、１以上のピークを示す。そして、このピークの極大点が示すピークトップ分子量から、前記タマリンド分解物の好ましい分解の程度を把握することができる。前記クロマトグラムにおいて、前記タマリンド分解物の各ピークは、８５０～５０，０００のピークトップ分子量を示すことが好ましい。
　より具体的には、前記タマリンド分解物は、前記クロマトグラムにおいて、ピークトップ分子量が３０，０００～５０，０００の第１のピークＰ１を示すことが好ましく、ピークトップ分子量が３，１００～８，０００の第２のピークＰ２を示すことがより好ましく、ピークトップ分子量が２，０００～３，０００の第３のピークＰ３を示すことがさらに好ましく、ピークトップ分子量が８５０～１，５００の第４のピークＰ４を示すことがより一層好ましい。
　さらに、第２のピークＰ２のピークトップ分子量は、３，５００～７，５００であることが好ましい。また、第３のピークＰ３のピークトップ分子量は、２，０００～２，３００であることが好ましい。また、第４のピークＰ４のピークトップ分子量は、９００～１，１００であることが好ましく、９５０～１，１００であることがより好ましい。
　前記タマリンド分解物は、前記クロマトグラムにおいて、第１のピークＰ１を示すことが好ましく、第１のピークＰ１及び第２のピークＰ２を示すことがより好ましく、第１のピークＰ１、第２のピークＰ２及び第３のピークＰ３を示すことがさらに好ましく、少なくとも第４のピークＰ４を示すことがより一層好ましい。
　前記タマリンド分解物は、７～９糖からなる繰り返し単位が１以上結合した分子構造を有する糖鎖を含むことが好ましい。図１に示されるように、前記繰り返し単位は、１，４－グリコシド結合によってつながった４つのβ－グルコースにより構成された主鎖を有する。また、前記繰り返し単位は、前記主鎖の４つのβ－グルコースのうちの３つのβ－グルコースの６位水酸基に１，６－グリコシド結合によってつながった３つのα－キシロースと、１つ又は２つのα－キシロースの２位水酸基に１，２－グリコシド結合によってつながった１つ又は２つのガラクトースと、により構成された側鎖を有する。また、前記繰り返し単位において、前記側鎖は、α－キシロースのみから構成されていてもよい。前記タマリンド分解物は、一つの前記繰り返し単位からなる糖鎖を含有していてもよい。すなわち、前記タマリンド分解物は、４つのβ－グルコースにより構成された主鎖と、３～５つのα－キシロース及びガラクトースにより構成された側鎖とからなる糖鎖を含有していてもよい。
　本実施形態のタマリンド分解物は、これを有効成分として含有する腸内酪酸産生用組成物を構成することが好ましい。例えば、本実施形態のタマリンド分解物は、各種製品に含有されて飲食品組成物を構成することが好ましい。かかる製品としては、経口摂取されるものが好ましく、例えば、各種飲料、ゼリー、ジャム、菓子、冷菓、たれ、ふりかけ、パン、米飯、総菜、レトルト食品、咀嚼・嚥下困難者用食品などの食品が挙げられる。言い換えれば、これらの製品は、本実施形態のタマリンド分解物を有効成分として含有する腸内酪酸産生用飲食品組成物である。本実施形態のタマリンド分解物は、飲食品の味や風味に対する影響が少ないため、上記の製品は、これらが本来有する味や風味が維持されたものとなる。なお、前記腸内酪酸産生用飲食品組成物は、飼育動物の飼料であってもよい。
　また、前記タマリンド分解物は、前記タマリンドガムなどの多糖類のような増粘性を示さないため、各種製品に高濃度で含有させることができる。より具体的には、前記タマリンド分解物を１０質量％で含有する水溶液（タマリンド分解物の質量：水の質量＝９：１）の粘度（Ｅ型粘度、温度２０℃、剪断速度５０［１／ｓ］）は５０ｍＰａ・ｓ以下である。これによって、該タマリンド分解物を飲食品組成物に高濃度で含有させた場合であっても、該飲食品組成物の流動性の低下を抑制することができる。前記粘度は、４０ｍＰａ・ｓ以下であることが好ましく、２０ｍＰａ・ｓ以下であることがより好ましく、１５ｍＰａ・ｓ以下であることがさらに好ましい。前記飲食品組成物の総質量に対する前記タマリンド分解物の含有量は、１質量％以上であってよく、３質量％以上であってもよく、１０質量％以上であってもよい。また、前記含有量は、７０質量％以下であってもよく、５０質量％以下であってもよく、通常は２０質量％以下である。
