WO2021194143A1 - 기계적 방식에 의한 생체조직을 구성하는 조직 및 세포 분리 방법 - Google Patents

기계적 방식에 의한 생체조직을 구성하는 조직 및 세포 분리 방법 Download PDF

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WO2021194143A1
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adipose tissue
tissue
cell isolation
cells
tissues
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PCT/KR2021/003108
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이준석
이레이 콥쿠하심
Original Assignee
이준석
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    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
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    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
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    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
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    • C12N5/0667—Adipose-derived stem cells [ADSC]; Adipose stromal stem cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M45/00—Means for pre-treatment of biological substances
    • C12M45/02—Means for pre-treatment of biological substances by mechanical forces; Stirring; Trituration; Comminuting
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    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M45/00—Means for pre-treatment of biological substances
    • C12M45/06—Means for pre-treatment of biological substances by chemical means or hydrolysis

Definitions

  • the present invention relates to a method for separating various tissues and cells constituting a living tissue by a mechanical method.
  • a pretreatment process such as dilution is performed prior to the micronization process of living tissue, and the physical, chemical, and electro-mechanical effects according to the dilution, in particular, adipose tissue (adipose tissue).
  • adipose tissue adipose tissue
  • It relates to a method for separating tissues and cells by a mechanical method, which can improve the efficiency of the separation process of useful tissues and cells and stromal cells, that is, cells containing adipose tissue-derived stem cells.
  • the diluent is buffered saline, dextrose solution, maltodextrin solution, ethanol, physiological saline, lactate Ringer's solution, Ringer's solution, balanced electrolyte solution, PRP (platelet-rich plasma), PPP ( platelet-poor plasma), a mixed solution of PRP and PPP, and an intravenous solution may include at least one selected from the group consisting of.
  • the dilution ratio of the adipose tissue to the diluent in the adipose tissue mixture may be 1:99 to 99:1 (v/v).
  • the diluent may be 25% (volume) to 75% (volume) of the adipose tissue mixture.
  • the step of preparing the adipose tissue mixture may include adjusting the number of cells per unit volume and the cell density according to the dilution ratio of the diluent.
  • the step of refining the adipose tissue and various tissues and cells constituting the adipose tissue includes at least one or more of cutting, tearing, scraping, decomposition and separation using a mechanical method. process may be used.
  • the step of refining the adipose tissue and various tissues and cells constituting the adipose tissue may include passing the adipose tissue mixture through the through holes of a plurality of screens sequentially, repeatedly back and forth, or both. It may be moved to pass through.
  • the plurality of screens may include through-holes of different or the same size, and the plurality of screens may include through-holes of different or the same shape.
  • the plurality of screens may each include a through hole having a size of 10 ⁇ m to 4,000 ⁇ m.
  • the plurality of screens are arranged in order according to the size of the through hole, and may include a sharp edge derived from the surface, the inside, or both of the through hole. .
  • the step of refining the adipose tissue and various tissues and cells constituting the adipose tissue includes: a housing having a plurality of screens having a plurality of through holes having different sizes mounted therein; It may be to use a device including a connector for connecting a syringe to both sides of the housing.
  • the step of separating microfat and various tissues and cells constituting the adipose tissue from the micronized adipose tissue mixture comprises using at least one of centrifugation, vibration method, and filtering to determine specific gravity and / Or it may be separated according to size.
  • the step of separating the adipose tissue and various tissues and cells constituting the adipose tissue from the micronized adipose tissue mixture is separating the tissue constituting the adipose tissue and the stromal cells including the stem cells.
  • the present invention provides physiological saline, lactate Ringer's solution, Ringer's solution, balanced electrolyte solution, PRP (platelet-rich plasma), A dilution process of diluting adipose tissue with PPP (platelet-poor plasma), a mixed solution of PRP and PPP, or a solution that can be administered by intravenous injection, etc. It is possible to separate various cells constituting more adipose tissue, and adipose tissue-derived stromal cells, that is, cells abundantly containing stem cells, and to improve the separation process efficiency.
  • FIG. 1 is an exemplary view showing a process flow diagram of a separation method according to the present invention, according to an embodiment of the present invention.
  • FIG. 2 is an exemplary front sectional view of an apparatus used in the method of the present invention, according to an embodiment of the present invention.
  • FIG. 3 is a cut-away perspective view of a partial structure of the device of FIG. 2 by way of example, according to an embodiment of the present invention.
  • FIG 4 is an exemplary view of a screen of a device used in the method of the present invention, according to an embodiment of the present invention.
  • the present invention relates to a method for separating various tissues and cells constituting a tissue by a mechanical method.
  • the separation method includes the steps of preparing adipose tissue (S1); diluting the adipose tissue (S2); Refining adipose tissue (S3); and separating the adipose tissue and various tissues and cells constituting the adipose tissue (S4).
  • the step (S1) of preparing adipose tissue is to prepare an adipose tissue sample for separating the tissues and cells constituting the adipose tissue, including stem cells, from the adipose tissue, and the animal ( Adipose tissue derived from fish, mammals, etc.) can be collected and concentrated adipose tissue that can be used for tissue and cell separation constituting adipose tissue can be prepared.
  • adipose tissue in order to collect adipose tissue in a desired manner such as liposuction, adipose tissue excision, etc., and to concentrate the fat aspirate or adipose tissue, decanting or centrifugation method ), it is possible to remove impurities located in the uppermost layer (oil) and the lower layer of the separated adipose tissue.
  • the decanting (decanting), adipose tissue is lighter than blood or water, if the suction container is left still, the adipose tissue floats up after a few minutes, and then may correspond to a method of separating the water or blood under the adipose tissue.
  • the step (S2) of diluting the adipose tissue is a step of diluting the adipose tissue with a diluent to prepare an adipose tissue mixture, and processing such as a refinement process of adipose tissue and a separation process, that is,
  • the dilution process according to various protocols/methods may be performed according to the amount and density of the tissue and cell mixture for finally recovering (or separating) the concentrated adipose tissue prior to mechanical processing.
  • the number of cells and cell density per unit volume of the adipose tissue used in the separation process or the finally recovered tissue and cell mixture is adjusted, and various tissues, cells and It is possible to increase the amount of separation of stromal cells (stromal cells).
