WO2022085602A1 - Ｔｇｒ５活性化用組成物 - Google Patents

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WO2022085602A1
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tgr5
evening primrose
seed extract
composition
primrose seed
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PCT/JP2021/038334
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亜由太 船木
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サントリーホールディングス株式会社
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Definitions

  • the present invention relates to a composition for activating TGR5 and the like.
  • TGR5 Transmembrane G protein-coupled receptor 5
  • TGR5 Transmembrane G protein-coupled receptor 5
  • Bile acids are known as in vivo ligands for TGR5. Bile acids in blood activate intracellular signals through binding to TGR5, and exert anti-obesity, hypoglycemic effects, and the like.
  • Patent Document 1 describes that soybean saponin and the like have a TGR5 activating action.
  • Receptor agonist compounds are desired to be highly selective for the targeted receptor. This is because when the selectivity is low, it is easy to bind to a receptor other than the target, so that it is difficult to obtain a desired effect sufficiently, and side effects are likely to occur.
  • TGR5 a substance having a TGR5 activating action and high selectivity for TGR5 is required. In Patent Document 1, the selectivity of the TGR5 activator to TGR5 has not been investigated.
  • the evening primrose seed extract has a TGR5 activating effect and is highly selective for TGR5.
  • TGR5 activation composition containing evening primrose seed extract as an active ingredient.
  • TGR5 activation composition which is a food or drink, a cosmetic, a pharmaceutical product, a quasi-drug, or a feed.
  • Use of evening primrose seed extract for producing a TGR5 activation composition is a food or drink, a cosmetic, a pharmaceutical product, a quasi-drug, or a feed.
  • Use of evening primrose seed extract for producing a TGR5 activation composition Use of evening primrose seed extract to activate TGR5.
  • a TGR5 activation composition or the like containing a substance having a TGR5 activating action and high selectivity for TGR5 as an active ingredient.
  • the composition for activating TGR5 of the present invention has a TGR5 activating action and has high selectivity for TGR5 by containing the evening primrose seed extract as an active ingredient.
  • the evening primrose seed extract used in the present invention is a component that has been ingested as a food raw material for a long time, and is also advantageous in that it is highly safe and can be ingested continuously. Further, according to the present invention, it is possible to provide the use of evening primrose seed extract for producing a composition for activating TGR5 and the use of evening primrose seed extract for activating TGR5.
  • the TGR5 activation composition of the present invention contains evening primrose seed extract as an active ingredient.
  • the TGR5 Transmembrane G protein-coupled Receptor 5
  • the TGR5 is preferably a human TGR5 (hTGR5).
  • Evening primrose seed extract has an action (agonist action) of activating TGR5.
  • Evening primrose seed extract has the effect of activating TGR5 and increasing the intracellular cAMP concentration.
  • Evening primrose seed extract is characterized by high selectivity for TGR5.
  • Evening primrose is classified into the evening primrose genus (scientific name: Evening primrose), evening primrose (scientific name: Evening primrose), evening primrose (scientific name: Evening primrose), evening primrose, etc.
  • the type of evening primrose used in the present invention is not particularly limited, and may be one type or two or more types. Of these, evening primrose is preferable.
  • the method for extracting evening primrose seeds for obtaining evening primrose seed extract is not particularly limited, and can be obtained by a usual extraction method used for extracting plant components.
  • the extraction method can be appropriately set, and the extraction conditions are not particularly limited.
  • evening primrose seeds as a raw material may be subjected to an extraction step as they are, or may be subjected to an extraction step after being crushed, cut or dried.
  • the evening primrose seed extract may be an extract obtained by extracting the evening primrose seed as it is, but may be an extract obtained by extracting the evening primrose seed from crushed, cut or dried.
  • the extraction solvent for extracting the evening primrose seed extract from the evening primrose seed is not particularly limited as long as the evening primrose seed extract can be extracted.
  • the extraction solvent used for preparing the evening primrose seed extract can be appropriately selected, and those usually used for extracting the evening primrose seed component can be used.
  • Examples of the extraction solvent include water; monohydric alcohols having 1 to 5 carbon atoms such as methanol, ethanol, propanol and butanol; ethylene glycol, propylene glycol, 1,2-butylene glycol, 1,3-butylene glycol and 1,4-.
  • Polyhydric alcohols having 2 to 5 carbon atoms such as butylene glycol, 2,3-butylene glycol and glycerin; ketones such as acetone and methyl ethyl ketone; esters such as methyl acetate and ethyl acetate; chains such as tetrahydrofuran, ethyl ether and diethyl ether.
  • the monohydric alcohol having 1 to 5 carbon atoms those having 1 to 4 carbon atoms are preferable, those having 2 to 4 carbon atoms are more preferable, and ethanol is more preferable.
  • the polyhydric alcohol having 2 to 5 carbon atoms a divalent or trivalent alcohol having 2 to 4 carbon atoms is preferable, a divalent alcohol is more preferable, and 1,3-butylene glycol is further preferable.
  • the extraction solvent water, a monohydric alcohol having 1 to 5 carbon atoms, a polyhydric alcohol having 2 to 5 carbon atoms, and a mixed solvent of two or more of these are preferable, and water and a monohydric alcohol having 2 to 4 carbon atoms are preferable.
  • an aqueous solution thereof, a dihydric alcohol having 2 to 4 carbon atoms or an aqueous solution thereof is more preferable, and water, ethanol, an aqueous ethanol solution, 1,3-butylene glycol, an aqueous solution of 1,3-butylene glycol are more preferable, and water, an aqueous ethanol solution or an aqueous solution thereof.
  • An aqueous solution of 1,3-butylene glycol is particularly preferable.
  • the ethanol or 1,3-butylene glycol aqueous solution preferably has an ethanol or 1,3-butylene glycol concentration of 10 to 98% by volume, more preferably 30 to 90% by volume, and further preferably 30 to 70% by volume. preferable.
  • the above solvent extract can be preferably used.
  • Acid or alkali may be added at the time of extraction to adjust the pH of the extraction solvent. After extraction, it is preferable to remove the evening primrose seed residue (evening primrose seed after extraction) from the extract.
  • the method for removing the evening primrose seed residue from the extract is not particularly limited, and examples thereof include known separation means such as filtration and centrifugation.
  • the following method can be used, for example. Finely crush the evening primrose seeds or dried products, add 0.1 to 30 times the amount of the extraction solvent by weight, and under normal pressure, preferably at room temperature for 10 minutes to 15 days, more preferably 30 minutes to 10 days, still more preferably 1. Extraction takes time to 7 days, or extraction is preferably performed in the vicinity of the boiling point of the extraction solvent for about 10 minutes to 1 day (more preferably 10 minutes to 2 hours), and then filtered to obtain a filtrate. At the time of extraction, it may be allowed to stand still or may be appropriately stirred. Further, the obtained filtrate (evening primrose seed extract) may be used as it is as evening primrose seed extract, and may be diluted, concentrated or dried as necessary.
  • the evening primrose seed extract obtained by extraction can be used as it is as evening primrose seed extract. Further, as long as the effect of the present invention is not impaired, it may be diluted, concentrated or dried by a known method to form a diluted solution, a concentrate or a powder, or it may be prepared in the form of a paste and used. Examples of the drying method include freeze-drying and spray-drying. Further, the evening primrose seed extract, its concentrate, dry powder and the like may be further purified by deodorization, decolorization and the like, if necessary, as long as the effects of the present invention are not impaired. Such a purification method may be carried out by arbitrarily selecting ordinary means.
  • the evening primrose seed extract in the present invention includes various solvent extracts obtained by the above-mentioned extraction methods, diluted solutions thereof, concentrates thereof or dry powders thereof, and purified products thereof. Further, the extract can also be used by diluting or dissolving it in a solvent different from the extraction solvent.
  • the evening primrose seed extract contained in the composition of the present invention may be extracted from the pressed cake obtained in the manufacturing process for obtaining evening primrose oil from evening primrose seeds by the above-mentioned extraction method.
  • the extraction temperature is not particularly limited, and may be extracted at room temperature, for example, or may be extracted at a temperature of 70 ° C. or higher.
  • the evening primrose seed extract may be obtained by the above-mentioned extraction method or may be a commercially available product.
  • Examples of commercial products of evening primrose seed extract include evening primrose seed extract-P (powder, Oryza oil conversion Co., Ltd.), evening primrose seed extract-WSPS (water-soluble powder, Oryza oil conversion Co., Ltd.), and evening primrose seed extract.
  • evening primrose seed extract LC trade name, Oryza Yuka Co., Ltd.
  • Luna White B trade name, Ichimaru Falcos Co., Ltd.
  • the intracellular cyclic AMP (cAMP) concentration increases. Through this increase in cAMP concentration, transcription of the target gene is activated and various actions are exerted. Activation of TGR5 can be confirmed by evaluation of activity by a reporter assay or analysis of gene expression downstream of the TGR5 signal.
  • the TGR5 activation composition of the present invention can be used to increase the intracellular cAMP concentration.
  • TGR5 increases mitochondrial activity through an increase in intracellular cAMP concentration, for example, in skeletal muscle and brown adipocytes, resulting in promotion of heat production, improvement of energy metabolism, and increase of fatty acid oxidation. Therefore, through the activation of TGR5, effects such as promotion of heat production and prevention or amelioration of obesity can be obtained. In addition, by increasing muscle mass and mitochondrial activity, effects such as improvement of motor function, improvement of endurance, and suppression of fatigue can be expected.
  • TGR5 activation in L cells of intestinal endocrine cells promotes glucose metabolism. Therefore, a hypoglycemic effect can be obtained through activation of TGR5.
  • bile acids exert an effect of enhancing gastrointestinal motility and improving constipation based on the activation of TGR5 (Alemi et al., Gastroenterology. 2013 Jan; 144 (1): 145. -154.).
