CN114901721A - 纯化聚乙二醇化合物的方法 - Google Patents

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Abstract

一种用于纯化式[1]所示的聚乙二醇化合物的方法，包括下列的步骤(A)和(B)：步骤(A)：将式[1]表示的化合物溶解在希尔德布兰德溶解度参数为8至10(cal/cm3)1/2的有机溶剂中以得到溶液的步骤，步骤(B)：相对于1质量份式[1]的化合物，将0.1至1质量份且比表面积为50至200m2/g的由水滑石制成的吸附剂混合到溶液中制备悬浮液的步骤，
Figure DDA0003715368960000011
(在式[1]中，Z是从具有2至5个活性氢基团的化合物中去除活性氢基团而得到的残基；A是氨基；Y1和Y2各自独立地为醚键、酰胺键、酯键、氨基甲酸酯键、碳酸酯键、仲氨基、硫醚键、二硫键、硫酯键或这些的亚烷基；聚合物表示聚乙二醇链；X表示具有1至7个碳原子的烃基、具有3至9碳原子的缩醛基、羟基、羟基的保护基团、羧基、羧基的保护基团、巯基、巯基的保护基团、氰基或含有它们的亚烷基；l和m分别满足l＝1或0，m＝1或0；并且a和b是满足0≤a≤4、0≤b≤4并且l≤a+b≤4的整数)。

Description

纯化聚乙二醇化合物的方法
技术领域
本发明涉及一种纯化具有一个氨基的聚乙二醇化合物的方法，其优选用于医药用途。更具体地，本发明是一种用于获得具有一个氨基的高纯度聚乙二醇化合物的纯化方法，该聚乙二醇化合物是用于药物递送系统中的化学修饰用途的高分子量活化聚乙二醇，并且用作其原材料。
本发明特别适用于医药用途，包括多肽、酶、抗体、其他低分子药物、诸如基因和寡核酸等的核酸化合物、核酸药物和其他生理活性物质的修饰或应用于药物递送系统载体，如脂质体、聚合物胶团和纳米颗粒等。
背景技术
聚乙二醇(PEG)作为药物递送系统中的标准载体而广为人知，并且是一种非常有用且不可或缺的材料。通过用聚乙二醇化合物修饰诸如生理活性物质或脂质体等的药物，由于聚乙二醇的高水合层和空间排斥效应，抑制了网状内皮系统(RES)对药物的捕获及其在肾脏中的排泄，从而能够改善药物在血液中的循环并降低其抗原性。特别地，末端具有氨基的聚乙二醇化合物本身是具有羧基的药物的修饰剂，并且也通过与低分子活化剂反应，用作用于合成诸如末端马来酰亚胺化合物、叠氮化物化合物和碘乙酰胺化合物的其他活化聚乙二醇化合物的原材料或者作为通过与α-氨基酸-N-羧基酸酐反应形成聚合物胶团的嵌段共聚物的原材料，使得聚乙二醇化合物作为尤其重要的材料。
作为这样的医药用途的活化聚乙二醇化合物，从对活化聚乙二醇化合物进行修饰而制造的药物的性能和安全性的观点出发，要求杂质少的活化聚乙二醇化合物。目前，作为在末端具有一个氨基的聚乙二醇化合物，开发了具有各种骨架的聚乙二醇化合物，并且根据其制造方法的不同，作为副产物而产生的杂质也不同。在包含具有多个氨基的聚乙二醇化合物作为杂质的情况下，在对药物进行修饰时会引起药物的低聚化，因此优选尽可能地减少其的量。然而，由于具有一个氨基的聚乙二醇化合物和作为杂质的具有多个氨基的聚乙二醇化合物两者都是聚合物并且具有离子的氨基，因此它们具有相似的物理化学性质，并且因此难以通过通用技术而分离和纯化。