  • the diluent may be a solution that can be applied to an intravenous route, for example, buffered saline, dextrose solution, maltodextrin solution, ethanol, saline, Lactate Ringer lactate, Ringer's solution, balanced electrolyte or solution, PRP (platelet-rich plasma), PPP (platelet-poor plasma), PRP and PPP mixture, intravenous injection It may include at least one selected from the group consisting of solutions.
  • physiological saline, Ringer's lactate, Ringer's, balanced electrolyte solution, PRP that can be applied by any intravenous infusion route (platelet-rich plasma), PPP (platelet-poor plasma), PRP and PPP predilution using a mixture or solution to dilute adipose tissue is a physical, chemical and / or electromechanical effect according to the dilution. It is possible to increase the separation of adipose tissue and various tissues and cells constituting the adipose tissue, and improve the efficiency of the various tissue and cell separation processes constituting the adipose tissue.
  • the diluent, the dilution ratio of the adipose tissue to the diluent in the adipose tissue mixture is 1: 99 to 99: 1 (v/v); 20: 80 to 80: 20 (v/v); Or 50: 50 to 20: 80 (v/v), preferably, the diluent may be 25% (volume) to 75% (volume) of the adipose tissue mixture. This can be appropriately adjusted according to the volume of the device and system used in the micronization process and the separation process, and the number of cells and/or cell density contained in the dilution of the recovered cells and tissues can be adjusted.
  • a 50% diluent and 50% adipose tissue such as any intravenous infusion solution
  • dilution is made before mechanical treatment, and the following process can be performed. More specifically, 5 cc of adipose tissue and 5 cc of diluent may be used in a 10 cc syringe or container, or 10 cc of adipose tissue and 10 cc of diluent may be used in a 20 cc syringe or container.
  • the step of refining the adipose tissue is a step of refining the adipose tissue and various tissues and cells constituting the adipose tissue in the diluted adipose tissue mixture, cutting, It may be miniaturized using at least one process of tearing, scraping, disintegration, and separation.
  • the step of refining adipose tissue is to uniformly refine adipose tissue, adipocytes, stromal cells including stem cells, biomaterials, etc. to a size of 10 ⁇ m to 4,000 ⁇ m in the adipose tissue mixture.
  • the adipose tissue mixture in the step of refining adipose tissue (S3), may be miniaturized using a system or device having a plurality of screens built-in.
  • the plurality of screens may include through-holes of different or the same size, and may include through-holes of different or the same shape. This can improve the efficiency of the separation process by refining adipocytes and stromal cells of various sizes.
  • each of the plurality of screens may include a single or a plurality of through-holes.
  • the plurality of screens may include through-holes each having a size of 10 ⁇ m to 4,000 ⁇ m, and the through-holes may include at least one of a spherical shape, an elliptical shape, a polygonal shape, and a grid shape.
  • the size may mean the diameter, length, etc. of the through hole.
  • it includes a sharp edge derived on the surface, inside, or both of the through hole, which may be derived in the form of a blade including a sharp edge, as shown in FIG. 4 .
  • the adipose tissue mixture is introduced into a system or device in which the plurality of screens are arranged, moves from the inlet to the outlet, and passes through the through holes of the plurality of screens sequentially, back and forth repeatedly, or both. have.
  • the number of repetitions of moving the adipose tissue through the through hole in the system or device in which the plurality of screens are arranged may be about 3 to 30 times. For example, it can be repeated from a screen with large micropores to a screen with relatively small pores or vice versa.
  • a device equipped with a plurality of screens in which a miniaturization process is performed to obtain tissues and cells constituting adipose tissue from diluted adipose tissue may use the biological tissue miniaturization system 1 shown in FIG. 1 .
  • the biological tissue miniaturization system 1 includes a first syringe (C1), a second syringe (C2), a second cover 160, a first cover 150, a housing 110, a second rocker 192 and a second One locker 191 may be included.
  • the plurality of screens have through-holes having a size of 10 ⁇ m to 4000 ⁇ m, and include through-holes in a blade shape with a blade protruding toward the center of the through-holes, and 2000 ⁇ m to 3000 ⁇ m, 1000 ⁇ m to 2000 ⁇ m, 500 ⁇ m to 1000 ⁇ m, and a screen having micropores of 250 ⁇ m to 500 ⁇ m in size may be arranged in order.
  • the plurality of screens, the disk 120 including the plurality of screens in the miniaturization system 1 may include a plate 121 and a plurality of screens 122a, 122b, 122c, 122d, and 122e.
  • the plate 121 may be fixed to the first mount 111 .
  • the plate 121 may include a first central opening 1211 . That is, the first screen 122a is selected from among the plurality of screens 122a, 122b, 122c, 122d, and 122e each including a plurality of through-holes configured to refine the adipose tissue, and the fat is applied to the selected first screen 122a.
  • the second screen 122b may be selected among the plurality of screens 122a, 122b, 122c, 122d, and 122e, and the adipose tissue may be refined using the selected second screen 122b.
  • the selection and order of the plurality of screens 122a, 122b, 122c, 122d, and 122e are determined by the user, the selection and order of the screens described above are not limited.
  • the configuration of the screen is exemplarily shown in a device equipped with a plurality of screens according to an embodiment of the present invention.
  • the screen 220 includes a plate 221 and a through hole 222 .
  • the through hole 222 may be defined by a plurality of corners of the plate 221 .
  • the screen 220 is a first linear portion 223a formed on the first side of the through hole 222, is formed on the first side of the through hole 222 and is formed toward the center of the through hole 222.
  • the first protrusion 224a protruding in one direction T1, the second linear portion 223b formed on the second side of the through hole 222, and the through hole 222 formed on the second side of the through hole 222 ) may include a second protrusion 224b protruding in the second direction T2 toward the center.
  • the first protrusion 224a and the second protrusion 224b may be oriented at an angle with respect to the screen 220 and may be configured to scrape and tear adipose tissue passing through the screen 220 .
  • the first extension line L1 of the first protrusion 224a protruding in the first direction T1 and the second extension line L2 of the second protrusion 224b protruding in the second direction T2 are at a twisted position. there may be That is, the first extension line L1 and the second extension line L2 may not be parallel to each other and may not meet each other.
