WO2013072322A1 - Utilisation d'une association de trois principes actifs pour la reconstruction du tissu adipeux et la lutte contre les signes du vieillissement cutané - Google Patents

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WO2013072322A1
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cosmetic
aging
extract
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Claire Deloche
Julien Laboureau
Theebah SELLATHURAI
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L'oreal
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Definitions

  • the hypodermis is the deepest compartment. Its thickness is variable depending on the different anatomical sites of the skin. It is invaginated in the dermis and is attached to the underlying dermis by trabeculae composed of collagen and elastin fibers. It consists essentially of a type of cells specialized in the accumulation and storage of fat, adipocytes.
  • tea fermentation product described in international application WO2004 / 012650.
  • this product is a kombucha.
  • soybean extract marketed by Gognis under the name Eleseryl SH-VEG 8 ® corresponding to a dispersion of soy protein in an aqueous medium (EU INCI name: GLYCINE SOJA PROTEIN ).
  • the composition is in the form of a cosmetic cream.
  • the combination of 3 active ingredients is an effective stimulator of pre-adipocyte differentiation since it increases the synthesis of lipids, a marker of mature adipocytes. This stimulation is visible during morphological observations compared to the control population.
  • the combination according to the invention makes it possible, by a synergistic effect, to stimulate the differentiation of adipocytes and the synthesis of lipids and matrix components essential for the support of adipocytes, and thus to promote and / or stimulate the reconstruction of adipose tissue, and to prevent and / or treat the cutaneous signs of aging and / or photo-aging, in particular to reduce ptosis, reduce the loss of firmness of the skin, reduce the visibility of wrinkles or fine lines, or improve the quality and / or the transparency of the skin.
  • synergistic effect it is meant that the combination of the three assets provides a greater effect than that given by each individual asset at the same concentration as in the combination.

Abstract

L'Invention concerne une composition cosmétique comprenant au moins un extrait de lin, un produit de fermentation de thé, et un extrait de soja, éventuellement hydrolysé, et un milieu physiologiquement acceptable. L'invention concerne en particulier l'utilisation d'une telle composition ou d'une association d'au moins l'extrait de lin, du produit de fermentation de thé, et de l'extrait de soja, éventuellement hydrolysé, dans un but esthétique ou dans une méthode de soin cosmétique. L'invention concerne plus particulièrement l'utilisation d'au moins ces trois ingrédients actifs pour favoriser et/ou stimuler la reconstruction du tissu adipeux, et/ou pour prévenir et/ou traiter les signes cutanés du vieillissement et/ou du photo-vieillissement, en particulier pour diminuer la ptôse, diminuer la perte de fermeté de la peau, diminuer la visibilité des rides ou ridules cutanées, ou améliorer la qualité et/ou la transparence de la peau.

Description

Utilisation d'une association de trois principes actifs pour la reconstruction du tissu adipeux et la lutte contre les signes du vieillissement cutané
L'objet de l'invention consiste en l'utilisation de trois principes actifs en association pour favoriser et/ou stimuler la reconstruction du tissu adipeux, et/ou pour prévenir et/ou traiter les signes cutanés du vieillissement et/ou du photo-vieillissement, en particulier pour diminuer la ptôse, diminuer la perte de fermeté de la peau, diminuer la visibilité des rides ou ridules cutanées, ou améliorer la qualité et/ou la transparence de la peau.
La peau humaine est constituée de plusieurs compartiments dont 3 couvrent l'ensemble du corps : un compartiment superficiel, l'épiderme, le derme et un compartiment profond l'hypoderme.
L'épiderme est un épithélium pavimenteux stratifié kératinisé. Il est constitué principalement (90 %) de kératinocytes, mais également d'autres cellules, et repose sur une membrane basale qui le sépare du derme. La différenciation progressive des cellules de la membrane basale vers la surface de l'épiderme s'accompagne d'une multitude de changements. Les kératinocytes se différencient et migrent de la couche basale vers la surface où ils desquament.
Le derme est un tissu conjonctif. Son architecture résulte de l'agencement et des interactions entre les constituants de la matrice extracellulaire et les fibroblastes qui assurent leur synthèse et leur dégradation. Les autres constituants cellulaires sont impliqués dans le système immun (macrophages et mastocytes) ou sont liés à la présence de vaisseaux sanguins (cellules endothéliales, musculaires et nerveuses). Le derme constitue la masse principale de la peau. On subdivise le derme en deux couches, le derme papillaire et le derme réticulaire. Le derme est constitué de fibres de collagène et de fibres élastiques ainsi que de glycosaminoglycanes et de protéoglyclanes. Ces différentes structures forment un réseau complexe qui joue un rôle clef dans les propriétés biomécaniques de la peau.
