JP2007332118A - 神経保護剤 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】柑橘類果実を破砕する工程、該破砕物を水処理する工程、その水層を除去する工程を含む方法により得られる水不溶物を含有する、神経保護剤またはアストロサイト活性化抑制剤、および神経保護またはアストロサイト活性化抑制用食品。
【選択図】図1
Description
(1)柑橘類果実の水不溶物を含有する神経保護剤。
(2)柑橘類果実のアルコール可溶性の水不溶物を含有する神経保護剤。
(3)柑橘類果実の水不溶物を含有するアストロサイト活性化抑制剤。
(4)柑橘類果実のアルコール可溶性の水不溶物を含有するアストロサイト活性化抑制剤。
(5)水不溶物が、柑橘類果実を破砕する工程、該破砕物を水処理する工程、水層を除去する工程を含む方法により得られるものである、(1)〜(4)のいずれか1項に記載の剤。
(6)該破砕物1重量部に対して1〜10重量部の水で水処理する、(5)に記載の剤。
(7)水処理の温度が0〜85℃、時間が5分〜48時間である(5)または(6)記載の剤。
(8)アルコールで抽出する工程を含む(5)〜(7)のいずれか1項に記載の剤。
(9)アルコールがメタノールまたはエタノールである(8)記載の剤。
(10)柑橘類が、温州ミカン(Citrus unshiu)またはシークワサー(Citrus depressa)である、(1)〜(9)のいずれか1項に記載の剤。
(11)柑橘類果実が、直径1〜4cmの柑橘類果実である、(10)に記載の剤。
(12)柑橘類果実の水不溶物を含有する神経保護剤の製造方法であって、柑橘類果実を破砕する工程、該破砕物を水処理する工程、水層を除去し水不溶物を得る工程を含む製造方法。
(13)柑橘類果実の水不溶物を含有するアストロサイト活性化抑制剤の製造方法であって、柑橘類果実を破砕する工程、該破砕物を水処理する工程、水層を除去し水不溶物を得る工程を含む製造方法。
(14)破砕物1重量部に対して1〜10重量部の水で水処理する、(12)または(13)記載の製造方法。
(15)水処理の温度が0〜85℃、時間が5分〜48時間である、(12)〜(14)のいずれか1項に記載の製造方法。
(16)さらにアルコールで抽出する工程を含む(12)〜(15)のいずれか1項に記載の製造方法。
(17)アルコールがメタノールまたはエタノールである(16)記載の製造方法。
(18)柑橘類果実の水不溶物を含有する、神経保護作用を有するものであることを特徴とし、神経保護のために用いられる旨の表示を付した食品。
(19)柑橘類果実のアルコール可溶性の水不溶物を含有する、神経保護作用を有するものであることを特徴とし、神経保護のために用いられる旨の表示を付した食品。
(20)柑橘類果実の水不溶物を含有する、アストロサイト活性化抑制作用を有するものであることを特徴とし、アストロサイト活性化抑制のために用いられる旨の表示を付した食品。
(21)柑橘類果実のアルコール可溶性の水不溶物を含有する、アストロサイト活性化抑制作用を有するものであることを特徴とし、アストロサイト活性化抑制のために用いられる旨の表示を付した食品。
(22)水不溶物が、柑橘類果実を破砕する工程、該破砕物を水処理する工程、水層を除去する工程を含む方法により得られるものである、(18)〜(21)のいずれか1項に記載の食品。
(23)破砕物1重量部に対して1〜10重量部の水で水処理する、(22)に記載の食品。
(24)水処理の温度が0〜85℃、時間が5分〜48時間である、(22)または(23)記載の食品。
(25)アルコールで抽出する工程を含む(22)〜(24)のいずれか1項に記載の食品。
(26)アルコールがメタノールまたはエタノールである(25)記載の食品。