　本実施形態のタマリンド分解物は、腸内の酪酸産生菌の餌として機能し、酪酸産生菌を増殖させるものである。これに伴って、腸内の酪酸が増加し、腸内環境を改善させることができる。従って、本実施形態のタマリンド分解物は、酪酸産生菌増殖促進剤に用いられるのに好適である。また、本実施形態のタマリンド分解物は、酪酸産生菌以外の他の細菌の増殖量よりも多くの酪酸産生菌を増殖させることに優れる。従って、本実施形態のタマリンド分解物は、酪酸産生菌選択的増殖促進剤に用いられるのに好適である。
　前記タマリンド分解物の摂取量は、１日あたり０．０５ｇ／ｋｇ体重以上であることが好ましく、０．１ｇ～２ｇ／ｋｇ体重であることがより好ましく、０．２～１ｇ／ｋｇ体重であることがさらに好ましく、０．２～０．４ｇ／ｋｇ体重であることがより一層好ましい。
　前記タマリンド分解物を摂取させる対象は、ヒトであることが好ましい。この他、該対象は、サル、ウサギ、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ブタなどの哺乳動物であってもよい。
　次に、前記酪酸産生菌（選択的）増殖促進剤について説明する。
　前記酪酸産生増殖促進剤は、例えば、前記飲食品組成物を調製するための飲食品用添加剤であることが好ましい。また、酪酸産生増殖促進剤は、医薬品やサプリメントなどの薬剤であってもよい。
　前記酪酸産生菌増殖促進剤に含まれる多糖類の総質量に対する前記タマリンド分解物の割合は、９０質量％以上であることが好ましく、９５質量％以上であることがより好ましい。前記酪酸産生菌増殖促進剤は、前記タマリンド分解物以外の多糖類を実質的に含有していないことが好ましい。これによって、前記酪酸産生菌増殖促進剤が、選択的に酪酸産生菌を増殖させるのに優れたものとなる。
　前記酪酸産生菌増殖促進剤に含まれる前記タマリンド分解物は、前記クロマトグラムにおいて、少なくとも第４のピークＰ４を示すことが好ましい。これによって、さらに、選択的に酪酸産生菌を増殖させるのに優れたものとなる。
　前記酪酸産生菌増殖促進剤は、前記タマリンド分解物を担持する担体や、前記タマリンド分解物を希釈する希釈剤を含んでいてもよい。かかる担体又は希釈剤としては、賦形剤、稀釈剤、増量剤、崩壊剤、安定剤、保存剤、緩衝剤、乳化剤、芳香剤、着色剤、甘味料、粘稠剤、矯味剤、溶解補助剤等が挙げられる。
　前記酪酸産生菌増殖促進剤が飲食品用添加剤である場合、剤型は、顆粒剤、粉末剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、液剤などが好ましい。
　前記酪酸産生菌増殖促進剤が薬剤である場合、剤型は、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、細粒剤、ドロップ剤、内用液剤などの経口剤が好ましい。この他、剤型は、注射剤であってもよい。
　前記酪酸産生菌増殖促進剤の総質量に対する前記タマリンド分解物の含有量は、５０質量％以上であってもよく、６０質量％以上であってもよく、７０質量％以上であってもよく、８０質量％以上であってもよく、９０質量％以上であってもよい。
　次に、前記タマリンド分解物の製造方法について説明する。
　前記タマリンド分解物の製造方法は、前記タマリンドガムを分解して前記タマリンド分解物を得る分解工程と、前記タマリンド分解物を精製する精製工程とを備える。
