WO2019240288A1 - 抗体に対する親和性物質、および生体直交性官能基を有する化合物またはその塩 - Google Patents

抗体に対する親和性物質、および生体直交性官能基を有する化合物またはその塩 Download PDF

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松田　豊
紀子 畑田
慧 山田
奈都紀 敷田
和高 新保
友博 藤井
成郎 平澤
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味の素株式会社
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    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype

Definitions

  • the present invention relates to an affinity substance for an antibody, a compound having a bioorthogonal functional group, or a salt thereof.
  • ADC antibody-drug conjugates
  • a drug eg, anticancer drug
  • T-DM1 trade name: Kadsaila (registered trademark)
  • ADCs including T-DM1 has been a problem from the beginning of development. That is, since a low molecular weight drug is reacted at random with about 70 to 80 Lys residues in the antibody, the drug antibody ratio (Drug / Antibody Ratio: DAR) and the conjugation position are not constant. In general, it is known that such a random conjugation method has a DAR in the range of 0 to 8, resulting in a plurality of drugs having different drug binding numbers. In recent years, it has been reported that pharmacokinetics, drug release rate, and effects change when the number and position of ADC drug binding are changed. For these reasons, in next-generation ADCs, it is required to control the number and position of drugs to be conjugated. If the number and the position are constant, it is considered that the problem of the expected efficiency, the variation of the conjugation drug, and the so-called regulation of the lot difference are solved (Non-patent Document 4).
  • Antibody regioselective modification methods have been studied all over the world, but most of them are genetic engineering techniques or modification methods using enzymes. Regarding the genetic engineering modification method, although the position selectivity and the number selectivity can be controlled, problems such as reduction in the expression efficiency of the antibody itself (decrease in the total yield in preparing ADC) have been pointed out. In addition, it takes a long time to construct an antibody expression system, etc. (Non-Patent Documents 5 to 7).
  • Non-Patent Documents 8 to 11 In recent years, methods for chemically modifying proteins in a complicated environment such as intracellular using a small molecule probe have been reported. This technique is used for receptor identification in imaging and repositioning of small molecule drugs. In the field of chemical biology, organic chemical protein modification methods using synthetic small molecule probes have attracted attention (Non-Patent Documents 8 to 11).
  • CCAP Chemical Conjugation by Affinity Peptide
  • This method is based on a method in which a peptide reagent in which an NHS-activated ester and a drug are linked to an affinity peptide (Affinity Peptide) is reacted with an antibody (that is, a method for producing an ADC through a linker containing a peptide moiety),
  • an antibody that is, a method for producing an ADC through a linker containing a peptide moiety
  • This method was the first in the world to succeed in regioselectively modifying an antibody Fc region with a drug by a chemical synthesis method, and also had good practical results [reaction time 30 minutes, yield 70%.
  • the object of the present invention is to develop a technique that enables modification of antibodies, particularly, position-selective modification of antibodies.
  • ALE a structural unit of ALE (where A is an affinity substance for an antibody, and L is a divalent group containing a predetermined leaving group). , E is a divalent group comprising (i) an electrophilic group linked to the leaving group and (ii) capable of reacting with a nucleophilic group in the antibody).
  • the salt thereof is useful for regiospecific modification of antibodies.
  • an affinity substance for an antibody represented by the formula (I) and a predetermined compound having a bioorthogonal functional group are useful for regiospecific modification of an antibody (eg, FIG. 1.
  • a compound having an affinity substance for an antibody and a functional substance represented by the formula (IV) and a functional substance or a salt thereof are useful for regiospecific modification of an antibody (eg, Example) 13, 14).
  • the present inventors further prepared an antibody (antibody-drug conjugate (ADC)) having a functional substance (eg, drug) regioselectively containing no peptide moiety as a linker by using such a compound.
  • ADC antibody-drug conjugate
  • the antibody Fc region can be regioselectively modified with a drug by a chemical synthesis method and without using a linker containing a peptide moiety.
  • the present invention is as follows.
  • A is an affinity substance for an antibody
  • L is a divalent group containing a leaving group
  • E is a divalent group comprising an electrophilic group (i) linked to the leaving group and (ii) capable of reacting with a nucleophilic group in the antibody
  • B is a bioorthogonal functional group
  • the leaving group has the ability to be cleaved from E by the reaction between the nucleophilic group and the electrophilic group.
  • [3] The compound or salt thereof according to [2], wherein the peptide is a peptide having a binding ability to a constant region of a monoclonal antibody.
  • [4] The compound of [2] or [3] or a salt thereof, wherein the peptide is a peptide having a binding ability to the Fc region of a monoclonal antibody.
  • [5] The compound or a salt thereof according to [4], wherein the peptide is a peptide having a binding ability to an Fc region of IgG.
  • [6] The compound according to any one of [2] to [5] or a salt thereof, wherein the peptide has 10 to 40 amino acid residues.
  • the peptide is (A) the amino acid sequence of (a-1-1) FNMQQQRRFYEALHDPNNLNEEEQRNARIRSIRDD (SEQ ID NO: 11), or (A-1-2) In the amino acid sequence of FNMQCQRRFYEALHDPNNLEEQRNARIRSRDDC (SEQ ID NO: 12), Any one to three amino acid residues in the sequence may be the same or different and each is replaced by one amino acid residue selected from the group consisting of a lysine residue, an aspartic acid residue, and a glutamic acid residue Or (A-2-1) ⁇ -Ala-NMQQRRFYEALHDPNNLEEQRNARIRSIRDD (SEQ ID NO: 13) amino acid sequence, or In the amino acid sequence of (a-2-2) ⁇ -Ala-NMQCQRRFYEALHDPNNLEEQRNARIRSRDDC (SEQ ID NO: 14), Any one to three amino acid residues in the sequence may be the same or different and each is replaced by one amino acid residue
  • the peptide is Formula 1-1: (X 0-3 ) a -C-Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-IIWC- (X 0-3 ) b (SEQ ID NO: 15)
  • Formula 1-2 (X 0-3 ) a -C-Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-IVVC- (X 0-3 ) b
  • Formula 1-3 (X 0-3 ) a -C-Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-VVWC (X 0-3 ) b
  • Formula 1-4 (X 0-3 ) a -C-Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-AVVC
  • Xaa1 ′, Xaa2 ′, Xaa3 ′, Xaa4 ′, Xaa5 ′, and Xaa6 ′ are the same as Xaa1, Xaa2, Xaa3, Xaa4, Xaa5, and Xaa6, respectively.
  • the leaving group is (1) —O—, —S—, —Se—, —SO 2 —O—, —SO 2 —N (R) —, —SO 2 —, —C ⁇ C A group selected from the group consisting of —CH 2 —O—, —N (OR) —, —N (R) —, and —O—N (R) —, wherein R is a hydrogen atom or the number of carbon atoms 1) to 6), or (2) a heteroarylene compound or a salt thereof according to any one of [1] to [8].
  • the nucleophilic group is NH 2 in a side chain of a lysine residue, OH in a side chain of a tyrosine residue, OH in a side chain of a serine residue, OH in a side chain of a threonine residue, and a cysteine residue
  • the compound according to any one of [1] to [10], wherein the electrophilic group is a group selected from the group consisting of —C ( ⁇ O) —, —SO 2 —, and —CH 2 — Its salt.
  • the bioorthogonal functional group is an azide residue, aldehyde residue, thiol residue, alkyne residue, alkene residue, halogen residue, tetrazine residue, nitrone residue, hydroxylamine residue, nitrile residue.
  • bioorthogonal functional group is a group selected from the group consisting of an azide residue, a thiol residue, an alkyne residue, a maleimide residue, and a disulfide residue. Or a salt thereof.
  • the compound represented by the formula (I) is represented by the following formula (I-1): AL 1 -L 2 -E 1 -E 2 -E 3 -B (I-1) [Where, A and B are the same as those of formula (I), L 1 is a bond or a divalent group; L 2 is a leaving group, E 1 is (i) an electrophilic group that is linked to the leaving group and (ii) has the ability to react with a nucleophilic group in the antibody; E 2 is (a) -X—Y— [where X is bonded to E 1 is C (R 1 ) (R 2 ) (where R 1 and R 2 are each independently a hydrogen atom Or an alkyl having 1 to 6 carbon atoms), N (R 3 ) (wherein R 3 is a hydrogen atom or an alkyl having 1 to 6 carbon atoms), O, S, or Se.
  • Y bound to E 3 is C (R 4 ) (R 5 ) (wherein R 4 and R 5 are each independently a hydrogen atom or an alkyl having 1 to 6 carbon atoms). is there. Or (b) the following formula (i): (Herein, ring Z is a divalent ring group in which all of the ring-constituting atoms X ′ bound to E 1 and both adjacent ring-constituting atoms are carbon atoms, or the ring-constituting atoms bound to E 1. Is a divalent heterocyclic group in which X ′ is a nitrogen atom, and the ring-constituting atoms on both sides of the nitrogen atom are carbon atoms.
  • E 3 is a divalent group when E 2 is —X—Y—, and is a bond or a divalent group when E 2 is a group represented by formula (i),
  • the leaving group has the ability to be cleaved from E 1 by the reaction between the nucleophilic group and the electrophilic group. Any one of [1] to [13] or a salt thereof.
  • the L 2 is (A) Ring PQ- [wherein ring P is an arylene which may be substituted with an electron-withdrawing group, a heteroarylene which may be substituted with an electron-withdrawing group, or a condensed ring.
  • 2,5-diketopyrrolidine, optionally condensed 2,6-diketopiperidine, optionally condensed 2-ketopyrrolidine, optionally condensed 2-ketopiperidine, 2-pyridone Q is a group selected from the group consisting of: —O—, —S—, —Se—, —SO 2 —O—, —SO 2 —N (R) —, —SO 2 —, —C ⁇ A group selected from the group consisting of C—CH 2 —O—, —N (OR) —, —N (R) —, and —O—N (R) — (wherein R represents a hydrogen atom or a carbon atom) 1 to 6 alkyl).
  • [16] The compound of [14] or [15] or a salt thereof, wherein L 2 is a group selected from the group consisting of the following structural formulas: (Here, EWG is an electron withdrawing group, m is an integer from 0 to 4, n is an integer from 0 to 3, R is a hydrogen atom or alkyl having 1 to 6 carbon atoms; ⁇ (open circles) is a bond to the L 1, ⁇ (black circle) is a bond to the E 1. ). [17] The compound or a salt thereof according to any one of [1] to [16], wherein the main chain of L or L 1 -L 2 linking A and E consists of 20 or less atoms.
  • the compound represented by the formula (I-1) is represented by the following formula (I-2): AL 1 -L 2 -E 1 -XYE 3 -B (I-2) [Where, A, L 1 , X, Y, and B are the same as those in the formula (I-1), L 2 is (A) Ring PQ- [wherein ring P is an arylene which may be substituted with an electron-withdrawing group, a heteroarylene which may be substituted with an electron-withdrawing group, or a condensed ring.
  • 2,5-diketopyrrolidine, optionally condensed 2,6-diketopiperidine, optionally condensed 2-ketopyrrolidine, optionally condensed 2-ketopiperidine, 2-pyridone Q is a group selected from the group consisting of: —O—, —S—, —Se—, —SO 2 —O—, —SO 2 —N (R) —, —SO 2 —, —C ⁇ A group selected from the group consisting of C—CH 2 —O—, —N (OR) —, —N (R) —, and —O—N (R) — (wherein R represents a hydrogen atom or a carbon atom) 1 to 6 alkyl).
  • the compound represented by the formula (I-1) is represented by the following formula (I-3): [Where, A, L 1 , rings Z, and B are the same as those in formula (I-1), L 2 is (A) Ring PQ- [wherein ring P is an arylene which may be substituted with an electron-withdrawing group, a heteroarylene which may be substituted with an electron-withdrawing group, or a condensed ring.
  • 2,5-diketopyrrolidine, optionally condensed 2,6-diketopiperidine, optionally condensed 2-ketopyrrolidine, optionally condensed 2-ketopiperidine, 2-pyridone Q is a group selected from the group consisting of: —O—, —S—, —Se—, —SO 2 —O—, —SO 2 —N (R) —, —SO 2 —, —C ⁇ A group selected from the group consisting of C—CH 2 —O—, —N (OR) —, —N (R) —, and —O—N (R) — (wherein R represents a hydrogen atom or a carbon atom) 1 to 6 alkyl).
  • A is an affinity substance for an antibody
  • L is a divalent group containing a leaving group
  • E is a divalent group comprising an electrophilic group (i) linked to the leaving group and (ii) capable of reacting with a nucleophilic group in the antibody
  • B is a bioorthogonal functional group
  • the leaving group has the ability to be cleaved from E by the reaction between the nucleophilic group and the electrophilic group.
  • a regioselective modification reagent for an antibody with a bioorthogonal functional group comprising an affinity substance for the antibody and a compound having a bioorthogonal functional group or a salt thereof.
  • a method for producing an antibody having a biological orthogonal functional group or a salt thereof The following formula (I): ALBE (I) [Where, A is an affinity substance for an antibody, L is a divalent group containing a leaving group, E is a divalent group comprising an electrophilic group (i) linked to the leaving group and (ii) capable of reacting with a nucleophilic group in the antibody; B is a bioorthogonal functional group, The leaving group has the ability to be cleaved from E by the reaction between the nucleophilic group and the electrophilic group.
  • a method for producing an antibody having a functional substance or a salt thereof (1) The following formula (I): ALBE (I) [Where, A is an affinity substance for an antibody, L is a divalent group containing a leaving group, E is a divalent group comprising an electrophilic group (i) linked to the leaving group and (ii) capable of reacting with a nucleophilic group in the antibody; B is a bioorthogonal functional group, The leaving group has the ability to be cleaved from E by the reaction between the nucleophilic group and the electrophilic group.
  • Y bound to E 3 is C (R 4 ) (R 5 ) (wherein R 4 and R 5 are each independently a hydrogen atom or an alkyl having 1 to 6 carbon atoms). is there. Or (b) the following formula (i): (Herein, ring Z is a divalent ring group in which all of the ring-constituting atoms X ′ bound to E 1 and both adjacent ring-constituting atoms are carbon atoms, or the ring-constituting atoms bound to E 1. Is a divalent heterocyclic group in which X ′ is a nitrogen atom, and the ring-constituting atoms on both sides of the nitrogen atom are carbon atoms.
  • E 3 is a divalent group when E 2 is —X—Y—, and is a bond or a divalent group when E 2 is a group represented by formula (i), B is a bioorthogonal functional group.
  • the antibody or its salt which has a bioorthogonal functional group represented by regioselectivity.
  • the antibody or salt thereof according to [23] wherein the antibody is an antibody having a bioorthogonal functional group only in the constant region of a monoclonal antibody.
  • the antibody is a human IgG having a bioorthogonal functional group position-selectively in a region consisting of amino acid residues at positions 246 to 248 or 288 to 290 in the human IgG Fc region.
  • the antibody or salt thereof according to any of [25].
  • the antibody represented by the formula (II-1) is represented by the following formula (II-2): Ab-E 1 -XYE 3 -B (II-2) [Where, Ab, X, Y, and B are the same as those in the formula (II-1), E 1 is a group selected from the group consisting of —C ( ⁇ O) —, —SO 2 —, and —CH 2 —; E 3 is a divalent group.
  • the antibody or a salt thereof according to any one of [23] to [26], which is a regioselective antibody having a bioorthogonal functional group represented by: [28]
  • the antibody represented by the formula (II-1) is represented by the following formula (II-3): [Where, Ab, ring-constituting atom X ′, ring Z, and B are the same as those in formula (II-1), E 1 is a group selected from the group consisting of —C ( ⁇ O) —, —SO 2 —, and —CH 2 —; E 3 is a bond or a divalent group.
  • the antibody or a salt thereof according to any one of [23] to [26], which is a regioselective antibody having a bioorthogonal functional group represented by: [29]
  • Y bound to E 3 is C (R 4 ) (R 5 ) (wherein R 4 and R 5 are each independently a hydrogen atom or an alkyl having 1 to 6 carbon atoms). is there. Or (b) the following formula (i): (Herein, ring Z is a divalent ring group in which all of the ring-constituting atoms X ′ bound to E 1 and both adjacent ring-constituting atoms are carbon atoms, or the ring-constituting atoms bound to E 1. Is a divalent heterocyclic group in which X ′ is a nitrogen atom, and the ring-constituting atoms on both sides of the nitrogen atom are carbon atoms.
  • E 3 is a divalent group when E 2 is —X—Y—, and is a bond or a divalent group when E 2 is a group represented by formula (i)
  • B ′ is a divalent group containing a moiety generated by a reaction between a functional substance and a bioorthogonal functional group
  • F is a functional substance.
  • the antibody of [29] or a salt thereof, wherein the antibody is an antibody having a bioorthogonal functional group only in the constant region of a monoclonal antibody.
  • the antibody represented by the formula (III-1) is represented by the following formula (III-2): Ab-E 1 -XYE 3 -B′-F (III-2) [Where, Ab, X, Y, B ′ and F are the same as those in the formula (III-1), E 1 is a group selected from the group consisting of —C ( ⁇ O) —, —SO 2 —, and —CH 2 —; E 3 is represented by a is] divalent group is an antibody having a functional substance on the regioselective, any of the antibodies or a salt thereof [29] - [32].
  • the antibody represented by the formula (III-1) is represented by the following formula (III-3): [Where, Ab, ring-constituting atom X ′, ring Z, B ′ and F are the same as those in formula (III-1), E 1 is a group selected from the group consisting of —C ( ⁇ O) —, —SO 2 —, and —CH 2 —; E 3 is a bond or a divalent group.
  • the antibody or salt thereof according to any one of [29] to [32], which is a regioselective antibody having a functional substance represented by [35]
  • the compound or its salt which has an affinity substance with respect to an antibody represented by these, and a functional substance.
  • A is an affinity substance for an antibody
  • L is a divalent group containing a leaving group
  • E is a divalent group comprising an electrophilic group (i) linked to the leaving group and (ii) capable of reacting with a nucleophilic group in the antibody
  • F is a functional substance
  • the leaving group has the ability to be cleaved from E by the reaction between the nucleophilic group and the electrophilic group.
  • a regioselective modification reagent for an antibody with a functional substance comprising a compound having an affinity substance for an antibody and a functional substance or a salt thereof, represented by: [37]
  • a compound having an affinity substance for an antibody and a functional substance or a salt thereof represented by the following: Formula (III) below: Ab-EF (III) [Where, Ab is an antibody; E and F are the same as those in the formula (IV). And a salt thereof having a functional substance, or a salt thereof.
  • the compound of the present invention having an affinity substance for an antibody and a bioorthogonal functional group or functional substance or a salt thereof is useful for, for example, regioselective modification of an antibody.
  • the antibody of the present invention or a salt thereof having a bioorthogonal functional group regioselectively is useful, for example, as an intermediate in the preparation of an antibody or a salt thereof regioselectively having a functional substance.
  • the antibody of the present invention or a salt thereof having a functional substance regioselectively is useful, for example, as a medicine or a reagent (eg, diagnostic agent, research reagent).
  • FIG. 1 is a schematic diagram showing an outline of the present invention.
  • FIG. 2 is a diagram showing the analysis results by SDS-PAGE in the synthesis of IgG antibody trastuzumab-peptide complex.
  • Lanes 1, 3, 6, 8 molecular weight markers;
  • Lane 2 unreacted IgG antibody trastuzumab (control, band around 50,000 molecular weight indicates heavy chain; band near molecular weight 25,000 indicates light chain);
  • lane 4 Complex of IgG antibody trastuzumab and compound 10 (band above molecular weight around 50,000 indicates that compound 10 was conjugated to heavy chain of trastuzumab.
  • Lane 5 complex of IgG antibody trastuzumab and compound 11 (band above molecular weight around 50,000 is complex to trastuzumab heavy chain compound 11) (A band below a molecular weight of about 50,000 indicates an unreacted heavy chain, and a band near a molecular weight of 25,000 indicates an unreacted light chain); 7: Reaction mixture after conjugation with IgG antibody trastuzumab and compound 12 (band with molecular weight around 50,000 shows unreacted heavy chain, band with molecular weight around 25,000 shows unreacted light chain. Compound 12 There is no conjugated band).
  • FIG. 1 complex of IgG antibody trastuzumab and compound 11 (band above molecular weight around 50,000 is complex to trastuzumab heavy chain compound 11) (A band below a molecular weight of about 50,000 indicates an unreacted heavy chain, and a band near a molecular weight of 25,000 indicates an unreacted light chain); 7: Reaction mixture after conjugation with IgG antibody trastu
  • FIG. 3 shows the results of SDS-PAGE analysis of a trastuzumab-peptide complex synthesized by introducing maleimide site-specifically into IgG antibody trastuzumab and then conjugating it with a peptide reagent having a thiol.
  • Lanes 1, 9 molecular weight markers.
  • Lane 2 Complex obtained by treating IgG antibody trastuzumab with compound 22 (10 molar equivalents relative to antibody), introducing maleimide regioselectively, and then conjugating compound 25. The upper band around the molecular weight of 50,000 indicates that maleimide was introduced into the heavy chain of trastuzumab and was conjugated with compound 25.
  • Lane 3 Complex obtained by treating IgG antibody trastuzumab with compound 22 (20 molar equivalents relative to antibody), introducing maleimide regioselectively, and then conjugating compound 25.
  • the upper band around the molecular weight of 50,000 indicates that maleimide was introduced into the heavy chain of trastuzumab and was conjugated with compound 25.
  • a band below a molecular weight of about 50,000 indicates an unreacted heavy chain, and a band near a molecular weight of 25,000 indicates an unreacted light chain.
  • Lane 4 Complex obtained by treating IgG antibody trastuzumab with compound 22 (40 molar equivalents relative to antibody), introducing maleimide regioselectively, and then conjugating compound 25.
  • the upper band around the molecular weight of 50,000 indicates that maleimide was introduced into the heavy chain of trastuzumab and was conjugated with compound 25.
  • a band below a molecular weight of about 50,000 indicates an unreacted heavy chain, and a band near a molecular weight of 25,000 indicates an unreacted light chain.
  • Lane 5 Complex obtained by treating IgG antibody trastuzumab with compound 23 (10 molar equivalents relative to antibody), introducing maleimide regioselectively, and then conjugating compound 25.
  • the upper band around the molecular weight of 50,000 indicates that maleimide was introduced into the heavy chain of trastuzumab and was conjugated with compound 25.
  • a band below a molecular weight of about 50,000 indicates an unreacted heavy chain, and a band near a molecular weight of 25,000 indicates an unreacted light chain.
  • Lane 6 Complex obtained by treating IgG antibody trastuzumab with compound 23 (20 molar equivalents relative to antibody), introducing maleimide regioselectively, and then conjugating compound 25.
  • the upper band around the molecular weight of 50,000 indicates that maleimide was introduced into the heavy chain of trastuzumab and was conjugated with compound 25.
  • Lane 7 Complex obtained by treating IgG antibody trastuzumab with compound 23 (40 molar equivalents relative to antibody), introducing maleimide regioselectively, and then conjugating compound 25.
  • the upper band around the molecular weight of 50,000 indicates that maleimide was introduced into the heavy chain of trastuzumab and was conjugated with compound 25.
  • a band below a molecular weight of about 50,000 indicates an unreacted heavy chain, and a band near a molecular weight of 25,000 indicates an unreacted light chain.
  • Lanes 8 and 10 Unreacted IgG antibody trastuzumab (control, band around 50,000 molecular weight indicates heavy chain and band near molecular weight 25,000 indicates light chain)
  • Lane 11 IgG antibody trastuzumab as compound 24 (antibody The reaction mixture was treated with 10 molar equivalents) followed by addition of compound 25. A band with a molecular weight of about 50,000 indicates an unreacted heavy chain, and a band with a molecular weight of about 25,000 indicates an unreacted light chain.
  • Lane 12 Reaction mixture in which IgG antibody trastuzumab was treated with compound 24 (20 molar equivalents relative to antibody) and then compound 25 was added.
  • FIG. 4 is a diagram showing ESI-TOFMS under post-reduction conditions of a modified trastuzumab-maleimide synthesized in (4-5-1).
  • FIG. 5 is a diagram showing ESI-TOFMS under post-reduction conditions of the trastuzumab-azide modified product (azide modified antibody 1) synthesized in (6-1-1).
  • the lower row shows the unreacted trastuzumab measured, and the upper row shows the modified form.
  • FIG. 6 is a diagram showing ESI-TOFMS under post-reduction conditions of a trastuzumab-azide modified product (azide modified antibody 3) synthesized in (6-1-2).
  • the lower row shows the unreacted trastuzumab measured, and the upper row shows the modified form.
  • FIG. 5 is a diagram showing ESI-TOFMS under post-reduction conditions of the trastuzumab-azide modified product (azide modified antibody 1) synthesized in (6-1-1).
  • the lower row shows the unreacted trastuzumab measured, and the upper row shows the modified form.
  • FIG. 6 is a diagram showing ESI-TOFMS
  • FIG. 7 is a diagram showing ESI-TOFMS under post-reduction conditions of a trastuzumab-azide modified product (azide modified antibody 6) synthesized in (6-1-3). The upper row shows the unreacted trastuzumab measured, and the lower row shows the modified product.
  • FIG. 8 is a diagram showing ESI-TOFMS under post-reduction conditions of a trastuzumab-azide modified product (azide modified antibody 8) synthesized in (6-1-3). The upper row shows the unreacted trastuzumab measured, and the lower row shows the modified product.
  • FIG. 8 is a diagram showing ESI-TOFMS under post-reduction conditions of a trastuzumab-azide modified product (azide modified antibody 8) synthesized in (6-1-3). The upper row shows the unreacted trastuzumab measured, and the lower row shows the modified product.
  • FIG. 9 is a diagram showing ESI-TOFMS under post-reduction conditions of a trastuzumab-azide modified product (azide modified antibody 10) synthesized in (6-1-3). The upper row shows the unreacted trastuzumab measured, and the lower row shows the modified product.
  • FIG. 10 is a diagram showing ESI-TOFMS under post-reduction conditions of the adalimumab-azide modified product (azide modified antibody 28) synthesized in (6-1-4). The upper row shows the measured unreacted adalimumab, and the lower row shows the modified form.
  • FIG. 10 is a diagram showing ESI-TOFMS under post-reduction conditions of the adalimumab-azide modified product (azide modified antibody 28) synthesized in (6-1-4). The upper row shows the measured unreacted adalimumab, and the lower row shows the modified form.
  • FIG. 10 is a diagram showing ESI
  • FIG. 11 is a diagram showing ESI-TOFMS under the post-reduction conditions of the denosumab-azide modified antibody (azide modified antibody 29) synthesized in (6-1-4). The upper row shows the unreacted denosumab, and the lower row shows the modified form.
  • FIG. 12 is a diagram showing ESI-TOFMS under the post-reduction conditions of the dupilumab-azide modified antibody (azide modified antibody 30) synthesized in (6-1-4). The upper row shows the measured unreacted dupilumab, and the lower row shows the modified form.
  • FIG. 12 is a diagram showing ESI-TOFMS under the post-reduction conditions of the dupilumab-azide modified antibody (azide modified antibody 30) synthesized in (6-1-4). The upper row shows the measured unreacted dupilumab, and the lower row shows the modified form.
  • FIG. 13 is a diagram showing ESI-TOFMS under conditions after reduction of the rituximab-azide modified antibody (azide modified antibody 31) synthesized in (6-1-4). The lower row shows the measured unreacted rituximab, and the upper row shows the modified form.
  • FIG. 14 is a diagram showing ESI-TOFMS under post-reduction conditions of the trastuzumab-protected thiol modified product synthesized in (8-1-1). The upper row shows the unreacted trastuzumab measured, and the lower row shows the modified product.
  • FIG. 15 is a diagram showing ESI-TOFMS under post-reduction conditions of a trastuzumab-thiol modified product deprotected with (8-3-1).
  • FIG. 16 is a diagram showing ESI-TOFMS under post-reduction conditions of the modified trastuzumab-azide synthesized in (9-1-1).
  • the upper row shows the unreacted trastuzumab measured, and the lower row shows the modified product.
  • FIG. 17 is a diagram showing ESI-TOFMS under post-reduction conditions of the trastuzumab-azide modified product synthesized in (9-1-5).
  • the upper row shows the unreacted trastuzumab measured, and the lower row shows the modified product.
  • FIG. 18 is a diagram showing ESI-TOFMS under post-reduction conditions for the modified trastuzumab-azide synthesized in (9-2-2).
  • the upper row shows the unreacted trastuzumab measured, and the lower row shows the modified product.
  • FIG. 19 is a diagram showing an ESI-TOFMS of the trastuzumab-Cy3 complex synthesized in (10-1-1).
  • the lower row shows the unreacted trastuzumab measured, the middle row shows the measured trastuzumab-azide modified compound synthesized in (6-1-1), and the upper row shows the trastuzumab-Cy3 complex.
  • FIG. 19 is a diagram showing ESI-TOFMS under post-reduction conditions for the modified trastuzumab-azide synthesized in (9-2-2).
  • the upper row shows the unreacted trastuzumab measured, and the lower row shows the modified product.
  • FIG. 19 is a diagram showing an ES
  • FIG. 20 is a diagram showing ESI-TOFMS under the reduction conditions of trastuzumab-Cy3 complex treated with (10-1-2).
  • the lower row shows the unreacted trastuzumab measured
  • the middle row shows the measured trastuzumab-azide modified compound synthesized in (6-1-1)
  • the upper row shows the trastuzumab-Cy3 complex.
  • FIG. 21 is a diagram showing an ESI-TOFMS of the trastuzumab-peptide complex synthesized in (10-2-2).
  • the lower row shows the unreacted trastuzumab measured
  • the middle row shows the measured trastuzumab-azide modified compound synthesized in (6-1-1)
  • the upper row shows the trastuzumab-Cy3 complex.
  • FIG. 22 is a diagram showing ESI-TOFMS under the reduction conditions of trastuzumab-Cy3 complex treated with (10-2-3).
  • the lower row shows unreacted trastuzumab
  • the middle row shows the measured trastuzumab-azide modification synthesized in (6-1-1)
  • the upper row shows the trastuzumab-peptide complex.
  • FIG. 23 is a diagram showing ESI-TOFMS under the reducing conditions of the trastuzumab-maleimide compound complex treated with (10-3-1).
  • the upper row shows the thiol introduced body of trastuzumab and the lower row shows the trastuzumab-maleimide compound complex.
  • FIG. 24 is a diagram showing ESI-TOFMS under the reduction conditions of the reaction product treated with (10-3-2).
  • the upper row shows the thiol introduced body of trastuzumab and the lower row shows the trastuzumab-maleimide compound complex.
  • FIG. 25 shows (1) the amino acid sequence of the heavy chain of trastuzumab (SEQ ID NO: 2) and (2) the amino acid sequence of the light chain of trastuzumab (SEQ ID NO: 4).
  • 26 shows the amino acid sequence of the heavy chain of denosumab (SEQ ID NO: 104) and the amino acid sequence of the light chain of denosumab (SEQ ID NO: 105).
  • FIG. 27 is a diagram showing (1) the amino acid sequence of the heavy chain of dupilumab (SEQ ID NO: 106), and (2) the amino acid sequence of the light chain of dupilumab (SEQ ID NO: 107).
  • FIG. 28 is a diagram showing an MS spectrum of a peptide fragment of THTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISR (SEQ ID NO: 11) containing a modification site to a lysine residue by trypsin digestion of azidobenzoic acid-modified trastuzumab.
  • SEQ ID NO: 11 an MS spectrum of a peptide fragment of THTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISR
  • FIG. 29 is a diagram showing a CID spectrum of a peptide fragment of THTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISR (SEQ ID NO: 11) containing a modification site to a lysine residue by trypsin digestion of azidobenzoic acid-modified trastuzumab.
  • FIG. 30 is a diagram showing an MS spectrum of a peptide fragment of FNWYVDGVEVHNAKTTKPR (SEQ ID NO: 12) containing a modification site to a lysine residue by trypsin digestion of azidobenzoic acid-modified trastuzumab.
  • FIG. 31 shows a CID spectrum of a peptide fragment of FNWYVGDGEVHNAKTTKPR (SEQ ID NO: 12) containing a modification site to a lysine residue by trypsin digestion of azidobenzoic acid-modified trastuzumab (amine benzoic acid introducer (+1199.037 Da)). It is.
  • FIG. 32 is a diagram showing an MS spectrum of a peptide fragment of THTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISR (SEQ ID NO: 11) containing a modification site to a lysine residue by trypsin digestion of mercaptopropionic acid-added maleimide-modified trastuzumab.
  • FIG. 12 shows a CID spectrum of a peptide fragment of FNWYVGDGEVHNAKTTKPR (SEQ ID NO: 12) containing a modification site to a lysine residue by trypsin digestion of azidobenzoic acid-
  • FIG. 33 is a diagram showing a CID spectrum of a peptide fragment of THTCPPCPAPELLGGPSVFLPPPKPKDTLMISR (SEQ ID NO: 11) containing a modification site to a lysine residue by trypsin digestion of maleimide MPA-modified trastuzumab.
  • FIG. 34 is a diagram showing an MS spectrum of a peptide fragment of THTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISR (SEQ ID NO: 11) containing a site for modification to a lysine residue by trypsin digestion of alkylazide-modified trastuzumab.
  • FIG. 34 is a diagram showing an MS spectrum of a peptide fragment of THTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISR (SEQ ID NO: 11) containing a site for modification to a lysine residue by trypsin digestion of alkylazide-modified trastuzumab.
  • FIG. 35 is a diagram showing a CID spectrum of a peptide fragment of THTCPPCPAPELLGGPSVFLPPPKPKDTLMISR (SEQ ID NO: 11) containing a site for modification to a lysine residue by trypsin digestion of alkylazide-modified trastuzumab.
  • FIG. 36 is a diagram showing an MS spectrum of a peptide fragment of VVSVLTVLHQDWLNGKEYK (SEQ ID NO: 101) containing a modification site to a lysine residue by trypsin digestion of azidobenzoic acid-modified trastuzumab.
  • FIG. 37 is a diagram showing a CID spectrum of a peptide fragment of VVSVLTVLHQDWLNGKEYK (SEQ ID NO: 101) containing a modification site to a lysine residue by trypsin digestion of azidobenzoic acid-modified trastuzumab.
  • FIG. 38 is a diagram showing an analysis result by BioPharmaca Finder that a lysine residue at position 317 of azidobenzoic acid-modified trastuzumab is highly selectively modified.
  • FIG. 39 is a diagram showing an MS spectrum of a peptide fragment of FNWYVDGVEVHNAKTTKPR (SEQ ID NO: 12) containing a modification site to a lysine residue by trypsin digestion of azidobenzoic acid-modified trastuzumab.
  • FIG. 40 is a diagram showing a CID spectrum of a peptide fragment of FNWYVDGVEVHNAKTTKPR (SEQ ID NO: 12) containing a modification site to a lysine residue by trypsin digestion of azidobenzoic acid-modified trastuzumab.
  • FIG. 40 is a diagram showing a CID spectrum of a peptide fragment of FNWYVDGVEVHNAKTTKPR (SEQ ID NO: 12) containing a modification site to a lysine residue by trypsin digestion of azidobenzoic acid-modified trastuzumab.
  • FIG. 41 is a diagram showing an analysis result by BioPharmaca Finder that a lysine residue at position 288 or position 290 of azidobenzoic acid-modified trastuzumab is highly selectively modified.
  • FIG. 42 is a diagram showing an MS spectrum of a peptide fragment of THTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISR (SEQ ID NO: 11) containing a modification site to a lysine residue by trypsin digestion of azidobenzoic acid-modified trastuzumab.
  • SEQ ID NO: 11 an MS spectrum of a peptide fragment of THTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISR
  • FIG. 43 is a diagram showing a CID spectrum of a peptide fragment of THTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISR (SEQ ID NO: 11) containing a modification site to a lysine residue by trypsin digestion of azidobenzoic acid-modified trastuzumab.
  • FIG. 44 is a diagram showing an analysis result by BioPharmaca Finder that a lysine residue at positions 246 or 248 of azidobenzoic acid-modified trastuzumab is highly selectively modified.
  • FIG. 45 is a diagram showing an MS spectrum of a peptide fragment of THTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISR (SEQ ID NO: 11) containing a site modified to a lysine residue by trypsin digestion of acetylthiol-modified trastuzumab.
  • FIG. 46 is a diagram showing a CID spectrum of a peptide fragment of THTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISR (SEQ ID NO: 11) containing a site for modification to a lysine residue by trypsin digestion of acetylthiol-modified trastuzumab.
  • FIG. 11 is a diagram showing an MS spectrum of a peptide fragment of THTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISR (SEQ ID NO: 11) containing a site modified to a lysine residue by trypsin digestion of acetylthiol-modified trast
  • FIG. 47 is a diagram showing an analysis result by BioPharmaca Finder that a lysine residue at position 246 or 248 of acetylthiol-modified trastuzumab is highly selectively modified.
  • FIG. 48 is a diagram showing an MS spectrum of a peptide fragment of THTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISR (SEQ ID NO: 11) containing a modification site to a lysine residue by trypsin digestion of azidobenzoic acid-modified trastuzumab.
  • SEQ ID NO: 11 an MS spectrum of a peptide fragment of THTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISR
  • FIG. 49 is a diagram showing a CID spectrum of a peptide fragment of THTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISR (SEQ ID NO: 11) containing a modification site to a lysine residue by trypsin digestion of azidobenzoic acid-modified trastuzumab.
  • FIG. 50 is a diagram showing an MS spectrum of a peptide fragment of FNWYVDGVEVHNAKTTKPR (SEQ ID NO: 12) containing a modification site to a lysine residue by trypsin digestion of azidobenzoic acid-modified trastuzumab.
  • FIG. 12 is a diagram showing an MS spectrum of a peptide fragment of FNWYVDGVEVHNAKTTKPR (SEQ ID NO: 12) containing a modification site to a lysine residue by trypsin digestion of azidobenzoic acid-modified trastuzumab.
  • FIG. 51 is a diagram showing a CID spectrum of a peptide fragment of FNWYVDGVEVHNAKTTKPR (SEQ ID NO: 12) containing a modification site to a lysine residue by trypsin digestion of azidobenzoic acid-modified trastuzumab.
  • FIG. 52 is a diagram showing an MS spectrum of a peptide fragment of THTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISR (SEQ ID NO: 11) containing a modification site to a lysine residue by trypsin digestion of acetylthiol and azidobenzoic acid modified trastuzumab.
  • FIG. 12 is a diagram showing a CID spectrum of a peptide fragment of FNWYVDGVEVHNAKTTKPR (SEQ ID NO: 12) containing a modification site to a lysine residue by trypsin digestion of azidobenzoic acid-modified trastuzumab.
  • FIG. 53 is a diagram showing a CID spectrum of a peptide fragment of THTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISR (SEQ ID NO: 11) containing a site for modification to lysine residues by trypsin digestion of acetylthiol and azidobenzoic acid modified trastuzumab.
  • FIG. 54 shows the MS spectrum of the peptide fragment of FNWYVDGVEVHNAKTTKPR (SEQ ID NO: 12) containing the site of modification to lysine residues by trypsin digestion of acetylthiol and azidobenzoic acid modified trastuzumab.
  • FIG. 12 shows the MS spectrum of the peptide fragment of FNWYVDGVEVHNAKTTKPR (SEQ ID NO: 12) containing the site of modification to lysine residues by trypsin digestion of acetylthiol and azidobenzoic acid modified trastuzumab.
  • FIG. 55 is a diagram showing a CID spectrum of a peptide fragment of FNWYVDGVEVHNAKTTKPR (SEQ ID NO: 12) containing a modification site to a lysine residue by trypsin digestion of acetylthiol and azidobenzoic acid modified trastuzumab.
  • FIG. 56 is a diagram showing an analysis result by BioPharmaca Finder that lysine residues at positions 246 or 248 and 288 or 290 of acetylthiol and azidobenzoic acid modified trastuzumab are highly selectively modified.
  • FIG. 10 is a diagram showing a CID spectrum of a peptide fragment of FNWYVDGVEVHNAKTTKPR (SEQ ID NO: 12) containing a modification site to a lysine residue by trypsin digestion of acetylthiol and azidobenzoic acid modified trastuzumab.
  • FIG. 57 is a diagram showing an MS spectrum of a peptide fragment of CCVECPPCPAPPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISR (SEQ ID NO: 102) containing a site for modification to a lysine residue by trypsin digestion of benzoic acid-modified denosumab.
  • FIG. 58 is a diagram showing a CID spectrum of a peptide fragment of CCVECPPCPAPPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISR (SEQ ID NO: 102) containing a site for modification to a lysine residue by trypsin digestion of benzoic acid-modified denosumab.
  • FIG. 102 is a diagram showing an MS spectrum of a peptide fragment of CCVECPPCPAPPPVAGPSVFLFPPKPKPKDTLMISR (SEQ ID NO: 102) containing a site for modification to a lysine residue by trypsin digestion of benzoic acid-modified denosumab.
  • FIG. 60 is a diagram showing an analysis result by BioPharmaca Finder that a lysine residue at position 247 or 249 of benzoic acid-modified denosumab is highly selectively modified.
  • FIG. 60 is a diagram showing an MS spectrum of a peptide fragment of YGPPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISR (SEQ ID NO: 103) containing a modification site to a lysine residue by trypsin digestion of benzoic acid-modified dupilumab.
  • SEQ ID NO: 103 SEQ ID NO: 103
  • FIG. 61 is a diagram showing a CID spectrum of a peptide fragment of YGPPPCPPCPAPEFLGGPSVFLPPPKPKDTLMISR (SEQ ID NO: 103) containing a site for modification to a lysine residue by trypsin digestion of benzoic acid-modified dupilumab.
  • FIG. 62 is a diagram showing an analysis result by BioPharmaca Finder that a lysine residue at position 251 or 253 of benzoic acid-modified dupilumab is highly selectively modified.
  • FIG. 63 shows the analysis results of trastuzumab-DM1 conjugate synthesized in (12-1-1) by ESI-TOFMS (under non-reducing conditions).
  • FIG. 64 shows the analysis results of trastuzumab-DM1 conjugate synthesized in (12-1-1) by ESI-TOFMS (under reducing conditions).
  • FIG. 65 shows the analysis results of the trastuzumab-MMAE conjugate synthesized in (12-2-1) by ESI-TOFMS (under non-reducing conditions).
  • FIG. 66 shows the analysis results of the trastuzumab-MMAE conjugate synthesized in (12-2-1) by ESI-TOFMS (under reducing conditions).
  • FIG. 67 shows the results of analysis of the rituximab-DM1 conjugate synthesized in (12-3-1) by ESI-TOFMS (under non-reducing conditions).
  • FIG. 68 shows the analysis results of rituximab-DM1 conjugate synthesized in (12-3-1) by ESI-TOFMS (under reducing conditions).
  • FIG. 69 shows the analysis results of rituximab-DM1 conjugate synthesized in (12-4-1) by ESI-TOFMS (under non-reducing conditions).
  • FIG. 70 is a diagram showing an analysis result of the rituximab-DM1 conjugate synthesized in (12-4-1) by ESI-TOFMS (under reducing conditions).
  • 71 shows (1) the Fc region in the heavy chain of trastuzumab and the consensus amino acid sequence of the IgG1 Fc region (SEQ ID NO: 1), and (2) the amino acid sequence of the IgG1 Fc region (SEQ ID NO: 3). .
  • a substance having affinity for an antibody and a compound having a bioorthogonal functional group or a salt thereof 1-1.
  • the present invention provides an affinity substance for an antibody represented by formula (I), and a compound having a bioorthogonal functional group or a salt thereof.
  • ALBE (I) [Where, A is an affinity substance for an antibody, L is a divalent group containing a leaving group, E is a divalent group comprising an electrophilic group (i) linked to the leaving group and (ii) capable of reacting with a nucleophilic group in the antibody; B is a bioorthogonal functional group, The leaving group has the ability to be cleaved from E by the reaction between the nucleophilic group and the electrophilic group. ]
  • the affinity substance (A) for the antibody is one structural unit having LE-B or a plurality of (for example, 2 to 5, preferably 2) having LE-B. May have up to 4 (more preferably 2 or 3) structural units (same or different).
  • the affinity substance (A) or antibody (Ab) for the antibody indicates that the specific structural unit (structural unit excluding A or Ab) in the formula contains a covalent bond. Therefore, also in other formulas, the affinity substance (A) or antibody (Ab) for an antibody is one specific structural unit or a plurality (for example, 2 to 5, preferably 2 to 4, more preferably 2 Or 3) specific structural units (same or different).
  • Affinity substance for antibody In the formula (I), A is an affinity substance for the antibody.
  • An affinity substance for an antibody is a substance that has a non-covalent binding ability to an antibody.
  • the affinity substance used in the present invention targets an antibody.
  • the antibody may be an antibody modified with a biomolecule (eg, sugar) or an antibody unmodified with a biomolecule.
  • a biomolecule eg, sugar
  • an antibody against a biological component or a virus-derived component is preferable.
  • the biological component include components (eg, proteins) derived from animals such as mammals and birds (eg, chickens), insects, microorganisms, plants, fungi, and fishes.
  • the biological component is a component derived from a mammal.
  • Mammals include, for example, primates (eg, humans, monkeys, chimpanzees), rodents (eg, mice, rats, guinea pigs, hamsters, rabbits), pets (eg, dogs, cats), livestock (eg, Cattle, pigs, goats) and working animals (eg, horses, sheep).
  • the biological component is more preferably a primate or rodent component (eg, protein), and even more preferably, from the viewpoint of clinical application of the present invention, a human component (eg, protein). is there.
  • virus-derived components include components (eg, proteins) derived from influenza viruses (eg, avian influenza virus, swine influenza virus), AIDS virus, Ebola virus, and phage virus.
  • the antibody is also a polyclonal antibody or a monoclonal antibody, preferably a monoclonal antibody.
  • Monoclonal antibodies include, for example, chimeric antibodies, humanized antibodies, human antibodies, and antibodies with a predetermined sugar chain added (eg, modified to have a sugar chain binding consensus sequence such as an N-type sugar chain binding consensus sequence).
  • Antibody bispecific antibody, scFv antibody, Fab antibody, F (ab ′) 2 antibody, VHH antibody, Fc region protein, and Fc fusion protein.
  • the antibody may also be a divalent antibody (eg, IgG, IgD, IgE), or a tetravalent or higher antibody (eg, IgA antibody, IgM antibody).
  • the antibody that is the target of the affinity substance may also be composed of any amino acid residue, but is preferably composed of 20 natural L- ⁇ -amino acid residues that normally constitute proteins.
  • amino acid residues include L-alanine (A), L-asparagine (N), L-cysteine (C), L-glutamine (Q), L-isoleucine (I), L-leucine ( L), L-methionine (M), L-phenylalanine (F), L-proline (P), L-serine (S), L-threonine (T), L-tryptophan (W), L-tyrosine (Y ), L-valine (V), L-aspartic acid (D), L-glutamic acid (E), L-arginine (R), L-histidine (H), or L-lysine (K), and glycine (G (Hereinafter, the notation of L is omitted).
  • the antibody may be composed of, for example, 100 or more, preferably 120 or more, more preferably 150 or more, still more preferably 180 or more, particularly preferably 200 or more amino acid residues.
  • the antibody may also be, for example, 1000 or less, preferably 900 or less, more preferably 800 or less, even more preferably 700 or less, and particularly preferably 600 or less. More specifically, the antibody has, for example, 100 to 1000, preferably 120 to 900, more preferably 150 to 800, even more preferably 180 to 700 or more, and particularly preferably 200 to 600 amino acid residues. You may be comprised from group.
  • the number of amino acid residues may correspond to the amino acid residues of the antibody heavy chain.
  • the antibody which is the target of the affinity substance further contains a specific amino acid residue having a side chain or a terminal (N-terminal and / or C-terminal), preferably a side chain capable of reacting with a bioorthogonal functional group as described later.
  • a protein comprising one or more positions (preferably a plurality of positions).
  • Such specific amino acid residues include, for example, amino acid residues as described later, and preferably include lysine residues, tyrosine residues, serine residues, threonine residues, and cysteine residues.
  • an antibody comprising such a specific amino acid residue at a plurality of positions is preferred.
  • the plurality of positions is not particularly limited as long as it is 2 or more positions, but for example, 3 or more positions, preferably 5 or more positions, more preferably 10 or more positions, still more preferably 20 or more positions, particularly preferably. May be 30 or more positions.
  • the plurality of positions may also be, for example, 200 or less positions, preferably 180 or less positions, more preferably 150 or less positions, even more preferably 120 or less positions, and particularly preferably 100 or less positions.
  • the plurality of positions are, for example, 3 to 200 positions, preferably 5 to 180 positions, more preferably 10 to 150 positions, still more preferably 20 to 120 positions, particularly preferably 30 to There may be 100 positions.
  • the compound of the present invention regioselectively modifies one or two specific amino acid residues present in a specific region.
  • the number of lysine residues in human IgG1 depends on the amino acid composition in the variable region, it is generally said to be about 70 to 90.
  • one or two lysine residues present in such a specific region of human IgG1 have been successfully regioselectively modified.
  • the present invention modifies amino acid residues present at specific target sites in the antibody while maintaining the function of the antibody (ie, maintaining native folding without denaturing the antibody). From this viewpoint, regioselective modification of amino acid residues exposed on the surface of the antibody is preferable.
  • human IgGs such as human IgG1
  • exposed lysine residues and exposed tyrosine residues are present at the following positions (according to EU numbering; reference).
  • human IgG such as human IgG1
  • a lysine residue, a tyrosine residue, a serine residue or a threonine residue it is exposed to the surface among the above positions (1) to (4).
  • a lysine residue, a tyrosine residue, a serine residue, or a threonine residue present at the following position may be modified.
  • a predetermined position in the CH2 domain that can be efficiently modified in the present invention (example: Lysine residues present at positions 246, 248, 288, 290, 317) may be modified.
  • an antibody that is a target of an affinity substance is identified in a target region consisting of 1 to 50 consecutive amino acid residues when it contains a specific amino acid residue at a plurality of positions as described above. And one or more amino acid residues, and 5 or more specific amino acid residues in a non-target region other than the target region.
  • the target region is preferably 1-30, more preferably 1-20, even more preferably 1-10, 1-5, or 1-3 (ie 1, 2, or 3) ) Amino acid residues.
  • the target region may be a region consisting of a specific amino acid residue present at a specific position.
  • Such a specific position varies depending on the type of the target protein and affinity substance, and is, for example, a specific position in a specific region (eg, CH1, CH2, CH3) in an antibody constant region. Preferably, it may be a position in CH2 of the antibody.
  • the target region may be the following residues according to Eu numbering in human IgG Fc: (1) Lys248 residue (hereinafter also referred to simply as “Lys248” and corresponds to the 18th residue of the human IgG CH2 region (SEQ ID NO: 1)) or Lys246 residue (hereinafter referred to herein) In this case, it is simply expressed as “Lys246”, which corresponds to the 16th residue of the human IgG CH2 region (SEQ ID NO: 1)): (2) Lys288 residue (hereinafter also simply referred to as “Lys288” in the present specification, which corresponds to the 58th residue of the human IgG CH2 region (SEQ ID NO: 1)) or Lys290 residue (hereinafter referred to herein) In this case, it is also simply expressed as “Lys290” and corresponds to the 60th residue of the human IgG CH2 region (SEQ ID NO: 1)); (3) Lys 317 residue (hereinafter also referred to referred
  • a specific amino acid residue in the target region can be highly regioselectively modified.
  • Such regioselectivity is, for example, 30% or more, preferably 40% or more, more preferably 50% or more, even more preferably 60% or more, particularly preferably 70% or more, 80% or more, 90% or more, 95 % Or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99% or more, or 100%.
  • the target region also includes a number of specific amino acid residues present at a specific position with respect to the N-terminal side and the C-terminal side with respect to the specific position (where a is an arbitrary number of 1 to 10) In the region up to the remote position of the amino acid residue of the amino acid residue of the amino acid residue other than the specific amino acid residue present at the specific position, Also good. a is preferably an integer of 1 to 5, more preferably an integer of 1 to 3, even more preferably 1 or 2, and particularly preferably 1.
  • the antibody is a monoclonal antibody.
  • antibody isotypes such as monoclonal antibodies include IgG (eg, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4), IgM, IgA, IgD, IgE, and IgY.
  • the monoclonal antibody is a full-length antibody or an antibody fragment (eg, F (ab ′) 2 , Fab ′, Fab, Fv, single chain antibody), and a full-length antibody is preferable.
  • the antibody is a human antibody, humanized antibody or chimeric antibody having human IgG (eg, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4) in the constant region.
  • Antibody is an antibody against an arbitrary antigen.
  • an antigen may be a component found in an organism or virus as described above.
  • antigens include proteins [oligopeptides and polypeptides. It may be a protein modified with a biomolecule such as sugar (eg, glycoprotein)], sugar chain, nucleic acid, and low molecular weight compound.
  • the antibody may be an antibody having a protein as an antigen.
  • proteins include cell membrane receptors, cell membrane proteins other than cell membrane receptors (eg, extracellular matrix proteins), ligands, and soluble receptors.
  • the protein that is the antigen of the antibody may be a disease target protein.
  • diseases target protein include the following.
  • the affinity substance for the antibody is an affinity substance for the monoclonal antibody.
  • the isotype of the monoclonal antibody is the same as that described above for the antibody, but IgG (eg, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4) is preferred.
  • the monoclonal antibody is a full length monoclonal antibody.
  • the affinity substance for the antibody is an affinity substance for a chimeric antibody, humanized antibody, or human antibody (eg, IgG such as IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, etc.) that is a full-length monoclonal antibody.
  • IgG such as IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, etc.
  • the affinity substance for an antibody is an affinity substance for an antibody comprising any one Fc region protein selected from the group consisting of the following (A) to (C) and having an antigen-binding ability. : (A) an Fc region protein comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1; (B) an Fc region protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acid residues are inserted, added, deleted or substituted in the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1; or (C) the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 and 90 Fc region protein comprising an amino acid sequence exhibiting at least% identity.
  • the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 is an Fc region protein.
  • Fc region proteins are known to have secretory ability. Therefore, the Fc region proteins (A) to (C) can have secretory ability.
  • an antibody containing such an Fc region protein can have antigen binding ability.
  • the amino acid residue at position 18 in SEQ ID NO: 1 is an arbitrary amino acid residue, preferably a neutral amino acid residue, more preferably an amino acid residue having a nonpolar side chain as described below, Even more preferred is leucine, isoleucine or alanine, and particularly preferred is leucine or alanine.
  • the amino acid residue at position 19 in SEQ ID NO: 1 is an arbitrary amino acid residue, preferably a neutral amino acid residue or an acidic amino acid residue, more preferably an amino acid residue having a nonpolar side chain or an acidic amino acid residue. An amino acid residue, even more preferably leucine or glutamic acid.
  • the amino acid residue at position 21 in SEQ ID NO: 1 is an arbitrary amino acid residue, preferably a neutral amino acid residue, more preferably an amino acid residue having a nonpolar side chain, still more preferably Glycine or alanine.
  • the amino acid residue at position 140 in SEQ ID NO: 1 is an arbitrary amino acid residue, preferably an acidic amino acid residue, more preferably glutamic acid or aspartic acid.
  • the amino acid residue at position 142 in SEQ ID NO: 1 is an arbitrary amino acid residue, preferably a neutral amino acid residue, more preferably an amino acid residue having a nonpolar side chain, still more preferably It is methionine, leucine or isoleucine, particularly preferably methionine or leucine.
  • the amino acid residue at position 177 in SEQ ID NO: 1 is an arbitrary amino acid residue, preferably a neutral amino acid residue, more preferably an amino acid residue having an uncharged polar side chain as described later or An amino acid residue having a nonpolar side chain, more preferably threonine, alanine or glycine, and particularly preferably threonine or alanine.
  • amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 may be an amino acid sequence consisting of amino acid residues at positions 220 to 449 in the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2.
  • amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 may be an amino acid sequence consisting of amino acid residues at positions 7 to 236 in the amino acid sequence of SEQ ID NO: 3.
  • an antibody comprising an Fc region protein comprising an amino acid sequence as described above may be an Fc region protein comprising an amino acid sequence as described above and an antibody comprising an antibody constant region.
  • the constant region of such an antibody may be a constant region of a chimeric antibody, a humanized antibody, or a human antibody (eg, IgG such as IgG1, IgG2, IgG3, IgG4).
  • one or several amino acid residues are modified by 1, 2, 3 or 4 mutations selected from the group consisting of deletion, substitution, addition and insertion of amino acid residues. obtain.
  • the amino acid residue mutation may be introduced into one region in the amino acid sequence, or may be introduced into a plurality of different regions.
  • the term “one or several” refers to a number that does not significantly impair the activity of the protein.
  • the number represented by the term “one or several” is, for example, 1 to 100, preferably 1 to 80, more preferably 1 to 50, 1 to 30, 1 to 20, 1 to 10 or 1 to 5 (eg, 1, 2, 3, 4, or 5).
  • the percent identity with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 is 70% or more, 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 91% or more, 92% or more, 93 % Or more, 94% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, or 99% or more.
  • compositional adjustments Conditional composition, matrix adjustment.
  • Secretion in secretory capacity has the same meaning as secretory protein secretion (so-called soluble). Therefore, “having secretory ability” means functioning as an antibody in the same manner as a normal antibody.
  • the antibody containing the Fc region protein may be introduced with a mutation at a specific site as long as it retains the desired characteristics (eg, secretion ability, antigen binding ability).
  • desired characteristics eg, secretion ability, antigen binding ability.
  • the positions of amino acid residues where mutations may be introduced that can retain the desired properties will be apparent to those skilled in the art. Specifically, those skilled in the art 1) compare the amino acid sequences of multiple proteins with similar characteristics, 2) reveal regions that are relatively conserved, and regions that are not relatively conserved, Then, 3) from the relatively conserved region and the relatively non-conserved region, it is possible to predict the region that can play an important role in the function and the region that can not play the important role in the function, respectively. The correlation between structure and function can be recognized. Therefore, those skilled in the art can specify the position of an amino acid residue to which a mutation may be introduced in the amino acid sequence of an antibody containing the Fc region protein.
  • amino acid residue substitution may be a conservative substitution.
  • conservative substitution refers to the replacement of a given amino acid residue with an amino acid residue having a similar side chain. Families of amino acid residues with similar side chains are well known in the art.
  • such families include amino acids having basic side chains (eg, lysine, arginine, histidine), amino acids having acidic side chains (eg, aspartic acid, glutamic acid), amino acids having uncharged polar side chains (Eg, asparagine, glutamine, serine, threonine, tyrosine, cysteine), amino acids with non-polar side chains (eg, glycine, alanine, valine, leucine, isoleucine, proline, phenylalanine, methionine, tryptophan), ⁇ -branched side chain Amino acids (eg, threonine, valine, isoleucine), amino acids having aromatic side chains (eg, tyrosine, phenylalanine, tryptophan, histidine), amino acids having side groups containing hydroxyl groups (eg, alcoholic, phenolic) ( Example, serine, thread Nin, tyrosine), and amino acids (e.g.
  • the conservative substitution of amino acids is a substitution between aspartic acid and glutamic acid, a substitution between arginine and lysine and histidine, a substitution between tryptophan and phenylalanine, and between phenylalanine and valine. Or a substitution between leucine, isoleucine and alanine, and a substitution between glycine and alanine.
  • Examples of the antibody used in the present invention or an antibody containing any one Fc region selected from the group consisting of (A) to (C) above include chimeric antibodies (eg, rituximab, basiliximab, infliximab, cetuximab, siltuximab) , Dinutuximab, ortoxaximab), humanized antibodies (eg, daclizumab, palivizumab, trastuzumab, alentuzumab, omalizumab, efalizumab, bevacizumab, natalizumab (IgG4), tocilizumab, eculimabumab (IgG2), (IgG4), mepolizumab, erutuzumab, daratumumab, ikesekizumab (IgG4), lesriumab (IgG4), atezolizumab), human antibodies (eg, Adari Mab, pan
  • affinity substances for antibodies as described above include peptides (including oligopeptides, polypeptides, and proteins), low molecular compounds, nucleic acids, nucleic acid-peptide complexes, peptide-low molecular compound complexes, nucleic acids, Examples include small molecule complexes.
  • the affinity substance for an antibody as described above may be a peptide (including oligopeptides, polypeptides, proteins, which may be glycoproteins).
  • peptides including oligopeptides, polypeptides, proteins, which may be glycoproteins.
  • IgG-binding peptides having affinity for a specific region (CH2 region) of human IgG in general that is, human IgG1, IgG2, IgG3, and IgG4; the same applies hereinafter
  • CH2 region specific region of human IgG in general
  • QSYP SEQ ID NO: 29
  • HWRGWV SEQ ID NO: 30
  • HYFKFD SEQ ID NO: 31
  • HFRRHL SEQ ID NO: 32
  • DAAG SEQ ID NO: 33
  • Fc-I, Fc-II, and Fc-III having affinity for a specific region (Fc region) of human IgG in general (eg, Warren L. Delano et al., Science, 2000, VOL.
  • NARKFYKG SEQ ID NO: 34
  • NKFRGKYK SEQ ID NO: 35
  • Fc region specific region of human IgG in general
  • the affinity substance for an antibody as described above may be a substance other than a peptide.
  • examples of such substances include aptamers having an affinity for a specific region (CH2 region, particularly the side chain of Lys340) of human IgG (eg, human IgG1 to 4) (eg, GGUG (C / G, GGGUG, CUG, etc.)).
  • A) (U / T) motif-containing aptamer] has been reported (eg, International Publication No. 2007/004748; Nomura Y et al., Nucleic Acids Res., 2010 Nov; 38 (21): 7822-9 Miyakawa S et al., RNA., 2008 Jun; 14 (6): 1154-63).
  • the affinity substance for the antibody as described above can be obtained by any known method in the art. For example, by producing an antibody using the whole antibody or a partial peptide in the antibody (eg, a partial peptide existing in the region where the antibody surface exposed region is known) (eg, hybridoma method) Or by screening affinity substances from libraries (eg, peptide libraries, antibody libraries, antibody-producing cell libraries, aptamer libraries, phage libraries, mRNA libraries, cDNA libraries) from which affinity substances are available (eg, phage display) Method, SELEX method, mRNA display method, ribosome display method, cDNA display method, yeast display method).
  • libraries eg, peptide libraries, antibody libraries, antibody-producing cell libraries, aptamer libraries, phage libraries, mRNA libraries, cDNA libraries
  • affinity substances eg, phage display
  • the affinity substance for the antibody is an affinity substance for the Fc region (soluble region) of the antibody
  • specific regions of the Fc region (eg, CH1, CH1, etc.) of various antibodies eg, IgG, IgA, IgM, IgD, IgE
  • an affinity substance eg, antibody, aptamer
  • those having a relatively strong affinity and those having a weak affinity are mixed.
  • the affinity binding ability can be reinforced by using an excess amount.
  • the affinity substance for the antibody is a peptide.
  • a peptide having binding ability to the constant region of a monoclonal antibody is preferable, a peptide having binding ability to the Fc region of a monoclonal antibody is more preferable, and a peptide having binding ability to the Fc region of IgG is even more preferable.
  • the length of the peptide is not particularly limited. For example, it is a peptide consisting of 10 to 40 (eg, 10 to 20, 20 to 30, and 30 to 40) amino acid residues.
  • amino acid residues constituting peptides there are 20 types of L- ⁇ -amino acid residues constituting natural proteins, stereoisomers thereof (eg, D-amino acids), and isomers thereof (eg, ⁇ -amino acids). Can be mentioned.
  • the affinity substance for an antibody as described above may be a peptide comprising any of the following amino acid sequences.
  • A-1-1) amino acid sequence of FNMQQQRRFYEALHDPNNLEEQRNARIRSIRDD (SEQ ID NO: 11) (see, eg, compounds 22-24, 29), or (A-1-2)
  • amino acid sequence of FNMQCQRRFYEALHDPNNLEEQRNARIRSIRDDC (SEQ ID NO: 12) (amino acid sequence in which two K are substituted by R in the known sequence Z34C)
  • any one to three amino acid residues in the sequence are , which may be the same or different, each substituted with one amino acid residue selected from the group consisting of a lysine residue, an aspartic acid residue, and a glutamic acid residue
  • A-2-1) ⁇ -Ala-NMQQRRFYEALHDPNNLNEEQRNARIRSIRDD (SEQ ID NO: 13) amino acid sequence (eg, see compounds 26-
  • the peptide consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12 has two K (lysine) counted from the N-terminus as R (arginine) in the affinity peptide known as Z34C for convenience of peptide reagent synthesis. ).
  • the compound of the present invention including a peptide containing the above amino acid sequence is a specific amino acid residue in human IgG Fc (eg, Lys248 residue or Lys246 residue according to Eu numbering, Lys288 or Lys290, Lys317, or other than those residues) It is useful for regioselective modification of amino acid residues.
  • amino acid sequence of the Z34C is FNMQCQRRFYEALHDPNNLEEQRNAKIKSIRDDC (SEQ ID NO: 36) (eg, Starovasnik, M. A. et al., Structural mimicryinativem. USA., 94, 10080-10085 (1997)).
  • the affinity peptide can have affinity for human IgG (eg, human IgG as described above, preferably human IgG1).
  • human IgG eg, human IgG as described above, preferably human IgG1.
  • the affinity peptide includes two cysteine residues (for example, the 5th and 34th positions), the two cysteine residues may form a cyclic peptide by disulfide bonding.
  • any position as long as it has affinity for human IgG such as human IgG1 can be used. Such a position can be easily identified by those skilled in the art.
  • the position where the lysine residue, aspartic acid residue or glutamic acid residue is introduced may be an amino acid residue other than the cysteine residue. More preferably, examples of the position at which an amino acid residue that can be easily modified by a crosslinking agent is introduced include the 1st, 3rd, 6th, 7th, 13th, 20th, 24th, 31st, and 32nd positions. Position amino acid residues.
  • the amino acid sequence having the characteristics (a) and (b) is selected from the group consisting of a lysine residue, an aspartic acid residue, and a glutamic acid residue (an amino acid residue that can be easily modified by a crosslinking agent).
  • 20 specific amino acid residues preferably lysine residues, aspartic acid residues
  • 17 amino acid residues other than glutamic acid residues, and more preferably 19 amino acid residues other than lysine residues are also preferably present at positions other than the predetermined positions.
  • Such a predetermined position is not particularly limited, and examples thereof include 1st, 3rd, 6th, 7th, 13th, 20th, 24th, 31st, and 32nd positions.
  • two cysteine residues are maintained, and these two cysteine residues may be linked by a disulfide bond.
  • the amino acid sequence having 85% or more identity to the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 11 to 14 is 1, 2, 3 or 4 selected from the group consisting of deletion, substitution, addition and insertion of amino acid residues 1 to 3 (preferably 1 or 2, more preferably 1) amino acid residues may be modified by mutation (preferably substitution).
  • the amino acid residue mutation may be introduced into one region in the amino acid sequence, or may be introduced into a plurality of different regions.
  • the amino acid sequence having the characteristics (a) and (b) may be the following (c) or (d).
  • (C) An amino acid sequence selected from the group consisting of the following amino acid sequences (1) to (16): (1) FNMQQQRRFYEALHDPNNLEEQRNARIRSIKDD (SEQ ID NO: 5); (2) FNMQQQRRFYEALHDPNNLEEQRNARIKSIRDD (SEQ ID NO: 6); (3) ⁇ -Ala-NMQQRRFYEALHDPNNLNEEEQRNARIRSIRDD (SEQ ID NO: 7); (4) FNMQQQRRFYEALHDPNNLEEQRNAKIKISIKDD (SEQ ID NO: 8); (5) KNMQCQRRFYEALHDPNNLEEQRNARIRSRDDC (SEQ ID NO: 37); (6) FNMQCQKRFYEALHDPNNLEEQRNARIRSRDDC (SEQ ID NO: 38); (7) FNMQCQRRFYEAKHDPNNLEEQRNARI
  • the affinity peptide having the above amino acid sequence of (d) is preferably a peptide having the binding ability to the constant region of the monoclonal antibody, more preferably a peptide having the binding ability to the Fc region of the monoclonal antibody, and the binding ability to the Fc region of IgG. Even more preferred are peptides having
  • amino acid residues As long as the affinity peptide has 85% or more identity to the amino acid sequence of SEQ ID NOs: 11 to 14 or the amino acid sequences of (1) to (16), in addition to the introduction of amino acid residues, further amino acid residue mutations may be included. Those skilled in the art can easily identify the position at which additional amino acid mutations can be introduced. For example, phenylalanine residue at position 1, arginine residue at position 6, leucine residue at position 13, glutamic acid residue at position 20, asparagine residue at position 24, or arginine residue at position 31 It can be used even if the amino acid residue that can be modified is excluded).
  • amino acids that can be introduced by further amino acid mutation include alanine (A), asparagine (N), cysteine (C), glutamine (Q), glycine (G), isoleucine (I), leucine (L), methionine ( M), phenylalanine (F), proline (P), serine (S), threonine (T), tryptophan (W), tyrosine (Y), valine (V), aspartic acid (D), glutamic acid (E), arginine (R), histidine (H), and lysine (L).
  • these 19 amino acids other than lysine may be utilized.
  • the amino acid may be either L-form or D-form, but L-form is preferred (in the Examples, all amino acid residues constituting the peptide are L-form).
  • the degree of percent identity to the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 11 to 14 or the amino acid sequences of (1) to (16) can be determined as described above.
  • the degree of identity is preferably 90% or more, 92% or more, more preferably 94% or more, even more preferably 95% or more, and particularly preferably 97% or more (ie, only mutation of one amino acid residue is determined). It may be).
  • the affinity substance for an antibody as described above is a peptide comprising any of the following amino acid sequences: Formula 1-1: (X 0-3 ) a -C-Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-IIWC- (X 0-3 ) b (SEQ ID NO: 15)
  • Xaa1 ′, Xaa2 ′, Xaa3 ′, Xaa4 ′, Xaa5 ′, and Xaa6 ′ are the same as Xaa1, Xaa2, Xaa3, Xaa4, Xaa5, and Xaa6, respectively. ].
  • Such peptides have the ability to bind to the Fc region of monoclonal antibodies.
  • (X 0-3 ) a is none, arginine residue-glycine residue-asparagine residue, glycine residue- Asparagine residue, aspartic acid residue, or asparagine residue, preferably none, arginine residue-glycine residue-asparagine residue, aspartic acid residue, or asparagine residue.
  • Xaa2 is a tyrosine residue, tryptophan residue, or histidine residue, preferably a tyrosine residue or tryptophan Residue.
  • Xaa3 is a histidine residue, a phenylalanine residue, a tyrosine residue, a tryptophan residue, an arginine residue, or a glycine residue.
  • it is a histidine residue.
  • Xaa4 is a lysine residue, an aspartic acid residue, or a glutamic acid residue, preferably a lysine residue.
  • Xaa5 is glycine residue, serine residue, asparagine residue, glutamine residue, aspartic acid residue, glutamic acid residue , Phenylalanine residue, tyrosine residue, tryptophan residue, histidine residue, threonine residue, leucine residue, alanine residue, valine residue, isoleucine residue, or arginine residue, preferably glycine residue , Threonine residue, leucine residue.
  • Xaa6 is a glutamine residue, a glutamic acid residue, an asparagine residue, or an aspartic acid residue, more preferably It is a glutamine residue.
