WO2022121917A1 - 一种药物组合物及其应用 - Google Patents

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WO2022121917A1 PCT/CN2021/136293 CN2021136293W WO2022121917A1 WO 2022121917 A1 WO2022121917 A1 WO 2022121917A1 CN 2021136293 W CN2021136293 W CN 2021136293W WO 2022121917 A1 WO2022121917 A1 WO 2022121917A1
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sars
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司伟雪
李军强
邓捷
肖猛
马超
许允立
董小曼
陈列胜
朱涛
巢守柏
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康希诺生物股份公司
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    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Definitions

  • the present invention relates to the technical field of biomedicine, in particular to a pharmaceutical composition and application thereof, in particular to a recombinant adenovirus vector vaccine composition, a vaccine preparation (especially a liquid preparation) and its use in the prevention and/or treatment of diseases application.
  • Vaccines use pathogenic microorganisms (such as bacteria, viruses, rickettsia, etc.) or their components and their metabolites as immunogens, which are artificially attenuated, inactivated or made by transgenic methods to induce specific active Protective immune response, biological products used to prevent and treat corresponding diseases.
  • Vaccines retain the properties of pathogenic bacteria to stimulate the body's immune system. When the body is exposed to this innocuous pathogen, the immune system will produce certain protective substances, such as immune hormones, active physiological substances, cytokines, antibodies, etc.; when the animal is exposed to this pathogen again, the animal's body will The immune system will follow its original memory and produce more protective antibodies to prevent the damage of pathogenic bacteria.
  • Vaccination is the most economical and effective public health intervention for the prevention and control of infectious diseases, and it is also an effective means for families to reduce the occurrence of diseases among members and reduce medical costs.
  • the stability of vaccines is the most critical attribute of vaccines, and stability studies should be carried out after vaccine development and after marketing.
  • the efficacy of the vaccine will gradually decline with the extension of storage time and the change of storage conditions. According to the different biological activities and physicochemical properties of vaccine components, the stability characteristics of vaccines are also very different.
  • the active components of the vaccine are more active, especially for live virus vaccines or virus vector vaccines, it is difficult to control the stability, and the lyophilized preparations have very low moisture content, and the active components are more stable, the preparation of vector vaccines or virus vaccines
  • the form is more inclined to adopt the freeze-dried form.
  • the patent application CN201611100644.3 discloses an adenovirus freeze-dried additive and an adenovirus freeze-dried preparation. The viability of the virus decreases slowly, and the obtained recombinant adenovirus Ebola virus disease vaccine can be obtained.
  • the lyophilized formulation is stable for 1 year at 2-8°C, but needs to be reconstituted before administration.
  • an adjuvant composition which comprises: mannitol, sucrose, sodium chloride, magnesium chloride, HEPES, polysorbate 80, and glycerin (or consisting of the above components).
  • the above composition comprises: mannitol 10-150mg/ml, sucrose 10-150mg/ml, sodium chloride 10-150mM, magnesium chloride 1-10mM, HEPES 1-15mM, polysorbate 80 0.001%-0.5% ( weight percent), glycerol 0.05-2% (weight percent).
  • the content of mannitol can be 10, 20, 30, 35, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 65, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150mg/ml; especially 40-60mg/ml, 45-55mg/ml; In an embodiment of the present invention, the content of mannitol in the above composition is 50 mg/ml.
  • the content of sucrose can be 10, 15, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 50, 60, 70, 80 , 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150mg/ml; especially 15-35mg/ml, 20-30mg/ml; in one embodiment of the present invention, the content of sucrose in the above composition is 25mg/ml ml.
  • the content of sodium chloride can be 10, 20, 30, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54 , 55, 56, 57, 58, 59, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150mM; especially 40-60mM, 45-55mM; in one embodiment of the present invention, The content of sodium chloride in the above composition was 50 mM.
  • the content of magnesium chloride can be 1, 1.2, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.8, 3, 3.5, 4 , 4.5, 5, 6, 7, 8, 9, 10 mM; especially 1-5 mM, 1-3 mM; in one embodiment of the present invention, the content of magnesium chloride in the above composition is 2 mM.
  • the content of HEPES can be 1, 1.2, 1.4, 1.5, 1.6, 1.8, 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3, 3.2, 3.4 , 3.5, 4, 4.5, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15mM; especially 1.5-3.5mM, 2-3mM;
  • the above The content of HEPES in the composition was 2.5 mM.
  • the content of polysorbate 80 can be 0.001%, 0.002%, 0.004%, 0.005%, 0.006%, 0.008%, 0.01%, 0.02%, 0.03%, 0.04%, 0.05%, 0.06% %, 0.07%, 0.08%, 0.09%, 0.1%, 0.2%, 0.3%, 0.4%, 0.5% (g/g); especially 0.001%-0.1%, 0.005%-0.05% (g/g);
  • the content of polysorbate 80 in the above composition is 0.01% (g/g).
  • the content of glycerin can be 0.05%, 0.06%, 0.08%, 0.10%, 0.11%, 0.12%, 0.13%, 0.14%, 0.15%, 0.16%, 0.17%, 0.18%, 0.19% %, 0.20%, 0.40%, 0.60%, 0.80%, 1%, 1.2%, 1.4%, 1.6%, 1.8%, 2% (g/g); especially 0.05%-0.5%, 0.1%-0.2% (g/g);
  • the content of glycerin in the above composition is 0.15% (g/g).
  • the above-mentioned adjuvant composition comprises: mannitol: 50mg/ml, sucrose: 25mg/ml, sodium chloride: 50mM, magnesium chloride: 2mM, HEPES: 2.5mM, polysorbate 80: 0.01% (g/g), glycerol: 0.15% (g/g) (or consisting of the above components).
  • the present invention also provides a pharmaceutical composition comprising an active component, and the above-mentioned adjuvant composition of the present invention (especially consisting of the active component and the above-mentioned adjuvant composition of the present invention).
  • the above-mentioned active components comprise antigenic components, such as antigens or components thereof, metabolites thereof, nucleic acids encoding them.
  • the above-mentioned antigens can be viruses, fungi, bacteria, chlamydia, rickettsia, mycoplasma, spirochetes, especially viruses, such as SARS-CoV, SARS-CoV-2, Ebola virus (EBOV), hepatitis B virus ( HBV), hepatitis C virus (HCV), dengue virus (DEN), herpes virus (EB), rabies virus (RV), human immunodeficiency virus (HIV), etc.
  • viruses such as SARS-CoV, SARS-CoV-2, Ebola virus (EBOV), hepatitis B virus ( HBV), hepatitis C virus (HCV), dengue virus (DEN), herpes virus (EB), rabies virus (RV), human immunodeficiency virus (HIV), etc.
  • the aforementioned antigens may also be tumor antigens (eg, tumor-specific antigens, tumor-associated antigens).
