WO2020126653A1

WO2020126653A1 - Extrait de bois de rosier

Info

Publication number: WO2020126653A1
Application number: PCT/EP2019/084365
Authority: WO
Inventors: Jocelyne Franchi; Virginie Pecher; Milène JUAN
Original assignee: L V M H Recherche
Priority date: 2018-12-20
Filing date: 2019-12-10
Publication date: 2020-06-25
Also published as: US20220047495A1; KR20210107724A; EP3897566A1; FR3090380B1; CN113316448A; FR3090380A1; JP7387741B2; JP2022515409A

Abstract

La présente invention concerne un extrait aqueux de bois de rose, de préférence de bois de rose d'été, obtenu par extraction enzymatique au moyen d'un solvant polaire cosmétiquement acceptable, son procédé de préparation et ses utilisations notamment comme agent pour prévenir et/ou diminuer les signes du vieillissement cutané.

Description

EXTRAIT DE BOIS DE ROSIER

DOMAINE DE L'INVENTION

La présente invention concerne un extrait aqueux de bois de rose, en particulier de la variété Evanrat ou rose Jardin de Granville®, et ses utilisations en tant qu’agent destiné à prévenir et/ou traiter les signes du vieillissement cutané en particulier de la peau du visage et/ou du corps.

ETAT DE LA TECHNIQUE

La peau est la première barrière de protection de l'organisme vis-à-vis de l'environnement. Elle est donc soumise à des facteurs d’origine exogène (ex : rayonnements UV, variations de température, pollution atmosphérique, fumée de cigarette...) ou endogène (ex : hormones...) susceptibles d’induire des signes du vieillissement cutané, que l’on appellera respectivement vieillissement extrinsèque ou vieillissement intrinsèque (ou physiologique). Le vieillissement extrinsèque entraîne des altérations cliniques telles que des rides profondes et la formation d'une peau ayant perdu sa fermeté, sa souplesse et son élasticité, l’altération de la fonction barrière de la peau, l’altération de l’immunité innée de la peau, et l’apparition de tâches pigmentaires cutanées, autrement nommées tâches de vieillesse, taches brunes, lentigo solaire, lentigo actinique ou lentigo sénile, en particulier sur le dos des mains, sur le visage, le décolleté, ou encore le crâne des hommes. Les peaux sèches sont également connues pour être des peaux sans éclat et plus sensibles aux désordres pigmentaires. De façon concomitante, le vieillissement intrinsèque ou physiologique provoque notamment un ralentissement du renouvellement des cellules de la peau, les kératinocytes, ce qui se traduit essentiellement par l'apparition d'altérations cliniques telles que la réduction du tissu adipeux sous-cutané et l'apparition de fines rides ou ridules.

Les stress endogènes et/ou exogènes peuvent aussi être une cause majeure de l’inflammaging (ou inflamma’ging ou inflamm’age), issu de la contraction des termes "inflammation" et "aging". Ce process chronique et silencieux d’inflammation, décrypté par Franceschi C et al. en 2000 (Inflamm-aging. An evolutionary perspective on immunosenescence. Annals of the New York Academy of Sciences. 2000;908:244-254) est décrit comme une réaction naturelle de défense du système immunitaire face à un stress qui dégénère en un processus micro-inflammatoire chronique et silencieux, responsable notamment du vieillissement des matières kératiniques et en particulier de la peau. Avec l’âge, des micro-inflammations répétitives se propagent dans le tissu cutané et affaiblissent les systèmes de défense des cellules, ayant pour conséquence l’apparition de rides, un relâchement de la peau, une sécheresse cutanée, et/ou un teint terne et inhomogène. Ce phénomène s’accentue avec le temps et concerne toutes les peaux, en particulier les peaux sensibles, plus fragilisées par le stress et les agressions extérieures. Avec l’âge, l’épiderme, plus fin et plus fragile, est également plus perméable face à ces agresseurs qui génèrent un stress de ses cellules et déséquilibrent son état naturel d’homéostasie. Le système immunitaire de la peau se défend et déclenche la libération, entre autres et en excès, de radicaux libres, de neuropeptides et de médiateurs pro inflammatoires, les cytokines, qui aboutissent à la dégradation des fibres de collagène et d’élastine, ralentit la capacité de renouvellement cellulaire, accélère le vieillissement cutané, menant ainsi à une perte de tonicité, d’élasticité et de fermeté avec une altération de la fonction barrière. On recherche donc de nouveaux ingrédients anti-âge capables de prévenir et/ou diminuer les signes du vieillissement cutané sus-décrits.

De manière inattendue, la Demanderesse a mis en évidence les effets in vitro d’un extrait aqueux de bois de rose, en particulier de rose Jardin de Granville®, permettant d’envisager son utilisation comme actif pour prévenir et/ou traiter le vieillissement cutané notamment induit par le stress oxydant, prévenir et/ou diminuer une altération de la fonction barrière de la peau, prévenir et/ou diminuer l’apparition de taches pigmentaires cutanées, prévenir et/ou diminuer une altération de l’immunité innée de la peau ou encore prévenir et/ou diminuer les signes du vieillissement cutanés liés à une micro-inflammation chronique de la peau aussi connue sous le terme‘inflammaging’. RESUME DE L’INVENTION

Un premier objet de l’invention concerne un extrait aqueux de bois de rose, de préférence de bois de rose d’été, obtenu par extraction enzymatique au moyen d’un solvant polaire cosmétiquement acceptable.

Un autre objet de l’invention concerne un procédé de préparation d’un extrait de bois de rose selon l’invention comprenant les étapes : a) addition d'eau à de la matière végétale présentant une taille de particule appropriée, b) addition d'un mélange enzymatique contenant au moins une cellulase, au moins une hémicellulase et au moins une pectinase, et avantageusement en outre au moins une protéase,

c) incubation sous agitation de la matière végétale et du mélange enzymatique pour libérer dans le milieu réactionnel des huiles, des protéines et des sucres fermentescibles, pendant une durée dépendant des rendements recherchés,

d) séparation du milieu réactionnel pour obtenir de l'huile libre, une phase aqueuse contenant des protéines et des sucres fermentescibles, et une phase solide, et

e) séparation de la phase aqueuse et ajout éventuel de conservateurs.

L’invention porte encore sur une composition cosmétique pour application topique sur la peau et/ou les lèvres, en particulier la peau du visage et/ou du corps, comprenant dans un milieu physiologiquement acceptable, au moins une quantité efficace d’au moins un extrait aqueux de bois de rose selon l’invention.

Un autre objet de l’invention est l’utilisation cosmétique non thérapeutique d’au moins un extrait aqueux de bois de rose selon l’invention, en particulier de la variété Evanrat ou rose Jardin de Granville®, en tant qu'agent destiné à prévenir et/ou diminuer les signes du vieillissement cutané, en particulier la perte de tonicité, la perte d’élasticité et/ou la perte de fermeté de la peau, l’altération de la fonction barrière, l’apparition de rides et/ou ridules, l’apparition de tâches pigmentaires cutanées, en particulier le lentigo sénile (tâches de vieillesse) ou le lentigo solaire, une sécheresse cutanée, et/ou un teint terne et inhomogène.

Elle porte également sur un procédé cosmétique non thérapeutique destiné à prévenir et/ou diminuer les signes du vieillissement cutané, en particulier la perte de tonicité, la perte d’élasticité et/ou la perte de fermeté de la peau, l’altération de la fonction barrière, l’apparition de rides et/ou ridules, l’apparition de tâches pigmentaires cutanées, en particulier le lentigo sénile (tâches de vieillesse) ou le lentigo solaire, une sécheresse cutanée, et/ou un teint terne et inhomogène, caractérisé en ce qu'il comprend l'application sur la peau du visage et/ou du corps, d'une composition cosmétique comprenant un extrait aqueux de bois de rose telle que définie dans l’invention.

Par « teint terne et inhomogène », on entend notamment un teint qui manque de lumière et d’éclat, un teint altéré, brouillé, présentant des irrégularités de surface et/ou de couleur, généralement associé à une perception d’inconfort et des manifestations ressenties comme des imperfections cutanées ou désordres esthétiques.

Un autre objet de l’invention est un extrait aqueux de bois de rose selon l’invention ou une composition en comprenant selon l’invention pour une utilisation pour apaiser la peau et/ou pour une utilisation dans la prévention et/ou le traitement de désordres cutanés liés à une micro-inflammation chronique de la peau, en particulier prévenir et/ou diminuer les signes du vieillissement cutané induits par une micro-inflammation chronique de la peau.