  • the peptide comprising any one of the amino acid sequences represented by the above formulas 1-1 to 1-9 and formula 2-1 is a peptide comprising an amino acid sequence selected from the group consisting of: (1 ′) RGNCAYHKGIIWCTYH (SEQ ID NO: 46); (2 ′) RGNCAYHKGQIVWCTYH (SEQ ID NO: 47); (3 ′) RGNCAYHKGQVVWCTYH (SEQ ID NO: 48); (4 ′) RGNCAYHKGAVWCTYH (SEQ ID NO: 49); (5 ′) RGNCAYHKGQLLWCTYH (SEQ ID NO: 50); (6 ′) RGNCAYHKGQLIWCTYH (SEQ ID NO: 51); (7 ′) DCAYHKQIVWCT (SEQ ID NO: 52); (8 ′) DCAYHKQVVWCT (SEQ ID NO: 53); (9 ') DCAYHKGQAVWCT (SEQ ID NO: 54); (10 ′) RGNCAYHK
  • At least two cysteine residues that are separated in each amino acid sequence of the peptide can form a cyclic peptide by a disulfide bond.
  • the sulfide group in two cysteine residues may be connected by the carbonyl group containing linker represented below.
  • the broken line portion of the carbonyl group-containing linker represented above means a binding portion with a sulfide group.
  • the linker is more stable against a reduction reaction or the like than a normal disulfide bond.
  • Such a peptide can be prepared, for example, by the method described in International Publication No. 2016/186206.
  • the compound of the present invention including a peptide containing the above amino acid sequence is a specific amino acid residue in human IgG Fc (eg, Lys248 residue or Lys246 residue according to Eu numbering, Lys288 or Lys290, Lys317, or other than those residues) It is useful for regioselective modification of amino acid residues.
  • the amino acid constituting the peptide may be either L-form or D-form, but L-form is preferred (in the examples, all amino acid residues constituting the peptide are L-form).
  • the peptide may be modified at a specific amino acid residue with a crosslinking agent.
  • specific amino acid residues include lysine residues, aspartic acid residues, and glutamic acid residues, with lysine residues being preferred.
  • the cross-linking agent for example, a cross-linking agent preferably containing two or more succinimidyl groups such as DSG (disuccinimidyl glutarate), DSS (disuccinimidyl suberate, disuccinimidyl suberate) or the like, DMA (dimethimididapididipide)
  • imide acid moieties such as 2HCl, dimethyl adipimidate dihydrochloride (DMP), dimethyl pimelimidate-2 HCl, pimelimido acid dimethyl dihydrochloride, and DMS (dimethyl thisubimidate-2 HCl, dimethyl suberimidate dihydrochloride) are preferred.
  • a crosslinking agent containing two or more, and DTBP dimethyl 3,3'-dithiobispropio
  • examples include crosslinkers having an SS bond such as imidate ⁇ 2HCl, 3,3′-dithiobispropionimidic acid dimethyl dihydrochloride) and DSP (dithiobis (succinimidyl propionate), dithiobissuccinimidylpropionic acid).
  • SS bond such as imidate ⁇ 2HCl, 3,3′-dithiobispropionimidic acid dimethyl dihydrochloride) and DSP (dithiobis (succinimidyl propionate), dithiobissuccinimidylpropionic acid).
  • the terminal amino group and carboxy group of the peptide may be protected.
  • the protecting group for the N-terminal amino group include an alkylcarbonyl group (acyl group) (eg, butoxycarbonyl group such as acetyl group, propoxy group, tert-butoxycarbonyl group), alkyloxycarbonyl group (eg, fluoro group). Nylmethoxycarbonyl group), aryloxycarbonyl group, arylalkyl (aralkyl) oxycarbonyl group (eg, benzyloxycarbonyl group).
  • the protecting group for the N-terminal amino group is preferably an acetyl group.
  • Examples of the protecting group for the C-terminal carboxy group include groups capable of forming an ester or an amide.
  • groups capable of forming an ester or amide include alkyloxy groups (eg, methyloxy, ethyloxy, propyloxy, butyloxy, pentyloxy, hexyloxy), aryloxy groups (eg, phenyloxy, naphthyloxy), aralkyl Examples include an oxy group (eg, benzyloxy) and an amino group.
  • the protecting group for the C-terminal carboxy group is preferably an amino group.
  • L is a divalent group containing a leaving group.
  • the leaving group is a group having the ability to be cleaved from E by the reaction between the nucleophilic group in the antibody and the electrophilic group contained in the divalent group (E) containing the electrophilic group. is there.
  • Such leaving groups are common knowledge in the art (eg, Fujishima, S. et al J. Am. Chem. Soc, 2012, 134, 3961-3964. (Supra); Chem. Sci. 2015 3217. -3224 .; Nature Chemistry volume 8, pages 542-548 (2016)).
  • the leaving group is not particularly limited as long as it has the ability to be cleaved from E by the above reaction.
  • alkyl having 1 to 6 carbon atoms examples include methyl, ethyl, n-propyl, i-propyl, n-butyl, s-butyl, isobutyl, t-butyl, pentyl and hexyl.
  • the alkyl having 1 to 6 carbon atoms is preferably an alkyl having 1 to 4 carbon atoms.
  • Examples of leaving groups are —O—, —S—, —Se—, —SO 2 —O—, —SO 2 —N (R) —, —SO 2 —, —C ⁇ C—CH 2 —.
  • the group selected from the group consisting of O—, —N (OR) —, —N (R) —, and —O—N (R) — is the following (1) or (2): (1) —O—, —S—, —Se—, —SO 2 —O—, —SO 2 —N (R) —, —SO 2 —, —C ⁇ C—CH 2 —O—, —N A group consisting of (OR) —, —N (R) —, or —O—N (R) —; or (2) —O—, —S—, —Se—, —SO 2 —O—, —SO 2 —N (R) —, —SO 2 —, —
  • a group that enhances the ability of —, —N (R) —, or —O—N (R) — to be eliminated is such that the group is —O—, —S—, —Se—, —SO 2 —O—, —SO 2 —N (R) —, —SO 2 —, —C ⁇ C—CH 2 —O—, —N (OR) —, —N (R) —, or —O—N (R) — And when present, the group is —O—, —S—, —Se—, —SO 2 —O—, —SO 2 —N (R) —, —SO 2 —, —C ⁇ C—CH.
  • Preferred examples of the group that enhances the ability to remove —, —N (R) —, or —O—N (R) — include an arylene that may be substituted with an electron-withdrawing group, and an electron-withdrawing group.
  • Heteroarylene which may be substituted 2,5-diketopyrrolidine which may be condensed, 2,6-diketopiperidine which may be condensed, 2-ketopyrrolidine which may be condensed , Optionally fused 2-ketopiperidine, and 2-pyridone.
  • the number of electron withdrawing groups that arylene and heteroarylene may have is 1 or more (eg, 1 to 3, preferably 1 or 2).
  • Examples of the electron-withdrawing group include a halogen atom, an alkyl substituted with a halogen atom (eg, trifluoromethyl), a boronic acid residue, mesyl, tosyl, triflate, nitro, cyano, phenyl group, keto group (eg, , Acyl).
  • a halogen atom eg, trifluoromethyl
  • a boronic acid residue mesyl, tosyl, triflate, nitro, cyano, phenyl group, keto group (eg, , Acyl).
  • the “arylene” in the “arylene optionally substituted with an electron-withdrawing group” is preferably arylene having 6 to 24 carbon atoms, more preferably arylene having 6 to 18 carbon atoms, and 6 to 14 carbon atoms. Are more preferred, and arylene having 6 to 10 carbon atoms is most preferred.
  • the arylene which may be substituted with an electron-withdrawing group may be further substituted with a substituent other than the electron-withdrawing group or may not be substituted.
  • the number of carbon atoms does not include the number of carbon atoms of the electron-withdrawing group and other substituents. Examples of arylene include phenylene, naphthylene, and anthracenylene.
  • heteroarylene in the “heteroarylene optionally substituted with an electron-withdrawing group” is preferably a heteroarylene having 1 to 21 carbon atoms, more preferably a heteroarylene having 1 to 15 carbon atoms, Even more preferred are heteroarylenes of 1-9, most preferred are heteroarylenes of 1-6 carbon atoms.
  • the heteroarylene which may be substituted with an electron-withdrawing group may be further substituted with a substituent other than the electron-withdrawing group or may not be substituted.
  • the number of carbon atoms does not include the number of carbon atoms of the electron-withdrawing group and other substituents.
  • the heteroarylene includes one or more (for example, 1 to 5, preferably 1 to 4, more preferably 1 to 3) heteroatoms selected from the group consisting of a nitrogen atom, an oxygen atom, and a sulfur atom as ring constituent atoms.
  • Heteroarylene includes, for example, pyrrole diyl, frangiyl, thiophene diyl, pyridinediyl, pyridazine diyl, pyrimidine diyl, pyrazine diyl, triazine diyl, pyrazole diyl, imidazole diyl, thiazole diyl, isothiazole diyl, oxazole diyl, isoxazole diyl, triazole Examples include diyl, tetrazole diyl, indole diyl, purine diyl, anthraquinone diyl, carbazole diyl, fluorenediyl, quinoline diyl, isoquinoline diyl, quinazoline diyl, and
  • 2,5-diketopyrrolidine which may be condensed 2,6-diketopiperidine which may be condensed, 2-ketopyrrolidine which may be condensed, or 2 which may be condensed -Ketopiperidine and 2-pyridone may or may not be substituted with a substituent such as an electron-withdrawing group.
  • Heteroarylene which is an example of a leaving group, is a heteroarylene having a low ⁇ electron density (that is, less than 1).
  • a heteroarylene containing a nitrogen atom as a ring constituent atom is preferable.
  • the heteroarylene containing a nitrogen atom as a ring constituent atom is preferably a heteroarylene having 1 to 21 carbon atoms containing a nitrogen atom as a ring constituent atom, and having 1 to 15 carbon atoms containing a nitrogen atom as a ring constituent atom.
  • a heteroarylene having 1 to 9 carbon atoms containing a nitrogen atom as a ring-constituting atom is a heteroarylene having a low ⁇ electron density (that is, less than 1).
  • the heteroarylene that is a leaving group may or may not be substituted with a substituent such as an electron-withdrawing group.
  • the number of carbon atoms of the substituent is not included in the number of carbon atoms.
  • Examples of the heteroarylene that is a leaving group containing a nitrogen atom as a ring constituent atom include imidazole diyl, triazole diyl, tetrazole diyl, and 2-pyridone diyl (that is, 2-hydroxypyridine diyl).
  • examples of such a substituent include the following: (I) a halogen atom; (Ii) a monovalent hydrocarbon group; (Iii) Aralkyl; (Iv) a monovalent heterocyclic group; (V) R a —O—, R a —C ( ⁇ O) —, R a —O—C ( ⁇ O) —, or R a —C ( ⁇ O) —O— (R a is a hydrogen atom Or represents a monovalent hydrocarbon group); or (vi) NR b R c —, NR b R c —C ( ⁇ O) —, NR b R c —C ( ⁇ O) —O—, or R b —C ( ⁇ O) —NR c — (R b and R c are the following: (I) a halogen atom; (Ii) a monovalent hydrocarbon group; (Iii) Aralkyl; (Iv) a monovalent heterocycl
  • halogen atom examples include a fluorine atom, a chlorine atom, a bromine atom, and an iodine atom.
  • Examples of the monovalent hydrocarbon group include a monovalent chain hydrocarbon group, a monovalent alicyclic hydrocarbon group, and a monovalent aromatic hydrocarbon group.
  • the monovalent chain hydrocarbon group means a hydrocarbon group composed only of a chain structure, and the main chain does not include a cyclic structure. However, the chain structure may be linear or branched. Examples of the monovalent chain hydrocarbon group include alkyl, alkenyl, and alkynyl. Alkyl, alkenyl, and alkynyl may be linear or branched.
  • alkyl having 1 to 12 carbon atoms is preferable, alkyl having 1 to 6 carbon atoms is more preferable, and alkyl having 1 to 4 carbon atoms is more preferable.
  • the number of carbon atoms of the substituent is not included in the number of carbon atoms.
  • the alkyl having 1 to 12 carbon atoms include methyl, ethyl, n-propyl, i-propyl, n-butyl, s-butyl, isobutyl, t-butyl, pentyl, hexyl, heptyl, octyl, nonyl, decyl. , Dodecyl.
  • alkenyl having 2 to 12 carbon atoms is preferable, alkenyl having 2 to 6 carbon atoms is more preferable, and alkenyl having 2 to 4 carbon atoms is more preferable.
  • the number of carbon atoms of the substituent is not included in the number of carbon atoms. Examples of alkenyl having 2 to 12 carbon atoms include vinyl, propenyl, and n-butenyl.
  • Alkynyl is preferably alkynyl having 2 to 12 carbon atoms, more preferably alkynyl having 2 to 6 carbon atoms, and further preferably alkynyl having 2 to 4 carbon atoms.
  • the number of carbon atoms of the substituent is not included in the number of carbon atoms.
  • alkynyl having 2 to 12 carbon atoms include ethynyl, propynyl and n-butynyl.
  • alkyl is preferable.
  • the monovalent alicyclic hydrocarbon group means a hydrocarbon group containing only an alicyclic hydrocarbon as a ring structure and not containing an aromatic ring.
  • the alicyclic hydrocarbon is monocyclic or polycyclic. It may be. However, it is not necessary to be composed only of alicyclic hydrocarbons, and a part thereof may include a chain structure.
  • Examples of the monovalent alicyclic hydrocarbon group include cycloalkyl, cycloalkenyl, and cycloalkynyl, which may be monocyclic or polycyclic.
  • cycloalkyl a cycloalkyl having 3 to 12 carbon atoms is preferable, a cycloalkyl having 3 to 6 carbon atoms is more preferable, and a cycloalkyl having 5 to 6 carbon atoms is more preferable.
  • the number of carbon atoms of the substituent is not included in the number of carbon atoms.
  • examples of the cycloalkyl having 3 to 12 carbon atoms include cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, and cyclohexyl.
  • the cycloalkenyl is preferably a cycloalkenyl having 3 to 12 carbon atoms, more preferably a cycloalkenyl having 3 to 6 carbon atoms, and further preferably a cycloalkenyl having 5 to 6 carbon atoms.
  • the number of carbon atoms of the substituent is not included in the number of carbon atoms.
  • Examples of the cycloalkenyl having 3 to 12 carbon atoms include cyclopropenyl, cyclobutenyl, cyclopentenyl, and cyclohexenyl.
  • the cycloalkynyl is preferably a cycloalkynyl having 3 to 12 carbon atoms, more preferably a cycloalkynyl having 3 to 6 carbon atoms, and further preferably a cycloalkynyl having 5 to 6 carbon atoms.
  • the number of carbon atoms of the substituent is not included in the number of carbon atoms.
  • Examples of the cycloalkynyl having 3 to 12 carbon atoms include cyclopropynyl, cyclobutynyl, cyclopentynyl, and cyclohexynyl.
  • cycloalkyl is preferable.
  • the monovalent aromatic hydrocarbon group means a hydrocarbon group containing an aromatic ring structure. However, it is not necessary to be composed only of an aromatic ring, and a part thereof may contain a chain structure or an alicyclic hydrocarbon, and the aromatic ring may be either a monocyclic ring or a polycyclic ring. Good.
  • aryl having 6 to 12 carbon atoms is preferable, aryl having 6 to 10 carbon atoms is more preferable, and aryl having 6 carbon atoms is more preferable.
  • the number of carbon atoms of the substituent is not included in the number of carbon atoms. Examples of the aryl having 6 to 12 carbon atoms include phenyl and naphthyl.
  • phenyl is preferable.
  • alkyl As the monovalent hydrocarbon group, alkyl, cycloalkyl, and aryl are preferable, and alkyl is more preferable.
  • Aralkyl refers to arylalkyl.
  • the definition, examples and preferred examples of aryl and alkyl in arylalkyl are as described above.
  • Aralkyl having 3 to 15 carbon atoms is preferred as the aralkyl. Examples of such aralkyl include benzoyl, phenethyl, naphthylmethyl, and naphthylethyl.
  • the monovalent heterocyclic group refers to a group obtained by removing one hydrogen atom from a heterocyclic ring of a heterocyclic compound.
  • the monovalent heterocyclic group is a monovalent aromatic heterocyclic group or a monovalent non-aromatic heterocyclic group.
  • the hetero atom constituting the heterocyclic group preferably contains at least one selected from the group consisting of an oxygen atom, a sulfur atom, a nitrogen atom, a phosphorus atom, a boron atom and a silicon atom, and includes an oxygen atom, a sulfur atom and nitrogen. More preferably, at least one selected from the group consisting of atoms is included.
  • the monovalent aromatic heterocyclic group is preferably an aromatic heterocyclic group having 1 to 15 carbon atoms, more preferably an aromatic heterocyclic group having 1 to 9 carbon atoms, and an aromatic group having 1 to 6 carbon atoms. More preferred are group heterocyclic groups.
  • the number of carbon atoms of the substituent is not included in the number of carbon atoms.
  • Examples of the monovalent aromatic heterocyclic group include pyrrolyl, furanyl, thiophenyl, pyridinyl, pyridazinyl, pyrimidinyl, pyrazinyl, triazinyl, pyrazolyl, imidazolyl, thiazolyl, isothiazolyl, oxazolyl, isoxazolyl, triazolyl, tetrazolyl, indolyl, purinyl, anthraquinolyl , Carbazonyl, fluorenyl, quinolinyl, isoquinolinyl, quinazolinyl, and phthalazinyl.
  • the monovalent non-aromatic heterocyclic group is preferably a non-aromatic heterocyclic group having 2 to 15 carbon atoms, more preferably a non-aromatic heterocyclic group having 2 to 9 carbon atoms, More preferred are 6 non-aromatic heterocyclic groups.
  • the number of carbon atoms of the substituent is not included in the number of carbon atoms.
  • Examples of the monovalent non-aromatic heterocyclic group include oxiranyl, aziridinyl, azetidinyl, oxetanyl, thietanyl, pyrrolidinyl, dihydrofuranyl, tetrahydrofuranyl, dioxolanyl, tetrahydrothiophenyl, pyrrolinyl, imidazolidinyl, oxazolidinyl, piperidinyl, dihydropyranyl.
  • Tetrahydropyranyl Tetrahydropyranyl, tetrahydrothiopyranyl, morpholinyl, thiomorpholinyl, piperazinyl, dihydrooxazinyl, tetrahydrooxazinyl, dihydropyrimidinyl, and tetrahydropyrimidinyl.
  • the monovalent heterocyclic group is preferably a 5-membered or 6-membered heterocyclic group.
  • the substituent may be: (I ′) a halogen atom; (Ii ′) alkyl having 1 to 12 carbon atoms, phenyl, or naphthyl; (Iii ') Aralkyl having 3 to 15 carbon atoms; (Iv ′) a 5- or 6-membered heterocycle; (V ′) R a —O—, R a —C ( ⁇ O) —, R a —O—C ( ⁇ O) —, or R a —C ( ⁇ O) —O— (R a is hydrogen Or (vi ′) NR b R c —, NR b R c —C ( ⁇ O) —, NR b R c —C ( ⁇ O) —, or an atom or alkyl having 1 to 12 carbon atoms; O—, or R b —C ( ⁇ O) —NR c — (R b and R c are the same or different and each
  • the substituent may be: (I ′′) a halogen atom; (Ii '') alkyl having 1 to 12 carbon atoms; (Iii ′′) R a —O—, R a —C ( ⁇ O) —, R a —O—C ( ⁇ O) —, or R a —C ( ⁇ O) —O— (R a is Represents hydrogen atom or alkyl having 1 to 12 carbon atoms.); Or (iv ′′) NR b R c —, NR b R c —C ( ⁇ O) —, NR b R c —C ( ⁇ O ) —O— or R b —C ( ⁇ O) —NR c — (R b and R c are the same or different and each represents a hydrogen atom or alkyl having 1 to 12 carbon atoms); (V ′′) The same groups as listed above in (vii).
  • the substituent may be: (I ′ ′′) a halogen atom; (Ii ′ ′′) alkyl having 1 to 6 carbon atoms; (Iii ′ ′′) R a —O—, R a —C ( ⁇ O) —, R a —O—C ( ⁇ O) —, or R a —C ( ⁇ O) —O— (R a is , Hydrogen atom, or alkyl having 1 to 6 carbon atoms); or (iv ′ ′′) NR b R c —, NR b R c —C ( ⁇ O) —, NR b R c —C ( ⁇ O) —O—, or R b —C ( ⁇ O) —NR c — (R b and R c are the same or different and each represents a hydrogen atom or alkyl having 1 to 6 carbon atoms); (V ′ ′′) the same groups as listed above in (vii).
  • the substituent may be: (I ′′ ′′) a halogen atom; (Ii ′′ ′′) alkyl having 1 to 4 carbon atoms; (Iii ′′ ′′) R a —O—, R a —C ( ⁇ O) —, R a —O—C ( ⁇ O) —, or R a —C ( ⁇ O) —O— (R a Represents a hydrogen atom or alkyl having 1 to 4 carbon atoms.); Or (iv ′′ ′′) NR b R c —, NR b R c —C ( ⁇ O) —, NR b R c — C ( ⁇ O) —O—, or R b —C ( ⁇ O) —NR c — (R b and R c are the same or different and each represents a hydrogen atom or an alkyl having 1 to 4 carbon atoms. ); (V ′′ ′′) The same groups as listed above
  • examples of the leaving group include any of the following (a) to (c).
  • 2,5-diketopyrrolidine, optionally condensed 2,6-diketopiperidine, optionally condensed 2-ketopyrrolidine, optionally condensed 2-ketopiperidine, 2-pyridone Q is a group selected from the group consisting of: —O—, —S—, —Se—, —SO 2 —O—, —SO 2 —N (R) —, —SO 2 —, —C ⁇ A group selected from the group consisting of C—CH 2 —O—, —N (OR) —, —N (R) —, and —O—N (R) — (wherein R represents a hydrogen atom or a carbon atom) 1 to 6 alkyl).
  • Ring P in (a) is arylene optionally substituted with an electron withdrawing group, heteroarylene optionally substituted with an electron withdrawing group, 2,5-diketopyrrolidine optionally condensed, 2,6-diketopiperidine which may be condensed, 2-ketopyrrolidine which may be condensed, 2-ketopiperidine which may be condensed, or 2-pyridone.
  • arylene substituted with an electron-withdrawing group, heteroarylene substituted with an electron-withdrawing group, 2,5-diketopyrrolidine, and 2,6-diketopiperidine are more preferable. Even more preferred are arylene, 2,5-diketopyrrolidine, and 2,6-diketopiperidine.
  • Ring P in (a) is arylene which may be substituted with an electron-withdrawing group, heteroarylene which may be substituted with an electron-withdrawing group, 2,5-diketopyrrolidine which may be condensed, A group selected from the group consisting of 2,6-diketopiperidine which may be condensed, 2-ketopyrrolidine which may be condensed, 2-ketopiperidine which may be condensed, 2-pyridone is there. Details of these groups are the same as those described as preferred examples of the group that enhances the ability to leave —N (R) —, —N (OR) —, —O—, —S—, or —Se—. It is.
  • Q in (a) is —O—, —S—, —Se—, —SO 2 —O—, —SO 2 —N (R) —, —SO 2 —, —C ⁇ C—CH 2 —O.
  • R is a hydrogen atom or alkyl having 1 to 6 carbon atoms
  • Q in (C) is —O—, —S—, —Se—, —SO 2 —O—, —SO 2 —N (R) —, —SO 2 —, —C ⁇ C—CH 2 —O.
  • a preferable leaving group may be a group selected from the group consisting of the following structural formulas.
  • EWG is an electron withdrawing group
  • m is an integer from 0 to 4
  • n is an integer from 0 to 3
  • R is a hydrogen atom or alkyl having 1 to 6 carbon atoms
  • ⁇ open circles
  • ⁇ black circle
  • m is preferably an integer of 1 to 4, more preferably 1, 2 or 3.
  • n is preferably an integer of 1 to 3, more preferably 1 or 2.
  • the divalent group containing a leaving group represented by L is a divalent group composed of the above leaving group, or a divalent group containing another divalent group in addition to the above leaving group.
  • examples of such other divalent groups include a divalent hydrocarbon group, a divalent heterocyclic group, —C ( ⁇ O) —, —NR L — (R L represents a hydrogen atom, or A substituent), —O—, —S—, —C ( ⁇ S) —, and combinations of two or more thereof (for example, 2 to 8, preferably 2 to 6, more preferably 2 to 4).
  • the divalent hydrocarbon group and the divalent heterocyclic group may have, for example, 1 to 5, preferably 1 to 3, more preferably 1 or 2 substituents.
  • the divalent hydrocarbon group is a linear, branched or cyclic divalent hydrocarbon group, preferably a linear or branched divalent hydrocarbon group.
  • Examples of the divalent hydrocarbon group include alkylene, alkenylene, alkynylene, and arylene.
  • alkylene alkylene having 1 to 12 carbon atoms is preferable, alkylene having 1 to 6 carbon atoms is more preferable, and alkylene having 1 to 4 carbon atoms is particularly preferable.
  • the number of carbon atoms of the substituent is not included in the number of carbon atoms.
  • Alkylene may be linear, branched or cyclic, but is preferably linear alkylene. Examples of such alkylene include methylene, ethylene, propylene, butylene, pentylene, and hexylene.
  • the alkenylene is preferably an alkenylene having 2 to 12 carbon atoms, more preferably an alkenylene having 2 to 6 carbon atoms, and particularly preferably an alkenylene having 2 to 4 carbon atoms.
  • the number of carbon atoms of the substituent is not included in the number of carbon atoms.
  • Alkenylene may be linear, branched or cyclic, but linear alkenylene is preferred. Examples of such alkenylene include ethylenylene, propynylene, butenylene, pentenylene, and hexenylene.
  • alkynylene alkynylene having 2 to 12 carbon atoms is preferable, alkynylene having 2 to 6 carbon atoms is more preferable, and alkynylene having 2 to 4 carbon atoms is particularly preferable.
  • the number of carbon atoms of the substituent is not included in the number of carbon atoms.
  • Alkynylene may be linear, branched or cyclic, but linear alkynylene is preferred. Examples of such alkynylene include ethynylene, propynylene, butynylene, pentynylene, and hexynylene.
  • arylene having 6 to 24 carbon atoms is preferable, arylene having 6 to 18 carbon atoms is more preferable, arylene having 6 to 14 carbon atoms is further preferable, and arylene having 6 to 10 carbon atoms is still more preferable. preferable.
  • the number of carbon atoms of the substituent is not included in the number of carbon atoms. Examples of arylene include phenylene, naphthylene, and anthracenylene.
  • the divalent heterocyclic group is a divalent aromatic heterocyclic group or a divalent non-aromatic heterocyclic group.
  • the hetero atom constituting the heterocyclic ring preferably contains at least one selected from the group consisting of an oxygen atom, a sulfur atom, a nitrogen atom, a phosphorus atom, a boron atom and a silicon atom, and includes an oxygen atom, a sulfur atom and a nitrogen atom More preferably, at least one selected from the group consisting of:
  • the divalent aromatic heterocyclic group is preferably a divalent aromatic heterocyclic group having 1 to 21 carbon atoms, more preferably a divalent aromatic heterocyclic group having 1 to 15 carbon atoms, A divalent aromatic heterocyclic group having 1 to 9 carbon atoms is more preferable, and a divalent aromatic heterocyclic group having 1 to 6 carbon atoms is still more preferable.
  • the number of carbon atoms of the substituent is not included in the number of carbon atoms.
  • examples of the divalent aromatic heterocyclic group include pyrrole diyl, frangiyl, thiophene diyl, pyridine diyl, pyridazine diyl, pyrimidine diyl, pyrazine diyl, triazine diyl, pyrazole diyl, imidazole diyl, thiazole diyl, Examples include isothiazole diyl, oxazole diyl, isoxazole diyl, triazole diyl, tetrazole diyl, indole diyl, purine diyl, anthraquinone diyl, carbazole diyl, fluorenediyl, quinoline diyl, isoquinoline diyl, quinazoline diyl, and phthalazine diyl.
  • the divalent non-aromatic heterocyclic group is preferably a non-aromatic heterocyclic group having 2 to 21 carbon atoms, more preferably a non-aromatic heterocyclic group having 2 to 15 carbon atoms, A non-aromatic heterocyclic group having 9 carbon atoms is more preferable, and a non-aromatic heterocyclic group having 2 to 6 carbon atoms is still more preferable.
  • the number of carbon atoms of the substituent is not included in the number of carbon atoms.
  • examples of the divalent non-aromatic heterocyclic group include pyrrole dione diyl, pyrroline dione diyl, pyrroline diyl, oxirane diyl, aziridine diyl, azetidine diyl, oxetane diyl, thietane diyl, pyrrolidine diyl, dihydrofurandyl.
  • L can be represented as L 1 -L 2 .
  • L 1 is a bond or a divalent group.
  • examples and preferred examples of the divalent group represented by L 1 are divalent groups in which a divalent group containing a leaving group represented by L contains another divalent group in addition to the leaving group. In the case of the above group, it is the same as that of the other divalent group.
  • L 2 is a leaving group.
  • the definition, examples and preferred examples of the leaving group represented by L 2 are the same as those of the leaving group for L.
  • the leaving group represented by L 2 is any one of the above (a) to (c). Examples and preferred examples of the leaving group represented by L 2 are also the same as those described in the above (a) to (c).
  • L (a divalent group containing a leaving group) or L 1 (a bond or a divalent group) -L 2 (linkage between A (affinity substance) and E (a divalent group containing an electrophilic group)
  • the length of the main chain of the leaving group depends on the type of antibody and affinity substance, and the relationship between the target site of the affinity substance in the antibody and the specific amino acid residue in the antibody to be regioselectively modified. It can design suitably according to various factors, such as.
  • the main chain of L or L 1 -L 2 is a chain structure composed of a plurality of covalently linked atoms that connect A and E, and excludes hydrogen atoms, branched structure parts, and substituents. .
  • A When the compound represented by formula (I) is brought into contact with an antibody, A first associates with the antibody.
  • the nucleophilic group in the side chain of the specific amino acid residue to be modified in the antibody in the vicinity of the antibody association site eg, the amino group in the side chain of the lysine residue
  • E The leaving group contained in L or L 1 can be removed from E while the nucleophilic group is bonded to the electrophilic group.
  • the length of the main chain is strictly controlled.
  • the electrophilic group in E can be regioselectively linked to the nucleophilic group in the side chain of the particular amino acid residue to be modified in the antibody.
  • the electrophilic group in E can be determined by controlling the length of the main chain. Can be regioselectively bound to the amino acid residues.
  • the length of the main chain of L or L 1 -L 2 linking A and E is not particularly limited as long as a specific amino acid residue in the antibody can be regioselectively modified.
  • amino acid residues eg, Lys248 or Lys246 residues, Lys288 or Lys290, Lys317, or other amino acid residues other than those residues
  • the length of the main chain of L or L 1 -L 2 is also preferably 1 or more, more preferably 2 or more, even more preferably 3 or more, and particularly preferably 4 or more or 5 or more. May be.
  • the length of the main chain of L or L 1 -L 2 is also preferably 50 or less, more preferably 30 or less, even more preferably 20 or less, and particularly preferably 15 or less or 10 or less. May be. More specifically, the length of the main chain of L or L 1 -L 2 is preferably 1 to 50, more preferably 1 to 30, even more preferably 1 to 20, particularly preferably. May be 1-15 or 1-10. Alternatively, the length of the main chain of L or L 1 -L 2 is preferably 2 to 30, more preferably 3 to 20, and particularly preferably 4 to 15 or 5 to 10. .
  • the number of atoms in the main chain is determined by counting the number of atoms in the chain structure (excluding the number of hydrogen atoms, branched structure parts, and atoms in substituents). can do.
  • the number of atoms in the main chain can be conveniently counted from the viewpoint of defining the length of the main chain.
  • the number of atoms in the main chain in such a case is the number of atoms in the chain structure that does not include a divalent ring structure in the main chain (number of atoms in the hydrogen atom, branched structure portion, and substituent). Can be determined by counting the number of atoms in the shortest path connecting two bonds in the ring structure (see, for example, the bold paths in (a) to (d) below). • is a bond.
  • the main chain of L or L 1 -L 2 is a chain structure in which the “other divalent group” in L or the “divalent group” in L 1 does not include a divalent ring structure. Also good. Therefore, “another divalent group” in L or “a divalent group” in L 1 is a divalent linear or branched hydrocarbon group, —C ( ⁇ O) —, —NR L — ( R L represents a hydrogen atom or the above-described substituent), —O—, —S—, —C ( ⁇ S) —, and two or more thereof (for example, 2 to 8, preferably 2 to 6, more preferably) May be a group comprising a combination of 2 to 4).
  • the divalent linear or branched hydrocarbon group may have, for example, 1 to 5, preferably 1 to 3, more preferably 1 or 2 substituents. Good. From the viewpoint of synthesizing a compound having a simple chemical structure, it is preferable not to have such a substituent. On the other hand, when the group as described above has a substituent, examples and preferred examples of such a substituent are the same as the substituents that the heteroarylene as an example of the leaving group may have.
  • L is a divalent group comprising an electrophilic group that is (i) linked to a leaving group and (ii) has the ability to react with a nucleophilic group in the antibody.
  • nucleophilic group in the antibody examples include NH 2 in the side chain of the lysine residue, OH in the side chain of the tyrosine residue, OH in the side chain of the serine residue, OH in the side chain of the threonine residue, and cysteine SH in the side chain of the residue.
  • the nucleophilic group in the antibody is preferably NH 2 in the side chain of the lysine residue, or OH in the side chain of the tyrosine residue, and more preferably NH 2 in the side chain of the lysine residue.
  • any electrophilic group that can be linked to the leaving group and has the ability to react with the nucleophilic group in the antibody as described above can be used.
  • a group selected from the group consisting of —C ( ⁇ O) —, —SO 2 —, and —CH 2 — is preferred.
  • —CH 2 — can also be used depending on the electronic balance with the adjacent group (eg, leaving group, L 2 , E 2 ).
  • —CH 2 — can be preferably used as an electrophilic group (Tsukiji et al., Nature Chemical Biology, Vol. 5, No. 5, May 2009). ).
  • the electrophilic group is more preferably —C ( ⁇ O) — or —SO 2 —, and still more preferably —C ( ⁇ O) —.
  • the divalent group containing an electrophilic group represented by E is a divalent group composed of the above electrophilic group, or a divalent group containing another divalent group in addition to the above electrophilic group.
  • examples of such other divalent groups include a divalent hydrocarbon group, a divalent heterocyclic group, —C ( ⁇ O) —, —NR E — (R E represents a hydrogen atom, A substituent), —O—, —S—, —C ( ⁇ S) —, and combinations of two or more thereof (for example, 2 to 8, preferably 2 to 6, more preferably 2 to 4). Groups.
  • the divalent hydrocarbon group and the divalent heterocyclic group may have, for example, 1 to 5, preferably 1 to 3, more preferably 1 or 2 substituents. May be. From the viewpoint of synthesizing a compound having a simple chemical structure, it is preferable not to have such a substituent.
  • examples and preferred examples of such a substituent are the same as the substituents that the heteroarylene as an example of the leaving group may have.
  • E (and E 1 -E 2 -E 3, described below) can be designed to be free of peptide moieties that have potential immunogenicity and are susceptible to hydrolysis in blood.
  • the divalent hydrocarbon group is a linear, branched or cyclic divalent hydrocarbon group, preferably a linear or branched divalent hydrocarbon group.
  • Examples of the divalent hydrocarbon group include alkylene, alkenylene, alkynylene, and arylene.
  • alkylene alkylene having 1 to 12 carbon atoms is preferable, alkylene having 1 to 6 carbon atoms is more preferable, and alkylene having 1 to 4 carbon atoms is particularly preferable.
  • the number of carbon atoms of the substituent is not included in the number of carbon atoms.
  • Alkylene may be linear, branched or cyclic, but is preferably linear alkylene. Examples of such alkylene include methylene, ethylene, propylene, butylene, pentylene, and hexylene.
  • the alkenylene is preferably an alkenylene having 2 to 12 carbon atoms, more preferably an alkenylene having 2 to 6 carbon atoms, and particularly preferably an alkenylene having 2 to 4 carbon atoms.
  • the number of carbon atoms of the substituent is not included in the number of carbon atoms.
  • Alkenylene may be linear, branched or cyclic, but linear alkenylene is preferred. Examples of such alkenylene include ethylenylene, propynylene, butenylene, pentenylene, and hexenylene.
  • alkynylene alkynylene having 2 to 12 carbon atoms is preferable, alkynylene having 2 to 6 carbon atoms is more preferable, and alkynylene having 2 to 4 carbon atoms is particularly preferable.
  • the number of carbon atoms of the substituent is not included in the number of carbon atoms.
  • Alkynylene may be linear, branched or cyclic, but linear alkynylene is preferred. Examples of such alkynylene include ethynylene, propynylene, butynylene, pentynylene, and hexynylene.
  • arylene having 6 to 24 carbon atoms is preferable, arylene having 6 to 18 carbon atoms is more preferable, arylene having 6 to 14 carbon atoms is further preferable, and arylene having 6 to 10 carbon atoms is still more preferable. preferable.
  • the number of carbon atoms of the substituent is not included in the number of carbon atoms. Examples of arylene include phenylene, naphthylene, and anthracenylene.
  • the divalent heterocyclic group is a divalent aromatic heterocyclic group or a divalent non-aromatic heterocyclic group.
  • the hetero atom constituting the heterocyclic ring preferably contains at least one selected from the group consisting of an oxygen atom, a sulfur atom, a nitrogen atom, a phosphorus atom, a boron atom and a silicon atom, and includes an oxygen atom, a sulfur atom and a nitrogen atom More preferably, at least one selected from the group consisting of:
  • the divalent aromatic heterocyclic group is preferably a divalent aromatic heterocyclic group having 1 to 21 carbon atoms, more preferably a divalent aromatic heterocyclic group having 1 to 15 carbon atoms, A divalent aromatic heterocyclic group having 1 to 9 carbon atoms is more preferable, and a divalent aromatic heterocyclic group having 1 to 6 carbon atoms is still more preferable.
  • the number of carbon atoms of the substituent is not included in the number of carbon atoms.
  • examples of the divalent aromatic heterocyclic group include pyrrole diyl, frangiyl, thiophene diyl, pyridine diyl, pyridazine diyl, pyrimidine diyl, pyrazine diyl, triazine diyl, pyrazole diyl, imidazole diyl, thiazole diyl, Examples include isothiazole diyl, oxazole diyl, isoxazole diyl, triazole diyl, tetrazole diyl, indole diyl, purine diyl, anthraquinone diyl, carbazole diyl, fluorenediyl, quinoline diyl, isoquinoline diyl, quinazoline diyl, and phthalazine diyl.
  • the divalent non-aromatic heterocyclic group is preferably a non-aromatic heterocyclic group having 2 to 21 carbon atoms, more preferably a non-aromatic heterocyclic group having 2 to 15 carbon atoms, A non-aromatic heterocyclic group having 9 carbon atoms is more preferable, and a non-aromatic heterocyclic group having 2 to 6 carbon atoms is still more preferable.
  • the number of carbon atoms of the substituent is not included in the number of carbon atoms.
  • examples of the divalent non-aromatic heterocyclic group include pyrrole dione diyl, pyrroline dione diyl, pyrroline diyl, oxirane diyl, aziridine diyl, azetidine diyl, oxetane diyl, thietane diyl, pyrrolidine diyl, dihydrofurandyl.
  • E can be represented as E 1 -E 2 -E 3 .
  • E 1 is an electrophilic group (i) linked to the leaving group and (ii) capable of reacting with a nucleophilic group in the antibody.
  • the definition, examples and preferred examples of the electrophilic group for E 1 are the same as those for E.
  • E 2 is the following (a) or (b): (A) —X—Y— [wherein X bonded to E 1 is C (R 1 ) (R 2 ) (where R 1 and R 2 are each independently a hydrogen atom or a carbon atom number] 1 to 6 alkyl), N (R 3 ) (wherein R 3 is a hydrogen atom or alkyl having 1 to 6 carbon atoms), O, S, or Se, and E 3 Y bound to is C (R 4 ) (R 5 ) (wherein R 4 and R 5 are each independently a hydrogen atom or alkyl having 1 to 6 carbon atoms).
  • ring Z is a divalent ring group in which all of the ring-constituting atoms X ′ bound to E 1 and both adjacent ring-constituting atoms are carbon atoms, or the ring-constituting atoms bound to E 1.
  • X ′ is a nitrogen atom
  • a ring atom adjacent to the nitrogen atom is a carbon atom.
  • • is a bond.
  • E 2 is the above (a)
  • X bonded to E 1 is C (R 1 ) (R 2 ), N (R 3 ) from the viewpoint of improving the reactivity and stability of the compound of the present invention.
  • O, S, or Se are preferred, and C (R 1 ) (R 2 ), N (R 3 ), O, or S are more preferred, and C (R 1 ) (R 2 ), N (R 3 ) Or O is even more preferred, C (R 1 ) (R 2 ), or N (R 3 ) is even more preferred, and C (R 1 ) (R 2 ) is most preferred.
  • X in E 2 can also be defined in relation to leaving groups (eg, see L, L 2 ).
  • X is an atom or group such as N (R 3 ), O, S, or Se, not only the leaving group, but also X can be removed from the electrophilic group.
  • X in at least some of the compounds represented by the formula (I) should not be eliminated from the electrophilic group. Since the reaction can be controlled, in the present invention, an atom or group as described above can be used as X.
  • X is more desorbed than the leaving group. It is possible to use an atom or group that is difficult to separate (that is, the pKa value of the atom or group is larger than the pKa value of the leaving group). Therefore, by eliminating the leaving group more selectively and suppressing the elimination of X in E 2 , the efficiency of the target reaction between the compound represented by formula (I) and the antibody is improved. From the viewpoint of improving the yield of an antibody having a bioorthogonal functional group, X in E 2 is preferably one whose ability to desorb is not more than the leaving group.
  • Examples of such X include leaving group type (eg, —N (R) —, —N (OR) —, —O—, —S—, or —Se—, or heteroarylene), and leaving group. Although it may vary depending on the presence / absence of a group containing a group that enhances the ability of a leaving group present adjacent to the group to leave, the outline thereof is as follows. (1) When the leaving group is —N (R) — or —N (OR) —, X is preferably C (R 1 ) (R 2 ) or N (R 3 ), and C (R 1 ) (R 2 ) is more preferred.
  • leaving group type eg, —N (R) —, —N (OR) —, —O—, —S—, or —Se—, or heteroarylene
  • leaving group eg, —N (R) —, —N (OR) —, —O—, —S—, or —Se
  • X is preferably C (R 1 ) (R 2 ), N (R 3 ), or O, and C (R 1 ) (R 2 ), or N (R 3 ) is more preferred, and C (R 1 ) (R 2 ) is even more preferred.
  • X is preferably C (R 1 ) (R 2 ), N (R 3 ), O, or S, and C (R 1 ) (R 2 ) , N (R 3 ), or O is more preferred, C (R 1 ) (R 2 ), or N (R 3 ) is even more preferred, and C (R 1 ) (R 2 ) is even more preferred.
  • X is preferably C (R 1 ) (R 2 ), N (R 3 ), O, S, or Se, and C (R 1 ) (R 2 ), N (R 3 ), O, or S are more preferred, C (R 1 ) (R 2 ), N (R 3 ), or O are even more preferred, C (R 1 ) (R 2 ), Or N (R 3 ) is even more preferred and C (R 1 ) (R 2 ) is most preferred.
  • X is preferably C (R 1 ) (R 2 ), N (R 3 ), O, S, or Se, and C (R 1 ) (R 2 ), N (R 3 ), O, or S are more preferred, C (R 1 ) (R 2 ), N (R 3 ), or O are even more preferred, C (R 1 ) (R 2 ), or N (R 3 ) is even more preferred, and C (R 1 ) (R 2 ) is most preferred.
  • the ring-constituting atom X ′ bonded to E 1 contained in the ring Z is a carbon atom or a nitrogen atom.
  • the ring Z is a divalent ring group in which all of the ring member atoms X ′ bonded to E 1 and the adjacent ring member atoms are carbon atoms. It is.
  • the divalent ring group may or may not have, for example, 1 to 5, preferably 1 to 3, more preferably 1 or 2 substituents. From the viewpoint of synthesizing a compound having a simple chemical structure, it is preferable not to have such a substituent.
  • examples and preferred examples of such a substituent are the same as the substituents that the heteroarylene as an example of the leaving group may have.
  • Examples of such a divalent cyclic group include a cyclic divalent hydrocarbon group (eg, arylene, cyclic alkylene, cyclic alkenylene, cyclic alkynylene), and a divalent heterocyclic group (eg, 2 Valent aromatic heterocyclic group and divalent non-aromatic heterocyclic group).
  • a cyclic divalent hydrocarbon group eg, arylene, cyclic alkylene, cyclic alkenylene, cyclic alkynylene
  • a divalent heterocyclic group eg, 2 Valent aromatic heterocyclic group and divalent non-aromatic heterocyclic group.
  • the divalent hydrocarbon group is a cyclic divalent hydrocarbon group, and examples of the divalent hydrocarbon group include cyclic alkylene, cyclic alkenylene, cyclic alkynylene, and arylene.
  • alkylene having 3 to 12 carbon atoms is preferable, alkylene having 3 to 10 carbon atoms is more preferable, and alkylene having 5 to 8 carbon atoms is particularly preferable.
  • the number of carbon atoms of the substituent is not included in the number of carbon atoms.
  • alkylene include cyclopropylene, cyclobutylene, cyclopentylene, cyclohexylene, cycloheptylene, cyclooctylene, cyclononylene, and cyclodexylene.
  • alkenylene having 3 to 12 carbon atoms is preferable, alkenylene having 3 to 10 carbon atoms is more preferable, and alkenylene having 5 to 8 carbon atoms is particularly preferable.
  • the number of carbon atoms of the substituent is not included in the number of carbon atoms.
  • alkenylene include cyclopropenylene, cyclobutenylene, cyclopentenylene, cyclohexenylene, cycloheptenylene, cyclooctenylene, cyclononenylene, and cyclodekenylene.
  • alkynylene having 6 to 12 carbon atoms is preferable, alkynylene having 7 to 12 carbon atoms is more preferable, and alkynylene having 8 to 12 carbon atoms is particularly preferable.
  • the number of carbon atoms of the substituent is not included in the number of carbon atoms.
  • Alkynylene may be linear, branched or cyclic, but linear alkynylene is preferred. Examples of such alkynylene include cyclohexylene, cycloheptynylene, cyclooctynylene, cyclononynylene, cyclodecynylene, cycloundecylene, and cyclododecylene.
  • arylene having 6 to 24 carbon atoms is preferable, arylene having 6 to 18 carbon atoms is more preferable, arylene having 6 to 14 carbon atoms is further preferable, and arylene having 6 to 10 carbon atoms is still more preferable. preferable.
  • the number of carbon atoms of the substituent is not included in the number of carbon atoms. Examples of arylene include phenylene, naphthylene, and anthracenylene.
  • the divalent heterocyclic group is a divalent aromatic heterocyclic group or a divalent non-aromatic heterocyclic group.
  • the hetero atom constituting the heterocyclic ring preferably contains at least one selected from the group consisting of an oxygen atom, a sulfur atom, a nitrogen atom, a phosphorus atom, a boron atom and a silicon atom, and includes an oxygen atom, a sulfur atom and a nitrogen atom More preferably, at least one selected from the group consisting of:
  • the divalent aromatic heterocyclic group is preferably a divalent aromatic heterocyclic group having 3 to 21 carbon atoms, more preferably a divalent aromatic heterocyclic group having 3 to 15 carbon atoms, A divalent aromatic heterocyclic group having 3 to 9 carbon atoms is more preferable, and a divalent aromatic heterocyclic group having 3 to 6 carbon atoms is still more preferable.
  • the number of carbon atoms of the substituent is not included in the number of carbon atoms.
  • examples of the divalent aromatic heterocyclic group include pyrrole diyl, frangiyl, thiophene diyl, pyridinediyl, pyridazinediyl, pyrimidinediyl, pyrazolediyl, isothiazolediyl, isoxazolediyl, indolediyl, Anthraquinone diyl, carbazole diyl, fluorenediyl, quinoline diyl, isoquinoline diyl, quinazoline diyl, and phthalazine diyl.
  • the divalent non-aromatic heterocyclic group is preferably a non-aromatic heterocyclic group having 3 to 21 carbon atoms, more preferably a non-aromatic heterocyclic group having 3 to 15 carbon atoms, and 3 to 3 carbon atoms.
  • a non-aromatic heterocyclic group having 9 carbon atoms is more preferred, and a non-aromatic heterocyclic group having 3 to 6 carbon atoms is still more preferred.
  • the number of carbon atoms of the substituent is not included in the number of carbon atoms.
  • examples of the divalent non-aromatic heterocyclic group include pyrrolindionediyl, pyrrolinediyl, azetidinediyl, oxetanediyl, thietanediyl, pyrrolidinediyl, dihydrofurandiyl, tetrahydrofuranediyl, tetrahydrothiophenediyl, pyrrolindiyl.
  • the ring Z is a ring atom X ′ bonded to E 1 is a nitrogen atom
  • the ring atoms adjacent to the nitrogen atom are carbon atoms. It is a certain divalent heterocyclic group.
  • Such a divalent heterocyclic group is a divalent heterocyclic group containing a nitrogen atom as a ring constituent atom.
  • the divalent heterocyclic group containing a nitrogen atom as a ring constituent atom is preferably a divalent heterocyclic group having 3 to 21 carbon atoms, more preferably a divalent heterocyclic group having 3 to 15 carbon atoms, A divalent heterocyclic group having 3 to 9 carbon atoms is more preferable, and a divalent heterocyclic group having 3 to 6 carbon atoms is still more preferable.
  • the divalent heterocyclic group may or may not have, for example, 1 to 5, preferably 1 to 3, more preferably 1 or 2 substituents. From the viewpoint of synthesizing a compound having a simple chemical structure, it is preferable not to have such a substituent.
  • the divalent heterocyclic group has a substituent
  • examples and preferred examples of such a substituent are the same as the substituents that the heteroarylene as an example of the leaving group may have.
  • the number of carbon atoms of the substituent is not included in the number of carbon atoms.
  • Examples of the divalent heterocyclic group containing a nitrogen atom as a ring constituent atom include a divalent aromatic heterocyclic group containing a nitrogen atom as a ring constituent atom, and a divalent non-aromatic containing a nitrogen atom as a ring constituent atom.
  • a heterocyclic group is mentioned.
  • Examples of the divalent aromatic heterocyclic group containing a nitrogen atom as a ring constituent atom include pyrrole diyl, imidazole diyl, indole diyl, purine diyl, and carbazole diyl.
  • Examples of the divalent non-aromatic heterocyclic group containing a nitrogen atom as a ring constituent atom include pyrrole dione diyl, pyrroline dione diyl, pyrroline diyl, aziridine diyl, azetidine diyl, pyrrolidine diyl, pyrroline diyl, imidazolidine diyl, piperidine diyl. , Morpholine diyl, thiomorpholine diyl, piperazine diyl, dihydropyrimidine diyl, and tetrahydropyrimidine diyl.
  • (b) the group represented by the above formula (i) is (b ′) the following formula (i ′):
  • ring Z is a divalent ring group in which all of the ring member atoms bonded to E 1 and the adjacent ring member atoms are carbon atoms.. Is a bond. It is a group.
  • the definition, examples and preferred examples of the divalent ring group for the ring Z in the group represented by the above formula (i ′) are the divalent ring groups for the ring Z in the group represented by the above formula (i). Is the same as
  • E 3 is a divalent group when E 2 is —X—Y—, and is a bond or a divalent group when E 2 is a group represented by formula (i).
  • the divalent group represented by E 3 is another group in which the divalent group containing the electrophilic group represented by E is a divalent group containing another divalent group in addition to the electrophilic group. This is the same as the divalent group.
  • E divalent group containing an electrophilic group
  • E 1 electrophilic group
  • E 1 electrophilic group
  • E 2 electrophilic group
  • B biologically orthogonal functional group
  • the length of the main chain of (a) or (b))-E 3 is determined depending on the specific antibody in the reaction between the compound represented by formula (I) and the antibody. It may not be involved in regioselective modification of amino acid residues, but rather may be involved in the distance between the antibody and the bioorthogonal functional group in an antibody having a bioorthogonal functional group that is generated after the reaction.
  • the main chain of E or E 1 -E 2 -E 3 refers to a chain structure composed of a plurality of atoms connected by covalent bonds connecting L and B, and includes a hydrogen atom, a branched structure portion, and a substituent. Is excluded. Therefore, the length of the main chain of E or E 1 -E 2 -E 3 can be appropriately designed from the viewpoint of adjusting the distance.
  • the length of the main chain of E or E 1 -E 2 -E 3 linking L and B is not particularly limited, but may be a length composed of 3 or more atoms.
  • the number of atoms in the main chain is determined by counting the number of atoms in the chain structure (excluding the number of hydrogen atoms, branched structure parts, and atoms in substituents). can do.
  • the number of atoms in the main chain can be conveniently counted from the viewpoint of defining the length of the main chain.
  • the number of atoms in the main chain in such a case is the number of atoms in the chain structure that does not include a divalent ring structure in the main chain (hydrogen atom, branched structure portion, and substituent).
  • the number of atoms in the shortest path connecting two bonds in the ring structure can be determined.
  • the main chain of E or E 1 -E 2 -E 3 is a chain structure in which the “other divalent group” in E or the “divalent group” in E 3 does not contain a divalent ring structure. It may be. Therefore, the “other divalent group” in E or the “divalent group” in E 3 is a divalent linear or branched hydrocarbon group, —C ( ⁇ O) —, —NR E — ( R E represents a hydrogen atom or the above-described substituent group, —O—, —S—, —C ( ⁇ S) —, and two or more thereof (for example, 2 to 8, preferably 2 to 6, more preferably May be a group comprising a combination of 2 to 4).
  • the divalent linear or branched hydrocarbon group may have, for example, 1 to 5, preferably 1 to 3, more preferably 1 or 2 substituents. Good. From the viewpoint of synthesizing a compound having a simple chemical structure, it is preferable not to have such a substituent. On the other hand, when the group as described above has a substituent, examples and preferred examples of such a substituent are the same as the substituents that the heteroarylene as an example of the leaving group may have.
  • Bioorthogonal functional groups do not react with biological components (eg, amino acids, nucleic acids, lipids, sugars, phosphates) or have a slow reaction rate to biological components, but with respect to components other than biological components Group which reacts selectively.
  • Bioorthogonal functional groups are well known in the art (eg, Sharpless KB et al., Angew. Chem. Int. Ed. 40, 2004 (2015); Bertozzi CR et al.,). Science 291, 2357 (2001); see Bertozzi CR et al., Nature Chemical Biology 1, 13 (2005)).
  • the bioorthogonal functional group is a bioorthogonal functional group for the protein.
  • a bioorthogonal functional group for a protein is a group that reacts with a predetermined functional group without reacting with the side chains of 20 natural amino acid residues constituting the protein.
  • A alanine
  • N asparagine
  • C cysteine
  • C glutamine
  • Q glycine
  • G isoleucine
  • I leucine
  • M methionine
  • P proline
  • S serine
  • T tryptophan
  • W tyrosine
  • V valine
  • D glutamic acid
  • E arginine
  • H histidine
  • L lysine
  • glycine without a side chain that is, a hydrogen atom
  • a side chain that is a hydrocarbon group that is, a group consisting of a sulfur atom, a nitrogen atom, and an oxygen atom
  • Alanine, isoleucine, leucine, phenylalanine, and valine which do not contain selected heteroatoms in the side chain are inactive for normal reactions.
  • bioorthogonal functional groups for proteins include asparagine, glutamine, methionine, proline, serine, threonine, tryptophan, tyrosine in addition to those amino acid side chains that are inactive for normal reactions , A functional group that cannot react with the side chains of aspartic acid, glutamic acid, arginine, histidine, and lysine.
  • bioorthogonal functional groups that cannot react with proteins include azide residues, aldehyde residues, thiol residues, alkene residues (in other words, the smallest unit having a double bond between carbon atoms). It suffices to have a certain vinylene (ethenylene) moiety, the same shall apply hereinafter), an alkyne residue (in other words, an ethynylene moiety which is the smallest unit having a carbon-carbon triple bond, and so forth).
  • alde residues aldehyde residues, thiol residues
  • alkene residues in other words, the smallest unit having a double bond between carbon atoms. It suffices to have a certain vinylene (ethenylene) moiety, the same shall apply hereinafter), an alkyne residue (in other words, an ethynylene moiety which is the smallest unit having a carbon-carbon triple bond, and so forth).
  • the antibody can be a protein that cannot contain free thiols.
  • the thiol functions as a bioorthogonal functional group. Therefore, when the target of the affinity substance is an antibody, the bioorthogonal functional group includes a thiol.
  • the thiol residue can be an unprotected thiol residue (ie, —SH) or a protected thiol residue.
  • Examples of the protecting group for the thiol residue in the protected thiol residue include a hydrocarbon group [eg, alkyl group, alkenyl group, alkynyl group, cycloalkyl group, aryl group (eg, phenyl group, naphthyl group), aryl Alkyl (aralkyl) group], acyl group (eg, acetyl group, propoxy group, butoxycarbonyl group such as tert-butoxycarbonyl group, benzoyl group), arylalkyloxycarbonyl group (eg, fluorenylmethoxycarbonyl group), aryl Examples include an oxycarbonyl group, an arylalkyl (aralkyl) oxycarbonyl group (eg, benzyloxycarbonyl group), an alkylthiol group (t-butylthio group), and an arylthiol group (eg, pyridyldithio group).
  • the protected thiol residue may be a disulfide residue.
  • the arylalkyl in the arylalkyl (aralkyl) group and the arylalkyl (aralkyl) oxycarbonyl group is one in which one or more (eg, 2, 3, 4, 5) aryls are bonded to alkyl. is there.
  • the number of carbon atoms of the protecting group of the thiol residue is, for example, 1 to 30, preferably 1 to 20, more preferably 1 to 15, even more preferably 1 to 10, particularly preferably 1 to 6. is there.
  • the compound represented by formula (I) may contain one or more (eg, two, three, four) bioorthogonal functional groups, preferably One kind of bioorthogonal functional group may be included.
  • the bioorthogonal functional group may correspond to any one chemical structure selected from the group consisting of: [Where, R 1f , single or plural R 1g and single or plural R 1h are the same or different and are an atom or group selected from the group consisting of (a) to (g), or an electron withdrawing group, • is a bond. )
  • Examples of the atom or group selected from the group consisting of (a) to (g) include the following: (A) a hydrogen atom or a halogen atom; (B) a monovalent hydrocarbon group; (C) Aralkyl; (D) a monovalent heterocyclic group; (E) R a —O—, R a —C ( ⁇ O) —, R a —O—C ( ⁇ O) —, or R a —C ( ⁇ O) —O— (R a is a hydrogen atom Or represents a monovalent hydrocarbon group); or (f) NR b R c —, NR b R c —C ( ⁇ O) —, NR b R c —C ( ⁇ O) —O—, or R b —C ( ⁇ O) —NR c — (R b and R c are the same or different and each represents a hydrogen atom or a monovalent hydrocarbon group); (G) A group selected from the group
  • halogen atom examples and preferred examples of the halogen atom, monovalent hydrocarbon group, aralkyl, monovalent heterocyclic group and monovalent hydrocarbon group in R a to R c in (a) to (g) are as described above.
  • the atom or group selected from the group consisting of (a) to (g) is the atom or group of (a) or (b).
  • the bioorthogonal functional group is an azide residue, a thiol residue, an alkyne residue, a maleimide residue, and a disulfide residue among the bioorthogonal functional groups described above from the viewpoint of improving reaction efficiency. It may be a group selected from the group consisting of
  • Examples of the electron withdrawing group include those described above, and a halogen atom, a boronic acid residue, mesyl, tosyl, and triflate are preferable.
  • the compound represented by formula (I) is represented by the following formula (I-1): AL 1 -L 2 -E 1 -E 2 -E 3 -B (I-1) [Where, A and B are the same as in formula (I) L 1 is a bond or a divalent group; L 2 is a leaving group, E 1 is an electrophilic group that is (i) linked to a leaving group and (ii) has the ability to react with a nucleophilic group in an antibody; E 2 is (a) -X—Y— [where X is bonded to E 1 is C (R 1 ) (R 2 ) (where R 1 and R 2 are each independently a hydrogen atom Or an alkyl having 1 to 6 carbon atoms), N (R 3 ) (wherein R 3 is a hydrogen atom or an alkyl having 1 to 6 carbon atoms), O, S, or Se.
  • R 1 is a bond or a divalent group
  • L 2 is a leaving group
  • E 1 is an electrophilic
  • Y bound to E 3 is C (R 4 ) (R 5 ) (wherein R 4 and R 5 are each independently a hydrogen atom or an alkyl having 1 to 6 carbon atoms). is there. Or (b) the following formula (i): (Herein, ring Z is a divalent ring group in which all of the ring-constituting atoms X ′ bound to E 1 and both adjacent ring-constituting atoms are carbon atoms, or the ring-constituting atoms bound to E 1. Is a divalent heterocyclic group in which X ′ is a nitrogen atom, and the ring-constituting atoms on both sides of the nitrogen atom are carbon atoms.
  • E 3 is a divalent group when E 2 is —X—Y—, and is a bond or a divalent group when E 2 is a group represented by formula (i),
  • the leaving group has the ability to be cleaved from E 1 and eliminated by the reaction between the nucleophilic group and the electrophilic group.
  • the compound represented by this may be sufficient.
  • the leaving group represented by L 2 is preferably any one of the above (a) to (c). Examples and preferred examples of the leaving group represented by L 2 are also the same as those described in the above (a) to (c).
  • the compound represented by formula (I-1) is represented by the following formula (I-2): AL 1 -L 2 -E 1 -XYE 3 -B (I-2) [Where, A, L 1 , X, Y, and B are the same as those of formula (I-1), L 2 is (A) Ring PQ- [wherein ring P is an arylene which may be substituted with an electron-withdrawing group, a heteroarylene which may be substituted with an electron-withdrawing group, or a condensed ring.
  • 2,5-diketopyrrolidine, optionally condensed 2,6-diketopiperidine, optionally condensed 2-ketopyrrolidine, optionally condensed 2-ketopiperidine, 2-pyridone Q is a group selected from the group consisting of: —O—, —S—, —Se—, —SO 2 —O—, —SO 2 —N (R) —, —SO 2 —, —C ⁇ A group selected from the group consisting of C—CH 2 —O—, —N (OR) —, —N (R) —, and —O—N (R) — (wherein R represents a hydrogen atom or a carbon atom) 1 to 6 alkyl).
  • the compound represented by formula (I-1) is represented by the following formula (I-3): [Where, A, L 1 , ring Z, ring-constituting atoms X ′, and B are the same as those in formula (I-1), L 2 is (A) Ring PQ- [wherein ring P is an arylene which may be substituted with an electron-withdrawing group, a heteroarylene which may be substituted with an electron-withdrawing group, or a condensed ring.
  • 2,5-diketopyrrolidine, optionally condensed 2,6-diketopiperidine, optionally condensed 2-ketopyrrolidine, optionally condensed 2-ketopiperidine, 2-pyridone Q is a group selected from the group consisting of: —O—, —S—, —Se—, —SO 2 —O—, —SO 2 —N (R) —, —SO 2 —, —C ⁇ A group selected from the group consisting of C—CH 2 —O—, —N (OR) —, —N (R) —, and —O—N (R) — (wherein R represents a hydrogen atom or a carbon atom) 1 to 6 alkyl).
  • the compound represented by the formula (I-3) is represented by the following formula (I-4): [Where, A, L 1 , and B are the same as those in the formula (I-1), L 2 represents (a) Ring PQ- [wherein Ring P is arylene optionally substituted with an electron-withdrawing group, heteroarylene optionally substituted with an electron-withdrawing group, 2,5-diketopyrrolidine which may be substituted, 2,6-diketopiperidine which may be condensed, 2-ketopyrrolidine which may be condensed, 2-ketopiperidine which may be condensed , 2-pyridone, and Q is —O—, —S—, —Se—, —SO 2 —O—, —SO 2 —N (R) —, —SO 2 —.
  • E 1 is a group selected from the group consisting of —C ( ⁇ O) —, —SO 2 —, and —CH 2 —;
  • Ring Z is a divalent ring group in which all of the ring member atoms bonded to E 1 and the adjacent ring member atoms are carbon atoms.
  • E 3 is a bond or a divalent group. The compound represented by this may be sufficient.
  • R 1 to Definitions examples and preferred examples of alkyl having 1 to 6 carbon atoms and a group represented by formula (i) (for example, a divalent cyclic group and a divalent heterocyclic group) in R 5 are the same as those described above. The same.
  • the definitions, examples and preferred examples of groups such as alkyl having 1 to 6 atoms are also the same as described above.
  • An affinity substance for an antibody, a compound having a bioorthogonal functional group, or a salt thereof can be appropriately prepared.
  • the compound having an affinity substance for an antibody and a bioorthogonal functional group or a salt thereof is preferably represented by the formula (I), preferably the formula (I-1), more preferably the formula (I-2), (I-3) or It is represented by (I-4).
  • the affinity substance (A) for the antibody one having an arbitrary functional group can be appropriately selected. Therefore, by utilizing a reactive group capable of reacting with the functional group, the affinity substance is reacted with a structural unit represented by LEB, and represented by ALEB. Structural units can be prepared. For example, such a reaction can be carried out in a suitable reaction system such as an organic solvent system or an aqueous solution system at an appropriate temperature (eg, about 15 to 200 ° C.). The reaction system may contain a suitable catalyst.
  • the reaction time is, for example, 1 minute to 20 hours, preferably 10 minutes to 15 hours, more preferably 20 minutes to 10 hours, and even more preferably 30 minutes to 8 hours.
  • the molar ratio (Y / X) of the structural unit (Y) represented by LEB to the affinity substance (X) depends on the type of the structural unit, the affinity substance, and the structural unit. Although it is not particularly limited since it varies depending on the number of sites in the affinity substance to be modified, for example, 0.1 to 50, preferably 0.5 to 40, more preferably 1 to 35. More preferably, it is 2 to 25, and particularly preferably 3 to 15.
  • an affinity substance for an antibody and a compound having a bioorthogonal functional group or a salt thereof depends on the specific raw material and the molecular weight of the product.
  • electrophoresis e.g, electrophoresis, chromatography (eg, Gel filtration chromatography, ion exchange chromatography, reverse phase column chromatography, HPLC), or mass spectrometry, preferably by mass spectrometry.
  • the affinity substance for the antibody and the compound having a bioorthogonal functional group or a salt thereof can be appropriately purified by any method such as chromatography (eg, the above-described chromatography and affinity chromatography).
  • any symbol eg, A, L, E, B
  • Details of terms represented in relation to the symbols are common to the invention of the compound represented by the above formula (I) or a subordinate concept thereof, or a salt thereof.
  • any technical element eg, definition, example and preferred
  • a specific group eg, bioorthogonal functional group, divalent group, substituent
  • Example can also be made common to those described above. Therefore, these matters can be appropriately incorporated in the invention described later without particularly mentioning them.
  • the technical elements of the specific invention described in the invention described later can be used as appropriate as technical elements of the present invention and other inventions.
  • the manufacturing method of the antibody which has a biological orthogonal functional group provides the manufacturing method of the antibody which has a biological orthogonal functional group, or its salt containing the following.
  • the antibody used in the method for producing an antibody having a bioorthogonal functional group is the same as the above-described antibody.
  • the antibody is a monoclonal antibody.
  • the isotype of the monoclonal antibody include IgG (eg, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4), IgM, IgA, IgD, IgE, and IgY.
  • the monoclonal antibody is a full-length antibody or an antibody fragment (eg, F (ab ′) 2 , Fab ′, Fab, Fv, single chain antibody), and a full-length antibody is preferable.
  • the antibody is a human antibody, humanized antibody or chimeric antibody having human IgG (eg, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4) in the constant region.
  • Ab in formula (II) is the same as the above-described antibody, and is covalently bonded to the electrophilic group in E.
  • Examples of the nucleophilic group in the antibody to be covalently bonded to the electrophilic group in E include NH 2 in the side chain of the lysine residue, OH in the side chain of the tyrosine residue, and in the side chain of the serine residue. OH, OH in the side chain of the threonine residue, and SH in the side chain of the cysteine residue.
  • E in the formula (II) is the same as E in the above formula (I).
  • E can be represented by E 1 -E 2 -E 3 .
  • E 1 , E 2 , and E 3 are the same as described above.
  • E and E 1 -E 2 -E 3 can be designed to be free of peptide moieties that have potential immunogenicity and are susceptible to hydrolysis in blood.
  • the antibody having a bioorthogonal functional group represented by the formula (II) can be used for preparing an antibody having a functional substance that does not have such a problem.
  • the electrophilic group at E and the electrophilic group at E 1 are covalently bonded to the nucleophilic group in the antibody.
  • Examples of the electrophilic group covalently bonded to the nucleophilic group in the antibody include NH—C ( ⁇ O) —, NH—SO 2 —, and NH—CH 2 — (E.
  • the nucleophilic group in the antibody is NH 2 in the side chain of the lysine residue), O—C ( ⁇ O) —, O—SO 2 —, and O—CH 2 — (for covalent bonding to E
  • the nucleophilic group in the antibody provided is OH in the side chain of a tyrosine, serine or threonine residue
  • S—C ( ⁇ O) — is S—CH 2 —
  • the nucleophilic group in the antibody subjected to the covalent bond to SH is SH in the side chain of the cysteine residue.
  • Examples of the electrophilic group covalently bonded to the nucleophilic group in the antibody include NH—C ( ⁇ O) — and NH—SO 2 — (the nucleophilic group in the antibody subjected to the covalent bond with E is lysine. (When NH 2 in the side chain of the residue), O—C ( ⁇ O) — and O—SO 2 — (where the nucleophilic group in the antibody subjected to covalent bond with E is on the side of the tyrosine residue.
  • NH—C ( ⁇ O) — and NH—SO 2 — wherein the nucleophilic group in the antibody subjected to covalent bonding with E is NH 2 in the side chain of the lysine residue
  • NH—C ( ⁇ O) — when the nucleophilic group in the antibody to be covalently bound to E is NH 2 in the side chain of the lysine residue
  • NH—C ( ⁇ O) — when the nucleophilic group in the antibody to be covalently bound to E is NH 2 in the side chain of the lysine residue
  • B in formula (II) is the same as B in formula (I) above.
  • the antibody having a bioorthogonal functional group produced by the production method of the present invention is an antibody having a bioorthogonal functional group regioselectively.
  • the affinity substance for the antibody and the compound having a bioorthogonal functional group or a salt thereof are represented by the formula (I)
  • the bioorthogonal functional group represented by the formula (II) is position-selected.
  • Antibody can be produced.
  • the antibody having a bioorthogonal functional group in a position-selective manner is preferably an antibody having a bioorthogonal functional group only in the constant region, and more preferably an antibody having a bioorthogonal functional group only in the Fc region. .
  • regioselective or “regioselectivity” refers to binding to a specific amino acid residue in an antibody even though the specific amino acid residue is not ubiquitous in a specific region in the antibody. A given predetermined structural unit is unevenly distributed in a specific region in an antibody. Thus, expressions related to regioselectivity such as “having regioselective”, “regioselective binding”, “binding with regioselectivity”, etc. are target regions containing one or more specific amino acid residues.
