WO2021085497A1 - がんを治療するための医薬、組み合わせ医薬、医薬組成物、免疫応答性細胞、核酸送達媒体、及び製品 - Google Patents

がんを治療するための医薬、組み合わせ医薬、医薬組成物、免疫応答性細胞、核酸送達媒体、及び製品 Download PDF

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耕治 玉田
幸美 佐古田
圭志 安達
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    • A61K2239/46—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the cancer treated
    • A61K2239/48—Blood cells, e.g. leukemia or lymphoma
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
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    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
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    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/03—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a transmembrane segment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/20—Fusion polypeptide containing a tag with affinity for a non-protein ligand
    • C07K2319/21—Fusion polypeptide containing a tag with affinity for a non-protein ligand containing a His-tag
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/33—Fusion polypeptide fusions for targeting to specific cell types, e.g. tissue specific targeting, targeting of a bacterial subspecies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/70—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction
    • C07K2319/74—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction containing a fusion for binding to a cell surface receptor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
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    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/20—Type of nucleic acid involving clustered regularly interspaced short palindromic repeats [CRISPRs]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2510/00—Genetically modified cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
    • C12N2740/00011—Details
    • C12N2740/10011—Retroviridae
    • C12N2740/10041—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2740/10043—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
    • C12N2740/00011—Details
    • C12N2740/10011—Retroviridae
    • C12N2740/13011—Gammaretrovirus, e.g. murine leukeamia virus
    • C12N2740/13041—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2740/13043—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2800/00—Nucleic acids vectors
    • C12N2800/10—Plasmid DNA
    • C12N2800/106—Plasmid DNA for vertebrates
    • C12N2800/107—Plasmid DNA for vertebrates for mammalian

Definitions

  • the present disclosure relates to drugs, combination drugs, pharmaceutical compositions, immune-responsive cells, nucleic acid delivery media, and products for treating cancer.
  • Cancer is also called a malignant neoplasm, and its treatment is one of the major goals in medicine. Conventionally, treatments using radiation and chemical anticancer agents have been performed, but the effects vary greatly depending on the type of cancer, and not all cancers can be highly effective.
  • CAR-T cell therapy using CAR-T cells obtained by modifying T cells so that a special protein called CAR (chimeric antigen receptor) can be produced using gene therapy technology has been developed in recent years. ing.
  • B-ALL B-cell acute lymphoblastic leukemia
  • DLBCL diffuse large B-cell lymphoma
  • T-cell therapy has been shown to be effective.
  • International Publication No. 2017/159736 describes interleukin 7 (IL-7) and chemokines (CC motifs) in immunocompetent cells that express cell surface molecules that specifically recognize cancer antigens such as CAR-T cells.
  • IL-7 interleukin 7
  • CC motifs chemokines
  • WO 2019/073973 is a T cell or B cell enhancer having memory function in the administration subject and T in the administration subject, which comprises a nucleic acid delivery medium, a nucleic acid encoding IL-7, and a nucleic acid encoding CCL19. Inducing agents that induce memory function in cells or B cells are described.
  • Japanese Patent Application Laid-Open No. 2018-538339 states that cells expressing mesothelin-specific CAR are administered in combination with an antibody against PD-L1 from the viewpoint of enhancing the effectiveness of treatment using CAR-T cells. It is described to provide compositions and methods for the treatment of diseases associated with the expression of mesothelin, including.
  • the present disclosure provides drugs, combination drugs, pharmaceutical compositions, immune-responsive cells, nucleic acid delivery media, and products for treating cancer, which have high anticancer effects. That is the issue.
  • the present disclosure includes the following aspects.
  • IL-7 interleukin 7
  • CC motif chemokine ligand 19
  • a combination drug for treating cancer in a subject including an immunosuppressive inhibitor.
  • the disclosure also includes the following aspects: In a subject comprising (a) one or more cells or nucleic acid delivery media or combinations thereof that jointly contain a nucleic acid encoding interleukin 7 and a nucleic acid encoding CCL19, and (b) an immunosuppressive inhibitor.
  • a combination drug for treating cancer comprising (a) one or more cells or nucleic acid delivery media or combinations thereof that jointly contain a nucleic acid encoding interleukin 7 and a nucleic acid encoding CCL19, and (b) an immunosuppressive inhibitor.
  • a combination drug for treating cancer comprising (a) one or more cells or nucleic acid delivery media or combinations thereof that jointly contain a nucleic acid encoding interleukin 7 and a nucleic acid encoding CCL19, and (b) an immunosuppressive inhibitor.
  • a combination drug for treating cancer further includes the following aspects: Immune-responsive cells expressing cell surface molecules that specifically recognize cancer antigens, interleukin 7, CCL19, and immuno
  • a drug, a combination drug, a pharmaceutical composition, an immunoresponsive cell, a nucleic acid delivery medium, and a product for treating cancer, which have a high anticancer effect are provided.
  • the pMSGV vector containing eGFP and not containing IL-7 and CCL19 (hereinafter, also referred to as eGFP-Conv. Vector; IL-7-F2A-CCL19-F2A-eGFP DNA fragment (SEQ ID NO: 10)) described in Examples. It is a figure which shows the map of the pMSGV vector (the vector which extracted the region encoding IL-7 and CCL19). It is a figure which shows the map of the pMSGV vector (hereinafter, also referred to as 7 ⁇ 19 expression vector) containing IL-7-F2A-CCL19-F2A-eGFP DNA fragment (SEQ ID NO: 10) described in Example.
  • eGFP-Conv. Vector IL-7-F2A-CCL19-F2A-eGFP DNA fragment (SEQ ID NO: 10)
  • Vector-introduced TCR-T cells (specifically, mouse T cells expressing spleen cell-derived P815 tumor antigen P1A-specific TCR without vector introduction.
  • vector-unintroduced P1A-TCRT Also referred to as cells.
  • Mouse T cells expressing P1A-specific TCR with or without vector introduction are collectively referred to as P1A-TCRT cells), eGFP-Conv.
  • each of the vector-introduced P1A-TCRT cells (hereinafter, also referred to as eGFP-expressing P1A-TCRT cells) and the 7 ⁇ 19 expression vector-introduced P1A-TCRT cells (hereinafter, also referred to as eGFP-expressing P1A-7 ⁇ 19 TCRT cells).
  • eGFP-expressing P1A-TCRT cells the vector-introduced P1A-TCRT cells
  • 7 ⁇ 19 expression vector-introduced P1A-TCRT cells hereinafter, also referred to as eGFP-expressing P1A-7 ⁇ 19 TCRT cells.
  • mastocytoma cells were subcutaneously injected into DBA / 2 mice, and after the DBA / 2 mice were irradiated, vector-unintroduced P1A-TCRT cells or eGFP-expressing P1A-TCRT cells and / or It is a graph which shows the relationship between the elapsed days and the survival rate when the anti-PD-1 monoclonal antibody was administered to the DBA / 2 mouse. In Examples, the relationship between the number of days elapsed and the tumor volume when no treatment was performed after subcutaneously injecting mastocytoma cells (P815) into DBA / 2 mice and irradiating the DBA / 2 mice is shown. It is a graph.
  • mastocytoma cells were subcutaneously injected into DBA / 2 mice, and after the DBA / 2 mice were irradiated, eGFP-expressing P1A-TCRT cells and anti-PD-1 monoclonal antibody were injected into the DBA / 2 is a graph showing the relationship between the number of days elapsed when administered to mice and the tumor volume.
  • mastocytoma cells (P815) were subcutaneously injected into DBA / 2 mice, the DBA / 2 mice were irradiated, and then eGFP-expressing P1A-7 ⁇ 19 TCRT cells were administered to the DBA / 2 mice.
  • mastocytoma cells P815 were subcutaneously injected into DBA / 2 mice, the DBA / 2 mice were irradiated, and then eGFP-expressing P1A-7 ⁇ 19 TCRT cells and anti-PD-1 monoclonal antibody were injected.
  • eGFP expression in which the PD-1 gene or ROSA26 gene was knocked down (disrupted).
  • Is. 6 is a graph showing the relationship between the number of days elapsed and tumor volume when neither P1A-TCRT cells nor anti-PD-1 monoclonal antibody were administered in the experiment of FIG. 6A.
  • FIG. 6 is a graph showing the relationship between the number of days elapsed and tumor volume when eGFP-expressing P1A-7 ⁇ 19 TCRT cells in which the ROSA26 gene was knocked down were administered in the experiment of FIG. 6A.
  • 6 is a graph showing the relationship between the number of days elapsed and tumor volume when eGFP-expressing P1A-7 ⁇ 19 TCRT cells in which the PD-1 gene was knocked down were administered in the experiment of FIG. 6A.
  • FIG. 6 is a graph showing the relationship between the number of days elapsed and tumor volume when eGFP-expressing P1A-7 ⁇ 19 TCRT cells in which the PD-1 gene was knocked down were administered in the experiment of FIG. 6A.
  • FIG. 6 is a graph showing the relationship between the number of days elapsed and tumor volume when eGFP-expressing P1A-7 ⁇ 19 TCRT cells in which the PD-1 gene was knocked down and an anti-PD-1 monoclonal antibody were administered in the experiment of FIG. 6A. ..
  • DBA / 2 mice inoculated with cancer cells were administered eGFP-expressing P1A-TCRT cells or eGFP-expressing P1A-7 ⁇ 19TCRT cells to express both eGFP and CD8 after complete tumor regression.
  • 3 is a graph showing the proportion of T cells expressing eGFP without expressing CD8 and the proportion of T cells expressing both CD8 and eGFP in the spleen cells obtained in the experiment of FIG. 7.
  • 3 is a graph showing the number of T cells expressing eGFP without expressing CD8 and the number of T cells expressing both CD8 and eGFP in the spleen cells obtained in the experiment of FIG. 7.
  • FIG. 3 is a graph showing the relationship between the number of days elapsed and the number of T cells expressing both CD8 and eGFP when the spleen cells obtained in the experiment of FIG. 7 were further co-cultured with P815 tumor cells.
  • 6 is a graph showing the relationship between the number of days elapsed and the IFN- ⁇ concentration in the culture supernatant when the spleen cells obtained in the experiment of FIG. 7 were further co-cultured with P815 tumor cells.
  • FIG. 5 is a graph showing the relationship between the number of days elapsed and tumor volume when P815 tumor cells were re-inoculated after complete tumor regression in the experiment of FIG. 5F and when P815 tumor cells were inoculated into naive DBA / 2 mice.
  • DBA / 2 mice are inoculated with P815 tumor cells (P815-hCD20 tumor cells) expressing human CD20 (hCD20), followed by intraperitoneal administration of cyclophosphamide, followed by anti-hCD20 CAR-expressing T cells or anti-anti-hCD20.
  • FIG. 5 is a graph showing the relationship between the passage of time and tumor volume when neither CAR-T nor antibody was administered in the experiment of FIG. 10A. In the experiment of FIG.
  • FIG. 10A it is a graph which shows the relationship between the time passage and the tumor volume when CAR-T was not administered but the anti-PD-1 monoclonal antibody was administered.
  • FIG. 5 is a graph showing the relationship between the passage of time and tumor volume when anti-hCD20 CAR-expressing T cells were administered and anti-PD-1 antibody was administered in the experiment of FIG. 10A.
  • FIG. 5 is a graph showing the relationship between the passage of time and tumor volume when anti-hCD20 CAR-IL7 / CCL19-expressing T cells were administered and control IgG was administered in the experiment of FIG. 10A.
  • FIG. 5 is a graph showing the relationship between the passage of time and tumor volume when anti-hCD20 CAR-IL7 / CCL19-expressing T cells were administered and an anti-PD-1 monoclonal antibody was administered in the experiment of FIG. 10A.
  • TIL tumor-infiltrating lymphocytes
  • c. -It is a scatter diagram which shows the result of having examined based on the expression of kit, CD11c, CD3, eGFP, CD4, and CD8.
  • FIG. 5 is a conceptual diagram showing a vector encoding CAR and anti-mouse PD-1scFv and a vector encoding CAR, IL-7, CCL19, and anti-mouse PD-1scFv used in Examples.
  • the contents of the present disclosure will be described in detail below.
  • the description of the constituent elements described below may be based on the representative embodiments of the present disclosure, but the present disclosure is not limited to such embodiments.
  • the upper limit value or the lower limit value described in one numerical range may be replaced with the upper limit value or the lower limit value of another numerical range described stepwise. ..
  • the upper limit value or the lower limit value of the numerical range may be replaced with the value shown in the examples.
  • the amount of each component in the composition described in the present disclosure is a plurality of applicable substances present in the composition when a plurality of substances corresponding to each component are present in the composition, unless otherwise specified. It means the total amount of substances.
  • a immune-responsive cells expressing cell surface molecules specifically recognizing cancer antigens, interleukin 7 (IL-7), and CCL19, and (b) immunity.
  • a combination drug (hereinafter, also referred to as “combination drug A according to the present disclosure”) for treating cancer in a subject, which contains an inhibitory inhibitor, is provided.
  • the present inventors have found that an extremely high cancer treatment effect can be obtained by the combination drug A according to the present disclosure.
  • the combination drug A according to the present disclosure immune-responsive cells expressing cell surface molecules, IL-7 and CCL19, which specifically recognize cancer antigens (hereinafter, "immune response according to the present disclosure”). (Also referred to as "sex cell A”) is used.
  • sex cell A immune response according to the present disclosure
  • One or more of the events such as induction of intracellular signal transduction occur, and an attack on cancer cells of a person suffering from cancer (hereinafter, also referred to as “cancer-affected person") is started.
  • cancer-affected person an attack on cancer cells of a person suffering from cancer
  • cancer-affected person an attack on cancer cells of a person suffering from cancer
  • cancer cells have an immunosuppressive mechanism that suppresses immune-responsive cells from attacking cancer cells or issuing instructions to attack cancer cells. The immune attack on cancer cells is suppressed.
  • the immunosuppressive inhibitor which is one of the components of the combination drug A according to the present disclosure, inhibits the immunosuppressive mechanism by cancer cells, so that the immune system of the cancer-affected person attacks the cancer cells. It will be easier.
  • the immune-responsive cell A according to the present disclosure also expresses IL-7 and CCL19, so that not only the immune-responsive cell A according to the present disclosure but also the endogenous immunity of the cancer-affected person Responsive cells also accumulate around the cancer cells, which may enable them to attack the cancer cells more effectively.
  • the combination drug A according to the present disclosure contains a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen, immune-responsive cells expressing IL-7 and CCL19, and an immunosuppressive inhibitor, thereby producing a cancer antigen.
  • the combination of immune-responsive cells expressing specifically recognized cell surface molecules, secreted IL-7 and CCL19, and factors consisting of immunosuppressive inhibitors exerted a synergistic effect, which was greatly improved. It is thought to be effective in treating cancer. This synergistic effect is unpredictable from the individual effects of each factor.
  • the cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen in the present disclosure is a molecule that specifically binds to a cancer antigen, and even if it is a polypeptide as long as it specifically binds to a cancer antigen, it is an aptamer. It may be a nucleic acid such as, or a molecule other than these.
  • the cancer antigen means a substance such as a protein or glycolipid that is expressed higher in cancer cells than in normal cells or specifically expressed in cancer cells, and the cancer antigen is tumor-related. Examples thereof include antigens, cancer testis antigens, angiogenesis-related antigens, and epitope peptides of cancer neoantigens (neoantigens) due to gene mutations.
  • cancer antigens specifically recognized by cell surface molecules include WT1, MART-1, NY-ESO-1, MAGE-A1, MAGE-A3, MAGE-A4, and MAGE-A10.
  • WT1 MART-1
  • NY-ESO-1 MAGE-A1, MAGE-A3, MAGE-A4, and MAGE-A10.
  • Glypican-3 KIF20A
  • Survivin AFP, gp100, MUC1, PLL3, PRSS21, Antigen4, FAP, Integrin ⁇ 7, CT-83 (KK-LC-1), KRAS (variant, including mKRAS), Epha2, PRAME, HA-1, PAP-10, PAP-5, TRP2-1, SART-1, VEGFR1, VEGFR2, NEIL3, MPHOSPH1, DEPDC1, FOXM1, CDH3, TTK, TOMM34, URLC10, KOC1, UBE2T, TOPK, ECT2,
  • proteins such as MESOTHELIN, NKG2D and P1A, and glycolipids such
  • CD20 examples include CD20, EGFR (EGFRvIII, etc.), EGFRvariant, FITC, CD19, CD22, CD33, PSMA, ROR1, c-Met, HER2, CEA, CD7, CD10, CD30, CD34, CD38, CD41, CD44, CD74.
  • the cell surface molecule one or more kinds of cell surface molecules such as these may be contained.
  • the organism from which these antigens are derived can be the species to be treated by the combination drug A according to the present disclosure, for example, human.
  • cell surface molecules that specifically recognize cancer antigens include cell surface receptors, artificial receptors, and adhesion factors that specifically recognize cancer antigens.
  • the cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen may have only the function of binding to the cancer antigen and arranging the immune-responsive cell A according to the present disclosure in the vicinity of the cancer cell. In order to further enhance the therapeutic effect, the cell may also have a function of inducing signal transduction that activates the immune response of the immune-responsive cell.
  • the cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen may be, for example, an antibody or an antibody fragment that specifically recognizes a cancer antigen.
  • the antibody or antibody fragment is not limited to IgM, IgD, IgG, IgA, IgE and the like, and may be a low molecular weight antibody such as Fab and scFv.
  • the cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen include a T cell receptor (TCR) that specifically recognizes a cancer antigen, a chimeric antigen receptor (CAR) that specifically recognizes a cancer antigen, and the like.
  • TCR T cell receptor
  • CAR chimeric antigen receptor
  • a molecule that imparts a specific ability to discriminate against cancer to a cell by being expressed on the cell surface can be mentioned.
  • TCR is an example of the cell surface receptor
  • CAR is an example of the artificial receptor
  • antibodies including small molecule antibodies such as Fab, Fab', F (ab') 2 , scFv
  • the adhesion factor may be a molecule other than an antibody, such as a sugar chain or an aptamer.
  • TCR is an antigen receptor molecule expressed on the cell membrane of T cells.
  • TCR exists as a heterodimer consisting of alpha and beta chains, or gamma and delta chains, and activates T cells by recognizing antigen molecules bound to major histocompatibility complex (MHC) molecules. It is known to become.
  • MHC major histocompatibility complex
  • the TCR is a heterodimer consisting of an alpha chain and a beta chain (alpha beta TCR) as long as it specifically recognizes a cancer antigen, but a heterodimer consisting of a gamma chain and a delta chain (gamma delta). It may be TCR).
  • the TCR may be endogenous or exogenous TCR (recombinant TCR).
  • TIL tumor-infiltrating lymphocytes
  • TIL tumor-affiliating lymph nodes
  • peripheral blood lymphocytes peripheral blood lymphocytes
  • pleural lymphocytes pleural lymphocytes
  • ascites examples include, but are not limited to, lymphocytes.
  • Techniques for the separation of TCR expressing TCR with a given antigen-binding property include density gradient centrifugation; resetting; coupling to particles that change cell density; magnetic separation with antibody-coated magnet beads; affinity. Chromatography (eg, affinity chromatography with negative selection); cytotoxic agents linked to or used in combination with monoclonal antibodies, including complements and cytotoxins.
  • transgenic animals such as transgenic mice modified to express a specific TCR have also been developed.
  • CAR is an artificial chimeric protein that fuses a single-chain antibody that recognizes cell surface antigens of cancer cells with a signal transduction region that induces activation of T cells.
  • the CAR may include, for example, a single chain antibody region that recognizes a cell surface antigen of a cancer cell, a transmembrane region, and a signal transduction region that induces activation of T cells.
  • the cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen in the combination drug A according to the present disclosure is CAR, the number of immune-responsive cells A according to the present disclosure administered as a component of the combination drug A is determined. Even if the number of CAR-T cells is smaller than the number of CAR-T cells (usually 1 ⁇ 10 6 or more) administered in the conventional method using CAR-T cells alone, it is possible to achieve the same or higher effect.
  • the single chain antibody (scFv) in CAR includes a light chain variable region and a heavy chain variable region derived from the antigen binding site of the monoclonal antibody, and a linker peptide is located between the light chain variable region and the heavy chain variable region. Oligos or polypeptides can be mentioned.
  • a single chain antibody that recognizes a target cancer antigen can be produced by a known method. For example, after inoculating a mouse or the like with an antigen, lymphoid tissue is collected, a library of antibody genes is prepared, and a base sequence encoding an antibody that recognizes a cancer antigen is obtained by antibody direct cloning, and the base sequence is used as the basis.
  • a single chain antibody may be designed.
  • a hybridoma may be prepared using the collected lymphoid tissue, a hybridoma encoding an antibody that recognizes a cancer antigen may be identified to obtain a monoclonal antibody, and a single-chain antibody may be designed based on the sequence information. Good.
  • a single-chain antibody library prepared from healthy human B cells, an antibody library prepared from cancer-affected B cells having an antiserum showing high neutralizing activity against cancer antigens, and the like.
  • a single-chain antibody library may be prepared and presented on a phage display to select a single-chain antibody that recognizes a cancer antigen.
  • the immune-responsive cell activation signal transduction region is a region capable of signaling intracellularly when the single-stranded antibody recognizes a cell surface antigen of a cancer cell, and is CD28, 4-1BB (CD28, 4-1BB). It may contain at least one or more selected from the polypeptides of any of the intracellular regions of CD137), GITR, CD27, OX40, HVEM, CD3 ⁇ , and FcReceptor-associated ⁇ chain, CD28, It may contain polypeptides of three intracellular regions, 4-1BB and CD3 ⁇ .
  • polypeptides of each intracellular region may be linked via an oligopeptide linker consisting of 2 to 10 amino acids or a polypeptide linker, and examples of such a linker sequence include a glycine-serine continuous sequence.
  • Activation of immune-responsive cells means initiating an immune response by inducing intracellular signal transduction or changes in protein expression.
  • CD3 chains assemble in response to ligand binding and immunoreceptor tyrosine-based inhibitory motifs (ITAMs)
  • ITAMs immunoreceptor tyrosine-based inhibitory motifs
  • an endogenous TCR or an extrinsic CAR binds to an antigen, it contains a collection of many molecules near the bound receptor (eg, CD4 or CD8, CD3 ⁇ / ⁇ / ⁇ / ⁇ , etc.).
  • the formation of immunological synapses can occur. This assembly of membrane-bound signaling molecules phosphorylates the ITM motif contained within the CD3 chain.
  • This phosphorylation can thus initiate the immune-responsive cell activation pathway and ultimately activate transcription factors such as NF- ⁇ B and AP-1. These transcription factors produce IL-2 for the proliferation and expression of major regulatory T cell proteins, eg, to elicit overall T cell gene expression and initiate a T cell-mediated immune response. To increase.
  • the cell membrane penetrating region in CAR includes CD8, ⁇ chain of T cell receptor, ⁇ chain, CD28, CD3 ⁇ , CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134. , CD137, CD154, or GITR-derived polypeptide in the transmembrane region.
  • the transmembrane region may be, for example, a polypeptide of the human CD8 transmembrane region.
  • the transmembrane region anchors CAR to the cell membrane of T cells.
  • the transmembrane region may include a hinge region consisting of any oligopeptide or polypeptide and having a length of 1 to 100 amino acids, more specifically 10 to 70 amino acids.
  • the hinge region the hinge region of the human CD8 can be mentioned.
  • a spacer made of any oligopeptide or polypeptide is provided between the single-chain antibody that recognizes the cell surface antigen of cancer cells and the transmembrane region, the transmembrane region and the immunoresponsive cell activation signal transduction region.
  • a region may be provided.
  • the length of the spacer region can be 1 to 100 amino acids, more specifically 10 to 50 amino acids, and the spacer region can be a glycine-serine continuous sequence.
  • the amino acid sequence of the cell surface molecule that specifically recognizes the cancer antigen is, for example, a mammalian-derived amino acid sequence, and may be a human-derived amino acid sequence from the viewpoint of suppressing rejection when administered to humans.
  • the amino acid sequence can be appropriately obtained by searching public literature and databases such as NCBI (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/guide/).
  • the cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen may be a human TCR or a CAR in which a single-chain antibody region is humanized.
  • the cell surface molecule that specifically recognizes the cancer antigen may be indirectly recognized as long as the recognition of the cancer antigen is specific.
  • a molecule such as an antibody that specifically recognizes a cancer antigen is administered to a subject simultaneously or continuously with the immune-responsive cell A according to the present disclosure to recognize the molecule such as the antibody, or the antibody or the like.
  • the immune-responsive cell A according to the present disclosure can indirectly and specifically recognize the cancer antigen.
  • examples of the case of recognizing an antibody include CD16 as a cell surface molecule
  • examples of a tag labeling a molecule such as an antibody include FITC and the like.
  • IL-7 is a cytokine of approximately 25 kDa structurally produced from bone marrow and thymus-derived stroma cells. IL-7 signals through the IL-7 receptor to promote the differentiation of hematopoietic stem cells into lymph progenitor cells, giving rise to T cells, B cells, and NK cells.
  • the amino acid sequence of IL-7 is, for example, a mammalian-derived amino acid sequence, and may be a human-derived amino acid sequence from the viewpoint of suppressing rejection.
  • the amino acid sequence can be appropriately obtained by searching public literature and databases such as NCBI (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/guide/).
  • Chemokine (CC motif) ligand 19 is a cytokine belonging to the CC chemokine family and is highly expressed in the thymus and lymph nodes.
  • the amino acid sequence of CCL19 is, for example, a mammalian-derived amino acid sequence, and may be a human-derived amino acid sequence from the viewpoint of suppressing rejection.
  • the amino acid sequence can be appropriately obtained by searching public literature and databases such as NCBI (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/guide/).
  • Immune-responsive cells refer to cells involved in the immune response.
  • immune-responsive cells include lymphocytes such as T cells, natural killer cells (NK cells) and B cells, antigen-presenting cells such as monospheres, macrophages and dendritic cells, neutrophils and eosinophils. , Basophils, granulocytes such as mast cells.
  • T cells include alpha beta T cells, gamma delta T cells, CD8 + T cells, CD4 + T cells, tumor infiltrating T cells, memory T cells, naive T cells, natural killer T (NKT) cells, etc. Can be mentioned.
  • Immune-responsive cells are isolated from immune cells that invade body fluids such as blood and bone marrow fluid, tissues such as spleen, thoracic gland, and lymph nodes, or cancer tissues such as primary tumors, metastatic tumors, and cancerous ascites. , And immune-responsive cells prepared from pluripotent stem cells such as iPS cells and ES cells or somatic stem cells such as hematopoietic stem cells may be used.
  • the immune-responsive cells may be T cells derived from mammals such as chicks, dogs, cats, pigs, and mice, and may be T cells derived from chicks.
  • the immune-responsive cell A expresses IL-7 and CCL19, which are cell surface molecules that specifically recognize cancer antigens.
  • IL-7 and CCL19 are cell surface molecules that specifically recognize cancer antigens.
  • "expressing IL-7 and CCL19, cell surface molecules that specifically recognize cancer antigens” means that the cell surface molecules that specifically recognize cancer antigens, IL-7 and CCL19, have an immune response.
  • At least a part of the cell surface molecules produced by sex cells that specifically recognize cancer antigens are located on the cell surface (cell surface outside the cell), and IL-7 and CCL19 are secreted extracellularly. Point to.
  • the immune-responsive cell A is, for example, an immune-responsive cell collected from a living body, a pluripotent stem cell such as iPS cell or ES cell, or an immune-responsive cell derived from a somatic stem cell such as a hematopoietic stem cell. It can be obtained by introducing a gene encoding a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen, a gene encoding IL-7, and a gene encoding CCL19. Alternatively, immunoreactive cells that endogenously express a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen (for example, a TCR that specifically recognizes a cancer antigen) are collected from a living body to obtain IL-7.
  • a pluripotent stem cell such as iPS cell or ES cell
  • an immune-responsive cell derived from a somatic stem cell such as a hematopoietic stem cell. It can be obtained by introducing a gene encoding a cell surface molecule that specifically recognizes a
  • the expression of a gene encoding XX and the expression of a nucleic acid encoding XX are used interchangeably.
  • the nucleic acid may be single-stranded or double-stranded, DNA or RNA, but is preferably double-stranded DNA.
  • rejection can be minimized by collecting the immune-responsive cells of the cancer-affected person treated by the combination drug A according to the present disclosure (that is, his own). it can. However, it does not preclude the use of allogeneic immune-responsive cells. That is, the immunoresponsive cell A according to the present disclosure may or may not be an immunoresponsive cell derived from the subject itself.
  • the gene encoding the cell surface molecule that specifically recognizes the cancer antigen, the gene encoding IL-7, and the gene encoding CCL19 are each present in the genome of the immune-responsive cell A according to the present disclosure. It may be carried in a vector outside the genome, or may be present in the genome from the viewpoint of stability of gene carrying, for example. In addition, the gene encoding the cell surface molecule that specifically recognizes the cancer antigen, the gene encoding IL-7, and the gene encoding CCL19 may be present together in the genome, and may be present separately ( It may exist (separately).
  • the cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen is a heterodimer or a heteromultimer, for example, a TCR consisting of an ⁇ dimer or a ⁇ dimer
  • the heterodimer Genes encoding each molecule that constitutes a body or heteromultimer may be present collectively in the genome or may be present separately (separately).
  • the gene encoding IL-7 and the gene encoding CCL19 are exogenous and both are integrated into the genome of immunoresponsive cell A according to the present disclosure, or said immunoresponsive cell. It is encoded together or separately in one or more vectors present in A. Whether or not each gene is present in the cell can be easily confirmed by using a known method such as PCR.
  • exogenous means that the gene or nucleic acid is not a gene or nucleic acid originally present in the cell, but a gene or nucleic acid introduced from the outside.
  • MART1-specific TCR (Cancer Res. 54,5265-5268 (1994)), MAGE-A3-specific TCR (Anticancer Res., 20,1793-1799 (2000)), gp100-specific TCR ( J.Immunol.170,2186-2194 (2003)), NY-ESO-1 specific TCR (J.Immunol.,174,4415-4423 (2005)), WT1-specific TCR (Blood, 106,470-476 (2005)) )), MAGE-A1-specific TCR (Int.Immunol., 8,1463-1466 (1996)), P1A-specific TCR (Sarma, S., Y. Guo, Y. Guilloux, C.
  • the base sequence of the gene encoding TCR is as long as it can recognize the target antigen molecule and activate T cells. For example, 80% or more, more specifically 85% or more, more specifically 90% or more, more specifically 95% or more, more specifically 98% or more with the base sequence encoding the TCR described in 1. It may be a base sequence having the sequence identity of.
  • the sequence identity of amino acid sequences and the sequence identity of base sequences can be evaluated by default parameters using, for example, the BLAST (National Library of Medicine) program.
  • the base sequence of the gene encoding TCR maintains the base sequence encoding CDR in the base sequence encoding TCR described in the above document, and in the base sequence of a region other than the base sequence encoding CDR. 60% or more, more specifically 70% or more, more specifically 80% or more, more specifically 90% or more of the base sequence of the region in the base sequence encoding TCR described in the above document. More specifically, it may be a base sequence having 95% or more sequence identity.
  • the base sequence of TCR varies depending on the antigen specificity of TCR, and T cells expressing TCR that binds to a desired antigen may be isolated and the base sequence of the TCR may be analyzed.
  • the nucleotide sequence of a gene encoding a TCR that specifically recognizes a specific antigen is a cytotoxic T cell (CTL) induced using the specific antigen by using a method known in the art. It can be obtained by analyzing the nucleotide sequences encoding the alpha chain and beta chain as the TCR subunit of (International Publication No. 2007/032255, and Morgan et al., J Immunol, 171, 3288 (2003)). ..
  • the base sequence encoding each strand may be amplified and analyzed by the PCR method.
  • the PCR primers are, for example, a 5'-R primer as a 5'side primer (5'-gtccagcatcgttcat-3': SEQ ID NO: 1) and a 3-'specification for the TCR alpha chain C region as a 3'side primer.
  • TRa-C primer (5'-tcagctggaccaccagcggcgt-3': SEQ ID NO: 2), 3-TRb-C1 primer specific for TCR beta chain C1 region (5'-tcagaatccctttctctttgtgac-3': SEQ ID NO: 3), or TCR beta It may be, but is not limited to, a 3-TRbeta-C2 primer (5'-ctagccctgtggaatccttttctctcttt-3': SEQ ID NO: 4) specific for the chain C2 region.
  • the antigen-specific TCR can bind to a target cell presenting an antigen (eg, a peptide) with high binding strength.
  • an antigen eg, a peptide
  • proper selection of immune-responsive cell types can mediate the efficient killing of target cells that present antigenic peptides.
  • the base sequence encoding CAR is not particularly limited as long as it is a base sequence encoding a polypeptide constituting CAR, and is a single-chain antibody that recognizes a cell surface antigen of a cancer cell, a transmembrane region, and a T cell. Contains a base sequence encoding a polypeptide in the signaling region that induces activation of.
  • Genbank number: NM_006139.2 (updated: May 10, 2014) for human CD28
  • Genbank number: NM_001561.5 (updated: March 16, 2014) for human 4-1BB
  • human As for CD3 ⁇ the one registered as Genbank number: NM_000734.3 (updated date: August 12, 2014) can be exemplified.
  • a monoclonal antibody that recognizes the target cell surface antigen is prepared, and the amino acid sequence of the monoclonal antibody is determined by a known method such as the Edman method. However, it can also be obtained based on such an amino acid sequence.
  • a method for producing a monoclonal antibody a method for producing a monoclonal antibody, a method for producing by transforming a host with an expression vector containing an antibody gene by a genetic engineering method, or a method for immunizing a transgenic animal with a desired antigen. A method of producing the above can be mentioned.
  • the base sequence encoding IL-7 can be appropriately selected according to the type of immune-responsive cell A according to the present disclosure, and is, for example, a base sequence encoding the amino acid sequence of human IL-7 (SEQ ID NO: 5). Also, as long as it has an effect of enhancing the cell proliferation rate as IL-7, for example, 80% or more, more specifically 85% or more, more specifically 90% or more of the base sequence shown in SEQ ID NO: 5. , More specifically, it may be a base sequence having 95% or more, more specifically 98% or more sequence identity.
  • the base sequence encoding CCL19 can be appropriately selected according to the type of immune-responsive cell A according to the present disclosure, and may be, for example, a base sequence encoding the amino acid sequence (SEQ ID NO: 6) of human CCL19. , For example, 80% or more, more specifically 85% or more, more specifically 90% or more, more specifically 95% with the nucleotide sequence shown in SEQ ID NO: 6, as long as it has a T cell migration action as CCL19. As described above, more specifically, it may be a base sequence having 98% or more sequence identity.
  • the gene encoding the cell surface molecule that specifically recognizes the cancer antigen, the gene encoding IL-7, and the gene encoding CCL19 are the appropriate promoter controls. Make sure it is below.
  • the immune-responsive cells A include IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, in addition to cell surface molecules, IL-7, and CCL19, which specifically recognize cancer antigens.
  • Techniques for the separation of immune-responsive cells A include density gradient centrifugation; resetting; coupling to particles that alter cell density; magnetic separation with antibody-coated magnet beads; affinity chromatography (eg, affinity chromatography). , Affinity chromatography with negative selection); Cytotoxic agents linked to or used in combination with monoclonal antibodies, including complements and cytotoxins. (Not limited to); Panning with an antibody bound to a solid matrix such as a plate, chip; Eltriation; Selective proliferation by antigen stimulation; Separation using a complex of MHC and antigen, but is not limited thereto.
  • T cells expressing a TCR that specifically recognizes a predetermined cancer antigen are isolated.
  • One or more of the gene encoding IL-7, the gene encoding CCL19, and the gene encoding CCL19 are introduced from the outside.
  • Nucleic acids containing a gene encoding a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen for introduction into an immune-responsive cell a nucleic acid containing a gene encoding IL-7, and a nucleic acid containing a gene encoding CCL19
  • a nucleic acid containing a gene encoding IL-7 a nucleic acid containing a gene encoding CCL19
  • Each can be produced by a known technique such as a method of chemically synthesizing or a method of amplifying by PCR based on the information of the base sequence encoding the molecule.
  • the codon in the coding region may be modified to optimize the expression of the gene in the immune-responsive cell into which the nucleic acid containing the gene is introduced.
  • the gene to be introduced may be introduced in a state of being carried on different vectors, or may be introduced in a state of carrying two or more kinds of genes on the same vector.
  • the gene encoding IL-7 and the gene encoding CCL19 may be introduced in separate vectors.
  • Both genes may be carried and introduced into the same vector.
  • a gene encoding a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen, a gene encoding IL-7, and a gene encoding CCL19 may be introduced by supporting them on separate vectors.
  • a gene encoding a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen and a gene encoding IL-7 are carried on the same vector, and a gene encoding CCL19 is carried on a separate vector and introduced.
  • a gene encoding a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen and a gene encoding CCL19 are carried on the same vector, and a gene encoding IL-7 is carried on a separate vector and introduced. It ’s okay, (Iv) A gene encoding IL-7 and a gene encoding CCL19 are carried on the same vector, and a gene encoding a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen is carried on a separate vector and introduced. It ’s okay, (V) A gene encoding a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen, a gene encoding IL-7, and a gene encoding CCL19 may be carried on the same vector and introduced.
  • two or more kinds of genes may be introduced while being carried on the same vector.
  • the two or more genes will be present together in the immune-responsive cell.
  • vectors or group of vectors can be used.
  • A Vector containing a gene encoding a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen, a gene encoding IL-7, and a gene encoding CCL19
  • B-1 The following vectors (b-1) and Vector group consisting of vector (b-2):
  • B-1 A vector containing a gene encoding a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen;
  • B-2) A vector containing a gene encoding IL-7 and a gene encoding CCL19;
  • C Vector group consisting of the following vectors (c-1) and vector (c-2): (C-1) A vector containing a gene encoding a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen and a gene encoding IL-7;
  • C-2) Vector containing a gene encoding CCL19;
  • D Vector group consisting of the following vectors (d-1) and vector (d-2): (D-1) A vector
  • the vector group may be designed so that the gene is included in redundancy, and for example, the vector group consisting of the above (c-1) and (d-2) may be designed.
  • the gene encoding the cell surface molecule that specifically recognizes the cancer antigen is contained in both vectors, but the gene that encodes the cell surface molecule that specifically recognizes the cancer antigen contained in both vectors. May be the same or different from each other.
  • the method for introducing a gene-carrying vector into immune-responsive cells is not particularly limited, but known methods such as a virus infection method, a transposon method, a calcium phosphate method, a lipofection method, a microinjection method, and an electroporation method can be used. Can be mentioned. A method of introducing a foreign gene by a viral infection method capable of introducing the gene into the genome can bring about stability of gene support.
  • GP2-293 cells manufactured by Takara Bio
  • Plat-GP cells manufactured by Cosmo Bio
  • PG13 cells ATCC CRL-10686
  • PA317 cells ATCC CRL-
  • a method of transfecting packaging cells such as 9078) to prepare a recombinant virus and infecting immune-responsive cells with the recombinant virus can be mentioned, such as Retrovirus packaging Kit Eco (manufactured by Takara Bio Co., Ltd.). It may be carried out using a commercially available kit. By using an MSCV retrovirus expression system or the like, it is possible to introduce a foreign gene into the genome.
  • the gene encoding IL-7, the gene encoding CCL19, and if necessary, the gene encoding the cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen are integrated into the genome using a known gene editing technique. You can also do it.
  • Known gene editing techniques include techniques using endonucleases such as zinc finger nucleases, TALENs (transcriptional activation-like effector nucleases), and CRISPR (Crustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeat) -Cas systems.
  • endonucleases such as zinc finger nucleases, TALENs (transcriptional activation-like effector nucleases), and CRISPR (Crustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeat) -Cas systems.
  • the integration of a gene encoding another foreign protein, which is optionally introduced, into the genome can be performed by the same method.
  • genes when these genes are integrated into the genome of immunoresponsive cells, they can be actuated in a non-coding region of the genome together with an upstream promoter that controls the gene (that is, can be expressed under the control of the promoter). ) It may be integrated or it may be operably integrated downstream of a promoter already present in the genome without a promoter. Examples of promoters already present in the genome include promoters of TCR ⁇ and TCR ⁇ .
  • a vector carrying two or more of a gene encoding a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen, a gene encoding IL-7, and a gene encoding CCL19 is introduced into immune-responsive cells.
  • the order of the two or more genes in the vector is not particularly limited.
  • a sequence of these three types of genes The order is not limited.
  • a gene encoding a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen in the order from upstream (5'terminal side) to downstream (3'terminal side), a gene encoding a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen, a gene encoding IL-7, and CCL19. Regardless of the order in which the genes encoding cancer antigens are arranged, the genes encoding cell surface molecules that specifically recognize cancer antigens, the genes encoding CCL19, and the genes encoding IL-7 are arranged in this order. Even if the gene encoding IL-7, the gene encoding CCL19, and the gene encoding the cell surface molecule that specifically recognizes the cancer antigen are arranged in this order, the gene encoding IL-7 and the cancer antigen can be selected.
  • the gene encoding the cell surface molecule that specifically recognizes and the gene encoding CCL19 are arranged in the order, the gene encoding CCL19, the gene encoding the cell surface molecule that specifically recognizes the cancer antigen, and IL Even if the gene encoding -7 is arranged, the gene encoding CCL19, the gene encoding IL-7, and the gene encoding the cell surface molecule that specifically recognizes the cancer antigen are arranged in the order. May be good.
  • the order of the IL-7-encoding gene and the CCL19-encoding gene is not particularly limited, and IL
  • the gene encoding CCL19 may be located upstream or downstream with respect to the gene encoding -7.
  • C-1 In a vector containing a gene encoding a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen and a gene encoding IL-7, the cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen is encoded.
  • the order of the genes encoding IL-7 and the genes encoding IL-7 is not particularly limited, and the gene encoding IL-7 is placed upstream of the gene encoding the cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen. Or it may be arranged downstream.
  • (D-2) A gene encoding a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen in a vector containing a gene encoding a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen and a gene encoding CCL19.
  • the order of the genes encoding CCL19 is not particularly limited, and even if the gene encoding CCL19 is arranged upstream with respect to the gene encoding the cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen, it is arranged downstream. You may.
  • the gene encoding the cell surface molecule that specifically recognizes the cancer antigen, the gene encoding IL-7, and the gene encoding CCL19 may be transcribed by different promoters, and the internal ribosome entry site (IRES) may be transcribed. : International ribosome entry site) or self-cleaving 2A peptide may be used for transcription with a single promoter.
  • the base sequence between the respective genes may contain any base sequence as long as each gene can be expressed, but a self-cleaving peptide (2A peptide) or a self-cleaving peptide (2A peptide) or It may contain a base sequence encoding an IRES, or may contain a base sequence encoding a 2A peptide.
  • the base sequence between genes that can contain a self-cleaving peptide (2A peptide) or a base sequence encoding IRES may be, for example, a base sequence between a gene encoding IL-7 and a gene encoding CCL19.
  • each of the regions between these genes can contain a self-cleaving peptide (2A peptide) or a base sequence encoding an IRES, if desired.
  • the 2A peptide is a self-cleaving peptide derived from a virus.
  • the endoplasmic reticulum is between GP and GP (the position of one residue from the C-terminal) in the amino acid sequence. It has the characteristic of being cut by (Szymczak et al., Expert Opin. Biol. Ther. 5 (5): 627-638 (2005)). Therefore, the nucleic acids integrated before and after the 2A peptide are expressed independently of each other in the cell.
  • the 2A peptide may be a 2A peptide derived from picornavirus, rotavirus, insect virus, aft virus or tripanosoma virus, or a 2A peptide (F2A) derived from picornavirus shown in SEQ ID NO: 8. Good.
  • the vector used for gene transfer into immune-responsive cells may be linear or cyclic, and may be a non-viral vector such as a plasmid, a viral vector, or a transposon vector.
  • the vector used for gene transfer into immune-responsive cells may contain one or more of a control sequence such as a promoter and a terminator, and a selectable marker sequence such as a drug resistance gene and a reporter gene. Even after the gene is introduced into immune-responsive cells, the promoter contained in the vector may be used to express the gene.
  • one or more of a gene encoding a cell surface molecule that operably recognizes a cancer antigen, a gene encoding IL-7, and a gene encoding CCL19 are placed downstream of the promoter sequence in the vector. By doing so, the gene can be efficiently transcribed.
  • the promoter examples include a retrovirus LTR promoter, an SV40 early promoter, a cytomegalovirus promoter, a virus-derived promoter such as the thymidine kinase promoter of simple herpesvirus, a phosphoglycerate kinase (PGK) promoter, an Xist promoter, and ⁇ -actin.
  • Mammalian-derived promoters such as promoters, RNA polymerase II promoters, and polypeptide chain elongation factor gene promoters can be mentioned.
  • a tetracycline-responsive promoter induced by tetracycline, an Mx1 promoter induced by interferon, or the like may be used.
  • a gene whose transcription is regulated by the promoter for example, a gene encoding a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen, a gene encoding IL-7, and CCL19 can be obtained. It is possible to control the expression of one or more of the encoding genes) according to the course of cancer treatment.
  • the viral vector examples include a retrovirus vector, a lentivirus vector, an adenovirus vector, and an adeno-associated virus vector.
  • retrovirus vector examples include a pMSGV vector (Tamada K. et al., Clin Cancer Res 18: 6436-6445 (2002)), a pMSCV vector (manufactured by Takara Bio Inc.), and the like. If a retrovirus vector is used, the transgene is incorporated into the genome of the host cell, so that the transgene can be stably expressed for a long period of time.
  • IL-7 and CCL19 which are cell surface molecules that specifically recognize cancer antigens in immune-responsive cells
  • flow cytometry ELISA
  • Western blotting or the like.
  • introduction of the gene encoding these can be confirmed by confirming the expression product as described above, or by PCR such as Northern blotting, Southern blotting, RT-PCR and the like.
  • the vector used for gene transfer contains a marker gene
  • the gene transfer can be confirmed by examining the expression of the marker gene inserted in the expression vector.
  • the immune-responsive cell A further expresses suicide genes such as herpes simplex virus thymidine kinase (HSV-TK) and inducible caspase-9 (inducible caspase-9) in order to induce apoptosis.
  • suicide genes such as herpes simplex virus thymidine kinase (HSV-TK) and inducible caspase-9 (inducible caspase-9) in order to induce apoptosis.
  • HSV-TK herpes simplex virus thymidine kinase
  • inducible caspase-9 inducible caspase-9
  • the genes of these enzymes can also be introduced into immune-responsive cells (for example, into the genome of immune-responsive cells) by the same procedure as described above.
  • the suicide gene means a gene having a function of directly or secondarily inducing a substance having cytotoxicity by expression and causing the cell expressing the suicide gene to die.
  • a drug that activates the function of the suicide gene is administered according to the course of cancer treatment, for example, when the tumor disappears, and is present in vivo.
  • the immunoresponsive cells A according to the present disclosure can be reduced or eliminated.
  • Examples of the suicide gene include genes encoding the herpes simplex virus thymidine kinase (HSV-TK) and inducible caspase-9 (inducible caspase-9) described in the following documents, and activate the functions of such genes.
  • Examples of the drug to be converted include ganciclovir for the former and AP1903, which is a dimer-inducing compound (chemical induction of dimerization: CID) for the latter (Cooper LJ., Et. Al. Cytotherapy. 2006; 8 (2): 105-17., Jensen M. C. et. Al. Biol Blood Marrow Transplant. 2010 Sep; 16 (9): 1245-56., Jones BS. Front Pharmacol. 2014 Nov 27; 5 : 254., Minagawa K., Pharmaceuticals (Basel). 2015 May 8; 8 (2): 230-49., Bole-Richard E., Front Pharmaceuticals. 2015 Aug 25; 6: 174).
  • An immunosuppressive inhibitor refers to a substance that releases or reduces the suppression of immune-responsive cell activation. Suppression of immune-responsive cell activation includes, for example, inhibition of the binding of cytotoxic T cells or helper T cells to dendritic cells by binding of regulatory T cells (Tregs) to dendritic cells; Inhibition of activation of cytotoxic T cells, helper T cells, etc. by secreting inhibitory cytokines such as - ⁇ and IL-10 and cytotoxic substances such as perforin and granzyme; PD-1 and PD-L1 It is caused by suppression of cytotoxic T cell activation by immunocheckpoints due to the interaction between CTLA-4 and CD80 / CD86.
  • An immunosuppressive inhibitor is a substance that releases the above-mentioned suppression of immune-responsive cell activation and enables the activation of immune-responsive cells.
  • immunosuppressive inhibitors include immune checkpoint inhibitors, Tregs, molecular target drugs that inhibit the infiltration, survival, or function of immunosuppressive cells such as bone marrow-derived immunosuppressive cells (MDSCs), CCR4 inhibitors, and indoleamines.
  • immunosuppressive cells such as bone marrow-derived immunosuppressive cells (MDSCs), CCR4 inhibitors, and indoleamines.
  • MDSCs bone marrow-derived immunosuppressive cells
  • CCR4 inhibitors CCR4 inhibitors
  • indoleamines examples include amine 2,3-dioxygenase (IDO) inhibitors, prostaglandin E2 [PGE2] inhibitors, and cytotoxic anticancer agents.
  • IDO amine 2,3-dioxygenase
  • PGE2 prostaglandin E2
  • cytotoxic anticancer agents cytotoxic anticancer agents.
  • the immunosuppressive inhibitor may be an antibody, for example, an IgG mono
  • the immune checkpoint inhibitor is, for example, an immune checkpoint molecule (eg PD-1, CTLA-4, BTLA, TIM-3, TIGIT, LAG-3, etc.) or a ligand of an immune checkpoint molecule (eg PD-L1, PD). -L2, CD80 / CD86, Signal-15, etc.) can be bound to prevent the ligand from initiating signal transduction from the immune checkpoint molecule, thereby reducing the inhibitory response to the immune response.
  • Molecular-targeted drugs that inhibit the infiltration, survival, or function of immunosuppressive cells such as Tregs and MDSCs reduce the amount of Tregs that infiltrate into cancer tissues by, for example, inhibiting tyrosine kinases, resulting in cancer.
  • CCR4 inhibitors can reduce immunosuppression in the cancer microenvironment by inhibiting the action of the chemokine receptor CCR4 to attract Tregs.
  • the IDO inhibitor can suppress the production of kynurenine by inhibiting the enzymatic activity of IDO or suppressing the expression of IDO itself, and can reduce the Treg activation by kynurenine.
  • the PGE2 inhibitor can reduce immunosuppression in the cancer microenvironment by suppressing PGE2 from binding to the prostaglandin EP4 receptor on the surface of the Treg to increase the immunosuppressive effect of the Treg.
  • Cytotoxic anticancer agents can reduce inhibition of the immune response by reducing the number of immunosuppressive cells such as Tregs.
  • immune checkpoint inhibitors include PD-1 inhibitors, PD-L1 inhibitors, CTLA-4 inhibitors, CD47 inhibitors, SIRP ⁇ inhibitors, BTLA inhibitors, TIM-3 inhibitors, TIGIT inhibitors, Examples include LAG-3 inhibitor, Sigma-15 inhibitor, galectin-9 inhibitor and the like.
  • molecular-targeted drugs that inhibit the infiltration, survival, or function of immunosuppressive cells such as Treg and MDSC include sorafenib, sunitinib, and the like.
  • CCR4 inhibitors include anti-CCR4 antibodies (eg, mogamulizumab) and the like.
  • IDO inhibitors include epacadostat and the like.
  • prostaglandin E2 [PGE2] inhibitors include aspirin and the like.
  • cytotoxic anticancer agents include cyclophosphamide, gemcitabine and the like.
  • Immunosuppression inhibitors are PD-1 inhibitor, PD-L1 inhibitor, PD-L2 inhibitor, CTLA-4 inhibitor, BTLA (B-and T-lymphocyte attenuator) inhibitor, TIM-3 (T-cell). Selected from the group consisting of immunoglobulin and mucin domain 3) inhibitors, TIGIT (T-cell immunoreceptor with Ig and ITIM domains) inhibitors, LAG-3 (Lymphocyte Activation Gene-3) inhibitors, and Sigma-15 inhibitors. It may contain one or more kinds.
  • the immunosuppressive inhibitor in the combination drug A according to the present disclosure may be an immune checkpoint inhibitor, more specifically, a PD-1 inhibitor or a PD-L1 inhibitor, and more specifically. May be an antibody against PD-1 or an antibody against PD-L1.
  • antibodies against PD-1 include Nivolumab, Pembrolizumab, Tripalimab, Cemiplimab-rwlc, Sintilimab and the like.
  • Examples of antibodies against PD-L1 include Atezolizumab, Durvalumab, Avelumab, and the like.
  • Examples of antibodies against CTLA-4 include Ipilimumab and the like.
  • Other examples include antibodies against CD47 and SIRP ⁇ .
  • IL-7 and CCL19 are also expressed, and an immunosuppressive inhibitor. Not only does it exert a cancer-suppressing effect by cell surface molecules that specifically recognize cancer antigens, but it also has immunosuppressive properties in the cancer microenvironment due to the combination of IL-7, CCL19 and an immunosuppressive inhibitor. It is considered that the effect of inducing and activating endogenous cytotoxic T cells and the like around cancer cells can be obtained.
  • the combination drug A according to the present disclosure when the immunoresponsive cell A according to the present disclosure is simply administered and no immunosuppressive inhibitor is administered, or a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen is used. Although it is expressed, IL-7 and CCL19 can bring about an improved cancer therapeutic effect that cannot be achieved by co-administration of immune-responsive cells that are not expressed and an immunosuppressive inhibitor.
  • the cancer therapeutic effect can be evaluated by, for example, a decrease in the number of tumor cells, a decrease in tumor size, a disappearance of a tumor, a decrease in tumor load, etc. in a mammal, for example, a human subject.
  • the immunosuppressive inhibitor activates the functions of immune-responsive cells in general in the immunosuppressive microenvironment around the cancer, not only the immune-responsive cells A according to the present disclosure but also endogenous immunity It improves the cancer cell attack activity of responsive cells. Therefore, even if the immunosuppressive inhibitor is, for example, an immune checkpoint inhibitor that targets a specific molecule, the immune-responsive cell A according to the present disclosure needs to express the target molecule on the cell surface. Is not always present, and the target molecule may or may not be expressed.
  • the term “antibody” can refer not only to a complete antibody molecule but also to a fragment of an antibody molecule that retains its ability to bind an antigen. Such antibody fragments are also known in the art and are commonly used both in vitro and in vivo. Thus, as used herein, the term “antibody” refers to a concept that includes not only complete immunoglobulin molecules, but also known antibody functional fragments F (ab') 2 and Fab. In the present disclosure, antibodies also include fully native antibodies, bispecific antibodies, chimeric antibodies, Fabs, Fab', single chain antibodies (scFv), fusion polypeptides, and non-conventional antibodies.
  • a single chain antibody is a fusion protein of the variable regions of heavy and light chains (VH) and light chains (VL) of immunoglobulins that are covalently linked to form a VH :: VL heterodimer. ..
  • the heavy chain (VH) and light chain (VL) are directly linked, or the N-terminal of VH and the C-terminal of VL are bound, or the C-terminal of VH and the N-terminal of VL are bound by a peptide linker.
  • the length of the peptide linker is, for example, 10 amino acids, 15 amino acids, 20 amino acids, or 25 amino acids.
  • Peptide linkers are usually rich in glycine, which contributes to flexibility, and serine or threonine, which contributes to solubility. Despite removing the constant region and introducing a peptide linker, the scFv protein maintains the antigen-binding specificity of the underlying immunoglobulin. As described by Huston et al. (Proc.Nat.Acad.Sci.USA, 85: 5879-5883, 1988), scFv can be expressed from nucleic acids containing VH-encoding sequences and VL-encoding sequences. For scFv, US Pat. Nos. 5,091,513, 5,132,405, and 4,965,778; and US Patent Publications 20050196754 and 20050196754 can also be referred to.
  • An antibody as an immune checkpoint inhibitor is an IgG monoclonal antibody, a Fab fragment, a scFv, or any other antibody or antibody fragment as long as it has a predetermined antigen-binding property.
  • For scFv for example, a method of producing a mouse hybridoma clone and then converting a complete IgG (or IgM) to scFv, a method of producing an immunized phage display scFv, and then a method of screening a library using the antigen. It can be obtained by a method of directly obtaining scFv by screening an off-the-shelf scFv phage display library using an antigen.
  • Antibodies obtained in animals other than humans may provoke an immune response when administered to humans.
  • the portion other than the determining region (CDR) may be modified into a humanized antibody prepared by recombining with a human antibody gene.
  • a fully humanized antibody may be obtained by using a phage display or a genetically modified mouse that produces a human antibody instead of causing a mouse or the like to produce the antibody.
  • the administration composition containing the immune-responsive cell A according to the present disclosure (hereinafter, also referred to as the first administration composition) further contains a pharmaceutically acceptable additive.