  • the first protrusion 224a and the second protrusion 224b are in the direction T1 and the second protrusion of the first protrusion 224a to face any one of the first cover 150 and the second cover 160 .
  • the direction T2 of 224b may be set.
  • the step of separating adipose tissue and various tissues and cells constituting the adipose tissue is to separate the various tissues and cells constituting the microfat and adipose tissue from the adipose tissue mixture.
  • step, centrifugation, decanting, vibration, filtering, etc. may be used.
  • desired adipose tissue and cells may be separated by separating according to specific gravity and/or size using at least one of centrifugation, vibration, and filtering.
  • the cells are concentrated into four layers (triglyceride layer; adipose tissue, adipose tissue and the boundary layer of the diluent + body fluid) When separated into an aggregate layer; and a diluent, a body fluid, and a stromal cell solution layer containing stem cells), i) the stromal cell solution layer having stem cells in the lowermost layer and the cells immediately above it are aggregated
  • the dried layer can be withdrawn from the syringe.
  • the two layers can be mixed with each other and ready for application (treatment).
  • the lowest solution layer called a stem cell or stromal cell solution (diluent + body fluid + stromal cell) layer may be used.
  • the cell aggregate layer which is the second layer, can be recovered from the lowermost layer (stromal cell solution layer), and this layer can be used as a gel due to its high viscosity.
  • this layer can be directly mixed and used with normal adipose tissue.
  • this layer after this layer is obtained, it can be used after being diluted with a desired diluent.
  • the upper adipose tissue is the overall stromal differentiation layer below, that is, the stromal cell aggregate layer, which refers to all layers below the adipose tissue layer.
  • stromal cell aggregate layer which refers to all layers below the adipose tissue layer.
  • diluent, body fluid and stromal cell solution layer containing stromal cells and the mixture can be used as a cell-enriched adipose tissue graft.
  • concentrated adipose tissue was prepared.
  • the concentrated adipose tissue was subjected to a dilution process according to Tables 1 and 2 and was repeatedly refined 30 times using a plurality of screens having through-holes having a size of 400 ⁇ m to 4,000 ⁇ m in the apparatus of FIG. 2 .
  • the number and density of stromal cells were analyzed according to the dilution process and dilution ratio, and are shown in Tables 1 and 2. The ratio of the number of nucleated cells to the control group that was not subjected to the dilution process before the micronization process was shown.

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Abstract

본 발명은, 기계적 방식에 의한 조직 및 세포 분리 방법에 관한 것으로, 보다 구체적으로, 지방조직을 준비하는 단계; 상기 지방조직을 희석액으로 희석하여 지방조직 혼합액을 제조하는 단계; 상기 지방조직 혼합액에서 지방조직과 지방조직을 구성하는 다양한 조직 및 세포를 미세화하는 단계; 및 미세화된 지방조직 혼합액에서 지방조직과 지방조직을 구성하는 다양한 조직 및 세포를 분리하는 단계;를 포함하는, 기계적 방식에 의한 조직 및 세포 분리 방법에 관한 것이다.

Description

기계적 방식에 의한 생체조직을 구성하는 조직 및 세포 분리 방법
본 발명은, 기계적 방식에 의해 생체조직을 구성하는 다양한 조직 및 세포를 분리하는 방법에 관한 것이다.
생체조직은 재생치료 및 미용목적에 이용될 수 있는 다양한 조직, 세포, 물질이 포함되어 있어 이를 분리하기 위한 다양한 방법들이 이용되고 있다. 특히 지방조직은 일반적으로 효소를 이용하여 조직을 분해하고 원심분리 하는 방법이 널리 사용되고 있으나, 적절한 의료용 효소가 없고, 사용되는 효소에 독성이 있어 효소를 이용해 분해된 지방조직으로부터 획득한 물질의 안전성에 대한 논란이 있다. 이에, 효소를 사용하지 않고 지방조직으로부터 재생치료 및 미용목적에 사용될 수 있는 물질을 얻기 위한 다양한 시도가 있다. 예를 들어, 미국공개출원은 여과 방법 및 장치(FILTRATION METHOD AND APPARATUS)를 개시한다.
본 발명은, 상기 언급한 문제점을 해결하기 위해서, 생체조직의 미세화 공정 이전에 희석과 같은 전처리 공정을 진행하여, 희석에 따른 물리적, 화학적 및 전기-기계적 효과에 의해 생체조직, 특히 지방조직(adipose tissue)에서 유용한 조직 및 세포 및 기질세포(stromal cell), 즉, 지방조직 유래 줄기세포가 포함된 세포의 분리 공정 효율을 향상시킬 수 있는, 기계적 방식에 의한 조직 및 세포의 분리 방법에 관한 것이다.
그러나, 본 발명이 해결하고자 하는 과제는 이상에서 언급한 것들로 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 해당 분야 통상의 기술자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
본 발명의 일 실시예에 따라, 지방조직을 준비하는 단계; 상기 지방조직을 희석액으로 희석하여 지방조직 혼합액을 제조하는 단계; 상기 지방조직 혼합액에서 지방조직과 지방조직을 구성하는 다양한 조직 및 세포를 미세화하는 단계; 및 상기 미세화된 지방조직 혼합액에서 지방조직과 지방조직을 구성하는 다양한 조직 및 세포를 분리하는 단계;를 포함하는, 기계적 방식에 의한 조직 및 세포의 분리 방법에 관한 것이다.