  • the binding rate or possession rate of a given structural unit in the target region is more significant than the possession rate or binding rate of the structural unit in a non-target region containing a plurality of amino acid residues that are the same as the specific amino acid residue in the target region Means high at a certain level.
  • Such regioselective binding or possession is achieved by using a compound containing an affinity substance for the antibody instead of randomly reacting a predetermined structural unit with a specific amino acid residue in the antibody. This can be achieved by the present invention, in which a given structural unit can be preferentially reacted with a specific amino acid residue in a target region therein.
  • the antibody (Ab) is a target region consisting of 1 to 50 consecutive amino acid residues [eg, a region consisting of amino acid residues 246 to 248 in the human IgG Fc region, (b) human Specific amino acid residues (eg, lysine residues, tyrosine) in the region consisting of amino acid residues at positions 288 to 290 in the IgG Fc region, or (c) the region consisting of amino acid residues in position 317 in the human IgG Fc region]
  • the structure can be bound with more than 30% regioselectivity to one or more specific amino acid residues contained in the target region.
  • the position selectivity is preferably 40% or more, more preferably 50% or more, even more preferably 60% or more, particularly preferably 70% or more, 80% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97 % Or more, 98% or more, 99% or more, or 100%.
  • the antibody having a bioorthogonal functional group produced by the production method of the present invention can also have a bioorthogonal functional group (that is, a structural unit represented by EB) depending on the number of heavy chains.
  • a bioorthogonal functional group that is, a structural unit represented by EB
  • An antibody having a bioorthogonal functional group in a position-selective manner is first prepared by converting a compound (ALEB) represented by the formula (I) into an antibody heavy chain via an affinity substance (A) for the antibody. And then reacting the electrophilic group in E with the nucleophilic group in the side chain of a specific amino acid residue in the vicinity of the association site (constant region of the same heavy chain as the antibody heavy chain). Can be manufactured.
  • ALEB compound represented by the formula (I) into an antibody heavy chain via an affinity substance (A) for the antibody.
  • A affinity substance
  • an antibody having a plurality of antibody heavy chains for example, 1 to 8, preferably 1 to 4, more preferably 2 in the production method of the present invention
  • An antibody having a plurality of structural units represented by EB (or a plurality of structural units in a subordinate concept thereof) in a regioselective manner can be produced.
  • an antibody having two antibody heavy chains eg, IgG, IgD, IgE, F (ab ′) 2 antibody, Fc region protein, Fc fusion protein
  • Antibodies can be produced that regioselectively have two structural units represented by EB in the same target region of the chain. That is, in an antibody having a bioorthogonal functional group, the modification mode by the bioorthogonal functional group can be made the same among a plurality of (eg, two) heavy chains.
  • An antibody having a bioorthogonal functional group can also be a homologous or heterologous living body in a plurality (for example, 2 to 5, preferably 2 to 4, more preferably 2 or 3) target regions of one antibody heavy chain. It can have an orthogonal functional group (for example, a structural unit represented by EB).
  • the modification mode by the bioorthogonal functional group can be made the same among a plurality of (eg, two) heavy chains.
  • the production method of the present invention may also include generating an antibody having a bioorthogonal functional group and further modified by subjecting the generated antibody to a specific treatment.
  • specific treatment include antibody fragmentation treatment (eg, treatment with a specific protease such as papain or pepsin).
  • an antibody having a bioorthogonal functional group represented by the above formula (II) can be produced.
  • Ab-E 1 -E 2 -E 3 -B (II-1) [Where, Ab is an antibody; E 1 is an electrophilic group linked to a nucleophilic group in the antibody; E 2 is (a) -X—Y— [where X is bonded to E 1 is C (R 1 ) (R 2 ) (where R 1 and R 2 are each independently a hydrogen atom Or an alkyl having 1 to 6 carbon atoms), N (R 3 ) (wherein R 3 is a hydrogen atom or an alkyl having 1 to 6 carbon atoms), O, S, or Se.
  • Y bound to E 3 is C (R 4 ) (R 5 ) (wherein R 4 and R 5 are each independently a hydrogen atom or an alkyl having 1 to 6 carbon atoms). is there. Or (b) the following formula (i): (Herein, ring Z is a divalent ring group in which all of the ring-constituting atoms X ′ bound to E 1 and both adjacent ring-constituting atoms are carbon atoms, or the ring-constituting atoms bound to E 1. Is a divalent heterocyclic group in which X ′ is a nitrogen atom, and the ring-constituting atoms on both sides of the nitrogen atom are carbon atoms.
  • E 3 is a divalent group when E 2 is —X—Y—, and is a bond or a divalent group when E 2 is a group represented by formula (i), B is a bioorthogonal functional group. ]
  • the compound represented by the formula (I-3) when used as the compound represented by the formula (I-1) in the production method of the present invention, the compound represented by the following formula (II-3) An antibody having the bioorthogonal functional group represented can be produced.
  • E 1 is a group selected from the group consisting of —C ( ⁇ O) —, —SO 2 —, and —CH 2 —; E 3 is a bond or a divalent group.
  • the bioorthogonality represented by the following formula (II-4) Antibodies having functional groups can be produced.
  • Ab, ring Z, and B are the same as in formula (II-1);
  • E 1 is a group selected from the group consisting of —C ( ⁇ O) —, —SO 2 —, and —CH 2 —;
  • E 3 is a bond or a divalent group.
  • a compound having an affinity substance for an antibody and a bioorthogonal functional group or a salt thereof has an electrophilic group at E or an electrophilic group at E 1 , and thus can react with an antibody.
  • Such a reaction can be appropriately performed under conditions (mild conditions) that cannot cause protein denaturation / degradation (eg, amide bond cleavage).
  • a reaction can be performed at room temperature (eg, about 15 to 30 ° C.) in a suitable reaction system such as a buffer.
  • the pH of the buffer is, for example, 5 to 9, preferably 5.5 to 8.5, and more preferably 6.0 to 8.0.
  • the buffer may contain a suitable catalyst.
  • the reaction time is, for example, 1 minute to 20 hours, preferably 10 minutes to 15 hours, more preferably 20 minutes to 10 hours, and even more preferably 30 minutes to 8 hours.
  • the reaction time is, for example, 1 minute to 20 hours, preferably 10 minutes to 15 hours, more preferably 20 minutes to 10 hours, and even more preferably 30 minutes to 8 hours.
  • G.I. J. et al. L. Bernardes et al. Chem. Rev. 115, 2174 (2015); J. et al. L. Bernardes et al. , Chem. Asian. J. et al. 4,630 (2009); G. Davis et al. Nat. Commun. 5, 4740 (2014); Wagner et al. , Bioconjugate. Chem. , 25, 825 (2014).
  • the molar ratio (Y / X) of the affinity substance for the antibody and the compound having a biological orthogonal functional group or its salt (Y) (Y / X) with respect to the antibody (X) is the affinity substance for the antibody and the biological orthogonality.
  • the number of sites (eg, DAR) in an antibody to be modified by a compound having a functional group or a salt thereof and the type of antibody, an affinity substance for the antibody, and a compound having a bioorthogonal functional group or a salt thereof For example, it is 0.1 to 100, preferably 0.5 to 80, more preferably 1 to 70, and even more preferably 2 to 50. Preferably, it is 3-30.
  • Confirmation of the production of the antibody having a bioorthogonal functional group depends on the specific raw material and the molecular weight of the product. For example, electrophoresis, chromatography (eg, gel filtration chromatography, ion exchange chromatography, Reverse phase column chromatography (HPLC), or by mass spectrometry, preferably by mass spectrometry.
  • the regioselectivity can be confirmed, for example, by peptide mapping.
  • Peptide mapping can be performed, for example, by protease (eg, trypsin, chymotrypsin) treatment and mass spectrometry. As the protease, endoprotease is preferable.
  • endoproteases include trypsin, chymotrypsin, Glu-C, Lys-N, Lys-C, and Asp-N.
  • Confirmation of the number of bioorthogonal functional groups possessed by an antibody having a bioorthogonal functional group can be performed, for example, by electrophoresis, chromatography, or mass spectrometry, preferably by mass spectrometry.
  • An antibody having a bioorthogonal functional group can be appropriately purified by any method such as chromatography (eg, the above-described chromatography and affinity chromatography).
  • the present invention includes a method for producing an antibody having a functional substance or a salt thereof, including the following: I will provide a.
  • I will provide a.
  • the step (1) can be carried out in the same manner as in the method for producing an antibody having a bioorthogonal functional group.
  • the functional substance (F) used in the step (2) is not particularly limited as long as it is a substance that imparts an arbitrary function to the antibody, and examples thereof include drugs, labeling substances, and stabilizers. Drug or labeling substance.
  • the functional substance may also be a single functional substance or a substance in which two or more functional substances are linked.
  • the drug may be a drug for any disease.
  • diseases include cancer (eg, lung cancer, stomach cancer, colon cancer, pancreatic cancer, kidney cancer, liver cancer, thyroid cancer, prostate cancer, bladder cancer, ovarian cancer, uterine cancer, bone cancer, skin cancer, Brain tumor, melanoma), autoimmune disease / inflammatory disease (eg, allergic disease, rheumatoid arthritis, systemic lupus erythematosus), cranial nerve disease (eg, cerebral infarction, Alzheimer's disease, Parkinson's disease, amyotrophic lateral sclerosis), Infection (eg, bacterial infection, viral infection), hereditary / rare disease (eg, hereditary spherocytosis, non-dystrophic myotonia), eye disease (eg, age-related macular degeneration, diabetic retinopathy, Retinitis pigmentosa), bone / orthopedic diseases (eg, osteoarthritis), blood diseases (eg, leukemia, purpura
  • the drug is an anticancer agent.
  • anticancer agents include chemotherapeutic agents, toxins, radioisotopes or substances containing the same.
  • chemotherapeutic agents include DNA damaging agents, antimetabolites, enzyme inhibitors, DNA intercalating agents, DNA cleaving agents, topoisomerase inhibitors, DNA binding inhibitors, tubulin binding inhibitors, cytotoxic nucleosides, A platinum compound is mentioned.
  • the toxin include bacterial toxins (eg, diphtheria toxin) and plant toxins (eg, ricin).
  • radioisotope examples include a radioisotope of a hydrogen atom (eg, 3 H), a radioisotope of a carbon atom (eg, 14 C), a radioisotope of a phosphorus atom (eg, 32 P), a sulfur atom Radioisotope (eg, 35 S ), yttrium radioisotope (eg, 90 Y), technetium radioisotope (eg, 99m Tc), indium radioisotope (eg, 111 In), iodine atom radioactivity Isotopes (eg, 123 I, 125 I, 129 I, 131 I), radioisotopes of samarium (eg, 153 Sm), radioisotopes of rhenium (eg, 186 Re), radioisotopes of astatine (eg, 211 At), and radioisotopes of bismuth (eg, 212 Bi).
  • labeling substances include enzymes (eg, peroxidase, alkaline phosphatase, luciferase, ⁇ -galactosidase), affinity substances (eg, streptavidin, biotin, digoxigenin, aptamer), fluorescent substances (eg, fluorescein, fluorescein isothiocyanate, rhodamine). , Green fluorescent protein, red fluorescent protein), luminescent material (eg, luciferin, aequorin, acridinium ester, tris (2,2′-bipyridyl) ruthenium, luminol), radioisotope (eg, those described above) or The substance containing is mentioned.
  • enzymes eg, peroxidase, alkaline phosphatase, luciferase, ⁇ -galactosidase
  • affinity substances eg, streptavidin, biotin, digoxigenin, aptamer
  • fluorescent substances eg
  • the functional substance is also a high molecular compound, a medium molecular compound, or a low molecular compound, and preferably a low molecular compound.
  • a low molecular weight compound means a compound having a molecular weight of 1500 or less.
  • the low molecular compound is a natural compound or a synthetic compound.
  • the molecular weight of the low molecular weight compound may be 1200 or less, 1000 or less, 900 or less, 800 or less, 700 or less, 600 or less, 500 or less, 400 or less, or 300 or less.
  • the molecular weight of the low molecular compound may also be 30 or more, 40 or more, or 50 or more.
  • the low molecular weight compound may be a drug or a labeling substance as described above.
  • low molecular weight compound examples include amino acids, oligopeptides, vitamins, nucleosides, nucleotides, oligonucleotides, monosaccharides, oligosaccharides, lipids, fatty acids, and salts thereof.
  • the functional substance has various functional groups depending on its structure.
  • the functional substance has a functional group that easily reacts with the biological orthogonal functional group
  • the functional group of the functional substance and the biological orthogonal functional group can be appropriately reacted.
  • the functional group that easily reacts with the bioorthogonal functional group may vary depending on the specific type of the bioorthogonal functional group.
  • a person skilled in the art can appropriately select an appropriate functional group as a functional group that easily reacts with a bioorthogonal functional group (for example, Bouturera et al., Chem. Rev., 2015, 115, 2174-2195). ).
  • Examples of the functional group that easily reacts with the bioorthogonal functional group include an azide residue when the bioorthogonal functional group is an alkyne residue, and the bioorthogonal functional group is an aldehyde residue or a ketone residue. Includes a hydrazine residue.
  • the bioorthogonal functional group is a thiol residue, examples thereof include, but are not limited to, a maleimide residue and a disulfide residue.
  • the functional substance and the bioorthogonal functional group may be a divalent group containing a triazole residue (which may or may not be condensed with another ring).
  • the functional substance and the living body The divalent group containing a moiety generated by a reaction with an orthogonal functional group may be a divalent group containing a hydrazone residue; the bioorthogonal functional group is a thiol residue, and A functional group that easily reacts with an orthogonal functional group is a maleimide residue.
  • a divalent group containing a moiety formed by a reaction between a functional substance and a bioorthogonal functional group is a divalent group containing a thiosuccinimide residue Or a divalent group containing a disulfide residue (eg, Boutureira et al., Chem. Rev., 2015, 115, 2174-2195).
  • a divalent group containing a triazole residue (which may or may not be condensed with another ring), a divalent group containing a hydrazone residue, a divalent group containing a thiosuccinimide residue, or A divalent group containing a disulfide residue is a preferred example of a divalent group containing a moiety generated by a reaction between a functional substance and a bioorthogonal functional group.
  • a functional substance derivatized to have a desired functional group can be used.
  • the functional substance is a soluble protein
  • a derivatized product having a functional group that the soluble protein does not naturally have can be used.
  • Derivatization is common technical knowledge in the field (eg, International Publication No. 2004/010957, US Patent Application Publication No. 2006/0074008, US Patent Application Publication No. 2005/0238649).
  • derivatization may be performed using a cross-linking agent as described above.
  • derivatization may be performed using a specific linker having the desired functional group.
  • such a linker may be capable of separating a functional substance and an antibody by cleavage of the linker in an appropriate environment (eg, intracellular or extracellular).
  • linkers examples include peptidyl linkers (eg, intracellular proteases (eg, lysosomes or proteases present in endosomes), extracellular proteases (eg, secreted proteases)) that are cleaved by specific proteases (eg, For example, US Pat. No. 6,214,345; Dubowchik et al., Pharm. Therapeutics 83: 67-123 (1999)), a linker (eg, US Pat. No. 5 622, 929, 5,122, 368; 5,824, 805).
  • the linker may be self-immobilizing (eg, WO 02/083180, WO 04/043493, WO 05/112919).
  • the derivatized functional substance can also be simply referred to as “functional substance”.
  • Ab in formula (III) is the same as the above-described antibody, and is covalently bonded to the electrophilic group in E.
  • Examples of the nucleophilic group in the antibody to be covalently bonded to the electrophilic group in E include NH 2 in the side chain of the lysine residue, OH in the side chain of the tyrosine residue, and in the side chain of the serine residue. OH, OH in the side chain of the threonine residue, and SH in the side chain of the cysteine residue.
  • E in the formula (III) is the same as E in the above formula (I).
  • E can be represented by E 1 -E 2 -E 3 .
  • E 1 , E 2 , and E 3 are the same as described above.
  • E and E 1 -E 2 -E 3 can be designed to be free of peptide moieties that have potential immunogenicity and are susceptible to hydrolysis in blood.
  • an antibody having a functional substance represented by the formula (III) can be suitably used as a medicine.
  • the electrophilic group at E and the electrophilic group at E 1 are covalently bonded to the nucleophilic group in the antibody.
  • Examples of the electrophilic group covalently bonded to the nucleophilic group in the antibody include NH—C ( ⁇ O) —, NH—SO 2 —, and NH—CH 2 — (E.
  • the nucleophilic group in the antibody is NH 2 in the side chain of the lysine residue), O—C ( ⁇ O) —, O—SO 2 —, and O—CH 2 — (for covalent bonding to E
  • the nucleophilic group in the antibody provided is OH in the side chain of a tyrosine, serine or threonine residue
  • S—C ( ⁇ O) — is S—CH 2 —
  • the nucleophilic group in the antibody subjected to the covalent bond to SH is SH in the side chain of the cysteine residue.
  • Examples of the electrophilic group covalently bonded to the nucleophilic group in the antibody include NH—C ( ⁇ O) — and NH—SO 2 — (the nucleophilic group in the antibody subjected to the covalent bond with E is lysine. (When NH 2 in the side chain of the residue), O—C ( ⁇ O) — and O—SO 2 — (where the nucleophilic group in the antibody subjected to covalent bond with E is on the side of the tyrosine residue.
  • NH—C ( ⁇ O) — and NH—SO 2 — wherein the nucleophilic group in the antibody subjected to covalent bonding with E is NH 2 in the side chain of the lysine residue
  • NH—C ( ⁇ O) — when the nucleophilic group in the antibody to be covalently bound to E is NH 2 in the side chain of the lysine residue
  • NH—C ( ⁇ O) — when the nucleophilic group in the antibody to be covalently bound to E is NH 2 in the side chain of the lysine residue
  • Functional groups that easily react with bioorthogonal functional groups are azide residues, aldehyde residues, thiol residues, alkyne residues, alkene residues, halogen residues, tetrazine residues, nitrone residues, hydroxylamine residues, Nitrile residue, hydrazine residue, ketone residue, boronic acid residue, cyanobenzothiazole residue, allyl residue, phosphine residue, maleimide residue, disulfide residue, thioester residue, ⁇ -halocarbonyl residue, It may be a group selected from the group consisting of an isonitrile residue, a sydnone residue, and a selenium residue.
  • the functional substance when the functional substance has a functional group that easily reacts with a bioorthogonal functional group, or is derivatized to have a functional group that easily reacts with a bioorthogonal functional group
  • the functional group that easily reacts with the bioorthogonal functional group may be a group selected from the group consisting of the groups represented below. [Where, R 1f , single or plural R 1g and single or plural R 1h are the same or different and are an atom or group selected from the group consisting of the above (i) to (vii), or an electron withdrawing group, -Is a bond to a functional substance. )
  • the divalent group containing a moiety generated by the reaction between the functional substance and the bioorthogonal functional group represented by B ′ in formula (III) is (1) the residues mentioned in the above preferred examples Or a divalent group including a triazole residue, a hydrazone residue, or a thiosuccinimide residue, or (2) a non-limiting example, for example, a disulfide residue (this residue Group is the residue mentioned in the above preferred examples), acetal residue, ketal residue, ester residue, carbamoyl residue, alkoxyalkyl residue, imine residue, tertiary alkyloxycarbamate residue, silane Residue, hydrazone-containing residue, phosphoramidate residue, aconityl residue, trityl residue, azo residue, vicinal diol residue, selenium residue, electron withdrawing group Aromatic ring-containing residue, coumarin-containing residues, sulfone-containing residue, an unsaturated bond-containing chain residue
  • the divalent group including a moiety generated by the reaction between the functional substance and the bioorthogonal functional group is not particularly limited, and for example, the following: [Where the wavy line orthogonal to the bond indicates the bond produced by the reaction,
  • the plurality of R 2a , the plurality of R 2b , and the plurality of R 2c are the same or different and are a hydrogen atom or the above-described substituent; J is —CH 2 —, —O—, or —S—; r is an arbitrary integer of 1 to 4, ⁇ (white circle) indicates a bond to the F-side portion, and ⁇ (black circle) indicates a bond to the B′-side portion.
  • ⁇ may represent a bond to the B ′ side portion, and ⁇ may represent a bond to the F side portion.
  • the antibody having a functional substance produced in step (2) in the production method of the present invention is an antibody having a functional substance in a position-selective manner.
  • the antibody having a bioorthogonal functional group is regioselectively represented by formula (II)
  • an antibody having a functional substance regioselectively represented by formula (III) is produced.
  • the antibody having a functional substance in a position-selective manner is preferably an antibody having a functional substance only in the constant region, and more preferably an antibody having a functional substance only in the Fc region.
  • Antibody (Ab) is a target region consisting of continuous 1 to 50 amino acid residues [eg, region consisting of amino acid residues 246 to 248 in human IgG Fc region, (b) 288 to 288 in human IgG Fc region Specific amino acid residues (eg, lysine residue, tyrosine residue, threonine residue) in the region consisting of amino acid residue at position 290 or (c) the region consisting of amino acid residue at position 317 in human IgG Fc region] , A serine residue, a cysteine residue) and a non-target region other than the target region includes the specific amino acid residue in the target region.
  • region consisting of amino acid residues 246 to 248 in human IgG Fc region eg, region consisting of amino acid residues 246 to 248 in human IgG Fc region, (b) 288 to 288 in human IgG Fc region Specific amino acid residues (eg, lysine residue, tyrosine residue,
  • the position selectivity is preferably 40% or more, more preferably 50% or more, even more preferably 60% or more, particularly preferably 70% or more, 80% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97 % Or more, 98% or more, 99% or more, or 100%.
  • An antibody having a functional substance produced by the production method of the present invention can also have a functional substance (that is, a structural unit represented by EB′-F) depending on the number of heavy chains.
  • a functional substance that is, a structural unit represented by EB′-F
  • an antibody having a functional substance can be produced from an antibody having a bioorthogonal functional group that can have a structural unit represented by EB depending on the number of heavy chains. Therefore, by using an antibody having a plurality of antibody heavy chains (for example, 1 to 8, preferably 1 to 4, more preferably 2) in the production method of the present invention, the same target region of a plurality of antibody heavy chains can be used.
  • An antibody having a plurality of structural units represented by EB′-F (or a plurality of structural units in its subordinate concept) in a regioselective manner can be produced.
  • an antibody having two antibody heavy chains eg, IgG, IgD, IgE, F (ab ′) 2 antibody, Fc region protein, Fc fusion protein
  • Antibodies can be produced that regioselectively have two structural units represented by EB′-F in the same target region of the chain. That is, in an antibody having a functional substance, the modification mode by the functional substance can be made the same among a plurality of (eg, two) heavy chains.
  • An antibody having a functional substance may also be a homologous or heterogeneous functional substance in a plurality (for example, 2 to 5, preferably 2 to 4, more preferably 2 or 3) of target regions of one antibody heavy chain.
  • a structural unit represented by EB′-F for example, a structural unit represented by EB′-F.
  • the modification mode by the functional substance can be made the same among a plurality of (eg, two) heavy chains.
  • the production method of the present invention may also include generating an antibody having a functional substance and further modified by subjecting the generated antibody to a specific treatment.
  • specific treatment include antibody fragmentation treatment (eg, treatment with a specific protease such as papain or pepsin).
  • an antibody having a bioorthogonal functional group represented by the above formula (II) is produced in the step (1). Then, in the step (2), an antibody having a functional substance group represented by the above formula (III) can be produced.
  • the compound represented by the formula (I-1) when used as the compound represented by the formula (I) in the production method of the present invention, in the step (1), the above formula (II-1) In the step (2), an antibody having a functional substance group represented by the following formula (III-1) can be produced. Can do.
  • Ab-E 1 -E 2 -E 3 -B′-F (III-1) [Where, Ab is an antibody; E 1 is an electrophilic group linked to a nucleophilic group in the antibody; E 2 is (a) -X—Y— [where X is bonded to E 1 is C (R 1 ) (R 2 ) (where R 1 and R 2 are each independently a hydrogen atom Or an alkyl having 1 to 6 carbon atoms), N (R 3 ) (wherein R 3 is a hydrogen atom or an alkyl having 1 to 6 carbon atoms), O, S, or Se.
  • Y bound to E 3 is C (R 4 ) (R 5 ) (wherein R 4 and R 5 are each independently a hydrogen atom or an alkyl having 1 to 6 carbon atoms). is there. Or (b) the following formula (i): (Herein, ring Z is a divalent ring group in which all of the ring-constituting atoms X ′ bound to E 1 and both adjacent ring-constituting atoms are carbon atoms, or the ring-constituting atoms bound to E 1. Is a divalent heterocyclic group in which X ′ is a nitrogen atom, and the ring-constituting atoms on both sides of the nitrogen atom are carbon atoms.
  • E 3 is a divalent group when E 2 is —X—Y—, and is a bond or a divalent group when E 2 is a group represented by formula (i), B ′ is a divalent group containing a moiety generated by a reaction between a functional substance and a bioorthogonal functional group, F is a functional substance.
  • the compound represented by formula (I-2) when used as the compound represented by formula (I-1) in the production method of the present invention, in the step (1), the above formula (I II-2) An antibody having a bioorthogonal functional group can be produced, and then, in the step (2), an antibody having a functional substance group represented by the following formula (III-2) Can be manufactured.
  • Ab-E 1 -XYE 3 -B′-F (III-2) [Where, Ab, X, Y, B ′ and F are the same as those in the formula (III-1), E 1 is a group selected from the group consisting of —C ( ⁇ O) —, —SO 2 —, and —CH 2 —; E 3 is a divalent group. ]
  • an antibody having a functional substance group represented by the following formula (III-4) can be produced.
  • E 1 is a group selected from the group consisting of —C ( ⁇ O) —, —SO 2 —, and —CH 2 —; E 3 is a bond or a divalent group.
  • An antibody having a bioorthogonal functional group can react with a functional substance via a bioorthogonal functional group. Such a reaction can be appropriately performed under conditions (mild conditions) that cannot cause protein denaturation / degradation (eg, amide bond cleavage) as described above.
  • the molar ratio (Z / Y) of the functional substance (Z) to the antibody (Y) having a biological direct functional group is the type of the biological direct functional group, functional substance, and antibody, and modification.
  • it is not particularly limited since it varies depending on the number of sites in the antibody to be performed (eg, DAR), etc., for example, 0.1-100, preferably 0.5-80, more preferably 1 ⁇ 70, even more preferably 2 ⁇ 50, and particularly preferably 3 ⁇ 30.
  • Confirmation of the production of an antibody having a functional substance depends on the specific raw material and the molecular weight of the product. For example, electrophoresis, chromatography (eg, gel filtration chromatography, ion exchange chromatography, reverse phase) Column chromatography, HPLC), or mass spectrometry, preferably by mass spectrometry.
  • the regioselectivity can be confirmed, for example, by peptide mapping.
  • Peptide mapping can be performed, for example, by protease (eg, trypsin, chymotrypsin) treatment and mass spectrometry. As the protease, endoprotease is preferable.
  • endoproteases include trypsin, chymotrypsin, Glu-C, Lys-N, Lys-C, and Asp-N.
  • Confirmation of the number of functional substances possessed by an antibody having a functional substance can be performed, for example, by electrophoresis, chromatography, or mass spectrometry, preferably by mass spectrometry.
  • An antibody having a functional substance can be appropriately purified by any method such as chromatography (eg, the above-described chromatography and affinity chromatography).
  • the present invention provides an antibody or a salt thereof having a bioorthogonal functional group or a functional substance, or a salt thereof, regioselectively having a bioorthogonal functional group or a functional substance.
  • the antibody having a bioorthogonal functional group or a salt thereof is an antibody having a bioorthogonal functional group represented by the above formula (II-1).
  • an antibody having a bioorthogonal functional group represented by the above formula (II-1) the bioorthogonal functional group represented by the above formula (II-2) or (II-3) is preferably used.
  • An antibody having a regioselective position is provided. More preferably, the antibody having the bioorthogonal functional group represented by the above formula (II-3) is regioselectively selected as the antibody having the bioorthogonal functional group represented by the above formula (II-3).
  • An antibody is provided.
  • the antibody having a functional substance regioselectively or a salt thereof is an antibody having a functional substance represented by the above formula (III-1) regioselectively.
  • the antibody having the functional substance represented by the formula (III-1) is regioselectively selected from the functional substance represented by the formula (III-2) or (III-3).
  • An antibody is provided. More preferably, an antibody having a functional substance represented by the formula (III-4) is provided as an antibody having a functional substance represented by the formula (III-3). Is done.
  • the antibody having a bioorthogonal functional group or a functional substance regioselectively is the same as the above-described antibody.
  • such an antibody is a monoclonal antibody.
  • the isotype of the monoclonal antibody include IgG (eg, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4), IgM, IgA, IgD, IgE, and IgY.
  • the monoclonal antibody is a full-length antibody or an antibody fragment (eg, F (ab ′) 2 , Fab ′, Fab, Fv, single chain antibody), and a full-length antibody is preferable.
  • such an antibody is a human antibody, humanized antibody or chimeric antibody having human IgG (eg, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4) in the constant region.
  • the antibody having a bioorthogonal functional group or a functional substance regioselectively is preferably an antibody having a bioorthogonal functional group or a functional substance only in the constant region of the antibody, more preferably an Fc region of the antibody. Only an antibody having a bioorthogonal functional group or a functional substance.
  • An antibody having a bioorthogonal functional group or a functional substance regioselectively has a target region consisting of 1 to 50 consecutive amino acid residues [eg, (a) amino acid residues at positions 246 to 248 in the human IgG Fc region. Specific amino acid residues in (b) a region consisting of amino acid residues 288 to 290 in the human IgG Fc region, or (c) a region consisting of amino acid residues 317 in the human IgG Fc region].
  • a bioorthogonal functional group or functional substance is added to one or more specific amino acid residues contained in the target region. It can have 0% or more regioselectivity.
  • the position selectivity is preferably 40% or more, more preferably 50% or more, even more preferably 60% or more, particularly preferably 70% or more, 80% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97 % Or more, 98% or more, 99% or more, or 100%.
  • An antibody having a bioorthogonal functional group or a functional substance regioselectively also has a bioorthogonal functional group (ie, a structural unit represented by EB) or a functional substance (depending on the number of heavy chains). That is, it can have a structural unit represented by EB′-F.
  • An antibody having a bioorthogonal functional group or a functional substance regioselectively has a plurality of antibody heavy chains when it has a plurality of antibody heavy chains (for example, 1 to 8, preferably 1 to 4, more preferably 2). It can have bioorthogonal functional groups or functional substances regioselectively in the same target region of the chain.
  • the modification mode by the bioorthogonal functional group or the functional substance can be made the same among a plurality of (eg, two) heavy chains it can.
  • An antibody having a bioorthogonal functional group or a functional substance regioselectively also has multiple (eg 2-5, preferably 2-4, more preferably 2 or 3) targets of one antibody heavy chain. In the region, it has the same or different bioorthogonal functional group (for example, a structural unit represented by EB) or the same or different functional substance (for example, a structural unit represented by EB′-F). be able to.
  • the modification mode by the bio-orthogonal functional group or the functional substance is made the same among a plurality of (eg, two) heavy chains. Can do.
  • the present invention provides an affinity substance for an antibody and a compound having a functional substance or a salt thereof represented by the formula (IV).
  • AL-E-F (IV) [Where, A is an affinity substance for an antibody, L is a divalent group containing a leaving group, E is a divalent group comprising an electrophilic group (i) linked to the leaving group and (ii) capable of reacting with a nucleophilic group in the antibody; F is a functional substance, The leaving group has the ability to be cleaved from E by the reaction between the nucleophilic group and the electrophilic group. ]
  • an affinity substance for an antibody, and a compound having a functional substance or a salt thereof an affinity substance for an antibody (A), a divalent group containing a leaving group (L), a divalent group containing an electrophilic group (
  • E) and the functional substance (F) are the same as those described above. Therefore, in the compound having an affinity substance for an antibody and a functional substance or a salt thereof, A, L, and E are the affinity substance for the antibody, and a compound having a bioorthogonal functional group or a salt thereof (for example, the formula (See (I)), and can be specified in the same manner as A, L, and E.
  • F is specified in the same manner as F in the antibody having a functional substance or a salt thereof (see, for example, formula (III)). Can do.
  • the compound represented by formula (IV) is represented by the following formula (IV-1): AL 1 -L 2 -E 1 -E 2 -E 3 -F (IV-1) [Where, A and F are the same as in formula (IV) L 1 is a bond or a divalent group; L 2 is a leaving group, E 1 is an electrophilic group that is (i) linked to a leaving group and (ii) has the ability to react with a nucleophilic group in an antibody; E 2 is (a) -X—Y— [where X is bonded to E 1 is C (R 1 ) (R 2 ) (where R 1 and R 2 are each independently a hydrogen atom Or an alkyl having 1 to 6 carbon atoms), N (R 3 ) (wherein R 3 is a hydrogen atom or an alkyl having 1 to 6 carbon atoms), O, S, or Se.
  • Y bound to E 3 is C (R 4 ) (R 5 ) (wherein R 4 and R 5 are each independently a hydrogen atom or an alkyl having 1 to 6 carbon atoms). is there. Or (b) the following formula (i): (Herein, ring Z is a divalent ring group in which all of the ring-constituting atoms X ′ bound to E 1 and both adjacent ring-constituting atoms are carbon atoms, or the ring-constituting atoms bound to E 1. Is a divalent heterocyclic group in which X ′ is a nitrogen atom, and the ring-constituting atoms on both sides of the nitrogen atom are carbon atoms.
  • E 3 is a divalent group when E 2 is —X—Y—, and is a bond or a divalent group when E 2 is a group represented by formula (i),
  • the leaving group has the ability to be cleaved from E 1 and eliminated by the reaction between the nucleophilic group and the electrophilic group.
  • the compound represented by this may be sufficient.
  • the compound represented by formula (IV-1) is represented by the following formula (IV-2): AL 1 -L 2 -E 1 -XYE 3 -F (IV-2) [Where, A, L 1 , X, Y and F are the same as those of formula (IV-1), L 2 is (A) Ring PQ- [wherein ring P is an arylene which may be substituted with an electron-withdrawing group, a heteroarylene which may be substituted with an electron-withdrawing group, or a condensed ring.
  • 2,5-diketopyrrolidine, optionally condensed 2,6-diketopiperidine, optionally condensed 2-ketopyrrolidine, optionally condensed 2-ketopiperidine, 2-pyridone Q is a group selected from the group consisting of: —O—, —S—, —Se—, —SO 2 —O—, —SO 2 —N (R) —, —SO 2 —, —C ⁇ A group selected from the group consisting of C—CH 2 —O—, —N (OR) —, —N (R) —, and —O—N (R) — (wherein R represents a hydrogen atom or a carbon atom) 1 to 6 alkyl).
  • the compound represented by formula (IV-1) is represented by the following formula (IV-3): [Where, A, L 1 , ring Z, ring-constituting atoms X ′ and F are the same as those in formula (IV-1), L 2 is (A) Ring PQ- [wherein ring P is an arylene which may be substituted with an electron-withdrawing group, a heteroarylene which may be substituted with an electron-withdrawing group, or a condensed ring.
  • 2,5-diketopyrrolidine, optionally condensed 2,6-diketopiperidine, optionally condensed 2-ketopyrrolidine, optionally condensed 2-ketopiperidine, 2-pyridone Q is a group selected from the group consisting of: —O—, —S—, —Se—, —SO 2 —O—, —SO 2 —N (R) —, —SO 2 —, —C ⁇ A group selected from the group consisting of C—CH 2 —O—, —N (OR) —, —N (R) —, and —O—N (R) — (wherein R represents a hydrogen atom or a carbon atom) 1 to 6 alkyl).
  • the compound represented by the formula (IV-3) is represented by the following formula (IV-4): [Where, A, L 1 and F are the same as those in formula (IV-1), L 2 represents (a) Ring PQ- [wherein Ring P is arylene optionally substituted with an electron-withdrawing group, heteroarylene optionally substituted with an electron-withdrawing group, 2,5-diketopyrrolidine which may be substituted, 2,6-diketopiperidine which may be condensed, 2-ketopyrrolidine which may be condensed, 2-ketopiperidine which may be condensed , 2-pyridone, and Q is —O—, —S—, —Se—, —SO 2 —O—, —SO 2 —N (R) —, —SO 2 —.
  • E 1 is a group selected from the group consisting of —C ( ⁇ O) —, —SO 2 —, and —CH 2 —;
  • Ring Z is a divalent ring group in which all of the ring member atoms bonded to E 1 and the adjacent ring member atoms are carbon atoms.
  • E 3 is a bond or a divalent group. The compound represented by this may be sufficient.
  • the definitions, examples and preferred examples of groups such as alkyl having 1 to 6 atoms are also the same as described above.
  • the compound having an affinity substance for an antibody and a functional substance or a salt thereof is the same as described above for the compound having an affinity substance for an antibody and a bioorthogonal functional group or a salt thereof via a bioorthogonal functional group. It can be appropriately prepared by reacting with a functional substance. Such a reaction can be carried out in an appropriate reaction system such as an organic solvent system or an aqueous solution system at an appropriate temperature (eg, about 15 to 200 ° C.). The reaction system may contain a suitable catalyst.
  • the reaction time is, for example, 1 minute to 20 hours, preferably 10 minutes to 15 hours, more preferably 20 minutes to 10 hours, and even more preferably 30 minutes to 8 hours.
  • the molar ratio (Y / X) of the affinity substance for the antibody with respect to the functional substance (X) and the compound having a biological orthogonal functional group or a salt thereof is the kind of the structural unit and the affinity substance, although it is not particularly limited because it varies depending on the number of sites in the affinity substance to be modified by the structural unit, for example, 0.01 to 100, preferably 0.05 to 20, more preferably Is 0.1-10.
  • Confirmation of the production of a compound having an affinity substance for an antibody and a functional substance or a salt thereof depends on the specific raw material and the molecular weight of the product. For example, electrophoresis, chromatography (eg, gel filtration) Chromatography, ion exchange chromatography, reverse phase column chromatography, HPLC) or mass spectrometry, preferably by mass spectrometry.
  • a compound having an affinity substance for an antibody and a functional substance or a salt thereof can be appropriately purified by an arbitrary method such as chromatography (eg, the above-described chromatography and affinity chromatography).
  • the present invention provides a method for producing antibody having functional substance or salt thereof, comprising: To do.
  • the antibody having a functional substance produced by the production method of the present invention is an antibody having a functional substance in a position-selective manner.
  • an antibody represented by the formula (V) having a functional substance in a position-selective manner can be produced.
  • the antibody having a functional substance in a position-selective manner is preferably an antibody having a functional substance only in the constant region, and more preferably an antibody having a functional substance only in the Fc region.
  • Antibody (Ab) is a target region consisting of continuous 1 to 50 amino acid residues [eg, region consisting of amino acid residues 246 to 248 in human IgG Fc region, (b) 288 to 288 in human IgG Fc region Specific amino acid residues (eg, lysine residue, tyrosine residue, threonine residue) in the region consisting of amino acid residue at position 290 or (c) the region consisting of amino acid residue at position 317 in human IgG Fc region] , A serine residue, a cysteine residue) and a non-target region other than the target region includes the specific amino acid residue in the target region.
  • region consisting of amino acid residues 246 to 248 in human IgG Fc region eg, region consisting of amino acid residues 246 to 248 in human IgG Fc region, (b) 288 to 288 in human IgG Fc region Specific amino acid residues (eg, lysine residue, tyrosine residue,
  • the position selectivity is preferably 40% or more, more preferably 50% or more, even more preferably 60% or more, particularly preferably 70% or more, 80% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97 % Or more, 98% or more, 99% or more, or 100%.
  • An antibody having a functional substance produced by the production method of the present invention can also have a functional substance (that is, a structural unit represented by EF) depending on the number of heavy chains. Therefore, by using an antibody having a plurality of antibody heavy chains (for example, 1 to 8, preferably 1 to 4, more preferably 2) in the production method of the present invention, the same target region of a plurality of antibody heavy chains can be used. An antibody having a plurality of structural units represented by EF (or a plurality of structural units in a subordinate concept thereof) in a regioselective manner can be produced.
  • EF structural unit represented by EF
  • Antibodies can be produced that regioselectively have two structural units represented by EF in the same target region of the chain. That is, in an antibody having a functional substance, the modification mode by the functional substance can be made the same among a plurality of (eg, two) heavy chains.
  • An antibody having a functional substance may also be a homologous or heterogeneous functional substance in a plurality (for example, 2 to 5, preferably 2 to 4, more preferably 2 or 3) of target regions of one antibody heavy chain. (For example, a structural unit represented by EF).
  • an antibody having a functional substance can have the same mode of modification by the functional substance between multiple (eg, two) heavy chains.
  • the production method of the present invention may also include generating an antibody having a functional substance and further modified by subjecting the generated antibody to a specific treatment.
  • specific treatment include antibody fragmentation treatment (eg, treatment with a specific protease such as papain or pepsin).
  • the functional substance represented by the following formula (V-1) can be produced.
  • Ab-E 1 -E 2 -E 3 -F (V-1) [Where, Ab is an antibody; E 1 , E 2 , E 3 and F are the same as those in the above formula (IV-1). ]
  • the compound having an affinity substance for an antibody and a functional substance or a salt thereof can react with the antibody.
  • Such a reaction can be appropriately performed under conditions (mild conditions) that cannot cause protein denaturation / degradation (eg, amide bond cleavage).
  • a reaction can be performed at room temperature (eg, about 15 to 30 ° C.) in a suitable reaction system such as a buffer.
  • the pH of the buffer is, for example, 5 to 9, preferably 5.5 to 8.5, and more preferably 6.0 to 8.0.
  • the buffer may contain a suitable catalyst.
  • the reaction time is, for example, 1 minute to 20 hours, preferably 10 minutes to 15 hours, more preferably 20 minutes to 10 hours, and even more preferably 30 minutes to 8 hours.
  • the reaction time is, for example, 1 minute to 20 hours, preferably 10 minutes to 15 hours, more preferably 20 minutes to 10 hours, and even more preferably 30 minutes to 8 hours.
  • G.I. J. et al. L. Bernardes et al. Chem. Rev. 115, 2174 (2015); J. et al. L. Bernardes et al. , Chem. Asian. J. et al. 4,630 (2009); G. Davis et al. Nat. Commun. 5, 4740 (2014); Wagner et al. , Bioconjugate. Chem. , 25, 825 (2014).
  • the molar ratio (Y / X) of the affinity substance for the antibody and the compound having the functional substance or the salt (Y) (Y / X) with respect to the antibody (X) is the affinity substance for the antibody and the functional substance group.
  • a salt thereof and the type of antibody, an affinity substance for the antibody, and the number of sites in the antibody to be modified by the compound having a biological orthogonal functional group or a salt thereof eg, DAR
  • it is 0.1 to 100, preferably 0.5 to 80, more preferably 1 to 70, even more preferably 2 to 50, and particularly preferably 3 to 100. ⁇ 30.
  • Confirmation of the production of an antibody having a functional substance depends on the specific raw material and the molecular weight of the product. For example, electrophoresis, chromatography (eg, gel filtration chromatography, ion exchange chromatography, reverse phase) Column chromatography, HPLC), or mass spectrometry, preferably by mass spectrometry.
  • the regioselectivity can be confirmed, for example, by peptide mapping.
  • Peptide mapping can be performed, for example, by protease (eg, trypsin, chymotrypsin) treatment and mass spectrometry. As the protease, endoprotease is preferable.
  • endoproteases include trypsin, chymotrypsin, Glu-C, Lys-N, Lys-C, and Asp-N.
  • Confirmation of the number of functional group possessed by an antibody having a functional group can be performed by, for example, electrophoresis, chromatography, or mass spectrometry, preferably by mass spectrometry.
  • An antibody having a functional group can be appropriately purified by any method such as chromatography (eg, the above-described chromatography and affinity chromatography).
  • examples of the salt include a salt with an inorganic acid, a salt with an organic acid, a salt with an inorganic base, a salt with an organic base, and a salt with an amino acid.
  • examples of the salt with an inorganic acid include salts with hydrogen chloride, hydrogen bromide, phosphoric acid, sulfuric acid, and nitric acid.
  • Examples of salts with organic acids include formic acid, acetic acid, trifluoroacetic acid, lactic acid, tartaric acid, fumaric acid, oxalic acid, maleic acid, citric acid, succinic acid, malic acid, benzenesulfonic acid, and p-toluenesulfonic acid. Of the salt.
  • Examples of the salt with an inorganic base include alkali metals (eg, sodium, potassium), alkaline earth metals (eg, calcium, magnesium), and other metals such as zinc and aluminum, and salts with ammonium.
  • Examples of the salt with an organic base include salts with trimethylamine, triethylamine, propylenediamine, ethylenediamine, pyridine, ethanolamine, monoalkylethanolamine, dialkylethanolamine, diethanolamine, and triethanolamine.
  • Examples of salts with amino acids include salts with basic amino acids (eg, arginine, histidine, lysine, ornithine) and acidic amino acids (eg, aspartic acid, glutamic acid).
  • the salt is preferably a salt with an inorganic acid (eg, hydrogen chloride) or an organic acid (eg, trifluoroacetic acid).
  • the affinity substance for an antibody and the compound of the present invention having a bioorthogonal functional group or a salt thereof are useful for, for example, regioselective modification of an antibody with a bioorthogonal functional group. Accordingly, the present invention provides a reagent for regioselective modification of an antibody with a bioorthogonal functional group, comprising an affinity substance for the antibody and a compound having a bioorthogonal functional group or a salt thereof.
  • the compound of the present invention having an affinity substance for an antibody and a functional substance or a salt thereof is useful for, for example, regioselective modification of an antibody with a functional substance.
  • the present invention provides a reagent for regioselective modification of an antibody with a functional substance, comprising an affinity substance for the antibody and a compound having a functional substance or a salt thereof.
  • affinity substance for the antibody and the compound having a functional substance or a salt thereof for example, definitions, examples and preferred examples
  • the regioselective modification reagent of the antibody with the functional substance are the same as those described above. .
  • the regioselective modification reagent of the present invention may be provided in the form of a composition further containing other components.
  • other components include solutions and stabilizers (eg, antioxidants and preservatives).
  • an aqueous solution is preferable.
  • the aqueous solution include water (eg, distilled water, sterilized distilled water, purified water, physiological saline), buffer solution (eg, phosphoric acid aqueous solution, Tris-hydrochloric acid buffer solution, carbonate-bicarbonate buffer solution, boric acid aqueous solution). Glycine-sodium hydroxide buffer, citrate buffer), and the buffer is preferred.
  • the pH of the solution is, for example, 5.0 to 9.0, preferably 5.5 to 8.5.
  • the regioselective modifying reagent of the present invention can be provided in liquid or powder form (eg, lyophilized powder).
  • An antibody or a salt thereof having a bioorthogonal functional group regioselectively is useful as an intermediate in the preparation of an antibody or a salt thereof regioselectively having a functional substance, for example.
  • the antibody having a functional substance regioselectively or a salt thereof is particularly useful as a medicine or a reagent (eg, diagnostic agent, research reagent), for example, as a medicine.
  • a medicine or a reagent eg, diagnostic agent, research reagent
  • ADC antibody-drug conjugate
  • the antibody of the present invention or a salt thereof having a functional substance regioselectively can solve such a problem of regulation. Therefore, the antibody of the present invention or a salt thereof having a functional substance regioselectively may be provided in the form of a pharmaceutical composition.
  • a pharmaceutical composition may contain a pharmaceutically acceptable carrier in addition to the antibody or a salt thereof having a functional substance regioselectively.
  • pharmaceutically acceptable carriers include sucrose, starch, mannitol, sorbit, lactose, glucose, cellulose, talc, calcium phosphate, calcium carbonate, and other excipients, cellulose, methylcellulose, hydroxypropylcellulose, polypropylpyrrolidone.
  • Formulations suitable for oral administration include a solution in which an effective amount of a ligand is dissolved in a diluent such as water, saline, orange juice, a capsule containing an effective amount of the ligand as a solid or granule, a sachet or Examples thereof include tablets, suspensions in which an effective amount of an active ingredient is suspended in a suitable dispersion medium, and emulsions in which a solution in which an effective amount of an active ingredient is dissolved is dispersed in an appropriate dispersion medium and emulsified.
  • a diluent such as water, saline, orange juice
  • a capsule containing an effective amount of the ligand as a solid or granule a sachet or Examples thereof include tablets, suspensions in which an effective amount of an active ingredient is suspended in a suitable dispersion medium, and emulsions in which a solution in which an effective amount of an active ingredient is dissolved is dispersed in an appropriate dispersion medium
  • the pharmaceutical composition is suitable for parenteral administration (eg, intravenous injection, subcutaneous injection, intramuscular injection, local injection, intraperitoneal administration).
  • Such pharmaceutical compositions suitable for parenteral administration include aqueous and non-aqueous isotonic sterile injection solutions, which include antioxidants, buffers, antibacterial agents, isotonic agents. Etc. may be included.
  • Aqueous and non-aqueous sterile suspensions are also included, which may contain suspending agents, solubilizers, thickeners, stabilizers, preservatives and the like.
  • the dosage of the pharmaceutical composition varies depending on the type and activity of the active ingredient, the severity of the disease, the animal species to be administered, the drug acceptability of the administration target, the body weight, the age, etc., but can be appropriately set.
  • Example 1 Synthesis of IgG1 Fc affinity substance
  • a linear peptide serving as a precursor is obtained by the method described above, and then shown as follows. It was synthesized by the method. Tens of mg of the obtained precursor was dissolved in 1 mL of DMSO, 100 ⁇ L of NH 3 / MeOH and 10 ⁇ L of H 2 O 2 were added, and the mixture was stirred overnight. After confirming the completion of the reaction by LCMS, the product was purified by preparative HPLC to obtain the target affinity peptide.
  • a linear peptide as a precursor is obtained by the method shown above, and then the following method is used. And synthesized. Dozens of mg of the obtained precursor was dissolved in 20 mL of 0.1 M Tris-HCl Buffer (pH 8.00), glutathione oxidation type 5.0 eq was added, and the mixture was stirred overnight. After confirming the completion of the reaction by LCMS, the product was purified by preparative HPLC to obtain the target affinity peptide.
  • N, N′-dicyclohexylcarbodiimide 113 mg, 0.546 mmol
  • 1-hydroxybenzotriazole monohydrate 78.1 mg, 0.546 mmol
  • 4-pentynoic acid 53.6 mg, 0.546 mmol
  • 12-amino-dodecanol (0.100 g, 0.497 mmol) was added and stirred at room temperature for 4 hours.
  • the reaction mixture was diluted with ethyl acetate, washed with water and brine, sodium sulfate was added, and the mixture was allowed to stand for 5 min.
  • reaction solution was washed with water and ethyl acetate, and the aqueous phase was recovered.
  • a 6M hydrochloric acid aqueous solution was added to the aqueous phase to adjust the pH of the system to 3.0, followed by liquid separation extraction with ethyl acetate, and then the organic phase was washed with brine and then anhydrous magnesium sulfate was added for 5 minutes. I put it. Magnesium sulfate was removed by filtration and concentrated under reduced pressure to obtain a crude product, which was then purified by silica gel column chromatography.
  • reaction solution was washed with water and ethyl acetate, and the aqueous phase was recovered.
  • a 6M hydrochloric acid aqueous solution was added to the aqueous phase to adjust the pH of the system to 3.0, followed by liquid separation extraction with ethyl acetate, and then the organic phase was washed with brine and then anhydrous magnesium sulfate was added for 5 minutes. I put it. Magnesium sulfate was removed by filtration and concentrated under reduced pressure to obtain a crude product, which was then purified by silica gel column chromatography.
  • Example 4 Regioselective maleimide introduction and analysis into anti-HER2 IgG antibody trastuzumab
  • 4-1) Synthesis of peptide reagent having thiol
  • Compound 25 is not an affinity peptide, but a model peptide compound instead of a drug to be introduced via a maleimide group to an antibody having a maleimide which is a bioorthogonal functional group regioselectively.
  • the solvent of the reaction solution was replaced with 20 mM acetate buffer (pH 4.5) by ultrafiltration (Amicon Ultra, 10K MWCO).
  • the affinity peptide reagent was removed by repeating the same operation three times to obtain a modified IgG antibody trastuzumab-maleimide.
  • IgG antibody trastuzumab-maleimide modified product was obtained by concentration by ultrafiltration (Amicon Ultra, 10k MWCO).
  • Example 5 Synthesis of antibody modifying reagent loaded with azide
  • 5-1 Synthesis of an antibody modifying reagent (Comparative Example compound) having a hetero atom at the ⁇ -position of the antibody modifying group (electrophilic group)
  • the antibody affinity peptide (Compound 2) synthesized in Example 1 was dissolved in dimethyl sulfoxide, a solution of N-hydroxymaleimide (20 molar equivalent) in dimethyl sulfoxide was added, and the mixture was stirred for 1 hour. After confirming disappearance of the raw material by LC-MS, 11-azido-3,6,9-trioxaundecanoic acid (40 molar equivalent), 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride (32 mole) Equivalent) and 1-hydroxybenzotriazole (32 molar equivalents) were added and stirred for 2 hours. After completion of the reaction was confirmed by LC-MS, it was purified by preparative HPLC. The fraction containing the desired product was confirmed by ESI-MS and then lyophilized to obtain the product azide-PEG-affinity peptide reagent (Compound 26).
  • the antibody affinity peptide (compound 3) synthesized in Example 1 was dissolved in dimethyl sulfoxide, a dimethyl sulfoxide solution of N-hydroxymaleimide (20 molar equivalents) was added, and the mixture was stirred for 1 hour. After confirming the disappearance of the raw materials by LC-MS, 6-azido-hexanoic acid (40 molar equivalent), 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride (32 molar equivalent), 1-hydroxybenzotriazole (32 molar equivalents) was added and stirred for 2 hours. After completion of the reaction was confirmed by LC-MS, it was purified by preparative HPLC. The fraction containing the desired product was confirmed by ESI-MS and then lyophilized to obtain the product azido-alkyl-affinity peptide reagent (Compound 27).
  • Compound 60 is a comparative compound having a hetero atom at the ⁇ -position of the antibody modifying group (electrophilic group).
  • the antibody affinity peptide (compound 3) synthesized in Example 1 was dissolved in dimethyl sulfoxide, a dimethyl sulfoxide solution of N-hydroxymaleimide (20 molar equivalents) was added, and the mixture was stirred for 1 hour. After confirming the disappearance of the raw materials by LC-MS, 4-azidobenzoic acid (40 molar equivalent), 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride (32 molar equivalent), 1-hydroxybenzotriazole ( 32 molar equivalents) was added and stirred for 2 hours. After completion of the reaction was confirmed by LC-MS, it was purified by preparative HPLC. The fraction containing the desired product was confirmed by ESI-MS and then lyophilized to obtain the product azido-phenyl-affinity peptide reagent (Compound 28).
  • Example 3 The antibody affinity peptide synthesized in Example 1 (Compound 3) was dissolved in dimethyl sulfoxide, 2-iminothiolane hydrochloride (10 molar equivalents) and diisopropylethylamine (15 molar equivalents) were added, and the mixture was stirred for 1 hour. After confirming the disappearance of the raw material by LC-MS, a dimethyl sulfoxide solution of N-hydroxymaleimide (20 molar equivalent) was added and stirred for 1 hour.
  • the antibody modification reagent synthesized using the antibody affinity peptide (Compound 32) synthesized in Example 1 is as follows.
  • the antibody modifying reagent synthesized using the antibody affinity peptide (Compound 33) synthesized in Example 1 is as follows.
  • the antibody modifying reagent synthesized using the antibody affinity peptide (Compound 34) synthesized in Example 1 is as follows.
  • the antibody modification reagent synthesized using the antibody affinity peptide (Compound 35) synthesized in Example 1 is as follows.
  • the antibody modification reagent synthesized using the antibody affinity peptide (Compound 36) synthesized in Example 1 is as follows.
  • the antibody modifying reagent synthesized using the antibody affinity peptide (Compound 37) synthesized in Example 1 is as follows.
  • the antibody modification reagent synthesized using the antibody affinity peptide (Compound 38) synthesized in Example 1 is as follows.
  • the antibody modification reagent synthesized using the antibody affinity peptide (Compound 39) synthesized in Example 1 is as follows.
  • the antibody modifying reagent synthesized using the antibody affinity peptide (Compound 40) synthesized in Example 1 is as follows.
  • the antibody modifying reagent synthesized using the antibody affinity peptide (Compound 41) synthesized in Example 1 is as follows.
  • the antibody modification reagent synthesized using the antibody affinity peptide (Compound 42) synthesized in Example 1 is as follows.
  • the antibody modifying reagent synthesized using the antibody affinity peptide (Compound 43) synthesized in Example 1 is as follows.
  • the antibody modification reagent synthesized using the antibody affinity peptide (Compound 44) synthesized in Example 1 is as follows.
  • the antibody modifying reagent synthesized using the antibody affinity peptide (Compound 45) synthesized in Example 1 is as follows.
  • the antibody modification reagent synthesized using the antibody affinity peptide (Compound 46) synthesized in Example 1 is as follows.
  • the antibody modification reagent synthesized using the antibody affinity peptide (Compound 47) synthesized in Example 1 is as follows.
  • the antibody modification reagent synthesized using the antibody affinity peptide (Compound 48) synthesized in Example 1 is as follows.
  • the antibody modifying reagent synthesized using the antibody affinity peptide synthesized in Example 1 (Compound 49) is as follows.
  • the antibody modifying reagent synthesized using the antibody affinity peptide (Compound 50) synthesized in Example 1 is as follows.
  • the antibody modification reagent synthesized using the antibody affinity peptide (Compound 51) synthesized in Example 1 is as follows.
  • the antibody modifying reagent synthesized using the antibody affinity peptide (Compound 52) synthesized in Example 1 is as follows.
  • the antibody modifying reagent synthesized using the antibody affinity peptide (Compound 53) synthesized in Example 1 is as follows.
  • Example 6 Position-specific modification of IgG1 Fc with IgG1 Fc affinity peptide reagent and analysis by ESI-TOFMS] (6-1) Antibody modification reaction with an antibody modifying reagent having a carbon atom at the ⁇ -position of an antibody modifying group (electrophilic group) (6-1-1) Affinity peptide reagent (Compound 27, Compound 59) was used. Antibody modification reaction (azide modified antibodies 1, 2) The affinity peptide reagent (compound 27) loaded with the azide synthesized in Example 5 was dissolved in N, N′-dimethylformamide to give 0.22 mM.
  • an antibody modification reaction was carried out using an affinity peptide reagent (compound 59) loaded with azide to obtain an IgG antibody trastuzumab-azide modified product (azide modified antibody 2).
  • the reaction was stopped by adding 50 ⁇ L of a 10 mg / mL Lys aqueous solution to the reaction solution and stirring for 30 minutes. Purify the reaction mixture with Protein A (Aspire Protein A Tips, Thermo), replace the eluate with 9.57 mM PBS buffer (pH 7.0), and concentrate by ultrafiltration (Amicon Ultra, 10K MWCO). Thus, an IgG antibody trastuzumab-azide modified product (azido modified antibody 3) was obtained.
  • an antibody modification reaction was carried out using an affinity peptide reagent (compound 61) loaded with azide in the same manner to obtain an IgG antibody trastuzumab-azide modified product (azide modified antibody 4).
  • the reaction was stopped by adding 50 ⁇ L of a 10 mg / mL Lys aqueous solution to the reaction solution and stirring for 30 minutes. Purify the reaction mixture with Protein A (Aspire Protein A Tips, Thermo), replace the eluate with 9.57 mM PBS buffer (pH 7.0), and concentrate by ultrafiltration (Amicon Ultra, 10K MWCO). To obtain an IgG antibody trastuzumab-azide modified product (azide modified antibody 5).
  • an antibody modification reaction was performed using an affinity peptide reagent (compound 62) loaded with azide in the same manner to obtain an IgG antibody trastuzumab-azide modified product (azide modified antibody 6).
  • an antibody modification reaction was performed using an affinity peptide reagent (compound 63) loaded with azide to obtain an IgG antibody trastuzumab-azide modified product (azide modified antibody 7).
  • an antibody modification reaction was performed using an affinity peptide reagent (compound 64) loaded with azide to obtain an IgG antibody trastuzumab-azide modified product (azide modified antibody 8).
  • an antibody modification reaction was carried out using an affinity peptide reagent (compound 65) loaded with azide in the same manner to obtain an IgG antibody trastuzumab-azide modified product (azide modified antibody 9).
  • an antibody modification reaction was carried out using an affinity peptide reagent (compound 66) loaded with azide to obtain an IgG antibody trastuzumab-azide modified product (azide modified antibody 10).
  • an antibody modification reaction was carried out using an affinity peptide reagent (compound 67) loaded with azide to obtain an IgG antibody trastuzumab-azide modified product (azide modified antibody 11).
  • an antibody modification reaction was carried out using an affinity peptide reagent (compound 68) loaded with azide to obtain an IgG antibody trastuzumab-azide modified product (azide modified antibody 12).
  • an antibody modification reaction was carried out using an affinity peptide reagent (compound 69) loaded with azide to obtain an IgG antibody trastuzumab-azide modified product (azide modified antibody 13).
  • an antibody modification reaction was carried out using an affinity peptide reagent (compound 70) loaded with azide to obtain an IgG antibody trastuzumab-azide modified product (azide modified antibody 14).
  • an antibody modification reaction was performed using an affinity peptide reagent (compound 71) loaded with azide to obtain an IgG antibody trastuzumab-azide modified product (azide modified antibody 15).
  • an antibody modification reaction was carried out using an affinity peptide reagent (compound 72) loaded with azide in the same manner to obtain an IgG antibody trastuzumab-azide modified product (azide modified antibody 16).
  • an antibody modification reaction was carried out using an affinity peptide reagent (compound 73) loaded with azide in the same manner to obtain an IgG antibody trastuzumab-azide modified product (azide modified antibody 17).
  • an antibody modification reaction was carried out using an affinity peptide reagent (compound 74) loaded with azide to obtain an IgG antibody trastuzumab-azide modified product (azide modified antibody 18).
  • an antibody modification reaction was carried out using an affinity peptide reagent (compound 75) loaded with azide to obtain an IgG antibody trastuzumab-azide modified product (azide modified antibody 19).
  • an antibody modification reaction was carried out using an affinity peptide reagent (compound 76) loaded with azide in the same manner to obtain an IgG antibody trastuzumab-azide modified product (azide modified antibody 20).
  • an antibody modification reaction was carried out using an affinity peptide reagent (compound 77) loaded with azide to obtain an IgG antibody trastuzumab-azide modified product (azide modified antibody 21).
  • an antibody modification reaction was carried out using an affinity peptide reagent (compound 78) loaded with azide to obtain an IgG antibody trastuzumab-azide modified product (azide modified antibody 22).
  • an antibody modification reaction was carried out using an affinity peptide reagent (compound 79) loaded with azide to obtain an IgG antibody trastuzumab-azide modified product (azide modified antibody 23).
  • an antibody modification reaction was carried out using an affinity peptide reagent (compound 80) loaded with azide in the same manner to obtain an IgG antibody trastuzumab-azide modified product (azide modified antibody 24).
  • an antibody modification reaction was carried out using an affinity peptide reagent (compound F81) loaded with azide by the same method to obtain an IgG antibody trastuzumab-azide modified product (azide modified antibody 25).
  • an antibody modification reaction was carried out using an affinity peptide reagent (compound 82) loaded with azide in the same manner to obtain an IgG antibody trastuzumab-azide modified product (azide modified antibody 26).
  • an antibody modification reaction was carried out using an affinity peptide reagent (compound 83) loaded with azide to obtain an IgG antibody trastuzumab-azide modified product (azide modified antibody 27).
  • the reaction was stopped by adding 50 ⁇ L of a 10 mg / mL Lys aqueous solution to the reaction solution and stirring for 30 minutes. Purify the reaction mixture with Protein A (Aspire Protein A Tips, Thermo), replace the eluate with 9.57 mM PBS buffer (pH 7.0), and concentrate by ultrafiltration (Amicon Ultra, 10K MWCO). Thus, an IgG antibody adalimumab-azide modified product was obtained (Azide modified antibody 28).
  • an antibody modification reaction was carried out using anti-RANKL IgG antibody denosumab (Daiichi Sankyo) to obtain an IgG antibody denosumabumab-azide modified product (azide modified antibody 29).
  • an antibody modification reaction was performed using anti-IL-4 / 13 IgG antibody dupilumab (Sanofi) to obtain an IgG antibody dupilumab-azide modified product (azide modified antibody 30).
  • an antibody modification reaction was performed using anti-CD20 IgG antibody rituximab (Roche) to obtain an IgG antibody rituximab-azide modified product (azide modified antibody 31).
  • ESI-TOF MS analysis was also performed on azide-modified antibody 2.
  • trastuzumab used as a control a heavy chain peak was observed at 50602, 50764, and a light chain peak was observed at 23443.
  • light chain peaks were observed at 50742, 50904 in which alkyl azide was introduced into the heavy chain, and 23443, which was the same as the raw material.
  • ESI-TOF MS analysis was also performed on azide-modified antibody 4.
  • trastuzumab used as a control a heavy chain peak was observed at 50597 and 50758, and a light chain peak was observed at 23441.
  • a light chain peak was observed at 50716, 50877 in which amine benzoic acid was introduced into the heavy chain, and 23441, the same as the raw material.
  • ESI-TOF MS analysis was also performed on the azide-modified antibody 6.
  • trastuzumab used as a control a heavy chain peak was observed at 50594 and 5076, and a light chain peak was observed at 23439.
  • a light chain peak was observed at 50714, 50875 in which amine benzoic acid was introduced into the heavy chain, and 23439, which was the same as the raw material.
  • the ESI-TOFMS analysis results are shown in FIG.
  • ESI-TOF MS analysis was also performed on azide-modified antibody 7.
  • trastuzumab used as a control a heavy chain peak was observed at 50594 and 5076, and a light chain peak was observed at 23439.
  • a light chain peak was observed at 50713, 50875 in which amine benzoic acid was introduced into the heavy chain, and 23439, which was the same as the raw material.
  • ESI-TOF MS analysis was also performed on azide-modified antibody 8.
  • trastuzumab used as a control a heavy chain peak was observed at 50602, 50764, and a light chain peak was observed at 23443.
  • a light chain peak was observed at 50721,50883 in which amine benzoic acid was introduced into the heavy chain, and 23442, which was the same as the raw material.
  • the ESI-TOFMS analysis results are shown in FIG.
  • ESI-TOF MS analysis was also performed on azide-modified antibody 9.
  • trastuzumab used as a control a heavy chain peak was observed at 50595 and 50757, and a light chain peak was observed at 23440.
  • reaction product a light chain peak was observed at 50714, 50875 in which amine benzoic acid was introduced into the heavy chain, and 23440, which was the same as the raw material.
  • ESI-TOF MS analysis was also performed on the azido modified antibody 10.
  • trastuzumab used as a control a heavy chain peak was observed at 50602, 50764, and a light chain peak was observed at 23443.
  • light chain peaks were observed at 50721, 50883 in which amine benzoic acid was introduced into the heavy chain, and 23443, which was the same as the raw material.
  • the ESI-TOFMS analysis results are shown in FIG.
  • ESI-TOF MS analysis was also performed on the azide-modified antibody 11.
  • a heavy chain peak was observed at 50595 and 50757, and a light chain peak was observed at 23440.
  • light chain peaks were observed at 50713, 50874 in which amine benzoic acid was introduced into the heavy chain, and 23440, which was the same as the raw material.
  • ESI-TOF MS analysis was also performed on the azido modified antibody 12.
  • a heavy chain peak was observed at 50595 and 50757, and a light chain peak was observed at 23440.
  • a light chain peak was observed at 50714, 50876 in which amine benzoic acid was introduced into the heavy chain, and 23440, which was the same as the raw material.
  • ESI-TOF MS analysis was also performed on the azide-modified antibody 13.
  • a heavy chain peak was observed at 50594, 50756, and a light chain peak was observed at 23440.
  • a light chain peak was observed at 50714, 50876 in which amine benzoic acid was introduced into the heavy chain, and 23440, which was the same as the raw material.
  • ESI-TOF MS analysis was also performed on the azide-modified antibody 14.
  • a heavy chain peak was observed at 50594, 50756, and a light chain peak was observed at 23440.
  • a light chain peak was observed at 50714, 50876 in which amine benzoic acid was introduced into the heavy chain, and 23440, which was the same as the raw material.
  • ESI-TOF MS analysis was also performed on the azide-modified antibody 15.
  • a heavy chain peak was observed at 50594, 50756, and a light chain peak was observed at 23440.
  • a light chain peak was observed at 50714, 50876 in which amine benzoic acid was introduced into the heavy chain, and 23440, which was the same as the raw material.
  • the ESI-TOF MS analysis was also performed on the azido modified antibody 16 by the same method.
  • a heavy chain peak was observed at 50594, 50756, and a light chain peak was observed at 23440.
  • a light chain peak was observed at 50714, 50875 in which amine benzoic acid was introduced into the heavy chain, and 23440, which was the same as the raw material.
  • ESI-TOF MS analysis was also performed on the azide-modified antibody 17.
  • a heavy chain peak was observed at 50595 and 50757, and a light chain peak was observed at 23440.
  • a light chain peak was observed at 50714, 50876 in which amine benzoic acid was introduced into the heavy chain, and 23440, which was the same as the raw material.
  • ESI-TOF MS analysis was also performed on the azido modified antibody 18.
  • a heavy chain peak was observed at 50594, 50756, and a light chain peak was observed at 23439.
  • a light chain peak was observed at 50714, 50876 in which amine benzoic acid was introduced into the heavy chain, and 23440, which was the same as the raw material.
  • ESI-TOF MS analysis was also performed on the azide modified antibody 19.
  • a heavy chain peak was observed at 50595 and 50757, and a light chain peak was observed at 23440.
  • a light chain peak was observed at 50714, 50875 in which amine benzoic acid was introduced into the heavy chain, and 23440, which was the same as the raw material.
  • ESI-TOF MS analysis was also performed on the azide modified antibody 20.
  • a heavy chain peak was observed at 50595 and 50757, and a light chain peak was observed at 23440.
  • a light chain peak was observed at 50714, 50875 in which amine benzoic acid was introduced into the heavy chain, and 23440, which was the same as the raw material.
  • ESI-TOF MS analysis was also performed on the azide-modified antibody 21.
  • a heavy chain peak was observed at 50595 and 50757, and a light chain peak was observed at 23440.
  • a light chain peak was observed at 50714, 50876 in which amine benzoic acid was introduced into the heavy chain, and 23440, which was the same as the raw material.
  • the ESI-TOF MS analysis was also performed on the azido modified antibody 22 by the same method.
  • a heavy chain peak was observed at 50595 and 50757, and a light chain peak was observed at 23440.
  • a light chain peak was observed at 50714, 50875 in which amine benzoic acid was introduced into the heavy chain, and 23440, which was the same as the raw material.
  • ESI-TOF MS analysis was also performed on the azide-modified antibody 23.
  • a heavy chain peak was observed at 50597 and 50759, and a light chain peak was observed at 23440.
  • a light chain peak was observed at 50714, 50876 in which amine benzoic acid was introduced into the heavy chain, and 23440, which was the same as the raw material.
  • ESI-TOF MS analysis was also performed on the azido modified antibody 24.
  • a heavy chain peak was observed at 50597 and 50759, and a light chain peak was observed at 23440.