  • tumor antigens eg, tumor-specific antigens, tumor-associated antigens.
  • the above-mentioned active component is a recombinant vaccine vector comprising a nucleic acid encoding an antigen or a component thereof.
  • the above-mentioned vaccine vector may be a viral vector.
  • the above-mentioned viral vector can be an adenovirus vector, an adenovirus-associated virus vector, a reverse transcription vector, a herpes virus vector, an influenza virus vector, etc., especially an adenovirus vector.
  • the above-mentioned adenoviruses may be replication-type or replication-deficient, especially replication-deficient adenoviruses.
  • the above-mentioned adenovirus may be a human adenovirus (eg, human adenovirus type 5 (AdHu5 type), AdHu2, AdHu4, AdHu7, AdHu11, AdHu26, AdHu35, AdHu55, etc.), an animal adenovirus vector such as a chimpanzee adenovirus vector (eg, a chimpanzee adenovirus vector).
  • Adenovirus type 68 AdC6 type, AdC3 type, AdC63 type, etc.
  • AdHu5 type AdHu5 type.
  • the active component in the above-mentioned pharmaceutical composition comprises a gene ( Full-length or partial sequence) recombinant adenoviral vector, such as recombinant adenoviral vector containing SARS-CoV-2 S protein gene, especially AdHu5 type vector containing SARS-CoV-2 S protein gene.
  • a gene Full-length or partial sequence
  • recombinant adenoviral vector such as recombinant adenoviral vector containing SARS-CoV-2 S protein gene, especially AdHu5 type vector containing SARS-CoV-2 S protein gene.
  • the content of the recombinant viral vector is 1*10 9 -1*10 12 VP/ml (for example, 1*10 9 , 5*10 9 , 1*10 10 , 2*10 10 , 4 *10 10 , 6*10 10 , 8*10 10 , 1*10 11 , 2*10 11 , 4*10 11 , 6*10 11 , 8*10 11 , 1*10 12 VP/ml), especially 5*10 10 to 5*10 11 VP/ml; in an embodiment of the present invention, the content of the recombinant viral vector in the vaccine composition is 1*10 11 VP/ml.
  • the above pharmaceutical composition comprises: recombinant viral vector: 1*10 11 VP/ml, mannitol: 50mg/ml, sucrose: 25mg/ml, sodium chloride: 50mM, magnesium chloride: 2mM, HEPES: 2.5 mM, Polysorbate 80: 0.01% (g/g), Glycerol: 0.15% (g/g) (or consisting of the above components).
  • the above-mentioned pharmaceutical composition is a liquid preparation.
  • the present invention also provides a vaccine preparation prepared from the above-mentioned pharmaceutical composition.
  • the above vaccine formulations are liquid formulations, especially single-dose injections.
  • the above-mentioned preparation method may include semi-finished product preparation, sub-packaging and plugging.
  • the above vaccine preparation can be stably stored at 2-8°C for more than 2 years.
  • the above vaccine formulations can be stably stored at 37°C for more than 2 weeks.
  • the above vaccine preparation can be stably stored at 25°C for more than 3 months.
  • the above vaccine formulations can be repeatedly frozen and thawed for many times.
  • the present invention also provides the application of the above-mentioned adjuvant composition in improving the stability of vaccine active components.
  • the present invention also provides the application of the above-mentioned adjuvant composition in the preparation of a product for improving the stability of vaccine active components.
  • the above-mentioned vaccine active components are recombinant vaccine vectors comprising nucleic acids encoding antigens or components thereof, such as recombinant viral vectors, especially recombinant adenovirus vectors.
  • vaccine vectors in the above applications, vaccine vectors, viral vectors, and adenoviruses have the above corresponding definitions of the present invention.
  • the active component of the vaccine is a gene (full-length or partial sequence) comprising a structural protein (such as one or more of S protein, M protein, E protein, and N protein) encoding SARS-CoV-2. ) recombinant adenoviral vector, such as a recombinant adenoviral vector comprising the S protein gene of SARS-CoV-2, especially an AdHu5 type vector comprising the S protein gene of SARS-CoV-2.
  • a structural protein such as one or more of S protein, M protein, E protein, and N protein
  • recombinant adenoviral vector such as a recombinant adenoviral vector comprising the S protein gene of SARS-CoV-2, especially an AdHu5 type vector comprising the S protein gene of SARS-CoV-2.
  • the present invention also provides the application of the above-mentioned adjuvant composition, vaccine composition and vaccine preparation in the preparation of medicines for preventing and/or treating diseases (eg vaccines, gene therapy medicines).
  • diseases eg vaccines, gene therapy medicines.
  • the above-mentioned application is the application of an adjuvant composition, a vaccine composition, and a vaccine preparation in the preparation of a medicine (eg, a vaccine) for preventing diseases.
  • a medicine eg, a vaccine
  • the above-mentioned diseases may be diseases caused by or related to antigenic infection, such as, but not limited to, SARS, COVID-19, Ebola virus disease, hepatitis B, hepatitis C, dengue fever, herpes, rabies, AIDS, tumors (eg, cervical cancer, breast cancer, lung cancer, colorectal cancer, gastric cancer, melanoma, etc.) and the like.
  • SARS SARS
  • COVID-19 Ebola virus disease
  • hepatitis B hepatitis C
  • dengue fever herpes
  • rabies AIDS
  • tumors eg, cervical cancer, breast cancer, lung cancer, colorectal cancer, gastric cancer, melanoma, etc.
  • tumors eg, cervical cancer, breast cancer, lung cancer, colorectal cancer, gastric cancer, melanoma, etc.
  • the present invention also provides a method for preventing and/or treating a disease, comprising the step of administering a prophylactically effective amount or a therapeutically effective amount of the above-mentioned pharmaceutical composition or vaccine formulation of the present invention to a subject in need thereof.
  • the above-mentioned subjects may be animals, such as humans, and non-human animals such as poultry, pigs, cattle, sheep, horses, dogs, cats, mice, fish, etc., especially humans.
  • the above-mentioned diseases may be diseases caused by or related to antigenic infection, such as, but not limited to, SARS, COVID-19, Ebola virus disease, hepatitis B, hepatitis C, dengue fever, herpes, rabies, AIDS, tumors (eg, cervical cancer, breast cancer, lung cancer, colorectal cancer, gastric cancer, melanoma, etc.) and the like.
  • SARS SARS
  • COVID-19 Ebola virus disease
  • hepatitis B hepatitis C
  • dengue fever herpes
  • rabies AIDS
  • tumors eg, cervical cancer, breast cancer, lung cancer, colorectal cancer, gastric cancer, melanoma, etc.
  • tumors eg, cervical cancer, breast cancer, lung cancer, colorectal cancer, gastric cancer, melanoma, etc.
  • the above-mentioned administration mode may be mucosal administration, oral administration, injection administration (eg, subcutaneous injection, intradermal injection, intravenous injection, intramuscular injection).