Par‘micro-inflammation chronique de la peau’, on entend selon l’invention des processus micro-inflammatoires invisibles (silencieux) se mettant en place de façon localisée au niveau de la peau et qui, s’ils dégénèrent ou sont mal résolus, deviennent chroniques. La micro-inflammation chronique de la peau peut notamment être liée à l’accumulation de dommages tissulaires, la défaillance du système immunitaire ou bien encore à l’accumulation de cellules sénescentes et sécrétant des cytokines pro-inflammatoires. Avec le temps, ces événements micro-inflammatoires à répétition contribuent au vieillissement cutané.

DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION

Extrait de bois de rose et procédé de préparation

Un premier objet de l’invention concerne un extrait aqueux de bois de rose de préférence de bois de rose d’été, obtenu par extraction enzymatique au moyen d’un solvant polaire cosmétiquement acceptable.

On parlera indifféremment d’extrait aqueux ou d’extrait polaire ou d’extrait hydrophile de rose ou d’éco-extrait dans la description. L’extrait aqueux de bois de rose est obtenu avantageusement au moyen d’un solvant polaire cosmétiquement acceptable. Par « extrait de bois de rose » ou « extrait aqueux de bois de rose » selon l’invention, on comprend notamment que les composés polaires (hydrophiles) des bois de rose se sont solubilisés et/ou ont été extraits dans un solvant polaire. Avantageusement, cet extrait de bois de rose est obtenu par un procédé d’éco-extraction. On parlera ainsi d’éco-extrait de bois de rose. L’expression « solvant polaire » signifie que le solvant a une valeur d’indice de Polarité qui est égale ou supérieure à une valeur de 4. L’indice de polarité est une grandeur calculée sur la base de grandeurs thermodynamiques (de solubilité et de changement d’état) qui met en évidence le caractère plus ou moins polaire d’une molécule. On se reportera, pour les indices de polarité des solvants, à l'article de L.R. SNYDER : Classification of the solvent properties of common liquids ; Journal of Chromatography, 92 (1974), 223-230. Les solvants polaires préférés sont ceux constitués d’un composé comprenant au moins une liaison covalente polaire de type O-H.

A titre de solvant polaire cosmétiquement acceptable, on choisit un solvant ou un mélange de solvants choisi(s) parmi l’eau, les alcools en CrC₄, tel que l’éthanol, les glycols, tels que l’éthylène glycol, le glycérol, le butylèneglycol et le propylèneglycol, et leurs mélanges. De préférence, on utilise l’eau.

Selon un mode particulier, ledit extrait est caractérisé en ce qu’il comprend de l’eau en une teneur allant de 94 à 96%, une teneur en extrait sec allant de 3 à 5% et des conservateurs en une teneur allant de 0.5 à 1% en poids par rapport au poids total de l’extrait.

Matériel végétal

Les extraits de l’invention sont des extraits de bois de rose. On parlera indifféremment selon l’invention d’un extrait de rose, d’un extrait de bois de rose, d’un extrait de rosier, d’un extrait de bois de rosier ou d’un extrait en particulier de la variété Evanrat ou rose Jardin de Granville®.

L’homme du métier choisira de préférence des roses sélectionnées dont les propriétés sont préservées par un environnement et un mode d’agriculture biologique. Selon un mode particulier et préféré, on utilisera un extrait de pétales de rose de la variété Evanrat ou rose‘Jardin de Granville®’. Le rosier ou rose‘Jardin de Granville®’ est une variété hybride proposée exclusivement par « Roses anciennes André Eve S. A. S » et protégée par Certificat d’Obtention Végétale sous le N°20110345 avec pour espèce la dénomination Rosa L. et pour la variété la dénomination EVANRAT. Ce rosier buisson appartient au groupe des hybrides modernes, qui, de mai à octobre, se couvre de roses en permanence, montrant ainsi un excellent caractère remontant. Ainsi, selon un mode particulier et préféré de l’invention, l’extrait aqueux de bois de rose autrement nommé extrait de bois de rosier est un extrait de bois de rose de la variété Evanrat ou rose Jardin de Granville®. On distingue deux types de bois de rose selon le moment de l’année où ils sont récoltés :

- Les bois d’hiver, généralement récoltés entre les mois de novembre et d’avril

- Les bois d’été, généralement récoltés entre les mois de mai et d’octobre.

Selon un mode particulier et préféré, on utilisera des bois d’été. On parlera indifféremment dans la description de bois de rose ou bois de rose d’été. Les bois de rose selon l’invention sont obtenus à partir de roses entières fraîchement coupées et sont isolés du reste de la plante par séparation manuelle ou mécanique.

Dans un mode de réalisation particulier, les bois de rose sont directement utilisés en vue de l’extraction.

Dans un autre mode de réalisation, les bois de rose sont préalablement séchés avant extraction.

Selon un mode particulier et préféré, le bois de rose est broyé préalablement à l’étape d’extraction.

Les bois de rose comprennent des sucres monosaccharides (fructose, glucose), et polysaccharides en particulier disaccharides, des polyphénols (catéchine), des acides aminés (majoritairement acide aspartique tyrosine et arginine), des minéraux (cendres, sodium, potassium, calcium), des flavonoïdes (pour la plupart glycosylés) et des tanins.

En particulier, le calcium améliore la différenciation épidermique et renforce la structure de la peau, tandis que le potassium amplifie l’hydratation cutanée et booste l’assimilation de l’énergie. Les phytosucres (fructose, glucose) sont destinés à gorger les cellules cutanées d’énergie.

L’extrait aqueux de bois de rose selon l’invention est un extrait concentré en composés naturels polaires. L’extrait aqueux de bois de rose selon l’invention est distinct d’une eau de rose. Il s’agit ici d’un extrait de bois de rose mettant en œuvre l’extraction de composés naturels de bois de rose en présence de solvants aqueux (polaire) avec ou sans ajout de modificateur de pH, et une mise en œuvre, dans la formulation, sous la forme d’une solution ou concentré aqueux, le solvant du concentré pouvant être le solvant d’extraction et/ou un solvant additionnel. Selon un mode particulier, l’extrait aqueux de bois de rose selon l’invention comprend en outre en faible proportion un extrait de fleurs de rose représentant de 0,01 à 1%, de préférence de 0,05 à 0,5%, de préférence 0,1 à 0,2% de l’extrait aqueux total de rose selon l’invention. Dans ce mode de réalisation, le matériel végétal d’origine comprend des bois de rose et des fleurs de rose dans une proportion 0,01 % fleurs pour 99,99% de bois à 1 % fleurs pour 99% de bois.

Procédé d’extraction

L’extrait aqueux de bois de rose selon l’invention peut être obtenu selon différents procédés d’éco-extraction connus de l’homme du métier et notamment celui décrit ci- après.

Selon un mode particulier et préféré, on utilisera comme matériel végétal dans les procédés d’extraction adaptés à l’invention décrits ci-après, des bois de rose de la variété Evanrat, de préférence la rose Jardin de Granville®, de préférence des bois de rose préalablement séchés.

Par « éco-extraction » on entend un procédé d’extraction permettant de réduire la consommation énergétique, mais aussi l’utilisation de solvants alternatifs et des ressources végétales renouvelables, tout en garantissant un produit/extrait sûr et de qualité. L’Eco extraction privilégie 6 grands principes (Farid Chemat, Dunod, 2010, Eco- Extraction du végétal) :

- Favoriser l’innovation par la sélection variétale et l’utilisation de ressources végétales renouvelables,

- Privilégier les solvants alternatifs dits solvants verts et principalement ceux issus des agro-ressources,

- Réduire la consommation énergétique par l’assistance des technologies innovantes et favoriser la récupération d’énergie,

- Favoriser la création de coproduits au lieu de déchets pour intégrer la voie de la bio ou agro-raffinerie,

- Réduire les opérations unitaires grâce à l’innovation technologique et favoriser les procédés surs, robustes et contrôlés, et

- Privilégier un produit non dénaturé, biodégradable, sans contaminants et surtout porteur de valeurs « extrait ». On utilisera donc avantageusement comme solvant vert polaire : l’eau. Par « extraction solide/liquide » on entend un type d’extraction mettant en contact un solide (matériel bio-sourcé) et un liquide (dit solvant) afin de laisser diffuser/imprégner un ou plusieurs composé(s) soluble(s) dit(s) soluté(s) dans le liquide. Ceci se fait en général grâce à des actions physiques et physico-chimiques plus ou moins rapides. Les bois peuvent être utilisés frais, congelés ou préalablement séchés à l’aide d’outils de séchage conventionnels et connus de l’homme du métier, comme par exemple le séchage à l’air libre, en étuves, par lyophilisation ou zéodratation. Ainsi, selon un mode de réalisation, et préalablement à l’étape d’extraction elle-même, les bois peuvent avoir été séchés et/ou broyés. Selon un autre mode de réalisation, les bois sont utilisés humides puis broyés.