(27)柑橘類が、温州ミカン(Citrus unshiu)またはシークワサー(Citrus depressa)である、(18)〜(26)のいずれか1項に記載の食品。
(28)柑橘類果実が、直径1〜4cmの柑橘類果実である、(27)記載の食品。
(29)柑橘類果実の水不溶物を含有する神経保護用食品の製造方法であって、柑橘類果実を破砕する工程、該破砕物を水処理する工程、水層を除去し水不溶物を得る工程を含む製造方法。
(30)柑橘類果実の水不溶物を含有するアストロサイト活性化抑制用食品の製造方法であって、柑橘類果実を破砕する工程、該破砕物を水処理する工程、水層を除去し水不溶物を得る工程を含む製造方法。
除去は、数回行うのが好ましい。すなわち完全に水溶性成分を除去するためには、水処理の工程および除去の工程を2〜5回繰り返すことが好ましい。
具体的には、柑橘類果実の破砕物1重量部に対して1〜20重量部のアルコールで抽出して濃縮乾固したものを水処理および水層を除去して水不溶物を得る、または上述の3工程で得られた水不溶物1重量部に対して1〜20重量部のアルコールで抽出して濃縮乾固させて水不溶物を得ることができる。
このようにアルコールで抽出する工程を加えることで有効成分の濃縮効果が得られる。
同量のみかんの表面を水で洗浄し、フードプロセッサーで破砕後、水を溜めた大型ビーカー内で懸濁した。その後、布巾で絞り、脱水後、残渣を凍結乾燥した。凍結乾燥物をフードプロセッサーで粉砕し、粉末サンプルBを得た。
上清を採取した沈殿に再びメタノール20 mlを加え懸濁し、室温で1時間振とう後、3,000 rpmで20分間遠心分離し、上清を採取するという操作を4回繰り返し行った。計5回の抽出により得られた上清を合わせ、濃縮乾固した。得られた乾固物をジメチルスルホキシド(DMSO)で50 mg/mlになるように溶解し、メタノール抽出サンプルを得た。サンプルAのメタノール抽出物をメタノール抽出サンプルおよびBの同抽出物を水処理メタノール再抽出サンプルとした。
アストロサイト活性化抑制作用を測定するにあたり、初代培養アストロサイトを用いて、炎症性サイトカインの刺激で誘発、発現される誘導型一酸化窒素合成酵素(iNOS:inducible nitric oxide synthase)によって産生されるNOをグリース法により亜硝酸の形で定量し、アストロサイト活性化抑制作用を評価した。
さらに7日間37 ℃、5% CO2下で培養した細胞をトリプシンで処理し浮遊させ、96穴培養プレートに3×105細胞/mlの濃度で懸濁した。96穴培養プレートに0.1 mlずつ播種し、37 ℃、5% CO2下で一晩培養した。
翌日、培地を取り除き、終濃度500μg/mlになるように希釈したサンプル入りDMEM培地(1%ウシ胎児血清、1%ペニシリン-ストレプトマイシンを含む)を50μl加え、37℃、5% CO2下で30分間培養し、前処理を行った。なお、コントロールは、1% DMSOを含む培地に交換した。
翌日、96穴培養プレートにサンプル別培養上清を各80μlずつ移した。
また、亜硝酸量を定量するための濃度既知スタンダードとして、100 mM亜硝酸を培地で希釈し、12.5μM、25μM、50μM溶液を調製し、同じように96穴培養プレートに各80μlずつ移した。
ここに1% スルファニルアミド、4.25% リン酸混合液を40μl/穴加えた。5分後、0.1% ナフチルエチレンジアミン水溶液を40μl/穴加えた。10分後、マイクロプレートリーダーで540 nmの吸光度を測定した。
コントロール(DMSOで前処理、サイトカイン刺激あり)測定値から陰性コントロール(DMSOで前処理、サイトカイン刺激なし)の測定値を引いた値を100%とし、各サンプルで処理した細胞の活性を調べた。
Claims (30)
- 柑橘類果実の水不溶物を含有する神経保護剤。
- 柑橘類果実のアルコール可溶性の水不溶物を含有する神経保護剤。
