WO2021132124A1

WO2021132124A1 - ポリエチレングリコール化合物の精製方法

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Publication number: WO2021132124A1
Application number: PCT/JP2020/047604
Authority: WO
Inventors: 領川原; 佐藤　敦; 翠平居; 竹内　球
Original assignee: 日油株式会社
Priority date: 2019-12-27
Filing date: 2020-12-21
Publication date: 2021-07-01
Also published as: CN114901721A; EP4083108A4; JP2021107533A; US20230050758A1; CA3164456A1; EP4083108A1; KR20220123402A

Abstract

（Ａ)工程および（Ｂ）工程を有することを特徴とする、式［１］のポリエチレングリコール化合物の精製方法。（Ａ）工程：式［１］の化合物を、ヒルデブランド溶解パラメータが８～１０(ｃａｌ／ｃｍ３)１／２である有機溶剤に溶解させることで溶液を得る工程（Ｂ）工程：式［１］の化合物１質量部に対して、比表面積が５０～２００ｍ２／ｇであるハイドロタルサイトからなる０．１～１質量部の吸着剤を前記溶液に混合することでスラリーを調製する工程（式［１］中、Ｚは、２～５個の活性水素基を有する化合物から前記活性水素基を除いた残基であり、Ａはアミノ基であり、Ｙ１及びＹ２は、それぞれ独立して、エーテル結合、アミド結合、エステル結合、ウレタン結合、カーボネート結合、２級アミノ基、チオエーテル結合、ジスルフィド結合、チオエステル結合またはこれらを含むアルキレン基であり、Ｐｏｌｙｍｅｒはポリエチレングリコール鎖を表し、Ｘは、炭素数１～７の炭化水素基、炭素数３～９のアセタール基、水酸基、水酸基の保護基、カルボキシル基、カルボキシル基の保護基、チオール基、チオール基の保護基、シアノ基またはこれらを含むアルキレン基であり、ｌ及びｍは、それぞれｌ＝１または０、ｍ＝１または０であり、ａ及びｂは０≦ａ≦４、０≦ｂ≦４かつ１≦ａ＋ｂ≦４を満たす整数である）

Description

ポリエチレングリコール化合物の精製方法

　本発明は、医薬用途に好ましく用いられるアミノ基を一つ有するポリエチレングリコール化合物の精製方法に関するものである。更に詳しくは、本発明は、ドラッグデリバリーシステムにおける化学修飾用途の高分子量の活性化ポリエチレングリコールであり、かつその原料として用いられる高純度なアミノ基を一つ有するポリエチレングリコール化合物を得る精製方法である。

　本発明は、ポリペプチド、酵素、抗体やその他低分子薬剤や遺伝子、オリゴ核酸などを含む核酸化合物、核酸医薬やその他の生理活性物質の修飾、または、リポソーム、ポリマーミセル、ナノパーティクルなどのドラッグデリバリーシステムキャリアへの応用を含む医薬用途に特に適する。

　ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）は、ドラッグデリバリーシステムにおけるスタンダードな担体として広く知られており、非常に有用で欠かすことのできない素材である。生理活性物質やリポソーム等の薬剤に、ポリエチレングリコール化合物を修飾することで、ポリエチレングリコールの高い水和層と立体反発効果により、薬剤が細網内皮系（ＲＥＳ）で捕捉されることや腎臓で排泄されることを抑制し、薬剤の血中滞留性の改善及び抗原性の低減が可能となる。中でも、末端にアミノ基を有するポリエチレングリコール化合物はそれ自身がカルボキシル基を有する薬剤の修飾剤であるとともに、低分子の活性化試薬と反応させることで、末端マレイミド体やアジド体、ヨードアセトアミド体のような他の活性化ポリエチレングリコール化合物を合成する原料や、α－アミノ酸－Ｎ－カルボキシ無水物と反応させることで、高分子ミセルを形成するためのブロック共重合体の原料にもなるため、特に重要な素材である。