Selon un mode particulier, les bois sont broyés avant extraction, par exemple au moyen d’un mortier, d’un cryobroyage, d’un mixeur, d’un broyeur traditionnel ou d’un centrifugeur selon les méthodes connues de l’homme du métier.

L’extrait aqueux de bois de rose selon l’invention peut être obtenu en particulier selon des procédés d’extraction enzymatique.

Les enzymes choisies hydrolysent certains ou tous les composés du matériel végétal afin de détériorer la paroi cellulaire et donc libérer favorablement les molécules contenues.

On entend par « paroi cellulaire » ou « paroi végétale » ou « paroi pectocellulosique » l’élément de structure cellulaire qui protège chaque cellule végétale. Elle se compose notamment de trois parties :

- la lamelle moyenne : riche en pectine et dépourvue de cellulose,

- la paroi primaire : composée majoritairement de cellulose (9 à 25%), d’hémicellulose (25 à 58%), de pectines (10 à 35%), et de protéines (10%),

- la paroi secondaire : cellulose, hémicellulose. Selon les molécules que l’on cherche à extraire, les enzymes seront adaptées aux parois à hydrolyser pour accéder à ces dites molécules. Avantageusement, on pourra notamment utiliser des enzymes de type cellulase, hémicellulase, pectinase ou protéase, seules ou en combinaison.

On entend par « cellulase » une enzyme qui peut décomposer la cellulose, biopolymère constitué d'une chaîne linéaire de D-glucose et principal constituant de la paroi cellulaire végétale. Le produit final de la dégradation de la cellulose par la cellulase le glucose. Il existe plusieurs types de cellulases comme la béta-glucosidase, l’endo-cellulase, l’exo- cellulase, l’oxydative cellulase ou encore la cellulose phosphorylase. On entend par « hémicellulase » une enzyme qui peut décomposer l’hémicellulose, biopolymère constitutif de la paroi cellulaire végétale permettant notamment le pontage entre les fibres de cellulose, ainsi qu’avec d'autres composés matriciels. Il existe plusieurs types d’hémicellulases comme l’arabinase, la xylanase, ou la galactanase.

On entend par « pectinase » une enzyme capable de dégrader la pectine, polysaccharide présent dans les parois cellulaires végétales. Il existe plusieurs types de pectinases comme l’endopolygalacturanase, ou la pectine méthylestérase.

On entend par « protéase » une enzyme capable de défaire les liaisons peptidiques. Les protéases sont utilisées dans le procédé de l’invention pour hydrolyser les protéines de structure et améliorer la lyse de la matière première, non pour produire des peptides.

On pourra ainsi utiliser une cellulase pour libérer le glucose et la cellulose ; une hemicellulase pour libérer les mono et oligomères de sucres réduits ; une pectinase pour libérer les acides uroniques ; et avantageusement une protéase pour hydrolyser les protéines de structure et améliorer la lyse de la matière première.

Dans un mode de réalisation préféré, l’éco-extraction est réalisée au moyen du protocole décrit dans la demande de brevet WO2011045387 (correspondant à la demande de brevet FR2351461) au nom de l’Institut National Polytechnique de Lorraine INPL. Il s’agit d’une technologie alternative répondant aux contraintes réglementaires et environnementales tout en restant compétitif économiquement. Ce procédé innovant, permet d’extraire de la matière végétale, en une seule étape, trois types de produits à savoir une huile (riche en nutriments polyphénols, stérols, vitamine E...), un extrait aqueux ainsi qu’un tourteau (phase solide).

Ce procédé comprend notamment les étapes suivantes :

a) addition d'eau à de la matière végétale présentant une taille de particule appropriée,

b) addition d'un mélange enzymatique contenant au moins une cellulase, au moins une hémicellulase et au moins une pectinase, et avantageusement en outre au moins une protéase,

c) incubation sous agitation de la matière végétale et du mélange enzymatique pour libérer dans le milieu réactionnel des huiles, des protéines et des sucres fermentescibles, pendant une durée dépendant des rendements recherchés, d) séparation du milieu réactionnel pour obtenir de l'huile libre, une phase aqueuse contenant des protéines et des sucres fermentescibles, et une phase solide, et e) séparation de la phase aqueuse et ajout éventuel de conservateurs. Ainsi, on obtient à l’issue de l’étape de séparation (e) une phase aqueuse correspondant à l’extrait de bois de rose selon l’invention. Ainsi, un autre objet de l’invention concerne un procédé de préparation d’un extrait de bois de rose selon l’invention comprenant les étapes :

a) addition d'eau au bois de rose préalablement broyé présentant une taille de particule appropriée,

c) incubation sous agitation du bois de rose préalablement broyé et du mélange enzymatique pour libérer dans le milieu réactionnel des huiles, des protéines et des sucres fermentescibles, pendant une durée dépendant des rendements recherchés,

e) séparation de la phase aqueuse et ajout éventuel de conservateurs.

Ledit extrait de bois de rose selon l’invention étant obtenu après l’étape de séparation (e).

Avantageusement, ce procédé d’extraction ne fait pas intervenir de solvants organiques, comme l'hexane ce qui pourrait entraîner de nombreux problèmes de sécurité des installations et des personnels, de santé humaine et de préservation de l'environnement. Cette technologie permet ainsi de réduire les émissions de composés organiques volatiles (COV). Il s’agit ainsi d’un procédé propre permettant d'extraire sous forme d’huile et/ou d’extrait aqueux des protéines, sucres et autres co-produits de hautes qualités et directement utilisables en cosmétique.

L’étape de broyage nécessite d’ajuster la durée, et la vitesse en fonction de l’instrument employé et de la nature sèche ou humide du matériau à broyer.

L’étape de d’addition d’eau nécessite d’ajuster la vitesse, la durée, le ratio eau/solide en fonction notamment de l’instrument à employer. L’étape d’hydrolyse enzymatique nécessite de déterminer les enzymes à utiliser et d’ajuster divers paramètres tels que le ratio enzyme/substrat, le temps d’hydrolyse, la vitesse d’agitation, le pH et la température.

L’étape d’inactivation des enzymes endogènes ou exogènes nécessite d’ajuster des paramètres tels que la température d’inactivation, la température, la durée, de même que le pH.

L’étape de centrifugation, nécessite d’ajuster des paramètres tels que la vitesse, la température, la durée et le pH.

Selon un mode particulier, à l’étape a), la taille de particule appropriée de la matière végétale est avantageusement obtenue par broyage de ladite matière végétale. Le broyage doit être le plus fin possible pour favoriser l'action des enzymes. Idéalement, toutes les particules doivent avoir une taille proche de 50 pm, de préférence proche de 10 pm.

De préférence, la masse d'eau ajoutée à la matière végétale est égale à 1 à 2 fois la masse de ladite matière végétale et ne dépasse pas cette quantité.

En particulier à l’étape b), le rapport entre l'activité de la pectinase et l'activité de la cellulase étant d'au moins 0.14, de préférence compris entre 0.3 et 2.5, et plus préférentiellement entre 0.35 et 0.45, et le rapport entre l'activité de la pectinase et l'activité de l'hémicellulase étant d'au moins 7.10³ ; de préférence compris entre 1.10² et 0.5, et plus préférentiellement entre 1.10² et 2.10².

Plus particulièrement, le mélange enzymatique utilisé contient au moins une cellulase, au moins une hemicellulase, au moins une pectinase, et avantageusement en outre au moins une protéase. Selon un mode particulier, la ou les cellulase(s), hemicellulase(s) et pectinase(s) représentent 75% du mélange enzymatique et la ou les protéase(s) représentent 25% dudit mélange enzymatique. Selon un mode particulier, les cellulases sont présentes en une teneur allant de 1 à 50%, de préférence de 20 à 30% en poids du mélange enzymatique, les hémicellulases sont présentes en une teneur allant de 1 à 50%, de préférence de 20 à 30% en poids du mélange enzymatique et les pectinases sont présentes en une teneur allant de 1 à 50%, de préférence de 20 à 30% en poids du mélange enzymatique. Et avantageusement les protéases sont présentes en une teneur allant de 1 à 50%, de préférence de 20 à 30% en poids du mélange enzymatique.

Dans un mode de réalisation préféré le mélange enzymatique utilisé contient 25% de cellulases, 25% d’hémicellulases, 25% de pectinases et 25% de protéases. De préférence, la quantité utilisée du mélange enzymatique tel que défini ci-dessus est comprise entre 0.25% et 10%, de préférence entre 1 % et 6%, en volume du mélange eau/matière végétale.

Avantageusement, l'incubation selon l'étape c) est réalisée pendant 2 à 20 heures, de préférence entre 4 et 12 heures, à une température comprise entre 25°C et 75°C, de préférence entre 40°C et 60°C, et de préférence autour de 50°C.