L'hypoderme est le compartiment le plus profond. Son épaisseur est variable en fonction des différents sites anatomiques de la peau. Il s'invagine dans le derme et est rattaché au derme sous-jacent par travées composées de fibres de collagène et d'élastine. Il est essentiellement constitué d'un type de cellules spécialisées dans l'accumulation et le stockage des graisses, les adipocytes.
Dans la zone où le revêtement tégumentaire n'est pas kératinisé, il est appelé muqueuse. Ce tissu contient également un derme avec des fibroblastes au sein d'une matrice dermique. Le tissu cutané comprend aussi des annexes : glandes sudoripares, follicules pilo- sebacés, poils, cheveux, ongles qui subissent aussi le vieillissement.
Au cours du vieillissement chronologique et/ou actinique, l'épiderme subit de nombreuses modifications et dégradations qui se traduisent, avec l'âge, par une altération du microrelief, une apparition de rides et ridules, une altération des propriétés mécaniques de la peau avec diminution de la fermeté et de l'élasticité et une perte d'éclat du teint.
Au niveau tissulaire, le vieillissement se manifeste par une désorganisation de l'architecture épidermique, de la jonction dermo-épidermique et du derme, ainsi que des systèmes d'irrigation sanguine et d'innervation, un ralentissement de différents métabolismes tels que ceux mis en jeu dans l'équilibre de la fonction barrière.
Au niveau cellulaire le vieillissement se traduit par une altération de la physiologie ou du métabolisme des principaux types cellulaires du derme (fibroblastes) et de l'épiderme (kératinocytes).
Par ailleurs il est maintenant clairement établi que le tissu adipeux, localisé sous le derme profond subit des modifications et s'altère. Il est admis que cette altération est liée notamment au déplacement des masses graisseuses et dans une moindre mesure à une désorganisation du tissu adipeux.
On comprend donc l'importance de pouvoir disposer de produits capables de renforcer/stimuler les différentes couches de la peau et notamment de restructurer l'hypoderme en stimulant deux mécanismes :
- stimuler la différenciation des adipocytes et la synthèse de lipides ;
- stimuler la synthèse de composants matriciels essentiels au soutien des adipocytes.
Ainsi, l'invention a pour but de fournir une composition pour favoriser et/ou stimuler la reconstruction du tissu adipeux, et/ou pour prévenir et/ou traiter les signes cutanés du vieillissement et/ou du photo-vieillissement, en particulier pour diminuer la ptôse, diminuer la perte de fermeté de la peau, diminuer la visibilité des rides ou ridules cutanées, ou améliorer la qualité et/ou la transparence de la peau.
L'invention a pour but en particulier de stimuler la différenciation des adipocytes ou la synthèse de lipides, ou stimuler la synthèse de composants matriciels essentiels au soutien des adipocytes.
L'invention a pour but également de fournir une composition cosmétique adaptée à une application topique, ou à une administration orale ou par injection intra-cutanée, notamment pour une utilisation dans un but esthétique ou pour une méthode de soin cosmétique, pour favoriser et/ou stimuler la reconstruction du tissu adipeux, et/ou pour prévenir et/ou traiter les signes cutanés du vieillissement et/ou du photo-vieillissement.
DESCRIPTION DE L'INVENTION
L'invention concerne une composition cosmétique et/ou dermatologique comprenant au moins un extrait de lin, un produit de fermentation de thé, et un extrait de soja, éventuellement hydrolysé, et un milieu physiologiquement acceptable.
L'extrait de lin, le produit de fermentation de thé, et l'extrait de soja, éventuellement hydrolysé, qui sont chacun des ingrédients actifs, constituent l'association selon l'invention.
Selon une variante, chacun des trois ingrédients actifs est présent en une proportion comprise entre 0,001 à 10%, et de préférence de 0,01 à 5% en poids, par rapport au poids total de la composition.
Plus particulièrement, l'invention concerne un extrait de lin tel que défini dans la demande internationale WO2008/043944. Cet extrait est obtenu de préférence par un procédé comprenant des étapes de solubilisation de lin dans l'eau, d'hydrolyse(s) chimique(s) et/ou enzymatique(s) successive(s) et/ou simultanée(s), de séparation(s) des faces solubles et insolubles, d'inactivation(s) de/ ou des activités enzymatiques résiduelles, de préférence par traitement thermique, de purification(s) de la fraction active par séparation(s), décantation(s), filtration(s), centrifugation(s), et de concentration(s) par filtration. Ces étapes peuvent être éventuellement répétées ou comprendre des étapes intermédiaires. Des étapes supplémentaires peuvent être également ajoutées pour décolorer et/ou stabiliser le produit obtenu.