  • a light chain peak was observed at 50714, 50876 in which amine benzoic acid was introduced into the heavy chain, and 23440, which was the same as the raw material.
  • ESI-TOF MS analysis was also performed on the azide-modified antibody 25.
  • a heavy chain peak was observed at 50597 and 50759, and a light chain peak was observed at 23440.
  • a light chain peak was observed at 50714, 50876 in which amine benzoic acid was introduced into the heavy chain, and 23440, which was the same as the raw material.
  • ESI-TOF MS analysis was also performed for the azide modified antibody 26.
  • a heavy chain peak was observed at 50597 and 50759, and a light chain peak was observed at 23440.
  • a light chain peak was observed at 50714, 50876 in which amine benzoic acid was introduced into the heavy chain, and 23440, which was the same as the raw material.
  • ESI-TOF MS analysis was also performed on the azide-modified antibody 27.
  • trastuzumab used as a control a heavy chain peak was observed at 50602, 50764, and a light chain peak was observed at 23443.
  • light chain peaks were observed at 50721, 50883 in which amine benzoic acid was introduced into the heavy chain, and 23440, which was the same as the raw material.
  • ESI-TOF MS analysis was also performed on azide modified antibody 29 (denosumab-azide modified antibody).
  • a heavy chain peak was observed at 50208 and 50371, and a light chain peak was observed at 23487.
  • a light chain peak was observed at 50327, 50490 in which amine benzoic acid was introduced into the heavy chain, and at 23487, the same as the raw material.
  • FIG. 11 shows the ESI-TOFMS analysis results.
  • ESI-TOF MS analysis was also performed on the azide modified antibody 30 (dupilumab-azide modified antibody).
  • the raw material dupilumab used as a control had a heavy chain peak at 50889 and a light chain peak at 24022.
  • a light chain peak was observed at 51,099 in which amine benzoic acid was introduced into the heavy chain, and 24022, the same as the raw material.
  • the ESI-TOFMS analysis results are shown in FIG.
  • ESI-TOF MS analysis was also performed on azido modified antibody 31 (rituximab-azide modified antibody).
  • rituximab-azide modified antibody azido modified antibody 31
  • a heavy chain peak was observed at 50515, 50678, and a light chain peak was observed at 23040.
  • a light chain peak was observed at 50635,50797 in which amine benzoic acid was introduced into the heavy chain, and 23040, which was the same as the raw material (FIG. 13).
  • the reaction was stopped by adding 50 ⁇ L of a 10 mg / mL Lys aqueous solution to the reaction solution and stirring for 30 minutes. After solvent substitution into PBS solution by ultrafiltration (Amicon Ultra, 10K MWCO), 2.0 ⁇ L of 7 mM tris (2-carboxyethyl) phosphine hydrochloride solution (100 equivalents to antibody) was added, Left at room temperature for 20 minutes.
  • mass was measured by ESI-TOFMS, a heavy chain peak was observed at 50595 and 50757, and a light chain peak was observed at 23440 in the starting material trastuzumab used as a control.
  • an antibody modification reaction was performed using a peptide reagent (compound 60) having a hetero base paper at the ⁇ -position.
  • a heavy chain peak was observed at 50602, 50764 and a light chain peak was observed at 23443 of the starting material trastuzumab used as a control.
  • a heavy chain peak was observed at 50602 and 50764, and a light chain peak was observed at 23443, and it was confirmed that the antibody modification reaction with compound 60 having a hetero atom at the ⁇ -position did not proceed.
  • Example 7 Synthesis of antibody modifying reagent loaded with thiol protector
  • (7-1) Synthesis of an antibody modifying reagent (compound 84) by linking a protected thiol reagent and an affinity peptide
  • the hydroxymaleimide-affinity peptide (compound 57) synthesized in (3-5-3) was used as a dimethyl sulfoxide solvent.
  • Example 8 Position-specific modification of IgG1 Fc with IgG1 Fc affinity peptide reagent loaded with thiol protector and analysis by ESI-TOFMS] (8-1) Antibody Modification Reaction with IgG1 Fc Affinity Peptide Reagent Mounted with Thiol Protector (8-1-1) Antibody Modification Reaction Using Affinity Peptide Reagent (Compound 84) The protected thiol synthesized in Example 7 The loaded affinity peptide reagent (Compound 84) was dissolved in N, N′-dimethylformamide to 2.0 mM.
  • IgG antibody trastuzumab-benzoyl protected thiol modified product IgG antibody trastuzumab-benzoyl protected thiol modified product obtained in (8-2-2) was converted to 20 mM ethylenediamine, 0.5 M hydroxylamine aqueous solution. Replaced with (pH 6 preparation) and allowed to stand at room temperature for 1 hour. The reaction solution was concentrated by ultrafiltration (Amicon Ultra, 10k MWCO) to obtain each IgG antibody trastuzumab-thiol modified product.
  • Example 9 Regioselective modification of different target regions of IgG1 Fc with IgG1 Fc affinity peptide reagent and analysis by ESI-TOFMS] (9-1) Regioselective modification of different target regions using two types of affinity peptide reagents stepwise analysis by ESI-TOFMS (9-1-1) Two types of affinity peptide reagents (compound 66, Multiple-site position-specific antibody modification reaction using compound 64) stepwise Affinity peptide reagent (compound 66) loaded with azide synthesized in Example 5 was dissolved in N, N′-dimethylformamide to give 2.04 mM. did.
  • a 20 mM equivalent of 2.0 mM N, N′-dimethylformamide solution of the affinity peptide reagent (compound 64) loaded with the azide synthesized in Example 5 was added to the antibody and stirred at 37 ° C. for 16 hours. .
  • the reaction was stopped by adding 50 ⁇ L of a 10 mg / mL Lys aqueous solution to the reaction solution and stirring for 30 minutes.
  • IgG antibody trastuzumab-azide modified product was obtained by concentration by ultrafiltration (Amicon Ultra, 10k MWCO).
  • Peptide reagent residues were removed by ultrafiltration (Amicon Ultra, 10k MWCO), and the resulting concentrate was diluted with 200 ⁇ L of 50 mM sodium acetate buffer (pH 4.7). 20 mol equivalent of 2.04 mM N, N′-dimethylformamide solution of the affinity peptide reagent (compound 66) loaded with azide synthesized in Example 5 was added to the antibody and stirred at 37 ° C. for 16 hours. . The reaction was stopped by adding 50 ⁇ L of a 10 mg / mL Lys aqueous solution to the reaction solution and stirring for 30 minutes. IgG antibody trastuzumab-azide modified product was obtained by concentration by ultrafiltration (Amicon Ultra, 10k MWCO).
  • Peptide reagent residue was removed by ultrafiltration (Amicon Ultra, 10k MWCO), and the resulting concentrate was diluted with 200 ⁇ L of 50 mM HEPES buffer (pH 7.2).
  • a 20 mM equivalent of 2.0 mM N, N′-dimethylformamide solution of the affinity peptide reagent (compound 64) loaded with the azide synthesized in Example 5 was added to the antibody and stirred at 37 ° C. for 16 hours. .
  • the reaction was stopped by adding 50 ⁇ L of a 10 mg / mL Lys aqueous solution to the reaction solution and stirring for 30 minutes.
  • IgG antibody trastuzumab-azide modified product was obtained by concentration by ultrafiltration (Amicon Ultra, 10k MWCO).
  • Example 10 Conjugation of regiospecific azide transductant of trastuzumab with any compound and ESI-TOFMS analysis of the product] (10-1) Conjugation of a position-specific azide-introduced trastuzumab with Cy3-cycloalkyne (10-1-1) Conjugation of a position-specific azide-introduced trastuzumab with Cy3-DBCO and ESI-TOFMS analysis The azidobenzoic acid transductant of trastuzumab synthesized in (6-1-2) of Example 6 was dissolved in 20 mM PBS buffer to make 0.3 mM, and then dibenzocycline-Cy3 (0.94 mM, dimethyl sulfoxide from Sigma Aldrich).
  • the azide-introduced trastuzumab synthesized in (6-1-1) of Example 6 as a raw material was observed to have a heavy chain peak at 50714 and 50876 and a light chain peak at 23440
  • peaks were observed at 51722 and 51585 where Cy3 was introduced into the heavy chain, and a light chain peak was observed at 23440, the same as the starting material (FIG. 20).
  • the azide benzoic acid introducer is reduced to an amine benzoic acid introducer by the reduction reaction of 7 mM tris (2-carboxyethyl) phosphine salt as a pretreatment for measurement.
  • the resin was removed by filtration, diethyl ether was added for precipitation, and diethyl ether was removed by decantation to obtain the peptide as crude crystals. This was purified by preparative HPLC to obtain the following compound 30 as a product.
  • the azide-introduced trastuzumab synthesized in (6-1-1) of Example 6 as a raw material was observed to have a heavy chain peak at 50714 and 50876 and a light chain peak at 23440,
  • peaks were observed at 51941 and 52102 in which the peptide was introduced into the heavy chain, and a light chain peak was observed at 23440, which was the same as the raw material (FIG. 22).
  • the azide benzoic acid introducer is reduced to an amine benzoic acid introducer by the reduction reaction of 7 mM tris (2-carboxyethyl) phosphine salt as a pretreatment for measurement.
  • trastuzumab When mass was measured by ESI-TOFMS, trastuzumab was observed to have a peak at 14822, trastuzumab synthesized in (8-3-3) was observed to have a peak at 148243, and the reaction product was m-dPEG ( A peak was observed at 150880 in which two (registered trademark) 24 -MAL were introduced (FIG. 23).
  • Example 11 Confirmation of position-specific modification of biologically orthogonal functional group-introduced body of trastuzumab] (11-1) Glycosylation of a bioorthogonal functional group-introduced body of trastuzumab (11-1-1) Glycosylation of azidobenzoic acid-introduced body of trastuzumab (1)
  • the azidobenzoic acid transductant of trastuzumab synthesized in Example 6- (6-1-2) (azide-modified antibody 3) was prepared using PNGase F (NEW ENGLAND BioLabs, Catalog No. P0704) using the manufacturer's protocol and patent (WO2017 / In accordance with the method of 19817, sugar chain cleavage and post-treatment were performed.
  • the alkyl azide introducer is partially reduced to an alkylamine introducer, and the azidobenzoic acid introducer is reduced to an amine benzoic acid introducer.
  • the acetylthiol introducer undergoes carbamidomethylation.
  • Example 12 Synthesis of four antibody drug conjugates (ADC), trastuzumab-DM1 and trastuzumab-MMAE, and rituximab-DM1 and rituximab-MMAE (12-1) Conjugation of Trastuzumab Position-Specific Azide Introducer with DBCO-DM1 (12-1-1) Synthesis of Regioselective Trastuzumab-DM1 Conjugate In Example 6- (6-1-2) After 0.9 mg of the azidobenzoic acid transductant (azide antibody 3) of the synthesized trastuzumab was dissolved in 473 ⁇ L of 100 mM PBS, 10 mM EDTA buffer, 51 ⁇ L of N, N′-dimethylacetamide and DBCO-DM1 (manufactured by Abzena, 2 ⁇ L of compound 87) dissolved in N, N′-dimethylacetamide and adjusted to 4 mM was added and stirred at 25 ° C.
  • peaks were observed at 51748 and 519097 where DM1 was introduced into the heavy chain, and a light chain peak was observed at 23440, which was the same as the raw material (FIG. 65).
  • the azide benzoic acid introducer is reduced to an amine benzoic acid introducer by the reduction reaction of 7 mM tris (2-carboxyethyl) phosphine salt as a pretreatment for measurement.
  • peaks were observed at 51668 and 51831 in which DM1 was introduced into the heavy chain, and a light chain peak was observed at 23040, which was the same as the raw material (FIG. 69).
  • the azidobenzoic acid introducer is reduced to an amine benzoic acid introducer by the reduction reaction of 7 mM tris (2-carboxyethyl) phosphine salt as a pretreatment for measurement.
  • peaks were observed at 52071 and 52233 in which MMAE was introduced into the heavy chain, and a light chain peak was observed at 23040, which was the same as the raw material (FIG. 71).
  • the azide benzoic acid introducer is reduced to an amine benzoic acid introducer by the reduction reaction of 7 mM tris (2-carboxyethyl) phosphine salt as a pretreatment for measurement.
  • Example 13 Introduction of position-specific payload model of IgG1 Fc with IgG1 Fc affinity peptide reagent loaded with payload model and analysis by ESI-TOFMS] (13-1) Synthesis of Payload Model-Loaded IgG1 Fc Affinity Peptide Reagent (13-1-1) Synthesis of Payload Model-Loaded IgG1 Fc Affinity Peptide Reagent (Compound 89) Antibody Affinity Peptide Synthesized in Example 1 (Compound) 36) was dissolved in dimethyl sulfoxide, 2-iminothiolane hydrochloride (10 molar equivalents) and diisopropylethylamine (15 molar equivalents) were added, and the mixture was stirred for 1 hour.
  • trastuzumab was observed to have a peak at 148061, and the reaction product was observed to have a peak at 149867 where two Fmoc-dPEG12 were introduced.
  • Example 14 Position-specific payload introduction of IgG1 Fc by payload-loaded IgG1 Fc affinity peptide reagent and analysis by ESI-TOFMS] (14-1) Synthesis of MMAE-loaded IgG1 Fc affinity peptide reagent (Compound 91) The Fc affinity peptide reagent (Compound 66) synthesized in Example 5 was dissolved in N, N′-dimethylformamide to a concentration of 0.22 mM. . DBCO-MMAE (manufactured by Abzena, compound 91) was added, and the mixture was stirred at 25 degrees for 16 hours. The disappearance of the raw materials was confirmed by LC-MS, and the product, MMAE-loaded Fc affinity peptide reagent, was obtained.
  • Example 15 Position-specific modification of IgG1 Fc with an IgG1 Fc affinity peptide reagent having a linker from a glutamic acid residue and analysis by ESI-TOFMS] (15-1) Synthesis of affinity peptide for antibody Compound 92 was synthesized and obtained by the method shown in (1-1).
  • trastuzumab-azide modified product obtained in (15-3) was obtained in (6) Reduction and ESI-TOFMS analysis were performed by the method shown in 2-3-3).
  • trastuzumab used as a control a heavy chain peak was observed at 50602, 50764, and a light chain peak was observed at 23443.
  • light chain peaks were observed at 50725, 50885, and 23446 in which amine benzoic acid was introduced into the heavy chain.
  • Example 16 Position-specific modification of IgG1 Fc with IgG1 Fc affinity peptide reagent having thioglycolate as a leaving group and analysis by ESI-TOFMS]
  • (16-1) Synthesis of linker (compound 95) having thioglycolate leaving group Dissolving dithiodiglycolic acid in dichloromethane, glycine t-butyl ester (2.2 molar equivalents), N, N-diisopropylamine (4.8 molar equivalents) and 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride (2.4 molar equivalents) were added and stirred for 1 hour.
  • (16-2) Synthesis of antibody modifying reagent by linking azide reagent and affinity peptide Linker (compound 95) synthesized in (16-1) to antibody affinity peptide (compound 36) synthesized in (1-1) ( 40 molar equivalents), 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride (32 molar equivalents) and 1-hydroxybenzotriazole (32 molar equivalents) were added and stirred for 2 hours. After completion of the reaction was confirmed by LC-MS, it was purified by preparative HPLC. The fraction containing the desired product was confirmed by ESI-MS and then lyophilized to obtain the product azido-phenyl-affinity peptide reagent (Compound 96).
  • trastuzumab-azide modified product obtained in (16-3) was obtained in (6) Reduction and ESI-TOFMS analysis were performed by the method shown in 2-3-3).
  • trastuzumab used as a control a heavy chain peak was observed at 50602, 50764, and a light chain peak was observed at 23443.
  • light chain peaks were observed at 50720, 50882 in which amine benzoic acid was introduced into the heavy chain, and 23443, which was the same as the raw material.
  • the antibody has also been shown to be capable of regioselective modification of specific amino acid residues, including the following amino acid residues: (1) Lysine residues at positions 246 and / or 248 for example, Examples 11 (11-5-1) and (11-5-3) relating to modification of lysine residues at positions 246 and / or 248 of trastuzumab , (11-5-4), (11-5-7), (11-5-8), (11-5-9), and (11-5-10), position 247 and / or 249 of denosumab Example 11 (11-5-11) for modification of lysine residues at positions (corresponding to lysine residues 246 and / or 248 of human IgG in EU numbering), and positions 251 and / or 253 of dupilumab See Example 11 (11-5-12) for modification of lysine residues (corresponding to lysine residues 246 and / or 248 of human IgG in EU numbering); (2) Lysine residue at position 288 and /
  • A is an affinity substance for an antibody
  • L is a divalent group containing a leaving group
  • E is a divalent group comprising an electrophilic group (i) linked to the leaving group and (ii) capable of reacting with a nucleophilic group in the antibody
  • B is a bioorthogonal functional group
  • the leaving group has the ability to be cleaved from E by the reaction between the nucleophilic group and the electrophilic group.
  • the antibody can be regioselectively modified by appropriately adjusting factors such as the position in the sex substance.
  • the present invention is useful for producing, for example, a regioselectively modified antibody.

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Abstract

本発明は、抗体の修飾、特に、抗体の位置選択的な修飾を可能にする技術を提供する。より具体的には、本発明は、下記式（Ｉ）： Ａ－Ｌ－Ｅ－Ｂ　（Ｉ） 〔式中、　Ａは、抗体に対する親和性物質であり、　Ｌは、脱離基を含む２価の基であり、　Ｅは、（ｉ）前記脱離基と連結しており、かつ（ｉｉ）前記抗体中の求核基と反応する能力を有する求電子基を含む２価の基であり、　Ｂは、生体直交性官能基であり、　前記脱離基は、前記求核基と前記求電子基との間の反応によりＥから切断されて脱離する能力を有する。〕で表される、抗体に対する親和性物質、および生体直交性官能基を有する化合物またはその塩などを提供する。

Description

抗体に対する親和性物質、および生体直交性官能基を有する化合物またはその塩
　本発明は、抗体に対する親和性物質、および生体直交性官能基を有する化合物またはその塩などに関する。
　近年、抗体薬物複合体（Ａｎｔｉｂｏｄｙ－Ｄｒｕｇ　Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ：ＡＤＣ）の研究開発が盛んに行われている。ＡＤＣはその名の通り、抗体に薬物（例、抗がん剤）をコンジュゲーションした薬剤であり、がん細胞などに対して直接的な殺細胞活性を有する。代表的なＡＤＣとしては、Ｔ－ＤＭ１（商品名：カドサイラ（登録商標））がある（非特許文献１～３）。
　Ｔ－ＤＭ１を始めとするＡＤＣは、開発当初からその不均一性が問題となっている。すなわち、抗体中に７０～８０程度あるＬｙｓ残基に対して、低分子薬物をランダムに反応させているため、薬物抗体比（Ｄｒｕｇ／Ａｎｔｉｂｏｄｙ　Ｒａｔｉｏ：ＤＡＲ）やコンジュゲーション位置が一定ではない。通常このようなランダムコンジュゲーション法になるとＤＡＲが０～８の範囲となり、薬物の結合数が異なる複数の薬剤が生じることが分かっている。近年ＡＤＣの薬物の結合数および結合位置を変化させると、体内動態や薬物の放出速度、効果が変化することが報告されている。これらのことから次世代型ＡＤＣではコンジュゲーションする薬物の個数と位置を制御することが求められている。個数および位置が一定であると、期待通りのｅｆｆｉｃａｃｙ、コンジュゲーション薬剤のバリエーション、ロット差いわゆるレギュレーションの問題が解決すると考えられている（非特許文献４）。
　抗体の位置選択的修飾法は世界中で研究されているが、そのほとんどが遺伝子工学的手法もしくは酵素を用いた修飾法である。遺伝子工学的修飾法に関しては、位置選択性、個数選択性は制御できるものの、抗体自体の発現効率が低下（ＡＤＣを調製する際の総収率が低下）するなどの問題が指摘されている。また、抗体発現系の構築などに長い年月を要することが問題となっている（非特許文献５～７）。
　また、小分子プローブを利用して細胞内のような夾雑な環境下でタンパク質を化学修飾する方法が近年報告されている。本手法は、イメージングや低分子薬物のリポジショニングを行う上で受容体の同定などに利用されている。また、ケミカルバイオロジー分野において、合成小分子プローブを用いた有機化学的なタンパク質修飾法が注目されている（非特許文献８～１１）。
　最近、ＣＣＡＰ（Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ　ｂｙ　Ａｆｆｉｎｉｔｙ　Ｐｅｐｔｉｄｅ）法が開発された。本方法は、親和性ペプチド（Ａｆｆｉｎｉｔｙ　Ｐｅｐｔｉｄｅ）に対してＮＨＳ活性化エステルおよび薬物が連結されたペプチド試薬を抗体と反応させる方法（すなわち、ペプチド部分を含むリンカーを介したＡＤＣの作製方法）により、抗体の位置選択的な修飾に成功している。本方法は世界で初めて、化学合成的手法により、薬物で抗体Ｆｃ領域を位置選択的に修飾することに成功したものであり、しかも実用上も良好な結果〔反応時間３０分、収率７０％（ＤＡＲ　１の場合）、位置選択性１００％〕が確認されている。ペプチド試薬を５等量程度加えることで、ＤＡＲを２で制御できることが実証されており、修飾位置も制御できる点で画期的である（特許文献１）。
国際公開第２０１６／１８６２０６号
Ｒｅｉｃｈｅｒｔ　ＪＭ　ｅｔ　ａｌ．，Ｎａｔ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ　２００５；２３：１０７３－８ Ｋｕｂｏｔａ　Ｔ　ｅｔ　ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ　Ｓｃｉ　２００９；１００：１５６６－７２ Ｗｕ　ＡＭ　ｅｔ　ａｌ．，Ｎａｔ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ　２００５；２３：１１３７－４６ Ｊｕｎｕｔｕｌａ　ＪＲ　ｅｔ　ａｌ．，Ｎａｔ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ　２００８；２６：９２５－３２ Ｓｈｅｎ　ＢＱ　ｅｔ　ａｌ．，Ｎａｔ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ　２０１２；３０：１８４－９ Ｈｏｆｅｒ　Ｔ　ｅｔ　ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　２００９；４８：１２０４７－５７ Ｌｉｕ　Ｗ　ｅｔ　ａｌ．，Ｎａｔ　Ｍｅｔｈｏｄｓ　２００７；４：２３９－４４ Ｓ．Ｔ．Ｌａｕｇｈｌｉｎ　ｅｔ　ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ　２００８；３２０，６６４ Ａ．Ｅ．Ｓｐｅｅｒｓ　ｅｔ　ａｌ．，ＣｈｅｍＢｉｏＣｈｅｍ　２００４；５，４１ Ｙ．Ｔａｋａｏｋａ　ｅｔ　ａｌ．，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．　２０１３；５２，４０８８ Ｓ．Ｆｕｊｉｓｈｉｍａ　ｅｔ　ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ，２０１２；１３４：３９６１－６４
　本発明は、抗体の修飾、特に、抗体の位置選択的な修飾を可能にする技術を開発することを目的とする。
　本発明者らは、鋭意検討した結果、Ａ－Ｌ－Ｅという構造単位（ここで、Ａは、抗体に対する親和性物質であり、Ｌは、所定の脱離基を含む２価の基であり、Ｅは、（ｉ）前記脱離基と連結しており、かつ（ｉｉ）前記抗体中の求核基と反応する能力を有する求電子基を含む２価の基である。）を有する化合物またはその塩が、抗体の位置特異的な修飾に有用であることを見出した。例えば、式（Ｉ）で表われる、抗体に対する親和性物質、および生体直交性官能基を有する所定の化合物が、抗体の位置特異的な修飾に有用であることが見出された（例、図１、各種実施例）。また、式（ＩＶ）で表われる、抗体に対する親和性物質、および機能性物質を有する化合物またはその塩が、抗体の位置特異的な修飾に有用であることが見出された（例、実施例１３、１４）。本発明者らはさらに、このような化合物を用いることにより、ペプチド部分をリンカーとして含まない、機能性物質（例、薬物）を位置選択的に有する抗体（抗体薬物複合体（ＡＤＣ））を調製できることなどを見出した。潜在的な免疫原性を有し、また血中で加水分解され易いペプチド部分を含むリンカーの使用の回避は、ＡＤＣの臨床応用において望ましいものである。すなわち、本発明者らの開発した方法によれば、化学合成的手法により、しかもペプチド部分を含むリンカーを使用することなく、薬物で抗体Ｆｃ領域を位置選択的に修飾することができる。
　すなわち、本発明は、以下のとおりである。
〔１〕下記式（Ｉ）：
Ａ－Ｌ－Ｅ－Ｂ　　　（Ｉ）
〔式中、
　Ａは、抗体に対する親和性物質であり、
　Ｌは、脱離基を含む２価の基であり、
　Ｅは、（ｉ）前記脱離基と連結しており、かつ（ｉｉ）前記抗体中の求核基と反応する能力を有する求電子基を含む２価の基であり、
　Ｂは、生体直交性官能基であり、
　前記脱離基は、前記求核基と前記求電子基との間の反応によりＥから切断されて脱離する能力を有する。〕で表される、抗体に対する親和性物質、および生体直交性官能基を有する化合物またはその塩。
〔２〕前記親和性物質がペプチドである、〔１〕の化合物またはその塩。
〔３〕前記ペプチドが、モノクローナル抗体の定常領域に対する結合能を有するペプチドである、〔２〕の化合物またはその塩。
〔４〕前記ペプチドが、モノクローナル抗体のＦｃ領域に対する結合能を有するペプチドである、〔２〕または〔３〕の化合物またはその塩。
〔５〕前記ペプチドが、ＩｇＧのＦｃ領域に対する結合能を有するペプチドである、〔４〕の化合物またはその塩。
〔６〕前記ペプチドが、１０～４０のアミノ酸残基を有する、〔２〕～〔５〕のいずれかの化合物またはその塩。
〔７〕前記ペプチドが、
（ａ）（ａ－１－１）ＦＮＭＱＱＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤ（配列番号１１）のアミノ酸配列、または、
（ａ－１－２）ＦＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤＣ（配列番号１２）のアミノ酸配列において、
　配列中のいずれかの１～３つのアミノ酸残基が、同一でも異なってもよく、リジン残基、アスパラギン酸残基、およびグルタミン酸残基からなる群より選ばれる各々１つのアミノ酸残基により置換されているか、
（ａ－２－１）β－Ａｌａ－ＮＭＱＱＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤ（配列番号１３）のアミノ酸配列、または、
（ａ－２－２）β－Ａｌａ－ＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤＣ（配列番号１４）のアミノ酸配列において、
　配列中のいずれかの１～３つのアミノ酸残基が、同一でも異なってもよく、リジン残基、アスパラギン酸残基、およびグルタミン酸残基からなる群より選ばれる各々１つのアミノ酸残基により置換されており、かつ
（ｂ）配列番号１１～１４の前記アミノ酸配列各々に対して８５％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含む、〔２〕～〔６〕のいずれかの化合物またはその塩。
〔８〕前記ペプチドが、
式１－１：（Ｘ０－３）ａ－Ｃ－Ｘａａ１－Ｘａａ２－Ｘａａ３－Ｘａａ４－Ｘａａ５－Ｘａａ６－Ｉ－Ｉ－Ｗ－Ｃ－（Ｘ０－３）ｂ（配列番号１５）
式１－２：（Ｘ０－３）ａ－Ｃ－Ｘａａ１－Ｘａａ２－Ｘａａ３－Ｘａａ４－Ｘａａ５－Ｘａａ６－Ｉ－Ｖ－Ｗ－Ｃ－（Ｘ０－３）ｂ（配列番号１６）
式１－３：（Ｘ０－３）ａ－Ｃ－Ｘａａ１－Ｘａａ２－Ｘａａ３－Ｘａａ４－Ｘａａ５－Ｘａａ６－Ｖ－Ｖ－Ｗ－Ｃ－（Ｘ０－３）ｂ（配列番号１７）
式１－４：（Ｘ０－３）ａ－Ｃ－Ｘａａ１－Ｘａａ２－Ｘａａ３－Ｘａａ４－Ｘａａ５－Ｘａａ６－Ａ－Ｖ－Ｗ－Ｃ－（Ｘ０－３）ｂ（配列番号１８）
式１－５：（Ｘ０－３）ａ－Ｃ－Ｘａａ１－Ｘａａ２－Ｘａａ３－Ｘａａ４－Ｘａａ５－Ｘａａ６－Ｌ－Ｌ－Ｗ－Ｃ－（Ｘ０－３）ｂ（配列番号１９）
式１－６：（Ｘ０－３）ａ－Ｃ－Ｘａａ１－Ｘａａ２－Ｘａａ３－Ｘａａ４－Ｘａａ５－Ｘａａ６－Ｌ－Ｉ－Ｗ－Ｃ－（Ｘ０－３）ｂ（配列番号２０）
式１－７：（Ｘ０－３）ａ－Ｃ－Ｘａａ１－Ｘａａ２－Ｘａａ３－Ｘａａ４－Ｘａａ５－Ｘａａ６－Ｌ－Ｖ－Ｆ－Ｃ－（Ｘ０－３）ｂ（配列番号２１）
式１－８：（Ｘ０－３）ａ－Ｃ－Ｘａａ１－Ｘａａ２－Ｘａａ３－Ｘａａ４－Ｘａａ５－Ｘａａ６－Ｑ－Ｖ－Ｗ－Ｃ－（Ｘ０－３）ｂ（配列番号２２）
式１－９：（Ｘ０－３）ａ－Ｃ－Ｘａａ１－Ｘａａ２－Ｘａａ３－Ｘａａ４－Ｘａａ５－Ｘａａ６－Ｅ－Ｖ－Ｗ－Ｃ－（Ｘ０－３）ｂ（配列番号２３）
〔式中、
　（Ｘ０－３）ａは、なし、アルギニン残基－グリシン残基－アスパラギン残基、グリシン残基－アスパラギン残基、アスパラギン酸残基、またはアスパラギン残基であり、
　（Ｘ０－３）ｂは、なし、スレオニン残基－チロシン残基－ヒスチジン残基、またはスレオニン残基であり、
　Ｘａａ１は、アラニン残基であり、
　Ｘａａ２は、チロシン残基、トリプトファン残基、またはヒスチジン残基であり、
　Ｘａａ３は、ヒスチジン残基、フェニルアラニン残基、チロシン残基、トリプトファン残基、アルギニン残基、またはグリシン残基であり、
　Ｘａａ４は、リジン残基、アスパラギン酸残基、またはグルタミン酸残基であり、
　Ｘａａ５は、グリシン残基、セリン残基、アスパラギン残基、グルタミン残基、アスパラギン酸残基、グルタミン酸残基、フェニルアラニン残基、チロシン残基、トリプトファン残基、ヒスチジン残基、スレオニン残基、ロイシン残基、アラニン残基、バリン残基、イソロイシン残基、またはアルギニン残基であり、
　Ｘａａ６は、グルタミン残基、グルタミン酸残基、アスパラギン残基、またはアスパラギン酸残基である。〕、あるいは
式２－１：（Ｘ０－３’）ａ－Ｃ－（Ｘａａ１’）－（Ｘａａ２’）－（Ｘａａ３’）－（Ｘａａ４’）－（Ｘａａ５’）－（Ｘａａ６’）－Ｌ－Ｖ－Ｗ－Ｃ－（Ｘ０－３’）ｂ（配列番号２４）
〔式中、
　（Ｘ０－３’）ａおよび（Ｘ０－３’）ｂはそれぞれ、前記（Ｘ０－３）ａおよび（Ｘ０－３）ｂと同じであり、
　Ｘａａ１’、Ｘａａ２’、Ｘａａ３’、Ｘａａ４’、Ｘａａ５’、Ｘａａ６’はそれぞれ、前記Ｘａａ１、Ｘａａ２、Ｘａａ３、Ｘａａ４、Ｘａａ５、Ｘａａ６と同じである。〕のいずれかのアミノ酸配列を含む、〔２〕～〔６〕のいずれかの化合物またはその塩。
〔９〕前記脱離基が、（１）－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓｅ－、－ＳＯ２－Ｏ－、－ＳＯ２－Ｎ（Ｒ）－、－ＳＯ２－、－Ｃ≡Ｃ－ＣＨ２－Ｏ－、－Ｎ（ＯＲ）－、－Ｎ（Ｒ）－、および－Ｏ－Ｎ（Ｒ）－からなる群より選ばれる基（ここで、Ｒは、水素原子または炭素原子数１～６のアルキルである。）、または（２）ヘテロアリーレンである、〔１〕～〔８〕のいずれかの化合物またはその塩。
〔１０〕前記求核基が、リジン残基の側鎖におけるＮＨ２、チロシン残基の側鎖におけるＯＨ、セリン残基の側鎖におけるＯＨ、スレオニン残基の側鎖におけるＯＨ、およびシステイン残基の側鎖におけるＳＨからなる群より選ばれる基である、〔１〕～〔９〕のいずれかの化合物またはその塩。
〔１１〕前記求電子基が、－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＳＯ２－、および－ＣＨ２－からなる群より選ばれる基である、〔１〕～〔１０〕のいずれかの化合物またはその塩。
〔１２〕前記生体直交性官能基が、アジド残基、アルデヒド残基、チオール残基、アルキン残基、アルケン残基、ハロゲン残基、テトラジン残基、ニトロン残基、ヒドロキシルアミン残基、ニトリル残基、ヒドラジン残基、ケトン残基、ボロン酸残基、シアノベンゾチアゾール残基、アリル残基、ホスフィン残基、マレイミド残基、ジスルフィド残基、チオエステル残基、α―ハロカルボニル残基、イソニトリル残基、シドノン残基、およびセレン残基からなる群より選ばれる基である、〔１〕～〔１１〕のいずれかの化合物またはその塩。
〔１３〕前記生体直交性官能基が、アジド残基、チオール残基、アルキン残基、マレイミド残基、およびジスルフィド残基からなる群より選ばれる基である、〔１〕～〔１２〕のいずれかの化合物またはその塩。
〔１４〕前記式（Ｉ）で表される化合物が、下記式（Ｉ－１）：
Ａ－Ｌ１－Ｌ２－Ｅ１－Ｅ２－Ｅ３－Ｂ　　　（Ｉ－１）
〔式中、
　ＡおよびＢは、前記式（Ｉ）のものと同じであり、
　Ｌ１は、結合または２価の基であり、
　Ｌ２は、脱離基であり、
　Ｅ１は、（ｉ）前記脱離基と連結しており、かつ（ｉｉ）前記抗体中の求核基と反応する能力を有する求電子基であり、
　Ｅ２は、（ａ）－Ｘ－Ｙ－〔ここで、Ｅ１と結合するＸは、Ｃ（Ｒ１）（Ｒ２）（ここで、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立して、水素原子または炭素原子数１～６のアルキルである。）、Ｎ（Ｒ３）（ここで、Ｒ３は、水素原子または炭素原子数１～６のアルキルである。）、Ｏ、Ｓ、またはＳｅであり、Ｅ３と結合するＹは、Ｃ（Ｒ４）（Ｒ５）（ここで、Ｒ４およびＲ５はそれぞれ独立して、水素原子または炭素原子数１～６のアルキルである。）である。〕、あるいは（ｂ）下記式（ｉ）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000008
 （ここで、環Ｚは、Ｅ１と結合する環構成原子Ｘ’およびその両隣の環構成原子の全てが炭素原子である２価の環基であるか、またはＥ１と結合する環構成原子Ｘ’が窒素原子であり、かつ窒素原子の両隣の環構成原子が炭素原子である２価の複素環基である。・は結合手である。）で表される基であり、
　Ｅ３は、Ｅ２が－Ｘ－Ｙ－の場合には２価の基であり、Ｅ２が式（ｉ）で表される基の場合には結合または２価の基であり、
　前記脱離基は、前記求核基と前記求電子基との間の反応によりＥ１から切断されて脱離する能力を有する。〕で表される化合物である、〔１〕～〔１３〕のいずれかの化合物またはその塩。
〔１５〕前記Ｌ２が、
（ａ）環Ｐ－Ｑ－〔ここで、環Ｐが、電子吸引性基で置換されていてもよいアリーレン、電子吸引性基で置換されていてもよいヘテロアリーレン、縮環していてもよい２，５-ジケトピロリジン、縮環していてもよい２，６－ジケトピペリジン、縮環していてもよい２-ケトピロリジン、縮環していてもよい２－ケトピペリジン、２－ピリドンからなる群より選ばれる基であり、Ｑが、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓｅ－、－ＳＯ２－Ｏ－、－ＳＯ２－Ｎ（Ｒ）－、－ＳＯ２－、－Ｃ≡Ｃ－ＣＨ２－Ｏ－、－Ｎ（ＯＲ）－、－Ｎ（Ｒ）－、および－Ｏ－Ｎ（Ｒ）－からなる群より選ばれる基（ここで、Ｒは、水素原子または炭素原子数１～６のアルキルである。）である。〕、
（ｂ）ヘテロアリーレン、あるいは
（ｃ）－Ｑ－〔ここで、Ｑが、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓｅ－、－ＳＯ２－Ｏ－、－ＳＯ２－Ｎ（Ｒ）－、－ＳＯ２－、－Ｃ≡Ｃ－ＣＨ２－Ｏ－、－Ｎ（ＯＲ）－、－Ｎ（Ｒ）－、および－Ｏ－Ｎ（Ｒ）－からなる群より選ばれる基（ここで、Ｒは、水素原子または炭素原子数１～６のアルキルである。）である。〕、〔１４〕の化合物またはその塩。
〔１６〕前記Ｌ２が、下記構造式からなる群より選ばれる基である、〔１４〕または〔１５〕の化合物またはその塩：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000009
 （ここで、ＥＷＧは、電子吸引性基であり、
　ｍは、０～４の整数であり、
　ｎは、０～３の整数であり、
　Ｒは、水素原子、または炭素原子数１～６のアルキルであり、
　○（白丸）は、Ｌ１に対する結合手であり、●（黒丸）は、Ｅ１に対する結合手である。）。
〔１７〕ＡとＥとを連結するＬまたはＬ１－Ｌ２の主鎖が２０個以下の原子からなる、〔１〕～〔１６〕のいずれかの化合物またはその塩。
〔１８〕前記式（Ｉ－１）で表される化合物が、下記式（Ｉ－２）：
Ａ－Ｌ１－Ｌ２－Ｅ１－Ｘ－Ｙ－Ｅ３－Ｂ　（Ｉ－２）
〔式中、
　Ａ、Ｌ１、Ｘ、Ｙ、およびＢは、前記式（Ｉ－１）のものと同じであり、
　Ｌ２は、
（ａ）環Ｐ－Ｑ－〔ここで、環Ｐが、電子吸引性基で置換されていてもよいアリーレン、電子吸引性基で置換されていてもよいヘテロアリーレン、縮環していてもよい２，５-ジケトピロリジン、縮環していてもよい２，６－ジケトピペリジン、縮環していてもよい２-ケトピロリジン、縮環していてもよい２－ケトピペリジン、２－ピリドンからなる群より選ばれる基であり、Ｑが、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓｅ－、－ＳＯ２－Ｏ－、－ＳＯ２－Ｎ（Ｒ）－、－ＳＯ２－、－Ｃ≡Ｃ－ＣＨ２－Ｏ－、－Ｎ（ＯＲ）－、－Ｎ（Ｒ）－、および－Ｏ－Ｎ（Ｒ）－からなる群より選ばれる基（ここで、Ｒは、水素原子または炭素原子数１～６のアルキルである。）である。〕、
（ｂ）ヘテロアリーレン、あるいは
（ｃ）－Ｑ－〔ここで、Ｑが、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓｅ－、－ＳＯ２－Ｏ－、－ＳＯ２－Ｎ（Ｒ）－、－ＳＯ２－、－Ｃ≡Ｃ－ＣＨ２－Ｏ－、－Ｎ（ＯＲ）－、－Ｎ（Ｒ）－、および－Ｏ－Ｎ（Ｒ）－からなる群より選ばれる基（ここで、Ｒは、水素原子または炭素原子数１～６のアルキルである。）である。〕であり、
　Ｅ１は、－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＳＯ２－、および－ＣＨ２－からなる群より選ばれる基であり、
　Ｅ３は、２価の基である。〕で表される化合物である、〔１４〕～〔１７〕のいずれかの化合物またはその塩。
〔１９〕前記式（Ｉ－１）で表される化合物が、下記式（Ｉ－３）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000010
 〔式中、
　Ａ、Ｌ１、環Ｚ、およびＢは、前記式（Ｉ－１）のものと同じであり、
　Ｌ２は、
（ａ）環Ｐ－Ｑ－〔ここで、環Ｐが、電子吸引性基で置換されていてもよいアリーレン、電子吸引性基で置換されていてもよいヘテロアリーレン、縮環していてもよい２，５-ジケトピロリジン、縮環していてもよい２，６－ジケトピペリジン、縮環していてもよい２-ケトピロリジン、縮環していてもよい２－ケトピペリジン、２－ピリドンからなる群より選ばれる基であり、Ｑが、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓｅ－、－ＳＯ２－Ｏ－、－ＳＯ２－Ｎ（Ｒ）－、－ＳＯ２－、－Ｃ≡Ｃ－ＣＨ２－Ｏ－、－Ｎ（ＯＲ）－、－Ｎ（Ｒ）－、および－Ｏ－Ｎ（Ｒ）－からなる群より選ばれる基（ここで、Ｒは、水素原子または炭素原子数１～６のアルキルである。）である。〕、
（ｂ）ヘテロアリーレン、あるいは
（ｃ）－Ｑ－〔ここで、Ｑが、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓｅ－、－ＳＯ２－Ｏ－、－ＳＯ２－Ｎ（Ｒ）－、－ＳＯ２－、－Ｃ≡Ｃ－ＣＨ２－Ｏ－、－Ｎ（ＯＲ）－、－Ｎ（Ｒ）－、および－Ｏ－Ｎ（Ｒ）－からなる群より選ばれる基（ここで、Ｒは、水素原子または炭素原子数１～６のアルキルである。）である。〕であり、
　Ｅ１は、－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＳＯ２－、および－ＣＨ２－からなる群より選ばれる基であり、
　Ｅ３は、結合または２価の基である。〕で表される化合物である、〔１４〕～〔１７〕のいずれかの化合物またはその塩。
〔２０〕下記式（Ｉ）：
Ａ－Ｌ－Ｅ－Ｂ　　　（Ｉ）
〔式中、
　Ａは、抗体に対する親和性物質であり、
　Ｌは、脱離基を含む２価の基であり、
　Ｅは、（ｉ）前記脱離基と連結しており、かつ（ｉｉ）前記抗体中の求核基と反応する能力を有する求電子基を含む２価の基であり、
　Ｂは、生体直交性官能基であり、
　前記脱離基は、前記求核基と前記求電子基との間の反応によりＥから切断されて脱離する能力を有する。〕で表される、抗体に対する親和性物質、および生体直交性官能基を有する化合物またはその塩を含む、生体直交性官能基による抗体の位置選択的修飾試薬。
〔２１〕生体直交性官能基を有する抗体またはその塩の製造方法であって、
　下記式（Ｉ）：
Ａ－Ｌ－Ｅ－Ｂ　　　（Ｉ）
〔式中、
　Ａは、抗体に対する親和性物質であり、
　Ｌは、脱離基を含む２価の基であり、
　Ｅは、（ｉ）前記脱離基と連結しており、かつ（ｉｉ）前記抗体中の求核基と反応する能力を有する求電子基を含む２価の基であり、
　Ｂは、生体直交性官能基であり、
　前記脱離基は、前記求核基と前記求電子基との間の反応によりＥから切断されて脱離する能力を有する。〕で表される、抗体に対する親和性物質、および生体直交性官能基を有する化合物またはその塩を、抗体と反応させて、
　下記式（ＩＩ）：
Ａｂ－Ｅ－Ｂ　　　（ＩＩ）
〔式中、
　ＥおよびＢは、前記式（Ｉ）のものと同じであり、
　Ａｂは、抗体である。〕で表される、生体直交性官能基を有する抗体またはその塩を生成することを含む、方法。
〔２２〕機能性物質を有する抗体またはその塩の製造方法であって、
（１）下記式（Ｉ）：
Ａ－Ｌ－Ｅ－Ｂ　　　（Ｉ）
〔式中、
　Ａは、抗体に対する親和性物質であり、
　Ｌは、脱離基を含む２価の基であり、
　Ｅは、（ｉ）前記脱離基と連結しており、かつ（ｉｉ）前記抗体中の求核基と反応する能力を有する求電子基を含む２価の基であり、
　Ｂは、生体直交性官能基であり、
　前記脱離基は、前記求核基と前記求電子基との間の反応によりＥから切断されて脱離する能力を有する。〕で表される、抗体に対する親和性物質、および生体直交性官能基を有する化合物またはその塩を、抗体と反応させて、
　下記式（ＩＩ）：
Ａｂ－Ｅ－Ｂ　　　（ＩＩ）
〔式中、
　ＥおよびＢは、前記式（Ｉ）のものと同じであり、
　Ａｂは、抗体である。〕で表される、生体直交性官能基を有する抗体またはその塩を生成すること；ならびに
（２）前記式（ＩＩ）で表される、生体直交性官能基を有する抗体またはその塩を、生体直交性官能基を介して機能性物質と反応させて、
　下記式（ＩＩＩ）：
Ａｂ－Ｅ－Ｂ’－Ｆ　　　（ＩＩＩ）
〔式中、
　Ａｂは、前記式（ＩＩ）のものと同じであり、
　Ｅは、前記式（Ｉ）のものと同じであり、
　Ｂ’は、機能性物質と生体直交性官能基との間の反応により生成する部分を含む２価の基であり、
　Ｆは、機能性物質である。〕で表される、機能性物質を有する抗体またはその塩を生成することを含む、方法。
〔２３〕下記式（ＩＩ－１）：
Ａｂ－Ｅ１－Ｅ２－Ｅ３－Ｂ　　　（ＩＩ－１）
〔式中、
　Ａｂは、抗体であり、
　Ｅ１は、抗体中の求核基と連結している求電子基であり、
　Ｅ２は、（ａ）－Ｘ－Ｙ－〔ここで、Ｅ１と結合するＸは、Ｃ（Ｒ１）（Ｒ２）（ここで、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立して、水素原子または炭素原子数１～６のアルキルである。）、Ｎ（Ｒ３）（ここで、Ｒ３は、水素原子または炭素原子数１～６のアルキルである。）、Ｏ、Ｓ、またはＳｅであり、Ｅ３と結合するＹは、Ｃ（Ｒ４）（Ｒ５）（ここで、Ｒ４およびＲ５はそれぞれ独立して、水素原子または炭素原子数１～６のアルキルである。）である。〕、あるいは（ｂ）下記式（ｉ）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000011
 （ここで、環Ｚは、Ｅ１と結合する環構成原子Ｘ’およびその両隣の環構成原子の全てが炭素原子である２価の環基であるか、またはＥ１と結合する環構成原子Ｘ’が窒素原子であり、かつ窒素原子の両隣の環構成原子が炭素原子である２価の複素環基である。・は結合手である。）で表される基であり、
　Ｅ３は、Ｅ２が－Ｘ－Ｙ－の場合には２価の基であり、Ｅ２が式（ｉ）で表される基の場合には結合または２価の基であり、
　Ｂは、生体直交性官能基である。〕で表される、生体直交性官能基を位置選択的に有する抗体またはその塩。
〔２４〕前記抗体が、モノクローナル抗体の定常領域のみに生体直交性官能基を有する抗体である、〔２３〕の抗体またはその塩。
〔２５〕前記抗体が、モノクローナル抗体のＦｃ領域のみに生体直交性官能基を有する抗体である、〔２３〕または〔２４〕の抗体またはその塩。
〔２６〕前記抗体が、ヒトＩｇＧ　Ｆｃ領域における２４６～２４８位または２８８～２９０位のアミノ酸残基からなる領域において、生体直交性官能基を位置選択的に有するヒトＩｇＧである、〔２３〕～〔２５〕のいずれかの抗体またはその塩。
〔２７〕前記式（ＩＩ－１）で表される前記抗体が、下記式（ＩＩ－２）：
Ａｂ－Ｅ１－Ｘ－Ｙ－Ｅ３－Ｂ　　　（ＩＩ－２）
〔式中、
　Ａｂ、Ｘ、Ｙ、およびＢは、前記式（ＩＩ－１）のものと同じであり、
　Ｅ１は、－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＳＯ２－、および－ＣＨ２－からなる群より選ばれる基であり、
　Ｅ３は、２価の基である。〕で表される、生体直交性官能基を位置選択的に有する抗体である、〔２３〕～〔２６〕のいずれかの抗体またはその塩。
〔２８〕前記式（ＩＩ－１）で表される前記抗体が、下記式（ＩＩ－３）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000012
 〔式中、
　Ａｂ、環構成原子Ｘ’、環Ｚ、およびＢは、前記式（ＩＩ－１）のものと同じであり、
　Ｅ１は、－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＳＯ２－、および－ＣＨ２－からなる群より選ばれる基であり、
　Ｅ３は、結合または２価の基である。〕で表される、生体直交性官能基を位置選択的に有する抗体である、〔２３〕～〔２６〕のいずれかの抗体またはその塩。
〔２９〕下記式（ＩＩＩ－１）：
Ａｂ－Ｅ１－Ｅ２－Ｅ３－Ｂ’－Ｆ　　　（ＩＩＩ－１）
〔式中、
　Ａｂは、抗体であり、
　Ｅ１は、抗体中の求核基と連結している求電子基であり、
　Ｅ２は、（ａ）－Ｘ－Ｙ－〔ここで、Ｅ１と結合するＸは、Ｃ（Ｒ１）（Ｒ２）（ここで、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立して、水素原子または炭素原子数１～６のアルキルである。）、Ｎ（Ｒ３）（ここで、Ｒ３は、水素原子または炭素原子数１～６のアルキルである。）、Ｏ、Ｓ、またはＳｅであり、Ｅ３と結合するＹは、Ｃ（Ｒ４）（Ｒ５）（ここで、Ｒ４およびＲ５はそれぞれ独立して、水素原子または炭素原子数１～６のアルキルである。）である。〕、あるいは（ｂ）下記式（ｉ）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000013
 （ここで、環Ｚは、Ｅ１と結合する環構成原子Ｘ’およびその両隣の環構成原子の全てが炭素原子である２価の環基であるか、またはＥ１と結合する環構成原子Ｘ’が窒素原子であり、かつ窒素原子の両隣の環構成原子が炭素原子である２価の複素環基である。・は結合手である。）で表される基であり、
　Ｅ３は、Ｅ２が－Ｘ－Ｙ－の場合には２価の基であり、Ｅ２が式（ｉ）で表される基の場合には結合または２価の基であり、
　Ｂ’は、機能性物質と生体直交性官能基との間の反応により生成する部分を含む２価の基であり、
　Ｆは、機能性物質である。〕で表される、機能性物質を位置選択的に有する抗体またはその塩。
〔３０〕前記抗体が、モノクローナル抗体の定常領域のみに生体直交性官能基を有する抗体である、〔２９〕の抗体またはその塩。
〔３１〕前記抗体が、モノクローナル抗体のＦｃ領域のみに生体直交性官能基を有する抗体である、〔２９〕または〔３０〕の抗体またはその塩。
〔３２〕前記抗体が、ヒトＩｇＧ　Ｆｃ領域における２４６～２４８位または２８８～２９０位のアミノ酸残基からなる領域において、機能性物質を位置選択的に有するヒトＩｇＧである、〔２９〕～〔３１〕のいずれかの抗体またはその塩。
〔３３〕前記式（ＩＩＩ－１）で表される前記抗体が、下記式（ＩＩＩ－２）：
Ａｂ－Ｅ１－Ｘ－Ｙ－Ｅ３－Ｂ’－Ｆ　　　（ＩＩＩ－２）
〔式中、
　Ａｂ、Ｘ、Ｙ、Ｂ’およびＦは、前記式（ＩＩＩ－１）のものと同じであり、
　Ｅ１は、－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＳＯ２－、および－ＣＨ２－からなる群より選ばれる基であり、
　Ｅ３は、２価の基である〕で表される、機能性物質を位置選択的に有する抗体である、〔２９〕～〔３２〕のいずれかの抗体またはその塩。
〔３４〕前記式（ＩＩＩ－１）で表される前記抗体が、下記式（ＩＩＩ－３）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000014
 〔式中、
　Ａｂ、環構成原子Ｘ’、環Ｚ、Ｂ’およびＦは、前記式（ＩＩＩ－１）のものと同じであり、
　Ｅ１は、－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＳＯ２－、および－ＣＨ２－からなる群より選ばれる基であり、
　Ｅ３は、結合または２価の基である。〕で表される、機能性物質を位置選択的に有する抗体である、〔２９〕～〔３２〕のいずれかの抗体またはその塩。
〔３５〕下記式（ＩＶ）：
Ａ－Ｌ－Ｅ－Ｆ　　　（ＩＶ）
〔式中、
　Ａは、抗体に対する親和性物質であり、
　Ｌは、脱離基を含む２価の基であり、
　Ｅは、（ｉ）前記脱離基と連結しており、かつ（ｉｉ）前記抗体中の求核基と反応する能力を有する求電子基を含む２価の基であり、
　Ｆは、機能性物質であり、
　前記脱離基は、前記求核基と前記求電子基との間の反応によりＥから切断されて脱離する能力を有する。〕で表される、抗体に対する親和性物質、および機能性物質を有する化合物またはその塩。
〔３６〕下記式（ＩＶ）：
Ａ－Ｌ－Ｅ－Ｆ　　　（ＩＶ）
〔式中、
　Ａは、抗体に対する親和性物質であり、
　Ｌは、脱離基を含む２価の基であり、
　Ｅは、（ｉ）前記脱離基と連結しており、かつ（ｉｉ）前記抗体中の求核基と反応する能力を有する求電子基を含む２価の基であり、
　Ｆは、機能性物質であり、
　前記脱離基は、前記求核基と前記求電子基との間の反応によりＥから切断されて脱離する能力を有する。〕で表される、抗体に対する親和性物質、および機能性物質を有する化合物またはその塩を含む、機能性物質による抗体の位置選択的修飾試薬。
〔３７〕機能性物質を有する抗体またはその塩の製造方法であって、
　下記式（ＩＶ）：
Ａ－Ｌ－Ｅ－Ｆ　　　（ＩＶ）
〔式中、
　Ａは、抗体に対する親和性物質であり、
　Ｌは、脱離基を含む２価の基であり、
　Ｅは、（ｉ）前記脱離基と連結しており、かつ（ｉｉ）前記抗体中の求核基と反応する能力を有する求電子基を含む２価の基であり、
　Ｆは、機能性物質であり、
　前記脱離基は、前記求核基と前記求電子基との間の反応によりＥから切断されて脱離する能力を有する。〕で表される、抗体に対する親和性物質、および機能性物質を有する化合物またはその塩を、抗体と反応させて、
　下記式（ＩＩＩ）：
Ａｂ－Ｅ－Ｆ　　　（ＩＩＩ）
〔式中、
　Ａｂは、抗体であり、
　ＥおよびＦは、前記式（ＩＶ）のものと同じである。〕で表される、機能性物質を有する抗体またはその塩を生成することを含む、方法。
　抗体に対する親和性物質、および生体直交性官能基または機能性物質を有する本発明の化合物またはその塩は、例えば、抗体の位置選択的な修飾に有用である。
　生体直交性官能基を位置選択的に有する本発明の抗体またはその塩は、例えば、機能性物質を位置選択的に有する抗体またはその塩の調製における中間体として有用である。
　機能性物質を位置選択的に有する本発明の抗体またはその塩は、例えば、医薬、または試薬（例、診断薬、研究用試薬）として有用である。