La réaction d'hydrolyse est ensuite stoppée par désactivation des enzymes par chauffage de préférence entre 80°C et 105°C pendant par exemple 5 à 20 minutes

Puis le milieu réactionnel est séparé, selon l'étape d), en utilisant toutes les techniques de séparation connues adaptées, telle que la centrifugation ou la décantation.

Selon un mode particulier, le mélange est préfiltré sur tamis de 0.8mm puis 0.5mm afin de retirer la partie le plus importante de la phase solide, puis une filtration stérilisante est avantageusement réalisée sur plaques clarifiantes d’une taille de pores de 0.2pm, à une pression de 2 Bars. La phase aqueuse obtenue après filtration stérilisante est stabilisée avec les conservateurs (acide citrique, sorbate de potassium, benzoate de sodium).

Ainsi selon un mode de réalisation préféré, ledit extrait aqueux de bois de rose, de préférence de bois de rose d’été, est obtenu par un procédé d’extraction comprenant les étapes : a) addition d'eau au bois de rose préalablement broyé présentant une taille de particule appropriée,

b) addition d'un mélange enzymatique contenant au moins une cellulase, au moins une hémicellulase et au moins une pectinase, et avantageusement au moins une protéase,

c) incubation sous agitation du bois de rose préalablement broyé et du mélange enzymatique pour libérer dans le milieu réactionnel des huiles si présentes, des protéines et des sucres fermentescibles, pendant une durée dépendant des rendements recherchés,

e) séparation de la phase aqueuse et ajout éventuel de conservateurs. L’extrait aqueux de bois de rose selon l’invention est caractérisé notamment par la présence d’acides aminés (acide aspartique, tyrosine, arginine) et de sucres totaux (glucose, fructose).

L’extrait aqueux de bois de rose selon l’invention se caractérise également par le fait qu’il ne s’agit pas d’un extrait fermenté.

Selon un mode particulier, l’extrait aqueux de bois de rose obtenu selon l’invention comprend de l’eau en une teneur allant de 94 à 96%, une teneur en extrait sec allant de 1 à 6% et préférentiellement de 3 à 5% et des conservateurs en une teneur allant de 0.5 à 1 % en poids par rapport au poids total de l’extrait. Cet extrait de bois de rose selon l’invention est dénommé en nom INCI water (and) rose extract (and) citric acid (and) potassium sorbate (and) sodium benzoate.

Composition et galénique

Par‘application topique’, on entend une composition destinée à une application sur les matières kératiniques. De fait, une composition orale n’est pas destinée à une application topique sur la peau.

L’extrait aqueux de bois de rose est présent dans la composition cosmétique de l’invention dans une quantité efficace pour obtenir l’effet recherché.

En particulier, il est présent en une teneur allant de 0,1 % à 80%, notamment de 0,5% à 60% en poids de matière première par rapport au poids total de la composition. Selon un premier mode de réalisation, il est présent en une teneur allant de 50% à 80%, en particulier de 60% à 75% en poids de matière première par rapport au poids total de la composition. Selon un autre mode particulier de réalisation, il est présent en une teneur allant de 0,1 % à 20%, de préférence de 0,5% à 10%, et de préférence encore de 1 % à 5% en poids de matière première par rapport au poids total de la composition. Des exemples illustratifs sont donnés ci-après. La composition cosmétique de l’invention peut se présenter sous toute forme galénique adaptée à une application topique sur les matières kératiniques et en particulier la peau, par exemple un sérum, une émulsion huile- dans-eau, une émulsion eau-dans-huile, une émulsion multiple, une microémulsion, une lotion, une suspension, un gel aqueux, un stick, une poudre. La composition selon l’invention peut être une composition de soin et/ou de maquillage des matières kératiniques.

Par « matière kératinique » on entend la peau et/ou ses phanères, et les lèvres, en particulier la peau du visage et/ou du corps et les lèvres.

La composition est préférentiellement destinée à être appliquée sur la peau du visage et/ou du corps ou sur les lèvres et se présente par exemple sous la forme d’une lotion, d'une crème de soin, d’un sérum, d'un fluide pour le visage, d’un gel de soin pour le visage et/ou le corps, d’une composition de soin des lèvres, d’un baume à lèvres, d’un rouge à lèvre, ou d’un gloss.

Selon un mode particulier, la composition cosmétique selon l’invention est sous la forme d’une crème de soin et/ou de maquillage pour le visage.

Selon un autre mode particulier, la composition cosmétique selon l’invention est sous la forme d’un gel aqueux pour le contour des yeux.

Selon un autre mode particulier, la composition cosmétique selon l’invention est sous la forme d’une composition de soin et/ou de maquillage pour les lèvres.

La phase aqueuse représente généralement de 1 à 99% en poids, par rapport au poids total de ladite composition.

Phase aqueuse

La phase aqueuse de la composition selon l'invention comprend de l'eau et éventuellement un solvant hydrosoluble.

On entend par‘solvant hydrosoluble’ selon l’invention, un composé liquide à température ambiante et miscible à l'eau (miscibilité dans l'eau supérieure à 50 % en poids à 25 °C et pression atmosphérique). On peut citer notamment :

les mono-alcools inférieurs en C1-C5 tels que l'éthanol, l'isopropanol et leurs mélanges ;

les glycols en C2-C8 tels que l'éthylène glycol, le propylène glycol, le 1 ,3- butylène glycol, le dipropylène glycol, et leurs mélanges ;

les polyols en C2-C32 tels que les polyglycérols, les polyéthylènes glycols, et leurs mélanges,

et leurs mélanges. Elle peut comprendre également des gélifiants hydrophiles, des antioxydants, des conservateurs et leurs mélanges.

A titre de gélifiants hydrophiles, on peut citer notamment les polymères d’acide acrylique tels que ceux de Nom INCI Carbomer ou de référence commerciale Carbopol®, les copolymères d’acides acrylique et méthacrylique, les polymères carboxyvinyliques, les épaississants associatifs de type acrylique ou polyuréthane, les gélifiants polysaccharidiques tels que les alginates, les gommes naturelles ou modifiées telles que les gommes de xanthane, les gommes de carraghénanes, les gommes d’agar, les gommes de guar, les gommes de gellane, les chitosans, les mannanes, les pullulanes, les dérivés de la cellulose, la gélatine, les pectines, les gélifiants minéraux tels que les bentones ou les silices modifiées, et leurs mélanges.

Par gomme naturelle ou modifiée on entend un polysaccharide éventuellement modifié qui s'hydrate en milieu aqueux pour former une solution visqueuse ou une dispersion. Parmi les gommes naturelles on inclut les extraits d'algues, les exsudais de plantes et les gommes extraites de graines ou de racines végétales et celles obtenues par fermentation microbiologique. Les gommes modifiées ou semi-synthétiques comprennent les dérivés de la cellulose et de l'amidon et, de façon générale, les dérivés de toutes les gommes naturelles.

Selon un mode particulier, la composition cosmétique de l’invention comprend une phase aqueuse gélifiée, notamment par la présence d’au moins un polymère acrylique, en particulier un polymère d’acide acrylique ou copolymère d’acide acrylique et méthacrylique.

La teneur en gélifiant(s) hydrophile(s) dans la composition cosmétique de l’invention ira généralement de 0,5 à 5%, notamment de 0,7 à 4%, de préférence de 0,9 à 3% et de préférence encore de 1 à 2% en poids par rapport au poids total de ladite composition.

Phase grasse ou huileuse

La composition cosmétique de l’invention peut comprendre en outre une phase grasse (corps gras solides) ou huileuse. On entend par « phase huileuse » une huile ou un mélange d'huiles miscibles entre elles. Par « huile », on entend, au sens de l'invention, un corps gras, non soluble dans l'eau, liquide à 25°C et pression atmosphérique. Une phase huileuse selon l’invention peut comprendre des huiles hydrocarbonées, siliconées, fluorées ou non, et leurs mélanges.

Ces huiles peuvent être volatiles ou non volatiles, végétale, minérale ou synthétique.

Par‘huile hydrocarbonée’, on entend selon l’invention une huile contenant principalement des atomes d’hydrogène et de carbone.

Par‘huile siliconée’, on entend selon l’invention une huile comprenant au moins un atome de silicium, et notamment au moins un groupe Si-O.

Par‘huile fluorée’, on entend selon l’invention une huile comprenant au moins un atome de fluor.

Comme huiles non volatiles hydrocarbonées, on peut citer notamment les huiles hydrocarbonées, les huiles hydrocarbonées d’origine végétale, les éthers de synthèse en C10-C40, les esters de synthèse en C10-C40, les alcools gras en C12-C26, les acides gras supérieurs en C12-C22, et leurs mélanges.

Comme huiles non volatiles siliconées, on peut citer notamment les huiles siliconées phénylées, les huiles siliconées non phénylées, et leurs mélanges.