  • TGR5 activation suppressed alcoholic fatty liver (Iracheta-Verve A et al, Hepatol Commun. 2018 Oct 15; 2 (11): 1379-1391).
  • the TGR5 activation composition of the present invention can be expected to exert the above-mentioned effects by activating TGR5.
  • primrose seed extract can be used, for example, through activation of TGR5, for example, muscle mass increase, muscle strength increase, muscle loss suppression or muscle weakness suppression, motor function improvement, endurance improvement, fatigue suppression, preflail, flail, sarcopenia, locomotive syndrome.
  • TGR5 activation composition of the present invention can be used, for example, to obtain the above-mentioned effects by activating TGR5.
  • the TGR5 activation composition of the present invention can be used, for example, for increasing muscle mass, increasing muscle strength, suppressing muscle mass loss or suppressing muscle weakness; for improving motor function or endurance, and the like. can.
  • the TGR5 activation composition of the present invention prevents or ameliorate a state or disease in which muscle mass or strength such as fatigue suppression, preflail, flail, sarcopenia, locomotive syndrome, etc. is reduced, and prevents or ameliorate obesity. It can be used for lowering blood glucose, promoting heat production, improving energy metabolism, promoting gastrointestinal motility, preventing or improving alcoholic fatty liver, preventing or improving metabolic syndrome, and the like.
  • prevention includes preventing the onset, delaying the onset, reducing the onset rate, reducing the risk of onset, and the like.
  • Improvement of a condition or disease is to recover the subject from the condition or disease, alleviate the symptoms of the condition or disease, improve the symptoms of the condition or disease, delay the progression of the condition or disease, or prevent it. Etc. are included.
  • the TGR5 activation composition of the present invention can be applied to either therapeutic use (medical use) or non-therapeutic use (non-medical use).
  • Non-therapeutic is a concept that does not include medical practice, ie human surgery, treatment or diagnosis.
  • the composition for activating TGR5 of the present invention can be provided, for example, in the form of foods and drinks, cosmetics, pharmaceuticals, quasi-drugs, feeds and the like, but is not limited thereto.
  • the composition for activating TGR5 of the present invention may be food or drink, cosmetics, pharmaceuticals, quasi-drugs, feeds, etc. used for TGR5 activity by itself, and is used by blending them. It may be a formulation or material such as an additive.
  • the composition for activating TGR5 of the present invention can be provided in the form of an agent as an example, but is not limited to this form.
  • the agent can be provided as it is as a composition or as a composition containing the agent.
  • the TGR5 activation composition of the present invention may be an oral composition or a parenteral composition, but is preferably an oral composition.
  • the oral composition include foods and drinks, oral medicines, quasi-drugs for oral use, and feeds, and foods and drinks are preferable.
  • the parenteral composition include parenteral drugs, quasi-drugs for parenteral use, and cosmetics.
  • composition for activating TGR5 of the present invention can contain any additives and any components in addition to the above-mentioned evening primrose seed extract as long as the effects of the present invention are not impaired.
  • additives and ingredients can be selected according to the form of the composition and the like, and generally, those that can be used for foods and drinks, cosmetics, pharmaceuticals, quasi-drugs, feeds and the like can be used. Any additive or component may be used alone or in combination of two or more.
  • excipients, binders, emulsifiers, tensioning agents (isotonic agents), buffers, solubilizing agents, preservatives, stabilizers to be added in the formulation.
  • TGR5 activation composition of the present invention is used as a food or drink, a cosmetic, a pharmaceutical product, a quasi-drug, a feed, or the like, the production method thereof is not particularly limited and can be produced by a general method.
  • the evening primrose seed extract contains ingredients that can be used in the food and drink (for example, food and drink materials such as the above-mentioned optional ingredients, and additives used as necessary). Etc.) can be blended to make various foods and drinks.
  • the food and drink is not particularly limited, and examples thereof include general food and drink, health food, health drink, food with functional claims, food for specified health use, food and drink for the sick, food additives, and raw materials thereof.
  • the form of the food or drink is not particularly limited, and examples thereof include solid, semi-fluid, and fluid.
  • Foods and drinks are oral solid preparations such as tablets, coated tablets, fine granules, granules, powders, pills, capsules, dry syrups and chewables; various forms of oral liquid preparations such as oral liquids and syrups. It can also be.
  • the evening primrose seed extract may be blended in the cosmetic, and the evening primrose seed extract may be blended with a carrier, an additive or the like acceptable for the cosmetic.
  • the above-mentioned cosmetics include components such as carriers and additives that are acceptable for cosmetics, for example, water, alcohols, oils, surfactants, thickeners, metal soaps, etc., as long as the effects of the present invention are not impaired. Gelling agents, powders, chelating agents, water-soluble polymers, film-forming agents, resins, inclusion compounds, antibacterial agents, deodorants, salts, pH adjusters, UV absorbers, derived from animals, plants and microorganisms other than the above.
  • Cosmetics can be manufactured by a general manufacturing method. For example, it can be obtained by mixing the evening primrose seed extract with one or two or more components that can be used in the above cosmetics and then processing the extract into a desired form.
  • the product form of the cosmetic is not particularly limited.
  • the composition for activating TGR5 of the present invention is used as a drug or a quasi-drug, for example, a pharmacologically acceptable excipient or the like is mixed with the evening primrose seed extract to form a drug or a drug in various dosage forms. It can be an external product.
  • the administration form of the drug or quasi-drug may be oral administration or parenteral administration. From the viewpoint of obtaining the effect of the present invention more sufficiently, the administration form is preferably oral administration.
  • the dosage form may be a dosage form suitable for the administration form.
  • an oral solid preparation such as a tablet, a coated tablet, a fine granule, a granule, a powder, a pill, a capsule, a dry syrup, or a chewable agent
  • Oral liquid preparations such as syrups.
  • Dosage forms of parenteral drugs or non-oral drugs include injections, infusions, ointments, lotions, patches, suppositories, nasal agents, transpulmonary agents (inhalants) and the like. ..
  • the drug may be a non-human animal drug.
  • the evening primrose seed extract can be mixed with ingredients that can be used in the feed to prepare the feed.
  • the feed include livestock feeds used for cattle, pigs, chickens, sheep, horses and the like; small animal feeds used for rabbits, guinea pigs, rats, mice and the like; pet foods used for dogs, cats, small birds and the like. ..
  • the content of evening primrose seed extract in the TGR5 activation composition of the present invention is not particularly limited and can be appropriately set according to the form of the composition and the like.
  • the content of the evening primrose seed extract (dry matter equivalent) in the composition of the present invention is, for example, preferably 0.001% by weight or more, more preferably 0.01% by weight or more, and 0.05% by weight in the composition. % Or more is more preferable, and 10% by weight or less is preferable, and 5% by weight or less is more preferable.
  • the content of evening primrose seed extract (dry matter equivalent) is preferably 0.001 to 10% by weight, more preferably 0.01 to 5% by weight, and 0.05 to 5% by weight in the composition. More preferred.
  • the above content is the total content of two or more different types of evening primrose seed extracts.
  • the TGR5 activation composition of the present invention can be ingested or administered by an appropriate method according to its form.
  • the TGR5 activation composition of the present invention is preferably ingested (orally administered) orally.
  • the dose (which can also be referred to as ingestion) of the composition of the present invention is not particularly limited.
  • the dose of the TGR5 activation composition of the present invention may be any amount (effective amount) that can obtain the TGR5 activation effect, and may be appropriately set according to the administration form, administration method, body weight of the subject, and the like. .. Preferably, it is orally administered or ingested.
  • the dose of evening primrose seed extract (dry matter equivalent) is preferably 60 kg per day, preferably. Is 1 mg or more, more preferably 10 mg or more, still more preferably 100 mg or more, preferably 1000 mg or less, more preferably 500 mg or less, still more preferably 300 mg or less. In one embodiment, the dose of evening primrose seed extract (dry matter equivalent) is 60 kg per day for humans (adults), preferably 1 to 1000 mg, more preferably 10 to 500 mg, still more preferably 100 to 300 mg. Is.
  • the composition of the present invention can be used to ingest or administer the above amount of evening primrose seed extract per day to humans per 60 kg of body weight.
  • the above total dose is the total amount of the evening primrose seed extract when two or more kinds are used.
  • the TGR5 activation composition of the present invention is preferably continuously ingested or administered. Evening primrose seed extract is expected to enhance the above effects by continuous ingestion or administration.
  • the TGR5 activation composition of the present invention is preferably ingested or administered continuously for 1 week or longer, more preferably 4 weeks or longer, further preferably 8 weeks or longer, and particularly preferably 12 weeks or longer. It is preferable to be done.
  • the subject to which the TGR5 activation composition of the present invention is administered or ingested is preferably a mammal (human or non-human mammal), and more preferably a human.
  • the subject to be administered in the present invention is preferably a subject requiring or wishing to activate TGR5.
  • the subjects to be administered in the present invention include subjects that require or desire to increase muscle mass, increase muscle strength, suppress muscle mass loss, or suppress muscle weakness; subjects that require or desire to improve motor function or endurance. Be done. Such subjects include, for example, middle-aged and elderly people, subjects who need or desire prevention or improvement of frailty syndrome, locomotive syndrome or sarcopenia, athletes and the like.
  • the middle-aged person may be, for example, a human being 40 years or older.
  • the elderly are preferable as the target.
  • the elderly person may be, for example, a human aged 60 years or older or 65 years or older.
  • the composition of the present invention may also be used for healthy subjects, for example, for the purpose of preventing or preventing symptoms or diseases that can be expected to be prevented or improved by increasing muscle mass, increasing muscle strength, suppressing muscle loss or suppressing muscle weakness. can.
  • the TGR5 activation composition of the present invention one or two or more of the intended use, the type of active ingredient, the above-mentioned effect, the method of use (for example, ingestion method, administration method), etc. are indicated on the packaging, container, instruction manual, etc. You may.