図１は、本発明の概要を示す模式図である。 図２は、ＩｇＧ抗体トラスツズマブ－ペプチド複合体合成におけるＳＤＳ－ＰＡＧＥによる解析結果を示す図である。レーン１，３，６，８：分子量マーカー；レーン２：未反応のＩｇＧ抗体トラスツズマブ（コントロール、分子量５万付近のバンドが重鎖を分子量２万５千付近のバンドが軽鎖を示す）；レーン４：ＩｇＧ抗体トラスツズマブと化合物１０による複合体（分子量５万付近の上のバンドがトラスツズマブの重鎖に化合物１０がコンジュゲーションしたことを示す。分子量５万付近の下のバンドが未反応の重鎖、分子量２万５千付近のバンドが未反応の軽鎖を示す）；レーン５：ＩｇＧ抗体トラスツズマブと化合物１１による複合体（分子量５万付近の上のバンドがトラスツズマブの重鎖に化合物１１がコンジュゲーションしたことを示す。分子量５万付近の下のバンドが未反応の重鎖、分子量２万５千付近のバンドが未反応の軽鎖を示す）；レーン７：ＩｇＧ抗体トラスツズマブと化合物１２によるコンジュゲーション後の反応混合物（分子量５万付近のバンドが未反応の重鎖、分子量２万５千付近のバンドが未反応の軽鎖を示す。化合物１２がコンジュゲーションしたバンドは見られない）。 図３は、ＩｇＧ抗体トラスツズマブに位置特異的にマレイミドを導入し、その後にチオールを有するペプチド試薬とコンジュゲーションさせ合成したトラスツズマブ－ペプチド複合体のＳＤＳ－ＰＡＧＥによる解析結果を示す図である。レーン１，９：分子量マーカー。レーン２：ＩｇＧ抗体トラスツズマブを化合物２２（抗体に対して１０モル当量）で処理し、位置選択的にマレイミドを導入した後、化合物２５をコンジュゲーションさせた複合体。分子量５万付近の上のバンドがトラスツズマブの重鎖にマレイミドが導入され、化合物２５とコンジュゲーションしたことを示す。分子量５万付近の下のバンドは未反応の重鎖、分子量２万５千付近のバンドが未反応の軽鎖を示す。レーン３：ＩｇＧ抗体トラスツズマブを化合物２２（抗体に対して２０モル当量）で処理し、位置選択的にマレイミドを導入した後、化合物２５をコンジュゲーションさせた複合体。分子量５万付近の上のバンドがトラスツズマブの重鎖にマレイミドが導入され、化合物２５とコンジュゲーションしたことを示す。分子量５万付近の下のバンドは未反応の重鎖、分子量２万５千付近のバンドが未反応の軽鎖を示す。レーン４：ＩｇＧ抗体トラスツズマブを化合物２２（抗体に対して４０モル当量）で処理し、位置選択的にマレイミドを導入した後、化合物２５をコンジュゲーションさせた複合体。分子量５万付近の上のバンドがトラスツズマブの重鎖にマレイミドが導入され、化合物２５とコンジュゲーションしたことを示す。分子量５万付近の下のバンドが未反応の重鎖、分子量２万５千付近のバンドは未反応の軽鎖を示す。レーン５：ＩｇＧ抗体トラスツズマブを化合物２３（抗体に対して１０モル当量）で処理し、位置選択的にマレイミドを導入した後、化合物２５をコンジュゲーションさせた複合体。分子量５万付近の上のバンドがトラスツズマブの重鎖にマレイミドが導入され、化合物２５とコンジュゲーションしたことを示す。分子量５万付近の下のバンドは未反応の重鎖、分子量２万５千付近のバンドが未反応の軽鎖を示す。レーン６：ＩｇＧ抗体トラスツズマブを化合物２３（抗体に対して２０モル当量）で処理し、位置選択的にマレイミドを導入した後、化合物２５をコンジュゲーションさせた複合体。分子量５万付近の上のバンドがトラスツズマブの重鎖にマレイミドが導入され、化合物２５とコンジュゲーションしたことを示す。分子量５万付近の下のバンドは未反応の重鎖、分子量２万５千付近のバンドが未反応の軽鎖を示す。レーン７：ＩｇＧ抗体トラスツズマブを化合物２３（抗体に対して４０モル当量）で処理し、位置選択的にマレイミドを導入した後、化合物２５をコンジュゲーションさせた複合体。分子量５万付近の上のバンドがトラスツズマブの重鎖にマレイミドが導入され、化合物２５とコンジュゲーションしたことを示す。分子量５万付近の下のバンドが未反応の重鎖、分子量２万５千付近のバンドは未反応の軽鎖を示す。レーン８、１０：未反応のＩｇＧ抗体トラスツズマブ（コントロール、分子量５万付近のバンドが重鎖を分子量２万５千付近のバンドが軽鎖を示す）レーン１１：ＩｇＧ抗体トラスツズマブを化合物２４（抗体に対して１０モル当量）で処理した後、化合物２５を加えた反応混合物。分子量５万付近のバンドは未反応の重鎖、分子量２万５千付近のバンドが未反応の軽鎖を示す。レーン１２：ＩｇＧ抗体トラスツズマブを化合物２４（抗体に対して２０モル当量）で処理した後、化合物２５を加えた反応混合物。分子量５万付近のバンドは未反応の重鎖、分子量２万５千付近のバンドが未反応の軽鎖を示す。レーン１３：ＩｇＧ抗体トラスツズマブを化合物２４（抗体に対して４０モル当量）で処理した後、化合物２５を加えた反応混合物。分子量５万付近のバンドは未反応の重鎖、分子量２万５千付近のバンドが未反応の軽鎖を示す。 図４は、（４－５－１）で合成したトラスツズマブ－マレイミド修飾体の還元後条件でのＥＳＩ－ＴＯＦＭＳを示す図である。上段が未反応のトラスツズマブを測定したもの、下段が修飾体を示す。 図５は、（６－１－１）で合成したトラスツズマブ－アジド修飾体（アジド修飾抗体１）の還元後条件でのＥＳＩ－ＴＯＦＭＳを示す図である。下段が未反応のトラスツズマブを測定したもの、上段が修飾体を示す。 図６は、（６－１－２）で合成したトラスツズマブ－アジド修飾体（アジド修飾抗体３）の還元後条件でのＥＳＩ－ＴＯＦＭＳを示す図である。下段が未反応のトラスツズマブを測定したもの、上段が修飾体を示す。 図７は、（６－１－３）で合成したトラスツズマブ－アジド修飾体（アジド修飾抗体６）の還元後条件でのＥＳＩ－ＴＯＦＭＳを示す図である。上段が未反応のトラスツズマブを測定したもの、下段が修飾体を示す。 図８は、（６－１－３）で合成したトラスツズマブ－アジド修飾体（アジド修飾抗体８）の還元後条件でのＥＳＩ－ＴＯＦＭＳを示す図である。上段が未反応のトラスツズマブを測定したもの、下段が修飾体を示す。 図９は、（６－１－３）で合成したトラスツズマブ－アジド修飾体（アジド修飾抗体１０）の還元後条件でのＥＳＩ－ＴＯＦＭＳを示す図である。上段が未反応のトラスツズマブを測定したもの、下段が修飾体を示す。 図１０は、（６－１－４）で合成したアダリムマブ－アジド修飾体（アジド修飾抗体２８）の還元後条件でのＥＳＩ－ＴＯＦＭＳを示す図である。上段が未反応のアダリムマブを測定したもの、下段が修飾体を示す。 図１１は、（６－１－４）で合成したデノスマブ―アジド修飾抗体（アジド修飾抗体２９）の還元後条件でのＥＳＩ－ＴＯＦＭＳを示す図である。上段が未反応のデノスマブを測定したもの、下段が修飾体を示す。 図１２は、（６－１－４）で合成したデュピルマブ―アジド修飾抗体（アジド修飾抗体３０）の還元後条件でのＥＳＩ－ＴＯＦＭＳを示す図である。上段が未反応のデュピルマブを測定したもの、下段が修飾体を示す。 図１３は、（６－１－４）で合成したリツキシマブ―アジド修飾抗体（アジド修飾抗体３１）の還元後条件でのＥＳＩ－ＴＯＦＭＳを示す図である。下段が未反応のリツキシマブを測定したもの、上段が修飾体を示す。 図１４は、（８－１－１）で合成したトラスツズマブ－保護チオール修飾体の還元後条件でのＥＳＩ－ＴＯＦＭＳを示す図である。上段が未反応のトラスツズマブを測定したもの、下段が修飾体を示す。 図１５は、（８－３－１）で脱保護したトラスツズマブ－チオール修飾体の還元後条件でのＥＳＩ－ＴＯＦＭＳを示す図である。上段が未反応のトラスツズマブを測定したもの、下段が修飾体を示す。 図１６は、（９－１－１）で合成したトラスツズマブ－アジド修飾体の還元後条件でのＥＳＩ－ＴＯＦＭＳを示す図である。上段が未反応のトラスツズマブを測定したもの、下段が修飾体を示す。 図１７は、（９－１－５）で合成したトラスツズマブ－アジド修飾体の還元後条件でのＥＳＩ－ＴＯＦＭＳを示す図である。上段が未反応のトラスツズマブを測定したもの、下段が修飾体を示す。 図１８は、（９－２－２）で合成したトラスツズマブ－アジド修飾体の還元後条件でのＥＳＩ－ＴＯＦＭＳを示す図である。上段が未反応のトラスツズマブを測定したもの、下段が修飾体を示す。 図１９は、（１０－１－１）で合成したトラスツズマブ－Ｃｙ３複合体のＥＳＩ－ＴＯＦＭＳを示す図である。下段が未反応のトラスツズマブを測定したもの、中段が（６－１－１）で合成したトラスツズマブ－アジド修飾体を測定したもの、上段がトラスツズマブ－Ｃｙ３複合体を示す。 図２０は、（１０－１－２）で処理したトラスツズマブ－Ｃｙ３複合体の還元条件でのＥＳＩ－ＴＯＦＭＳを示す図である。下段が未反応のトラスツズマブを測定したもの、中段が（６－１－１）で合成したトラスツズマブ－アジド修飾体を測定したもの、上段がトラスツズマブ－Ｃｙ３複合体を示す。 図２１は、（１０－２－２）で合成したトラスツズマブ－ペプチド複合体のＥＳＩ－ＴＯＦＭＳを示す図である。下段が未反応のトラスツズマブを測定したもの、中段が（６－１－１）で合成したトラスツズマブ－アジド修飾体を測定したもの、上段がトラスツズマブ－Ｃｙ３複合体を示す。 図２２は、（１０－２－３）で処理したトラスツズマブ－Ｃｙ３複合体の還元条件でのＥＳＩ－ＴＯＦＭＳを示す図である。下段が未反応のトラスツズマブを測定したもの、中段が（６－１－１）で合成したトラスツズマブ－アジド修飾体を測定したもの、上段がトラスツズマブ－ペプチド複合体を示す。 図２３は、（１０－３－１）で処理したトラスツズマブ－マレイミド化合物複合体の還元条件でのＥＳＩ－ＴＯＦＭＳを示す図である。上段がトラスツズマブのチオール導入体を測定したもの、下段がトラスツズマブ－マレイミド化合物複合体を示す。 図２４は、（１０－３－２）で処理した反応生成物の還元条件でのＥＳＩ－ＴＯＦＭＳを示す図である。上段がトラスツズマブのチオール導入体を測定したもの、下段がトラスツズマブ－マレイミド化合物複合体を示す。 図２５は、（１）トラスツズマブの重鎖のアミノ酸配列（配列番号２）、（２）トラスツズマブの軽鎖のアミノ酸配列（配列番号４）を示す図である。 図２６は、（１）デノスマブの重鎖のアミノ酸配列（配列番号１０４）、（２）デノスマブの軽鎖のアミノ酸配列（配列番号１０５）を示す図である。 図２７は、（１）デュピルマブの重鎖のアミノ酸配列（配列番号１０６）、（２）デュピルマブの軽鎖のアミノ酸配列（配列番号１０７）を示す図である。 図２８は、アジド安息香酸修飾トラスツズマブのトリプシン消化によるリジン残基への修飾部位を含む、ＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲ（配列番号１１）のペプチドフラグメントのＭＳスペクトルを示す図である。 図２９は、アジド安息香酸修飾トラスツズマブのトリプシン消化によるリジン残基への修飾部位を含む、ＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲ（配列番号１１）のペプチドフラグメントのＣＩＤスペクトルを示す図である。 図３０は、アジド安息香酸修飾トラスツズマブのトリプシン消化によるリジン残基への修飾部位を含む、ＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲ（配列番号１２）のペプチドフラグメントのＭＳスペクトルを示す図である。 図３１は、アジド安息香酸修飾トラスツズマブのトリプシン消化によるリジン残基への修飾部位（アミン安息香酸導入体（＋１１９．０３７Ｄａ））を含む、ＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲ（配列番号１２）のペプチドフラグメントのＣＩＤスペクトルを示す図である。 図３２は、メルカプトプロピオン酸付加マレイミド修飾トラスツズマブのトリプシン消化によるリジン残基への修飾部位を含む、ＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲ（配列番号１１）のペプチドフラグメントのＭＳスペクトルを示す図である。 図３３は、マレイミドＭＰＡ修飾トラスツズマブのトリプシン消化によるリジン残基への修飾部位を含む、ＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲ（配列番号１１）のペプチドフラグメントのＣＩＤスペクトルを示す図である。 図３４は、アルキルアジド修飾トラスツズマブのトリプシン消化によるリジン残基への修飾部位を含む、ＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲ（配列番号１１）のペプチドフラグメントのＭＳスペクトルを示す図である。 図３５は、アルキルアジド修飾トラスツズマブのトリプシン消化によるリジン残基への修飾部位を含む、ＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲ（配列番号１１）のペプチドフラグメントのＣＩＤスペクトルを示す図である。 図３６は、アジド安息香酸修飾トラスツズマブのトリプシン消化によるリジン残基への修飾部位を含む、ＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫ（配列番号１０１）のペプチドフラグメントのＭＳスペクトルを示す図である。 図３７は、アジド安息香酸修飾トラスツズマブのトリプシン消化によるリジン残基への修飾部位を含む、ＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫ（配列番号１０１）のペプチドフラグメントのＣＩＤスペクトルを示す図である。 図３８は、アジド安息香酸修飾トラスツズマブの３１７位のリジン残基が高選択的に修飾されているというＢｉｏＰｈａｒｍａ　Ｆｉｎｄｅｒによる解析結果を示す図である。 図３９は、アジド安息香酸修飾トラスツズマブのトリプシン消化によるリジン残基への修飾部位を含む、ＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲ（配列番号１２）のペプチドフラグメントのＭＳスペクトルを示す図である。 図４０は、アジド安息香酸修飾トラスツズマブのトリプシン消化によるリジン残基への修飾部位を含む、ＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲ（配列番号１２）のペプチドフラグメントのＣＩＤスペクトルを示す図である。 図４１は、アジド安息香酸修飾トラスツズマブの２８８位もしくは２９０位のリジン残基が高選択的に修飾されているというＢｉｏＰｈａｒｍａ　Ｆｉｎｄｅｒによる解析結果を示す図である。 図４２は、アジド安息香酸修飾トラスツズマブのトリプシン消化によるリジン残基への修飾部位を含む、ＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲ（配列番号１１）のペプチドフラグメントのＭＳスペクトルを示す図である。 図４３は、アジド安息香酸修飾トラスツズマブのトリプシン消化によるリジン残基への修飾部位を含む、ＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲ（配列番号１１）のペプチドフラグメントのＣＩＤスペクトルを示す図である。 図４４は、アジド安息香酸修飾トラスツズマブの２４６位もしくは２４８位のリジン残基が高選択的に修飾されているというＢｉｏＰｈａｒｍａ　Ｆｉｎｄｅｒによる解析結果を示す図である。 図４５は、アセチルチオール修飾トラスツズマブのトリプシン消化によるリジン残基への修飾部位を含む、ＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲ（配列番号１１）のペプチドフラグメントのＭＳスペクトルを示す図である。 図４６は、アセチルチオール修飾トラスツズマブのトリプシン消化によるリジン残基への修飾部位を含む、ＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲ（配列番号１１）のペプチドフラグメントのＣＩＤスペクトルを示す図である。 図４７は、アセチルチオール修飾トラスツズマブの２４６位もしくは２４８位のリジン残基が高選択的に修飾されているというＢｉｏＰｈａｒｍａ　Ｆｉｎｄｅｒによる解析結果を示す図である。 図４８は、アジド安息香酸修飾トラスツズマブのトリプシン消化によるリジン残基への修飾部位を含む、ＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲ（配列番号１１）のペプチドフラグメントのＭＳスペクトルを示す図である。 図４９は、アジド安息香酸修飾トラスツズマブのトリプシン消化によるリジン残基への修飾部位を含む、ＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲ（配列番号１１）のペプチドフラグメントのＣＩＤスペクトルを示す図である。 図５０は、アジド安息香酸修飾トラスツズマブのトリプシン消化によるリジン残基への修飾部位を含む、ＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲ（配列番号１２）のペプチドフラグメントのＭＳスペクトルを示す図である。 図５１は、アジド安息香酸修飾トラスツズマブのトリプシン消化によるリジン残基への修飾部位を含む、ＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲ（配列番号１２）のペプチドフラグメントのＣＩＤスペクトルを示す図である。 図５２は、アセチルチオールおよびアジド安息香酸修飾トラスツズマブのトリプシン消化によるリジン残基への修飾部位を含む、ＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲ（配列番号１１）のペプチドフラグメントのＭＳスペクトルを示す図である。 図５３は、アセチルチオールおよびアジド安息香酸修飾トラスツズマブのトリプシン消化によるリジン残基への修飾部位を含む、ＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲ（配列番号１１）のペプチドフラグメントのＣＩＤスペクトルを示す図である。 図５４は、アセチルチオールおよびアジド安息香酸修飾トラスツズマブのトリプシン消化によるリジン残基への修飾部位を含む、ＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲ（配列番号１２）のペプチドフラグメントのＭＳスペクトルを示す図である。 図５５は、アセチルチオールおよびアジド安息香酸修飾トラスツズマブのトリプシン消化によるリジン残基への修飾部位を含む、ＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲ（配列番号１２）のペプチドフラグメントのＣＩＤスペクトルを示す図である。 図５６は、アセチルチオールおよびアジド安息香酸修飾トラスツズマブの２４６位もしくは２４８位および２８８位もしくは２９０位のリジン残基が高選択的に修飾されているというＢｉｏＰｈａｒｍａ　Ｆｉｎｄｅｒによる解析結果を示す図である。 図５７は、安息香酸修飾デノスマブのトリプシン消化によるリジン残基への修飾部位を含む、ＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲ（配列番号１０２）のペプチドフラグメントのＭＳスペクトルを示す図である。 図５８は、安息香酸修飾デノスマブのトリプシン消化によるリジン残基への修飾部位を含む、ＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲ（配列番号１０２）のペプチドフラグメントのＣＩＤスペクトルを示す図である。 図５９は、安息香酸修飾デノスマブの２４７位もしくは２４９位のリジン残基が高選択的に修飾されているというＢｉｏＰｈａｒｍａ　Ｆｉｎｄｅｒによる解析結果を示す図である。 図６０は、安息香酸修飾デュピルマブのトリプシン消化によるリジン残基への修飾部位を含む、ＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲ（配列番号１０３）のペプチドフラグメントのＭＳスペクトルを示す図である。 図６１は、安息香酸修飾デュピルマブのトリプシン消化によるリジン残基への修飾部位を含む、ＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲ（配列番号１０３）のペプチドフラグメントのＣＩＤスペクトルを示す図である。 図６２は、安息香酸修飾デュピルマブの２５１位もしくは２５３位のリジン残基が高選択的に修飾されているというＢｉｏＰｈａｒｍａ　Ｆｉｎｄｅｒによる解析結果を示す図である。 図６３は、ＥＳＩ－ＴＯＦＭＳ（非還元条件下）による、（１２－１－１）で合成したトラスツズマブ－ＤＭ１コンジュゲートの解析結果を示す図である。 図６４は、ＥＳＩ－ＴＯＦＭＳ（還元条件下）による、（１２－１－１）で合成したトラスツズマブ－ＤＭ１コンジュゲートの解析結果を示す図である。 図６５は、ＥＳＩ－ＴＯＦＭＳ（非還元条件下）による、（１２－２－１）で合成したトラスツズマブ－ＭＭＡＥコンジュゲートの解析結果を示す図である。 図６６は、ＥＳＩ－ＴＯＦＭＳ（還元条件下）による、（１２－２－１）で合成したトラスツズマブ－ＭＭＡＥコンジュゲートの解析結果を示す図である。 図６７は、ＥＳＩ－ＴＯＦＭＳ（非還元条件下）による、（１２－３－１）で合成したリツキシマブ－ＤＭ１コンジュゲートの解析結果を示す図である。 図６８は、ＥＳＩ－ＴＯＦＭＳ（還元条件下）による、（１２－３－１）で合成したリツキシマブ－ＤＭ１コンジュゲートの解析結果を示す図である。 図６９は、ＥＳＩ－ＴＯＦＭＳ（非還元条件下）による、（１２－４－１）で合成したリツキシマブ－ＤＭ１コンジュゲートの解析結果を示す図である。 図７０は、ＥＳＩ－ＴＯＦＭＳ（還元条件下）による、（１２－４－１）で合成したリツキシマブ－ＤＭ１コンジュゲートの解析結果を示す図である。 図７１は、（１）トラスツズマブの重鎖中のＦｃ領域、およびＩｇＧ１　Ｆｃ領域のコンセンサスアミノ酸配列（配列番号１）、ならびに（２）ＩｇＧ１　Ｆｃ領域のアミノ酸配列（配列番号３）を示す図である。
１．抗体に対する親和性物質、および生体直交性官能基を有する化合物またはその塩
１－１．概要
　本発明は、式（Ｉ）で表される、抗体に対する親和性物質、および生体直交性官能基を有する化合物またはその塩を提供する。
Ａ－Ｌ－Ｅ－Ｂ　　　（Ｉ）
〔式中、
　Ａは、抗体に対する親和性物質であり、
　Ｌは、脱離基を含む２価の基であり、
　Ｅは、（ｉ）前記脱離基と連結しており、かつ（ｉｉ）前記抗体中の求核基と反応する能力を有する求電子基を含む２価の基であり、
　Ｂは、生体直交性官能基であり、
　前記脱離基は、前記求核基と前記求電子基との間の反応によりＥから切断されて脱離する能力を有する。〕
　本発明に関連して提示される式（Ｉ）および他の式などの表記において、－（ハイフン）は、その両側に存在する２つの単位が共有結合していることを示す。したがって、式（Ｉ）では、Ａは、Ｌと共有結合しており、Ｌは、ＡおよびＥと共有結合しており、Ｅは、ＬおよびＢと共有結合しており、Ｂは、Ｅと共有結合している。式（Ｉ）で表される、抗体に対する親和性物質、および生体直交性官能基を有する化合物またはその塩は、抗体に対する親和性物質（Ａ）が、Ｌ－Ｅ－Ｂを有する構造単位を、ＡとＬとの共有結合を介して含むことを示す。したがって、式（Ｉ）において、抗体に対する親和性物質（Ａ）は、Ｌ－Ｅ－Ｂを有する１個の構造単位、またはＬ－Ｅ－Ｂを有する複数（例えば２～５個、好ましくは２～４個、より好ましくは２または３個）の構造単位（同種または異種）を有していてもよい。
　他の式においても、抗体に対する親和性物質（Ａ）または抗体（Ａｂ）は、式中の特定構造単位（ＡまたはＡｂを除く構造単位）を、共有結合を介して含むことを示す。したがって、他の式においても、抗体に対する親和性物質（Ａ）または抗体（Ａｂ）は、１個の特定構造単位、または複数（例えば２～５個、好ましくは２～４個、より好ましくは２または３個）の特定構造単位（同種または異種）を有していてもよい。
１－２．抗体に対する親和性物質（Ａ）
　式（Ｉ）において、Ａは、抗体に対する親和性物質である。抗体に対する親和性物質とは、抗体に対して非共有結合による結合能を有する物質である。
　本発明で用いられる親和性物質は、抗体を標的とする。抗体は、生体分子（例、糖）で修飾された抗体であっても、生体分子で未修飾の抗体であってもよい。抗体としては、生物由来成分、ウイルス由来成分、および環境中に見出される成分等の任意の成分に対する任意の抗体を用いることができるが、生物由来成分またはウイルス由来成分に対する抗体が好ましい。生物由来成分としては、例えば、哺乳動物、鳥類（例、ニワトリ）等の動物、昆虫、微生物、植物、菌類、および魚類由来の成分（例、タンパク質）が挙げられる。好ましくは、生物由来成分は、哺乳動物由来の成分である。哺乳動物としては、例えば、霊長類（例、ヒト、サル、チンパンジー）、齧歯類（例、マウス、ラット、モルモット、ハムスター、ウサギ）、愛玩動物（例、イヌ、ネコ）、家畜（例、ウシ、ブタ、ヤギ）、使役動物（例、ウマ、ヒツジ）が挙げられる。生物由来成分は、より好ましくは、霊長類または齧歯類由来の成分（例、タンパク質）であり、さらにより好ましくは、本発明の臨床応用の観点から、ヒト由来の成分（例、タンパク質）である。ウイルス由来成分としては、例えば、インフルエンザウイルス（例、トリインフルエンザウイルス、ブタインフルエンザウイルス）、エイズウイルス、エボラウイルス、ファージウイルスに由来する成分（例、タンパク質）が挙げられる。
　抗体はまた、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体であり、好ましくはモノクローナル抗体である。モノクローナル抗体としては、例えば、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、所定の糖鎖が付加された抗体（例、Ｎ型糖鎖結合コンセンサス配列等の糖鎖結合コンセンサス配列を有するように改変された抗体）、二重特異性抗体、ｓｃＦｖ抗体、Ｆａｂ抗体、Ｆ（ａｂ‘）２抗体、ＶＨＨ抗体、Ｆｃ領域タンパク質、Ｆｃ融合タンパク質が挙げられる。抗体はまた、２価の抗体（例、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＥ）、または４価以上の抗体（例、ＩｇＡ抗体、ＩｇＭ抗体）であってもよい。
　親和性物質の標的である抗体はまた、任意のアミノ酸残基から構成されていてもよいが、好ましくは、タンパク質を通常構成する天然の２０種のＬ－α－アミノ酸残基から構成される。このようなアミノ酸残基としては、例えば、Ｌ－アラニン（Ａ）、Ｌ－アスパラギン（Ｎ）、Ｌ－システイン（Ｃ）、Ｌ－グルタミン（Ｑ）、Ｌ－イソロイシン（Ｉ）、Ｌ－ロイシン（Ｌ）、Ｌ－メチオニン（Ｍ）、Ｌ－フェニルアラニン（Ｆ）、Ｌ－プロリン（Ｐ）、Ｌ－セリン（Ｓ）、Ｌ－スレオニン（Ｔ）、Ｌ－トリプトファン（Ｗ）、Ｌ－チロシン（Ｙ）、Ｌ－バリン（Ｖ）、Ｌ－アスパラギン酸（Ｄ）、Ｌ－グルタミン酸（Ｅ）、Ｌ－アルギニン（Ｒ）、Ｌ－ヒスチジン（Ｈ）、またはＬ－リジン（Ｋ）、及びグリシン（Ｇ）が挙げられる（以下、Ｌの表記を省略）。抗体は、例えば１００個以上、好ましくは１２０個以上、より好ましくは１５０個以上、さらにより好ましくは１８０個以上、特に好ましくは２００個以上のアミノ酸残基から構成されていてもよい。抗体はまた、例えば１０００個以下、好ましくは９００個以下、より好ましくは８００個以下、さらにより好ましくは７００個以下、特に好ましくは６００個以下であってもよい。より具体的には、抗体は、例えば１００～１０００個、好ましくは１２０～９００個、より好ましくは１５０～８００個、さらにより好ましくは１８０～７００個以上、特に好ましくは２００～６００個のアミノ酸残基から構成されていてもよい。抗体が抗体（例、上述したようなモノクローナル抗体）である場合、上記個数のアミノ酸残基は、抗体の重鎖のアミノ酸残基に相当するものであってもよい。
　親和性物質の標的である抗体はさらに、後述するような生体直交性官能基が反応できる側鎖または末端（Ｎ末端および/またはＣ末端）、好ましくは側鎖を有する特定のアミノ酸残基を１つの位置または複数の位置（好ましくは複数の位置）で含むタンパク質である。このような特定のアミノ酸残基としては、例えば、後述するようなアミノ酸残基が挙げられるが、好ましくは、リジン残基、チロシン残基、セリン残基、スレオニン残基、およびシステイン残基からなる群より選ばれるアミノ酸残基である。本発明の化合物が抗体を位置選択的に修飾できることに鑑みると、このような特定のアミノ酸残基を複数の位置で含む抗体が好ましい。複数の位置としては、２以上の位置である限り特に限定されないが、例えば３以上の位置、好ましくは５以上の位置、より好ましくは１０以上の位置、さらにより好ましくは２０以上の位置、特に好ましくは３０以上の位置であってもよい。複数の位置はまた、例えば２００以下の位置、好ましくは１８０以下の位置、より好ましくは１５０以下の位置、さらにより好ましくは１２０以下の位置、特に好ましくは１００以下の位置であってもよい。より具体的には、複数の位置は、例えば３～２００の位置、好ましくは５～１８０の位置、より好ましくは１０～１５０の位置、さらにより好ましくは２０～１２０の位置、特に好ましくは３０～１００の位置であってもよい。このような特定のアミノ酸残基を複数の位置で含む抗体であっても、本発明の化合物は、特定の領域に存在する１または２個の特定のアミノ酸残基を位置選択的に修飾することができる。例えば、ヒトＩｇＧ１のリジン残基数は、可変領域中のアミノ酸組成にもよるが、一般的には７０～９０個程度と言われている。本発明では、このようなヒトＩｇＧ１の特定の領域に存在する１または２個のリジン残基を位置選択的に修飾することに成功している。
　より具体的には、本発明では、抗体の機能を維持しつつ（すなわち、抗体を変性させずにネイティブなフォールディングを維持しつつ）、抗体中の特定の標的部位に存在するアミノ酸残基を修飾する観点から、抗体の表面に露出しているアミノ酸残基の位置選択的な修飾が好ましい。例えば、ヒトＩｇＧ１等のヒトＩｇＧでは、露出リジン残基および露出チロシン残基は、以下の位置に存在する（ＥＵ　ｎｕｍｂｅｒｉｎｇによる；ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／ＩＭＧＴＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＣｈａｒｔ／Ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ／Ｈｕ＿ＩＧＨＧｎｂｅｒ．ｈｔｍｌを参照）。
（１）露出リジン残基
ＣＨ２ドメイン（２４６位、２４８位、２７４位、２８８位、２９０位、３１７位、３２０位、３２２位、３３８位）
ＣＨ３ドメイン（３６０位、４１４位、４３９位）
（２）露出チロシン残基
ＣＨ２ドメイン（２７８位、２９６位、３００位）
ＣＨ３ドメイン（４３６位）
（３）露出セリン残基
ＣＨ２ドメイン（２５４位、２６７位、２９８位、３２４位）
ＣＨ３ドメイン（３７５位、４００位、４１５位、４４０位、４４２位）
（４）露出スレオニン残基
ＣＨ２ドメイン（２５６位、２８９位、３０７位）
ＣＨ３ドメイン（３３５位、３５９位、３９３位、４３７位）
したがって、ヒトＩｇＧ１等のヒトＩｇＧがリジン残基またはチロシン残基で修飾される場合、上記位置での修飾が好ましい。
　好ましくは、ヒトＩｇＧ１等のヒトＩｇＧがリジン残基、チロシン残基、セリン残基またはスレオニン残基で修飾される場合、上記（１）～（４）の位置のなかでも、表面への露出性が高い以下の位置に存在するリジン残基、チロシン残基、セリン残基またはスレオニン残基が修飾されてもよい。
（１’）露出リジン残基
ＣＨ２ドメイン（２４６位、２４８位、２７４位、２８８位、２９０位、３１７位、３２０位、３２２位）
ＣＨ３ドメイン（３６０位、４１４位、４３９位）
（２’）露出チロシン残基
ＣＨ２ドメイン（２７８位、２９６位、３００位）
ＣＨ３ドメイン（４３６位）
（３’）露出セリン残基
ＣＨ２ドメイン（２５４位、２６７位、２９８位）
ＣＨ３ドメイン（４００位、４１５位、４４０位）
（４’）露出スレオニン残基
ＣＨ２ドメイン（２５６位、２８９位）
ＣＨ３ドメイン（３３５位、３５９位）
したがって、ヒトＩｇＧ１等のヒトＩｇＧがリジン残基、チロシン残基、セリン残基またはスレオニン残基で修飾される場合、上記位置での修飾がより好ましい。
　より好ましくは、ヒトＩｇＧ１等のヒトＩｇＧがリジン残基で修飾される場合、上記（１）の位置のなかでも、本発明において効率的に修飾することができるＣＨ２ドメイン中の所定の位置（例、２４６位、２４８位、２８８位、２９０位、３１７位）に存在するリジン残基が修飾されてもよい。
　特定の実施形態では、親和性物質の標的である抗体は、上述したように特定のアミノ酸残基を複数の位置で含む場合、連続する１～５０個のアミノ酸残基からなる標的領域中において特定のアミノ酸残基を１個以上含み、かつ、前記標的領域以外の非標的領域中において特定のアミノ酸残基を５個以上含むものであってもよい。標的領域は、好ましくは１～３０個、より好ましくは１～２０個、さらにより好ましくは１～１０個、１～５個、または１～３個（すなわち、１個、２個、もしくは３個）のアミノ酸残基からなるものであってもよい。特に好ましくは、標的領域は、特定の位置に存在する特定のアミノ酸残基からなる領域であってもよい。このような特定の位置は、標的タンパク質および親和性物質の種類などによっても変動するが、例えば、抗体の定常領域中の特定領域（例、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３）中の特定の位置であってもよく、好ましくは抗体のＣＨ２中の位置であってもよい。より具体的には、標的領域は、ヒトＩｇＧ　ＦｃにおけるＥｕ　ｎｕｍｂｅｒｉｎｇに従う下記残基であってもよい：
（１）Ｌｙｓ２４８残基（以下、本明細書では単に「Ｌｙｓ２４８」とも表記し、ヒトＩｇＧ　ＣＨ２領域（配列番号１）の１８番目の残基に相当する）またはＬｙｓ２４６残基（以下、本明細書では単に「Ｌｙｓ２４６」とも表記し、ヒトＩｇＧ　ＣＨ２領域（配列番号１）の１６番目の残基に相当する）：
（２）Ｌｙｓ２８８残基（以下、本明細書では単に「Ｌｙｓ２８８」とも表記し、ヒトＩｇＧ　ＣＨ２領域（配列番号１）の５８番目の残基に相当する）またはＬｙｓ２９０残基（以下、本明細書では単に「Ｌｙｓ２９０」とも表記し、ヒトＩｇＧ　ＣＨ２領域（配列番号１）の６０番目の残基に相当する）；
（３）Ｌｙｓ３１７残基（以下、本明細書では単に「Ｌｙｓ３１７」とも表記し、ヒトＩｇＧ　ＣＨ２領域（配列番号１）の８７番目の残基に相当する）。
　本発明によれば、上記標的領域における特定のアミノ酸残基を高度に位置選択的に修飾することができる。このような位置選択性は、例えば３０％以上、好ましくは４０％以上、より好ましくは５０％以上、さらにより好ましくは６０％以上、特に好ましくは７０％以上、８０％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上、または１００％であってもよい。
　標的領域はまた、特定の位置に存在する特定のアミノ酸残基が、当該特定の位置を中心としてそれぞれＮ末端側およびＣ末端側に対してａ個（ここで、ａは、１～１０の任意の整数である）のアミノ酸残基の遠隔位置までの領域において、当該特定の位置に存在する特定のアミノ酸残基以外に、特定のアミノ酸残基と同種のアミノ酸残基を含まないものであってもよい。ａは、好ましくは１～５の整数であり、より好ましくは１～３の整数であり、さらにより好ましくは１または２であり、特に好ましくは１である。
　好ましい実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体である。モノクローナル抗体等の抗体のアイソタイプとしては、例えば、ＩｇＧ（例、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、およびＩｇＹが挙げられる。モノクローナル抗体は、全長抗体、または抗体断片（例、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、Ｆｖ、単鎖抗体）であるが、全長抗体が好ましい。特に好ましくは、抗体は、ヒトＩｇＧ（例、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）を定常領域に有するヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体である。
　抗体は、任意の抗原に対する抗体である。例えば、このような抗原は、上述したような生物またはウイルスにおいて見出される成分であってもよい。このような抗原としてはまた、例えば、タンパク質〔オリゴペプチド、ポリペプチドを含む。糖等の生体分子で修飾されたタンパク質（例、糖タンパク質）であってもよい〕、糖鎖、核酸、低分子化合物が挙げられる。
　好ましくは、抗体は、タンパク質を抗原とする抗体であってもよい。タンパク質としては、例えば、細胞膜受容体、細胞膜受容体以外の細胞膜タンパク質（例、細胞外基質タンパク質）、リガンド、可溶性受容体が挙げられる。
　より具体的には、抗体の抗原であるタンパク質は、疾患標的タンパク質であってもよい。疾患標的タンパク質としては、例えば、以下が挙げられる。
（１）がん領域
　ＰＤ－Ｌ１、ＧＤ２、ＰＤＧＦＲα（血小板由来成長因子受容体）、ＣＤ２２、ＨＥＲ２、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、ＥｐＣＡＭ、フィブロネクチン、ＰＤ－１、ＶＥＧＦＲ－２、ＣＤ３３、ＨＧＦ、ｇｐＮＭＢ、ＣＤ２７、ＤＥＣ－２０５、葉酸受容体、ＣＤ３７、ＣＤ１９、Ｔｒｏｐ２、ＣＥＡＣＡＭ５、Ｓ１Ｐ、ＨＥＲ３、ＩＧＦ－１Ｒ、ＤＬＬ４、ＴＮＴ－１／Ｂ、ＣＰＡＡｓ、ＰＳＭＡ、ＣＤ２０、ＣＤ１０５（エンドグリン）、ＩＣＡＭ－１、ＣＤ３０、ＣＤ１６Ａ、ＣＤ３８、ＭＵＣ１、ＥＧＦＲ、ＫＩＲ２ＤＬ１，２，、ＮＫＧ２Ａ、ｔｅｎａｓｃｉｎ－Ｃ、ＩＧＦ（Ｉｎｓｕｌｉｎ－ｌｉｋｅ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ）、ＣＴＬＡ－４、ｍｅｓｏｔｈｅｌｉｎ、ＣＤ１３８、ｃ－Ｍｅｔ、Ａｎｇ２、ＶＥＧＦ－Ａ、ＣＤ７９ｂ、ＥＮＰＤ３、葉酸受容体α、ＴＥＭ－１、ＧＭ２、グリピカン３、ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｆａｃｔｏｒ、ＣＤ７４、Ｎｏｔｃｈ１、Ｎｏｔｃｈ２、Ｎｏｔｃｈ３、ＣＤ３７、ＴＬＲ－２、ＣＤ３、ＣＳＦ－１Ｒ、ＦＧＦＲ２ｂ、ＨＬＡ－ＤＲ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＥｐｈＡ３、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ１２３、ｇｐＡ３３、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ７受容体、ＤＬＬ４、ＶＥＧＦ、ＲＳＰＯ、ＬＩＶ－１、ＳＬＩＴＲＫ６、Ｎｅｃｔｉｎ－４、ＣＤ７０、ＣＤ４０、ＣＤ１９、ＳＥＭＡ４Ｄ（ＣＤ１００）、ＣＤ２５、ＭＥＴ、Ｔｉｓｓｕｅ　Ｆａｃｔｏｒ、ＩＬ－８、ＥＧＦＲ、ｃＭｅｔ、ＫＩＲ３ＤＬ２、Ｂｓｔ１（ＣＤ１５７）、Ｐ－カドヘリン、ＣＥＡ、ＧＩＴＲ、ＴＡＭ（ｔｕｍｏｒ　ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ）、ＣＥＡ、ＤＬＬ４、Ａｎｇ２、ＣＤ７３、ＦＧＦＲ２、ＣＸＣＲ４、ＬＡＧ－３、ＧＩＴＲ、Ｆｕｃｏｓｙｌ　ＧＭ１、ＩＧＦ－１、Ａｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ　２、ＣＳＦ－１Ｒ、ＦＧＦＲ３、ＯＸ４０、ＢＣＭＡ、ＥｒｂＢ３、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＰＴＫ７、ＥＦＮＡ４、ＦＡＰ、ＤＲ５、ＣＥＡ、Ｌｙ６Ｅ、ＣＡ６、ＣＥＡＣＡＭ５、ＬＡＭＰ１、ｔｉｓｓｕｅ　ｆａｃｔｏｒ、ＥＰＨＡ２、ＤＲ５、Ｂ７－Ｈ３、ＦＧＦＲ４、ＦＧＦＲ２、α２－ＰＩ、Ａ３３、ＧＤＦ１５、ＣＡＩＸ、ＣＤ１６６、ＲＯＲ１、ＧＩＴＲ、ＢＣＭＡ、ＴＢＡ、ＬＡＧ－３、ＥｐｈＡ２、ＴＩＭ－３、ＣＤ－２００、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＣＤ１６Ａ、ＣＤ３２Ｂ、ＰＩＧＦ、Ａｘｌ、ＭＩＣＡ／Ｂ、Ｔｈｏｍｓｅｎ－Ｆｒｉｅｄｅｎｒｅｉｃｈ、ＣＤ３９、ＣＤ３７、ＣＤ７３、ＣＬＥＣ１２Ａ、Ｌｇｒ３、トランスフェリン受容体、ＴＧＦβ、ＩＬ－１７、５Ｔ４、ＲＴＫ、Ｉｍｍｕｎｅ　Ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ　Ｐｒｏｔｅｉｎ、ＮａＰｉ２ｂ、ルイス血液型Ｂ抗原、Ａ３４、Ｌｙｓｉｌ－Ｏｘｉｄａｓｅ、ＤＬＫ－１、ＴＲＯＰ－２、α９インテグリン、ＴＡＧ－７２（ＣＡ７２－４）、ＣＤ７０
（２）自己免疫疾患・炎症性疾患
　ＩＬ－１７、ＩＬ－６Ｒ、ＩＬ－１７Ｒ、ＩＮＦ－α、ＩＬ－５Ｒ、ＩＬ－１３、ＩＬ－２３、ＩＬ－６、ＡｃｔＲＩＩＢ、β７－Ｉｎｔｅｇｒｉｎ、ＩＬ－４αＲ、ＨＡＳ、Ｅｏｔａｘｉｎ－１、ＣＤ３、ＣＤ１９、ＴＮＦ－α、ＩＬ－１５、ＣＤ３ε、Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ、ＩＬ－１β、ＩＬ－１α、ＩＬ－１７、ＴＳＬＰ（Ｔｈｙｍｉｃ　Ｓｔｒｏｍａｌ　Ｌｙｍｐｈｏｐｏｉｅｔｉｎ）、ＬＡＭＰ（Ａｌｐｈａ４　Ｂｅｔａ　７　Ｉｎｔｅｇｒｉｎ）、ＩＬ－２３、ＧＭ－ＣＳＦＲ、ＴＳＬＰ、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＴＬＲ－３、ＢＡＦＦ－Ｒ、ＭＡｄＣＡＭ、ＩＬ－３１Ｒ、ＩＬ－３３、ＣＤ７４、ＣＤ３２Ｂ、ＣＤ７９Ｂ、ＩｇＥ（免疫グロブリンＥ）、ＩＬ－１７Ａ、ＩＬ－１７Ｆ、Ｃ５、ＦｃＲｎ、ＣＤ２８、ＴＬＲ４、ＭＣＡＭ、Ｂ７ＲＰ１、ＣＸＣＲ１，２　Ｌｉｇａｎｄｓ、ＩＬ－２１、Ｃａｄｈｅｒｉｎ－１１、ＣＸ３ＣＬ１、ＣＣＬ２０、ＩＬ－３６Ｒ、ＩＬ－１０Ｒ、ＣＤ８６、ＴＮＦ－α、ＩＬ－７Ｒ、Ｋｖ１．３、α９インテグリン、ＬＩＦＨＴ
（３）脳神経疾患
　ＣＧＲＰ、ＣＤ２０、βアミロイド、βアミロイドプロトフィブリン、Ｃａｌｃｉｔｏｎｉｎ　Ｇｅｎｅ－Ｒｅｌａｔｅｄ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　Ｒｅｃｅｐｔｏｒ、ＬＩＮＧＯ（Ｉｇ　Ｄｏｍａｉｎ　Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ１）、αシヌクレイン、細胞外ｔａｕ、ＣＤ５２、インスリン受容体、ｔａｕタンパク、ＴＤＰ－４３、ＳＯＤ１、ＴａｕＣ３、ＪＣウイルス
（４）感染症
　Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ　Ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ　ｔｏｘｉｎ　Ｂ、サイトメガロウイルス、ＲＳウイルス、ＬＰＳ、Ｓ．Ａｕｒｅｕｓ　Ａｌｐｈａ－ｔｏｘｉｎ、Ｍ２ｅタンパク、Ｐｓｌ、ＰｃｒＶ、Ｓ．Ａｕｒｅｕｓ　ｔｏｘｉｎ、インフルエンザＡ、Ａｌｇｉｎａｔｅ、黄色ブドウ球菌、ＰＤ－Ｌ１、インフルエンザＢ、アシネトバクター、Ｆ－ｐｒｏｔｅｉｎ、Ｅｎｖ、ＣＤ３、病原性大腸菌、クレブシエラ、肺炎球菌
（５）遺伝性・希少疾患
　アミロイドＡＬ、ＳＥＭＡ４Ｄ（ＣＤ１００）、インスリン受容体、ＡＮＧＰＴＬ３、ＩＬ４、ＩＬ１３、ＦＧＦ２３、副腎皮質刺激ホルモン、トランスサイレチン、ハンチンチン
（６）眼疾患
　Ｆａｃｔｏｒ　Ｄ、ＩＧＦ－１Ｒ、ＰＧＤＦＲ、Ａｎｇ２、ＶＥＧＦ－Ａ、ＣＤ－１０５（Ｅｎｄｏｇｌｉｎ）、ＩＧＦ－１Ｒ、βアミロイド
（７）骨・整形外科領域
Ｓｃｌｅｒｏｓｔｉｎ、Ｍｙｏｓｔａｔｉｎ、Ｄｉｃｋｋｏｐｆ－１、ＧＤＦ８、ＲＮＡＫＬ、ＨＡＳ、Ｓｉｇｌｅｃ－１５
（８）血液疾患
　ｖＷＦ、Ｆａｃｔｏｒ　ＩＸａ、Ｆａｃｔｏｒ　Ｘ、ＩＦＮγ、Ｃ５、ＢＭＰ－６、Ｆｅｒｒｏｐｏｒｔｉｎ、ＴＦＰＩ
（９）その他の疾患
　ＢＡＦＦ（Ｂ　ｃｅｌｌ　ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ　ｆａｃｔｏｒ）、ＩＬ－１β、ＰＣＳＫ９、ＮＧＦ、ＣＤ４５、ＴＬＲ－２、ＧＬＰ－１、ＴＮＦＲ１、Ｃ５、ＣＤ４０、ＬＰＡ、プロラクチン受容体、ＶＥＧＦＲ－１、ＣＢ１、Ｅｎｄｏｇｌｉｎ、ＰＴＨ１Ｒ、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ８、ＩＬ－１β、ＡＴ２－Ｒ、ＩＡＰＰ
　より好ましい実施形態では、抗体に対する親和性物質は、モノクローナル抗体に対する親和性物質である。モノクローナル抗体のアイソタイプは、抗体について上述したものと同様であるが、ＩｇＧ（例、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）が好ましい。好ましくは、モノクローナル抗体は、全長モノクローナル抗体である。
　さらにより好ましい実施形態では、抗体に対する親和性物質は、全長モノクローナル抗体であるキメラ抗体、ヒト化抗体、またはヒト抗体（例、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４等のＩｇＧ）に対する親和性物質である。
　特に好ましい実施形態では、抗体に対する親和性物質は、下記（Ａ）～（Ｃ）からなる群より選ばれるいずれか一つのＦｃ領域タンパク質を含み、かつ抗原結合能を有する抗体に対する親和性物質である：
（Ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＦｃ領域タンパク質；
（Ｂ）配列番号１のアミノ酸配列において、１もしくは数個のアミノ酸残基が挿入、付加、欠失もしくは置換されたアミノ酸配列を含むＦｃ領域タンパク質；または
（Ｃ）配列番号１のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を示すアミノ酸配列を含むＦｃ領域タンパク質。
　配列番号１のアミノ酸配列は、Ｆｃ領域タンパク質である。このようなＦｃ領域タンパク質は、分泌能を有することが知られている。したがって、上記（Ａ）～（Ｃ）のＦｃ領域タンパク質は、分泌能を有することができる。また、このようなＦｃ領域タンパク質を含む抗体は、抗原結合能を有することができる。配列番号１における１８位のアミノ酸残基は、任意のアミノ酸残基であるが、好ましくは中性アミノ酸残基であり、より好ましくは後述するような非極性側鎖を有するアミノ酸残基であり、さらにより好ましくはロイシン、イソロイシンまたはアラニンであり、特に好ましくはロイシンまたはアラニンである。配列番号１における１９位のアミノ酸残基は、任意のアミノ酸残基であるが、好ましくは中性アミノ酸残基または酸性アミノ酸残基であり、より好ましくは非極性側鎖を有するアミノ酸残基または酸性アミノ酸残基であり、さらにより好ましくはロイシンまたはグルタミン酸である。配列番号１における２１位のアミノ酸残基は、任意のアミノ酸残基であるが、好ましくは中性アミノ酸残基であり、より好ましくは非極性側鎖を有するアミノ酸残基であり、さらにより好ましくはグリシンまたはアラニンである。配列番号１における１４０位のアミノ酸残基は、任意のアミノ酸残基であるが、好ましくは酸性アミノ酸残基であり、より好ましくはグルタミン酸またはアスパラギン酸である。配列番号１における１４２位のアミノ酸残基は、任意のアミノ酸残基であるが、好ましくは中性アミノ酸残基であり、より好ましくは非極性側鎖を有するアミノ酸残基であり、さらにより好ましくはメチオニン、ロイシンまたはイソロイシンであり、特に好ましくはメチオニンまたはロイシンである。配列番号１における１７７位のアミノ酸残基は、任意のアミノ酸残基であるが、好ましくは中性アミノ酸残基であり、より好ましくは後述するような非荷電性極性側鎖を有するアミノ酸残基または非極性側鎖を有するアミノ酸残基であり、さらにより好ましくはスレオニン、アラニンまたはグリシンであり、特に好ましくはスレオニンまたはアラニンである。
　好ましい実施形態では、配列番号１のアミノ酸配列は、配列番号２のアミノ酸配列における２２０～４４９位のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列であってもよい。
　別の好ましい実施形態では、配列番号１のアミノ酸配列は、配列番号３のアミノ酸配列における７～２３６位のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列であってもよい。
　特定の実施形態では、上述したようなアミノ酸配列を含むＦｃ領域タンパク質を含む抗体は、上述したようなアミノ酸配列を含むＦｃ領域タンパク質、および抗体の定常領域を含む抗体であってもよい。このような抗体の定常領域としては、キメラ抗体、ヒト化抗体、またはヒト抗体（例、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４等のＩｇＧ）の定常領域であってもよい。
　Ｆｃ領域タンパク質（Ｂ）では、アミノ酸残基の欠失、置換、付加および挿入からなる群より選ばれる１、２、３または４種の変異により、１個または数個のアミノ酸残基が改変され得る。アミノ酸残基の変異は、アミノ酸配列中の１つの領域に導入されてもよいが、複数の異なる領域に導入されてもよい。用語「１個または数個」は、タンパク質の活性を大きく損なわない個数を示す。用語「１個または数個」が示す数は、例えば、１～１００個、好ましくは１～８０個、より好ましくは１～５０個、１～３０個、１～２０個、１～１０個または１～５個（例、１個、２個、３個、４個、または５個）である。
　Ｆｃ領域タンパク質（Ｃ）では、配列番号１のアミノ酸配列との同一性％は、７０％以上、７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９１％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上または９９％以上であってもよい。本発明では、ペプチドまたはポリペプチド（タンパク質）の同一性％の算出は、アルゴリズムｂｌａｓｔｐにより行うことができる。より具体的には、ポリペプチドの同一性の算定％は、Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃｅｎｔｅｒ　ｆｏｒ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）において提供されているアルゴリズムｂｌａｓｔｐにおいて、デフォルト設定のＳｃｏｒｉｎｇ　Ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ（Ｍａｔｒｉｘ：ＢＬＯＳＵＭ６２；Ｇａｐ　Ｃｏｓｔｓ：Ｅｘｉｓｔｅｎｃｅ＝１１　Ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ＝１；Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｌ　Ａｄｊｕｓｔｍｅｎｔｓ：Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎａｌ　ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｌ　ｓｃｏｒｅ　ｍａｔｒｉｘ　ａｄｊｕｓｔｍｅｎｔ）を用いて行うことができる。また、ポリヌクレオチド（遺伝子）の同一性％の算出は、アルゴリズムｂｌａｓｔｎにより行うことができる。より具体的には、ポリヌクレオチドの同一性％の算定は、ＮＣＢＩにおいて提供されているアルゴリズムｂｌａｓｔｎにおいて、デフォルト設定のＳｃｏｒｉｎｇ　Ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ（Ｍａｔｃｈ／Ｍｉｓｍａｔｃｈ　Ｓｃｏｒｅｓ＝１，－２；Ｇａｐ　Ｃｏｓｔｓ＝Ｌｉｎｅａｒ）を用いて行うことができる。
　分泌能における分泌は、分泌タンパク質の分泌（いわゆる可溶性）と同じ意味である。したがって、「分泌能を有する」とは、通常の抗体と同様に、抗体として機能することを意味する。
　上記Ｆｃ領域タンパク質を含む抗体は、目的の特性（例、分泌能、抗原結合能）を保持する限り、特定の部位に、変異が導入されていてもよい。目的の特性を保持し得る、変異が導入されてもよいアミノ酸残基の位置は、当業者に明らかである。具体的には、当業者は、１）同種の特性を有する複数のタンパク質のアミノ酸配列を比較し、２）相対的に保存されている領域、および相対的に保存されていない領域を明らかにし、次いで、３）相対的に保存されている領域および相対的に保存されていない領域から、それぞれ、機能に重要な役割を果たし得る領域および機能に重要な役割を果たし得ない領域を予測できるので、構造・機能の相関性を認識することができる。したがって、当業者は、上記Ｆｃ領域タンパク質を含む抗体のアミノ酸配列において変異が導入されてもよいアミノ酸残基の位置を特定できる。
　アミノ酸残基が置換により変異される場合、アミノ酸残基の置換は、保存的置換であってもよい。本明細書中で用いられる場合、用語「保存的置換」とは、所定のアミノ酸残基を、類似の側鎖を有するアミノ酸残基で置換することをいう。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当該分野で周知である。例えば、このようなファミリーとしては、塩基性側鎖を有するアミノ酸（例、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖を有するアミノ酸（例、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電性極性側鎖を有するアミノ酸（例、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖を有するアミノ酸（例、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、β位分岐側鎖を有するアミノ酸（例、スレオニン、バリン、イソロイシン）、芳香族側鎖を有するアミノ酸（例、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）、ヒドロキシル基（例、アルコール性、フェノール性）含有側鎖を有するアミノ酸（例、セリン、スレオニン、チロシン）、および硫黄含有側鎖を有するアミノ酸（例、システイン、メチオニン）が挙げられる。好ましくは、アミノ酸の保存的置換は、アスパラギン酸とグルタミン酸との間での置換、アルギニンとリジンとヒスチジンとの間での置換、トリプトファンとフェニルアラニンとの間での置換、フェニルアラニンとバリンとの間での置換、ロイシンとイソロイシンとアラニンとの間での置換、およびグリシンとアラニンとの間での置換であってもよい。
　本発明で用いられる抗体、または上記（Ａ）～（Ｃ）からなる群より選ばれるいずれか一つのＦｃ領域を含む抗体としては、例えば、キメラ抗体（例、リツキシマブ、バシリキシマブ、インフリキシマブ、セツキシマブ、シルツキシマブ、ディヌツキシマブ、オルタトキサシマブ）、ヒト化抗体（例、ダクリヅマブ、パリビズマブ、トラスツズマブ、アレンツズマブ、オマリヅマブ、エファリヅマブ、ベバシヅマブ、ナタリヅマブ（ＩｇＧ４）、トシリヅマブ、エクリヅマブ（ＩｇＧ２）、モガムリヅマブ、ペルツヅマブ、オビヌツヅマブ、ベドリヅマブ、ペンプロリヅマブ（ＩｇＧ４）、メポリヅマブ、エロツヅマブ、ダラツムマブ、イケセキヅマブ（ＩｇＧ４）、レスリヅマブ（ＩｇＧ４）、アテゾリヅマブ）、ヒト抗体（例、アダリムマブ、パニツムマブ、ゴリムマブ、ウステキヌマブ、カナキヌマブ、オファツムマブ、デノスマブ（ＩｇＧ２）、イピリムマブ、ベリムマブ、ラキシバクマブ、ラムシルマブ、ニボルマブ（ＩｇＧ４）、セクキヌマブ、エボロクマブ（ＩｇＧ２）、アリロクマブ、ネシツムマブ、ブロダルマブ（ＩｇＧ２）、オララツマブ、デュピルマブ（ＩｇＧ４））が挙げられる（ＩｇＧサブタイプに言及していない場合、ＩｇＧ１であることを示す）。
　上述したような抗体に対する親和性物質としては、例えば、ペプチド（オリゴペプチド、ポリペプチド、およびタンパク質を含む）、低分子化合物、核酸、核酸-ペプチド複合体、ペプチド－低分子化合物複合体、核酸―低分子複合体挙げられる。
　特定の実施形態では、上述したような抗体に対する親和性物質は、ペプチド（オリゴペプチド、ポリペプチド、タンパク質を含む。糖タンパク質であってもよい）であってもよい。このようなペプチドとしては、例えば、以下が報告されている：
（１）ヒトＩｇＧ全般（すなわち、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４。以下同様）の特定領域（ＣＨ２領域）に親和性を有するＩｇＧ結合ペプチド（例、国際公開第２０１６／１８６２０６号、国際公開２０１３／０２７７９６号、国際公開第２００８／０５４０３０号を参照）；
（２）ヒトＩｇＧ全般の特定領域（ＣＨ２領域）に親和性を有するＰｒｏｔｅｉｎＡ　Ｍｉｍｅｔｉｃ（ＰＡＭ）　ｐｅｐｔｉｄｅ（例、Ｆａｓｓｉｎａ　Ｇ　ｅｔ　ａｌ．，ＪＯＵＲＮＡＬ　ＯＦ　ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ　ＲＥＣＯＧＮＩＴＩＯＮ，１９９６，ＶＯＬ．６，５６４－５６９を参照）；
（３）ヒトＩｇＧ全般の特定領域（ＣＨ２領域）に親和性を有するＥＰＩＨＲＳＴＬＴＡＬＬ（配列番号２５）（例、Ｅｈｒｌｉｃｈ　Ｇ．Ｋ　ｅｔ　ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，２００１，ＶＯＬ．４９，４４３－４５４を参照）；
（４）ヒトＩｇＧ全般の特定領域（Ｆｃ領域）に親和性を有する（ＮＨ２－Ｃｙｓ１－Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４）２－Ｌｙｓ－Ｇｌｙ－ＯＨ（例、Ｒｕｖｏ　Ｍ　ｅｔ　ａｌ．，ＣｈｅｍＢｉｏＣｈｅｍ，２００５，ＶＯＬ．６，１２４２－１２５３を参照）；
（５）ヒトＩｇＧ全般の特定領域（Ｆｃ領域）に親和性を有するＦＡＲＬＶＳＳＩＲＹ（配列番号２６）、ＦＧＲＬＶＳＳＩＲＹ（配列番号２７）、およびＴＷＫＴＳＲＩＳＩＦ（配列番号２８）（例、Ｋｒｏｏｋ　Ｍ　ｅｔ　ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｍｅｔｈｏｄｓ，１９９８，ＶＯＬ．２２１，１５１－１５７を参照）；
（６）ヒトＩｇＧ全般の特定領域に親和性を有するＱＳＹＰ（配列番号２９）（例、Ｊａｃｏｂｓ　Ｊ．Ｍ．　ｅｔ　ａｌ．，Ｂｉｏ．Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，２００３，ＶＯＬ．３４，１３２－１４１を参照）；
（７）ヒトＩｇＧ全般の特定領域（Ｆｃ領域）に親和性を有するＨＷＲＧＷＶ（配列番号３０）、ＨＹＦＫＦＤ（配列番号３１）、およびＨＦＲＲＨＬ（配列番号３２）（例、Ｃａｒｂｏｎｅｌｌ　Ｒ．Ｇ．　ｅｔ　ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　Ａ，２００９，ＶＯＬ．１２１６，９１０－９１８を参照）；
（８）ヒトＩｇＧ全般の特定領域（Ｆｃ領域）に親和性を有するＤＡＡＧ（配列番号３３）（例、Ｌｕｎｄ　Ｌ．Ｎ．　ｅｔ　ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　Ａ，２０１２，ＶＯＬ．１２２５，１５８－１６７を参照）；
（９）ヒトＩｇＧ全般の特定領域（Ｆｃ領域）に親和性を有するＦｃ－Ｉ、Ｆｃ－ＩＩ、およびＦｃ－ＩＩＩ（例、Ｗａｒｒｅｎ　Ｌ．Ｄｅｌａｎｏ　ｅｔ　ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０００，ＶＯＬ．２８７，１２７９－１２８３；国際公開２００１／０４５７４６号を参照）；ならびに
（１０）ヒトＩｇＧ全般の特定領域（Ｆｃ領域）に親和性を有するＮＡＲＫＦＹＫＧ（配列番号３４）、およびＮＫＦＲＧＫＹＫ（配列番号３５）（例、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　Ｊｏｕｒｎａｌ，２０１３，ＶＯＬ．７９，３３－４０を参照）。
　別の特定の実施形態では、上述したような抗体に対する親和性物質は、ペプチド以外の物質であってもよい。このような物質としては、例えば、ヒトＩｇＧ（例、ヒトＩｇＧ１～４）の特定領域（ＣＨ２領域、特にＬｙｓ３４０の側鎖）に親和性を有するアプタマー〔例、ＧＧＵＧＣＵおよびＧＧＵＧＡＵ等のＧＧＵＧ（Ｃ／Ａ）（Ｕ／Ｔ）モチーフ含有アプタマー〕が報告されている（例、国際公開第２００７／００４７４８号公報；Ｎｏｍｕｒａ　Ｙ　ｅｔ　ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄｓ　Ｒｅｓ．，２０１０　Ｎｏｖ；３８（２１）：７８２２－９；Ｍｉｙａｋａｗａ　Ｓ　ｅｔ　ａｌ．，ＲＮＡ．，２００８　Ｊｕｎ；１４（６）：１１５４－６３を参照）。
　上述したような抗体に対する親和性物質は、当該分野における任意の公知の方法により得ることができる。例えば、抗体全体、または抗体中の部分ペプチド（例、抗体表面露出領域が判明している場合、当該領域中に存在する部分ペプチド）を用いて、抗体を作製することにより（例、ハイブリドーマ法）、または親和性物質を入手可能なライブラリ（例、ペプチドライブラリ、抗体ライブラリ、抗体産生細胞ライブラリ、アプタマーライブラリ、ファージライブラリ、ｍＲＮＡライブラリ、ｃＤＮＡライブラリ）から親和性物質をスクリーニングすることにより（例、ファージディスプレイ法、ＳＥＬＥＸ法、ｍＲＮＡディスプレイ法、リボソームディスプレイ法、ｃＤＮＡディスプレイ法、酵母ディスプレイ法）、取得することができる。また、抗体に対する親和性物質が抗体のＦｃ領域（可溶性領域）に対する親和性物質である場合、各種抗体（例、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＥ）のＦｃ領域の特定領域（例、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３）中に存在する部分ペプチドを用いることにより、抗体のＦｃ領域中の任意の部分に対して選択的に結合することができる親和性物質（例、抗体、アプタマー）を効率的に取得することができる。このようにして取得される親和性物質のなかには、親和的結合能が相対的に強いものおよび弱いものが混在する。しかし、親和的結合能が弱い親和性物質であっても、過剰量で用いることにより、その親和的結合能を補強することができる。
　好ましい実施形態では、抗体に対する親和性物質は、ペプチドである。このようなペプチドとしては、モノクローナル抗体の定常領域に対する結合能を有するペプチドが好ましく、モノクローナル抗体のＦｃ領域に対する結合能を有するペプチドがより好ましく、ＩｇＧのＦｃ領域に対する結合能を有するペプチドがさらにより好ましい。ペプチドの長さとしては、特に限定されないが、例えば、１０～４０（例、１０～２０、２０～３０、および３０～４０）のアミノ酸残基からなるペプチドである。ペプチドを構成するアミノ酸残基としては、天然タンパク質を構成する２０種のＬ－α－アミノ酸残基およびその立体異性体（例、Ｄ－アミノ酸）、それらの異性体（例、β－アミノ酸）が挙げられる。
　特定の実施形態では、上述したような抗体に対する親和性物質は、以下のいずれかのアミノ酸配列を含むペプチドであってもよい。
（ａ－１－１）ＦＮＭＱＱＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤ（配列番号１１）のアミノ酸配列（例、化合物２２～２４、２９を参照）、または、
（ａ－１－２）ＦＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤＣ（配列番号１２）のアミノ酸配列（公知配列Ｚ３４Ｃにおいて２つのＫがＲで置換されているアミノ酸配列）において、配列中のいずれかの１～３つのアミノ酸残基が、同一でも異なってもよく、リジン残基、アスパラギン酸残基、およびグルタミン酸残基からなる群より選ばれる各々１つのアミノ酸残基により置換されているか、
（ａ－２－１）β－Ａｌａ－ＮＭＱＱＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤ（配列番号１３）のアミノ酸配列（例、化合物２６～２８を参照）、または、
（ａ－２－２）β－Ａｌａ－ＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤＣ（配列番号１４）のアミノ酸配列（公知配列Ｚ３４Ｃにおいて２つのＫがＲで置換されており、かつＮ末端のＦがβ－Ａｌａで置換されているアミノ酸配列）において、配列中のいずれかの１～３つのアミノ酸残基が、同一でも異なってもよく、リジン残基、アスパラギン酸残基、およびグルタミン酸残基からなる群より選ばれる各々１つのアミノ酸残基により置換されており、かつ
（ｂ）配列番号１１～１４の前記アミノ酸配列各々に対して８５％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含むペプチド。
　このようなペプチドは、モノクローナル抗体のＦｃ領域に対する結合能を有する。
　配列番号１２のアミノ酸配列からなるペプチドは、ペプチド試薬合成上の都合により、Ｚ３４Ｃとして知られている親和性ペプチドにおいてＮ末端から数えて２６番目と２８番目の２つのＫ（リジン）をＲ（アルギニン）に変更したものである。上記アミノ酸配列を含むペプチドを含む本発明の化合物は、ヒトＩｇＧ　Ｆｃにおける特定のアミノ酸残基（例、Ｅｕ　ｎｕｍｂｅｒｉｎｇに従うＬｙｓ２４８残基またはＬｙｓ２４６残基、Ｌｙｓ２８８またはＬｙｓ２９０、Ｌｙｓ３１７、あるいはそれら残基以外の他のアミノ酸残基）の位置選択的な修飾に有用である。なお、上記Ｚ３４Ｃのアミノ酸配列は、ＦＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＫＩＫＳＩＲＤＤＣ（配列番号３６）である（例、Ｓｔａｒｏｖａｓｎｉｋ，　Ｍ．　Ａ．　ｅｔ　ａｌ．，Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ　ｍｉｍｉｃｒｙ　ｏｆ　ａ　ｎａｔｉｖｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｂｙ　ａ　ｍｉｎｉｍｉｚｅｄ　ｂｉｎｄｉｎｇ　ｄｏｍａｉｎ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．，９４，１００８０－１００８５（１９９７）を参照）。
　親和性ペプチドは、ヒトＩｇＧ（例、上述したようなヒトＩｇＧ。好ましくはヒトＩｇＧ１）に対する親和性を有することができる。上記親和性ペプチドは、２つのシステイン残基（例、５位および３４位）を含む場合、２つのシステイン残基がジスルフィド結合して環状ペプチドを形成していてもよい。
　リジン残基、アスパラギン酸残基、またはグルタミン酸残基（架橋剤によって修飾が容易であるアミノ酸残基）が導入される位置としては、ヒトＩｇＧ１等のヒトＩｇＧに対する親和性を有する限り任意の位置を利用することができる。このような位置については、当業者であれば容易に同定することができる。リジン残基、アスパラギン酸残基、またはグルタミン酸残基が導入される位置は、システイン残基以外のアミノ酸残基であってもよい。より好ましくは、架橋剤によって容易に修飾できるアミノ酸残基が導入される位置としては、例えば、１位、３位、６位、７位、１３位、２０位、２４位、３１位、および３２位のアミノ酸残基が挙げられる。
　好ましくは、（ａ）および（ｂ）の特性を有する上記アミノ酸配列は、リジン残基、アスパラギン酸残基、およびグルタミン酸残基（架橋剤によって容易に修飾できるアミノ酸残基）からなる群より選ばれる１つの特定のアミノ酸残基（好ましくは、リジン残基）を所定の位置に有し、かつ、天然タンパク質を構成する通常の２０種のアミノ酸残基（好ましくは、リジン残基、アスパラギン酸残基、およびグルタミン酸残基以外の１７種のアミノ酸残基であり、より好ましくはリジン残基以外の１９種のアミノ酸残基）の変異を当該所定の位置以外の位置に有することもまた好ましい。このような所定の位置は、特に限定されず、例えば、１位、３位、６位、７位、１３位、２０位、２４位、３１位、および３２位が挙げられる。（ａ）および（ｂ）の特性を有する上記アミノ酸配列は、２つのシステイン残基が維持されており、これらの２つのシステイン残基はジスルフィド結合により結合していてもよい。配列番号１１～１４の前記アミノ酸配列に対して８５％以上の同一性を有するアミノ酸配列は、アミノ酸残基の欠失、置換、付加および挿入からなる群より選ばれる１、２、３または４種の変異（好ましくは置換）により、１～３個（好ましくは１または２個、より好ましくは１個）のアミノ酸残基が改変されたものであってもよい。アミノ酸残基の変異は、アミノ酸配列中の１つの領域に導入されてもよいが、複数の異なる領域に導入されてもよい。
　より好ましくは、（ａ）および（ｂ）の特性を有する上記アミノ酸配列は、以下（ｃ）または（ｄ）であってもよい。
（ｃ）以下（１）～（１６）のアミノ酸配列からなる群より選ばれるアミノ酸配列：
（１）ＦＮＭＱＱＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＫＤＤ（配列番号５）；
（２）ＦＮＭＱＱＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＫＳＩＲＤＤ（配列番号６）；
（３）β－Ａｌａ－ＮＭＱＱＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤ（配列番号７）；
（４）FＮＭＱＱＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＫＩＫＳＩＫＤＤ（配列番号８）；
（５）ＫＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤＣ（配列番号３７）；
（６）ＦＮＭＱＣＱＫＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤＣ（配列番号３８）；
（７）ＦＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＫＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤＣ（配列番号３９）；
（８）ＦＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＫＡＲＩＲＳＩＲＤＤＣ（配列番号４０）；
（９）ＦＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＫＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤＣ（配列番号４１）；
（１０）ＦＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＫＤＤＣ（配列番号４２）；
（１１）ＦＮＫＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤＣ（配列番号４３）；
（１２）ＦＮＭＱＣＫＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤＣ（配列番号４４）；
（１３）ＦＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＫＤＣ（配列番号４５）；
（１４）β－Ａｌａ－ＮＭＱＱＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩ（配列番号９７）；
（１５）ＦＮＭＱＱＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＫＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤ（配列番号９８）；および
（１６）β－Ａｌａ－ＮＭＱＱＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＫＤＤ（配列番号１００）；あるいは
（ｄ）上記（１）～（１６）のいずれかのアミノ酸配列において、１つのリジン残基および２つのシステイン残基以外の位置（例、１位、３位、６位、７位、１３位、２０位、２４位、３１位、および３２位の位置）において、リジン残基以外の１９種のアミノ酸残基の変異を有する、上記（１）～（１６）のいずれかのアミノ酸配列に対して９０％以上の同一性（上述したような個数のアミノ酸残基の修飾であってもよい）を有するアミノ酸配列。
このようなアミノ酸配列を含むペプチドは、ＩｇＧのＦｃ領域に対する結合能を有することが確認されている。（ｄ）の上記アミノ酸配列を有する親和性ペプチドは、モノクローナル抗体の定常領域に対する結合能を有するペプチドが好ましく、モノクローナル抗体のＦｃ領域に対する結合能を有するペプチドがより好ましく、ＩｇＧのＦｃ領域に対する結合能を有するペプチドがさらにより好ましい。
　上記親和性ペプチドは、配列番号１１～１４の前記アミノ酸配列または上記（１）～（１６）のアミノ酸配列に対して８５％以上の同一性を有する限り、架橋剤によって修飾が容易である１つのアミノ酸残基の導入以外にも、さらなるアミノ酸残基の変異を有していてもよい。さらなるアミノ酸の変異を導入できる位置については、当業者であれば容易に同定することができる。例えば、１位のフェニルアラニン残基、６位のアルギニン残基、１３位のロイシン残基、２０位のグルタミン酸残基、２４位のアスパラギン残基、または３１位のアルギニン残基（架橋剤によって容易に修飾できるアミノ酸残基が既に導入された位置を除く）であっても利用することができる。さらなるアミノ酸の変異により導入できるアミノ酸としては、例えば、アラニン（Ａ）、アスパラギン（Ｎ）、システイン（Ｃ）、グルタミン（Ｑ）、グリシン（Ｇ）、イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、フェニルアラニン（Ｆ）、プロリン（Ｐ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、トリプトファン（Ｗ）、チロシン（Ｙ）、バリン（Ｖ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、アルギニン（Ｒ）、ヒスチジン（Ｈ）、およびリジン（Ｌ）が挙げられる。好ましくは、リジン以外のこれらの１９種のアミノ酸が利用されてもよい。アミノ酸はＬ体またはＤ体のいずれであってもよいが、Ｌ体が好ましい（実施例ではペプチドを構成するアミノ酸残基は全てＬ体である）。
　配列番号１１～１４の前記アミノ酸配列または（１）～（１６）の前記アミノ酸配列に対する同一性％の程度は、上述したとおりに決定することができる。同一性％の程度は、好ましくは９０％以上、９２％以上、より好ましくは９４％以上、さらにより好ましくは９５％以上、特に好ましくは９７％以上（すなわち、１つのアミノ酸残基の変異のみを有するもの）であってもよい。
　別の特定の実施形態では、上述したような抗体に対する親和性物質は、以下のいずれかのアミノ酸配列を含むペプチドである。
式１－１：（Ｘ０－３）ａ－Ｃ－Ｘａａ１－Ｘａａ２－Ｘａａ３－Ｘａａ４－Ｘａａ５－Ｘａａ６－Ｉ－Ｉ－Ｗ－Ｃ－（Ｘ０－３）ｂ（配列番号１５）
式１－２：（Ｘ０－３）ａ－Ｃ－Ｘａａ１－Ｘａａ２－Ｘａａ３－Ｘａａ４－Ｘａａ５－Ｘａａ６－Ｉ－Ｖ－Ｗ－Ｃ－（Ｘ０－３）ｂ（配列番号１６）
式１－３：（Ｘ０－３）ａ－Ｃ－Ｘａａ１－Ｘａａ２－Ｘａａ３－Ｘａａ４－Ｘａａ５－Ｘａａ６－Ｖ－Ｖ－Ｗ－Ｃ－（Ｘ０－３）ｂ（配列番号１７）
式１－４：（Ｘ０－３）ａ－Ｃ－Ｘａａ１－Ｘａａ２－Ｘａａ３－Ｘａａ４－Ｘａａ５－Ｘａａ６－Ａ－Ｖ－Ｗ－Ｃ－（Ｘ０－３）ｂ（配列番号１８）
式１－５：（Ｘ０－３）ａ－Ｃ－Ｘａａ１－Ｘａａ２－Ｘａａ３－Ｘａａ４－Ｘａａ５－Ｘａａ６－Ｌ－Ｌ－Ｗ－Ｃ－（Ｘ０－３）ｂ（配列番号１９）
式１－６：（Ｘ０－３）ａ－Ｃ－Ｘａａ１－Ｘａａ２－Ｘａａ３－Ｘａａ４－Ｘａａ５－Ｘａａ６－Ｌ－Ｉ－Ｗ－Ｃ－（Ｘ０－３）ｂ（配列番号２０）
式１－７：（Ｘ０－３）ａ－Ｃ－Ｘａａ１－Ｘａａ２－Ｘａａ３－Ｘａａ４－Ｘａａ５－Ｘａａ６－Ｌ－Ｖ－Ｆ－Ｃ－（Ｘ０－３）ｂ（配列番号２１）
式１－８：（Ｘ０－３）ａ－Ｃ－Ｘａａ１－Ｘａａ２－Ｘａａ３－Ｘａａ４－Ｘａａ５－Ｘａａ６－Ｑ－Ｖ－Ｗ－Ｃ－（Ｘ０－３）ｂ（配列番号２２）
式１－９：（Ｘ０－３）ａ－Ｃ－Ｘａａ１－Ｘａａ２－Ｘａａ３－Ｘａａ４－Ｘａａ５－Ｘａａ６－Ｅ－Ｖ－Ｗ－Ｃ－（Ｘ０－３）ｂ（配列番号２３）
〔式中、
　（Ｘ０－３）ａは、なし、アルギニン残基－グリシン残基－アスパラギン残基、グリシン残基－アスパラギン残基、アスパラギン酸残基、またはアスパラギン残基であり、
　（Ｘ０－３）ｂは、なし、スレオニン残基－チロシン残基－ヒスチジン残基、またはスレオニン残基であり、
　Ｘａａ１は、アラニン残基であり、
　Ｘａａ２は、チロシン残基、トリプトファン残基、またはヒスチジン残基であり、
　Ｘａａ３は、ヒスチジン残基、フェニルアラニン残基、チロシン残基、トリプトファン残基、アルギニン残基、またはグリシン残基であり、