  • injection administration eg, subcutaneous injection, intradermal injection, intravenous injection, intramuscular injection.
  • the above administration may be one or more times.
  • the above-mentioned adjuvant composition and pharmaceutical composition provided by the present invention can be used to prepare vaccine (especially recombinant vector vaccine, such as recombinant adenovirus vector vaccine) preparation (especially liquid preparation), the vaccine preparation can effectively avoid antigen aggregation, stability Good, it can be stored stably at 2-8°C for more than 2 years, at 25°C for more than 3 months, and at 37°C for more than 2 weeks. It can maintain good antigenic activity after repeated freezing and thawing, and its abnormal toxicity The test is qualified and safe to use.
  • vaccine especially recombinant vector vaccine, such as recombinant adenovirus vector vaccine
  • liquid preparation especially liquid preparation
  • Figure 1 shows the changes of IFU in the repeated freezing and thawing test of recombinant adenovirus vector vaccine, wherein the virus IFU is taken as log logarithm.
  • Figure 2 shows the pH changes of the recombinant adenovirus vector vaccine in repeated freezing and thawing experiments.
  • Figure 3 shows the changes of IFU at different times under accelerated conditions at 37°C, where the virus IFU is taken as log logarithm.
  • Figure 4 shows the changes of IFU at different times under accelerated conditions at 25°C, where the virus IFU is taken as log logarithm.
  • Figure 5 shows the changes of IFU at different times under the long-term stability condition of 2-8°C, wherein the virus IFU is taken as log logarithm.
  • Figure 6 shows the pH changes of the finished product after the recombinant adenovirus vector vaccine was placed at different times.
  • tween80 In the present invention, “tween80”, “Tween 80” and “polysorbate 80” represent the same product and can be used interchangeably.
  • HPES 4-hydroxyethylpiperazineethanesulfonic acid.
  • recombinant vaccine vector refers to a vector in which a gene encoding an effective immunogen has been inserted into the vector genome by means of genetic engineering and other methods, that is, it as a whole already contains a vector encoding an effective immunogen. Gene.
  • stable preservation of a vaccine formulation means that the activity of the active ingredient in the vaccine formulation is reduced by no more than 10% (eg, no more than 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3% %, 2%, 1%, 0.5%, 0.4%, 0.3%, 0.2%, 0.1%, 0.05%, 0.01%), e.g., for recombinant viral vector vaccine formulations (such as recombinant adenoviral vector vaccine formulations), “stable” Preservation” can refer to a reduction in viral IFU by no more than 1 lg (eg, no more than 0.9, 0.8, 0.7, 0.6, 0.5, 0.4, 0.3, 0.2, 0.1 lg).
  • the recombinant adenovirus vector vaccine in which the antigen content is 1*10 11 VP/ml, was designed with four formulations of different excipients, placed for 3 months, and the appearance was observed regularly to study the effect of glycerol and tween80 on virus aggregation.
  • the ingredients of each formula are as follows:
  • Formulation 1 Mannitol: 50mg/ml, Sucrose: 25mg/ml, Sodium Chloride: 50mM, Magnesium Chloride: 2mM, HEPES: 2.5mM;
  • Formulation 2 Mannitol: 50mg/ml, Sucrose: 25mg/ml, Sodium Chloride: 50mM, Magnesium Chloride: 2mM, HEPES: 2.5mM, Glycerol: 0.15% (g/g);
  • Formulation 3 Mannitol: 50mg/ml, Sucrose: 25mg/ml, Sodium Chloride: 50mM, Magnesium Chloride: 2mM, HEPES: 2.5mM, Polysorbate 80: 0.01% (g/g);
  • Formulation 4 Mannitol: 50mg/ml, Sucrose: 25mg/ml, Sodium Chloride: 50mM, Magnesium Chloride: 2mM, HEPES: 2.5mM, Polysorbate 80: 0.01% (g/g), Glycerol: 0.15% (g /g).
  • Formulation 5 Mannitol: 50mg/ml, Sucrose: 25mg/ml, Sodium Chloride: 50mM, Magnesium Chloride: 2mM, Phosphate Buffer: 2.5mM, Polysorbate 80: 0.01% (g/g), Glycerol: 0.15 % (g/g).
  • Formulation 6 Mannitol: 50 mg/ml, Sucrose: 25 mg/ml, Sodium Chloride: 50 mM, Magnesium Chloride: 2 mM, Tris-HCl Buffer: 2.5 mM, Polysorbate 80: 0.01% (g/g), Glycerol: 0.15% (g/g).
  • Formulation 7 Mannitol: 50mg/ml, Sucrose: 25mg/ml, Sodium Chloride: 50mM, Magnesium Chloride: 2mM, Histidine Buffer: 2.5mM, Polysorbate 80: 0.01% (g/g), Glycerol: 0.15% (g/g).
  • the degree of filamentous or flocculent is represented by -, +, ++, +++, ++++.
  • Adenovirus vector vaccine will form obvious filaments after aggregation, and more serious will form flocculent or flake shape; the recombinant adenovirus vector vaccine is placed for three months, and the appearance is observed regularly.
  • the results show that the formula does not contain glycerol and Tween80. 1. After 1 month, the finished product has obvious filamentous shape. After 2 months, the finished product appears flake. Compared with the glycerin formula 2 and formula 1, the appearance of the finished product has not been effectively improved, indicating that only mannitol is included. , sucrose, sodium chloride, magnesium chloride, HEPES and glycerol were not effective in addressing formulation appearance.
  • Tween80 is an important adjuvant for preventing the aggregation of adenovirus vector vaccines.
  • Recombinant adenovirus vector vaccines contain different concentrations of antigens and excipients, as follows:
  • Formulation 1 [Preparation Formulation]----The virus content is: 1*10 11 VP/ml, containing mannitol: 50mg/ml, sucrose: 25mg/ml, sodium chloride: 50mM, magnesium chloride: 2mM, HEPES: 2.5 mM, Polysorbate 80: 0.01% (g/g), Glycerol: 0.15% (g/g).
  • Formula 2 [does not contain virus, only contains excipients]---contains mannitol: 50mg/ml, sucrose: 25mg/ml, sodium chloride: 50mM, magnesium chloride: 2mM, HEPES: 2.5mM, polysorbate 80: 0.01 % (g/g), glycerol: 0.15% (g/g).
  • Formula 3 [The virus content remains unchanged, and the excipient formula is improved]---the virus content is: 1*10 11 VP/ml, containing mannitol: 150mg/ml, sucrose: 150mg/ml, sodium chloride: 150mM, magnesium chloride: 10 mM, HEPES: 15 mM, Polysorbate 80: 0.5% (g/g), Glycerol: 2% (g/g).