  • the composition for activating TGR5 of the present invention may be labeled as having a TGR5 activating action or an action based on this action.
  • the TGR5 activation composition of the present invention has such indications, for example, "suppression of muscle loss", “maintenance of muscle”, “muscle gain”, “improvement of muscle”, “suppression of muscle weakness”.
  • the TGR5 activation composition of the present invention may be, for example, "anti-obesity”, “prevention of obesity”, “improvement of obesity”, “reduction of waist circumference”, “maintenance of waist circumference”. , “Maintaining a slim body”, “Suppressing the accumulation of body fat”, “Reducing body fat”, “Suppressing the accumulation of visceral fat”, “Reducing visceral fat”, “Suppressing the accumulation of fat in the liver” , “Reduction of fat in the liver", “Weight loss”, “Weight loss", “Diet”, “Fat burning”, “Fat consumption”, “Flip metabolism", “Military function", “Thermal production”, " One or two or more functions such as “basic metabolism”, “metabolic function”, “metabolic power”, “prevention of metabolic syndrome", and “improvement of metabolic syndrome” may be indicated.
  • the TGR5 activation composition of the present invention may be, for example, "suppressing the rise in blood glucose level after meals”, “moderating the rise in blood glucose level after meals”, and “lowering the blood glucose level after meals”. , “For those who are concerned about blood sugar level”, “For those who are concerned about blood sugar level after meals”, “Improving the constitution that blood sugar level tends to rise”, etc. May be good.
  • the present invention also includes the following methods for activating TGR5, the use for activating TGR5.
  • the above method may be a therapeutic method or a non-therapeutic method.
  • the above uses may be therapeutic or non-therapeutic.
  • TGR5 can be activated in the subject.
  • Evening primrose seed extract can be used to activate TGR5 in a subject.
  • evening primrose seed extract in an amount (which can be said to be an effective amount) that gives a desired effect may be used.
  • TGR5 activation composition are the same as the above-mentioned TGR5 activation composition. Evening primrose seed extract may be administered as it is, or may be administered as a composition containing the same.
  • the TGR5 activation composition of the present invention described above may be administered.
  • the present invention also includes the use of evening primrose seed extract for producing a TGR5 activation composition.
  • the composition for activating TGR5 and a preferred embodiment thereof are the same as described above.
  • Example 1 The TGR5 activating effect of the test substance was evaluated by a luciferase assay.
  • This evaluation system determines the activation of human TGR5 (hTGR5) by transcriptional activation of cAMP response element binding protein (CREB), which is a signal downstream of TGR5. Since the binding of CREB to CRE is activated and the transcription of the luciferase gene is induced as the intracellular cAMP concentration increases, the activation of CREB can be evaluated by quantification of luciferase activity.
  • CREB cAMP response element binding protein
  • hTGR forcibly expressing cells in addition to the cells forcibly expressing hTGR5 (also referred to as hTGR forcibly expressing cells), a glucagon-like peptide which is a G protein-conjugated receptor like hTGR5- A luciferase assay was performed on cells in which 1 (GLP-1) receptor (GLP1R) was forcibly expressed in place of hTGR5 (also referred to as hGLP1R forcible expression cells). The hGLP1R forced expression cells do not express hTGR5. Both GLP1R and TGR5 are G protein-coupled receptors, and when GLP1R is activated, intracellular cAMP increases.
  • the luciferase activity is increased in hTGR5 forced expression cells by the addition of the test substance, it is judged that the substance has a TGR5 activating effect. Further, the test substance was added to the hTGR5 forced expression cells and the GLP1R forced expression cells, and the greater the increase in the luciferase activity in the hTGR5 forced expression cells with respect to the increase in the luciferase activity in the GLP1R forced expression cells, the more the test substance was transferred to TGR5. It can be said that the selectivity is high.
  • the hTGR expression vector (pTGR5) was prepared by the following procedure.
  • An expression vector for eukaryotic organisms pcDNA3.1 (+) (Invitrogen (registered trademark), manufactured by Thermo Fisher Scientific), the synthesized DNA was inserted using the cloning sites BamHI and EcoRI of the vector into the hTGR expression vector (hTGR expression vector).
  • a plasmid) was prepared. The host of transformation is E.
  • a plasmid was prepared using colli K12 (dam + dcm + tonA).
  • the constructed hTGR expression vector was named pTGR5.
  • CRE-reactive luciferase expression vector pCRE / Luc
  • pGL4.29 [luc2P / CRE / Hygro] manufactured by Promega was used.
  • This plasmid is a vector carrying a luciferase gene linked to cAMP response element (CRE).
  • the purified plasmid is treated with multiple restriction enzymes together with the plasmid used for transformation, and the enzyme-treated fragments are compared by electrophoresis and the same pattern is confirmed, so that the purified plasmid is the same as the original vector. It was confirmed that the same structure was maintained (results not shown).
  • the plasmid purified above was used.
  • DMEM High-glucose
  • PBS Phosphate Buffered Salts
  • HEK293 cells human fetal kidney cell line, ATCC: CRL-2828
  • FBS fetal bovine serum
  • the medium was removed and the cells were washed with 10 mL of PBS (-) solution.
  • Add 1 mL of trypsin solution (0.25% trypsin-EDTA (manufactured by Nakaraitesk Co., Ltd.) diluted 10-fold with PBS solution) to the cells, leave for about 30 seconds, peel off the cells, and then add 10 mL of medium.
  • trypsin solution 0.25% trypsin-EDTA (manufactured by Nakaraitesk Co., Ltd.) diluted 10-fold with PBS solution
  • an incubator 37 ° C, 5% CO 2 .
  • the plasmid was introduced into HEK293 cells according to the following procedure. Take 45 ⁇ L of X-tremeGENE (registered trademark) (Roche) in a 1.5 mL tube, add 705 ⁇ L of OptiMEM (registered trademark) I Reduced Serum Medium (Thermo Fisher SCIENTIFIC) at room temperature, and mix immediately after two rotations. , The solution was spun down to obtain an X-tremeGENE diluted solution.
  • X-tremeGENE registered trademark
  • OptiMEM registered trademark
  • I Reduced Serum Medium Thermo Fisher SCIENTIFIC
  • plasmid hTGR5 expression vector (pTGR) (5 ⁇ g) and CRE-reactive luciferase expression vector (pCRE / Luc) (5 ⁇ g)
  • pTGR hTGR5 expression vector
  • pCRE / Luc CRE-reactive luciferase expression vector
  • the collected cells were transferred to a 50 mL centrifuge tube and centrifuged at room temperature 1000 rpm for 3 minutes.
  • the obtained pellets were loosened with 2 mL of medium, a part thereof was diluted 10-fold with 0.2% trypan blue, and the number of cells was counted using a blood cell counter.
  • Cells were suspended in seed medium (DMEM (FBS-free, including penicillin / streptomycin (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.))), and 75 ⁇ L / well was a 96-well white clear plate (Corning, Corning 96-well white).
  • the cells were seeded in a transparent bottom flat-bottom cell culture surface-treated polystyrene microplate) and cultured in an incubator (37 ° C., 5% CO 2 ) to obtain hTGR5 forced expression cells.
  • hGLP1 forced expression cells A vector expressing the human GLP1 receptor (hGLP1R) gene was introduced into HEK293 cells to prepare cells in which hGLP1R was forcibly expressed.
  • GLP1R NM_002062
  • ORIGENE Human United Clone
  • the hGLP1R expression vector was introduced into HEK293 cells by the same method as above except that the above hGLP1R expression vector was used instead of the hTGR5 expression vector (pSTW01), and hGLP1R forced expression cells were obtained.
  • the evening primrose seed extract (Evening primrose extract-P (manufactured by Oryza Yuka Co., Ltd.)) (final concentration: 20 ⁇ g / mL) was added, and the cells were further cultured for 5 hours. Evening primrose seed extract was added by dissolving it in dimethyl sulfoxide (DMSO (manufactured by Nacalai Tesque, Inc., final concentration 0.1%)). In addition, DMSO was added instead of evening primrose seed extract (final concentration was 0.1%) to make a negative control.
  • DMSO dimethyl sulfoxide
  • Dual-Glo Luciferase Assay Reagent attached to the Dual-Glo® Luciferase Assay System (manufactured by Promega) at 75 ⁇ L / well, incubate at room temperature for 10 minutes, and then incubate at room temperature for 10 minutes, and then use the multimode microplate reader FL.
  • the emission intensity was measured using MOLECULAR DEVICES). The luminescence intensity was defined as luciferase activity. In this evaluation system, sea shiitake luciferase is used as an internal standard.
  • luciferase luminescence measurement was performed in the same manner as above using hGLP1R forced expression cells instead of hTGR forced expression cells.
  • the hTGR5 forced expression cells supplemented with the evening primrose seed extract had significantly stronger luminescence intensity than the negative control (2.0 times that of the negative control), indicating that the evening primrose seed extract had an hTGR5 activating effect.
  • the selectivity of the evening primrose seed extract to TGR5 was evaluated by the ratio (hTGR5 / hGLP1R) of the luciferase activity (hTGR5) in the hTGR5 forced expression cells to the luciferase activity (hGLP1R) in the hGLP1R forced expression cells to which the evening primrose seed extract was added. bottom.
  • the ratio (hTGR5 / hGLP1R) of the luciferase activity (hTGR5) in the hTGR5 forced expression cells to the luciferase activity (hGLP1R) in the hGLP1R forced expression cells supplemented with evening primrose seed extract is shown in Table 1.
  • hGLP1R luciferase activity
  • hGLP1R forced expression cells hGLP1R forced expression cells supplemented with Lithocholic acid or Taurolithocholic Acid Sodium Salt as a positive control
  • hTGR5 the ratio of luciferase activity
  • hTGR5 forced expression cells hTGR5 forced expression cells
  • Table 1 shows the ratio (hTGR5 / hGLP1R) of the luciferase activity (hTGR5) in the hTGR5 forced expression cells to the luciferase activity (hGLP1R) in the hGLP1R forced expression cells to which DMSO was added as a negative control.
