WO2021158146A1 - Рекомбинантный ростовой дифференцировочный фактор роста 11 (gdf11), - Google Patents
Рекомбинантный ростовой дифференцировочный фактор роста 11 (gdf11), Download PDFInfo
- Publication number
- WO2021158146A1 WO2021158146A1 PCT/RU2021/050009 RU2021050009W WO2021158146A1 WO 2021158146 A1 WO2021158146 A1 WO 2021158146A1 RU 2021050009 W RU2021050009 W RU 2021050009W WO 2021158146 A1 WO2021158146 A1 WO 2021158146A1
- Authority
- WO
- WIPO (PCT)
- Prior art keywords
- gdf11
- protein
- glucan
- gbd
- recombinant
- Prior art date
Links
- 102100040898 Growth/differentiation factor 11 Human genes 0.000 title claims abstract description 11
- 101000893545 Homo sapiens Growth/differentiation factor 11 Proteins 0.000 title claims abstract description 10
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 claims abstract description 56
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 claims abstract description 56
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 40
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 33
- 229920001503 Glucan Polymers 0.000 claims abstract description 18
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 claims abstract description 16
- 239000002594 sorbent Substances 0.000 claims abstract description 15
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 12
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims abstract description 9
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims abstract description 4
- 230000003993 interaction Effects 0.000 claims abstract description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims abstract description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 31
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 31
- 230000037396 body weight Effects 0.000 claims description 28
- 229920000310 Alpha glucan Polymers 0.000 claims description 19
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 13
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 11
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 10
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 10
- 241000672609 Escherichia coli BL21 Species 0.000 claims description 5
- 241000194019 Streptococcus mutans Species 0.000 claims description 5
- 108010074864 Factor XI Proteins 0.000 claims description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 4
- 101150080985 GDF11 gene Proteins 0.000 claims description 3
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 claims description 3
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 claims description 3
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 3
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 claims description 3
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 claims description 3
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 claims description 3
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 claims description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 abstract description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 6
- 108090001082 glucan-binding proteins Proteins 0.000 abstract description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 abstract description 4
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 abstract description 3
- 108010077805 Bacterial Proteins Proteins 0.000 abstract description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 abstract description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 abstract description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 43
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 42
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 10
- 108010056852 Myostatin Proteins 0.000 description 9
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 8
- 102100039939 Growth/differentiation factor 8 Human genes 0.000 description 8
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 8
- 241000286209 Phasianidae Species 0.000 description 6
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 6
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 5
- 241000283903 Ovis aries Species 0.000 description 5
- 239000012053 oil suspension Substances 0.000 description 5
- SOEGEPHNZOISMT-BYPYZUCNSA-N Gly-Ser-Gly Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O SOEGEPHNZOISMT-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 4
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 4
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 4
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 4
- 244000309464 bull Species 0.000 description 4
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 102100034134 Activin receptor type-1B Human genes 0.000 description 3
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N Benzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101000799189 Homo sapiens Activin receptor type-1B Proteins 0.000 description 3
- UIGMAMGZOJVTDN-WHFBIAKZSA-N Ser-Gly-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O UIGMAMGZOJVTDN-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 3
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 3
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 108010069926 arginyl-glycyl-serine Proteins 0.000 description 3
- 108010092854 aspartyllysine Proteins 0.000 description 3
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 3
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 3
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 3
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 3
- RVLOMLVNNBWRSR-KNIFDHDWSA-N (2s)-2-aminopropanoic acid;(2s)-2,6-diaminohexanoic acid Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O.NCCCC[C@H](N)C(O)=O RVLOMLVNNBWRSR-KNIFDHDWSA-N 0.000 description 2
- XCVRVWZTXPCYJT-BIIVOSGPSA-N Ala-Asn-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N XCVRVWZTXPCYJT-BIIVOSGPSA-N 0.000 description 2
- MQIGTEQXYCRLGK-BQBZGAKWSA-N Ala-Gly-Pro Chemical compound C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O MQIGTEQXYCRLGK-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- VCSABYLVNWQYQE-UHFFFAOYSA-N Ala-Lys-Lys Natural products NCCCCC(NC(=O)C(N)C)C(=O)NC(CCCCN)C(O)=O VCSABYLVNWQYQE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WVNFNPGXYADPPO-BQBZGAKWSA-N Arg-Gly-Ser Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O WVNFNPGXYADPPO-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- XVAPVJNJGLWGCS-ACZMJKKPSA-N Asn-Glu-Asn Chemical compound C(CC(=O)O)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N XVAPVJNJGLWGCS-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 2
- GFFRWIJAFFMQGM-NUMRIWBASA-N Asn-Glu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O GFFRWIJAFFMQGM-NUMRIWBASA-N 0.000 description 2
- IICZCLFBILYRCU-WHFBIAKZSA-N Asn-Gly-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O IICZCLFBILYRCU-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- AEZCCDMZZJOGII-DCAQKATOSA-N Asn-Met-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O AEZCCDMZZJOGII-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- PBVLJOIPOGUQQP-CIUDSAMLSA-N Asp-Ala-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O PBVLJOIPOGUQQP-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- KOHBWQDSVCARMI-BWBBJGPYSA-N Cys-Cys-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O KOHBWQDSVCARMI-BWBBJGPYSA-N 0.000 description 2
- AOZBJZBKFHOYHL-AVGNSLFASA-N Cys-Glu-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O AOZBJZBKFHOYHL-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- URDUGPGPLNXXES-WHFBIAKZSA-N Cys-Gly-Cys Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O URDUGPGPLNXXES-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- ZOXBSICWUDAOHX-GUBZILKMSA-N Glu-Asn-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O ZOXBSICWUDAOHX-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- DSPQRJXOIXHOHK-WDSKDSINSA-N Glu-Asp-Gly Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O DSPQRJXOIXHOHK-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- 229920002527 Glycogen Polymers 0.000 description 2
- IXQGOKWTQPCIQM-YJRXYDGGSA-N His-Thr-His Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CN=CN2)N)O IXQGOKWTQPCIQM-YJRXYDGGSA-N 0.000 description 2
- LHSGPCFBGJHPCY-UHFFFAOYSA-N L-leucine-L-tyrosine Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 LHSGPCFBGJHPCY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XGDCYUQSFDQISZ-BQBZGAKWSA-N Leu-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XGDCYUQSFDQISZ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- QWWPYKKLXWOITQ-VOAKCMCISA-N Leu-Thr-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(C)C QWWPYKKLXWOITQ-VOAKCMCISA-N 0.000 description 2
- QESXLSQLQHHTIX-RHYQMDGZSA-N Leu-Val-Thr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O QESXLSQLQHHTIX-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 2
- CNGOEHJCLVCJHN-SRVKXCTJSA-N Lys-Pro-Glu Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O CNGOEHJCLVCJHN-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- IEIHKHYMBIYQTH-YESZJQIVSA-N Lys-Tyr-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N)C(=O)O IEIHKHYMBIYQTH-YESZJQIVSA-N 0.000 description 2
- BQVUABVGYYSDCJ-UHFFFAOYSA-N Nalpha-L-Leucyl-L-tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C(N)CC(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 BQVUABVGYYSDCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FEVDNIBDCRKMER-IUCAKERBSA-N Pro-Gly-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H]1CCCN1 FEVDNIBDCRKMER-IUCAKERBSA-N 0.000 description 2
- 229920001218 Pullulan Polymers 0.000 description 2
- 239000004373 Pullulan Substances 0.000 description 2
- UQFYNFTYDHUIMI-WHFBIAKZSA-N Ser-Gly-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CO UQFYNFTYDHUIMI-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- DGDCHPCRMWEOJR-FQPOAREZSA-N Thr-Ala-Tyr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 DGDCHPCRMWEOJR-FQPOAREZSA-N 0.000 description 2
- SKHPKKYKDYULDH-HJGDQZAQSA-N Thr-Asn-Leu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O SKHPKKYKDYULDH-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 2
- MXNAOGFNFNKUPD-JHYOHUSXSA-N Thr-Phe-Thr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O MXNAOGFNFNKUPD-JHYOHUSXSA-N 0.000 description 2
- GFRIEEKFXOVPIR-RHYQMDGZSA-N Thr-Pro-Lys Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O GFRIEEKFXOVPIR-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 2
- IVDFVBVIVLJJHR-LKXGYXEUSA-N Thr-Ser-Asp Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O IVDFVBVIVLJJHR-LKXGYXEUSA-N 0.000 description 2
- PMIJXCLOQFMOKZ-BPUTZDHNSA-N Trp-Asp-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)N PMIJXCLOQFMOKZ-BPUTZDHNSA-N 0.000 description 2
- YPBYQWFZAAQMGW-XIRDDKMYSA-N Trp-Lys-Asn Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N YPBYQWFZAAQMGW-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 2
- JKUZFODWJGEQAP-KBPBESRZSA-N Tyr-Gly-Lys Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N)O JKUZFODWJGEQAP-KBPBESRZSA-N 0.000 description 2
- BGFCXQXETBDEHP-BZSNNMDCSA-N Tyr-Phe-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O BGFCXQXETBDEHP-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 2
- XQVRMLRMTAGSFJ-QXEWZRGKSA-N Val-Asp-Arg Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)N XQVRMLRMTAGSFJ-QXEWZRGKSA-N 0.000 description 2