Préférentiellement, on entend par « lin » des graines de lin de la variété linum usitatissinum, réduites en poudre, sous forme de farine ou de semoule, ou des tourteaux de graines de lin de la variété linum usitatssinum obtenus après extraction de la partie huileuse par pressage des graines. Un tel extrait est commecialisé par exemple sous la marque Linactyl ® par la société SI LAB.
Avantageusement, on préfère utiliser un produit de fermentation de thé décrit dans la demande internationale WO2004/012650. De préférence, ce produit est un kombucha.
Le kombucha est un thé qui a subit une transformation microbiologique. Cette transformation est une fermentation par un symbiote de levure du genre Saccharomyces qui nidifie au sein d'une matrice de polysaccharides produite par une Bactérie Xylinum. La composition exacte de ce symbiose (en particulier les proportions de chacune des espèces) varie avec les conditions géographiques et climatiques et dépend des sous- espèces locales sauvages de levure et de bactéries ; néanmoins on peut citer, entre autres, sans que cette liste soit limitative : Saccharomyces ludwigii, espèces Saccharomyces apicalutus, Bacterium xylinoides, Bacterium gluconicum, Schizosaccharomyces pombe, Acetobacter ketogenum, espèces Torula, Pichia fermentans et autres levures. Dans la littérature sur le kombucha, ce symbiote de levures et bactéries est aussi appelé « champignon », « champion de longue vie » et de nombreux synonymes.
Cette fermentation est tout à fait originale puisque l'alcool produit par la levure à partir du sucre est transformé par la bactérie en différents acides, glucuronique, lactique, usnique et surtout acétique qui donne son goût acidulé au kombucha avec un pH final compris entre 2,5 et 4. D'autre part, la bactérie Xylinum qualifiée de bactérie acétique, utilise elle aussi le sucre présent dans le thé et transforme le saccharose en micro-fibrilles de cellulose constituant ainsi la membrane support dans laquelle la levure nidifie et se développe.
Les produits du métabolisme de la levure sont excrétés dans le kombucha et sont constitués de nombreuses vitamines telles que B1 , B2, B3 et B12, co-facteurs essentiels à la croissance des bactéries.
Le kombucha, également appelé « thé au champignon de longue vie », est un remède thérapeutique populaire connu depuis longtemps par différents noms [FRANK G., 1999]. Le thé utilisé pour la fabrication de kombucha peut être de toute sorte et de toute origine, il s'agit notamment de Camellia sinensis variétés sinensis ou assamica. Toutes les variétés de thé vert, thé semi-fermenté, thé noir, thé noir fumé, thé jaune, thé sombre, thé blanc, de tisane aux plantes ou aux fruits, d'infusion, peuvent servir de base à la fabrication du kombucha. On utilise préférentiellement toutes les variétés de thé vert, thé semi-fermenté, thé noir, thé noir fumé, thé jaune, thé sombre, thé blanc (tous Camellia sinsensis) et plus particulièrement le thé noir.
Parfois il peut y avoir confusion autour du terme thé fermenté. En effet, le thé noir est du thé vert appelé fermenté, mais cette transformation n'est pas une fermentation à proprement parler, il s'agit d'une oxydation que subit le thé quand sont mis en contact certains substrats par une rupture mécanique des cellules en rompant ou en coupant les feuilles. Par contre, pour obtenir du thé vert, immédiatement après la cueillette, pour éviter l'oxydation des tanins et préserver la chlorophylle, les feuilles doivent être mises faiblement sous vapeur, ensuite les feuilles sont roulées et séchées.
Pour la fabrication du kombucha le thé noir est le meilleur bouillon de culture : il conduit à la plus grande concentration d'acide lactique et gluconique, offre les meilleures conditions à la croissance du champignon, et est riche en purines. Ainsi on préfère que le produit de fermentation de thé soit un produit de fermentation de thé noir. Le kombucha produit, outre de nombreuses substances à effet antibiotique difficilement définissables, avant tout de l'acide glucuronique, les vitamines B1 , B2, B3, B6 et B12 ainsi que l'acide folique, et de l'acide tactique D (+).
Un tel produit est commercialisé par exemple par SEDERMA sous la marque Kombuchka ®.
L'invention concerne de préférence un extrait de soja tel que décrit dans la demande de brevet FR2937533. En particulier, cet extrait est un extrait de protéines de soja.