专利文献1中描述了通过使用了离子交换树脂的柱色谱法来纯化具有一个氨基的聚乙二醇化合物的方法。在该方法中，通过连续改变洗脱液的组成，能够根据氨基数的不同来分离和纯化聚乙二醇化合物。然而，由于这种使用了离子交换树脂的纯化方法原则上是利用与固体表面的相互作用和在其上的吸附现象的方法，因此需要在稀释溶液条件下使用大量树脂的纯化处理。由于该过程中聚乙二醇化合物的浓度应为约1至2％的稀释条件以抑制可分离性的降低，因此不能充分满足工业生产率。此外，大量的离子交换树脂最终变成废料，并且因此该方法是在工业应用中也存在问题的纯化方法。
专利文献2中描述了将具有一个氨基的聚乙二醇化合物溶解在pH1至3的强酸性水溶液中以使末端氨基离子化，并且在特定的温度范围内使用特定混合有机溶剂萃取聚乙二醇化合物的纯化方法。在该专利中，具有通过离子化增强了亲水性的氨基的聚乙二醇化合物分布在水层中，而不具有氨基的聚乙二醇化合物分布在混合有机层中，从而能够选择性地分离和纯化它们。然而，由于该纯化方法根据氨基的有无而分离聚乙二醇化合物，因此当目标物质和杂质都含有一个以上氨基时，两者不能根据氨基数的不同而分离。
专利文献3和4描述了一种通过利用具有羟基和羧基的聚乙二醇化合物与吸附剂之间的相互作用来纯化聚乙二醇化合物的方法。当使用与这些官能团相互作用的合适的吸附剂时，具有更多官能团的聚乙二醇优先吸附在吸附剂上，因此能够根据官能团的有无并且在某些情况下根据官能团的数量而实现分离和纯化。然而，没有描述能够根据氨基的有无和氨基的数量而选择性地去除杂质。
现有技术文件
专利文献
专利文献1:JP-A-8-165343
专利文献2:JP-A-2014-208786
专利文献3:JP-A-2010-254978
专利文献4:JP-A-2011-79934
发明内容
本发明待解决的问题
如上所述，在末端处具有一个氨基的聚乙二醇化合物在医药用途中是重要的材料，但该化合物不能通过工业上容易的制造方法而获得并且存在很多问题。
本发明的目的在于从主成分中减少作为杂质的多官能化合物，并且通过工业上可行的方法高效且高纯度地纯化在末端处具有一个氨基的聚乙二醇化合物。
解决问题的手段
本发明人为了解决上述课题进行了深入研究，结果发现，由水滑石制成的吸附剂具有选择性吸附并去除具有多个碱性氨基的聚乙二醇化合物的效果，从而获得了本发明。
即，本发明如下所示。
一种用于纯化式[1]所示的聚乙二醇化合物的方法，包括下列的步骤(A)和(B)：
步骤(A)：将式[1]表示的化合物溶解在希尔德布兰德溶解度参数为8至10(cal/cm3)1/2的有机溶剂中以得到溶液的步骤，
步骤(B)：相对于1质量份式[1]的化合物，将0.1至1质量份且比表面积为50至200m2/g的由水滑石制成的吸附剂混合到溶液中以制备悬浮液的步骤，
Figure BDA0003715368940000041
(在式[1]中，
Z是从具有2至5个活性氢基团的化合物中去除活性氢基团而得到的残基；
A是氨基；
Y1和Y2各自独立地为醚键、酰胺键、酯键、氨基甲酸酯键、碳酸酯键、仲氨基、硫醚键、二硫键、硫酯键或这些的亚烷基；
聚合物表示聚乙二醇链；
X表示具有1至7个碳原子的烃基、具有3至9碳原子的缩醛基、羟基、羟基的保护基团、羧基、羧基的保护基团、巯基、巯基的保护基团、氰基或含有它们的亚烷基；
l和m分别满足l＝1或0，m＝1或0；并且
a'和b是满足0≤a≤4、0≤b≤4并且l≤a+b≤4的整数)。
发明效果
根据本发明，通过使由水滑石制成的吸附剂作用于在末端处具有一个氨基的聚乙二醇化合物，能够选择性地去除作为杂质的具有多个氨基的聚乙二醇。因此，本发明的制造方法能够容易地以工业规模提供适用于医药用途的高品质聚乙二醇化合物。
附图说明
图1示出实施例1-1的原材料(纯化前)的HPLC色谱图。
图2示出实施例1-1纯化后的HPLC色谱图。