　このような医薬用途を目的とした活性化ポリエチレングリコール化合物は、これを修飾して製造される薬剤の性能や安全性の観点から不純物の少ないものが求められている。現在、末端にアミノ基を一つ有するポリエチレングリコール化合物には、様々な骨格を持つものが開発されており、その製造方法により副生する不純物は様々であるが、アミノ基を複数有するポリエチレングリコール化合物が不純物として含まれていた場合、薬剤の修飾を行なった際に薬剤の多量化の原因となるため可能な限り低減させることが好ましい。しかし、アミノ基を一つ有するポリエチレングリコール化合物と、不純物であるアミノ基を複数有するポリエチレングリコール化合物はともにポリマーであり、かつイオン性であるアミノ基を有することから、物理化学的性質が類似しており、一般の技術では分離精製が困難である。

　特許文献１においては、イオン交換樹脂を用いたカラムクロマトグラフィーによってアミノ基を一つ有するポリエチレングリコール化合物を精製する方法が記載されている。この方法では溶離液の組成を連続的に変化させることで、アミノ基の数の違いに応じてポリエチレングリコール化合物を分離し精製することが可能である。しかしながら、このようなイオン交換樹脂を使用した精製方法は、原理的に固体表面への相互作用、吸着現象を利用した方法であるため、希薄溶液条件下において大量の樹脂を使用した精製処理が必要である。工程中のポリエチレングリコール化合物の濃度は、分離能の低下を抑えるため１－２％程度と希釈条件でなければならないため、工業的な生産性を十分に満足できるものではない。また、最終的に大量のイオン交換樹脂が廃棄物となり、産業利用上においても問題を有する精製法である。

　特許文献２においては、アミノ基を一つ有するポリエチレングリコール化合物をｐＨ１～３の強酸性水溶液中に溶解させて末端アミノ基をイオン化し、特定の混合有機溶剤を用いて特定の温度範囲で抽出することによって精製する方法が記載されている。この特許においては、イオン化により親水性の高まったアミノ基を有するポリエチレングリコール化合物が水層に分配し、アミノ基を有さないポリエチレングリコール化合物は混合有機層に分配するため、選択的に分離、精製することができる。しかし、この精製法は、アミノ基の有無によってポリエチレングリコール化合物を分離するため、目的物と不純物の両方に１個以上のアミノ基が含まれていた場合、そのアミノ基の数の違いで両者を分離することはできない。

　特許文献３、及び特許文献４においては、水酸基及びカルボキシル基を有するポリエチレングリコール化合物と吸着剤の相互作用を利用してポリエチレングリコール化合物を精製する方法が記載されている。これらの官能基と相互作用する適切な吸着剤を使用すると、官能基数が多いポリエチレングリコールほど吸着剤に優先して吸着されるため、官能基の有無、及び場合によっては官能基数により分離精製することができる。しかし、アミノ基有無及び数で選択的に不純物を除去できるといった記載はない。

日本国特開平８－１６５３４３号公報日本国特開２０１４－２０８７８６号公報日本国特開２０１０－２５４９７８号公報日本国特開２０１１－７９９３４号公報

　このように、末端にアミノ基を１つ有するポリエチレングリコール化合物は、医薬用途において重要な素材であるにも関わらず、工業的に製造容易な方法では得られておらず、多くの課題を有している。

　本発明の課題は、主成分から不純物である多官能体を削減し、末端にアミノ基を１つ有するポリエチレングリコール化合物を工業的に実施可能な方法にて高効率で純度良く精製することである。

　本発明者らは、上記の課題を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、ハイドロタルサイトからなる吸着剤に、塩基性であるアミノ基を複数有するポリエチレングリコール化合物を選択的に吸着除去する効果があることを見出し、本発明を完成させるに至った。

　即ち、本発明は以下に示すとおりである。
　下記（Ａ)工程および（Ｂ）工程を有することを特徴とする、式［１］で示されるポリエチレングリコール化合物の精製方法。
　（Ａ）工程：　前記式［１］で示される化合物を、ヒルデブランド溶解パラメータが８～１０(ｃａｌ／ｃｍ^３)^１／２である有機溶剤に溶解させることで溶液を得る工程
　（Ｂ）工程：　前記式［１］の化合物１質量部に対して、比表面積が５０～２００ｍ^２／ｇであるハイドロタルサイトからなる０．１～１質量部の吸着剤を前記溶液に混合することでスラリーを調製する工程