- 柑橘類果実の水不溶物を含有するアストロサイト活性化抑制剤。
- 柑橘類果実のアルコール可溶性の水不溶物を含有するアストロサイト活性化抑制剤。
- 水不溶物が、柑橘類果実を破砕する工程、該破砕物を水処理する工程、水層を除去する工程を含む方法により得られるものである、請求項1〜4のいずれか1項に記載の剤。
- 該破砕物1重量部に対して1〜10重量部の水で水処理する、請求項5に記載の剤。
- 水処理の温度が0〜85℃、時間が5分〜48時間である請求項5または6記載の剤。
- アルコールで抽出する工程を含む請求項5〜7のいずれか1項に記載の剤。
- アルコールがメタノールまたはエタノールである請求項8記載の剤。
- 柑橘類が、温州ミカン(Citrus unshiu)またはシークワサー(Citrus depressa)である、請求項1〜9のいずれか1項に記載の剤。
- 柑橘類果実が、直径1〜4cmの柑橘類果実である、請求項10に記載の剤。
- 柑橘類果実の水不溶物を含有する神経保護剤の製造方法であって、柑橘類果実を破砕する工程、該破砕物を水処理する工程、水層を除去し水不溶物を得る工程を含む製造方法。
- 柑橘類果実の水不溶物を含有するアストロサイト活性化抑制剤の製造方法であって、柑橘類果実を破砕する工程、該破砕物を水処理する工程、水層を除去し水不溶物を得る工程を含む製造方法。
- 破砕物1重量部に対して1〜10重量部の水で水処理する、請求項12または13記載の製造方法。
- 水処理の温度が0〜85℃、時間が5分〜48時間である、請求項12〜14のいずれか1項に記載の製造方法。
- さらにアルコールで抽出する工程を含む請求項12〜15のいずれか1項に記載の製造方法。
- アルコールがメタノールまたはエタノールである請求項16記載の製造方法。
- 柑橘類果実の水不溶物を含有する、神経保護作用を有するものであることを特徴とし、神経保護のために用いられる旨の表示を付した食品。
- 柑橘類果実のアルコール可溶性の水不溶物を含有する、神経保護作用を有するものであることを特徴とし、神経保護のために用いられる旨の表示を付した食品。
- 柑橘類果実の水不溶物を含有する、アストロサイト活性化抑制作用を有するものであることを特徴とし、アストロサイト活性化抑制のために用いられる旨の表示を付した食品。
- 柑橘類果実のアルコール可溶性の水不溶物を含有する、アストロサイト活性化抑制作用を有するものであることを特徴とし、アストロサイト活性化抑制のために用いられる旨の表示を付した食品。
- 水不溶物が、柑橘類果実を破砕する工程、該破砕物を水処理する工程、水層を除去する工程を含む方法により得られるものである、請求項18〜21のいずれか1項に記載の食品。
- 破砕物1重量部に対して1〜10重量部の水で水処理する、請求項22に記載の食品。
- 水処理の温度が0〜85℃、時間が5分〜48時間である、請求項22または23記載の食品。
- アルコールで抽出する工程を含む請求項22〜24のいずれか1項に記載の食品。
- アルコールがメタノールまたはエタノールである請求項25記載の食品。
- 柑橘類が、温州ミカン(Citrus unshiu)またはシークワサー(Citrus depressa)である、請求項18〜26のいずれか1項に記載の食品。
- 柑橘類果実が、直径1〜4cmの柑橘類果実である、請求項27記載の食品。
- 柑橘類果実の水不溶物を含有する神経保護用食品の製造方法であって、柑橘類果実を破砕する工程、該破砕物を水処理する工程、水層を除去し水不溶物を得る工程を含む製造方法。
- 柑橘類果実の水不溶物を含有するアストロサイト活性化抑制用食品の製造方法であって、柑橘類果実を破砕する工程、該破砕物を水処理する工程、水層を除去し水不溶物を得る工程を含む製造方法。
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