具体实施方式
具体而言，本发明是通过包括以下操作的处理步骤来纯化由通式[1]表示的具有一个氨基的聚乙二醇化合物的方法。
Figure BDA0003715368940000051
Z是从具有2至5个活性氢基团(-GH)的化合物(Z(GH)n：n＝2至5)中去除活性氢基团(GH)而得到的残基。活性氢基团是指具有活性氢的官能团。活性氢基团的实例包括羟基、羧基、氨基、仲氨基和巯基。当活性氢基团(GH)为羟基或羧基时，残基Z为脱羟基残基，并且当活性氢基团为氨基、仲氨基或巯基时，残基Z是脱氢残基。
具有2至5个活性氢基团(-GH)的化合物(Z(GH)n：n＝2至5)的具体实例包括：多元醇类，诸如乙二醇、丙二醇、三亚甲基乙二醇、异丙二醇、丁二醇、四亚甲基二醇、三羟甲基丙烷、甘油、双甘油、三甘油、季戊四醇和木糖醇；具有氨基、羧基或巯基的氨基酸和肽，诸如赖氨酸和谷氨酸；以及诸如有机胺和有机羧酸等的化合物。
Y1是残基Z和A的结合基团，并且其为是共价键就没有特别限制。Y1和Y2各自独立地为醚键、酰胺键、酯键、氨基甲酸酯键、碳酸酯键、仲氨基、硫醚键、二硫键、硫酯键或可以包含这些的亚烷基。作为亚烷基部分，可以优选地提及亚甲基、乙烯基、亚丙基、亚异丙基、亚丁基、异亚丁基、亚戊基、亚异戊基、亚己基等，并且它们可能是支链的。
A表示氨基。
聚合物是直链或支链的聚乙二醇链。支链的聚乙二醇链是通过中间的连接体而分支成两条以上链的聚乙二醇链，并且可以具有多个分支点。如下式(i)所示，一个示例为以诸如甘油等的多元醇为分支点并分支为两条以上的聚乙二醇链。
Figure BDA0003715368940000061
(其中n1和n2各自为1至1000，优选100至1000。)
聚乙二醇化合物的重均分子量没有特别限定，但是优选为2000至100000，更优选为2000至80000。
l等于0或1，m等于0或1，并且a和b是满足0≤a≤4、0≤b≤4以及1≤a+b≤4的整数。
在下文中，将更详细地描述每个步骤。
步骤(A)是将式[1]表示的化合物溶解在希尔德布兰德溶解度参数为8至10(cal/cm3)1/2的有机溶剂中以得到溶液的步骤。
在步骤(A)中，使用希尔德布兰德溶解度参数为8至10(cal/cm3)1/2的有机溶剂。该有机溶剂的希尔德布兰德溶解度参数小于8时，聚乙二醇化合物不溶解，并且当有机溶剂的希尔德布兰德溶解度参数超过10时，存在洗脱和金属组分从吸附剂中溶出的风险，因此这种情形不优选。有机溶剂的希尔德布兰德溶解度参数优选为8.5至9.5，并且更优选为8.5至9.0。有机溶剂优选为选自甲苯、二甲苯、苯、氯仿和二氯甲烷的有机溶剂，更优选甲苯或氯仿，并且进一步优选甲苯。
在步骤(A)中，在将有机溶剂相对于1质量份的式[1]的化合物的量表示为W和式[1]表示的化合物的重均分子量时表示为M时，优选满足2.0M×10-4+2.0≤W≤50，并且更优选满足2.0M×10-4+2.0≤W≤30。
使用上述有机溶剂溶解聚乙二醇化合物。关于加入处理容器的顺序，可以首先加入聚乙二醇化合物或有机溶剂任一者。根据聚乙二醇化合物的分子量，可能需要加热，并且加热的方法没有特别限定，但通常加热至30℃以上化合物就能够溶解。
步骤(B)是相对于1质量份式[1]的化合物，将0.1至1质量份的比表面积为50至200m2/g的由水滑石制成的吸附剂混合到溶液中以制备悬浮液的步骤。
步骤(B)中的吸附剂由选自具有以下通式的化合物所组成的组中的至少一种水滑石制成：
(M2+)1-x 1(M3+)x 1(OH)2(An-)x 1 /n·aH2O