　前記分解工程では、タマリンドの種子を粉砕することによって得られる粉砕物を使用してもよく、タマリンドの種子又は粉砕物から前記タマリンドガムを抽出することによって得られるタマリンド種子抽出物を使用してもよい。また、前記粉砕物又は前記タマリンド種子抽出物を分離、精製することによって得られる高純度の精製物を使用してもよい。
　前記分解工程では、重量平均分子量が７０，０００以下になるまで前記タマリンドガムを分解することが重要である。前記分解工程では、重量平均分子量が、好ましくは６０，０００以下になるまで、より好ましくは５０，０００以下になるまで、さらに好ましくは４０，０００以下になるまで、より一層好ましくは３０，０００以下になるまで、特に好ましくは２０，０００以下になるまで、前記タマリンドガムを分解する。
　また、前記分解工程では、前記クロマトグラムにおいて、前記ピークトップ分子量が５０，０００以下のピークが表れるまで、前記タマリンドガムを分解することが好ましい。より具体的には、前記分解工程では、前記クロマトグラムにおいて、好ましくは少なくとも第１のピークＰ１が表れるまで、より好ましくは第１のピークＰ１及び第２のピークＰ２が表れるまで、さらに好ましくは第１のピークＰ１、第２のピークＰ２及び第３のピークＰ３が表れるまで、より一層好ましくは第４のピークＰ４が表れるまで、前記タマリンドガムを分解する。
　前記分解工程では、酵素によって前記タマリンドガムを分解し、前記タマリンド分解物を得ることが好ましい。前記酵素は、前記タマリンドガムの前記主鎖のグリコシド結合（β－１，４－グリコシド結合）を分解するものであることが好ましい。かかる酵素としては、セルラーゼが好ましい。なお、前記分解工程では、酸による加水分解によって前記タマリンドガムを分解してもよい。すなわち、前記タマリンド分解物は、前記タマリンドガムが前記酵素によって分解された酵素分解物であってもよく、酸加水分解によって分解された酸加水分解物であってもよい。
　前記分解工程では、前記酵素が安定して存在可能であり且つ活性を示すことが可能な水中で、前記タマリンドガムを分解することが好ましい。具体的には、前記分解工程では、前記タマリンドガム及び前記酵素が分散し且つｐＨ３～７、温度２５～６０℃に維持された分散液中で前記タマリンドガムを分解することが好ましい。
　前記分散液における前記タマリンドガムの濃度は、６０質量％以下であることが好ましい。
　前記分解工程における分解時間は、１時間以上に設定することが好ましく、３時間以上に設定することがより好ましく、５時間以上に設定することがさらに好ましい。前記タマリンド分解物の重量平均分子量やピークトップ分子量が所望の値になれば、８０℃以上、好ましくは９０℃以上に前記分散液を加熱することにより前記酵素を失活させることが好ましい。すなわち、本実施形態での前記分解時間は、分散液を調製してから分散液が上記の温度に加熱されて酵素が失活するまでの時間を変化させることで調整可能である。
　前記分解工程では、前記タマリンド分解物を含む分散液を凍結乾燥し、さらに、ミルなどを用いて乾燥物を粉砕、篩過することによって、未精製品としての前記タマリンド分解物を得てもよい。
　本実施形態の精製工程では、水溶性有機溶媒を含有する水溶液によって前記未精製品を精製し、精製品としての前記タマリンド分解物を得る。前記未精製品に前記水溶液を混合すると、一部のタマリンド分解物が該水溶液中に析出しつつ、残部のタマリンド分解物が該水溶液に溶解した状態となる。本実施形態の精製工程では、前記水溶液中に析出した析出物としての低分解タマリンド分解物と、前記水溶液に溶解した溶解物としての高分解タマリンド分解物とのそれぞれを精製品として得る。