Le terme "extrait de protéines de soja", dans le cadre de la présente invention, désigne des extraits de polypeptides de soja, éventuellement hydrolysés. Les protéines de soja sont extraites (de la graine ou de toute autre partie de la plante) selon des méthodes connues de l'homme du métier. On utilise de préférence comme extrait de protéines de soja un hydrolysat de protéines de soja. L'hydrolyse peut être ensuite réalisée selon plusieurs méthodes connues de l'homme de l'art. Les protéines de soja ainsi extraites peuvent donc être mises en contact avec un cocktail enzymatique en présence d'eau de manière à ce qu'elles soient hydrolysées, puis il est procédé à une filtration afin de séparer l'hydrolysat. Selon une autre méthode, les protéines de soja peuvent être mises en contact avec un microorganisme (Lactobacillus, par exemple) contenant un cocktail enzymatique (protéases), dans un procédé de fermentation durant lequel aura lieu l'hydrolyse peptidique. S'en suit la séparation des microorganismes de l'hydrolysat. En particulier, l'hydrolysat de protéines de soja correspond à des polypeptides de poids moléculaire moyen de 800 Daltons, obtenus par fermentation de protéines de soja par une souche de lactobacille.
Parmi les extraits de protéines de soja, on peut notamment citer l'extrait de soja commercialisé par la société Gognis sous la dénomination Eleseryl SH-VEG 8 ® correspondant à une dispersion de protéines de soja en milieu aqueux (Nom INCI UE : GLYCINE SOJA PROTEIN).
Parmi les hydrolysats de protéines de soja, on peut citer à titre illustratif les hydrolysats de soja commercialisés par les sociétés COLETICA et/ou BASF Beauty Care Solutions sous la dénomination commerciale Phytokine (numéro CAS: 68607-88-5; nom INCI: Hydrolyzed Soy Protein) ou un extrait de protéines hydrolysées de soja tel que le RIDULISSE C ® de la société SILAB, la Soyaline® (Oligopeptides de soja, riches en proline, arginine et acide aspartique obtenues par hydrolyse enzymatique ) de Solabia (Nom INCI UE : Hydrolyzed Soy Protein) ou le Soymilk extract (Cosmetochem International Ltd). De préférence on utilise un extrait de protéines hydrolysées de soja tel que le RIDULISSE C ® de la société SILAB. De préférence, l'association selon l'invention est formulée dans une composition telle que définie selon la description, y compris les exemples.
Par « milieu physiologiquement acceptable », on entend désigner un milieu compatible avec les matières et/ou les fibres kératiniques d'êtres humains, comme par exemple, de manière non limitative, la peau, les muqueuses, les ongles, le cuir chevelu et/ou les cheveux.
Ce milieu physiologiquement acceptable comprend de l'eau, éventuellement en mélange ou non avec un ou plusieurs solvants organiques tels que des alcools en C Cs, notamment l'éthanol, l'isopropanol, le tert-butanol, le n-butanol, des polyols comme la glycérine, le propylène glycol, le butylène glycol et des éthers de polyol.
La composition selon l'invention peut également comprendre une phase grasse, qui peut comprendre des huiles, des gommes, des cires usuellement utilisées dans le domaine d'application considéré.
Les compositions cosmétiques selon l'invention peuvent contenir des ingrédients actifs, additifs ou excipients habituels en cosmétique : actifs biologiques (anti-âge, antipeau grasse, éclaircissant, blanchissant, anti-transpirant, anti-oxydant, etc .), pigments, colorants, filtres solaires, polymères, filmogènes, huiles, corps gras, silicones, hydratants, émolients, solvants, tensio-actifs, vitamines, et/ou conservateurs, ou d'autres excipients cosmétiques.
Les compositions selon l'invention peuvent se présenter sous la forme de gels, de sérums, d'émulsions directes, inverses ou multiples, de sticks, de coulés à chaud, de poudre libre ou compactée, ou de crème.
La composition selon l'invention peut se présenter sous toutes les formes galéniques normalement utilisées dans les domaines cosmétique et dermatologique.
Elle peut être notamment sous forme d'une solution aqueuse, hydroalcoolique, éventuellement gélifiée, d'une dispersion du type lotion éventuellement biphasée, d'une émulsion huile-dans-eau ou eau-dans-huile ou multiple, d'un gel aqueux, d'une dispersion d'huile(s) dans une phase aqueuse, notamment à l'aide de sphérules, ces sphérules pouvant être des particules polymériques ou mieux, des vésicules lipidiques de type ionique et/ou non-ionique, ou bien encore sous la forme d'une poudre, d'un sérum, d'une pâte ou d'un bâtonnet souple. Elle peut être de consistance solide, pâteuse, ou liquide plus ou moins fluide.