(其中M2+表示二价金属离子，M3+表示三价金属离子，An-表示n价阴离子，n表示An-阴离子的化合价，x1和a分别表示0<x1<0.5和0≤a<1)；
或者
x2(M2+)O·y(M3+)2O3·z(An-)·bH2O
(其中M2+表示二价金属离子，M3+表示三价金属离子，An-表示n价阴离子，n表示An-阴离子的化合价，x2、y、z和b分别表示0<x2≤10，0<y≤10，0≤z≤10，和0≤b≤20)。
作为M2+，优选Mg、Ca或Zn的二价离子，作为M3+，优选Al或Fe的三价离子，并且作为An-，可以提及OH、ClO4、NO3、SO4、CO3、SiO3、HPO4、PO4或CH3COO。其中，M2+为Mg、M3+为Al并且An-为CO3的水滑石是优选的。特别优选的是(Mg)1-x 1(Al)x 1(OH)2(CO3)x 1 /2·aH2O(0.2≤x1≤0.4,0.4≤a≤0.7)或x2MgO·yAl2O3·z(CO3)·bH2O(1≤x2≤4,0.5≤y≤3,0≤z≤3,0≤b≤10)，并且最优选的是x2MgO·yAl2O3·z(CO3)·bH2O(1≤x2≤5,0.5≤y≤3,0≤z≤3,0≤b≤10)。作为具体示例，水滑石可为从市场商购的Sakai Chemical Industry Co.,Ltd.制造的STABIACE HT系列的STABIACE HT-1(Mg0.67Al0.33(OH)2(CO3)0.17·0.5H2O)、STABIACE HT-P(Mg0.69Al0.31(OH)2(CO3)0.15·0.54H2O)；Kyowa Chemical Industry Co.,Ltd.制造的Kyoward系列的Kyoward 300(2.5MgO·Al2O3·0.7CO3·aH2O,6≤a≤7)、Kyoward 500(Mg0.75Al0.25(OH)2(CO3)0.13·aH2O,0.50≤a≤0.63)、Kyoward 1000(Mg0.69Al0.31(OH)2(CO3)0.15·aH2O,0.46≤a≤0.62)等。其中，Kyoward 300是优选的。上述吸附剂可以单独使用或组合使用。
相对于1质量份的式[1]表示的化合物，吸附剂的量优选为0.1至1.0质量份的范围。当吸附剂的量小于0.1质量份时，不能获得足够的纯化效果，而当吸附剂的量大于1质量份时，在过滤处理过的悬浮液溶液时，聚乙二醇化合物残留在滤饼中并且产率下降。更优选地，吸附剂的量为0.1至0.5质量份。
步骤(B)中的处理温度优选为25至60℃。在低于25℃的温度下，溶液的粘度高并且纯化效率变差。另外，由于根据聚乙二醇化合物的结构和分子量可能析出结晶，因此温度优选为25℃以上。更优选的温度范围是40至60℃。
步骤(B)中的处理时间优选为在0.1至24小时之间。另外，进行该操作的气氛没有特别限定，但为了抑制氧化，也能够优选在诸如氮气的惰性气体的存在下进行处理。另外，装置也没有特别限定，考虑到在不易发生氧化劣化的氮气下且密闭状态的操作，也可以在耐压容器中进行处理。
回收步骤：从悬浮液中回收聚乙二醇化合物的步骤
该步骤是从步骤(B)的吸附处理溶液(悬浮液)中去除吸附剂和溶剂并分离目标聚乙二醇化合物的步骤。吸附剂的去除方法没有特别限定，但通常通过减压过滤或加压过滤来去除吸附剂。此时，为了防止因过滤时的温度下降而析出结晶，优选预先将过滤器加热至与步骤(B)中的处理温度相同的温度。过滤后，目标聚乙二醇化合物包含在滤液中。