　前記精製工程では、前記低分解タマリンド分解物の重量平均分子量が１０，０００以上となるように、前記水溶液を選択することが好ましい。また、前記高分解タマリンド分解物の重量平均分子量が１，５００以下、好ましくは１，０００以下となるように、前記水溶液を選択することが好ましい。かかる観点から、前記水溶液に含有させる水溶性有機溶媒としては、メタノール、エタノール、ｎ－プロパノール、又はｉｓｏ－プロパノールなどの低級アルコール、アセトンなどのケトン系溶媒が好ましい。なお、水溶性有機溶媒に代えて、ヘキサンなどの非水溶性有機溶媒を用いてもよく、前記低級アルコール、前記ケトン系溶媒、及び前記非水溶性有機溶媒を併用してもよい。かかる併用によって、前記低分解タマリンド分解物及び前記高分解タマリンド分解物の重量分子量及びピークトップ分子量を調整することができる。
　前記精製工程では、前記水溶液から析出物としての前記低分解タマリンド分解物を分離することによって、前記低分解タマリンド分解物と前記高分解タマリンド分解物とを分離する。分離方法には、従来公知の方法を採用することができ、例えば、遠心分離や減圧ろ過が挙げられる。また、好ましくは、前記水溶液から固形物としての前記高分解タマリンド分解物を取得する。固形物としての前記高分解タマリンド分解物を取得する方法としては、前記水溶液を濃縮して得られる残渣に水を添加して凍結乾燥する方法が好ましい。前記高分解タマリンド分解物は、前記低分解タマリンド分解物と比較して、重量平均分子量が小さいものとなる。これによって、前記高分解タマリンド分解物は、酪酸産生菌を選択的に増殖させることに優れたものとなる。
　前記精製工程では、さらに、前記低分解タマリンド分解物及び前記高分解タマリンド分解物を凍結乾燥、粉砕、篩過することが好ましい。すなわち、前記精製工程では、粉状物などの固形物として、前記低分解タマリンド分解物及び前記高分解タマリンド分解物を取得することが好ましい。
　上記の一実施形態に係るタマリンド分解物は、
　タマリンドガムの分解物であり、重量平均分子量が７０，０００以下である。
　斯かる構成によれば、重量平均分子量が７０，０００以下であることによって、酪酸産生菌の増殖に優れたものとなる。
　また、上記の一実施形態に係る酪酸産生菌増殖促進剤は、前記タマリンド分解物を含有する。
　斯かる構成によれば、前記タマリンド分解物を含有することによって、ヒトなどの動物に摂取された場合において、腸内の酪酸産生菌の増殖に優れたものとなる。
　また、上記の一実施形態に係る腸内酪酸産生用組成物は、前記タマリンド分解物を含有する。
　斯かる構成によれば、前記タマリンド分解物を含有することによって、ヒトなどの動物に摂取された場合において、腸内の酪酸産生に優れたものとなる。
　また、上記の一実施形態に係るタマリンド分解物の製造方法は、重量平均分子量が７０，０００以下になるまでタマリンドガムを分解してタマリンドガムの分解物であるタマリンド分解物を製造する。
　斯かる構成によれば、重量平均分子量が７０，０００以下になるまでタマリンドガムを分解することによって、酪酸産生菌の増殖に優れるタマリンド分解物を製造することができる。
　以上のように、例示として一実施形態を示したが、本発明に係るタマリンド分解物、酪酸産生菌増殖促進剤、腸内酪酸産生用組成物、並びに、タマリンド分解物の製造方法は、上記実施形態の構成に限定されるものではない。また、本発明に係るタマリンド分解物、酪酸産生菌増殖促進剤、腸内酪酸産生用組成物、並びに、タマリンド分解物の製造方法は、上記した作用効果により限定されるものでもない。本発明に係るタマリンド分解物、酪酸産生菌増殖促進剤、腸内酪酸産生用組成物、並びに、タマリンド分解物の製造方法は、本発明の要旨を逸脱しない範囲で種々の変更が可能である。
　以下、実施例により本発明をさらに説明するが、本発明は、これらに限定されるものではない。
［タマリンド分解物の製造例］
（分解工程）