Avantageusement, l'association est administrée par voie orale, topique, ou intra-cutanée. Selon un mode de réalisation particulier, la composition comprend un milieu physiologiquement acceptable pour une administration topique, orale ou par injection, en particulier intra-cutanée.
Selon une variante, la composition se présente sous forme d'une crème cosmétique.
Selon une autre variante, la composition est injectable et comprend un support d'injection, tel qu'une ou plusieurs macromolécules de la matrice extracellulaire, comme par exemple l'acide hyaluronique, le collagène, et/ou des cellules, et/ou un extrait de tissu adipeux ou une préparation en contenant.
La composition de l'invention peut donc être adaptée à une injection intra-cutanée par l'utilisation d'une seringue, utilisant une ou plusieurs micro-aiguilles, ou un implant ou un réservoir bio-dégradable. On entend par « réservoir bio-dégradable » un dispositif comprenant des molécules dégradables selon une période plus ou moins longue, souvent de quelques semaines à plusieurs mois, voire années, après introduction dans la peau.
Pour ces formes de compositions, on peut utiliser les principes actifs de l'invention en association avec un support d'injection tel qu'une ou plusieurs macromolécules de la matrice extra-cellulaire comme l'acide hyaluronique ou le collagène, des cellules ou des extraits de tissu adipeux, ou des préparations en contenant. En général les extraits de tissu adipeux proviennent du corps du sujet recevant l'injection de la composition de l'invention, mais il peut en être autrement. Cet extrait peut-être issu d'un autre sujet ou d'un groupe de sujets.
L'invention concerne encore un dispositif d'injection intra-cutanée pré-rempli avec l'association ou la composition selon l'invention.
L'invention concerne également un kit d'injection intra-cutanée comprenant un dispositif d'injection intra-cutanée, tel qu'une seringue, utilisant une ou plusieurs microaiguilles, un implant ou un réservoir bio-dégradable, ledit kit comprenant également la composition selon l'invention séparée physiquement du dispositif d'injection notamment pour remplir le dispositif d'injection juste avant l'injection.
L'invention concerne aussi l'utilisation cosmétique (dans un but esthétique) d'une association d'au moins trois ingrédients actifs choisis parmi un extrait de lin, un produit de fermentation de thé et un extrait de soja, éventuellement hydrolysé, pour favoriser et/ou stimuler la reconstruction du tissu adipeux, et/ou pour prévenir et/ou traiter les signes cutanés du vieillissement et/ou du photo-vieillissement, en particulier pour diminuer la ptôse, diminuer la perte de fermeté de la peau, diminuer la visibilité des rides ou ridules cutanées, ou améliorer la qualité et/ou la transparence de la peau. Cette association est de préférence formulée dans une composition selon l'invention. Selon cet aspect de l'invention, cette utilisation vise exclusivement le traitement esthétique d'un sujet, de préférence humain, et exclut donc tout traitement chirurgical, ou thérapeutique. Selon cet aspect, l'invention vise in fine la diminution de la visibilité des rides, de préférence par comblement, justifiant ainsi le but esthétique de cette utilisation.
On entend par diminuer la visibilité des rides : la diminution de la visibilité ou de la profondeur des sillons des rides formées à la surface cutanée, appréciée visuellement par un être humain ou par l'intermédiaire d'un appareillage approprié à quantifier l'apparence des rides cutanées.
L'invention concerne également une méthode de soin cosmétique comprenant l'application topique, ou l'administration par voie orale ou intra-cutanée d'une composition cosmétique telle que définie selon la description, y compris les exemples, notamment chez un individu sujet à un vieillissement cutané, pour favoriser et/ou stimuler la reconstruction du tissu adipeux.
L'invention concerne encore une méthode de soin cosmétique comprenant l'application topique, ou l'administration par voie orale ou intra-cutanée d'une composition cosmétique telle que définie selon la description, y compris les exemples, notamment chez un individu sujet à un vieillissement ou photo-vieillissement cutané, pour prévenir et/ou traiter les signes cutanés du vieillissement cutané, ou du photo-vieillissement cutané, en particulier pour diminuer la ptôse, diminuer la perte de fermeté de la peau, diminuer la visibilité des rides ou ridules cutanées, ou améliorer la qualité et/ou la transparence de la peau, éventuellement par le biais d'un dispositif ou d'un kit décrit ci- dessus.
L'invention concerne encore une méthode telle que décrite ci-dessus caractérisée en ce que l'association ou la composition améliore la synthèse de lipides et/ou la synthèse de collagène VI par les pré-adipocytes.