　Ｘａａ４は、リジン残基、アスパラギン酸残基、またはグルタミン酸残基であり、
　Ｘａａ５は、グリシン残基、セリン残基、アスパラギン残基、グルタミン残基、アスパラギン酸残基、グルタミン酸残基、フェニルアラニン残基、チロシン残基、トリプトファン残基、ヒスチジン残基、スレオニン残基、ロイシン残基、アラニン残基、バリン残基、イソロイシン残基、またはアルギニン残基であり、
　Ｘａａ６は、グルタミン残基、グルタミン酸残基、アスパラギン残基、またはアスパラギン酸残基である。〕、あるいは
式２－１：（Ｘ０－３’）ａ－Ｃ－（Ｘａａ１’）－（Ｘａａ２’）－（Ｘａａ３’）－（Ｘａａ４’）－（Ｘａａ５’）－（Ｘａａ６’）－Ｌ－Ｖ－Ｗ－Ｃ－（Ｘ０－３’）ｂ（配列番号２４）
〔式中、
　（Ｘ０－３’）ａおよび（Ｘ０－３’）ｂはそれぞれ、前記（Ｘ０－３）ａおよび（Ｘ０－３）ｂと同じであり、
　Ｘａａ１’、Ｘａａ２’、Ｘａａ３’、Ｘａａ４’、Ｘａａ５’、Ｘａａ６’はそれぞれ、前記Ｘａａ１、Ｘａａ２、Ｘａａ３、Ｘａａ４、Ｘａａ５、Ｘａａ６と同じである。
〕。
　このようなペプチドは、モノクローナル抗体のＦｃ領域に対する結合能を有する。
　上記式１－１～１－９、および式２－１で表されるアミノ酸配列において、（Ｘ０－３）ａは、なし、アルギニン残基－グリシン残基－アスパラギン残基、グリシン残基－アスパラギン残基、アスパラギン酸残基、またはアスパラギン残基であり、好ましくは、なし、アルギニン残基－グリシン残基－アスパラギン残基、アスパラギン酸残基、またはアスパラギン残基である。
　上記式１－１～１－９、および式２－１で表されるアミノ酸配列において、Ｘａａ２は、チロシン残基、トリプトファン残基、またはヒスチジン残基であり、好ましくは、チロシン残基、またはトリプトファン残基である。
　上記式１－１～１－９、および式２－１で表されるアミノ酸配列において、Ｘａａ３は、ヒスチジン残基、フェニルアラニン残基、チロシン残基、トリプトファン残基、アルギニン残基、またはグリシン残基であり、好ましくは、ヒスチジン残基である。
　上記式１－１～１－９、および式２－１で表されるアミノ酸配列において、Ｘａａ４は、リジン残基、アスパラギン酸残基、またはグルタミン酸残基であり、好ましくは、リジン残基である。
　上記式１－１～１－９、および式２－１で表されるアミノ酸配列において、Ｘａａ５は、グリシン残基、セリン残基、アスパラギン残基、グルタミン残基、アスパラギン酸残基、グルタミン酸残基、フェニルアラニン残基、チロシン残基、トリプトファン残基、ヒスチジン残基、スレオニン残基、ロイシン残基、アラニン残基、バリン残基、イソロイシン残基、またはアルギニン残基であり、好ましくは、グリシン残基、スレオニン残基、ロイシン残基である。
　上記式１－１～１－９、および式２－１で表されるアミノ酸配列において、Ｘａａ６は、グルタミン残基、グルタミン酸残基、アスパラギン残基、またはアスパラギン酸残基であり、より好ましくは、グルタミン残基である。
　好ましくは、上記式１－１～１－９、および式２－１で表されるいずれかのアミノ酸配列を含むペプチドは、下記からなる群より選ばれるアミノ酸配列を含むペプチドである：
（１’）　ＲＧＮＣＡＹＨＫＧＱＩＩＷＣＴＹＨ（配列番号４６）；
（２’）　ＲＧＮＣＡＹＨＫＧＱＩＶＷＣＴＹＨ（配列番号４７）；
（３’）　ＲＧＮＣＡＹＨＫＧＱＶＶＷＣＴＹＨ（配列番号４８）；
（４’）　ＲＧＮＣＡＹＨＫＧＱＡＶＷＣＴＹＨ（配列番号４９）；
（５’）　ＲＧＮＣＡＹＨＫＧＱＬＬＷＣＴＹＨ（配列番号５０）；
（６’）　ＲＧＮＣＡＹＨＫＧＱＬＩＷＣＴＹＨ（配列番号５１）；
（７’）　　　ＤＣＡＹＨＫＧＱＩＶＷＣＴ　　（配列番号５２）；
（８’）　　　ＤＣＡＹＨＫＧＱＶＶＷＣＴ　　（配列番号５３）；
（９’）　　　ＤＣＡＹＨＫＧＱＡＶＷＣＴ　　（配列番号５４）；
（１０’）ＲＧＮＣＡＹＨＫＳＱＩＩＷＣＴＹＨ（配列番号５５）；
（１１’）ＲＧＮＣＡＹＨＫＮＱＩＩＷＣＴＹＨ（配列番号５６）；
（１２’）ＲＧＮＣＡＹＨＫＤＱＩＩＷＣＴＹＨ（配列番号５７）；
（１３’）ＲＧＮＣＡＹＨＫＱＱＩＩＷＣＴＹＨ（配列番号５８）；
（１４’）ＲＧＮＣＡＹＨＫＥＱＩＩＷＣＴＹＨ（配列番号５９）；
（１５’）ＲＧＮＣＡＹＨＫＦＱＩＩＷＣＴＹＨ（配列番号６０）；
（１６’）ＲＧＮＣＡＹＨＫＹＱＩＩＷＣＴＹＨ（配列番号６１）；
（１７’）ＲＧＮＣＡＹＨＫＷＱＩＩＷＣＴＹＨ（配列番号６２）；
（１８’）ＲＧＮＣＡＹＨＫＨＱＩＩＷＣＴＹＨ（配列番号６３）；
（１９’）ＲＧＮＣＡＹＨＫＴＱＩＩＷＣＴＹＨ（配列番号６４）；
（２０’）ＲＧＮＣＡＹＨＫＬＱＩＩＷＣＴＹＨ（配列番号６５）；
（２１’）　　　ＣＡＹＨＫＬＱＩＶＷＣ　　　（配列番号６６）；
（２２’）　　　ＣＡＹＨＫＬＱＬＩＷＣ　　　（配列番号６７）；
（２３’）　　　ＣＡＹＨＫＳＱＩＶＷＣ　　　（配列番号６８）；
（２４’）ＲＧＮＣＡＹＨＫＧＱＬＶＦＣＴＹＨ（配列番号６９）；
（２５’）ＲＧＮＣＡＹＨＫＧＱＱＶＷＣＴＹＨ（配列番号７０）；
（２６’）ＲＧＮＣＡＹＨＫＧＱＥＶＷＣＴＹＨ（配列番号７１）；
（２７’）　　　ＣＡＹＨＫＧＱＬＶＷＣ　　　（配列番号７２）；
（２８’）ＲＧＮＣＡＹＨＫＡＱＬＶＷＣＴＹＨ（配列番号７３）；
（２９’）ＲＧＮＣＡＹＨＫＶＱＬＶＷＣＴＹＨ（配列番号７４）；
（３０’）ＲＧＮＣＡＹＨＫＬＱＬＶＷＣＴＹＨ（配列番号７５）；
（３１’）ＲＧＮＣＡＹＨＫＩＱＬＶＷＣＴＹＨ（配列番号７６）；
（３２’）ＲＧＮＣＡＹＨＫＳＱＬＶＷＣＴＹＨ（配列番号７７）；
（３３’）ＲＧＮＣＡＹＨＫＴＱＬＶＷＣＴＹＨ（配列番号７８）；
（３４’）ＲＧＮＣＡＹＨＫＮＱＬＶＷＣＴＹＨ（配列番号７９）；
（３５’）ＲＧＮＣＡＹＨＫＤＱＬＶＷＣＴＹＨ（配列番号８０）；
（３６’）ＲＧＮＣＡＹＨＫＱＱＬＶＷＣＴＹＨ（配列番号８１）；
（３７’）ＲＧＮＣＡＹＨＫＥＱＬＶＷＣＴＹＨ（配列番号８２）；
（３８’）ＲＧＮＣＡＹＨＫＦＱＬＶＷＣＴＹＨ（配列番号８３）；
（３９’）ＲＧＮＣＡＹＨＫＲＱＬＶＷＣＴＹＨ（配列番号８４）；
（４０’）ＲＧＮＣＡＹＨＫＨＱＬＶＷＣＴＹＨ（配列番号８５）；
（４１’）ＲＧＮＣＡＹＨＫＷＱＬＶＷＣＴＹＨ（配列番号８６）；
（４２’）ＲＧＮＣＡＹＨＫＹＱＬＶＷＣＴＹＨ（配列番号８７）；
（４３’）ＲＧＮＣＡＹＦＫＧＱＬＶＷＣＴＹＨ（配列番号８８）；
（４４’）ＲＧＮＣＡＹＹＫＧＱＬＶＷＣＴＹＨ（配列番号８９）；
（４５’）ＲＧＮＣＡＹＷＫＧＱＬＶＷＣＴＹＨ（配列番号９０）；
（４６’）ＲＧＮＣＡＹＲＫＧＱＬＶＷＣＴＹＨ（配列番号９１）；
（４７’）ＲＧＮＣＡＹＧＫＧＱＬＶＷＣＴＹＨ（配列番号９２）；
（４８’）　　ＤＣＡＹＨＫＧＱＬＶＷＣ　　　（配列番号９３）；
（４９’）　　ＮＣＡＹＨＫＧＱＬＶＷＣ　　　（配列番号９４）；
（５０’）　　　ＣＡＹＨＫＧＱＬＶＷＣＴ　　（配列番号９５）；
（５１’）　　　ＣＡＹＨＫＳＱＬＶＷＣ　　　（配列番号９６）；
（５２’）　ＧＮＣＡＹＨＫＧＱＩＩＷＣＴＹＨ（配列番号９９）；および
（５３’）ＲＧＮＣＡＹＨＥＧＱＩＩＷＣＴＹＨ（配列番号１０８）。
　このようなアミノ酸配列を含むペプチドは、ＩｇＧのＦｃ領域に対する結合能を有することが確認されている。
　上記ペプチドの各アミノ酸配列の中に離間した少なくとも２つのシステイン残基は、ジスルフィド結合により環状ペプチドを形成することができる。あるいは、上記ペプチドにおいて、２つのシステイン残基中のスルフィド基は、以下で表されるカルボニル基含有リンカーにより連結されていてもよい。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000015
　上記で表されるカルボニル基含有リンカーの破線部分は、スルフィド基との結合部分を意味する。当該リンカーは、通常のジスルフィド結合よりも、還元反応等に対して安定である。このようなペプチドは、例えば、国際公開第２０１６／１８６２０６号に記載される方法により、調製することができる。
　上記アミノ酸配列を含むペプチドを含む本発明の化合物は、ヒトＩｇＧ　Ｆｃにおける特定のアミノ酸残基（例、Ｅｕ　ｎｕｍｂｅｒｉｎｇに従うＬｙｓ２４８残基またはＬｙｓ２４６残基、Ｌｙｓ２８８またはＬｙｓ２９０、Ｌｙｓ３１７、あるいはそれら残基以外の他のアミノ酸残基）の位置選択的な修飾に有用である。上記ペプチドを構成するアミノ酸はＬ体またはＤ体のいずれであってもよいが、Ｌ体が好ましい（実施例ではペプチドを構成するアミノ酸残基は全てＬ体である）。
　上記ペプチドは、架橋剤により特定のアミノ酸残基が修飾されてもよい。このような特定のアミノ酸残基としては、例えば、リジン残基、アスパラギン酸残基、およびグルタミン酸残基が挙げられるが、好ましくは、リジン残基である。架橋剤としては、例えば、ＤＳＧ（ｄｉｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ　ｇｌｕｔａｒａｔｅ、ジスクシンイミジルグルタレート）、ＤＳＳ（ｄｉｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ　ｓｕｂｅｒａｔｅ、ジスクシンイミジルスベレート）等のスクシンイミジル基を好ましくは２以上含む架橋剤、ＤＭＡ（ｄｉｍｅｔｈｙｌ　ａｄｉｐｉｍｉｄａｔｅ・２ＨＣｌ、アジプイミド酸ジメチル二塩酸塩）、ＤＭＰ（ｄｉｍｅｔｈｙｌ　ｐｉｍｅｌｉｍｉｄａｔｅ・２　ＨＣｌ、ピメルイミド酸ジメチル二塩酸塩）、及びＤＭＳ（ｄｉｍｅｔｈｙｌ　ｓｕｂｅｒｉｍｉｄａｔｅ・２　ＨＣｌ、スベルイミド酸ジメチル二塩酸塩）等のイミド酸部分を好ましくは２以上含む架橋剤、並びにＤＴＢＰ（ｄｉｍｅｔｈｙｌ　３，３’－ｄｉｔｈｉｏｂｉｓｐｒｏｐｉｏｎｉｍｉｄａｔｅ・２ＨＣｌ、３，３’－ジチオビスプロピオンイミド酸ジメチル二塩酸塩）及びＤＳＰ（ｄｉｔｈｉｏｂｉｓ（ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ　ｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ）、ジチオビススクシンイミジルプロピオン酸）等のＳＳ結合を有する架橋剤が挙げられる（例、国際公開第２０１６／１８６２０６号）。
　抗体に対する親和性物質がペプチドである場合、ペプチドは、末端にあるアミノ基およびカルボキシ基が保護されていてもよい。Ｎ－末端アミノ基の保護基としては、例えば、アルキルカルボニル基（アシル基）（例、アセチル基、プロポキシ基、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル基等のブトキシカルボニル基）、アルキルオキシカルボニル基（例、フルオレニルメトキシカルボニル基）、アリールオキシカルボニル基、アリールアルキル（アラルキル）オキシカルボニル基（例、ベンジルオキシカルボニル基）が挙げられる。Ｎ－末端アミノ基の保護基としては、アセチル基が好ましい。Ｃ－末端カルボキシ基の保護基としては、例えば、エステルまたはアミドを形成可能な基が挙げられる。エステルまたはアミドを形成可能な基としては、例えば、アルキルオキシ基（例、メチルオキシ、エチルオキシ、プロピルオキシ、ブチルオキシ、ペンチルオキシ、ヘキシルオキシ）、アリールオキシ基（例、フェニルオキシ、ナフチルオキシ）、アラルキルオキシ基（例、ベンジルオキシ）、アミノ基が挙げられる。Ｃ－末端カルボキシ基の保護基としては、アミノ基が好ましい。
１－３．脱離基を含む２価の基（Ｌ）
　式（Ｉ）において、Ｌは、脱離基を含む２価の基である。
　脱離基は、抗体中の求核基と、求電子基を含む２価の基（Ｅ）に含まれる求電子基との間の反応によりＥから切断されて脱離する能力を有する基である。このような脱離基は、当該分野における技術常識である（例、Ｆｕｊｉｓｈｉｍａ，Ｓ．ｅｔ　ａｌ　Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ，２０１２，１３４，３９６１－３９６４．（前述）；Ｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．２０１５　３２１７－３２２４．；Ｎａｔｕｒｅ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ｖｏｌｕｍｅ　８，　ｐａｇｅｓ　５４２－５４８　（２０１６））。脱離基としては、上記のような反応によりＥから切断される能力を有する限り特に限定されないが、例えば、（１）－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓｅ－、－ＳＯ２－Ｏ－、－ＳＯ２－Ｎ（Ｒ）－、－ＳＯ２－、－Ｃ≡Ｃ－ＣＨ２－Ｏ－、－Ｎ（ＯＲ）－、－Ｎ（Ｒ）－、および－Ｏ－Ｎ（Ｒ）－からなる群より選ばれる基（ここで、Ｒは、水素原子または炭素原子数１～６のアルキルである。）、および（２）ヘテロアリーレンが挙げられる。
　炭素原子数１～６のアルキルとしては、例えば、メチル、エチル、ｎ－プロピル、ｉ－プロピル、ｎ－ブチル、ｓ－ブチル、イソブチル、ｔ－ブチル、ペンチル、ヘキシルが挙げられる。炭素原子数１～６のアルキルとしては、炭素原子数１～４のアルキルが好ましい。
　脱離基の例である、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓｅ－、－ＳＯ２－Ｏ－、－ＳＯ２－Ｎ（Ｒ）－、－ＳＯ２－、－Ｃ≡Ｃ－ＣＨ２－Ｏ－、－Ｎ（ＯＲ）－、－Ｎ（Ｒ）－、および－Ｏ－Ｎ（Ｒ）－からなる群より選ばれる基は、下記（１）あるいは（２）である：
（１）－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓｅ－、－ＳＯ２－Ｏ－、－ＳＯ２－Ｎ（Ｒ）－、－ＳＯ２－、－Ｃ≡Ｃ－ＣＨ２－Ｏ－、－Ｎ（ＯＲ）－、－Ｎ（Ｒ）－、または－Ｏ－Ｎ（Ｒ）－からなる基；あるいは
（２）－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓｅ－、－ＳＯ２－Ｏ－、－ＳＯ２－Ｎ（Ｒ）－、－ＳＯ２－、－Ｃ≡Ｃ－ＣＨ２－Ｏ－、－Ｎ（ＯＲ）－、－Ｎ（Ｒ）－、または－Ｏ－Ｎ（Ｒ）－およびその脱離する能力を高める基を含む基。
　－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓｅ－、－ＳＯ２－Ｏ－、－ＳＯ２－Ｎ（Ｒ）－、－ＳＯ２－、－Ｃ≡Ｃ－ＣＨ２－Ｏ－、－Ｎ（ＯＲ）－、－Ｎ（Ｒ）－、または－Ｏ－Ｎ（Ｒ）－の脱離する能力を高める基は、当該基が－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓｅ－、－ＳＯ２－Ｏ－、－ＳＯ２－Ｎ（Ｒ）－、－ＳＯ２－、－Ｃ≡Ｃ－ＣＨ２－Ｏ－、－Ｎ（ＯＲ）－、－Ｎ（Ｒ）－、または－Ｏ－Ｎ（Ｒ）－に隣接して存在する場合、当該基が－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓｅ－、－ＳＯ２－Ｏ－、－ＳＯ２－Ｎ（Ｒ）－、－ＳＯ２－、－Ｃ≡Ｃ－ＣＨ２－Ｏ－、－Ｎ（ＯＲ）－、－Ｎ（Ｒ）－、または－Ｏ－Ｎ（Ｒ）－に隣接して存在しない場合に比し、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓｅ－、－ＳＯ２－Ｏ－、－ＳＯ２－Ｎ（Ｒ）－、－ＳＯ２－、－Ｃ≡Ｃ－ＣＨ２－Ｏ－、－Ｎ（ＯＲ）－、－Ｎ（Ｒ）－、または－Ｏ－Ｎ（Ｒ）－が求電子基から脱離する能力を高める基である。換言すれば、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓｅ－、－ＳＯ２－Ｏ－、－ＳＯ２－Ｎ（Ｒ）－、－ＳＯ２－、－Ｃ≡Ｃ－ＣＨ２－Ｏ－、－Ｎ（ＯＲ）－、－Ｎ（Ｒ）－、または－Ｏ－Ｎ（Ｒ）－の脱離する能力を高める基は、酸素原子、硫黄原子、セレン原子、または窒素原子の電子を吸引する能力を有する基である。
　－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓｅ－、－ＳＯ２－Ｏ－、－ＳＯ２－Ｎ（Ｒ）－、－ＳＯ２－、－Ｃ≡Ｃ－ＣＨ２－Ｏ－、－Ｎ（ＯＲ）－、－Ｎ（Ｒ）－、または－Ｏ－Ｎ（Ｒ）－の脱離する能力を高める基の好ましい例としては、電子吸引性基で置換されていてもよいアリーレン、電子吸引性基で置換されていてもよいヘテロアリーレン、縮環していてもよい２，５-ジケトピロリジン、縮環していてもよい２，６－ジケトピペリジン、縮環していてもよい２-ケトピロリジン、縮環していてもよい２－ケトピペリジン、および２－ピリドンが挙げられる。アリーレンおよびヘテロアリーレンが有していてもよい電子吸引性基の数は、１以上（例えば１～３、好ましくは１または２）である。電子吸引性基としては、例えば、ハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されたアルキル（例、トリフルオロメチル）、ボロン酸残基、メシル、トシル、トリフレート、ニトロ、シアノ、フェニル基、ケト基（例、アシル）が挙げられる。
　「電子吸引性基で置換されていてもよいアリーレン」における「アリーレン」としては、炭素原子数６～２４のアリーレンが好ましく、炭素原子数６～１８のアリーレンがより好ましく、炭素原子数６～１４のアリーレンがさらにより好ましく、炭素原子数６～１０のアリーレンが最も好ましい。電子吸引性基で置換されていてもよいアリーレンはさらに、電子吸引性基以外の置換基により置換されていても、置換されていなくてもよい。上記炭素原子数に電子吸引性基およびそれ以外の置換基の炭素原子数は含まれない。アリーレンとしては、例えば、フェニレン、ナフチレン、アントラセニレンが挙げられる。
　「電子吸引性基で置換されていてもよいヘテロアリーレン」における「ヘテロアリーレン」としては、炭素原子数１～２１のヘテロアリーレンが好ましく、炭素原子数１～１５のヘテロアリーレンがより好ましく、炭素原子数１～９のヘテロアリーレンがさらにより好ましく、炭素原子数１～６のヘテロアリーレンが最も好ましい。電子吸引性基で置換されていてもよいヘテロアリーレンはさらに、電子吸引性基以外の置換基により置換されていても、置換されていなくてもよい。上記炭素原子数に電子吸引性基およびそれ以外の置換基の炭素原子数は含まれない。ヘテロアリーレンは、窒素原子、酸素原子および硫黄原子からなる群より選ばれる１以上（例えば１～５、好ましくは１～４、より好ましくは１～３）のヘテロ原子を環構成原子として含む。ヘテロアリーレンとしては、例えば、ピロールジイル、フランジイル、チオフェンジイル、ピリジンジイル、ピリダジンジイル、ピリミジンジイル、ピラジンジイル、トリアジンジイル、ピラゾールジイル、イミダゾールジイル、チアゾールジイル、イソチアゾールジイル、オキサゾールジイル、イソオキサゾールジイル、トリアゾールジイル、テトラゾールジイル、インドールジイル、プリンジイル、アントラキノンジイル、カルバゾールジイル、フルオレンジイル、キノリンジイル、イソキノリンジイル、キナゾリンジイル、およびフタラジンジイルが挙げられる。
　縮環していてもよい２，５-ジケトピロリジン、縮環していてもよい２，６－ジケトピペリジン、縮環していてもよい２-ケトピロリジン、縮環していてもよい２－ケトピペリジン、および２－ピリドンは、電子吸引性基等の置換基により置換されていても、置換されていなくてもよい。
　脱離基の例であるヘテロアリーレンは、π電子密度が低い（すなわち、１未満である）ヘテロアリーレンである。脱離基であるヘテロアリーレンとしては、窒素原子を環構成原子として含有するヘテロアリーレンが好ましい。窒素原子を環構成原子として含有するヘテロアリーレンとしては、窒素原子を環構成原子として含有する炭素原子数１～２１のヘテロアリーレンが好ましく、窒素原子を環構成原子として含有する炭素原子数１～１５のヘテロアリーレンがより好ましく、窒素原子を環構成原子として含有する炭素原子数１～９のヘテロアリーレンがさらに好ましい。脱離基であるヘテロアリーレンは、電子吸引性基等の置換基により置換されていても、置換されていなくてもよい。上記炭素原子数に置換基の炭素原子数は含まれない。窒素原子を環構成原子として含有する脱離基であるヘテロアリーレンとしては、例えば、イミダゾールジイル、トリアゾールジイル、テトラゾールジイル、２－ピリドンジイル（すなわち、２－ヒドロキシピリジンジイル）が挙げられる。
　－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓｅ－、－ＳＯ２－Ｏ－、－ＳＯ２－Ｎ（Ｒ）－、－ＳＯ２－、－Ｃ≡Ｃ－ＣＨ２－Ｏ－、－Ｎ（ＯＲ）－、－Ｎ（Ｒ）－、または－Ｏ－Ｎ（Ｒ）－の脱離する能力を高める基の例である「電子吸引性基で置換されていてもよいアリーレン」等の基、ならびに脱離基の例である「ヘテロアリーレン」は、例えば１～５個、好ましくは１～３個、より好ましくは１もしくは２個の置換基を有していても、有していなくてもよい。化学構造が簡潔な化合物を合成する観点からは、このような置換基を有しないことが好ましい。一方、上記のような基が置換基を有する場合、このような置換基としては、例えば、以下が挙げられる：
（ｉ）ハロゲン原子；
（ｉｉ）１価の炭化水素基；
（ｉｉｉ）アラルキル；
（ｉｖ）１価の複素環基；
（ｖ）Ｒａ－Ｏ－、Ｒａ－Ｃ（＝Ｏ）－、Ｒａ－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－、もしくはＲａ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－（Ｒａは、水素原子、もしくは１価の炭化水素基を示す。）；または
（ｖｉ）ＮＲｂＲｃ－、ＮＲｂＲｃ－Ｃ（＝Ｏ）－、ＮＲｂＲｃ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－、もしくはＲｂ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲｃ－（ＲｂおよびＲｃは、同一もしくは異なって、水素原子、もしくは１価の炭化水素基を示す。）；
（ｖｉｉ）ニトロ基、硫酸基、スルホン酸基、シアノ基、およびカルボキシル基。
　ハロゲン原子としては、例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子が挙げられる。
　１価の炭化水素基としては、例えば、１価の鎖状炭化水素基、１価の脂環式炭化水素基、および１価の芳香族炭化水素基が挙げられる。
　１価の鎖状炭化水素基とは、鎖状構造のみで構成された炭化水素基を意味し、主鎖に環状構造を含まない。ただし、鎖状構造は直鎖状であっても分岐状であってもよい。１価の鎖状炭化水素基としては、例えば、アルキル、アルケニル、アルキニルが挙げられる。アルキル、アルケニル、およびアルキニルは、直鎖状、または分岐状のいずれであってもよい。
　アルキルとしては、炭素原子数１～１２のアルキルが好ましく、炭素原子数１～６のアルキルがより好ましく、炭素原子数１～４のアルキルがさらに好ましい。上記炭素原子数に置換基の炭素原子数は含まれない。炭素原子数１～１２のアルキルとしては、例えば、メチル、エチル、ｎ－プロピル、ｉ－プロピル、ｎ－ブチル、ｓ－ブチル、イソブチル、ｔ－ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ドデシルが挙げられる。
　アルケニルとしては、炭素原子数２～１２のアルケニルが好ましく、炭素原子数２～６のアルケニルがより好ましく、炭素原子数２～４のアルケニルがさらに好ましい。上記炭素原子数に置換基の炭素原子数は含まれない。炭素原子数２～１２のアルケニルとしては、例えば、ビニル、プロペニル、ｎ－ブテニルが挙げられる。
　アルキニルとしては、炭素原子数２～１２のアルキニルが好ましく、炭素原子数２～６のアルキニルがより好ましく、炭素原子数２～４のアルキニルがさらに好ましい。上記炭素原子数に置換基の炭素原子数は含まれない。炭素原子数２～１２のアルキニルとしては、例えば、エチニル、プロピニル、ｎ－ブチニルが挙げられる。
　１価の鎖状炭化水素基としては、アルキルが好ましい。
　１価の脂環式炭化水素基とは、環構造として脂環式炭化水素のみを含み、芳香族環を含まない炭化水素基を意味し、脂環式炭化水素は単環、多環のいずれであってもよい。ただし、脂環式炭化水素のみで構成されている必要はなく、その一部に鎖状構造を含んでいてもよい。１価の脂環式炭化水素基としては、例えば、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニルが挙げられ、これらは、単環、多環のいずれであってもよい。
　シクロアルキルとしては、炭素原子数３～１２のシクロアルキルが好ましく、炭素原子数３～６のシクロアルキルがより好ましく、炭素原子数５～６のシクロアルキルがさらに好ましい。上記炭素原子数に置換基の炭素原子数は含まれない。炭素原子数３～１２のシクロアルキルとしては、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルが挙げられる。
　シクロアルケニルとしては、炭素原子数３～１２のシクロアルケニルが好ましく、炭素原子数３～６のシクロアルケニルがより好ましく、炭素原子数５～６のシクロアルケニルがさらに好ましい。上記炭素原子数に置換基の炭素原子数は含まれない。炭素原子数３～１２のシクロアルケニルとしては、例えば、シクロプロペニル、シクロブテニル、シクロペンテニル、シクロヘキセニルが挙げられる。
　シクロアルキニルとしては、炭素原子数３～１２のシクロアルキニルが好ましく、炭素原子数３～６のシクロアルキニルがより好ましく、炭素原子数５～６のシクロアルキニルがさらに好ましい。上記炭素原子数に置換基の炭素原子数は含まれない。炭素原子数３～１２のシクロアルキニルとしては、例えば、シクロプロピニル、シクロブチニル、シクロペンチニル、シクロヘキシニルが挙げられる。
　１価の脂環式炭化水素基としては、シクロアルキルが好ましい。
　１価の芳香族炭化水素基とは、芳香族環構造を含む炭化水素基を意味する。ただし、芳香族環のみで構成されている必要はなく、その一部に鎖状構造や脂環式炭化水素を含んでいてもよく、芳香族環は単環、多環のいずれであってもよい。１価の芳香族炭化水素基としては、炭素原子数６～１２のアリールが好ましく、炭素原子数６～１０のアリールがより好ましく、炭素原子数６のアリールがさらに好ましい。上記炭素原子数に置換基の炭素原子数は含まれない。炭素原子数６～１２のアリールとしては、例えば、フェニル、ナフチルが挙げられる。
　１価の芳香族炭化水素基としては、フェニルが好ましい。
　これらの中でも、１価の炭化水素基としては、アルキル、シクロアルキル、アリールが好ましく、アルキルがより好ましい。
　アラルキルとは、アリールアルキルをいう。アリールアルキルにおけるアリールおよびアルキルの定義、例および好ましい例は、上述したとおりである。アラルキルとしては、炭素原子数３～１５のアラルキルが好ましい。このようなアラルキルとしては、例えば、ベンゾイル、フェネチル、ナフチルメチル、ナフチルエチルが挙げられる。
　１価の複素環基とは、複素環式化合物の複素環から水素原子１個を除いた基をいう。１価の複素環基は、１価の芳香族複素環基、または１価の非芳香族複素環基である。複素環基を構成するヘテロ原子として、酸素原子、硫黄原子、窒素原子、リン原子、ホウ素原子及びケイ素原子からなる群から選択される１種以上を含むことが好ましく、酸素原子、硫黄原子及び窒素原子からなる群から選択される１種以上を含むことがより好ましい。
　１価の芳香族複素環基としては、炭素原子数１～１５の芳香族複素環基が好ましく、炭素原子数１～９の芳香族複素環基がより好ましく、炭素原子数１～６の芳香族複素環基がさらに好ましい。上記炭素原子数に置換基の炭素原子数は含まれない。１価の芳香族複素環基としては、例えば、ピロリル、フラニル、チオフェニル、ピリジニル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、トリアジニル、ピラゾリル、イミダゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、インドリル、プリニル、アントラキノリル、カルバゾニル、フルオレニル、キノリニル、イソキノリニル、キナゾリニル、及びフタラジニルが挙げられる。
　１価の非芳香族複素環基としては、炭素原子数２～１５の非芳香族複素環基が好ましく、炭素原子数２～９の非芳香族複素環基がより好ましく、炭素原子数２～６の非芳香族複素環基がさらに好ましい。上記炭素原子数に置換基の炭素原子数は含まれない。１価の非芳香族複素環基としては、例えば、オキシラニル、アジリジニル、アゼチジニル、オキセタニル、チエタニル、ピロリジニル、ジヒドロフラニル、テトラヒドロフラニル、ジオキソラニル、テトラヒドロチオフェニル、ピロリニル、イミダゾリジニル、オキサゾリジニル、ピペリジニル、ジヒドロピラニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、モルホリニル、チオモルホリニル、ピペラジニル、ジヒドロオキサジニル、テトラヒドロオキサジニル、ジヒドロピリミジニル、及びテトラヒドロピリミジニルが挙げられる。
　これらの中でも、１価の複素環基としては、５員または６員の複素環基が好ましい。
　好ましくは、置換基は、以下であってもよい：
（ｉ’）ハロゲン原子；
（ｉｉ’）炭素原子数１～１２のアルキル、フェニル、もしくはナフチル；
（ｉｉｉ’）炭素原子数３～１５のアラルキル；
（ｉｖ’）５員または６員の複素環；
（ｖ’）Ｒａ－Ｏ－、Ｒａ－Ｃ（＝Ｏ）－、Ｒａ－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－、もしくはＲａ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－（Ｒａは、水素原子、もしくは炭素原子数１～１２のアルキルを示す。）；または
（ｖｉ’）ＮＲｂＲｃ－、ＮＲｂＲｃ－Ｃ（＝Ｏ）－、ＮＲｂＲｃ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－、もしくはＲｂ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲｃ－（ＲｂおよびＲｃは、同一もしくは異なって、水素原子、もしくは炭素原子数１～１２のアルキルを示す。）；
（ｖｉｉ’）上記（ｖｉｉ）で列挙したものと同じ基。
　より好ましくは、置換基は、以下であってもよい：
（ｉ’’）ハロゲン原子；
（ｉｉ’’）炭素原子数１～１２のアルキル；
（ｉｉｉ’’）Ｒａ－Ｏ－、Ｒａ－Ｃ（＝Ｏ）－、Ｒａ－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－、もしくはＲａ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－（Ｒａは、水素原子、もしくは炭素原子数１～１２のアルキルを示す。）；または
（ｉｖ’’）ＮＲｂＲｃ－、ＮＲｂＲｃ－Ｃ（＝Ｏ）－、ＮＲｂＲｃ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－、もしくはＲｂ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲｃ－（ＲｂおよびＲｃは、同一もしくは異なって、水素原子、もしくは炭素原子数１～１２のアルキルを示す。）；
（ｖ’’）上記（ｖｉｉ）で列挙したものと同じ基。
　さらにより好ましくは、置換基は、以下であってもよい：
（ｉ’’’）ハロゲン原子；
（ｉｉ’’’）炭素原子数１～６のアルキル；
（ｉｉｉ’’’）Ｒａ－Ｏ－、Ｒａ－Ｃ（＝Ｏ）－、Ｒａ－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－、もしくはＲａ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－（Ｒａは、水素原子、もしくは炭素原子数１～６のアルキルを示す。）；または
（ｉｖ’’’）ＮＲｂＲｃ－、ＮＲｂＲｃ－Ｃ（＝Ｏ）－、ＮＲｂＲｃ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－、もしくはＲｂ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲｃ－（ＲｂおよびＲｃは、同一もしくは異なって、水素原子、もしくは炭素原子数１～６のアルキルを示す。）；
（ｖ’’’）上記（ｖｉｉ）で列挙したものと同じ基。
　特に好ましくは、置換基は、以下であってもよい：
（ｉ’’’’）ハロゲン原子；
（ｉｉ’’’’）炭素原子数１～４のアルキル；
（ｉｉｉ’’’’）Ｒａ－Ｏ－、Ｒａ－Ｃ（＝Ｏ）－、Ｒａ－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－、もしくはＲａ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－（Ｒａは、水素原子、もしくは炭素原子数１～４のアルキルを示す。）；または
（ｉｖ’’’’）ＮＲｂＲｃ－、ＮＲｂＲｃ－Ｃ（＝Ｏ）－、ＮＲｂＲｃ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－、もしくはＲｂ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲｃ－（ＲｂおよびＲｃは、同一もしくは異なって、水素原子、もしくは炭素原子数１～４のアルキルを示す。）；
（ｖ’’’’）上記（ｖｉｉ）で列挙したものと同じ基。
　より具体的には、脱離基としては、下記（ａ）～（ｃ）のいずれかが挙げられる。
（ａ）環Ｐ－Ｑ－〔ここで、環Ｐが、電子吸引性基で置換されていてもよいアリーレン、電子吸引性基で置換されていてもよいヘテロアリーレン、縮環していてもよい２，５-ジケトピロリジン、縮環していてもよい２，６－ジケトピペリジン、縮環していてもよい２-ケトピロリジン、縮環していてもよい２－ケトピペリジン、２－ピリドンからなる群より選ばれる基であり、Ｑが、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓｅ－、－ＳＯ２－Ｏ－、－ＳＯ２－Ｎ（Ｒ）－、－ＳＯ２－、－Ｃ≡Ｃ－ＣＨ２－Ｏ－、－Ｎ（ＯＲ）－、－Ｎ（Ｒ）－、および－Ｏ－Ｎ（Ｒ）－からなる群より選ばれる基（ここで、Ｒは、水素原子または炭素原子数１～６のアルキルである。）である。〕、
（ｂ）ヘテロアリーレン、あるいは
（ｃ）－Ｑ－〔ここで、Ｑが、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓｅ－、－ＳＯ２－Ｏ－、－ＳＯ２－Ｎ（Ｒ）－、－ＳＯ２－、－Ｃ≡Ｃ－ＣＨ２－Ｏ－、－Ｎ（ＯＲ）－、－Ｎ（Ｒ）－、および－Ｏ－Ｎ（Ｒ）－からなる群より選ばれる基（ここで、Ｒは、水素原子または炭素原子数１～６のアルキルである。）である。〕
　脱離基としては、（ａ）、（ｂ）および（ｃ）のうち、（ａ）または（ｂ）が好ましく、（ａ）が特に好ましい。（ａ）における環Ｐは、電子吸引性基で置換されていてもよいアリーレン、電子吸引性基で置換されていてもよいヘテロアリーレン、縮環していてもよい２，５－ジケトピロリジン、縮環していてもよい２，６－ジケトピペリジン、縮環していてもよい２－ケトピロリジン、縮環していてもよい２－ケトピペリジン、２－ピリドンのいずれかであるが、このうち、電子吸引性基で置換されているアリーレン、電子吸引性基で置換されているヘテロアリーレン、２，５－ジケトピロリジン、２，６－ジケトピペリジンがより好ましく、電子吸引性基で置換されているアリーレン、２，５－ジケトピロリジン、２，６－ジケトピペリジンがさらにより好ましい。
　（ａ）における環Ｐは、電子吸引性基で置換されていてもよいアリーレン、電子吸引性基で置換されていてもよいヘテロアリーレン、縮環していてもよい２，５-ジケトピロリジン、縮環していてもよい２，６－ジケトピペリジン、縮環していてもよい２-ケトピロリジン、縮環していてもよい２－ケトピペリジン、２－ピリドンからなる群より選ばれる基である。これらの基の詳細は、－Ｎ（Ｒ）－、－Ｎ（ＯＲ）－、－Ｏ－、－Ｓ－、または－Ｓｅ－の脱離する能力を高める基の好ましい例として述べたものと同じである。
　（ａ）におけるＱは、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓｅ－、－ＳＯ２－Ｏ－、－ＳＯ２－Ｎ（Ｒ）－、－ＳＯ２－、－Ｃ≡Ｃ－ＣＨ２－Ｏ－、－Ｎ（ＯＲ）－、－Ｎ（Ｒ）－、－Ｏ－Ｎ（Ｒ）－からなる群より選ばれる基（ここで、Ｒは、水素原子または炭素原子数１～６のアルキルである。）である。〕であるが、このうち、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＳＯ２－Ｏ－、または－ＳＯ２－Ｎ（Ｒ）－が好ましく、－Ｏ－または－Ｓ－がより好ましく、－Ｏ－がさらにより好ましい。
　（ｂ）はヘテロアリーレンであるが、イミダゾールジイル、トリアゾールジイル、テトラゾールジイル、または２－ピリドンジイル（＝２－ヒドロキシピリジンジイル）が好ましく、イミダゾールジイル、または２－ピリドンジイルがさらにより好ましい。
　（Ｃ）におけるＱは、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓｅ－、－ＳＯ２－Ｏ－、－ＳＯ２－Ｎ（Ｒ）－、－ＳＯ２－、－Ｃ≡Ｃ－ＣＨ２－Ｏ－、－Ｎ（ＯＲ）－、－Ｎ（Ｒ）－、および－Ｏ－Ｎ（Ｒ）－からなる群より選ばれる基（ここで、Ｒは、水素原子または炭素原子数１～６のアルキルである。）であるが、－Ｓ－、－Ｃ≡Ｃ－ＣＨ２－Ｏ－、－Ｎ（ＯＲ）－、－Ｎ（Ｒ）－、または－Ｏ－Ｎ（Ｒ）－が好ましく、Ｓ、－Ｎ（ＯＲ）、または－Ｏ－Ｎ（Ｒ）－がさらにより好ましい。
　より具体的には、好ましい脱離基は、下記構造式からなる群より選ばれる基であってもよい。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000016
 （ここで、ＥＷＧは、電子吸引性基であり、
　ｍは、０～４の整数であり、
　ｎは、０～３の整数であり、
　Ｒは、水素原子、または炭素原子数１～６のアルキルであり、
　○（白丸）は、Ｌ１に対する結合手であり、●（黒丸）は、Ｅ１に対する結合手である。）。
　電子吸引性基、および炭素原子数１～６のアルキルの詳細は、上述のとおりである。ｍは、好ましくは１～４の整数であり、より好ましくは１、２または３である。ｎは、好ましくは１～３の整数であり、より好ましくは１または２である。
　Ｌで表される、脱離基を含む２価の基は、上記脱離基からなる２価の基、または上記脱離基に加えて他の２価の基を含む２価の基である。このような他の２価の基としては、例えば、２価の炭化水素基、２価の複素環基、－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＮＲＬ－（ＲＬは水素原子、または上述の置換基を示す）、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（＝Ｓ）－、およびこれらの２以上（例えば２～８、好ましくは２～６、より好ましくは２～４）の組み合わせからなる基が挙げられる。２価の炭化水素基、および２価の複素環基は、例えば１～５個、好ましくは１～３個、より好ましくは１もしくは２個の置換基を有していても、有していなくてもよい。化学構造が簡潔な化合物を合成する観点からは、このような置換基を有しないことが好ましい。一方、上記のような基が置換基を有する場合、このような置換基の例および好ましい例は、上述のものと同じである。
　２価の炭化水素基としては、直鎖、分岐鎖、または環状の２価の炭化水素基であり、好ましくは直鎖または分岐鎖の２価の炭化水素基である。２価の炭化水素基としては、例えば、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、アリーレンが挙げられる。
　アルキレンとしては、炭素原子数１～１２のアルキレンが好ましく、炭素原子数１～６のアルキレンがより好ましく、炭素原子数１～４のアルキレンが特に好ましい。上記炭素原子数に置換基の炭素原子数は含まれない。アルキレンは、直鎖、分岐鎖、または環状のいずれであってもよいが、直鎖のアルキレンが好ましい。このようなアルキレンとしては、例えば、メチレン、エチレン、プロピレン、ブチレン、ペンチレン、へキシレンが挙げられる。
　アルケニレンとしては、炭素原子数２～１２のアルケニレンが好ましく、炭素原子数２～６のアルケニレンがより好ましく、炭素原子数２～４のアルケニレンが特に好ましい。上記炭素原子数に置換基の炭素原子数は含まれない。アルケニレンは、直鎖、分岐鎖、または環状のいずれであってもよいが、直鎖のアルケニレンが好ましい。このようなアルケニレンとしては、例えば、エチレニレン、プロピニレン、ブテニレン、ペンテニレン、へキセニレンが挙げられる。
　アルキニレンとしては、炭素原子数２～１２のアルキニレンが好ましく、炭素原子数２～６のアルキニレンがより好ましく、炭素原子数２～４のアルキニレンが特に好ましい。上記炭素原子数に置換基の炭素原子数は含まれない。アルキニレンは、直鎖、分岐鎖、または環状のいずれであってもよいが、直鎖のアルキニレンが好ましい。このようなアルキニレンとしては、例えば、エチニレン、プロピニレン、ブチニレン、ペンチニレン、へキシニレンが挙げられる。
　アリーレンとしては、炭素原子数６～２４のアリーレンが好ましく、炭素原子数６～１８のアリーレンがより好ましく、炭素原子数６～１４のアリーレンがさらに好ましく、炭素原子数６～１０のアリーレンがさらにより好ましい。上記炭素原子数に置換基の炭素原子数は含まれない。アリーレンとしては、例えば、フェニレン、ナフチレン、アントラセニレンが挙げられる。
　２価の複素環基は、２価の芳香族複素環基、または２価の非芳香族複素環基である。複素環を構成するヘテロ原子として、酸素原子、硫黄原子、窒素原子、リン原子、ホウ素原子およびケイ素原子からなる群から選択される１種以上を含むことが好ましく、酸素原子、硫黄原子および窒素原子からなる群から選択される１種以上を含むことがより好ましい。
　２価の芳香族複素環基としては、炭素原子数１～２１の２価の芳香族複素環基が好ましく、炭素原子数１～１５の２価の芳香族複素環基がより好ましく、炭素原子数１～９の２価の芳香族複素環基がさらに好ましく、炭素原子数１～６の２価の芳香族複素環基がさらにより好ましい。上記炭素原子数に置換基の炭素原子数は含まれない。より具体的には、２価の芳香族複素環基としては、例えば、ピロールジイル、フランジイル、チオフェンジイル、ピリジンジイル、ピリダジンジイル、ピリミジンジイル、ピラジンジイル、トリアジンジイル、ピラゾールジイル、イミダゾールジイル、チアゾールジイル、イソチアゾールジイル、オキサゾールジイル、イソオキサゾールジイル、トリアゾールジイル、テトラゾールジイル、インドールジイル、プリンジイル、アントラキノンジイル、カルバゾールジイル、フルオレンジイル、キノリンジイル、イソキノリンジイル、キナゾリンジイル、およびフタラジンジイルが挙げられる。
　２価の非芳香族複素環基としては、炭素原子数２～２１の非芳香族複素環基が好ましく、炭素原子数２～１５の非芳香族複素環基がより好ましく、炭素原子数２～９の非芳香族複素環基がさらに好ましく、炭素原子数２～６の非芳香族複素環基がさらにより好ましい。上記炭素原子数に置換基の炭素原子数は含まれない。より具体的には、２価の非芳香族複素環基としては、例えば、ピロールジオンジイル、ピロリンジオンジイル、ピロリンジイル、オキシランジイル、アジリジンジイル、アゼチジンジイル、オキセタンジイル、チエタンジイル、ピロリジンジイル、ジヒドロフランジイル、テトラヒドロフランジイル、ジオキソランジイル、テトラヒドロチオフェンジイル、ピロリンジイル、イミダゾリジンジイル、オキサゾリジンジイル、ピペリジンジイル、ジヒドロピランジイル、テトラヒドロピランジイル、テトラヒドロチオピランジイル、モルホリンジイル、チオモルホリンジイル、ピペラジンジイル、ジヒドロオキサジンジイル、テトラヒドロオキサジンジイル、ジヒドロピリミジンジイル、およびテトラヒドロピリミジンジイルが挙げられる。
　特定の実施形態では、Ｌは、Ｌ１－Ｌ２として表わされることができる。
　Ｌ１は、結合または２価の基である。Ｌ１で表される２価の基の定義、例および好ましい例は、Ｌで表される脱離基を含む２価の基が脱離基に加えて他の２価の基を含む２価の基である場合における他の２価の基のものと同じである。
　Ｌ２は、脱離基である。Ｌ２で表される脱離基の定義、例および好ましい例は、Ｌにおける脱離基のものと同じである。
　好ましくは、Ｌ２で表される脱離基は、上記（ａ）～（ｃ）のいずれかである。Ｌ２で表される脱離基の例および好ましい例もまた、上記（ａ）～（ｃ）で述べたものと同じである。
　Ａ（親和性物質）とＥ（求電子基を含む２価の基）とを連結するＬ（脱離基を含む２価の基）またはＬ１（結合または２価の基）－Ｌ２（脱離基）の主鎖の長さは、抗体および親和性物質の種類、ならびに抗体における親和性物質の標的部位と、位置選択的に修飾されるべき抗体中の特定のアミノ酸残基との関係などの種々の因子に応じて、適宜設計することができる。ＬまたはＬ１－Ｌ２の主鎖とは、ＡおよびＥを連結する、共有結合で連結された複数の原子からなる鎖状構造をいい、水素原子、分岐構造部分、および置換基は除かれる。式（Ｉ）で表される化合物を抗体と接触させると、先ず、Ａが抗体に会合する。次いで、抗体会合部位の近傍に存在する抗体中の修飾されるべき特定のアミノ酸残基の側鎖中の求核基（例、リジン残基の側鎖中のアミノ基）がＥにおける求電子基と反応することにより、当該求核基が当該求電子と結合する一方で、ＬまたはＬ１に含まれる脱離基がＥから脱離することができる。このとき、抗体会合部位と修飾されるべき特定のアミノ酸残基との間の近傍において当該特定のアミノ酸残基と同種のアミノ酸残基が他に存在しない場合、主鎖の長さを厳密に制御せずとも、Ｅにおける求電子基は、抗体中の修飾されるべき特定のアミノ酸残基の側鎖中の求核基に対して位置選択的に結合することができる。勿論、このような領域において当該特定のアミノ酸残基と同種のアミノ酸残基が他に存在する場合であっても、主鎖の長さを制御することにより、Ｅにおける求電子基は、当該特定のアミノ酸残基に対して位置選択的に結合することができる。
　ＡとＥとを連結するＬまたはＬ１－Ｌ２の主鎖の長さは、抗体中の特定のアミノ酸残基を位置選択的に修飾できる限り特に限定されないが、例えば、ヒトＩｇＧ　Ｆｃにおける特定のアミノ酸残基（例、Ｅｕ　ｎｕｍｂｅｒｉｎｇに従うＬｙｓ２４８残基またはＬｙｓ２４６残基、Ｌｙｓ２８８またはＬｙｓ２９０、Ｌｙｓ３１７、あるいはそれら残基以外の他のアミノ酸残基）を位置選択的に修飾する場合、２０個以下の原子からなる長さであることが好ましい。ＬまたはＬ１－Ｌ２の主鎖の長さはまた、好ましくは１以上であり、より好ましくは２以上であり、さらにより好ましくは３以上であり、特に好ましくは４以上または５以上であってもよい。ＬまたはＬ１－Ｌ２の主鎖の長さはまた、好ましくは５０以下であり、より好ましくは３０以下であり、さらにより好ましくは２０以下であり、特に好ましくは１５以下または１０以下であってもよい。より具体的には、ＬまたはＬ１－Ｌ２の主鎖の長さは、好ましくは１～５０であり、より好ましくは１～３０であり、さらにより好ましくは１～２０であり、特に好ましくは１～１５または１～１０であってもよい。あるいは、ＬまたはＬ１－Ｌ２の主鎖の長さは、好ましくは２～３０であり、さらにより好ましくは３～２０であり、特に好ましくは４～１５または５～１０であってもよい。
　主鎖が環構造を含まない構造である場合、主鎖の原子数は、鎖状構造中の原子数（水素原子、分岐構造部分、および置換基中の原子数を除く）を数えることにより決定することができる。
　一方、主鎖が環構造を含む構造である場合、主鎖の長さを規定する観点から、主鎖の原子数を便宜的に数えることができる。具体的には、このような場合における主鎖の原子数は、主鎖において２価の環構造を含まない鎖状構造中の原子数（水素原子、分岐構造部分、および置換基中の原子数を除く）に加えて、環構造中の２つの結合手を連絡する最短経路の原子数を数えることにより決定することができる（例えば、以下（ａ）～（ｄ）の太字経路を参照）。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000017
 ・は、結合手である。
（ａ）の場合、最短経路は太字経路であるため、主鎖の原子数として数えられる２価の環構造中の原子数は、２である。
（ｂ）の場合、最短経路は太字経路であるため、主鎖の原子数として数えられる２価の環構造中の原子数は、３である。
（ｃ）の場合、いずれの経路も最短経路（等距離）であるため、主鎖の原子数として数えられる２価の環構造中の原子数は、４である。
（ｄ）の場合、縮合部位の経路が最短経路であるため、主鎖の原子数として数えられる２価の環構造中の原子数は、４である。
　好ましくは、ＬまたはＬ１－Ｌ２の主鎖は、Ｌにおける「他の２価の基」またはＬ１における「２価の基」が２価の環構造を含まない鎖状構造であってもよい。したがって、Ｌにおける「他の２価の基」またはＬ１における「２価の基」は、２価の直鎖または分岐鎖の炭化水素基、－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＮＲＬ－（ＲＬは水素原子、または上述の置換基を示す）、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（＝Ｓ）－、およびこれらの２以上（例えば２～８、好ましくは２～６、より好ましくは２～４）の組み合わせからなる基であってもよい。２価の直鎖または分岐鎖の炭化水素基は、例えば１～５個、好ましくは１～３個、より好ましくは１もしくは２個の置換基を有していても、有していなくてもよい。化学構造が簡潔な化合物を合成する観点からは、このような置換基を有しないことが好ましい。一方、上記のような基が置換基を有する場合、このような置換基の例および好ましい例は、脱離基の例であるヘテロアリーレンが有していてもよい置換基と同じである。
１－４．求電子基を含む２価の基（Ｅ）
　式（Ｉ）において、Ｌは、（ｉ）脱離基と連結しており、かつ（ｉｉ）抗体中の求核基と反応する能力を有する求電子基を含む２価の基である。
　抗体中の求核基としては、例えば、リジン残基の側鎖におけるＮＨ２、チロシン残基の側鎖におけるＯＨ、セリン残基の側鎖におけるＯＨ、スレオニン残基の側鎖におけるＯＨ、およびシステイン残基の側鎖におけるＳＨが挙げられる。抗体中の求核基としては、リジン残基の側鎖におけるＮＨ２、またはチロシン残基の側鎖におけるＯＨが好ましく、リジン残基の側鎖におけるＮＨ２がより好ましい。
　Ｅに含まれる求電子基としては、脱離基と連結することができ、かつ、上述のような抗体中の求核基と反応する能力を有する任意の求電子基を用いることができるが、－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＳＯ２－、および－ＣＨ２－からなる群より選ばれる基が好ましい。求電子基としては、その隣接する基（例、脱離基、Ｌ２、Ｅ２）との電子的なバランスによって－ＣＨ２－も利用することができる。例えば、脱離基としてトシル基が利用される場合、求電子基として－ＣＨ２－を好適に利用することができる（Ｔｓｕｋｉｊｉ　ｅｔ　ａｌ．，　Ｎａｔｕｒｅ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．５，Ｎｏ．５，Ｍａｙ　２００９）。求電子基としては、－Ｃ（＝Ｏ）－または－ＳＯ２－がより好ましく、－Ｃ（＝Ｏ）－がさらにより好ましい。
　Ｅで表される、求電子基を含む２価の基は、上記求電子基からなる２価の基、または上記求電子基に加えて他の２価の基を含む２価の基である。このような他の２価の基としては、例えば、２価の炭化水素基、２価の複素環基、－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＮＲＥ－（ＲＥは水素原子、または上述の置換基を示す）、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（＝Ｓ）－、およびこれらの２以上（例えば２～８、好ましくは２～６、より好ましくは２～４）の組み合わせからなる基が挙げられる。２価の炭化水素基、および２価の複素環基は、例えば１～５個、好ましくは１～３個、より好ましくは１もしくは２個の置換基を有していても、有していなくてもよい。化学構造が簡潔な化合物を合成する観点からは、このような置換基を有しないことが好ましい。一方、上記のような基が置換基を有する場合、このような置換基の例および好ましい例は、脱離基の例であるヘテロアリーレンが有していてもよい置換基と同じである。Ｅ（および後述のＥ１－Ｅ２－Ｅ３）は、潜在的な免疫原性を有し、また血中で加水分解され易いという問題を抱えるペプチド部分を含まないように設計できる。
　２価の炭化水素基としては、直鎖、分岐鎖、または環状の２価の炭化水素基であり、好ましくは直鎖または分岐鎖の２価の炭化水素基である。２価の炭化水素基としては、例えば、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、アリーレンが挙げられる。
　アルキレンとしては、炭素原子数１～１２のアルキレンが好ましく、炭素原子数１～６のアルキレンがより好ましく、炭素原子数１～４のアルキレンが特に好ましい。上記炭素原子数に置換基の炭素原子数は含まれない。アルキレンは、直鎖、分岐鎖、または環状のいずれであってもよいが、直鎖のアルキレンが好ましい。このようなアルキレンとしては、例えば、メチレン、エチレン、プロピレン、ブチレン、ペンチレン、へキシレンが挙げられる。
　アルケニレンとしては、炭素原子数２～１２のアルケニレンが好ましく、炭素原子数２～６のアルケニレンがより好ましく、炭素原子数２～４のアルケニレンが特に好ましい。上記炭素原子数に置換基の炭素原子数は含まれない。アルケニレンは、直鎖、分岐鎖、または環状のいずれであってもよいが、直鎖のアルケニレンが好ましい。このようなアルケニレンとしては、例えば、エチレニレン、プロピニレン、ブテニレン、ペンテニレン、へキセニレンが挙げられる。
　アルキニレンとしては、炭素原子数２～１２のアルキニレンが好ましく、炭素原子数２～６のアルキニレンがより好ましく、炭素原子数２～４のアルキニレンが特に好ましい。上記炭素原子数に置換基の炭素原子数は含まれない。アルキニレンは、直鎖、分岐鎖、または環状のいずれであってもよいが、直鎖のアルキニレンが好ましい。このようなアルキニレンとしては、例えば、エチニレン、プロピニレン、ブチニレン、ペンチニレン、へキシニレンが挙げられる。
　アリーレンとしては、炭素原子数６～２４のアリーレンが好ましく、炭素原子数６～１８のアリーレンがより好ましく、炭素原子数６～１４のアリーレンがさらに好ましく、炭素原子数６～１０のアリーレンがさらにより好ましい。上記炭素原子数に置換基の炭素原子数は含まれない。アリーレンとしては、例えば、フェニレン、ナフチレン、アントラセニレンが挙げられる。
　２価の複素環基は、２価の芳香族複素環基、または２価の非芳香族複素環基である。複素環を構成するヘテロ原子として、酸素原子、硫黄原子、窒素原子、リン原子、ホウ素原子およびケイ素原子からなる群から選択される１種以上を含むことが好ましく、酸素原子、硫黄原子および窒素原子からなる群から選択される１種以上を含むことがより好ましい。
　２価の芳香族複素環基としては、炭素原子数１～２１の２価の芳香族複素環基が好ましく、炭素原子数１～１５の２価の芳香族複素環基がより好ましく、炭素原子数１～９の２価の芳香族複素環基がさらに好ましく、炭素原子数１～６の２価の芳香族複素環基がさらにより好ましい。上記炭素原子数に置換基の炭素原子数は含まれない。より具体的には、２価の芳香族複素環基としては、例えば、ピロールジイル、フランジイル、チオフェンジイル、ピリジンジイル、ピリダジンジイル、ピリミジンジイル、ピラジンジイル、トリアジンジイル、ピラゾールジイル、イミダゾールジイル、チアゾールジイル、イソチアゾールジイル、オキサゾールジイル、イソオキサゾールジイル、トリアゾールジイル、テトラゾールジイル、インドールジイル、プリンジイル、アントラキノンジイル、カルバゾールジイル、フルオレンジイル、キノリンジイル、イソキノリンジイル、キナゾリンジイル、およびフタラジンジイルが挙げられる。
　２価の非芳香族複素環基としては、炭素原子数２～２１の非芳香族複素環基が好ましく、炭素原子数２～１５の非芳香族複素環基がより好ましく、炭素原子数２～９の非芳香族複素環基がさらに好ましく、炭素原子数２～６の非芳香族複素環基がさらにより好ましい。上記炭素原子数に置換基の炭素原子数は含まれない。より具体的には、２価の非芳香族複素環基としては、例えば、ピロールジオンジイル、ピロリンジオンジイル、ピロリンジイル、オキシランジイル、アジリジンジイル、アゼチジンジイル、オキセタンジイル、チエタンジイル、ピロリジンジイル、ジヒドロフランジイル、テトラヒドロフランジイル、ジオキソランジイル、テトラヒドロチオフェンジイル、ピロリンジイル、イミダゾリジンジイル、オキサゾリジンジイル、ピペリジンジイル、ジヒドロピランジイル、テトラヒドロピランジイル、テトラヒドロチオピランジイル、モルホリンジイル、チオモルホリンジイル、ピペラジンジイル、ジヒドロオキサジンジイル、テトラヒドロオキサジンジイル、ジヒドロピリミジンジイル、およびテトラヒドロピリミジンジイルが挙げられる。
　特定の実施形態では、Ｅは、Ｅ１－Ｅ２－Ｅ３として表わされることができる。
　Ｅ１は、（ｉ）前記脱離基と連結しており、かつ（ｉｉ）前記抗体中の求核基と反応する能力を有する求電子基である。Ｅ１の求電子基の定義、例および好ましい例は、Ｅにおける求電子基と同じである。
　Ｅ２は、下記（ａ）あるいは（ｂ）である：
（ａ）－Ｘ－Ｙ－〔ここで、Ｅ１と結合するＸは、Ｃ（Ｒ１）（Ｒ２）（ここで、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立して、水素原子または炭素原子数１～６のアルキルである。）、Ｎ（Ｒ３）（ここで、Ｒ３は、水素原子または炭素原子数１～６のアルキルである。）、Ｏ、Ｓ、またはＳｅであり、Ｅ３と結合するＹは、Ｃ（Ｒ４）（Ｒ５）（ここで、Ｒ４およびＲ５はそれぞれ独立して、水素原子または炭素原子数１～６のアルキルである。）である。〕；あるいは
（ｂ）下記式（ｉ）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000018
 （ここで、環Ｚは、Ｅ１と結合する環構成原子Ｘ’およびその両隣の環構成原子の全てが炭素原子である２価の環基であるか、またはＥ１と結合する環構成原子Ｘ’が窒素原子であり、かつ窒素原子の両隣の環構成原子が炭素原子である２価の複素環基である。・は結合手である。）で表される基である。
　Ｅ２が上記（ａ）である場合、Ｒ１～Ｒ５における炭素原子数１～６のアルキルは、上述のものと同じである。
　Ｅ２が上記（ａ）である場合、Ｅ１と結合するＸとしては、本発明の化合物の反応性および安定性の向上の観点より、Ｃ（Ｒ１）（Ｒ２）、Ｎ（Ｒ３）、Ｏ、Ｓ、またはＳｅが好ましく、Ｃ（Ｒ１）（Ｒ２）、Ｎ（Ｒ３）、Ｏ、またはＳがより好ましく、Ｃ（Ｒ１）（Ｒ２）、Ｎ（Ｒ３）、またはＯがさらにより好ましく、Ｃ（Ｒ１）（Ｒ２）、またはＮ（Ｒ３）がなおさらにより好ましく、Ｃ（Ｒ１）（Ｒ２）が最も好ましい。
　Ｅ２におけるＸはまた、脱離基（例、Ｌ、Ｌ２を参照）との関係において規定することができる。ＸがＮ（Ｒ３）、Ｏ、Ｓ、またはＳｅ等の原子または基である場合、脱離基のみならず、Ｘもまた求電子基から脱離し得る。しかし、式（Ｉ）で表される所定量の化合物を抗体との反応に使用した場合、式（Ｉ）で表される少なくとも一部の化合物におけるＸは、求電子基から脱離しないように反応を制御することができるので、本発明では、Ｘとして上述したような原子または基を用いることができる。好ましくは、式（Ｉ）で表される化合物と抗体との目的反応の効率の向上、ひいては生体直交性官能基を有する抗体の収率の向上の観点から、Ｘとして、脱離基よりも脱離し難い原子または基（すなわち、当該原子または基のｐＫａ値が脱離基のｐＫａ値よりも大きいもの）を用いることができる。したがって、脱離基をより選択的に脱離させ、かつＥ２におけるＸの脱離を抑制させることにより、式（Ｉ）で表される化合物と抗体との目的反応の効率を向上させ、ひいては生体直交性官能基を有する抗体の収率を向上させる観点から、Ｅ２におけるＸとしては、脱離する能力が脱離基以下であるものが好ましい。このようなＸとしては、脱離基の種類（例、－Ｎ（Ｒ）－、－Ｎ（ＯＲ）－、－Ｏ－、－Ｓ－、または－Ｓｅ－、あるいはヘテロアリーレン）、ならびに脱離基に隣接して存在する脱離基の脱離する能力を高める基を含む基の有無およびその種類によって変動し得るが、概説すると、以下のとおりである。
（１）脱離基が－Ｎ（Ｒ）－または－Ｎ（ＯＲ）－である場合、Ｘとしては、Ｃ（Ｒ１）（Ｒ２）、またはＮ（Ｒ３）が好ましく、Ｃ（Ｒ１）（Ｒ２）がより好ましい。
（２）脱離基が－Ｏ－である場合、Ｘとしては、Ｃ（Ｒ１）（Ｒ２）、Ｎ（Ｒ３）、またはＯが好ましく、Ｃ（Ｒ１）（Ｒ２）、またはＮ（Ｒ３）がより好ましく、Ｃ（Ｒ１）（Ｒ２）がさらにより好ましい。
（３）脱離基が－Ｓ－である場合、Ｘとしては、Ｃ（Ｒ１）（Ｒ２）、Ｎ（Ｒ３）、Ｏ、またはＳが好ましく、Ｃ（Ｒ１）（Ｒ２）、Ｎ（Ｒ３）、またはＯがより好ましく、Ｃ（Ｒ１）（Ｒ２）、またはＮ（Ｒ３）がさらにより好ましく、Ｃ（Ｒ１）（Ｒ２）がなおさらにより好ましい。
（４）脱離基が－Ｓｅ－である場合、Ｘとしては、Ｃ（Ｒ１）（Ｒ２）、Ｎ（Ｒ３）、Ｏ、Ｓ、またはＳｅが好ましく、Ｃ（Ｒ１）（Ｒ２）、Ｎ（Ｒ３）、Ｏ、またはＳがより好ましく、Ｃ（Ｒ１）（Ｒ２）、Ｎ（Ｒ３）、またはＯがさらにより好ましく、Ｃ（Ｒ１）（Ｒ２）、またはＮ（Ｒ３）がなおさらにより好ましく、Ｃ（Ｒ１）（Ｒ２）が最も好ましい。
（５）脱離基がヘテロアリーレンである場合、Ｘとしては、Ｃ（Ｒ１）（Ｒ２）、Ｎ（Ｒ３）、Ｏ、Ｓ、またはＳｅが好ましく、Ｃ（Ｒ１）（Ｒ２）、Ｎ（Ｒ３）、Ｏ、またはＳがより好ましく、Ｃ（Ｒ１）（Ｒ２）、Ｎ（Ｒ３）、またはＯがさらにより好ましく、Ｃ（Ｒ１）（Ｒ２）、またはＮ（Ｒ３）がなおさらにより好ましく、Ｃ（Ｒ１）（Ｒ２）が最も好ましい。
　Ｅ２が上記（ｂ）である場合、環Ｚに含まれる、Ｅ１と結合する環構成原子Ｘ’は、炭素原子または窒素原子である。
　Ｅ１と結合する環構成原子Ｘ’が炭素原子である場合、環Ｚは、Ｅ１と結合する環構成原子Ｘ’およびその両隣の環構成原子の全てが炭素原子である２価の環基である。２価の環基は、例えば１～５個、好ましくは１～３個、より好ましくは１もしくは２個の置換基を有していても、有していなくてもよい。化学構造が簡潔な化合物を合成する観点からは、このような置換基を有しないことが好ましい。一方、２価の環基が置換基を有する場合、このような置換基の例および好ましい例は、脱離基の例であるヘテロアリーレンが有していてもよい置換基と同じである。このような２価の環基としては、例えば、環状の２価の炭化水素基（例、アリーレン、環状のアルキレン、環状のアルケニレン、環状のアルキニレン）、および２価の複素環基（例、２価の芳香族複素環基、２価の非芳香族複素環基）が挙げられる。
　２価の炭化水素基としては、環状の２価の炭化水素基であり、２価の炭化水素基としては、例えば、環状のアルキレン、環状のアルケニレン、環状のアルキニレン、アリーレンが挙げられる。
　環状のアルキレンとしては、炭素原子数３～１２のアルキレンが好ましく、炭素原子数３～１０のアルキレンがより好ましく、炭素原子数５～８のアルキレンが特に好ましい。上記炭素原子数に置換基の炭素原子数は含まれない。このようなアルキレンとしては、例えば、シクロプロピレン、シクロブチレン、シクロペンチレン、シクロへキシレン、シクロヘプチレン、シクロオクチレン、シクロノニレン、シクロデキレンが挙げられる。
　環状のアルケニレンとしては、炭素原子数３～１２のアルケニレンが好ましく、炭素原子数３～１０のアルケニレンがより好ましく、炭素原子数５～８のアルケニレンが特に好ましい。上記炭素原子数に置換基の炭素原子数は含まれない。このようなアルケニレンとしては、例えば、シクロプロペニレン、シクロブテニレン、シクロペンテニレン、シクロへキセニレン、シクロヘプテニレン、シクロオクテニレン、シクロノネニレン、シクロデケニレンが挙げられる。
　環状のアルキニレンとしては、炭素原子数６～１２のアルキニレンが好ましく、炭素原子数７～１２のアルキニレンがより好ましく、炭素原子数８～１２のアルキニレンが特に好ましい。上記炭素原子数に置換基の炭素原子数は含まれない。アルキニレンは、直鎖、分岐鎖、または環状のいずれであってもよいが、直鎖のアルキニレンが好ましい。このようなアルキニレンとしては、例えば、シクロへキシニレン、シクロヘプチニレン、シクロオクチニレン、シクロノニニレン、シクロデキニレン、シクロウンデキニレン、シクロドデキニレンが挙げられる。
　アリーレンとしては、炭素原子数６～２４のアリーレンが好ましく、炭素原子数６～１８のアリーレンがより好ましく、炭素原子数６～１４のアリーレンがさらに好ましく、炭素原子数６～１０のアリーレンがさらにより好ましい。上記炭素原子数に置換基の炭素原子数は含まれない。アリーレンとしては、例えば、フェニレン、ナフチレン、アントラセニレンが挙げられる。
　２価の複素環基は、２価の芳香族複素環基、または２価の非芳香族複素環基である。複素環を構成するヘテロ原子として、酸素原子、硫黄原子、窒素原子、リン原子、ホウ素原子およびケイ素原子からなる群から選択される１種以上を含むことが好ましく、酸素原子、硫黄原子および窒素原子からなる群から選択される１種以上を含むことがより好ましい。
　２価の芳香族複素環基としては、炭素原子数３～２１の２価の芳香族複素環基が好ましく、炭素原子数３～１５の２価の芳香族複素環基がより好ましく、炭素原子数３～９の２価の芳香族複素環基がさらに好ましく、炭素原子数３～６の２価の芳香族複素環基がさらにより好ましい。上記炭素原子数に置換基の炭素原子数は含まれない。より具体的には、２価の芳香族複素環基としては、例えば、ピロールジイル、フランジイル、チオフェンジイル、ピリジンジイル、ピリダジンジイル、ピリミジンジイル、ピラゾールジイル、イソチアゾールジイル、イソオキサゾールジイル、インドールジイル、アントラキノンジイル、カルバゾールジイル、フルオレンジイル、キノリンジイル、イソキノリンジイル、キナゾリンジイル、およびフタラジンジイルが挙げられる。
　２価の非芳香族複素環基としては、炭素原子数３～２１の非芳香族複素環基が好ましく、炭素原子数３～１５の非芳香族複素環基がより好ましく、炭素原子数３～９の非芳香族複素環基がさらに好ましく、炭素原子数３～６の非芳香族複素環基がさらにより好ましい。上記炭素原子数に置換基の炭素原子数は含まれない。より具体的には、２価の非芳香族複素環基としては、例えば、ピロリンジオンジイル、ピロリンジイル、アゼチジンジイル、オキセタンジイル、チエタンジイル、ピロリジンジイル、ジヒドロフランジイル、テトラヒドロフランジイル、テトラヒドロチオフェンジイル、ピロリンジイル、ピペリジンジイル、ジヒドロピランジイル、テトラヒドロピランジイル、テトラヒドロチオピランジイル、ピペラジンジイル、ジヒドロオキサジンジイル、テトラヒドロオキサジンジイル、ジヒドロピリミジンジイル、およびテトラヒドロピリミジンジイルが挙げられる。
　Ｅ１と結合する環構成原子Ｘ’が窒素原子である場合、環Ｚは、Ｅ１と結合する環構成原子Ｘ’が窒素原子であり、かつ窒素原子の両隣の環構成原子が炭素原子である２価の複素環基である。このような２価の複素環基は、環構成原子として窒素原子を含む２価の複素環基である。環構成原子として窒素原子を含む２価の複素環基としては、炭素原子数３～２１の２価の複素環基が好ましく、炭素原子数３～１５の２価の複素環基がより好ましく、炭素原子数３～９の２価の複素環基がさらに好ましく、炭素原子数３～６の２価の複素環基がさらにより好ましい。２価の複素環基は、例えば１～５個、好ましくは１～３個、より好ましくは１もしくは２個の置換基を有していても、有していなくてもよい。化学構造が簡潔な化合物を合成する観点からは、このような置換基を有しないことが好ましい。一方、２価の複素環基が置換基を有する場合、このような置換基の例および好ましい例は、脱離基の例であるヘテロアリーレンが有していてもよい置換基と同じである。上記炭素原子数に置換基の炭素原子数は含まれない。環構成原子として窒素原子を含む２価の複素環基としては、例えば、環構成原子として窒素原子を含む２価の芳香族複素環基、環構成原子として窒素原子を含む２価の非芳香族複素環基が挙げられる。環構成原子として窒素原子を含む２価の芳香族複素環基としては、例えば、ピロールジイル、イミダゾールジイル、インドールジイル、プリンジイル、カルバゾールジイルが挙げられる。環構成原子として窒素原子を含む２価の非芳香族複素環基としては、例えば、ピロールジオンジイル、ピロリンジオンジイル、ピロリンジイル、アジリジンジイル、アゼチジンジイル、ピロリジンジイル、ピロリンジイル、イミダゾリジンジイル、ピペリジンジイル、モルホリンジイル、チオモルホリンジイル、ピペラジンジイル、ジヒドロピリミジンジイル、およびテトラヒドロピリミジンジイルが挙げられる。
　好ましくは、（ｂ）上記式（ｉ）で表される基は、（ｂ’）下記式（ｉ’）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000019
 （ここで、環Ｚは、Ｅ１と結合する環構成原子およびその両隣の環構成原子の全てが炭素原子である２価の環基である。・は結合手である。）で表される基である。上記式（ｉ’）で表される基における環Ｚについての２価の環基の定義、例および好ましい例は、上記式（ｉ）で表される基における環Ｚについての２価の環基のものと同じである。
　Ｅ３は、Ｅ２が－Ｘ－Ｙ－の場合には２価の基であり、Ｅ２が式（ｉ）で表される基の場合には結合または２価の基である。Ｅ３で表される２価の基は、Ｅで表される求電子基を含む２価の基が求電子基に加えて他の２価の基を含む２価の基である場合における他の２価の基と同じである。
　Ｌ（脱離基を含む２価の基）とＢ（生体直交性官能基）とを連結するＥ（求電子基を含む２価の基）またはＥ１（求電子基）－Ｅ２（上記（ａ）または（ｂ））－Ｅ３（結合または２価の基）の主鎖の長さは、式（Ｉ）で表される化合物と抗体との間の反応における、抗体中の特定のアミノ酸残基の位置選択的な修飾に関与し得ず、むしろ、当該反応後に生成する、生体直交性官能基を有する抗体における抗体と生体直交性官能基との間の距離に関与し得る。ＥまたはＥ１－Ｅ２－Ｅ３の主鎖とは、ＬおよびＢを連結する、共有結合で連結された複数の原子からなる鎖状構造をいい、水素原子、分岐構造部分、および置換基は除かれる。したがって、ＥまたはＥ１－Ｅ２－Ｅ３の主鎖の長さは、当該距離の調節の観点から、適宜設計することができる。
　ＬとＢとを連結するＥまたはＥ１－Ｅ２－Ｅ３の主鎖の長さは、特に限定されないが、３個以上の原子からなる長さであってもよい。
　主鎖が環構造を含まない構造である場合、主鎖の原子数は、鎖状構造中の原子数（水素原子、分岐構造部分、および置換基中の原子数を除く）を数えることにより決定することができる。
　一方、主鎖が環構造を含む構造である場合、主鎖の長さを規定する観点から、主鎖の原子数を便宜的に数えることができる。具体的には、このような場合における主鎖の原子数は、上述のとおり、主鎖において２価の環構造を含まない鎖状構造中の原子数（水素原子、分岐構造部分、および置換基中の原子数を除く）に加えて、環構造中の２つの結合手を連絡する最短経路の原子数を数えることにより決定することができる。
　好ましくは、ＥまたはＥ１－Ｅ２－Ｅ３の主鎖は、Ｅにおける「他の２価の基」またはＥ３における「２価の基」が２価の環構造を含まない鎖状構造であってもよい。したがって、Ｅにおける「他の２価の基」またはＥ３における「２価の基」は、２価の直鎖または分岐鎖の炭化水素基、－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＮＲＥ－（ＲＥは水素原子、または上述の置換基を示す）、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（＝Ｓ）－、およびこれらの２以上（例えば２～８、好ましくは２～６、より好ましくは２～４）の組み合わせからなる基であってもよい。２価の直鎖または分岐鎖の炭化水素基は、例えば１～５個、好ましくは１～３個、より好ましくは１もしくは２個の置換基を有していても、有していなくてもよい。化学構造が簡潔な化合物を合成する観点からは、このような置換基を有しないことが好ましい。一方、上記のような基が置換基を有する場合、このような置換基の例および好ましい例は、脱離基の例であるヘテロアリーレンが有していてもよい置換基と同じである。
１－５．生体直交性官能基（Ｂ）
　式（Ｉ）において、Ｂは、生体直交性官能基である。
　生体直交性官能基とは、生体構成成分（例、アミノ酸、核酸、脂質、糖、リン酸）とは反応しない、もしくは生体構成成分に対する反応の速度が遅いが、生体構成成分以外の成分に対して選択的に反応する基をいう。生体直交性官能基は、当該技術分野において周知である（例、Ｓｈａｒｐｌｅｓｓ　Ｋ．Ｂ．ｅｔ　ａｌ．，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．４０，２００４（２０１５）；Ｂｅｒｔｏｚｚｉ　Ｃ．Ｒ．ｅｔ　ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ　２９１，２３５７（２００１）；Ｂｅｒｔｏｚｚｉ　Ｃ．Ｒ．ｅｔ　ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　１，１３（２００５）を参照）。
　親和性物質の標的が抗体（タンパク質）である場合、生体直交性官能基は、タンパク質に対する生体直交性官能基である。タンパク質に対する生体直交性官能基とは、タンパク質を構成する天然の２０種のアミノ酸残基の側鎖と反応せずに、所定の官能基と反応する基である。タンパク質を構成する天然の２０種のアミノ酸は、アラニン（Ａ）、アスパラギン（Ｎ）、システイン（Ｃ）、グルタミン（Ｑ）、グリシン（Ｇ）、イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、フェニルアラニン（Ｆ）、プロリン（Ｐ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、トリプトファン（Ｗ）、チロシン（Ｙ）、バリン（Ｖ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、アルギニン（Ｒ）、ヒスチジン（Ｈ）、およびリジン（Ｌ）である。これらの天然の２０種のアミノ酸のうち、側鎖がない（すなわち、水素原子である）グリシン、ならびに側鎖が炭化水素基である（すなわち、硫黄原子、窒素原子、および酸素原子からなる群より選ばれるヘテロ原子を側鎖に含まない）アラニン、イソロイシン、ロイシン、フェニルアラニン、およびバリンは、通常の反応に対して不活性である。したがって、タンパク質に対する生体直交性官能基は、通常の反応に対して不活性である側鎖を有するこれらのアミノ酸の側鎖に加えて、アスパラギン、グルタミン、メチオニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、アスパラギン酸、グルタミン酸、アルギニン、ヒスチジン、およびリジンの側鎖に対しても反応できない官能基である。