  • the description of "Taurolithocholic acid” in Table 1 indicates “Taurolithocholic Acid Sodium Salt”.
  • evening primrose seed extract has a TGR5 activating effect. It was also shown that evening primrose seed extract has higher selectivity for hTGR5 than positive and negative controls.

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Abstract

本発明は、ＴＧＲ５活性化作用を有し、かつＴＧＲ５に対する選択性が高い物質を有効成分として含むＴＧＲ５活性化用組成物を提供することを目的とする。 本発明は、月見草種子エキスを有効成分として含有するＴＧＲ５活性化用組成物に関する。

Description

ＴＧＲ５活性化用組成物
本発明は、ＴＧＲ５活性化用組成物などに関する。
ＴＧＲ５（Ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ　Ｇ　ｐｒｏｔｅｉｎ－ｃｏｕｐｌｅｄ　Ｒｅｃｅｐｔｏｒ　５）は、Ｇタンパク質共役胆汁酸受容体であり、骨格筋、褐色脂肪組織などの多くの組織に発現している。ＴＧＲ５の生体内リガンドとして胆汁酸が知られている。血液中の胆汁酸は、ＴＧＲ５との結合を介して細胞内シグナルを活性化し、抗肥満、血糖降下作用等を発揮する。特許文献１には、ダイズサポニン等がＴＧＲ５活性化作用を有することが記載されている。
特開２０１６－２７０１２号公報
受容体のアゴニスト化合物は、標的とする受容体に対する選択性が高いことが望まれる。選択性が低いと、標的以外の受容体に結合しやすいため、所望の効果が充分に得にくい、副作用が生じるなどの問題が生じやすいためである。ＴＧＲ５についても、ＴＧＲ５活性化作用を有し、かつＴＧＲ５に対する選択性が高い物質が求められている。特許文献１では、ＴＧＲ５活性化剤のＴＧＲ５への選択性は検討されていない。
本発明は、ＴＧＲ５活性化作用を有し、かつＴＧＲ５に対する選択性が高い物質を有効成分として含むＴＧＲ５活性化用組成物を提供することを目的とする。また、本発明は、ＴＧＲ５活性化用組成物を製造するための月見草種子エキスの使用、及び、ＴＧＲ５を活性化するための月見草種子エキスの使用を提供することを目的とする。
本発明者らは、上記課題に鑑み鋭意研究した結果、月見草種子エキスが、ＴＧＲ５活性化作用を有し、しかもＴＧＲ５に対する選択性が高いことを見出した。
すなわち、これに限定されるものではないが、本発明は以下のＴＧＲ５活性化用組成物などに関する。
〔１〕月見草種子エキスを有効成分として含有するＴＧＲ５活性化用組成物。
〔２〕飲食品、化粧料、医薬品、医薬部外品又は飼料である上記〔１〕に記載のＴＧＲ５活性化用組成物。
〔３〕ＴＧＲ５活性化用組成物を製造するための、月見草種子エキスの使用。
〔４〕ＴＧＲ５を活性化するための、月見草種子エキスの使用。
本発明によれば、ＴＧＲ５活性化作用を有し、かつＴＧＲ５に対する選択性が高い物質を有効成分として含むＴＧＲ５活性化用組成物等が提供される。本発明のＴＧＲ５活性化用組成物は、月見草種子エキスを有効成分として含有することにより、ＴＧＲ５活性化作用を有し、かつＴＧＲ５に対する選択性が高いものである。本発明で使用される月見草種子エキスは、古くから食品原料として摂取されてきた成分であり、安全性が高く継続的に摂取できる点でも有利である。また、本発明によれば、ＴＧＲ５活性化用組成物を製造するための月見草種子エキスの使用、及び、ＴＧＲ５を活性化するための月見草種子エキスの使用を提供することができる。
本発明のＴＧＲ５活性化用組成物は、月見草種子エキスを有効成分として含む。
本発明において、ＴＧＲ５（Ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ　Ｇ　ｐｒｏｔｅｉｎ－ｃｏｕｐｌｅｄ　Ｒｅｃｅｐｔｏｒ　５）は、好ましくはヒトＴＧＲ５（ｈＴＧＲ５）である。
月見草種子エキスは、ＴＧＲ５を活性化する作用（アゴニスト作用）を有する。月見草種子エキスは、ＴＧＲ５を活性化させ、細胞内ｃＡＭＰ濃度を上昇させる作用を有する。月見草種子エキスは、ＴＧＲ５に対する選択性が高いという特徴を有する。
月見草は、マツヨイグサ属（学名：Ｏｅｎｏｔｈｅｒａ）に分類され、コマツヨイグサ（学名：Ｏｅｎｏｔｈｅｒａ　ｌａｃｉｎｉａｔａ）、マツヨイグサ（学名：Ｏｅｎｏｔｈｅｒａ　ｓｔｒｉａｔａ）、メマツヨイグサ（学名：Ｏｅｎｏｔｈｅｒａ　ｂｉｅｎｎｉｓ）、オオマツヨイグサ（学名：Ｏｅｎｏｔｈｅｒａ　ｅｒｙｔｈｒｏｓｅｐａｌａ）等が代表的な種として知られている。
本発明で使用される月見草の種類は特に制限されず、１種であってもよく、２種以上であってもよい。中でも、メマツヨイグサが好ましい。
月見草種子エキスを得るための月見草種子の抽出方法は特に限定されず、植物成分の抽出に用いられる通常の抽出方法により得ることができる。抽出方法は適宜設定することができ、抽出条件も特に限定されない。例えば、月見草種子を常温又は加温下にて溶媒（抽出溶媒）で抽出することにより月見草種子エキスを得ることが好ましい。月見草種子エキスの調製において、原料である月見草種子はそのまま抽出工程に付されてもよく、粉砕、切断又は乾燥された後に抽出工程に付されてもよい。本発明において月見草種子エキスは、月見草種子をそのまま抽出した抽出物であってよいが、月見草種子を粉砕、切断又は乾燥したものから抽出した抽出物であってよい。好ましくは、月見草種子を粉砕、切断又は乾燥したものからの抽出物である。
また、月見草の種子から月見草種子エキスを抽出するための抽出溶媒としては、月見草種子エキスを抽出できれば特に限定されるものではない。
月見草種子エキスの調製に用いる抽出溶媒は適宜選択することができ、月見草種子成分の抽出に通常用いられるものを使用することができる。抽出溶媒として、例えば水；メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等の炭素数１～５の１価アルコール；エチレングリコール、プロピレングリコール、１，２－ブチレングリコール、１，３－ブチレングリコール、１，４－ブチレングリコール、２，３－ブチレングリコール、グリセリン等の炭素数２～５の多価アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン；酢酸メチル、酢酸エチル等のエステル；テトラヒドロフラン、エチルエーテル、ジエチルエーテル等の鎖状及び環状エーテル；ポリエチレングリコール等のポリエーテル；スクワラン等が挙げられる。これらは単独で用いてもよいし、２種以上を組み合わせた混合溶媒（混合液）を用いてもよい。炭素数１～５の１価アルコールとして、炭素数１～４のものが好ましく、炭素数２～４のものがより好ましく、エタノールがさらに好ましい。炭素数２～５の多価アルコールとして、炭素数２～４の２価又は３価のアルコールが好ましく、２価のアルコールがより好ましく、１，３－ブチレングリコールがさらに好ましい。中でも、抽出溶媒として、水、炭素数１～５の１価アルコール、炭素数２～５の多価アルコール、これらの２種以上の混合溶媒が好ましく、水、炭素数２～４の１価アルコール又はその水溶液、炭素数２～４の２価アルコール又はその水溶液がより好ましく、水、エタノール、エタノール水溶液、１，３－ブチレングリコール、１，３－ブチレングリコール水溶液がさらに好ましく、水、エタノール水溶液又は１，３－ブチレングリコール水溶液が特に好ましい。一態様において、エタノール水溶液及び１，３－ブチレングリコール水溶液は、エタノール又は１，３－ブチレングリコール濃度が１０～９８体積％が好ましく、３０～９０体積％がより好ましく、３０～７０体積％がさらに好ましい。本発明における月見草種子エキスとして、上記の溶媒抽出物を好適に使用することができる。
抽出に際して酸又はアルカリを添加し、抽出溶媒のｐＨを調整してもよい。抽出後には、月見草種子残渣（抽出後の月見草種子）を抽出液から除去することが好ましい。月見草種子残渣を抽出液から除去する方法は特に限定されず、ろ過、遠心分離等の公知の分離手段が挙げられる。
月見草種子エキスの抽出方法の一例として、例えば以下の方法が使用できる。月見草種子又は乾燥物を細砕し、抽出溶媒を重量で０．１～３０倍量加え、常圧下、室温で好ましくは１０分～１５日、より好ましくは３０分～１０日、さらに好ましくは１時間～７日抽出するか、又は、抽出溶媒の沸点付近で好ましくは１０分～１日（より好ましくは１０分～２時間）程抽出してからろ過してろ液を得る。抽出の際は、静置してもよく、適宜攪拌を行ってもよい。また、得られたろ液（月見草種子抽出液）をそのまま月見草種子エキスとしてもよく、必要に応じ希釈、濃縮又は乾燥等してもよい。
本発明においては、抽出により得られた月見草種子抽出液をそのまま月見草種子エキスとして用いることができる。また、本発明の効果を損なわない限り、公知の方法により希釈、濃縮又は乾燥して、希釈液、濃縮物や粉末としてもよく、ペースト状に調製して用いることもできる。乾燥方法として、例えば、凍結乾燥、噴霧乾燥等が挙げられる。さらに、上記の月見草種子エキス、その濃縮物や乾燥粉末等について、本発明の効果を損なわない範囲で、必要に応じて、さらに脱臭、脱色等の精製を行ってもよい。このような精製方法は、通常の手段を任意に選択して行えばよい。