去除吸附剂后的处理步骤没有特别限定，但通常可以通过冷却包含聚乙二醇化合物的溶液或添加诸如己烷、环己烷的烃、诸如异丙醇的高级醇、或添加诸如二乙醚或甲基叔丁基醚等醚作为不良溶剂来使聚乙二醇化合物结晶，通过过滤而分离，并且随后干燥，从而能够分离化合物。此外，聚乙二醇化合物能够通过脱溶剂来分离溶剂，从而实现干燥和固化。
实施例
在下文中，将基于实施例更详细地描述本发明。对于实施例的化合物中的多官能PEG含量的定量，使用以下所示的分析方法A或B，通过衍生化使荧光物质与氨基结合，并且随后通过RP-HPLC进行测量。
<衍生化>
分析方法A：
将100mg样品、11.3mg琥珀酰亚胺6-[[7-(N,N-二甲基氨基磺酰基)-2,1,3-苯并恶二唑-4-基]氨基]己酸酯、4mL甲苯和1mL乙腈装入9mL螺旋管，然后在25℃溶解。向其中加入5.5μL N-甲基吗啉，并且整体在25℃搅拌1小时。反应后，用乙酸乙酯稀释，并且用己烷进行结晶。通过过滤分离析出的结晶并在真空下干燥，并且收集分析用样品。
分析方法B：
向300mg的3,5-二硝基苯甲酰氯(DNB)中加入1.5mL四氢呋喃，并且进行溶解以制备DNB溶液。将10mg样品和60μL四氢呋喃装入1mL螺旋管中，随后在25℃溶解。向其中加入吡啶4μL和DNB溶液36μl，并在40℃衍生化1小时。衍生化完成后，将混合物用0.4mL的0.1％三氟乙酸水溶液稀释并过滤以得到用于分析的样品。
<RP-HPLC的分析方法>
分析方法A：
HPLC系统使用Alliance(Waters)，并且在下列条件下进行测量。
流动相
流动相D：1mmol/L盐酸/乙腈(2/1)
流动相A：1mmol/L盐酸/乙腈(1/1)
梯度条件
0分钟 流动相D:流动相A＝100:0
22分钟 流动相D:流动相A＝0:100
24分钟 流动相D:流动相A＝0:100
26分钟 流动相D:流动相A＝100:0
35分钟 流动相D:流动相A＝100:0
流速：1ml/分钟
柱：apHera C4，φ4.6mm，15cm(SUPELCO)
柱温：33℃(分子量为20000时)或25℃(分子量为40000时)
检测器：荧光检测器(ex 384nm，em 520nm)
样品浓度：1mg/mL
进样量：50μl(分子量为20000时)或20μl(分子量为40000时)
分析方法B：
Thermo Fisher Ultimate 3000用作HPLC系统。
流动相
流动相A：0.1％三氟乙酸水溶液
流动相B：0.1％三氟乙酸乙腈溶液
梯度条件
0分钟 流动相A:流动相B＝70:30
30分钟 流动相A:流动相B＝50:50
30.1分钟 流动相A:流动相B＝5:95
35分钟 流动相A:流动相B＝5:95
流速：0.6分钟
柱：Sun Shel HFC 18-30，φ3mm，15cm
柱温：50℃
检测器：UV检测器(220nm)
样品浓度：20mg/mL
进样量：5μL
对于分析方法A和B，作为HPLC测量值，将来自目标单官能化合物的主峰和衍生化的多官能PEG峰垂直于基线地划分，并且通过以下公式由获得的每个峰的面积值算出多官能PEG含量。
多官能PEG含量[％]
＝
Figure BDA0003715368940000111
P：主峰的峰面积
Qq：衍生化的q官能PEG的峰面积
a'、b：由下式(ii)或(iii)所示的杂质结构确定的整数
在分析方法A中，检测由下式(ii)表示的杂质，并且在分析方法B中，检测由下式(iii)表示的杂质。
Figure BDA0003715368940000121
(在式(ii)和(iii)中，