　ミキサーにタマリンドガム（ＤＳＰ五協フード＆ケミカル株式会社製）を１００ｇ投入した。次いで、ミキサーによりタマリンドガムを撹拌しながらセルラーゼ（三菱ケミカルフーズ株式会社製スクラーゼＣ）の水溶液（酵素濃度１．０質量％、ｐＨ４の５ｍＭ酢酸緩衝液）を１００ｇ投入し、タマリンドガム及びセルラーゼを含有する分散液を作製した。撹拌を止め、薬さじでミキサーの内壁に付着した粉末を落とし、さらに手撹拌でかき混ぜた後、再びミキサーにより分散液を撹拌した。この操作を１０分間繰り返した。分散液をレトルトパウチに移しヒートシール後、５０℃の水浴に浸漬させ、下記表２に示す分解時間静置した。水浴からレトルトパウチを取り出し、１２５℃、６０分間、加圧加熱（レトルト殺菌）処理を行い、セルラーゼを失活させた。レトルトパウチの上部をはさみで切断し、開封させた状態で金属トレイに載せ、－３５℃の冷凍庫に入れ凍結後、凍結乾燥機（ＦＤ－１型、東京理化器械株式会社製）を用いて４日間凍結乾燥した。乾燥物を粉砕機（サンプルミルＳＫ－Ｍ１０型、協立理工株式会社製）で粉砕し、４８メッシュで篩過し、未精製品のタマリンド分解物を得た。
（精製工程）
　１Ｌステンレスビーカーにて脱イオン水に未精製品のタマリンド分解物を溶解し、全量２００ｇとした（タマリンド分解物の濃度５質量％）。撹拌機で撹拌しながら、ｉｓｏ－プロパノール濃度が７０質量％となるようｉｓｏ－プロパノールをゆっくり滴下した。一晩放置後、遠沈処理（５，０００ｒｐｍ、１０分）し、デカンテーションにて、高分解タマリンド分解物を溶解しているｉｓｏ－プロパノール水溶液と、析出物たる低分解タマリンド分解物とを分離した。析出物を５０ｍＬの７０％ｉｓｏ－プロパノール水溶液で１回洗浄した。析出物をスパーテルでほぐしながら遠沈管内で脱イオン水に溶解し、－３５℃に設定したディープフリーザーにて一晩以上凍結させた。凍結乾燥し、得られた乾燥物を乳鉢ですりつぶして、粉状の低分解タマリンド分解物を得た。また、分離したｉｓｏ－プロパノール水溶液をエバポレーターにて濃縮し、蒸留水３０ｇに再度溶解し、－３５℃に設定したディープフリーザーにて一晩以上凍結させた。凍結乾燥機で凍結乾燥し、得られた乾燥物を乳鉢ですりつぶして、粉状の高分解タマリンド分解物を得た。
［分子量の測定］
　下記測定条件のゲル浸透クロマトグラフィ（ＧＰＣ）によって、表２に示した各試料の分子量を測定した。ＥＺｃｈｒｏｍ　Ｅｌｉｔｅ　ＳＥＣ／ＧＰＣソフトウェアを使用し、表１に示した標準品の分析値により作成した近似式から各試料の重量平均分子量及びピークトップ分子量を算出した。各試料の測定結果は、表２に示したとおりである。また、ＧＰＣのクロマトグラムを図２～図７に示した。
＜ＧＰＣ測定条件＞
試料　　　　：０．１％濃度試料溶液（溶媒：０．２Ｍ硝酸ナトリウム水溶液）
前処理　　　：０．４５μmメンブレンフィルター（ＤＩＳＭＩＣ－１３ＣＰ）
ガードカラム：Shodex OHpak SB-G
カラム　　　：Shodex OHpak SB-806M HQ（8.0mmID×300mmL、２本直列で使用）
カラム温度　：４０℃
移動相　　　：０．２Ｍ硝酸ナトリウム水溶液
流速　　　　：０．８ｍＬ／ｍｉｎ
検出器　　　：ＲＩ
標準品　　　：デキストラン及びグルコース
近似式　　　：指数近似
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
［腸内細菌の増殖促進効果の評価］
　表２に掲載した試料につき、ヒト腸内常在菌叢最優勢種及びプロバイオティクス細菌を用いたin vitro培養により、各試料による細菌の増殖促進効果を評価した。また、参考例１として、イヌリンによる細菌の増殖促進効果も評価した。
（試料の調製方法）
　５００ｍＬビーカーに脱イオン水１９８．０ｇを量り取った。クローバー型撹拌羽を取り付けた撹拌機により６００～８００ｒｐｍの撹拌速度で撹拌しながら試料２．０ｇを分散させ、室温で１５分間撹拌して完全に溶解させ、１．０％試料溶液を調製した。
（培地の調製）