本発明における月見草種子エキスは、上記のような抽出方法で得られた各種溶媒抽出液、その希釈液、その濃縮物又はその乾燥粉末、これらの精製物を含む。また、抽出物は、抽出溶媒とは異なる溶媒で希釈又は溶解させて用いることもできる。
本発明の組成物に含まれる月見草種子エキスは、月見草種子から月見草油を得る製造工程において得られる圧搾粕から、上述の抽出方法により抽出される場合もある。
抽出温度としては、特に制限はなく、例えば、常温で抽出されてもよく、また、７０℃以上の温度で抽出されてもよい。
月見草種子エキスは、上述の抽出方法により得られたものであってもよいし、市販品であってもよい。月見草種子エキスの市販品の例としては、月見草種子エキス－Ｐ（粉末、オリザ油化（株））、月見草種子エキス－ＷＳＰＳ（水溶性粉末、オリザ油化（株））の他、月見草種子エキス粉末を水及び１，３－ブチレングリコールの混合溶媒に溶解させたものとして、月見草種子エキスＬＣ（商品名、オリザ油化（株））、ルナホワイトＢ（商品名、一丸ファルコス（株））等が挙げられる。
ＴＧＲ５に活性化（アゴニスト）作用を有する物質が結合すると、細胞内のサイクリックＡＭＰ（ｃＡＭＰ）濃度が上昇する。このｃＡＭＰ濃度の上昇を介して、標的遺伝子の転写が活性化されて種々の作用が発揮される。ＴＧＲ５の活性化は、レポーターアッセイによる活性の評価や、ＴＧＲ５シグナル下流の遺伝子発現の解析によって確認することができる。
一態様において、本発明のＴＧＲ５活性化用組成物は、細胞内ｃＡＭＰ濃度を上昇させるために使用することができる。
ＴＧＲ５を活性化すると、筋肉細胞の分化が促進されたことや、骨格筋特異的にＴＧＲ５を高発現させたマウスでは、筋量（筋肉量）が増加したことが報告されている（Ｓａｓａｋｉ　ｅｔ　ａｌ．，　Ｊ．　Ｂｉｏｌ．　Ｃｈｅｍ．　（２０１８）　２９３（２６），　１０３２２－１０３３２）。従ってＴＧＲ５の活性化は、筋量の増加をもたらす。筋量増加により、筋力増加、筋量の減少抑制、筋力の低下抑制などの効果が得られる。また、このような効果により、例えば、筋量維持、筋力維持、低下した筋量又は筋力の回復などが可能となる。
また、ＴＧＲ５の活性化は、例えば骨格筋や褐色脂肪細胞においては、細胞内ｃＡＭＰ濃度の上昇を介してミトコンドリア活性を上昇させ、熱産生促進、エネルギー代謝改善、脂肪酸酸化の増加をもたらす。従って、ＴＧＲ５の活性化を介して、熱産生促進、肥満の予防又は改善などの効果が得られる。また、筋量増加、ミトコンドリア活性の上昇により、運動機能向上、持久力向上、疲労抑制などの効果が期待できる。
腸管内分泌細胞のＬ細胞におけるＴＧＲ５の活性化は、糖代謝を促進する。従ってＴＧＲ５の活性化を介して、血糖降下効果が得られる。また、胆汁酸がＴＧＲ５の活性化を介して消化管運動の亢進とそれに基づく便秘の改善作用を発揮することが報告されている（Ａｌｅｍｉ　ｅｔ　ａｌ．，　Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ．　２０１３　Ｊａｎ；　１４４（１）：　１４５－１５４．）。上記以外にも、ＴＧＲ５活性化がアルコール性脂肪肝を抑制したこと（Ｉｒａｃｈｅｔａ－Ｖｅｌｌｖｅ　Ａ　ｅｔ　ａｌ，，　Ｈｅｐａｔｏｌ　Ｃｏｍｍｕｎ．　２０１８　Ｏｃｔ　１５；２（１１）：１３７９－１３９１）が報告されている。本発明のＴＧＲ５活性化用組成物は、ＴＧＲ５を活性化することにより、上記のような作用を発揮することが期待できる。
月見草種子エキスは、ＴＧＲ５の活性化を介して、例えば、筋量増加、筋力増加、筋量減少抑制又は筋力低下抑制、運動機能向上、持久力向上、疲労抑制、プレフレイル、フレイル、サルコペニア、ロコモティブシンドローム等の筋量又は筋力が低下した状態または疾患の予防又は改善、肥満の予防又は改善、血糖降下、熱産生促進、エネルギー代謝改善、消化管運動の亢進、アルコール性脂肪肝の予防又は改善、メタボリックシンドロームの予防又は改善等の効果を発揮することが期待される。
本発明のＴＧＲ５活性化用組成物は、ＴＧＲ５を活性化することにより、例えば上記の効果を得るために使用することができる。一態様において、本発明のＴＧＲ５活性化用組成物は、例えば、筋量増加、筋力増加、筋量減少抑制又は筋力低下抑制のため；運動機能向上又は持久力向上等のために使用することができる。一態様において、本発明のＴＧＲ５活性化用組成物は、例えば、疲労抑制、プレフレイル、フレイル、サルコペニア、ロコモティブシンドローム等の筋量又は筋力が低下した状態または疾患の予防又は改善、肥満の予防又は改善、血糖降下、熱産生促進、エネルギー代謝改善、消化管運動の亢進、アルコール性脂肪肝の予防又は改善、メタボリックシンドロームの予防又は改善等のために使用することができる。
本発明において、予防は、発症を防止すること、発症を遅延させること、発症率を低下させること、発症のリスクを軽減すること等を包含する。状態又は疾患の改善は、対象を状態又は疾患から回復させること、状態又は疾患の症状を軽減すること、状態又は疾患の症状を好転させること、状態又は疾患の進行を遅延させること、防止すること等を包含する。
本発明のＴＧＲ５活性化用組成物は、治療用途（医療用途）又は非治療用途（非医療用途）のいずれにも適用することができる。非治療的とは、医療行為、すなわち人間の手術、治療又は診断を含まない概念である。
本発明のＴＧＲ５活性化用組成物は、例えば、飲食品、化粧料、医薬品、医薬部外品、飼料等の形態で提供することができるが、これらに限定されるものではない。本発明のＴＧＲ５活性化用組成物は、それ自体がＴＧＲ５活性のために用いられる飲食品、化粧料、医薬品、医薬部外品、飼料等であってもよく、これらに配合して使用される添加剤等の製剤、素材であってもよい。本発明のＴＧＲ５活性化用組成物は、一例として、剤の形態で提供することができるが、本形態に限定されるものではない。当該剤をそのまま組成物として、又は、当該剤を含む組成物として提供することもできる。
一態様において、本発明のＴＧＲ５活性化用組成物は、経口用組成物であってよく、非経口用組成物であってもよいが、好ましくは経口用組成物である。経口用組成物として、飲食品、経口用医薬品、経口用医薬部外品、飼料が挙げられ、好ましくは飲食品である。非経口用組成物として、非経口用医薬品、非経口用医薬部外品、化粧料が挙げられる。
本発明のＴＧＲ５活性化用組成物は、本発明の効果を損なわない限り、上述した月見草種子エキス以外に、任意の添加剤、任意の成分を含有することができる。これらの添加剤及び成分は、組成物の形態等に応じて選択することができ、一般的に飲食品、化粧料、医薬品、医薬部外品、飼料等に使用可能なものが使用できる。任意の添加剤又は成分は、１種用いてもよく、２種以上を組み合わせて用いてもよい。
また、任意の添加剤又は成分の一例として、製剤化において配合される賦形剤、結合剤、乳化剤、緊張化剤（等張化剤）、緩衝剤、溶解補助剤、防腐剤、安定化剤、抗酸化剤、着色剤、凝固剤、コーティング剤、香料等が挙げられる。
本発明のＴＧＲ５活性化用組成物を、飲食品、化粧料、医薬品、医薬部外品、飼料等とする場合、その製造方法は特に限定されず、一般的な方法により製造することができる。
本発明のＴＧＲ５活性化用組成物を飲食品とする場合、月見草種子エキスに、飲食品に使用可能な成分（例えば、上記の任意成分等の飲食品素材、必要に応じて使用される添加剤等）を配合して、種々の飲食品とすることができる。飲食品は特に限定されず、例えば、一般的な飲食品、健康食品、健康飲料、機能性表示食品、特定保健用食品、病者用飲食品、食品添加剤、これらの原料等が挙げられる。飲食品の形態も特に限定されず、固形状、半流動状、流動状などを挙げることができる。飲食品は、錠剤、被覆錠剤、細粒剤、顆粒剤、散剤、丸薬、カプセル剤、ドライシロップ剤、チュアブル剤等の経口用固形製剤；内服液剤、シロップ剤等の経口用液体製剤の各種製剤形態とすることもできる。
本発明のＴＧＲ５活性化用組成物を化粧料とする場合、月見草種子エキスを化粧料に配合すればよく、月見草種子エキスに化粧料に許容される担体、添加剤等を配合することができる。
上記化粧料には、本発明の効果を損なわない範囲で、化粧料に許容される担体、添加剤等の成分、例えば、水、アルコール類、油剤、界面活性剤、増粘剤、金属セッケン、ゲル化剤、粉体、キレート剤、水溶性高分子、皮膜形成剤、樹脂、包接化合物、抗菌剤、消臭剤、塩類、ｐＨ調整剤、紫外線吸収剤、上記以外の動植物・微生物由来の抽出物、角質溶解剤、酵素、ホルモン類、他のビタミン類、保湿剤、殺菌剤、抗炎症剤、香料等の１又は２以上を適宜含有させることができる。化粧料は、一般的な製造法により製造することができる。例えば、上記月見草種子エキスと、上記の化粧料に使用し得る成分１又は２以上とを混合した後、所望の形態に加工することによって得ることができる。
化粧料の製品形態は特に限定されない。