- XPKCFQZDQGVJCX-RHYQMDGZSA-N Val-Lys-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C(C)C)N)O XPKCFQZDQGVJCX-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 2
- YTNGABPUXFEOGU-SRVKXCTJSA-N Val-Pro-Arg Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O YTNGABPUXFEOGU-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- RYQUMYBMOJYYDK-NHCYSSNCSA-N Val-Pro-Glu Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N RYQUMYBMOJYYDK-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 108010042598 glutamyl-aspartyl-glycine Proteins 0.000 description 2
- 229940096919 glycogen Drugs 0.000 description 2
- XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N glycyl-L-tyrosine hemihydrate Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- 108010025306 histidylleucine Proteins 0.000 description 2
- 108010012058 leucyltyrosine Proteins 0.000 description 2
- 108010017391 lysylvaline Proteins 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 235000019423 pullulan Nutrition 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 2
- GJLXVWOMRRWCIB-MERZOTPQSA-N (2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-acetamido-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-6-aminohexanoyl]amino]-6-aminohexanoyl]amino]-6-aminohexanoyl]amino]-6-aminohexanoyl]amino]-6-aminohexanoyl]amino]-6-aminohexanoyl]amino]-6-aminohexanamide Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(N)=O)C1=CC=C(O)C=C1 GJLXVWOMRRWCIB-MERZOTPQSA-N 0.000 description 1
- 102100034135 Activin receptor type-1C Human genes 0.000 description 1
- CVGNCMIULZNYES-WHFBIAKZSA-N Ala-Asn-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(O)=O CVGNCMIULZNYES-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- XQJAFSDFQZPYCU-UWJYBYFXSA-N Ala-Asn-Tyr Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)O)N XQJAFSDFQZPYCU-UWJYBYFXSA-N 0.000 description 1
- FUSPCLTUKXQREV-ACZMJKKPSA-N Ala-Glu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O FUSPCLTUKXQREV-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- VBRDBGCROKWTPV-XHNCKOQMSA-N Ala-Glu-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N VBRDBGCROKWTPV-XHNCKOQMSA-N 0.000 description 1
- VCSABYLVNWQYQE-SRVKXCTJSA-N Ala-Lys-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](N)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O VCSABYLVNWQYQE-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- DHBKYZYFEXXUAK-ONGXEEELSA-N Ala-Phe-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C)CC1=CC=CC=C1 DHBKYZYFEXXUAK-ONGXEEELSA-N 0.000 description 1
- BTRULDJUUVGRNE-DCAQKATOSA-N Ala-Pro-Lys Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O BTRULDJUUVGRNE-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- BUQICHWNXBIBOG-LMVFSUKVSA-N Ala-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)N BUQICHWNXBIBOG-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 1
- 102100022524 Alpha-1-antichymotrypsin Human genes 0.000 description 1
- AHPWQERCDZTTNB-FXQIFTODSA-N Arg-Cys-Cys Chemical compound C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N)CN=C(N)N AHPWQERCDZTTNB-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- SSZGOKWBHLOCHK-DCAQKATOSA-N Arg-Lys-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N SSZGOKWBHLOCHK-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- ISJWBVIYRBAXEB-CIUDSAMLSA-N Arg-Ser-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O ISJWBVIYRBAXEB-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- NMTANZXPDAHUKU-ULQDDVLXSA-N Arg-Tyr-Lys Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 NMTANZXPDAHUKU-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- QCTOLCVIGRLMQS-HRCADAONSA-N Arg-Tyr-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N)C(=O)O QCTOLCVIGRLMQS-HRCADAONSA-N 0.000 description 1
- APHUDFFMXFYRKP-CIUDSAMLSA-N Asn-Asn-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N APHUDFFMXFYRKP-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- VYLVOMUVLMGCRF-ZLUOBGJFSA-N Asn-Asp-Ser Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O VYLVOMUVLMGCRF-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- UBGGJTMETLEXJD-DCAQKATOSA-N Asn-Leu-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O UBGGJTMETLEXJD-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- AYOAHKWVQLNPDM-HJGDQZAQSA-N Asn-Lys-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O AYOAHKWVQLNPDM-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 1
- KTDWFWNZLLFEFU-KKUMJFAQSA-N Asn-Tyr-His Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N)O KTDWFWNZLLFEFU-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- KGAJCJXBEWLQDZ-UBHSHLNASA-N Asp-Asp-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N KGAJCJXBEWLQDZ-UBHSHLNASA-N 0.000 description 1
- QCLHLXDWRKOHRR-GUBZILKMSA-N Asp-Glu-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N QCLHLXDWRKOHRR-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- MYLZFUMPZCPJCJ-NHCYSSNCSA-N Asp-Lys-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O MYLZFUMPZCPJCJ-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- LIJXJYGRSRWLCJ-IHRRRGAJSA-N Asp-Phe-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O LIJXJYGRSRWLCJ-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- GWIJZUVQVDJHDI-AVGNSLFASA-N Asp-Phe-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O GWIJZUVQVDJHDI-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- ZARXTZFGQZBYFO-JQWIXIFHSA-N Asp-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)N)C(O)=O)=CNC2=C1 ZARXTZFGQZBYFO-JQWIXIFHSA-N 0.000 description 1
- YUELDQUPTAYEGM-XIRDDKMYSA-N Asp-Trp-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N YUELDQUPTAYEGM-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 1
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 101100505161 Caenorhabditis elegans mel-32 gene Proteins 0.000 description 1
- GSNRZJNHMVMOFV-ACZMJKKPSA-N Cys-Asp-Glu Chemical compound C(CC(=O)O)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N GSNRZJNHMVMOFV-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- LDIKUWLAMDFHPU-FXQIFTODSA-N Cys-Cys-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O LDIKUWLAMDFHPU-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- NXQCSPVUPLUTJH-WHFBIAKZSA-N Cys-Ser-Gly Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O NXQCSPVUPLUTJH-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- WZZSKAJIHTUUSG-ACZMJKKPSA-N Glu-Ala-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WZZSKAJIHTUUSG-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- ATRHMOJQJWPVBQ-DRZSPHRISA-N Glu-Ala-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O ATRHMOJQJWPVBQ-DRZSPHRISA-N 0.000 description 1
- YKLNMGJYMNPBCP-ACZMJKKPSA-N Glu-Asn-Asp Chemical compound C(CC(=O)O)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N YKLNMGJYMNPBCP-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- VMKCPNBBPGGQBJ-GUBZILKMSA-N Glu-Leu-Asn Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N VMKCPNBBPGGQBJ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- WIKMTDVSCUJIPJ-CIUDSAMLSA-N Glu-Ser-Arg Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N WIKMTDVSCUJIPJ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- JLXVRFDTDUGQEE-YFKPBYRVSA-N Gly-Arg Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N JLXVRFDTDUGQEE-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- AIJAPFVDBFYNKN-WHFBIAKZSA-N Gly-Asn-Asp Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)CN)C(=O)N AIJAPFVDBFYNKN-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- LXXLEUBUOMCAMR-NKWVEPMBSA-N Gly-Asp-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)CN)C(=O)O LXXLEUBUOMCAMR-NKWVEPMBSA-N 0.000 description 1
- YTSVAIMKVLZUDU-YUMQZZPRSA-N Gly-Leu-Asp Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O YTSVAIMKVLZUDU-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- ABPRMMYHROQBLY-NKWVEPMBSA-N Gly-Ser-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CO)NC(=O)CN)C(=O)O ABPRMMYHROQBLY-NKWVEPMBSA-N 0.000 description 1
- GULGDABMYTYMJZ-STQMWFEESA-N Gly-Trp-Asp Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O GULGDABMYTYMJZ-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- 241000190687 Gobius Species 0.000 description 1
- 101710194452 Growth/differentiation factor 11 Proteins 0.000 description 1
- JIUYRPFQJJRSJB-QWRGUYRKSA-N His-His-Gly Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)NCC(O)=O)C1=CN=CN1 JIUYRPFQJJRSJB-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- 108010093488 His-His-His-His-His-His Proteins 0.000 description 1
- LNCFUHAPNTYMJB-IUCAKERBSA-N His-Pro Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(O)=O)C1=CN=CN1 LNCFUHAPNTYMJB-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- SOYCWSKCUVDLMC-AVGNSLFASA-N His-Pro-Arg Chemical compound N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(=O)N2CCC[C@H]2C(=O)N[C@@H](CCCNC(=N)N)C(=O)O SOYCWSKCUVDLMC-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- ILUVWFTXAUYOBW-CUJWVEQBSA-N His-Ser-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)N)O ILUVWFTXAUYOBW-CUJWVEQBSA-N 0.000 description 1
- 101000799193 Homo sapiens Activin receptor type-1C Proteins 0.000 description 1
- 101000678026 Homo sapiens Alpha-1-antichymotrypsin Proteins 0.000 description 1
- 101000911390 Homo sapiens Coagulation factor VIII Proteins 0.000 description 1
- SENJXOPIZNYLHU-UHFFFAOYSA-N L-leucyl-L-arginine Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCN=C(N)N SENJXOPIZNYLHU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- REPPKAMYTOJTFC-DCAQKATOSA-N Leu-Arg-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O REPPKAMYTOJTFC-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- IGUOAYLTQJLPPD-DCAQKATOSA-N Leu-Asn-Arg Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N IGUOAYLTQJLPPD-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- FGNQZXKVAZIMCI-CIUDSAMLSA-N Leu-Asp-Cys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N FGNQZXKVAZIMCI-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- IAJFFZORSWOZPQ-SRVKXCTJSA-N Leu-Leu-Asn Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O IAJFFZORSWOZPQ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- FLNPJLDPGMLWAU-UWVGGRQHSA-N Leu-Met-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C FLNPJLDPGMLWAU-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- VDIARPPNADFEAV-WEDXCCLWSA-N Leu-Thr-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(O)=O VDIARPPNADFEAV-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 1
- AIQWYVFNBNNOLU-RHYQMDGZSA-N Leu-Thr-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O AIQWYVFNBNNOLU-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- MPOHDJKRBLVGCT-CIUDSAMLSA-N Lys-Ala-Asn Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N MPOHDJKRBLVGCT-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- QZONCCHVHCOBSK-YUMQZZPRSA-N Lys-Gly-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O QZONCCHVHCOBSK-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- JYVCOTWSRGFABJ-DCAQKATOSA-N Lys-Met-Ser Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N JYVCOTWSRGFABJ-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- UGCIQUYEJIEHKX-GVXVVHGQSA-N Lys-Val-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O UGCIQUYEJIEHKX-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 1