  • the additives may be saline, buffered saline, cell culture medium, dextrose, water for injection, glycerol, ethanol and combinations thereof, stabilizers, solubilizers, surfactants, buffers. Examples include agents, preservatives, tonicity agents, fillers, and lubricants.
  • the administration composition containing an immunosuppressive inhibitor may further contain a pharmaceutically acceptable additive.
  • a pharmaceutically acceptable additive for example, physiological saline, buffered physiological saline, cell culture medium, dextrose, water for injection, glycerol, ethanol and combinations thereof, stabilizers, solubilizers, surfactants, buffers, preservatives, etc. Isotonic agents, fillers, and lubricants can be mentioned.
  • the second administration composition may be the same composition as the first administration composition, in which case one administration composition is immunosuppressed with the immunoresponsive cells A according to the present disclosure. It will contain both inhibitory inhibitors.
  • the first dosing composition and the second dosing composition are administered together, as described below. It may be administered at different timings (points of time). That is, the immunoreactive cell A according to the present disclosure and the immunosuppressive inhibitor may be administered together or separately at different time points.
  • the amount of immune-responsive cells A according to the present disclosure contained in the first composition for administration can be appropriately adjusted according to the type, location, severity of cancer, age, body weight, condition of the subject to be treated, and the like. However, for example, 1 ⁇ 10 4 to 1 ⁇ 10 11 pieces, more specifically 1 ⁇ 10 5 to 1 ⁇ 10 10 pieces, more specifically 1 ⁇ 10 6 to 1 ⁇ 10 9 pieces per administration. May be administered.
  • the amount of immune-responsive cells A according to the present disclosure is less than 1 ⁇ 10 6 cells per administration, for example, 1 ⁇ 10 5 to 5 ⁇ 10 5 cells, more specifically 1.5 ⁇ 10 5 cells. It may be as small as ⁇ 4 ⁇ 10 5 pieces.
  • the amount of immune-responsive cells A according to the present disclosure contained in the first composition for administration is the same when the same amount (same number of cells) of immune-responsive cells A according to the present disclosure is used alone.
  • the amount may be so small that it does not have an anticancer effect.
  • the lower limit of the amount of immune-responsive cells A is not particularly limited as long as the amount can exert an anticancer effect due to the synergistic effect with the immunosuppressive inhibitor.
  • the first composition for administration is 4 times a day, 3 times a day, 2 times a day, once a day, every 1 day, every 2 days, every 3 days, every 4 days, every 5 days, a week. It may be administered once, every 7 days, every 8 days, every 9 days, twice a week, once a month or twice a month.
  • the total number of administrations may be, for example, 1 to 10 times, that is, 1 time, 2 times, 3 times, 4 times, 5 times, 6 times, 7 times, 8 times, 9 times or 10 times. It may be administered more than 10 times.
  • the amount of the immunosuppressive inhibitor contained in the second composition for administration can be appropriately adjusted according to the type, location, severity of the cancer, the age, weight and condition of the subject to be treated, etc., but once.
  • the dose of the immunosuppressive inhibitor per administration can be, for example, 0.1 to 500 mg / kg, more specifically 0.5 to 250 mg / kg, and more specifically 1 to 100 mg / kg.
  • the second composition for administration is 4 times a day, 3 times a day, 2 times a day, once a day, every 1 day, every 2 days, every 3 days, every 4 days, every 5 days, a week. It may be administered once, every 7 days, every 8 days, every 9 days, twice a week, once a month or twice a month.
  • the total number of administrations is, for example, 1 to 30 times, that is, 1 time, 2 times, 3 times, 4 times, 5 times, 6 times, 7 times, 8 times, 9 times, 10 times, or 11 times. It may be administered 30 times, but it may be administered more than 30 times.
  • the relationship between the timing of administering the first composition for administration and the timing of administering the second composition for administration is not particularly limited, and administration of the first composition for administration may be started first. Then, the administration of the second administration composition may be started first, or the administration of the first administration composition and the second administration composition may be started at the same time.
  • the relationship between the number of administrations and the frequency of administration of each composition for administration is not particularly limited.
  • the first administration composition and the second administration composition may be the same composition, and in this case, the medicament containing both the immunoresponsive cell A and the immunosuppressive inhibitor according to the present disclosure.
  • the composition (mixture) is provided.
  • the first administration composition and the second administration composition in the combination drug A according to the present disclosure are different compositions, the first administration composition and the second administration composition are simultaneously used. It may be administered at different times (ie, at intervals).
  • the timing of administering the first administration composition and the administration of the second administration composition is 3 months. It may be within 2 months, within 1 month, or within 2 weeks. The interval may be within 1 week or 3 days, but as shown in Examples described later, the immune-responsive cells A according to the present disclosure are maintained in vivo for a long period of time. Therefore, it is not necessary to make the interval extremely short.
  • the immunoresponsive cells A according to the present disclosure and the immunosuppressive inhibitor can be administered at independent timings (for example, different timings).
  • the terms "co-administration” and “combination” mean that when a plurality of agents are contained in the same composition and administered, the plurality of agents are contained in different compositions but are administered at the same time. In the case of, it is used in the sense of including the case where a plurality of agents are contained in different compositions and administered at different time points.
  • the combination drug A according to the present disclosure is a factor consisting of immune-responsive cells expressing a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen, secreted IL-7 and CCL19, and an immunosuppressive inhibitor. Due to the synergistic effect of the combination of, a surprisingly improved cancer treatment effect is achieved.
  • the first composition for administration can be administered to a subject in need of treatment for cancer using methods known to those skilled in the art, such as topical injection (including catheter administration), systemic injection, intravenous. It can be administered by internal injection or parenteral administration (for example, transdermal administration, transmucosal administration, more specifically, nasal drops, eye drops, sublingual administration, suppositories, patches, etc.). From the viewpoint of handling, the first composition for administration may be formulated in an injectable form (solution, suspension, emulsion) of a unit dose.
  • administration method include intravenous, intratumoral, intradermal, subcutaneous, intramuscular, intraperitoneal, intraarterial, intramedullary, intracardiac, intraarticular, intrasynovial, intracranial, and intrathecal.
  • submucosal (cerebrospinal fluid) injections can be mentioned.
  • the second composition for administration can be administered to a subject in need of treatment for cancer using methods known to those skilled in the art, such as oral administration, local injection (including catheter administration), systemic administration. It can be administered by injection, intravenous injection or parenteral administration (eg, transdermal administration, transmucosal administration, more specifically nasal drops, eye drops, sublingual, suppositories, patches, etc.).
  • the second composition for administration may be formulated in an injectable form (solution, suspension, emulsion) at a unit dose from the viewpoint of handling.
  • administration method include intravenous, intratumoral, intradermal, subcutaneous, intramuscular, intraperitoneal, intraarterial, intramedullary, intracardiac, intraarticular, intrasynovial, intracranial, and intrathecal.
  • submucosal (cerebrospinal fluid) injections can be mentioned.
  • the immune-responsive cell A according to the present disclosure is obtained by obtaining the original immune-responsive cell or a precursor cell thereof from a patient to be treated, and introducing a gene necessary for obtaining the immune-responsive cell A according to the present disclosure. Later, it may be administered to the same patient (self-administration) or to another patient (allogeneic administration).
  • the source immune-responsive cells or progenitor cells thereof may be prepared from pluripotent stem cells such as iPS cells and ES cells or somatic stem cells such as hematopoietic stem cells.
  • the first administration composition and the second administration composition are, for example, sterile liquid preparations which may be buffered to a predetermined pH, for example, isotonic aqueous solutions, suspensions, emulsions, etc. It can be administered as a dispersion or a viscous composition.
  • the liquid preparation may be a liquid preparation for injection. Further, in order to prolong the contact time with a specific structure, the liquid preparation may be in the form of a viscous composition having a viscosity within an appropriate viscosity range.
  • the liquid preparation comprises, for example, a solvent or dispersion medium consisting of water, saline, phosphate buffered saline, polyols (eg, glycerol, propylene glycol, liquid polyethylene glycol, etc.) and mixtures thereof. May be good.
  • a solvent or dispersion medium consisting of water, saline, phosphate buffered saline, polyols (eg, glycerol, propylene glycol, liquid polyethylene glycol, etc.) and mixtures thereof. May be good.
  • the liquid preparation can be prepared by blending the immunoresponsive cells A and / or the immunosuppressive inhibitor according to the present disclosure with various amounts of other components in an appropriate amount of a suitable solvent.
  • the liquid preparation may contain suitable carriers, diluents, or excipients.
  • the liquid preparation may also be lyophilized.
  • the liquid preparation may further contain a variety of co-auxiliaries, depending on the desired route of administration, examples of co-auxiliaries include wetting agents, dispersants or emulsifiers (eg, methylcellulose), pH buffering agents. , Gelling agents or viscosity-enhancing additives, preservatives, flavoring agents, coloring agents and the like.
  • co-auxiliaries include wetting agents, dispersants or emulsifiers (eg, methylcellulose), pH buffering agents. , Gelling agents or viscosity-enhancing additives, preservatives, flavoring agents, coloring agents and the like.
  • the liquid preparation may also further contain various additives that enhance the stability and sterility of the liquid preparation, such as antibacterial preservatives, antioxidants, chelating agents, and buffers. And so on.
  • various antibacterial and antifungal agents such as parabens, chlorobutanol, phenol, sorbic acid and the like can be used to prevent the action of microorganisms.
  • Vehicles, diluents or additives used in liquid preparations must be compatible with the immunoresponsive cells A and / or immunosuppressive inhibitors according to the present disclosure contained therein.
  • the liquid preparation may be isotonic with blood.
  • Isotonicity is a liquid preparation of sodium chloride, or other pharmaceutically acceptable osmoregulators (eg, dextrose, boric acid, sodium tartrate, propylene glycol, or other inorganic or organic solutes). It can be achieved by containing it in.
  • the combination drug A according to the present disclosure may further contain other anticancer agents in addition to the immunoresponsive cells A and the immunosuppressive inhibitor according to the present disclosure.
  • anticancer agents include alkylating agents such as bendamstin, iosfamide and dacarbazine, metabolic antagonists such as pentostatin, fludalabine, cladribine, methotrexate, 5-fluorouracil, 6-mercaptopurine and enocitabine, rituximab and cetuximab.
  • Molecular-targeted drugs such as trastuzumab, kinase inhibitors such as imatinib, gefetinib, errotinib, afatinib, dasatinib, snitinib, tramethinib, proteasome inhibitors such as bortezomib, calcinurine inhibitors such as cyclosporin and tachlorimus
  • anticancer antibiotics plant alkaloids such as irinotecan and etoposide, platinum preparations such as cisplatin, oxaliplatin and carboplatin, hormonal therapeutic agents such as tamoxyphene and bicardamide, and immunomodulators such as interferon.
  • Other anti-cancer agents may include, for example, at least one of an alkylating agent and an antimetabolite.
  • the treatment target may be, for example, any mammal, but may be, for example, a primate animal, and more specifically, a human.
  • the treatment target may be a pet animal or a domestic animal, and examples thereof include dogs, cats, pigs, cows, horses, sheep, and goats.
  • the cancers to be treated may be solid cancers or blood cancers, adenocarcinoma, squamous cell carcinoma, glandular squamous cell carcinoma, undifferentiated cancer, large cell cancer, small cell cancer, skin.
  • sarcoma such as chondrosarcoma, Ewing sarcoma, malignant vascular endothelial tumor, malignant Schwan tumor, osteosarcoma, soft tissue sarcoma, hepatoblastoma, myeloma, nephrblastoma, neuroblastoma, pancreas
  • blastomas such as blastoma, pleural lung blastoma, and retinal blastoma, embryonic cell tumors
  • the combination drug A according to the present disclosure it is possible to reduce the immunosuppressive property in the cancer microenvironment, so that the cancer to be treated is not limited to blood cell type cancer, but for solid cancer. However, it has a therapeutic effect. Therefore, it can be highly effective against solid cancers that were difficult to treat by conventional methods.
  • the combination drug A according to the present disclosure may be prophylactically administered to a subject even before a definitive diagnosis of cancer is made, in a situation where the presence of cancer cells in the subject is suspected.
  • usage patterns are also included in the concept of use for the treatment of cancer.
  • Subjects including (a) immune-responsive cells expressing cancer antigen-specifically recognizing cell surface molecules, IL-7, and CCL19, and (b) immunosuppressive inhibitors combined and administered to the subject.
  • a method for treating cancer in the above (hereinafter, also referred to as a cancer treatment method A according to the present disclosure) is provided.
  • the immune-responsive cell in the cancer treatment method A according to the present disclosure is the immune-responsive cell A according to the present disclosure
  • the detailed configuration and examples thereof are the immune-responsive cell A according to the present disclosure.
  • the above explanation applies as it is.
  • the above description of the immunosuppressive inhibitor in the combination drug A according to the present disclosure applies as it is.
  • the immunoresponsive cells (a) and the immunosuppressive inhibitor (b) may be administered simultaneously or at different time points.
  • both the immune-responsive cells (a) and the immunosuppressive inhibitor (b) can be administered in therapeutically effective amounts.
  • the cancer treatment method A according to the present disclosure is synergistic with a combination of factors consisting of a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen, immune-responsive cells expressing IL-7 and CCL19, and an immunosuppressive inhibitor. It has a surprisingly improved cancer treatment effect.
  • the above-mentioned description of the combination drug A according to the present disclosure applies as it is to the details of the immunoresponsive cells, the immunosuppressive inhibitor, the composition for administration, the treatment of cancer and the like.
  • IL-7 and CCL19 cell surface molecules that specifically recognize cancer antigens, used in combination with immunosuppressive inhibitors to treat cancer in a subject.
  • Drugs containing immunoresponsive cells are also provided.
  • the medicament containing the immunoreactive cell A according to the present disclosure produces a synergistic effect when used in combination with an immunosuppressive inhibitor, and exhibits a surprisingly improved cancer therapeutic effect.
  • immune-responsive cells immunosuppressive inhibitors, compositions for administration, treatment of cancer, etc.
  • the above-mentioned description of the combination drug A according to the present disclosure applies as it is.
  • immune-responsive cells expressing IL-7 and CCL19, cell surface molecules that specifically recognize cancer antigens, used in combination with immunosuppressive inhibitors to treat cancer in a subject are also provided.
  • immunity used to treat cancer in a subject in combination with immune-responsive cells expressing IL-7 and CCL19 cell surface molecules that specifically recognize cancer antigens.
  • Pharmaceuticals containing inhibitory inhibitors are also provided.
  • a drug containing an immunosuppressive inhibitor is used in combination with the immune-responsive cell A according to the present disclosure, a synergistic effect is produced, and a surprisingly improved cancer therapeutic effect is exhibited.
  • immunosuppressive inhibitors, compositions for administration, treatment of cancer, etc. the above-mentioned description of the combination drug A according to the present disclosure applies as it is.
  • immunosuppressive inhibitors used to treat cancer in a subject in combination with immune-responsive cells expressing IL-7 and CCL19, cell surface molecules that specifically recognize cancer antigens are also provided.
  • immunoresponsiveness that is contained in a container indicated to be used in combination with an immunosuppressive inhibitor and expresses cell surface molecules, IL-7 and CCL19, which specifically recognize cancer antigens.
  • Drugs containing cells are also provided.
  • the above-mentioned description of the combination drug A according to the present disclosure applies as it is.
  • the above-mentioned description of the first administration composition can be applied as it is.
  • the container labeled to be used in combination with the immunosuppressive inhibitor may be a vial with a usage label, an intravenous bag, a cell storage bag, a drip bag, or the like, or an Eppendorf tube. It may be a container such as. In such a container, the drug containing the immunoreactive cell A according to the present disclosure is contained, for example, in the state described in the above description of the first administration composition.
  • the indication that it is used in combination with an immunosuppressive inhibitor may be attached to any surface of the container, but may be attached to the outer surface of the container in consideration of visibility. Further, the indication may be attached not to the container itself but to a case such as a box for further storing one or more containers.
  • the indication that it is used in combination with an immunosuppressive inhibitor is not limited to the indication that it is used in combination with an immunosuppressive inhibitor, and mentions the possibility of concomitant use with an immunosuppressive inhibitor. It may be any display that is displayed.
  • an attachment describing that it is used in combination with an immunosuppressive inhibitor and immune-responsive cells expressing cell surface molecules that specifically recognize cancer antigens, IL-7 and CCL19, are included.
  • Products containing, and containers containing the drug, are also provided.
  • the above-mentioned description of the combination drug A according to the present disclosure applies as it is.
  • the above-mentioned description of the first administration composition can be applied as it is.
  • the container containing the immunoresponsive cells A according to the present disclosure may be a container such as a vial with a usage indication, an intravenous injection bag, a cell storage bag, a drip bag, etc., or an Eppendorf tube. It may be such a container.
  • the drug containing the immunoreactive cell A according to the present disclosure is contained, for example, in the state described in the above description of the first administration composition.
  • the description in the package insert that it is used in combination with an immunosuppressive inhibitor is not limited to the description that explicitly indicates that it is used in combination with an immunosuppressive inhibitor, and it can be used in combination with an immunosuppressive inhibitor. It may be any description that refers to sex.
  • a synergistic effect of a combination of a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen, immune-responsive cells expressing IL-7 and CCL19, and an immunosuppressive inhibitor is possible to obtain a surprisingly improved cancer therapeutic effect.
  • the embodiments according to the present disclosure include the following.
  • ⁇ 1> Treat cancer in a subject, including (a) cell surface molecules that specifically recognize cancer antigens, immune-responsive cells expressing interleukin 7 and CCL19, and (b) immunosuppressive inhibitors.
  • ⁇ 2> The combination drug according to ⁇ 1>, wherein the immunoresponsive cells and the immunosuppressive inhibitor are separately administered at different time points.
  • ⁇ 3> The gene encoding interleukin 7 and the gene encoding CCL19 are exogenous, and both are integrated into the genome of the immune-responsive cell, or one or one present in the immune-responsive cell.
  • the combination drug according to ⁇ 1> or ⁇ 2> which is encoded together or separately in a plurality of vectors.
  • the cell surface molecule that specifically recognizes the cancer antigen is one of ⁇ 1> to ⁇ 3>, which is a chimeric antigen receptor (CAR) or a T cell receptor (TCR).
  • the immunosuppressive inhibitor is a PD-1 inhibitor, PD-L1 inhibitor, PD-L2 inhibitor, CTLA-4 inhibitor, BTLA (B- and T-lymphocyte attenuator) inhibitor, TIM-3.
  • the combination drug according to any one of ⁇ 1> to ⁇ 4> which comprises one or more selected from.
  • ⁇ 6> The combination drug according to any one of ⁇ 1> to ⁇ 5>, wherein the immunosuppressive inhibitor is an antibody.
  • ⁇ 7> The combination drug according to ⁇ 6>, wherein the antibody is an IgG monoclonal antibody or an antibody fragment.
  • ⁇ 8> The combination drug according to any one of ⁇ 1> to ⁇ 7>, wherein the cancer is a solid cancer.
  • the immunoresponsive cell is an immunoresponsive cell derived from the subject itself.
  • the immune-responsive cells include lymphocytes such as T cells, natural killer cells (NK cells), and B cells, antigen-presenting cells such as monospheres, macrophages, and dendritic cells, and neutrophils.
  • the combination drug according to any one of ⁇ 1> to ⁇ 9>, which is selected from the group consisting of neutrophils, basophils, and mast cells.
  • ⁇ 11> Includes immune-responsive cells expressing interleukin 7 and CCL19, cell surface molecules that specifically recognize cancer antigens, used in combination with immunosuppressive inhibitors to treat cancer in a subject. Medicine.
  • ⁇ 12> An immunosuppressive inhibitor used to treat cancer in a subject in combination with immune-responsive cells expressing cell surface molecules that specifically recognize cancer antigens, interleukin 7, and CCL19. Including medicine.
  • ⁇ 13> The medicament according to ⁇ 11> or ⁇ 12>, which is used in a form in which the immunosuppressive inhibitor and the immune-responsive cells are separately administered at different time points.
  • ⁇ 14> Contains immune-responsive cells that are housed in a container labeled to be used in combination with an immunosuppressive inhibitor and that express cell surface molecules that specifically recognize cancer antigens, interleukin 7 and CCL19. Medicine.
  • ⁇ 15> The package insert stating that it is used in combination with an immunosuppressive inhibitor, A container containing a drug containing immune-responsive cells expressing interleukin 7 and CCL19, a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen, and a container.
  • Products including. ⁇ 16> Treat cancer in a subject, including (a) cell surface molecules that specifically recognize cancer antigens, immune-responsive cells expressing interleukin 7 and CCL19, and (b) immunosuppressive inhibitors.
  • Pharmaceutical composition for. ⁇ 17> The pharmaceutical composition according to ⁇ 16>, wherein the cell surface molecule that specifically recognizes the cancer antigen is a chimeric antigen receptor (CAR) or a T cell receptor (TCR).
  • CAR chimeric antigen receptor
  • TCR T cell receptor
  • ⁇ 18> Includes (a) a combination of a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen, immune-responsive cells expressing IL-7 and CCL19, and (b) an immunosuppressive inhibitor to be administered to a subject in combination. , How to treat cancer in a subject.
  • ⁇ 19> In the manufacture of drugs for treating cancer, (a) cell surface molecules that specifically recognize cancer antigens, immune-responsive cells expressing IL-7 and CCL19, and (b) immunosuppression. The use of inhibitors is provided.
  • A One or more types of cells or nucleic acid delivery media or combinations thereof containing a nucleic acid encoding interleukin 7 and a nucleic acid encoding CCL19 in cooperation, and (b) an immunosuppressive inhibitor.
  • a combination drug for treating cancer in a subject hereinafter, also referred to as “combination drug B according to the present disclosure”.
  • interleukin 7, CCL19 the details of the definitions, examples, amino acid sequences, base sequences, preferred embodiments and the like of the interleukin 7, CCL19, the nucleic acid encoding interleukin 7, the nucleic acid encoding CCL19, and the immunosuppressive inhibitor in the combination drug B are described.
  • the details such as the amino acid sequence, the base sequence, and the preferred embodiment are the same.
  • cooperatively included means that a plurality of elements (for example, a plurality of cells, a plurality of nucleic acid delivery media, or one or more cells and one or more nucleic acid delivery media) are present.
  • the substance indicated as an object to be included eg, a nucleic acid encoding a particular polypeptide
  • cooperatively included can also be expressed as “included as a whole”.
  • the meaning of "cooperatively included” also includes the case where all of the plurality of substances indicated as objects to be included are contained in a single cell or nucleic acid delivery medium, and such a configuration is also preferable. It is one of the configurations.
  • cell I contains a nucleic acid encoding interleukin 7 and does not contain a nucleic acid encoding CCL19, and cell II encodes CCL19. It may be a configuration containing nucleic acid and not containing nucleic acid encoding interleukin 7.
  • the combination drug B according to the present disclosure contains a nucleic acid delivery medium I and a nucleic acid delivery medium II
  • the nucleic acid delivery medium I contains a nucleic acid encoding interleukin 7 and does not contain a nucleic acid encoding CCL19, and is a nucleic acid.
  • the delivery medium II may be configured to contain a nucleic acid encoding CCL19 and not a nucleic acid encoding interleukin 7.
  • the combination drug B according to the present disclosure may comprise a single cell or nucleic acid delivery medium containing both the nucleic acid encoding interleukin 7 and the nucleic acid encoding CCL19.
  • the "combination thereof" in “one or more kinds of cells or nucleic acid delivery media or a combination thereof jointly containing a nucleic acid encoding interleukin 7 and a nucleic acid encoding CCL19" is one kind or a plurality of kinds.
  • a polypeptide generally refers to a polymer in which amino acid residues are linked by peptide bonds, and so-called proteins are also included in the examples.
  • the number of amino acid residues in the polypeptide may be 10 or more, 20 or more, 30 or more, 40 or more, 50 or more, 70 or more. It may be 100 or more.
  • the upper limit of the number of amino acid residues is not particularly limited, but the number of amino acid residues may be 10,000 or less, 5000 or less, 2000 or less, or 1000 or less. It may be 500 or less, 200 or less, 100 or less, 70 or less, 50 or less, 40 or less, 30 or less. It may be 20 or less.
  • the above lower limit value and upper limit value can be freely combined to form a range as long as there is no contradiction.
  • the cell is a cell capable of expressing the nucleic acid referred to as the content target (for example, the nucleic acid encoding interleukin 7 and / or the nucleic acid encoding CCL19).
  • the cells are preferably cells that accumulate or infiltrate around the cancer cells when introduced into the body.
  • the nucleic acids are independently contained in the cell in a state of being integrated into the genome or in a state of being carried on a plasmid. It may be contained in a state of being linked to each other and integrated into the genome or in a state of being carried on a plasmid. Examples of such cells include immune-responsive cells, anaerobic cells, and mesenchymal stem cells (MSCs).
  • MSCs mesenchymal stem cells
  • the nucleic acid delivery medium is to deliver and express a nucleic acid referred to as a inclusion target (for example, a nucleic acid encoding interleukin 7 and / or a nucleic acid encoding CCL19) to cells.
  • a nucleic acid referred to as a inclusion target for example, a nucleic acid encoding interleukin 7 and / or a nucleic acid encoding CCL19
  • the cell is preferably a human cell, more preferably a cell in the human body, and even more preferably a cancer cell or an immunoresponsive cell in the human body. That is, the nucleic acid delivery medium is preferably a nucleic acid delivery medium that delivers nucleic acid into cancer cells or immune-responsive cells when introduced into the body.
  • nucleic acid delivery medium examples include viruses, liposomes and nanoparticles.
  • a nucleic acid delivery medium known in the art may be used according to conventional methods. It is also possible to use a viral vector as a nucleic acid delivery medium.
  • the nucleic acids may be contained independently or linked to each other in the nucleic acid delivery medium. It may be included in the state of being.
  • Cancer cells have an immunosuppressive mechanism that suppresses immune-responsive cells from attacking cancer cells or issuing instructions to attack cancer cells. Attacks on cancer cells are suppressed.
  • the immunosuppressive inhibitor which is one of the components of the combination drug B according to the present disclosure, inhibits the immunosuppressive mechanism by cancer cells, so that the immune system of the cancer-affected person attacks the cancer cells. It will be easier.
  • one or more cells or nucleic acid delivery media or combinations thereof that jointly contain a nucleic acid encoding interleukin 7 and a nucleic acid encoding CCL19 can cause IL-7 in the vicinity of cancer tissue.
  • the combination drug B comprises one or more types of cells or nucleic acid delivery media or a combination thereof, which jointly contains a nucleic acid encoding interleukin 7 and a nucleic acid encoding CCL19, and an immunosuppressive inhibitor.
  • the one or more cell or nucleic acid delivery medium in Combination Medicine B delivers nucleic acid to cells other than cancer cells, such as immunity-responsive cells.
  • the one or more cell or nucleic acid delivery media or combinations thereof in the combination drug B according to the present disclosure further comprises a nucleic acid encoding a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen. You may be.
  • the cell or nucleic acid delivery medium containing the nucleic acid encoding the cell surface molecule that specifically recognizes the cancer antigen may or may not contain the nucleic acid encoding interleukin 7, and the nucleic acid encoding CCL19. May or may not be included.
  • the one or more types of cells or nucleic acid delivery medium or a combination thereof in the combination drug B according to the present disclosure further contains a nucleic acid encoding a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen.
  • the one or more types of cell or nucleic acid delivery medium or a combination thereof comprises a nucleic acid encoding interleukin 7, a nucleic acid encoding CCL19, and a nucleic acid encoding a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen. It may be included in cooperation (in other words, as a whole).
  • the one or more types of cells or nucleic acid delivery medium or a combination thereof in the combination drug B according to the present disclosure further expresses a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen in the cells to which the nucleic acid has been delivered. Therefore, the cancer therapeutic effect can be further enhanced.
  • a nucleic acid encoding a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen is contained in a nucleic acid delivery medium
  • the nucleic acid delivery medium is administered to a subject to introduce the nucleic acid into T cells in the target body. Thereby, the cell surface molecule is expressed in the T cell.
  • the one or more types of cell or nucleic acid delivery medium in Combination Medicine B has a molecule on its surface that specifically recognizes the cancer cell in order to deliver the nucleic acid to the cancer cell.
  • the details of the molecule that specifically recognizes the cancer cell and the preferred embodiment are the same as the details of the cell surface molecule that specifically recognizes the cancer cell and the preferred embodiment.
  • the one or more types of cells or nucleic acid delivery medium in the combination drug B is a "cell", for example, a nucleic acid encoding a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen is introduced into the cell, and the combination drug is used.
  • scFv or the like that specifically recognizes a cancer antigen By culturing before administration of B, scFv or the like that specifically recognizes a cancer antigen can be expressed on the surface thereof.
  • the one or more types of cells or nucleic acid delivery medium in the combination drug B is a "virus", for example, a nucleic acid encoding a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen is incorporated into the virus genome, and an appropriate cell is used.
  • scFv or the like that specifically recognizes a cancer antigen By transfecting into a virus to produce and propagate a virus, scFv or the like that specifically recognizes a cancer antigen can be expressed on the surface thereof.
  • Antibodies such as scFv may be contained in the envelope or capsid of the virus.
  • the envelope glycoprotein gD which is responsible for invasion of the herpes virus, cannot bind to the original receptor.
  • An antibody such as scFv that specifically recognizes a cancer antigen may be inserted into the envelope glycoprotein gD.
  • the one or more types of cells or nucleic acid delivery medium in the combination drug B are liposomes, nanoparticles, or the like, a molecule that specifically recognizes cancer cells on the surface is previously known by a known method or equivalent. It can be combined by a method.
  • Nucleic acids encoding cell surface molecules that specifically recognize cancer antigens are preferably contained in immune-responsive cells.
  • the one or more types of cell or nucleic acid delivery medium or a combination thereof in the combination drug B according to the present disclosure is immunoresponsive including a nucleic acid encoding a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen. It preferably contains cells.
  • the immunoresponsive cells may or may not contain a nucleic acid encoding interleukin 7 and may or may not contain a nucleic acid encoding CCL19.
  • Cell surface molecules that specifically recognize cancer antigens include T cell receptors (TCRs) that specifically recognize cancer antigens, chimeric antigen receptors (CARs) that specifically recognize cancer antigens, and the like.
  • the combination drug B according to the present disclosure can be used in combination with treatment using CAR-T or TCR-T.
  • one or more types of cells or nucleic acid delivery media or combinations thereof that jointly contain the nucleic acid encoding interleukin 7 and the nucleic acid encoding CCL19 specifically comprises a cancer antigen. It may contain immunoreactive cells expressing the recognized cell surface molecules, interleukin 7 and CCL19. Further, the immunosuppressive inhibitor may be an immunosuppressive inhibitory polypeptide expressed by cells, and the combination drug B according to the present disclosure may contain cells expressing an immunosuppressive inhibitory polypeptide.
  • the cells include one or more types of cells cooperatingly containing a nucleic acid encoding interleukin 7 and a nucleic acid encoding CCL19, or a cell described below as an example of a cell in a nucleic acid delivery medium or a combination thereof. Can be mentioned.
  • a nucleic acid delivery medium containing a nucleic acid encoding an immunosuppressive inhibitory polypeptide instead of the immunosuppressive inhibitor in the combination drug B according to the present disclosure is also included in the scope of the embodiment according to the present disclosure. ..
  • the nucleic acid delivery medium may be the same nucleic acid delivery medium as a nucleic acid delivery medium containing other nucleic acids, or may be a separate nucleic acid delivery medium. Therefore, according to an embodiment of the present disclosure, the immunosuppressive inhibitor is a polypeptide, and the cell or nucleic acid delivery medium or a combination thereof further cooperates with a nucleic acid encoding an immunosuppressive inhibitor polypeptide. And include.
  • the combination drug B comprises an immunoresponsive cell expressing a cell surface molecule specifically recognizing a cancer antigen, interleukin 7 and CCL19, and a cell expressing an immunosuppressive inhibitory polypeptide.
  • a cell surface molecule specifically recognizing a cancer antigen such as interleukin 7 and CCL19
  • an immunosuppressive inhibitory polypeptide such as interleukin 7 and CCL19
  • they may be the same cell or different cells.
  • the immune-responsive cells expressing the cell surface molecules, interleukin 7 and CCL19, which specifically recognize the cancer antigen, and the cells expressing the immunosuppressive inhibitory polypeptide are the same immune-responsive cells, the present disclosure is made.
  • the combination drug B according to the above is one or a plurality of types of cells or nucleic acid delivery media or a combination thereof, which jointly contains a nucleic acid encoding interleukin 7 and a nucleic acid encoding CCL19 by containing the immune-responsive cells.
  • an immunosuppressive inhibitor is disclosed as a component independent of one or more types of cells or nucleic acid delivery media or combinations thereof, which jointly contain a nucleic acid encoding interleukin 7 and a nucleic acid encoding CCL19. May be included in the combination drug B according to the above. In other words, it may be contained in the combination drug B according to the present disclosure as a substance added separately, not as a substance expressed by the one or more kinds of cells or nucleic acid delivery medium or a combination thereof.
  • the cell or nucleic acid delivery medium or combination thereof in the combination drug B according to the present disclosure consists of a group consisting of immune-responsive cells, viruses, anaerobic bacteria, liposomes, mesenchymal stem cells (MSCs), and nanoparticles. It may be at least one selected, or a plurality selected from these may be mixed and used.
  • the immune-responsive cell is particularly any cell that is involved in the immune response and can be expressed containing a nucleic acid to be contained (for example, a nucleic acid encoding interleukin 7 and / or a nucleic acid encoding CCL19).
  • a nucleic acid to be contained for example, a nucleic acid encoding interleukin 7 and / or a nucleic acid encoding CCL19.
  • the nucleic acid to be delivered may be contained in the genome of an immune-responsive cell or may be carried on a vector outside the genome. For example, it may be contained in the genome from the viewpoint of gene-supporting stability. Good.
  • the immunoreactive cells are preferably immunoreactive cells collected from a living body, for example, lymphocytes such as T cells, natural killer cells (NK cells), and B cells, neutrophils, macrophages, and trees.
  • Examples thereof include antigen-presenting cells such as morphocytes, and granulocytes such as neutrophils, neutrophils, neutrophils, and mast cells.
  • Preferred examples include T cells collected from mammals such as humans, dogs, cats, pigs and mice, and more preferably T cells collected from humans.
  • the cell population may contain other cells in addition to T cells, but 50% or more of the total number of cells based on the number of cells.
  • T cells may be contained in a proportion of 60% or more, 70% or more, 80% or more, or 90% or more.
  • Immune-responsive cells such as T cells infiltrate, for example, body fluids such as blood and bone marrow fluid, tissues such as spleen, thymus, and lymph nodes, or cancer tissues such as primary tumors, metastatic tumors, and cancerous ascites. It can be obtained by collecting a cell population containing immune-responsive cells from immune cells. In order to increase the proportion of immune-responsive cells such as T cells contained in the cell population, the separated cell population may be subjected to a routine isolation step or purification step, if necessary. Further, the immune-responsive cells may be immune-responsive cells prepared from ES cells or iPS cells.
  • T cells examples include alpha beta T cells, gamma delta T cells, CD8 + T cells, CD4 + T cells, tumor infiltrating T cells, memory T cells, naive T cells, And NKT cells.
  • the origin of the immune-responsive cells and the administration target of the combination drug may be the same individual or different individuals, but the same individuals are preferable.
  • the immune-responsive cells may be autologous cells collected from the patient himself / herself as the administration target or allogeneic cells collected from another person. That is, the donor and the recipient may or may not match, but they are preferably matched.
  • the virus as a nucleic acid delivery medium is preferably a virus that can enclose a nucleic acid to be delivered (for example, a nucleic acid encoding interleukin 7 and / or a nucleic acid encoding CCL19) and can infect cancer cells. More preferably, it is an oncolytic virus.
  • the above-mentioned oncolytic virus is a virus that hardly proliferates even when infected with normal cells, but proliferates when infected with cancer cells and has the ability to kill cancer cells (cancer cell damage). Meaning, for example, is reviewed in Molecular Therapy, Vol. 18, No. 2, February 2010, pp. 233-234.
  • the oncolytic virus is not particularly limited as long as it has the ability to infect cancer cells and kill the cancer cells, and examples thereof include oncolytic vaccinia virus, oncolytic adenovirus, and oncolytic simple herpes. Examples include viruses, oncolytic leovirus, oncolytic measles virus, oncolytic Newcastle disease virus, oncolytic bovine hemorrhoid virus, oncolytic mumps virus, and oncolytic coxsackie virus.
  • Oncolytic vaccinia virus is, for example, Kim MK et al. Science Translational Medicine. 2013 May 15; 5 (185): 185ra63, Heo J, et al. Nature Medicine, 2013 (3): 329-36. Doi: 10.1038 /nm.3089.Epub2013Feb10., International Publication No. 2012/094386, but not limited to this vaccinia virus.
  • Examples of oncolytic adenovirus are Tedcastle A et al. Mol Ther. 2016; 24: 796-804, Marino N, Illingworth S, Kodialbail P, Patel A, Calderon H, Lear R, Fisher KD, Champion BR, Brown ACN.
  • Examples of oncolytic herpes simplex virus include Mazzacurati et al., Mol Ther, 2015 Jan; 23 (1): 99-107, Hirooka Y, et al.
  • oncolytic reovirs include, but are not limited to, the reovirs described in Mahalingam, et al, Cancers 2018, 10, 160.
  • oncolytic Newcastle disease viruses include, but are not limited to, the Newcastle disease virus described in Journal of Virology. 2016 Jun; 90 (11): 5343-5352.
  • oncolytic blister mouth ulcer virus disease virus examples include, but are not limited to, the blister mouth ulcer virus disease virus described in Muik A. et al. Cancer Res; 74 (13); 3567-78.
  • Some oncolytic viruses have a protein expression function added by genetic modification.
  • a polypeptide encoded by the nucleic acid to be delivered for example, interleukin 7 and / or CCL19 may be expressed.
  • An anaerobic bacterium as a cell in "one or more types of cells or nucleic acid delivery medium or a combination thereof jointly containing a nucleic acid encoding interleukin 7 and a nucleic acid encoding CCL19" is a nucleic acid to be contained.
  • a nucleic acid encoding interleukin 7 and / or a nucleic acid encoding CCL19 is not particularly limited as long as it is a cell of an anaerobic bacterium that can be expressed.
  • the anaerobic bacterium is preferably an anaerobic gram-positive bacterium having an ability to accumulate in cancer cells, and examples thereof include bifidobacteria such as bifidobacteria, Lactobacillus spp., And Listeria spp. Can be mentioned. It is known that anaerobic bacteria easily accumulate in cancer cells because they easily grow in an environment with little oxygen. Anaerobic bacteria can also be taken up by cells in the body to which the combination drug B according to the present disclosure is administered.
  • the liposome as a nucleic acid delivery medium may be a lipid nanocapsule composed of a phospholipid bilayer membrane capable of encapsulating the nucleic acid to be delivered (for example, a nucleic acid encoding interleukin 7 and / or a nucleic acid encoding CCL19).
  • a nucleic acid encoding interleukin 7 and / or a nucleic acid encoding CCL19 for example, a nucleic acid encoding interleukin 7 and / or a nucleic acid encoding CCL19.
  • Such liposomes may be commercially available products or may be liposomes synthesized by a conventional method. Liposomes may be PEG-modified or have targeted probe molecules such as lectins or proteins (eg, antibodies) on the surface to improve their accumulation in cancer cells.
  • MSCs Membrane stem cells as cells in "one or more types of cells or nucleic acid delivery media or combinations thereof that cooperatively contain a nucleic acid encoding interleukin 7 and a nucleic acid encoding CCL19" are contained.
  • the MSC is not particularly limited as long as it can be expressed by containing the nucleic acid of interest (for example, the nucleic acid encoding interleukin 7 and / or the nucleic acid encoding CCL19).
  • the MSCs are preferably MSCs that accumulate in cancer cells.
  • Nanoparticles as a nucleic acid delivery medium have the ability to deliver nucleic acids to be delivered (eg, nucleic acids encoding interleukin 7 and / or nucleic acids encoding CCL19) to cancer cells, preferably on the order of nanometers. Is not particularly limited as long as it is a particle body having a diameter of 5 to 800 nm.
  • Examples of nanoparticles include metal nanoparticles such as gold nanoparticles and silica nanoparticles. Such nanoparticles may be commercially available products or may be nanoparticles synthesized by a conventional method. Nanoparticles can reach cancer cells, for example, by Enhanced Permeability and Retention Effect (EPR effect).
  • EPR effect Enhanced Permeability and Retention Effect
  • the nucleic acid can be included in the nanoparticles in the form of binding to the surface of the nanoparticles, encapsulation in the nanoparticles, or the like.
  • a nucleic acid encoding interleukin 7 contained in a cell or a nucleic acid delivery medium, a nucleic acid encoding CCL19, and a cell surface molecule that specifically recognizes an optionally contained cancer antigen are used. It is preferred that each of the encoding nucleic acids is operably linked downstream of the promoter. The operation of incorporating these nucleic acids into cells or nucleic acid delivery media may be performed according to a conventional method.
  • nucleic acid into cells for example, an electroporation method (see, for example, Cytotechnology, 3,133 (1990)), a calcium phosphate method (see, for example, JP-A-2-227075), and a lipofection method (for example, Proc. Natl. Acad).
  • the introduction can be performed using a method selected from .Sci.U.SA, 84,7413 (1987)) and virus infection methods.
  • virus infection method a vector containing the nucleic acid to be introduced and a packaging plasmid are used as GP2-293 cells (manufactured by Takara Bio), Plat-GP cells (manufactured by Cosmo Bio), and PG13 cells (ATCC CRL-10686).
  • the nucleic acid to be introduced may be integrated into the genome of the cell so that it can be expressed under the control of an appropriate promoter using a known gene editing technique.
  • known gene editing techniques include techniques using endonucleases such as zinc finger nucleases, TALENs (transcriptional activation-like effector nucleases), and CRISPR (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeat) -Cas systems.
  • nucleic acid to be contained When a nucleic acid to be contained is contained in a cell, the nucleic acid may be integrated into the genome of the cell or may be supported by an intracellular vector. When two or more nucleic acids to be contained are contained in the same cell, they may be integrated into the genome of the cell adjacently or separately. However, they may be contained in the same vector or separately in separate vectors. In addition, some of the nucleic acids to be contained may be contained in the genome, and the rest may be contained in the vector.
  • nucleic acid to be contained When the nucleic acid to be contained is contained in the nucleic acid delivery medium, the nucleic acid may be contained alone or supported on a vector. When two or more nucleic acids to be contained are contained in the same nucleic acid delivery medium, they may be contained in the same vector or separately in separate vectors. However, it may be contained in the same virus or in a separate virus. Further, the different nucleic acids may be contained in the same nucleic acid delivery medium or may be contained in different nucleic acid delivery media.
  • the vector may be linear or cyclic, and may be a non-viral vector such as a plasmid, a viral vector, or a transposon vector.
  • the vector may contain one or more of a control sequence such as a promoter and a terminator, and a selectable marker sequence such as a drug resistance gene and a reporter gene.
  • the promoter contained in the vector may be used to express the gene contained in the vector.
  • the combination drug B according to the present disclosure exhibits a surprisingly improved cancer therapeutic effect due to the synergistic effect of the combination of IL-7 and CCL19 and a factor consisting of an immunosuppressive inhibitor.
  • the effect is more remarkable when the combination drug B according to the present disclosure contains a cell containing a nucleic acid encoding a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen or a nucleic acid delivery medium, and is specific to the cancer antigen. It is even more prominent when it contains immunoreactive cells containing nucleic acids encoding cell surface molecules that are recognized in.
  • a composition for administration containing one or more types of cells or nucleic acid delivery media or a combination thereof containing a nucleic acid encoding interleukin 7 and a nucleic acid encoding CCL19 in cooperation.
  • a third composition for administration may further contain a pharmaceutically acceptable additive, and the additive includes a physiological saline solution, a buffered physiological saline solution, a cell culture medium, and dextrose.
  • the first administration composition is read as the third administration composition
  • the administration composition for the administration of the combination drug B according to the present disclosure can be applied to.
  • the second dosing composition may be the same composition as the third dosing composition, in which case one dosing composition may deliver one or more of the cells or nucleic acids. It will include both the vehicle or a combination thereof and an immunosuppressive inhibitor.
  • the second dosing composition is a composition separate from the third dosing composition
  • the third dosing composition and the second dosing composition may be administered together. It may be administered at different timings (points of time). Therefore, the cell or nucleic acid delivery medium or a combination thereof and the immunosuppressive inhibitor may be administered separately at different time points.
  • the description of the amount of immune-responsive cells A according to the present disclosure in the description of the administration composition in the combination drug A according to the present disclosure is that one or more of the above-mentioned cells or nucleic acid delivery medium or a combination thereof is a cell. It shall be read as the description of the amount of cells in the third composition for administration in the case containing
  • the combination drug A according to the present disclosure may be read as the combination drug B according to the present disclosure, and the immunoresponsive cells A and the "cancer antigen specifically" according to the present disclosure.
  • it can be read as a combination thereof, and can be applied to the combination drug B according to the present disclosure unless there is a particular contradiction. This includes explanations of the usage patterns of the combination drug, such as the species to be treated, the individual, the type of disease, the dose, and the administration schedule.
  • the amount of the nucleic acid delivery medium in the third composition for administration is determined by the type, location, severity, and the like of the cancer. It can be appropriately adjusted according to the age, weight, condition, etc. of the subject to be treated, but the amount of nucleic acid to be delivered may be an appropriate amount for delivering a therapeutically effective amount.
  • the combination drug A according to the present disclosure may be read as the combination drug B according to the present disclosure, and the immunoresponsive cell A and the cancer antigen according to the present disclosure.
  • A One or more types of cells or nucleic acid delivery media or combinations thereof containing a nucleic acid encoding interleukin 7 and a nucleic acid encoding CCL19 in cooperation, and (b) an immunosuppressive inhibitor in combination.
  • a method for treating a cancer in a subject, including administration (hereinafter, also referred to as a cancer treatment method B according to the present disclosure) is provided.
  • one or more types of cells or cells in the manufacture of a medicament for treating cancer (a) a nucleic acid encoding interleukin 7 and a nucleic acid encoding CCL19.
  • Nucleic acid delivery media or combinations thereof, as well as the use of (b) immunosuppressive inhibitors are provided.
  • delivery of one or more types of cells or nucleic acids containing a nucleic acid encoding interleukin 7 and a nucleic acid encoding CCL19 which are used in combination with an immunosuppressive inhibitor to treat cancer in a subject.
  • Nucleic acids containing vehicles or combinations thereof are also provided.
  • one or more types of cell or nucleic acid delivery that jointly contain a nucleic acid encoding interleukin 7 and a nucleic acid encoding CCL19, which is used in combination with an immunosuppressive inhibitor to treat cancer in a subject.
  • Media or combinations thereof are also provided.
  • One or more types of cells or nucleic acid delivery media or combinations thereof containing a nucleic acid encoding interleukin 7 and a nucleic acid encoding CCL19 in cooperation, and an immunosuppressive inhibitor are different even when administered together. It may be administered separately at the time.
  • one or more types of cells or nucleic acid delivery media, or combinations thereof, which jointly contain a nucleic acid encoding interleukin 7 and a nucleic acid encoding CCL19 can be used in combination with a cancer in a subject.
  • Nucleic acids containing immunosuppressive inhibitors used for treatment are also provided.
  • it is used to treat cancer in a subject in combination with one or more types of cells or nucleic acid delivery media or combinations thereof that jointly contain a nucleic acid encoding interleukin 7 and a nucleic acid encoding CCL19.
  • Immunosuppressive inhibitors are also provided.
  • nucleic acids that are contained in a container labeled to be used in combination with an immunosuppressive inhibitor and that jointly contain a nucleic acid encoding interleukin 7 and a nucleic acid encoding CCL19.
  • Pharmaceuticals containing cells or nucleic acid delivery media or combinations thereof are also provided. Details of the container, labeling, etc. are as described above.
  • a container containing a nucleic acid containing a combination thereof and a product containing the same are also provided. Details of the container, package insert, etc. are as described above.
  • one or more types of cells or nucleic acid delivery media or combinations thereof which jointly contain a nucleic acid encoding interleukin 7 and a nucleic acid encoding CCL19, and a combination thereof. Due to the synergistic effect of the combination of immunosuppressive inhibitors, a surprisingly improved cancer therapeutic effect can be obtained.
  • immunoreactive cells expressing cell surface molecules specifically recognizing cancer antigens, interleukin 7, CCL19, and immunosuppressive inhibitory polypeptides (hereinafter, according to the present disclosure).
  • Immune-responsive cells C are provided.
  • a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen interleukin 7, CCL19
  • a nucleic acid encoding a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen Details of the definition, eg, amino acid sequence, base sequence, preferred embodiment, etc. of the nucleic acid encoding interleukin 7, the nucleic acid encoding CCL19, and the immunosuppressive inhibitor are described in Immunoresponsive Cell A according to the present disclosure and the present disclosure.
  • a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen interleukin 7, CCL19
  • a nucleic acid that encodes a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen and a gene encoding interleukin 7.
  • the immunoresponsive cell C according to the present disclosure can be considered to be a cell in which the immunoresponsive cell A according to the present disclosure further expresses an immunosuppressive inhibitory polypeptide. Therefore, the matters already explained in the description of the immune-responsive cell A (explanation of the cell surface molecule that specifically recognizes the cancer antigen, interleukin 7, CCL19, etc.) will be described in the immune-responsive cell A. Since it is the same as those described in the above, the description thereof will be omitted.
  • the immunosuppressive inhibitory polypeptide refers to a substance that falls under the category of immunosuppressive inhibitor in the combination drug A according to the present disclosure and corresponds to the polypeptide.
  • the immunosuppressive inhibitory polypeptide releases or reduces the suppression of immune-responsive cell activation.
  • immunosuppressive polypeptides include immune checkpoint-inhibiting polypeptides, Tregs, polypeptides that inhibit the infiltration, survival, or function of immunosuppressive cells such as bone marrow-derived immunosuppressive cells (MDSCs), CCR4 inhibition.
  • immunosuppressive cells such as bone marrow-derived immunosuppressive cells (MDSCs), CCR4 inhibition.
  • examples include sex polypeptides, indoleamine 2,3-dioxygenase (IDO) -inhibiting polypeptides, prostaglandin E2 [PGE2] -suppressing polypeptides, and cytotoxic anticancer polypeptides.
  • the immunosuppressive inhibitory polypeptide may be an antibody, for example, an IgG monoclonal antibody or an antibody fragment, as long as it has these functions.
  • Immune checkpoint-inhibiting polypeptides are polypeptides that typically release or reduce the immunosuppressive mechanism mediated by immune checkpoint molecules expressed on the surface of T cells.
  • the immune checkpoint inhibitory polypeptide is, for example, an immune checkpoint molecule (eg PD-1, CTLA-4, BTLA, TIM-3, TIGIT, LAG-3, etc.) or a ligand for an immune checkpoint molecule (eg PD-L1). , PD-L2, CD80 / CD86, Signal-15, etc.) to prevent the ligand from initiating signal transduction from immune checkpoint molecules, thereby reducing the inhibitory response to the immune response. it can.
  • an immune checkpoint molecule eg PD-1, CTLA-4, BTLA, TIM-3, TIGIT, LAG-3, etc.
  • a ligand for an immune checkpoint molecule eg PD-L1.
  • PD-L2 CD80 / CD86, Signal-15, etc.
  • immune checkpoint inhibitory polypeptides include PD-1 inhibitory polypeptide, PD-L1 inhibitory polypeptide, CTLA-4 inhibitory polypeptide, CD47 inhibitory polypeptide, SIRP ⁇ inhibitory polypeptide, BTLA inhibition.
  • examples thereof include a sex polypeptide, a TIM-3 inhibitory polypeptide, a TIGIT inhibitory polypeptide, a LAG-3 inhibitory polypeptide, a Sigma-15 inhibitory polypeptide, and a galectin-9 inhibitory polypeptide.
  • CCR4 inhibitory polypeptides include anti-CCR4 antibodies (eg, mogamulizumab) and the like.
  • Immunosuppressive inhibitors include PD-1 inhibitory polypeptide, PD-L1 inhibitory polypeptide, PD-L2 inhibitory polypeptide, CTLA-4 inhibitory polypeptide, BTLA (B-and T-lymphocyte attenuator).
  • Inhibitory polypeptide TIM-3 (T-cell immunoglobulin and mucin domain 3) Inhibiting polypeptide, TIGIT (T-cell immunoreceptor with Ig and ITIM domains) Inhibiting polypeptide, LAG-3 (Lymphocyte Activation Gene-3)
  • TIGIT T-cell immunoreceptor with Ig and ITIM domains
  • LAG-3 Lymphocyte Activation Gene-3
  • It may contain one or more selected from the group consisting of an inhibitory polypeptide and a Signal-15 inhibitory polypeptide.
  • the immunosuppressive inhibitory polypeptide may be an immune checkpoint inhibitory polypeptide, more specifically a PD-1 inhibitory polypeptide or a PD-L1 inhibitory polypeptide, and more specifically. May be an antibody against PD-1 or an antibody against PD-L1.
  • antibodies against PD-1 include Nivolumab, Pembrolizumab, Tripalimab, Cemiplimab-rwlc, Sintilimab and the like.
  • Examples of antibodies against PD-L1 include Atezolizumab, Durvalumab, Avelumab, and the like.
  • Examples of antibodies against CTLA-4 include Ipilimumab and the like.
  • Other examples include antibodies against CD47 and SIRP ⁇ .
  • the antibody may be an IgG monoclonal antibody, a Fab fragment, a scFv, or another antibody or antibody fragment as long as it has a predetermined antigen-binding property.
  • the anti-PD-1scFv as an immunosuppressive inhibitory polypeptide include the amino acid sequence at positions 592 to 835 counting from the N-terminal in SEQ ID NO: 16, and an example of the nucleic acid sequence encoding the amino acid sequence is SEQ ID NO: 16. Examples thereof include the nucleic acid sequences of the 1717th residue to the 2505th residue counting from the 5'terminal at 15.
  • a single chain antibody (scFv) against a target of interest can also be produced by a known method. For example, after inoculating a mouse or the like with an antigen, lymphoid tissue is collected to prepare a library of antibody genes, and a base sequence encoding an antibody that recognizes a cancer antigen is obtained by antibody direct cloning, and the base sequence is used as the basis.
  • a single chain antibody may be designed.
  • a hybridoma may be prepared using the collected lymphoid tissue, a hybridoma encoding an antibody that recognizes a cancer antigen may be identified to obtain a monoclonal antibody, and a single-chain antibody may be designed based on the sequence information. Good.
  • an antibody library prepared from cancer-affected B cells having an antiserum showing high neutralizing activity against cancer antigens may be prepared and presented on a phage display to select a single-chain antibody that recognizes a cancer antigen.
  • the immune-responsive cell C expresses cell surface molecules that specifically recognize cancer antigens, IL-7, CCL19, and immunosuppressive inhibitory polypeptides.
  • "expressing a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen, IL-7, CCL19, and an immunosuppressive inhibitory polypeptide” means a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen.
  • IL-7, CCL19, and immunosuppressive inhibitory polypeptides are produced by immune-responsive cells, and at least some of the cell surface molecules that specifically recognize cancer antigens are located on the cell surface (cell surface outside the cell). It means that IL-7, CCL19, and immunosuppressive inhibitory polypeptides are secreted extracellularly.
  • Cancer cells have an immunosuppressive mechanism that suppresses immune-responsive cells from attacking cancer cells or issuing instructions to attack cancer cells. Attacks on cancer cells are suppressed.
  • the immunosuppressive inhibitory polypeptide expressed by the immune-responsive cell C according to the present disclosure makes it possible for the immune system of a cancer-affected person to attack the cancer cell by inhibiting the immunosuppressive mechanism by the cancer cell. It is thought to be easy.
  • the immune-responsive cell C according to the present disclosure also expresses IL-7 and CCL19, so that not only the immune-responsive cell C according to the present disclosure but also the endogenous immunity of the cancer-affected person Responsive cells also accumulate around the cancer cells, which may enable them to attack the cancer cells more effectively.
  • the immune-responsive cell C specifically recognizes a cancer antigen by expressing a cell surface molecule that specifically recognizes the cancer antigen, interleukin 7, CCL19, and an immunosuppressive inhibitory polypeptide.
  • a cell surface molecule that specifically recognizes the cancer antigen, interleukin 7, CCL19, and an immunosuppressive inhibitory polypeptide.
  • the combination of immune-responsive cells expressing recognized cell surface molecules, secreted IL-7, CCL19, and immunosuppressive inhibitory polypeptide exerted a synergistic effect, which resulted in significant improvement. It is thought to have a therapeutic effect. This synergistic effect is unpredictable from the individual effects of each factor.
  • immune-responsive cells expressing cell surface molecules specifically recognizing cancer antigens, interleukin 7, and CCL19 but not immunosuppressive inhibitors were used. Cancer that is difficult to treat when using immune-responsive cells that express cell surface molecules and immunosuppressive inhibitors that specifically recognize cancer antigens, but do not express interleukin 7 and CCL19. Even in the case of treatment, it may be possible to treat by using the immunoresponsive cells C according to the present disclosure. In addition, due to such a high therapeutic effect, it is possible to obtain a therapeutic effect even when the dose of cells is reduced, and even when a sufficient number of immune-responsive cells cannot be collected when using autologous cells, treatment is performed. It becomes possible to obtain the effect.