La présente invention vise également une méthode de soin cosmétique pour le comblement immédiat de rides, caractérisée en ce qu'elle comprend l'application topique, l'administration orale ou l'injection intra-cutanée d'une composition selon l'invention. Cette application topique ou injection intra-cutanée est effectuée au niveau de la zone à combler, ou à proximité. En général, on réalise cette application ou injection à moins de 2 cm, et de préférence moins de 1 cm, parallèlement aux rides à combler.
Des exemples concrets, mais nullement limitatifs, illustrant l'invention, vont maintenant être donnés.
Dans les exemples, tous les pourcentages sont donnés en poids, sauf indication contraire et la température est exprimée en degré Celsius sauf indication contraire, et la pression atmosphérique, sauf indication contraire. Dans les exemples les quantités des ingrédients des compositions sont données en pourcentage pondéral par rapport au poids total de la composition.
La Figure 1 est un diagramme représentatif de la quantification de la synthèse de collagène VI en fonction de la composition ajoutée au milieu de culture comprenant des pré-adipocytes.
EXEMPLES
EXEMPLE 1 :
EVALUATION DE L'EFFET DE L'ASSOCIATION DES TROIS ACTIFS DE L'INVENTION SUR LA SYNTHESE DE LIPIDES ET LA SYNTHESE DE COLLAGENE VI PAR LES PRE-ADIPOCYTES.
Les pré-adipocytes sont des cellules « pré-engagées » dans la voie de différenciation adipocytaire et sont capables de se différencier en adipocytes, chargés de lipides, sous l'action d'un cocktail de différenciation lipogénique, composé d'IBMX (3- lsobultyl-1-Methylxanthine), de déxamethasone, d'insuline humaine et d'indométacine, qui sont ajoutés dans le milieu de culture.
L'étude est réalisée sur des pré-adipocytes sous-cutanés humains (fournis par
Lonza, réf. PT-5020). Ces pré-adipocytes sont isolés à partir de la fraction stroma- vasculaire issue de donneurs adultes sains.
Les trois actifs (Kombuchka ®, Linactyl ®, Ridulisse C ®) sont testés seuls ou en combinaison pour étudier leurs effets sur la synthèse de lipides et de collagène VI par les pré-adipocytes au cours de leur différenciation.
Les actifs sont dilués dans les milieux de culture et testés en systémique aux concentrations suivantes :
- Kombushka à 0,3%
- Linactyl à 0,1 %
- Ridulisse à 0,2%
- Kombushka à 0,3% + Linactyl à 0,1 %
- Kombushka à 0,3% + Ridulisse à 0,2%
- Kombushka à 0,3% + Linactyl à 0,1 % + Ridulisse à 0,2%
La culture se déroule en 3 étapes :
· J-3 à J0 (3 jours) : à J-3, les pré-adipocytes non différenciés sont ensemencés dans des plaques 48 puits et sont cultivés en milieu de base pendant 3 jours.
• J0 à J3 (3 jours) : à J0, les actifs sont ajoutés en même temps que le cocktail de différenciation (milieu de différenciation) pendant 3 jours.
• J3 à J6 (3 jours) : à J3, les milieux de culture sont renouvelés avec du milieu de base sans le cocktail de différenciation, mais toujours en présence des actifs, pendant 3 jours supplémentaires.
A la fin de cette 3e étape, la culture est arrêtée par fixation des cellules au paraformaldéhyde 4%. Les lipides sont observés après coloration spécifique à l'Oil Red O. Le collagène VI est révélé par analyse immunohistochimique et quantifié par une analyse HCS (High Content Screening). Dans une plateforme automatisée, la technologie HCS permet de coupler l'acquisition d'image à haut débit par microscopie en fluorescence simultanément à l'analyse des images par le logiciel Cellomics® ArrayScan fournis par ThermoFisher Scientific. (cf. publication : Abraham et al, High-content screening applied to large-scale cell biology, Trends Biotechnol. 2004). 50 champs par puits ont été scannés pour quantifier le marqueur d'intérêt.
RESULTATS
STIMULATION DE LA SYNTHÈSE DE LIPIDES
Les résultats sont observés sur la base d'images, obtenues par microscope en contraste de phase, représentatives des différentes conditions de culture.
On constate une stimulation de la différenciation adipocytaire en culture avec une augmentation de la synthèse de lipides (coloration rouge par l'Oil Red O) par les pré- adipocytes traités par l'association du Kombuchka ® avec le Linactyl ® et le Ridulisse C ® pendant 6 jours.