- DSWOTZCVCBEPOU-IUCAKERBSA-N Met-Arg-Gly Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(O)=O)CCCNC(N)=N DSWOTZCVCBEPOU-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- ZACMJPCWVSLCNS-JYJNAYRXSA-N Met-Phe-Met Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 ZACMJPCWVSLCNS-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- PHURAEXVWLDIGT-LPEHRKFASA-N Met-Ser-Pro Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N PHURAEXVWLDIGT-LPEHRKFASA-N 0.000 description 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-leucine Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010047562 NGR peptide Proteins 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- ZWJKVFAYPLPCQB-UNQGMJICSA-N Phe-Arg-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@@H](N)Cc1ccccc1)C(O)=O ZWJKVFAYPLPCQB-UNQGMJICSA-N 0.000 description 1
- PYOHODCEOHCZBM-RYUDHWBXSA-N Phe-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 PYOHODCEOHCZBM-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- 241000255969 Pieris brassicae Species 0.000 description 1
- VJLJGKQAOQJXJG-CIUDSAMLSA-N Pro-Asp-Glu Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O VJLJGKQAOQJXJG-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- VTFXTWDFPTWNJY-RHYQMDGZSA-N Pro-Leu-Thr Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O VTFXTWDFPTWNJY-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- JUJCUYWRJMFJJF-AVGNSLFASA-N Pro-Lys-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 JUJCUYWRJMFJJF-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- AJJDPGVVNPUZCR-RHYQMDGZSA-N Pro-Thr-Lys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1)O AJJDPGVVNPUZCR-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- KHRLUIPIMIQFGT-AVGNSLFASA-N Pro-Val-Leu Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O KHRLUIPIMIQFGT-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- SRTCFKGBYBZRHA-ACZMJKKPSA-N Ser-Ala-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O SRTCFKGBYBZRHA-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- IOVBCLGAJJXOHK-SRVKXCTJSA-N Ser-His-His Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CO)N)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(O)=O)C1=CN=CN1 IOVBCLGAJJXOHK-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- FUMGHWDRRFCKEP-CIUDSAMLSA-N Ser-Leu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O FUMGHWDRRFCKEP-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- PBUXMVYWOSKHMF-WDSKDSINSA-N Ser-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO PBUXMVYWOSKHMF-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- UGGWCAFQPKANMW-FXQIFTODSA-N Ser-Met-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O UGGWCAFQPKANMW-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- PJIQEIFXZPCWOJ-FXQIFTODSA-N Ser-Pro-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O PJIQEIFXZPCWOJ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- RHAPJNVNWDBFQI-BQBZGAKWSA-N Ser-Pro-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O RHAPJNVNWDBFQI-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- AABIBDJHSKIMJK-FXQIFTODSA-N Ser-Ser-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O AABIBDJHSKIMJK-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- KKKVOZNCLALMPV-XKBZYTNZSA-N Ser-Thr-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O KKKVOZNCLALMPV-XKBZYTNZSA-N 0.000 description 1
- 102100033456 TGF-beta receptor type-1 Human genes 0.000 description 1
- JKGGPMOUIAAJAA-YEPSODPASA-N Thr-Gly-Val Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O JKGGPMOUIAAJAA-YEPSODPASA-N 0.000 description 1
- NDXSOKGYKCGYKT-VEVYYDQMSA-N Thr-Pro-Asp Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O NDXSOKGYKCGYKT-VEVYYDQMSA-N 0.000 description 1
- VUXIQSUQQYNLJP-XAVMHZPKSA-N Thr-Ser-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N)O VUXIQSUQQYNLJP-XAVMHZPKSA-N 0.000 description 1
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 1
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 1
- 108010011702 Transforming Growth Factor-beta Type I Receptor Proteins 0.000 description 1
- WTRQBSSQBKRNKV-MNSWYVGCSA-N Trp-Thr-Tyr Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)[C@H](O)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 WTRQBSSQBKRNKV-MNSWYVGCSA-N 0.000 description 1
- ZWZOCUWOXSDYFZ-CQDKDKBSSA-N Tyr-Ala-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 ZWZOCUWOXSDYFZ-CQDKDKBSSA-N 0.000 description 1
- ZAGPDPNPWYPEIR-SRVKXCTJSA-N Tyr-Cys-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O ZAGPDPNPWYPEIR-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- LOOCQRRBKZTPKO-AVGNSLFASA-N Tyr-Glu-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 LOOCQRRBKZTPKO-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- OSXNCKRGMSHWSQ-ACRUOGEOSA-N Tyr-His-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O OSXNCKRGMSHWSQ-ACRUOGEOSA-N 0.000 description 1
- DMWNPLOERDAHSY-MEYUZBJRSA-N Tyr-Leu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O DMWNPLOERDAHSY-MEYUZBJRSA-N 0.000 description 1
- BIWVVOHTKDLRMP-ULQDDVLXSA-N Tyr-Pro-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O BIWVVOHTKDLRMP-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HHSILIQTHXABKM-YDHLFZDLSA-N Val-Asp-Phe Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(O)=O HHSILIQTHXABKM-YDHLFZDLSA-N 0.000 description 1
- DLLRRUDLMSJTMB-GUBZILKMSA-N Val-Ser-Met Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)O)N DLLRRUDLMSJTMB-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- OEVFFOBAXHBXKM-HSHDSVGOSA-N Val-Trp-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)NC(=O)[C@H](C(C)C)N)O OEVFFOBAXHBXKM-HSHDSVGOSA-N 0.000 description 1
- JXWGBRRVTRAZQA-ULQDDVLXSA-N Val-Tyr-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N JXWGBRRVTRAZQA-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 108010005233 alanylglutamic acid Proteins 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- 108010062796 arginyllysine Proteins 0.000 description 1
- 108010040443 aspartyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010069205 aspartyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 108010038633 aspartylglutamate Proteins 0.000 description 1
- 235000019445 benzyl alcohol Nutrition 0.000 description 1
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 1
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 230000034373 developmental growth involved in morphogenesis Effects 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 108010049041 glutamylalanine Proteins 0.000 description 1
- 108010085325 histidylproline Proteins 0.000 description 1
- 108010018006 histidylserine Proteins 0.000 description 1
- 102000057593 human F8 Human genes 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 210000003000 inclusion body Anatomy 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 108010000761 leucylarginine Proteins 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 108010005942 methionylglycine Proteins 0.000 description 1
- 230000037257 muscle growth Effects 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 229940047431 recombinate Drugs 0.000 description 1
- 230000028504 regulation of cardiac muscle cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000008844 regulatory mechanism Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 108010026333 seryl-proline Proteins 0.000 description 1
- 108010071207 serylmethionine Proteins 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 108010080629 tryptophan-leucine Proteins 0.000 description 1
- 108010020532 tyrosyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
- A61K38/1841—Transforming growth factor [TGF]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
- C07K1/22—Affinity chromatography or related techniques based upon selective absorption processes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
- C07K14/495—Transforming growth factor [TGF]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/02—Preparation of peptides or proteins having a known sequence of two or more amino acids, e.g. glutathione
Definitions
- the group of inventions relates to genetic engineering, biotechnology and veterinary medicine, and specifically to a recombinant differentiating growth factor 11, a method for its production, an immunogenic composition containing GDF11 as an antigen, an injectable preparation for increasing the muscle mass of mammals and poultry, as well as a method of using said injection a drug for increasing the muscle mass of animals.
- Protein GDF11 growth differentiation factor-11, belongs to the TGF-b superfamily of transforming growth factor-b.
- GDF11 is a protein homologous to myostatin that acts as an inhibitor of the growth of various tissues.
- GDF11 can bind to the same receptors of the TGF-beta type I superfamily ACVR1B (ALK4), TGFBR1 (ALK5) and ACVR1C (ALK7) as myostatin, but predominantly uses ALK4 and ALK5 for signaling (Andersson O, Reissmann E, Ibanez CF 2006 EMBO Reports. 7 (8): 831-7).
- US patent Ns 6096506 discloses an antibody that specifically reacts with a myostatin polypeptide. Also known is a method for increasing muscle mass in an animal by introducing a monoclonal antibody against myotatin and blocking its activity (US patent Ns 6468535) and a method for producing a fusion protein with a myostatin sequence capable of inducing the synthesis of specific autoantibodies to myostatin as part of an immunogenic composition, blocking its action and, as a result, to stimulate the growth of muscle tissue (RF patent Ns 2613420). GDF11 is closely related to myostatin, a negative regulator of muscle growth. (McPherron AC, Lee SJ 1997 Proc. Natl. Acad.
- Myostatin and GDF11 are involved in the regulation of cardiomyocyte proliferation.
- the similarities between GDF11 and myostatin imply the possibility that the same regulatory mechanisms are used that are involved in regulating tissue size in both muscle and bone and cartilage. (Egerman MA et al. Cell Metab. 2015 22 (1): 164-74; Zimmers TA et al. 2017 Basic Res Cardiol. 112 (4): 48). Therefore, blocking the activity of GDF11 should lead to a significant increase in muscle mass in the body.
- the present inventors have obtained an unexpected and reproducible result demonstrating that a recombinant fusion protein with GDF11, immunogenic compositions with this protein and vaccination can be used to increase muscle mass in the body.
- the technical problem to be solved by the claimed group of inventions is to create a recombinant immunologically active GDFll-containing protein that is easily purified and has sufficient immunogenicity against GDF11 as an antigen that can be used to increase the meat productivity of farm animals (cattle, pigs, horses, rabbits, etc.) and poultry by inducing the synthesis of specific autoantibodies to GDF11, blocking its action and, as a consequence, stimulating the growth of muscle tissue.
- Another technical problem to be solved by the claimed group of inventions is to develop a drug based on the specified protein and to create a method for using this drug, which solves the problem of increasing the meat productivity of farm animals and poultry, provided that the drug is not used systematically.
- the amino acid sequence of GDF11 is identical in all mammals, animals and birds.
- the developed drug is a universal tool for increasing the meat productivity of farm animals and poultry.