　タンパク質に対して反応できないこのような生体直交性官能基としては、例えば、アジド残基、アルデヒド残基、チオール残基、アルケン残基（換言すれば、炭素原子間二重結合を有する最小単位であるビニレン（エテニレン）部分を有していればよい。以下同様）、アルキン残基（換言すれば、炭素原子間三重結合を有する最小単位であるエチニレン部分を有していればよい。以下同様）、ハロゲン残基、テトラジン残基、ニトロン残基、ヒドロキシルアミン残基、ニトリル残基、ヒドラジン残基、ケトン残基、ボロン酸残基、シアノベンゾチアゾール残基、アリル残基、ホスフィン残基、マレイミド残基、ジスルフィド残基、チオエステル残基、α―ハロカルボニル残基（例、α位にフッ素原子、塩素原子、臭素原子またはヨウ素原子を有するカルボニル残基。以下同様）、イソニトリル残基、シドノン残基、セレン残基が挙げられる。抗体は、遊離のチオールを含み得ないタンパク質であり得る。遊離のチオールを含み得ないタンパク質においては、チオールが生体直交性官能基として機能する。したがって、親和性物質の標的が抗体である場合、生体直交性官能基にはチオールが含まれる。チオール残基は、未保護のチオール残基（すなわち、－ＳＨ）であっても、保護されたチオール残基であってもよい。保護されたチオール残基におけるチオール残基の保護基としては、例えば、炭化水素基〔例、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、シクロアルキル基、アリール基（例、フェニル基、ナフチル基）、アリールアルキル（アラルキル）基〕、アシル基（例、アセチル基、プロポキシ基、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル基等のブトキシカルボニル基、ベンゾイル基）、アリールアルキルオキシカルボニル基（例、フルオレニルメトキシカルボニル基）、アリールオキシカルボニル基、アリールアルキル（アラルキル）オキシカルボニル基（例、ベンジルオキシカルボニル基）、アルキルチオール基（ｔ－ブチルチオ基)、アリールチオール基（例、ピリジルジチオ基）が挙げられる。あるいは、保護されたチオール残基は、ジスルフィド残基であってもよい。アリールアルキル（アラルキル）基、およびアリールアルキル（アラルキル）オキシカルボニル基におけるアリールアルキルは、１個または複数個（例えば、２個、３個、４個、５個）のアリールがアルキルに結合したものである。チオール残基の保護基の炭素原子数は、例えば１～３０個、好ましくは１～２０個、より好ましくは１～１５個、さらにより好ましくは１～１０個、特に好ましくは１～６個である。本発明では、式（Ｉ）で表される化合物において、１種または２種以上（例、２種、３種、４種）の生体直交性官能基が含まれていてもよいが、好ましくは、１種の生体直交性官能基が含まれていてもよい。
　より具体的には、生体直交性官能基は、下記からなる群より選ばれるいずれか一つの化学構造に対応していてもよい。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000020
 〔式中、
　Ｒ１ｆ、単一もしくは複数のＲ１ｇおよび単一もしくは複数のＲ１ｈは、同一もしくは異なって、（ａ）～（ｇ）からなる群より選ばれる原子もしくは基、または電子吸引基であり、
　・は、結合手である。）
　（ａ）～（ｇ）からなる群より選ばれる原子もしくは基としては、下記が挙げられる：
（ａ）水素原子、またはハロゲン原子；
（ｂ）１価の炭化水素基；
（ｃ）アラルキル；
（ｄ）１価の複素環基；
（ｅ）Ｒａ－Ｏ－、Ｒａ－Ｃ（＝Ｏ）－、Ｒａ－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－、もしくはＲａ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－（Ｒａは、水素原子、もしくは１価の炭化水素基を示す。）；または
（ｆ）ＮＲｂＲｃ－、ＮＲｂＲｃ－Ｃ（＝Ｏ）－、ＮＲｂＲｃ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－、もしくはＲｂ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲｃ－（ＲｂおよびＲｃは、同一もしくは異なって、水素原子、もしくは１価の炭化水素基を示す。）；
（ｇ）ニトロ基、硫酸基、スルホン酸基、シアノ基、もしくはカルボキシル基
からなる群より選ばれる基。
　（ａ）～（ｇ）におけるハロゲン原子、１価の炭化水素基、アラルキル、１価の複素環基、およびＲａ～Ｒｃにおける１価の炭化水素基の定義、例および好ましい例は、上記（ｉ）～（ｖｉｉ）におけるものと同じである。特に好ましくは、（ａ）～（ｇ）からなる群より選ばれる原子もしくは基は、（ａ）または（ｂ）の原子もしくは基である。
　好ましくは、生体直交性官能基は、反応効率の向上等の観点より、上述の生体直交性官能基のなかでも、アジド残基、チオール残基、アルキン残基、マレイミド残基、およびジスルフィド残基からなる群より選ばれる基であってもよい。
　電子吸引基としては、例えば、上述したものが挙げられるが、ハロゲン原子、ボロン酸残基、メシル、トシル、トリフレートが好ましい。
１－６．式（Ｉ）で表される化合物の好ましい構造
　好ましい実施形態では、式（Ｉ）で表される化合物は、下記式（Ｉ－１）：
Ａ－Ｌ１－Ｌ２－Ｅ１－Ｅ２－Ｅ３－Ｂ　　　（Ｉ－１）
〔式中、
　ＡおよびＢは、式（Ｉ）のものと同じであり、
　Ｌ１は、結合または２価の基であり、
　Ｌ２は、脱離基であり、
　Ｅ１は、（ｉ）脱離基と連結しており、かつ（ｉｉ）抗体中の求核基と反応する能力を有する求電子基であり、
　Ｅ２は、（ａ）－Ｘ－Ｙ－〔ここで、Ｅ１と結合するＸは、Ｃ（Ｒ１）（Ｒ２）（ここで、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立して、水素原子または炭素原子数１～６のアルキルである。）、Ｎ（Ｒ３）（ここで、Ｒ３は、水素原子または炭素原子数１～６のアルキルである。）、Ｏ、Ｓ、またはＳｅであり、Ｅ３と結合するＹは、Ｃ（Ｒ４）（Ｒ５）（ここで、Ｒ４およびＲ５はそれぞれ独立して、水素原子または炭素原子数１～６のアルキルである。）である。〕、あるいは（ｂ）下記式（ｉ）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000021
 （ここで、環Ｚは、Ｅ１と結合する環構成原子Ｘ’およびその両隣の環構成原子の全てが炭素原子である２価の環基であるか、またはＥ１と結合する環構成原子Ｘ’が窒素原子であり、かつ窒素原子の両隣の環構成原子が炭素原子である２価の複素環基である。・は結合手である。）で表される基であり、
　Ｅ３は、Ｅ２が－Ｘ－Ｙ－の場合には２価の基であり、Ｅ２が式（ｉ）で表される基の場合には結合または２価の基であり、
　脱離基は、上記求核基と上記求電子基との間の反応によりＥ１から切断されて脱離する能力を有する。〕で表される化合物であってもよい。
　式（Ｉ－１）において、Ｌ２で表される脱離基は、好ましくは、上記（ａ）～（ｃ）のいずれかである。Ｌ２で表される脱離基の例および好ましい例もまた、上記（ａ）～（ｃ）で述べたものと同じである。
　好ましい特定の実施形態では、式（Ｉ－１）で表される化合物は、下記式（Ｉ－２）：
Ａ－Ｌ１－Ｌ２－Ｅ１－Ｘ－Ｙ－Ｅ３－Ｂ　（Ｉ－２）
〔式中、
　Ａ、Ｌ１、Ｘ、Ｙ、およびＢは、式（Ｉ－１）のものと同じであり、
　Ｌ２は、
（ａ）環Ｐ－Ｑ－〔ここで、環Ｐが、電子吸引性基で置換されていてもよいアリーレン、電子吸引性基で置換されていてもよいヘテロアリーレン、縮環していてもよい２，５-ジケトピロリジン、縮環していてもよい２，６－ジケトピペリジン、縮環していてもよい２-ケトピロリジン、縮環していてもよい２－ケトピペリジン、２－ピリドンからなる群より選ばれる基であり、Ｑが、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓｅ－、－ＳＯ２－Ｏ－、－ＳＯ２－Ｎ（Ｒ）－、－ＳＯ２－、－Ｃ≡Ｃ－ＣＨ２－Ｏ－、－Ｎ（ＯＲ）－、－Ｎ（Ｒ）－、および－Ｏ－Ｎ（Ｒ）－からなる群より選ばれる基（ここで、Ｒは、水素原子または炭素原子数１～６のアルキルである。）である。〕、
（ｂ）ヘテロアリーレン、あるいは
（ｃ）－Ｑ－〔ここで、Ｑが、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓｅ－、－ＳＯ２－Ｏ－、－ＳＯ２－Ｎ（Ｒ）－、－ＳＯ２－、－Ｃ≡Ｃ－ＣＨ２－Ｏ－、－Ｎ（ＯＲ）－、－Ｎ（Ｒ）－、および－Ｏ－Ｎ（Ｒ）－からなる群より選ばれる基（ここで、Ｒは、水素原子または炭素原子数１～６のアルキルである。）である。〕であり、
　Ｅ１は、－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＳＯ２－、および－ＣＨ２－からなる群より選ばれる基であり、
　Ｅ３は、２価の基である。〕で表される化合物であってもよい。
　好ましい別の特定の実施形態では、式（Ｉ－１）で表される化合物は、下記式（Ｉ－３）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000022
 〔式中、
　Ａ、Ｌ１、環Ｚ、環構成原子Ｘ’、およびＢは、前記式（Ｉ－１）のものと同じであり、
　Ｌ２は、
（ａ）環Ｐ－Ｑ－〔ここで、環Ｐが、電子吸引性基で置換されていてもよいアリーレン、電子吸引性基で置換されていてもよいヘテロアリーレン、縮環していてもよい２，５-ジケトピロリジン、縮環していてもよい２，６－ジケトピペリジン、縮環していてもよい２-ケトピロリジン、縮環していてもよい２－ケトピペリジン、２－ピリドンからなる群より選ばれる基であり、Ｑが、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓｅ－、－ＳＯ２－Ｏ－、－ＳＯ２－Ｎ（Ｒ）－、－ＳＯ２－、－Ｃ≡Ｃ－ＣＨ２－Ｏ－、－Ｎ（ＯＲ）－、－Ｎ（Ｒ）－、および－Ｏ－Ｎ（Ｒ）－からなる群より選ばれる基（ここで、Ｒは、水素原子または炭素原子数１～６のアルキルである。）である。〕、
（ｂ）ヘテロアリーレン、あるいは
（ｃ）－Ｑ－〔ここで、Ｑが、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓｅ－、－ＳＯ２－Ｏ－、－ＳＯ２－Ｎ（Ｒ）－、－ＳＯ２－、－Ｃ≡Ｃ－ＣＨ２－Ｏ－、－Ｎ（ＯＲ）－、－Ｎ（Ｒ）－、および－Ｏ－Ｎ（Ｒ）－からなる群より選ばれる基（ここで、Ｒは、水素原子または炭素原子数１～６のアルキルである。）である。〕であり、
　Ｅ１は、－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＳＯ２－、および－ＣＨ２－からなる群より選ばれる基であり、
　Ｅ３は、結合または２価の基である。〕で表される化合物であってもよい。
　好ましくは、式（Ｉ－３）で表される化合物は、下記式（Ｉ－４）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000023
 〔式中、
　Ａ、Ｌ１、およびＢは、前記式（Ｉ－１）のものと同じであり、
　Ｌ２は、（ａ）環Ｐ－Ｑ－〔ここで、環Ｐが、電子吸引性基で置換されていてもよいアリーレン、電子吸引性基で置換されていてもよいヘテロアリーレン、縮環していてもよい２，５-ジケトピロリジン、縮環していてもよい２，６－ジケトピペリジン、縮環していてもよい２-ケトピロリジン、縮環していてもよい２－ケトピペリジン、２－ピリドンからなる群より選ばれる基であり、Ｑが、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓｅ－、－ＳＯ２－Ｏ－、－ＳＯ２－Ｎ（Ｒ）－、－ＳＯ２－、－Ｃ≡Ｃ－ＣＨ２－Ｏ－、－Ｎ（ＯＲ）－、－Ｎ（Ｒ）－、および－Ｏ－Ｎ（Ｒ）－からなる群より選ばれる基（ここで、Ｒは、水素原子または炭素原子数１～６のアルキルである。）である。〕、
（ｂ）ヘテロアリーレン、あるいは
（ｃ）－Ｑ－〔ここで、Ｑが、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓｅ－、－ＳＯ２－Ｏ－、－ＳＯ２－Ｎ（Ｒ）－、－ＳＯ２－、－Ｃ≡Ｃ－ＣＨ２－Ｏ－、－Ｎ（ＯＲ）－、－Ｎ（Ｒ）－、および－Ｏ－Ｎ（Ｒ）－からなる群より選ばれる基（ここで、Ｒは、水素原子または炭素原子数１～６のアルキルである。）である。〕であり、
　Ｅ１は、－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＳＯ２－、および－ＣＨ２－からなる群より選ばれる基であり、
　環Ｚは、Ｅ１と結合する環構成原子およびその両隣の環構成原子の全てが炭素原子である２価の環基である。）で表される基であり、
　Ｅ３は、結合または２価の基である。〕で表される化合物であってもよい。
　上記式（Ｉ－１）～（Ｉ－４）で表される化合物において、Ａ、Ｌ１、Ｌ２、Ｅ１、Ｅ２、Ｅ３、およびＢ、ならびに－Ｘ－Ｙ－、Ｒ１～Ｒ５における炭素原子数１～６のアルキル、式（ｉ）で表される基（例、２価の環基、２価の複素環基）の定義、例および好ましい例は、上述したものと同じである。また、Ｌ２である（ａ）～（ｃ）、ならびに環Ｚ（例、Ｅ１と結合する環構成原子Ｘ’およびその両隣の環構成原子の全てが炭素原子である２価の環基、またはＥ１と結合する環構成原子Ｘ’が窒素原子であり、かつ窒素原子の両隣の環構成原子が炭素原子である２価の複素環基）、環Ｐ、およびＱ（例、Ｒにおける炭素原子数１～６のアルキル）などの基の定義、例および好ましい例もまた、上述したものと同じである。
１－７．製造方法
　抗体に対する親和性物質、および生体直交性官能基を有する化合物またはその塩は、適宜調製することができる。抗体に対する親和性物質、および生体直交性官能基を有する化合物またはその塩は、式（Ｉ）、好ましくは式（Ｉ－１）、より好ましくは式（Ｉ－２）、（Ｉ－３）または（Ｉ－４）で表される。
　抗体に対する親和性物質（Ａ）としては、任意の官能基を有するものを適宜選択することができる。したがって、当該官能基と反応することができる反応性基を利用することにより、親和性物質を、Ｌ－Ｅ－Ｂで表される構造単位と反応させて、Ａ－Ｌ－Ｅ－Ｂで表される構造単位を調製することができる。例えば、このような反応は、適切な反応系、例えば有機溶媒系または水溶液系において、適温（例、約１５～２００℃）で行うことができる。反応系は、適切な触媒を含んでいてもよい。反応時間は、例えば１分～２０時間、好ましくは１０分～１５時間、より好ましくは２０分～１０時間、さらにより好ましくは３０分～８時間である。
　反応系において、親和性物質（Ｘ）に対する、Ｌ－Ｅ－Ｂで表される構造単位（Ｙ）のモル比率（Ｙ／Ｘ）は、当該構造単位および親和性物質の種類、当該構造単位によって修飾されるべき親和性物質中の部位の数等に応じて変動することから特に限定されないが、例えば０．１～５０であり、好ましくは０．５～４０であり、より好ましくは１～３５であり、さらにより好ましくは２～２５であり、特に好ましくは３～１５である。
　抗体に対する親和性物質、および生体直交性官能基を有する化合物またはその塩の生成の確認は、その具体的な原料および生成物の分子量にもよるが、例えば、電気泳動法、クロマトグラフィー（例、ゲル濾過クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、逆相カラムクロマトグラフィー、ＨＰＬＣ）、または質量分析により、好ましくは、質量分析により行うことができる。抗体に対する親和性物質、および生体直交性官能基を有する化合物またはその塩は、クロマトグラフィー（例、上述したクロマトグラフィー、およびアフィニティークロマトグラフィー）等の任意の方法により適宜精製することができる。
１－８．その他
　後述の発明〔例、式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）およびその下位概念の式、ならびに部分構造式で表される発明〕では、任意の記号（例、Ａ、Ｌ、Ｅ、Ｂ）、および当該記号に関連して表される用語の詳細（例えば、定義、例および好ましい例）は、上記式（Ｉ）またはその下位概念の式で表される化合物またはその塩の発明と共通する。また、後述の発明を規定することができる特定の基（例、生体直交性官能基、２価の基、置換基）、および特定の数値等の任意の技術要素（例、定義、例および好ましい例）についても、上記で説明したものと共通にすることができる。したがって、これらの事項は、特に言及することなく、後述の発明において適宜援用することができる。同様に、後述の発明で述べた特定の発明の技術要素は、本発明および他の発明の技術要素として、適宜援用することができる。
２．生体直交性官能基を有する抗体の製造方法
　本発明は、以下を含む、生体直交性官能基を有する抗体またはその塩の製造方法を提供する。
（１）下記式（Ｉ）：
Ａ－Ｌ－Ｅ－Ｂ　　　（Ｉ）
〔式中、
　Ａは、抗体に対する親和性物質であり、
　Ｌは、脱離基を含む２価の基であり、
　Ｅは、（ｉ）脱離基と連結しており、かつ（ｉｉ）抗体中の求核基と反応する能力を有する求電子基を含む２価の基であり、
　Ｂは、生体直交性官能基であり、
　脱離基は、上記求核基と上記求電子基との間の反応によりＥから切断されて脱離する能力を有する。〕で表される、抗体に対する親和性物質、および生体直交性官能基を有する化合物またはその塩を、抗体と反応させて、
　下記式（ＩＩ）：
Ａｂ－Ｅ－Ｂ　　　（ＩＩ）
〔式中、
　ＥおよびＢは、式（Ｉ）のものと同じであり、
　Ａｂは、抗体である。〕で表される、生体直交性官能基を有する抗体またはその塩を生成すること。
　生体直交性官能基を有する抗体の製造方法で用いられる抗体は、上述の抗体と同じである。好ましくは、抗体は、モノクローナル抗体である。モノクローナル抗体のアイソタイプとしては、例えば、ＩｇＧ（例、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、およびＩｇＹが挙げられる。モノクローナル抗体は、全長抗体、または抗体断片（例、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、Ｆｖ、単鎖抗体）であるが、全長抗体が好ましい。特に好ましくは、抗体は、ヒトＩｇＧ（例、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）を定常領域に有するヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体である。
　式（ＩＩ）におけるＡｂは、上述の抗体と同じであり、Ｅにおける求電子基と共有結合している。Ｅにおける求電子基との共有結合に供される抗体中の求核基としては、例えば、リジン残基の側鎖におけるＮＨ２、チロシン残基の側鎖におけるＯＨ、セリン残基の側鎖におけるＯＨ、スレオニン残基の側鎖におけるＯＨ、およびシステイン残基の側鎖におけるＳＨが挙げられる。
　式（ＩＩ）におけるＥは、上記式（Ｉ）におけるＥと同じである。Ｅは、Ｅ１－Ｅ２－Ｅ３で表されることができる。Ｅ１、Ｅ２、およびＥ３は、上述のものと同じである。上述のとおり、ＥおよびＥ１－Ｅ２－Ｅ３は、潜在的な免疫原性を有し、また血中で加水分解され易いという問題を抱えるペプチド部分を含まないように設計できる。この場合、式（ＩＩ）で表される生体直交性官能基を有する抗体は、かかる問題を抱えない、機能性物質を有する抗体の調製に使用することができる。
　Ｅにおける求電子基およびＥ１の求電子基は、抗体中の求核基と共有結合している。抗体中の求核基と共有結合している求電子基としては、例えば、ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－、ＮＨ－ＳＯ２－、およびＮＨ－ＣＨ２－（Ｅとの共有結合に供される抗体中の求核基がリジン残基の側鎖におけるＮＨ２である場合）、Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－、Ｏ－ＳＯ２－、およびＯ－ＣＨ２－（Ｅとの共有結合に供される抗体中の求核基が、チロシン残基、セリン残基、またはスレオニン残基の側鎖におけるＯＨである場合）、Ｓ－Ｃ（＝Ｏ）－、およびＳ－ＣＨ２－（Ｅとの共有結合に供される抗体中の求核基が、システイン残基の側鎖におけるＳＨである場合）が挙げられる。抗体中の求核基と共有結合している求電子基としては、ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－およびＮＨ－ＳＯ２－（Ｅとの共有結合に供される抗体中の求核基がリジン残基の側鎖におけるＮＨ２である場合）、Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－およびＯ－ＳＯ２－（Ｅとの共有結合に供される抗体中の求核基が、チロシン残基の側鎖におけるＯＨである場合）が好ましく、ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－およびＮＨ－ＳＯ２－（Ｅとの共有結合に供される抗体中の求核基がリジン残基の側鎖におけるＮＨ２である場合）がより好ましく、ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｅとの共有結合に供される抗体中の求核基がリジン残基の側鎖におけるＮＨ２である場合）がさらにより好ましい。
　式（ＩＩ）におけるＢは、上記式（Ｉ）におけるＢと同じである。
　好ましくは、本発明の製造方法で製造される生体直交性官能基を有する抗体は、生体直交性官能基を位置選択的に有する抗体である。抗体に対する親和性物質、および生体直交性官能基を有する化合物またはその塩が、式（Ｉ）で表されるものである場合、式（ＩＩ）で表される、生体直交性官能基を位置選択的に有する抗体を製造することができる。生体直交性官能基を位置選択的に有する抗体は、好ましくは、定常領域のみに生体直交性官能基を有する抗体であり、より好ましくは、Ｆｃ領域のみに生体直交性官能基を有する抗体である。
　本明細書において、「位置選択的」または「位置選択性」とは、抗体において特定のアミノ酸残基が特定の領域に偏在していないにもかかわらず、抗体中の特定のアミノ酸残基と結合できる所定の構造単位が、抗体中の特定の領域に偏在することをいう。したがって、「位置選択的に有する」、「位置選択的な結合」、「位置選択性での結合」等の位置選択性に関連する表現は、１個以上の特定のアミノ酸残基を含む標的領域における所定の構造単位の結合率または保有率が、標的領域における当該特定のアミノ酸残基と同種である複数個のアミノ酸残基を含む非標的領域における当該構造単位の保有率または結合率よりも有意なレベルで高いことを意味する。このような位置選択的な結合または保有は、抗体中の特定のアミノ酸残基に対して所定の構造単位をランダムに反応させるのではなく、抗体に対する親和性物質を含む化合物を用いることにより、抗体中の標的領域における特定のアミノ酸残基に対して所定の構造単位を優先的に反応させることができる本発明により達成することができる。
　より具体的には、抗体（Ａｂ）が、連続する１～５０個のアミノ酸残基からなる標的領域〔例、ヒトＩｇＧ　Ｆｃ領域における２４６～２４８位のアミノ酸残基からなる領域、（ｂ）ヒトＩｇＧ　Ｆｃ領域における２８８～２９０位のアミノ酸残基からなる領域、または（ｃ）ヒトＩｇＧ　Ｆｃ領域における３１７位のアミノ酸残基からなる領域〕中において特定のアミノ酸残基（例、リジン残基、チロシン残基、スレオニン残基、セリン残基、システイン残基）を１個以上含み、かつ、前記標的領域以外の非標的領域中において前記特定のアミノ酸残基を５個以上含む場合、抗体以外の部分構造は、当該標的領域中に含まれる１個以上の特定のアミノ酸残基に対して３０％以上の位置選択性で結合させることができる。位置選択性は、好ましくは４０％以上、より好ましくは５０％以上、さらにより好ましくは６０％以上、特に好ましくは７０％以上、８０％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上、または１００％であってもよい。
　本発明の製造方法で製造される生体直交性官能基を有する抗体はまた、重鎖の数に応じて、生体直交性官能基（すなわち、Ｅ－Ｂで表わされる構造単位）を有することができる。生体直交性官能基を位置選択的に有する抗体は、先ず、式（Ｉ）で表される化合物（Ａ－Ｌ－Ｅ－Ｂ）を、抗体に対する親和性物質（Ａ）を介して抗体重鎖の定常領域に会合させ、次いで、Ｅにおける求電子基を、会合部位の近傍（上記抗体重鎖と同一重鎖の定常領域）における特定のアミノ酸残基の側鎖中の求核基と反応させることにより、製造することができる。したがって、抗体重鎖を複数（例えば１～８個、好ましくは１～４個、より好ましくは２個）有する抗体を本発明の製造方法において用いることで、複数の抗体重鎖の同じ標的領域においてＥ－Ｂで表われる複数の構造単位（またはその下位概念の複数の構造単位）を位置選択的に有する抗体を製造することができる。例えば、抗体重鎖を２つ有する抗体（例、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、Ｆ（ａｂ‘）２抗体、Ｆｃ領域タンパク質、Ｆｃ融合タンパク質）を本発明の製造方法において用いることで、２つの抗体重鎖の同じ標的領域においてＥ－Ｂで表われる２つの構造単位を位置選択的に有する抗体を製造することができる。すなわち、生体直交性官能基を有する抗体において、生体直交性官能基による修飾様式を複数（例、２つ）の重鎖間で同一にすることができる。
　生体直交性官能基を有する抗体はまた、１つの抗体重鎖の複数（例えば２～５個、好ましくは２～４個、より好ましくは２または３個）の標的領域において、同種または異種の生体直交性官能基（例えば、Ｅ－Ｂで表わされる構造単位）を有することができる。この場合、生体直交性官能基を有する抗体において、生体直交性官能基による修飾様式を複数（例、２つ）の重鎖間で同一にすることができる。
　本発明の製造方法はまた、生成した抗体を、特定の処理に付すことにより、生体直交性官能基を有し、かつさらに修飾された抗体を生成することを含んでいてもよい。このような特定の処理としては、例えば、抗体の断片化処理（例、パパイン、ペプシン等の特定のプロテアーゼによる処理）が挙げられる。
　本発明の製造方法において式（Ｉ）で表される化合物またはその塩を用いる場合、上記式（ＩＩ）で表される生体直交性官能基を有する抗体を製造することができる。
　好ましい実施形態では、本発明の製造方法において式（Ｉ）で表される化合物として式（Ｉ－１）で表されるものを用いる場合、下記式（ＩＩ－１）で表される生体直交性官能基を有する抗体を製造することができる。
Ａｂ－Ｅ１－Ｅ２－Ｅ３－Ｂ　　　（ＩＩ－１）
〔式中、
　Ａｂは、抗体であり、
　Ｅ１は、抗体中の求核基と連結している求電子基であり、
　Ｅ２は、（ａ）－Ｘ－Ｙ－〔ここで、Ｅ１と結合するＸは、Ｃ（Ｒ１）（Ｒ２）（ここで、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立して、水素原子または炭素原子数１～６のアルキルである。）、Ｎ（Ｒ３）（ここで、Ｒ３は、水素原子または炭素原子数１～６のアルキルである。）、Ｏ、Ｓ、またはＳｅであり、Ｅ３と結合するＹは、Ｃ（Ｒ４）（Ｒ５）（ここで、Ｒ４およびＲ５はそれぞれ独立して、水素原子または炭素原子数１～６のアルキルである。）である。〕、あるいは（ｂ）下記式（ｉ）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000024
 （ここで、環Ｚは、Ｅ１と結合する環構成原子Ｘ’およびその両隣の環構成原子の全てが炭素原子である２価の環基であるか、またはＥ１と結合する環構成原子Ｘ’が窒素原子であり、かつ窒素原子の両隣の環構成原子が炭素原子である２価の複素環基である。・は結合手である。）で表される基であり、
　Ｅ３は、Ｅ２が－Ｘ－Ｙ－の場合には２価の基であり、Ｅ２が式（ｉ）で表される基の場合には結合または２価の基であり、
　Ｂは、生体直交性官能基である。〕
　好ましい特定の実施形態では、本発明の製造方法において式（Ｉ－１）で表される化合物として式（Ｉ－２）で表されるものを用いる場合、下記式（ＩＩ－２）で表される生体直交性官能基を有する抗体を製造することができる。
Ａｂ－Ｅ１－Ｘ－Ｙ－Ｅ３－Ｂ　　　（ＩＩ－２）
〔式中、
　Ａｂ、Ｘ、Ｙ、およびＢは、式（ＩＩ－１）のものと同じであり、
　Ｅ１は、－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＳＯ２－、および－ＣＨ２－からなる群より選ばれる基であり、
　Ｅ３は、２価の基である。〕
　好ましい別の特定の実施形態では、本発明の製造方法において式（Ｉ－１）で表される化合物として式（Ｉ－３）で表されるものを用いる場合、下記式（ＩＩ－３）で表される生体直交性官能基を有する抗体を製造することができる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000025
 〔式中、
　Ａｂ、環構成原子Ｘ’、環Ｚ、およびＢは、式（ＩＩ－１）のものと同じであり、
　Ｅ１は、－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＳＯ２－、および－ＣＨ２－からなる群より選ばれる基であり、
　Ｅ３は、結合または２価の基である。〕
　好ましくは、本発明の製造方法において式（Ｉ－３）で表される化合物として式（Ｉ－４）で表されるものを用いる場合、下記式（ＩＩ－４）で表される生体直交性官能基を有する抗体を製造することができる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000026
 〔式中、
　Ａｂ、環Ｚ、およびＢは、式（ＩＩ－１）のものと同じであり、
　Ｅ１は、－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＳＯ２－、および－ＣＨ２－からなる群より選ばれる基であり、
　Ｅ３は、結合または２価の基である。〕
　式（ＩＩ）、（ＩＩ－１）、（ＩＩ－２）、（ＩＩ－３）または（ＩＩ－４）における任意の記号（例、Ｅ、Ｅ１、Ｅ２、Ｅ３、Ｂ）、および当該記号に関連して表される用語（例、抗体、求電子基、生体直交性官能基）の詳細（例えば、定義、例および好ましい例）は、上記式（Ｉ）またはその下位概念の式のものと共通する。
　抗体に対する親和性物質、および生体直交性官能基を有する化合物またはその塩は、Ｅにおける求電子基またはＥ１の求電子基を有するため、抗体と反応することができる。このような反応は、タンパク質の変性・分解（例、アミド結合の切断）を引き起こし得ない条件（温和な条件）下で適宜行うことができる。例えば、このような反応は、適切な反応系、例えば緩衝液中において、室温（例、約１５～３０℃）で行うことができる。緩衝液のｐＨは、例えば５～９であり、好ましくは５．５～８．５であり、より好ましくは６．０～８．０である。緩衝液は、適切な触媒を含んでいてもよい。反応時間は、例えば１分～２０時間、好ましくは１０分～１５時間、より好ましくは２０分～１０時間、さらにより好ましくは３０分～８時間である。このような反応の詳細については、例えば、Ｇ．Ｊ．Ｌ．Ｂｅｒｎａｒｄｅｓ　ｅｔ　ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．，１１５，２１７４（２０１５）；Ｇ．Ｊ．Ｌ．Ｂｅｒｎａｒｄｅｓ　ｅｔ　ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ａｓｉａｎ．Ｊ．，４，６３０（２００９）；Ｂ．Ｇ．Ｄａｖｉｅｓ　ｅｔ　ａｌ．，Ｎａｔ．Ｃｏｍｍｕｎ．，５，４７４０（２０１４）；Ａ．Ｗａｇｎｅｒ　ｅｔ　ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ．Ｃｈｅｍ．，２５，８２５（２０１４）を参照のこと。
　反応系において、抗体（Ｘ）に対する、抗体に対する親和性物質、および生体直交性官能基を有する化合物またはその塩（Ｙ）のモル比率（Ｙ／Ｘ）は、抗体に対する親和性物質、および生体直交性官能基を有する化合物またはその塩および抗体の種類、抗体に対する親和性物質、および生体直交性官能基を有する化合物またはその塩によって修飾されるべき抗体中の部位の数（例、ＤＡＲ）等に応じて変動することから特に限定されないが、例えば０．１～１００であり、好ましくは０．５～８０であり、より好ましくは１～７０であり、さらにより好ましくは２～５０であり、特に好ましくは３～３０である。
　生体直交性官能基を有する抗体の生成の確認は、その具体的な原料および生成物の分子量にもよるが、例えば、電気泳動法、クロマトグラフィー（例、ゲル濾過クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、逆相カラムクロマトグラフィー、ＨＰＬＣ）、または質量分析により、好ましくは、質量分析により行うことができる。位置選択性の確認は、例えば、ペプチドマッピングにより行うことができる。ペプチドマッピングは、例えば、プロテアーゼ（例、トリプシン、キモトリプシン、）処理および質量分析により行うことができる。プロテアーゼとしては、エンドプロテアーゼが好ましい。このようなエンドプロテアーゼとしては、例えば、トリプシン、キモトリプシン、Ｇｌｕ－Ｃ、Ｌｙｓ－Ｎ、Ｌｙｓ－Ｃ、Ａｓｐ－Ｎが挙げられる。生体直交性官能基を有する抗体が保有する、生体直交性官能基の個数の確認は、例えば、電気泳動法、クロマトグラフィー、または質量分析により、好ましくは、質量分析により行うことができる。生体直交性官能基を有する抗体は、クロマトグラフィー（例、上述したクロマトグラフィー、およびアフィニティークロマトグラフィー）等の任意の方法により適宜精製することができる。
３．抗体に対する親和性物質、および生体直交性官能基を有する化合物またはその塩を用いる、機能性物質を有する抗体の製造方法
　本発明は、以下を含む、機能性物質を有する抗体またはその塩の製造方法を提供する。
（１）下記式（Ｉ）：
Ａ－Ｌ－Ｅ－Ｂ　　　（Ｉ）
〔式中、
　Ａは、抗体に対する親和性物質であり、
　Ｌは、脱離基を含む２価の基であり、
　Ｅは、（ｉ）脱離基と連結しており、かつ（ｉｉ）抗体中の求核基と反応する能力を有する求電子基を含む２価の基であり、
　Ｂは、生体直交性官能基であり、
　脱離基は、上記求核基と上記求電子基との間の反応によりＥから切断されて脱離する能力を有する。〕で表される、抗体に対する親和性物質、および生体直交性官能基を有する化合物またはその塩を、抗体と反応させて、
　下記式（ＩＩ）：
Ａｂ－Ｅ－Ｂ　　　（ＩＩ）
〔式中、
　ＥおよびＢは、前記式（Ｉ）のものと同じであり、
　Ａｂは、抗体である。〕で表される、生体直交性官能基を有する抗体またはその塩を生成すること；ならびに
（２）前記式（ＩＩ）で表される、生体直交性官能基を有する抗体またはその塩を、生体直交性官能基を介して機能性物質と反応させて、
　下記式（ＩＩＩ）：
Ａｂ－Ｅ－Ｂ’－Ｆ　　　（ＩＩＩ）
〔式中、
　Ａｂは、式（ＩＩ）のものと同じであり、
　Ｅは、式（Ｉ）のものと同じであり、
　Ｂ’は、機能性物質と生体直交性官能基との間の反応により生成する部分を含む２価の基であり、
　Ｆは、機能性物質である。〕で表される、機能性物質を有する抗体またはその塩を生成すること。
　（１）の工程は、生体直交性官能基を有する抗体の製造方法と同様にして行うことができる。
　（２）の工程で用いられる機能性物質（Ｆ）は、抗体に任意の機能を付与する物質である限り特に限定されず、例えば、薬物、標識物質、安定化剤が挙げられるが、好ましくは薬物または標識物質である。機能性物質はまた、単一の機能性物質であってもよく、または２以上の機能性物質が連結された物質であってもよい。
　薬物としては、任意の疾患に対する薬物であってもよい。このような疾患としては、例えば、癌（例、肺癌、胃癌、大腸癌、膵臓癌、腎臓癌、肝臓癌、甲状腺癌、前立腺癌、膀胱癌、卵巣癌、子宮癌、骨癌、皮膚癌、脳腫瘍、黒色腫）、自己免疫疾患・炎症性疾患（例、アレルギー疾患、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス）、脳神経疾患（例、脳梗塞、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症）、感染症（例、細菌感染症、ウイルス感染症）、遺伝性・希少疾患（例、遺伝性球状赤血球症、非ジストロフィー筋緊張症）、眼疾患（例、加齢黄斑変性症、糖尿病網膜症、網膜色素変性症）、骨・整形外科領域の疾患（例、変形性関節症）、血液疾患（例、白血病、紫斑病）、その他の疾患（例、糖尿病、高脂血症等の代謝異常症、肝臓疾患、腎疾患、肺疾患、循環器系疾患、消化器官系疾患）が挙げられる。薬物は、所定の疾患を治療または予防する薬物、または所定の疾患の標的タンパク質に対する抗体の使用に伴う副作用を緩和する薬物であってもよい。
　より具体的には、薬物は、抗癌剤である。抗癌剤としては、例えば、化学療法剤、毒素、放射性同位体またはそれを含む物質が挙げられる。化学療法剤としては、例えば、ＤＮＡ損傷剤、代謝拮抗薬、酵素阻害剤、ＤＮＡインターカレート剤、ＤＮＡ切断剤、トポイソメラーゼ阻害剤、ＤＮＡ結合阻害剤、チューブリン結合阻害剤、細胞傷害性ヌクレオシド、白金化合物が挙げられる。毒素としては、例えば、細菌毒素（例、ジフテリア毒素）、植物毒素（例、リシン）が挙げられる。放射性同位体としては、例えば、水素原子の放射性同位体（例、３Ｈ）、炭素原子の放射性同位体（例、１４Ｃ）、リン原子の放射性同位体（例、３２Ｐ）、硫黄原子の放射性同位体（例、３５Ｓ）、イットリウムの放射性同位体（例、９０Ｙ）、テクネチウムの放射性同位体（例、９９ｍＴｃ）、インジウムの放射性同位体（例、１１１Ｉｎ）、ヨウ素原子の放射性同位体（例、１２３Ｉ、１２５Ｉ、１２９Ｉ、１３１Ｉ)、サマリウムの放射性同位体（例、１５３Ｓｍ）、レニウムの放射性同位体（例、１８６Ｒｅ）、アスタチンの放射性同位体（例、２１１Ａｔ）、ビスマスの放射性同位体（例、２１２Ｂｉ）が挙げられる。
　標識物質としては、例えば、酵素（例、ペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ルシフェラーゼ、βガラクトシダーゼ）、親和性物質（例、ストレプトアビジン、ビオチン、ジゴキシゲニン、アプタマー）、蛍光物質（例、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、緑色蛍光タンパク質、赤色蛍光タンパク質）、発光物質（例、ルシフェリン、エクオリン、アクリジニウムエステル、トリス（２，２’－ビピリジル）ルテニウム、ルミノール）、放射性同位体（例、上述したもの）またはそれを含む物質が挙げられる。
　機能性物質はまた、高分子化合物、中分子化合物、または低分子化合物であり、好ましくは、低分子化合物である。低分子化合物とは、分子量１５００以下の化合物をいう。低分子化合物は、天然化合物または合成化合物である。低分子化合物の分子量は、１２００以下、１０００以下、９００以下、８００以下、７００以下、６００以下、５００以下、４００以下、または３００以下であってもよい。低分子化合物の分子量はまた、３０以上、４０以上、または５０以上であってもよい。低分子化合物は、上述したような薬物または標識物質であってもよい。また、低分子化合物としては、例えば、アミノ酸、オリゴペプチド、ビタミン、ヌクレオシド、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、単糖、オリゴ糖、脂質、脂肪酸、およびそれらの塩が挙げられる。
　機能性物質は、その構造に応じた種々の官能基を有する。機能性物質が、生体直交性官能基と反応し易い官能基を有する場合、機能性物質の当該官能基と生体直交性官能基とを適宜反応させることができる。生体直交性官能基と反応し易い官能基は、生体直交性官能基の具体的な種類によっても異なり得る。当業者であれば、適切な官能基を、生体直交性官能基と反応し易い官能基として適宜選択することができる（例、Ｂｏｕｔｕｒｅｉｒａ　ｅｔ　ａｌ．，　Ｃｈｅｍ．　Ｒｅｖ．，２０１５，１１５，２１７４－２１９５）。生体直交性官能基と反応し易い官能基としては、例えば、生体直交性官能基がアルキン残基の場合はアジド残基が挙げられ、生体直交性官能基がアルデヒド残基またはケトン残基の場合はヒドラジン残基が挙げられ、生体直交性官能基がチオール残基の場合はマレイミド残基およびジスルフィド残基が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、生体直交性官能基がアルキン残基であり、かつ生体直交性官能基と反応し易い官能基がアジド残基である場合（またはその逆である場合）、機能性物質と生体直交性官能基との間の反応により生成する部分を含む２価の基は、トリアゾール残基（他の環と縮合していても縮合していなくてもよい）を含む２価の基であってもよい；生体直交性官能基がアルデヒド残基またはケトン残基であり、かつ生体直交性官能基と反応し易い官能基がヒドラジン残基である場合（またはその逆である場合）、機能性物質と生体直交性官能基との間の反応により生成する部分を含む２価の基は、ヒドラゾン残基を含む２価の基であってもよい；生体直交性官能基がチオール残基であり、かつ生体直交性官能基と反応し易い官能基がマレイミド残基またはジスルフィド残基である場合（またはその逆である場合）、機能性物質と生体直交性官能基との間の反応により生成する部分を含む２価の基は、チオスクシンイミド残基を含む２価の基、またはジスルフィド残基を含む２価の基であってもよい（例、Ｂｏｕｔｕｒｅｉｒａ　ｅｔ　ａｌ．，　Ｃｈｅｍ．　Ｒｅｖ．，２０１５，１１５，２１７４－２１９５）。トリアゾール残基（他の環と縮合していても縮合していなくてもよい）を含む２価の基、ヒドラゾン残基を含む２価の基、チオスクシンイミド残基を含む２価の基、またはジスルフィド残基を含む２価の基は、機能性物質と生体直交性官能基との間の反応により生成する部分を含む２価の基の好ましい例である。
　一方、機能性物質が、生体直交性官能基と反応し易い官能基を有しない場合、機能性物質として、所望の官能基を有するように誘導体化されたものを使用することができる。例えば、機能性物質が可溶性タンパク質である場合、可溶性タンパク質が天然に有しない官能基を有するように誘導体化されたものを使用することができる。
　誘導体化は、当該分野における技術常識である（例、国際公開第２００４／０１０９５７号、米国特許出願公開第２００６／００７４００８号明細書、米国特許出願公開第２００５／０２３８６４９号明細書）。例えば、誘導体化は、上述したような架橋剤を用いて行われてもよい。あるいは、誘導体化は、所望の官能基を有する特定のリンカーを用いて行われてもよい。例えば、このようなリンカーは、適切な環境（例、細胞内または細胞外）において機能性物質と抗体とをリンカーの切断により分離可能なものであってもよい。このようなリンカーとしては、例えば、特定のプロテアーゼ〔例、細胞内プロテアーゼ（例、リソソーム、またはエンドソーム中に存在するプロテアーゼ）、細胞外プロテアーゼ（例、分泌性プロテアーゼ）〕で分解されるペプチジルリンカー（例、米国特許第６，２１４，３４５号；Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ　ｅｔ　ａｌ．，Ｐｈａｒｍ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ　８３：６７－１２３（１９９９））、生体内に存在する局所酸性部位で切断され得るリンカー（例、米国特許第５，６２２，９２９号、同第５，１２２，３６８号；同第５，８２４，８０５号）が挙げられる。リンカーは、自壊的（ｓｅｌｆ－ｉｍｍｏｌａｔｉｖｅ）であってもよい（例、国際公開第０２／０８３１８０号、国際公開第０４／０４３４９３号、国際公開第０５／１１２９１９号）。本発明では、誘導体化された機能性物質も、単に「機能性物質」と呼称することができる。
　式（ＩＩＩ）におけるＡｂは、上述の抗体と同じであり、Ｅにおける求電子基と共有結合している。Ｅにおける求電子基との共有結合に供される抗体中の求核基としては、例えば、リジン残基の側鎖におけるＮＨ２、チロシン残基の側鎖におけるＯＨ、セリン残基の側鎖におけるＯＨ、スレオニン残基の側鎖におけるＯＨ、およびシステイン残基の側鎖におけるＳＨが挙げられる。
　式（ＩＩＩ）におけるＥは、上記式（Ｉ）におけるＥと同じである。Ｅは、Ｅ１－Ｅ２－Ｅ３で表されることができる。Ｅ１、Ｅ２、およびＥ３は、上述のものと同じである。上述のとおり、ＥおよびＥ１－Ｅ２－Ｅ３は、潜在的な免疫原性を有し、また血中で加水分解され易いという問題を抱えるペプチド部分を含まないように設計できる。この場合、式（ＩＩＩ）で表される機能性物質を有する抗体は、医薬として好適に使用することができる。
　Ｅにおける求電子基およびＥ１の求電子基は、抗体中の求核基と共有結合している。抗体中の求核基と共有結合している求電子基としては、例えば、ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－、ＮＨ－ＳＯ２－、およびＮＨ－ＣＨ２－（Ｅとの共有結合に供される抗体中の求核基がリジン残基の側鎖におけるＮＨ２である場合）、Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－、Ｏ－ＳＯ２－、およびＯ－ＣＨ２－（Ｅとの共有結合に供される抗体中の求核基が、チロシン残基、セリン残基、またはスレオニン残基の側鎖におけるＯＨである場合）、Ｓ－Ｃ（＝Ｏ）－、およびＳ－ＣＨ２－（Ｅとの共有結合に供される抗体中の求核基が、システイン残基の側鎖におけるＳＨである場合）が挙げられる。抗体中の求核基と共有結合している求電子基としては、ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－およびＮＨ－ＳＯ２－（Ｅとの共有結合に供される抗体中の求核基がリジン残基の側鎖におけるＮＨ２である場合）、Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－およびＯ－ＳＯ２－（Ｅとの共有結合に供される抗体中の求核基が、チロシン残基の側鎖におけるＯＨである場合）が好ましく、ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－およびＮＨ－ＳＯ２－（Ｅとの共有結合に供される抗体中の求核基がリジン残基の側鎖におけるＮＨ２である場合）がより好ましく、ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｅとの共有結合に供される抗体中の求核基がリジン残基の側鎖におけるＮＨ２である場合）がさらにより好ましい。
　特定の実施形態では、機能性物質が、生体直交性官能基と反応し易い官能基を有する場合、または、生体直交性官能基と反応し易い官能基を有するように誘導体化されている場合、生体直交性官能基と反応し易い官能基は、アジド残基、アルデヒド残基、チオール残基、アルキン残基、アルケン残基、ハロゲン残基、テトラジン残基、ニトロン残基、ヒドロキシルアミン残基、ニトリル残基、ヒドラジン残基、ケトン残基、ボロン酸残基、シアノベンゾチアゾール残基、アリル残基、ホスフィン残基、マレイミド残基、ジスルフィド残基、チオエステル残基、α―ハロカルボニル残基、イソニトリル残基、シドノン残基、セレン残基からなる群より選ばれる基であってもよい。
　さらに特定の実施形態では、機能性物質が、生体直交性官能基と反応し易い官能基を有する場合、または、生体直交性官能基と反応し易い官能基を有するように誘導体化されている場合、前記生体直交性官能基と反応し易い官能基は、下記で表される基からなる群より選ばれる基であってもよい。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000027
 〔式中、
　Ｒ１ｆ、単一もしくは複数のＲ１ｇおよび単一もしくは複数のＲ１ｈは、同一もしくは異なって、前記（ｉ）～（ｖｉｉ）からなる群より選ばれる原子もしくは基、または電子吸引基であり、・は、機能性物質に対する結合手である。）
　式（ＩＩＩ）におけるＢ’で表される、機能性物質と生体直交性官能基との間の反応により生成する部分を含む２価の基は、（１）上述の好ましい例において言及した残基である、トリアゾール残基、ヒドラゾン残基、またはチオスクシンイミド残基を含む２価の基であってもよく、あるいは、（２）特に限定されるわけではないが、例えば、ジスルフィド残基（この残基は、上述の好ましい例において言及した残基である）、アセタール残基、ケタール残基、エステル残基、カルバモイル残基、アルコキシアルキル残基、イミン残基、三級アルキルオキシカルバメート残基、シラン残基、ヒドラゾン含有残基、フォスフォルアミデート残基、アコニチル残基、トリチル残基、アゾ残基、ビシナルジオール残基、セレン残基、電子吸引基を有する芳香族環含有残基、クマリン含有残基、スルホン含有残基、不飽和結合含有鎖残基、グリコシル残基からなる群より選ばれる残基を含む２価の基であってもよい。
　機能性物質と生体直交性官能基との間の反応により生成する部分を含む２価の基はまた、特に限定されるわけではないが、例えば、下記：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000028
 〔ここで、結合に直交する波線は、反応により生成する結合を示し、
　複数のＲ２ａ、複数のＲ２ｂ、および複数のＲ２ｃは、同一または異なって、水素原子または上述の置換基であり、
　Ｊは、－ＣＨ２－、－Ｏ－、または－Ｓ－であり、
　ｒは、１～４の任意の整数であり、
　○（白丸）はＦ側の部分に対する結合を示し、●（黒丸）はＢ’側の部分に対する結合を示す。
　化学構造が、切断性部分を中心にして非対称である場合、●がＢ’側の部分に対する結合を示し、○がＦ側の部分に対する結合を示していてもよい。〕からなる群より選ばれるいずれか一つの化学構造に対応する残基を含む２価の基であってもよい。
　好ましくは、本発明の製造方法における工程（２）で製造される機能性物質を有する抗体は、機能性物質を位置選択的に有する抗体である。生体直交性官能基を位置選択的に有する抗体が、式（ＩＩ）で表されるものである場合、式（ＩＩＩ）で表される、機能性物質を位置選択的に有する抗体を製造することができる。機能性物質を位置選択的に有する抗体は、好ましくは、定常領域のみに機能性物質を有する抗体であり、より好ましくは、Ｆｃ領域のみに機能性物質を有する抗体である。
　抗体（Ａｂ）が、連続する１～５０個のアミノ酸残基からなる標的領域〔例、ヒトＩｇＧ　Ｆｃ領域における２４６～２４８位のアミノ酸残基からなる領域、（ｂ）ヒトＩｇＧ　Ｆｃ領域における２８８～２９０位のアミノ酸残基からなる領域、または（ｃ）ヒトＩｇＧ　Ｆｃ領域における３１７位のアミノ酸残基からなる領域〕中において特定のアミノ酸残基（例、リジン残基、チロシン残基、スレオニン残基、セリン残基、システイン残基）を１個以上含み、かつ、前記標的領域以外の非標的領域中において前記特定のアミノ酸残基を５個以上含む場合、抗体以外の部分構造は、当該標的領域中に含まれる１個以上の特定のアミノ酸残基に対して３０％以上の位置選択性で結合させることができる。位置選択性は、好ましくは４０％以上、より好ましくは５０％以上、さらにより好ましくは６０％以上、特に好ましくは７０％以上、８０％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上、または１００％であってもよい。
　本発明の製造方法で製造される機能性物質を有する抗体はまた、重鎖の数に応じて、機能性物質（すなわち、Ｅ－Ｂ’－Ｆで表われる構造単位）を有することができる。これは、機能性物質を有する抗体を、重鎖の数に応じてＥ－Ｂで表われる構造単位を有することができる生体直交性官能基を有する抗体から製造することができるためである。したがって、抗体重鎖を複数（例えば１～８個、好ましくは１～４個、より好ましくは２個）有する抗体を本発明の製造方法において用いることで、複数の抗体重鎖の同じ標的領域においてＥ－Ｂ’－Ｆで表われる複数の構造単位（またはその下位概念の複数の構造単位）を位置選択的に有する抗体を製造することができる。例えば、抗体重鎖を２つ有する抗体（例、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、Ｆ（ａｂ‘）２抗体、Ｆｃ領域タンパク質、Ｆｃ融合タンパク質）を本発明の製造方法において用いることで、２つの抗体重鎖の同じ標的領域においてＥ－Ｂ’－Ｆで表われる２つの構造単位を位置選択的に有する抗体を製造することができる。すなわち、機能性物質を有する抗体において、機能性物質による修飾様式を複数（例、２つ）の重鎖間で同一にすることができる。
　機能性物質を有する抗体はまた、１つの抗体重鎖の複数（例えば２～５個、好ましくは２～４個、より好ましくは２または３個）の標的領域において、同種または異種の機能性物質（例えば、Ｅ－Ｂ’－Ｆで表われる構造単位）を有することができる。この場合、機能性物質を有する抗体において、機能性物質による修飾様式を複数（例、２つ）の重鎖間で同一にすることができる。
　本発明の製造方法はまた、生成した抗体を、特定の処理に付すことにより、機能性物質を有し、かつさらに修飾された抗体を生成することを含んでいてもよい。このような特定の処理としては、例えば、抗体の断片化処理（例、パパイン、ペプシン等の特定のプロテアーゼによる処理）が挙げられる。
　本発明の製造方法において式（Ｉ）で表される化合物またはその塩を用いる場合、（１）の工程において、上記式（ＩＩ）で表される生体直交性官能基を有する抗体を製造することができ、次いで、（２）の工程において、上記式（ＩＩＩ）で表される機能性物質基を有する抗体を製造することができる。
　好ましい実施形態では、本発明の製造方法において式（Ｉ）で表される化合物として式（Ｉ－１）で表されるものを用いる場合、（１）の工程において、上記式（ＩＩ－１）で表される生体直交性官能基を有する抗体を製造することができ、次いで、（２）の工程において、下記式（ＩＩＩ－１）で表される機能性物質基を有する抗体を製造することができる。
Ａｂ－Ｅ１－Ｅ２－Ｅ３－Ｂ’－Ｆ　　　（ＩＩＩ－１）
〔式中、
　Ａｂは、抗体であり、
　Ｅ１は、抗体中の求核基と連結している求電子基であり、
　Ｅ２は、（ａ）－Ｘ－Ｙ－〔ここで、Ｅ１と結合するＸは、Ｃ（Ｒ１）（Ｒ２）（ここで、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立して、水素原子または炭素原子数１～６のアルキルである。）、Ｎ（Ｒ３）（ここで、Ｒ３は、水素原子または炭素原子数１～６のアルキルである。）、Ｏ、Ｓ、またはＳｅであり、Ｅ３と結合するＹは、Ｃ（Ｒ４）（Ｒ５）（ここで、Ｒ４およびＲ５はそれぞれ独立して、水素原子または炭素原子数１～６のアルキルである。）である。〕、あるいは（ｂ）下記式（ｉ）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000029
 （ここで、環Ｚは、Ｅ１と結合する環構成原子Ｘ’およびその両隣の環構成原子の全てが炭素原子である２価の環基であるか、またはＥ１と結合する環構成原子Ｘ’が窒素原子であり、かつ窒素原子の両隣の環構成原子が炭素原子である２価の複素環基である。・は結合手である。）で表される基であり、
　Ｅ３は、Ｅ２が－Ｘ－Ｙ－の場合には２価の基であり、Ｅ２が式（ｉ）で表される基の場合には結合または２価の基であり、
　Ｂ’は、機能性物質と生体直交性官能基との間の反応により生成する部分を含む２価の基であり、
　Ｆは、機能性物質である。〕
　好ましい特定の実施形態では、本発明の製造方法において式（Ｉ－１）で表される化合物として式（Ｉ－２）で表されるものを用いる場合、（１）の工程において、上記式（ＩＩ－２）で表される生体直交性官能基を有する抗体を製造することができ、次いで、（２）の工程において、下記式（ＩＩＩ－２）で表される機能性物質基を有する抗体を製造することができる。
Ａｂ－Ｅ１－Ｘ－Ｙ－Ｅ３－Ｂ’－Ｆ　　　（ＩＩＩ－２）
〔式中、
　Ａｂ、Ｘ、Ｙ、Ｂ’およびＦは、前記式（ＩＩＩ－１）のものと同じであり、
　Ｅ１は、－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＳＯ２－、および－ＣＨ２－からなる群より選ばれる基であり、
　Ｅ３は、２価の基である。〕
　好ましい別の特定の実施形態では、本発明の製造方法において式（Ｉ－１）で表される化合物として式（Ｉ－３）で表されるものを用いる場合、（１）の工程において、上記式（ＩＩ－３）で表される生体直交性官能基を有する抗体を製造することができ、次いで、（２）の工程において、下記式（ＩＩＩ－３）で表される機能性物質基を有する抗体を製造することができる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000030
 〔式中、
　Ａｂ、環構成原子Ｘ’、環Ｚ、Ｂ’およびＦは、式（ＩＩＩ－１）のものと同じであり、
　Ｅ１は、－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＳＯ２－、および－ＣＨ２－からなる群より選ばれる基であり、
　Ｅ３は、結合または２価の基である。〕
　好ましくは、本発明の製造方法において式（Ｉ－３）で表される化合物として式（Ｉ－４）で表されるものを用いる場合、（１）の工程において、下記式（ＩＩ－４）で表される生体直交性官能基を有する抗体を製造することができ、次いで、（２）の工程において、下記式（ＩＩＩ－４）で表される機能性物質基を有する抗体を製造することができる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000031
 〔式中、
　Ａｂ、環Ｚ、Ｂ’およびＦは、式（ＩＩＩ－１）のものと同じであり、
　Ｅ１は、－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＳＯ２－、および－ＣＨ２－からなる群より選ばれる基であり、
　Ｅ３は、結合または２価の基である。〕
　式（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ－１）、（ＩＩＩ－２）、（ＩＩＩ－３）または（ＩＩＩ－４）における任意の記号（例、Ｅ、Ｅ１、Ｅ２、Ｅ３、Ｂ）、および当該記号に関連して表される用語（例、抗体、求電子基、生体直交性官能基）の詳細（例えば、定義、例および好ましい例）は、上記式（Ｉ）またはその下位概念の式のものと共通する。
　生体直交性官能基を有する抗体は、生体直行性官能基を介して、機能性物質と反応することができる。このような反応は、上述したような、タンパク質の変性・分解（例、アミド結合の切断）を引き起こし得ない条件（温和な条件）下で適宜行うことができる。
　反応系において、生体直行性官能基を有する抗体（Ｙ）に対する、機能性物質（Ｚ）のモル比率（Ｚ／Ｙ）は、生体直行性官能基、機能性物質、および抗体の種類、ならびに修飾されるべき抗体中の部位の数（例、ＤＡＲ）等に応じて変動することから特に限定されないが、例えば０．１～１００であり、好ましくは０．５～８０であり、より好ましくは１～７０であり、さらにより好ましくは２～５０であり、特に好ましくは３～３０である。
　機能性物質を有する抗体の生成の確認は、その具体的な原料および生成物の分子量にもよるが、例えば、電気泳動法、クロマトグラフィー（例、ゲル濾過クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、逆相カラムクロマトグラフィー、ＨＰＬＣ）、または質量分析により、好ましくは、質量分析により行うことができる。位置選択性の確認は、例えば、ペプチドマッピングにより行うことができる。ペプチドマッピングは、例えば、プロテアーゼ（例、トリプシン、キモトリプシン、）処理および質量分析により行うことができる。プロテアーゼとしては、エンドプロテアーゼが好ましい。このようなエンドプロテアーゼとしては、例えば、トリプシン、キモトリプシン、Ｇｌｕ－Ｃ、Ｌｙｓ－Ｎ、Ｌｙｓ－Ｃ、Ａｓｐ－Ｎが挙げられる。機能性物質を有する抗体が保有する、機能性物質の個数の確認は、例えば、電気泳動法、クロマトグラフィー、または質量分析により、好ましくは、質量分析により行うことができる。機能性物質を有する抗体は、クロマトグラフィー（例、上述したクロマトグラフィー、およびアフィニティークロマトグラフィー）等の任意の方法により適宜精製することができる。
４．生体直交性官能基または機能性物質を位置選択的に有する抗体またはその塩
　本発明は、生体直交性官能基または機能性物質を位置選択的に有する抗体またはその塩を提供する。
　生体直交性官能基を位置選択的に有する抗体またはその塩は、上記式（ＩＩ－１）で表される生体直交性官能基を位置選択的に有する抗体である。好ましくは、上記式（ＩＩ－１）で表される生体直交性官能基を位置選択的に有する抗体として、上記式（ＩＩ－２）または（ＩＩ－３）で表される生体直交性官能基を位置選択的に有する抗体が提供される。より好ましくは、上記式（ＩＩ－３）で表される生体直交性官能基を位置選択的に有する抗体として、上記式（ＩＩ－４）で表される生体直交性官能基を位置選択的に有する抗体が提供される。式（ＩＩ）、（ＩＩ－１）、（ＩＩ－２）、（ＩＩ－３）または（ＩＩ－４）における任意の記号（例、Ｅ、Ｅ１、Ｅ２、Ｅ３、Ｂ）、および当該記号に関連して表される用語（例、抗体、求電子基、生体直交性官能基）の詳細（例えば、定義、例および好ましい例）は、上記式（Ｉ）またはその下位概念の式のものと共通する。
　機能性物質を位置選択的に有する抗体またはその塩は、上記式（ＩＩＩ－１）で表される機能性物質を位置選択的に有する抗体である。好ましくは、上記式（ＩＩＩ－１）で表される機能性物質を位置選択的に有する抗体として、上記式（ＩＩＩ－２）または（ＩＩＩ－３）で表される機能性物質を位置選択的に有する抗体が提供される。より好ましくは、上記式（ＩＩＩ－３）で表される機能性物質を位置選択的に有する抗体として、上記式（ＩＩＩ－４）で表される機能性物質を位置選択的に有する抗体が提供される。式（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ－１）、（ＩＩＩ－２）、（ＩＩＩ－３）または（ＩＩＩ－４）における任意の記号（例、Ｅ、Ｅ１、Ｅ２、Ｅ３、Ｂ）、および当該記号に関連して表される用語（例、抗体、求電子基、生体直交性官能基）の詳細（例えば、定義、例および好ましい例）は、上記式（Ｉ）またはその下位概念の式のものと共通する。
　生体直交性官能基または機能性物質を位置選択的に有する抗体は、上述の抗体と同じである。好ましくは、このような抗体は、モノクローナル抗体である。モノクローナル抗体のアイソタイプとしては、例えば、ＩｇＧ（例、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、およびＩｇＹが挙げられる。モノクローナル抗体は、全長抗体、または抗体断片（例、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、Ｆｖ、単鎖抗体）であるが、全長抗体が好ましい。特に好ましくは、このような抗体は、ヒトＩｇＧ（例、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）を定常領域に有するヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体である。
　生体直交性官能基または機能性物質を位置選択的に有する抗体は、好ましくは、抗体の定常領域のみに生体直交性官能基または機能性物質を有する抗体であり、より好ましくは、抗体のＦｃ領域のみに生体直交性官能基または機能性物質を有する抗体である。
　生体直交性官能基または機能性物質を位置選択的に有する抗体は、連続する１～５０個のアミノ酸残基からなる標的領域〔例、（ａ）ヒトＩｇＧ　Ｆｃ領域における２４６～２４８位のアミノ酸残基からなる領域、（ｂ）ヒトＩｇＧ　Ｆｃ領域における２８８～２９０位のアミノ酸残基からなる領域、または（ｃ）ヒトＩｇＧ　Ｆｃ領域における３１７位のアミノ酸残基からなる領域〕中において特定のアミノ酸残基（例、リジン残基、チロシン残基、スレオニン残基、セリン残基、システイン残基）が１個以上含まれており、かつ、前記標的領域以外の非標的領域中において前記特定のアミノ酸残基が５個以上含まれている場合、生体直交性官能基または機能性物質を、当該標的領域中に含まれる１個以上の特定のアミノ酸残基において３０％以上の位置選択性で有することができる。位置選択性は、好ましくは４０％以上、より好ましくは５０％以上、さらにより好ましくは６０％以上、特に好ましくは７０％以上、８０％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上、または１００％であってもよい。
　生体直交性官能基または機能性物質を位置選択的に有する抗体はまた、重鎖の数に応じて、生体直交性官能基（すなわち、Ｅ－Ｂで表わされる構造単位）、または機能性物質（すなわち、Ｅ－Ｂ’－Ｆで表われる構造単位）を有することができる。生体直交性官能基または機能性物質を位置選択的に有する抗体は、抗体重鎖を複数（例えば１～８個、好ましくは１～４個、より好ましくは２個）有する場合、複数の抗体重鎖の同じ標的領域において生体直交性官能基または機能性物質を位置選択的に有することができる。すなわち、生体直交性官能基または機能性物質を位置選択的に有する抗体において、生体直交性官能基または機能性物質による修飾様式を複数（例、２つ）の重鎖間で同一にすることができる。
　生体直交性官能基または機能性物質を位置選択的に有する抗体はまた、１つの抗体重鎖の複数（例えば２～５個、好ましくは２～４個、より好ましくは２または３個）の標的領域において、同種または異種の生体直交性官能基（例えば、Ｅ－Ｂで表わされる構造単位）、または同種または異種の機能性物質（例えば、Ｅ－Ｂ’－Ｆで表われる構造単位）を有することができる。この場合、生体直交性官能基または機能性物質を位置選択的に有する抗体において、生体直交性官能基または機能性物質による修飾様式を複数（例、２つ）の重鎖間で同一にすることができる。
５．抗体に対する親和性物質、および機能性物質を有する化合物またはその塩
　本発明は、式（ＩＶ）で表される、抗体に対する親和性物質、および機能性物質を有する化合物またはその塩を提供する。
Ａ－Ｌ－Ｅ－Ｆ　　　（ＩＶ）
〔式中、
　Ａは、抗体に対する親和性物質であり、
　Ｌは、脱離基を含む２価の基であり、
　Ｅは、（ｉ）前記脱離基と連結しており、かつ（ｉｉ）前記抗体中の求核基と反応する能力を有する求電子基を含む２価の基であり、
　Ｆは、機能性物質であり、
　前記脱離基は、前記求核基と前記求電子基との間の反応によりＥから切断されて脱離する能力を有する。〕
　抗体に対する親和性物質、および機能性物質を有する化合物またはその塩における、抗体に対する親和性物質（Ａ）、脱離基を含む２価の基（Ｌ）、求電子基を含む２価の基（Ｅ）、および機能性物質（Ｆ）の定義、例、および好ましい例は、上述したものと同じである。したがって、抗体に対する親和性物質、および機能性物質を有する化合物またはその塩において、Ａ、Ｌ、およびＥは、抗体に対する親和性物質、および生体直交性官能基を有する化合物またはその塩（例えば、式（Ｉ）を参照）におけるＡ、Ｌ、およびＥと同様に特定することができる。また、抗体に対する親和性物質、および機能性物質を有する化合物またはその塩において、Ｆは、機能性物質を有する抗体またはその塩（例えば、式（ＩＩＩ）を参照）におけるＦと同様に特定することができる。
　好ましい実施形態では、式（ＩＶ）で表される化合物は、下記式（ＩＶ－１）：
Ａ－Ｌ１－Ｌ２－Ｅ１－Ｅ２－Ｅ３－Ｆ　　　（ＩＶ－１）
〔式中、
　ＡおよびＦは、式（ＩＶ）のものと同じであり、
　Ｌ１は、結合または２価の基であり、
　Ｌ２は、脱離基であり、
　Ｅ１は、（ｉ）脱離基と連結しており、かつ（ｉｉ）抗体中の求核基と反応する能力を有する求電子基であり、
　Ｅ２は、（ａ）－Ｘ－Ｙ－〔ここで、Ｅ１と結合するＸは、Ｃ（Ｒ１）（Ｒ２）（ここで、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立して、水素原子または炭素原子数１～６のアルキルである。）、Ｎ（Ｒ３）（ここで、Ｒ３は、水素原子または炭素原子数１～６のアルキルである。）、Ｏ、Ｓ、またはＳｅであり、Ｅ３と結合するＹは、Ｃ（Ｒ４）（Ｒ５）（ここで、Ｒ４およびＲ５はそれぞれ独立して、水素原子または炭素原子数１～６のアルキルである。）である。〕、あるいは（ｂ）下記式（ｉ）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000032
 （ここで、環Ｚは、Ｅ１と結合する環構成原子Ｘ’およびその両隣の環構成原子の全てが炭素原子である２価の環基であるか、またはＥ１と結合する環構成原子Ｘ’が窒素原子であり、かつ窒素原子の両隣の環構成原子が炭素原子である２価の複素環基である。・は結合手である。）で表される基であり、
　Ｅ３は、Ｅ２が－Ｘ－Ｙ－の場合には２価の基であり、Ｅ２が式（ｉ）で表される基の場合には結合または２価の基であり、
　脱離基は、上記求核基と上記求電子基との間の反応によりＥ１から切断されて脱離する能力を有する。〕で表される化合物であってもよい。
　式（ＩＶ－１）において、Ｌ２で表される脱離基の定義、例および好ましい例は、上記「１－３．脱離基を含む２価の基（Ｌ）」における（ａ）～（ｃ）について述べたものと同じである。
　好ましい特定の実施形態では、式（ＩＶ－１）で表される化合物は、下記式（ＩＶ－２）：
Ａ－Ｌ１－Ｌ２－Ｅ１－Ｘ－Ｙ－Ｅ３－Ｆ　　　（ＩＶ－２）
〔式中、
　Ａ、Ｌ１、Ｘ、ＹおよびＦは、式（ＩＶ－１）のものと同じであり、
　Ｌ２は、
（ａ）環Ｐ－Ｑ－〔ここで、環Ｐが、電子吸引性基で置換されていてもよいアリーレン、電子吸引性基で置換されていてもよいヘテロアリーレン、縮環していてもよい２，５-ジケトピロリジン、縮環していてもよい２，６－ジケトピペリジン、縮環していてもよい２-ケトピロリジン、縮環していてもよい２－ケトピペリジン、２－ピリドンからなる群より選ばれる基であり、Ｑが、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓｅ－、－ＳＯ２－Ｏ－、－ＳＯ２－Ｎ（Ｒ）－、－ＳＯ２－、－Ｃ≡Ｃ－ＣＨ２－Ｏ－、－Ｎ（ＯＲ）－、－Ｎ（Ｒ）－、および－Ｏ－Ｎ（Ｒ）－からなる群より選ばれる基（ここで、Ｒは、水素原子または炭素原子数１～６のアルキルである。）である。〕、
（ｂ）ヘテロアリーレン、あるいは
（ｃ）－Ｑ－〔ここで、Ｑが、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓｅ－、－ＳＯ２－Ｏ－、－ＳＯ２－Ｎ（Ｒ）－、－ＳＯ２－、－Ｃ≡Ｃ－ＣＨ２－Ｏ－、－Ｎ（ＯＲ）－、－Ｎ（Ｒ）－、および－Ｏ－Ｎ（Ｒ）－からなる群より選ばれる基（ここで、Ｒは、水素原子または炭素原子数１～６のアルキルである。）である。〕であり、
　Ｅ１は、－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＳＯ２－、および－ＣＨ２－からなる群より選ばれる基であり、
　Ｅ３は、２価の基である。〕で表される化合物であってもよい。
　好ましい別の特定の実施形態では、式（ＩＶ－１）で表される化合物は、下記式（ＩＶ－３）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000033
 〔式中、
　Ａ、Ｌ１、環Ｚ、環構成原子Ｘ’およびＦは、前記式（ＩＶ－１）のものと同じであり、
　Ｌ２は、
（ａ）環Ｐ－Ｑ－〔ここで、環Ｐが、電子吸引性基で置換されていてもよいアリーレン、電子吸引性基で置換されていてもよいヘテロアリーレン、縮環していてもよい２，５-ジケトピロリジン、縮環していてもよい２，６－ジケトピペリジン、縮環していてもよい２-ケトピロリジン、縮環していてもよい２－ケトピペリジン、２－ピリドンからなる群より選ばれる基であり、Ｑが、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓｅ－、－ＳＯ２－Ｏ－、－ＳＯ２－Ｎ（Ｒ）－、－ＳＯ２－、－Ｃ≡Ｃ－ＣＨ２－Ｏ－、－Ｎ（ＯＲ）－、－Ｎ（Ｒ）－、および－Ｏ－Ｎ（Ｒ）－からなる群より選ばれる基（ここで、Ｒは、水素原子または炭素原子数１～６のアルキルである。）である。〕、
（ｂ）ヘテロアリーレン、あるいは
（ｃ）－Ｑ－〔ここで、Ｑが、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓｅ－、－ＳＯ２－Ｏ－、－ＳＯ２－Ｎ（Ｒ）－、－ＳＯ２－、－Ｃ≡Ｃ－ＣＨ２－Ｏ－、－Ｎ（ＯＲ）－、－Ｎ（Ｒ）－、および－Ｏ－Ｎ（Ｒ）－からなる群より選ばれる基（ここで、Ｒは、水素原子または炭素原子数１～６のアルキルである。）である。〕であり、
　Ｅ１は、－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＳＯ２－、および－ＣＨ２－からなる群より選ばれる基であり、
　Ｅ３は、結合または２価の基である。〕で表される化合物であってもよい。
　好ましくは、式（ＩＶ－３）で表される化合物は、下記式（ＩＶ－４）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000034
 〔式中、
　Ａ、Ｌ１およびＦは、前記式（ＩＶ－１）のものと同じであり、
　Ｌ２は、（ａ）環Ｐ－Ｑ－〔ここで、環Ｐが、電子吸引性基で置換されていてもよいアリーレン、電子吸引性基で置換されていてもよいヘテロアリーレン、縮環していてもよい２，５-ジケトピロリジン、縮環していてもよい２，６－ジケトピペリジン、縮環していてもよい２-ケトピロリジン、縮環していてもよい２－ケトピペリジン、２－ピリドンからなる群より選ばれる基であり、Ｑが、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓｅ－、－ＳＯ２－Ｏ－、－ＳＯ２－Ｎ（Ｒ）－、－ＳＯ２－、－Ｃ≡Ｃ－ＣＨ２－Ｏ－、－Ｎ（ＯＲ）－、－Ｎ（Ｒ）－、および－Ｏ－Ｎ（Ｒ）－からなる群より選ばれる基（ここで、Ｒは、水素原子または炭素原子数１～６のアルキルである。）である。〕、
（ｂ）ヘテロアリーレン、あるいは
（ｃ）－Ｑ－〔ここで、Ｑが、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓｅ－、－ＳＯ２－Ｏ－、－ＳＯ２－Ｎ（Ｒ）－、－ＳＯ２－、－Ｃ≡Ｃ－ＣＨ２－Ｏ－、－Ｎ（ＯＲ）－、－Ｎ（Ｒ）－、および－Ｏ－Ｎ（Ｒ）－からなる群より選ばれる基（ここで、Ｒは、水素原子または炭素原子数１～６のアルキルである。）である。〕であり、
　Ｅ１は、－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＳＯ２－、および－ＣＨ２－からなる群より選ばれる基であり、
　環Ｚは、Ｅ１と結合する環構成原子およびその両隣の環構成原子の全てが炭素原子である２価の環基である。）で表される基であり、
　Ｅ３は、結合または２価の基である。〕で表される化合物であってもよい。
　上記式（ＩＶ－１）～（ＩＶ－４）で表される化合物において、Ａ、Ｌ１、Ｌ２、Ｅ１、Ｅ２、Ｅ３およびＦ、ならびに－Ｘ－Ｙ－、Ｒ１～Ｒ５における炭素原子数１～６のアルキル、式（ｉ）で表される基（例、２価の環基、２価の複素環基）の定義、例および好ましい例は、上述したものと同じである。また、Ｌ２である（ａ）～（ｃ）、ならびに環Ｚ（例、Ｅ１と結合する環構成原子Ｘ’およびその両隣の環構成原子の全てが炭素原子である２価の環基、またはＥ１と結合する環構成原子Ｘ’が窒素原子であり、かつ窒素原子の両隣の環構成原子が炭素原子である２価の複素環基）、環Ｐ、およびＱ（例、Ｒにおける炭素原子数１～６のアルキル）などの基の定義、例および好ましい例もまた、上述したものと同じである。
　抗体に対する親和性物質、および機能性物質を有する化合物またはその塩は、抗体に対する親和性物質、および生体直交性官能基を有する化合物またはその塩を、生体直交性官能基を介して、上述したような機能性物質と反応させることにより、適宜調製することができる。このような反応は、適切な反応系、例えば有機溶媒系または水溶液系において、適温（例、約１５～２００℃）で行うことができる。反応系は、適切な触媒を含んでいてもよい。反応時間は、例えば１分～２０時間、好ましくは１０分～１５時間、より好ましくは２０分～１０時間、さらにより好ましくは３０分～８時間である。