L'observation morphologique des pré-adipocytes, à la fin de la culture en présence des 3 actifs de l'invention montre une population adipocytaire plus riche et plus différenciée, présentant plus d'inclusions lipidiques par rapport aux cellules témoins non traitées et aux cellules traitées avec chacun des 3 actifs seuls.
Ces résultats traduisent le pouvoir stimulant des 3 actifs, en synergie, sur la différentiation adipocytaire et la synthèse de lipides. STIMULATION DE LA SYNTHÈSE DE COLLAGENE VI
Observation microscopique :
Les résultats sont observés sur la base d'images représentatives des différentes conditions de culture obtenues après marquage par immunohistochimie.
On constate une stimulation de la synthèse de collagène VI en culture avec une augmentation de la synthèse de collagène VI par les pré-adipocytes traités par l'association du Kombuchka ® avec le Linactyl ® et le Ridulisse C ® pendant 6 jours.
Les analyses immunohistochimiques sur les pré-adipocytes, cultivés en présence des 3 actifs de l'invention montre une augmentation de la synthèse de collagène VI par rapport aux cellules témoins non traitées et aux cellules traitées avec chacun des 3 actifs seuls. Quantification par Hiqh Content Screeninq (HCS) :
Le résultat présenté en figure 1 illustrent la quantification du collagène VI par HCS, avec des valeurs moyennes établies sur n=3 puits par condition de culture. Les valeurs d'intensité de fluorescence sont normalisées au nombre de cellules.
On constate une augmentation de la synthèse de collagène VI par les pré- adipocytes traités par l'association du Kombuchka ® avec le Linactyl ® et le Ridulisse C ® pendant 6 jours.
L'association des 3 actifs de l'invention montre une augmentation de la synthèse de collagène VI de manière synergique.
Cette augmentation est multipliée par 4 par rapport aux cellules non traitées.
CONCLUSION
L'association des 3 actifs (Kombuchka ®, Linactyl ® et Ridulisse C ®) est un stimulateur efficace de la différentiation des pré-adipocytes puisqu'il augmente la synthèse de lipides, marqueur des adipocytes arrivant à maturité. Cette stimulation est visible lors des observations morphologiques comparées à la population témoin.
En ce qui concerne la synthèse de macromolécules de la matrice extracellulaire, en particulier la synthèse de collagène VI, l'association des 3 actifs de l'invention potentialise cette synthèse de collagène par les pré-adipocytes ce qui confirme que cette association est un stimulateur efficace de la différentiation des pré-adipocytes.
Ainsi l'association selon l'invention permet, par un effet de synergie de stimuler la différenciation des adipocytes et la synthèse de lipides et de composants matriciels essentiels au soutien des adipocytes, et donc de favoriser et/ou stimuler la reconstruction du tissu adipeux, et de prévenir et/ou traiter les signes cutanés du vieillissement et/ou du photo-vieillissement, en particulier pour diminuer la ptôse, diminuer la perte de fermeté de la peau, diminuer la visibilité des rides ou ridules cutanées, ou améliorer la qualité et/ou la transparence de la peau. Par « synergie » on entend que la combinaison des trois actifs procure un effet supérieur à celui donné par chaque actif pris isolément à la même concentration que dans la combinaison. EXEMPLE 2
FORMULES
Nom INCI Crème A
SODIUM HYDROXIDE 0,0300
DISODIUM EDTA 0,1000
HYDROLYZED LINSEED EXTRACT 4,0000
(Linactyl ®)
SACCHAROMYCES/XYLINUM/BLACK TEA 0,3000 FERMENT (and) GLYCERIN (Kombuchka ®)
HYDROLYZED SOY PROTEIN 1 ,0000
(Ridulisse C ®)
OCTYLDODECANOL 1 ,2000
GLYCERYL DIBEHENATE (and) TRIBEHENIN 3,0000 (and) GLYCERYL BEHENATE
PENTAERYTHRITYL TETRAETHYLHEXANOATE 2,0000
CETYL ALCOHOL 2,0000
PARAFFIN 2,0000
HYDROGENATED JOJOBA OIL 2,0000
PRESERVATIVES 0,6000
SUNSCREENS 15,0000
XANTHAN GUM 0,2500
ACRYLATES/C 10-30 ALKYL ACRYLATE 0,1500 CROSSPOLYMER
POLYACRYLAMIDE (and) 1 ,0000
C13-14 ISOPARAFFIN (and) LAURETH-7
DIMETHICONE 3,0000
POLYSILICONE-1 1 2,5000
BUTYLENE GLYCOL 5,0000
ALCOHOL 3,0000
WATER qsp.100%
GLYCERIN 7,0000
CAPRYLYL GLYCOL 0,3000
GLYCERYL STEARATE (and) PEG-100 1 ,5000 STEARATE
BEHENYL ALCOHOL (and) GLYCERYL 3,3000 STEARATE (and) DISODIUM ETHYLENE u
DICOCAMIDE PEG-15 DISULFATE (and) I
GLYCERYL STEARATE CITRATE
qsp. 100% : quantité suffisante pour atteindre 100%.