　２００ｍＬビーカーにスターラーと約１２０ｍＬの脱塩水とを投入し、糖制限ＧＡＭ（ＧＡＭ糖分解用半流動培地（日水製薬株式会社製）４２．０１ｇを加え、撹拌して溶解させた。ろ紙を用いて吸引ろ過することによって培地に含まれる寒天を除去した。ろ液を脱塩水により４００ｍＬにメスアップした後、均一になるように混合し、耐熱性瓶に８０ｍＬずつ分注した（メーカー記載の濃度を１×とすると、２×の濃度となっている）。各耐熱性瓶に、上記で調製した１．０％試料溶液８０ｍＬを加え、転倒混和した。なお、コントロールには、脱塩水８０ｍＬを加えた。メディウム瓶に入れ、蓋を緩めた状態で１１５℃、１５分オートクレーブした。蓋は半開きのまま素早く、嫌気条件下のアネロパック角型ジャー（三菱ガス化学社製） に入れ、嫌気チャンバー内で終夜放置し、０．５％の試料を含有する糖制限ＧＡＭを調製した。
（培養）
　糖制限ＧＡＭで培養可能なヒト腸内常在菌叢最優勢種及びプロバイオティクス細菌の培養液を嫌気チャンバー内でマルチチャンネルピペットを用いて懸濁後、コピープレート９６（トッケン）を用いて、０．５％の試料を含有する糖制限ＧＡＭ５００μＬを加え、９６ディープウェルプレートに、１ウェルにつき単一菌株を植菌した。ガス透過性モイスチャーバリア粘着シール（Gas permeable moisture barrier sheel）を貼り、嫌気チャンバー内で３７℃にて２４時間（図８、図９、図１０、図１３）又は４８時間（図１１、図１２、図１４、図１５）培養を行った。
（細菌の生育度測定）
　マイクロプレートリーダー（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）を用い、６００ｎｍの吸光度（濁度）を測定した。ブランク測定には、未接種の０．５％の試料を含有する糖制限ＧＡＭを用いた。また、糖制限ＧＡＭにグルコースを添加した培地を用いた各細菌の培養液の濁度を光路長１ｃｍのキュベットを用いて測定し、マイクロプレートでの測定値を光路長１ｃｍのキュベットでの値に換算できる定数を算出した。得られた計算値から、各菌体について、［試料ありの測定値］／［コントロールの測定値］＝［コントロールとの比］としての増殖促進倍率を計算した。結果は、図８～図１５に示したとおりである。
　図８、図９に示したように、重量平均分子量が実施例よりも大きい比較例１（重量平均分子量６，３６０，０００）及び比較例２（重量平均分子量１，３１０，０００）を用いた場合には、ロゼブリア・インテスティナリスの濁度に殆ど変化は認められなかった。これに対して、図１０、図１１、図１２、図１３、及び図１４に示したように、重量平均分子量が７０，０００以下の実施例１～５を用いた場合には、ロゼブリア・インテスティナリスの濁度に増加が認められた。特に、重量平均分子量が３０，０００以下の実施例２（重量平均分子量２９，０００）及び重量平均分子量が２０，０００以下の実施例３～５（重量平均分子量１６，７００、１１，７００、９７３）を用いた場合には、他の細菌の濁度に比べて突出したロゼブリア・インテスティナリスの濁度の増加が認められた。よって、これらは、ロゼブリア・インテスティナリスの選択的な増殖促進効果を有すると考えられる。
　上記結果は、in vitroの実験によるものである。そこで、生体内を模した環境としての糞便中であっても、同様の結果が得られるか確認した。具体的には、ヒト糞便を用いてタマリンド分解物によるロゼブリア・インテスティナリスの増殖促進効果を評価した。まず、糖制限ＧＡＭ培地に実施例４又は実施例５のタマリンド分解物を含む試料を０．５％添加し、ここにヒト糞便とロゼブリア・インテスティナリスとを接種した。なお、ロゼブリア・インテスティナリスの初期菌体濃度はＯＤ６００＝０．０１とした。２４時間３７℃にて嫌気培養した後、ＤＮＡ抽出を行い、ロゼブリア・インテスティナリス由来ＤＮＡ量を定量ＰＣＲで測定した。その結果、前述のin vitro培養の結果と同様に、タマリンド分解物を添加したサンプルにおいてロゼブリア・インテスティナリスの増殖が認められた。