본 발명의 일 실시예에 따라, 상기 희석액은, 완충 식염수, 덱스트로즈 용액, 말토덱스트린 용액, 에탄올, 생리식염수, 락테이트 링거액, 링거액, 균형 전해질용액, PRP(platelet-rich plasma), PPP(platelet-poor plasma), PRP와 PPP의 혼합액 및 정맥주사 용액으로 이루어진 군에서 선택된 적어도 하나 이상을 포함하는 것일 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따라, 상기 지방조직 혼합액 중 상기 지방조직 대 상기 희석액의 희석비율은, 1 : 99 내지 99 : 1(v/v)인 것일 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따라, 상기 희석액은, 상기 지방조직 혼합액 중 25 %(부피) 내지 75 %(부피)인 것일 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따라, 상기 지방조직 혼합액을 제조하는 단계는, 상기 희석액의 희석비율에 따라 단위 부피 당 세포 수 및 세포 밀도를 조절하는 것일 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따라, 상기 지방조직과 지방조직을 구성하는 다양한 조직 및 세포를 미세화하는 단계는, 기계적인 방법을 이용하며 커팅, 찢기, 긁기, 분해 및 분리(separation) 중 적어도 하나 이상의 공정을 이용하는 것일 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따라, 상기 지방조직과 지방조직을 구성하는 다양한 조직 및 세포를 미세화하는 단계는, 10 ㎛ 내지 4,000 ㎛ 크기로 미세화하는 것일 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따라, 상기 지방조직과 지방조직을 구성하는 다양한 조직 및 세포를 미세화하는 단계는, 상기 지방조직 혼합액을 순차적, 앞뒤로 반복적 또는 이 둘의 방식으로 복수개의 스크린의 관통공을 통과하도록 이동시키는 것일 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따라, 상기 복수개의 스크린은, 상이하거나 또는 동일한 크기의 관통공을 포함하고, 상기 복수개의 스크린은, 상이하거나 또는 동일한 형태의 관통공을 포함하는 것일 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따라, 상기 복수개의 스크린은, 각각 10 ㎛ 내지 4,000 ㎛ 크기의 관통공을 포함하는 것일 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따라, 상기 복수개의 스크린은, 관통공의 크기에 따라 순서대로 배열되고, 상기 관통공의 표면, 내부 또는 이 둘에 도출한 날카로운 날(edge)을 포함하는 것일 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따라, 상기 지방조직과 지방조직을 구성하는 다양한 조직 및 세포를 미세화하는 단계는, 서로다른 크기를 가지는 복수개의 관통공을 가지는 복수개의 스크린을 내부에 장착한 하우징 및 상기 하우징 양면에 주사기를 연결한 연결구를 포함하는 장치를 이용하는 것일 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따라, 상기 미세화된 지방조직 혼합액에서 미세지방과 지방조직을 구성하는 다양한 조직 및 세포를 분리하는 단계는, 원심분리, 진동법 및 필터링 중 적어도 하나를 이용하여 비중 및/또는 크기에 따라 분리하는 것일 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따라, 상기 미세화된 지방조직 혼합액에서 지방조직과 지방조직을 구성하는 다양한 조직 및 세포를 분리하는 단계는, 지방조직을 구성하는 조직과 줄기세포를 포함하는 기질세포를 분리하는 것일 수 있다.
본 발명은, 기계적 방식으로 지방조직을 구성하는 다양한 조직 및 세포를 분리하는 공정에서 기계적 미세화 절차를 진행하기 전에 생리식염수, 락테이트 링거액, 링거액, 균형된 전해질용액, PRP(platelet-rich plasma), PPP(platelet-poor plasma), PRP와 PPP의 혼합액 또는 정맥주사 방식으로 투여 가능한 용액 등으로 지방조직을 희석하는 희석 공정을 진행하고, 이러한 사전 희석방식은 희석에 따른 물리적, 화학적 및 전기-기계적 효과의 의해 보다 많은 지방조직을 구성하는 다양한 세포, 및 지방조직 유래 기질세포 즉 줄기세포들이 풍부하게 포함된 세포를 분리하고, 분리 공정 효율을 향상시킬 수 있다.
도 1은, 본 발명의 일 실시예에 따라, 본 발명에 의한 분리 방법의 공정 흐름도를 예시적으로 나타낸 것이다.
도 2는, 본 발명의 일 실시예에 따라, 본 발명의 방법에 이용되는 장치의 정단면도를 예시적으로 나타낸 것이다.
도 3은, 본 발명의 일 실시예에 따라, 도 2의 장치의 일부 구조의 절단 사시도를 예시적으로 나타낸 것이다.
도 4는, 본 발명의 일 실시예에 따라, 본 발명의 방법에 이용되는 장치의 스크린을 예시적으로 나타낸 것이다.
이하 첨부된 도면을 참조하여 본 발명의 실시예들을 상세히 설명한다. 본 발명을 설명함에 있어서, 관련된 공지 기능 또는 구성에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 불필요하게 흐릴 수 있다고 판단되는 경우에는 그 상세한 설명을 생략할 것이다. 또한, 본 명세서에서 사용되는 용어들은 본 발명의 바람직한 실시예를 적절히 표현하기 위해 사용된 용어들로서, 이는 사용자, 운용자의 의도 또는 본 발명이 속하는 분야의 관례 등에 따라 달라질 수 있다. 따라서, 본 용어들에 대한 정의는 본 명세서 전반에 걸친 내용을 토대로 내려져야 할 것이다. 각 도면에 제시된 동일한 참조 부호는 동일한 부재를 나타낸다.
명세서 전체에서, 어떤 부재가 다른 부재 "상에" 위치하고 있다고 할 때, 이는 어떤 부재가 다른 부재에 접해 있는 경우뿐 아니라 두 부재 사이에 또 다른 부재가 존재하는 경우도 포함한다.
명세서 전체에서, 어떤 부분이 어떤 구성요소를 "포함"한다고 할 때, 이는 다른 구성요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성 요소를 더 포함할 수 있는 것을 의미한다.
이하, 본 발명의 기계적 방식에 의한 조직 및 세포를 분리 방법에 대하여 실시예 및 도면을 참조하여 구체적으로 설명하도록 한다. 그러나, 본 발명이 이러한 실시예 및 도면에 제한되는 것은 아니다.