  • Such effects include co-expression of cell surface molecules that specifically recognize cancer antigens, interleukin 7, and CCL19, or cell surface molecules that specifically recognize cancer antigens and immunosuppressive inhibitory polypeptides. This is an effect that cannot be predicted from the co-expression of.
  • the immune-responsive cell C is, for example, an immune-responsive cell collected from a living body, a pluripotent stem cell such as iPS cell or ES cell, or an immune-responsive cell derived from a somatic stem cell such as a hematopoietic stem cell. Obtained by introducing a nucleic acid encoding a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen, a nucleic acid encoding IL-7, a nucleic acid encoding CCL19, and a nucleic acid encoding an immunosuppressive inhibitory polypeptide. be able to.
  • immunoreactive cells that endogenously express a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen are collected from a living body to obtain IL-7. It can also be obtained by introducing a nucleic acid encoding, a nucleic acid encoding CCL19, and a nucleic acid encoding an immunosuppressive inhibitory polypeptide.
  • a nucleic acid encoding for example, a TCR that specifically recognizes a cancer antigen
  • CCL19 a nucleic acid encoding an immunosuppressive inhibitory polypeptide.
  • a nucleic acid encoding a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen, a nucleic acid encoding IL-7, a nucleic acid encoding CCL19, and a nucleic acid encoding an immunosuppressive inhibitory polypeptide are all related to the present disclosure. It may be present in the genome of immunoresponsive cell C or may be carried in a vector outside the genome, and may be present in the genome from the viewpoint of stability of nucleic acid carrying, for example.
  • nucleic acid encoding a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen a nucleic acid encoding IL-7, a nucleic acid encoding CCL19, and a nucleic acid encoding an immunosuppressive inhibitory polypeptide are integrated in the genome. They may exist (for example, in a concatenated manner), they may exist separately (separately), or only some of them may exist together (for example, in a concatenated manner), and others. Things may exist separately (separately).
  • the cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen is a heterodimer or a heteromultimer, for example, a TCR consisting of an ⁇ dimer or a ⁇ dimer
  • the heterodimer Nucleic acids encoding the respective molecules constituting the body or heteromultimer may be present collectively in the genome or may be present separately (separately).
  • At least one of the nucleic acids encoding IL-7, the nucleic acid encoding CCL19, and the nucleic acid encoding the immunosuppressive inhibitory polypeptide is exogenous, even if all are exogenous. Good.
  • the nucleic acid encoding IL-7, the nucleic acid encoding CCL19, and the nucleic acid encoding the immunosuppressive inhibitory polypeptide may be independently integrated into the genome or the vector. In certain embodiments, is the nucleic acid encoding IL-7, the nucleic acid encoding CCL19, and the nucleic acid encoding the immunosuppressive inhibitory polypeptide all integrated into the genome of immunoreactive cell C according to the present disclosure?
  • nucleic acid encoding IL-7 is integrated into the genome of immunoreactive cell C according to the present disclosure. However, the rest are integrated into one or more vectors present in the immunoresponsive cell C.
  • nucleic acid encoding the immunosuppressive inhibitory polypeptide is integrated into the genome of the immune-responsive cell or is present in the immune-responsive cell, the nucleic acid encoding IL-7 and the CCL19.
  • each nucleic acid is present in the cell can be easily confirmed by using a known method such as PCR.
  • immunoresponsive cells When immunoresponsive cells endogenously express a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen, for example, T cells expressing a TCR that specifically recognizes a predetermined cancer antigen are isolated. In this case, it is not necessary to introduce a nucleic acid encoding a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen from the outside, but in other cases, a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen is introduced. One or more of the encoding nucleic acid, the nucleic acid encoding IL-7, the nucleic acid encoding CCL19, and the immunosuppressive inhibitory polypeptide are introduced from the outside.
  • nucleic acid encodes a nucleic acid encoding a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen for introduction into an immune-responsive cell, a nucleic acid encoding IL-7, a nucleic acid encoding CCL19, and an immunosuppressive inhibitory polypeptide.
  • Each nucleic acid can be produced by a known technique such as a method of chemically synthesizing or a method of amplifying by PCR based on the information of the base sequence encoding the molecule.
  • the codon in the coding region may be modified to optimize the expression of the gene in the immune-responsive cell into which the nucleic acid containing the gene is introduced.
  • the nucleic acid group to be introduced can be introduced by including the nucleic acid group in one or more nucleic acid delivery media.
  • nucleic acid delivery media in this case include the viruses, liposomes and nanoparticles described above. Liposomes and nanoparticles may contain nucleic acids in a vector.
  • one or more types of nucleic acid delivery media also jointly contain a nucleic acid encoding interleukin 7, a nucleic acid encoding CCL19, and a nucleic acid encoding an immunosuppressive inhibitory polypeptide.
  • the nucleic acid delivery medium encodes a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen, such as when an immune-responsive cell does not endogenously express a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen. It may further contain nucleic acids.
  • a vector containing a group of nucleic acids will be described, but the same description applies to the case of a nucleic acid delivery medium as long as there is no contradiction.
  • the nucleic acid delivery medium may include a vector as described below.
  • the nucleic acid to be introduced may be introduced in a state of being carried on different vectors, or may be introduced in a state of carrying two or more kinds of nucleic acids on the same vector.
  • nucleic acid encoding IL-7 when introducing a nucleic acid encoding IL-7, a nucleic acid encoding CCL19, and a nucleic acid encoding an immunosuppressive inhibitory polypeptide into an immunoresponsive cell, the nucleic acid encoding IL-7 and the nucleic acid encoding CCL19 It may be introduced in a separate vector from the above, or both nucleic acids may be carried and introduced in the same vector.
  • the nucleic acid encoding CCL19 and the nucleic acid encoding the immunosuppressive inhibitory polypeptide may be introduced in separate vectors, or both nucleic acids may be supported and introduced in the same vector.
  • the nucleic acid encoding IL-7 and the nucleic acid encoding the immunosuppressive inhibitory polypeptide may be introduced in separate vectors, or both nucleic acids may be supported and introduced in the same vector.
  • the following description of the case where a nucleic acid encoding a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen is also introduced also excludes "a nucleic acid encoding a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen”.
  • a nucleic acid encoding IL-7, a nucleic acid encoding CCL19, and a nucleic acid encoding an immunosuppressive inhibitory polypeptide in other words, a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen.
  • a nucleic acid encoding a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen, a nucleic acid encoding IL-7, a nucleic acid encoding CCL19, and a nucleic acid encoding an immunosuppressive inhibitory polypeptide are introduced into immune-responsive cells. If, (I) A nucleic acid encoding a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen, a nucleic acid encoding IL-7, a nucleic acid encoding CCL19, and a nucleic acid encoding an immunosuppressive inhibitory polypeptide are separated from each other.
  • Nucleic acid encoding a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen and a nucleic acid encoding IL-7 are carried on the same vector, and a nucleic acid encoding CCL19 is carried on a separate vector to inhibit immunosuppression.
  • the nucleic acid encoding the sex polypeptide may be carried on a separate additional vector and introduced.
  • Nucleic acid encoding a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen and nucleic acid encoding CCL19 are carried on the same vector, and nucleic acid encoding IL-7 is carried on a separate vector to inhibit immunosuppression.
  • the nucleic acid encoding the sex polypeptide may be carried on a separate additional vector and introduced.
  • a nucleic acid encoding a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen and a nucleic acid encoding an immunosuppressive inhibitory polypeptide are carried on the same vector, and a nucleic acid encoding IL-7 is carried on a separate vector.
  • the nucleic acid encoding CCL19 may be carried on a separate additional vector for introduction.
  • nucleic acid encoding IL-7 and nucleic acid encoding CCL19 are carried on the same vector, and nucleic acid encoding a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen is carried on a separate vector to inhibit immunosuppression.
  • the nucleic acid encoding the sex polypeptide may be carried on a separate additional vector and introduced.
  • a nucleic acid encoding IL-7 and a nucleic acid encoding an immunosuppressive inhibitory polypeptide are carried on the same vector, and a nucleic acid encoding a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen is carried on a separate vector.
  • the nucleic acid encoding CCL19 may be carried on a separate additional vector for introduction.
  • a nucleic acid encoding CCL19 and a nucleic acid encoding an immunosuppressive inhibitory polypeptide are carried on the same vector, and a nucleic acid encoding a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen is carried on a separate vector.
  • the nucleic acid encoding IL-7 may be carried on a separate additional vector and introduced.
  • a nucleic acid encoding a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen and a nucleic acid encoding IL-7 are carried on the same vector, and a nucleic acid encoding CCL19 and a nucleic acid encoding an immunosuppressive inhibitory polypeptide are carried. May be introduced by carrying them together in separate vectors.
  • a nucleic acid encoding a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen and a nucleic acid encoding CCL19 are carried on the same vector, and a nucleic acid encoding IL-7 and a nucleic acid encoding an immunosuppression-inhibiting polypeptide are carried.
  • a nucleic acid encoding a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen and a nucleic acid encoding an immunosuppressive inhibitory polypeptide are carried on the same vector, and a nucleic acid encoding IL-7 and a nucleic acid encoding CCL19 are supported. May be introduced by carrying them together in separate vectors.
  • a nucleic acid encoding a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen, a nucleic acid encoding IL-7, and a nucleic acid encoding CCL19 are carried on the same vector to encode an immunosuppression-inhibiting polypeptide.
  • Nucleic acid may be introduced by supporting it on a separate vector, or it may be introduced.
  • a nucleic acid encoding a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen, a nucleic acid encoding IL-7, and a nucleic acid encoding an immunosuppressive inhibitory polypeptide are carried on the same vector to encode CCL19.
  • Nucleic acid may be introduced by supporting it on a separate vector.
  • a nucleic acid encoding a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen, a nucleic acid encoding CCL19, and a nucleic acid encoding an immunosuppressive inhibitory polypeptide are carried on the same vector to encode IL-7.
  • Nucleic acid may be introduced by supporting it on a separate vector.
  • a nucleic acid encoding IL-7, a nucleic acid encoding CCL19, and a nucleic acid encoding an immunosuppressive inhibitory polypeptide are carried on the same vector to encode a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen.
  • Nucleic acid may be introduced by supporting it on a separate vector, or it may be introduced.
  • Nucleic acid encoding a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen, nucleic acid encoding IL-7, nucleic acid encoding CCL19, and nucleic acid encoding an immunosuppressive inhibitory polypeptide are put into the same vector. It may be carried and introduced.
  • two or more kinds of nucleic acids may be introduced while being supported on the same vector.
  • the two or more kinds of nucleic acids are collectively present in the immune-responsive cell.
  • the following vectors or group of vectors can be used.
  • F A vector containing a nucleic acid encoding a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen, a nucleic acid encoding IL-7, a nucleic acid encoding CCL19, and a nucleic acid encoding an immunosuppressive inhibitory polypeptide (f).
  • G A group of vectors consisting of the following vectors (g-1) and vectors (g-2) (corresponding to the case of xiv above).
  • G-1 Vector containing nucleic acid encoding a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen (g-2) Nucleic acid encoding IL-7, nucleic acid encoding CCL19, immunosuppressive inhibitory polypeptide
  • a suitable vector group can be designed in the same manner as for the vector containing the nucleic acid encoding the above.
  • the vector group may be designed so that the nucleic acid is included in the redundancy. That is, a specific one of a nucleic acid encoding a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen, a nucleic acid encoding IL-7, a nucleic acid encoding CCL19, and a nucleic acid encoding an immunosuppressive inhibitory polypeptide. Nucleic acid may be contained in two or more of the vectors belonging to the vector group.
  • the method for introducing a vector carrying a nucleic acid into immune-responsive cells is not particularly limited, but known methods such as a virus infection method, a transposon method, a calcium phosphate method, a lipofection method, a microinjection method, and an electroporation method can be used. Can be mentioned. A method of introducing a foreign nucleic acid by a viral infection method capable of introducing it into the genome can bring about stability of nucleic acid support.
  • GP2-293 cells manufactured by Takara Bio
  • Plat-GP cells manufactured by Cosmo Bio
  • PG13 cells ATCC CRL-10686
  • PA317 cells ATCC CRL-
  • a method of transfecting packaging cells such as 9078) to prepare a recombinant virus and infecting immune-responsive cells with the recombinant virus can be mentioned, such as Retrovirus packaging Kit Eco (manufactured by Takara Bio Co., Ltd.). It may be carried out using a commercially available kit.
  • an MSCV retrovirus expression system or the like it is possible to introduce a foreign nucleic acid into the genome.
  • a nucleic acid encoding CCL19 a nucleic acid encoding an immunosuppressive inhibitory polypeptide, and, if necessary, a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen. Integration can also be performed using known gene editing techniques.
  • Known gene editing techniques include techniques using endonucleases such as zinc finger nucleases, TALENs (transcriptional activation-like effector nucleases), and CRISPR (Crustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeat) -Cas systems. Integration of nucleic acids encoding other foreign proteins, which are optionally introduced, into the genome can also be performed by a similar technique.
  • nucleic acids when integrated into the genome of immunoresponsive cells, they can be actuated in a non-coding region of the genome together with an upstream promoter that controls the gene (that is, can be expressed under the control of the promoter). It may be integrated (as such), or it may be operably integrated downstream of a promoter already present in the genome, without a promoter. Examples of promoters already present in the genome include promoters of TCR ⁇ and TCR ⁇ .
  • Nucleic acid encoding a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen nucleic acid encoding IL-7, nucleic acid encoding CCL19, nucleic acid encoding an immunosuppressive inhibitory polypeptide, and optionally introduced additional
  • these two or more kinds of nucleic acids can be expressed under the control of a common promoter.
  • a 2A peptide, an IRES peptide, or the like can be used to disrupt transcription and / or translation to express each polypeptide.
  • nucleic acid encoding a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen a nucleic acid encoding IL-7, a nucleic acid encoding CCL19, and a nucleic acid encoding an immunosuppressive inhibitory polypeptide.
  • the order of arrangement of the two or more types of nucleic acids in the vector is not particularly limited.
  • nucleic acid encoding a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen a nucleic acid encoding IL-7, a nucleic acid encoding CCL19, and a nucleic acid encoding an immunosuppressive inhibitory polypeptide are contained.
  • the order of arrangement of these four types of nucleic acids is not limited.
  • nucleic acid encoding a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen a nucleic acid encoding IL-7, a nucleic acid encoding CCL19, and a nucleic acid encoding an immunosuppressive inhibitory polypeptide.
  • nucleic acid encoding a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen a nucleic acid encoding IL-7, a nucleic acid encoding CCL19, and a nucleic acid encoding an immunosuppressive inhibitory polypeptide.
  • Any of the residuals (3) of the above 4 nucleic acids iii
  • Any of the residuals (2) of the above 4 nucleic acids any of the residuals (2) of the above 4 nucleic acids
  • the last remaining nucleic acid may be lined up.
  • nucleic acid encoding IL-7 a nucleic acid encoding CCL19, and a nucleic acid encoding CCL19, which may be used when immune-responsive cells endogenously express a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen
  • Vectors containing nucleic acids encoding immunosuppressive polypeptides are also available.
  • Any one of the residuals (2) of the above three nucleic acids iii) The last remaining one of the above three nucleic acids may be arranged in this order.
  • the nucleic acid encoding the cell surface molecule that specifically recognizes the cancer antigen, the nucleic acid encoding IL-7, the nucleic acid encoding CCL19, and the nucleic acid encoding the immunosuppressive inhibitory polypeptide are different promoters. It may be transcribed by one promoter using an internal ribosome entry site (IRES) or a self-cleaving 2A peptide.
  • IRS internal ribosome entry site
  • the base sequence between the respective nucleic acids may contain any base sequence as long as each nucleic acid can be expressed, but a self-cleaving peptide (2A peptide) or a self-cleaving peptide (2A peptide) or It may contain a base sequence encoding an IRES, or may contain a base sequence encoding a 2A peptide.
  • the base sequence between nucleic acids that may contain a self-cleaving peptide (2A peptide) or a base sequence encoding IRES may be, for example, a base sequence between a nucleic acid encoding IL-7 and a nucleic acid encoding CCL19. Often, it may be a base sequence between a nucleic acid encoding IL-7 and a nucleic acid encoding an immunosuppressive inhibitory polypeptide, and the nucleic acid encoding a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen and IL.
  • It may be a base sequence between a nucleic acid encoding -7, or a base sequence between a nucleic acid encoding a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen and a nucleic acid encoding CCL19. Often, it may be a base sequence between a nucleic acid encoding a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen and a nucleic acid encoding an immunosuppression-inhibiting polypeptide, and the nucleic acid encoding CCL19 and immunosuppression inhibition may be used.
  • It may be a base sequence between a nucleic acid encoding a sex polypeptide, a base sequence between a nucleic acid encoding an alpha chain and a nucleic acid encoding a beta chain in an alpha beta TCR, and a gamma.
  • -It may be a base sequence between the nucleic acid encoding the gamma chain and the nucleic acid encoding the delta chain in the delta TCR. That is, each region between these nucleic acids can optionally contain a self-cleaving peptide (2A peptide) or a base sequence encoding an IRES.
  • the 2A peptide is a self-cleaving peptide derived from a virus, and the details thereof are as described above.
  • the vector used for introducing nucleic acid into immune-responsive cells may be linear or cyclic, and may be a non-viral vector such as a plasmid, a viral vector, or a transposon vector.
  • the vector used for introducing nucleic acid into immune-responsive cells may contain one or more of a control sequence such as a promoter and a terminator, and a selectable marker sequence such as a drug-resistant nucleic acid and a reporter nucleic acid. Even after the nucleic acid is introduced into the immune-responsive cell, the promoter contained in the vector may be used to express the nucleic acid.
  • a nucleic acid encoding a cell surface molecule that operably recognizes a cancer antigen downstream of a promoter sequence in a vector, a nucleic acid encoding IL-7, a nucleic acid encoding CCL19, and an immunosuppressive inhibitory poly.
  • the nucleic acids By arranging one or more of the nucleic acids encoding the peptides, the nucleic acids can be efficiently transcribed.
  • the promoter examples include a retrovirus LTR promoter, an SV40 early promoter, a cytomegalovirus promoter, a virus-derived promoter such as the thymidine kinase promoter of simple herpesvirus, a phosphoglycerate kinase (PGK) promoter, an Xist promoter, and ⁇ -actin.
  • Mammalian-derived promoters such as promoters, RNA polymerase II promoters, and polypeptide chain elongation factor gene promoters can be mentioned.
  • a tetracycline-responsive promoter induced by tetracycline, an Mx1 promoter induced by interferon, or the like may be used.
  • a gene whose transcription is regulated by the promoter for example, a gene encoding a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen, a gene encoding IL-7, CCL19
  • the viral vector examples include a retrovirus vector, a lentivirus vector, an adenovirus vector, and an adeno-associated virus vector.
  • retrovirus vector examples include a pMSGV vector (Tamada K. et al., Clin Cancer Res 18: 6436-6445 (2002)), a pMSCV vector (manufactured by Takara Bio Inc.), and the like. If a retrovirus vector is used, the introduced nucleic acid is incorporated into the genome of the host cell, so that the introduced nucleic acid can be stably expressed for a long period of time.
  • Expression of cell surface molecules, IL-7, CCL19, and immunosuppressive inhibitory polypeptides that specifically recognize cancer antigens in immune-responsive cells can be confirmed by flow cytometry, ELISA, Western blotting, or the like. ..
  • the introduction of nucleic acids encoding these can be confirmed by confirming the expression product as described above, or by PCR such as Northern blotting, Southern blotting, RT-PCR and the like.
  • the vector used for nucleic acid introduction contains a marker gene
  • the introduction of nucleic acid can be confirmed by examining the expression of the marker gene inserted in the expression vector.
  • a drug containing an immunoresponsive cell expressing a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen, interleukin 7, CCL19, and an immunosuppressive inhibitory polypeptide (hereinafter, "the present disclosure” Also referred to as “pharmaceutical C") is provided. That is, the drug C according to the present disclosure is a drug containing immune-responsive cells C according to the present disclosure.
  • the pharmaceutical C according to the present disclosure may further contain a pharmaceutically acceptable additive, and the additive includes physiological saline, buffered physiological saline, cell culture medium, dextrose, water for injection, and glycerol. , Ethanol and combinations thereof, stabilizers, solubilizers, surfactants, buffers, preservatives, isotonic agents, fillers, and lubricants.
  • the amount of immune-responsive cells C according to the present disclosure contained in the medicament C according to the present disclosure can be appropriately adjusted according to the type, location, severity of the cancer, the age, weight and condition of the subject to be treated, and the like. For example, 1 ⁇ 10 4 to 1 ⁇ 10 11 pieces, more specifically 1 ⁇ 10 5 to 1 ⁇ 10 10 pieces, more specifically 1 ⁇ 10 6 to 1 ⁇ 10 9 pieces per administration. It may be administered.
  • the amount of immune-responsive cells C according to the present disclosure is less than 1 ⁇ 10 6 cells per administration, for example, 1 ⁇ 10 5 to 5 ⁇ 10 5 cells, more specifically 1.5 ⁇ 10 5 cells. It may be as small as ⁇ 4 ⁇ 10 5 pieces.
  • Immune-responsive cells that do not express interleukin 7 and CCL19 but that express cell surface molecules and immunosuppressive inhibitors that specifically recognize cancer antigens. When used, the amount may be so small that it does not exert an anticancer effect.
  • the lower limit of the amount of immune-responsive cells C is not particularly limited as long as the amount of immune-responsive cells C can exert an anticancer effect.
  • the drug C according to the present disclosure is 4 times a day, 3 times a day, 2 times a day, once a day, every 1 day, every 2 days, every 3 days, every 4 days, every 5 days, 1 week. It may be administered once every 7 days, every 8 days, every 9 days, twice a week, once a month or twice a month.
  • the total number of administrations may be, for example, 1 to 10 times, that is, 1 time, 2 times, 3 times, 4 times, 5 times, 6 times, 7 times, 8 times, 9 times or 10 times. It may be administered more than 10 times.
  • the medicament C comprises immune-responsive cells expressing a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen, secreted IL-7, CCL19, and an immunosuppressive inhibitory peptide.
  • the synergistic effect of the combination of factors produces a surprisingly improved cancer treatment effect.
  • the medicament C according to the present disclosure can be administered to a subject in need of treatment for cancer by using a method known to those skilled in the art, for example, local injection (including catheter administration), systemic injection, intravenous injection. It can be administered by injection or parenteral administration (eg, transdermal administration, transmucosal administration, more specifically nasal drops, eye drops, sublingual administration, suppositories, patches, etc.). From the viewpoint of handling, the drug C according to the present disclosure may be formulated in an injectable form (solution, suspension, emulsion) at a unit dose.
  • an injectable form solution, suspension, emulsion
  • administration method include intravenous, intratumoral, intradermal, subcutaneous, intramuscular, intraperitoneal, intraarterial, intramedullary, intracardiac, intraarticular, intrasynovial, intracranial, and intrathecal.
  • submucosal (cerebrospinal fluid) injections can be mentioned.
  • the immune-responsive cell C according to the present disclosure is a gene necessary for obtaining an original immune-responsive cell or a precursor cell thereof from a patient to be treated and forming the immune-responsive cell C according to the present disclosure. Later, it may be administered to the same patient (self-administration) or to another patient (allogeneic administration).
  • the source immune-responsive cells or progenitor cells thereof may be prepared from pluripotent stem cells such as iPS cells and ES cells or somatic stem cells such as hematopoietic stem cells.
  • the medicament C according to the present disclosure is administered as, for example, a sterile liquid preparation which may be buffered to a predetermined pH, for example, an isotonic aqueous solution, a suspension, an emulsion, a dispersion or a viscous composition. be able to.
  • the liquid preparation may be a liquid preparation for injection. Further, in order to prolong the contact time with a specific structure, the liquid preparation may be in the form of a viscous composition having a viscosity within an appropriate viscosity range.
  • the liquid preparation comprises, for example, a solvent or dispersion medium consisting of water, saline, phosphate buffered saline, polyols (eg, glycerol, propylene glycol, liquid polyethylene glycol, etc.) and mixtures thereof. May be good.
  • a solvent or dispersion medium consisting of water, saline, phosphate buffered saline, polyols (eg, glycerol, propylene glycol, liquid polyethylene glycol, etc.) and mixtures thereof. May be good.
  • the liquid preparation can be prepared by blending the immunoresponsive cells C according to the present disclosure with various amounts of other components in an appropriate amount of a suitable solvent.
  • the liquid preparation may contain suitable carriers, diluents, or excipients.
  • the liquid preparation may also be lyophilized.
  • the liquid preparation may further contain a variety of co-auxiliaries, depending on the desired route of administration, examples of co-auxiliaries include wetting agents, dispersants or emulsifiers (eg, methylcellulose), pH buffering agents. , Gelling agents or viscosity-enhancing additives, preservatives, flavoring agents, coloring agents and the like.
  • co-auxiliaries include wetting agents, dispersants or emulsifiers (eg, methylcellulose), pH buffering agents. , Gelling agents or viscosity-enhancing additives, preservatives, flavoring agents, coloring agents and the like.
  • the liquid preparation may also further contain various additives that enhance the stability and sterility of the liquid preparation, such as antibacterial preservatives, antioxidants, chelating agents, and buffers. And so on.
  • various antibacterial and antifungal agents such as parabens, chlorobutanol, phenol, sorbic acid and the like can be used to prevent the action of microorganisms.
  • the vehicle, diluent or additive used in the liquid preparation must be compatible with the immunoresponsive cells C according to the present disclosure contained therein.
  • the liquid preparation may be isotonic with blood.
  • Isotonicity is a liquid preparation of sodium chloride, or other pharmaceutically acceptable osmoregulators (eg, dextrose, boric acid, sodium tartrate, propylene glycol, or other inorganic or organic solutes). It can be achieved by containing it in.
  • the drug C according to the present disclosure may further contain another anticancer agent in addition to the immunoresponsive cells C according to the present disclosure.
  • anticancer agents include alkylating agents such as bendamstin, iosfamide and dacarbazine, metabolic antagonists such as pentostatin, fludalabine, cladribine, methotrexate, 5-fluorouracil, 6-mercaptopurine and enocitabine, rituximab and cetuximab.
  • Molecular-targeted drugs such as trastuzumab, kinase inhibitors such as imatinib, gefetinib, errotinib, afatinib, dasatinib, snitinib, tramethinib, proteasome inhibitors such as bortezomib, calcinurine inhibitors such as cyclosporin and tachlorimus
  • anticancer antibiotics plant alkaloids such as irinotecan and etoposide, platinum preparations such as cisplatin, oxaliplatin and carboplatin, hormonal therapeutic agents such as tamoxyphene and bicardamide, and immunomodulators such as interferon.
  • Other anti-cancer agents may include, for example, at least one of an alkylating agent and an antimetabolite.
  • the treatment target may be, for example, any mammal, but may be, for example, a primate animal, and more specifically, a human.
  • the treatment target may be a pet animal or a domestic animal, and examples thereof include dogs, cats, pigs, cows, horses, sheep, and goats.
  • the cancers to be treated may be solid cancers or blood cancers, adenocarcinoma, squamous cell carcinoma, glandular squamous cell carcinoma, undifferentiated cancer, large cell cancer, small cell cancer, skin.
  • sarcoma such as chondrosarcoma, Ewing sarcoma, malignant vascular endothelial tumor, malignant Schwan tumor, osteosarcoma, soft tissue sarcoma, hepatoblastoma, myeloma, nephrblastoma, neuroblastoma, pancreas
  • blastomas such as blastoma, pleural lung blastoma, and retinal blastoma, embryonic cell tumors
  • the drug C according to the present disclosure it is possible to reduce the immunosuppressive property in the cancer microenvironment, so that the cancer to be treated is not limited to blood cell type cancer, but for solid cancer. Also has a therapeutic effect. Therefore, it can be highly effective against solid cancers that were difficult to treat by conventional methods.
  • the drug C according to the present disclosure may be prophylactically administered to a subject even before a definitive diagnosis of cancer is made, in a situation where the presence of cancer cells in the subject is suspected.
  • usage patterns are also included in the concept of use for the treatment of cancer.
  • ⁇ Treatment method for cancer in the subject> According to one aspect of the present disclosure.
  • a method for treating (hereinafter, also referred to as a cancer treatment method C according to the present disclosure) is provided.
  • the immune-responsive cells in the cancer treatment method C according to the present disclosure are the immune-responsive cells C according to the present disclosure, and the detailed configuration and examples thereof are the immune-responsive cells C according to the present disclosure.
  • the above explanation applies as it is.
  • the immune-responsive cells C according to the present disclosure can be administered in a therapeutically effective amount.
  • the cancer treatment method C according to the present disclosure is a factor consisting of a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen expressed by an immune-responsive cell, IL-7, CCL19, and an immunosuppressive inhibitory polypeptide. The synergistic effect of the combination produces a surprisingly improved cancer treatment effect.
  • immunity expressing cell surface molecules specifically recognizing cancer antigens, interleukin 7, CCL19, and immunosuppressive inhibitory polypeptides in the manufacture of pharmaceuticals for treating cancer.
  • the use of responsive cells is provided. Even in this use, the above-mentioned description of Medicine C according to the present disclosure applies as it is to the details of immune-responsive cells, cancer treatment and the like.
  • the present disclosure expresses cell surface molecules that specifically recognize cancer antigens, interleukin 7, CCL19, and immunosuppressive inhibitory polypeptides used to treat cancer in a subject. Immune-responsive cells are also provided.
  • the drug C according to the present disclosure may be contained in a container as described in the description of the combination drug A according to the present disclosure. Products containing containers containing pharmaceutical C are also provided.
  • cell surface molecules, IL-7, CCL19, and immunosuppressive inhibitory peptides that specifically recognize cancer antigens expressed by immune-responsive cells. Due to the synergistic effect of the combination, a surprisingly improved cancer therapeutic effect can be obtained.
  • IL-7 ⁇ CCL19 expression vector A mouse IL-7 (without stop codon) followed by an IL-7-F2A-CCL19 DNA fragment (SEQ ID NO: 9) encoding F2A and mouse CCL19 was artificially synthesized.
  • the synthesized IL-7-F2A-CCL19 DNA fragment was used as a pMSGV retrovirus expression vector having an F2A-eGFP sequence (Tamada k et al., Clin Cancer).
  • a pMSGV vector (eGFP-Conv. Vector) containing eGFP as a control and not containing IL-7 and CCL19 was prepared.
  • eGFP-Conv. A map of the vector is shown in FIG. 1A.
  • the 1st to 462th bases are IL-7 (the 1st to 75th bases are the signal sequence of IL-7), the 463rd to 537th bases are F2A, and the 538th to 861st bases are CCL19.
  • Bases 538 to 612 are the signal sequence of CCL19
  • bases 868 to 942 are F2A
  • bases 946 to 1662 are nucleic acids encoding eGFP
  • bases 1663 to 1665 are stop codons.
  • amino acid sequence corresponding to the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 10 is shown in SEQ ID NO: 11.
  • the fourth base in SEQ ID NO: 10 is changed from thymine (t) to guanine (g) (the second amino acid in SEQ ID NO: 11 is changed from phenylalanine (F) to valine (V)). It has been replaced.
  • a retrovirus was prepared for transduction of mouse T cells. Using Lipofectamine 3000 (manufactured by Thermo Fisher Scientific Co., Ltd.), the above-mentioned 7 ⁇ 19 expression vector or eGFP-Conv. By transfecting the vector and the pCL-Eco plasmid (manufactured by Imgenex) into a GP2-293 packaging cell line (manufactured by Takara Bio Inc.), a 7 ⁇ 19 expression vector or eGFP-Conv. A retrovirus introduced with a vector was prepared.
  • DMEM fetal calf serum
  • 100 U / ml penicillin 100 U / ml penicillin
  • 100 ⁇ g / ml streptomycin 100 ⁇ g / ml streptomycin
  • 50 mM 2-mercaptoethanol 50 mM 2-mercaptoethanol
  • mice Male and female DBA / 2 mice (6-8 weeks old) were purchased from Nippon SLC Co., Ltd. (Shizuoka Prefecture) and used in the experiment.
  • Transgenic mice expressing TCR that specifically recognizes the H-2L d- restrictive P815 tumor antigen P1A (Sarma, S., Y. Guo, Y. Guilloux, C. Lee, X.-F. Bai, Y Liu. 1999. J. Exp. Med. 189: 811-820) was back-mated with DBA / 2 mice for at least 10 generations.
  • mice were maintained under pathogen-free conditions.
  • Spleen cells are collected from transgenic mice expressing TCR that specifically recognizes P1A after re-mating, and mouse T cells expressing P815 tumor antigen P1A-specific TCR derived from spleen cells (P1A-specific TCR-T).
  • Cells hereinafter also referred to as vector-unintroduced P1A-TCRT cells
  • mouse T cells expressing P1A-specific TCR regardless of the presence or absence of vector introduction are collectively referred to as P1A-TCRT cells.
  • vector-unintroduced P1A-TCRT cells were incubated and activated for 48 hours in the presence of an appropriate amount of P1A peptide (LPYLGWLVF; SEQ ID NO: 12) and IL-2 for cell activation. After 48 hours of incubation, cultured cells were harvested and vector-unintroduced P1A-TCRT cells were concentrated by negative magnetic sorting using a mouse Pan T cell Isolation Kit (Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Germany). The isolated vector-unintroduced P1A-TCRT cells were transferred to a plate coated with 25 ⁇ g / ml Retronectin (registered trademark: Takara Bio Inc.).
  • the supernatant containing the vector-introduced retrovirus was mixed in the presence of the above-mentioned vector-unintroduced P1A-TCRT cells (1 ⁇ 10 6 cells / ml) activated on the plate and at 1500 rpm for 2 hours. After centrifugation, the cells were cultured for 6 hours. To remove retrovirus from the culture medium, T cells were collected, washed, transferred to a new growth culture medium (RPMI-1640) containing IL-2, cultured for another 2 days, and a 7 ⁇ 19 expression vector was introduced.
  • RPMI-1640 new growth culture medium
  • a population of P1A-TCRT cells containing P1A-TCRT cells (hereinafter, also referred to as eGFP-expressing P1A-7 ⁇ 19 TCRT cells), or eGFP-Conv.
  • a population of P1A-TCRT cells containing vector-introduced P1A-TCRT cells (hereinafter, also referred to as eGFP-expressing P1A-TCRT cells) was obtained. Transduction of each expression vector was confirmed by flow cytometric analysis to detect eGFP as a surrogate marker.
  • the eGFP-expressing P1A-7 ⁇ 19 TCRT cells and the eGFP-expressing P1A-TCRT cells do not occupy the entire P1A-TCRT cell population, but in the present specification, the description is simplified. Therefore, unless otherwise specified, treatment for the cell population is described as treatment for eGFP-expressing P1A-7 ⁇ 19 TCRT cells or eGFP-expressing P1A-TCRT cells.
  • Transduction (-) represents P1A-TCRT cells without gene transfer (vector-unintroduced P1A-TCRT cells), and "Conv. P1A-T cells” represents eGFP.
  • Representing P1A-TCRT cells “7x19 P1A-T cells” represents eGFP-expressing P1A-7x19 TCRT cells.
  • the percentage value shown in FIG. 2 indicates the percentage of the number of cells present in each region. As shown in FIG.
  • mice were subcutaneously inoculated flankally with 5 ⁇ 10 5 P815 mastcytomas (mastocytomas) suspended in 0.1 ml HBSS.
  • the P815 mast cytoma is syngenic to DBA / 2 mice, and is hereinafter simply referred to as P815 cells and P815 tumor cells.
  • mice were irradiated with a sublethal dose (3-5 Gy) for preconditioning.
  • mice were divided into 6 groups, and 1 ⁇ 10 6 intravenous eGFP-expressing P1A-7 ⁇ 19 TCRT cells were intravenously administered to the 1st and 2nd groups, and the 3rd and 4th groups were divided into groups.
  • the total number of T cells in the P1A-TCRT cell population including expressed P1A-7 ⁇ 19 TCRT cells or eGFP-expressing P1A-TCRT cells).
  • mice in the 2nd, 4th, and 6th groups a total of 6 anti-PD-1 monoclonal antibodies (Clone G4 manufactured by Merck Co., Ltd .; hereinafter) once a week starting on the 10th day.
  • the analysis results of the survival rate of each mouse are shown in FIG. 4, and the results of measuring the tumor volume are shown in FIGS. 5A to 5F.
  • the data is a pool of 5 independent experiments.
  • the horizontal axis represents the number of days (day) after subcutaneous inoculation of P815 mast cytoma.
  • FIGS. 4 and 5A-5F the horizontal axis represents the number of days (day) after subcutaneous inoculation of P815 mast cytoma.
  • 5A to 5F also show the number of tumor-rejected mice (numerator) with respect to the total number of mice (denominator) in each group.
  • mice ( ⁇ ) or mice ( ⁇ ) that received anti-PD-1 monoclonal antibody in addition to eGFP-expressing P1A-TCRT cells You can see that.
  • mice ( ⁇ ) to which the eGFP-expressing P1A-TCRT cells and the anti-PD-1 monoclonal antibody were administered a high synergistic effect was not observed.
  • the obtained T cells were washed with PBS, resuspended in Buffer R (manufactured by Thermofisher Scientific Co., Ltd.), and TrueCut (registered trademark) Cas9 protein v2 (manufactured by Thermofisher Scientific Co., Ltd.) and gene-specific. It was mixed with a Cas9-RNP complex composed of a specific guide RNA. The Cas9-RNP complex was electroporated into T cells using the Neon Transfection System (manufactured by Invitrogen). As a result, the target gene was disrupted.
  • T cells were resuspended in IL-2 -containing cRPMI, and the 7 ⁇ 19 expression vector was packaged in a retrovirus and introduced into T cells in the same manner as described above.
  • the guide RNA that targets mouse PD-1 is Okada M, et al. Blockage of Core Fucosylation Reduces Cell-Surface Expression of PD-1 and Promotes Anti-tumor Immune Responses of T Cells. Cell Rep. 2017; 20 Designed with reference to (5): 1017-1028, the sequence of the guide RNA portion was 5'-UCUGGGCAUGUGGGUCCGGC-3'(SEQ ID NO: 13). In addition, the synthesis of guide RNA was outsourced to Thermo Fisher Scientific Co., Ltd.
  • the guide RNA was changed to 5'-CUCCAGUCUUUCUAGAAGAU-3'(SEQ ID NO: 14) targeting ROSA26, and mouse ROSA26 was disrupted.
  • Guide RNA targeting ROSA26 was purchased from Thermo Fisher Scientific, Inc.
  • mice were subcutaneously inoculated flankally with 5 ⁇ 10 5 P815 mastcytomas (mastocytomas) suspended in 0.1 ml HBSS.
  • mice were irradiated with a sublethal dose (3-5 Gy) for preconditioning. The mice were divided into 4 groups, and the following treatments were performed after the 7th day.
  • Group 1 No administration of T cells or antibodies.
  • Group 2 On day 7, 1 ⁇ 10 6 intravenous eGFP-expressing P1A-7 ⁇ 19 TCRT cells knocked down ROSA26 were administered.
  • Group 3 On day 7, a cell population containing eGFP-expressing P1A-7 ⁇ 19 TCRT cells in which PD-1 was knocked down was intravenously administered to 1 ⁇ 10 6.
  • Group 4 On the 7th day, a cell population containing eGFP-expressing P1A-7 ⁇ 19 TCRT cells in which PD-1 was knocked down was intravenously administered to 1 ⁇ 10 6 cells, and once a week on the 10th day as the first time.
  • the anti-PD-1 monoclonal antibody was intraperitoneally injected at a dose of 100 ⁇ g / individual 6 times in total.
  • x is an unadministered mouse (the first group)
  • ⁇ is a mouse to which eGFP-expressing P1A-7 ⁇ 19 TCRT cells knocked down the ROSA26 region (the second group)
  • ⁇ is PD-.
  • Mice to which eGFP-expressing P1A-7 ⁇ 19TCRT cells in which 1 was knocked down (the third group above), ⁇ were anti-PD-1 monoclonals in addition to eGFP-expressing P1A-7 ⁇ 19TCRT cells in which PD-1 was knocked down.
  • the horizontal axis represents the number of days (day) after subcutaneous inoculation of P815 mast cytoma.
  • FIGS. 6B to 6E also show the number of tumor-rejected mice (numerator) with respect to the total number of mice (denominator) in each group.
  • the cancer therapeutic effect obtained by the mice to which the anti-PD-1 monoclonal antibody was administered in addition to the eGFP-expressing P1A-7 ⁇ 19TCRT cells was obtained in the eGFP-expressing P1A-7 ⁇ 19TCRT cells. It can be seen that it is much higher than the case where PD-1 is simply knocked down. This means that administration of anti-PD-1 monoclonal antibody not only promotes the immune response of eGFP-expressing P1A-7 ⁇ 19 TCRT cells, but is also induced around cancer cells by eGFP-expressing P1A-7 ⁇ 19 TCRT cells. It is shown that it also promotes the function of the endogenous immune cells.
  • mice Male and female DBA / 2 mice were subcutaneously inoculated flankally with 5 ⁇ 10 5 P815 mastcytomas (mastocytomas) suspended in 0.1 ml HBSS. On day 6, mice were irradiated with a sublethal dose (3-5 Gy) for preconditioning. On day 7, the mice were divided into two groups, the first group was administered with 1 ⁇ 10 6 veins of eGFP-expressing P1A-7 ⁇ 19 TCRT cells, and the second group was administered with eGFP-expressing P1A. -TCRT cells were administered 1 ⁇ 10 6 veins.
  • Tumor-completely regressed mouse individuals were euthanized on day 119, spleen cells were collected, counted, analyzed by flow cytometry and evaluated for maintenance of P1A-TCRT cells in the spleen.
  • T cells were isolated from spleen cells using the magnetic sorting method and 2 ⁇ 10 6 T cells were incubated with 1 ⁇ 10 6 P815 cells treated with mitomycin C. After 3 days and 5 days, the culture supernatant was collected and the concentration of IFN- ⁇ was measured by ELISA. In addition, the number of P1A-TCRT cells (per well) during the culture period with P815 cells was measured by flow cytometry.
  • the collected spleen cells were subjected to CD8 and eGFP by the same flow cytometry as in the experiment shown in FIG. 2 (however, the gate was changed from a 4-split gate to a custom gate including a CD8-eGFP + gate and a CD8 + eGFP + gate).
  • the results of measuring the expression of the above are shown in FIG.
  • the average value of the ratio of cells expressing eGFP without expressing CD8 (CD8 - eGFP + cells) in the spleen cells is shown in white bars in FIG. 8A, and the average value of the number of cells is shown in white in FIG. 8B. Shown with a blank bar.
  • the average value of the ratio of cells expressing both CD8 and eGFP (CD8 + eGFP + cells) in the spleen cells is painted in black in FIG. 8A, and the average value of the number of cells is painted in black in FIG. 8B. Shown by the bar.
  • the data of "Conv. P1A-T cells" is almost invisible due to the small value, but the white bar is located on the left side of the black bar.
  • FIGS. 7, 8A and 8B "Conv.
  • P1A-T cells represents a group to which eGFP-expressing P1A-TCRT cells were administered, and "7 ⁇ 19 P1A-T cells” represents eGFP-expressing P1A-7 ⁇ 19 TCRT cells. Represents the group to which was administered. From the results shown in FIGS. 7, 8A and 8B, in the group administered with eGFP-expressing P1A-7 ⁇ 19 TCRT cells, P1A-TCRT cells carrying the introduced gene were maintained even in the mice on day 119. You can see that it has been done. The percentage value shown in FIG.
  • eGFP-expressing P1A-TCRT cells are administered as 0. 055%, 0.97% in the group administered with eGFP-expressing P1A-7 ⁇ 19 TCRT cells) and the ratio of the number of cells expressing both CD8 and eGFP (CD8 + eGFP + cells) (eGFP-expressing P1A-TCRT cells) 0.0068% in the group administered with eGFP, 0.47% in the group administered with eGFP-expressing P1A-7 ⁇ 19 TCRT cells).
  • FIG. 8C the result of measuring the number of P1A-TCRT cells (per well) expressing both CD8 and eGFP during the culture period with P815 cells by flow cytometry is shown in FIG. 8C.
  • the concentration of IFN- ⁇ obtained by measuring the culture supernatant by ELISA is shown in FIG. 8D.
  • FIGS. 8C and 8D the results in the group administered with eGFP-expressing P1A-TCRT cells are represented by the left bar (white bar) at each time point, and the group administered with eGFP-expressing P1A-7 ⁇ 19 TCRT cells is shown at each time point. It is represented by the bar on the right side (black-painted bar) in.
  • FIG. 8D the results in the group administered with eGFP-expressing P1A-TCRT cells are represented by the left bar (white bar) at each time point, and the group administered with eGFP-expressing P1A-7 ⁇ 19 TCRT cells is shown at each time point. It is represented by the bar on the
  • the left bar representing the results in the group administered with eGFP-expressing P1A-TCRT cells overlaps the horizontal axis (that is, the number of P1A-TCRT cells expressing both CD8 and eGFP). It is almost 0), so it is not actually visible.
  • the results are indicated by mean and standard deviation, where "*" indicates that the P value is P ⁇ 0.05 and "**" indicates that P ⁇ 0.01. .. From the results shown in FIGS. 8C and 8D, it can be seen that the function of P1A-TCRT cells carrying the introduced gene is retained even in the mouse on day 119.
  • mice On day 0, 6-8 week old male and female DBA / 2 mice were subcutaneously inoculated flankally with 5 ⁇ 10 5 P815 cells suspended in 0.1 ml HBSS. On day 6, mice were irradiated with a sublethal dose (3-5 Gy) for preconditioning. On day 7, eGFP-expressing P1A-7 ⁇ 19 TCRT cells were intravenously administered to 1 ⁇ 10 6 cells (note that, as described above, the cell numbers listed are P1A-TCRTs including eGFP-expressing P1A-7 ⁇ 19 TCRT cells. The total number of T cells in the cell population).
  • the anti-PD-1 monoclonal antibody was intraperitoneally injected at a dose of 100 ⁇ g / individual 6 times a week, starting on the 10th day for the first time.
  • 6 naive DBA / 2 mice were subcutaneously inoculated flankally with 5 ⁇ 10 5 P815 mastcytomas (mastocytomas) suspended in 0.1 ml HBSS.
  • mice The number of days elapsed until the 20th day of the measurement of the tumor volume of the mouse, with the day of re-inoculation of P815 cells in mice with completely regressed tumor or the day of inoculation of P815 cells in naive DBA / 2 mice as day 0. It is also shown in FIG. Tumor volumes in mice were measured with a digital caliper as described for FIGS. 5A-5F, but are shown by mean and standard deviation in this experiment.
  • x indicates the result of inoculation of P815 cells to naive DBA / 2 mice
  • ⁇ indicates the result of reinoculation of P815 cells to mice with completely regressed tumor.
  • mice cured by administration of eGFP-expressing P1A-7 ⁇ 19 TCRT cells and anti-PD-1 monoclonal antibody retained resistance to cancer cells even on day 117. You can see that it is doing.
  • Control anti-hCD20 CAR vector and IL-7 / CCL19 expression-anti-hCD20 CAR vector were prepared by the methods described in WO 2016/5628, paragraphs 0061 to 0066, and derived from the spleen and lymph nodes of DBA / 2 mice. Introduced into 3 ⁇ 10 6 purified mouse T cells of the above to prepare anti-hCD20 CAR-IL-7 / CCL19-expressing T cells or anti-hCD20 CAR-expressing T cells.
  • the control anti-hCD20 CAR vector is a vector containing a nucleic acid encoding anti-hCD20 CAR, and the IL-7 / CCL19 expression-anti-hCD20 CAR vector is anti-hCD20 CAR-F2A-IL-7-F2A-CCL19 in this order.
  • a vector containing the encoding nucleic acid is a vector containing the encoding nucleic acid.
  • the anti-PD-1 monoclonal antibody was intraperitoneally administered 5 times every 4 to 5 days starting from the 17th day.
  • 0.25 ⁇ 10 6 anti-hCD20 CAR-expressing T cells were intravenously administered on the 14th day, and the anti-PD-1 monoclonal antibody was administered 5 times every 4 to 5 days starting from the 17th day.
  • 0.25 ⁇ 10 6 anti-hCD20 CAR-IL-7 / CCL19-expressing T cells were intravenously administered on the 14th day, and a total of 5 times every 4 to 5 days starting from the 17th day.
  • a hamster control IgG antibody that does not recognize PD-1 was intraperitoneally administered at an amount of 100 ⁇ g / individual.
  • 0.25 ⁇ 10 6 anti-hCD20 CAR-IL-7 / CCL19-expressing T cells were intravenously administered on the 14th day, and the 17th day was the first day, and a total of 5 times every 4 to 5 days.
  • Anti-PD-1 monoclonal antibody was intraperitoneally administered in an amount of 100 ⁇ g / individual.
  • the survival rate of each mouse was analyzed, and the tumor volume of the mouse was measured twice a week by the method using the above digital caliper.
  • the analysis result of the survival rate of each mouse is shown in FIG. 10A, and the result of measuring the tumor volume up to the 70th day is shown in FIGS. 10B to 10F.
  • the data show pooled data from the results of two independent experiments.
  • Represents a mouse (sample size 10 animals; the fifth group above) to which the antibody was also administered.
  • N 5 in each group.
  • the horizontal axis represents the number of days (day) after subcutaneous inoculation of P815-hCD20 tumor cells.
  • FIGS. 10A-10F the horizontal axis represents the number of days (day) after subcutaneous inoculation of P815-hCD20 tumor cells.
  • FIGS. 10A-10F the horizontal axis represents the number of days (day) after subcutaneous inoculation of P815-hCD20 tumor cells.
  • 10B to 10F also show the number of tumor-rejecting mice (numerator) with respect to the total number of mice (denominator) in each group.
  • mice ( ⁇ ) to which the anti-PD-1 monoclonal antibody was administered in addition to the anti-hCD20 CAR-IL-7 / CCL19-expressing T cells were sufficiently administered alone. It was possible to achieve a remarkably high survival rate and suppression of tumor volume increase in solid tumors even when a dose that did not produce a favorable anticancer effect was administered.
  • the dose of anti-hCD20 CAR expressing T cells 0.25 ⁇ 10 6 cells and small as described above, is co
  • FIG. 11A shows a typical dot plot.
  • Percentage of c-kit negative cells identified as non-tumor cells (upper left panel), percentage of CD-3 negative / CD11c positive dendritic cells in the c-kit negative cell population (upper right panel), and CD
  • the percentage of endogenous T cells that are -3 positive / eGFP negative and the percentage of injected P1A-TCRT cells that are CD3-positive / eGFP positive are shown (center panel).
  • "Conv. P1A-T cells” represents a group administered with eGFP-expressing P1A-TCRT cells
  • “7 ⁇ 19 P1A-T cells” represents a group administered with eGFP-expressing P1A-7 ⁇ 19 TCRT cells. ..
  • DC represents dendritic cells
  • Endogenous T represents endogenous T cells
  • P1A-T represents P1A-TCRT cells.
  • White bars show a subset of tumor-infiltrating lymphocytes in mice treated with eGFP-expressing P1A-TCRT cells, and black bars show tumor-infiltrating lymphocytes in mice treated with eGFP-expressing P1A-7 ⁇ 19 TCRT cells. Shows a sphere subset. * Represents P ⁇ 0.05, ** represents P ⁇ 0.01, and *** represents P ⁇ 0.001.
  • c-kit staining which is known to be highly positive for P815 mast cytomas and low for dendritic cells and T cells. There was. From the results of FIGS. 11A and 11B, first, the proportion of c-kit negative tumor-infiltrating lymphocytes in the mice injected with eGFP-expressing P1A-7 ⁇ 19TCRT cells was determined by the mice injected with eGFP-expressing P1A-TCRT cells. It can be seen that it is higher than the rate of c-kit negative tumor-infiltrating lymphocytes in.
  • FIG. 11A The proportion of CD3-negative / CD11c-positive dendritic cells in a subset of c-kit-negative tumor-infiltrating lymphocytes is also shown in FIG. 11A.
  • FIG. 11A further shows the expression ratio of CD4 and CD8 in a subset of endogenous T cells that are CD3 positive / eGFP negative and a subset of CD3 positive / eGFP positive injected P1A-TCRT cells or P1A-7 ⁇ 19 TCRT cells. Also shown.
  • FIG. 11B black bars (in mice treated with eGFP-expressing P1A-7 ⁇ 19 TCRT cells) compared to white bars (a subset of tumor-infiltrating lymphocytes in mice treated with eGFP-expressing P1A-TCRT cells).
  • the 1st to 57th nucleotides counting from the 5'end correspond to the nucleic acid sequence encoding the leader sequence
  • the 58th to 375th nucleotides are the nucleic acids encoding the anti-hCD20scFv light chain.
  • the 376th to 420th nucleotides correspond to the sequence
  • the 421st to 783rd nucleotides correspond to the nucleic acid sequence encoding the anti-hCD20scFv heavy chain
  • the 793th to 1635th nucleotides correspond to the nucleic acid sequence encoding the linker.
  • Nucleotides correspond to nucleic acid sequences encoding transmembrane and cytoplasmic domains
  • nucleotides 1642 to 1716 correspond to nucleic acid sequences encoding 2A peptides
  • nucleotides 1717 to 1773 encode leader sequences.
  • the 1774th to 2106th nucleotides correspond to the nucleic acid sequence encoding the anti-mPD-1scFv light chain
  • the 2107th to 2151st nucleotides correspond to the nucleic acid sequence encoding the linker sequence, 2152.
  • the second to 2505 nucleotides correspond to the nucleic acid sequence encoding the anti-mPD-1scFv heavy chain
  • the 2506th to 2529th nucleotides correspond to the nucleic acid sequence encoding the FLAG tag
  • the 2539th to 2556th nucleotides are His.
  • the 2A peptide is also referred to as a foot-and-mouth disease virus 2A peptide (also referred to as F2A peptide). ) was used.
  • the anti-hCD20 CAR-anti-PD-1 antibody expression vector and the anti-hCD20 CAR-IL-7 / CCL19-anti-PD-1 antibody expression vector described later are the FLAG tag and the His tag (His ⁇ 6). Contains an array.
  • the amino acid sequence encoded by the nucleic acid sequence of SEQ ID NO: 15 is shown in SEQ ID NO: 16.
  • the amino acid sequence at positions 1 to 545 counting from the N-terminal is the amino acid sequence of anti-hCD20 CAR
  • the amino acid sequence at positions 548 to 572 is the amino acid sequence of the 2A peptide
  • the sequence is the amino acid sequence of anti-mPD-1 VL
  • the amino acid sequence of positions 703 to 717 is the amino acid sequence of the linker
  • the amino acid sequence of positions 718 to 835 is the amino acid sequence of anti-mPD-1 VH, 836 to.
  • the amino acid sequence at position 843 is the amino acid sequence of the FLAG tag
  • the amino acid sequence at positions 847 to 852 is the amino acid sequence of the His tag.
  • the 1st to 57th nucleotides correspond to the nucleic acid sequence encoding the leader sequence
  • the 58th to 375th nucleotides are the nucleic acids encoding the anti-hCD20scFv light chain.
  • the 376th to 420th nucleotides correspond to the nucleic acid sequence encoding the linker
  • the 421st to 783rd nucleotides correspond to the nucleic acid sequence encoding the anti-hCD20scFv heavy chain
  • the 792th to 1038th nucleotides correspond to the nucleic acid sequence of SEQ ID NO: 17
  • the nucleotides correspond to the nucleic acid sequence encoding mouse CD8, the 1039th to 1161st nucleotides correspond to the nucleic acid sequence encoding mouse CD28, and the 1162nd to 1296th nucleotides correspond to the nucleic acid sequence encoding mouse 4-1BB.
  • the 1297th to 1635th nucleotides correspond to the nucleic acid sequence encoding mouse CD3 ⁇ , the 1642nd to 1716th nucleotides correspond to the nucleic acid sequence encoding the 2A peptide, and the 1720th to 1794th nucleotides correspond to mIL.
  • the 1720th to 2181st nucleotides correspond to the nucleic acid sequence encoding mIL-7, and the 2182nd to 2256th nucleotides correspond to the nucleic acid sequence encoding the 2A peptide.
  • the 2257th to 2331th amino acid sequences correspond to the amino acid sequences encoding the leader sequence of mCCL19, the 2257th to 2580th nucleotides correspond to the nucleic acid sequences encoding mCCL19, and the 2584th to 2658th nucleotides.
  • nucleotides 2659 to 2715 correspond to the nucleic acid sequence encoding the leader sequence
  • nucleotides 2716 to 3048 correspond to the nucleic acid sequence encoding the anti-mPD-1scFv light chain.