［参考データ］
　図１６には、食品の分野において一般的に用いられているオリゴ糖であるラフィノース（Raffinose）、１－ケストース（1-kestose）、及びラクツロース（Lactulose）を用いた際の各種細菌の増殖促進効果を示すグラフを示した（日本農芸化学会2017年度大会　発表番号:2C19a03　2017年3月、“プロバイオティクス細菌を特異的に増殖させる次世代型プレバイオティクス・ガラクトシル-β-1,4-ラムノースの開発と偽膜性腸炎原因菌Clostridium difficileの生育抑制”）。このグラフから、一般的に知られているオリゴ糖は、複数の細菌を増殖させるものであることがわかる。すなわち、このグラフから、一般的なオリゴ糖は、特定の細菌を選択的に増殖させる機能を有さないことがわかる。
［酪酸産生量の測定］
　ロゼブリア・インテスティナリス（Roseburia intestinalis）の培養液における有機酸の濃度を測定することにより、酪酸の産生量を確認した。結果は、図１７に示したとおりである。
（試料の調製方法）
　培養後の９６ディープウェルプレートを遠心機（ｈｉｍａｃ社製、ＣＦ１６ＲＮ) を用い、４，７００ｒｐｍ、２０分、２５℃で遠心し、上清３００μＬを９６ウェルプレート（平底、３８０μＬ）に移した。検体に含まれる有機酸の濃度を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって測定した。分析対象は、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸、乳酸、フマル酸、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、ｉｓｏ－酪酸、ｎ－酪酸、ｉｓｏ－吉草酸、ｎ－吉草酸とした。前処理方法、測定装置及び測定条件は以下のとおりである。
＜ＨＰＬＣ測定条件＞
試料前処理　：培養液を孔径０．２０μｍのメンブレンフィルターでろ過し、試料溶液とした。
システム　　：島津有機酸分析システム
ガードカラム：Shim-pack SCR-102(H)、50mm×6mmID
カラム　　　：Shim-pack SCR-102(H)、300mm×8mmID（２本直列で使用）
溶離液　　　：５ｍｍｏｌ／Ｌ ｐ－トルエンスルホン酸
反応液　　　：５ｍｍｏｌ／Ｌ ｐ－トルエンスルホン酸、
　　　　　　　１００μｍｏｌ／Ｌ ＥＤＴＡ、
　　　　　　　２０ｍｍｏｌ／Ｌ Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓ
流速　　　　：０．８ｍＬ／ｍｉｎ
オーブン温度：４５℃
検出器　　　：電気伝導度検出器
　図１７に示したように、実施例１（重量平均分子量６７，３００）及び実施例４（重量平均分子量１１，７００）を用いた培養液は、比較例１（重量平均分子量６，３６０，０００）及び比較例２（重量平均分子量１，３１０，０００）を用いた培養液と比較して、酪酸の含有量が多いことが認められた。この結果から、重量平均分子量が７０，０００以下のタマリンド分解物は、酪酸産生菌の増殖促進において有意であることがわかる。
［使用例］
　実施例１～５に係るタマリンド分解物の使用例としては、次のようなものが挙げられる。使用例１としての薬剤（サプリメント）及び下記使用例２～１３の飲食品組成物は、問題なく摂取可能であり、タマリンド分解物を添加することによる味や風味に影響がないものと考えられる。
（使用例２：飲料（お茶））
タマリンド分解物：５．０
市販のお茶：９５．０
合計１００（％）
（使用例３：ゼリー）
タマリンド分解物：１．０
ゲル化剤（ＤＳＰ五協フード＆ケミカル株式会社製、ゲルメイトＮＢ）：０．８
食物繊維（ＤＳＰ五協フード＆ケミカル株式会社製、ヘルバセル）２％溶液：２５．０
砂糖：１１．０
１／５濃縮リンゴ透明果汁：１２．０
果糖ブドウ糖液糖：８．０