Les huiles pourront être présentes dans la composition de l’invention en une teneur allant de 0,01 à 95 % en poids par rapport au poids total de la composition.

La phase grasse ou huileuse peut comprendre également des gélifiants lipophiles, des polymères filmogènes, des tensioactifs, des antioxydants et leurs mélanges.

Selon un mode particulier de l’invention, la composition cosmétique est sous la forme d’une solution, d’une émulsion, d’un sérum ou d’un gel.

Selon un mode particulier, la composition cosmétique de l’invention ne comprend pas d’autre extrait de rose que des extraits de rose de la variété Evanrat ou Rose Jardin de Granville®.

Ingrédients additionnels

La composition de l'invention peut également comprendre tout additif usuellement utilisé en cosmétique tels que des filtres UV, des antioxydants, des parfums, des agents actifs cosmétiques, comme par exemple des agents émollients, des agents hydratants, des vitamines, des agents anti-âge, des agents liftants, des agents tenseurs, des agents repulpants, des agents apaisants, des agents antipollution, des agents éclaircissants ou dépigmentants, des charges, des nacres et leurs mélanges.

Ainsi selon un mode de réalisation particulier, l’invention porte sur une composition cosmétique pour application topique sur la peau et/ou les lèvres, en particulier la peau du visage et/ou du corps, comprenant dans un milieu physiologiquement acceptable, au moins une quantité efficace d’au moins un extrait aqueux de bois de rose selon l’invention et au moins un adjuvant cosmétique choisi dans le groupe constitué par les filtres UV, les antioxydants, les parfums, les agents émollients, les agents hydratants, les vitamines, les agents anti-âge, les agents liftants, les agents tenseurs, les agents repulpants, les agents apaisants, les agents antipollution, les agents éclaircissants ou dépigmentants, les charges, les nacres et leurs mélanges.

Selon un mode particulier et préféré, la composition comprend en outre au moins un actif cosmétique choisi parmi un agent antioxydant, un agent liftant, un agent tenseur, un agent repulpant, un agent apaisant, un agent anti-pollution et/ou un agent dépigmentant. Elle peut également comprendre des charges et/ou des nacres, en particulier des nacres blanches, destinées à masquer les imperfections de couleur (cernes) et illuminer le regard.

Utilisations cosmétiques et autres utilisations L’invention porte également sur l’utilisation cosmétique non thérapeutique d’au moins un extrait aqueux de bois de rose selon l’invention, en particulier de la variété Evanrat ou rose Jardin de Granville®, en tant qu'agent destiné à prévenir et/ou diminuer les signes du vieillissement cutané, en particulier la perte de tonicité, la perte d’élasticité et/ou la perte de fermeté de la peau, l’altération de la fonction barrière, l’apparition de rides et/ou ridules, une sécheresse cutanée, et/ou un teint terne et inhomogène.

Elle porte également sur un procédé cosmétique non thérapeutique destiné à prévenir et/ou diminuer les signes du vieillissement cutané, en particulier la perte de tonicité, la perte d’élasticité et/ou la perte de fermeté de la peau, l’altération de la fonction barrière, l’apparition de rides et/ou ridules, une sécheresse cutanée, et/ou un teint terne et inhomogène, caractérisé en ce qu'il comprend l'application sur la peau du visage et/ou du corps et/ou des lèvres, d'une composition cosmétique comprenant un extrait aqueux de bois de rose telle que définie dans l’invention. Par‘peau et/ou lèvres’ selon l’invention, on entend notamment une peau et/ou des lèvres saines, c’est-à-dire ne présentant pas de troubles ou de désordres qui relèveraient d’un état pathologique (sujets‘non sains’, atteints d’une pathologie).

Selon un mode particulier, la composition est appliquée sur une peau sèche, fragile, sensible, stressée, et notamment une peau fatiguée ayant perdu sa fermeté, sa souplesse et son élasticité.

Selon un autre mode particulier, la composition est appliquée sur des lèvres sèches, fragiles, sensibles et/ou stressées, Selon un mode particulier, la composition est appliquée sur des lèvres sèches et/ou fragiles. Selon un autre mode, sur des lèvres stressées. Selon un autre mode, sur des lèvres sensibles.

Un autre objet de l’invention est un extrait aqueux de bois de rose selon l’invention ou une composition en comprenant selon l’invention pour une utilisation pour apaiser la peau, et/ou prévenir et/ou traiter les désordres cutanés liés à une micro-inflammation chronique de la peau, en particulier prévenir et/ou diminuer les signes du vieillissement cutané induits par une micro-inflammation chronique de la peau.

Selon cet aspect de l’invention, l’extrait aqueux de bois de rose est utilisé sur des peaux présentant des troubles liés à une micro-inflammation chronique, notamment une inflammation due aux stress endogènes et/ou exogènes ayant des effets d’inflammaging.

La présente invention porte encore sur un extrait aqueux de bois de rose selon l’invention ou une composition en comprenant pour une utilisation pour diminuer le lentigo solaire.

Selon cet aspect de l’invention, l’extrait aqueux de bois de rose est utilisé sur des peaux présentant des altérations liées au soleil.

La composition peut être appliquée sur la peau du visage et/ou du corps ou sur les lèvres. Selon un mode particulier, la composition est appliquée sur le visage et/ou le corps.

Selon un autre aspect, la présente invention porte sur un extrait de bois de rose selon l’invention, ou d’une composition en contenant pour apaiser la peau, et/ou prévenir et/ou traiter les désordres cutanés liés à une micro-inflammation chronique de la peau.

La présente invention porte encore sur un extrait de bois de rose selon l’invention, ou une composition en contenant pour diminuer le lentigo solaire.

Selon un autre aspect, la présente invention porte sur une méthode de traitement des matières kératiniques, de préférence de la peau et/ou des lèvres, pour apaiser la peau, et/ou prévenir et/ou traiter les désordres cutanés liés à une micro-inflammation chronique de la peau, comprenant l’administration à une personne qui en a besoin, d’un extrait de bois de rose selon l’invention, ou une composition en contenant.

L’invention porte également sur une méthode de traitement des matières kératiniques, de préférence de la peau et/ou des lèvres, pour diminuer le lentigo solaire, comprenant l’administration à une personne qui en a besoin, d’un extrait de bois de rose selon l’invention, ou une composition en contenant.

L’invention va désormais être illustrée dans les exemples non limitatifs suivants. Sauf indication contraire, les % sont exprimés en % en poids par rapport au poids total de la composition.

EXEMPLES :

Exemple 1 : Extraction à partir de bois de rose et analyse de ces extraits Préparation du végétal

On utilise des bois de rose et fleurs de rose de la variété Evanrat, en particulier de la variété rose Jardin de Granville®.

Les matières premières, ici le bois de rose, éventuellement additionné de fleurs de rose, ont été réduites en poudre en trois étapes.

Etape 1 : passage dans un broyeur de jardin afin d’obtenir des tronçons de deux centimètres

Etape 2 : passage dans un broyeur industriel

Mise en solution

L’extraction enzymatique a été réalisée dans un réacteur d'une contenance maximale de 70I. Le réacteur est agité par hélice et est thermostaté par double enveloppe.

16Kg de poudre de bois de rose à 0.1 % de fleurs de rose sont dispersés et mis en suspension dans 47,5Kg d'eau.

Afin de désactiver les enzymes endogènes, le mélange a été élevé à une température de 85°C pendant 1 min puis stabilisé à 50°C.

Lyse des parois végétales

0.8 Kg d’un cocktail Enzymatique HEL1 PR1 comprenant un mélange de cellulases, d’hémicellulases et de pectinases à 75% et des protéases à 25%, ont été ajoutés au mélange réactionnel correspondant (5% w/w). La réaction est poursuivie pendant 4 heures, la température est maintenue à 50°C.

Inactivation des enzymes

Le mélange a été porté à 85°C pendant 1 min afin d'inactiver les enzymes, puis ramené à 35°C.

Pré filtration

Le mélange est préfiltré sur tamis de 0.8mm puis 0.5mm afin de retirer la partie le plus importante de la phase solide, puis sur un drap.

Filtration stérilisante Une filtration a été réalisée sur plaques clarifiantes (PALL corporation) d’une taille de pores de 0.2pm, à une pression de 2 Bars.

Formulation

La phase aqueuse obtenue après filtration stérilisante est stabilisée avec les conservateurs suivants :

- Acide citrique

- Sorbate de potassium et

- Benzoate de sodium

On obtient, après filtration, un extrait aqueux de bois de rose à 3.7% en poids de matière sèche par rapport au poids total de l’extrait. Cet extrait est utilisé dans les exemples suivants visant à mettre en évidence ses effets sur la peau ; les exemples suivants utilisent des cultures de kératinocytes et/ou mélanocytes.