（式［１］中、
　Ｚは、２～５個の活性水素基を有する化合物から前記活性水素基を除いた残基であり、
　Ａはアミノ基であり、
　Ｙ^１及びＹ^２は、それぞれ独立して、エーテル結合、アミド結合、エステル結合、ウレタン結合、カーボネート結合、２級アミノ基、チオエーテル結合、ジスルフィド結合、チオエステル結合またはこれらを含むアルキレン基であり、
　Ｐｏｌｙｍｅｒはポリエチレングリコール鎖を表し、
　Ｘは、炭素数１～７の炭化水素基、炭素数３～９のアセタール基、水酸基、水酸基の保護基、カルボキシル基、カルボキシル基の保護基、チオール基、チオール基の保護基、シアノ基またはこれらを含むアルキレン基であり、
　ｌ及びｍは、それぞれｌ＝１または０、ｍ＝１または０であり、
　ａ及びｂは０≦ａ≦４、０≦ｂ≦４かつ１≦ａ＋ｂ≦４を満たす整数である）

　本発明によれば、末端にアミノ基を一つ有するポリエチレングリコール化合物にハイドロタルサイトからなる吸着剤を作用させることによって、不純物であるアミノ基を複数有するポリエチレングリコールを選択的に除去することが可能である。したがって、本発明の製造方法は、医薬用途に適した高品質のポリエチレングリコール化合物を工業的スケールで容易に提供することができる。

実施例１－１の原料（精製前）のＨＰＬＣクロマトグラムを示す。実施例１－１の精製後のＨＰＬＣクロマトグラムを示す。

　本発明の詳細は、一般式［１］で示される、アミノ基を１つ有するポリエチレングリコール化合物を、以下の操作を含む処理工程により精製する方法である。

　Ｚは、２～５個の活性水素基（－ＧＨ）を持つ化合物（Ｚ（ＧＨ）ｎ：ｎ＝２～５）から活性水素基を除いた残基である。活性水素基とは、活性水素を有する官能基である。活性水素基としては、水酸基、カルボキシル基、アミノ基、2級アミノ基、チオール基などを例示できる。活性水素基（ＧＨ）が水酸基、カルボキシル基である場合は、残基Ｚは脱水酸基残基であり、活性水素基がアミノ基、2級アミノ基、チオール基の場合は、残基Ｚは脱水素残基である。

　２～５個の活性水素基（－ＧＨ）を持つ化合物（Ｚ（ＧＨ）ｎ：ｎ＝２～５）の具体例としては、エチレングリコール、プロピレングリコール、トリメチレングリコール、イソプロピレングリコール、ブチレングリコール、テトラメチレングリコール、トリメチロールプロパン、グリセリン、ジグリセリン、トリグリセリン、ペンタエリスリトール、キシリトールなどの多価アルコール類、またはリジンやグルタミン酸など、アミノ基、カルボキシル基、またはチオール基を持つアミノ酸やペプチド、または有機アミン、有機カルボン酸などの化合物が挙げられる。

　Ｙ^１は、残基ＺとＡの間の結合基であり、共有結合であれば特に制限はない。Ｙ^１及びＹ^２は、それぞれ独立して、エーテル結合、アミド結合、エステル結合、ウレタン結合、カーボネート結合、２級アミノ基、チオエーテル結合、ジスルフィド結合、チオエステル結合、またはこれらを含んでもよいアルキレン基が挙げられる。前記アルキレン基部分として好ましいものはメチレン基、エチレン基、プロピレン基、イソプロピレン基、ブチレン基、イソブチレン基、ペンチレン基、イソペンチレン基、へキシレン基などが挙げられ、これらは分岐していてもよい。

　Ａは、アミノ基を表す。
　Ｐｏｌｙｍｅｒは、直鎖または分岐のポリエチレングリコール鎖である。分岐のポリエチレングリコール鎖とは、途中にリンカーを介し、二鎖またはそれ以上に分岐しているポリエチレングリコール鎖であり、分岐点は複数あっても良い。例としては、下記式（ｉ）に示すようなグリセリンなどの多価アルコールを分岐点とし、二鎖、またはそれ以上に分岐しているポリエチレングリコール鎖である。

（ただし、ｎ１及びｎ２は１～１，０００であり、好ましくは１００～１，０００である。）

　ポリエチレングリコール化合物の重量平均分子量は、特に制限はないが、好ましくは２，０００～１００，０００であり、更に好ましくは２，０００～８０，０００である。
　ｌ＝０または１、ｍ＝０または１、ａ及びｂは０≦ａ≦４、０≦ｂ≦４かつ１≦ａ＋ｂ≦４を満たす整数である。