２０％(ｗ／ｗ)クエン酸溶液：０．２５
２０％(ｗ／ｗ)クエン酸三ナトリウム溶液：０．５
香料：０．１
水：４１．３５
合計１００（％）
（使用例４：菓子（ブラウニー））
タマリンド分解物：５．０
増粘剤（ＤＳＰ五協フード＆ケミカル株式会社製、グリロイド２Ａ）：１．６
チョコレート（ビター）：１５０．０
全卵：１３０．０
無塩バター：１００．０
グラニュー糖：１００．０
薄力粉：８０．０
合計５６６．６ｇ
（使用例５：咀嚼・嚥下困難者用食品）
タマリンド分解物：１．０
増粘剤（ＤＳＰ五協フード＆ケミカル株式会社製、ケルコゲルＤＧＡ）：０．３
魚（焼サケ、煮サバなど）：５０．０
出汁：４８．７
合計１００（％）
（使用例６：ジャム）
タマリンド分解物：１．０
アミドペクチン：０．７
増粘剤（ＤＳＰ五協フード＆ケミカル株式会社製、グリロイド２Ａ）：０．１
冷凍イチゴ：４０．０
グラニュー糖：２６．０
水：残量
５０％クエン酸：適量
合計１００（％）
（使用例７：冷菓（ラクトアイス））
タマリンド分解物：１．０
増粘剤（ＤＳＰ五協フード＆ケミカル株式会社製、グリロイドＣＳ－３）：０．３ 
砂糖：１２．０ 
脱脂粉乳：８．０
ヤシ油：６．０
乳化剤：０．３
水あめ（Ｂｒｉｘ８５°）：５．０
香料：０．１
色素：適量
水：残部
合計１００（％）
（使用例８：米飯）
タマリンド分解物：１ｇ
米：１合
水：２００ｇ
（使用例９：ふりかけ）
タマリンド分解物：０．１ｇ
ふりかけ：２．０ｇ
（使用例１０：パン（糖質オフパン））
タマリンド分解物：２．０ｇ
食物繊維（ＤＳＰ五協フード＆ケミカル株式会社製、ヘルバセル）：１０．０ｇ
強力粉：１６５．０ｇ
小麦ふすま：４０．０ｇ
大豆粉：３５．０ｇ
全卵：３４．０ｇ
小麦グルテン：２０．０ｇ
砂糖：２７．０ｇ
無塩バター：２０．０ｇ
食塩：６．０ｇ
ドライイースト：３．４ｇ
水：２７０．０ｇ
（使用例１１：総菜（ハンバーグ））
タマリンド分解物：１．００
鶏ミンチ肉：７７．００
玉ねぎみじん切り：１３．００
ラード：５．００
濃口醤油：２．００
上白糖：１．００
食物繊維（ＤＳＰ五協フード＆ケミカル株式会社製、ヘルバセル）：１．００
食塩：０．７０
白コショウ：０．１５
ガーリックパウダー：０．１５
合計１００（％）
（使用例１２：レトルト食品（カレーペースト））
タマリンド分解物：１．０
増粘剤（ＤＳＰ五協フード＆ケミカル株式会社製、グリロイド２Ａ）：０．２
牛脂：１０．０
コーンスターチ：５．０
食塩：２．６
砂糖：４．０
グルタミン酸ナトリウム：０．２
脱脂粉乳：３．０
カレー粉：２．５
オニオンパウダー：２．０
香料（ＤＳＰ五協フード＆ケミカル株式会社製、アロマビーフＳＤ）：０．５
水：６９．０
合計１００（％）
（使用例１３：たれ（みたらし団子用たれ））
タマリンド分解物：１．０
増粘剤（ＤＳＰ五協フード＆ケミカル株式会社製、グリロイド３Ｓ）：０．１ 
コーンスターチ：３．０
粉末こんぶだし：０．２
砂糖：４２．０ 
水あめ（Ｂｒｉｘ８３．５°）：５．０ 
濃口しょうゆ（Ｂｒｉｘ３７°）：１０．０ 
水：３８．７
合計１００（％）
Ｐ１：第１のピーク、Ｐ２：第２のピーク、Ｐ３：第３のピーク、Ｐ４：第４のピーク
 

Claims (4)

  1. 　タマリンドガムの分解物であり、
    　重量平均分子量が７０，０００以下である、タマリンド分解物。
  2. 　請求項１に記載のタマリンド分解物を含有する、酪酸産生菌増殖促進剤。
  3. 　請求項１に記載のタマリンド分解物を含有する、腸内酪酸産生用組成物。
  4. 　重量平均分子量が７０，０００以下になるまでタマリンドガムを分解してタマリンドガムの分解物であるタマリンド分解物を製造する、タマリンド分解物の製造方法。
     
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