本発明のＴＧＲ５活性化用組成物を医薬品又は医薬部外品とする場合、例えば、月見草種子エキスに、薬理学的に許容される賦形剤等を配合して、各種剤形の医薬品又は医薬部外品とすることができる。本発明の効果をより充分に得る観点から、医薬品又は医薬部外品の投与形態は、経口投与でもよく、非経口投与でもよい。本発明の効果をより充分に得る観点から、投与形態は、経口投与が好ましい。剤形は、投与形態に適した剤形とすればよい。経口用医薬品又は経口用医薬部外品の剤形として、例えば、錠剤、被覆錠剤、細粒剤、顆粒剤、散剤、丸薬、カプセル剤、ドライシロップ剤、チュアブル剤等の経口用固形製剤；内服液剤、シロップ剤等の経口用液体製剤が挙げられる。非経口用医薬品又は非経口用医薬部外品の剤形として、注射剤、点滴剤、軟膏剤、ローション剤、貼付剤、坐剤、経鼻剤、経肺剤（吸入剤）等が挙げられる。医薬品は、非ヒト動物用医薬であってもよい。
本発明のＴＧＲ５活性化用組成物を飼料とする場合、月見草種子エキスに、飼料に使用可能な成分を配合して飼料とすることができる。飼料としては、例えば、ウシ、ブタ、ニワトリ、ヒツジ、ウマ等に用いる家畜用飼料；ウサギ、モルモット、ラット、マウス等に用いる小動物用飼料；イヌ、ネコ、小鳥等に用いるペットフードなどが挙げられる。
本発明のＴＧＲ５活性化用組成物中の月見草種子エキスの含有量は特に限定されず、該組成物の形態等に応じて適宜設定することができる。
本発明の組成物中の月見草種子エキス（乾燥物換算）の含有量は、例えば、該組成物中に０．００１重量％以上が好ましく、０．０１重量％以上がより好ましく、０．０５重量％以上がさらに好ましく、また、１０重量％以下が好ましく、５重量％以下がより好ましい。一態様において、月見草種子エキス（乾燥物換算）の含有量は、組成物中に０．００１～１０重量％が好ましく、０．０１～５重量％がより好ましく、０．０５～５重量％がさらに好ましい。上記含有量は、異なる種類の月見草種子エキスを２種以上含有する場合は、これらの合計含有量である。
本発明のＴＧＲ５活性化用組成物は、その形態に応じた適当な方法で摂取又は投与することができる。本発明のＴＧＲ５活性化用組成物は、経口で摂取（経口投与）されることが好ましい。本発明の組成物の投与量（摂取量ということもできる）は特に限定されない。本発明のＴＧＲ５活性化用組成物の投与量は、ＴＧＲ５活性効果が得られるような量（有効量）であればよく、投与形態、投与方法、対象の体重等に応じて適宜設定すればよい。好ましくは、経口投与又は経口摂取される。
一態様において、本発明のＴＧＲ５活性化用組成物をヒト（成人）を対象に経口で摂取させる又は投与する場合、月見草種子エキス（乾燥物換算）の投与量は、１日当たり体重６０ｋｇで、好ましくは１ｍｇ以上、より好ましくは１０ｍｇ以上、さらに好ましくは１００ｍｇ以上、また、好ましくは１０００ｍｇ以下、より好ましくは５００ｍｇ以下、さらに好ましくは３００ｍｇ以下である。一態様において、月見草種子エキス（乾燥物換算）の投与量は、ヒト（成人）であれば、１日当たり体重６０ｋｇで、好ましくは１～１０００ｍｇ、より好ましくは１０～５００ｍｇ、さらに好ましくは１００～３００ｍｇである。上記量を、１日１回以上、例えば、１日１回又は数回（例えば２～３回）に分けて、摂取させる又は投与することが好ましい。一態様においては、上記量の月見草種子エキスを、ヒトに経口で摂取させる又は投与することが好ましい。一態様において、本発明の組成物は、ヒトに、体重６０ｋｇあたり、１日あたり上記量の月見草種子エキスを摂取させる又は投与するために使用することができる。上記総投与量は、月見草種子エキスを２種以上使用する場合は、これらの合計量である。
本発明のＴＧＲ５活性化用組成物は、継続して摂取又は投与されるものであることが好ましい。月見草種子エキスは、継続的に摂取又は投与されることによって、上記の効果が高まることが期待される。一態様において、本発明のＴＧＲ５活性化用組成物は、好ましくは１週間以上、より好ましくは４週間以上、さらに好ましくは８週間以上継続して、特に好ましくは１２週間以上継続して摂取又は投与されることが好ましい。
本発明のＴＧＲ５活性化用組成物を投与又は摂取させる対象（以下、単に投与対象ともいう）は、哺乳動物（ヒト又は非ヒト哺乳動物）が好ましく、ヒトがより好ましい。本発明における投与対象として、ＴＧＲ５活性化を必要とする又は希望する対象が好ましい。また本発明における投与対象として、筋量増加、筋力増加、筋量減少抑制又は筋力低下抑制を必要とする又は希望する対象；運動機能向上又は持久力向上を必要とする又は希望する対象等も挙げられる。このような対象として、例えば、中高年者、フレイル、ロコモティブシンドローム又はサルコペニアの予防又は改善を必要とする又は希望する対象、アスリート等が挙げられる。中高年者は、例えば、４０歳以上のヒトであってよい。一態様において中高年者の中でも、対象として高齢者が好ましい。高齢者は、例えば、６０歳以上又は６５歳以上のヒトであってよい。本発明の組成物は、例えば、筋量増加、筋力増加、筋量減少抑制又は筋力低下抑制により予防又は改善が期待できる症状又は疾患の予防等を目的として、健常者に対して使用することもできる。
本発明のＴＧＲ５活性化用組成物には、包装、容器又は説明書等に用途、有効成分の種類、上述した効果、使用方法（例えば、摂取方法、投与方法）等の１又は２以上を表示してもよい。本発明のＴＧＲ５活性化用組成物には、ＴＧＲ５活性化作用、又は、この作用に基づく作用を有する旨の表示が付されていてもよい。一態様において、本発明のＴＧＲ５活性化用組成物には、このような表示として、例えば、「筋肉減少抑制」、「筋肉維持」、「筋肉増加」、「筋肉改善」、「筋力低下抑制」、「筋力維持」、「筋力増加」、「筋力改善」、「筋肉をつくる力をサポート」、「歩行機能の改善」、「歩行機能の維持」、「運動機能改善」、「運動機能維持」、「加齢によって衰える筋肉の維持」及び「加齢によって衰える筋力の維持」からなる群より選択される１又は２以上の表示が付されていてもよい。
一態様において、本発明のＴＧＲ５活性化用組成物には、例えば、「抗肥満」、「肥満の予防」、「肥満の改善」、「ウエスト周囲径の低減」、「ウエスト周囲径の維持」、「スリムな身体の維持」、「体脂肪の蓄積を抑える」、「体脂肪の低減」、「内臓脂肪の蓄積を抑える」、「内臓脂肪の低減」、「肝臓中の脂肪の蓄積を抑える」、「肝臓中の脂肪の低減」、「体重減少」、「減量」、「ダイエット」、「脂肪燃焼」、「脂肪消費」、「脂質代謝」、「ミトコンドリア機能」、「熱産生」、「基礎代謝」、「代謝機能」、「代謝力」、「メタボリックシンドロームの予防」、「メタボリックシンドロームの改善」等の１又は２以上の機能の表示が付されていてもよい。
また別の一態様において、本発明のＴＧＲ５活性化用組成物には、例えば、「食後の血糖値の上昇を抑える」、「食後の血糖値の上昇をおだやかにする」、「血糖値を下げる」、「血糖値が気になる方へ」、「食後の血糖値が気になる方へ」、「血糖値が上がりやすい体質を改善する」等の１又は２以上の表示が付されていてもよい。
本発明は、以下のＴＧＲ５を活性化する方法、ＴＧＲ５を活性化するための使用も包含する。
月見草種子エキスを投与する、ＴＧＲ５を活性化する方法。
ＴＧＲ５を活性化するための、月見草種子エキスの使用。
上記の方法は、治療的な方法であってもよく、非治療的な方法であってもよい。上記の使用は、治療的使用であってもよく、非治療的使用であってもよい。
月見草種子エキスを対象に投与すると、対象においてＴＧＲ５を活性化することができる。月見草種子エキスは、対象においてＴＧＲ５を活性化するために使用することができる。
上記方法及び使用においては、所望の作用が得られる量（有効量ということもできる）の月見草種子エキスを使用すればよい。月見草種子エキス、対象、投与方法、投与量、それらの好ましい態様等は、上述したＴＧＲ５活性化用組成物と同じである。月見草種子エキスは、そのまま投与してもよく、これを含む組成物として投与してもよい。例えば、上述した本発明のＴＧＲ５活性化用組成物を投与してもよい。
本発明は、ＴＧＲ５活性化用組成物を製造するための、月見草種子エキスの使用、も包含する。ＴＧＲ５活性化用組成物及びその好ましい態様は、上記と同じである。
以下、本発明を実施例によりさらに詳しく説明するが、これにより本発明の範囲を限定するものではない。
＜実施例１＞
被験物質のＴＧＲ５活性化作用は、ルシフェラーゼアッセイにより評価した。
この評価系は、ヒトＴＧＲ５（ｈＴＧＲ５）の活性化を、ＴＧＲ５下流のシグナルであるｃＡＭＰ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｅｌｅｍｅｎｔ　ｂｉｎｄｉｎｇ　ｐｒｏｔｅｉｎ（ＣＲＥＢ）の転写活性化にて判定するものである。細胞内ｃＡＭＰ濃度の増加に伴いＣＲＥＢのＣＲＥへの結合が活性化され、ルシフェラーゼ遺伝子の転写が誘導されるため、ＣＲＥＢの活性化をルシフェラーゼ活性の定量により評価することができる。
また、被験物質のＴＧＲ５への選択性を評価するため、ｈＴＧＲ５を強制発現させた細胞（ｈＴＧＲ強制発現細胞ともいう）に加えて、ｈＴＧＲ５と同様にＧタンパク質共役型受容体であるグルカゴン様ペプチド－１（ＧＬＰ－１）受容体（ＧＬＰ１Ｒ）をｈＴＧＲ５の代わりに強制発現させた細胞（ｈＧＬＰ１Ｒ強制発現細胞ともいう）についてルシフェラーゼアッセイを行った。ｈＧＬＰ１Ｒ強制発現細胞は、ｈＴＧＲ５を発現していない。
ＧＬＰ１Ｒ及びＴＧＲ５はいずれもＧタンパク質共役型受容体であり、ＧＬＰ１Ｒが活性化されると細胞内ｃＡＭＰが上昇する。被験物質添加によりｈＴＧＲ５強制発現細胞においてルシフェラーゼ活性が上昇すれば、該物質はＴＧＲ５活性化作用を有すると判断される。また、被験物質をｈＴＧＲ５強制発現細胞及びＧＬＰ１Ｒ強制発現細胞に添加し、ｈＴＧＲ５強制発現細胞におけるルシフェラーゼ活性の上昇が、ＧＬＰ１Ｒ強制発現細胞におけるルシフェラーゼ活性の上昇に対して大きいほど、被験物質はＴＧＲ５への選択性が高いといえる。