- the technical result achieved by the implementation of the claimed group of inventions consists in expanding the arsenal of means and methods that ensure an increase in the productivity of livestock and poultry.
- the specified technical result is achieved due to a recombinant protein with a molecular weight of 35.9 kDa, including a fragment of the protein growth and differentiation factor 11 (GDF11) with the sequence SEQ ID NO 1, Gly-Ser spacer with the sequence SEQ ID NO 2, alpha-glucan binding domain ( GBD) a gene from Streptococcus mutans with the sequence SEQ ID NO 3 and the nucleotide sequence of the GDF11-GBD gene SEQ ID NO 4.
- GDF11 protein growth and differentiation factor 11
- GBD alpha-glucan binding domain
- the technical result is also achieved in a method for producing a recombinant protein GDF11 (GDF11-GBD) on glucan, which includes:
- glucan containing sorbent As a glucan containing sorbent (glucan, alpha-glucan), the following can be used: pullulan, glycogen, dextran, starch.
- the recombinant protein GDF11-GBD includes the protein sequence of the glucan-binding domain, which determines the ability of this protein to bind to the glucan-containing sorbent, which makes it possible to concentrate, purify, and immobilize the protein product on a glucan (alpha-glucan, glucan-containing sorbent) in one stage.
- Immobilization on glucan is provided due to the presence in the recombinant protein of the glucan-binding domain from the alpha-glucan-binding domain of the gene from Streptococcus mutans, which has a high affinity for alpha-glucans and provides irreversible binding to the glucan-containing sorbent in a wide pH range 6.0 - 9.0 and salt concentration 0 - 3 M NaCI. Since E. coli cells lack proteins that bind to alpha-glucan, the recombinant protein GDF11-GBD synthesized in E. coli cells is the only protein of the producer strain cells that strongly binds to alpha-glucan. This provides the possibility of a one-step production of a highly purified recombinant protein preparation immobilized on a glucan-containing sorbent.
- the technical result is also achieved due to an injectable preparation for increasing the muscle mass of farm animals and poultry, which contains the recombinant protein GDF11-GBD, described above, suspended in a medium from a glucan-containing (alpha-glucan-containing) sorbent in an acceptable for injection liquid adjuvant (carrier ), as well as through the implementation of a method for increasing the muscle mass of farm animals and poultry, which includes subcutaneous or intramuscular injections of a preparation containing the recombinant GDF11-GBD protein suspended in a glucan-containing (alpha-glucan) sorbent medium in an acceptable for injection use liquid carrier, at a dose of 0.5 to 50 ⁇ g of the specified protein per kilogram of body weight of an animal or bird.
- a bifunctional recombinant protein GDF11-GBD has been created, which has the ability to spontaneously bind to a glucan-containing sorbent, forming a highly immunogenic composition in the form of a polyantigen, induce the synthesis of specific autoantibodies to GDF11 when administered to animals and, as a consequence, stimulate the growth of muscle tissue.
- the GDF11 gene is obtained with its subsequent cloning.
- the GDF11 gene was obtained by a chemo-enzymatic method. Was designed oligonucleotide duplex encoding the corresponding gene, optimized for expression in E. coli. Then, the plasmid pGDFll-GBD was obtained, containing the sequences encoding GDF11, a spacer and a glucan-binding domain (GBD). Obtaining E. coli strain - producer of the recombinant GDF-11 antigen coupled to the glucan-binding domain
- E. coli BL21 cells were transformed with the pGDFll-GBD plasmid.
- the culture was added with 3 ⁇ l of OD M solution of isopropyl-beta-0-thiogalactopyranoside (IPTG) and grown for 3 hours at a temperature of 37 ° C.
- IPTG isopropyl-beta-0-thiogalactopyranoside
- coli was determined by comparing the intensity of staining of the band of the recombinant protein with the band of the corresponding protein - the molecular weight standard. It was shown that the recombinant protein GDF11-GBD is synthesized in E. coli cells in an insoluble form in the form of inclusion bodies.
- a cell culture of the E. coli BL21 [pGDFll-GBD] strain was grown in 1000 ml of LB medium with ampicillin (100 ⁇ g / ml) at 37C ° to an optical density corresponding to 1 unit. absorption at a wavelength of 550 nm. 15 ⁇ l of 0.1 M IHPT solution was added to the medium and grown for 3 hours. The cells were pelleted by centrifugation at 5500g for 15 minutes.
- the pellet was resuspended in phosphate buffer with lysozyme. Additionally, the suspension was sonicated. After centrifugation at 6000g, insoluble GDF11-GBD protein remained in the sediment. The precipitate was suspended in 8M urea, centrifuged at 12000g for 30 minutes, and the supernatant was collected. To immobilize the recombinant protein GDF11-GBD on a glucan-containing sorbent, the supernatant was diluted four times with physiological phosphate buffer with neutral pH, 1/10 volume of a suspension of alpha-glucan (pullulan or glycogen or dextran or starch) was added, and incubated at 25 ° C for 2 hours.
- alpha-glucan pulp or glycogen or dextran or starch
- the GDF11-GBD antigen immobilized on alpha-glucan was a suspension of a sorbent with a protein adsorbed on it. The purity of the preparation was at least 90%. The preparation was preserved by adding benzyl alcohol to a concentration of 0.1%. Biological action of recombinant proteins GDF11-GBD
- the preparation contains a solution of the recombinant GDF-11-GBD protein in a buffer with neutral pH, suspended in adjuvants: a mixture of a glucan solution and a water-oil suspension of MONTANIDE ISA 206 VG (50% to 50% by weight); MONTANIDE ISA 70 VG (30% to 70% by weight), 2, 3 or 6% suspension of aluminum hydroxide (from 5 to 30% of the total volume), or in other commercial adjuvants, according to the manufacturer's instructions for their use , and is used by subcutaneous or intramuscular injections of the drug once or twice with an inter-injection interval of 20-30 days at a dose of 0.5-150 ⁇ g of recombinant protein per kilogram of body weight of an animal or bird.
- the mechanism of action of the drug is based on the temporary blocking of the activity of endogenous GDF11 using autoantibodies.
- Example 1 Influence of the preparation with the recombinant protein GDF11-GBD on the increase in body weight of piglets
- Table 2 shows the levels of autoantibodies to myostatin in the sera of pigs after immunization with a preparation containing the recombinant protein GDF11-GBD (ELISA method).
- the Kholmogory gobies at the age of 3 months were injected with a preparation containing the recombinant protein GDF11-GBD suspended in an adjuvant medium: a mixture of alpha-glycan (50% by weight) and a water-oil suspension MONTANIDE ISA 206 VG ( 50% by mass) twice with an interval of 25 day based on OD - 150 ⁇ g of recombinant protein per 1 kg of live weight of animals.
- the drug was injected subcutaneously into the lower third of the neck.
- Each experimental and control group consisted of 10 animals. The animals of the control group were not injected with the drug.
- Example 3 Influence of the preparation with the recombinant protein GDF11-GBD on the increase in body weight of lambs Romanov lambs at the age of 2 - 3 months were injected with a preparation containing the recombinant protein GDF11-GBD, suspended in an adjuvant medium: mixture of alpha-glycan (50% mass) and a suspension of 3% aluminum hydroxide (15% by volume), twice with an interval of 30 days at the rate of 0.1 - 150 ⁇ g of recombinant protein per 1 kg of live body weight of animals. The drug was administered intramuscularly. Each experimental and control group consisted of 10 animals. The animals of the control group were not injected with the drug. The results are shown in Table 4.
- Example 5 The effect of the preparation with the recombinant protein GDF11-GBD on the increase in body weight of turkeys
- the preparation containing the recombinant protein was used on turkeys (males) of the broad-breasted white (heavy cross) breed at the age of 50-60 days.
- the drug was used at a dose of 0.1; 0.3; 0.5; five; fifty; 100; 110; 130; 150 ⁇ g / kg of recombinant protein per 1 kg of live body weight of turkeys containing the recombinant protein GDF11-GBD suspended in an adjuvant medium: a mixture of alpha-glycan (30% by weight) and a water-oil suspension MONTANIDE ISA 70 VG (70% by weight ), twice with an interval of 21 days.
- the drug was administered intramuscularly.
- Each experimental and control group consisted of 10 animals.
- the poultry of the control group was not injected with the drug.
- the results are presented in table. 6.
- Ser Met lie Ser Leu Ala Thr Gin Val Lys Thr Asn Glu Asn Gly Asp
- GAC AAA GTG GAA AAC GAT AGC GCG GAA CCG CAG ACC TTT ACC GCG AAC 306
- Asp Trp lie lie Ala Pro Lys Arg Tyr Lys Ala Asn Tyr Cys Ser Gly
- ATC TAC GGT AAA ATC CCG GGT ATG GTT GTT GAC CGC TGC GGT TGC TCT 1074 lie Tyr Gly Lys lie Pro Gly Met Val Val Asp Arg Cys Gly Cys Ser
Abstract
Цель изобретения состоит в создании рекомбинантного иммунологически активного GDF11 белка, легко поддающегося очистке и обладающего достаточной иммуногенностью в отношении белка фактора роста и дифференцировки 11, который может быть использован для повышения мышечной массы млекопитающих животных и птиц за счет индукции синтеза специфических аутоантител к GDF11, блокировании его действия и, как следствие, стимуляции роста мыщечной ткани. Изобретение реализовано путем создания рекомбинантного белка, включающего GDF11 и глюкансвязывающий домен. Разработан способ получения целевого белка на глюкане, который включает в себя связывание белка с глюкансодержащим сорбентом за счет аффинного взаимодействия, последующую отмывку от несвязавшихся бактериальных белков и выделение целевого продукта.
Description
РЕКОМБИНАТНЫЙ РОСТОВОЙ ДИФФЕРЕНЦИРОВОЧНЫЙ ФАКТОР РОСТА 11 (GDF11)
Группа изобретений относится к генной инженерии, биотехнологии и ветеринарии, а конкретно к рекомбинантному дифференцировочный фактор роста 11, способу его получения, иммуногенной композиции, содержащей в качестве антигена GDF11, инъекционный препарат для повышения мышечной массы млекопитающих животных и птицы, а также метод использования указанного инъекционного препарата для увеличения мышечной массы животных.