  • Formulation 4 [does not contain virus, only contains excipients]---contains mannitol: 150mg/ml, sucrose: 150mg/ml, sodium chloride: 150mM, magnesium chloride: 10mM, HEPES: 15mM, polysorbate 80: 0.5% (g/g), glycerol: 2% (g/g).
  • Formulation 5 [Replacement Buffer]----The virus content is: 1*10 11 VP/ml, containing mannitol: 50mg/ml, sucrose: 25mg/ml, sodium chloride: 50mM, magnesium chloride: 2mM, phosphate Buffer: 2.5 mM, Polysorbate 80: 0.01% (g/g), Glycerol: 0.15% (g/g).
  • Formulation 6 [Replacement Buffer]----The virus content is: 1*10 11 VP/ml, containing mannitol: 50mg/ml, sucrose: 25mg/ml, sodium chloride: 50mM, magnesium chloride: 2mM, Tris- Hydrochloric acid buffer: 2.5 mM, polysorbate 80: 0.01% (g/g), glycerol: 0.15% (g/g).
  • Formulation 7 [Replacement Buffer]----The virus content is: 1*10 11 VP/ml, containing mannitol: 50mg/ml, sucrose: 25mg/ml, sodium chloride: 50mM, magnesium chloride: 2mM, histamine Acid buffer: 2.5 mM, polysorbate 80: 0.01% (g/g), glycerol: 0.15% (g/g).
  • the abnormal toxicity study was carried out in guinea pigs and mice.
  • the specific test methods are as follows:
  • mice in each group were intraperitoneally injected with 0.5ml of the test substance.
  • the abnormal toxicity test is a key detection indicator in the release of vaccine products; the abnormal toxicity test of recombinant adenovirus vector vaccines is generally difficult to pass. The main reason is whether it is the active substance, adenovirus vector vaccine, or auxiliary materials . After immunizing guinea pigs with a very high dose, such as 10 times the human dose, it will cause a strong irritant response, resulting in abnormal diet, weight loss, and more serious cases, causing guinea pig prolapse and even death.
  • Example 3 Repeated freeze-thaw test of recombinant adenovirus vector vaccine
  • Formulation 1 The virus content is 1*10 11 VP/ml, containing mannitol: 50mg/ml, sucrose: 25mg/ml, sodium chloride: 50mM, magnesium chloride: 2mM, HEPES: 2.5mM, polysorbate 80: 0.01% (g/g), glycerol: 0.15% (g/g).
  • the virus content is: 1*10 11 VP/ml, containing mannitol: 50mg/ml, sucrose: 25mg/ml, sodium chloride: 50mM, magnesium chloride: 2mM, phosphate buffer: 2.5mM, polysorbate 80: 0.01% (g/g), glycerol: 0.15% (g/g).
  • Formulation 3 The virus content is: 1*10 11 VP/ml, containing mannitol: 50mg/ml, sucrose: 25mg/ml, sodium chloride: 50mM, magnesium chloride: 2mM, Tris-HCl buffer: 2.5mM, polysorbate Ester 80: 0.01% (g/g), Glycerol: 0.15% (g/g).
  • Formulation 4 The virus content is: 1*10 11 VP/ml, containing mannitol: 50mg/ml, sucrose: 25mg/ml, sodium chloride: 50mM, magnesium chloride: 2mM, histidine buffer: 2.5mM, polysorbate Ester 80: 0.01% (g/g), Glycerol: 0.15% (g/g).
  • Test method Repeated freezing and thawing 5 times, measuring 0, 1, 3 and 5 IFU and PH.
  • each dose contains mannitol: 50mg/ml, sucrose: 25mg/ml, sodium chloride: 50mM, magnesium chloride: 2mM, HEPES: 2.5mM, polysorbate 80: 0.01% (g /g), glycerol: 0.15% (g/g).
  • Recombinant adenovirus vector vaccine with antigen content of 1*10 11 VP/ml containing mannitol: 50mg/ml, sucrose: 25mg/ml, sodium chloride: 50mM, magnesium chloride: 2mM, HEPES: 2.5mM, polysorbate 80: 0.01% (g/g), glycerol: 0.15% (g/g).
  • Example 5 Changes in pH of finished products at different times
  • the pH of the finished recombinant adenovirus vector vaccine is stable is a key factor to be considered in the formulation development process. Whether the finished product is packaged in a vial or a prefilled needle, the rubber stopper of the vial or the rubber stopper of the prefilled needle has a certain impact on the pH of the product. Therefore, under normal circumstances, the vaccine preparation needs to contain a certain buffer. . Only 2.5mM HEPES in the formulation was studied to maintain the pH stability of the finished product.
  • Recombinant adenovirus vector vaccine the virus content of each dose is 1*10 11 VP/ml, containing mannitol: 50mg/ml, sucrose: 25mg/ml, sodium chloride: 50mM, magnesium chloride: 2mM, HEPES: 2.5mM, poly Sorbitan 80: 0.01% (g/g), Glycerol: 0.15% (g/g).
  • Test method Place at 2-8°C for 2.5 years, and measure pH every six months.