　以下、各工程を更に詳細に説明する。
（Ａ）工程は、式［１］で示される化合物を、ヒルデブランド溶解パラメータが８～１０(ｃａｌ／ｃｍ^３)^１／２である有機溶剤に溶解させることで溶液を得る工程である。

　工程（Ａ）では、ヒルデブランド溶解パラメータが８～１０(ｃａｌ／ｃｍ^３)^１／２の有機溶剤を用いる。この有機溶媒のヒルデブランド溶解パラメータが８未満だと、ポリエチレングリコール化合物が溶解せず、１０を超えると、脱着や吸着剤からの金属成分の溶出の恐れがあるため好ましくない。この有機溶媒のヒルデブランド溶解パラメータは、好ましくは８．５～９．５であり、より好ましくは８．５～９．０である。この有機溶媒は、トルエン、キシレン、ベンゼン、クロロホルムおよびジクロロメタンから選ばれる有機溶媒が好ましく、更に好ましくはトルエン、クロロホルムであり、より好ましくはトルエンである。

　工程（Ａ）においては、式［１］の化合物１質量部に対する有機溶剤の量をＷとし、式［１］で示される化合物の重量平均分子量をＭとしたとき、２．０Ｍ×１０^－４＋２．０≦Ｗ≦５０を満たすことが好ましく、２．０Ｍ×１０^－４＋２．０≦Ｗ≦３０を満たすことが更に好ましい。

　上記有機溶剤を用いて、ポリエチレングリコール化合物の溶解を行う。処理容器へ仕込む順番は、ポリエチレングリコール化合物、有機溶剤のどちらからでも良い。ポリエチレングリコール化合物の分子量によっては加温が必要な場合があり、その方法については特に制限はないが、一般的には３０℃以上に加温することで溶解することができる。

　工程（Ｂ）は、式［１］の化合物１質量部に対して、比表面積が５０～２００ｍ^２／ｇであるハイドロタルサイトからなる０．１～１質量部の吸着剤を溶液に混合することでスラリーを調製する工程である。

　工程（Ｂ）の吸着剤は、下記一般式を有する化合物からなる群から選択された少なくとも一種のハイドロタルサイトからなる。
　（Ｍ^２＋）_１－ｘ ¹（Ｍ^３＋）_ｘ ¹（ＯＨ）_２（Ａ^ｎ－）_ｘ ¹ _／ｎ・ａＨ_２Ｏ
　（式中、Ｍ^２＋は２価金属イオンを示し、Ｍ^３＋は３価金属イオンを示し、Ａ^ｎ－はｎ価のアニオンを示し、ｎはＡ^ｎ－のアニオンの価数を示し、ｘ¹およびａはそれぞれ０＜ｘ^１＜０．５、０≦ａ＜１の範囲を示す。）
または
　ｘ^２（Ｍ^２＋）Ｏ・ｙ（Ｍ^３＋）_２Ｏ_３・ｚ（Ａ^ｎ－）・ｂＨ_２Ｏ
　（式中、Ｍ^２＋は２価金属イオンを示し、Ｍ^３＋は３価金属イオンを示し、Ａ^ｎ－はｎ価のアニオンを示し、ｎはＡ^ｎ－のアニオンの価数を示し、ｘ^２、ｙ、ｚ、ｂはそれぞれ０＜ｘ^２≦１０、０＜ｙ≦１０、０≦ｚ≦１０、０≦ｂ≦２０の範囲を示す。）