본 발명은, 기계적 방식에 의한 조직을 구성하는 다양한 조직 및 세포를 분리 방법에 관한 것으로, 본 발명의 일 실시예에 따라, 상기 분리 방법은, 지방조직을 준비하는 단계(S1); 지방조직을 희석하는 단계(S2); 지방조직을 미세화하는 단계(S3); 및 지방조직 및 지방조직을 구성하는 다양한 조직 및 세포를 분리하는 단계(S4);를 포함할 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따라, 지방조직을 준비하는 단계(S1)는, 지방조직에서 줄기세포를 포함하여 지방조직을 구성하는 조직 및 세포들을 분리하기 위한 지방조직 시료를 준비하는 것으로, 동물(어류, 포유류 등) 등에서 유래한 지방조직을 수집하고 지방조직을 구성하는 조직 및 세포 분리에 이용할 수 있는 농축된 지방조직을 준비할 수 있다. 예를 들어, 지방 흡입술(liposuction), 지방조직 절개(excision) 등의 원하는 방식으로 지방조직을 수집하고, 지방 흡인물(lipoaspirate) 또는 지방조직을 농축하기 위해, 디캔팅(decanting) 또는 원심분리법(centrifugation)으로 분리된 지방조직의 최상층(oil) 및 하층에 위치한 불순물을 제거할 수 있다. 상기 디캔팅(decanting)은, 지방조직이 혈액이나 물보다 가벼워 흡인용기를 가만히 세워 두면 수분 후 지방조직이 위로 떠오르고 그 후 지방조직의 아래에 있는 수분이나 혈액을 분리하는 방법에 해당될 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따라, 지방조직을 희석하는 단계(S2)는, 상기 지방조직을 희석액으로 희석하여 지방조직 혼합액을 제조하는 단계이며, 지방조직의 미세화 공정, 분리 공정 같은 가공 처리, 즉 기계적으로 처리하기 이전에 농축된 지방조직을 최종적으로 회수(또는, 분리)하는 조직 및 세포 혼합액의 양 및 밀도에 따라 다양한 프로토콜/방법에 따른 희석 공정을 진행할 수 있다. 예를 들어, 상기 희석액의 희석비율에 따라 분리 공정에 이용되는 지방조직 또는 최종적으로 회수하는 조직 및 세포 혼합액의 단위 부피 당 세포 수 및 세포 밀도를 조절하고, 지방조직을 구성하는 다양한 조직, 세포 및 기질세포(Stromal cell)의 분리되는 양을 증가시킬 수 있다.
본 발명의 일 예로, 상기 희석액은, 정맥 주입 루트(intravenous route)에 적용될 수 있는 용액일 수 있고, 예를 들어, 완충 식염수, 덱스트로즈 용액, 말토덱스트린 용액, 에탄올, 생리식염수(saline), 락테이트 링거액(ringer lactate), 링거액(ringer), 균형 전해질용액(balanced electrolyte) 또는 용액(solution), PRP(platelet-rich plasma), PPP(platelet-poor plasma), PRP와 PPP의 혼합액, 정맥주사 용액으로 이루어진 군에서 선택된 적어도 하나 이상을 포함할 수 있다. 즉, 기계적 방식으로 지방조직으로부터 지방조직을 구성하는 다양한 조직 및 세포를 분리 및 획득하는 공정에 있어서, 임의의 정맥 주입 루트에 의해 적용될 수 있는 생리 식염수, 링거 락테이트, 링거, 균형 전해질 용액, PRP(platelet-rich plasma), PPP(platelet-poor plasma), PRP와 PPP의 혼합액 또는 용액을 이용하여 지방조직을 희석하는 사전 희석(predilution)은, 희석에 따른 물리적, 화학적 및/또는 전기 기계적 효과로 지방조직 및 지방조직을 구성하는 다양한 조직 및 세포의 분리를 증가시키고, 지방조직을 구성하는 다양한 조직 및 세포 분리 공정의 효율을 향상시킬 수 있다.
본 발명의 일 예로, 상기 희석액은, 상기 지방조직 혼합액 중 상기 지방조직 대 상기 희석액의 희석비율은, 1 : 99 내지 99 : 1(v/v); 20 : 80 내지 80 : 20(v/v); 또는 50 : 50 내지 20 : 80(v/v)이며, 바람직하게는 상기 희석액은, 상기 지방조직 혼합액 중 25 %(부피) 내지 75 %(부피)일 수 있다. 이는 미세화 공정 및 분리 공정에 이용되는 장치 및 시스템의 볼륨에 따라 적절하게 조절하고, 회수된 세포 및 조직의 희석액에 포함된 세포 수 및/또는 세포 밀도를 조절할 수 있다. 예를 들어, 임의의 정맥 주입 용액 등 50 %의 희석액 및 50 %의 지방조직을 이용함으로써 기계적 처리 이전에 희석이 이루어지고, 다음 공정이 진행될 수 있다. 보다 구체적으로, 10 cc의 주사기 또는 용기에 5 cc의 지방조직 및 5 cc의 희석액이 사용되거나, 20 cc의 주사기 또는 용기에 10 cc의 지방조직 및 10 cc의 희석액이 사용될 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따라, 지방조직을 미세화하는 단계(S3)는, 상기 희석된 지방조직 혼합액에서 지방조직과 지방조직을 구성하는 다양한 조직 및 세포를 미세화하는 단계이며, 커팅(cutting), 찢기, 긁기, 분해(disintegration) 및 분리(separation) 중 적어도 하나 이상의 공정을 이용하여 미세화할 수 있다.
본 발명의 일 예로, 지방조직을 미세화하는 단계(S3)는, 지방조직 혼합액에서 지방조직, 지방세포, 줄기세포를 포함하는 기질세포, 생체 물질 등을 10 ㎛ 내지 4,000 ㎛ 크기로 균일하게 미세화할 수 있다.
본 발명의 일 예로, 지방조직을 미세화하는 단계(S3)는, 상기 지방조직 혼합액을 복수개의 스크린이 내장된 시스템 또는 장치를 이용하여 미세화할 수 있다.
예를 들어, 상기 복수개의 스크린은, 상이하거나 또는 동일한 크기의 관통공을 포함하고, 상이하거나 또는 동일한 형태의 관통공을 포함할 수 있다. 이는 다양한 크기의 지방세포 및 기질세포를 미세화하여 분리 공정의 효율을 향상시킬 수 있다.
예를 들어, 상기 복수개의 스크린은, 각각 단일 또는 복수개의 관통공을 포함할 수 있다.