  • the 3049th to 3093th nucleotides correspond to the nucleic acid sequence encoding the linker sequence
  • the 3094th to 3447th nucleotides correspond to the nucleic acid sequence encoding the anti-mPD-1scFv heavy chain
  • the 3448th to 3471th nucleotides correspond to each other.
  • the second nucleotide corresponds to the nucleic acid sequence encoding the FLAG tag
  • the 3480th to 3497th nucleotides correspond to the nucleic acid sequence encoding the His tag.
  • the amino acid sequence encoded by the nucleic acid sequence of SEQ ID NO: 17 is shown in SEQ ID NO: 18.
  • the amino acid sequence at positions 1 to 261 is the amino acid sequence of anti-hCD20 scFv
  • the sequence at positions 265 to 346 is the amino acid sequence of mCD8
  • the amino acid sequence at positions 347 to 387 is the amino acid sequence at positions 347 to 387.
  • the amino acid sequence of mCD28, the amino acid sequence of positions 388 to 432 is the amino acid sequence of m4-1BB
  • the amino acid sequence of positions 433 to 545 is the amino acid sequence of mCD3
  • the amino acid sequence of positions 548 to 572 is that of the 2A peptide.
  • amino acid sequence at positions 574 to 727 is the amino acid sequence of mIL-7
  • amino acid sequence at positions 728 to 752 is the amino acid sequence of 2A peptide
  • amino acid sequence at positions 753 to 860 is the amino acid sequence of mCCL19.
  • the amino acid sequence at positions 862 to 886 is the amino acid sequence of the 2A peptide
  • the amino acid sequence at positions 906 to 1016 is the amino acid sequence of anti-mPD-1 VL
  • amino acid sequence at positions 1017 to 1031 is the amino acid of the linker.
  • the amino acid sequence at positions 1032 to 1149 is the amino acid sequence of anti-mPD-1 VH
  • the amino acid sequence at positions 1150 to 1157 is the amino acid sequence of the FLAG tag
  • the amino acid sequence at positions 1161 to 1166 is the amino acid sequence of the His tag. It is an amino acid sequence.
  • Retroviral vectors were generated for transduction of mouse T cells.
  • the above-mentioned anti-hCD20 CAR-anti-PD-1 antibody expression vector or anti-hCD20 CAR-IL was used for GP2-293 packaging cells (manufactured by Takara Bio Co., Ltd.) using Lipofectamine (registered trademark) 2000 or 3000 (manufactured by Life Technology Co., Ltd.).
  • DMEM containing 10% FCS, 100 U / ml penicillin, and 100 mg / ml streptomycin was used.
  • the T cell culture medium used in the examples described below is RPMI-1640 containing 10% FCS, 100 U / ml penicillin, 100 mg / ml streptomycin, 50 mM 2-mercaptoethanol, and 2 mM L-glutamine. Was used.
  • an expression vector similar to the anti-hCD20 CAR-anti-PD-1 antibody expression vector (hereinafter, also referred to as an anti-hCD20 CAR expression vector) except that the nucleic acid sequence encoding the anti-PD-1 scFv is not contained.
  • An expression vector similar to the anti-hCD20 CAR-IL-7 / CCL19-anti-PD-1 antibody expression vector except that it does not contain a nucleic acid sequence encoding anti-PD-1 scFv hereinafter, anti-hCD20 CAR-IL-7). (Also referred to as / CCL19 expression vector) was also prepared, and a retroviral vector was similarly prepared using it.
  • mice T cells Transduction of mouse T cells
  • purified mouse T cells derived from spleen and lymph nodes were stratified with anti-CD3 monoclonal antibody (3 ⁇ g / ml), anti-CD28 monoclonal antibody (1 ⁇ g / ml), IL-2 ( It was activated at 100 IU / ml) for 48 hours.
  • the anti-hCD20 CAR-anti-PD-1 antibody expression vector prepared above, the anti-hCD20 CAR-IL-7 / CCL19-anti-PD-1 antibody expression vector, the anti-hCD20 CAR expression vector, or the anti-hCD20 CAR-IL- The above-mentioned mouse T cells (1 ⁇ 10 6 ) in which a supernatant containing a retrovirus into which a 7 / CCL19 expression vector was introduced was activated on a plate coated with 25 ⁇ g / ml retronectin (registered trademark: Takara Bio Co., Ltd.).
  • mouse T cells are harvested, transferred to a new growth culture (RPMI) containing IL-2 (100 IU / ml), cultured for an additional 42 hours, anti-hCD20 CAR-anti-PD.
  • RPMI new growth culture
  • anti-hCD20 CAR-anti-PD-1 antibody-expressing T cells anti-hCD20 CAR-IL-7 / CCL19-anti-PD-1 antibody expression vector were introduced.
  • Mouse T cells (hereinafter, also referred to as anti-hCD20 CAR-IL-7 / CCL19-anti-PD-1 antibody-expressing T cells), mouse T cells into which an anti-hCD20 CAR expression vector has been introduced (hereinafter, also referred to as anti-hCD20 CAR-expressing T cells). ) Or anti-hCD20 CAR-IL-7 / CCL19 expression vector-introduced mouse T cells (hereinafter, also referred to as anti-hCD20 CAR-IL-7 / CCL19 expression T cells) were obtained.
  • Recombinant protein in which transduced T cells (denoted as uninf. In FIG. 13) or T cells transduced with various retroviral vectors encoding the above CARs are transduced to detect CAR expression It was stained with L (also referred to as protein L-bio) and subsequently with streptavidin (also referred to as sav-apc) to which allophycocyanin was bound. The expression level of CAR was analyzed by flow cytometry. The results are shown in FIG.
  • conv. / PD-1 is anti-hCD20 CAR-anti-PD-1 antibody-expressing T cells
  • 7 ⁇ 19 is anti-hCD20 CAR-IL-7 / CCL19-expressing T cells
  • 7 ⁇ 19 / PD-1 is anti-hCD20 CAR-IL.
  • the left side is an FSC-SSC plot
  • the right side is a graph showing the positive degree (horizontal axis) and cell count (vertical axis) of allophycocyanin staining.
  • the histogram shown in the graph on the right shows the percentage of cells that were positive for staining.
  • FIG. 13 it can be seen that the T cells transduced with the retroviral vector encoding CAR, other than the untransduced T cells, express CAR as expected.
  • the concentration of IL-7 and the concentration of CCL19 were measured by an ELISA kit.
  • -IL-7 / CCL19-Anti-PD-1 antibody-expressing T cells were cultured for 2 days, and the culture supernatant was collected, and the concentrations of IL-7 and CCL19 in the culture supernatant were measured with a commercially available ELISA kit (manufactured by R & D systems). Was measured using.
  • the standard deviation as well as the average value of the three wells is shown in the graph.
  • the data shows untransformed T cells (uninf.), Anti-hCD20 CAR-expressing T cells (conv.), And anti-hCD20 CAR-IL-7 / CCL19-expressing T cells (7). ⁇ 19), anti-hCD20 CAR-anti-PD-1 antibody-expressing T cells (conv./PD-1), anti-hCD20 CAR-IL-7 / CCL19-anti-PD-1 antibody-expressing T cells (7 ⁇ 19 / PD-) 1) and only the medium (data obtained by performing the same treatment when the culture solution does not contain T cells) are arranged in this order. As shown in FIG.
  • the concentration of anti-mPD-1scFv was measured by two kinds of ELISA kits. Specifically, untransformed T cells, anti-hCD20 CAR-expressing T cells, anti-hCD20 CAR-IL-7 / CCL19-expressing T cells, anti-hCD20 CAR-anti-PD-1 antibody-expressing T cells, or anti-hCD20 CAR.
  • the culture supernatant obtained by culturing -IL-7 / CCL19-anti-PD-1 antibody-expressing T cells for 2 days was collected, and the concentrations of IL-7 and CCL19 in the culture supernatant were measured by ELISA.
  • a recombinant fusion protein consisting of mouse PD-1 and immunoglobulin Fc moiety was immobilized in a well to capture PD-1scFv, and an anti-FLAG tag or an anti-6 ⁇ His tag was used for detection.
  • the results are shown in FIG. In FIG. 15, the standard deviation as well as the mean value of the three wells is shown in the graph. In each graph, from the left side, the data shows untransformed T cells (uninf.), Anti-hCD20 CAR-expressing T cells (conv.), And anti-hCD20 CAR-IL-7 / CCL19-expressing T cells (7).
  • anti-hCD20 CAR-anti-PD-1 antibody-expressing T cells conv./PD-1
  • anti-hCD20 CAR-IL-7 / CCL19-anti-PD-1 antibody-expressing T cells 7 ⁇ 19 / PD-) 1
  • only the medium data obtained by performing the same treatment when the culture solution does not contain T cells
  • anti-hCD20 CAR-anti-PD-1 antibody-expressing T cells conv./PD-1
  • anti-hCD20 CAR-IL-7 / CCL19-anti-PD-1 antibody-expressing T cells 7 ⁇
  • cpa only represents the first group (cyclophosphamide was administered, but CAR-expressing T cells were not administered).
  • N 10 in each group.
  • the horizontal axis represents the number of days (day) after subcutaneous inoculation of P815-hCD20 tumor cells. The results of the log rank test between each group for the survival time of mice are shown in the lower table of FIG. 16 in terms of P value.
  • mice having P815-hCD20 by using anti-hCD20 CAR-IL-7 / CCL19-anti-PD-1 antibody-expressing T cells corresponding to the immune-responsive cells C according to the present disclosure From the results shown in FIG. 16, mice having P815-hCD20 by using anti-hCD20 CAR-IL-7 / CCL19-anti-PD-1 antibody-expressing T cells corresponding to the immune-responsive cells C according to the present disclosure. It can be seen that the survival time of the mouse is significantly increased. In particular, even when anti-hCD20 CAR-anti-PD-1 antibody-expressing T cells were used or when anti-hCD20 CAR-IL-7 / CCL19-expressing T cells were used, most of the mice died during the test period. On the other hand, it is noteworthy that 50% of the anti-hCD20 CAR-IL-7 / CCL19-anti-PD-1 antibody-expressing T cells survived even after 98 days.
  • anti-PD-1scFv by anti-hCD20 CAR-anti-PD-1 antibody-expressing T cells and anti-PD- by anti-hCD20 CAR-IL-7 / CCL19-anti-PD-1 antibody-expressing T cells shown in FIG.
  • anti-hCD20 CAR-IL-7 / CCL19-anti-PD-1 antibody-expressing T cells have a large number of transgenes and a long nucleotide length, which is disadvantageous in transfection and expression. It is understood that the above-mentioned therapeutic effect by anti-hCD20 CAR-IL-7 / CCL19-anti-PD-1 antibody-expressing T cells is surprising in consideration of suffering from.
  • Illustrative embodiments of the present disclosure also include the following embodiments: ⁇ 1> A combination for treating cancer in a subject, including (a) cell surface molecules that specifically recognize cancer antigens, immune-responsive cells expressing interleukin 7 and CCL19, and (b) immunosuppressive inhibitors. Medicine.
  • ⁇ 3> The nucleic acid encoding interleukin 7 and the nucleic acid encoding CCL19 are integrated into the genome of the immune-responsive cell, or together with one or more vectors present in the immune-responsive cell.
  • the combination drug according to ⁇ 1> or ⁇ 2> which is incorporated in or separately.
  • the immune-responsive cells include lymphocytes such as T cells, natural killer cells (NK cells), and B cells, antigen-presenting cells such as monospheres, macrophages, and dendritic cells, and neutrophils.
  • ⁇ 6> In a subject comprising (a) one or more cells or nucleic acid delivery media or combinations thereof that jointly contain a nucleic acid encoding interleukin 7 and a nucleic acid encoding CCL19, and (b) an immunosuppressive inhibitor.
  • At least one of the above-mentioned one or more kinds of cells or nucleic acid delivery medium or a combination thereof is selected from immune-responsive cells, viruses, anaerobic bacteria, liposomes, mesenchymal stem cells (MSCs), and nanoparticles.
  • the combination drug according to ⁇ 6> which comprises one type.
  • the one or more types of cells or nucleic acid delivery medium or a combination thereof further contains a nucleic acid encoding a cell surface molecule that specifically recognizes a cancer antigen, and specifically recognizes the cancer antigen.
  • the combination drug according to ⁇ 6> or ⁇ 7>, wherein the cell surface molecule to be used is a chimeric antigen receptor (CAR) or a T cell receptor (TCR).
  • the immunosuppressive inhibitor is a polypeptide, and the cell or nucleic acid delivery medium or a combination thereof further cooperatively contains a nucleic acid encoding an immunosuppressive inhibitor polypeptide ⁇ 6> to ⁇ 9>.
  • the combination drug described in any one of them. ⁇ 11> The combination drug according to any one of ⁇ 6> to ⁇ 9>, wherein the cell or nucleic acid delivery medium or a combination thereof and the immunosuppressive inhibitor are separately administered at different time points. .. ⁇ 12>
  • the cell surface molecule that specifically recognizes the cancer antigen is one of ⁇ 1> to ⁇ 5>, which is a chimeric antigen receptor (CAR) or a T cell receptor (TCR). The combination drug described.
  • the immunosuppressive inhibitor is a PD-1 inhibitor, PD-L1 inhibitor, PD-L2 inhibitor, CTLA-4 inhibitor, BTLA (B- and T-lymphocyte attenuator) inhibitor, TIM-3.
  • the combination drug according to any one of ⁇ 1> to ⁇ 12> which comprises one or more selected from.
  • ⁇ 14> The combination drug according to any one of ⁇ 1> to ⁇ 13>, wherein the immunosuppressive inhibitor is an antibody.
  • ⁇ 15> The combination drug according to ⁇ 14>, wherein the antibody is an IgG monoclonal antibody or an antibody fragment.
  • ⁇ 16> The combination drug according to any one of ⁇ 1> to ⁇ 15>, wherein the cancer is a solid cancer.
  • Immune responsiveness that expresses (i) cell surface molecules that specifically recognize cancer antigens, interleukin 7 and CCL19, which are used in combination with immunosuppressive inhibitors to treat cancer in a subject.
  • ⁇ 18> Immune-responsive cells expressing cell surface molecules that specifically recognize cancer antigens, interleukin 7 and CCL19, or (ii) nucleic acids encoding interleukin 7 and nucleic acids encoding CCL19.
  • a drug comprising an immunosuppressive inhibitor used in combination with one or more cell or nucleic acid delivery media or a combination thereof to treat cancer in a subject.
  • a nucleic acid delivery medium, or a combination thereof are separately administered at different times, ⁇ 17. > Or ⁇ 18>.
  • Immune responsiveness that is contained in a container indicated to be used in combination with an immunosuppressive inhibitor and (i) expresses interleukin 7 and CCL19, cell surface molecules that specifically recognize cancer antigens.
  • a cell, or (ii) a medicament comprising one or more types of cells or nucleic acid delivery media or a combination thereof, which jointly contains a nucleic acid encoding interleukin 7 and a nucleic acid encoding CCL19.
  • ⁇ 21> A package insert stating that it will be used in combination with immunosuppressive inhibitors, (I) Immune-responsive cells expressing cell surface molecules that specifically recognize cancer antigens, interleukin 7 and CCL19, or (ii) nucleic acids encoding interleukin 7 and nucleic acids encoding CCL19.
  • Products including. ⁇ 22> (A) (i) Cell surface molecules that specifically recognize cancer antigens, immune-responsive cells expressing interleukin 7 and CCL19, or (ii) nucleic acids encoding interleukin 7 and nucleic acids encoding CCL19.
  • a pharmaceutical composition for treating cancer in a subject comprising one or more cell or nucleic acid delivery media or combinations thereof, which are jointly included, and (b) an immunosuppressive inhibitor.
  • the cell surface molecule that specifically recognizes the cancer antigen is a chimeric antigen receptor (CAR) or a T cell receptor (TCR).
  • CAR chimeric antigen receptor
  • TCR T cell receptor
  • Nucleic acid encoding interleukin 7 and nucleic acid encoding CCL19 are integrated into the genome of the immune-responsive cell or together in one or more vectors present in the immune-responsive cell.
  • the immunoreactive cell according to ⁇ 24> which is integrated into or separately from the nucleic acid.
  • ⁇ 26> Either one or a plurality of the above-mentioned vectors in which the nucleic acid encoding the immunosuppressive inhibitory polypeptide is integrated into the genome of the immune-responsive cell or is present in the immune-responsive cell.
  • the immune-responsive cell according to ⁇ 25> which is incorporated into a vector that may be the same as or different from that of the cell.
  • the cell surface molecule that specifically recognizes the cancer antigen is one of ⁇ 24> to ⁇ 26>, which is a chimeric antigen receptor (CAR) or a T cell receptor (TCR).
  • CAR chimeric antigen receptor
  • TCR T cell receptor
  • the immunosuppressive inhibitory polypeptide is PD-1 inhibitory polypeptide, PD-L1 inhibitory polypeptide, PD-L2 inhibitory polypeptide, CTLA-4 inhibitory polypeptide, BTLA (B- and T).
  • the immune-responsive cell according to any one of ⁇ 24> to ⁇ 27>, which comprises one or more selected from the group consisting of an inhibitory polypeptide and a Signal-15 inhibitory polypeptide. .. ⁇ 29>
  • ⁇ 30> The immune-responsive cell according to ⁇ 29>, wherein the antibody is an IgG monoclonal antibody or an antibody fragment.
  • Lymphocyte lineage cells such as T cells, natural killer cells (NK cells), and B cells, antigen-presenting cells such as monospheres, macrophages, and dendritic cells, neutrophils, neutrophils, and neutrophils.
  • the immune-responsive cell according to any one of ⁇ 24> to ⁇ 30> which is selected from the group consisting of mast cells.
  • ⁇ 33> The medicament according to ⁇ 32>, which is used for treating cancer in a subject.
  • ⁇ 34> The medicament according to ⁇ 33>, wherein the cancer is a solid cancer.
  • the immunoresponsive cell is an immunoresponsive cell derived from the subject itself.
  • One or more types of nucleic acid delivery media jointly comprising a nucleic acid encoding interleukin 7, a nucleic acid encoding CCL19, and a nucleic acid encoding an immunosuppressive inhibitory polypeptide.

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Abstract

例示的な組み合わせ医薬は、（ａ１）がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、インターロイキン７、及びＣＣＬ１９を発現する免疫応答性細胞又は（ａ２）インターロイキン７をコードする核酸及びＣＣＬ１９をコードする核酸を協同して含む１種類又は複数種類の細胞若しくは核酸送達媒体又はそれらの組み合わせ、並びに（ｂ）免疫抑制阻害剤を含み、対象におけるがんを治療するために用いられる。例示的な免疫応答性細胞は、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、インターロイキン７、ＣＣＬ１９、及び免疫抑制阻害性ポリペプチドを発現する。

Description

がんを治療するための医薬、組み合わせ医薬、医薬組成物、免疫応答性細胞、核酸送達媒体、及び製品
　本開示は、がんを治療するための医薬、組み合わせ医薬、医薬組成物、免疫応答性細胞、核酸送達媒体、及び製品に関する。
　がんは悪性新生物とも呼ばれ、その治療は医学における大きな目標の１つとなっている。従来、放射線、化学的抗がん剤を用いた治療などが行われてきたが、その効果はがんの種類によっても大きく異なり、全てのがんに対して高い効果が得られるわけではない。
　遺伝子医療の技術を用いてＣＡＲ（キメラ抗原受容体）と呼ばれる特殊なタンパク質を作り出すことができるようＴ細胞を改変して得られたＣＡＲ－Ｔ細胞を用いたＣＡＲ－Ｔ細胞療法が近年開発されている。例えば、再発又は難治性のＣＤ１９陽性のＢ細胞性急性リンパ芽球性白血病（Ｂ－ＡＬＬ）、及び再発又は難治性のＣＤ１９陽性のびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）に対してＣＡＲ－Ｔ細胞療法が有効であることが示されてきた。国際公開第２０１７／１５９７３６号は、ＣＡＲ－Ｔ細胞などのがん抗原を特異的に認識する細胞表面分子を発現する免疫担当細胞において、インターロイキン７（ＩＬ－７）及びケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド１９（ＣＣＬ１９）を発現させて抗腫瘍活性を向上させることを記載している。国際公開第２０１９／０７３９７３号は、核酸送達媒体、ＩＬ－７をコードする核酸、及びＣＣＬ１９をコードする核酸を含む、投与対象におけるメモリー機能を有するＴ細胞又はＢ細胞の増強体や投与対象におけるＴ細胞又はＢ細胞にメモリー機能を誘導する誘導剤を記載している。
　がんの治療においては、抗がん効果の増強や、投与量を減少させることによる副作用の軽減などを目的として、複数の抗がん剤が併用されることが多い。
　例えば、特表２０１８－５３８３３９号公報は、ＣＡＲ－Ｔ細胞を用いた治療の有効性を高める観点から、ＰＤ－Ｌ１に対する抗体と組み合わせてメソテリンに特異的なＣＡＲを発現する細胞を投与することを含む、メソテリンの発現と関連する疾患の処置のための組成物及び方法を提供することを記載している。
　抗がん剤の併用は、相乗的な効果をもたらすことがある一方、組み合わせによっては相互に効果を阻害することもあり、有用な併用の組み合わせが探索されている。
　以上の状況に鑑みて、本開示は、高い抗がん効果が得られる、がんを治療するための医薬、組み合わせ医薬、医薬組成物、免疫応答性細胞、核酸送達媒体、及び製品を提供することを課題とする。
　本開示は、以下の態様を含む。
　（ａ）がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、インターロイキン７（ＩＬ－７）及びケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド１９（ＣＣＬ１９）を発現する免疫応答性細胞、並びに
　（ｂ）免疫抑制阻害剤
　を含む、対象におけるがんを治療するための組み合わせ医薬。
　本開示は以下の態様も含む。
　（ａ）インターロイキン７をコードする核酸及びＣＣＬ１９をコードする核酸を協同して含む１種類又は複数種類の細胞若しくは核酸送達媒体又はそれらの組み合わせ、並びに
　（ｂ）免疫抑制阻害剤
　を含む、対象におけるがんを治療するための組み合わせ医薬。
　本開示は、さらに以下の態様も含む。
　がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、インターロイキン７、ＣＣＬ１９、及び免疫抑制阻害性ポリペプチドを発現する免疫応答性細胞。
　本開示によれば、高い抗がん効果が得られる、がんを治療するための医薬、組み合わせ医薬、医薬組成物、免疫応答性細胞、核酸送達媒体、及び製品が提供される。
実施例に記載の、ｅＧＦＰを含みＩＬ－７及びＣＣＬ１９を含まないｐＭＳＧＶベクター（以下、ｅＧＦＰ－Ｃｏｎｖ．ベクターとも称する。ＩＬ－７－Ｆ２Ａ－ＣＣＬ１９－Ｆ２Ａ－ｅＧＦＰ ＤＮＡ断片（配列番号１０）を含むｐＭＳＧＶベクターからＩＬ－７及びＣＣＬ１９をコードする領域を抜いたベクター）のマップを示す図である。 実施例に記載の、ＩＬ－７－Ｆ２Ａ－ＣＣＬ１９－Ｆ２Ａ－ｅＧＦＰ ＤＮＡ断片（配列番号１０）を含むｐＭＳＧＶベクター（以下、７×１９発現ベクターとも称する）のマップを示す図である。 ベクターを導入していないＴＣＲ－Ｔ細胞（具体的には、ベクターを導入していない、脾臓細胞由来のＰ８１５腫瘍抗原Ｐ１Ａ特異的なＴＣＲを発現するマウスＴ細胞。以下、ベクター未導入Ｐ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞とも称する。また、ベクターの導入の有無に関わらず、Ｐ１Ａ特異的なＴＣＲを発現するマウスＴ細胞をＰ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞と総称する）、ｅＧＦＰ－Ｃｏｎｖ．ベクターを導入したＰ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞（以下、ｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞とも称する）、及び７×１９発現ベクターを導入したＰ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞（以下、ｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－７×１９ＴＣＲＴ細胞とも称する）それぞれにおけるｅＧＦＰとＣＤ８の発現量をフローサイトメトリーで計測した結果を示す散布図である。 ベクター未導入Ｐ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞、ｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞、及びｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－７×１９ＴＣＲＴ細胞それぞれにおけるＩＬ－７の発現量をＥＬＩＳＡにより測定した結果を示すグラフである。 ベクター未導入Ｐ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞、ｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞、及びｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－７×１９ＴＣＲＴ細胞それぞれにおけるＣＣＬ１９の発現量をＥＬＩＳＡにより測定した結果を示すグラフである。 実施例において、ＤＢＡ／２マウスに肥満細胞腫の細胞（Ｐ８１５）を皮下注入し、該ＤＢＡ／２マウスを放射線照射した後に、ベクター未導入Ｐ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞若しくはｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞及び／又は抗ＰＤ－１モノクローナル抗体を前記ＤＢＡ／２マウスに投与したときの経過日数と生存率との関係を示すグラフである。 実施例において、ＤＢＡ／２マウスに肥満細胞腫の細胞（Ｐ８１５）を皮下注入し、該ＤＢＡ／２マウスを放射線照射した後に、処置を行わなかったときの経過日数と腫瘍体積との関係を示すグラフである。 実施例において、ＤＢＡ／２マウスに肥満細胞腫の細胞（Ｐ８１５）を皮下注入し、該ＤＢＡ／２マウスを放射線照射した後に、抗ＰＤ－１モノクローナル抗体を前記ＤＢＡ／２マウスに投与したときの経過日数と腫瘍体積との関係を示すグラフである。 実施例において、ＤＢＡ／２マウスに肥満細胞腫の細胞（Ｐ８１５）を皮下注入し、該ＤＢＡ／２マウスを放射線照射した後に、ｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞を前記ＤＢＡ／２マウスに投与したときの経過日数と腫瘍体積との関係を示すグラフである。 実施例において、ＤＢＡ／２マウスに肥満細胞腫の細胞（Ｐ８１５）を皮下注入し、該ＤＢＡ／２マウスを放射線照射した後に、ｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞及び抗ＰＤ－１モノクローナル抗体を前記ＤＢＡ／２マウスに投与したときの経過日数と腫瘍体積との関係を示すグラフである。 実施例において、ＤＢＡ／２マウスに肥満細胞腫の細胞（Ｐ８１５）を皮下注入し、該ＤＢＡ／２マウスを放射線照射した後に、ｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－７×１９ＴＣＲＴ細胞を前記ＤＢＡ／２マウスに投与したときの経過日数と腫瘍体積との関係を示すグラフである。 実施例において、ＤＢＡ／２マウスに肥満細胞腫の細胞（Ｐ８１５）を皮下注入し、該ＤＢＡ／２マウスを放射線照射した後に、ｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－７×１９ＴＣＲＴ細胞及び抗ＰＤ－１モノクローナル抗体を前記ＤＢＡ／２マウスに投与したときの経過日数と腫瘍体積との関係を示すグラフである。 実施例において、ＤＢＡ／２マウスに肥満細胞腫の細胞（Ｐ８１５）を皮下注入し、該ＤＢＡ／２マウスを放射線照射した後に、ＰＤ－１遺伝子又はＲＯＳＡ２６遺伝子がノックダウン（破壊）されたｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－７×１９ＴＣＲＴ細胞を前記ＤＢＡ／２マウスに投与し又は投与せず、抗ＰＤ－１モノクローナル抗体を前記ＤＢＡ／２マウスに投与した又はしないときの経過日数と生存率との関係を示すグラフである。 図６Ａの実験において、Ｐ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞も抗ＰＤ－１モノクローナル抗体も投与しなかったときの、経過日数と腫瘍体積との関係を示すグラフである。 図６Ａの実験において、ＲＯＳＡ２６遺伝子がノックダウンされたｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－７×１９ＴＣＲＴ細胞を投与したときの、経過日数と腫瘍体積との関係を示すグラフである。 図６Ａの実験において、ＰＤ－１遺伝子がノックダウンされたｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－７×１９ＴＣＲＴ細胞を投与したときの、経過日数と腫瘍体積との関係を示すグラフである。 図６Ａの実験において、ＰＤ－１遺伝子がノックダウンされたｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－７×１９ＴＣＲＴ細胞、及び抗ＰＤ－１モノクローナル抗体を投与したときの、経過日数と腫瘍体積との関係を示すグラフである。 実施例において、がん細胞を接種されたＤＢＡ／２マウスに、ｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞又はｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－７×１９ＴＣＲＴ細胞を投与し、完全な腫瘍退縮後にｅＧＦＰとＣＤ８の両方を発現しているｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞又はｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－７×１９ＴＣＲＴ細胞が脾臓細胞中に存在するかどうかをＣＤ８及びｅＧＦＰ発現量をフローサイトメトリーで測定することにより評価したグラフである。 図７の実験で得られた脾臓細胞中におけるＣＤ８を発現せずｅＧＦＰを発現しているＴ細胞の割合並びにＣＤ８及びｅＧＦＰの両方を発現しているＴ細胞の割合を示すグラフである。 図７の実験で得られた脾臓細胞中におけるＣＤ８を発現せずｅＧＦＰを発現しているＴ細胞の数並びにＣＤ８及びｅＧＦＰの両方を発現しているＴ細胞の数を示すグラフである。 図７の実験で得られた脾臓細胞をさらにＰ８１５腫瘍細胞と共培養したときの、経過日数とＣＤ８及びｅＧＦＰの両方を発現しているＴ細胞の数との関係を示すグラフである。 図７の実験で得られた脾臓細胞をさらにＰ８１５腫瘍細胞と共培養したときの、経過日数と培養上清中におけるＩＦＮ－γ濃度との関係を示すグラフである。 図５Ｆの実験で完全な腫瘍退縮後にＰ８１５腫瘍細胞を再度接種したとき、及びナイーブＤＢＡ／２マウスにＰ８１５腫瘍細胞を接種したときそれぞれの、経過日数と腫瘍体積との関係を示すグラフである。 ＤＢＡ／２マウスにヒトＣＤ２０（ｈＣＤ２０）を発現するＰ８１５腫瘍細胞（Ｐ８１５－ｈＣＤ２０腫瘍細胞）を接種し、その後にシクロホスファミドを腹腔内投与し、さらにその後に抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ発現Ｔ細胞又は抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ－ＩＬ７／ＣＣＬ１９発現Ｔ細胞を静注し又はせず、さらにその後にコントロールＩｇＧ又は抗ＰＤ－１モノクローナル抗体を投与し又はしなかったときの、時間経過と生存率との関係を示すグラフである。 図１０Ａの実験において、ＣＡＲ－Ｔの投与も抗体の投与も行わなかったときの時間経過と腫瘍体積との関係を示すグラフである。 図１０Ａの実験において、ＣＡＲ－Ｔの投与は行わず、抗ＰＤ－１モノクローナル抗体を投与したときの時間経過と腫瘍体積との関係を示すグラフである。 図１０Ａの実験において、抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ発現Ｔ細胞を投与し、抗ＰＤ－１抗体を投与したときの時間経過と腫瘍体積との関係を示すグラフである。 図１０Ａの実験において、抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ－ＩＬ７／ＣＣＬ１９発現Ｔ細胞を投与し、コントロールＩｇＧを投与したときの時間経過と腫瘍体積との関係を示すグラフである。 図１０Ａの実験において、抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ－ＩＬ７／ＣＣＬ１９発現Ｔ細胞を投与し、抗ＰＤ－１モノクローナル抗体を投与したときの時間経過と腫瘍体積との関係を示すグラフである。 ＤＢＡ／２マウスにＰ８１５腫瘍細胞を接種し、ｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞又はｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－７×１９ＴＣＲＴ細胞を７日目に静脈注射した場合における、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の内訳について、ｃ－ｋｉｔ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ３、ｅＧＦＰ、ＣＤ４、及びＣＤ８の発現を基に調べた結果を示す散布図である。 図１１Ａの実験で得られた免疫細胞の種類毎の細胞数を示すグラフである。 実施例で用いた、ＣＡＲ及び抗マウスＰＤ－１ｓｃＦｖをコードするベクター、並びにＣＡＲ、ＩＬ－７、ＣＣＬ１９、及び抗マウスＰＤ－１ｓｃＦｖをコードするベクターを表した概念図である。 実施例で用いた形質導入していないＴ細胞及び種々のＣＡＲ含有構築物を形質導入したＴ細胞のフローサイトメトリーで得られた前方散乱－側方散乱を表すグラフ、並びにｐｒｏｔｅｉｎＬ－ｂｉｏ及びｓａｖ－ａｐｃを用いて測定されたＣＡＲ発現細胞の割合を示すグラフである。 実施例で用いた形質導入していないＴ細胞及び種々のＣＡＲ含有構築物を形質導入したＴ細胞の培養上清中におけるＩＬ－７及びＣＣＬ１９の濃度をＥＬＩＳＡで測定した結果を示すグラフである。 実施例で用いた形質導入していないＴ細胞及び種々のＣＡＲ含有構築物を形質導入したＴ細胞の培養上清中における抗ＰＤ－１抗体の濃度をＥＬＩＳＡで測定した結果を示すグラフである。 実施例において、ＤＢＡ／２マウスにヒトＣＤ２０を発現するＰ８１５細胞を皮下注入し、シクロホスファミドを腹腔内投与した後に、形質導入していないＴ細胞又は種々のＣＡＲ含有構築物を形質導入したＴ細胞を投与したときの経過日数と生存率との関係を示すグラフ、並びに実験群間のログランク検定によるＰ値を示す表である。 図１６の実験において、各実験群における経過日数と腫瘍体積との関係を示すグラフである。
　以下において、本開示の内容について詳細に説明する。以下に記載する構成要件の説明は、本開示の代表的な実施態様に基づいてなされることがあるが、本開示はそのような実施態様に限定されるものではない。
　本開示中に段階的に記載されている数値範囲において、１つの数値範囲で記載された上限値又は下限値は、他の段階的な記載の数値範囲の上限値又は下限値に置き換えてもよい。また、本開示中に記載されている数値範囲において、その数値範囲の上限値又は下限値は、実施例に示されている値に置き換えてもよい。
　更に、本開示に記載されている組成物中の各成分の量は、組成物中に各成分に該当する物質が複数存在する場合、特に断らない限り、組成物中に存在する該当する複数の物質の合計量を意味する。
　また、本開示において、「質量％」と「重量％」とは同義であり、「質量部」と「重量部」とは同義である。
　更に、本開示において、２以上の態様は、矛盾が生じない限り互いに組み合わせてもよい。
　本開示に係る一態様によれば、（ａ）がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、インターロイキン７（ＩＬ－７）、及びＣＣＬ１９を発現する免疫応答性細胞、並びに（ｂ）免疫抑制阻害剤を含む、対象におけるがんを治療するための組み合わせ医薬（以下、「本開示に係る組み合わせ医薬Ａ」とも称する）が提供される。
　本発明者らは、がん治療方法における有用な抗がん剤の組み合わせを探求した結果、本開示に係る組み合わせ医薬Ａによって、極めて高いがん治療効果を得られることを見出した。具体的には、本開示に係る組み合わせ医薬Ａにおいては、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、ＩＬ－７及びＣＣＬ１９を発現する免疫応答性細胞（以下、「本開示に係る免疫応答性細胞Ａ」とも称する）が用いられる。本開示に係る免疫応答性細胞Ａと、免疫抑制阻害剤との共投与によって著しく高い相乗効果が得られることは、本発明者らにより初めて見出された事項である。
　本開示に係る免疫応答性細胞Ａの細胞表面上に存在する、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子は、がん細胞に発現しているがん抗原に特異的に結合する。この結合により、前記免疫応答性細胞ががん細胞につなぎとめられる。細胞内シグナル伝達が引き起こされる等の事象のうち１つ以上が生じ、がんに罹患している者（以下、「がん罹患者」とも称する）のがん細胞への攻撃が開始される。なお、本開示において「認識」と「結合」とは互換的に用いられる。
　また、がん細胞は免疫応答性細胞ががん細胞を攻撃したり、がん細胞を攻撃する指示を発したりすることを抑制する免疫抑制機構を有しているため、がん罹患者自身の免疫によるがん細胞への攻撃が抑制されている。本開示に係る組み合わせ医薬Ａの構成要素の１つである免疫抑制阻害剤は、がん細胞による免疫抑制機構を阻害することで、がん罹患者の免疫系ががん細胞を攻撃することをより容易にすると考えられる。
　これらに加えて、本開示に係る免疫応答性細胞ＡがＩＬ－７及びＣＣＬ１９も発現していることにより、本開示に係る免疫応答性細胞Ａだけではなく、がん罹患者の内因性の免疫応答性細胞もがん細胞の周囲に集積するため、がん細胞をより効果的に攻撃することが可能になると考えられる。
　本開示に係る組み合わせ医薬Ａは、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、ＩＬ－７及びＣＣＬ１９を発現する免疫応答性細胞と、免疫抑制阻害剤とを含むことによって、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子を発現する免疫応答性細胞、分泌されたＩＬ－７及びＣＣＬ１９、並びに免疫抑制阻害剤からなる因子の組み合わせによる相乗的な効果を発揮し、このために大きく改善したがん治療効果を奏すると考えられる。この相乗的な効果は、それぞれの因子の個別の効果からは予測することができないほど優れた効果である。
　例えば、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、インターロイキン７、及びＣＣＬ１９を発現する免疫応答性細胞を単独で用いた場合、及び免疫抑制阻害剤を単独で用いた場合には治療困難ながん治療の場合でも、本開示に係る組み合わせ医薬Ａを用いれば治療可能となりうる。このことは、後述の本開示に係る免疫応答性細胞Ｃに関する実験結果から示唆される。また、このような高い治療効果により、細胞の投与量を減らした場合でも治療効果を得ることが可能となり、自家細胞を使用する場合において従来必要とされていた数の免疫応答性細胞を採取できない場合でも、治療効果を得ることが可能になる。このような効果は、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、インターロイキン７、及びＣＣＬ１９を発現する免疫応答性細胞の単独投与、あるいは、免疫抑制阻害剤の単独投与からは予測できない効果である。
＜がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子＞
　本開示におけるがん抗原を特異的に認識する細胞表面分子とは、がん抗原に特異的に結合する分子であり、がん抗原に特異的に結合する限りはポリペプチドであっても、アプタマー等の核酸であっても、これら以外の分子であってもよい。ここでがん抗原とは、がん細胞において正常細胞よりも高く発現する、あるいはがん細胞に特異的に発現するタンパク質、糖脂質等の物質を意味し、かかるがん抗原としては、腫瘍関連抗原や癌精巣抗原、血管新生関連抗原、遺伝子変異によるがん新生抗原（ネオアンチゲン）のエピトープペプチドを挙げることができる。
　細胞表面分子により特異的に認識されるがん抗原の例としては、具体的には、ＷＴ１、ＭＡＲＴ－１、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＭＡＧＥ－Ａ１、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＡＧＥ－Ａ４、ＭＡＧＥ－Ａ１０、Ｇｌｙｐｉｃａｎ－３、ＫＩＦ２０Ａ、Ｓｕｒｖｉｖｉｎ、ＡＦＰ、ｇｐ１００、ＭＵＣ１、ＤＬＬ３、ＰＲＳＳ２１、Ｎｅｃｔｉｎ４、ＦＡＰ、インテグリンβ７、ＣＴ－８３（ＫＫ－ＬＣ－１）、ＫＲＡＳ（変異型、つまりｍＫＲＡＳも含む）、Ｅｐｈａ２、ＰＲＡＭＥ、ＨＡ－１、ＰＡＰ－１０、ＰＡＰ－５、ＴＲＰ２－１、ＳＡＲＴ－１、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、ＮＥＩＬ３、ＭＰＨＯＳＰＨ１、ＤＥＰＤＣ１、ＦＯＸＭ１、ＣＤＨ３、ＴＴＫ、ＴＯＭＭ３４、ＵＲＬＣ１０、ＫＯＣ１、ＵＢＥ２Ｔ、ＴＯＰＫ、ＥＣＴ２、メソテリン（ＭＥＳＯＴＨＥＬＩＮ）、ＮＫＧ２Ｄ、Ｐ１Ａ等のタンパク質や、ＧＤ２、ＧＭ２等の糖脂質を挙げることができる。さらなる例としては、ＣＤ２０、ＥＧＦＲ（ＥＧＦＲｖＩＩＩ等）、ＥＧＦＲｖａｒｉａｎｔ、ＦＩＴＣ、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ｃ－Ｍｅｔ、ＨＥＲ２、ＣＥＡ、ＣＤ７、ＣＤ１０、ＣＤ３０、ＣＤ３４、ＣＤ３８、ＣＤ４１、ＣＤ４４、ＣＤ７４、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＣＤ１７１、ＣＤ１８０、ＭＵＣ１６、ＣＳ１（ＣＤ３１９）、ＩＬ－１３Ｒａ２、ＢＣＭＡ、ＬｅｗｉｓＹ、ＩｇＧ　κ鎖、葉酸受容体α、ＰＳＣＡ、ＥｐＣＡＭ、ＣＡＩＸ、ＣＤＳ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ５６、ＣＤ１３８、ＩＧＦ１Ｒ、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）感染細胞抗原、ＥＧＰ－２、ＥＧＰ－４０、ＥＲＢ－Ｂ２、ＥＲＢ－Ｂ３、ＥＲＢ－Ｂ４、ＦＢＰ、胎児性アセチルコリン受容体、ＧＤ３、ＨＥＲ－２、ｈＴＥＲＴ、Ｋ－軽鎖、ＬｅＹ、Ｌ１細胞接着分子、ＮＫＧ２Ｄリガンド、５Ｔ４、及びＴＡＧ－７２も挙げることができるが、これらに限定されない。細胞表面分子として、これら等の細胞表面分子を１種以上含んでいてもよい。これらの抗原の由来生物は、本開示に係る組み合わせ医薬Ａによって治療される対象となる生物種とすることができ、例えばヒトである。
　がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子としては、がん抗原を特異的に認識する、細胞表面受容体、人工受容体、接着因子を挙げることができる。がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子は、がん抗原に結合して本開示に係る免疫応答性細胞Ａをがん細胞の近傍に配置させる機能のみを果たすものでもよいが、がん治療効果をより上昇させるために、免疫応答性細胞の免疫応答を活性化させるシグナル伝達を細胞内で引き起こす機能も有しているものであってもよい。がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子は、例えば、がん抗原を特異的に認識する抗体又は抗体断片であってもよい。抗体又は抗体断片はＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥ等に限定されるものではなく、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ等の低分子抗体であってもよい。
　がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子としては、がん抗原を特異的に認識するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）、がん抗原を特異的に認識するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）等の、細胞表面に発現することによってがんに対する特異的な識別能を細胞に付与する分子を挙げることができる。ＴＣＲは上記細胞表面受容体の一例であり、ＣＡＲは上記人工受容体の一例であり、抗体（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ等の低分子抗体も含む）は上記接着因子の一例であるともいえる。もちろん、がん抗原を特異的に認識する限りは、接着因子は糖鎖、アプタマー等の、抗体以外の分子であってもよい。これらの細胞表面分子は、がん抗原を特異的に認識し、それによって、本開示に係る免疫応答性細胞Ａは、がん細胞周辺に局在することが可能になる。
　ＴＣＲはＴ細胞の細胞膜上に発現している抗原受容体分子である。ＴＣＲはアルファ鎖とベータ鎖、又はガンマ鎖とデルタ鎖からなるヘテロ二量体として存在しており、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子に結合した抗原分子を認識することでＴ細胞を活性化することが知られている。ＴＣＲは、がん抗原を特異的に認識するかぎりアルファ鎖及びベータ鎖からなるヘテロ二量体（アルファ・ベータＴＣＲ）であっても、ガンマ鎖及びデルタ鎖からなるヘテロ二量体（ガンマ・デルタＴＣＲ）であってもよい。
　ＴＣＲは内因性のものであっても、外来性のＴＣＲ（組換えＴＣＲ）であってもよい。内因性のＴＣＲを発現するＴ細胞及び外来性のＴＣＲを遺伝子導入するＴ細胞のソースとしては、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、腫瘍所属リンパ節、末梢血リンパ球、胸水中リンパ球、腹水中リンパ球が挙げられるが、これらに限定されない。
　所定の抗原結合性を有するＴＣＲを発現するＴ細胞の分離のための手法としては、密度勾配遠心分離；リセッティング；細胞密度を変える粒子へのカップリング；抗体被覆された磁石ビーズによる磁気分離；アフィニティークロマトグラフィー（例えば、ネガティブセレクションを用いたアフィニティークロマトグラフィー）；モノクローナル抗体に連結されるか、又は、モノクローナル抗体との併用で使用される細胞毒性剤（これには、補体及び細胞毒素が含まれるが、これらに限定されない）；プレート、チップ等の固体マトリックスに結合された抗体によるパンニング；エルトリエーション；抗原刺激による選択的増殖；ＭＨＣと抗原の複合体を利用した分離が挙げられるが、これらに限定されない。
　また、特定のＴＣＲを発現するように改変されたトランスジェニックマウス等のトランスジェニック動物も開発されている。
　ＣＡＲは、がん細胞の細胞表面抗原を認識する一本鎖抗体と、Ｔ細胞の活性化を誘導するシグナル伝達領域を融合させた人工的なキメラタンパク質である。ＣＡＲは、例えば、がん細胞の細胞表面抗原を認識する一本鎖抗体領域、細胞膜貫通領域、及びＴ細胞の活性化を誘導するシグナル伝達領域を含むものであってもよい。本開示に係る組み合わせ医薬Ａにおいてがん抗原を特異的に認識する細胞表面分子がＣＡＲである場合、該組み合わせ医薬Ａの構成要素として投与される本開示に係る免疫応答性細胞Ａの数が、ＣＡＲ－Ｔ細胞を単独で用いる従来の方法において投与されるＣＡＲ－Ｔ細胞数（通常、１×１０６個以上）に比べて少なくても、同等以上の効果を奏することが可能である。
　ＣＡＲにおける一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）としては、モノクローナル抗体の抗原結合部位に由来する軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み、軽鎖可変領域及び重鎖可変領域の間にリンカーペプチドが位置するオリゴ又はポリペプチドを挙げることができる。
　目的のがん抗原を認識する一本鎖抗体は、公知の手法により作製することができる。例えば、マウス等に抗原を接種してからリンパ組織を採取して、抗体遺伝子のライブラリーを作製し、抗体ダイレクトクローニングによりがん抗原を認識する抗体をコードする塩基配列を得て、それを基に一本鎖抗体を設計してもよい。あるいは、採取したリンパ組織を用いてハイブリドーマを作製し、がん抗原を認識する抗体をコードするハイブリドーマを同定してモノクローナル抗体を得て、その配列情報を基に一本鎖抗体を設計してもよい。あるいは、健常人のＢ細胞から作製したナイーブ抗体ライブラリー、がん抗原に対して高い中和活性を示す抗血清をもつがん罹患者由来のＢ細胞から作製した抗体ライブラリー等を基にして一本鎖抗体のライブラリーを作製し、これをファージディスプレイにより提示させてがん抗原を認識する一本鎖抗体を選抜してもよい。
　免疫応答性細胞活性化シグナル伝達領域は、前記一本鎖抗体ががん細胞の細胞表面抗原を認識した際に、細胞内にシグナル伝達することが可能な領域であり、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＧＩＴＲ、ＣＤ２７、ＯＸ４０、ＨＶＥＭ、ＣＤ３ζ、及びＦｃ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ γｃｈａｉｎのうちいずれかの細胞内領域のポリペプチドから選択される少なくとも１種又は２種以上を含んでいてもよく、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、及びＣＤ３ζの３種の細胞内領域のポリペプチドを含んでいてもよい。
　それぞれの細胞内領域のポリペプチドは、２～１０アミノ酸からなるオリゴペプチドリンカー又はポリペプチドリンカーを介して連結されていてもよく、かかるリンカー配列として、グリシン－セリン連続配列を挙げることができる。
　免疫応答性細胞の活性化とは、細胞内でのシグナル伝達又はタンパク質発現の変化の誘導により、免疫応答を開始させることを意味する。例えば、ＣＤ３鎖がリガンド結合及び免疫受容体チロシンベースの阻害モチーフ（ＩＴＡＭｓ）に応答して集まると、シグナル伝達カスケードが作られる。また、内因性のＴＣＲ又は外因性のＣＡＲが抗原に結合すると、結合された受容体（例えば、ＣＤ４又はＣＤ８、ＣＤ３γ／δ／ε／ζ等）の近くで、多くの分子の集合を含む、免疫シナプスの形成が起こり得る。この膜結合シグナル伝達分子の集合によって、ＣＤ３鎖内に含有されたＩＴＡＭモチーフがリン酸化する。このリン酸化は、ひいては免疫応答性細胞活性化経路を開始させ、最終的には、ＮＦ－κＢ及びＡＰ－１などの転写因子を活性化しうる。これら転写因子は、例えばＴ細胞の全体的な遺伝子発現を惹起し、Ｔ細胞が媒介する免疫応答を開始させるために、主な制御性Ｔ細胞タンパク質の増殖及び発現のためのＩＬ－２の産生を増加させる。
　ＣＡＲにおける細胞膜貫通領域としては、ＣＤ８、Ｔ細胞受容体のα鎖、β鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＧＩＴＲのいずれか由来の細胞膜貫通領域のポリペプチドを挙げることができる。前記細胞膜貫通領域は、例えば、ヒトＣＤ８細胞膜貫通領域のポリペプチドでもよい。かかる細胞膜貫通領域によって、ＣＡＲがＴ細胞の細胞膜に固定される。
　前記細胞膜貫通領域には、任意のオリゴペプチド又はポリペプチドからなり、長さが１～１００アミノ酸、より具体的には１０～７０アミノ酸のヒンジ領域を含んでもよい。ヒンジ領域としては、ヒトＣＤ８のヒンジ領域を挙げることができる。
　また、がん細胞の細胞表面抗原を認識する一本鎖抗体と細胞膜貫通領域、細胞膜貫通領域と免疫応答性細胞活性化シグナル伝達領域との間には、任意のオリゴペプチド又はポリペプチドからなるスペーサー領域を設けてもよい。スペーサー領域の長さとしては、１～１００アミノ酸、より具体的には１０～５０アミノ酸を挙げることができ、かかるスペーサー領域として、グリシン－セリン連続配列を挙げることができる。
　がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子のアミノ酸配列は、例えば哺乳動物由来のアミノ酸配列であり、ヒトに投与した場合の拒絶反応を抑える観点からヒト由来のアミノ酸配列としてもよい。アミノ酸配列は、公知の文献やＮＣＢＩ（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/guide/）等のデータベースを検索して適宜入手することができる。がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子は、ヒトのＴＣＲ、あるいは一本鎖抗体領域がヒト化されているＣＡＲであってもよい。
　なお、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子は、がん抗原の認識が特異的であれば、間接的に認識するものであってもよい。例えば、がん抗原を特異的に認識する抗体等の分子を本開示に係る免疫応答性細胞Ａと同時又は連続して対象に投与し、当該抗体等の分子を認識するか、又は抗体等の分子に標識されたタグを認識することで、本開示に係る免疫応答性細胞Ａは間接的にがん抗原を特異的に認識し得る。これらの場合、抗体を認識する場合の例としては、細胞表面分子としてＣＤ１６等が挙げられ、抗体等の分子に標識するタグの例としては、ＦＩＴＣ等が挙げられる。
＜ＩＬ－７＞
　ＩＬ－７は、構造的に骨髄及び胸腺由来のストロマ細胞から生産される約２５ｋＤａのサイトカインである。ＩＬ－７は、ＩＬ－７レセプターを通して造血幹細胞からリンパ前駆細胞への分化を促進するためのシグナルを出し、Ｔ細胞、Ｂ細胞、及びＮＫ細胞を生じさせる。ＩＬ－７のアミノ酸配列は、例えば哺乳動物由来のアミノ酸配列であり、拒絶反応を抑える観点からヒト由来のアミノ酸配列としてもよい。アミノ酸配列は、公知の文献やＮＣＢＩ（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/guide/）等のデータベースを検索して適宜入手することができる。
＜ＣＣＬ１９＞
　ケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド１９（ＣＣＬ１９）はＣＣケモカインファミリーに属するサイトカインであり、胸腺及びリンパ節での発現量が多い。ＣＣＬ１９のアミノ酸配列は、例えば哺乳動物由来のアミノ酸配列であり、拒絶反応を抑える観点からヒト由来のアミノ酸配列としてもよい。アミノ酸配列は、公知の文献やＮＣＢＩ（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/guide/）等のデータベースを検索して適宜入手することができる。
＜本開示に係る免疫応答性細胞Ａ＞
　免疫応答性細胞とは、免疫応答に関与する細胞を指す。免疫応答性細胞の例としては、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）、Ｂ細胞等のリンパ球系細胞、単球、マクロファージ、樹状細胞等の抗原提示細胞、好中球、好酸球、好塩基球、肥満細胞等の顆粒球が挙げられる。Ｔ細胞の例としては、アルファ・ベータＴ細胞、ガンマ・デルタＴ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、腫瘍浸潤Ｔ細胞、メモリーＴ細胞、ナイーブＴ細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞等が挙げられる。
　免疫応答性細胞は、血液、骨髄液等の体液や、脾臓、胸腺、リンパ節等の組織、若しくは原発腫瘍、転移性腫瘍、がん性腹水等のがん組織に浸潤する免疫細胞から単離、精製して得ることができ、またｉＰＳ細胞、ＥＳ細胞等の多能性幹細胞又は造血幹細胞などの体性幹細胞から作製された免疫応答性細胞を用いてもよい。
　免疫応答性細胞は、ヒ卜、イヌ、ネコ、ブタ、マウス等の哺乳動物由来のＴ細胞であってもよく、ヒ卜由来のＴ細胞であってもよい。
　本開示に係る免疫応答性細胞Ａは、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、ＩＬ－７及びＣＣＬ１９を発現する。ここで、「がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、ＩＬ－７及びＣＣＬ１９を発現する」とは、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、ＩＬ－７及びＣＣＬ１９が免疫応答性細胞により産生され、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子の少なくとも一部が細胞表面（細胞外側の細胞表面）に位置し、ＩＬ－７及びＣＣＬ１９が細胞外に分泌されることを指す。
　本開示に係る免疫応答性細胞Ａは、例えば、生体から採取した免疫応答性細胞、又はｉＰＳ細胞、ＥＳ細胞等の多能性幹細胞若しくは造血幹細胞などの体性幹細胞から誘導した免疫応答性細胞等に、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする遺伝子、ＩＬ－７をコードする遺伝子、及びＣＣＬ１９をコードする遺伝子を導入することで得ることができる。あるいは、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子（例えばがん抗原を特異的に認識するＴＣＲ）を内在的に発現している免疫応答性細胞を生体から採取して、ＩＬ－７をコードする遺伝子及びＣＣＬ１９をコードする遺伝子を導入することでも得ることができる。なお、本開示においては、ＸＸをコードする遺伝子なる表現と、ＸＸをコードする核酸なる表現は互換的に用いられる。この場合、核酸は一本鎖でも二本鎖でも、ＤＮＡであってもＲＮＡであってもよいが、二本鎖ＤＮＡであることが好ましい。
　生体から採取した免疫応答性細胞に遺伝子導入する場合、本開示に係る組み合わせ医薬Ａにより治療されるがん罹患者自身の（つまり自家の）免疫応答性細胞を採取すれば、拒絶反応を最小化できる。ただし、他家の免疫応答性細胞を使用することを排除するものではない。つまり、本開示に係る免疫応答性細胞Ａは、対象自身に由来する免疫応答性細胞であっても、なくてもよい。
　がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする遺伝子、ＩＬ－７をコードする遺伝子、及びＣＣＬ１９をコードする遺伝子は、それぞれ、本開示に係る免疫応答性細胞Ａのゲノム中に存在していても、ゲノム外のベクターに担持されていてもよく、例えば、遺伝子担持の安定性の観点からゲノム中に存在させてもよい。また、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする遺伝子、ＩＬ－７をコードする遺伝子、及びＣＣＬ１９をコードする遺伝子は、ゲノム中にまとまって存在していてもよく、ばらばらに（分離して）存在していてもよい。がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子が、例えばαβの二量体又はγδの二量体からなるＴＣＲである場合のようにヘテロ二量体又はヘテロ多量体である場合、ヘテロ二量体又はヘテロ多量体を構成するそれぞれの分子をコードする遺伝子はゲノム中にまとまって存在していてもよく、ばらばらに（分離して）存在していてもよい。
　一実施形態においては、ＩＬ－７をコードする遺伝子及びＣＣＬ１９をコードする遺伝子は外来性であり、双方が本開示に係る免疫応答性細胞Ａのゲノムに組み込まれているか、又は前記免疫応答性細胞Ａ中に存在する１個又は複数個のベクターに一緒に若しくは別個にコードされている。なお、細胞中に各遺伝子が存在しているかどうかは、ＰＣＲ等公知の手法を用いて容易に確認することができる。本開示において、「外来性」（exogenous）とは、当該遺伝子又は核酸が細胞内に元々存在していた遺伝子又は核酸ではなく、外部から導入された遺伝子又は核酸であることを表す。
　ＴＣＲとしては、すでに、ＭＡＲＴ１特異的ＴＣＲ（Cancer Res.54,5265-5268(1994)）、ＭＡＧＥ－Ａ３特異的ＴＣＲ（Anticancer Res.,20,1793-1799(2000)）、ｇｐ１００特異的ＴＣＲ（J.Immunol.170,2186-2194(2003)）、ＮＹ－ＥＳＯ－１特異的ＴＣＲ（J.Immunol.,174、4415-4423(2005)）、ＷＴ１特異的ＴＣＲ（Blood,106,470-476(2005)）、ＭＡＧＥ－Ａ１特異的ＴＣＲ（Int.Immunol.,8,1463-1466(1996)）、Ｐ１Ａ特異的ＴＣＲ（Sarma, S., Y. Guo, Y. Guilloux, C. Lee, X.-F. Bai, Y. Liu. 1999. Cytotoxic T lymphocytes to an unmutated tumor antigen P1A: normal development but restrained effector function. J. Exp. Med. 189:811.）、ＭＡＧＥ－Ａ１０特異的ＴＣＲ、ＡＦＰ特異的ＴＣＲ、ＣＴ－８３特異的ＴＣＲ、ＫＲＡＳ（変異型、つまりｍＫＲＡＳも含む）特異的ＴＣＲ、ＭＡＧＥ－Ａ４特異的ＴＣＲ、Ｅｐｈａ２特異的ＴＣＲ、ＢＣＭＡ特異的ＴＣＲ、５Ｔ４特異的ＴＣＲ、ＰＲＡＭＥ特異的ＴＣＲ、ＨＡ－１特異的ＴＣＲ等のＴＣＲが報告されており、それらをコードする核酸配列についても上記各文献に報告されている。がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子がＴＣＲである場合、ＴＣＲをコードする遺伝子の塩基配列は、目的の抗原分子を認識し、かつＴ細胞を活性化することができるかぎり、上記文献に記載のＴＣＲをコードする塩基配列と例えば８０％以上、より具体的には８５％以上、より具体的には９０％以上、より具体的には９５％以上、より具体的には９８％以上の配列同一性を有する塩基配列であってもよい。本開示において、アミノ酸配列の配列同一性及び塩基配列の配列同一性は、例えばＢＬＡＳＴ（登録商標、National Library of Medicine）プログラムを用いてデフォールトパラメータで評価することができる。
　あるいは、ＴＣＲをコードする遺伝子の塩基配列は、上記文献に記載されたＴＣＲをコードする塩基配列中におけるＣＤＲをコードする塩基配列を維持し、かつＣＤＲをコードする塩基配列以外の領域の塩基配列において、上記文献に記載のＴＣＲをコードする塩基配列における当該領域の塩基配列と６０％以上、より具体的には７０％以上、より具体的には８０％以上、より具体的には９０％以上、より具体的には９５％以上の配列同一性を有する塩基配列でもよい。
　もちろんＴＣＲの塩基配列は、ＴＣＲの抗原特異性により変動するものであり、所望の抗原に結合するＴＣＲを発現するＴ細胞を単離して、当該ＴＣＲの塩基配列を解析してもよい。例えば、特定の抗原を特異的に認識するＴＣＲをコードする遺伝子の塩基配列は、当技術分野における公知の方法を用いることにより、特定の抗原を用いて誘導された細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のＴＣＲサブユニットとしてのアルファ鎖及びベータ鎖をコードする塩基配列を解析することで得ることができる（国際公開第２００７／０３２２５５号、及びMorgan et al., J Immunol, 171, 3288 (2003)）。ＴＣＲの塩基配列を解析する際には、ＰＣＲ法により各鎖をコードする塩基配列を増幅して解析してもよい。ＰＣＲプライマーは、例えば、５'側プライマーとしての５'－Ｒプライマー（５'－ｇｔｃｔａｃｃａｇｇｃａｔｔｃｇｃｔｔｃａｔ－３'：配列番号１）、及び３'側プライマーとしての、ＴＣＲアルファ鎖Ｃ領域に特異的な３－ＴＲａ－Ｃプライマー（５'－ｔｃａｇｃｔｇｇａｃｃａｃａｇｃｃｇｃａｇｃｇｔ－３'：配列番号２）、ＴＣＲベータ鎖Ｃ１領域に特異的な３－ＴＲｂ－Ｃ１プライマー（５'－ｔｃａｇａａａｔｃｃｔｔｔｃｔｃｔｔｇａｃ－３'：配列番号３）、又はＴＣＲベータ鎖Ｃ２領域に特異的な３－ＴＲｂｅｔａ－Ｃ２プライマー（５'－ｃｔａｇｃｃｔｃｔｇｇａａｔｃｃｔｔｔｃｔｃｔｔ－３'：配列番号４）であってもよいが、これらに限定されない。抗原特異的なＴＣＲは、抗原（例えばペプチド）を提示する標的細胞と高い結合力で結合することができる。また、免疫応答性細胞の種類を適切に選択することにより、抗原ペプチドを提示する標的細胞の効率的な殺傷を媒介することができる。
　ＣＡＲをコードする塩基配列としては、ＣＡＲを構成するポリペプチドをコードする塩基配列であれば特に制限されず、がん細胞の細胞表面抗原を認識する一本鎖抗体、細胞膜貫通領域、及びＴ細胞の活性化を誘導するシグナル伝達領域のポリペプチドをコードする塩基配列が含まれる。
　ＣＡＲにおけるがん細胞の細胞表面抗原に対する一本鎖抗体、細胞膜貫通領域、及び免疫応答性細胞活性化シグナル伝達領域のポリペプチドをコードする塩基配列の情報は、公知の文献やＮＣＢＩ（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/guide/）などのデータベースを検索して適宜入手することができる。
　たとえば、免疫応答性細胞活性化シグナル伝達領域におけるＣＤ２８、４－１ＢＢ、及びＣＤ３ζの細胞膜貫通領域のポリペプチドをコードする塩基配列の情報は、ＮＣＢＩなどのデータベースを検索して適宜入手することができ、ヒトＣＤ２８については、Ｇｅｎｂａｎｋ番号：ＮＭ＿００６１３９．２（更新日：２０１４年５月１０日）、ヒト４－１ＢＢについては、Ｇｅｎｂａｎｋ番号：ＮＭ＿００１５６１．５（更新日：２０１４年３月１６日）、ヒトＣＤ３ζについては、Ｇｅｎｂａｎｋ番号：ＮＭ＿０００７３４．３（更新日：２０１４年８月１２日）として登録されたものを例示することができる。
　また、ヒトＣＤ８の細胞膜貫通領域のポリペプチドをコードする塩基配列の情報は、ＮＣＢＩ等のデータベースを検索し適宜入手することができ、Ｇｅｎｂａｎｋ番号：ＮＭ＿００１７６８．６（更新日：２０１４年５月１０日）として登録されたものを例示することができる。
　さらに、一本鎖抗体のポリペプチドをコードする塩基配列の情報については、標的とする細胞表面抗原を認識するモノクローナル抗体を作製し、かかるモノクローナル抗体のアミノ酸配列をエドマン法などの公知の方法で決定し、かかるアミノ酸配列に基づいて入手することもできる。モノクローナル抗体の作製方法としては、ハイブリドーマを用いて作製する方法や、遺伝子工学的手法により抗体遺伝子を含む発現ベクターで宿主を形質転換して作製する方法や、トランスジェニック動物を所望の抗原で免疫することで作製する方法を挙げることができる。
　ＩＬ－７をコードする塩基配列及びＣＣＬ１９をコードする塩基配列の情報は、公知の文献やＮＣＢＩ（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/guide/）などのデータベースを検索して適宜入手することができる。
　ＩＬ－７をコードする塩基配列は、本開示に係る免疫応答性細胞Ａの種類に応じて適宜選択でき、例えば、ヒトＩＬ－７のアミノ酸配列（配列番号５）をコードする塩基配列であってもよく、また、ＩＬ－７としての細胞増殖率の亢進作用を有する限り、配列番号５に示す塩基配列と例えば８０％以上、より具体的には８５％以上、より具体的には９０％以上、より具体的には９５％以上、より具体的には９８％以上の配列同一性を有する塩基配列であってもよい。
　ＣＣＬ１９をコードする塩基配列は、本開示に係る免疫応答性細胞Ａの種類に応じて適宜選択でき、例えば、ヒトＣＣＬ１９のアミノ酸配列（配列番号６）をコードする塩基配列であってもよく、また、ＣＣＬ１９としてのＴ細胞遊走作用を有する限り、配列番号６に示す塩基配列と例えば８０％以上、より具体的には８５％以上、より具体的には９０％以上、より具体的には９５％以上、より具体的には９８％以上の配列同一性を有する塩基配列であってもよい。
　本開示に係る免疫応答性細胞Ａにおいては、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする遺伝子、ＩＬ－７をコードする遺伝子、及びＣＣＬ１９をコードする遺伝子は、適切なプロモーターの制御下にあるようにする。
　本開示に係る免疫応答性細胞Ａは、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、ＩＬ－７、及びＣＣＬ１９に加えて、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１４、ＩＬ－１５、ＩＬ－１６、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－２３、ＩＬ－２７、ＩＰ－１０、ＣＣＬ１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１４、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２３、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２６、ＣＣＬ２７、ＣＣＬ２８、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ４、ＣＸＣＬ４Ｌ１、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ７、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＣＸＣＬ１６、ＣＸＣＬ１７、ＣＸ３ＣＬ１、ＸＣＬ１、ＸＣＬ２、ＣＣＬ３Ｌ１、ＣＣＬ３Ｌ３、ＣＣＬ４Ｌ１、ＣＣＬ４Ｌ２、Ｆｌｔ３Ｌ、Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ－ｇａｍｍａ、ＭＩＰ－１ａｌｐｈａ、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｍ－ＣＳＦ、ＴＧＦ－ｂｅｔａ、ＴＮＦ－ａｌｐｈａ等の他の免疫機能制御因子を１種以上さらに発現していてもよい。
　本開示に係る免疫応答性細胞Ａの分離のための手法としては、密度勾配遠心分離；リセッティング；細胞密度を変える粒子へのカップリング；抗体被覆された磁石ビーズによる磁気分離；アフィニティークロマトグラフィー（例えば、ネガティブセレクションを用いたアフィニティークロマトグラフィー）；モノクローナル抗体に連結されるか、又は、モノクローナル抗体との併用で使用される細胞毒性剤（これには、補体及び細胞毒素が含まれるが、これらに限定されない）；プレート、チップ等の固体マトリックスに結合された抗体によるパンニング；エルトリエーション；抗原刺激による選択的増殖；ＭＨＣと抗原の複合体を利用した分離が挙げられるが、これらに限定されない。
　免疫応答性細胞ががん抗原を特異的に認識する細胞表面分子を内在的に発現している場合、例えば所定のがん抗原を特異的に認識するＴＣＲを発現しているＴ細胞を単離する場合には、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする遺伝子を外部から導入する必要は無いが、一般的には、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする遺伝子、ＩＬ－７をコードする遺伝子、及びＣＣＬ１９をコードする遺伝子のうちの１種以上を外部から導入する。
　免疫応答性細胞に導入するためのがん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする遺伝子を含む核酸、ＩＬ－７をコードする遺伝子を含む核酸及びＣＣＬ１９をコードする遺伝子を含む核酸は、それぞれ、当該分子をコードする塩基配列の情報に基づき、化学合成する方法や、ＰＣＲによって増幅する方法等の公知の技術によって作製することができる。なお、コーディング領域におけるコドンは、遺伝子を含む核酸が導入される対象となる免疫応答性細胞における当該遺伝子の発現を最適化するために改変されてもよい。
　導入の対象となる遺伝子は、それぞれ別々のベクターに担持された状態で導入されても、２種以上の遺伝子を同じベクターに担持した状態で導入してもよい。例えば、ＩＬ－７をコードする遺伝子及びＣＣＬ１９をコードする遺伝子を免疫応答性細胞に導入する場合、ＩＬ－７をコードする遺伝子とＣＣＬ１９をコードする遺伝子とは別々のベクターで導入してもよいし、同じベクターに両遺伝子を担持させて導入してもよい。
　また、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする遺伝子、ＩＬ－７をコードする遺伝子及びＣＣＬ１９をコードする遺伝子を免疫応答性細胞に導入する場合、
　（ｉ）がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする遺伝子、ＩＬ－７をコードする遺伝子及びＣＣＬ１９をコードする遺伝子を、それぞれ別個のベクターに担持させて導入してもよいし、
　（ｉｉ）がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする遺伝子及びＩＬ－７をコードする遺伝子を同じベクターに担持させ、ＣＣＬ１９をコードする遺伝子を別個のベクターに担持させて導入してもよいし、
　（ｉｉｉ）がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする遺伝子及びＣＣＬ１９をコードする遺伝子を同じベクターに担持させ、ＩＬ－７をコードする遺伝子を別個のベクターに担持させて導入してもよいし、
　（ｉｖ）ＩＬ－７をコードする遺伝子及びＣＣＬ１９をコードする遺伝子を同じベクターに担持させ、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする遺伝子を別個のベクターに担持させて導入してもよいし、
　（ｖ）がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする遺伝子、ＩＬ－７をコードする遺伝子及びＣＣＬ１９をコードする遺伝子を、同じベクターに担持させて導入してもよい。
　導入効率を考慮して、２種以上の遺伝子を同じベクターに担持した状態で導入させてもよい。この場合は、当該２種以上の遺伝子は、免疫応答性細胞中でまとまって存在することになる。
　例えば、以下のベクター又はベクター群を使用することができる。
　（ａ）がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする遺伝子、ＩＬ－７をコードする遺伝子、及びＣＣＬ１９をコードする遺伝子を含有するベクター
　（ｂ）以下のベクター（ｂ－１）及びベクター（ｂ－２）からなるベクター群：
（ｂ－１）がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする遺伝子を含有するベクター；
（ｂ－２）ＩＬ－７をコードする遺伝子及びＣＣＬ１９をコードする遺伝子を含有するベクター；
　（ｃ）以下のベクター（ｃ－１）及びベクター（ｃ－２）からなるベクター群：
（ｃ－１）がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする遺伝子及びＩＬ－７をコードする遺伝子を含有するベクター；
（ｃ－２）ＣＣＬ１９をコードする遺伝子を含有するベクター；
　（ｄ）以下のベクター（ｄ－１）及びベクター（ｄ－２）からなるベクター群：
（ｄ－１）ＩＬ－７をコードする遺伝子を含有するベクター；
（ｄ－２）がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする遺伝子及びＣＣＬ１９をコードする遺伝子を含有するベクター；
　（ｅ）以下のベクター（ｅ－１）、ベクター（ｅ－２）及びベクター（ｅ－３）からなるベクター群：
（ｅ－１）がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする遺伝子を含有するベクター；
（ｅ－２）ＩＬ－７をコードする遺伝子を含有するベクター；
（ｅ－３）ＣＣＬ１９をコードする遺伝子を含有するベクター。
　ベクター群は、遺伝子が冗長（ｒｅｄｕｎｄａｎｔ）に含まれるように設計してもよく、例えば上記（ｃ－１）及び（ｄ－２）からなるベクター群を設計してもよい。この場合は、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする遺伝子は両方のベクターに含まれるが、両ベクターに含まれるがん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする遺伝子は互いに同じであっても異なっていてもよい。
　上記のベクターのうち任意のベクターに、又は上記のベクターとは別個のベクターに、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１４、ＩＬ－１５、ＩＬ－１６、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－２３、ＩＬ－２７、ＩＰ－１０、ＣＣＬ１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１４、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２３、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２６、ＣＣＬ２７、ＣＣＬ２８、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ４、ＣＸＣＬ４Ｌ１、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ７、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＣＸＣＬ１６、ＣＸＣＬ１７、ＣＸ３ＣＬ１、ＸＣＬ１、ＸＣＬ２、ＣＣＬ３Ｌ１、ＣＣＬ３Ｌ３、ＣＣＬ４Ｌ１、ＣＣＬ４Ｌ２、Ｆｌｔ３Ｌ、Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ－ｇａｍｍａ、ＭＩＰ－１ａｌｐｈａ、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｍ－ＣＳＦ、ＴＧＦ－ｂｅｔａ、ＴＮＦ－ａｌｐｈａ等の１種以上の他の免疫機能制御因子をコードする遺伝子をさらに含有させて、免疫応答性細胞に導入してもよい。
　遺伝子を担持するベクターを免疫応答性細胞に導入する方法としては特に制限されないが、ウイルス感染法、トランスポゾン法、カルシウムリン酸法、リポフェクション法、マイクロインジェクション法、エレクトロポレーション法等の公知の方法が挙げられる。外来遺伝子のゲノムへの導入が可能なウイルス感染法により導入する方法は遺伝子担持の安定性をもたらしうる。
　ウイルス感染法としては、ベクターとパッケージングプラスミドをＧＰ２－２９３細胞（タカラバイオ社製）、Ｐｌａｔ－ＧＰ細胞（コスモ・バイオ社製）、ＰＧ１３細胞（ATCC CRL-10686）、ＰＡ３１７細胞（ATCC CRL-9078）等のパッケージング細胞にトランスフェクションして組換えウイルスを作製し、かかる組換えウイルスを免疫応答性細胞に感染させる方法を挙げることができ、Retrovirus packaging Kit Eco（タカラバイオ社製）等の市販のキットを用いて行ってもよい。ＭＳＣＶレトロウイルス発現システム等を用いれば、外来遺伝子のゲノムへの導入が可能である。
　また、ＩＬ－７をコードする遺伝子、ＣＣＬ１９をコードする遺伝子、及び必要ならがん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする遺伝子のゲノムへの組込みは、公知の遺伝子編集技術を用いて行うこともできる。公知の遺伝子編集技術としては、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、ＴＡＬＥＮ（転写活性化様エフェクターヌクレアーゼ）、ＣＲＩＳＰＲ（Ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ Ｒｅｇｕｌａｒｌｙ Ｉｎｔｅｒｓｐａｃｅｄ Ｓｈｏｒｔ Ｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃ Ｒｅｐｅａｔ）－Ｃａｓシステム等のエンドヌクレアーゼを用いる技術が挙げられる。所望により導入される他の外来タンパク質をコードする遺伝子のゲノムへの組込みも、同様の手法により行うことができる。
　また、これらの遺伝子を免疫応答性細胞のゲノムに組み込む場合には、当該遺伝子を制御する上流プロモーターと共にゲノムの非コード領域等に作動可能に（即ち、当該プロモーターの制御下で発現可能なように）組み込んでもよいし、プロモーター無しに、ゲノム中に既に存在しているプロモーターの下流に作動可能に組み込んでもよい。ゲノム中に既に存在しているプロモーターとしては、ＴＣＲα、ＴＣＲβのプロモーター等が挙げられる。
　がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする遺伝子、ＩＬ－７をコードする遺伝子、ＣＣＬ１９をコードする遺伝子、及び所望により導入された追加の外来タンパク質をコードする遺伝子のうち２種以上の遺伝子が近接して存在する場合には、それら２種以上の遺伝子を共通のプロモーターの制御下で発現させることもできる。共通のプロモーターの制御下で発現させる場合には、２Ａペプチド、ＩＲＥＳペプチド等を使用して、転写及び／又は翻訳を分断してそれぞれのポリペプチドを発現させるようにできる。
　がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする遺伝子、ＩＬ－７をコードする遺伝子及びＣＣＬ１９をコードする遺伝子のうちの２種以上を担持するベクターを免疫応答性細胞に導入する場合には、該ベクター中における前記２種以上の遺伝子の並び順は特に限定されない。例えば、前記（ａ）がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする遺伝子、ＩＬ－７をコードする遺伝子及びＣＣＬ１９をコードする遺伝子を含有するベクターにおいては、これら３種の遺伝子の並び順は限定されない。具体的には、上流（５’末端側）から下流（３’末端側）への順に、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする遺伝子、ＩＬ－７をコードする遺伝子及びＣＣＬ１９をコードする遺伝子が並ぶ順番であっても、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする遺伝子、ＣＣＬ１９をコードする遺伝子及びＩＬ－７をコードする遺伝子が並ぶ順番であっても、ＩＬ－７をコードする遺伝子、ＣＣＬ１９をコードする遺伝子及びがん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする遺伝子が並ぶ順番であっても、ＩＬ－７をコードする遺伝子、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする遺伝子及びＣＣＬ１９をコードする遺伝子が並ぶ順番であっても、ＣＣＬ１９をコードする遺伝子、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする遺伝子及びＩＬ－７をコードする遺伝子が並ぶ順番であっても、ＣＣＬ１９をコードする遺伝子、ＩＬ－７をコードする遺伝子及びがん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする遺伝子が並ぶ順番であってもよい。
　また、上記（ｂ－２）ＩＬ－７をコードする遺伝子及びＣＣＬ１９をコードする遺伝子を含有するベクターにおいて、ＩＬ－７をコードする遺伝子及びＣＣＬ１９をコードする遺伝子の並び順は特に制限されず、ＩＬ－７をコードする遺伝子に対してＣＣＬ１９をコードする遺伝子が上流に配置されても下流に配置されてもよい。
　上記（ｃ－１）がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする遺伝子及びＩＬ－７をコードする遺伝子を含有するベクターにおいて、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする遺伝子及びＩＬ－７をコードする遺伝子の並び順は特に制限されず、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする遺伝子に対してＩＬ－７をコードする遺伝子が上流に配置されても下流に配置されてもよい。
　上記（ｄ－２）がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする遺伝子及びＣＣＬ１９をコードする遺伝子を含有するベクターにおいて、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする遺伝子及びＣＣＬ１９をコードする遺伝子の並び順は特に制限されず、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする遺伝子に対してＣＣＬ１９をコードする遺伝子が上流に配置されても下流に配置されてもよい。
　なお、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする遺伝子、ＩＬ－７をコードする遺伝子及びＣＣＬ１９をコードする遺伝子はそれぞれ別のプロモーターにより転写されてもよく、内部リボソームエントリー部位（ＩＲＥＳ：ｉｎｔｅｒｎａｌ ｒｉｂｏｚｙｍｅ ｅｎｔｒｙ ｓｉｔｅ）又は自己切断型２Ａペプチドを使用して一つのプロモーターで転写されてもよい。
　一つのプロモーターで複数の遺伝子を転写させる場合、それぞれの遺伝子の間の塩基配列は、それぞれの遺伝子を発現し得る限り、任意の塩基配列を含んでもよいが、自己切断型ペプチド（２Ａペプチド）又はＩＲＥＳをコードする塩基配列を含んでもよく、２Ａペプチドをコードする塩基配列を含んでもよい。このような塩基配列を用いて複数の遺伝子を連結することにより、それぞれの遺伝子を効率よく発現させることが可能となる。自己切断型ペプチド（２Ａペプチド）又はＩＲＥＳをコードする塩基配列を含みうる遺伝子間の塩基配列は、例えば、ＩＬ－７をコードする遺伝子とＣＣＬ１９をコードする遺伝子との間の塩基配列であってもよく、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする遺伝子とＩＬ－７をコードする遺伝子との間の塩基配列であってもよく、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする遺伝子とＣＣＬ１９をコードする遺伝子との間の塩基配列であってもよく、アルファ・ベータＴＣＲにおけるアルファ鎖をコードする遺伝子とベータ鎖をコードする遺伝子との間の塩基配列であってもよく、ガンマ・デルタＴＣＲにおけるガンマ鎖をコードする遺伝子とデルタ鎖をコードする遺伝子の間の塩基配列であってもよい。つまり、これらの遺伝子間の領域それぞれについて、所望により、自己切断型ペプチド（２Ａペプチド）又はＩＲＥＳをコードする塩基配列を含ませることができる。
　２Ａペプチドとは、ウイルス由来の自己切断型ペプチドであり、例として配列番号７で示されるアミノ酸配列の場合、該アミノ酸配列中のＧ－Ｐ間（Ｃ末端から１残基の位置）が小胞体で切断される特徴を有する（Szymczak et al., Expert Opin. Biol. Ther.5(5):627-638(2005)）。そのため、２Ａペプチドを介してその前後に組み込まれた核酸は、細胞内で互いに独立して発現することとなる。
　前記２Ａペプチドとしては、ピコルナウイルス、ロタウイルス、昆虫ウイルス、アフトウイルス又はトリパノソーマウイルス由来の２Ａペプチドであってもよく、配列番号８に示すピコルナウイルス由来の２Ａペプチド（Ｆ２Ａ）であってもよい。
　免疫応答性細胞への遺伝子導入に用いられるベクターは直鎖状でも環状でもよく、プラスミド等の非ウイルスベクターでも、ウイルスベクターでも、トランスポゾンによるベクターでもよい。免疫応答性細胞への遺伝子導入に用いられるベクターは、プロモーター、ターミネーター等の制御配列、薬剤耐性遺伝子、レポーター遺伝子等の選択マーカー配列のうち１つ以上を含有していてもよい。免疫応答性細胞への遺伝子導入後も、ベクターに含まれるプロモーターを利用して遺伝子の発現を行わせるようにしてもよい。例えば、ベクター中のプロモーター配列の下流に作動可能にがん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする遺伝子、ＩＬ－７をコードする遺伝子及びＣＣＬ１９をコードする遺伝子のうち１つ以上を配置することで、当該遺伝子を効率よく転写させることができる。
　前記プロモーターの例としては、レトロウイルスのＬＴＲプロモーター、ＳＶ４０初期プロモーター、サイトメガロウイルスプロモーター、単純ヘルペスウイルスのチミジンキナーゼプロモーター等のウイルス由来プロモーター、ホスホグリセリン酸キナーゼ（ＰＧＫ）プロモーター、Ｘｉｓｔプロモーター、β－アクチンプロモーター、ＲＮＡポリメラーゼＩＩプロモーター、ポリペプチド鎖伸長因子遺伝子プロモーター等の哺乳類由来プロモーターを挙げることができる。また、テトラサイクリンによって誘導されるテトラサイクリン応答型プロモーター、インターフェロンによって誘導されるＭｘ１プロモーター等を用いてもよい。特定の物質によって誘導されるプロモーターを用いることによって、プロモーターに転写制御される遺伝子（例えば、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする遺伝子、ＩＬ－７をコードする遺伝子及びＣＣＬ１９をコードする遺伝子のうち１つ以上）の発現をがんの治療経過に応じて制御することが可能となる。
　前記ウイルスベクターの例としては、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクターを挙げることができる。レトロウイルスベクターとしては、ｐＭＳＧＶベクター（Tamada K. et al., Clin Cancer Res 18:6436-6445(2002)）、ｐＭＳＣＶベクター（タカラバイオ社製）等を挙げることができる。レトロウイルスベクターを用いれば、導入遺伝子はホスト細胞のゲノムへ取り込まれるため、導入遺伝子を長期間安定に発現することが可能となる。
　免疫応答性細胞におけるがん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、ＩＬ－７及びＣＣＬ１９の発現は、フローサイトメトリー、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロッティング等により確認することができる。また、これらをコードする遺伝子の導入は、上記のように発現産物を確認するか、あるいはノザンブロッティング、サザンブロッティング、ＲＴ－ＰＣＲ等のＰＣＲ等により確認することができる。遺伝子導入に用いるベクターがマーカー遺伝子を含有する場合には、当該発現ベクターに挿入されたマーカー遺伝子の発現を調べることによって遺伝子の導入を確認することができる。
　また、本開示に係る免疫応答性細胞Ａは、アポトーシス誘導を可能とするために、単純ヘルペスウイルスのチミジンキナーゼ（HSV-TK）、誘導性カスパーゼ９（inducible caspase 9）等の自殺遺伝子をさらに発現してもよい。これらの酵素の遺伝子も、上記と同様の手法により免疫応答性細胞内に（例えば、免疫応答性細胞のゲノムに）導入できる。例えば、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする遺伝子、ＩＬ－７をコードする遺伝子、及びＣＣＬ１９をコードする遺伝子のうちの１種以上を担持するベクターに、若しくは該ベクターとは別個のベクターに、自殺遺伝子をコードする核酸を含ませて、免疫応答性細胞に導入してもよい。
　自殺遺伝子とは、発現することによって直接的に、あるいは二次的に細胞毒性を有する物質を誘導し、自殺遺伝子を発現した細胞を死に至らしめる機能を有する遺伝子を意味する。自殺遺伝子をコードする核酸を免疫応答性細胞に含ませることによって、がんの治療経過に応じて、たとえば腫瘍が消失した場合に自殺遺伝子の機能を活性化する薬剤を投与し、生体内に存在する本開示に係る免疫応答性細胞Ａを減少又は除去することができる。
　自殺遺伝子としては、以下の文献に記載された単純ヘルペスウイルスのチミジンキナーゼ（HSV-TK）や誘導性カスパーゼ９（inducible caspase 9）をコードする遺伝子等を挙げることができ、かかる遺伝子の機能を活性化する薬剤としては、前者に対してはガンシクロビル、後者に対しては二量体誘導化合物（chemical induction of dimerization:CID）であるＡＰ１９０３を挙げることができる（Cooper LJ.,et. al. Cytotherapy. 2006;8(2):105-17.,Jensen M. C. et. al. Biol Blood Marrow Transplant. 2010 Sep;16(9):1245-56., Jones BS. Front Pharmacol.2014 Nov 27;5:254., Minagawa K., Pharmaceuticals (Basel). 2015 May 8;8(2):230-49., Bole-Richard E., Front Pharmacol. 2015 Aug 25;6:174）。
＜免疫抑制阻害剤＞
　免疫抑制阻害剤は、免疫応答性細胞活性化の抑制を解除又は低減する物質を指す。免疫応答性細胞活性化の抑制は、例えば、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）が樹状細胞と結合することによる細胞傷害性Ｔ細胞又はヘルパーＴ細胞と樹状細胞との結合の阻害；ＴｒｅｇがＴＧＦ－β、ＩＬ－１０などの抑制性サイトカインやパーフォリン、グランザイムなどの細胞傷害性物質等を分泌することによる細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞等の活性化阻害；ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との相互作用、ＣＴＬＡ－４とＣＤ８０／ＣＤ８６との相互作用等による免疫チェックポイントによる細胞傷害性Ｔ細胞の活性化抑制などにより生じる。免疫抑制阻害剤は、免疫応答性細胞活性化に対する上記等の抑制を解除し、免疫応答性細胞が活性化することを可能にする物質である。
　免疫抑制阻害剤の例としては、免疫チェックポイント阻害剤、Ｔｒｅｇ、骨髄由来免疫抑制細胞（ＭＤＳＣ）等の免疫抑制性細胞の浸潤、生存、又は機能を阻害する分子標的薬、ＣＣＲ４阻害剤、インドールアミン２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤、プロスタグランジンＥ２［ＰＧＥ２］抑制剤、細胞傷害性抗がん剤が挙げられる。免疫抑制阻害剤は、これらの機能を有する限り、抗体であってもよく、例えばＩｇＧモノクローナル抗体又は抗体断片であってもよい。
　免疫チェックポイント阻害剤は、典型的にはＴ細胞の表面に発現する免疫チェックポイント分子を介した免疫抑制機構を解除又は軽減させる物質である。免疫チェックポイント阻害剤は、例えば、免疫チェックポイント分子（例えばＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４、ＢＴＬＡ、ＴＩＭ－３、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ－３等）又は免疫チェックポイント分子のリガンド（例えばＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＤ８０／ＣＤ８６、Ｓｉｇｌｅｃ－１５等）に結合して、リガンドにより免疫チェックポイント分子からのシグナル伝達が開始されることを阻害することで、免疫応答に対する抑制反応を減少させることができる。
　Ｔｒｅｇ、ＭＤＳＣ等の免疫抑制性細胞の浸潤、生存、又は機能を阻害する分子標的薬は、例えば、チロシンキナーゼを阻害することによって、がん組織内に浸潤してくるＴｒｅｇを減少させ、がん微小環境における免疫抑制を軽減させることができる。
　ＣＣＲ４阻害剤は、ケモカインレセプターＣＣＲ４がＴｒｅｇを呼び集める働きを阻害することによって、がん微小環境における免疫抑制を軽減させることができる。
　ＩＤＯ阻害剤は、ＩＤＯの酵素活性を阻害する、又はＩＤＯの発現自体を抑制することによりキヌレニンの産生を抑制し、キヌレニンによるＴｒｅｇ活性化を減少させることができる。
　ＰＧＥ２抑制剤は、ＰＧＥ２がＴｒｅｇ表面にあるプロスタグランジンＥＰ４受容体と結合してＴｒｅｇの免疫抑制作用を上昇させることを抑制することで、がん微小環境における免疫抑制を軽減させることができる。
　細胞傷害性抗がん剤は、Ｔｒｅｇ等の免疫抑制細胞の数を減少させることによって免疫応答に対する抑制を減少させることができる。
　免疫チェックポイント阻害剤の例としては、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、ＣＴＬＡ－４阻害剤、ＣＤ４７阻害剤、ＳＩＲＰα阻害剤、ＢＴＬＡ阻害剤、ＴＩＭ－３阻害剤、ＴＩＧＩＴ阻害剤、ＬＡＧ－３阻害剤、Ｓｉｇｌｅｃ－１５阻害剤、ガレクチン－９阻害剤等が挙げられる。Ｔｒｅｇ、ＭＤＳＣ等の免疫抑制性細胞の浸潤、生存、又は機能を阻害する分子標的薬の例としては、ソラフェニブ、スニチニブ等が挙げられる。ＣＣＲ４阻害剤の例としては、抗ＣＣＲ４抗体（例えばモガムリズマブ）等が挙げられる。ＩＤＯ阻害剤の例としては、エパカドスタット等が挙げられる。プロスタグランジンＥ２［ＰＧＥ２］抑制剤の例としてはアスピリン等が挙げられる。細胞傷害性抗がん剤の例としては、シクロホスファミド、ゲムシタビン等が挙げられる。
　免疫抑制阻害剤は、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、ＰＤ－Ｌ２阻害剤、ＣＴＬＡ－４阻害剤、ＢＴＬＡ（B- and T-lymphocyte attenuator）阻害剤、ＴＩＭ－３（T-cell immunoglobulin and mucin domain 3）阻害剤、ＴＩＧＩＴ（T-cell immunoreceptor with Ig and ITIM domains）阻害剤、ＬＡＧ－３（Lymphocyte Activation Gene-3）阻害剤、及びＳｉｇｌｅｃ－１５阻害剤からなる群から選択される１種以上を含んでいてもよい。
　本開示に係る組み合わせ医薬Ａにおける免疫抑制阻害剤は、免疫チェックポイント阻害剤であってもよく、より具体的にはＰＤ－１阻害剤又はＰＤ－Ｌ１阻害剤であってもよく、さらに具体的にはＰＤ－１に対する抗体又はＰＤ－Ｌ１に対する抗体であってもよい。ＰＤ－１に対する抗体の例としては、Nivolumab（ニボルマブ）、Pembrolizumab（ペムブロリズマブ）、Toripalimab（トリパリマブ）、Cemiplimab-rwlc（セミプリマブ）、Sintilimab（シンチリマブ）等が挙げられる。ＰＤ－Ｌ１に対する抗体の例としては、Atezolizumab（アテゾリズマブ）、Durvalumab（デュルバルマブ）、Avelumab （アベルマブ）等が挙げられる。ＣＴＬＡ－４に対する抗体の例としては、Ipilimumab（イピリムマブ）等が挙げられる。他にＣＤ４７、ＳＩＲＰαに対する抗体等も挙げられる。
　本開示に係る組み合わせ医薬Ａにおいては、本開示に係る免疫応答性細胞Ａによりがん抗原を特異的に認識する細胞表面分子に加えて、ＩＬ－７及びＣＣＬ１９も発現させ、さらに免疫抑制阻害剤を含むことによって、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子によるがん抑制効果を発揮するだけでなく、ＩＬ－７、ＣＣＬ１９及び免疫抑制阻害剤の組み合わせによりがん微小環境における免疫抑制性を低減させ、さらに内因性の細胞傷害性Ｔ細胞等もがん細胞周辺に誘導し活性化する効果が得られると考えられる。このため、本開示に係る組み合わせ医薬Ａによれば、単に本開示に係る免疫応答性細胞Ａを投与し免疫抑制阻害剤は投与しない場合、あるいはがん抗原を特異的に認識する細胞表面分子を発現するがＩＬ－７及びＣＣＬ１９は発現しない免疫応答性細胞と免疫抑制阻害剤とを共投与した場合では達成できないような向上したがん治療効果をもたらすことができる。
　がん治療効果は、例えば哺乳動物、例えばヒトである対象における腫瘍細胞の数の減少、腫瘍のサイズの減少、腫瘍の消滅、腫瘍負荷の減少等により評価することができる。
　免疫抑制阻害剤は、がん周囲の免疫抑制性の微小環境における免疫応答性細胞一般の働きを活性化するものであるため、本開示に係る免疫応答性細胞Ａだけでなく、内因性の免疫応答性細胞のがん細胞攻撃活性を向上させるものである。このため、免疫抑制阻害剤が例えば特定の分子を標的とする免疫チェックポイント阻害剤であったとしても、本開示に係る免疫応答性細胞Ａが当該標的の分子を細胞表面に発現している必要は必ずしも無く、標的の分子を発現していても発現していなくてもよい。
　本開示において、用語「抗体」は、完全な抗体分子のみならず、抗原への結合能を保持する抗体分子の断片をも指しうる。そのような抗体断片も当技術分野において公知であり、インビトロ及びインビボの両方で一般的に用いられている。したがって、本明細書中で用いる場合、用語「抗体」は、完全な免疫グロブリン分子のみならず、公知の抗体機能断片であるＦ（ａｂ’）２及びＦａｂをも包含する概念を指す。本開示において抗体は、完全な天然抗体、二重特異性抗体、キメラ抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）、融合ポリペプチド、及び非従来型の抗体をも包含する。
　本開示において、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）は、ＶＨ：：ＶＬヘテロダイマーを形成するよう共有結合している免疫グロブリンの重鎖（ＶＨ）及び軽鎖（ＶＬ）の可変領域の融合タンパク質である。重鎖（ＶＨ）及び軽鎖（ＶＬ）は、直接結合しているか、又は、ＶＨのＮ末端とＶＬのＣ末端とが、若しくはＶＨのＣ末端とＶＬのＮ末端とがペプチドリンカーによって結合している。ペプチドリンカーの長さは、例えば、１０アミノ酸、１５アミノ酸、２０アミノ酸、又は２５アミノ酸である。ペプチドリンカーは、通常、柔軟性に寄与するグリシン、及び、可溶性に寄与するセリン若しくはスレオニンに富んでいる。定常領域を除去し、かつペプチドリンカーを導入しているにもかかわらず、ｓｃＦｖタンパク質は、元となる免疫グロブリンが有している抗原への結合特異性を維持している。Ｈｕｓｔｏｎら(Proc.Nat.Acad.Sci.USA,85:5879-5883, 1988)により記載されているように、ｓｃＦｖは、ＶＨコード配列及びＶＬコード配列を含む核酸から発現され得る。ｓｃＦｖについては、米国特許第５，０９１，５１３号、第５，１３２，４０５号、及び第４，９５６，７７８号；並びに米国特許公開第２００５０１９６７５４号及び２００５０１９６７５４号も参照することができる。
　免疫チェックポイント阻害剤としての抗体は、所定の抗原結合性を有していればＩｇＧモノクローナルであっても、Ｆａｂ断片であっても、ｓｃＦｖであっても、それ以外の抗体又は抗体断片であってもよい。ｓｃＦｖは、例えば、マウスハイブリドーマクローンを作製し、次に完全ＩｇＧ（又はＩｇＭ）をｓｃＦｖに変換する方法、免疫されたファージディスプレイｓｃＦｖを作製し、次いでその抗原を用いてライブラリーをスクリーニングする方法、抗原を使用して既製のｓｃＦｖファージディスプレイライブラリーをスクリーニングしてｓｃＦｖを直接得る方法等により得ることができる。
　ヒト以外の動物（例えばマウス）で得た抗体は、ヒトに投与した場合に免疫応答を引き起こす可能性があるため、抗体の不変部の遺伝子をヒト抗体遺伝子に組み換えて作製したキメラ抗体、相補性決定領域（ＣＤＲ）以外の部分をヒト抗体遺伝子に組み換えて作製したヒト化抗体に改変して用いてもよい。また、マウス等に抗体を産生させるのではなく、ファージディスプレイ、又はヒト抗体を産生する遺伝子改変マウスを用いて、完全ヒト化抗体を得てもよい。
＜投与用組成物＞
　本開示に係る組み合わせ医薬Ａにおいて、本開示に係る免疫応答性細胞Ａを含む投与用組成物（以下、第１の投与用組成物とも称する）は、さらに薬学的に許容される添加剤を含有していてもよく、前記添加剤としては、生理食塩水、緩衝生理食塩水、細胞培養培地、デキストロース、注射用水、グリセロール、エタノール及びこれらの組合せ、安定剤、可溶化剤、界面活性剤、緩衝剤、防腐剤、等張化剤、充填剤、並びに潤滑剤を挙げることができる。
　本開示に係る組み合わせ医薬Ａにおいて、免疫抑制阻害剤を含む投与用組成物（以下、第２の投与用組成物とも称する）は、さらに薬学的に許容される添加剤を含有していてもよく、前記添加剤としては、生理食塩水、緩衝生理食塩水、細胞培養培地、デキストロース、注射用水、グリセロール、エタノール及びこれらの組合せ、安定剤、可溶化剤、界面活性剤、緩衝剤、防腐剤、等張化剤、充填剤、並びに潤滑剤を挙げることができる。
　なお、第２の投与用組成物は、第１の投与用組成物と同一の組成物であってもよく、この場合は１つの投与用組成物が本開示に係る免疫応答性細胞Ａと免疫抑制阻害剤の両方を含むことになる。
　第２の投与用組成物が第１の投与用組成物と別個の組成物である場合は、後述のとおり、第１の投与用組成物と第２の投与用組成物は一緒に投与してもよいし、別々のタイミング（時点）で投与してもよい。つまり、本開示に係る免疫応答性細胞Ａと、免疫抑制阻害剤とは、一緒に投与されても、異なる時点で別々に投与されてもよい。
　第１の投与用組成物に含まれる本開示に係る免疫応答性細胞Ａの量は、がんの種類、位置、重症度、治療を受ける対象の年齢、体重及び状態等に応じて適宜調整できるが、一回の投与当たり例えば１×１０４～１×１０１１個、より具体的には１×１０５～１×１０１０個、より具体的には１×１０６～１×１０９個を投与してもよい。また、本開示に係る免疫応答性細胞Ａの量は、一回の投与当たり１×１０６個未満、例えば１×１０５～５×１０５個、より具体的には１．５×１０５～４×１０５個と少量であってもよい。
　上述のとおり、本開示に係る免疫応答性細胞Ａを単独で用いた場合、及び免疫抑制阻害剤を単独で用いた場合には治療困難ながん治療の場合でも、本開示に係る組み合わせ医薬Ａを用いれば治療可能となりうる。このため、第１の投与用組成物に含まれる本開示に係る免疫応答性細胞Ａの量は、本開示に係る免疫応答性細胞Ａを単独で同じ量（同じ細胞数）用いた場合には抗がん効果を奏さないほど少量であってもよい。免疫抑制阻害剤との相乗効果により、抗がん効果を奏すことができる量であれば、免疫応答性細胞Ａの量の下限値は特に制限されない。
　第１の投与用組成物は、１日４回、１日３回、１日２回、１日１回、１日おき、２日おき、３日おき、４日おき、５日おき、週１回、７日おき、８日おき、９日おき、週２回、月１回又は月２回の頻度で投与してもよい。また、投与回数は総計で例えば１回～１０回、すなわち、１回、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回又は１０回としてもよいが、１０回を超える回数投与しても構わない。
　第２の投与用組成物に含まれる免疫抑制阻害剤の量は、がんの種類、位置、重症度、治療を受ける対象の年齢、体重及び状態等に応じて適宜調整できるが、一回の投与当たりの免疫抑制阻害剤の用量は、例えば、０．１～５００ｍｇ／ｋｇ、より具体的には０．５～２５０ｍｇ／ｋｇ、より具体的には１～１００ｍｇ／ｋｇとすることができる。
第２の投与用組成物は、１日４回、１日３回、１日２回、１日１回、１日おき、２日おき、３日おき、４日おき、５日おき、週１回、７日おき、８日おき、９日おき、週２回、月１回又は月２回の頻度で投与してもよい。また、投与回数は総計で例えば１回～３０回、すなわち、１回、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回、又は１１回～３０回としてもよいが、３０回を超える回数投与しても構わない。
　第１の投与用組成物を投与するタイミングと、第２の投与用組成物を投与するタイミングとの関係は特に限定されず、第１の投与用組成物の投与を先に開始してもよいし、第２の投与用組成物の投与を先に開始してもよいし、あるいは第１の投与用組成物と第２の投与用組成物とは同時に投与を開始してもよい。それぞれの投与用組成物の投与回数、投与頻度の間の関係についても特に限定はされない。
　第１の投与用組成物と第２の投与用組成物とは同一の組成物であってもよく、この場合は、本開示に係る免疫応答性細胞Ａと免疫抑制阻害剤の両方を含む医薬組成物（合剤）が提供される。本開示に係る組み合わせ医薬Ａにおける第１の投与用組成物と第２の投与用組成物とが異なる組成物である場合、第１の投与用組成物と第２の投与用組成物とは同時に投与されてもよく、別々のタイミングで（つまり間隔を空けて）投与されてもよい。ただし、本開示に係る免疫応答性細胞Ａと免疫抑制阻害剤とによる相乗効果を効果的に得る観点からは、第１の投与用組成物を投与するタイミングと第２の投与用組成物を投与するタイミングとの間の間隔（一方の投与用組成物を投与するタイミングと、それと最も時間的に近接しているもう一方の投与用組成物を投与するタイミングとの間の間隔）は、３ヶ月以内であってもよく、２ヶ月以内であってもよく、１ヶ月以内であってもよく、２週間以内であってもよい。前記間隔は、１週間以内であってもよく、３日以内であってもよいが、後述の実施例で示すように本開示に係る免疫応答性細胞Ａは生体内で長期間維持されているため、前記間隔を極端に短くする必要は無い。