Des dosages réalisés sur cet extrait aqueux non stabilisé par des conservateurs donnent les résultats suivants :

Polyphénols totaux (g/L) : 2.5

Sucres réducteurs (g/L) : 16.2

Azote protéique (g/L) : 0.64

Protéines totales (g/L) : < 6

Glucose (g/100g) : 1.4 (±0.8)

Fructose (g/100g) : 0.3 (±0.3) Exemple 2 : Protocole d’étude de l’expression des gènes d’intérêt en culture de kératinocytes

Des kératinocytes humains normaux (KH N) sont mis en culture puis traités avec l’extrait aqueux de bois de Rose tel que préparé à l’exemple 1.

Après traitement des KH N, une étude par Taqman Low Density Array (TLDA) sur les gènes étudiés est effectuée à partir des ADNc obtenus après transcription inverse des ARN totaux extraits.

L’extrait aqueux de bois de rose est testé à 0.1 % ou 0.25% en poids de matière première (excipient eau).

Culture des KHN

Les kératinocytes humains normaux sont issus d’un prélèvement cutané issu de chirurgie plastique. Les cellules sont cultivées dans un milieu Epilife complet avec une densité d’ensemencement de 50.000 cellules par puits, dans des plaques 12 puits. A sub confluence, les cellules sont traitées 24 heures avec les doses d’extraits de rose décrites ci-dessus.

Technologie TLDA (TagMan Low Density Array)

Obtention des ARN totaux

Le milieu de culture des cellules est éliminé, et 250 pL de tampon de lyse RLT (fourni dans le kit Nucleospin RNA trace, Macherey-Nagel) sont ajoutés. Les cellules sont raclées à l’aide d’un Cell Scraper puis, le lysat cellulaire est récupéré dans une deepwell 1 ,2 mL (fourni_dans le kit Nucleospin RNA). Les ARN totaux sont extraits selon les protocoles définis.

Les solutions d’ARN totaux obtenues sont dosées, et leur qualité vérifiée, à l'aide d'un lecteur de microplaques, le spectrostarNANO (BMG Labtech) couplé au MicrolabSTAR. Cet appareil est relié à l'ordinateur pilotant la plateforme Robotique et possède le logiciel spécifique d'analyse des résultats (logiciel MARS). La technique nécessite une micro plaque de 384 puits (LoBase), un contrôle positif (RNA 250, AM7155, Thermofisher) permettant de valider les pipetages réalisés par le robot ainsi que les valeurs générées par le lecteur spectrostarNANO.

Synthèse des ADN complémentaires

Le kit de reverse transcription (RT) utilisé est le High Capacity Reverse Transcription Kit (Thermo Fisher). Il a été utilisé selon le protocole fourni. 500 ng d’ARN totaux sont dilués dans de l’eau pour un volume final de 25 pL. Ils sont ensuite incubés pendant 10 minutes à 25°C puis 2 heures à 37°C en présence de 25 pL de mélange réactionnel de High Capacity Reverse Transcription Kit 2X préalablement préparé comme indiqué ci-dessous. Les différentes incubations sont faites au sein du TRobot (Biométra).

Tableau 1 : Mélange réactionnel High Capacity Reverse Transcription Kit 2X pour 1 réaction

PCR-TagMan Low Density Array 15 pl_ de chaque RT sont mélangés à 60 mI d’eau puis 75 mI_ de TaqMan Gene

Expression master mix (ThermoFisher), contenant l’ADN polymerase, sont ajoutés. Après homogénéisation, 100 mI_ sont déposés sur les cartes microfluidiques contenant les sondes correspondant aux gènes testés (tableau 2 ci-dessous), ces dernières sont centrifugées puis scellées. Le CD Rom correspondant au profil des gènes déposés sur les plaques est chargé dans le logiciel SDS 2.3, précisant l’emplacement de chaque gène sur la carte. Le gène contrôle (ou « endogeneous » gene) à utiliser pour la normalisation des résultats est à indiquer avant le lancement de la PCR. Cette dernière est réalisée selon le protocole fourni par Applied Biosystems dans l’appareil ABI Prism 7900HT Sequence détection System. Les étapes de la qPCR sont 2 min à 50°C, 10 min à 94,5°C puis 30s à 97°C et 1 min à 59,7°C pour 40 cycles. En fonction des effets recherchés, l’Homme du métier détermine quels sont les gènes pertinents à inclure dans l’étude ; il relève de ses connaissances générales de déterminer et d’optimiser pour chaque gène les séquences nucléotidiques des amorces PCR à utiliser.

Analyses statistiques La PCR quantitative en temps réel peut être exploitée si son efficacité est comprise entre 90% et 110%. Pour chaque échantillon, le nombre de cycles auquel apparaît le signal est déterminé par le logiciel SDS 2.3. Pour un même essai, les niveaux d’expression des transcrits d’intérêt obtenus sont normalisés par rapport à la valeur obtenue pour le gène de ménage Beta-2-microglobuline. Ce gène dont l’expression est constitutive et invariante permet de s’affranchir toutes variations induites au cours de l’expérience (dosage des ARNs totaux, pipetages, étape de réverse transcription, PCR dans l’appareillage).

Dans la méthode de RT-PCR TLDA, la quantification est effectuée en utilisant la méthode comparative de AACt. Les valeurs de quantification relative (RQ) obtenues correspondent au niveau d’amplitude (x fois plus ou moins que le contrôle) de l’expression par rapport à notre contrôle ici le non irradié. Le RQ est obtenu par le calcul suivant où le contrôle est égal à 1 :

ACt traité = Ct gène cible traité - Ct gène de ménage traité

ACt non traité Ct gène cible non traité - Ct gène de ménage non traité

Afin d’évaluer des variations d’activité transcriptionnelle statistiquement significative, nous utiliserons le test t de Student. Chaque condition est réalisée en triplicate (3 non traités et 3 traités dans les mêmes conditions). Le test-F de Fischer est tout d’abord appliqué en comparant les deux matrices de données. Lorsque la valeur est supérieure à a = 0,05 alors la variance pour le test t de Student est de 2, lorsque le test-F de Fischer est inférieur à a = 0,05 alors la variance sera égale à 3. Les variations transcriptionnelles retenues seront celles qui ont un test t de Student inférieur à a = 0,05. Les résultats sont présentés en moyenne sur n=3. Le test t de Student a été utilisé pour comparer l’effet entre les cellules traitées et non traitées.

Les résultats sont considérés comme significatifs pour p<0,05(*) ou p<0,01(**).

Les résultats sont présentés dans le tableau 3 suivant :

Exemple 3 : Effet de l’extrait aqueux de bois de rose sur le stress oxydant

Nous avons étudié l’effet de l’extrait de bois de rose selon l’invention sur la stimulation de l’expression génique d’enzymes anti-oxydantes endogènes, qui participent à neutraliser les radicaux libres et ainsi à protéger les cellules de la peau notamment contre le vieillissement. Cette étude a été réalisée sur culture de kératinocytes en suivant le protocole détaillé dans l’exemple 2.

Tableau 2 : référence des gènes étudiés

Tableau 3 : Modulation de l’expression des gènes d’intérêt après traitement par l’extrait de bois de rose selon l’invention

Ces résultats montrent que l’extrait aqueux de bois de rose selon l’invention stimule des gènes impliqués dans la réponse au stress oxydant, et permet ainsi de limiter l’accumulation de radicaux libres. L’extrait aqueux de bois de rose est donc avantageux pour une utilisation destinée à prévenir et/ou diminuer les réactions cutanées notamment causées par l’environnement, la pollution, le tabac et ainsi à lutter contre le vieillissement cellulaire de la peau.

Exemple 4 : Effet de l’extrait aqueux de bois de rose sur la fonction barrière

Nous avons étudié l’effet de l’extrait de bois de rose selon l’invention sur l’expression de gènes impliqués dans la cohésion cellulaire, la différentiation épidermique, ou l’homéostasie de l’épiderme et ainsi participant à la régulation de la fonction barrière cutanée. Cette étude a été réalisée sur culture de kératinocytes en suivant le protocole détaillé dans l’exemple 2.

Tableau 4 : référence des gènes étudiés

Tableau 5 : Modulation de l’expression des gènes d’intérêt après traitement par l’extrait de bois de rose selon l’invention

Ces résultats montrent que l’extrait aqueux de bois de rose selon l’invention stimule de nombreux médiateurs de la différenciation épidermique et de la cohésion cellulaire. L’extrait aqueux de bois de rose selon l’invention est donc avantageux pour favoriser et/ou stimuler la fonction barrière cutanée et notamment pour promouvoir la fermeté, la souplesse et l’élasticité de la peau. Exemple 5 : Effet de l’extrait aqueux de bois de rose sur le transfert de mélanine

L’objectif de cette étude est d’étudier l’effet supposé dépigmentant de l’extrait de bois de rose selon l’invention. Cette évaluation est réalisée par mesure du taux de transfert de mélanine dans un modèle de co-culture kératinocyte/mélanocyte. Modèle de co-culture KHN/MHN

Les KHN sont ensemencés à raison de 50000 cellules/puits dans 1 ml d’un mélange de milieu Epilife et M254 (Invitrogen), respectivement 25% et 75%, dans des supports de culture 24 puits.