Уровень техники
Белок GDF11, дифференцировочный фактор роста 11 (growth differentiation factor-11), относится к суперсемейству TGF-b трансформирующего фактора роста b (transforming growth factor-b). GDF11 представляет собой белок гомологичный миостатину, который действует как ингибитор роста различных тканей. GDF11 может связываться с теми же рецепторами суперсемейства TGF-бета типа I ACVR1B (ALK4), TGFBR1 (ALK5) и ACVR1C (ALK7) что и миостатин, но преимущественно использует ALK4 и ALK5 для передачи сигнала (Andersson О, Reissmann Е, Ibanez CF 2006 ЕМВО Reports. 7 (8): 831-7).
Из уровня техники известен патент США Ns 6096506, в котором раскрыто антитело, которое специфически реагирует с полипептидом миостатина. Также известен способ увеличения мышечной массы у животного путем введения моноклонального антитела против миотатина и блокирования его активности (патент США Ns 6468535) и способ получения слитого белка с последовательностью миостатина, способного в составе иммуногенной композиции индуцировать синтез специфических аутоантител к миостатину, блокировать его действие и, как следствие, стимулировать рост мышечной ткани (патент РФ Ns 2613420).
GDF11 тесно связан с миостатином, негативным регулятором роста мышц. (McPherron АС, Lee SJ 1997 Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 94(23):12457-61) Миостатин и GDF11 участвуют в регуляции пролиферации кардиомиоцитов. Сходство между GDF11 и миостатином подразумевают вероятность того, что используются одни и те же регулирующие механизмы, которые задействованы для регуляции размера ткани как мышечной, так костной и хрящевой. (Egerman МА et al. Cell Metab. 2015 22(1):164-74; Zimmers ТА et al. 2017 Basic Res Cardiol. 112(4):48). Следовательно, блокирование активности GDF11 должно приводит к значительному увеличению мышечной массы организма.
Авторы настоящего изобретения получили неожиданный и воспроизводимый результат, демонстрирующий что слитный рекомбинантный белок с GDF11, иммуногенная композиции с этим белком и вакцинация может быть использована для увеличения мышечной массы организма.
Сущность изобретения
Техническая проблема, на решение которой направлена заявляемая группа изобретений, заключается в создании рекомбинантного иммунологически активного GDFll-содержащего белка, легко поддающегося очистке и обладающего достаточной иммуногенностью в отношении GDF11 как антигена, который может быть использован для повышения мясной продуктивности сельскохозяйственных животных (крупный рогатый скот, свиньи, лошади, кролики и т.д.) и птицы за счет индукции синтеза специфических аутоантител к GDF11, блокировании его действия и, как следствие, стимуляции роста мышечной ткани. Другая техническая проблема, на решение которой направлена заявляемая группа изобретений, заключается в разработке препарата на основе указанного белка и в создании способа использования этого препарата, решающего задачу повышения мясной продуктивности сельскохозяйственных животных и птицы при условии несистематического применения препарата. Следует отметить, что аминокислотная последовательность GDF11 идентична у всех млекопитающих животных и птиц. Вследствие этого разработанный препарат является универсальным средством для повышения мясной продуктивности сельскохозяйственных животных и птицы.
Технический результат, достигаемый при реализации заявляемой группы изобретений, заключается в расширении арсенала средств и методов, обеспечивающих повышение продуктивности скота и птицы.
Указанный технический результат достигается за счет рекомбинантного белка с молекулярной массой 35,9 кДа, включающего фрагмент белка фактора роста и дифференцировки 11 (GDF11) с последовательностью SEQ ID NO 1, Гли-Сер спейсер с последовательностью SEQ ID NO 2, альфа-глюкансвязывающий домен (GBD) гена из Streptococcus mutans с последовательностью SEQ ID NO 3 и последовательность нуклеотидов гена GDF11-GBD SEQ ID NO 4.
Технический результат также достигается в способе получения рекомбинантного белка GDF11 (GDF11-GBD) на глюкане, который включает:
- выращивание клеток штамма Е. coli, экспрессирующих ген GDF11-GBD;
- связывание белка GDF11-GBD в составе клеточных экстрактов штамма Е. coli BL21 [pGDFll-GBD] с глюкан содержащим (альфа-глюкансодержащем) сорбентом за счет аффинного взаимодействия при процедуре инкубации;
- последующую отмывку от несвязавшихся бактериальных белков и выделение целевого продукта.
В качестве глюкан содержаще го сорбента (глюкана, альфа-глюкана) могут использоваться: пуллулан, гликоген, декстран, крахмал.
Рекомбинантный белок GDF11-GBD включает в себя белковую последовательность глюкансвязывающего домена, определяющего способность данного белка связываться с глюкансодержащим сорбентом, что позволяет проводить в одну стадию концентрирование, очистку и иммобилизацию белкового продукта на глюкане (альфа-глюкане, глюкансодержащем сорбенте). Иммобилизация на глюкане обеспечивается за счет присутствия в рекомбинантном белке глюкансвязывающего домена из альфа-глюкансвязывающего домена гена из Streptococcus mutans, который обладает высоким сродством к альфа-глюканам и обеспечивает необратимое связывание с глюкансодержащим сорбентом в широком диапазоне значений pH 6,0 - 9,0 и концентраций соли 0 - 3 М NaCI.
Поскольку в клетках Е. coli отсутствуют белки, связывающиеся с альфа-глюканом, то синтезируемый в клетках Е. coli рекомбинантный белок GDF11-GBD, является единственным белком клеток штамма-продуцента, прочно связывающимся с альфа- глюканом. Это обеспечивает возможность одностадийного получения высокоочищенного препарата рекомбинантного белка, иммобилизованного на глюкансодержащем сорбенте.
Технический результат достигается также за счет инъекционного препарата для повышения мышечной массы сельскохозяйственных животных и птицы, который содержит рекомбинантный белок GDF11-GBD, охарактеризованный выше, суспендированный в среде из глюкан содержаще го (альфа-глюкансодержащего) сорбента в приемлемом для инъекционного использования жидком адьюванте (носителе), а также за счет реализации метода повышения мышечной массы сельскохозяйственных животных и птицы, который включает проведение подкожных или внутримышечных инъекций препарата, содержащего рекомбинантный белок GDF11-GBD, суспендированный в среде из глюкан содержаще го (альфа-глюканового) сорбента в приемлемом для инъекционного использования жидком носителе, в дозе 0,5 - 50 мкг указанного белка на один килограмм массы тела животного или птицы.
Таким образом, создан бифункциональный рекомбинантный белок GDF11-GBD, обладающий способностью самопроизвольно связываться с глюкансодержащим сорбентом, формируя высокоиммуногенную композицию в форме полиантигена, индуцировать синтез специфических аутоантител к GDF11 при введении животным и, как следствие, стимулировать рост мышечной ткани.
Получение рекомбинантного слитного белка GDF11 (GDF11-GBD)
На первом этапе осуществляют получение гена GDF11 с последующим его клонированием.
Ген GDF11 получали химико-ферментативным методом. Был спланирован олигонуклеотидный дуплекс, кодирующий соответствующий ген, оптимизированный для экспрессии в E.coli. Затем осуществляли получение плазмиды pGDFll-GBD, содержащей последовательности, кодирующие GDF11, спейсер и глюкансвязывающий домен (GBD).
Получение штамма Е. coli - продуцента рекомбинантного антигена GDF-11, соединенного с глюкансвязыващим доменом
Для получения штамма Е. coli- продуцента рекомбинантного белка GDF11-GBD клетки Е. coli BL21 трансформировали плазмидой pGDFll-GBD. В культурудобавляли З мкл ОД М раствора изопропил-бета-0-тиогалактопиранозида (ИПТГ) и выращивали в течение 3 часов при температуре 37°С. При сравнении спектра белков, синтезированных клетками штамма Е. coli BL21 [pGDFll-GBD] обнаруживали появление дополнительной белковой полосы. Молекулярная масса дополнительной полосы соответствовала ожидаемой для рекомбинантного белка GDF11-GBD массе в 35,9 кДа. Уровень синтеза белков в Е. coli определяли, сравнивая интенсивность окрашивания полосы рекомбинантного белка с полосой соответствующего белка - стандарта молекулярной массы. Было показано, что рекомбинантный белок GDF11-GBD синтезируется в клетках E.coli в нерастворимой форме в виде телец-включения.
Получение иммобилизованного на альфа-глюкане рекомбинантного белка (GDF11) GDF11-GBD
Для получения рекомбинантного белка клеточную культуру штамма E.coli BL21 [pGDFll-GBD] выращивали в 1000 мл среды LB с ампициллином (100 мкг/мл) при 37С° до оптической плотности, соответствующей 1 ед. поглощения при длине волны 550 нм. В среду добавляли 15 мкл 0,1 М раствора ИГПТ и выращивали в течение 3 часов. Клетки осаждали центрифугированием при 5500g в течение 15 минут.
Осадок ресуспендировали в фосфатном буфере с лизоцимом. Дополнительно суспензию обрабатывали ультразвуком. После центрифугирования при 6000g нерастворимый белок GDF11-GBD оставался в осадке. Осадок суспендировали в 8М мочевине, центрифугировали при 12000g 30 минут и отбирали надосадочную жидкость. Для иммобилизации рекомбинантного белка GDF11-GBD на глюкансодержащем сорбенте супернатант разводили физиологическим фосфатным буфером с нейтральным pH в четыре раза, добавляли 1/10 объема суспензии альфа-глюкана (пуллулана или гликогена или декстрана или крахмала), инкубировали при 25 С° втечение2часов. Центрифугировали при частоте оборотов, равной 8000 об/мин, осадок ресуспендировали в фосфатном буфере; отмывку альфа- глюкана повторяли 3 раза. Иммобилизованный на альфа-глюкане анти ген GDF11-GBD представлял собой суспензию сорбента с адсорбированными на нем белком. Степень чистоты препарата составляла не менее 90%. Консервацию препарата проводили добавляя бензиловый спирт до концентрации 0,1%.