Ces compositions sont formulées selon les connaissances générales de l'homme du métier.

Claims

REVENDICATIONS
\ - Composition cosmétique et/ou dermatologique comprenant au moins un extrait de lin, un produit de fermentation de thé, et un extrait de soja, éventuellement hydrolysé, et un milieu physiologiquement acceptable.
2.- Composition selon la revendication 1 , caractérisée en ce qu'elle comprend chacun des trois ingrédients actifs en une proportion comprise entre 0,001 à 10%, et de préférence de 0,01 à 5% en poids, par rapport au poids total de la composition.
3.- Composition selon la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce que le produit de fermentation de thé est un produit de fermentation de thé noir.
4.- Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle comprend un milieu physiologiquement acceptable pour une administration topique, orale ou par injection, en particulier intra-cutanée.
5. - Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisée en ce qu'elle est injectable et qu'elle comprend un support d'injection, tel qu'une ou plusieurs macromolécules de la matrice extracellulaire, comme par exemple l'acide hyaluronique, le collagène, et/ou des cellules, et/ou un extrait de tissu adipeux ou une préparation en contenant.
6. - Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisée en ce qu'elle se présente sous forme d'une crème cosmétique.
7.- Dispositif d'injection intra-cutanée pré-rempli avec la composition telle que définie à selon l'une quelconque des revendications 1 à 5.
8. - Kit d'injection intra-cutanée comprenant un dispositif d'injection intra-cutané, tel qu'une seringue, utilisant une ou plusieurs micro-aiguilles, un implant ou un réservoir biodégradable, ledit kit comprenant également la composition telle que définie selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, séparée physiquement du dispositif d'injection.
9. - Utilisation cosmétique d'une association d'au moins trois ingrédients actifs choisis parmi un extrait de lin, un produit de fermentation de thé et un extrait de soja, éventuellement hydrolysé, pour favoriser et/ou stimuler la reconstruction du tissu adipeux.
10. - Utilisation cosmétique d'une association d'au moins trois ingrédients actifs choisis parmi un extrait de lin, un produit de fermentation de thé et un extrait de soja, éventuellement hydrolysé, pour prévenir et/ou traiter les signes cutanés du vieillissement et/ou du photo-vieillissement, en particulier pour diminuer la ptôse, diminuer la perte de fermeté de la peau, diminuer la visibilité des rides ou ridules cutanées, ou améliorer la qualité et/ou la transparence de la peau.
1 1.- Utilisation selon la revendication 9 ou 10, caractérisée en ce que ladite association est formulée dans une composition telle que définie à l'une quelconque des revendications 1 à 6, ou présente dans un dispositif selon la revendication 7 ou dans un kit selon la revendication 8.
12.- Utilisation selon l'une quelconque des revendications 9 à 1 1 , caractérisée en ce que l'association est administrée par voie orale, topique, ou intra-cutanée.
13.- Utilisation selon l'une quelconque des revendications 9 à 12, caractérisée en ce que l'association améliore la synthèse de lipides et/ou la synthèse de collagène VI par les pré-adipocytes.
14. - Méthode de soin cosmétique caractérisée en ce qu'elle comprend l'application topique, ou l'administration par voie orale ou intra-cutanée d'une composition cosmétique telle que définie à l'une quelconque des revendications 1 à 6, notamment chez un individu sujet à un vieillissement cutané, pour favoriser et/ou stimuler la reconstruction du tissu adipeux afin de diminuer la visibilité des rides.
15. - Méthode de soin cosmétique caractérisée en ce qu'elle comprend l'application topique, ou l'administration par voie orale ou intra-cutanée d'une composition cosmétique telle que définie à l'une quelconque des revendications 1 à 6, notamment chez un individu sujet à un vieillissement ou photo-vieillissement cutané, pour prévenir et/ou traiter les signes cutanés du vieillissement et/ou du photo-vieillissement, en particulier pour diminuer la ptôse, diminuer la perte de fermeté de la peau, diminuer la visibilité des rides ou ridules cutanées, ou améliorer la qualité et/ou la transparence de la peau, éventuellement en utilisant un dispositif selon la revendication 7 ou un kit selon la revendication 8.
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