Après 24 heures de culture, les MHN sont ajoutés à raison de 4000 cellules/puits dans 400 pL/puits dans le même milieu renouvelé.

Traitement des cellules

Après 24 heures de culture à 37°C, la co-culture est traitée ou non par des actifs (l’extrait de bois de rose selon l’invention ou un témoin positif). Un témoin non traité et un témoin positif, le niacinamide (Sigma) à une concentration de 10 mMoI/L sont inclus dans l’étude.

Les cellules sont traitées pendant 48 heures sans renouvellement avec l’extrait de bois de rose selon l’invention à 0.1 % ou avec le niacinamide pour la condition contrôle positif.

Immunomarguage Après 48 heures de traitement, le milieu de culture est éliminé. Les cellules sont rincées au PBS (Invitrogen), puis fixées à la formaline (Sigma) pendant 10 minutes.

Après rinçage au PBS, les puits de culture sont remplis avec une solution de PBS/Triton 0,1 % (Sigma) pendant 10 minutes afin de perméabiliser les membranes des cellules fixées, puis rincées 2 fois au PBS. Les cellules sont recouvertes d’une solution de PBS/BSA 1% (Sigma). Après 30 minutes à température ambiante, la solution de PBS/BSA est éliminée. Les cellules sont alors recouvertes d’une solution d’anticorps primaires anti-melanoma marker HMB45 (Dako, , Mouse) dilué au 1/150ème dans la solution de PBS-BSA 1%, pendant 2 heures à température ambiante. Les cellules sont ensuite rincées 3 fois dans une solution de PBS. Les cellules sont ensuite recouvertes d’une solution d’anticorps secondaires anti-mouse (Alexa fluor 568, goat anti-mouse, Invitrogen) dilué au 1/300ème dans une solution de PBS-BSA 1%. Une coloration des noyaux cellulaires est réalisée au DAPI dilué au 1/100ème (Invitrogen) ainsi qu’un marquage de l’actine avec la phalloïdine Alexa Fluor 488 diluée au 1/100ème dans la solution d’anticorps secondaire. Les cellules sont incubées pendant 60 minutes à température ambiante à l’abri de la lumière. Les puits de culture sont rincés 3 fois dans du PBS puis quelques gouttes de milieu de montage (DAKO) sont déposées sur les cellules.

Les plaques sont conservées à 4°C et à l’obscurité jusqu’à l’acquisition des images. Acquisition des images par HCS

Les plaques sont scannées à l’ArrayScan XTi de Thermo Cellomics selon les recommandations du fournisseur.

Analyse d’images Les images sont analysées à l’aide du logiciel d'analyse Cell Profiler. Un programme est créé afin de quantifier le nombre de mélanosomes transférés par surface de kératinocytes. Les résultats sont transférés directement dans un fichier Microsoft Excel.

Analyse statistique

L’analyse statistique des résultats est faite à l’aide du logiciel Microsoft Excel. Cette analyse consiste en un calcul de la moyenne, de l’écart type et de l’intervalle de confiance (a = 0,05) du nombre de mélanosomes transférés par surface de kératinocytes. Afin d’évaluer des variations statistiquement significatives, le test-T de Student est utilisé. Le test-F de Fischer est tout d’abord appliqué en comparant les deux matrices de données. Lorsque la valeur est supérieure à a = 0,05 alors la variance pour le test t de Student est de 2, lorsque le test-F de Fischer est inférieur à a = 0,05 alors la variance sera égale à 3. Les variations retenues seront celles qui ont un test t de Student inférieur à a = 0,05.

Résultats

Le témoin positif ainsi que les différentes doses d’ingrédients testés sont comparés au témoin non traité. On observe une diminution du transfert de mélanosomes de -30 % pour le témoin positif (niacinamide) par rapport au témoin non traité. Concernant l’extrait de bois de rose à la dose de 0.1%, on observe une diminution significative de -30% du nombre de mélanosomes transférés par kératinocyte par rapport au témoin non traité, soit un niveau équivalent au témoin positif niacinamide.

Cette étude met donc en évidence l’effet dépigmentant de l’extrait de bois de rose. L’utilisation de cet extrait est donc particulièrement avantageuse pour prévenir et/ou traiter l’aspect inhomogène du teint, l’apparition de tâches pigmentaires cutanées, ou tâches de vieillesse, en particulier sur le dos des mains, sur le visage, le décolleté, ou encore le crâne des hommes.

Exemple 6 : Effet de l’extrait aqueux de bois de rose sur l’immunité innée

Nous avons étudié l’effet de l’extrait de bois de rose selon l’invention sur l’expression des gènes codant pour des peptides antibactériens et donc impliqués dans l’immunité innée. Cette étude a été réalisée sur culture de kératinocytes en suivant le protocole détaillé dans l’exemple 2.

Tableau 6 : référence des gènes étudiés

Tableau 7 : Modulation de l’expression des gènes d’intérêt après traitement par l’extrait de bois de rose selon l’invention

On observe dans cette étude une forte stimulation de l’expression de gènes codant pour des peptides antibactériens, ce qui met en avant l’effet bénéfique de l’extrait de bois de rose selon l’invention sur sa capacité à promouvoir l’immunité innée de la peau.

Exemple 7 : Effet de l’extrait aqueux de bois de rose sur la micro-inflammation

Nous avons étudié l’effet de l’extrait de bois de rose selon l’invention sur l’expression des cytokines ou de récepteurs aux cytokines, qui sont des gènes impliqués dans les processus de micro-inflammation au niveau de la peau susceptibles de favoriser les phénomènes de vieillissement cutanés ou inflammaging. Cette étude a été réalisée sur culture de kératinocytes en suivant le protocole détaillé dans l’exemple 2.

Tableau 8 : référence des gènes étudiés

bois de rose selon l’invention

Ces résultats montrent que l’extrait aqueux de bois de rose selon l’invention inhibe de nombreux médiateurs de l’inflammation notamment de cytokines, de récepteurs de cytokines. L’extrait aqueux de bois de rose selon l’invention est donc avantageux pour une utilisation destinée à prévenir et/ou diminuer les effets de la micro-inflammation chronique de la peau et ainsi lutter contre le vieillissement de la peau ou inflammaging. Conclusion

L’ensemble des effets observés sur le stress oxydant, la fonction barrière, la pigmentation, l’immunité ou encore la micro-inflammation montre que l’extrait de bois de rose selon l’invention est d’intérêt pour prévenir et/ou traiter les principaux facteurs responsables du vieillissement cutané et ainsi permettre l’amélioration de l’aspect des peaux âgées.

Exemple 8 : Formulations

8.1 Composition sous la forme d’une émulsion

Phase aqueuse :

Eau déminéralisée qsp 100,0%

Glycols 20,0%

Conservateurs 0,6% Chélatant 0,04%

Carbomer (Carbopol® 981) 0,3%

Sodium polyacrylate (Covacryl® MV60) 0,2%

Sodium Hydroxide 0,15%

Extrait aqueux de bois de rose selon l’invention* 3,0%

Phase grasse :

Huile végétale, esters, silicones 16%

Anti-oxydant 0,2%

Concentré de parfum 0,4%

Steareth-2 0,8%

Steareth-21 1 ,5%

* tel que décrit dans l’exemple 1

La composition est préparée selon le mode opératoire suivant :

les gélifiants sont dispersés dans la phase aqueuse (hors extrait aqueux de bois de rose et hydroxyde de sodium) qui est portée à 70°C ;

la phase grasse (hors concentré de parfum, antioxydant) est chauffée à 70°C ; l’émulsion est réalisée par introduction de la phase grasse dans la phase aqueuse sous forte agitation ;

les gélifiants sont neutralisés par ajout d’hydroxyde de sodium et l’émulsion est refroidie sous agitation modérée avec introduction du concentré de parfum, de l’antioxydant et de l’extrait aqueux de bois de rose à basse température.

Appliquée sur la peau, en particulier la peau du visage, cette composition confère tonicité, élasticité et fermeté, les traits sont réhaussés, le visage est regalbé.