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Abstract

本发明公开了一种药物组合物及其应用，特别是一种重组腺病毒载体疫苗组合物、疫苗制剂(特别是液体制剂)及其在预防和/或治疗疾病中的应用。上述组合物可用于制备疫苗(特别是重组载体疫苗，例如重组腺病毒载体疫苗)制剂(特别是液体制剂)，该疫苗制剂可有效避免抗原的聚集，稳定性良好，可以在2-8℃稳定保存2年以上，在25℃稳定保存3月以上，在37℃稳定保存2周以上，可经多次冻融仍保持较佳的抗原活力，且其异常毒性试验合格，使用安全。

Description

一种药物组合物及其应用 技术领域
本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种药物组合物及其应用，特别是一种重组腺病毒载体疫苗组合物、疫苗制剂(特别是液体制剂)及其在预防和/或治疗疾病中的应用。
背景技术
疫苗是以病原微生物(例如细菌、病毒、立克次氏体等)或其组成部分、其代谢产物作为免疫原，经过人工减毒、灭活或利用转基因等方法制成的能够诱导特定的主动保护性免疫反应，用于预防、治疗相应疾病的生物制品。疫苗保留了病原菌刺激机体免疫系统的特性。当机体接触到这种不具伤害力的病原菌后，免疫系统便会产生一定的保护物质，如免疫激素、活性生理物质、细胞因子、抗体等；当动物再次接触到这种病原菌时，动物体的免疫系统便会依循其原有的记忆，产生更多的保护性抗体来阻止病原菌的伤害。接种疫苗是预防和控制传染病最经济、有效的公共卫生干预措施，对于家庭来说也是减少成员疾病发生、减少医疗费用的有效手段。
疫苗的稳定性是疫苗最关键的属性，在疫苗开发和上市后均应开展稳定性研究。疫苗的效力会随着储存时间的延长及储存条件的变化而逐渐下降。根据疫苗组成成分的生物活性及理化性质的不同，疫苗的稳定性特点也存在很大差异。
液体状态下，疫苗活性组分较活跃，尤其是对活病毒疫苗，或者病毒载体疫苗，不易控制稳定性，而冻干制剂水分含量非常少，活性组分更稳定，载体疫苗或者病毒疫苗的制剂形式更偏向采用冻干形式，例如，专利申请CN201611100644.3公开了一种腺病毒冷冻干燥添加剂和腺病毒冻干制剂，病毒的活力下降缓慢，可使获得的重组腺病毒埃博拉病毒病疫苗冻干制剂稳定存储于2-8℃1年，但其在给药时需先复溶。
此外，液体状态下，对于蛋白类，或者病毒类，或者病毒载体类疫苗而言，很 容易形成抗原，或者病毒以及病毒载体的聚集，导致长时间放置时很容易出现丝状物，对其实际应用时的疫苗效力产生不利的影响，更严重的情况下，可能会引发安全性风险。
发明内容
为克服现有技术的不足，本发明提供一种辅料组合物，其包含：甘露醇、蔗糖、氯化钠、氯化镁、HEPES、聚山梨酯80、甘油(或由上述组分组成)。
具体地，上述组合物包含：甘露醇10-150mg/ml，蔗糖10-150mg/ml，氯化钠10-150mM，氯化镁1-10mM，HEPES 1-15mM，聚山梨酯80 0.001％-0.5％(重量百分比)，甘油0.05-2％(重量百分比)。
具体地，上述组合物中，甘露醇的含量可以为10、20、30、35、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、65、70、80、90、100、110、120、130、140、150mg/ml；特别是40-60mg/ml，45-55mg/ml；在本发明的一个实施例中，上述组合物中甘露醇的含量为50mg/ml。
具体地，上述组合物中，蔗糖的含量可以为10、15、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150mg/ml；特别是15-35mg/ml，20-30mg/ml；在本发明的一个实施例中，上述组合物中蔗糖的含量为25mg/ml。
具体地，上述组合物中，氯化钠的含量可以为10、20、30、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150mM；特别是40-60mM，45-55mM；在本发明的一个实施例中，上述组合物中氯化钠的含量为50mM。
具体地，上述组合物中，氯化镁的含量可以为1、1.2、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.8、3、3.5、4、4.5、5、6、7、8、9、10mM；特别是1-5mM，1-3mM；在本发明的一个实施例中，上述组合物中氯化镁的含量为2mM。
具体地，上述组合物中，HEPES的含量可以为1、1.2、1.4、1.5、1.6、1.8、2、 2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.2、3.4、3.5、4、4.5、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15mM；特别是1.5-3.5mM，2-3mM；在本发明的一个实施例中，上述组合物中HEPES的含量为2.5mM。
具体地，上述组合物中，聚山梨酯80的含量可以为0.001％、0.002％、0.004％、0.005％、0.006％、0.008％、0.01％、0.02％、0.03％、0.04％、0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％、0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％(g/g)；特别是0.001％-0.1％，0.005％-0.05％(g/g)；在本发明的一个实施例中，上述组合物中聚山梨酯80的含量为0.01％(g/g)。
具体地，上述组合物中，甘油的含量可以为0.05％、0.06％、0.08％、0.10％、0.11％、0.12％、0.13％、0.14％、0.15％、0.16％、0.17％、0.18％、0.19％、0.20％、0.40％、0.60％、0.80％、1％、1.2％、1.4％、1.6％、1.8％、2％(g/g)；特别是0.05％-0.5％，0.1％-0.2％(g/g)；在本发明的一个实施例中，上述组合物中甘油的含量为0.15％(g/g)。
在本发明的一个实施例中，上述辅料组合物包含：甘露醇：50mg/ml，蔗糖：25mg/ml，氯化钠：50mM，氯化镁：2mM，HEPES：2.5mM，聚山梨酯80：0.01％(g/g)，甘油：0.15％(g/g)(或由上述组分组成)。
本发明还提供一种药物组合物，其包含活性组分，以及本发明上述辅料组合物(特别是由活性组分和本发明上述辅料组合物组成)。
在本发明的一个实施方式中，上述活性组分包含抗原组分，例如抗原或其组成部分、其代谢产物、其编码核酸。