　このように本開示に係る組み合わせ医薬Ａにおいては、本開示に係る免疫応答性細胞Ａと免疫抑制阻害剤とは独立したタイミング（例えば異なるタイミング）で投与することができるものである。また、本開示において「共投与」及び「併用」の用語は、複数の剤が同一の組成物に含有されて投与される場合、複数の剤が別々の組成物に含有されるが同時に投与される場合、複数の剤が別々の組成物に含有され別々の時点で投与される場合のいずれをも包含する意味で用いられる。
　上記のとおり、本開示に係る組み合わせ医薬Ａは、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子を発現する免疫応答性細胞、分泌されたＩＬ－７及びＣＣＬ１９、並びに免疫抑制阻害剤からなる因子の組み合わせによる相乗的な効果により、驚くべきほどに向上したがん治療効果を奏する。
　第１の投与用組成物は、当業者に既知の方法を用いて、がんの治療を必要とする対象に投与することができ、例えば、局所注入（カテーテル投与を含む）、全身注入、静脈内注入又は非経口投与（例えば経皮投与、経粘膜投与、より具体的には点鼻、点眼、舌下、坐薬、パッチ等）によって投与することができる。第１の投与用組成物は、取り扱いの観点から、単位投与量の注入可能な形態（溶液、懸濁液、乳濁液）に製剤化されていてもよい。投与方法のより具体的な例としては、静脈内、腫瘍内、皮内、皮下、筋肉内、腹腔内、動脈内、髄内、心臓内、関節内、滑液嚢内、頭蓋内、髄腔内、及びくも膜下（髄液）への注射を挙げることができる。
　第２の投与用組成物は、当業者に既知の方法を用いて、がんの治療を必要とする対象に投与することができ、例えば、経口投与、局所注入（カテーテル投与を含む）、全身注入、静脈内注入又は非経口投与（例えば経皮投与、経粘膜投与、より具体的には点鼻、点眼、舌下、坐薬、パッチ等）によって投与することができる。第２の投与用組成物は、取り扱いの観点から、単位投与量の注入可能な形態（溶液、懸濁液、乳濁液）に製剤化されていてもよい。投与方法のより具体的な例としては、静脈内、腫瘍内、皮内、皮下、筋肉内、腹腔内、動脈内、髄内、心臓内、関節内、滑液嚢内、頭蓋内、髄腔内、及びくも膜下（髄液）への注射を挙げることができる。
　本開示に係る免疫応答性細胞Ａは、元となる免疫応答性細胞又はその前駆体細胞を治療対象の患者から得て、本開示に係る免疫応答性細胞Ａとするために必要な遺伝子の導入後に、同じ患者に投与してもよく（自家投与）、又は別の患者に投与してもよい（他家投与）。あるいは、元となる免疫応答性細胞又はその前駆体細胞は、ｉＰＳ細胞、ＥＳ細胞等の多能性幹細胞又は造血幹細胞などの体性幹細胞から作製してもよい。
　第１の投与用組成物及び第２の投与用組成物は、例えば、所定のｐＨに緩衝化されていてもよい無菌の液体調製物、例えば、等張水溶液、懸濁液、乳濁液、分散物又は粘性組成物として投与することができる。前記液体調製物は、注射用の液体調製物であってもよい。また、特定の組織との接触時間を長くするために、前記液体調製物を適切な粘度範囲内の粘度を有する粘性組成物の形態としてもよい。液体調製物は、例えば、水、生理食塩水、リン酸塩緩衝化生理食塩水、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液状ポリエチレングリコールなど）及びそれらの混合物からなる溶媒又は分散媒を含んでいてもよい。
　前記液体調製物は、本開示に係る免疫応答性細胞Ａ及び／又は免疫抑制阻害剤を、その他の成分の様々な量とともに、適当量の適切な溶媒に配合することによって調製することができる。前記液体調製物は、好適な担体、希釈剤、又は賦形剤を含んでいてもよい。前記液体調製物はまた、凍結乾燥されていてもよい。液体調製物は、所望の投与経路に依存して、様々な補助物質をさらに含んでいてもよく、補助物質の例としては、湿潤剤、分散剤又は乳化剤（例えば、メチルセルロース）、ｐＨ緩衝化剤、ゲル化剤又は粘度増強添加剤、保存剤、矯味矯臭剤、着色剤などが挙げられる。液体調製物中が含みうる成分については、“ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＳＣＩＥＮＣＥ”，１７版、１９８５の記載を参照することもできる。
　また、液体調製物は、液体調製物の安定性及び無菌性を高める様々な添加剤をさらに含んでいてもよく、その例としては、抗菌性保存剤、酸化防止剤、キレート剤、及び緩衝剤などが挙げられる。微生物の作用を防止するために、様々な抗菌剤及び抗真菌剤、例えば、パラベン類、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸などを使用することができる。液体調製物に使用するビヒクル、希釈剤又は添加剤は、そこに含まれる本開示に係る免疫応答性細胞Ａ及び／又は免疫抑制阻害剤との適合性を有していなければならない。
　液体調製物は血液と等張性であってもよい。等張性は、塩化ナトリウム、又は他の薬学的に許容され得る浸透圧調節物質（例えば、デキストロース、ホウ酸、酒石酸ナトリウム、プロピレングリコール、あるいは、他の無機溶質又は有機溶質など）を液体調製物に含有させることで達成することができる。
　本開示に係る組み合わせ医薬Ａは、本開示に係る免疫応答性細胞Ａ及び免疫抑制阻害剤に加えて、さらに他の抗がん剤を含んでいてもよい。他の抗がん剤の例としては、ベンダムスチン、イオスファミド、ダカルバジン等のアルキル化薬、ペントスタチン、フルダラビン、クラドリビン、メソトレキセート、５－フルオロウラシル、６－メルカプトプリン、エノシタビン等の代謝拮抗薬、リツキシマブ、セツキシマブ、トラスツズマブ等の分子標的薬、イマチニブ、ゲフェチニブ、エルロチニブ、アファチニブ、ダサチニブ、スニチニブ、トラメチニブ等のキナーゼ阻害剤、ボルテゾミブ等のプロテアソーム阻害剤、シクロスポリン、タクロリムス等のカルシニューリン阻害薬、イダルビジン、ドキソルビシンマイトマイシンＣ等の抗がん性抗生物質、イリノテカン、エトポシド等の植物アルカロイド、シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチン等のプラチナ製剤、タモキシフェン、ビカルダミド等のホルモン療法薬、インターフェロン等の免疫制御薬を挙げることができる。他の抗がん剤は、例えば、アルキル化薬及び代謝拮抗薬のうちの少なくとも１種を含んでいてもよい。
＜本開示に係る組み合わせ医薬Ａを用いたがんの治療＞
　本開示に係る組み合わせ医薬Ａをがんの治療に用いる場合、治療の対象は例えば任意の哺乳動物でよいが、例えば霊長類の動物であり、より具体的にはヒトであってもよい。治療対象は、愛玩動物又は家畜であってもよく、その例としては、イヌ、ネコ、ブタ、ウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギなどが挙げられる。
　治療の対象となるがんは、固形がんでも血液がんでもよく、腺がん、扁平上皮がん、腺扁平上皮がん、未分化がん、大細胞がん、小細胞がん、皮膚がん、乳がん、前立腺がん、膀胱がん、膣がん、子宮頸部がん、子宮がん、肝臓がん、腎臓がん、膵臓がん、脾臓がん、肺がん、気管がん、気管支がん、結腸がん、小腸がん、胃がん、食道がん、胆嚢がん、精巣がん、卵巣がん等のがんや、骨組織、軟骨組織、脂肪組織、筋組織、血管組織及び造血組織のがんのほか、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、悪性血管内皮腫、悪性シュワン腫、骨肉腫、軟部組織肉腫等の肉腫や、肝芽腫、髄芽腫、腎芽腫、神経芽腫、膵芽腫、胸膜肺芽腫、網膜芽腫等の芽腫や、胚細胞腫瘍や、リンパ腫や、白血病を挙げることができる。
　本開示に係る組み合わせ医薬Ａによればがん微小環境における免疫抑制性を軽減することが可能であるため、治療対象となるがんは血球系のがんに限定されず、固形がんに対しても治療効果を奏する。このため、従来の方法では治療が難しかった固形がんに対しても高い有効性を発揮できる。
　本開示に係る組み合わせ医薬Ａは、がんの確定診断がされる前であっても、対象内におけるがん細胞の存在が疑われる状況においては、対象に予防的に投与してもよい。本開示においては、このような使用形態も、がんの治療のための使用の概念に包含される。
＜対象におけるがんの治療方法＞
　本開示に係る一態様によれば、
　（ａ）がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、ＩＬ－７、及びＣＣＬ１９を発現する免疫応答性細胞、並びに
　（ｂ）免疫抑制阻害剤
　を組み合わせて対象に投与することを含む、対象におけるがんを治療する方法（以下、本開示に係るがんの治療方法Ａとも称する）が提供される。
　ここで、本開示に係るがんの治療方法Ａにおける免疫応答性細胞は本開示に係る免疫応答性細胞Ａであり、その詳しい構成及び例などについては本開示に係る免疫応答性細胞Ａについての上記説明がそのまま当てはまる。また、本開示に係るがんの治療方法Ａにおける免疫抑制阻害剤の詳しい構成及び例についても、本開示に係る組み合わせ医薬Ａにおける免疫抑制阻害剤についての上記説明がそのまま当てはまる。
　これに加え、本開示に係るがんの治療方法Ａにおける対象、がんの種類、用量、投与スケジュール等の、治療方法の詳細については、前述の本開示に係る組み合わせ医薬Ａの説明がそのまま当てはまる。例えば、（ａ）の免疫応答性細胞と、（ｂ）の免疫抑制阻害剤とは同時に投与されてもよいし、別々の時点で投与されてもよい。また、（ａ）の免疫応答性細胞と、（ｂ）の免疫抑制阻害剤とは、どちらも治療有効量で投与することができる。
　本開示に係るがんの治療方法Ａは、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、ＩＬ－７及びＣＣＬ１９を発現する免疫応答性細胞、並びに免疫抑制阻害剤からなる因子の組み合わせによる相乗的な効果により、驚くべきほどに向上したがん治療効果を奏する。
　さらに、本開示によれば、がんを治療するための医薬の製造における、（ａ）がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、ＩＬ－７及びＣＣＬ１９を発現する免疫応答性細胞、並びに（ｂ）免疫抑制阻害剤の使用が提供される。この使用においても、免疫応答性細胞、免疫抑制阻害剤、投与用組成物、がんの治療等の詳細については、前述の本開示に係る組み合わせ医薬Ａの説明がそのまま当てはまる。
　加えて、本開示によれば、免疫抑制阻害剤と併用されて対象におけるがんを治療するために用いられる、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、ＩＬ－７及びＣＣＬ１９を発現する免疫応答性細胞を含む医薬も提供される。本開示に係る免疫応答性細胞Ａを含む医薬は、免疫抑制阻害剤と併用されることで、相乗的な効果を生じ、驚くべきほどに向上したがん治療効果を奏する。免疫応答性細胞、免疫抑制阻害剤、投与用組成物、がんの治療等の詳細については、前述の本開示に係る組み合わせ医薬Ａの説明がそのまま当てはまる。さらに、免疫抑制阻害剤と併用されて対象におけるがんを治療するために用いられる、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、ＩＬ－７及びＣＣＬ１９を発現する免疫応答性細胞も提供される。
　さらに、本開示によれば、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、ＩＬ－７及びＣＣＬ１９を発現する免疫応答性細胞と併用されて対象におけるがんを治療するために用いられる、免疫抑制阻害剤を含む医薬も提供される。免疫抑制阻害剤を含む医薬は、本開示に係る免疫応答性細胞Ａと併用されることで、相乗的な効果を生じ、驚くべきほどに向上したがん治療効果を奏する。免疫応答性細胞、免疫抑制阻害剤、投与用組成物、がんの治療等の詳細については、前述の本開示に係る組み合わせ医薬Ａの説明がそのまま当てはまる。さらに、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、ＩＬ－７及びＣＣＬ１９を発現する免疫応答性細胞と併用されて対象におけるがんを治療するために用いられる、免疫抑制阻害剤も提供される。
　本開示によれば、免疫抑制阻害剤と併用されることが表示された容器に収容され、かつ、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、ＩＬ－７及びＣＣＬ１９を発現する免疫応答性細胞を含む医薬も提供される。免疫応答性細胞、免疫抑制阻害剤等の詳細については、前述の本開示に係る組み合わせ医薬Ａの説明がそのまま当てはまる。また、医薬の構成の詳細については、前述の第１の投与用組成物の説明がそのまま当てはまる。免疫抑制阻害剤と併用されることが表示された容器は、使用方法の表示が付されたバイアル、静注バッグ、細胞保存用バッグ、点滴用バッグ等の容器であってもよいし、エッペンドルフチューブのような容器であってもよい。このような容器中に、本開示に係る免疫応答性細胞Ａを含む医薬は、例えば前述の第１の投与用組成物の説明に記載した状態で収容される。免疫抑制阻害剤と併用されることの表示は、容器のどの面に付されていてもよいが、視認性を考慮して容器の外面に付されていてもよい。また、表示は容器そのものにではなく、１つ又は複数の容器をさらに収納する箱等のケースに付されていてもよい。また、免疫抑制阻害剤と併用されることの表示は、免疫抑制阻害剤と併用されることを明示的に指示している表示に限られず、免疫抑制阻害剤との併用の可能性について言及している任意の表示であってもよい。
　本開示によれば、免疫抑制阻害剤と併用されることが記載された添付文書と、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、ＩＬ－７及びＣＣＬ１９を発現する免疫応答性細胞を含む医薬を収容した容器と、を含む製品も提供される。免疫応答性細胞、免疫抑制阻害剤等の詳細については、前述の本開示に係る組み合わせ医薬Ａの説明がそのまま当てはまる。また、医薬の構成の詳細については、前述の第１の投与用組成物の説明がそのまま当てはまる。本開示に係る免疫応答性細胞Ａを収容した容器は、使用方法の表示が付されたバイアル、静注バッグ、細胞保存用バッグ、点滴用バッグ等の容器であってもよいし、エッペンドルフチューブのような容器であってもよい。このような容器中に、本開示に係る免疫応答性細胞Ａを含む医薬は、例えば前述の第１の投与用組成物の説明に記載した状態で収容される。また、添付文書中における免疫抑制阻害剤と併用されることの記載は、免疫抑制阻害剤と併用されることを明示的に指示している記載に限られず、免疫抑制阻害剤との併用の可能性について言及している任意の記載であってもよい。
　以上説明したとおり、本開示に係る一態様によれば、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、ＩＬ－７及びＣＣＬ１９を発現する免疫応答性細胞、並びに免疫抑制阻害剤の組み合わせによる相乗的な効果により、驚くべきほどに向上したがん治療効果を得ることができる。
　本開示に係る実施形態には以下のものが含まれる。
＜１＞　（ａ）がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、インターロイキン７及びＣＣＬ１９を発現する免疫応答性細胞、並びに
　（ｂ）免疫抑制阻害剤
　を含む、対象におけるがんを治療するための組み合わせ医薬。
＜２＞　前記免疫応答性細胞と、前記免疫抑制阻害剤とが、異なる時点で別々に投与される、＜１＞に記載の組み合わせ医薬。
＜３＞　インターロイキン７をコードする遺伝子及びＣＣＬ１９をコードする遺伝子が外来性であり、双方が前記免疫応答性細胞のゲノムに組み込まれているか、又は前記免疫応答性細胞中に存在する１個又は複数個のベクターに一緒に若しくは別個にコードされている、＜１＞又は＜２＞に記載の組み合わせ医薬。
＜４＞　前記がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である、＜１＞～＜３＞のうちいずれか１つに記載の組み合わせ医薬。
＜５＞　前記免疫抑制阻害剤が、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、ＰＤ－Ｌ２阻害剤、ＣＴＬＡ－４阻害剤、ＢＴＬＡ（B- and T-lymphocyte attenuator）阻害剤、ＴＩＭ－３（T-cell immunoglobulin and mucin domain 3）阻害剤、ＴＩＧＩＴ（T-cell immunoreceptor with Ig and ITIM domains）阻害剤、ＬＡＧ－３（Lymphocyte Activation Gene-3）阻害剤、及びＳｉｇｌｅｃ－１５阻害剤からなる群から選択される１種以上を含む、＜１＞～＜４＞のうちいずれか１つに記載の組み合わせ医薬。
＜６＞　前記免疫抑制阻害剤が抗体である、＜１＞～＜５＞のうちいずれか１つに記載の組み合わせ医薬。
＜７＞　前記抗体が、ＩｇＧモノクローナル抗体又は抗体断片である、＜６＞に記載の組み合わせ医薬。
＜８＞　前記がんが固形がんである、＜１＞～＜７＞のうちいずれか１つに記載の組み合わせ医薬。
＜９＞　前記免疫応答性細胞が、前記対象自身に由来する免疫応答性細胞である、＜１＞～＜８＞のうちいずれか１つに記載の組み合わせ医薬。
＜１０＞　前記免疫応答性細胞が、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）、及びＢ細胞等のリンパ球系細胞、単球、マクロファージ、及び樹状細胞等の抗原提示細胞、好中球、好酸球、好塩基球、並びに肥満細胞からなる群から選択される、＜１＞～＜９＞のうちいずれか１つに記載の組み合わせ医薬。
＜１１＞　免疫抑制阻害剤と併用されて対象におけるがんを治療するために用いられる、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、インターロイキン７及びＣＣＬ１９を発現する免疫応答性細胞を含む医薬。
＜１２＞　がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、インターロイキン７、及びＣＣＬ１９を発現する免疫応答性細胞と併用されて対象におけるがんを治療するために用いられる、免疫抑制阻害剤を含む医薬。
＜１３＞　前記免疫抑制阻害剤と前記免疫応答性細胞とが異なる時点で別々に投与される形態にて用いるための、＜１１＞又は＜１２＞に記載の医薬。
＜１４＞　免疫抑制阻害剤と併用されることが表示された容器に収容され、かつ、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、インターロイキン７及びＣＣＬ１９を発現する免疫応答性細胞を含む医薬。
＜１５＞　免疫抑制阻害剤と併用されることが記載された添付文書と、
　がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、インターロイキン７及びＣＣＬ１９を発現する免疫応答性細胞を含む医薬を収容した容器と、
　を含む製品。
＜１６＞　（ａ）がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、インターロイキン７及びＣＣＬ１９を発現する免疫応答性細胞、並びに
　（ｂ）免疫抑制阻害剤
　を含む、対象におけるがんを治療するための医薬組成物。
＜１７＞　前記がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である、＜１６＞に記載の医薬組成物。
＜１８＞　（ａ）がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、ＩＬ－７及びＣＣＬ１９を発現する免疫応答性細胞、並びに
　（ｂ）免疫抑制阻害剤
　を組み合わせて対象に投与することを含む、対象におけるがんを治療する方法。
＜１９＞　がんを治療するための医薬の製造における、（ａ）がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、ＩＬ－７及びＣＣＬ１９を発現する免疫応答性細胞、並びに（ｂ）免疫抑制阻害剤の使用が提供される。
　以下、本開示に係るさらなる態様について説明する。
　本開示の一態様によれば、
　（ａ）インターロイキン７をコードする核酸及びＣＣＬ１９をコードする核酸を協同して含む１種類又は複数種類の細胞若しくは核酸送達媒体又はそれらの組み合わせ、並びに
　（ｂ）免疫抑制阻害剤 
　を含む、対象におけるがんを治療するための組み合わせ医薬（以下、「本開示に係る組み合わせ医薬Ｂ」とも称する）が提供される。
　ここで、組み合わせ医薬Ｂにおけるインターロイキン７、ＣＣＬ１９、インターロイキン７をコードする核酸、ＣＣＬ１９をコードする核酸、及び免疫抑制阻害剤の定義、例、アミノ酸配列、塩基配列、好ましい実施形態等の詳細は、本開示に係る免疫応答性細胞Ａ及び本開示に係る組み合わせ医薬Ａにおける、インターロイキン７、ＣＣＬ１９、インターロイキン７をコードする遺伝子、ＣＣＬ１９をコードする遺伝子、及び免疫抑制阻害剤の定義、例、アミノ酸配列、塩基配列、好ましい実施形態等の詳細と、それぞれ同様である。
　また、本開示において「協同して含む」とは、複数の要素（例えば、複数の細胞、複数の核酸送達媒体、又は１つ以上の細胞及び１つ以上の核酸送達媒体）が存在する場合に、含まれる対象として示された物質（例えば特定のポリペプチドをコードする核酸）が、前記複数の要素のうち少なくとも１つには含まれていることを意味し、前記複数の要素の全てが当該物質を含んでいることは必要無い。つまり、「協同して含む」とは、「全体として含む」と表現することもできる。また、「協同して含む」の意味する範囲には、含まれる対象として示された複数の物質の全てが単一の細胞又は核酸送達媒体に含まれる場合も包含され、このような構成も好ましい構成の一つである。
　このため、本開示に係る組み合わせ医薬Ｂが、細胞Ｉ及び細胞ＩＩを含む場合、細胞Ｉがインターロイキン７をコードする核酸を含んでＣＣＬ１９をコードする核酸を含まず、細胞ＩＩがＣＣＬ１９をコードする核酸を含んでインターロイキン７をコードする核酸を含まない構成であってもよい。同様に、本開示に係る組み合わせ医薬Ｂが、核酸送達媒体Ｉ及び核酸送達媒体ＩＩを含む場合、核酸送達媒体Ｉがインターロイキン７をコードする核酸を含んでＣＣＬ１９をコードする核酸を含まず、核酸送達媒体ＩＩがＣＣＬ１９をコードする核酸を含んでインターロイキン７をコードする核酸を含まない構成であってもよい。
　あるいは、本開示に係る組み合わせ医薬Ｂは、インターロイキン７をコードする核酸及びＣＣＬ１９をコードする核酸の両方を含む単一の細胞又は核酸送達媒体を含んでいてもよい。
　さらに、「インターロイキン７をコードする核酸及びＣＣＬ１９をコードする核酸を協同して含む１種類又は複数種類の細胞若しくは核酸送達媒体又はそれらの組み合わせ」における「それらの組み合わせ」とは、１種類又は複数種類の細胞と、１種類又は複数種類の核酸送達媒体との組み合わせであって、インターロイキン７をコードする核酸がそれら１種類又は複数種類の細胞及び１種類又は複数種類の核酸送達媒体のうち少なくとも１つに含まれ、ＣＣＬ１９をコードする核酸がそれら１種類又は複数種類の細胞及び１種類又は複数種類の核酸送達媒体のうち少なくとも１つに含まれている組み合わせを表す。
　さらに、本開示においてポリペプチドとは、アミノ酸残基がペプチド結合で連結したポリマー一般を示し、いわゆるタンパク質もその例に含まれる。ポリペプチドのアミノ酸残基数は１０以上であってもよく、２０以上であってもよく、３０以上であってもよく、４０以上であってもよく、５０以上であってもよく、７０以上であってもよく、１００以上であってもよい。アミノ酸残基数の上限値は特に制限されないが、アミノ酸残基数は１００００以下であってもよく、５０００以下であってもよく、２０００以下であってもよく、１０００以下であってもよく、５００以下であってもよく、２００以下であってもよく、１００以下であってもよく、７０以下であってもよく、５０以下であってもよく、４０以下であってもよく、３０以下であってもよく、２０以下であってもよい。上記の下限値と上限値とは、矛盾の生じない限りにおいて自由に組み合わせて範囲を形成することができる。
　本開示に係る組み合わせ医薬Ｂにおいて、細胞とは、含有対象として言及された核酸（例えば、インターロイキン７をコードする核酸及び／又はＣＣＬ１９をコードする核酸）を発現することが可能な細胞である限りは特に限定されない。細胞は、体内に導入された場合に、がん細胞周辺に集積あるいは浸潤する細胞であることが好ましい。含有対象として言及された核酸が一つの細胞内に２つ以上存在する場合、該細胞内において、それらの核酸は、それぞれ独立に、ゲノムに組み込まれた状態又はプラスミドに担持された状態で含まれていてもよく、あるいは互いに連結されてゲノムに組み込まれた状態又はプラスミドに担持された状態で含まれていてもよい。前記細胞の例としては、免疫応答性細胞、嫌気性菌の細胞、及び間葉系幹細胞（ＭＳＣ）が挙げられる。
　本開示に係る組み合わせ医薬Ｂにおいて、核酸送達媒体とは、含有対象として言及された核酸（例えば、インターロイキン７をコードする核酸及び／又はＣＣＬ１９をコードする核酸）を細胞に送達して発現させることが可能な核酸送達媒体である限りは特に限定されない。該細胞は、ヒトの細胞であることが好ましく、ヒトの体内の細胞であることがより好ましく、ヒト体内のがん細胞又は免疫応答性細胞であることがさらに好ましい。つまり、核酸送達媒体は、体内に導入された場合に、がん細胞内又は免疫応答性細胞内に核酸を送達する核酸送達媒体であることが好ましい。
　前記核酸送達媒体の例としては、ウイルス、リポソーム及びナノ粒子が挙げられる。核酸送達媒体として当業界で知られているものを、常法に従って用いればよい。核酸送達媒体として、ウイルスベクターを用いることも可能である。
　含有対象として言及された核酸が２つ以上、一つの核酸送達媒体内に存在する場合、該核酸送達媒体内において、それらの核酸は、それぞれ独立した状態で含まれていてもよく、あるいは互いに連結された状態で含まれていてもよい。
　がん細胞は免疫応答性細胞ががん細胞を攻撃したり、がん細胞を攻撃する指示を発したりすることを抑制する免疫抑制機構を有しているため、がん罹患者自身の免疫によるがん細胞への攻撃が抑制されている。本開示に係る組み合わせ医薬Ｂの構成要素の１つである免疫抑制阻害剤は、がん細胞による免疫抑制機構を阻害することで、がん罹患者の免疫系ががん細胞を攻撃することをより容易にすると考えられる。
　これらに加えて、インターロイキン７をコードする核酸及びＣＣＬ１９をコードする核酸を協同して含む１種類又は複数種類の細胞若しくは核酸送達媒体又はそれらの組み合わせが、がん組織の近傍でＩＬ－７を発現し、又は細胞（典型的には体内の細胞）に核酸送達してＩＬ－７を発現させ、さらにＣＣＬ１９を発現し、又は細胞（典型的には体内の細胞）に核酸送達してＣＣＬ１９を発現させることにより、がん罹患者の内因性の免疫応答性細胞ががん細胞の周囲に集積するため、がん細胞をより効果的に攻撃することが可能になると考えられる。この点から、核酸送達の対象となる細胞は、体内のがん細胞であることが好ましい。
　本開示に係る組み合わせ医薬Ｂは、インターロイキン７をコードする核酸及びＣＣＬ１９をコードする核酸を協同して含む１種類又は複数種類の細胞若しくは核酸送達媒体又はそれらの組み合わせと、免疫抑制阻害剤とを含むことによって、発現したＩＬ－７及びＣＣＬ１９、並びに免疫抑制阻害剤からなる因子の組み合わせによる相乗的な効果を発揮し、このために大きく改善したがん治療効果を奏すると考えられる。この相乗的な効果は、それぞれの因子の個別の効果からは予測することができないほど優れた効果である。
　ある実施形態では、組み合わせ医薬Ｂにおける前記１種類又は複数種類の細胞又は核酸送達媒体は、免役応答性細胞等、がん細胞以外の細胞に核酸を送達する。かかる実施形態では、本開示に係る組み合わせ医薬Ｂにおける前記１種類又は複数種類の細胞若しくは核酸送達媒体又はそれらの組み合わせは、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする核酸をさらに含んでいてもよい。この場合、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする核酸を含む細胞又は核酸送達媒体は、インターロイキン７をコードする核酸を含んでいてもいなくてもよく、ＣＣＬ１９をコードする核酸を含んでいてもいなくてもよい。つまり、本開示に係る組み合わせ医薬Ｂにおける前記１種類又は複数種類の細胞若しくは核酸送達媒体又はそれらの組み合わせが、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする核酸をさらに含む場合は、前記１種類又は複数種類の細胞若しくは核酸送達媒体又はそれらの組み合わせは、インターロイキン７をコードする核酸、ＣＣＬ１９をコードする核酸、及びがん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする核酸を協同して（言い換えれば全体として）含んでいればよい。
　本開示に係る組み合わせ医薬Ｂにおける前記１種類又は複数種類の細胞若しくは核酸送達媒体又はそれらの組み合わせが、核酸を送達した細胞において、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をさらに発現させることにより、がん治療効果をいっそう増強しうる。例えば、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする核酸を核酸送達媒体に含ませた場合、当該核酸送達媒体を対象に投与して対象の体内のＴ細胞に前記核酸を導入することによって、当該Ｔ細胞において細胞表面分子が発現する。
　ある実施形態では、組み合わせ医薬Ｂにおける前記１種類又は複数種類の細胞又は核酸送達媒体は、がん細胞に核酸を送達するために、がん細胞を特異的に認識する分子をその表面に有する。がん細胞を特異的に認識する分子の例及び好ましい実施形態等の詳細については、がん細胞を特異的に認識する細胞表面分子の例及び好ましい実施形態等の詳細と同様である。
　組み合わせ医薬Ｂにおける前記１種類又は複数種類の細胞又は核酸送達媒体が「細胞」の場合、例えば、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする核酸を当該細胞に導入し、組み合わせ医薬Ｂの投与前に培養することによって、その表面にがん抗原を特異的に認識するｓｃＦｖ等を発現させることができる。
　組み合わせ医薬Ｂにおける前記１種類又は複数種類の細胞又は核酸送達媒体が「ウイルス」の場合、例えば、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする核酸をウイルスゲノムに組み込み、適当な細胞にトランスフェクションしてウイルスを産生・増殖させることにより、その表面にがん抗原を特異的に認識するｓｃＦｖ等を発現させることができる。ｓｃＦｖ等の抗体はウイルスのエンベロープ又はカプシドに含ませてもよく、例えば、ヘルペスウイルスを用いる場合、ヘルペスウイルスへの侵入を担うエンベロープ糖タンパク質ｇＤを本来の受容体に結合不能とした上で、該エンベロープ糖タンパク質ｇＤにがん抗原を特異的に認識するｓｃＦｖ等の抗体を挿入してもよい。
　また、組み合わせ医薬Ｂにおける前記１種類又は複数種類の細胞又は核酸送達媒体がリポソームやナノ粒子などの場合は、予め、表面にがん細胞を特異的に認識する分子を、公知の方法又はそれに準ずる方法で結合させておくことができる。
　ここで、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、及びがん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする核酸の定義、例、アミノ酸配列、塩基配列、好ましい実施形態等の詳細は、本開示に係る免疫応答性細胞Ａ及び本開示に係る組み合わせ医薬Ａにおけるがん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、及びがん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする遺伝子の定義、例、アミノ酸配列、塩基配列、好ましい実施形態等の詳細と、それぞれ同様である。
　がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする核酸は、免疫応答性細胞に含まれることが好ましい。言い換えれば、本開示に係る組み合わせ医薬Ｂにおける前記１種類又は複数種類の細胞若しくは核酸送達媒体又はそれらの組み合わせは、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする核酸を含む免疫応答性細胞を含むことが好ましい。該免疫応答性細胞は、インターロイキン７をコードする核酸を含んでいてもいなくてもよく、ＣＣＬ１９をコードする核酸を含んでいてもいなくてもよい。がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子は、がん抗原を特異的に認識するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）、がん抗原を特異的に認識するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）等の、細胞表面に発現することによってがんに対する特異的な識別能を細胞に付与する分子であることが好ましい。
　このため、ある実施形態では、本開示に係る組み合わせ医薬Ｂは、ＣＡＲ－Ｔ又はＴＣＲ－Ｔを用いた処置と併用することができるともいえる。
　一つの実施形態においては、前記インターロイキン７をコードする核酸及びＣＣＬ１９をコードする核酸を協同して含む１種類又は複数種類の細胞若しくは核酸送達媒体又はそれらの組み合わせは、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、インターロイキン７及びＣＣＬ１９を発現する免疫応答性細胞を含んでいてもよい。また、免疫抑制阻害剤は、細胞が発現した免疫抑制阻害性ポリペプチドであってもよく、本開示に係る組み合わせ医薬Ｂは、免疫抑制阻害性ポリペプチドを発現する細胞を含んでいてもよい。該細胞の例としては、インターロイキン７をコードする核酸及びＣＣＬ１９をコードする核酸を協同して含む１種類又は複数種類の細胞若しくは核酸送達媒体又はそれらの組み合わせにおける細胞の例として後述された細胞が挙げられる。あるいは、本開示に係る組み合わせ医薬Ｂにおける免疫抑制阻害剤の代わりに、免疫抑制阻害性ポリペプチドをコードする核酸を含む核酸送達媒体を含ませることも、本開示に係る実施形態の範疇に含まれる。該核酸送達媒体は、他の核酸を含む核酸送達媒体と同じ核酸送達媒体であっても、別個の核酸送達媒体であってもよい。
　このため、本開示のある実施形態によれば、前記免疫抑制阻害剤がポリペプチドであって、前記細胞若しくは核酸送達媒体又はそれらの組み合わせが、免疫抑制阻害剤ポリペプチドをコードずる核酸をさらに協同して含む。
　また、本開示に係る組み合わせ医薬Ｂが、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、インターロイキン７及びＣＣＬ１９を発現する免疫応答性細胞と、免疫抑制阻害性ポリペプチドを発現する細胞とを含む場合、これらは同じ細胞であってもよく、別の細胞であってもよい。がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、インターロイキン７及びＣＣＬ１９を発現する免疫応答性細胞と、免疫抑制阻害性ポリペプチドを発現する細胞とが同じ免疫応答性細胞である場合、本開示に係る組み合わせ医薬Ｂは、該免疫応答性細胞を含むことにより、インターロイキン７をコードする核酸及びＣＣＬ１９をコードする核酸を協同して含む１種類又は複数種類の細胞若しくは核酸送達媒体又はそれらの組み合わせ、並びに免疫抑制阻害剤を含むといえる。もちろん、免疫抑制阻害剤は、インターロイキン７をコードする核酸及びＣＣＬ１９をコードする核酸を協同して含む１種類又は複数種類の細胞若しくは核酸送達媒体又はそれらの組み合わせとは独立した成分として、本開示に係る組み合わせ医薬Ｂに含まれていてもよい。言い換えれば、前記１種類又は複数種類の細胞若しくは核酸送達媒体又はそれらの組み合わせにより発現される物質ではなく、別個に加えられた物質として、本開示に係る組み合わせ医薬Ｂに含まれていてもよい。
　上記のとおり、本開示に係る組み合わせ医薬Ｂにおける細胞若しくは核酸送達媒体又はその組み合わせは、免疫応答性細胞、ウイルス、嫌気性菌、リポソーム、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）、及びナノ粒子からなる群から選択される少なくとも１つであってもよく、これらから選ばれる複数を混合して用いてもよい。 
　ここで、免疫応答性細胞は、免疫応答に関与し、含有の対象となる核酸（例えば、インターロイキン７をコードする核酸及び／又はＣＣＬ１９をコードする核酸）を含んで発現できる細胞であれば特に制限されない。送達対象となる核酸は、免疫応答細胞のゲノムに含まれていても、ゲノム外のベクターに担持されていてもよいが、例えば、遺伝子担持の安定性の観点からゲノム中に含まれていてもよい。前記免疫応答性細胞は、生体から採取された免疫応答性細胞であることが好ましく、例えば、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）、Ｂ細胞等のリンパ球系細胞、単球、マクロファージ、樹状細胞等の抗原提示細胞、並びに好中球、好酸球、好塩基球、肥満細胞等の顆粒球が挙げられる。好ましい例としては、ヒト、イヌ、ネコ、ブタ、マウス等の哺乳動物から採取されたＴ細胞、さらに好ましくはヒトから採取されたＴ細胞が挙げられる。なお、生体から採取されたＴ細胞を含む細胞集団を用いる場合、該細胞集団はＴ細胞以外に他の細胞も含んでいてもよいが、細胞数基準で全細胞数のうちの５０％以上、又は６０％以上、又は７０％以上、又は８０％以上、又は９０％以上の割合でＴ細胞を含んでいてもよい。Ｔ細胞等の免疫応答性細胞は、例えば、血液、骨髄液等の体液、脾臓、胸腺、リンパ節等の組織、若しくは原発腫瘍、転移性腫瘍、がん性腹水等のがん組織に浸潤する免疫細胞から、免疫応答性細胞を含む細胞集団を採取して得ることができる。細胞集団に含まれるＴ細胞等の免疫応答性細胞の割合を高めるため、分離した細胞集団を、必要に応じて、定法による単離工程又は精製工程に供してもよい。また、免疫応答性細胞は、ＥＳ細胞又はｉＰＳ細胞から作製された免疫応答性細胞であってもよい。免疫応答性細胞の例としてのＴ細胞の例としては、アルファ・ベータＴ細胞、ガンマ・デルタＴ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、腫瘍浸潤Ｔ細胞、メモリーＴ細胞、ナイーブＴ細胞、及びＮＫＴ細胞が挙げられる。なお、免疫応答性細胞の由来と、組み合わせ医薬の投与対象とは同じ個体であっても異なる個体であってもよいが、同じ個体であることが好ましい。例えば、投与対象がヒトの場合、免疫応答性細胞は、投与対象としての患者本人から採取した自家細胞であっても、他人から採取した他家細胞であってもよい。すなわち、ドナーとレシピエントは一致しても不一致でもよいが、一致することが好ましい。
　核酸送達媒体としてのウイルスは、送達対象となる核酸（例えば、インターロイキン７をコードする核酸及び／又はＣＣＬ１９をコードする核酸）を封入でき、がん細胞に感染しうるウイルスであることが好ましく、腫瘍溶解性ウイルスであることがより好ましい。上記腫瘍溶解性ウイルス（oncolytic virus）とは、正常細胞に感染してもほとんど増殖しないが、がん細胞に感染すると増殖し、がん細胞を死滅（がん細胞傷害）させる能力を有するウイルスを意味し、例えばＭｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｔｈｅｒａｐｙ、第１８巻、第２号、２０１０年２月、２３３～２３４ページに総説されている。腫瘍溶解性ウイルスは、がん細胞に感染してがん細胞を死滅させる能力を有する限り特に限定されないが、その例としては、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、腫瘍溶解性アデノウイルス、腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルス、腫瘍溶解性レオウイルス、腫瘍溶解性麻疹ウイルス、腫瘍溶解性ニューカッスル病ウイルス、腫瘍溶解性牛痘ウイルス、腫瘍溶解性ムンプスウイルス、及び腫瘍溶解性コクサッキーウイルスが挙げられる。
　腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、例えば、Kim MK et al. Science Translational Medicine. 2013 May 15;5(185):185ra63、Heo J, et al.　Nature Medicine, 2013 (3):329-36. doi: 10.1038/nm.3089. Epub 2013 Feb 10.、国際公開第２０１２／０９４３８６号に記載のワクシニアウイルスであるが、これに限定されない。腫瘍溶解性アデノウイルスの例としては、Tedcastle A et al. Mol Ther. 2016;24:796-804, Marino N, Illingworth S, Kodialbail P, Patel A, Calderon H, Lear R, Fisher KD, Champion BR, Brown ACN. PLoS One 2017;12(5):e0177810、Freedman JD, et al. EMBO Mol Med 9:1067-1087 (2017)、Lang FF et al., Journal of Clinical Oncology (2018)、James M. et al. The Journal of Oncology, 188(6):2391-7, 2012、特許第３８６７９６８号公報及び特許第５５７４２８４号公報に記載のアデノウイルスが挙げられるが、これらに限定されない。また、腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルスの例としては、Mazzacurati et al., Mol Ther, 2015 Jan;23(1):99-107、Hirooka Y, et al. BMC Cancer 2018, 18, 596、Nakatake R, et al. Cancer Sci. 2018 Mar, 109(3);600-610.及びAndtbacka RHI, et al. J Clin Oncol. 2015;33:2780-2788に記載の単純ヘルペスウイルスが挙げられるが、これらに限定されない。腫瘍溶解性レオウイルスの例としては、Mahalingam, et al, Cancers 2018, 10, 160に記載のレオウイルスが挙げられるが、これに限定されない。腫瘍溶解性ニューカッスル病ウイルスの例としては、Journal of Virology. 2016 Jun; 90(11):5343-5352.に記載のニューカッスル病ウイルスが挙げられるが、これに限定されない。腫瘍溶解性水泡口内炎ウイルス病ウイルスの例としては、Muik A. et al. Cancer Res; 74(13); 3567-78. に記載の水泡口内炎ウイルス病ウイルスが挙げられるが、これに限定されない。腫瘍溶解性ウイルスは、遺伝子改変により付加されたタンパク質発現機能を有しているものもある。当該付加されたタンパク質発現機能により発現されるタンパク質として、送達対象となる核酸にコードされるポリペプチド（例えば、インターロイキン７及び／又はＣＣＬ１９）を発現させてもよい。 
　「インターロイキン７をコードする核酸及びＣＣＬ１９をコードする核酸を協同して含む１種類又は複数種類の細胞若しくは核酸送達媒体又はそれらの組み合わせ」における細胞としての嫌気性菌は、含有の対象となる核酸（例えば、インターロイキン７をコードする核酸及び／又はＣＣＬ１９をコードする核酸）を含んで発現できる嫌気性菌の細胞であれば特に制限されない。嫌気性菌は、がん細胞に集積する能力を有する嫌気性グラム陽性菌であることが好ましく、その例としては、ビフィズス菌等のビフィドバクテリウム属菌、ラクトバシラス属菌、及びリステリア属菌が挙げられる。なお、嫌気性菌は酸素が少ない環境下で生育しやすいことから、がん細胞に集積しやすいことが知られている。嫌気性菌は、本開示に係る組み合わせ医薬Ｂの投与の対象の体内の細胞に取り込まれることも可能である。
　核酸送達媒体としてのリポソームは、送達対象となる核酸（例えば、インターロイキン７をコードする核酸及び／又はＣＣＬ１９をコードする核酸）を封入でき、リン脂質二重膜から構成される脂質ナノカプセルであれば特に制限されない。かかるリポソームは、市販品であってもよく、常法によって合成されたリポソームであってもよい。リポソームは、がん細胞への集積を向上するために、ＰＥＧ修飾を受ける、あるいはレクチン若しくはタンパク質（例えば抗体）等の標的化プローブ分子を表面に有していてもよい。
　「インターロイキン７をコードする核酸及びＣＣＬ１９をコードする核酸を協同して含む１種類又は複数種類の細胞若しくは核酸送達媒体又はそれらの組み合わせ」における細胞としての間葉系幹細胞（ＭＳＣ）は、含有の対象となる核酸（例えば、インターロイキン７をコードする核酸及び／又はＣＣＬ１９をコードする核酸）を含んで発現できるＭＳＣであれば特に制限されない。ＭＳＣは、がん細胞に集積するＭＳＣであることが好ましい。 
　核酸送達媒体としてのナノ粒子は、送達対象となる核酸（例えば、インターロイキン７をコードする核酸及び／又はＣＣＬ１９をコードする核酸）をがん細胞に送達できる能力を有し、ナノメートルオーダー、好ましくは直径５～８００ｎｍの粒子体であれば特に制限されない。ナノ粒子の例としては、金ナノ粒子等の金属ナノ粒子、及びシリカナノ粒子が挙げられる。かかるナノ粒子は市販品であってもよく、常法によって合成されたナノ粒子であってもよい。ナノ粒子は、例えばEnhanced Permeability and Retention Effect（ＥＰＲ効果）により、がん細胞に到達しうる。ナノ粒子の材質に応じて、核酸はナノ粒子の表面に結合させる、ナノ粒子内に封入する等の形でナノ粒子に含ませることができる。
　本開示に係る組み合わせ医薬Ｂにおいて、それぞれ細胞又は核酸送達媒体に含まれるインターロイキン７をコードする核酸、ＣＣＬ１９をコードする核酸、及び任意に含まれるがん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする核酸は、それぞれプロモーターの下流に作動可能に連結されていることが好ましい。これらの核酸を細胞又は核酸送達媒体に含ませる操作は、常法に従って行えばよい。細胞に核酸を導入する場合には、例えば、エレクトロポレーション法（例えばCytotechnology,3,133(1990)参照）、リン酸カルシウム法（例えば特開平２－２２７０７５号公報参照）、リポフェクション法（例えばProc.Natl.Acad.Sci.U．S.A.,84,7413(1987)参照）、及びウイルス感染法から選択される方法を用いて導入を行うことができる。ウイルス感染法は、導入する核酸を含むベクターと、パッケージングプラスミドとを、ＧＰ２－２９３細胞（タカラバイオ社製）、Ｐｌａｔ－ＧＰ細胞（コスモ・バイオ社製）、ＰＧ１３細胞（ATCC CRL-10686）、又はＰＡ３１７細胞（ATCC CRL-9078）といったパッケージング細胞にトランスフェクションして組換えウイルスを作製し、かかる組換えウイルスをＴ細胞に感染させる方法（例えば国際公開第２０１７／１５９７３６号参照）であってもよい。
　あるいは、導入対象となる核酸は、公知の遺伝子編集技術を用いて、適切なプロモーターの制御下で発現可能なように、細胞のゲノムに組み込まれてもよい。公知の遺伝子編集術の例としては、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、ＴＡＬＥＮ（転写活性化様エフェクターヌクレアーゼ）、ＣＲＩＳＰＲ（Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeat）－Ｃａｓシステム等のエンドヌクレアーゼを用いる技術が挙げられる。
　含有対象となる核酸が細胞に含まれる場合、当該核酸は細胞のゲノムに組み込まれていても、細胞内のベクターに担持されていてもよい。含有対象となる核酸が２つ以上、同じ細胞に含まれている場合には、それらは隣接して細胞のゲノムに組み込まれていてもよいし、別個に細胞のゲノムに組み込まれていてもよいし、同じベクター中に含まれていてもよいし、別個のベクター中に別々に含まれていてもよい。また、含有対象となる核酸のうちいくつかがゲノムに含まれ、残りがベクターに含まれていてもよい。
　含有対象となる核酸が核酸送達媒体に含まれる場合、当該核酸は単独で含まれていても、ベクターに担持されていてもよい。含有対象となる核酸が２つ以上、同じ核酸送達媒体に含まれている場合には、それらは同じベクター中に含まれていてもよいし、別個のベクター中に別々に含まれていてもよいし、同じウイルス中に含まれていてもよいし、別個のウイルス中に含まれていてもよい。また、別々の核酸は、同じ核酸送達媒体に含まれていても、別々の核酸送達媒体に含まれていてもよい。
　ベクターは直鎖状でも環状でもよく、プラスミド等の非ウイルスベクターでも、ウイルスベクターでも、トランスポゾンによるベクターでもよい。ベクターは、プロモーター、ターミネーター等の制御配列、薬剤耐性遺伝子、レポーター遺伝子等の選択マーカー配列のうち１つ以上を含有していてもよい。ベクターに含まれるプロモーターを利用して、ベクターに含まれる遺伝子の発現を行わせるようにしてもよい。
　本開示に係る組み合わせ医薬Ｂは、ＩＬ－７及びＣＣＬ１９、並びに免疫抑制阻害剤からなる因子の組み合わせによる相乗的な効果により、驚くべきほどに向上したがん治療効果を奏する。該効果は、本開示に係る組み合わせ医薬Ｂが、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする核酸を含む細胞又は核酸送達媒体を含む場合により顕著であり、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする核酸を含む免疫応答性細胞を含む場合にさらに顕著である。
　本開示に係る組み合わせ医薬Ｂにおいて、インターロイキン７をコードする核酸及びＣＣＬ１９をコードする核酸を協同して含む１種類又は複数種類の細胞若しくは核酸送達媒体又はそれらの組み合わせを含む投与用組成物（以下、第３の投与用組成物とも称する）は、さらに薬学的に許容される添加剤を含有していてもよく、前記添加剤としては、生理食塩水、緩衝生理食塩水、細胞培養培地、デキストロース、注射用水、グリセロール、エタノール及びこれらの組合せ、安定剤、可溶化剤及び界面活性剤、緩衝剤及び防腐剤、等張化剤、充填剤、並びに潤滑剤を挙げることができる。
　本開示に係る組み合わせ医薬Ａにおける投与組成物についての説明は、第１の投与用組成物を第３の投与用組成物に読み替えて、本開示に係る組み合わせ医薬Ｂの投与のための投与組成物に適用することができる。例えば、第２の投与用組成物は、第３の投与用組成物と同一の組成物であってもよく、この場合は１つの投与用組成物が前記１種類又は複数種類の細胞若しくは核酸送達媒体又はそれらの組み合わせと、免疫抑制阻害剤の両方を含むことになる。この場合は、インターロイキン７をコードする核酸及びＣＣＬ１９をコードする核酸を協同して含む１種類又は複数種類の細胞若しくは核酸送達媒体又はそれらの組み合わせと、免疫抑制阻害剤の両方を含む医薬組成物（合剤）が提供される。
　第２の投与用組成物が第３の投与用組成物と別個の組成物である場合は、第３の投与用組成物と第２の投与用組成物は一緒に投与してもよいし、別々のタイミング（時点）で投与してもよい。
　このため、前記細胞若しくは核酸送達媒体又はそれらの組み合わせと、前記免疫抑制阻害剤とは、異なる時点で別々に投与されてもよい。
　ただし、本開示に係る組み合わせ医薬Ａにおける投与組成物についての説明における本開示に係る免疫応答性細胞Ａの量の記載は、前記１種類又は複数種類の細胞若しくは核酸送達媒体又はそれらの組み合わせが細胞を含む場合における第３の投与用組成物中における細胞量の記載に読み替えて、本開示に係る組み合わせ医薬Ｂにおける投与組成物の説明に適用するものとする。
　その他、本開示に係る組み合わせ医薬Ａについての説明は、本開示に係る組み合わせ医薬Ａを本開示に係る組み合わせ医薬Ｂと読み替え、本開示に係る免疫応答性細胞Ａ及び「がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、ＩＬ－７及びＣＣＬ１９を発現する免疫応答性細胞」を、インターロイキン７をコードする核酸及びＣＣＬ１９をコードする核酸を協同して含む１種類又は複数種類の細胞若しくは核酸送達媒体又はそれらの組み合わせに読み替えて、特に矛盾の無い限り、本開示に係る組み合わせ医薬Ｂに適用できる。これには、治療対象の生物種、個体、疾患の種類、用量、投与スケジュール等、組み合わせ医薬の使用形態についての説明も含まれる。
　前記１種類又は複数種類の細胞若しくは核酸送達媒体又はそれらの組み合わせが核酸送達媒体を含む場合における第３の投与用組成物中における核酸送達媒体の量は、がんの種類、位置、重症度、治療を受ける対象の年齢、体重及び状態等に応じて適宜調整できるが、送達すべき核酸を治療有効量送達するのに適切な量とすればよい。
　本開示に係る組み合わせ医薬Ａを用いたがんの治療についての説明は、本開示に係る組み合わせ医薬Ａを本開示に係る組み合わせ医薬Ｂと読み替え、本開示に係る免疫応答性細胞Ａ及びがん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、ＩＬ－７及びＣＣＬ１９を発現する免疫応答性細胞を、インターロイキン７をコードする核酸及びＣＣＬ１９をコードする核酸を協同して含む１種類又は複数種類の細胞若しくは核酸送達媒体又はそれらの組み合わせに読み替えて、本開示に係る組み合わせ医薬Ｂを用いたがんの治療に適用できる。例えば、本開示に係る一態様によれば、
　（ａ）インターロイキン７をコードする核酸及びＣＣＬ１９をコードする核酸を協同して含む１種類又は複数種類の細胞若しくは核酸送達媒体又はそれらの組み合わせ、並びに
　（ｂ）免疫抑制阻害剤
　を組み合わせて対象に投与することを含む、対象におけるがんを治療する方法（以下、本開示に係るがんの治療方法Ｂとも称する）が提供される。
　同様に、本開示によれば、がんを治療するための医薬の製造における、（ａ）インターロイキン７をコードする核酸及びＣＣＬ１９をコードする核酸を協同して含む１種類又は複数種類の細胞若しくは核酸送達媒体又はそれらの組み合わせ、並びに（ｂ）免疫抑制阻害剤の使用が提供される。また、免疫抑制阻害剤と併用されて対象におけるがんを治療するために用いられる、インターロイキン７をコードする核酸及びＣＣＬ１９をコードする核酸を協同して含む１種類又は複数種類の細胞若しくは核酸送達媒体又はそれらの組み合わせを含む医薬も提供される。さらに、免疫抑制阻害剤と併用されて対象におけるがんを治療するために用いられる、インターロイキン７をコードする核酸及びＣＣＬ１９をコードする核酸を協同して含む１種類又は複数種類の細胞若しくは核酸送達媒体又はそれらの組み合わせも提供される。インターロイキン７をコードする核酸及びＣＣＬ１９をコードする核酸を協同して含む１種類又は複数種類の細胞若しくは核酸送達媒体又はそれらの組み合わせと、免疫抑制阻害剤とは、一緒に投与されても、異なる時点で別々に投与されてもよい。
　さらに、本開示によれば、インターロイキン７をコードする核酸及びＣＣＬ１９をコードする核酸を協同して含む１種類又は複数種類の細胞若しくは核酸送達媒体又はそれらの組み合わせと併用されて対象におけるがんを治療するために用いられる、免疫抑制阻害剤を含む医薬も提供される。さらに、インターロイキン７をコードする核酸及びＣＣＬ１９をコードする核酸を協同して含む１種類又は複数種類の細胞若しくは核酸送達媒体又はそれらの組み合わせと併用されて対象におけるがんを治療するために用いられる、免疫抑制阻害剤も提供される。
　本開示によれば、免疫抑制阻害剤と併用されることが表示された容器に収容され、かつ、インターロイキン７をコードする核酸及びＣＣＬ１９をコードする核酸を協同して含む１種類又は複数種類の細胞若しくは核酸送達媒体又はそれらの組み合わせを含む医薬も提供される。容器、表示等の詳細は、上述のとおりである。加えて、免疫抑制阻害剤と併用されることが記載された添付文書と、インターロイキン７をコードする核酸及びＣＣＬ１９をコードする核酸を協同して含む１種類又は複数種類の細胞若しくは核酸送達媒体又はそれらの組み合わせを含む医薬を収容した容器と、を含む製品も提供される。容器、添付文書等の詳細は、上述のとおりである。
　以上説明したとおり、本開示に係る一態様によれば、インターロイキン７をコードする核酸及びＣＣＬ１９をコードする核酸を協同して含む１種類又は複数種類の細胞若しくは核酸送達媒体又はそれらの組み合わせ、並びに免疫抑制阻害剤の組み合わせによる相乗的な効果により、驚くべきほどに向上したがん治療効果を得ることができる。
　本開示に係るさらなる態様によれば、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、インターロイキン７、ＣＣＬ１９、及び免疫抑制阻害性ポリペプチドを発現する免疫応答性細胞（以下、本開示に係る免疫応答性細胞Ｃとも称する）が提供される。
　ここで、本開示に係る免疫応答性細胞Ｃにおける、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、インターロイキン７、ＣＣＬ１９、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする核酸、インターロイキン７をコードする核酸、ＣＣＬ１９をコードする核酸、及び免疫抑制阻害剤の定義、例、アミノ酸配列、塩基配列、好ましい実施形態等の詳細は、本開示に係る免疫応答性細胞Ａ及び本開示に係る組み合わせ医薬Ａにおける、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、インターロイキン７、ＣＣＬ１９、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする核酸、インターロイキン７をコードする遺伝子、ＣＣＬ１９をコードする遺伝子、及び免疫抑制阻害剤の定義、例、アミノ酸配列、塩基配列、好ましい実施形態等の詳細と、それぞれ同様である。
　本開示に係る免疫応答性細胞Ｃは、本開示に係る免疫応答性細胞Ａがさらに免疫抑制阻害性ポリペプチドを発現している細胞であると考えることができる。したがって、免疫応答性細胞Ａの説明において既に説明済みの事項（がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、インターロイキン７、及びＣＣＬ１９についての説明等）については、免疫応答性細胞Ａの説明におけるそれらの記載と同様であるので、説明を省略する。
　免疫抑制阻害性ポリペプチドとは、本開示に係る組み合わせ医薬Ａにおける免疫抑制阻害剤の範疇に入る物質のうち、ポリペプチドに該当するものを指す。免疫抑制阻害性ポリペプチドは、免疫応答性細胞活性化の抑制を解除又は低減する。
　免疫抑制阻害性ポリペプチドの例としては、免疫チェックポイント阻害性ポリペプチド、Ｔｒｅｇ、骨髄由来免疫抑制細胞（ＭＤＳＣ）等の免疫抑制性細胞の浸潤、生存、又は機能を阻害するポリペプチド、ＣＣＲ４阻害性ポリペプチド、インドールアミン２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害性ポリペプチド、プロスタグランジンＥ２［ＰＧＥ２］抑制性ポリペプチド、細胞傷害性抗がん性ポリペプチドが挙げられる。免疫抑制阻害性ポリペプチドは、これらの機能を有する限り、抗体であってもよく、例えばＩｇＧモノクローナル抗体又は抗体断片であってもよい。
　免疫チェックポイント阻害性ポリペプチドは、典型的にはＴ細胞の表面に発現する免疫チェックポイント分子を介した免疫抑制機構を解除又は軽減させるポリペプチドである。免疫チェックポイント阻害性ポリペプチドは、例えば、免疫チェックポイント分子（例えばＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４、ＢＴＬＡ、ＴＩＭ－３、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ－３等）又は免疫チェックポイント分子のリガンド（例えばＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＤ８０／ＣＤ８６、Ｓｉｇｌｅｃ－１５等）に結合して、リガンドにより免疫チェックポイント分子からのシグナル伝達が開始されることを阻害することで、免疫応答に対する抑制反応を減少させることができる。
　免疫チェックポイント阻害性ポリペプチドの例としては、ＰＤ－１阻害性ポリペプチド、ＰＤ－Ｌ１阻害性ポリペプチド、ＣＴＬＡ－４阻害性ポリペプチド、ＣＤ４７阻害性ポリペプチド、ＳＩＲＰα阻害性ポリペプチド、ＢＴＬＡ阻害性ポリペプチド、ＴＩＭ－３阻害性ポリペプチド、ＴＩＧＩＴ阻害性ポリペプチド、ＬＡＧ－３阻害性ポリペプチド、Ｓｉｇｌｅｃ－１５阻害性ポリペプチド、ガレクチン－９阻害性ポリペプチド等が挙げられる。ＣＣＲ４阻害性ポリペプチドの例としては、抗ＣＣＲ４抗体（例えばモガムリズマブ）等が挙げられる。
　免疫抑制阻害性ポリペプチドは、ＰＤ－１阻害性ポリペプチド、ＰＤ－Ｌ１阻害性ポリペプチド、ＰＤ－Ｌ２阻害性ポリペプチド、ＣＴＬＡ－４阻害性ポリペプチド、ＢＴＬＡ（B- and T-lymphocyte attenuator）阻害性ポリペプチド、ＴＩＭ－３（T-cell immunoglobulin and mucin domain 3）阻害性ポリペプチド、ＴＩＧＩＴ（T-cell immunoreceptor with Ig and ITIM domains）阻害性ポリペプチド、ＬＡＧ－３（Lymphocyte Activation Gene-3）阻害性ポリペプチド、及びＳｉｇｌｅｃ－１５阻害性ポリペプチドからなる群から選択される１種以上を含んでいてもよい。
　免疫抑制阻害性ポリペプチドは、免疫チェックポイント阻害性ポリペプチドであってもよく、より具体的にはＰＤ－１阻害性ポリペプチド又はＰＤ－Ｌ１阻害性ポリペプチドであってもよく、さらに具体的にはＰＤ－１に対する抗体又はＰＤ－Ｌ１に対する抗体であってもよい。ＰＤ－１に対する抗体の例としては、Nivolumab（ニボルマブ）、Pembrolizumab（ペムブロリズマブ）、Toripalimab（トリパリマブ）、Cemiplimab-rwlc（セミプリマブ）、Sintilimab（シンチリマブ）等が挙げられる。ＰＤ－Ｌ１に対する抗体の例としては、Atezolizumab（アテゾリズマブ）、Durvalumab（デュルバルマブ）、Avelumab （アベルマブ）等が挙げられる。ＣＴＬＡ－４に対する抗体の例としては、Ipilimumab（イピリムマブ）等が挙げられる。他にＣＤ４７、ＳＩＲＰαに対する抗体等も挙げられる。
　抗体は、所定の抗原結合性を有していればＩｇＧモノクローナルであっても、Ｆａｂ断片であっても、ｓｃＦｖであっても、それ以外の抗体又は抗体断片であってもよい。免疫抑制阻害性ポリペプチドとしての抗ＰＤ－１ｓｃＦｖの例としては、配列番号１６におけるＮ末端から数えて５９２～８３５位のアミノ酸配列が挙げられ、それをコードする核酸配列の例としては、配列番号１５における５’末端から数えて１７１７番目の残基～２５０５番目の残基の核酸配列が挙げられる。
　目的の標的に対する一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）は、公知の手法により作製することもできる。例えば、マウス等に抗原を接種してからリンパ組織を採取して、抗体遺伝子のライブラリーを作製し、抗体ダイレクトクローニングによりがん抗原を認識する抗体をコードする塩基配列を得て、それを基に一本鎖抗体を設計してもよい。あるいは、採取したリンパ組織を用いてハイブリドーマを作製し、がん抗原を認識する抗体をコードするハイブリドーマを同定してモノクローナル抗体を得て、その配列情報を基に一本鎖抗体を設計してもよい。あるいは、健常人のＢ細胞から作製したナイーブ抗体ライブラリー、がん抗原に対して高い中和活性を示す抗血清をもつがん罹患者由来のＢ細胞から作製した抗体ライブラリー等を基にして一本鎖抗体のライブラリーを作製し、これをファージディスプレイにより提示させてがん抗原を認識する一本鎖抗体を選抜してもよい。
　本開示に係る免疫応答性細胞Ｃは、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、ＩＬ－７、ＣＣＬ１９、及び免疫抑制阻害性ポリペプチドを発現する。ここで、「がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、ＩＬ－７、ＣＣＬ１９、及び免疫抑制阻害性ポリペプチドを発現する」とは、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、ＩＬ－７、ＣＣＬ１９、及び免疫抑制阻害性ポリペプチドが免疫応答性細胞により産生され、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子の少なくとも一部が細胞表面（細胞外側の細胞表面）に位置し、ＩＬ－７、ＣＣＬ１９、及び免疫抑制阻害性ポリペプチドが細胞外に分泌されることを指す。
　がん細胞は免疫応答性細胞ががん細胞を攻撃したり、がん細胞を攻撃する指示を発したりすることを抑制する免疫抑制機構を有しているため、がん罹患者自身の免疫によるがん細胞への攻撃が抑制されている。本開示に係る免疫応答性細胞Ｃが発現する免疫抑制阻害性ポリペプチドは、がん細胞による免疫抑制機構を阻害することで、がん罹患者の免疫系ががん細胞を攻撃することをより容易にすると考えられる。
　これらに加えて、本開示に係る免疫応答性細胞ＣがＩＬ－７及びＣＣＬ１９も発現していることにより、本開示に係る免疫応答性細胞Ｃだけではなく、がん罹患者の内因性の免疫応答性細胞もがん細胞の周囲に集積するため、がん細胞をより効果的に攻撃することが可能になると考えられる。