Биологическое действие рекомбинантного белков GDF11-GBD
В предпочтительном варианте осуществления изобретения препарат содержит раствор рекомбинантного белка GDF-11-GBD в буфере с нейтральным pH, суспендированный в адъювантах: смеси раствора глюкана и водно-масляной суспензии MONTANIDE ISA 206 VG (50% на 50% по массе); MONTANIDE ISA 70 VG (30% на 70% по массе), 2, 3 или 6%-ной суспензии гидроокиси алюминия (от 5 до 30 % от общего объёма), либо в других коммерческих адъювантах, в соответствии с инструкцией производителя по их применению, и используется путем подкожных или внутримышечных инъекций препарата однократно или дважды с межинъекционным интервалом 20 - 30 суток в дозе 0,5-150 мкг рекомбинантного белка на один килограмм массы тела животного или птицы. Механизм действия препарата основан на временном блокировании активности эндогенного GDF11 с помощью аутоантител.
Эффективность применения препарата для повышения мышечной массы тела у сельскохозяйственных животных иллюстрируется следующими примерами. Пример 1. Влияние препарата с рекомбинантным белком GDF11-GBD на увеличение массы тела поросят
В условиях промышленного свиноводческого комплекса поросятам породы крупная белая в возрасте 90-120 суток с массой тела 20 - 25 кг был введен препарат, содержащий рекомбинантный белок GDF11-GBD, суспендированный в среде адъюванта: смеси из альфа-глюкана (50% по массе) и водно-масляной суспензии MONTANIDE ISA 206 VG (50% по массе) двукратно с интервалом 21 суток из расчета 0,10- 150 мкг рекомбинантного белка на 1 кг живой массы тела животных. Препарат вводили подкожно. В каждой опытной и контрольной группе было по 10 животных. Животным контрольной группы препарат не вводился. Результаты представлены в таблице 1.
Таблица 1
Как видно из представленных данных, двукратное (с интервалом 21 сутки) введение препарата, содержащего рекомбинантный белок GDF11-GBD, привело к увеличению массы тела поросят через 90 суток после второй инъекции препарата при применении в дозе 0,5 мкг/кг рекомбинантного белка на 13,4% по отношению к этому показателю в контрольной группе; при применении препарата в дозе 50 мкг/кг рекомбинантного белка - на 28,8%; при применении препарата в дозе 100 мкг/кг рекомбинантного белка - на 28,6%. Таким образом, при введении препарата в дозах, лежащих в диапазоне от 0,5 до 150 мкг/кг наблюдался значимый прирост массы тела поросят относительно величины прироста в контрольной группе.
Кроме того, также было обнаружено, что даже однократное введение препарата, содержащего рекомбинантный белок GDF11-GBD, обеспечивает значительный прирост массы тела поросят.
Важно отметить, что при введении препарата в дозах, лежащих вне диапазона доз 0,5-150 мкг/кг наблюдался существенный спад прироста массы тела поросят относительно величины прироста в контрольной группе.
В таблице 2 представлены уровни аутоантител к миостатину в сыворотках поросят после иммунизации препаратом, содержащем рекомбинантный белок GDF11- GBD (метод ИФА).
Таблица 2.
Результаты определения в ИФА уровня аутоантител к GDF11 в образцах сывороток поросят иммунизированных препаратом, содержащим рекомбинантный белок GDF11-GBD
Продолжение таблицы 2
Из данных таблицы 1 и 2 следует, что оптимальной дозой препарата, содержащего рекомбинантный белок GDF11-GBD, для индукции аутоантител у животных является доза, равная 0,5-150 мг/кг массы тела животного. Пример 2. Влияние препарата с рекомбинантным белком GDF11-GBD на увеличение массы тела быков холмогорской породы
В условиях откормочного комплекса бычкам холмогорской породы в возрасте 3- х месяцев был введен препарат, содержащий рекомбинантный белок GDF11-GBD, суспендированный в среде адъюванта: смеси из альфа-гликана (50% по массе) и водно- масляной суспензии MONTANIDE ISA 206 VG (50% по массе) двукратно с интервалом 25
сутки из расчета ОД - 150 мкг рекомбинантного белка на 1 кг живой массы тела животных. Препарат вводили подкожно в область нижней трети шеи. В каждой опытной и контрольной группе было по 10 животных. Животным контрольной группы препарат не вводился.
Результаты представлены в таблице 3.
Таблица 3
Из представленных данных видно, что двукратное (с интервалом 25 суток) введение препарата, содержащего рекомбинантный белок GDF11-GBD, привело к увеличению массы тела бычков через 90 суток после второй инъекции препарата при применении в дозе 0,5 мкг/кг рекомбинантного белка на 6,4% по отношению к этому показателю в контрольной группе; при применении препарата в дозе 5 мкг/кг
рекомбинантного белка - на 14,1%; при применении препарата в дозе 50 мкг/кг рекомбинантного белка - на 10,8%, при увеличении дозы в двое до 100 или 150 мкг/кг привесы увеличиваются на 22,1%.
Таким образом, при введении препарата в дозах, лежащих в диапазоне от 0,5 до 150 мкг/кг наблюдался значимый прирост массы тела поросят относительно величины прироста в контрольной группе.
Кроме того, также было обнаружено, что даже однократное введение препарата, содержащего рекомбинантный белок GDF11-GBD, обеспечивает значительный прирост массы тела бычков. Важно отметить, что при введении препарата в дозах, лежащих вне диапазона доз 0,5-150 мкг/кг наблюдался существенный спад прироста массы тела бычков относительно величины прироста в контрольной группе.
Пример 3. Влияние препарата с рекомбинантным белком GDF11-GBD на увеличение массы тела ягнят Ягнятам романовской породы в возрасте 2 - 3 месяцев был введен препарат, содержащий рекомбинантный белок GDF11-GBD, суспендированный в среде адъюванта: смеси из альфа-гликана (50% по массе) и суспензии 3%-ной гидроокиси алюминия (15% по объему), двукратно с интервалом 30 суток из расчета 0,1 - 150 мкг рекомбинантного белка на 1 кг живой массы тела животных. Препарат вводили внутримышечно. В каждой опытной и контрольной группе было по 10 животных. Животным контрольной группы препарат не вводился. Результаты представлены в таблице 4.
Таблица 4
Как видно из представленных данных, двукратное (с интервалом ВО суток) введение ягнятам романовской породы препарата, содержащего рекомбинантный белок GDF11-GBD, привело к увеличению массы тела животных через 90 суток после второй инъекции препарата при применении в дозе 0,5 мкг/кг рекомбинантного белка на 11,4% по отношению к этому показателю в контрольной группе; при применении препарата в дозе 5 мкг/кг рекомбинантного белка - на 16,6%; при применении препарата в дозе 50 мкг/кг рекомбинантного белка - на 22,9%; при применении препарата в дозе 100 мкг/кг рекомбинантного белка - на 23,2%; при применении препарата в дозе 150 мкг/кг рекомбинантного белка - на 23,4%.
Кроме того, также было обнаружено, что даже однократное введение препарата, содержащего рекомбинантный белок GDF11-GBD, обеспечивает значительный прирост массы тела ягнят.
Важно отметить, что при введении препарата в дозах, лежащих вне диапазона доз 0,5-150 мкг/кг наблюдался существенный спад прироста массы тела ягнят относительно величины прироста в контрольной группе.
Пример 4. Влияние препарата с рекомбинантным белком GDF11-GBD на увеличение массы тела кроликов
Кроликам породы Белый великан в возрасте 2 - В месяцев был введен препарат, содержащий рекомбинантный белок GDF11-GBD, суспендированный в среде адъюванта: смеси из альфа-гликана (50% по массе) и суспензии 3%-ной гидроокиси алюминия (10% по объему), двукратно с интервалом 28 суток из расчета 0,1 - 150 мкг рекомбинантного белка на 1 кг живой массы тела животных. Препарат вводили внутримышечно. В каждой опытной и контрольной группе было по 10 животных. Животным контрольной группы препарат не вводился. Результаты представлены в таблице 5.
Таблица 5
Кроме того, также было обнаружено, что даже однократное введение препарата, содержащего рекомбинантный белок GDF11-GBD, обеспечивает значительный прирост массы тела кроликов.
Важно отметить, что при введении препарата в дозах, лежащих вне диапазона доз 0,5-150 мкг/кг наблюдался существенный спад прироста массы тела кроликов относительно величины прироста в контрольной группе.
Пример 5. Влияние препарата с рекомбинантным белком GDF11-GBD на увеличение массы тела индеек
Препарат, содержащий рекомбинантный белок, был применен на индейках (самцах) породы белая широкогрудая (тяжелый кросс) в возрасте 50 - 60 суток. Препарат применяли в дозе 0,1; 0,3; 0,5; 5; 50; 100; 110; 130; 150 мкг/кг рекомбинантного белка на 1 кг живой массы тела индюков содержащий рекомбинантный белок GDF11-GBD, суспендированный в среде адъюванта: смеси из альфа-гликана (30% по массе) и водно- масляной суспензии MONTANIDE ISA 70 VG (70% по массе), двукратно с интервалом 21 сутки. Препарат вводили внутримышечно. В каждой опытной и контрольной группе было по 10 животных. Птице контрольной группы препарат не вводился. Результаты представлены в табл. 6.