　Ｍ^２＋としてはＭｇ、Ｃａ又はＺｎの２価イオンが好ましく、Ｍ^３＋としてはＡｌ又はＦｅの３価イオンが好ましく、Ａ^ｎ－としてはＯＨ、ＣｌＯ_４、ＮＯ_３、ＳＯ_４、ＣＯ_３、ＳｉＯ_３、ＨＰＯ_４、ＰＯ_４又はＣＨ_３ＣＯＯを挙げることができる。中でもＭ^２＋がＭｇであり、Ｍ^３＋がＡｌであり、Ａ^ｎ－がＣＯ_３であるハイドロタルサイトが好ましい。特に好ましくは（Ｍｇ）_１－ｘ ¹（Ａｌ）_ｘ ¹（ＯＨ）_２（ＣＯ_３）_ｘ ¹ _／２・ａＨ_２Ｏ（０．２≦ｘ^１≦０．４、０．４≦ａ≦０．７）、またはｘ^２ＭｇＯ・ｙＡｌ_２Ｏ_３・ｚ（ＣＯ_３）・ｂＨ_２Ｏ（１≦ｘ^２≦４、０．５≦ｙ≦３、０≦ｚ≦３、０≦ｂ≦１０）であり、最も好ましくはｘ^２ＭｇＯ・ｙＡｌ_２Ｏ_３・ｚ（ＣＯ_３）・ｂＨ_２Ｏ（１≦ｘ^２≦５、０．５≦ｙ≦３、０≦ｚ≦３、０≦ｂ≦１０）である。具体的な例としては、堺化学工業（株）製のＳＴＡＢＩＡＣＥ　ＨＴシリーズのＳＴＡＢＩＡＣＥ　ＨＴ－１（Ｍｇ_０．６７Ａｌ_０．３３（ＯＨ）_２（ＣＯ_３）_０．１７・０．５Ｈ_２Ｏ）、ＳＴＡＢＩＡＣＥ　ＨＴ－Ｐ（Ｍｇ_０．６９Ａｌ_０．３１（ＯＨ）_２（ＣＯ_３）_０．１５・０．５４Ｈ_２Ｏ）、協和化学工業(株)製のキョーワードシリーズのキョーワード３００（２．５ＭｇＯ・Ａｌ_２Ｏ_３・０．７ＣＯ_３・ａＨ_２Ｏ、６≦ａ≦７）、キョーワード５００（Ｍｇ_０．７５Ａｌ_０．２５（ＯＨ）_２（ＣＯ_３）_０．１３・ａＨ_２Ｏ、０．５０≦ａ≦０．６３）、キョーワード１０００（Ｍｇ_０．６９Ａｌ_０．３１（ＯＨ）_２（ＣＯ_３）_０．１５・ａＨ_２Ｏ、０．４６≦ａ≦０．６２）等として市場から入手することができる。中でも、キョーワード３００が好ましい。
上記吸着剤は単独、または組み合わせて使用してもよい。

　式［１］で示される化合物１質量部に対して、吸着剤の量は０．１～１．０質量部倍の範囲が好ましい。吸着剤の量が０．１質量部未満だと、十分な精製効果が得られず、吸着剤の量が１質量部より多いと、処理後のスラリー溶液をろ過した際にろ過ケーキへポリエチレングリコール化合物が残り歩留りが低下する。更に好ましくは、吸着剤量が０．１～０．５質量部である。

　工程（Ｂ）における処理温度としては、２５～６０℃が好ましい。２５℃より低温では、溶液の粘性が高く精製効率が悪くなる。また、ポリエチレングリコール化合物の構造や分子量によっては結晶が析出してしまうため、２５℃以上が好ましい。更に好ましい温度範囲としては、４０～６０℃である。

　工程（Ｂ）における処理時間としては、０．１～２４時間の間が好ましい。また、この操作を実施する雰囲気は特に限定されないが、好ましくは酸化を最小限に抑えることを目的として、窒素などの不活性ガス存在下にて行うこともできる。また、装置も特に限定されないが、酸化劣化の起きにくい窒素下かつ密閉状態での操作を考慮して耐圧容器にて行うこともできる。

　回収工程：前記スラリーから前記ポリエチレングリコール化合物を回収する工程
　この工程は、上記工程（Ｂ）の吸着処理溶液（スラリー）から吸着剤と溶剤の除去を行い、目的のポリエチレングリコール化合物を単離する工程である。吸着剤の除去方法は特に制限はないが、一般的には、減圧濾過、または加圧ろ過によって除去を行う。この際、ろ過時の温度の低下による結晶の析出を予防する目的で予めろ過器を工程（Ｂ）の処理温度と同じに加温しておくことが望ましい。ろ過後、目的のポリエチレングリコール化合物は、ろ液に含有される。
　吸着剤除去後の処理工程については、特にこれを限定するものではないが、典型的にはポリエチレングリコール化合物を含む溶液を冷却するか、またはヘキサンやシクロヘキサンなどの炭化水素、イソプロパノールなどの高級アルコール、ジエチルエーテルやメチルtert-ブチルエーテルなどのエーテルを貧溶媒として添加し、ポリエチレングリコール化合物を結晶化させ、ろ別した後に乾燥して単離することができる。また、脱溶剤によって溶剤を除去し、ポリエチレングリコール化合物を乾燥固化して単離することもまた可能である。