예를 들어, 상기 복수개의 스크린은, 각각 10 ㎛ 내지 4,000 ㎛ 크기의 관통공을 포함하고, 상기 관통공은, 구형, 타원형, 다각형 및 격자 형태 중 적어도 하나 이상을 포함할 수 있다. 상기 크기는 관통공의 직경, 길이 등을 의미할 수 있다.
예를 들어, 상기 관통공의 표면, 내 또는 이 둘에 도출한 날카로운 날(edge)을 포함하고, 이는 도 4에 나타낸 바와 같이, 날카로운 날을 포함하는 블레이드 형태로 도출될 수 있다.
예를 들어, 상기 복수개의 스크린은, 시스템 또는 장치 내에서 관통공의 크기에 따라 순차적으로 배열되고, 관통공이 큰 순서대로 또는 관통공이 작은 순서대로 배열될 수 있다.
예를 들어, 상기 지방조직 혼합액은 상기 복수개의 스크린이 배열된 시스템 또는 장치 내에 투입되고 입구에서 출구로 이동하며 순차적, 앞뒤로 반복적 또는 이 둘의 방식으로 복수개의 스크린의 관통공을 통과하면서 미세화될 수 있다.
예를 들어, 상기 복수개의 스크린이 배열된 시스템 또는 장치 내에 지방조직을 관통공을 통과하도록 이동시키는 반복 횟수는 약 3 내지 30회일 수 있다. 예를 들어, 큰 미세기공을 가지는 스크린에서 상대적으로 작은 기공을 가지는 스크린으로 또는 반대 순서로 반복될 수 있다.
본 발명의 일 예로, 희석된 지방조직으로부터 지방조직을 구성하는 조직 및 세포를 획득하기 미세화 공정이 진행되는 복수개의 스크린을 장착한 장치는 도 1에서 도시된 생체조직 미세화 시스템(1)을 이용할 수 있다. 생체조직 미세화 시스템(1)은, 제1 시린지(C1), 제2 시린지(C2), 제2 커버(160), 제1 커버(150), 하우징(110), 제2 로커(192) 및 제1 로커(191)를 포함할 수 있다. 생체조직 미세화 시스템(1)은, 날카로운 날을 갖는 블레이드 형태로 돌출부를 가지고 있는 다양한 크기의 관통공을 포함하는 복수개의 스크린을 포함하는 디스크(120)가 장착된 하우징(110)에서 양 측의 접속부 사이에 장착되고, 하우징(110)의 양 측에 있는 접속부에 각각 연결된 제1 시린지(C1) 및 제2 시린지(C2)를 포함한다. 제1 시린지(C1) 및 제2 시린지(C2)는, 각각 희석된 지방조직 혼합물(BT)을 수용하도록 구성된 제1 용기 및 제2 용기를 형성하고, 내부에 압력을 인가하고 지방조직(BT)을 스크린(120)을 향해 가압하도록 구성된 제1 푸시 로드를 포함할 수 있다. 2개의 시린지(C1, C2)들의 플런저를 각각 가압하여 하우징(110)을 매개로 희석된 지방조직을 스크린을 통과하도록 반복적으로 이동시키면, 다양한 크기를 가진 균질의 미세화된 지방조직을 획득하고, 이를 이용하여 다양한 크기의 균질화된 미세지방과 그외 지방조직을 구성하는 조직 및 세포를 기계적으로 분리할 수 있다.
예를 들어, 상기 복수개의 스크린은, 10 ㎛ 내지 4000 ㎛ 크기의 관통공을 가지며 블레이드 형태로 날이 관통공의 중앙을 향해 돌출된 형상의 관통공을 포함하고, 2000 ㎛ 내지 3000 ㎛, 1000 ㎛ 내지 2000 ㎛, 500 ㎛ 내지 1000 ㎛, 및 250 ㎛ 내지 500 ㎛ 크기의 미세 구멍을 갖는 스크린 순으로 배열될 수 있다.
예를들어, 상기 복수개의 스크린은, 미세화 시스템(1)에서 복수개의 스크린을 포함하는 디스크(120)은, 플레이트(121) 및 복수개의 스크린(122a, 122b, 122c, 122d, 122e)을 포함할 수 있다. 플레이트(121)는 제1마운트(111)에 고정될 수 있다. 플레이트(121)는 제1중심 개구(1211)를 포함할 수 있다. 즉, 지방조직을 미세화하도록 구성된 복수개의 관통공을 각각 포함하는 복수개의 스크린(122a, 122b, 122c, 122d, 122e) 중 제1스크린(122a)을 선택하고, 선택된 제1스크린(122a)으로 지방조직을 미세화 한 후, 복수개의 스크린(122a, 122b, 122c, 122d, 122e) 중 제2스크린(122b)을 선택하고, 선택된 제2스크린(122b)으로 지방조직을 미세화하도록 구성될 수 있다. 여기서, 복수개의 스크린(122a, 122b, 122c, 122d, 122e)의 선택 및 순서는 사용자에 의해 결정되는 것이므로, 상기 설명한 스크린의 선택 및 순서에 구속되지 않는다.
도 4를 참조하면, 본 발명의 일 실시예에 따라 복수개의 스크린을 장착한 장치에서 상기 스크린의 구성을 예시적으로 나타낸 것으로, 도 4에서 스크린(220)은 플레이트(221) 및 관통공(222)을 포함할 수 있다. 관통공(222)은 플레이트(221)의 복수개의 모서리들에 의해 규정될 수 있다. 예를 들어, 스크린(220)은 관통공(222)의 제1측에 형성된 제1선형부(223a), 관통공(222)의 제1측에 형성되고 관통공(222)의 중심을 향해 제1방향(T1)으로 돌출하는 제1돌출부(224a), 관통공(222)의 제2측에 형성된 제2선형부(223b) 및 관통공(222)의 제2측에 형성되고 관통공(222)의 중심을 향해 제2방향(T2)으로 돌출하는 제2돌출부(224b)를 포함할 수 있다. 제1돌출부(224a) 및 제2돌촐부(224b)는 스크린(220)에 대해 각이 지도록 배향될 수 있고, 스크린(220)을 통과하는 지방조직을 긁고 찢도록 구성될 수 있다. 제1방향(T1)으로 돌출하는 제1돌출부(224a)의 제1연장선(L1) 및 제2방향(T2)으로 돌출하는 제2돌출부(224b)의 제2연장선(L2)은 서로 꼬인 위치에 있을 수 있다. 즉, 제1연장선(L1) 및 제2연장선(L2)은 서로 평행하지도 않고 서로 만나지도 않을 수 있다. 제1돌출부(224a) 및 제2돌출부(224b)는 제1커버(150) 및 제2커버(160) 중 어느 하나의 커버를 향하도록 제1돌출부(224a)의 방향(T1) 및 제2돌출부(224b)의 방향(T2)이 설정될 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따라, 지방조직 및 지방조직을 구성하는 다양한 조직 및 세포를 분리하는 단계(S4)는, 상기 지방조직 혼합액에서 미세지방과 지방조직을 구성하는 다양한 조직 및 세포를 분리하는 단계이며, 원심분리, 디캔팅, 진동법(vibration), 필터링 등을 이용할 수 있다.