（発現ベクターの作製）
ｈＴＧＲ発現ベクター（ｐＴＧＲ５）は以下の手順にて作製した。
ヒト由来ＴＧＲ５遺伝子の塩基配列として、ＮＭ＿００１０７７１９１を参照し、ヒトＴＧＲ５をコードする人工遺伝子を設計し、ＤＮＡを合成した。真核生物用発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１（＋）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（登録商標）、Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）に、該ベクターのクローニングサイトＢａｍＨＩ、ＥｃｏＲＩを用いて、合成したＤＮＡを挿入してｈＴＧＲ発現ベクター（プラスミド）を作製した。形質転換の宿主にはＥ．ｃｏｌｉ　Ｋ１２（ｄａｍ＋　ｄｃｍ＋　ｔｏｎＡ）を用い、プラスミドを調製した。構築したｈＴＧＲ発現ベクターをｐＴＧＲ５と名付けた。
ＣＲＥ反応性ルシフェラーゼ発現ベクター（ｐＣＲＥ／Ｌｕｃ）には、プロメガ社製のｐＧＬ４．２９［ｌｕｃ２Ｐ／ＣＲＥ／Ｈｙｇｒｏ］を使用した。このプラスミドは、ｃＡＭＰ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｅｌｅｍｅｎｔ（ＣＲＥ）と連結したルシフェラーゼ遺伝子を保持するベクターである。
ｐＴＧＲ５及びｐＣＲＥ／Ｌｕｃの２つのプラスミドを大腸菌ＪＭ１０９に導入し、形質転換した大腸菌を培養し、実験に充分な量のプラスミドを精製した。精製したプラスミドを形質転換に用いたプラスミドと共に、複数の制限酵素で処理し、電気泳動することによりその酵素処理断片を比較し、同一のパターンを確認することで、精製したプラスミドが元のベクターと同一構造を維持していることを確認した（結果は示さず）。以下の実験では、上記で精製したプラスミドを使用した。
（ｈＴＧＲ５強制発現細胞の作製）
以下の試験において、ＤＭＥＭ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ　Ｍｏｄｉｆｉｅｄ　Ｅａｇｌｅ　Ｍｅｄｉｕｍ）には、ＤＭＥＭ（Ｈｉｇｈ－ｇｌｕｃｏｓｅ）（富士フイルム和光純薬（株）製）を使用した。ＰＢＳ（Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ　Ｂｕｆｆｅｒｅｄ　Ｓａｌｔｓ）は、タカラバイオ株式会社製のものを使用した。
ＨＥＫ２９３細胞（ヒト胎児腎細胞株、ＡＴＣＣ：ＣＲＬ－２８２８）をＤＭＥＭ－１０％ＦＢＳ（ＤＭＥＭにウシ胎仔血清（ＦＢＳ）（フナコシ（株）製）を１０％添加）で、Ｔ７５フラスコを用いて継代培養した。培地を除去し、ＰＢＳ（－）溶液１０ｍＬで細胞を洗浄した。細胞に１ｍＬのトリプシン液（０．２５％トリプシン－ＥＤＴＡ（ナカライテスク（株）製）をＰＢＳ溶液で１０倍希釈したもの）を添加し、３０秒ほど置き、細胞をはがしてから１０ｍＬの培地を加えて細胞を回収した。回収した細胞を５０ｍＬ遠沈管に移して、室温１０００ｒｐｍで３分間遠心した。得られたペレットを２ｍＬの培地でほぐし、その一部を０．２％トリパンブルーで１０倍希釈し、血球計算盤を用いて細胞数を計測した。新しいＴ７５フラスコに、細胞数が６×１０６個／２５ｍＬになるように培地及び細胞懸濁液を分注し、インキュベーター内（３７℃、５％ＣＯ２）で２２時間前後培養し、本細胞をプラスミド導入に用いた。
ＨＥＫ２９３細胞へのプラスミド導入は、以下の手順で行った。
１．５ｍＬチューブにＸ－ｔｒｅｍｅＧＥＮＥ（登録商標）（Ｒｏｃｈｅ社製）を４５μＬ取り、室温のＯｐｔｉＭＥＭ（登録商標）　Ｉ　Ｒｅｄｕｃｅｄ　Ｓｅｒｕｍ　Ｍｅｄｉｕｍ（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　ＳＣＩＥＮＴＩＦＩＣ社製）７０５μＬを添加、速やかに２回転倒混和後、液をスピンダウンしてＸ－ｔｒｅｍｅＧＥＮＥ希釈液を得た。室温で５分間静置後、プラスミド（ｈＴＧＲ５発現ベクター（ｐＴＧＲ）（５μｇ）及びＣＲＥ反応性ルシフェラーゼ発現ベクター（ｐＣＲＥ／Ｌｕｃ）（５μｇ））を上記Ｘ－ｔｒｅｍｅＧＥＮＥ希釈液（７５０μＬ）に添加、すみやかに２回転倒混合後、スピンダウンし、室温で２５分間静置した。この２５分の間に、上記でＨＥＫ２９３細胞を播種したＦ７５フラスコの培地を、１５ｍＬのＤＭＥＭ＋５％ＦＢＳ（抗生剤無し）に置換した。室温で２５分間静置した後、上記のプラスミドを添加したＸ－ｔｒｅｍｅＧＥＮＥ希釈液７６５μＬを、フラスコ中のＨＥＫ２９３細胞に静かに添加（滴下）し、静かに混合し、３７℃、５％ＣＯ２条件下で５時間培養した。培地を除去し、ＰＢＳ（－）溶液１０ｍＬで細胞を洗浄した。細胞に、１ｍＬのトリプシン液（０．２５％トリプシン－ＥＤＴＡをＰＢＳ溶液で１０倍希釈したもの）を添加し、３０秒ほど置き、細胞をはがしてから１０ｍＬの培地を加えて細胞を回収した。回収した細胞を５０ｍＬ遠沈管に移して、室温１０００ｒｐｍで３分間遠心した。得られたペレットを２ｍＬの培地でほぐし、その一部を０．２％トリパンブルーで１０倍希釈し、血球計算盤を用いて細胞数を計測した。シード培地（ＤＭＥＭ（ＦＢＳ不含、ペニシリン／ストレプトマイシン（富士フイルム和光純薬（株）製）を含む））に細胞を懸濁し、７５μＬ／ウェルで９６ウェル白色クリアプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ社、Ｃｏｒｎｉｎｇ　９６ウェル　白　透明ボトム　平底　細胞培養表面処理　ポリスチレン　マイクロプレート）に播種し、インキュベーター内（３７℃、５％ＣＯ２）で培養し、ｈＴＧＲ５強制発現細胞とした。
（ｈＧＬＰ１強制発現細胞の作製）
ヒトＧＬＰ１受容体（ｈＧＬＰ１Ｒ）遺伝子を発現するベクターをＨＥＫ２９３細胞に導入し、ｈＧＬＰ１Ｒを強制発現させた細胞を作製した。
ｈＧＬＰ１Ｒ発現ベクターには、ＧＬＰ１Ｒ　（ＮＭ＿００２０６２）　Ｈｕｍａｎ　Ｕｎｔａｇｇｅｄ　Ｃｌｏｎｅ（ＯＲＩＧＥＮＥ社）を使用した。この発現ベクターは、ベクターｐＣＭＶ６－ＸＬ５にｈＧＬＰ１Ｒの遺伝子が挿入されており、ｈＧＬＰ１Ｒを発現する構造を有する。
ｈＴＧＲ５発現ベクター（ｐＳＴＷ０１）の代わりに上記のｈＧＬＰ１Ｒ発現ベクターを使用した以外は、上記と同じ方法でＨＥＫ２９３細胞にｈＧＬＰ１Ｒ発現ベクターを導入し、ｈＧＬＰ１Ｒ強制発現細胞を得た。
（ルシフェラーゼ活性の測定）
ｈＴＧＲ強制発現細胞を播種して２４時間培養後に、月見草種子エキス（月見草エキス－Ｐ（オリザ油化（株）製））(終濃度：２０μｇ／ｍＬ)を添加し、更に５時間培養した。月見草種子エキスはジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ（ナカライテスク（株）製、最終濃度０．１％））に溶解させて添加した。また、月見草種子エキスの代わりに、ＤＭＳＯを添加して（終濃度を０．１％）陰性対照とした。培養後にＤｕａｌ－Ｇｌｏ（登録商標）　Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ　Ａｓｓａｙ　Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｒｏｍｅｇａ社製）に付属するＤｕａｌ－Ｇｌｏ　Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ　Ａｓｓａｙ　Ｒｅａｇｅｎｔを７５μＬ／ｗｅｌｌで添加し、室温で１０分保温した後、マルチモードマイクロプレートリーダー　ＦｌｅｘＳｔａｔｉｏｎ　３（ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ　ＤＥＶＩＣＥＳ社製）を用いて発光強度を測定した。発光強度をルシフェラーゼ活性とした。この評価系では、ウミシイタケルシフェラーゼを内部標準として用いている。
ｈＴＧＲ５に対する選択性を評価するために、ｈＴＧＲ強制発現細胞の代わりに、ｈＧＬＰ１Ｒ強制発現細胞を用いて、上記と同様にルシフェラーゼの発光測定を行った。
月見草種子エキスの代わりに、陽性対照としてＬｉｔｈｏｃｈｏｌｉｃ　ａｃｉｄ（東京化成工業（株）製）をＤＭＳＯに溶解させてｈＴＧＲ強制発現細胞及びｈＧＬＰ１Ｒ強制発現細胞に添加し（終濃度３．３μＭ）、上記の方法で発光強度を測定した。別の陽性対照として、Ｔａｕｒｏｌｉｔｈｏｃｈｏｌｉｃ　Ａｃｉｄ　Ｓｏｄｉｕｍ　Ｓａｌｔ（富士フイルム和光純薬（株）製）をＤＭＳＯに溶解させて、ｈＴＧＲ強制発現細胞及びｈＧＬＰ１Ｒ強制発現細胞に添加し（終濃度３．３μＭ）、上記の方法で発光強度を測定した。ｈＴＧＲ５強制発現細胞及びｈＧＬＰ１Ｒ強制発現細胞において、どちらの陽性対照を添加した場合も陰性対照（ＤＭＳＯ）と比較して発光強度が強いことを確認した。
（結果）
（ＴＧＲ５活性化作用）
月見草種子エキスを添加したｈＴＧＲ５強制発現細胞は、陰性対照より有意に発光強度が強く（陰性対照の２．０倍）、月見草種子エキスがｈＴＧＲ５活性化作用を有することが示された。
（ｈＴＧＲ５への選択性）