　以下、実施例に基づいて本発明をさらに具体的に説明する。なお、例中の化合物中の多官能ＰＥＧ含量の定量には、以下に示す分析法ＡまたはＢを用いて、誘導体化によりアミノ基に蛍光物質を結合させた後、ＲＰ－ＨＰＬＣにより測定した。

＜誘導体化＞
　分析法Ａ：
　サンプル１００ｍｇと６－［［７－（Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノスルホニル）－２，１，３－ベンゾオキサジアゾール－４－イル］アミノ］ヘキサン酸スクシンイミジル：１１．３ｍｇとトルエン４ｍＬ、アセトニトリル１ｍＬを９ｍＬスクリュー管に仕込み２５℃で溶解した。これにN－メチルモルホリン：５．５μＬを添加し、２５℃で１時間撹拌を行った。反応後に酢酸エチルで希釈し、ヘキサンにて結晶化させた。析出した結晶をろ別し、真空乾燥を行い、分析用試料を回収した。

　分析法Ｂ：
　３，５－ジニトロベンゾイルクロリド（ＤＮＢ）３００ｍｇにテトラヒドロフラン１．５ｍＬを添加し、溶解させてＤＮＢ溶液を調整する。サンプル１０ｍｇとテトラヒドロフラン６０μＬを１ｍＬスクリュー管に仕込み２５℃で溶解した。これにピリジン４μＬとＤＮＢ溶液３６μＬを添加し、４０℃で１時間誘導体化を行った。誘導体化終了後、０．１％トリフルオロ酢酸水溶液０．４ｍＬで希釈し、ろ過して分析用試料とした。

＜ＲＰ－ＨＰＬＣの分析方法＞
　分析法Ａ：
　ＨＰＬＣシステムとしてはａｌｌｉａｎｃｅ（Ｗａｔｅｒｓ）を用い、下記条件にて測定を行った。
　移動相
　移動相Ｄ：　１ｍｍｏｌ／Ｌ　塩酸／アセトニトリル（２／１）
　移動相Ａ：　１ｍｍｏｌ／Ｌ　塩酸／アセトニトリル（１／１）
　グラジエント条件
　０分　移動相Ｄ：移動相Ａ＝１００：０
２２分　移動相Ｄ：移動相Ａ＝０：１００
２４分　移動相Ｄ：移動相Ａ＝０：１００
２６分　移動相Ｄ：移動相Ａ＝１００：０
３５分　移動相Ｄ：移動相Ａ＝１００：０
　流速：　１ｍｌ/ｍｉｎ
　カラム：ａｐＨｅｒａＣ４，φ４．６ｍｍ，　１５ｃｍ（ＳＵＰＥＬＣＯ）
　カラム温度：３３℃（分子量２万の場合）又は２５℃（分子量４万の場合）
　検出器：蛍光検出器（ｅｘ３８４ｎｍ、ｅｍ５２０ｎｍ）
　サンプル濃度：１ｍｇ／ｍＬ
　注入量：５０μｌ（分子量２万の場合）又は２０μｌ（分子量４万の場合）

　分析法Ｂ：
　ＨＰＬＣシステムとしてはＴｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｕｌｔｉｍａｔｅ　３０００を用いた。
　移動相：
　移動相Ａ：０．１％トリフルオロ酢酸水溶液
　移動相Ｂ：　０．１％トリフルオロ酢酸アセトニトリル溶液
　グラジエント条件
　０分　　　　移動相Ａ：移動相Ｂ＝７０：３０
　３０分　　　移動相Ａ：移動相Ｂ＝５０：５０
　３０．１分　移動相Ａ：移動相Ｂ＝５：９５
　３５分　　　移動相Ａ：移動相Ｂ＝５：９５
　流速：　　　０．６ｍｉｎ
　カラム：Ｓｕｎ　Ｓｈｅｌ　ＨＦＣ　１８－３０,　φ３ｍｍ，１５ｃｍ
　カラム温度：５０℃
　検出器：ＵＶ検出器（２２０ｎｍ）
　サンプル濃度：２０ｍｇ/ｍＬ
　注入量：５μＬ