Z是从具有2至5个活性氢基团的化合物中去除活性氢基团而得到的残基；
A是氨基；
Y1和Y2各自独立地为醚键、酰胺键、酯键、氨基甲酸酯键、碳酸酯键、仲氨基、硫醚键、二硫键、硫酯键或这些的亚烷基；
聚合物表示聚乙二醇链；
X表示具有1至7个碳原子的烃基、具有3至9碳原子的缩醛基、羟基、羟基的保护基团、羧基、羧基的保护基团、巯基、巯基的保护基团、氰基或含有它们的亚烷基；
l和m分别满足l＝1或0，m＝1或0；并且
a'和b是满足1≤a’≤4、0≤b≤4并且l≤a’+b≤4的整数)。
(实施例1-1)
向2L的四颈烧瓶中装入100g由下式(iv)表示的在甘油骨架中具有两个聚乙二醇链的支链聚乙二醇化合物(重均分子量：20000，双官能PEG含量：1.3％，三官能PEG含量：未检测到)和1150g甲苯。安装三合一电机(three-one motor)、冷却管、吹氮管，并且整体使用水浴在50℃溶解。向其中加入30g的Kyoward 300(Kyowa Chemical Industry Co.,Ltd.)，随后在50℃搅拌1小时。然后，过滤收集滤液，浓缩，并且随后加入己烷以析出晶体。通过过滤分离已析出的结晶并在真空下干燥，并且收集晶体(产率91％)。
作为分析方法A的RP-HPLC分析的结果，双官能PEG含量为0.1％。
Figure BDA0003715368940000131
(实施例1-2至1-3)
使用与实施例1-1相同的原料，进行相同的方法，不同之处在于将Kyoward 300改变为下表中所示的吸附剂。结果如下所示。在下表中，Kyoward缩写为“KW”。
[表1]
实施例 纯化前 1-1 1-2 1-3
吸附剂 - KW300 KW500 KW1000
比表面积(m<sup>2</sup>/g) - 130 110 72
双官能PEG含量(％) 1.3 0.1 0.2 0.1
产率(％) - 91 84 80
由以上结果可知，作为水滑石的Kyoward 300、Kyoward 500、Kyoward 1000均具有去除双官能PEG的效果。其中，300是最有效的并且展现出良好的产率。
(比较例1-1至1-3)
使用与实施例1-1相同的支链聚乙二醇化合物(重均分子量：20000，双官能PEG含量：1.4％，三官能PEG含量：未检测到)，进行相同的方法，不同之处在于将Kyoward 300改为下表所示的无机盐。结果如下所示。
[表2]
比较例 纯化前 1-1 1-2 1-3
无机盐 - KW700 氧化铝 硫酸镁
双官能PEG含量(％) 1.4 0.1 1.4 1.3
产率(％) - 40 94 95
由以上结果可知，作为硅酸铝的Kyoward 700是酸性吸附剂，具有去除双官能PEG的效果，但由于也吸附了目标物质，因此产率显着降低。另一方面，诸如氧化铝的无机氧化物和诸如硫酸镁的无机盐没有纯化效果。
(实施例1-4至1-5)
使用与实施例1-1相同的原料，进行相同的方法，不同之处在于将Kyoward 300的量改变为下表中所示的量。结果如下所示。
[表3]
实施例 纯化前 1-4 1-1 1-5
吸附剂的量 - 0.1 0.3 0.4
双官能PEG含量(％) 1.3 0.3 0.1 0.1
产率(％) - 91 91 91
由以上结果可知，虽然效率稍有降低，但即使在0.1质量倍时也展现出去除双官能PEG的效果。另外，在0.1至0.4质量倍的范围内，产率几乎没有下降。
(实施例2)