본 발명의 일 예로, 원심분리, 진동법, 및 필터링 중 적어도 하나를 이용하여 비중 및/또는 크기에 따라 분리하여 원하는 지방조직 및 세포를 분리할 수 있다. 하나의 예로, 상기 미세화 공정을 거친 지방조직 혼합액을 원심분리로 분리 공정 이후에 4개의 층(트리글리세라드(triglyceride)층; 지방조직, 지방조직과 희석액 + 체액의 경계층으로 세포들이 집약된 기질세포 집약(aggregate)층; 및 희석액, 체액, 줄기세포를 포함하는 기질세포 용액층)으로 분리되면, i) 그 중 최하층의 줄기세포를 가진 기질세포 용액층 및 그 바로 위의 세포들이 집약(aggregate)된 층을 주사기로부터 회수할 수 있다. 상기 2개의 층은 서로 혼합되어 적용(치료)을 위해 준비될 수 있다. ii) 용액만을 원하는 경우, 줄기세포 내지 기질세포 용액(희석액 + 체액 + 기질세포)층으로 불리는 최하 용액층이 사용될 수 있다. iii) 젤 형태의 최종 산물만을 원하는 경우, 최하층(기질세포 용액층)으로부터 2번째 층인 세포 집약 층(aggregate)이 회수될 수 있고, 이 층은 점성이 높아 젤로서 이용될 수 있다. 또는, 이 층은 일반 지방조직과 직접적으로 혼합되고 사용될 수 있다. 또는, 이 층은 획득된 이후에, 원하는 희석액으로 희석되어 사용될 수 있다.
다른 예로, 최종 산물에서 최상층인 트리글리세라드(triglyceride)층을 제거함으로써, 상부 지방조직이 하부의 전체적인 기질 분화(stromal differentiation)층, 즉 지방조직층 이하의 모든 층을 가리키는 기질세포 집약(aggregate)층, 희석액, 체액 및 기질세포를 포함하는 기질세포 용액층과 혼합될 수 있고 혼합물은 세포 풍부화(cell-enriched) 지방조직 이식(graft)으로서 사용될 수 있다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명하고자 하나, 하기의 실시예는 단지 설명의 목적을 위한 것이며, 본 발명의 범위를 한정하고자 하는 것은 아니다.
실시예
인체에서 지방흡인 방식으로 수집한 지방조직에서 불순물을 제거하고 원심분리한 이후에 농축된 지방조직을 준비하였다. 상기 농축된 지방조직은 표 1 및 표 2에 따라 희석 공정을 거치고 도 2의 장치에서 400 ㎛ 내지 4,000 ㎛ 크기의 관통공을 갖는 복수개의 스크린을 이용하여 30회 반복적으로 미세화하였다. 미세화 공정 이전에 희석 공정 및 희석 비율에 따라 기질세포(유핵 세포)의 수 및 밀도를 분석하여 표 1 및 표 2에 나타내었다. 미세화 공정 이전에 희석 공정이 이루어지지 않은 대조군 대비 유핵세포 수의 비율을 나타내었다.
표 1 및 표 2를 살펴보면, 희석액을 이용하여 미세화 공정 이전에 희석할 경우에 기질세포(유핵세포)의 세포 수 및 밀도가 증가되고, 기계적 분리 공정을 통해 지방조직에서 기질세포(유핵세포)의 분리되는 양이 증가될 수 있음을 확인할 수 있다.
Figure PCTKR2021003108-appb-img-000001
Figure PCTKR2021003108-appb-img-000002
이상과 같이 실시예들이 비록 한정된 실시예와 도면에 의해 설명되었으나, 해당 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 상기의 기재로부터 다양한 수정 및 변형이 가능하다. 예를 들어, 설명된 기술들이 설명된 방법과 다른 순서로 수행되거나, 및/또는 설명된 구성요소들이 설명된 방법과 다른 형태로 결합 또는 조합되거나, 다른 구성요소 또는 균등물에 의하여 대치되거나 치환되더라도 적절한 결과가 달성될 수 있다. 그러므로, 다른 구현들, 다른 실시예들 및 특허청구범위와 균등한 것들도 후술하는 특허청구범위의 범위에 속한다.

Claims (14)

  1. 지방조직을 준비하는 단계;
    상기 지방조직을 희석액으로 희석하여 지방조직 혼합액을 제조하는 단계;
    상기 지방조직 혼합액에서 지방조직과 지방조직을 구성하는 조직 및 세포를 미세화하는 단계; 및
    미세화된 지방조직 혼합액에서 지방조직과 지방조직을 구성하는 조직 및 세포를 분리하는 단계;
    를 포함하는,
    기계적 방식에 의한 조직 및 세포 분리 방법.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 희석액은,
    완충 식염수, 덱스트로즈 용액, 말토덱스트린 용액, 에탄올, 생리식염수, 락테이트 링거액, 링거액, 균형 전해질용액, PRP(platelet-rich plasma), PPP(platelet-poor plasma), PRP와 PPP의 혼합액 및 정맥주사 용액으로 이루어진 군에서 선택된 적어도 하나 이상을 포함하는 것인,
    기계적 방식에 의한 조직 및 세포 분리 방법.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 지방조직 혼합액 중 상기 지방조직 대 상기 희석액의 희석비율은,
    1 : 99 내지 99 : 1(v/v)인 것인,
    기계적 방식에 의한 조직 및 세포 분리 방법.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 희석액은,
    상기 지방조직 혼합액 중 25 %(부피) 내지 75 %(부피)인 것인,
    기계적 방식에 의한 조직 및 세포 분리 방법.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 지방조직 혼합액을 제조하는 단계는,
    상기 희석액의 희석비율에 따라 회수된 조직 및 세포의 단위 부피 당 세포 수 및 세포 밀도를 조절하는 것인,
    기계적 방식에 의한 조직 및 세포 분리 방법.