　分析法Ａ、ＢともにＨＰＬＣ測定値には、目的物である１官能体に由来するメインピークと誘導体化された多官能ＰＥＧピークをベースラインに対して垂直に分割し、得られた各ピークの面積値から下記式により多官能ＰＥＧ含量を算出した。

　分析法Ａでは下記式（ii）、分析法Ｂでは下記式（iii）で示される不純物を検出している。

　（式（ii）、（iii）中、
　Ｚは、２～５個の活性水素基を有する化合物から前記活性水素基を除いた残基であり、
　Ａはアミノ基であり、
　Ｙ^１及びＹ^２は、それぞれ独立して、エーテル結合、アミド結合、エステル結合、ウレタン結合、カーボネート結合、２級アミノ基、チオエーテル結合、ジスルフィド結合、チオエステル結合またはこれらを含むアルキレン基であり、
　Ｐｏｌｙｍｅｒはポリエチレングリコール鎖を表し、
　Ｘは、炭素数１～７の炭化水素基、炭素数３～９のアセタール基、水酸基、水酸基の保護基、カルボキシル基、カルボキシル基の保護基、チオール基、チオール基の保護基、シアノ基またはこれらを含むアルキレン基であり、
　ｌ及びｍは、それぞれｌ＝１または０、ｍ＝１または０であり、
　ａ’及びｂは１≦ａ’≦４、０≦ｂ≦４かつ１≦ａ’＋ｂ≦４を満たす整数である）

（実施例１－１)
　下記式（ｉv）に示すグリセリン骨格に２本のポリエチレングリコール鎖を有する分岐型のポリエチレングリコール化合物（重量平均分子量：２０，０００、２官能ＰＥＧ含量：１．３%、３官能ＰＥＧ含量：不検出）１００ｇとトルエン１１５０ｇを２Ｌ四つ口フラスコに仕込み、スリーワンモーター、冷却管、窒素吹き込み管を取り付け、ウォーターバスを使用して５０℃で溶解した。これにキョーワード３００（協和化学工業）３０ｇを添加し、５０℃で１時間撹拌を行った。その後、ろ過によりろ液を回収し、濃縮後ヘキサンを加えて結晶を析出させた。析出した結晶をろ別し、真空乾燥を行い、結晶を回収した（収率９１％）。
　分析法ＡによるＲＰ－ＨＰＬＣ分析の結果、２官能ＰＥＧ含量は０．１％であった。

（実施例１－２～１－３）
　実施例１－１と同じ原料を用いて同様の方法で、キョーワード３００を以下の表に示す吸着剤に変更して行なった。以下に結果を示す。下記表において、キョーワードを「ＫＷ」と略す。

　以上の結果から、ハイドロタルサイト類であるキョーワード３００、キョーワード５００、キョーワード１０００にはいずれも２官能ＰＥＧ除去効果があり、中でも３００が最も効果が高く、かつ歩留も良好であった。

（比較例１－１～１－３)
　実施例１－１と同じ分岐型のポリエチレングリコール化合物（重量平均分子量：２０，０００、２官能ＰＥＧ含量：１．４%、３官能ＰＥＧ含量：不検出）を用いて同様の方法で、キョーワード３００を以下の表に示す無機塩類に変更して行なった。以下に結果を示す。

　以上の結果から、ケイ酸アルミニウムであるキョーワード７００では、酸性吸着剤であるため２官能ＰＥＧを除去する効果はあったものの、目的物も共に吸着されたため、歩留りが著しく低下した。一方、アルミナのような無機酸化物や硫酸マグネシウムなどの無機塩類では精製効果はなかった。

（実施例１－４～１－５)
　実施例１－１と同じ原料を用いて同様の方法で、キョーワード３００を以下の表に示す量に変更して行なった。以下に結果を示す。

　以上の結果より、やや効率は低下するものの、０．１質量倍でも２官能ＰＥＧを除去する効果があることがわかった。また、０．１～０．４質量倍の間で歩留りの低下はほとんどみられていなかった。