月見草種子エキスのＴＧＲ５への選択性の評価は、月見草種子エキスを添加したｈＧＬＰ１Ｒ強制発現細胞におけるルシフェラーゼ活性（ｈＧＬＰ１Ｒ）に対する、ｈＴＧＲ５強制発現細胞におけるルシフェラーゼ活性（ｈＴＧＲ５）の比（ｈＴＧＲ５／ｈＧＬＰ１Ｒ）で評価した。
月見草種子エキスを添加したｈＧＬＰ１Ｒ強制発現細胞におけるルシフェラーゼ活性（ｈＧＬＰ１Ｒ）に対する、ｈＴＧＲ５強制発現細胞におけるルシフェラーゼ活性（ｈＴＧＲ５）の比（ｈＴＧＲ５／ｈＧＬＰ１Ｒ）を、表１に示す。このルシフェラーゼ活性の比（ｈＴＧＲ５／ｈＧＬＰ１Ｒ）が大きいほど、ｈＴＧＲ５に対する選択性が高いことを意味する。
また、陽性対照としてＬｉｔｈｏｃｈｏｌｉｃ　ａｃｉｄ、又は、Ｔａｕｒｏｌｉｔｈｏｃｈｏｌｉｃ　Ａｃｉｄ　Ｓｏｄｉｕｍ　Ｓａｌｔを添加したｈＧＬＰ１Ｒ強制発現細胞におけるルシフェラーゼ活性（ｈＧＬＰ１Ｒ）に対する、ｈＴＧＲ５強制発現細胞におけるルシフェラーゼ活性（ｈＴＧＲ５）の比（ｈＴＧＲ５／ｈＧＬＰ１Ｒ）を表１に示す。
また、陰性対照としてＤＭＳＯを添加したｈＧＬＰ１Ｒ強制発現細胞におけるルシフェラーゼ活性（ｈＧＬＰ１Ｒ）に対する、ｈＴＧＲ５強制発現細胞におけるルシフェラーゼ活性（ｈＴＧＲ５）の比（ｈＴＧＲ５／ｈＧＬＰ１Ｒ）を表１に示す。表１中の「Ｔａｕｒｏｌｉｔｈｏｃｈｏｌｉｃ　ａｃｉｄ」の記載は、「Ｔａｕｒｏｌｉｔｈｏｃｈｏｌｉｃ　Ａｃｉｄ　Ｓｏｄｉｕｍ　Ｓａｌｔ」を示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
以上より、月見草種子エキスは、ＴＧＲ５活性化作用を有することが示された。また、月見草種子エキスは、陽性対照及び陰性対照と比較してｈＴＧＲ５に対する選択性が高いことが示された。

 

 

Claims (4)

  1. 月見草種子エキスを有効成分として含有するＴＧＲ５活性化用組成物。
  2. 飲食品、化粧料、医薬品、医薬部外品又は飼料である請求項１に記載のＴＧＲ５活性化用組成物。
  3. ＴＧＲ５活性化用組成物を製造するための月見草種子エキスの使用。
  4. ＴＧＲ５を活性化するための、月見草種子エキスの使用。

     
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Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002009734A1 (fr) * 2000-08-01 2002-02-07 Oryza Oil & Fat Chemical Co.,Ltd. Inhibiteurs d'absorption de sucre et leur procede de production
KR20030024745A (ko) * 2003-02-26 2003-03-26 주식회사 코넬피아 지방산 합성효소의 활성을 억제할 수 있는 비만 억제용조성물
CN101574396A (zh) * 2009-06-17 2009-11-11 赵景辉 一种北五味子和月见草co2超临界萃取物复合制剂及制备工艺
KR101499457B1 (ko) * 2013-10-07 2015-03-09 연세대학교 원주산학협력단 달맞이꽃 추출물을 유효성분으로 함유하는 근위축 예방 또는 개선용 식품 및 약학조성물
KR102087033B1 (ko) * 2019-01-28 2020-03-10 고려대학교 세종산학협력단 달맞이꽃 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 체중감량용 조성물

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002009734A1 (fr) * 2000-08-01 2002-02-07 Oryza Oil & Fat Chemical Co.,Ltd. Inhibiteurs d'absorption de sucre et leur procede de production
KR20030024745A (ko) * 2003-02-26 2003-03-26 주식회사 코넬피아 지방산 합성효소의 활성을 억제할 수 있는 비만 억제용조성물
CN101574396A (zh) * 2009-06-17 2009-11-11 赵景辉 一种北五味子和月见草co2超临界萃取物复合制剂及制备工艺
KR101499457B1 (ko) * 2013-10-07 2015-03-09 연세대학교 원주산학협력단 달맞이꽃 추출물을 유효성분으로 함유하는 근위축 예방 또는 개선용 식품 및 약학조성물
KR102087033B1 (ko) * 2019-01-28 2020-03-10 고려대학교 세종산학협력단 달맞이꽃 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 체중감량용 조성물

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
AITANI MICHIO, NISHIMURA AKIRA, HAMADA KOICHIRO, KOBA TAKASHIGE, KONISHI YOTARO, GRADUATE: "The Effects of an Extract of Seeds of Evening Primrose on Postprandial Hyperglycemia on Human Subjects", NIPPON SHOKUHIN KAGAKU KOGAKU KAISHI, vol. 50, no. 10, 1 January 2003 (2003-01-01), pages 451 - 459, XP055924283 *
AITANI, KIMURA H, ABIRU Y, SOYAMA H, MURAKAMI H, ZHANG H.L, SUGISHITA T, KONISHI Y: "Effect of an extract from evening-primrose [Oenothera biennis L.] seeds on postprandial blood glucose level and its active components", JOURNAL OF JAPANESE SOCIETY OF FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY, NIPPON SHOKUHIN KAGAKU KOGAKUKAI, TSUKUBA, JP, vol. 50, no. 4, 1 April 2003 (2003-04-01), JP , pages 180 - 187, XP055924285, ISSN: 1341-027X, DOI: 10.3136/nskkk.50.180 *
HAN XUE, GUO JIELONG, YIN MANWEN, LIU YIWEN, YOU YILIN, ZHAN JICHENG, HUANG WEIDONG: "Grape Extract Activates Brown Adipose Tissue Through Pathway Involving the Regulation of Gut Microbiota and Bile Acid", MOLECULAR NUTRITION & FOOD RESEARCH, WILEY - VCH VERLAG, WEINHEIM, DE, vol. 64, no. 10, 1 May 2020 (2020-05-01), DE , pages 2000149, XP055924287, ISSN: 1613-4125, DOI: 10.1002/mnfr.202000149 *
JIELONG GUO, XUE HAN, HONGYU TAN, WEIDONG HUANG, YILIN YOU, JICHENG ZHAN: "Blueberry Extract Improves Obesity through Regulation of the Gut Microbiota and Bile Acids via Pathways Involving FXR and TGR5.", ISCIENCE, vol. 19, 27 September 2019 (2019-09-27), pages 676 - 690, XP055924286 *
ZHU YUE, ZHANG JIA-YING, WEI YU-LONG, HAO JING-YI, LEI YU-QING, ZHAO WAN-BIN, XIAO YU-HANG, SUN AI-DONG: "The polyphenol-rich extract from chokeberry (Aronia melanocarpa L.) modulates gut microbiota and improves lipid metabolism in diet-induced obese rats", NUTRITION & METABOLISM, vol. 17, no. 1, 1 December 2020 (2020-12-01), XP055924288, DOI: 10.1186/s12986-020-00473-9 *

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