具体地，上述抗原可以为病毒、真菌、细菌、衣原体、立克次体、支原体、螺旋体，特别是病毒，例如SARS-CoV、SARS-CoV-2、埃博拉病毒(EBOV)、乙肝病毒(HBV)、丙肝病毒(HCV)、登革热病毒(DEN)、疱疹病毒(EB)、狂犬病毒(RV)、人类免疫缺陷病毒(HIV)等。
具体地，上述抗原也可以为肿瘤抗原(例如，肿瘤特异性抗原、肿瘤相关抗原)。
在本发明的一个实施方式中，上述活性组分为包含编码抗原或其组成部分的核酸的重组疫苗载体。
具体地，上述疫苗载体可以为病毒载体。
具体地，上述病毒载体可以为腺病毒载体、腺病毒伴随病毒载体、反转录载体、疱疹病毒载体、流感病毒载体等等，特别是腺病毒载体。
具体地，上述腺病毒可以为复制型或复制缺陷型，特别是复制缺陷型腺病毒。
具体地，上述腺病毒可以为人腺病毒(例如人腺病毒5型(AdHu5型)、AdHu2、AdHu4、AdHu7、AdHu11、AdHu26、AdHu35、AdHu55等)、动物腺病毒载体如黑猩猩腺病毒载体(例如黑猩猩腺病毒68型(AdC68)、AdC6型、AdC3型、AdC63型等)；在本发明的一个实施例中，上述腺病毒为AdHu5型。
在本发明的一个实施方式中，上述药物组合物中活性组分为包含编码SARS-CoV-2结构蛋白(如S蛋白、M蛋白、E蛋白、N蛋白中的一种或多种)基因(全长或部分序列)的重组腺病毒载体，例如包含SARS-CoV-2S蛋白基因的重组腺病毒载体，特别是包含SARS-CoV-2S蛋白基因的AdHu5型载体。
具体地，上述药物组合物中，重组病毒载体的含量为1*10 9～1*10 12VP/ml(例如1*10 9、5*10 9、1*10 10、2*10 10、4*10 10、6*10 10、8*10 10、1*10 11、2*10 11、4*10 11、6*10 11、8*10 11、1*10 12VP/ml)，特别是5*10 10～5*10 11VP/ml；在本发明的一个实施例中，上述疫苗组合物中重组病毒载体的含量为1*10 11VP/ml。
在本发明的一个实施例中，上述药物组合物包含：重组病毒载体：1*10 11VP/ml，甘露醇：50mg/ml，蔗糖：25mg/ml，氯化钠：50mM，氯化镁：2mM，HEPES：2.5mM，聚山梨酯80：0.01％(g/g)，甘油：0.15％(g/g)(或由上述组分组成)。
在本发明的一个实施方式中，上述药物组合物为液体制剂。
本发明还提供一种疫苗制剂，其由上述药物组合物制备得到。
具体地，上述疫苗制剂为液体制剂，特别是单剂量注射液。
具体地，上述制备方法可以包括半成品配制、分装和压塞。
具体地，上述疫苗制剂可以在2-8℃稳定保存2年以上。
具体地，上述疫苗制剂可以在37℃稳定保存2周以上。
具体地，上述疫苗制剂可以在25℃稳定保存3月以上。
具体地，上述疫苗制剂可以反复冻融多次。
具体地，上述疫苗制剂异常毒性试验合格。
本发明还提供上述辅料组合物在提高疫苗活性组分的稳定性中的应用。
本发明还提供上述辅料组合物在制备用于提高疫苗活性组分的稳定性的产品中的应用。
具体地，上述疫苗活性组分为包含编码抗原或其组成部分的核酸的重组疫苗载体，例如重组病毒载体，特别是重组腺病毒载体。
具体地，上述应用中，疫苗载体、病毒载体、腺病毒具有本发明上述相应定义。
具体地，上述应用中，疫苗活性组分为包含编码SARS-CoV-2的结构蛋白(如S蛋白、M蛋白、E蛋白、N蛋白中的一种或多种)基因(全长或部分序列)的重组腺病毒载体，例如包含SARS-CoV-2的S蛋白基因的重组腺病毒载体，特别是包含SARS-CoV-2的S蛋白基因的AdHu5型载体。
本发明还提供上述辅料组合物、疫苗组合物、疫苗制剂在制备预防和/或治疗疾病的药物(例如疫苗、基因治疗药物)中的应用。
具体地，上述应用为辅料组合物、疫苗组合物、疫苗制剂在制备预防疾病的药物(例如疫苗)中的应用。
具体地，上述疾病可以为由抗原感染引起或抗原感染相关的疾病，例如，但不限于，SARS、COVID-19、埃博拉病毒病、乙型肝炎、丙型肝炎、登革热、疱疹、狂犬病、AIDS、肿瘤(例如，宫颈癌、乳腺癌、肺癌、大肠癌、胃癌、黑色素瘤等)等。
本发明还提供一种预防和/或治疗疾病的方法，其包括向有此需要的受试者施用预防有效量或治疗有效量的本发明上述药物组合物或疫苗制剂的步骤。
具体地，上述受试者可以为动物，例如人类以及如家禽、猪、牛、羊、马、犬、猫、鼠、鱼等的非人动物，特别是人类。
具体地，上述疾病可以为由抗原感染引起或抗原感染相关的疾病，例如，但不限于，SARS、COVID-19、埃博拉病毒病、乙型肝炎、丙型肝炎、登革热、疱疹、狂犬病、AIDS、肿瘤(例如，宫颈癌、乳腺癌、肺癌、大肠癌、胃癌、黑色素瘤等)等。
具体地，上述施用方式可以为粘膜施用、口服施用、注射施用(例如皮下注射、皮内注射、静脉注射、肌肉注射)。
具体地，上述施用可以为一次或多次。
本发明提供的上述辅料组合物、药物组合物可用于制备疫苗(特别是重组载体疫苗，例如重组腺病毒载体疫苗)制剂(特别是液体制剂)，该疫苗制剂可有效避免抗原的聚集，稳定性良好，可以在2-8℃稳定保存2年以上，在25℃稳定保存3月以上，在37℃稳定保存2周以上，可经多次冻融仍保持较佳的抗原活力，且其异常毒性试验合格，使用安全。
附图说明
图1所示为重组腺病毒载体疫苗反复冻融试验IFU变化情况，其中，病毒IFU取lg对数。
图2所示为重组腺病毒载体疫苗反复冻融试验pH变化情况。
图3所示为37℃加速条件下不同时间IFU变化情况，其中，病毒IFU取lg对数。
图4所示为25℃加速条件下不同时间IFU变化情况，其中，病毒IFU取lg对数。
图5所示为2-8℃长期稳定性条件下不同时间IFU变化情况，其中，病毒IFU取lg对数。
图6所示为重组腺病毒载体疫苗放置不同时间成品pH变化。
具体实施方式
除非另有定义，本发明中所使用的所有科学和技术术语具有与本发明涉及技术领域的技术人员通常理解的相同的含义。
在本发明中，“tween80”、“吐温80”、“聚山梨酯80”代表相同产品，可互换使用。
在本发明中，“HEPES”是指4-羟乙基哌嗪乙磺酸。
在本发明中，除非另有说明，否则“重组疫苗载体”是指已经通过基因工程手段等方法将编码有效免疫原的基因插入载体基因组中的载体，即其作为整体已包含编码有效免疫原的基因。
在本发明中，疫苗制剂“稳定保存”是指该疫苗制剂中活性组分的活性降低不超过10％(例如不超过9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％、0.4％、0.3％、0.2％、0.1％、0.05％、0.01％)，例如，对于重组病毒载体疫苗制剂(例如重组腺病毒载体疫苗制剂)，“稳定保存”可以指病毒IFU降低不超过1个lg(例如不超过0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.3、0.2、0.1个lg)。