（実施例２）
　式（ｉv）に示すグリセリン骨格に２本のポリエチレングリコール鎖を有する分岐型のポリエチレングリコール化合物（分子量：４０，０００、２官能ＰＥＧ含量：１．１％、３官能ＰＥＧ含量：不検出）１０ｇとトルエン１８０ｇを５００ｍＬ四つ口フラスコに仕込み、スリーワンモーター、冷却管、窒素吹き込み管を取り付け、ウォーターバスを使用して５０℃で溶解した。これにキョーワード３００（協和化学工業）３ｇ添加し、５０℃で１時間撹拌を行った。その後、ろ過によりろ液を回収し、濃縮後ヘキサンを加えて結晶を析出させた。析出した結晶をろ別し、真空乾燥を行い、結晶を回収した（収率８６％）。
　分析法ＡによるＲＰ－ＨＰＬＣ分析の結果、２官能ＰＥＧ含量は０．１％未満（０．０３％）であった。

（実施例３）
　下記式（v）に示すα－アミノプロピル－, ω－メトキシ－ポリエチレングリコール（分子量：２０，０００、２官能ＰＥＧ含量：２．８％）２０ｇとトルエン３６０ｇを１Ｌ四つ口フラスコに仕込み、スリーワンモーター、冷却管、窒素吹き込み管を取り付け、ウォーターバスを使用して５０℃で溶解した。これにキョーワード３００：６ｇ添加し、５０℃で１時間撹拌を行った。その後、ろ過によりろ液を回収し、濃縮後ヘキサンを加えて結晶を析出させた。析出した結晶をろ別し、真空乾燥を行い、結晶を回収した（収率８２％）。
　分析法ＡによるＲＰ－ＨＰＬＣ分析の結果、試料の２官能ＰＥＧ含量は０．５％であった。

（実施例４）
　式（v）に示すα－アミノプロピル－, ω－メトキシ－ポリエチレングリコール（分子量：２，０００、２官能ＰＥＧ含量：１．８％）１０ｇとトルエン４５ｇを３００ｍＬ四つ口フラスコに仕込み、スリーワンモーター、冷却管、窒素吹き込み管を取り付け、ウォーターバスを使用して窒素下４０℃で溶解した。これにキョーワード３００：３ｇを添加し、４０℃で３０分撹拌を行った。その後、ろ過によりろ液を回収し、濃縮後ヘキサンを加えて結晶を析出させた。析出した結晶をろ別し、真空乾燥を行い、結晶を回収した（収率８４％）。
　分析法ＢによるＲＰ－ＨＰＬＣ分析の結果、試料の２官能ＰＥＧ含量は０．９％であった。

　本発明により、医薬用途に適した高品質のポリエチレングリコール化合物を工業的スケールで容易に提供することができる。

　本発明を詳細にまた特定の実施態様を参照して説明したが、本発明の精神と範囲を逸脱することなく様々な変更や修正を加えることができることは当業者にとって明らかである。
　本出願は、２０１９年１２月２７日出願の日本特許出願（特願２０１９－２３７８８０）に基づくものであり、その内容はここに参照として取り込まれる。

Claims

　下記（Ａ）工程および（Ｂ）工程を有することを特徴とする、式［１］で示されるポリエチレングリコール化合物の精製方法。
　（Ａ）工程：　前記式［１］で示される化合物を、ヒルデブランド溶解パラメータが８～１０(ｃａｌ／ｃｍ^３)^１／２である有機溶剤に溶解させることで溶液を得る工程
　（Ｂ）工程：　前記式［１］の化合物１質量部に対して、比表面積が５０～２００ｍ^２／ｇであるハイドロタルサイトからなる０．１～１質量部の吸着剤を前記溶液に混合することでスラリーを調製する工程

（式［１］中、
　Ｚは、２～５個の活性水素基を有する化合物から前記活性水素基を除いた残基であり、
　Ａはアミノ基であり、
　Ｙ^１及びＹ^２は、それぞれ独立して、エーテル結合、アミド結合、エステル結合、ウレタン結合、カーボネート結合、２級アミノ基、チオエーテル結合、ジスルフィド結合、チオエステル結合またはこれらを含むアルキレン基であり、
　Ｐｏｌｙｍｅｒはポリエチレングリコール鎖を表し、
　Ｘは、炭素数１～７の炭化水素基、炭素数３～９のアセタール基、水酸基、水酸基の保護基、カルボキシル基、カルボキシル基の保護基、チオール基、チオール基の保護基、シアノ基またはこれらを含むアルキレン基であり、
　ｌ及びｍは、それぞれｌ＝１または０、ｍ＝１または０であり、
　ａ及びｂは０≦ａ≦４、０≦ｂ≦４かつ１≦ａ＋ｂ≦４を満たす整数である）