  6. 제1항에 있어서,
    상기 지방조직과 지방조직을 구성하는 조직 및 세포를 미세화하는 단계는,
    커팅, 찢기, 긁기, 분해 및 분리(separation) 중 적어도 하나 이상의 공정을 이용하는 것인,
    기계적 방식에 의한 조직 및 세포 분리 방법.
  7. 제1항에 있어서,
    상기 지방조직과 지방조직을 구성하는 조직 및 세포를 미세화하는 단계는,
    10 ㎛ 내지 4,000 ㎛ 크기로 미세화하는 것인,
    기계적 방식에 의한 조직 및 세포 분리 방법.
  8. 제1항에 있어서,
    상기 지방조직과 지방조직을 구성하는 조직 및 세포를 미세화하는 단계는,
    상기 지방조직 혼합액을 순차적, 앞뒤로 반복적 또는 이 둘의 방식으로 복수개의 스크린 관통공을 통과하도록 이동시키는 것인,
    기계적 방식에 의한 조직 및 세포 분리 방법.
  9. 제8항에 있어서,
    상기 복수개의 스크린은, 상이하거나 또는 동일한 크기의 관통공을 포함하고,
    상기 복수개의 스크린은, 상이하거나 또는 동일한 형태의 관통공을 포함하는 것인,
    기계적 방식에 의한 조직 및 세포 분리 방법.
  10. 제8항에 있어서,
    상기 복수개의 스크린은,
    각각 10 ㎛ 내지 4,000 ㎛ 크기의 관통공을 포함하는 것인,
    기계적 방식에 의한 조직 및 세포 분리 방법.
  11. 제8항에 있어서,
    상기 복수개의 스크린은, 관통공의 크기에 따라 순서대로 배열되고,
    상기 관통공의 표면, 내 또는 이 둘에 도출한 날카로운 날(edge)을 포함하는 것인,
    기계적 방식에 의한 조직 및 세포 분리 방법.
  12. 제1항에 있어서,
    상기 지방조직과 지방조직을 구성하는 조직 및 세포를 미세화하는 단계는,
    서로다른 크기를 가지는 복수개의 관통공을 가지는 복수개의 스크린을 내부에 장착한 하우징 및 상기 하우징 양면에 주사기를 연결한 연결구를 포함하는 장치를 이용하는 것인,
    기계적 방식에 의한 조직 및 세포 분리 방법.
  13. 제1항에 있어서,
    상기 미세화된 지방조직 혼합액에서 지방조직과 지방조직을 구성하는 조직 및 세포를 분리하는 단계는,
    원심분리, 진동법 및 필터링 중 적어도 하나를 이용하여 크기와 비중에 따라 분리하는 것인,
    기계적 방식에 의한 조직 및 세포 분리 방법.
  14. 제1항에 있어서,
    상기 미세화된 지방조직 혼합액에서 지방조직과 지방조직을 구성하는 조직 및 세포를 분리하는 단계는,
    지방조직을 구성하는 조직과 줄기세포를 포함하는 기질세포를 분리하는 것인,
    기계적 방식에 의한 조직 및 세포 분리 방법.
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Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100821128B1 (ko) * 2003-11-04 2008-04-14 가부시키가이샤 바이오마스타 지방 조직으로부터 줄기세포를 생성하는 방법 및 시스템
WO2010045389A1 (en) * 2008-10-15 2010-04-22 Allan Yang Wu Method and apparatus for increasing adipose vascular fraction
JP2012080821A (ja) * 2010-10-12 2012-04-26 Univ Of Tsukuba 血液中の有核細胞成分濃縮方法
KR20170093105A (ko) * 2014-09-19 2017-08-14 필립 제이 심슨 기질 혈관 분획 처리 디바이스 및 방법
JP2019033691A (ja) * 2017-08-16 2019-03-07 ヒヨン イ 酵素を使用せず、生体組織から間質細胞を分離する方法及び装置
KR20190026586A (ko) * 2017-09-05 2019-03-13 이준석 생체조직 미세화 장치

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ITGE20120034A1 (it) * 2012-03-28 2013-09-29 Carlo Tremolada Preparato e metodo per la produzione di un preparato comprendente cellule staminali mesenchimali
CN107921182B (zh) * 2015-06-10 2022-09-02 特拉维夫医学研究、基础设施和卫生服务医疗中心基金会 用于分离基质血管部分的机械仪器和方法
KR101848868B1 (ko) * 2016-05-26 2018-04-13 (주) 굿모닝 바이오 지방 줄기 세포 자동 세척 및 분리장치
FR3068986B1 (fr) * 2017-07-12 2019-08-09 Stemcis Dispositif de fragmentation mecanique de tissus destine a la preparation d'une composition de cellules isolees, procede correspondant

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100821128B1 (ko) * 2003-11-04 2008-04-14 가부시키가이샤 바이오마스타 지방 조직으로부터 줄기세포를 생성하는 방법 및 시스템
WO2010045389A1 (en) * 2008-10-15 2010-04-22 Allan Yang Wu Method and apparatus for increasing adipose vascular fraction
JP2012080821A (ja) * 2010-10-12 2012-04-26 Univ Of Tsukuba 血液中の有核細胞成分濃縮方法
KR20170093105A (ko) * 2014-09-19 2017-08-14 필립 제이 심슨 기질 혈관 분획 처리 디바이스 및 방법
JP2019033691A (ja) * 2017-08-16 2019-03-07 ヒヨン イ 酵素を使用せず、生体組織から間質細胞を分離する方法及び装置
KR20190026586A (ko) * 2017-09-05 2019-03-13 이준석 생체조직 미세화 장치

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