Таблица б
Как видно из представленных данных, двукратное (с интервалом 21 суток) введение индюкам препарата, содержащего рекомбинантный белок GDF11-GBD, суспендированный в среде адъюванта: смеси из альфа-гликана (30% по массе) и водно- масляной суспензии MONTANIDE ISA 70 VG (70% по массе), привело к увеличению массы тела животных через 90 суток после второй инъекции препарата при применении в дозе 0,5 мкг/кг рекомбинантного белка на 8,4% по отношению к этому показателю в контрольной группе; при применении препарата в дозе 5 мкг/кг рекомбинантного белка - на 11,4%; при применении препарата в дозе 50 мкг/кг рекомбинантного белка - на 21.1%; при применении препарата в дозе 150 мкг/кг рекомбинантного белка - на 21.6%.
Кроме того, также было обнаружено, что даже однократное введение препарата, содержащего рекомбинантный белок GDF11-GBD, обеспечивает значительный прирост массы тела индюков.
Важно отметить, что при введении препарата в дозах, лежащих вне диапазона доз 0,5-150 мкг/кг наблюдался существенный спад прироста массы тела индюков относительно величины прироста в контрольной группе.
Приведенные примеры осуществления изобретения не являются исчерпывающими. Возможные иные примеры осуществления, соответствующие объему патентных притязаний.
Перечень последовательностей:
Последовательности аминокислот GDF11
SEQ ID N0 1
<210> 3
<211> 11
<212> PRT
<213> Artifical Sequence
<400> 3
Gly Leu Asp Cys Asp Glu His Ser Thr Glu Ser Arg Cys Cys Arg Tyr
1 5 10 15
Pro Leu Thr Val Asp Phe Glu Ala Phe Gly Trp Asp Trp lie lie Ala
20 25 30
Pro Lys Arg Туг Lys Ala Asn Tyr Cys Ser Gly Gin Cys Glu Tyr Met
35 40 45
Phe Met Gin Lys Tyr Pro His Thr His Leu Val Gin Gin Ala Asn Pro
50 55 60
Arg Gly Ser Ala Gly Pro Cys Cys Thr Pro Thr Lys Met Ser Pro lie
65 70 75
80
Asn Met Leu Tyr Phe Asn Asp Lys Gin Gin lie lie Tyr Gly Lys lie
85 90 95
Pro Gly Met Val Val Asp Arg Cys Gly Cys Ser 100 105
Последовательность аминокислот спейсера SEQ ID NO 2
<210> 3
<211> 11
<212> PRT
<213> Artifical Sequence
<400> 3
Gly Ser Pro Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ala
1 5 10 15
Последовательность аминокислот альфа-глюкансвязывающего домена из
Streptococcus mutans
SEQ ID NO 3
<210> 3
<211> 11
<212> PRT
<213> Streptococcus mutans
<400> 3
Glu Leu Asn Arg Lys Asn Tyr His Tyr Gin Gin Phe lie Thr Ala Tyr
1 5 10 15
Glu Asn Leu Leu Arg Asp Lys Val Glu Asn Asp Ser Ala Glu Pro Gin
20 25 30
Thr Phe Thr Ala Asn Gly Arg Gin Leu Ser Gin Asp Ala Leu Gly lie
35 40 45
Asn Gly Asp Gin Val Trp Thr Tyr Ala Lys Lys Gly Asn Asp Phe Arg
50 55 60
Thr lie Gin Leu Leu Asn Leu Met Gly lie Thr Ser Asp Trp Lys Asn
65 70 75
80
Glu Asp Gly Tyr Glu Asn Asn Lys Thr Pro Asp Glu Gin Thr Asn Leu
85 90 95
Leu Val Thr Tyr Pro Leu Thr Gly Val Ser Met Ala Glu Ala Asp Arg
100 105 110 lie Ala Lys Gin Val Tyr Leu Thr Ser Pro Asp Asp Trp Leu Gin Ser
115 120 125
Ser Met lie Ser Leu Ala Thr Gin Val Lys Thr Asn Glu Asn Gly Asp
130 135 140
Pro Val Leu Tyr lie Gin Val Pro Arg Leu Thr Leu Trp Asp Met lie
145 150 155
160
Tyr lie Asn Glu Thr lie Lys Pro Glu Thr Pro Lys Val Pro Glu Gin
165 170 175
Pro Gin His Pro 180
Последовательность нуклеотидов гена GDF11-GBD
SEQ ID NO 4
CTCGAGAAAT CATAAAAAAT TTATTTGCTT TGTGAGCGGA TAACAATTAT AATAGATTCA 60
ATTGTGAGCG GATAACAATT TCACACAGAA TTCATTAAAG AGGAGAAATT AACT 114
ATG AGA GGA TCG CAT CAC CAT CAC CAT CAC GGA TCC CCG GGT TCT GGC 162
Met Arg Gly Ser His His His His His His Gly Ser Pro Gly Ser Gly 1 5 10 15
ТСС GGC TCT GGT ТСС GGT TCT GGC GCC AGA TCC GAA CTG AAC CGC AAA 210
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ala Arg Ser Glu Leu Asn Arg Lys
20 25 30
AAC TAT CAT TAT CAG CAG TTT ATT ACC GCG TAT GAA AAC CTG CTG CGC 258
Asn Tyr His Tyr Gin Gin Phe lie Thr Ala Tyr Glu Asn Leu Leu Arg
35 40 45
GAC AAA GTG GAA AAC GAT AGC GCG GAA CCG CAG ACC TTT ACC GCG AAC 306
Asp Lys Val Glu Asn Asp Ser Ala Glu Pro Gin Thr Phe Thr Ala Asn
50 55 60
GGC CGC CAG CTG AGC CAG GAT GCT CTG GGC ATT AAC GGC GAT CAG GTG 354
Gly Arg Gin Leu Ser Gin Asp Ala Leu Gly lie Asn Gly Asp Gin Val 65 70 75 80
TGG ACC TAC GCT AAA AAA GGC AAC GAT TTT CGC ACC ATT CAG CTG CTG 402
Trp Thr Tyr Ala Lys Lys Gly Asn Asp Phe Arg Thr lie Gin Leu Leu
85 90 95
AAC CTG ATG GGC ATT ACC AGC GAC TGG AAA AAC GAA GAT GGC TAT GAA 450
Asn Leu Met Gly lie Thr Ser Asp Trp Lys Asn Glu Asp Gly Tyr Glu
100 105 110
AAC AAC AAA ACT CCA GAT GAA CAG ACC AAC CTG CTG GTG ACC TAC CCG 498
Asn Asn Lys Thr Pro Asp Glu Gin Thr Asn Leu Leu Val Thr Tyr Pro
115 120 125
CTG ACC GGT GTT TCT ATG GCT GAA GCT GAT CGC ATT GCG AAA CAG GTG 546
Leu Thr Gly Val Ser Met Ala Glu Ala Asp Arg lie Ala Lys Gin Val
130 135 140
TAT CTG ACC AGC CCG GAT GAT TGG CTG CAG AGC AGC ATG ATT AGC
CTG 594
Tyr Leu Thr Ser Pro Asp Asp Trp Leu Gin Ser Ser Met lie Ser
Leu
145 150 155
160
GCG ACC CAG GTG AAA ACC AAC GAA AAC GGC GAT CCG GTG CTG TAT ATT 642
Ala Thr Gin Val Lys Thr Asn Glu Asn Gly Asp Pro Val Leu Tyr lie
165 170 175
CAG GTG CCG CGC CTG ACC CTG TGG GAT ATG ATT TAT ATT AAC GAA ACC 690
Gin Val Pro Arg Leu Thr Leu Trp Asp Met lie Tyr lie Asn Glu Thr
180 185 190
ATT AAA CCG GAA ACC CCG AAA GTG CCG GAA CAG CCG CAG CAT CCG AGA 738 lie Lys Pro Glu Thr Pro Lys Val Pro Glu Gin Pro Gin His Pro Arg
195 200 205
TCC GGC TCT GGT TCT GGT CTG GAC TGC GAC GAA CAC TCT ACC GAA TCT 786
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Leu Asp Cys Asp Glu His Ser Thr Glu Ser
210 215 220
CGT TGC TGC CGT TAC CCG CTG ACC GTT GAC TTC GAA GCG TTC GGT
TGG 834
Arg Cys Cys Arg Tyr Pro Leu Thr Val Asp Phe Glu Ala Phe Gly
Trp
225 230 235
240
GAC TGG АТС АТС GCT CCG AAA CGT TAC AAA GCT AAC TAC TGC TCT GGA 882
Asp Trp lie lie Ala Pro Lys Arg Tyr Lys Ala Asn Tyr Cys Ser Gly
245 250 255
CAG TGC GAA TAC ATG TTC ATG CAG AAA TAC CCG CAC ACC CAC CTG GTT 930
Gin Cys Glu Tyr Met Phe Met Gin Lys Tyr Pro His Thr His Leu Val
260 265 270
CAG CAG GCT AAC CCG CGT GGT TCT GCT GGT CCG TGC TGC ACC CCG ACC 978
Gin Gin Ala Asn Pro Arg Gly Ser Ala Gly Pro Cys Cys Thr Pro Thr
275 280 285
AAA ATG TCT CCG АТС AAC ATG CTG TAC TTC AAC GAC AAA CAG CAG АТС 1026
Lys Met Ser Pro lie Asn Met Leu Tyr Phe Asn Asp Lys Gin Gin lie
290 295 300
АТС TAC GGT AAA АТС CCG GGT ATG GTT GTT GAC CGC TGC GGT TGC TCT 1074 lie Tyr Gly Lys lie Pro Gly Met Val Val Asp Arg Cys Gly Cys Ser
305 310 315
320
TAA CCG 1080 stop
GTCCGGAATT TCGTATGGCA ATGAAAGACG GTGAGCTGGT GATATGGGAT AGTGTTCACC 1140
Claims
1 . Рекомбинантный белок GDF11 с молекулярной массой ЗбкДа, включающий фрагмент белка фактора роста и дифференцировки 11 с последовательностью SEQ ID NO 1 , спейсер с последовательностью SEQ ID NO 2, альфа-глюкансвязывающего домен гена из Streptococcus mutans с последовательностью SEQ ID NO 3 и последовательность нуклеотидов гена GDF11 -GBD SEQ ID NO 4.