本文所引用的各种出版物、专利和公开的专利说明书，其公开内容通过引用整体并入本文。
下面将结合本发明实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1：制剂配方对聚集的影响
重组腺病毒载体疫苗，其中抗原含量为1*10 11VP/ml，设计四种辅料不同的制剂配方，放置3个月，定期进行外观观察，研究甘油和tween80对病毒聚集的作用。各配方辅料如下所示：
配方1：甘露醇：50mg/ml，蔗糖：25mg/ml，氯化钠：50mM，氯化镁：2mM，HEPES：2.5mM；
配方2：甘露醇：50mg/ml，蔗糖：25mg/ml，氯化钠：50mM，氯化镁：2mM，HEPES：2.5mM，甘油：0.15％(g/g)；
配方3：甘露醇：50mg/ml，蔗糖：25mg/ml，氯化钠：50mM，氯化镁：2mM，HEPES：2.5mM，聚山梨酯80：0.01％(g/g)；
配方4：甘露醇：50mg/ml，蔗糖：25mg/ml，氯化钠：50mM，氯化镁：2mM，HEPES：2.5mM，聚山梨酯80：0.01％(g/g)，甘油：0.15％(g/g)。
配方5：甘露醇：50mg/ml，蔗糖：25mg/ml，氯化钠：50mM，氯化镁：2mM，磷 酸盐缓冲液：2.5mM，聚山梨酯80：0.01％(g/g)，甘油：0.15％(g/g)。
配方6：甘露醇：50mg/ml，蔗糖：25mg/ml，氯化钠：50mM，氯化镁：2mM，Tris-盐酸缓冲液：2.5mM，聚山梨酯80：0.01％(g/g)，甘油：0.15％(g/g)。
配方7：甘露醇：50mg/ml，蔗糖：25mg/ml，氯化钠：50mM，氯化镁：2mM，组氨酸缓冲液：2.5mM，聚山梨酯80：0.01％(g/g)，甘油：0.15％(g/g)。
放置3个月进行外观观察，结果如下：
表1不同制剂配方腺病毒载体疫苗外观
  0点 1月 2月 3月
配方1 - ++ +++ ++++
配方2 - ++ +++ ++++
配方3 - - - -
配方4 - - - -
配方5 - - - -
配方6 - - - -
配方7 - - - -
备注：丝状或者絮状的程度以-，+，++，+++，++++表示。
腺病毒载体疫苗聚集后会形成明显的丝状，更严重的会形成絮状或者片状；将重组腺病毒载体疫苗放置三个月，定期进行外观观察，结果表明，不含有甘油和Tween80的配方1，放置1个月成品中产生明显的丝状，放置2个月，成品中出现片状，含有甘油的配方2和配方1相比，成品的外观并没有有效的改进，说明仅包括甘露醇、蔗糖、氯化钠、氯化镁、HEPES和甘油并不能有效的解决制剂外观。
含有Tween80的配方3，以及含有甘油和tween80的配方4～7，成品的外观明显改善。说明，Tween80是预防腺病毒载体疫苗聚集的重要辅料。
实施例2：腺病毒载体疫苗的异常毒性
重组腺病毒载体疫苗，含有不同浓度的抗原和辅料成分，具体如下：
配方1：【制剂配方】----病毒含量为：1*10 11VP/ml，含有甘露醇：50mg/ml，蔗糖： 25mg/ml，氯化钠：50mM，氯化镁：2mM，HEPES：2.5mM，聚山梨酯80：0.01％(g/g)，甘油：0.15％(g/g)。
配方2：【不含有病毒，只含有辅料】---含有甘露醇：50mg/ml，蔗糖：25mg/ml，氯化钠：50mM，氯化镁：2mM，HEPES：2.5mM，聚山梨酯80：0.01％(g/g)，甘油：0.15％(g/g)。
配方3：【病毒含量不变，提高辅料配方】---病毒含量为：1*10 11VP/ml，含有甘露醇：150mg/ml，蔗糖：150mg/ml，氯化钠：150mM，氯化镁：10mM，HEPES：15mM，聚山梨酯80：0.5％(g/g)，甘油：2％(g/g)。
配方4：【不含有病毒，只含有辅料】---含有甘露醇：150mg/ml，蔗糖：150mg/ml，氯化钠：150mM，氯化镁：10mM，HEPES：15mM，聚山梨酯80：0.5％(g/g)，甘油：2％(g/g)。
配方5：【替换缓冲液】----病毒含量为：1*10 11VP/ml，含有甘露醇：50mg/ml，蔗糖：25mg/ml，氯化钠：50mM，氯化镁：2mM，磷酸盐缓冲液：2.5mM，聚山梨酯80：0.01％(g/g)，甘油：0.15％(g/g)。
配方6：【替换缓冲液】----病毒含量为：1*10 11VP/ml，含有甘露醇：50mg/ml，蔗糖：25mg/ml，氯化钠：50mM，氯化镁：2mM，Tris-盐酸缓冲液：2.5mM，聚山梨酯80：0.01％(g/g)，甘油：0.15％(g/g)。
配方7：【替换缓冲液】----病毒含量为：1*10 11VP/ml，含有甘露醇：50mg/ml，蔗糖：25mg/ml，氯化钠：50mM，氯化镁：2mM，组氨酸缓冲液：2.5mM，聚山梨酯80：0.01％(g/g)，甘油：0.15％(g/g)。
以豚鼠和小鼠进行异常毒性研究，具体的试验方法如下：
豚鼠每组2只，腹腔注射5ml供试品；
小鼠每组5只，腹腔注射0.5ml供试品。
注射供试品前称重，于注射7天后，称重。同时观察试验动物的症状、记录试验动物的状态。结果分别如表2和表3所示。
表2：豚鼠异常试验结果
  体重增长 有无症状 是否死亡 结果
配方1 增长 无 无死亡 合格
配方2 增长 无 无死亡 合格
配方3 减轻 有症状 2只死亡 不合格
配方4 增长 无 无死亡 合格
配方5 增长 无 无死亡 合格
配方6 增长 无 无死亡 合格
配方7 增长 无 无死亡 合格
表3：小鼠异常试验结果
  体重增长 有无症状 是否死亡 结果
配方1 增长 无 无死亡 合格
配方2 增长 无 无死亡 合格
配方3 减轻 立毛，趴窝 无死亡 不合格
配方4 不增长 无 无死亡 不合格
配方5 增长 无 无死亡 合格
配方6 增长 无 无死亡 合格
配方7 增长 无 无死亡 合格
结果表明：异常毒性试验，豚鼠模型比小鼠模型更敏感，单独的辅料配方，包括提高辅料的含量，其异常毒性试验都合格，但是加入腺病毒载体疫苗后，只有配方1、5～7异常毒性合格。
异常毒性试验是疫苗产品放行中的一个很关键的检测指标；重组腺病毒载体疫苗的异常毒性试验，一般都很难合格，主要的原因是无论是活性物质---腺病毒载体疫苗，还是辅料，以很高的剂量，如10倍的人用剂量免疫豚鼠后，会引起很强的刺激性反应，从而造成豚鼠饮食不正常，体重下降，更严重的情况，引起豚鼠的脱肛，甚至死亡。
因此，通过制剂优化，或者配方设计，得到一个异常毒性，特别是豚鼠试验合格的制剂配方挑战非常大。本专利公开的制剂配方，无论是小鼠试验，还是豚鼠试验，其异常毒性都合格。
实施例3：重组腺病毒载体疫苗反复冻融试验
配方1：病毒含量为1*10 11VP/ml，含有甘露醇：50mg/ml，蔗糖：25mg/ml，氯化钠：50mM，氯化镁：2mM，HEPES：2.5mM，聚山梨酯80：0.01％(g/g)，甘油：0.15％(g/g)。