向500mL的四颈烧瓶中装入10g由式(iv)表示的在甘油骨架中具有两个聚乙二醇链的支链聚乙二醇化合物(重均分子量：40000，双官能PEG含量：1.1％，三官能PEG含量：未检测到)和180g甲苯。安装三合一电机(three-one motor)、冷却管、吹氮管，并且整体使用水浴在50℃溶解。向其中加入3g的Kyoward 300(Kyowa Chemical Industry Co.，Ltd.)，随后在50℃搅拌1小时。然后，过滤收集滤液并浓缩，并且随后加入己烷以析出晶体。通过过滤分离已析出的结晶并在真空下干燥，并且收集晶体(产率86％)。
作为分析方法A的RP-HPLC分析的结果，双官能PEG含量为小于0.1％(0.03％)。
(实施例3)
向1L的四颈烧瓶中装入20g由下式(v)表示的α-氨基丙基-，ω-甲氧基-聚乙二醇(分子量：20000，双官能PEG含量：2.8％)和360g甲苯。安装三合一电机(three-one motor)、冷却管、吹氮管，并且整体使用水浴在50℃溶解。向其中加入6g的Kyoward300，随后在50℃搅拌1小时。然后，过滤收集滤液并浓缩，并且随后加入己烷以析出晶体。通过过滤分离已析出的结晶并在真空下干燥，并且收集晶体(产率82％)。
作为分析方法A的RP-HPLC分析的结果，样品的双官能PEG含量为0.5％。
CH3-(OCH2CH2)n-OCH2CH2CH2NH2
···(v)
(实施例4)
向300mL的四颈烧瓶中装入10g由式(v)表示的α-氨基丙基-，ω-甲氧基-聚乙二醇(分子量：20000，双官能PEG含量：1.8％)和45g甲苯。安装三合一电机(three-one motor)、冷却管、吹氮管，并且整体使用水浴在氮气中在40℃下溶解。向其中加入3g的Kyoward 300，随后在40℃搅拌30分钟。然后，过滤收集滤液并浓缩，并且随后加入己烷以析出晶体。通过过滤分离已析出的结晶并在真空下干燥，并且收集晶体(产率84％)。
作为分析方法B的RP-HPLC分析的结果，样品的双官能PEG含量为0.9％。
工业应用性
根据本发明，能够容易地以工业规模提供适用于医药用途的高品质聚乙二醇化合物。
虽然已经参考具体实施例详细地描述了本发明，但对本领域技术人员显而易见的是，能够在不背离本发明的精神和范围的情况下，进行各种变化或修改。
本发明基于2019年12月27日提交的日本专利申请No.2019-237880，该专利的全文作为参考并入本申请。

Claims (1)

1.一种用于纯化式[1]所示的聚乙二醇化合物的方法，包括下列的步骤(A)和(B)：
步骤(A)：将式[1]表示的化合物溶解在希尔德布兰德溶解度参数为8至10(cal/cm3)1/2的有机溶剂中以得到溶液的步骤，
步骤(B)：相对于1质量份式[1]的化合物，将0.1至1质量份且比表面积为50至200m2/g的由水滑石制成的吸附剂混合到溶液中以制备悬浮液的步骤，
Figure FDA0003715368930000011
(在式[1]中，
Z是从具有2至5个活性氢基团的化合物中去除活性氢基团而得到的残基；
A是氨基；
Y1和Y2各自独立地为醚键、酰胺键、酯键、氨基甲酸酯键、碳酸酯键、仲氨基、硫醚键、二硫键、硫酯键或这些的亚烷基；
聚合物表示聚乙二醇链；
X表示具有1至7个碳原子的烃基、具有3至9碳原子的缩醛基、羟基、羟基的保护基团、羧基、羧基的保护基团、巯基、巯基的保护基团、氰基或含有它们的亚烷基；
l和m分别满足l＝1或0，m＝1或0；并且
a'和b是满足0≤a≤4、0≤b≤4并且l≤a+b≤4的整数)。
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