8.2 Composition sous la forme d’une dispersion solide de corps gras, de forme sphérique ou sphéroïde Phase aqueuse

Eau déminéralisée qsp100%

Extrait aqueux de bois de rose selon l’invention* 3.00%

Phenoxyethanol 0.42%

Gomme de xanthane 0.36%

Phase grasse

C10-18 triglycérides 38.84%

Anti Oxydant 0.1 % *tel que décrit dans l’exemple 1

La composition est préparée selon le mode opératoire suivant : on chauffe la cire (C10-18 triglycérides = Lipocire de Gatefossé) au-dessus de son point de fusion (quelques degrés) avec l’antioxydant;

- la phase grasse fondue est versée sous agitation dans de l’eau préalablement chauffée à la même température que la phase grasse ;

l’ensemble est maintenu sous agitation par un système rotatif pendant quelques minutes jusqu’à obtenir la taille de gouttelettes souhaitée ;

la dispersion obtenue est rapidement refroidie par addition d’eau glycolée préalablement refroidie (environ -4°C) pour solidifier les sphéroïdes lipidiques ;

l’agitation est arrêtée lorsque les sphéroïdes sont solidifiés puis sont récupérés à la surface ou filtrés ;

on prépare la phase aqueuse en mélangeant l’eau, la gomme de xanthane, le conservateur, et l’extrait aqueux de bois de rose selon l’invention ;

- on récupère les sphéroïdes à la surface et on les incorpore dans le gel de xanthane contenant l’extrait aqueux de bois de rose selon l’invention.

Appliquée sur la peau, cette composition permet de diminuer les signes visibles du vieillissement, notamment en conférant tonicité et fermeté à la peau ; l’ovale du visage est comme redessiné.

8.3 : Composition sous la forme d’un gel aqueux pour le visage

Extrait aqueux de bois de rose selon l’invention * 80.00%

Conservateurs 0,50%

Sucre 0,20% Carbomer 0,70%

Eau purifiée Qsp

100%

EDTA tetrasodique poudre 0,20%

Sodium hydroxide 0,17% * tel que décrit dans l’exemple 1

L’extrait de bois de rose selon l’invention et les conservateurs sont mélangés et homogénéisés à température ambiante sous agitation. Les sucres sont ajoutés sous agitation, puis le carbomer, puis l’eau et l’EDTA sous agitation. Le gel aqueux est ensuite neutralisé avec l’ajout d’hydroxyde de sodium sous agitation jusqu’à l’obtention d’un gel homogène.

Appliqué sur la peau du visage, ce gel aqueux corrige les sécheresses cutanées, et le teint terne ou inhomogène, et contribue à la jeunesse de la peau.

8.4 : Composition sous la forme d’un gel-sérum micronutritif pour le contour des veux

Eau purifiée Qsp 100.00%

Glycols 13,0%

Conservateurs 0,60%

Carbomer 0,80%

Glyceryl stéarate citrate 0,70%

Lécithine et sodium acrylates copolymer (Lecigel PCR négatif) 1 ,20%

Isostearate isostearyle 9,0%

Bis-diglyceryl polyacyladipate-2 (Softisan 649 MB) 1 ,0%

Silice 2,0%

Nacres 1 ,0%

Extrait de Centella asiatica 0,5%

Extrait de marron d’inde 0,1 %

Extrait aqueux de bois de rose selon l’invention * 3,0%

Tocopheryl acetate 0,10%

Parfum de rose 0,20%

* tels que décrits dans l’exemple 1

Les ingrédients de la phase aqueuse (l’eau, les glycols et le carbomer) sont mélangés à 80°C sous agitation. On ajoute ensuite les conservateurs, puis les gélifiants à 80°C sous agitation puis la température est abaissée à 75°C. Puis les tensioactifs sont émulsionnés dans la phase aqueuse sous agitation. Les charges et nacres, préalablement empâtées et homogénéisées, sont ajoutées à 40°C. Sont ensuite ajoutés à 40°C le cryoextrait, l’extrait aqueux de bois de rose selon l’invention, sous agitation jusqu’à 30°C.

Après application sur le contour des yeux de ce gel-sérum contribue à défroisser rides et ridules, la zone du regard est raffermie, l’apparence des cernes et des poches atténuée. La jeunesse du regard se reconstitue au fil des applications. 8.5 Baume à lèyres

Silice 10%

Poudre de nylon 7%

Cire de polyéthylène 17%

Glycérine 14%

Extrait aqueux de bois de rose selon l’invention * 3,0%

Myristate d’isopropyle qs100%

Cette composition est préparée par mélange des ingrédients selon les méthodes classiques de formulation des baumes. Ce baume à lèvres, après application sur des lèvres sèches et/ou fragiles, permet de les hydrater et les lisser.

Claims

REVENDICATIONS

1. Composition cosmétique pour application topique sur la peau et/ou les lèvres, en particulier la peau du visage et/ou du corps, comprenant dans un milieu physiologiquement acceptable, au moins une quantité efficace d’au moins un extrait aqueux de bois de rose et en particulier au moins un adjuvant cosmétique choisi dans le groupe constitué par les filtres UV, les antioxydants, les parfums, les agents émollients, les agents hydratants, les vitamines, les agents anti-âge, les agents liftants, les agents tenseurs, les agents repulpants, les agents apaisants, les agents antipollution, les agents éclaircissants ou dépigmentants, les charges, les nacres et leurs mélanges.

2. Composition cosmétique selon la revendication 1 , caractérisée en ce que l’extrait aqueux de bois de rose est présent dans la composition en une teneur allant de 0.1 à 80%, en particulier de 0,1 à 20%, de préférence de 0,5 à 10% et de préférence encore de 1 à 5% en poids de matière première par rapport au poids total de ladite composition.

3. Composition cosmétique selon la revendication 1 ou la revendication 2, caractérisée en ce qu’elle comprend en outre au moins un actif cosmétique choisi parmi un agent antioxydant, un agent liftant, un agent tenseur, un agent repulpant, un agent apaisant, un agent anti-pollution et/ou un agent dépigmentant.

4. Procédé cosmétique non thérapeutique destiné à prévenir et/ou diminuer les signes du vieillissement cutané, en particulier la perte de tonicité, la perte d’élasticité et/ou la perte de fermeté de la peau, l’altération de la fonction barrière, l’apparition de rides et/ou ridules, une sécheresse cutanée, et/ou un teint terne et inhomogène, caractérisé en ce qu'il comprend l'application sur une peau saine, en particulier sur la peau du visage et/ou du corps, d'une composition cosmétique comprenant un extrait aqueux de bois de rose telle que définie dans l’une quelconque des revendications 1 à 3.

5. Extrait aqueux de bois de rose, de préférence de bois de rose d’été, obtenu par extraction enzymatique au moyen d’un solvant polaire cosmétiquement acceptable, caractérisé en ce que les roses sont de la variété Evanrat, en particulier de la variété rose Jardin de Granville®.

6. Extrait selon la revendication 5, caractérisé en ce qu’il est obtenu par un procédé d’extraction enzymatique comprenant les étapes :

a) addition d'eau au bois de rose préalablement broyé présentant une taille de particule appropriée, b) addition d'un mélange enzymatique contenant au moins une cellulase, au moins une hémicellulase et au moins une pectinase, et avantageusement en outre au moins une protéase,

d) séparation du milieu réactionnel pour obtenir de l'huile libre, une phase aqueuse contenant des protéines et des sucres fermentescibles, et une phase solide,

e) séparation de la phase aqueuse et ajout éventuel de conservateurs.

7. Procédé de préparation d’un extrait de bois de rose, de préférence de bois de rose d’été, tel que défini dans la revendication 5 ou la revendication 6comprenant les étapes : a) addition d'eau au bois de rose préalablement broyé présentant une taille de particule appropriée,

c) incubation sous agitation au bois de rose préalablement broyé et du mélange enzymatique pour libérer dans le milieu réactionnel des huiles, des protéines et des sucres fermentescibles, pendant une durée dépendant des rendements recherchés,

e) séparation de la phase aqueuse et ajout éventuel de conservateurs.

8. Utilisation cosmétique non thérapeutique d’au moins un extrait aqueux de bois de rose tel que défini dans la revendication 5 ou la revendication 6, en tant qu'agent destiné à prévenir et/ou diminuer les signes du vieillissement cutané, en particulier la perte de tonicité, la perte d’élasticité et/ou la perte de fermeté de la peau, l’altération de la fonction barrière, l’apparition de rides et/ou ridules, une sécheresse cutanée, et/ou un teint terne et inhomogène.

9. Extrait aqueux de bois de rose tel que défini dans la revendication 5 ou la revendication 6 ou composition en comprenant telle que définie dans l’une quelconque des revendications 1 à 3 pour une utilisation pour apaiser la peau, et/ou prévenir et/ou le traiter les désordres cutanés liés à une micro-inflammation chronique de la peau.

10. Extrait aqueux de bois de rose tel que défini dans la revendication 5 ou la revendication 6 ou composition en comprenant telle que définie dans l’une quelconque des revendications 1 à 3 pour une utilisation pour diminuer le lentigo solaire.