配方2：病毒含量为：1*10 11VP/ml，含有甘露醇：50mg/ml，蔗糖：25mg/ml，氯化钠：50mM，氯化镁：2mM，磷酸盐缓冲液：2.5mM，聚山梨酯80：0.01％(g/g)，甘油：0.15％(g/g)。
配方3：病毒含量为：1*10 11VP/ml，含有甘露醇：50mg/ml，蔗糖：25mg/ml，氯化钠：50mM，氯化镁：2mM，Tris-盐酸缓冲液：2.5mM，聚山梨酯80：0.01％(g/g)，甘油：0.15％(g/g)。
配方4：病毒含量为：1*10 11VP/ml，含有甘露醇：50mg/ml，蔗糖：25mg/ml，氯化钠：50mM，氯化镁：2mM，组氨酸缓冲液：2.5mM，聚山梨酯80：0.01％(g/g)，甘油：0.15％(g/g)。
试验方法：反复冻融5次，测定0次，1次，3次，5次的IFU、PH。
试验结果如图1、图2所示。
结果表明：选用配方2～4的缓冲体系磷酸盐缓冲液、Tris-盐酸缓冲液、组氨酸缓冲液，经过反复冻融后病毒IFU均有不同幅度的下降，且配方2～4的pH波动较大。配方的pH是否稳定，是制剂开发过程中需要重点考虑的因素。只有配方1HEPES，经过反复冻融，其病毒IFU不会发生明显改变，pH波动最小。因此选择HEPES为重组腺病毒载体疫苗最佳缓冲体系。重组腺病毒载体疫苗最佳配方为：每剂含有甘露醇：50mg/ml，蔗糖：25mg/ml，氯化钠：50mM，氯化镁：2mM，HEPES：2.5mM，聚山梨酯80：0.01％(g/g)，甘油：0.15％(g/g)。
实施例4：腺病毒载体疫苗的稳定性
重组腺病毒载体疫苗，其中抗原含量为1*10 11VP/ml，含有甘露醇：50mg/ml，蔗 糖：25mg/ml，氯化钠：50mM，氯化镁：2mM，HEPES：2.5mM，聚山梨酯80：0.01％(g/g)，甘油：0.15％(g/g)。
37℃放置4周，25℃放置6月，2-8℃放置3年，进行制剂稳定性研究，结果如图3-5所示。
结果表明：重组腺病毒载体疫苗在本专利公开的制剂中可以稳定保存。2-8℃至少存放2年，成品IFU仍符合质量标准。
实施例5：不同时间成品pH的变化
重组腺病毒载体疫苗成品的pH是否稳定，是制剂开发过程中需要重点考虑的因素。成品无论是以西林瓶，还是预灌针作为包装，西林瓶的胶塞或者预灌针的胶塞对产品的pH都有一定的影响，因此，常规情况下，疫苗制剂需要含有一定的缓冲液。研究了制剂配方中只含有2.5mM HEPES可以维持成品pH的稳定性。
重组腺病毒载体疫苗：每剂的病毒含量为1*10 11VP/ml，含有甘露醇：50mg/ml，蔗糖：25mg/ml，氯化钠：50mM，氯化镁：2mM，HEPES：2.5mM，聚山梨酯80：0.01％(g/g)，甘油：0.15％(g/g)。
试验方法：2-8℃放置2.5年，每半年测定pH。
试验结果如图6所示。
结果表明：成品中含有2.5mM的HEPES，就可以维持重组腺病毒载体疫苗在2-8℃储存条件下pH稳定。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换等，均应包含在本发明的保护范围之内。
本发明中描述的前述实施例和方法可以基于本领域技术人员的能力、经验和偏好而有所不同。
本发明中仅按一定顺序列出方法的步骤并不构成对方法步骤顺序的任何限制。

Claims (13)

  1. 一种辅料组合物，其包含：甘露醇10-150mg/ml，蔗糖10-150mg/ml，氯化钠10-150mM，氯化镁1-10mM，HEPES 1-15mM，聚山梨酯80 0.001％-0.5％，甘油0.05-2％。
  2. 如权利要求1所述的辅料组合物，其特征在于，所述组合物包含：甘露醇40-60mg/ml，蔗糖15-35mg/ml，氯化钠40-60mM，氯化镁1-5mM，HEPES 1.5-3.5mM，聚山梨酯80 0.001％-0.1％，甘油0.05％-0.5％。
  3. 如权利要求1所述的辅料组合物，其特征在于，所述组合物包含：甘露醇：50mg/ml，蔗糖：25mg/ml，氯化钠：50mM，氯化镁：2mM，HEPES：2.5mM，聚山梨酯80：0.01％，甘油：0.15％。
  4. 一种药物组合物，其包含活性组分，以及权利要求1-3任一项所述的辅料组合物。
  5. 如权利要求4所述的药物组合物，其特征在于，所述活性组分为包含编码抗原或其组成部分的核酸的重组疫苗载体；
    优选地，所述抗原选自：SARS-CoV、SARS-CoV-2、埃博拉病毒、乙肝病毒、丙肝病毒、登革热病毒、疱疹病毒、狂犬病毒、人类免疫缺陷病毒。
  6. 如权利要求5所述的药物组合物，其特征在于，所述疫苗载体为病毒载体，其选自：腺病毒载体、腺病毒伴随病毒载体、反转录载体、疱疹病毒载体、流感病毒载体；
    优选地，所述腺病毒为人腺病毒或黑猩猩腺病毒；
    更优选地，所述人腺病毒选自：AdHu2、AdHu4、AdHu5、AdHu7、AdHu11、AdHu26、AdHu35、AdHu55；
    更优选地，所述黑猩猩腺病毒选自：AdC3、AdC6、AdC63、AdC68。
  7. 如权利要求5所述的药物组合物，其特征在于，所述活性组分为包含编码SARS-CoV-2的结构蛋白基因的重组腺病毒载体；
    优选地，所述活性组分为SARS-CoV-2的S蛋白基因的重组腺病毒载体；
    更优选地，所述活性组分为SARS-CoV-2的S蛋白基因的AdHu5型载体。
  8. 如权利要求6所述的药物组合物，其特征在于，所述重组病毒载体的含量为1*10 9～1*10 12VP/ml。
  9. 如权利要求4所述的药物组合物，其特征在于，所述组合物为液体制剂。
  10. 一种疫苗制剂，其由权利要求4-9任一项所述的药物组合物制备得到。
  11. 权利要求1-3任一项所述的辅料组合物在提高疫苗活性组分的稳定性中的应用。
  12. 如权利要求11所述的应用，其特征在于，所述疫苗活性组分为包含编码抗原或其组成部分的核酸的重组疫苗载体，特别是重组腺病毒载体；
    优选地，所述疫苗活性组分为包含编码SARS-CoV-2的结构蛋白基因的重组腺病毒载体；
    优选地，所述疫苗活性组分为SARS-CoV-2的S蛋白基因的重组腺病毒载体；
    更优选地，所述疫苗活性组分为SARS-CoV-2的S蛋白基因的AdHu5型载体。
  13. 权利要求1-3任一项所述的辅料组合物、权利要求4-9任一项所述的药物组合物或权利要求10所述的疫苗制剂在制备预防和/或治疗疾病的药物中的应用；
    优选地，所述疾病选自：SARS、COVID-19、埃博拉病毒病、乙型肝炎、丙型肝炎、登革热、疱疹、狂犬病、AIDS、肿瘤。
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