　本開示に係る免疫応答性細胞Ｃは、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、インターロイキン７、ＣＣＬ１９、及び免疫抑制阻害性ポリペプチドを発現することによって、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子を発現する免疫応答性細胞、分泌されたＩＬ－７、ＣＣＬ１９、及び免疫抑制阻害性ポリペプチドからなる因子の組み合わせによる相乗的な効果を発揮し、このために大きく改善したがん治療効果を奏すると考えられる。この相乗的な効果は、それぞれの因子の個別の効果からは予測することができないほど優れた効果である。
　例えば、後述の実施例に示されるとおり、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、インターロイキン７、及びＣＣＬ１９を発現するが免疫抑制阻害性ポリペプチドを発現しない免疫応答性細胞を用いた場合、及びがん抗原を特異的に認識する細胞表面分子及び免疫抑制阻害性ポリペプチドを発現するが、インターロイキン７及びＣＣＬ１９を発現しない免疫応答性細胞を用いた場合には治療困難ながん治療の場合でも、本開示に係る免疫応答性細胞Ｃを用いれば治療可能となりうる。また、このような高い治療効果により、細胞の投与量を減らした場合でも治療効果を得ることが可能となり、自家細胞を使用する場合において十分な数の免疫応答性細胞を採取できない場合でも、治療効果を得ることが可能になる。このような効果は、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、インターロイキン７、及びＣＣＬ１９の共発現、あるいは、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子及び免疫抑制阻害性ポリペプチドの共発現からは予測できない効果である。
　本開示に係る免疫応答性細胞Ｃは、例えば、生体から採取した免疫応答性細胞、又はｉＰＳ細胞、ＥＳ細胞等の多能性幹細胞若しくは造血幹細胞などの体性幹細胞から誘導した免疫応答性細胞等に、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする核酸、ＩＬ－７をコードする核酸、ＣＣＬ１９をコードする核酸、及び免疫抑制阻害性ポリペプチドをコードする核酸を導入することで得ることができる。あるいは、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子（例えばがん抗原を特異的に認識するＴＣＲ）を内在的に発現している免疫応答性細胞を生体から採取して、ＩＬ－７をコードする核酸、ＣＣＬ１９をコードする核酸、及び免疫抑制阻害性ポリペプチドをコードする核酸を導入することでも得ることができる。
　生体から採取した免疫応答性細胞に核酸導入する場合、本開示に係る免疫応答性細胞Ｃを含む医薬により治療されるがん罹患者自身の（つまり自家の）免疫応答性細胞を採取すれば、拒絶反応を最小化できる。ただし、他家の免疫応答性細胞を使用することを排除するものではない。つまり、本開示に係る免疫応答性細胞Ｃは、対象自身に由来する免疫応答性細胞であっても、なくてもよい。
　がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする核酸、ＩＬ－７をコードする核酸、ＣＣＬ１９をコードする核酸、及び免疫抑制阻害性ポリペプチドをコードする核酸は、それぞれ、本開示に係る免疫応答性細胞Ｃのゲノム中に存在していても、ゲノム外のベクターに担持されていてもよく、例えば、核酸担持の安定性の観点からゲノム中に存在させてもよい。また、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする核酸、ＩＬ－７をコードする核酸、ＣＣＬ１９をコードする核酸、及び免疫抑制阻害性ポリペプチドをコードする核酸は、ゲノム中にまとまって（例えば連結して）存在していてもよく、ばらばらに（分離して）存在していてもよく、あるいはこれらのうち一部のもののみがまとまって（例えば連結して）存在し、他のものはばらばらに（分離して）存在していてもよい。がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子が、例えばαβの二量体又はγδの二量体からなるＴＣＲである場合のようにヘテロ二量体又はヘテロ多量体である場合、ヘテロ二量体又はヘテロ多量体を構成するそれぞれの分子をコードする核酸はゲノム中にまとまって存在していてもよく、ばらばらに（分離して）存在していてもよい。
　一実施形態においては、ＩＬ－７をコードする核酸、ＣＣＬ１９をコードする核酸、及び免疫抑制阻害性ポリペプチドをコードする核酸のうち少なくとも１つは外来性であり、全てが外来性であってもよい。また、ＩＬ－７をコードする核酸、ＣＣＬ１９をコードする核酸、及び免疫抑制阻害性ポリペプチドをコードする核酸は、それぞれ独立に、ゲノムに組み込まれていても、ベクターに組み込まれていてもよい。ある実施形態では、ＩＬ－７をコードする核酸、ＣＣＬ１９をコードする核酸、及び免疫抑制阻害性ポリペプチドをコードする核酸の全てが、本開示に係る免疫応答性細胞Ｃのゲノムに組み込まれているか、又は前記免疫応答性細胞Ｃ中に存在する１個又は複数個のベクターに一緒に若しくは別個に組み込まれている。別の実施形態では、ＩＬ－７をコードする核酸、ＣＣＬ１９をコードする核酸、及び免疫抑制阻害性ポリペプチドをコードする核酸のうち一部は本開示に係る免疫応答性細胞Ｃのゲノムに組み込まれているが、残りは前記免疫応答性細胞Ｃ中に存在する１個又は複数個のベクターに組み込まれている。
　ある実施形態においては、免疫抑制阻害性ポリペプチドをコードする核酸は前記免疫応答性細胞のゲノムに組み込まれているか、又は、免疫応答性細胞中に存在する、ＩＬ－７をコードする核酸及びＣＣＬ１９をコードする核酸を協同して含む１個又は複数個のベクターのうちいずれかと同じであっても異なっていてもよいベクターに組み込まれている。
　なお、細胞中に各核酸が存在しているかどうかは、ＰＣＲ等公知の手法を用いて容易に確認することができる。
　免疫抑制阻害性ポリペプチドのアミノ酸配列及び免疫抑制阻害性ポリペプチドをコードする塩基配列の情報は、公知の文献やＮＣＢＩ（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/guide/）などのデータベースを検索して適宜入手することができる。
　免疫応答性細胞ががん抗原を特異的に認識する細胞表面分子を内在的に発現している場合、例えば所定のがん抗原を特異的に認識するＴＣＲを発現しているＴ細胞を単離する場合には、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする核酸を外部から導入する必要は無いが、これ以外の場合は、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする核酸、ＩＬ－７をコードする核酸、ＣＣＬ１９をコードする核酸、及び免疫抑制阻害性ポリペプチドのうちの１種以上を外部から導入する。
　免疫応答性細胞に導入するためのがん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする核酸、ＩＬ－７をコードする核酸、ＣＣＬ１９をコードする核酸、及び免疫抑制阻害性ポリペプチドをコードする核酸は、それぞれ、当該分子をコードする塩基配列の情報に基づき、化学合成する方法や、ＰＣＲによって増幅する方法等の公知の技術によって作製することができる。なお、コーディング領域におけるコドンは、遺伝子を含む核酸が導入される対象となる免疫応答性細胞における当該遺伝子の発現を最適化するために改変されてもよい。
　導入の対象となる核酸群の導入は、１つ又は複数の核酸送達媒体に核酸群を含ませて行うことができる。この場合の核酸送達媒体の例としては、前述のウイルス、リポソーム及びナノ粒子が挙げられる。リポソーム及びナノ粒子は、核酸をベクターに含ませた状態で含んでいてもよい。このように、本開示によれば、インターロイキン７をコードする核酸、ＣＣＬ１９をコードする核酸、及び免疫抑制阻害性ポリペプチドをコードする核酸を協同して含む１種類又は複数種類の核酸送達媒体も提供される。免疫応答性細胞ががん抗原を特異的に認識する細胞表面分子を内在的に発現していない場合などは、前記核酸送達媒体は、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする核酸をさらに含んでいてもよい。
　以下の説明では核酸群を含むベクターについて説明するが、核酸送達媒体の場合についても、矛盾が無い限り、同様の説明が当てはまる。あるいは、核酸送達媒体は以下に説明するようなベクターを含んでいてもよい。
　導入の対象となる核酸は、それぞれ別々のベクターに担持された状態で導入されても、２種以上の核酸を同じベクターに担持した状態で導入してもよい。例えば、ＩＬ－７をコードする核酸、ＣＣＬ１９をコードする核酸、及び免疫抑制阻害性ポリペプチドをコードする核酸を免疫応答性細胞に導入する場合、ＩＬ－７をコードする核酸とＣＣＬ１９をコードする核酸とは別々のベクターで導入してもよいし、同じベクターに両核酸を担持させて導入してもよい。ＣＣＬ１９をコードする核酸と免疫抑制阻害性ポリペプチドをコードする核酸とは別々のベクターで導入してもよいし、同じベクターに両核酸を担持させて導入してもよい。ＩＬ－７をコードする核酸と免疫抑制阻害性ポリペプチドをコードする核酸とは別々のベクターで導入してもよいし、同じベクターに両核酸を担持させて導入してもよい。がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする核酸も導入する場合についての以下に記載の説明も、「がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする核酸」を除くこと以外は同様に、ＩＬ－７をコードする核酸、ＣＣＬ１９をコードする核酸、及び免疫抑制阻害性ポリペプチドをコードする核酸を導入する場合（言い換えれば、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする核酸の導入が必要無い場合）に適用できる。
　がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする核酸、ＩＬ－７をコードする核酸、ＣＣＬ１９をコードする核酸、及び免疫抑制阻害性ポリペプチドをコードする核酸を免疫応答性細胞に導入する場合、
　（ｉ）がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする核酸、ＩＬ－７をコードする核酸、ＣＣＬ１９をコードする核酸、及び免疫抑制阻害性ポリペプチドをコードする核酸を、それぞれ別個のベクターに担持させて導入してもよいし、
　（ｉｉ）がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする核酸及びＩＬ－７をコードする核酸を同じベクターに担持させ、ＣＣＬ１９をコードする核酸を別個のベクターに担持させ、免疫抑制阻害性ポリペプチドをコードする核酸を別個のさらなるベクターに担持させて導入してもよいし、
　（ｉｉｉ）がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする核酸及びＣＣＬ１９をコードする核酸を同じベクターに担持させ、ＩＬ－７をコードする核酸を別個のベクターに担持させ、免疫抑制阻害性ポリペプチドをコードする核酸を別個のさらなるベクターに担持させて導入してもよいし、
　（ｉｖ）がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする核酸及び免疫抑制阻害性ポリペプチドをコードする核酸を同じベクターに担持させ、ＩＬ－７をコードする核酸を別個のベクターに担持させ、ＣＣＬ１９をコードする核酸を別個のさらなるベクターに担持させて導入してもよいし、
　（ｖ）ＩＬ－７をコードする核酸及びＣＣＬ１９をコードする核酸を同じベクターに担持させ、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする核酸を別個のベクターに担持させ、免疫抑制阻害性ポリペプチドをコードする核酸を別個のさらなるベクターに担持させて導入してもよいし、
　（ｖｉ）ＩＬ－７をコードする核酸及び免疫抑制阻害性ポリペプチドをコードする核酸を同じベクターに担持させ、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする核酸を別個のベクターに担持させ、ＣＣＬ１９をコードする核酸を別個のさらなるベクターに担持させて導入してもよいし、
　（ｖｉｉ）ＣＣＬ１９をコードする核酸及び免疫抑制阻害性ポリペプチドをコードする核酸を同じベクターに担持させ、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする核酸を別個のベクターに担持させ、ＩＬ－７をコードする核酸を別個のさらなるベクターに担持させて導入してもよいし、
　（ｖｉｉｉ）がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする核酸及びＩＬ－７をコードする核酸を同じベクターに担持させ、ＣＣＬ１９をコードする核酸及び免疫抑制阻害性ポリペプチドをコードする核酸を別個のベクターに一緒に担持させて導入してもよいし、
　（ｉｘ）がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする核酸及びＣＣＬ１９をコードする核酸を同じベクターに担持させ、ＩＬ－７をコードする核酸及び免疫抑制阻害性ポリペプチドをコードする核酸を別個のベクターに一緒に担持させて導入してもよいし、
　（ｘ）がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする核酸及び免疫抑制阻害性ポリペプチドをコードする核酸を同じベクターに担持させ、ＩＬ－７をコードする核酸及びＣＣＬ１９をコードする核酸を別個のベクターに一緒に担持させて導入してもよいし、
　（ｘｉ）がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする核酸、ＩＬ－７をコードする核酸、及びＣＣＬ１９をコードする核酸を同じベクターに担持させ、免疫抑制阻害性ポリペプチドをコードする核酸を別個のベクターに担持させて導入してもよいし、
　（ｘｉｉ）がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする核酸、ＩＬ－７をコードする核酸、及び免疫抑制阻害性ポリペプチドをコードする核酸を同じベクターに担持させ、ＣＣＬ１９をコードする核酸を別個のベクターに担持させて導入してもよいし、
　（ｘｉｉｉ）がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする核酸、ＣＣＬ１９をコードする核酸、及び免疫抑制阻害性ポリペプチドをコードする核酸を同じベクターに担持させ、ＩＬ－７をコードする核酸を別個のベクターに担持させて導入してもよいし、
　（ｘｉｖ）ＩＬ－７をコードする核酸、ＣＣＬ１９をコードする核酸、及び免疫抑制阻害性ポリペプチドをコードする核酸を同じベクターに担持させ、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする核酸を別個のベクターに担持させて導入してもよいし、
　（ｘｖ）がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする核酸、ＩＬ－７をコードする核酸、ＣＣＬ１９をコードする核酸、及び免疫抑制阻害性ポリペプチドをコードする核酸を、同じベクターに担持させて導入してもよい。
　導入効率を考慮して、２種以上の核酸を同じベクターに担持した状態で導入させてもよい。この場合は、当該２種以上の核酸は、免疫応答性細胞中でまとまって存在することになる。
　例えば、以下のベクター又はベクター群を使用することができる。
　（ｆ）がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする核酸、ＩＬ－７をコードする核酸、ＣＣＬ１９をコードする核酸、及び免疫抑制阻害性ポリペプチドをコードする核酸を含有するベクター（上記（ｘｖ）の場合に相当）
　（ｇ）以下のベクター（ｇ－１）及びベクター（ｇ－２）からなるベクター群（上記ｘｉｖの場合に相当）。
　　（ｇ－１）がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする核酸を含有するベクター
　　（ｇ－２）ＩＬ－７をコードする核酸、ＣＣＬ１９をコードする核酸、免疫抑制阻害性ポリペプチドをコードする核酸を含有するベクター
　その他の場合についても、同様に適切なベクター群を設計することができる。
　ベクター群は、核酸が冗長（ｒｅｄｕｎｄａｎｔ）に含まれるように設計してもよい。つまり、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする核酸、ＩＬ－７をコードする核酸、ＣＣＬ１９をコードする核酸、免疫抑制阻害性ポリペプチドをコードする核酸のうちの特定の一つの核酸が、ベクター群に属するベクターのうちの２つ以上に含まれていてもよい。
　上記のベクターのうち任意のベクターに、又は上記のベクターとは別個のベクターに、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１４、ＩＬ－１５、ＩＬ－１６、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－２３、ＩＬ－２７、ＩＰ－１０、ＣＣＬ１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１４、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２３、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２６、ＣＣＬ２７、ＣＣＬ２８、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ４、ＣＸＣＬ４Ｌ１、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ７、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＣＸＣＬ１６、ＣＸＣＬ１７、ＣＸ３ＣＬ１、ＸＣＬ１、ＸＣＬ２、ＣＣＬ３Ｌ１、ＣＣＬ３Ｌ３、ＣＣＬ４Ｌ１、ＣＣＬ４Ｌ２、Ｆｌｔ３Ｌ、Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ－ｇａｍｍａ、ＭＩＰ－１ａｌｐｈａ、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｍ－ＣＳＦ、ＴＧＦ－ｂｅｔａ、ＴＮＦ－ａｌｐｈａ等の１種以上の他の免疫機能制御因子をコードする核酸をさらに含有させて、免疫応答性細胞に導入してもよい。
　核酸を担持するベクターを免疫応答性細胞に導入する方法としては特に制限されないが、ウイルス感染法、トランスポゾン法、カルシウムリン酸法、リポフェクション法、マイクロインジェクション法、エレクトロポレーション法等の公知の方法が挙げられる。外来核酸のゲノムへの導入が可能なウイルス感染法により導入する方法は核酸担持の安定性をもたらしうる。
　ウイルス感染法としては、ベクターとパッケージングプラスミドをＧＰ２－２９３細胞（タカラバイオ社製）、Ｐｌａｔ－ＧＰ細胞（コスモ・バイオ社製）、ＰＧ１３細胞（ATCC CRL-10686）、ＰＡ３１７細胞（ATCC CRL-9078）等のパッケージング細胞にトランスフェクションして組換えウイルスを作製し、かかる組換えウイルスを免疫応答性細胞に感染させる方法を挙げることができ、Retrovirus packaging Kit Eco（タカラバイオ社製）等の市販のキットを用いて行ってもよい。ＭＳＣＶレトロウイルス発現システム等を用いれば、外来核酸のゲノムへの導入が可能である。
　また、ＩＬ－７をコードする核酸、ＣＣＬ１９をコードする核酸、免疫抑制阻害性ポリペプチドをコードする核酸、及び必要ならがん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする核酸のゲノムへの組込みは、公知の遺伝子編集技術を用いて行うこともできる。公知の遺伝子編集技術としては、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、ＴＡＬＥＮ（転写活性化様エフェクターヌクレアーゼ）、ＣＲＩＳＰＲ（Ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ Ｒｅｇｕｌａｒｌｙ Ｉｎｔｅｒｓｐａｃｅｄ Ｓｈｏｒｔ Ｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃ Ｒｅｐｅａｔ）－Ｃａｓシステム等のエンドヌクレアーゼを用いる技術が挙げられる。所望により導入される他の外来タンパク質をコードする核酸のゲノムへの組込みも、同様の手法により行うことができる。
　また、これらの核酸（遺伝子）を免疫応答性細胞のゲノムに組み込む場合には、当該遺伝子を制御する上流プロモーターと共にゲノムの非コード領域等に作動可能に（即ち、当該プロモーターの制御下で発現可能なように）組み込んでもよいし、プロモーター無しに、ゲノム中に既に存在しているプロモーターの下流に作動可能に組み込んでもよい。ゲノム中に既に存在しているプロモーターとしては、ＴＣＲα、ＴＣＲβのプロモーター等が挙げられる。
　がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする核酸、ＩＬ－７をコードする核酸、ＣＣＬ１９をコードする核酸、免疫抑制阻害性ポリペプチドをコードする核酸、及び所望により導入された追加の外来タンパク質をコードする核酸のうち２種以上の核酸が近接して存在する場合には、それら２種以上の核酸を共通のプロモーターの制御下で発現させることもできる。共通のプロモーターの制御下で発現させる場合には、２Ａペプチド、ＩＲＥＳペプチド等を使用して、転写及び／又は翻訳を分断してそれぞれのポリペプチドを発現させるようにできる。
　がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする核酸、ＩＬ－７をコードする核酸、ＣＣＬ１９をコードする核酸、及び免疫抑制阻害性ポリペプチドをコードする核酸のうちの２種以上を担持するベクターを免疫応答性細胞に導入する場合には、該ベクター中における前記２種以上の核酸の並び順は特に限定されない。例えば、前記（ｆ）がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする核酸、ＩＬ－７をコードする核酸、ＣＣＬ１９をコードする核酸、及び免疫抑制阻害性ポリペプチドをコードする核酸を含有するベクターにおいては、これら４種の核酸の並び順は限定されない。具体的には、上流（５’末端側）から下流（３’末端側）への順に、
　（ｉ）がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする核酸、ＩＬ－７をコードする核酸、ＣＣＬ１９をコードする核酸、及び免疫抑制阻害性ポリペプチドをコードする核酸のうちのいずれか、
　（ｉｉ）上記４つの核酸のうちの残余（３つ）のうちのいずれか
　（ｉｉｉ）上記４つの核酸のうちの残余（２つ）のうちのいずれか、
　（ｉｖ）上記４つの核酸のうちの最後に残ったもの
　で並んでいてもよい。
　同様に、免疫応答性細胞ががん抗原を特異的に認識する細胞表面分子を内在的に発現している場合に用いることが考えられるＩＬ－７をコードする核酸、ＣＣＬ１９をコードする核酸、及び免疫抑制阻害性ポリペプチドをコードする核酸を含有するベクターについても、
　（ｉ）ＩＬ－７をコードする核酸、ＣＣＬ１９をコードする核酸、及び免疫抑制阻害性ポリペプチドをコードする核酸のうちのいずれか、
　（ｉｉ）上記３つの核酸のうちの残余（２つ）のうちのいずれか
　（ｉｉｉ）上記３つの核酸のうちの最後に残ったもの
　の順に並んでいてもよい。
　なお、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする核酸、ＩＬ－７をコードする核酸、ＣＣＬ１９をコードする核酸、及び免疫抑制阻害性ポリペプチドをコードする核酸は、それぞれ別のプロモーターにより転写されてもよく、内部リボソームエントリー部位（ＩＲＥＳ：ｉｎｔｅｒｎａｌ ｒｉｂｏｚｙｍｅ ｅｎｔｒｙ ｓｉｔｅ）又は自己切断型２Ａペプチドを使用して一つのプロモーターで転写されてもよい。
　一つのプロモーターで複数の核酸を転写させる場合、それぞれの核酸の間の塩基配列は、それぞれの核酸を発現し得る限り、任意の塩基配列を含んでもよいが、自己切断型ペプチド（２Ａペプチド）又はＩＲＥＳをコードする塩基配列を含んでもよく、２Ａペプチドをコードする塩基配列を含んでもよい。このような塩基配列を用いて複数の核酸を連結することにより、それぞれの核酸を効率よく発現させることが可能となる。自己切断型ペプチド（２Ａペプチド）又はＩＲＥＳをコードする塩基配列を含みうる核酸間の塩基配列は、例えば、ＩＬ－７をコードする核酸とＣＣＬ１９をコードする核酸との間の塩基配列であってもよく、ＩＬ－７をコードする核酸と免疫抑制阻害性ポリペプチドをコードする核酸との間の塩基配列であってもよく、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする核酸とＩＬ－７をコードする核酸との間の塩基配列であってもよく、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする核酸とＣＣＬ１９をコードする核酸との間の塩基配列であってもよく、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする核酸と免疫抑制阻害性ポリペプチドをコードする核酸との間の塩基配列であってもよく、ＣＣＬ１９をコードする核酸と免疫抑制阻害性ポリペプチドをコードする核酸との間の塩基配列であってもよく、アルファ・ベータＴＣＲにおけるアルファ鎖をコードする核酸とベータ鎖をコードする核酸との間の塩基配列であってもよく、ガンマ・デルタＴＣＲにおけるガンマ鎖をコードする核酸とデルタ鎖をコードする核酸の間の塩基配列であってもよい。つまり、これらの核酸間の領域それぞれについて、所望により、自己切断型ペプチド（２Ａペプチド）又はＩＲＥＳをコードする塩基配列を含ませることができる。
　２Ａペプチドとは、ウイルス由来の自己切断型ペプチドであり、その詳細は前述のとおりである。
　免疫応答性細胞への核酸導入に用いられるベクターは直鎖状でも環状でもよく、プラスミド等の非ウイルスベクターでも、ウイルスベクターでも、トランスポゾンによるベクターでもよい。免疫応答性細胞への核酸導入に用いられるベクターは、プロモーター、ターミネーター等の制御配列、薬剤耐性核酸、レポーター核酸等の選択マーカー配列のうち１つ以上を含有していてもよい。免疫応答性細胞への核酸導入後も、ベクターに含まれるプロモーターを利用して核酸の発現を行わせるようにしてもよい。例えば、ベクター中のプロモーター配列の下流に作動可能にがん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする核酸、ＩＬ－７をコードする核酸、ＣＣＬ１９をコードする核酸、及び免疫抑制阻害性ポリペプチドをコードする核酸のうち１つ以上を配置することで、当該核酸を効率よく転写させることができる。
　前記プロモーターの例としては、レトロウイルスのＬＴＲプロモーター、ＳＶ４０初期プロモーター、サイトメガロウイルスプロモーター、単純ヘルペスウイルスのチミジンキナーゼプロモーター等のウイルス由来プロモーター、ホスホグリセリン酸キナーゼ（ＰＧＫ）プロモーター、Ｘｉｓｔプロモーター、β－アクチンプロモーター、ＲＮＡポリメラーゼＩＩプロモーター、ポリペプチド鎖伸長因子遺伝子プロモーター等の哺乳類由来プロモーターを挙げることができる。また、テトラサイクリンによって誘導されるテトラサイクリン応答型プロモーター、インターフェロンによって誘導されるＭｘ１プロモーター等を用いてもよい。特定の物質によって誘導されるプロモーターを用いることによって、プロモーターに転写制御される遺伝子（例えば、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする遺伝子、ＩＬ－７をコードする遺伝子、ＣＣＬ１９をコードする遺伝子、及び免疫抑制阻害性ポリペプチドをコードする遺伝子のうち１つ以上）の発現をがんの治療経過に応じて制御することが可能となる。
　前記ウイルスベクターの例としては、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクターを挙げることができる。レトロウイルスベクターとしては、ｐＭＳＧＶベクター（Tamada K. et al., Clin Cancer Res 18:6436-6445(2002)）、ｐＭＳＣＶベクター（タカラバイオ社製）等を挙げることができる。レトロウイルスベクターを用いれば、導入核酸はホスト細胞のゲノムへ取り込まれるため、導入核酸を長期間安定に発現することが可能となる。
　免疫応答性細胞におけるがん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、ＩＬ－７、ＣＣＬ１９、及び免疫抑制阻害性ポリペプチドの発現は、フローサイトメトリー、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロッティング等により確認することができる。また、これらをコードする核酸の導入は、上記のように発現産物を確認するか、あるいはノザンブロッティング、サザンブロッティング、ＲＴ－ＰＣＲ等のＰＣＲ等により確認することができる。核酸導入に用いるベクターがマーカー遺伝子を含有する場合には、当該発現ベクターに挿入されたマーカー遺伝子の発現を調べることによって核酸の導入を確認することができる。
＜本開示に係る免疫応答性細胞Ｃを含む医薬＞
　本開示によれば、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、インターロイキン７、ＣＣＬ１９、及び免疫抑制阻害性ポリペプチドを発現する免疫応答性細胞を含む医薬（以下、「本開示に係る医薬Ｃ」とも称する）が提供される。つまり、本開示に係る医薬Ｃは、本開示に係る免疫応答性細胞Ｃを含む医薬である。
　本開示に係る医薬Ｃは、さらに薬学的に許容される添加剤を含有していてもよく、前記添加剤としては、生理食塩水、緩衝生理食塩水、細胞培養培地、デキストロース、注射用水、グリセロール、エタノール及びこれらの組合せ、安定剤、可溶化剤、界面活性剤、緩衝剤、防腐剤、等張化剤、充填剤、並びに潤滑剤を挙げることができる。
　本開示に係る医薬Ｃに含まれる本開示に係る免疫応答性細胞Ｃの量は、がんの種類、位置、重症度、治療を受ける対象の年齢、体重及び状態等に応じて適宜調整できるが、一回の投与当たり例えば１×１０４～１×１０１１個、より具体的には１×１０５～１×１０１０個、より具体的には１×１０６～１×１０９個を投与してもよい。また、本開示に係る免疫応答性細胞Ｃの量は、一回の投与当たり１×１０６個未満、例えば１×１０５～５×１０５個、より具体的には１．５×１０５～４×１０５個と少量であってもよい。
　上述のとおり、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、インターロイキン７、及びＣＣＬ１９を発現するが免疫抑制阻害性ポリペプチドを発現しない免疫応答性細胞を用いた場合、及びがん抗原を特異的に認識する細胞表面分子及び免疫抑制阻害性ポリペプチドを発現するが、インターロイキン７及びＣＣＬ１９を発現しない免疫応答性細胞を用いた場合には治療困難ながん治療の場合でも、本開示に係る免疫応答性細胞Ｃを用いれば治療可能となりうる。このため、医薬Ｃに含まれる本開示に係る免疫応答性細胞Ｃの量は、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、インターロイキン７、及びＣＣＬ１９を発現するが免疫抑制阻害性ポリペプチドを発現しない免疫応答性細胞を用いた場合、及びがん抗原を特異的に認識する細胞表面分子及び免疫抑制阻害性ポリペプチドを発現するが、インターロイキン７及びＣＣＬ１９を発現しない免疫応答性細胞を用いた場合には抗がん効果を奏さないほど少量であってもよい。免疫応答性細胞Ｃが抗がん効果を奏すことができる量であれば、免疫応答性細胞Ｃの量の下限値は特に制限されない。
　本開示に係る医薬Ｃは、１日４回、１日３回、１日２回、１日１回、１日おき、２日おき、３日おき、４日おき、５日おき、週１回、７日おき、８日おき、９日おき、週２回、月１回又は月２回の頻度で投与してもよい。また、投与回数は総計で例えば１回～１０回、すなわち、１回、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回又は１０回としてもよいが、１０回を超える回数投与しても構わない。
　上記のとおり、本開示に係る医薬Ｃは、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子を発現する免疫応答性細胞、並びに分泌されたＩＬ－７、ＣＣＬ１９、及び免疫抑制阻害性ペプチドからなる因子の組み合わせによる相乗的な効果により、驚くべきほどに向上したがん治療効果を奏する。
　本開示に係る医薬Ｃは、当業者に既知の方法を用いて、がんの治療を必要とする対象に投与することができ、例えば、局所注入（カテーテル投与を含む）、全身注入、静脈内注入又は非経口投与（例えば経皮投与、経粘膜投与、より具体的には点鼻、点眼、舌下、坐薬、パッチ等）によって投与することができる。本開示に係る医薬Ｃは、取り扱いの観点から、単位投与量の注入可能な形態（溶液、懸濁液、乳濁液）に製剤化されていてもよい。投与方法のより具体的な例としては、静脈内、腫瘍内、皮内、皮下、筋肉内、腹腔内、動脈内、髄内、心臓内、関節内、滑液嚢内、頭蓋内、髄腔内、及びくも膜下（髄液）への注射を挙げることができる。
　本開示に係る免疫応答性細胞Ｃは、元となる免疫応答性細胞又はその前駆体細胞を治療対象の患者から得て、本開示に係る免疫応答性細胞Ｃとするために必要な遺伝子の導入後に、同じ患者に投与してもよく（自家投与）、又は別の患者に投与してもよい（他家投与）。あるいは、元となる免疫応答性細胞又はその前駆体細胞は、ｉＰＳ細胞、ＥＳ細胞等の多能性幹細胞又は造血幹細胞などの体性幹細胞から作製してもよい。
　本開示に係る医薬Ｃは、例えば、所定のｐＨに緩衝化されていてもよい無菌の液体調製物、例えば、等張水溶液、懸濁液、乳濁液、分散物又は粘性組成物として投与することができる。前記液体調製物は、注射用の液体調製物であってもよい。また、特定の組織との接触時間を長くするために、前記液体調製物を適切な粘度範囲内の粘度を有する粘性組成物の形態としてもよい。液体調製物は、例えば、水、生理食塩水、リン酸塩緩衝化生理食塩水、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液状ポリエチレングリコールなど）及びそれらの混合物からなる溶媒又は分散媒を含んでいてもよい。
　前記液体調製物は、本開示に係る免疫応答性細胞Ｃを、その他の成分の様々な量とともに、適当量の適切な溶媒に配合することによって調製することができる。前記液体調製物は、好適な担体、希釈剤、又は賦形剤を含んでいてもよい。前記液体調製物はまた、凍結乾燥されていてもよい。液体調製物は、所望の投与経路に依存して、様々な補助物質をさらに含んでいてもよく、補助物質の例としては、湿潤剤、分散剤又は乳化剤（例えば、メチルセルロース）、ｐＨ緩衝化剤、ゲル化剤又は粘度増強添加剤、保存剤、矯味矯臭剤、着色剤などが挙げられる。液体調製物中が含みうる成分については、“ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＳＣＩＥＮＣＥ”，１７版、１９８５の記載を参照することもできる。
　また、液体調製物は、液体調製物の安定性及び無菌性を高める様々な添加剤をさらに含んでいてもよく、その例としては、抗菌性保存剤、酸化防止剤、キレート剤、及び緩衝剤などが挙げられる。微生物の作用を防止するために、様々な抗菌剤及び抗真菌剤、例えば、パラベン類、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸などを使用することができる。液体調製物に使用するビヒクル、希釈剤又は添加剤は、そこに含まれる本開示に係る免疫応答性細胞Ｃとの適合性を有していなければならない。
　液体調製物は血液と等張性であってもよい。等張性は、塩化ナトリウム、又は他の薬学的に許容され得る浸透圧調節物質（例えば、デキストロース、ホウ酸、酒石酸ナトリウム、プロピレングリコール、あるいは、他の無機溶質又は有機溶質など）を液体調製物に含有させることで達成することができる。
　本開示に係る医薬Ｃは、本開示に係る免疫応答性細胞Ｃに加えて、さらに他の抗がん剤を含んでいてもよい。他の抗がん剤の例としては、ベンダムスチン、イオスファミド、ダカルバジン等のアルキル化薬、ペントスタチン、フルダラビン、クラドリビン、メソトレキセート、５－フルオロウラシル、６－メルカプトプリン、エノシタビン等の代謝拮抗薬、リツキシマブ、セツキシマブ、トラスツズマブ等の分子標的薬、イマチニブ、ゲフェチニブ、エルロチニブ、アファチニブ、ダサチニブ、スニチニブ、トラメチニブ等のキナーゼ阻害剤、ボルテゾミブ等のプロテアソーム阻害剤、シクロスポリン、タクロリムス等のカルシニューリン阻害薬、イダルビジン、ドキソルビシンマイトマイシンＣ等の抗がん性抗生物質、イリノテカン、エトポシド等の植物アルカロイド、シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチン等のプラチナ製剤、タモキシフェン、ビカルダミド等のホルモン療法薬、インターフェロン等の免疫制御薬を挙げることができる。他の抗がん剤は、例えば、アルキル化薬及び代謝拮抗薬のうちの少なくとも１種を含んでいてもよい。
＜本開示に係る医薬Ｃを用いたがんの治療＞
　本開示に係る医薬Ｃをがんの治療に用いる場合、治療の対象は例えば任意の哺乳動物でよいが、例えば霊長類の動物であり、より具体的にはヒトであってもよい。治療対象は、愛玩動物又は家畜であってもよく、その例としては、イヌ、ネコ、ブタ、ウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギなどが挙げられる。
　治療の対象となるがんは、固形がんでも血液がんでもよく、腺がん、扁平上皮がん、腺扁平上皮がん、未分化がん、大細胞がん、小細胞がん、皮膚がん、乳がん、前立腺がん、膀胱がん、膣がん、子宮頸部がん、子宮がん、肝臓がん、腎臓がん、膵臓がん、脾臓がん、肺がん、気管がん、気管支がん、結腸がん、小腸がん、胃がん、食道がん、胆嚢がん、精巣がん、卵巣がん等のがんや、骨組織、軟骨組織、脂肪組織、筋組織、血管組織及び造血組織のがんのほか、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、悪性血管内皮腫、悪性シュワン腫、骨肉腫、軟部組織肉腫等の肉腫や、肝芽腫、髄芽腫、腎芽腫、神経芽腫、膵芽腫、胸膜肺芽腫、網膜芽腫等の芽腫や、胚細胞腫瘍や、リンパ腫や、白血病を挙げることができる。
　本開示に係る医薬Ｃによればがん微小環境における免疫抑制性を軽減することが可能であるため、治療対象となるがんは血球系のがんに限定されず、固形がんに対しても治療効果を奏する。このため、従来の方法では治療が難しかった固形がんに対しても高い有効性を発揮できる。
　本開示に係る医薬Ｃは、がんの確定診断がされる前であっても、対象内におけるがん細胞の存在が疑われる状況においては、対象に予防的に投与してもよい。本開示においては、このような使用形態も、がんの治療のための使用の概念に包含される。
＜対象におけるがんの治療方法＞
　本開示に係る一態様によれば、
　（ａ）がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、インターロイキン７、ＣＣＬ１９、及び免疫抑制阻害性ポリペプチドを発現する免疫応答性細胞を対象に投与することを含む、対象におけるがんを治療する方法（以下、本開示に係るがんの治療方法Ｃとも称する）が提供される。
　ここで、本開示に係るがんの治療方法Ｃにおける免疫応答性細胞は本開示に係る免疫応答性細胞Ｃであり、その詳しい構成及び例などについては本開示に係る免疫応答性細胞Ｃについての上記説明がそのまま当てはまる。
　これに加え、本開示に係るがんの治療方法Ｃにおける対象、がんの種類、用量、投与スケジュール等の、治療方法の詳細については、前述の本開示に係る医薬Ｃの説明がそのまま当てはまる。本開示に係る免疫応答性細胞Ｃは、治療有効量で投与することができる。
　本開示に係るがんの治療方法Ｃは、免疫応答性細胞により発現されるがん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、ＩＬ－７、ＣＣＬ１９、及び免疫抑制阻害性ポリペプチドからなる因子の組み合わせによる相乗的な効果により、驚くべきほどに向上したがん治療効果を奏する。
　さらに、本開示によれば、がんを治療するための医薬の製造における、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、インターロイキン７、ＣＣＬ１９、及び免疫抑制阻害性ポリペプチドを発現する免疫応答性細胞の使用が提供される。この使用においても、免疫応答性細胞、がんの治療等の詳細については、前述の本開示に係る医薬Ｃの説明がそのまま当てはまる。
　加えて、本開示によれば、対象におけるがんを治療するために用いられる、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、インターロイキン７、ＣＣＬ１９、及び免疫抑制阻害性ポリペプチドを発現する免疫応答性細胞も提供される。
　本開示に係る医薬Ｃは、本開示に係る組み合わせ医薬Ａの説明において記載したような容器に収容されていてもよい。医薬Ｃを収容した容器を含む製品も提供される。
　以上説明したとおり、本開示に係る一態様によれば、る免疫応答性細胞により発現されるがん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、ＩＬ－７、ＣＣＬ１９、及び免疫抑制阻害性ペプチドの組み合わせによる相乗的な効果により、驚くべきほどに向上したがん治療効果を得ることができる。
　以下、実施例に基づいて実施形態をさらに具体的に説明するが、本開示はこれにより何ら限定されるものではない。以下、特に断りのない限り、％及びｐｐｍはいずれも質量基準である。
［ＩＬ－７×ＣＣＬ１９発現ベクターの作製］
　マウスＩＬ－７（ストップコドン無し）と、それに続くＦ２ＡとマウスＣＣＬ１９をコードするＩＬ－７－Ｆ２Ａ－ＣＣＬ１９ ＤＮＡ断片（配列番号９）を人工合成した。ＩＬ－７、ＣＣＬ１９及びｅＧＦＰを発現するベクターを作製するために、合成したＩＬ－７－Ｆ２Ａ－ＣＣＬ１９ ＤＮＡ断片を、Ｆ２Ａ－ｅＧＦＰ配列を有するｐＭＳＧＶレトロウイルス発現ベクター（Tamada k et al., Clin Cancer Res 18:6436-6445(2002)）のＭＣＳに、制限酵素（ＮｃｏＩ及びＥｃｏＲＩ）処理及びライゲーションにより挿入し、ＩＬ－７－Ｆ２Ａ－ＣＣＬ１９－Ｆ２Ａ－ｅＧＦＰ ＤＮＡ断片（配列番号１０）を含むｐＭＳＧＶベクター（７×１９発現ベクター）を得た。得られたベクターのマップを図１Ｂに示す。また、コントロールとしてｅＧＦＰを含み、ＩＬ－７及びＣＣＬ１９を含まないｐＭＳＧＶベクター（ｅＧＦＰ－Ｃｏｎｖ．ベクター）を作製した。ｅＧＦＰ－Ｃｏｎｖ．ベクターのマップを図１Ａに示す。なお、配列番号１０において、１～４６２番目の塩基がＩＬ－７（１～７５番目の塩基はＩＬ－７のシグナル配列）、４６３～５３７番目の塩基がＦ２Ａ、５３８～８６１番目の塩基がＣＣＬ１９（５３８～６１２番目の塩基はＣＣＬ１９のシグナル配列）、８６８～９４２がＦ２Ａ、９４６～１６６２番目の塩基がｅＧＦＰをコードする核酸、１６６３～１６６５番目の塩基がストップコドンである。また、上記配列番号１０の塩基配列に対応するアミノ酸配列を配列番号１１に示す。なお、制限酵素ＮｃｏＩを使用するため、配列番号１０における４番目の塩基はチミン（ｔ）からグアニン（ｇ）に（配列番号１１における２番目のアミノ酸はフェニルアラニン（Ｆ）からバリン（Ｖ）に）置換されている。
　マウスＴ細胞の形質導入のために、レトロウイルスを作製した。リポフェクタミン３０００（サーモフィッシャーサイエンティフィック株式会社製）を用い、上述の７×１９発現ベクター又はｅＧＦＰ－Ｃｏｎｖ．ベクターと、ｐＣＬ－Ｅｃｏプラスミド（Ｉｍｇｅｎｅｘ社製）をＧＰ２－２９３パッケージング細胞株（タカラバイオ社製）にトランスフェクションすることで、７×１９発現ベクター又はｅＧＦＰ－Ｃｏｎｖ．ベクターを導入したレトロウイルスを作製した。
　前記ＧＰ２－２９３細胞の培養液としては、１０％ＦＣＳ、１００Ｕ／ｍｌのペニシリン、１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシンを加えたＤＭＥＭを用いた。また、後述の実施例で用いるＴ細胞の培養液としては、１０％ＦＣＳ、１００Ｕ／ｍｌのペニシリン、１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシン、５０ｍＭの２－メルカプトエタノールを加えたＲＰＭＩ－１６４０を用いた。
［Ｐ８１５腫瘍抗原Ｐ１Ａを特異的に認識するＴＣＲ、ＩＬ－７、ＣＣＬ１９、及びｅＧＦＰを発現するＴ細胞の作製］
　雌雄のＤＢＡ／２マウス（６～８週齢）を日本エスエルシー株式会社（静岡県）から購入して実験に用いた。Ｈ－２Ｌｄ拘束性のＰ８１５腫瘍抗原Ｐ１Ａを特異的に認識するＴＣＲを発現するトランスジェニックマウス（Sarma, S., Y. Guo, Y. Guilloux, C. Lee, X.-F. Bai, Y. Liu. 1999. J. Exp. Med. 189:811-820）をＤＢＡ／２マウスと少なくとも１０世代戻し交配した。全てのマウスは、病原体フリーな条件で維持した。
　戻し交配後のＰ１Ａを特異的に認識するＴＣＲを発現するトランスジェニックマウスから脾臓細胞を採取し、脾臓細胞由来のＰ８１５腫瘍抗原Ｐ１Ａ特異的なＴＣＲを発現するマウスＴ細胞（Ｐ１Ａ特異的ＴＣＲ－Ｔ細胞；以下、ベクター未導入Ｐ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞とも称する）を得た。なお、ベクターの導入の有無に関わらず、Ｐ１Ａ特異的なＴＣＲを発現するマウスＴ細胞をＰ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞と総称する。形質導入のため、ベクター未導入Ｐ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞を、細胞活性化に適切な量のＰ１Ａペプチド（ＬＰＹＬＧＷＬＶＦ；配列番号１２）及びＩＬ－２の存在下で４８時間インキュベートして活性化した。４８時間のインキュベート後に、培養細胞を回収し、mouse Pan T cell Isolation Kit (Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Germany製)を用いてネガティブマグネティックソーティングによりベクター未導入Ｐ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞を濃縮した。単離したベクター未導入Ｐ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞を、２５μｇ／ｍｌのレトロネクチン（登録商標：タカラバイオ社製）でコートしたプレートに移した。上述で作製した７×１９発現ベクター又はｅＧＦＰ－Ｃｏｎｖ．ベクターを導入したレトロウイルスを含有する上清を、前記プレート上で活性化された上述のベクター未導入Ｐ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞（１×１０６ｃｅｌｌｓ／ｍｌ）の存在下で混合し、１５００ｒｐｍで２時間遠心後、６時間培養した。培養液からレトロウイルスを除去するため、Ｔ細胞を回収し、洗浄し、ＩＬ－２を含有する新しい増殖培養液（ＲＰＭＩ－１６４０）に移し、さらに２日間培養し、７×１９発現ベクターを導入したＰ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞（以下、ｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－７×１９ＴＣＲＴ細胞とも称する）を含むＰ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞の集団、又はｅＧＦＰ－Ｃｏｎｖ．ベクターを導入したＰ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞（以下、ｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞とも称する）を含むＰ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞の集団を得た。各発現ベクターの形質導入はサロゲートマーカーとしてｅＧＦＰを検出するフローサイトメトリー解析によって確認した。上記のとおり、ｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－７×１９ＴＣＲＴ細胞及びｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞は、それぞれのＰ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞集団の全体を占めているわけではないが、本明細書中では、記載の簡略化のため、特に明記が無い限りは、当該細胞集団に対する処理を、ｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－７×１９ＴＣＲＴ細胞又はｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞に対する処理として記載する。
［遺伝子導入の確認］
（フローサイトメトリー解析）
　ｅＧＦＰ及びＣＤ８の発現レベルは２色フローサイトメトリー解析によって行った。レトロウイルスによる遺伝子の導入を行っていないベクター未導入Ｐ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞、ｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－７×１９ＴＣＲＴ細胞、及びｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞をアロフィコシアニン（ＡＰＣ）結合抗ＣＤ８モノクローナル抗体（５３－６．７、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ社製）の存在下で培養した。フローサイトメトリーはＥＣ８００（ソニー株式会社製）又はＢＤ　ＬＳＲＦｏｒｅｔｅｓｓａ　Ｘ－２０（ＢＤバイオサイエンス社製）を用い、データ解析はＦｌｏｗＪｏ ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ｔｒｅｅ Ｓｔａｒ社製）を用いた。
　結果を図２に散布図として示す。図２、図３Ａ及び図３Ｂ中、「Transduction(-)」は遺伝子導入を行わなかったＰ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞（ベクター未導入Ｐ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞）を表し、「Conv. P1A-T cells」はｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞を表し、「7×19 P1A-T cells」はｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－７×１９ＴＣＲＴ細胞を表す。また、図２中に記載されたパーセントの値は、各領域に存在する細胞数の割合を示している。
　図２に示すように、ｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－７×１９ＴＣＲＴ細胞及びｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞においては、ｅＧＦＰを発現しているＴ細胞が７０％～８０％程度観察され、７×１９発現ベクター又はｅＧＦＰ－Ｃｏｎｖ．ベクターが成功裏に導入できたことが分かる。
（ＥＬＩＳＡによる解析）
　上記でｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－７×１９ＴＣＲＴ細胞又はｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞を２日間培養した培養上清を回収し、培養上清中のＩＬ－７及びＣＣＬ１９の濃度を市販のＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ社製）を用いて測定した。結果を図３Ａ及び図３Ｂに示す。３連のウエルの平均値と共に標準偏差もグラフには示した。グラフ中の「Ｎ．Ｄ．」は検出されなかったことを示し、「＊＊＊」はＰ値がＰ＜０．００１であることを示す。図３Ａ及び図３Ｂに示されるように、ｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－７×１９ＴＣＲＴ細胞では、ＩＬ－７及びＣＣＬ１９の発現が確認された。
（担がんマウスへの投与による抗がん効果の解析）
　０日目に、６～８週齢の雌雄のＤＢＡ／２マウスに０．１ｍｌのＨＢＳＳで懸濁した５×１０５個のＰ８１５マストサイトーマ（肥満細胞腫）を側腹に皮下接種した。なお、Ｐ８１５マストサイトーマは、ＤＢＡ／２マウスにシンジェニックであり、以降、単にＰ８１５細胞、Ｐ８１５腫瘍細胞とも称する。６日目に、マウスをプレコンディショニングのために亜致死量（３－５Ｇｙ）の照射を行った。７日目に、マウスを６つの群に分けて、第１群及び第２群にはｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－７×１９ＴＣＲＴ細胞を１×１０６個静脈に投与し、第３群及び第４群にはｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞を１×１０６個静脈に投与し、第５群及び第６群にはＴ細胞の投与を行わなかった（なお、上記のとおり、記載された細胞数は、ｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－７×１９ＴＣＲＴ細胞又はｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞を含むＰ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞集団中のＴ細胞の全数である）。また、第２群、第４群及び第６群のマウスについては、さらに、１０日目を初回として週１回の頻度で計６回抗ＰＤ－１モノクローナル抗体（メルク社製、クローンＧ４；以下に記載の抗ＰＤ－１モノクローナル抗体についても同様）を１００μｇ／個体の量で腹腔内注入した。それぞれのマウスの生存率を解析すると共にマウスの腫瘍体積を週２回測定した。腫瘍体積はデジタルカリパーで測定し、
腫瘍体積＝１／２×（腫瘍の長軸長）×（腫瘍の短軸長）２
　として求めた。それぞれのマウスの生存率の解析結果を図４に、腫瘍体積を測定した結果を図５Ａ～５Ｆに示す。データは独立した５回の実験をプールしたものである。
　図４及び図５Ａ～５Ｆにおいて、□は未投与マウス（サンプルサイズ＝１５匹；上記第５群）、■は抗ＰＤ－１モノクローナル抗体のみを投与したマウス（サンプルサイズ＝１１匹；上記第６群）、△はｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞を投与したマウス（サンプルサイズ＝１７匹；上記第３群）、▲はｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞に加えて抗ＰＤ－１モノクローナル抗体も投与したマウス（サンプルサイズ＝１４匹；上記第４群）、○はｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－７×１９ＴＣＲＴ細胞を投与したマウス（サンプルサイズ＝２４匹；上記第１群）、●はｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－７×１９ＴＣＲＴ細胞に加えて抗ＰＤ－１モノクローナル抗体も投与したマウス（サンプルサイズ＝１９匹；上記第２群）を表す。図４及び図５Ａ～５Ｆにおいて、横軸は、Ｐ８１５マストサイトーマを皮下接種してからの日数（ｄａｙ）を表す。また、図５Ａ～５Ｆには、各群におけるマウスの全個体数（分母）に対する腫瘍拒絶マウスの個体数（分子）も記載した。ログランク検定におけるＰ値は、△群と○群の間でＰ＝０．０００５、▲群と●群の間でＰ＝０．０００２、△群と▲群との間でＰ＝０．７２８４、○群と●群との間でＰ＝０．０２５３であった。
　図４及び図５Ａ～５Ｆに示された結果から、ｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－７×１９ＴＣＲＴ細胞に加えて抗ＰＤ－１モノクローナル抗体も投与したマウス（●）では、ｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－７×１９ＴＣＲＴ細胞を投与したマウス（○）又はｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞に加えて抗ＰＤ－１モノクローナル抗体も投与したマウス（▲）では達成できないレベルの生存率の上昇及び固形がんの腫瘍体積増加の抑制を達成できたことが分かる。一方、ｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞と抗ＰＤ－１モノクローナル抗体を投与したマウス（▲）では、高い相乗効果は見られなかった。
（ＰＤ－１又はＲＯＳＡ２６を破壊したＰ１Ａ－ＴＣＲＴの作製）
　遺伝子編集のため、上記と同様に細胞活性化に適切な量のベクター未導入Ｐ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞をＰ１Ａペプチド（ＬＰＹＬＧＷＬＶＦ；配列番号１２）及びＩＬ－２の存在下で４８時間インキュベートして活性化した。４８時間のインキュベート後に、培養細胞を回収し、mouse Pan T cell Isolation Kit (Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Germany)を用いてネガティブマグネティックソーティングによりベクター未導入Ｐ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞を濃縮した。得られたＴ細胞をＰＢＳで洗浄し、Buffer R（サーモフィッシャーサイエンティフィック株式会社製）に再懸濁して、TrueCut（登録商標）Ｃａｓ９タンパク質ｖ２（サーモフィッシャーサイエンティフィック株式会社製）及び遺伝子特異的ガイドＲＮＡから構成されるＣａｓ９－ＲＮＰ複合体と混合した。Ｃａｓ９－ＲＮＰ複合体をNeon Transfection System（Invitrogen社製）を用いてＴ細胞にエレクトロポレーションにより導入した。これにより目的の遺伝子の破壊を行った。さらに、エレクトロポレーション直後に、Ｔ細胞をＩＬ－２含有ｃＲＰＭＩに再懸濁し、上記と同様に７×１９発現ベクターをレトロウイルスにパッケージングしてＴ細胞に導入した。なお、マウスＰＤ－１を標的とするガイドＲＮＡは、Okada M, et al. Blockage of Core Fucosylation Reduces Cell-Surface Expression of PD-1 and Promotes Anti-tumor Immune Responses of T Cells. Cell Rep. 2017;20(5):1017-1028を参照して設計し、ガイドＲＮＡ部分の配列は5’-UCUGGGCAUGUGGGUCCGGC-3’（配列番号１３）であった。また、ガイドＲＮＡの合成はサーモフィッシャーサイエンティフィック株式会社に委託して行った。コントロールとしてガイドＲＮＡをＲＯＳＡ２６を標的とする5’-CUCCAGUCUUUCUAGAAGAU-3’（配列番号１４）に変えてマウスＲＯＳＡ２６の破壊を行った。ＲＯＳＡ２６を標的とするガイドＲＮＡはサーモフィッシャーサイエンティフィック株式会社から購入した。
（ＰＤ－１又はＲＯＳＡ２６を破壊したＰ１Ａ－ＴＣＲＴの投与実験）　
　０日目に、６～８週齢の雌雄のＤＢＡ／２マウスに０．１ｍｌのＨＢＳＳで懸濁した５×１０５個のＰ８１５マストサイトーマ（肥満細胞腫）を側腹に皮下接種した。６日目に、マウスをプレコンディショニングのために亜致死量（３－５Ｇｙ）の照射を行った。マウスを４つの群に分けて、７日目以降にそれぞれ以下の処置を行った。
　第１群：Ｔ細胞の投与も抗体の投与も行わなかった。
　第２群：７日目に、ＲＯＳＡ２６をノックダウンしたｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－７×１９ＴＣＲＴ細胞を１×１０６個静脈に投与した。
　第３群：７日目に、ＰＤ－１をノックダウンしたｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－７×１９ＴＣＲＴ細胞を含む細胞集団を１×１０６個静脈に投与した。
　第４群：７日目に、ＰＤ－１をノックダウンしたｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－７×１９ＴＣＲＴ細胞を含む細胞集団を１×１０６個静脈に投与し、さらに、１０日目を初回として週１回の頻度で計６回抗ＰＤ－１モノクローナル抗体を１００μｇ／個体の量で腹腔内注入した。
　なお、上記のとおり、記載された細胞数は、ｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－７×１９ＴＣＲＴ細胞を含むＰ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞集団中のＴ細胞の全数である。
　その後、それぞれのマウスの生存率を解析すると共にマウスの腫瘍体積を上記のデジタルカリパーを用いた手法により週２回測定した。それぞれのマウスの生存率の解析結果を図６Ａに、腫瘍体積を測定した結果を図６Ｂ～６Ｅに示す。なお、サンプルサイズはどの群もＮ＝６である。
　図６Ａ～６Ｅにおいて、×は未投与マウス（上記第１群）、□はＲＯＳＡ２６領域をノックダウンしたｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－７×１９ＴＣＲＴ細胞を投与したマウス（上記第２群）、◇は、ＰＤ－１をノックダウンしたｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－７×１９ＴＣＲＴ細胞を投与したマウス（上記第３群）、◆は、ＰＤ－１をノックダウンしたｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－７×１９ＴＣＲＴ細胞に加えて抗ＰＤ－１モノクローナル抗体も投与したマウス（上記第４群）を表す。
　図６Ａ～６Ｅにおいて、横軸は、Ｐ８１５マストサイトーマを皮下接種してからの日数（ｄａｙ）を表す。また、図６Ｂ～６Ｅには、各群におけるマウスの全個体数（分母）に対する腫瘍拒絶マウスの個体数（分子）も記載した。ログランク検定におけるＰ値は、×群と○群との間でＰ＝０．０４５４、□群と◇群の間でＰ＝０．０４３１、◇群と◆群の間でＰ＝０．０４０２であった。
　図６Ａ～６Ｅに示された結果から、ｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－７×１９ＴＣＲＴ細胞に加えて抗ＰＤ－１モノクローナル抗体も投与したマウスにより得られるがん治療効果は、ｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－７×１９ＴＣＲＴ細胞において単にＰＤ－１をノックダウンした場合に比べてはるかに高いものであることが分かる。このことは、抗ＰＤ－１モノクローナル抗体の投与が、単にｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－７×１９ＴＣＲＴ細胞の免疫応答を促進しているだけでなく、ｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－７×１９ＴＣＲＴ細胞によってがん細胞周辺に誘導された内因性の免疫細胞の働きも促進していることを示している。
（マウス脾臓におけるＰ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞の維持）　
　０日目に、６～８週齢の雌雄のＤＢＡ／２マウスに０．１ｍｌのＨＢＳＳで懸濁した５×１０５個のＰ８１５マストサイトーマ（肥満細胞腫）を側腹に皮下接種した。６日目に、マウスをプレコンディショニングのために亜致死量（３－５Ｇｙ）の照射を行った。７日目に、マウスを２つの群に分けて、１つ目の群にはｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－７×１９ＴＣＲＴ細胞を１×１０６個静脈に投与し、２つ目の群にはｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞を１×１０６個静脈に投与した。腫瘍が完全に退縮したマウス個体を１１９日目に安楽死させ、脾臓細胞を収集し、計数し、フローサイトメトリーで解析し、脾臓におけるＰ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞の維持について評価した。さらに、脾臓細胞からマグネティックソーティング法を用いてＴ細胞を単離し、２×１０６個のＴ細胞をマイトマイシンＣで処理した１×１０６個のＰ８１５細胞と共にインキュベートした。３日後及び５日後に、培養上清を回収しＥＬＩＳＡによりＩＦＮ－γの濃度を測定した。また、Ｐ８１５細胞との培養期間中におけるＰ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞の数（１ウエル当たり）をフローサイトメトリーで測定した。これらの試験により、脾臓におけるＰ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞の機能について評価した。