2. Способ получения рекомбинантного белка GDF11 на глюкане, включающий: связывание белка GDF11-GBD в составе клеточных экстрактов штамма Е. coli BL21 [pGDF11-GBD] с альфа-глюкансодержащим сорбентом за счет аффинного взаимодействия при процедуре инкубации, последующую отмывку от не связавшихся бактериальных белков и выделение целевого продукта.
3. Инъекционный препарат для повышения мышечной массы сельскохозяйственных животных, содержащий рекомбинантный белок GDF11 по п.1 , суспендированный в среде альфа-глюкансодержащего сорбента в приемлемом для инъекционного использования жидком адьюванте.
4. Метод повышения мышечной массы млекопитающих животных и птиц, включающий проведение подкожных или внутримышечных инъекций препарата, содержащего рекомбинантный белок GDF11 по п.1 , суспендированный в среде альфа-глюкансодержащего сорбента в приемлемом для инъекционного использования жидком адьюванте, в дозе 0,5 - 150 мкг указанного белка на один килограмм массы тела животного или птицы.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202180007896.4A CN115003690B (zh) | 2020-02-07 | 2021-01-18 | 重组生长分化因子11(gdf11) |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2020105836 | 2020-02-07 | ||
| RU2020105836A RU2750267C1 (ru) | 2020-02-07 | 2020-02-07 | Рекомбинантный ростовой дифференцировочный фактор роста 11 (GDF11), способ его получения, инъекционный препарат для повышения мышечной массы млекопитающих животных и птицы, а также способ использования препарата |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| WO2021158146A1 true WO2021158146A1 (ru) | 2021-08-12 |
Family
ID=76504823
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PCT/RU2021/050009 WO2021158146A1 (ru) | 2020-02-07 | 2021-01-18 | Рекомбинантный ростовой дифференцировочный фактор роста 11 (gdf11), |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN115003690B (ru) |
| RU (1) | RU2750267C1 (ru) |
| WO (1) | WO2021158146A1 (ru) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2024014989A1 (ru) * | 2022-07-14 | 2024-01-18 | Общество с ограниченной ответственностью "БИОМЕД-РЕСУРС" | Рекомбинантный белок gbd-actriib для увеличения мышечной массы сельскохозяйственных животных и птицы |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2613420C1 (ru) * | 2016-04-13 | 2017-03-16 | Сергей Михайлович Юдин | Рекомбинантный белок Мио-ГСД, способ его получения, инъекционный препарат для повышения мышечной массы сельскохозяйственных животных, птицы и животных семейства псовых, а также способ использования препарата |
Family Cites Families (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5994618A (en) * | 1997-02-05 | 1999-11-30 | Johns Hopkins University School Of Medicine | Growth differentiation factor-8 transgenic mice |
| US20060216279A1 (en) * | 2005-03-22 | 2006-09-28 | Glass David J | Myostatin inhibiting fusion polypeptides and therapeutic methods thereof |
| DOP2006000093A (es) * | 2005-04-25 | 2007-01-31 | Pfizer | Anticuerpos contra miostatina |
| CN102286513B (zh) * | 2011-07-06 | 2014-05-07 | 西南民族大学 | 藏绵羊肌肉生长抑制素重组表达蛋白质 |
| US9644021B2 (en) * | 2013-01-11 | 2017-05-09 | The California Institute For Biomedical Research | Bovine fusion antibodies |
| US10092627B2 (en) * | 2013-04-08 | 2018-10-09 | President And Fellows Of Harvard College | Methods and compositions for rejuvenating skeletal muscle stem cells |
| CN106661128A (zh) * | 2014-06-06 | 2017-05-10 | 加州生物医学研究所 | 构建氨基末端免疫球蛋白融合蛋白的方法及其组合物 |
| AU2016297248A1 (en) * | 2015-07-22 | 2018-02-15 | Scholar Rock, Inc. | GDF11 binding proteins and uses thereof |
| EP3922645A1 (en) * | 2015-09-15 | 2021-12-15 | Scholar Rock, Inc. | Anti-pro/latent-myostatin antibodies and uses thereof |
| WO2017104783A1 (en) * | 2015-12-18 | 2017-06-22 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Anti-myostatin antibodies, polypeptides containing variant fc regions, and methods of use |
| KR101810385B1 (ko) * | 2016-02-04 | 2017-12-20 | 주식회사 강스템바이오텍 | Gdf11을 포함하는 조성물 및 그의 용도 |
| MX2018014375A (es) * | 2016-06-17 | 2019-04-22 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Anticuerpos antimiostatina y metodos de uso. |
| WO2019144053A1 (en) * | 2018-01-19 | 2019-07-25 | President And Fellows Of Harward College | Gdf11 variants and uses thereof |
-
2020
- 2020-02-07 RU RU2020105836A patent/RU2750267C1/ru active
-
2021
- 2021-01-18 WO PCT/RU2021/050009 patent/WO2021158146A1/ru active Application Filing
- 2021-01-18 CN CN202180007896.4A patent/CN115003690B/zh active Active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2613420C1 (ru) * | 2016-04-13 | 2017-03-16 | Сергей Михайлович Юдин | Рекомбинантный белок Мио-ГСД, способ его получения, инъекционный препарат для повышения мышечной массы сельскохозяйственных животных, птицы и животных семейства псовых, а также способ использования препарата |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| BESSA P.C. ET AL.: "Expression, purification and osteogenic bioactivity of recombinant human BMP-4, -9, -10, -11 and -14", PROTEIN EXPRESSION AND PURIFICATION, vol. 63, no. 2, 2009, pages 89 - 94, XP025686803, DOI: 10.1016/j.pep). 2008.09.01 4 * |
| MCPHERRON ALEXANDRA C: "Metabolic functions of myostatin and GDF11", IMMUNOL ENDOCR METAB AGENTS MED CHEM, vol. 10, no. 4, 2010, pages 217 - 231, XP055200150, DOI: 10.2174/187152210793663810 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2750267C1 (ru) | 2021-06-25 |
| CN115003690B (zh) | 2024-04-05 |
| CN115003690A (zh) | 2022-09-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP3583421B2 (ja) | ＩｇＥの不変部の一部を含有するＩｇＥ媒介アレルギー反応治療用ワクチン | |
| DK201100184Y4 (da) | Antistoffer fra immuniserede fugle | |
| JP4188353B2 (ja) | 強化ワクチン | |
| JP7083362B2 (ja) | セネカウイルスａ免疫原性組成物およびその方法 | |
| WO2007113633A2 (en) | Immunogenic compositions comprising cat allergen fel dl | |
| CN111471701B (zh) | 高效表达鹅星状病毒可溶性衣壳蛋白的orf2基因的方法及其应用 | |
| RU2613420C1 (ru) | Рекомбинантный белок Мио-ГСД, способ его получения, инъекционный препарат для повышения мышечной массы сельскохозяйственных животных, птицы и животных семейства псовых, а также способ использования препарата | |
| RU2750267C1 (ru) | Рекомбинантный ростовой дифференцировочный фактор роста 11 (GDF11), способ его получения, инъекционный препарат для повышения мышечной массы млекопитающих животных и птицы, а также способ использования препарата | |
| CN108904788B (zh) | GnRH-防御素重组去势疫苗及其制备 | |
| JPH09510702A (ja) | インヒビン組成物およびそれらの使用方法 | |
| JPH10509038A (ja) | 免疫、精製及び検出適用のためのたんぱく質、ペプチド及び複合物の高い水準の発現と容易な精製 | |
| CN114699521B (zh) | 基于金属硫蛋白家族的免疫佐剂及其应用 | |
| US5176910A (en) | Treponema hyodysenteriae hemolysin and uses therefor | |
| RU2792817C1 (ru) | Рекомбинантный белок GBO-ActRIIB для увеличения мышечной массы сельскохозяйственных животных и птицы | |
| RU2614115C1 (ru) | Рекомбинантный соматостатинсодержащий белок, способ его получения, инъекционный препарат для повышения мясной и молочной продуктивности сельскохозяйственных животных, а также способ использования препарата | |
| WO2024014989A1 (ru) | Рекомбинантный белок gbd-actriib для увеличения мышечной массы сельскохозяйственных животных и птицы | |
| CN1321189A (zh) | 细胞性免疫的诱导方法以及被诱导了细胞免疫的细胞 | |
| Bennell et al. | Study of immunisation regimes for the stimulation of local immunity in the pig intestine | |
| US20040220098A1 (en) | Inhibin compositions and methods of enhancing fertility and growth | |
| EP2431052B1 (en) | Protein for the immunocastration for mammals | |
| RU2722849C1 (ru) | Рекомбинантный белок GBD-SSTad-SSTad, способ его получения и применения | |
| CN111944838B (zh) | 革兰氏阳性菌表达系统在表达腐败梭菌毒素中的应用、腐败梭菌α毒素的制备方法和疫苗 | |
| JP3116087B2 (ja) | 神経突起伸長活性を有する蛋白質 | |
| WO2023225646A1 (en) | Using fungal constructs to produce viral protein antigens | |
| JP2024512722A (ja) | 免疫原性融合タンパク質 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| 121 | Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application |
Ref document number: 21750575 Country of ref document: EP Kind code of ref document: A1 |
|
| NENP | Non-entry into the national phase |
Ref country code: DE |
|
| 122 | Ep: pct application non-entry in european phase |
Ref document number: 21750575 Country of ref document: EP Kind code of ref document: A1 |
|
| 32PN | Ep: public notification in the ep bulletin as address of the adressee cannot be established |
Free format text: NOTING OF LOSS OF RIGHTS PURSUANT TO RULE 112(1) EPC (EPO FORM 1205A DATED 20/02/2023) |
|
| 122 | Ep: pct application non-entry in european phase |
Ref document number: 21750575 Country of ref document: EP Kind code of ref document: A1 |