　サンプルサイズは、ｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－７×１９ＴＣＲＴ細胞を投与した群については５匹、ｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞を投与した群については２匹である。
　収集された脾臓細胞について図２に示した実験と同様のフローサイトメトリー（ただし、ゲートは４分割ゲートからＣＤ８－ｅＧＦＰ＋ゲートとＣＤ８＋ｅＧＦＰ＋ゲートを含むカスタムゲートに変更）により、ＣＤ８とｅＧＦＰの発現について測定した結果を図７に示す。また、脾臓細胞中におけるＣＤ８を発現せずｅＧＦＰを発現している細胞（ＣＤ８－ｅＧＦＰ＋細胞）の割合の平均値を図８Ａに白抜きのバーで、細胞数の平均値を図８Ｂに白抜きのバーで示す。また、脾臓細胞中におけるＣＤ８とｅＧＦＰのどちらも発現している細胞（ＣＤ８＋ｅＧＦＰ＋細胞）の割合の平均値を図８Ａに黒塗りのバーで、細胞数の平均値を図８Ｂに黒塗りのバーで示す。図８Ａ及び図８Ｂにおいて、「Conv. P1A-T cells」のデータは値が小さいためにほとんど見えないが、白抜きのバーが黒塗りのバーの左側に位置している。図７、図８Ａ及び図８Ｂにおいて、「Conv. P1A-T cells」はｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞を投与した群を表し、「7×19 P1A-T cells」はｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－７×１９ＴＣＲＴ細胞を投与した群を表す。図７、図８Ａ及び図８Ｂに示された結果から、ｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－７×１９ＴＣＲＴ細胞を投与した群では、１１９日目のマウスにおいても、導入された遺伝子を保持するＰ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞が維持されていることが分かる。なお、図７中に記載されたパーセントの値は、ＣＤ８を発現せずｅＧＦＰを発現している細胞（ＣＤ８－ｅＧＦＰ＋細胞）数の割合（ｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞を投与した群において０．０５５％、ｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－７×１９ＴＣＲＴ細胞を投与した群において０．９７％）及びＣＤ８とｅＧＦＰのどちらも発現している細胞（ＣＤ８＋ｅＧＦＰ＋細胞）数の割合（ｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞を投与した群において０．００６８％、ｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－７×１９ＴＣＲＴ細胞を投与した群において０．４７％）を示している。
　さらに、Ｐ８１５細胞との培養期間中におけるＣＤ８とｅＧＦＰのどちらも発現しているＰ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞の数（１ウエル当たり）をフローサイトメトリーで測定した結果を図８Ｃに示す。また、培養上清をＥＬＩＳＡで測定して得たＩＦＮ－γの濃度を図８Ｄに示す。図８Ｃ及び図８Ｄにおいて、ｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞を投与した群における結果を各時点における左側のバー（白抜きのバー）で表し、ｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－７×１９ＴＣＲＴ細胞を投与した群を各時点における右側のバー（黒塗りのバー）で表す。ただし、図８Ｃにおいて、ｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞を投与した群における結果を表す左側のバーは横軸と重なっている（つまり、ＣＤ８とｅＧＦＰのどちらも発現しているＰ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞の数がほぼ０である）ため、実際には見えない。図８Ｃ及び図８Ｄにおいて、結果は、平均値及び標準偏差により示し、「＊」はＰ値がＰ＜０．０５であることを、「＊＊」はＰ＜０．０１であることを表す。
　図８Ｃ及び図８Ｄに示された結果から、１１９日目のマウスにおいても、導入された遺伝子を保持するＰ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞の機能が保持されていることが分かる。
（がん細胞によるリチャレンジ実験）
　０日目に、６～８週齢の雌雄のＤＢＡ／２マウスに０．１ｍｌのＨＢＳＳで懸濁した５×１０５個のＰ８１５細胞を側腹に皮下接種した。６日目に、マウスをプレコンディショニングのために亜致死量（３－５Ｇｙ）の照射を行った。７日目に、ｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－７×１９ＴＣＲＴ細胞を１×１０６個静脈に投与した（なお、上記のとおり、記載された細胞数は、ｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－７×１９ＴＣＲＴ細胞を含むＰ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞集団におけるＴ細胞の全数である）。さらに、１０日目を初回として週１回の頻度で計６回抗ＰＤ－１モノクローナル抗体を１００μｇ／個体の量で腹腔内注入した。腫瘍が完全に退縮した４匹のマウスに対し、１１７日目に、０．１ｍｌのＨＢＳＳで懸濁した５×１０５個のＰ８１５マストサイトーマ（肥満細胞腫）を側腹に再度皮下接種した。さらに、コントロールとして、６匹のナイーブＤＢＡ／２マウスに０．１ｍｌのＨＢＳＳで懸濁した５×１０５個のＰ８１５マストサイトーマ（肥満細胞腫）を側腹に皮下接種した。腫瘍が完全に退縮したマウスに対するＰ８１５細胞の再接種の日、又はナイーブＤＢＡ／２マウスへのＰ８１５細胞の接種の日を０日として、マウスの腫瘍体積を測定した結果を２０日目まで経過日数と共に図９に示す。マウスの腫瘍体積は、図５Ａ～５Ｆについて記載したとおりデジタルカリパーで測定したが、本実験では平均値及び標準偏差により示す。
　図９において、×はナイーブＤＢＡ／２マウスへのＰ８１５細胞の接種の結果を示し、●は腫瘍が完全に退縮したマウスに対するＰ８１５細胞の再接種の結果を示す。
　図９に示された結果から分かるように、ｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－７×１９ＴＣＲＴ細胞と抗ＰＤ－１モノクローナル抗体との投与により治癒したマウスは、１１７日目においても、がん細胞に対する抵抗力を保持していることが分かる。
［ＩＬ－７及びＣＣＬ１９を発現するＣＡＲ－Ｔ細胞の作製］
　国際公開第２０１６／５６２２８号の段落００６１～段落００６６に記載の方法により、コントロール抗ｈＣＤ２０ ＣＡＲベクター及びＩＬ－７／ＣＣＬ１９発現－抗ｈＣＤ２０ ＣＡＲベクターを作製し、ＤＢＡ／２マウスの脾臓及びリンパ節由来の３×１０６個の精製したマウスＴ細胞に導入して抗ｈＣＤ２０ ＣＡＲ－ＩＬ－７／ＣＣＬ１９発現Ｔ細胞又は抗ｈＣＤ２０ ＣＡＲ発現Ｔ細胞を作製した。コントロール抗ｈＣＤ２０ ＣＡＲベクターは、抗ｈＣＤ２０ ＣＡＲをコードする核酸を含むベクターであり、ＩＬ－７／ＣＣＬ１９発現－抗ｈＣＤ２０ ＣＡＲベクターは、抗ｈＣＤ２０ ＣＡＲ－Ｆ２Ａ－ＩＬ－７－Ｆ２Ａ－ＣＣＬ１９をこの順でコードする核酸を含むベクターである。
（担がんマウスへの投与による抗がん効果の解析）
　０日目に、６～１２週齢の雄ＤＢＡ／２マウスに０．１ｍｌのＨＢＳＳで懸濁した５×１０５個のＰ８１５－ｈＣＤ２０腫瘍細胞（Nat Biotechnol. 2018;36(4):346-351参照）を側腹に皮下接種した。１１日目に、抗がん剤であるシクロホスファミド（ＣＰＡ、１００ｍｇ／ｋｇ）をマウスの腹腔内に投与した。マウスを５つの群に分けて、以降の処理を以下のとおり行った。
　第１群には、ＣＡＲ発現Ｔ細胞も抗体も投与しなかった。
　第２群には、抗ＰＤ－１モノクローナル抗体を、１７日目を初日として４～５日毎に計５回腹腔内投与した。
　第３群には、０．２５×１０６個の抗ｈＣＤ２０ ＣＡＲ発現Ｔ細胞を１４日目に静脈に投与し、１７日目を初日として４～５日毎に計５回抗ＰＤ－１モノクローナル抗体を１００μｇ／個体の量で腹腔内投与した。
　第４群には、０．２５×１０６個の抗ｈＣＤ２０ ＣＡＲ－ＩＬ－７／ＣＣＬ１９発現Ｔ細胞を１４日目に静脈に投与し、１７日目を初日として４～５日毎に計５回ＰＤ－１を認識しないハムスターコントロールＩｇＧ抗体を１００μｇ／個体の量で腹腔内投与した。
　第５群には、０．２５×１０６個の抗ｈＣＤ２０ ＣＡＲ－ＩＬ－７／ＣＣＬ１９発現Ｔ細胞を１４日目に静脈に投与し、１７日目を初日として４～５日毎に計５回抗ＰＤ－１モノクローナル抗体を１００μｇ／個体の量で腹腔内投与した。
　それぞれのマウスの生存率を解析すると共にマウスの腫瘍体積を上記のデジタルカリパーを用いた手法により週２回測定した。それぞれのマウスの生存率の解析結果を図１０Ａに、７０日目までの腫瘍体積を測定した結果を図１０Ｂ～１０Ｆに示す。データは独立した２回の実験の結果をプールしたデータを示したものである。
　図１０Ａ～１０Ｆにおいて、×は未投与マウス（サンプルサイズ＝１０匹；上記第１群）、□は抗ＰＤ－１モノクローナル抗体のみを投与したマウス（サンプルサイズ＝１０匹；上記第２群）、◆は抗ｈＣＤ２０ ＣＡＲ発現Ｔ細胞に加えて抗ＰＤ－１モノクローナル抗体も投与したマウス（サンプルサイズ＝５匹；上記第３群）、○は抗ｈＣＤ２０ ＣＡＲ－ＩＬ－７／ＣＣＬ１９発現Ｔ細胞に加えてＰＤ－１を認識しないハムスターコントロールＩｇＧ抗体も投与したマウス（サンプルサイズ＝１０匹；上記第４群）、●は抗ｈＣＤ２０ ＣＡＲ－ＩＬ－７／ＣＣＬ１９発現Ｔ細胞に加えて抗ＰＤ－１モノクローナル抗体も投与したマウス（サンプルサイズ＝１０匹；上記第５群）を表す。ただし、図１０Ｂ～１０Ｆにおいてはいずれの群もＮ＝５である。図１０Ａ～１０Ｆにおいて、横軸は、Ｐ８１５－ｈＣＤ２０腫瘍細胞を皮下接種してからの日数（ｄａｙ）を表す。また、図１０Ｂ～１０Ｆには、各群におけるマウスの全個体数（分母）に対する腫瘍拒絶マウスの個体数（分子）も記載した。ログランク検定におけるＰ値は、□群と◆群の間でＰ＝０．７２９３、□群と●群の間でＰ＜０．０００１、◆群と●群との間でＰ＜０．０００１、○群と●群との間でＰ＜０．０００１であった。
　図１０Ａ～１０Ｆに示された結果から、抗ｈＣＤ２０ ＣＡＲ－ＩＬ－７／ＣＣＬ１９発現Ｔ細胞に加えて抗ＰＤ－１モノクローナル抗体も投与したマウス（●）では、それぞれ単独で投与した場合には十分な抗がん効果が得られない用量を投与した場合であっても、著しく高い生存率及び固形がんの腫瘍体積増加の抑制を達成することができた。一方、抗ｈＣＤ２０ ＣＡＲ発現Ｔ細胞に加えて抗ＰＤ－１モノクローナル抗体も投与したマウス（▲）又は抗ｈＣＤ２０ ＣＡＲ－ＩＬ－７／ＣＣＬ１９発現Ｔ細胞に加えてコントロールＩｇＧ抗体も投与したマウス（○）ではこのような効果は得られなかった。
　また、抗ｈＣＤ２０ ＣＡＲ発現Ｔ細胞の投与量は、上記のとおり０．２５×１０６個と少なく、抗ＰＤ－１モノクローナル抗体との共投与の場合には少ない細胞数であっても高い効果が得られたことが分かった。
（リンパ球の腫瘍組織への浸潤の解析）
　０日目に、ＤＢＡ／２マウスにＰ８１５腫瘍細胞を接種し、ｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞又はｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－７×１９ＴＣＲＴ細胞を７日目に静脈注射した。なお、これらの細胞は、注射前に、ｅＧＦＰ陽性細胞の割合が９５％超となるまで純度を上げておいた。腫瘍細胞を採取し、シングル細胞懸濁液へと調製し、１２日目に、細胞数を計測すると共に、ｃ－ｋｉｔ、ｅＧＦＰ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ３、ＣＤ４及びＣＤ８の発現についてフローサイトメトリー解析により調べた。図１１Ａには、代表的なドットプロットを示す。非腫瘍細胞と同定されたｃ－ｋｉｔ陰性細胞の割合（左上のパネル）、ｃ－ｋｉｔ陰性細胞集団における、ＣＤ－３陰性／ＣＤ１１ｃ陽性である樹状細胞の割合（右上のパネル）、並びにＣＤ－３陽性／ｅＧＦＰ陰性である内在性Ｔ細胞の割合及びＣＤ３－陽性／ｅＧＦＰ陽性である注射されたＰ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞の割合を示す（中央のパネル）。図１１Ａにおいて、「Conv. P1A-T cells」はｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞を投与した群を表し、「7×19 P1A-T cells」はｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－７×１９ＴＣＲＴ細胞を投与した群を表す。内在性Ｔ細胞集団におけるＣＤ－４陽性細胞又はＣＤ８陽性細胞の割合（左下のパネル）及び注射されたＰ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞の割合を示す（右下のパネル）。図１１Ｂには、Ｐ８１５腫瘍細胞１×１０５個あたりの各種腫瘍浸潤リンパ球の細胞数を、平均値及び標準偏差（ＳＤ）により示す（ｎ＝５）。ＤＣは樹状細胞を表し、Ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ　Ｔは内在性Ｔ細胞を表し、Ｐ１Ａ－ＴはＰ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞を表す。白抜きのバーは、ｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞で処理されたマウス中における腫瘍浸潤リンパ球サブセットを示し、黒塗りのバーはｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－７×１９ＴＣＲＴ細胞で処理されたマウス中における腫瘍浸潤リンパ球サブセットを示す。＊はＰ＜０．０５を表し、＊＊はＰ＜０．０１を表し、＊＊＊はＰ＜０．００１を表す。
　なお、Ｐ８１５腫瘍細胞から腫瘍浸潤リンパ球を分離するために、Ｐ８１５マストサイトーマで高度に陽性であり、樹状細胞及びＴ細胞では陽性度の低いことが知られているｃ－ｋｉｔ染色を用いた。図１１Ａ及び図１１Ｂの結果からは、まず、ｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－７×１９ＴＣＲＴ細胞を注射されたマウスにおけるｃ－ｋｉｔ陰性の腫瘍浸潤リンパ球の割合は、ｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞を注射されたマウスにおけるｃ－ｋｉｔ陰性の腫瘍浸潤リンパ球の割合よりも高いことが分かる。ｃ－ｋｉｔ陰性腫瘍浸潤リンパ球のサブセットにおいて、ＣＤ３陰性／ＣＤ１１ｃ陽性である樹状細胞の割合も図１１Ａに示す。図１１Ａにはさらに、ＣＤ３陽性／ｅＧＦＰ陰性である内在性Ｔ細胞のサブセット、及びＣＤ３陽性／ｅＧＦＰ陽性の注射されたＰ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞若しくはＰ１Ａ－７×１９ＴＣＲＴ細胞のサブセットにおけるＣＤ４及びＣＤ８の発現割合も示す。ＣＤ４／ＣＤ８染色についてのさらなる解析により、ｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－７×１９ＴＣＲＴ細胞で処理されたマウス中における腫瘍浸潤樹状細胞、ＣＤ－４陽性及びＣＤ８陽性内在性Ｔ細胞、並びにＣＤ８陽性Ｐ１Ａ－Ｔ細胞の数は、ｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞で処理されたマウス中におけるそれらの数よりも顕著に多かった。このことは図１１Ｂに示される。図１１Ｂにおいて白抜きのバー（ｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞で処理されたマウス中における腫瘍浸潤リンパ球サブセット）と比べて黒塗りのバー（ｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－７×１９ＴＣＲＴ細胞で処理されたマウス中における腫瘍浸潤リンパ球サブセット）において、ＤＣ（樹状細胞）、ＥｎｇｏｇｅｎｏｕｓＴ（内在性Ｔ細胞）、及び注射されたＰ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞若しくはＰ１Ａ－７×１９ＴＣＲＴ細胞のいずれについても細胞数が多いことが示されている。これらの結果は、ｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－７×１９ＴＣＲＴ細胞による処理における内在性Ｔ細胞の役割が重要であることを裏付けるものである。このことは、抗ＰＤ－１モノクローナル抗体とｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－ＴＣＲＴ細胞ではなく、抗ＰＤ－１モノクローナル抗体とｅＧＦＰ発現Ｐ１Ａ－７×１９ＴＣＲＴ細胞との組み合わせにより相乗的な効果が得られたことと合致している。
（抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ－抗ＰＤ－１抗体発現ベクターの作製） 
　配列番号１５の核酸配列を有する構築物を、ＮｃｏＩサイト及びＳａｌＩサイトを用いてｐＭＳＧＶレトロウイルス発現ベクター（Tamada k et al., Clin Cancer Res 18:6436-6445(2002)）に導入して抗ｈＣＤ２０ｓｃＦｖ　ＣＡＲ及び抗ｍＰＤ－１ｓｃＦｖを含むｐＭＳＧＶベクター（以降、抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ－抗ＰＤ－１抗体発現ベクターとも称する）を作製した。得られたベクターの配置図をconventional ＣＡＲ－ＰＤ－１ ｓｃＦｖとして図１２に示す。配列番号１５の核酸配列において、５’末端から数えて、１番目～５７番目のヌクレオチドはリーダー配列をコードする核酸配列に相当し、５８番目～３７５番目のヌクレオチドは抗ｈＣＤ２０ｓｃＦｖ軽鎖をコードする核酸配列に相当し、３７６番目～４２０番目のヌクレオチドはリンカーをコードする核酸配列に相当し、４２１番目～７８３番目のヌクレオチドは抗ｈＣＤ２０ｓｃＦｖ重鎖をコードする核酸配列に相当し、７９３番目～１６３５番目のヌクレオチドは膜通過ドメイン及び細胞質ドメインをコードする核酸配列に相当し、１６４２番目のヌクレオチド～１７１６番目のヌクレオチドは２Ａペプチドをコードする核酸配列に相当し、１７１７番目～１７７３番目のヌクレオチドはリーダー配列をコードする核酸配列に相当し、１７７４番目～２１０６番目のヌクレオチドは抗ｍＰＤ－１ｓｃＦｖ軽鎖をコードする核酸配列に相当し、２１０７番目～２１５１番目のヌクレオチドはリンカー配列をコードする核酸配列に相当し、２１５２番目～２５０５番目のヌクレオチドは抗ｍＰＤ－１ｓｃＦｖ重鎖をコードする核酸配列に相当し、２５０６番目～２５２９番目のヌクレオチドはＦＬＡＧタグをコードする核酸配列に相当し、２５３９番目～２５５６番目のヌクレオチドはＨｉｓタグをコードする核酸配列に相当する。なお、抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ－抗ＰＤ－１抗体発現ベクター及び後述の抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ－ＩＬ－７／ＣＣＬ１９－抗ＰＤ－１抗体発現ベクターにおいて、２Ａペプチドとしては、口蹄疫ウイルスの２Ａペプチド（Ｆ２Ａペプチドとも称する）を用いた。２Ａペプチドを遺伝子間に挿入することで、複数のポリペプチドを同時に発現することを可能にしている。また、上記のとおり、抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ－抗ＰＤ－１抗体発現ベクター及び後述の抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ－ＩＬ－７／ＣＣＬ１９－抗ＰＤ－１抗体発現ベクターは、ＦＬＡＧタグ及びＨｉｓタグ（Ｈｉｓ×６）の配列を含んでいる。
　配列番号１５の核酸配列がコードするアミノ酸配列を配列番号１６に示す。配列番号１６において、Ｎ末端から数えて、１～５４５位のアミノ酸配列は抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲのアミノ酸配列であり、５４８～５７２位のアミノ酸配列は２Ａペプチドのアミノ酸配列であり、５９２～７０２位のアミノ酸配列は、抗ｍＰＤ－１　ＶＬのアミノ酸配列であり、７０３～７１７位のアミノ酸配列はリンカーのアミノ酸配列であり、７１８～８３５位のアミノ酸配列は抗ｍＰＤ－１　ＶＨのアミノ酸配列であり、８３６～８４３位のアミノ酸配列はＦＬＡＧタグのアミノ酸配列であり、８４７～８５２位のアミノ酸配列はＨｉｓタグのアミノ酸配列である。
（抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ－ＩＬ－７／ＣＣＬ１９－抗ＰＤ－１抗体発現ベクターの作製） 
　配列番号１７の核酸配列を有する構築物を、ＮｃｏＩサイト及びＳａｌＩサイトを用いてｐＭＳＧＶレトロウイルス発現ベクター（Tamada k et al., Clin Cancer Res 18:6436-6445(2002)）に導入して抗ｈＣＤ２０ｓｃＦｖ　ＣＡＲ、ｍＩＬ－７、ｍＣＣＬ１９、及び抗ｍＰＤ－１ｓｃＦｖを含むｐＭＳＧＶベクターを作製した（以降、抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ－ＩＬ－７／ＣＣＬ１９－抗ＰＤ－１抗体発現ベクターとも称する）。得られたベクターの配置図を図１２に７×１９ＣＡＲ－ＰＤ－１　ｓｃＦｖとして示す。配列番号１７の核酸配列において、５’末端から数えて、１番目～５７番目のヌクレオチドはリーダー配列をコードする核酸配列に相当し、５８番目～３７５番目のヌクレオチドは抗ｈＣＤ２０ｓｃＦｖ軽鎖をコードする核酸配列に相当し、３７６番目～４２０番目のヌクレオチドはリンカーをコードする核酸配列に相当し、４２１番目～７８３番目のヌクレオチドは抗ｈＣＤ２０ｓｃＦｖ重鎖をコードする核酸配列に相当し、７９２番目～１０３８番目のヌクレオチドはマウスＣＤ８をコードする核酸配列に相当し、１０３９番目～１１６１番目のヌクレオチドはマウスＣＤ２８をコードする核酸配列に相当し、１１６２番目～１２９６番目のヌクレオチドはマウス４－１ＢＢをコードする核酸配列に相当し、１２９７番目～１６３５番目のヌクレオチドはマウスＣＤ３ζをコードする核酸配列に相当し、１６４２番目～１７１６番目のヌクレオチドは２Ａペプチドをコードする核酸配列に相当し、１７２０番目～１７９４番目のヌクレオチドはｍＩＬ－７のリーダー配列をコードする核酸配列に相当し、１７２０番目～２１８１番目のヌクレオチドはｍＩＬ－７をコードする核酸配列に相当し、２１８２番目～２２５６番目のヌクレオチドは２Ａペプチドをコードする核酸配列に相当し、２２５７番目～２３３１番目のアミノ酸配列はｍＣＣＬ１９のリーダー配列をコードするアミノ酸配列に相当し、２２５７番目～２５８０番目のヌクレオチドはｍＣＣＬ１９をコードする核酸配列に相当し、２５８４番目～２６５８番目のヌクレオチドは２Ａペプチドをコードする核酸配列に相当し、２６５９番目～２７１５番目のヌクレオチドはリーダー配列をコードする核酸配列に相当し、２７１６番目～３０４８番目のヌクレオチドは抗ｍＰＤ－１ｓｃＦｖ軽鎖をコードする核酸配列に相当し、３０４９番目～３０９３番目のヌクレオチドはリンカー配列をコードする核酸配列に相当し、３０９４番目～３４４７番目のヌクレオチドは抗ｍＰＤ－１ｓｃＦｖ重鎖をコードする核酸配列に相当し、３４４８番目～３４７１番目のヌクレオチドはＦＬＡＧタグをコードする核酸配列に相当し、３４８０番目～３４９７番目のヌクレオチドはＨｉｓタグをコードする核酸配列に相当する。
　配列番号１７の核酸配列がコードするアミノ酸配列を配列番号１８に示す。配列番号１８において、Ｎ末端から数えて、１～２６１位のアミノ酸配列は抗ｈＣＤ２０　ｓｃＦｖのアミノ酸配列であり、２６５～３４６位の配列はｍＣＤ８のアミノ酸配列であり、３４７～３８７位のアミノ酸配列はｍＣＤ２８のアミノ酸配列であり、３８８～４３２位のアミノ酸配列はｍ４－１ＢＢのアミノ酸配列であり、４３３～５４５位のアミノ酸配列はｍＣＤ３のアミノ酸配列であり、５４８～５７２位のアミノ酸配列は２Ａペプチドのアミノ酸配列であり、５７４～７２７位のアミノ酸配列はｍＩＬ－７のアミノ酸配列であり、７２８～７５２位のアミノ酸配列は２Ａペプチドのアミノ酸配列であり、７５３～８６０位のアミノ酸配列はｍＣＣＬ１９のアミノ酸配列であり、８６２～８８６位のアミノ酸配列は２Ａペプチドのアミノ酸配列であり、９０６～１０１６位のアミノ酸配列は、抗ｍＰＤ－１　ＶＬのアミノ酸配列であり、１０１７～１０３１位のアミノ酸配列はリンカーのアミノ酸配列であり、１０３２～１１４９位のアミノ酸配列は抗ｍＰＤ－１　ＶＨのアミノ酸配列であり、１１５０～１１５７位のアミノ酸配列はＦＬＡＧタグのアミノ酸配列であり、１１６１～１１６６位のアミノ酸配列はＨｉｓタグのアミノ酸配列である。
（抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ－抗ＰＤ－１抗体発現ベクター、又は抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ－ＩＬ－７／ＣＣＬ１９－抗ＰＤ－１抗体発現ベクターを導入したレトロウイルスの作製） 
　マウスＴ細胞の形質導入のために、レトロウイルスベクターを作製した。ＧＰ２－２９３パッケージング細胞（タカラバイオ社製）に、リポフェクタミン（登録商標）２０００又は３０００（ライフテクノロジー社製）を用い、上述の抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ－抗ＰＤ－１抗体発現ベクター又は抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ－ＩＬ－７／ＣＣＬ１９－抗ＰＤ－１抗体発現ベクターと、ｐＣＬ－Ｅｃｏレトロウイルスパッケージングプラスミド（Ｉｍｇｅｎｅｘ社製）をトランスフェクションし、抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ－抗ＰＤ－１抗体発現ベクター又は抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ－ＩＬ－７／ＣＣＬ１９－抗ＰＤ－１抗体発現ベクターを導入したレトロウイルスを作製した。トランスフェクションから４８時間後に前記レトロウイルスを含有する上清を回収した。 
　前記ＧＰ２－２９３細胞の培養液としては、１０％ＦＣＳ、１００Ｕ／ｍｌのペニシリン、１００ｍｇ／ｍｌのストレプトマイシンを加えたＤＭＥＭを用いた。また、後述の実施例で用いるＴ細胞の培養液としては、１０％ＦＣＳ、１００Ｕ／ｍｌのペニシリン、１００ｍｇ／ｍｌのストレプトマイシン、５０ｍＭの２－メルカプトエタノール、２ｍＭのＬ－グルタミンを加えたＲＰＭＩ－１６４０を用いた。 
　また、同様にして、抗ＰＤ－１　ｓｃＦｖをコードする核酸配列を含まないこと以外は抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ－抗ＰＤ－１抗体発現ベクターと同様の発現ベクター（以下、抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ発現ベクターとも称する）、及び、抗ＰＤ－１　ｓｃＦｖをコードする核酸配列を含まないこと以外は抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ－ＩＬ－７／ＣＣＬ１９－抗ＰＤ－１抗体発現ベクターと同様の発現ベクター（以下、抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ－ＩＬ－７／ＣＣＬ１９発現ベクターとも称する）も作製し、それを用いてレトロウイルスベクターを同様に作製した。
（マウスＴ細胞の形質導入）
　マウスＴ細胞の形質導入のため、脾臓及びリンパ節由来の精製したマウスＴ細胞を、固層化した抗ＣＤ３モノクローナル抗体（３μｇ／ｍｌ）、抗ＣＤ２８モノクローナル抗体（１μｇ／ｍｌ）、ＩＬ－２（１００ＩＵ／ｍｌ）で４８時間活性化した。次に、上述で作製した抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ－抗ＰＤ－１抗体発現ベクター、抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ－ＩＬ－７／ＣＣＬ１９－抗ＰＤ－１抗体発現ベクター、抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ発現ベクター、又は抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ－ＩＬ－７／ＣＣＬ１９発現ベクターを導入したレトロウイルスを含有する上清を、２５μｇ／ｍｌのレトロネクチン（登録商標：タカラバイオ社製）でコートしたプレートで活性化させた上述のマウスＴ細胞（１×１０６ｃｅｌｌｓ／ｍｌ）と混合し、１５００ｒｐｍで２時間遠心後、ＩＬ－２（１００ＩＵ／ｍｌ）の存在下で６時間培養した。培養液からレトロウイルスを除去するため、マウスＴ細胞を回収し、ＩＬ－２（１００ＩＵ／ｍｌ）を含有する新しい増殖培養液（ＲＰＭＩ）に移し、さらに４２時間培養し、抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ－抗ＰＤ－１抗体発現ベクターを導入したマウスＴ細胞（以下、抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ－抗ＰＤ－１抗体発現Ｔ細胞とも称する）、抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ－ＩＬ－７／ＣＣＬ１９－抗ＰＤ－１抗体発現ベクターを導入したマウスＴ細胞（以下、抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ－ＩＬ－７／ＣＣＬ１９－抗ＰＤ－１抗体発現Ｔ細胞とも称する）、抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ発現ベクターを導入したマウスＴ細胞（以下、抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ発現Ｔ細胞とも称する）、又は抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ－ＩＬ－７／ＣＣＬ１９発現ベクターを導入したマウスＴ細胞（以下、抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ－ＩＬ－７／ＣＣＬ１９発現Ｔ細胞とも称する）を得た。 
　ＣＡＲ発現を検出するために、形質導入していないＴ細胞（図１３中ではｕｎｉｎｆ．と表記）又は種々の上記ＣＡＲをコードするレトロウイルスベクターを形質導入したＴ細胞を、ビオチン化した組換えｐｒｏｔｅｉｎ　Ｌ（ｐｒｏｔｅｉｎＬ－ｂｉｏとも表記する）で染色し、続いてアロフィコシアニンを結合させたストレプトアビジン（ｓａｖ－ａｐｃとも表記する）で染色した。ＣＡＲの発現レベルをフローサイトメトリーで解析した。結果を図１３に示す。
　図１３以降の図面において、ｕｎｉｎｆ．は形質導入していないＴ細胞を、ｃｏｎｖ．は抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ発現Ｔ細胞を、ｃｏｎｖ．／ＰＤ－１は抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ－抗ＰＤ－１抗体発現Ｔ細胞を、７×１９は抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ－ＩＬ－７／ＣＣＬ１９発現Ｔ細胞を、７×１９／ＰＤ－１は抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ－ＩＬ－７／ＣＣＬ１９－抗ＰＤ－１抗体発現Ｔ細胞を表す。図１３中の各Ｔ細胞のデータにおいて、左側はＦＳＣ－ＳＳＣプロットであり、右側はアロフィコシアニン染色の陽性度（横軸）と細胞カウント（縦軸）を示すグラフである。また、右側のグラフ中に示されたヒストグラムは、染色で陽性だった細胞の割合（％）を表す。図１３に示されるように、形質導入していないＴ細胞以外の、ＣＡＲをコードするレトロウイルスベクターで形質導入されたＴ細胞は、ＣＡＲを期待通りに発現していることが分かる。
　各種ＣＡＲ－Ｔ細胞を実験に使用する前に、ＩＬ－７の濃度及びＣＣＬ１９の濃度をＥＬＩＳＡキットにより測定した。具体的には、形質転換していないＴ細胞、抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ発現Ｔ細胞、抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ－ＩＬ－７／ＣＣＬ１９発現Ｔ細胞、抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ－抗ＰＤ－１抗体発現Ｔ細胞、又は抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ－ＩＬ－７／ＣＣＬ１９－抗ＰＤ－１抗体発現Ｔ細胞を２日間培養した培養上清を回収し、培養上清中のＩＬ－７及びＣＣＬ１９の濃度を市販のＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ社製）を用いて測定した。結果を図１４に示す。図１４には、３連のウエルの平均値と共に標準偏差もグラフには示した。なお、各グラフ中で、データは、左側から、形質転換していないＴ細胞（ｕｎｉｎｆ．）、抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ発現Ｔ細胞（ｃｏｎｖ．）、抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ－ＩＬ－７／ＣＣＬ１９発現Ｔ細胞（７×１９）、抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ－抗ＰＤ－１抗体発現Ｔ細胞（ｃｏｎｖ．／ＰＤ－１）、抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ－ＩＬ－７／ＣＣＬ１９－抗ＰＤ－１抗体発現Ｔ細胞（７×１９／ＰＤ－１）、及び培地のみ（培養液にＴ細胞を含ませなかった場合に同様の処理をして得られたデータ）の順で並んでいる。図１４に示されるように、抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ－ＩＬ－７／ＣＣＬ１９発現Ｔ細胞（７×１９）及び抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ－ＩＬ－７／ＣＣＬ１９－抗ＰＤ－１抗体発現Ｔ細胞（７×１９／ＰＤ－１）の場合に、ＩＬ－７及びＣＣＬ１９の発現が見られた。
　各種ＣＡＲ－Ｔ細胞を実験に使用する前に、抗ｍＰＤ－１ｓｃＦｖ（ＰＤ－１ｓｃＦｖとも称する）の濃度を２種類のＥＬＩＳＡキットにより測定した。具体的には、形質転換していないＴ細胞、抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ発現Ｔ細胞、抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ－ＩＬ－７／ＣＣＬ１９発現Ｔ細胞、抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ－抗ＰＤ－１抗体発現Ｔ細胞、又は抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ－ＩＬ－７／ＣＣＬ１９－抗ＰＤ－１抗体発現Ｔ細胞を２日間培養した培養上清を回収し、培養上清中のＩＬ－７及びＣＣＬ１９の濃度をＥＬＩＳＡにより測定した。ＥＬＩＳＡでは、マウスＰＤ－１とイムノグロブリンＦｃ部分からなる組換え融合タンパク質をウエル中に固定してＰＤ－１ｓｃＦｖを捕捉し、抗ＦＬＡＧタグ又は抗６×Ｈｉｓタグを検出に用いた。結果を図１５に示す。図１５には、３連のウエルの平均値と共に標準偏差もグラフには示した。なお、各グラフ中で、データは、左側から、形質転換していないＴ細胞（ｕｎｉｎｆ．）、抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ発現Ｔ細胞（ｃｏｎｖ．）、抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ－ＩＬ－７／ＣＣＬ１９発現Ｔ細胞（７×１９）、抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ－抗ＰＤ－１抗体発現Ｔ細胞（ｃｏｎｖ．／ＰＤ－１）、抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ－ＩＬ－７／ＣＣＬ１９－抗ＰＤ－１抗体発現Ｔ細胞（７×１９／ＰＤ－１）、及び培地のみ（培養液にＴ細胞を含ませなかった場合に同様の処理をして得られたデータ）の順で並んでいる。図１５に示されるように、抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ－抗ＰＤ－１抗体発現Ｔ細胞（ｃｏｎｖ．／ＰＤ－１）及び抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ－ＩＬ－７／ＣＣＬ１９－抗ＰＤ－１抗体発現Ｔ細胞（７×１９／ＰＤ－１）の場合に、抗ＰＤ－１ｓｃＦｖの発現が見られた。
（担がんマウスへの投与による抗がん効果の解析）
　０日目に、６～１２週齢の雄ＤＢＡ／２マウスに０．１ｍｌのＨＢＳＳで懸濁した５×１０５個のＰ８１５－ｈＣＤ２０腫瘍細胞（Nat Biotechnol. 2018;36(4):346-351参照）を側腹に皮下接種した。１１日目に、抗がん剤であるシクロホスファミド（ＣＰＡ、１００ｍｇ／ｋｇ）をマウスの腹腔内に投与した。マウスを５つの群に分けて、以降の処理を以下のとおり行った。
　第１群には、いかなるＣＡＲ発現Ｔ細胞も投与しなかった。
　第２群には、０．２５×１０６個の抗ｈＣＤ２０ ＣＡＲ発現Ｔ細胞を１４日目に静脈に投与した。
　第３群には、０．２５×１０６個の抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ－ＩＬ－７／ＣＣＬ１９発現Ｔ細胞を１４日目に静脈に投与した。　
　第４群には、０．２５×１０６個の抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ－抗ＰＤ－１抗体発現Ｔ細胞を１４日目に静脈に投与した。　
　第５群には、０．２５×１０６個の抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ－ＩＬ－７／ＣＣＬ１９－抗ＰＤ－１抗体発現Ｔ細胞を１４日目に静脈に投与した。　
　それぞれのマウスの生存率を解析すると共にマウスの腫瘍体積を上記のデジタルカリパーを用いた手法により週２回測定した。それぞれのマウスの生存率の解析結果を図１６に、７０日目までの腫瘍体積を測定した結果を図１７に示す。図１７において、最初の１４日間の腫瘍体積は各グラフの右側に拡大して示した。
　図１７において、ｃｐａ　ｏｎｌｙは、第１群（シクロホスファミド投与は行ったものの、ＣＡＲ発現Ｔ細胞の投与は行わなかった）を表す。図１７においてはいずれの群もＮ＝１０である。図１７において、横軸は、Ｐ８１５－ｈＣＤ２０腫瘍細胞を皮下接種してからの日数（ｄａｙ）を表す。マウスの生存時間について、各群の間のログランク検定の結果を、Ｐ値の値で、図１６の下側の表に示す。
　図１６に示された結果から、本開示に係る免疫応答性細胞Ｃに該当する抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ－ＩＬ－７／ＣＣＬ１９－抗ＰＤ－１抗体発現Ｔ細胞を用いることで、Ｐ８１５－ｈＣＤ２０を有するマウスの生存時間が顕著に増加していることが分かる。特に、抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ－抗ＰＤ－１抗体発現Ｔ細胞を用いた場合や抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ－ＩＬ－７／ＣＣＬ１９発現Ｔ細胞を用いた場合でも試験期間中にほとんどのマウスが死亡しているのに対して、抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ－ＩＬ－７／ＣＣＬ１９－抗ＰＤ－１抗体発現Ｔ細胞では９８日経過後でも５０％のマウスが生存していることは特筆すべきことである。このことから、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、インターロイキン７、及びＣＣＬ１９を発現するが免疫抑制阻害性ポリペプチドを発現しない免疫応答性細胞を用いた場合、及びがん抗原を特異的に認識する細胞表面分子及び免疫抑制阻害性ポリペプチドを発現するが、インターロイキン７及びＣＣＬ１９を発現しない免疫応答性細胞を用いた場合には治療困難ながん治療の場合でも、本開示に係る免疫応答性細胞Ｃを用いれば治療可能となりうることが分かる。また、Ｐ値から、抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ－ＩＬ－７／ＣＣＬ１９－抗ＰＤ－１抗体発現Ｔ細胞による治療効果は、他の各群で得られた結果とは統計的に明らかに差異がある、高い治療効果であることが分かる。
　図１５に記載の、抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ－抗ＰＤ－１抗体発現Ｔ細胞による抗ＰＤ－１ｓｃＦｖの発現量と、抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ－ＩＬ－７／ＣＣＬ１９－抗ＰＤ－１抗体発現Ｔ細胞による抗ＰＤ－１ｓｃＦｖの発現量との比較から分かるように、抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ－ＩＬ－７／ＣＣＬ１９－抗ＰＤ－１抗体発現Ｔ細胞は、導入遺伝子の数が多くヌクレオチド長が長いために、導入及び発現における不利を被ることを考慮すると、抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ－ＩＬ－７／ＣＣＬ１９－抗ＰＤ－１抗体発現Ｔ細胞による上記の治療効果は驚くべきものであることが理解される。
　また、図１７に示された結果から、抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ－ＩＬ－７／ＣＣＬ１９－抗ＰＤ－１抗体発現Ｔ細胞が投与されたマウスでは、腫瘍体積の増加自体が抑えられていることが理解できる。この腫瘍体積増加の抑制は、ＣＡＲ発現Ｔ細胞を投与しなかった場合（ｃｐａ　ｏｎｌｙ）及び抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ発現Ｔ細胞を投与した場合（ｃｏｎｖ．）と比較して顕著なだけではなく、抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ－ＩＬ－７／ＣＣＬ１９発現Ｔ細胞を投与した場合及び抗ｈＣＤ２０　ＣＡＲ－抗ＰＤ－１抗体発現Ｔ細胞を投与した場合と比較しても顕著なものである。
　また、抗ｈＣＤ２０ ＣＡＲ発現Ｔ細胞の投与量は、上記のとおり０．２５×１０６個と少なく、少ない細胞数であっても高い効果が得られたことが分かった。
　以上のとおり、実施例により、本開示の種々の態様に係る組み合わせ医薬及び免疫応答性細胞により、がん細胞に対する高い治療効果が得られることが示された。
　本開示の例示的な実施形態は、以下の実施形態も含む。
＜１＞
　（ａ）がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、インターロイキン７及びＣＣＬ１９を発現する免疫応答性細胞、並びに
　（ｂ）免疫抑制阻害剤
　を含む、対象におけるがんを治療するための組み合わせ医薬。
＜２＞　前記免疫応答性細胞と、前記免疫抑制阻害剤とが、異なる時点で別々に投与される、＜１＞に記載の組み合わせ医薬。
＜３＞　インターロイキン７をコードする核酸及びＣＣＬ１９をコードする核酸が、前記免疫応答性細胞のゲノムに組み込まれているか、又は前記免疫応答性細胞中に存在する１個又は複数個のベクターに一緒に若しくは別個に組み込まれている、＜１＞又は＜２＞に記載の組み合わせ医薬。
＜４＞　前記免疫応答性細胞が、前記対象自身に由来する免疫応答性細胞である、＜１＞～＜３＞のうちいずれか１つに記載の組み合わせ医薬。
＜５＞　前記免疫応答性細胞が、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）、及びＢ細胞等のリンパ球系細胞、単球、マクロファージ、及び樹状細胞等の抗原提示細胞、好中球、好酸球、好塩基球、並びに肥満細胞からなる群から選択される、＜１＞～＜４＞のうちいずれか１つに記載の組み合わせ医薬。
＜６＞
　（ａ）インターロイキン７をコードする核酸及びＣＣＬ１９をコードする核酸を協同して含む１種類又は複数種類の細胞若しくは核酸送達媒体又はそれらの組み合わせ、並びに
　（ｂ）免疫抑制阻害剤
　を含む、対象におけるがんを治療するための組み合わせ医薬。
＜７＞　前記１種類又は複数種類の細胞若しくは核酸送達媒体又はそれらの組み合わせが、免疫応答性細胞、ウイルス、嫌気性菌、リポソーム、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）、及びナノ粒子から選択される少なくとも１種を含む、＜６＞に記載の組み合わせ医薬。
＜８＞　前記１種類又は複数種類の細胞若しくは核酸送達媒体又はそれらの組み合わせが、がん抗原を特異的に認識する分子を表面に有する、＜６＞又は＜７＞に記載の組み合わせ医薬。
＜９＞　前記１種類又は複数種類の細胞若しくは核酸送達媒体又はそれらの組み合わせが、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする核酸をさらに含み、前記がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である、＜６＞又は＜７＞に記載の組み合わせ医薬。
＜１０＞　前記免疫抑制阻害剤がポリペプチドであって、前記細胞若しくは核酸送達媒体又はそれらの組み合わせは、免疫抑制阻害剤ポリペプチドをコードずる核酸をさらに協同して含む＜６＞～＜９＞のうちいずれか１つに記載の組み合わせ医薬。
＜１１＞　前記細胞若しくは核酸送達媒体又はそれらの組み合わせと、前記免疫抑制阻害剤とが、異なる時点で別々に投与される、＜６＞～＜９＞のうちいずれか１つに記載の組み合わせ医薬。
＜１２＞　前記がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である、＜１＞～＜５＞のうちいずれか１つに記載の組み合わせ医薬。
＜１３＞　前記免疫抑制阻害剤が、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、ＰＤ－Ｌ２阻害剤、ＣＴＬＡ－４阻害剤、ＢＴＬＡ（B- and T-lymphocyte attenuator）阻害剤、ＴＩＭ－３（T-cell immunoglobulin and mucin domain 3）阻害剤、ＴＩＧＩＴ（T-cell immunoreceptor with Ig and ITIM domains）阻害剤、ＬＡＧ－３（Lymphocyte Activation Gene-3）阻害剤、及びＳｉｇｌｅｃ－１５阻害剤からなる群から選択される１種以上を含む、＜１＞～＜１２＞のうちいずれか１つに記載の組み合わせ医薬。
＜１４＞　前記免疫抑制阻害剤が抗体である、＜１＞～＜１３＞のうちいずれか１つに記載の組み合わせ医薬。
＜１５＞　前記抗体が、ＩｇＧモノクローナル抗体又は抗体断片である、＜１４＞に記載の組み合わせ医薬。
＜１６＞　前記がんが固形がんである、＜１＞～＜１５＞のうちいずれか１つに記載の組み合わせ医薬。
＜１７＞　免疫抑制阻害剤と併用されて対象におけるがんを治療するために用いられる、（ｉ）がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、インターロイキン７及びＣＣＬ１９を発現する免疫応答性細胞、又は（ｉｉ）インターロイキン７をコードする核酸及びＣＣＬ１９をコードする核酸を協同して含む１種類又は複数種類の細胞若しくは核酸送達媒体若しくはそれらの組み合わせ、を含む医薬。
＜１８＞
　（ｉ）がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、インターロイキン７及びＣＣＬ１９を発現する免疫応答性細胞、又は（ｉｉ）インターロイキン７をコードする核酸及びＣＣＬ１９をコードする核酸を協同して含む１種類又は複数種類の細胞若しくは核酸送達媒体若しくはそれらの組み合わせ、と併用されて対象におけるがんを治療するために用いられる、免疫抑制阻害剤を含む医薬。
＜１９＞　前記免疫抑制阻害剤と前記免疫応答性細胞又は前記１種類又は複数種類の細胞若しくは核酸送達媒体若しくはそれらの組み合わせとが異なる時点で別々に投与される形態にて用いるための、＜１７＞又は＜１８＞に記載の医薬。
＜２０＞　免疫抑制阻害剤と併用されることが表示された容器に収容され、かつ、（ｉ）がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、インターロイキン７及びＣＣＬ１９を発現する免疫応答性細胞、又は（ｉｉ）インターロイキン７をコードする核酸及びＣＣＬ１９をコードする核酸を協同して含む１種類又は複数種類の細胞若しくは核酸送達媒体若しくはそれらの組み合わせ、を含む医薬。
＜２１＞
　免疫抑制阻害剤と併用されることが記載された添付文書と、
　（ｉ）がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、インターロイキン７及びＣＣＬ１９を発現する免疫応答性細胞、又は（ｉｉ）インターロイキン７をコードする核酸及びＣＣＬ１９をコードする核酸を協同して含む１種類又は複数種類の細胞若しくは核酸送達媒体若しくはそれらの組み合わせ、を含む医薬を収容した容器と、
　を含む製品。
＜２２＞
　（ａ）（ｉ）がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、インターロイキン７及びＣＣＬ１９を発現する免疫応答性細胞、又は（ｉｉ）インターロイキン７をコードする核酸及びＣＣＬ１９をコードする核酸を協同して含む１種類又は複数種類の細胞若しくは核酸送達媒体若しくはそれらの組み合わせ、並びに
　（ｂ）免疫抑制阻害剤
　を含む、対象におけるがんを治療するための医薬組成物。
＜２３＞　前記がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である、＜２２＞に記載の医薬組成物。
＜２４＞　がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、インターロイキン７、ＣＣＬ１９、及び免疫抑制阻害性ポリペプチドを発現する免疫応答性細胞。
＜２５＞　インターロイキン７をコードする核酸及びＣＣＬ１９をコードする核酸が、前記免疫応答性細胞のゲノムに組み込まれているか、又は前記免疫応答性細胞中に存在する１個又は複数個のベクターに一緒に若しくは別個に組み込まれている、＜２４＞に記載の免疫応答性細胞。
＜２６＞　免疫抑制阻害性ポリペプチドをコードする核酸が、前記免疫応答性細胞のゲノムに組み込まれているか、又は前記免疫応答性細胞中に存在する、前記１個又は複数個のベクターのうちいずれかと同じであっても異なっていてもよいベクターに組み込まれている、＜２５＞に記載の免疫応答性細胞。
＜２７＞　前記がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である、＜２４＞～＜２６＞のうちいずれか１つに記載の免疫応答性細胞。
＜２８＞　前記免疫抑制阻害性ポリペプチドが、ＰＤ－１阻害性ポリペプチド、ＰＤ－Ｌ１阻害性ポリペプチド、ＰＤ－Ｌ２阻害性ポリペプチド、ＣＴＬＡ－４阻害性ポリペプチド、ＢＴＬＡ（B- and T-lymphocyte attenuator）阻害性ポリペプチド、ＴＩＭ－３（T-cell immunoglobulin and mucin domain 3）阻害性ポリペプチド、ＴＩＧＩＴ（T-cell immunoreceptor with Ig and ITIM domains）阻害性ポリペプチド、ＬＡＧ－３（Lymphocyte Activation Gene-3）阻害性ポリペプチド、及びＳｉｇｌｅｃ－１５阻害性ポリペプチドからなる群から選択される１種以上を含む、＜２４＞～＜２７＞のうちいずれか１つに記載の免疫応答性細胞。
＜２９＞　前記免疫抑制阻害性ポリペプチドが抗体である、＜２４＞～＜２８＞のうちいずれか１つに記載の免疫応答性細胞。
＜３０＞　前記抗体が、ＩｇＧモノクローナル抗体又は抗体断片である、＜２９＞に記載の免疫応答性細胞。
＜３１＞　Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）、及びＢ細胞等のリンパ球系細胞、単球、マクロファージ、及び樹状細胞等の抗原提示細胞、好中球、好酸球、好塩基球、並びに肥満細胞からなる群から選択される、＜２４＞～＜３０＞のうちいずれか１つに記載の免疫応答性細胞。
＜３２＞　＜２４＞～＜３１＞のうちいずれか１つに記載の免疫応答性細胞を含む医薬。
＜３３＞　対象におけるがんを治療するために用いられる、＜３２＞に記載の医薬。
＜３４＞　前記がんが固形がんである、＜３３＞に記載の医薬。
＜３５＞　前記免疫応答性細胞が前記対象自身に由来する免疫応答性細胞である、＜３３＞又は＜３４＞に記載の医薬。
＜３６＞　インターロイキン７をコードする核酸、ＣＣＬ１９をコードする核酸、及び免疫抑制阻害性ポリペプチドをコードする核酸を協同して含む１種類又は複数種類の核酸送達媒体。
＜３７＞　がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする核酸をさらに含む、＜３６＞に記載の核酸送達媒体。
　本願は２０１９年１０月２８日出願の日本国特許出願２０１９－１９５４０７からの優先権を主張し、日本国特許出願２０１９－１９５４０７の開示はその全体が参照により本明細書に取り込まれる。
　本明細書に記載された全ての文献、特許出願、および技術規格は、個々の文献、特許出願、および技術規格が参照により取り込まれることが具体的かつ個々に記された場合と同程度に、本明細書中に参照により取り込まれる。

Claims (37)

  1. 　（ａ）がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、インターロイキン７及びＣＣＬ１９を発現する免疫応答性細胞、並びに
    　（ｂ）免疫抑制阻害剤
    　を含む、対象におけるがんを治療するための組み合わせ医薬。
  2. 　前記免疫応答性細胞と、前記免疫抑制阻害剤とが、異なる時点で別々に投与される、請求項１に記載の組み合わせ医薬。
  3. 　インターロイキン７をコードする核酸及びＣＣＬ１９をコードする核酸が、前記免疫応答性細胞のゲノムに組み込まれているか、又は前記免疫応答性細胞中に存在する１個又は複数個のベクターに一緒に若しくは別個に組み込まれている、請求項１又は請求項２に記載の組み合わせ医薬。
  4. 　前記免疫応答性細胞が、前記対象自身に由来する免疫応答性細胞である、請求項１～３のうちいずれか一項に記載の組み合わせ医薬。
  5. 　前記免疫応答性細胞が、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）、及びＢ細胞等のリンパ球系細胞、単球、マクロファージ、及び樹状細胞等の抗原提示細胞、好中球、好酸球、好塩基球、並びに肥満細胞からなる群から選択される、請求項１～４のうちいずれか一項に記載の組み合わせ医薬。
  6. 　（ａ）インターロイキン７をコードする核酸及びＣＣＬ１９をコードする核酸を協同して含む１種類又は複数種類の細胞若しくは核酸送達媒体又はそれらの組み合わせ、並びに
    　（ｂ）免疫抑制阻害剤
    　を含む、対象におけるがんを治療するための組み合わせ医薬。
  7. 　前記１種類又は複数種類の細胞若しくは核酸送達媒体又はそれらの組み合わせが、免疫応答性細胞、ウイルス、嫌気性菌、リポソーム、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）、及びナノ粒子から選択される少なくとも１種を含む、請求項６に記載の組み合わせ医薬。
  8. 　前記１種類又は複数種類の細胞若しくは核酸送達媒体又はそれらの組み合わせが、がん抗原を特異的に認識する分子を表面に有する、請求項６又は請求項７に記載の組み合わせ医薬。
  9. 　前記１種類又は複数種類の細胞若しくは核酸送達媒体又はそれらの組み合わせが、がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする核酸をさらに含み、前記がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である、請求項６又は請求項７に記載の組み合わせ医薬。
  10. 　前記免疫抑制阻害剤がポリペプチドであって、前記細胞若しくは核酸送達媒体又はそれらの組み合わせは、免疫抑制阻害剤ポリペプチドをコードずる核酸をさらに協同して含む請求項６～９のうちいずれか一項に記載の組み合わせ医薬。
  11. 　前記細胞若しくは核酸送達媒体又はそれらの組み合わせと、前記免疫抑制阻害剤とが、異なる時点で別々に投与される、請求項６～９のうちいずれか一項に記載の組み合わせ医薬。
  12. 　前記がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である、請求項１～５のうちいずれか一項に記載の組み合わせ医薬。
  13. 　前記免疫抑制阻害剤が、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、ＰＤ－Ｌ２阻害剤、ＣＴＬＡ－４阻害剤、ＢＴＬＡ（B- and T-lymphocyte attenuator）阻害剤、ＴＩＭ－３（T-cell immunoglobulin and mucin domain 3）阻害剤、ＴＩＧＩＴ（T-cell immunoreceptor with Ig and ITIM domains）阻害剤、ＬＡＧ－３（Lymphocyte Activation Gene-3）阻害剤、及びＳｉｇｌｅｃ－１５阻害剤からなる群から選択される１種以上を含む、請求項１～１２のうちいずれか一項に記載の組み合わせ医薬。
  14. 　前記免疫抑制阻害剤が抗体である、請求項１～１３のうちいずれか一項に記載の組み合わせ医薬。
  15. 　前記抗体が、ＩｇＧモノクローナル抗体又は抗体断片である、請求項１４に記載の組み合わせ医薬。
  16. 　前記がんが固形がんである、請求項１～１５のうちいずれか一項に記載の組み合わせ医薬。
  17. 　免疫抑制阻害剤と併用されて対象におけるがんを治療するために用いられる、（ｉ）がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、インターロイキン７及びＣＣＬ１９を発現する免疫応答性細胞、又は（ｉｉ）インターロイキン７をコードする核酸及びＣＣＬ１９をコードする核酸を協同して含む１種類又は複数種類の細胞若しくは核酸送達媒体若しくはそれらの組み合わせ、を含む医薬。
  18. 　（ｉ）がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、インターロイキン７及びＣＣＬ１９を発現する免疫応答性細胞、又は（ｉｉ）インターロイキン７をコードする核酸及びＣＣＬ１９をコードする核酸を協同して含む１種類又は複数種類の細胞若しくは核酸送達媒体若しくはそれらの組み合わせ、と併用されて対象におけるがんを治療するために用いられる、免疫抑制阻害剤を含む医薬。
  19. 　前記免疫抑制阻害剤と前記免疫応答性細胞又は前記１種類又は複数種類の細胞若しくは核酸送達媒体若しくはそれらの組み合わせとが異なる時点で別々に投与される形態にて用いるための、請求項１７又は請求項１８に記載の医薬。
  20. 　免疫抑制阻害剤と併用されることが表示された容器に収容され、かつ、（ｉ）がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、インターロイキン７及びＣＣＬ１９を発現する免疫応答性細胞、又は（ｉｉ）インターロイキン７をコードする核酸及びＣＣＬ１９をコードする核酸を協同して含む１種類又は複数種類の細胞若しくは核酸送達媒体若しくはそれらの組み合わせ、を含む医薬。
  21. 　免疫抑制阻害剤と併用されることが記載された添付文書と、
    　（ｉ）がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、インターロイキン７及びＣＣＬ１９を発現する免疫応答性細胞、又は（ｉｉ）インターロイキン７をコードする核酸及びＣＣＬ１９をコードする核酸を協同して含む１種類又は複数種類の細胞若しくは核酸送達媒体若しくはそれらの組み合わせ、を含む医薬を収容した容器と、
    　を含む製品。
  22. 　（ａ）（ｉ）がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、インターロイキン７及びＣＣＬ１９を発現する免疫応答性細胞、又は（ｉｉ）インターロイキン７をコードする核酸及びＣＣＬ１９をコードする核酸を協同して含む１種類又は複数種類の細胞若しくは核酸送達媒体若しくはそれらの組み合わせ、並びに
    　（ｂ）免疫抑制阻害剤
    　を含む、対象におけるがんを治療するための医薬組成物。
  23. 　前記がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である、請求項２２に記載の医薬組成物。
  24. 　がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子、インターロイキン７、ＣＣＬ１９、及び免疫抑制阻害性ポリペプチドを発現する免疫応答性細胞。
  25. 　インターロイキン７をコードする核酸及びＣＣＬ１９をコードする核酸が、前記免疫応答性細胞のゲノムに組み込まれているか、又は前記免疫応答性細胞中に存在する１個又は複数個のベクターに一緒に若しくは別個に組み込まれている、請求項２４に記載の免疫応答性細胞。
  26. 　免疫抑制阻害性ポリペプチドをコードする核酸が、前記免疫応答性細胞のゲノムに組み込まれているか、又は前記免疫応答性細胞中に存在する、前記１個又は複数個のベクターのうちいずれかと同じであっても異なっていてもよいベクターに組み込まれている、請求項２５に記載の免疫応答性細胞。
  27. 　前記がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である、請求項２４～２６のうちいずれか一項に記載の免疫応答性細胞。
  28. 　前記免疫抑制阻害性ポリペプチドが、ＰＤ－１阻害性ポリペプチド、ＰＤ－Ｌ１阻害性ポリペプチド、ＰＤ－Ｌ２阻害性ポリペプチド、ＣＴＬＡ－４阻害性ポリペプチド、ＢＴＬＡ（B- and T-lymphocyte attenuator）阻害性ポリペプチド、ＴＩＭ－３（T-cell immunoglobulin and mucin domain 3）阻害性ポリペプチド、ＴＩＧＩＴ（T-cell immunoreceptor with Ig and ITIM domains）阻害性ポリペプチド、ＬＡＧ－３（Lymphocyte Activation Gene-3）阻害性ポリペプチド、及びＳｉｇｌｅｃ－１５阻害性ポリペプチドからなる群から選択される１種以上を含む、請求項２４～２７のうちいずれか一項に記載の免疫応答性細胞。
  29. 　前記免疫抑制阻害性ポリペプチドが抗体である、請求項２４～２８のうちいずれか一項に記載の免疫応答性細胞。
  30. 　前記抗体が、ＩｇＧモノクローナル抗体又は抗体断片である、請求項２９に記載の免疫応答性細胞。
  31. 　Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）、及びＢ細胞等のリンパ球系細胞、単球、マクロファージ、及び樹状細胞等の抗原提示細胞、好中球、好酸球、好塩基球、並びに肥満細胞からなる群から選択される、請求項２４～３０のうちいずれか一項に記載の免疫応答性細胞。
  32. 　請求項２４～３１のうちいずれか一項に記載の免疫応答性細胞を含む医薬。
  33. 　対象におけるがんを治療するために用いられる、請求項３２に記載の医薬。
  34. 　前記がんが固形がんである、請求項３３に記載の医薬。
  35. 　前記免疫応答性細胞が前記対象自身に由来する免疫応答性細胞である、請求項３３又は請求項３４に記載の医薬。
  36. 　インターロイキン７をコードする核酸、ＣＣＬ１９をコードする核酸、及び免疫抑制阻害性ポリペプチドをコードする核酸を協同して含む１種類又は複数種類の核酸送達媒体。
  37. 　がん抗原を特異的に認識する細胞表面分子をコードする核酸をさらに含む、請求項３６に記載の核酸送達媒体。
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