　反応系において、機能性物質（Ｘ）に対する、抗体に対する親和性物質、および生体直交性官能基を有する化合物またはその塩のモル比率（Ｙ／Ｘ）は、当該構造単位および親和性物質の種類、当該構造単位によって修飾されるべき親和性物質中の部位の数等に応じて変動することから特に限定されないが、例えば０．０１～１００であり、好ましくは０．０５～２０であり、より好ましくは０．１～１０である。
　抗体に対する親和性物質、および機能性物質を有する化合物またはその塩の生成の確認は、その具体的な原料および生成物の分子量にもよるが、例えば、電気泳動法、クロマトグラフィー（例、ゲル濾過クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、逆相カラムクロマトグラフィー、ＨＰＬＣ）、または質量分析により、好ましくは、質量分析により行うことができる。抗体に対する親和性物質、および機能性物質を有する化合物またはその塩は、クロマトグラフィー（例、上述したクロマトグラフィー、およびアフィニティークロマトグラフィー）等の任意の方法により適宜精製することができる。
６．抗体に対する親和性物質、および機能性物質を有する化合物またはその塩を用いる、機能性物質を有する抗体の製造方法
　本発明は、以下を含む、機能性物質を有する抗体またはその塩の製造方法を提供する。
　下記式（ＩＶ）：
Ａ－Ｌ－Ｅ－Ｆ　　　（ＩＶ）
〔式中、
　Ａは、抗体に対する親和性物質であり、
　Ｌは、脱離基を含む２価の基であり、
　Ｅは、（ｉ）前記脱離基と連結しており、かつ（ｉｉ）前記抗体中の求核基と反応する能力を有する求電子基を含む２価の基であり、
　Ｆは、機能性物質であり、
　前記脱離基は、前記求核基と前記求電子基との間の反応によりＥから切断されて脱離する能力を有する。〕で表される、抗体に対する親和性物質、および機能性物質を有する化合物またはその塩を、抗体と反応させて、
　下記式（Ｖ）：
Ａｂ－Ｅ－Ｆ　　　（Ｖ）
〔式中、
　Ａｂは、抗体であり、
　ＥおよびＦは、前記式（ＩＶ）のものと同じである。〕で表される、機能性物質を有する抗体またはその塩を生成すること。
　好ましくは、本発明の製造方法で製造される機能性物質を有する抗体は、機能性物質を位置選択的に有する抗体である。この場合、式（Ｖ）で表される、機能性物質を位置選択的に有する抗体を製造することができる。機能性物質を位置選択的に有する抗体は、好ましくは、定常領域のみに機能性物質を有する抗体であり、より好ましくは、Ｆｃ領域のみに機能性物質を有する抗体である。
　抗体（Ａｂ）が、連続する１～５０個のアミノ酸残基からなる標的領域〔例、ヒトＩｇＧ　Ｆｃ領域における２４６～２４８位のアミノ酸残基からなる領域、（ｂ）ヒトＩｇＧ　Ｆｃ領域における２８８～２９０位のアミノ酸残基からなる領域、または（ｃ）ヒトＩｇＧ　Ｆｃ領域における３１７位のアミノ酸残基からなる領域〕中において特定のアミノ酸残基（例、リジン残基、チロシン残基、スレオニン残基、セリン残基、システイン残基）を１個以上含み、かつ、前記標的領域以外の非標的領域中において前記特定のアミノ酸残基を５個以上含む場合、抗体以外の部分構造は、当該標的領域中に含まれる１個以上の特定のアミノ酸残基に対して３０％以上の位置選択性で結合させることができる。位置選択性は、好ましくは４０％以上、より好ましくは５０％以上、さらにより好ましくは６０％以上、特に好ましくは７０％以上、８０％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上、または１００％であってもよい。
　本発明の製造方法で製造される機能性物質を有する抗体はまた、重鎖の数に応じて、機能性物質（すなわち、Ｅ－Ｆで表われる構造単位）を有することができる。したがって、抗体重鎖を複数（例えば１～８個、好ましくは１～４個、より好ましくは２個）有する抗体を本発明の製造方法において用いることで、複数の抗体重鎖の同じ標的領域においてＥ－Ｆで表われる複数の構造単位（またはその下位概念の複数の構造単位）を位置選択的に有する抗体を製造することができる。例えば、抗体重鎖を２つ有する抗体（例、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、Ｆ（ａｂ‘）２抗体、Ｆｃ領域タンパク質、Ｆｃ融合タンパク質）を本発明の製造方法において用いることで、２つの抗体重鎖の同じ標的領域においてＥ－Ｆで表われる２つの構造単位を位置選択的に有する抗体を製造することができる。すなわち、機能性物質を有する抗体において、機能性物質による修飾様式を複数（例、２つ）の重鎖間で同一にすることができる。
　機能性物質を有する抗体はまた、１つの抗体重鎖の複数（例えば２～５個、好ましくは２～４個、より好ましくは２または３個）の標的領域において、同種または異種の機能性物質（例えば、Ｅ－Ｆで表われる構造単位）を有することができる。この場合、機能性物質を有する抗体は、複数（例、２つ）の重鎖間で、機能性物質による修飾様式を同一にすることができる。
　本発明の製造方法はまた、生成した抗体を、特定の処理に付すことにより、機能性物質を有し、かつさらに修飾された抗体を生成することを含んでいてもよい。このような特定の処理としては、例えば、抗体の断片化処理（例、パパイン、ペプシン等の特定のプロテアーゼによる処理）が挙げられる。
　本発明の製造方法において式（ＩＶ）で表される化合物またはその塩を用いる場合、上記式（Ｖ）で表される機能性物質を有する抗体を製造することができる。
　好ましい実施形態では、本発明の製造方法において式（ＩＶ）で表される化合物として式（ＩＶ－１）で表されるものを用いる場合、下記式（Ｖ－１）で表される機能性物質を有する抗体を製造することができる。
Ａｂ－Ｅ１－Ｅ２－Ｅ３－Ｆ　　　（Ｖ－１）
〔式中、
　Ａｂは、抗体であり、
　Ｅ１、Ｅ２、Ｅ３およびＦは、上記式（ＩＶ－１）のものと同じである。〕
　好ましい特定の実施形態では、本発明の製造方法において式（ＩＶ－１）で表される化合物として式（ＩＶ－２）で表されるものを用いる場合、下記式（Ｖ－２）で表される機能性物質を有する抗体を製造することができる。
Ａｂ－Ｅ１－Ｘ－Ｙ－Ｅ３－Ｆ　　　（Ｖ－２）
〔式中、
　Ａｂは、抗体であり、
　Ｅ１、Ｘ、Ｙ、Ｅ３およびＦは、上記式（ＩＶ－２）のものと同じである。〕
　好ましい別の特定の実施形態では、本発明の製造方法において式（ＩＶ－１）で表される化合物として式（ＩＶ－３）で表されるものを用いる場合、下記式（Ｖ－３）で表される機能性物質を有する抗体を製造することができる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000035
 〔式中、
　Ａｂは、抗体であり、
　Ｅ１、環Ｚ、環構成原子Ｘ’、Ｅ３およびＦは、上記式（ＩＶ－３）のものと同じである。〕
　好ましくは、本発明の製造方法において式（ＩＶ－３）で表される化合物として式（ＩＶ－４）で表されるものを用いる場合、下記式（Ｖ－４）で表される機能性物質を有する抗体を製造することができる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000036
 〔式中、
　Ａｂは、抗体であり、
　Ｅ１、環Ｚ、Ｅ３およびＦは、上記式（ＩＶ－４）のものと同じである。〕
　抗体に対する親和性物質、および機能性物質を有する化合物またはその塩は、Ｅにおける求電子基またはＥ１の求電子基を有するため、抗体と反応することができる。このような反応は、タンパク質の変性・分解（例、アミド結合の切断）を引き起こし得ない条件（温和な条件）下で適宜行うことができる。例えば、このような反応は、適切な反応系、例えば緩衝液中において、室温（例、約１５～３０℃）で行うことができる。緩衝液のｐＨは、例えば５～９であり、好ましくは５．５～８．５であり、より好ましくは６．０～８．０である。緩衝液は、適切な触媒を含んでいてもよい。反応時間は、例えば１分～２０時間、好ましくは１０分～１５時間、より好ましくは２０分～１０時間、さらにより好ましくは３０分～８時間である。このような反応の詳細については、例えば、Ｇ．Ｊ．Ｌ．Ｂｅｒｎａｒｄｅｓ　ｅｔ　ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．，１１５，２１７４（２０１５）；Ｇ．Ｊ．Ｌ．Ｂｅｒｎａｒｄｅｓ　ｅｔ　ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ａｓｉａｎ．Ｊ．，４，６３０（２００９）；Ｂ．Ｇ．Ｄａｖｉｅｓ　ｅｔ　ａｌ．，Ｎａｔ．Ｃｏｍｍｕｎ．，５，４７４０（２０１４）；Ａ．Ｗａｇｎｅｒ　ｅｔ　ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ．Ｃｈｅｍ．，２５，８２５（２０１４）を参照のこと。
　反応系において、抗体（Ｘ）に対する、抗体に対する親和性物質、および機能性物質を有する化合物またはその塩（Ｙ）のモル比率（Ｙ／Ｘ）は、抗体に対する親和性物質、および機能性物基を有する化合物またはその塩および抗体の種類、抗体に対する親和性物質、および生体直交性官能基を有する化合物またはその塩によって修飾されるべき抗体中の部位の数（例、ＤＡＲ）等に応じて変動することから特に限定されないが、例えば０．１～１００であり、好ましくは０．５～８０であり、より好ましくは１～７０であり、さらにより好ましくは２～５０であり、特に好ましくは３～３０である。
　機能性物質を有する抗体の生成の確認は、その具体的な原料および生成物の分子量にもよるが、例えば、電気泳動法、クロマトグラフィー（例、ゲル濾過クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、逆相カラムクロマトグラフィー、ＨＰＬＣ）、または質量分析により、好ましくは、質量分析により行うことができる。位置選択性の確認は、例えば、ペプチドマッピングにより行うことができる。ペプチドマッピングは、例えば、プロテアーゼ（例、トリプシン、キモトリプシン、）処理および質量分析により行うことができる。プロテアーゼとしては、エンドプロテアーゼが好ましい。このようなエンドプロテアーゼとしては、例えば、トリプシン、キモトリプシン、Ｇｌｕ－Ｃ、Ｌｙｓ－Ｎ、Ｌｙｓ－Ｃ、Ａｓｐ－Ｎが挙げられる。機能性物基を有する抗体が保有する、機能性物基の個数の確認は、例えば、電気泳動法、クロマトグラフィー、または質量分析により、好ましくは、質量分析により行うことができる。機能性物基を有する抗体は、クロマトグラフィー（例、上述したクロマトグラフィー、およびアフィニティークロマトグラフィー）等の任意の方法により適宜精製することができる。
７．塩
　本発明において、塩としては、例えば、無機酸との塩、有機酸との塩、無機塩基との塩、有機塩基との塩、およびアミノ酸との塩が挙げられる。無機酸との塩としては、例えば、塩化水素、臭化水素、リン酸、硫酸、硝酸との塩が挙げられる。有機酸との塩としては、例えば、ギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、乳酸、酒石酸、フマル酸、シュウ酸、マレイン酸、クエン酸、コハク酸、リンゴ酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸との塩が挙げられる。無機塩基との塩としては、例えば、アルカリ金属（例、ナトリウム、カリウム）、アルカリ土類金属（例、カルシウム、マグネシウム）、および亜鉛、アルミニウム等の他の金属、ならびにアンモニウムとの塩が挙げられる。有機塩基との塩としては、例えば、トリメチルアミン、トリエチルアミン、プロピレンジアミン、エチレンジアミン、ピリジン、エタノールアミン、モノアルキルエタノールアミン、ジアルキルエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミンとの塩が挙げられる。アミノ酸との塩としては、例えば、塩基性アミノ酸（例、アルギニン、ヒスチジン、リジン、オルニチン）、および酸性アミノ酸（例、アスパラギン酸、グルタミン酸）との塩が挙げられる。塩は、好ましくは、無機酸（例、塩化水素）との塩、または有機酸（例、トリフルオロ酢酸）との塩である。
８．用途
　抗体に対する親和性物質、および生体直交性官能基を有する本発明の化合物またはその塩は、例えば、生体直交性官能基による抗体の位置選択的な修飾に有用である。したがって、本発明は、抗体に対する親和性物質、および生体直交性官能基を有する化合物またはその塩を含む、生体直交性官能基による抗体の位置選択的修飾試薬を提供する。生体直交性官能基による抗体の位置選択的修飾試薬において、抗体に対する親和性物質、および生体直交性官能基を有する化合物またはその塩の詳細（例えば、定義、例および好ましい例）は、上述したものと同じである。
　抗体に対する親和性物質、および機能性物質を有する本発明の化合物またはその塩は、例えば、機能性物質による抗体の位置選択的な修飾に有用である。したがって、本発明は、抗体に対する親和性物質、および機能性物質を有する化合物またはその塩を含む、機能性物質による抗体の位置選択的修飾試薬を提供する。機能性物質による抗体の位置選択的修飾試薬において、抗体に対する親和性物質、および機能性物質を有する化合物またはその塩の詳細（例えば、定義、例および好ましい例）は、上述したものと同じである。
　本発明の位置選択的修飾試薬において修飾される抗体の位置選択的修飾の詳細（例えば、定義、例および好ましい例）は、上述したものと同じである。
　本発明の位置選択的修飾試薬は、他の成分をさらに含む組成物の形態で提供されてもよい。このような他の成分としては、例えば、溶液、安定化剤（例、酸化防止剤、保存剤）が挙げられる。溶液としては、水溶液が好ましい。水溶液としては、例えば、水（例、蒸留水、滅菌蒸留水、精製水、生理食塩水）、緩衝液（例、リン酸水溶液、Ｔｒｉｓ－塩酸緩衝液、炭酸－重炭酸緩衝液、ホウ酸水溶液、グリシン－水酸化ナトリウム緩衝液、クエン酸緩衝液）が挙げられるが、緩衝液が好ましい。溶液のｐＨは、例えば５．０～９．０、好ましくは５．５～８．５である。本発明の位置選択的修飾試薬は、液状または粉末状（例、凍結乾燥粉末）において提供することができる。
　生体直交性官能基を位置選択的に有する抗体またはその塩は、例えば、機能性物質を位置選択的に有する抗体またはその塩の調製における中間体として有用である。
　機能性物質を位置選択的に有する抗体またはその塩は、例えば、医薬、または試薬（例、診断薬、研究用試薬）として、特に医薬として有用である。抗体薬物複合体（ＡＤＣ）の薬物の結合数および結合位置を変化させると、体内動態や薬物の放出速度、効果が変化することが報告されている。これらのことから次世代型ＡＤＣではコンジュゲーションする薬物の個数と位置を制御することが求められている。個数および位置が一定であると、期待通りのｅｆｆｉｃａｃｙ、コンジュゲーション薬剤のバリエーション、ロット差いわゆるレギュレーションの問題が解決すると考えられている。機能性物質を位置選択的に有する本発明の抗体またはその塩は、このようなレギュレーションの問題を解決することができる。したがって、機能性物質を位置選択的に有する本発明の抗体またはその塩は、医薬組成物の形態において提供されてもよい。このような医薬組成物は、機能性物質を位置選択的に有する抗体またはその塩に加えて、医薬上許容され得る担体を含んでいてもよい。医薬上許容され得る担体としては、例えば、ショ糖、デンプン、マンニット、ソルビット、乳糖、グルコース、セルロース、タルク、リン酸カルシウム、炭酸カルシウム等の賦形剤、セルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリプロピルピロリドン、ゼラチン、アラビアゴム、ポリエチレングリコール、ショ糖、デンプン等の結合剤、デンプン、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルスターチ、炭酸水素ナトリウム、リン酸カルシウム、クエン酸カルシウム等の崩壊剤、ステアリン酸マグネシウム、エアロジル、タルク、ラウリル硫酸ナトリウム等の滑剤、クエン酸、メントール、グリシルリシン・アンモニウム塩、グリシン、オレンジ粉等の芳香剤、安息香酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、メチルパラベン、プロピルパラベン等の保存剤、クエン酸、クエン酸ナトリウム、酢酸等の安定剤、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ステアリン酸アルミニウム等の懸濁剤、界面活性剤等の分散剤、水、生理食塩水、オレンジジュース等の希釈剤、カカオ脂、ポリエチレングリコール、白灯油等のベースワックスなどが挙げられるが、それらに限定されるものではない。機能性物質を位置選択的に有する本発明の抗体またはその塩はまた、安定性を実現する任意の修飾（例、ＰＥＧ化）を有していてもよい。
　経口投与に好適な製剤は、水、生理食塩水、オレンジジュースのような希釈液に有効量のリガンドを溶解させた液剤、有効量のリガンドを固体や顆粒として含んでいるカプセル剤、サッシェ剤または錠剤、適当な分散媒中に有効量の有効成分を懸濁させた懸濁液剤、有効量の有効成分を溶解させた溶液を適当な分散媒中に分散させ乳化させた乳剤等である。
　医薬組成物は、非経口的な投与（例、静脈内注射、皮下注射、筋肉注射、局所注入、腹腔内投与）に好適である。このような非経口的な投与に好適な医薬組成物としては、水性および非水性の等張な無菌の注射液剤があり、これには抗酸化剤、緩衝液、制菌剤、等張化剤等が含まれていてもよい。また、水性および非水性の無菌の懸濁液剤が挙げられ、これには懸濁剤、可溶化剤、増粘剤、安定化剤、防腐剤等が含まれていてもよい。
　医薬組成物の投与量は、有効成分の種類・活性、病気の重篤度、投与対象となる動物種、投与対象の薬物受容性、体重、年齢等によって異なるが、適宜設定することができる。
　次に実施例を示して本発明をさらに詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
［実施例１：ＩｇＧ１　Ｆｃ親和性物質の合成］
（１－１）抗体に対する親和性ペプチドの合成
　抗体に対する親和性物質である下記に示したペプチドは、全て同様の方法にて調製した。Ｆｍｏｃ法によるＲｉｎｋ　ａｍｉｄｅ樹脂をもちいたペプチド固相合成によって、Ｎ末端をアセチル基でキャッピングしたもの（化合物１，２，３２～５３）、Ｎ末端を３－（トリフェニルメチルチオ）プロピオン酸でキャッピングしたもの（化合物３，３１，５４）を調製し、トリフルオロ酢酸：水：トリイソプロピルシラン：エタンジチオール＝９４：２．５：１．０：２．５の溶液にて３時間攪拌することで樹脂からの切り出しと脱保護を行った。樹脂をフィルトレーションにより除去し、ジエチルエーテルを加え沈殿を行い、ジエチルエーテルをデカンテーションすることで除去し、ペプチドを粗結晶として得た。これを分取ＨＰＬＣにて精製し、生成物である親和性ペプチドを得た。
　分子内にＳ－Ｓ結合を有するペプチド（メチオニンを含有するものを除く）である化合物３５～５３については、前駆体となる直鎖のペプチドを上記に示す方法にて取得したのち、次に示す方法にて合成した。得られた前駆体数十ｍｇをＤＭＳＯ　１ｍＬに溶解し、ＮＨ３／ＭｅＯＨ　１００μＬ、Ｈ２Ｏ２　１０μＬを加え、終夜攪拌を行った。ＬＣＭＳにより反応が終了していることを確認したのち、分取ＨＰＬＣにて精製し、目的物である親和性ペプチドを得た。
　分子内にＳ－Ｓ結合を有するペプチド（メチオニンを含有するもの）である化合物３３，３４については、前駆体となる直鎖のペプチドを上記に示す方法にて取得したのち、次に示す方法にて合成した。得られた前駆体数十ｍｇを０．１ＭＴｒｉｓ－ＨＣｌ　Ｂｕｆｆｅｒ（ｐＨ８．００）　２０ｍＬに溶解し、グルタチオン酸化型　５．０ｅｑを加え、終夜攪拌を行った。ＬＣＭＳにより反応が終了していることを確認したのち、分取ＨＰＬＣにて精製し、目的物である親和性ペプチドを得た。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000037
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝３　１３９２［Ｍ＋３Ｈ］３＋，ｚ＝４　１０４４［Ｍ＋４Ｈ］４＋
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000038
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝３　１３９２［Ｍ＋３Ｈ］３＋，ｚ＝４　１０４４［Ｍ＋４Ｈ］４＋
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000039
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝３　１４７８［Ｍ＋３Ｈ］３＋，ｚ＝４　１１０８［Ｍ＋４Ｈ］４＋
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000040
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝２　１８９２　［Ｍ＋２Ｈ］２＋，　Ｚ＝３　１２６２　［Ｍ＋３Ｈ］３＋，　Ｚ＝４　９４６　［Ｍ＋４Ｈ］４＋，　ｚ＝５　７５７　［Ｍ＋５Ｈ］５＋
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000041
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝３　１４０１　［Ｍ＋３Ｈ］３＋，　Ｚ＝４　１０５１　［Ｍ＋４Ｈ］４＋，　ｚ＝５　８４１　［Ｍ＋５Ｈ］５＋
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000042
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝３　１４２６　［Ｍ＋３Ｈ］３＋，　Ｚ＝４　１０７０　［Ｍ＋４Ｈ］４＋，　ｚ＝５　８５９　［Ｍ＋５Ｈ］５＋
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000043
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝３　１４１７　［Ｍ＋３Ｈ］３＋，　Ｚ＝４　１０６３　［Ｍ＋４Ｈ］４＋，　ｚ＝５　８５１　［Ｍ＋５Ｈ］５＋
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000044
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝３　１４２５　［Ｍ＋３Ｈ］３＋，　Ｚ＝４　１０６９　［Ｍ＋４Ｈ］４＋，　ｚ＝５　８５５　［Ｍ＋５Ｈ］５＋
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000045
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝１　２０９０　［Ｍ＋１Ｈ］＋，　Ｚ＝２　１０４５　［Ｍ＋２Ｈ］２＋，　Ｚ＝３　６９７　［Ｍ＋３Ｈ］３＋
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000046
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝１　２０７４　［Ｍ＋１Ｈ］＋，　Ｚ＝２　１０３７　［Ｍ＋２Ｈ］２＋，　Ｚ＝３　６９２　［Ｍ＋３Ｈ］３＋
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000047
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝１　２０６１　［Ｍ＋１Ｈ］＋，　Ｚ＝２　１０３１　［Ｍ＋２Ｈ］２＋，　Ｚ＝３　６８７　［Ｍ＋３Ｈ］３＋
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000048
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝１　２０３２　［Ｍ＋１Ｈ］＋，　Ｚ＝２　１０１６　［Ｍ＋２Ｈ］２＋，　Ｚ＝３　６７８　［Ｍ＋３Ｈ］３＋
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000049
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝１　２０８９　［Ｍ＋１Ｈ］＋，　Ｚ＝２　１０４４　［Ｍ＋２Ｈ］２＋，　Ｚ＝３　６９６　［Ｍ＋３Ｈ］３＋
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000050
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝１　２０８８　［Ｍ＋１Ｈ］＋，　Ｚ＝２　１０４４　［Ｍ＋２Ｈ］２＋，　Ｚ＝３　６９６　［Ｍ＋３Ｈ］３＋
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000051
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝１　１５６１　［Ｍ＋Ｈ］＋，　Ｚ＝２　７８１　［Ｍ＋２Ｈ］２＋
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000052
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝１　１５４８　［Ｍ＋１Ｈ］＋，　Ｚ＝２　７７４　［Ｍ＋２Ｈ］２＋
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000053
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝２　１０５９　［Ｍ＋２Ｈ］２＋，　Ｚ＝３　７０６　［Ｍ＋３Ｈ］３＋
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000054
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝２　１０７４　［Ｍ＋２Ｈ］２＋，　Ｚ＝３　７１６　［Ｍ＋３Ｈ］３＋
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000055
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝２　１０８１　［Ｍ＋２Ｈ］２＋，　Ｚ＝３　７２１　［Ｍ＋３Ｈ］３＋，　Ｚ＝４　５４１　［Ｍ＋４Ｈ］４＋
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000056
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝２　１０８５　［Ｍ＋２Ｈ］２＋，　Ｚ＝３　７２３　［Ｍ＋３Ｈ］３＋，　Ｚ＝４　５４３　［Ｍ＋４Ｈ］４＋
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000057
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝２　１０４５　［Ｍ＋２Ｈ］２＋，　Ｚ＝３　６９７　［Ｍ＋３Ｈ］３＋
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000058
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝１　１３４５　［Ｍ＋１Ｈ］＋，　Ｚ＝２　６７３　［Ｍ＋２Ｈ］２＋
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000059
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝２　１０５２　［Ｍ＋２Ｈ］２＋，　Ｚ＝３　７０２　［Ｍ＋３Ｈ］３＋
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000060
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝２　１０７３　［Ｍ＋２Ｈ］２＋，　Ｚ＝３　７１５　［Ｍ＋３Ｈ］３＋
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000061
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝２　１０７３　［Ｍ＋２Ｈ］２＋，　Ｚ＝３　７１６　［Ｍ＋３Ｈ］３＋
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000062
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝２　９６６　［Ｍ＋２Ｈ］２＋，　Ｚ＝３　６４４　［Ｍ＋３Ｈ］３＋
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000063
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝３　１３８１　［Ｍ＋３Ｈ］３＋，　Ｚ＝４　１０３６　［Ｍ＋４Ｈ］４＋，　ｚ＝５　８２９　［Ｍ＋５Ｈ］５＋
（１－２）抗体に対する親和性ペプチドアジド付加体の合成
　下記に示したペプチド－アジド付加体（化合物４，５）は以下の通り合成した。後に官能基化する残基のＬｙｓのみｍｔｔ基で保護されたアミノ酸を用い、Ｆｍｏｃ法によるＲｉｎｋ　ａｍｉｄｅ樹脂を持ちいたペプチド固相合成によって、Ｎ末端をアセチル基でキャッピングしたものを調製した。ジクロロメタン：トリフルオロ酢酸：トリイソプロピルシラン＝９０：５：５の溶液にて１時間攪拌させ、ｍｔｔ基のみを脱保護した。樹脂をＤＭＦで洗浄した後に、トリエチルアミン（５０モル当量）、アジドアセチル酸ＮＨＳエステル（１０モル当量），ＤＭＦ４ｍＬ）に溶解させて添加し、１６時間攪拌した。溶液を除去した後トリフルオロ酢酸：水：トリイソプロピルシラン＝９５：２．５：２．５の溶液にて１時間攪拌することで樹脂からの切り出しと脱保護を行った。樹脂をフィルトレーションにより除去し、ジエチルエーテルを加え沈殿を行い、ジエチルエーテルをデカンテーションすることで除去し、ペプチドを粗結晶として得た。これを分取ＨＰＬＣにて精製し、生成物である親和性ペプチドアジド付加体を得た。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000064
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝３　１４０１［Ｍ＋３Ｈ］３＋，ｚ＝４　１０５１［Ｍ＋４Ｈ］４＋
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000065
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝３　１４２０［Ｍ＋３Ｈ］３＋，ｚ＝４　１０６５［Ｍ＋４Ｈ］４＋
［実施例２：抗体修飾リンカーの合成とＩｇＧ１　Ｆｃ親和性ペプチドアジド付加体との連結］
（２－１）イミダゾリルカルボニル化合物の合成
（２－１－１）イミダゾリルカルボニル化合物（化合物６）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000066
　３－ブチン－１－オール（０．１００ｇ，１．３２ｍｍｏｌ）とカルボニルジイミダゾール（２６３ｍｇ，１．６２ｍｍｏｌ）をＴＨＦ溶媒に溶解させ、室温で１時間攪拌した。反応液を酢酸エチルで希釈し、水、食塩水で洗浄後、硫酸ナトリウムを加え５分静置した。フィルトレーションにより硫酸ナトリウムを取り除き、減圧下濃縮することにより粗生成物を得たのち、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製した。生成物が含まれるフラクションを回収し、減圧下濃縮することにより、化合物６に相当する１Ｈ－イミダゾール－１－カルボン酸－３－ブチニルエステル（０．１８０ｇ，１．１０ｍｍｏｌ）を得た。
１Ｈ　ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ－ｄ）　δ　２．０８（ｔ，Ｊ＝２．７Ｈｚ，１Ｈ），２．７３（ｔｄ，Ｊ＝６．６，２．７Ｈｚ，２Ｈ），４．５４（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２Ｈ），７．１１（ｓ，１Ｈ），７．４３（ｓ，１Ｈ），８．１８（ｓ，１Ｈ）．
ＭＳ（ＥＳＩ）　ｍ／ｚ：１６５［Ｍ＋Ｎａ］＋
（２－１－２）イミダゾリルカルボニル化合物（化合物７）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000067
　９－デシン－１－オール（０．１００ｇ，０．７４５ｍｍｏｌ）とカルボニルジイミダゾール（１４８ｍｇ，０．９１６ｍｍｏｌ）をＴＨＦ溶媒に溶解させ、室温で１時間攪拌した。反応液を酢酸エチルで希釈し、水、食塩水で洗浄後、硫酸ナトリウムを加え５分静置した。フィルトレーションにより硫酸ナトリウムを取り除き、減圧下濃縮することにより、粗生成物を得たのち、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製した。生成物が含まれるフラクションを回収し、減圧下濃縮することにより、化合物７に相当する１Ｈ－イミダゾール－１－カルボン酸－９－ブチニルエステル（０．１５２ｇ，０．６１２ｍｍｏｌ）を得た。
１Ｈ　ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ－ｄ）　δ　１．３３－１．５０（ｍ，１０Ｈ），１．８２（ｍ，２Ｈ），１．９６（ｔ，Ｊ＝２．６Ｈｚ，１Ｈ）２．２１（ｔｄ，Ｊ＝６．８，２．６Ｈｚ，２Ｈ），４．４３（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ）７．１０（ｓ，１Ｈ），７．４５（ｂｒｓ，１Ｈ），８．１６（ｓ，１Ｈ）．
ＭＳ（ＥＳＩ）　ｍ／ｚ：２７１［Ｍ＋Ｎａ］＋
（２－１－３）イミダゾリルカルボニル化合物（化合物９）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000068
　Ｎ，Ｎ’－ジシクロヘキシルカルボジイミド（１１３ｍｇ，０．５４６ｍｍｏｌ）、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール一水和物（７８．１ｍｇ，０．５４６ｍｍｏｌ）、４－ペンチン酸（５３．６ｍｇ，０．５４６ｍｍｏｌ）をジクロロメタン溶媒に溶解させ、室温で１時間攪拌した後、１２－アミノ－ドデカノール（０．１００ｇ，０．４９７ｍｍｏｌ）を加え、室温で４時間攪拌した。反応液を酢酸エチルで希釈し、水、食塩水で洗浄後、硫酸ナトリウムを加え５分静置した。フィルトレーションにより硫酸ナトリウムを取り除き、減圧下濃縮することにより、化合物８に相当する１２－（ペンチ－４－イン－１－オキソ）アミノドデカン－１－オール（０．１０２ｇ，０．３６３ｍｍｏｌ）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）　ｍ／ｚ：２８１［Ｍ＋Ｈ］＋
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000069
　１２－（ペンチ－４－インアミド）ドデカン－１－オール（２５．０ｍｇ，０．０８９ｍｍｏｌ）とカルボニルジイミダゾール（２９．１ｍｇ，０．１７８ｍｍｏｌ）をＴＨＦ溶媒に溶解させ、室温で１時間攪拌した。反応液を酢酸エチルで希釈し、水、食塩水で洗浄後、硫酸ナトリウムを加え５分静置した。フィルトレーションにより硫酸ナトリウムを取り除き、減圧下濃縮することにより粗生成物を得たのち、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製した。生成物が含まれるフラクションを回収し、減圧下濃縮することにより、化合物９に相当する１Ｈ－イミダゾール－１－カルボン酸－１２－（ペンチ－４－イン－１－オキソ）アミノドデカニルエステル（１２．０ｍｇ，０．０３２ｍｍｏｌ）を得た。
１Ｈ　ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ－ｄ）　δ　１．２３－１．５０（ｍ，２０Ｈ），１．８１（ｔ，Ｊ＝２．６Ｈｚ，１Ｈ），２．３６（ｍ，２Ｈ）２．５３（ｔｄ，Ｊ＝６．８，２．６Ｈｚ，２Ｈ），３．２３（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ）４．４１（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），５．６４（ｂｒｓ，１Ｈ），７．０７（ｓ，１Ｈ），７．４３（ｂｒｓ，１Ｈ），８．１３（ｓ，１Ｈ）．
ＭＳ（ＥＳＩ）　ｍ／ｚ：３９８［Ｍ＋Ｎａ］＋
（２－２）イミダゾリルカルボニル化合物の合成と親和性ペプチドアジド体との連結
　実施例１で合成した親和性ペプチドアジド体（化合物４）と実施例２で合成したイミダゾリルカルボニル化合物（化合物６，７，９）は全て同様の方法で連結させた。ペプチドアジド体を１００ｍＭのリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）に溶解させ、アミノグアニジン塩酸塩（２０モル当量）、アスコルビン酸ナトリウム（２０モル当量）、１００ｍｇ／ｍＬのイミダゾリルカルボニル化合物（３モル当量）ジメチルスルホキシド溶液を加えた。この反応混合物に対して、別途調製した硫酸銅一水和物（４モル当量）とトリス（３－ヒドロキシプロピルトリアゾリルメチル）アミン　（２０モル当量）の水溶液を添加し、攪拌した。ＬＣ－ＭＳで反応モニタリングを行い、原料の消失を確認した後、これを限外濾過（Ａｍｉｃｏｎ　Ｕｌｔｒａ，　３Ｋ　ＭＷＣＯ））にて濃縮と水希釈を４回繰り返し、得られた水溶液を凍結乾燥して下記に示すぺプチド－イミダゾリルカルボニル化合物（化合物１０，１１，１２）を取得した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000070
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝３　１４５５［Ｍ＋３Ｈ］３＋，ｚ＝４　１０９２［Ｍ＋４Ｈ］４＋
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000071
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝３　１４８３［Ｍ＋３Ｈ］３＋，ｚ＝４　１１１３［Ｍ＋４Ｈ］４＋
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000072
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝３　１５２５［Ｍ＋３Ｈ］３＋，ｚ＝４　１１４４［Ｍ＋４Ｈ］４＋
［参考例１：モデル実験による親和性ペプチドから抗体修飾基（求電子基）までの原子数の違いによる、反応性の違いの検証］
（１－１）ＩｇＧ抗体トラスツズマブ－ペプチド複合体の合成
　抗ＨＥＲ２　ＩｇＧ抗体トラスツズマブ（中外製薬）２０μｇを１００ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ　７．２）２．０μＬに溶解させ、実施例２の（２－２）で合成したぺプチド－イミダゾリルカルボニル化合物（化合物１０，１１，１２）をそれぞれ抗体に対して２０モル当量加えて、３７度で４時間攪拌した。反応液を限外濾過（Ａｍｉｃｏｎ　Ｕｌｔｒａ，　３Ｋ　ＭＷＣＯ））により水置換しペプチド試薬を取り除くことで反応を停止させ、ＩｇＧ抗体トラスツズマブ－ペプチド複合体を得た。
（１－２）ＩｇＧ抗体トラスツズマブ－ペプチド複合体のＳＤＳ－ＰＡＧＥによる解析
　３種のぺプチド－イミダゾリルカルボニル化合物（化合物１０，１１，１２）を用いて（１－１）で得られたＩｇＧ抗体トラスツズマブ－ペプチド複合体の３種ををＳＤＳ－ＰＡＧＥ（Ｍｉｎｉ－ＰＲＯＴＥＡＮ　ＴＧＸ　ｇｅｌ，４～２０％，Ｂｉｏ－ＲＡＤ；還元条件下；Ｃｏｏｍａｓｉｅ　Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ　Ｂｌｕｅ　Ｇ－２５０　Ｓｔａｉｎにより染色）にて分析した結果を、図２に示す。この結果から、化合物１０，１１を用いたときには抗体の修飾反応が進行し、化合物１２を用いた際には進行しないことが分かった。
［実施例３：マレイミドを搭載した抗体親和性試薬の合成］
（３－１）保護チオール化合物の合成
（３－１－１）保護チオール化合物（化合物１４）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000073
　３－（トリフェニルメチルチオ）プロピオン酸（１００ｍｇ，０．２８７ｍｍｏｌ）をＴＨＦに溶解させ、０℃にてクロロ炭酸イソブチル（　４２．７μＬ，０．３１６ｍｍｏｌ）、Ｎ－メチルモルホリン（６９．４μＬ，０．６３１ｍｍｏｌ）を加え３０分攪拌し、対応する混合酸無水物を調製した。室温にて５－アミノ吉草酸（３３．６ｍｇ、０．２８７ｍｍｏｌ）を１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液に溶解させたのち、前述の混合酸無水物のＴＨＦ溶液を室温にて滴下した。室温にて１６時間攪拌した後、反応液を水と酢酸エチルで洗浄し、水相を回収した。水相に６Ｍ塩酸水溶液を加え、系内のｐＨを３．０に調整した後、酢酸エチルによる分液抽出を行った後、有機相を食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムを加え５分静置した。フィルトレーションにより硫酸マグネシウムを取り除き、減圧下濃縮することにより粗生成物を得たのち、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製した。生成物が含まれるフラクションを回収し、減圧下濃縮することにより、化合物１３に相当する５－［３－（トリフェニルメチル）スルファニル－プロピル－１－オキソ］アミノ－ヘキサン酸（１１０ｍｇ，０．２４６ｍｍｏｌ）を得た。
１Ｈ　ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ－ｄ）　δ　１．６６（ｍ，３Ｈ），２．０３（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），２．３９（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），２．５２（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），３．２２（ｑ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２Ｈ），５．３７（ｓ，１Ｈ），７．１９－７．３６（ｍ，９Ｈ），７．４０－７．４９（ｍ，６Ｈ）．
ＭＳ（ＥＳＩ）　ｍ／ｚ：４７０［Ｍ＋Ｎａ］＋
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000074
　５－（３－トリフェニルメチル－プロピル－１－オキソ）アミノ－ヘキサン酸（２０．２ｍｇ，０．０４５ｍｍｏｌ）をＴＨＦに溶解させ、０℃にてクロロ炭酸イソブチル（　６．７０μＬ，０．０５０ｍｍｏｌ）、Ｎ－メチルモルホリン（１０．９μＬ，０．０９９１ｍｍｏｌ）を加え３０分攪拌し、対応する混合酸無水物を調製した。室温にてプロパルギルアミン（１６．６μＬ、０．２２６ｍｍｏｌ）を１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液に溶解させたのち、前述の混合酸無水物のＴＨＦ溶液を室温にて滴下した。室温にて１６時間攪拌した後、反応液を水と酢酸エチルで洗浄し、水相を回収した。水相に６Ｍ塩酸水溶液を加え、系内のｐＨを３．０に調整した後、酢酸エチルによる分液抽出を行った後、有機相を食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムを加え５分静置した。フィルトレーションにより硫酸マグネシウムを取り除き、減圧下濃縮することにより、粗生成物を得たのち、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製した。生成物が含まれるフラクションを回収し、減圧下濃縮することにより、化合物１４に相当するＮ－プロピニル－５－（３－トリフェニルメチルスルファニル－プロピル－１－オキソ）アミノ－ヘキサンアミド（２０．０ｍｇ，０．０４１ｍｍｏｌ）を得た。
１Ｈ　ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ－ｄ）　δ　１．５２（ｄｔ，Ｊ＝８．２，６．５Ｈｚ，２Ｈ），１．５９－１．７２（ｍ，２Ｈ），２．０２－２．０９（ｍ，２Ｈ），２．１７－２．２８（ｍ，２Ｈ）２．５２（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．２１（ｂｒｓ，２Ｈ），４．０１（ｄｄ，Ｊ＝５．３，２．６Ｈｚ，２Ｈ），６．０４（ｓ，１Ｈ），７．１９－７．３５（ｍ，９Ｈ），７．４０－７．４９（ｍ，６Ｈ）．
ＭＳ（ＥＳＩ）　ｍ／ｚ：５０７［Ｍ＋Ｈ］＋
（３－１－２）保護チオール化合物（化合物１５）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000075
　３－（トリフェニルメチルチオ）プロピオン酸（１００ｍｇ，０．２８７ｍｍｏｌ）をＴＨＦに溶解させ、０℃にてクロロ炭酸イソブチル（４２．７μＬ，０．３１６ｍｍｏｌ）、Ｎ－メチルモルホリン（６９．４μＬ，０．６３１ｍｍｏｌ）を加え３０分攪拌し、対応する混合酸無水物を調製した。室温にてプロパルギルアミン（１０５μＬ、１．４３ｍｍｏｌ）を１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液に溶解させたのち、前述の混合酸無水物のＴＨＦ溶液を室温にて滴下した。室温にて１６時間攪拌した後、反応液を水と酢酸エチルで洗浄し、水相を回収した。水相に６Ｍ塩酸水溶液を加え、系内のｐＨを３．０に調整した後、酢酸エチルによる分液抽出を行った後、有機相を食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムを加え５分静置した。フィルトレーションにより硫酸マグネシウムを取り除き、減圧下濃縮することにより、化合物１５に相当するＮ－プロピニル－３－トリフェニルメチルスルファニル－プロパンアミド（１１０ｍｇ，０．２８６ｍｍｏｌ）を得た。
１Ｈ　ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ－ｄ）　δ　２．０１（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），２．２４（ｔ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ），２．５３（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），３．９９（ｍ，２Ｈ），５．４０（ｂｒｓ，１Ｈ），７．１９－７．３５（ｍ，９Ｈ），７．４０－７．４９（ｍ，６Ｈ）．
ＭＳ（ＥＳＩ）　ｍ／ｚ：４０８［Ｍ＋Ｎａ］＋
（３－２）親和性ペプチドと保護チオール化合物の連結
（３－２－１）ぺプチド－保護チオール連結体（化合物１６）
の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000076
　実施例１で合成した化合物５をＮ，Ｎ’－ジメチルホルムアミドに溶解し、３－（トリフェニルメチルチオ）プロピオン酸（５モル当量）、１－エチル―３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（１５モル当量）、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール（１５モル当量）をＮ，Ｎ’－ジメチルホルムアミドに溶解させ、系中に加えた。室温で１２時間攪拌した後、分取ＨＰＬＣにて精製した。目的物を含むフラクションをＥＳＩ－ＭＳで確認した後、凍結乾燥し生成物であるぺプチド－保護チオール連結体（化合物１６）を得た。
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝３　１５０２［Ｍ＋３Ｈ］３＋，ｚ＝４　１１２５［Ｍ＋４Ｈ］４＋
（３－２－２）ぺプチド－保護チオール連結体（化合物１７，１８）の合成
　実施例１で合成した親和性ペプチドアジド体（化合物５）と（４－１－１）、（４－１－２）で合成した保護チオール化合物（化合物１７，１８）は同様の方法で連結させた。ペプチドアジド体を１００ｍＭのリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）に溶解させ、アミノグアニジン塩酸塩（２０モル当量）、アスコルビン酸ナトリウム（２０モル当量）、１００ｍｇ／ｍＬの保護チオール化合物（３モル当量）ジメチルスルホキシド溶液を加えた。この反応混合物に対して、別途調製した硫酸銅一水和物（４モル当量）とトリス（３－ヒドロキシプロピルトリアゾリルメチル）アミン（２０モル当量）の水溶液を添加し、攪拌した。ＬＣ－ＭＳで反応モニタリングを行い、原料の消失を確認した後、これを限外濾過（Ａｍｉｃｏｎ　Ｕｌｔｒａ－４，　３Ｋ　ＭＷＣＯ）にて濃縮と水希釈を４回繰り返し、得られた水溶液を凍結乾燥してぺプチド－保護チオール連結体（化合物１７，１８）を取得した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000077
ＭＳ（ＥＳＩ）　ｍ／ｚ：ｚ＝３　１５４８［Ｍ＋３Ｈ］３＋，ｚ＝４　１１６１［Ｍ＋４Ｈ］４＋
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000078
ＭＳ（ＥＳＩ）　ｍ／ｚ：ｚ＝３　１５８１［Ｍ＋３Ｈ］３＋，ｚ＝４　１１８６［Ｍ＋４Ｈ］４＋
（３－３）ぺプチド－保護チオール連結体（化合物１９，２０，２１）の合成
　（３－２）で合成した親和性ペプチド－保護チオール連結体（化合物１６，１７，１８）を、トリフルオロ酢酸：ジクロロメタン＝１：１溶液で１時間攪拌することにより、トリフェニルメチル基を除去した。反応終結をＬＣ－ＭＳで確認した後、分取ＨＰＬＣにて精製した。目的物を含むフラクションをＥＳＩ－ＭＳで確認した後、凍結乾燥し生成物であるチオール－ペプチド連結体（化合物１９，２０，２１）を得た。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000079
ＭＳ（ＥＳＩ）　ｍ／ｚ：ｚ＝３　１４５４［Ｍ＋３Ｈ］３＋，ｚ＝４　１０９１［Ｍ＋４Ｈ］４＋
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000080
ＭＳ（ＥＳＩ）　ｍ／ｚ：ｚ＝３　１４６８［Ｍ＋３Ｈ］３＋，ｚ＝４　１１１１［Ｍ＋４Ｈ］４＋
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000081
ｍ／ｚ：ｚ＝３　１５０１［Ｍ＋３Ｈ］３＋，ｚ＝４　１１２６［Ｍ＋４Ｈ］４＋
（３－４）マレイミドを搭載した抗体親和性ペプチド試薬の合成（１）（化合物２２、２３、２４）
　（３－３）で合成したチオール－ペプチド連結体（化合物１９，２０，２１）をジメチルスルホキシドに溶解させ、Ｎ－ヒドロキシマレイミド（２０モル当量）のジメチルスルホキシド溶液を加え、１時間攪拌した。原料消失をＬＣ－ＭＳで確認した後、トランス－４－［（２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロリ－１－イル）メチル）］シクロヘキサンカルボン酸（４０モル当量）、１－エチル―３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（３０モル当量）、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール（３０モル当量）を加え、４時間攪拌した。反応終結をＬＣ－ＭＳで確認した後、分取ＨＰＬＣにて精製した。目的物を含むフラクションをＥＳＩ－ＭＳで確認した後、凍結乾燥し生成物であるマレイミド－親和性ペプチド試薬（化合物２２，２３，２４）を得た。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000082
ＭＳ（ＥＳＩ）　ｍ／ｚ：ｚ＝３　１５３２［Ｍ＋３Ｈ］３＋，ｚ＝４　１１５０［Ｍ＋４Ｈ］４＋
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000083
ＭＳ（ＥＳＩ）　ｍ／ｚ：ｚ＝３　１５７８［Ｍ＋３Ｈ］３＋，ｚ＝４　１１８４［Ｍ＋４Ｈ］４＋
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000084
ＭＳ（ＥＳＩ）　ｍ／ｚ：ｚ＝３　１６１１［Ｍ＋３Ｈ］３＋，ｚ＝４　１２０８［Ｍ＋４Ｈ］４＋
（３－５）マレイミドを搭載した抗体親和性ペプチド試薬の合成（２）（化合物５６、５８）
（３－５－１）Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド―ペプチド連結体（化合物５５）の合成
　（１－１）で合成した化合物３をジメチルスルホキシドに溶解させ、トリエチルアミン（１当量）、Ｎ－ヒドロキシマレイミド（１．２当量）のジメチルスルホキシド溶液を加えて室温で１時間撹拌した。反応終結をＬＣ－ＭＳで確認した後、分取ＨＰＬＣにて精製した。目的物を含むフラクションをＥＳＩ－ＭＳで確認した後、凍結乾燥し生成物であるＮ－ヒドロキシスクシンイミド―ペプチド連結体（化合物５５）を得た。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000085
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝３　１４２９　［Ｍ＋３Ｈ］３＋，　Ｚ＝４　１０７２　［Ｍ＋４Ｈ］４＋，　ｚ＝５　８５７　［Ｍ＋５Ｈ］５＋，　ｚ＝６　７１５　［Ｍ＋６Ｈ］６＋
（３－５－２）マレイミドを搭載した抗体親和性ペプチド試薬の合成（化合物５６）
　（３－５－１）で得られたＮ－ヒドロキシスクシンイミド―ペプチド連結体、４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサンカルボン酸Ｎ－スクシンイミジル（２０当量）をジメチルスルホキシドに溶解させ、トリエチルアミン（８当量）を加えた。室温で２時間撹拌後、ＬＣ－ＭＳにて反応進行を確認した。分取ＨＰＬＣにて精製、目的物を含むフラクションをＥＳＩ－ＭＳで確認した後、凍結乾燥し目的物であるマレイミドを搭載した抗体親和性ペプチド試薬（化合物５６）を得た。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000086
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝３　１５０２　［Ｍ＋３Ｈ］３＋，　Ｚ＝４　１１２６　［Ｍ＋４Ｈ］４＋，　ｚ＝５　９０１　［Ｍ＋５Ｈ］５＋，　ｚ＝６　７５１　［Ｍ＋６Ｈ］６＋
（３－５－３）Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド―ペプチド連結体（化合物５７）の合成
　実施例１で合成した抗体親和性ペプチド（化合物３６）をジメチルスルホキシドに溶解させ、２－イミノチオラン塩酸塩（１０モル当量）、ジイソプロピルエチルアミン（１５モル当量）を加え、１時間攪拌した。原料消失をＬＣ－ＭＳで確認した後、Ｎ－ヒドロキシマレイミド（２０モル当量）のジメチルスルホキシド溶液を加え、１時間攪拌した。反応進行をＬＣ－ＭＳで確認した後、分取ＨＰＬＣにて精製した。目的物を含むフラクションをＥＳＩ－ＭＳで確認した後、凍結乾燥し生成物であるヒドロキシマレイミド－親和性ペプチド体（化合物５７）を得た。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000087
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝２　１１５２　［Ｍ＋２Ｈ］２＋，　Ｚ＝３　７６９　［Ｍ＋３Ｈ］３＋
（３－５－４）マレイミドを搭載した抗体親和性ペプチド試薬の合成　（化合物５８）
　（３－５－２）で得られたＮ－ヒドロキシスクシンイミド－ペプチド連結体（Ｈ１）、４－〔（２，５－ジオキソー２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）メチル〕ベイゾイックアシッド（２０当量）をジメチルスルホキシドに溶解させ、トリエチルアミン（８当量）を加えた。室温で２時間撹拌後、ＬＣ－ＭＳにて反応進行を確認した。分取ＨＰＬＣにて精製、目的物を含むフラクションをＥＳＩ－ＭＳで確認した後、凍結乾燥し目的物であるマレイミドを搭載した抗体親和性ペプチド試薬（化合物５８）を得た。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000088
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝２　１２５９　［Ｍ＋２Ｈ］２＋，　Ｚ＝３　８４０　［Ｍ＋３Ｈ］３＋
［実施例４：抗ＨＥＲ２　ＩｇＧ抗体トラスツズマブへの位置選択的マレイミド導入と解析］
（４－１）チオールを有するペプチド試薬の合成
　下記の化合物２５をＦｍｏｃ法による２－クロロトリチルレジンを用いたペプチド固相合成によって合成した。固相合成後、トリフルオロ酢酸：水：トリイソプロピルシラン＝９５：２．５：２．５の溶液にて１時間攪拌することで樹脂からの切り出しと脱保護を行った。樹脂をフィルトレーションにより除去し、ジエチルエーテルを加え沈殿を行い、ジエチルエーテルをデカンテーションすることで除去し、ペプチドを粗結晶として得た。これを分取ＨＰＬＣにて精製し、生成物である下記化合物２５を得た。化合物２５は、親和性ペプチドではなく、生体直交性官能基であるマレイミドを位置選択的に有する抗体に対して、マレイミド基を介して導入されるべき、薬剤の代わりのモデルペプチド化合物である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000089
ＭＳ　（ＥＳＩ）　ｍ／ｚ：ｚ＝２　１４８２［Ｍ＋２Ｈ］２＋，ｚ＝３　９８８［Ｍ＋３Ｈ］３＋
（４－２）マレイミド－親和性ペプチド試薬によるＩｇＧ抗体トラスツズマブへの位置特異的な修飾
　実施例４の（４－４）で合成したマレイミド－親和性ペプチド試薬（化合物２２，２３，２４）をＮ，Ｎ’－ジメチルホルムアミドに溶解し２．１８ｍＭとした。抗ＨＥＲ２　ＩｇＧ抗体トラスツズマブ（中外製薬）２０．０μｇを５０ｍＭＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ　７．２）１４．８μＬに溶解させ、ペプチド試薬（１０～４０モル当量）を抗体に対して加えて、３７度で４時間攪拌した。反応液を限外濾過（Ａｍｉｃｏｎ　Ｕｌｔｒａ，　１０Ｋ　ＭＷＣＯ））により２０ｍＭ　酢酸緩衝液（ｐＨ４．５）へと溶媒置換した。同操作を３回繰り返すことで親和性ペプチド試薬を取り除き、ＩｇＧ抗体トラスツズマブ－マレイミド修飾体を得た。
（４－３）ＩｇＧ抗体トラスツズマブ－マレイミド修飾体とチオールを有するペプチド試薬とのコンジュゲーション
　実施例５の（５－２）で合成したＩｇＧ抗体トラスツズマブ－マレイミド修飾体を限外濾過（Ａｍｉｃｏｎ　Ｕｌｔｒａ，　１０Ｋ　ＭＷＣＯ）により５０ｍＭＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ　７．２）へ溶媒置換することで、系内のｐＨを中性に戻し、１０ｍｇ／ｍＬに調製した化合物２５水溶液（抗体に対して８０モル当量）を加え、１６時間攪拌した。反応液を限外濾過（Ａｍｉｃｏｎ　Ｕｌｔｒａ，　１０Ｋ　ＭＷＣＯ）により水置換しペプチド試薬を取り除くことで反応を停止させ、ＩｇＧ抗体トラスツズマブ－ペプチド複合体を得た。
（４－４）ＩｇＧ抗体トラスツズマブ－ペプチド複合体のＳＤＳ－ＰＡＧＥによる解析
　（４－３）で得られたＩｇＧ抗体トラスツズマブ－ペプチド複合体のをＳＤＳ－ＰＡＧＥ（Ｍｉｎｉ－ＰＲＯＴＥＡＮ　ＴＧＸ　ｇｅｌ，４～２０％，Ｂｉｏ－ＲＡＤ；還元条件下；Ｃｏｏｍａｓｉｅ　Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ　Ｂｌｕｅ　Ｇ－２５０　Ｓｔａｉｎにより染色）にて分析した結果を、図３に示す。この結果から、マレイミドの位置選択的導入反応（５－２）において化合物２２，２３を用いたときには抗体の修飾反応が進行し、化合物２４を用いた際には進行しないことが分かった。
（４－５）ＩｇＧ抗体トラスツズマブ－マレイミド修飾体の還元条件でのＥＳＩ－ＴＯＦＭＳ解析による重鎖選択性の確認
（４－５－１）ＩｇＧ抗体トラスツズマブ－マレイミド修飾体の合成（１）
　実施例３の（３－５－２）で合成したマレイミドを搭載した親和性ペプチド試薬（化合物５６）をＮ，Ｎ’－ジメチルホルムアミドに溶解し２．０ｍＭとした。抗ＨＥＲ２　ＩｇＧ抗体トラスツズマブ（中外製薬）２５０μｇを５０ｍＭＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ　７．２）２３０μＬに溶解させ、２．０ｍＭのペプチド試薬を抗体に対して２０モル当量加えて、３７度で１６時間攪拌した。限外濾過（Ａｍｉｃｏｎ　Ｕｌｔｒａ，　１０ｋ　ＭＷＣＯ）により濃縮することでＩｇＧ抗体トラスツズマブ－マレイミド修飾体を得た。
（４－５－２）トラスツズマブ－マレイミド修飾体の還元条件でのＥＳＩ－ＴＯＦＭＳ解析による重鎖選択性の確認（１）
　（４－５－１）で合成したトラスツズマブ－マレイミド修飾体に対して７ｍＭトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩溶液２．０μＬ（抗体に対して１００等量）を加えて、室温で２０分放置した。ＥＳＩ－ＴＯＦＭＳにより質量を測定したところ、コントロールとして用いた原料のトラスツズマブは５０５９６，５０７５７に重鎖ピーク、２３４３９に軽鎖ピークが観測された。反応生成物は重鎖にトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィンと反応したマレイミドが導入された５１０６２，５１２２４、および原料と同じ２３４３９に軽鎖ピークが観測された。ＥＳＩ－ＴＯＦＭＳ解析結果を図４に示す。
（４－５－３）ＩｇＧ抗体トラスツズマブ－マレイミド修飾体の合成（２）
　（４－５－１）と同様に実施例３の（３－５－４）で合成したマレイミドを搭載した親和性ペプチド試薬（化合物５８）を用いて、ＩｇＧ抗体トラスツズマブ－アジド修飾体を得た。
（４－５－４）トラスツズマブ－マレイミド修飾体の還元条件でのＥＳＩ－ＴＯＦＭＳ解析による重鎖選択性の確認（２）
　（４－５－２）と同様に処理を行い、ＥＳＩ－ＴＯＦＭＳにより質量を測定したところ、コントロールとして用いた原料のトラスツズマブは５０６０２，５０７６４に重鎖ピーク、２３４４３に軽鎖ピークが観測された。反応生成物は重鎖にＮ－アセチルシステインと反応したマレイミドが導入された５０８１８，５０９７９、および原料と同じ２３４４３に軽鎖ピークが観測された。
［実施例５：アジドを搭載した抗体修飾試薬の合成］
（５－１）抗体修飾基（求電子基）のβ位にヘテロ原子を有する抗体修飾試薬（比較例化合物）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000090
　実施例１で合成した抗体親和性ペプチド（化合物２）をジメチルスルホキシドに溶解させ、Ｎ－ヒドロキシマレイミド（２０モル当量）のジメチルスルホキシド溶液を加え、１時間攪拌した。原料消失をＬＣ－ＭＳで確認した後、１１－アジド－３，６，９－トリオキサウンデカン酸（４０モル当量）、１－エチル―３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（３２モル当量）、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール（３２モル当量）を加え、２時間攪拌した。反応終結をＬＣ－ＭＳで確認した後、分取ＨＰＬＣにて精製した。目的物を含むフラクションをＥＳＩ－ＭＳで確認した後、凍結乾燥し生成物であるアジド－ＰＥＧ－親和性ペプチド試薬（化合物２６）を得た。
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝３　１５０１［Ｍ＋３Ｈ］３＋，ｚ＝４　１１２５［Ｍ＋４Ｈ］４＋
（５－２）抗体修飾基（求電子基）のβ位に炭素原子またはヘテロ原子を有する抗体修飾試薬の合成
（５－２－１）アジド試薬と親和性ペプチドの連結による抗体修飾試薬（化合物２７，５９、６０）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000091
　実施例１で合成した抗体親和性ペプチド（化合物３）をジメチルスルホキシドに溶解させ、Ｎ－ヒドロキシマレイミド（２０モル当量）のジメチルスルホキシド溶液を加え、１時間攪拌した。原料消失をＬＣ－ＭＳで確認した後、６－アジド－ヘキサン酸（４０モル当量）、１－エチル―３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（３２モル当量）、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール（３２モル当量）を加え、２時間攪拌した。反応終結をＬＣ－ＭＳで確認した後、分取ＨＰＬＣにて精製した。目的物を含むフラクションをＥＳＩ－ＭＳで確認した後、凍結乾燥し生成物であるアジド－アルキル－親和性ペプチド試薬（化合物２７）を得た。
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝３　１４７５［Ｍ＋３Ｈ］３＋，ｚ＝４　１１０７［Ｍ＋４Ｈ］４＋
　同様の方法にて、実施例３で合成したＮ－ヒドロキシスクシンイミド―ペプチド連結体（化合物５７）を用い、アジド－アルキル－親和性ペプチド試薬（化合物５９）を得た。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000092
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝２　１２２２　［Ｍ＋２Ｈ］２＋，　Ｚ＝３　８１５　［Ｍ＋３Ｈ］３＋
　６－アジド－ヘキサン酸をアジド酢酸に変えて同様に合成を行い、アジド－アルキル－親和性ペプチド試薬（化合物６０）を得た。なお、化合物６０は、抗体修飾基（求電子基）のβ位にヘテロ原子を有する比較例化合物である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000093
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝２　１１９３　［Ｍ＋２Ｈ］２＋，　Ｚ＝３　７９６　［Ｍ＋３Ｈ］３＋
（５－２－２）アジド試薬と親和性ペプチドの連結による抗体修飾試薬（化合物２８，６１）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000094
　実施例１で合成した抗体親和性ペプチド（化合物３）をジメチルスルホキシドに溶解させ、Ｎ－ヒドロキシマレイミド（２０モル当量）のジメチルスルホキシド溶液を加え、１時間攪拌した。原料消失をＬＣ－ＭＳで確認した後、４－アジド安息香酸（４０モル当量）、１－エチル―３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（３２モル当量）、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール（３２モル当量）を加え、２時間攪拌した。反応終結をＬＣ－ＭＳで確認した後、分取ＨＰＬＣにて精製した。目的物を含むフラクションをＥＳＩ－ＭＳで確認した後、凍結乾燥し生成物であるアジド－フェニル－親和性ペプチド試薬（化合物２８）を得た。
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝３　１４７８［Ｍ＋３Ｈ］３＋，ｚ＝４　１１０８［Ｍ＋４Ｈ］４＋
　同様の方法にて、実施例１で合成した抗体親和性ペプチド（化合物３１）を用い、アジド－フェニル－親和性ペプチド試薬（化合物６１）を得た。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000095
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝３　１３４８　［Ｍ＋３Ｈ］３＋，　Ｚ＝４　１０１１　［Ｍ＋４Ｈ］４＋
（５－２－３）アジド試薬と親和性ペプチドの連結による抗体修飾試薬（化合物２９，６２～８３）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000096
　実施例１で合成した抗体親和性ペプチド（化合物３）をジメチルスルホキシドに溶解させ、２－イミノチオラン塩酸塩（１０モル当量）、ジイソプロピルエチルアミン（１５モル当量）を加え、１時間攪拌した。原料消失をＬＣ－ＭＳで確認した後、Ｎ－ヒドロキシマレイミド（２０モル当量）のジメチルスルホキシド溶液を加え、１時間攪拌した。反応進行をＬＣ－ＭＳで確認した後、４－アジド安息香酸（４０モル当量）、１－エチル―３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（３２モル当量）、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール（３２モル当量）を加え、２時間攪拌した。反応終結をＬＣ－ＭＳで確認した後、分取ＨＰＬＣにて精製した。目的物を含むフラクションをＥＳＩ－ＭＳで確認した後、凍結乾燥し生成物であるアジド－フェニル－親和性ペプチド試薬（化合物２９）を得た。
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝３　１５１２［Ｍ＋３Ｈ］３＋，ｚ＝４　１１３４［Ｍ＋４Ｈ］４＋
　同様の手法にて、実施例１で合成した抗体親和性ペプチド（化合物３２～５３）を用い、下記に示すアジド試薬と親和性ペプチドの連結による抗体修飾試薬を合成した（化合物６２～８３）。
　実施例１で合成した抗体親和性ペプチド（化合物３２）を用いて合成された抗体修飾試薬は、以下である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000097
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝３　１５２１［Ｍ＋３Ｈ］３＋，ｚ＝４　１１４１［Ｍ＋４Ｈ］４＋
　実施例１で合成した抗体親和性ペプチド（化合物３３）を用いて合成された抗体修飾試薬は、以下である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000098
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝３　１５４６　［Ｍ＋３Ｈ］３＋，　Ｚ＝４　１１５９　［Ｍ＋４Ｈ］４＋
　実施例１で合成した抗体親和性ペプチド（化合物３４）を用いて合成された抗体修飾試薬は、以下である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000099
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝３　１５３７　［Ｍ＋３Ｈ］３＋，　Ｚ＝４　１１５３　［Ｍ＋４Ｈ］４＋
　実施例１で合成した抗体親和性ペプチド（化合物３５）を用いて合成された抗体修飾試薬は、以下である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000100
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝３　１５４５　［Ｍ＋３Ｈ］３＋，　Ｚ＝４　１１５９　［Ｍ＋４Ｈ］４＋
　実施例１で合成した抗体親和性ペプチド（化合物３６）を用いて合成された抗体修飾試薬は、以下である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000101
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝２　１２２５［Ｍ＋Ｈ］＋，ｚ＝３　８１７［Ｍ＋Ｈ］＋
　実施例１で合成した抗体親和性ペプチド（化合物３７）を用いて合成された抗体修飾試薬は、以下である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000102
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝２　１２１７　［Ｍ＋２Ｈ］２＋，ｚ＝３　８１２　［Ｍ＋３Ｈ］３＋
　実施例１で合成した抗体親和性ペプチド（化合物３８）を用いて合成された抗体修飾試薬は、以下である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000103
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝２　１２１１　［Ｍ＋２Ｈ］２＋，ｚ＝３　８０７　［Ｍ＋３Ｈ］３＋
　実施例１で合成した抗体親和性ペプチド（化合物３９）を用いて合成された抗体修飾試薬は、以下である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000104
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝２　１１９６　［Ｍ＋２Ｈ］２＋，ｚ＝３　７９８　［Ｍ＋３Ｈ］３＋
　実施例１で合成した抗体親和性ペプチド（化合物４０）を用いて合成された抗体修飾試薬は、以下である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000105
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝２　１２２４　［Ｍ＋２Ｈ］２＋，ｚ＝３　８１７　［Ｍ＋３Ｈ］３＋
　実施例１で合成した抗体親和性ペプチド（化合物４１）を用いて合成された抗体修飾試薬は、以下である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000106
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝２　１２２４　［Ｍ＋２Ｈ］２＋，ｚ＝３　８１７　［Ｍ＋３Ｈ］３＋
　実施例１で合成した抗体親和性ペプチド（化合物４２）を用いて合成された抗体修飾試薬は、以下である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000107
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝２　９６１　［Ｍ＋２Ｈ］２＋
　実施例１で合成した抗体親和性ペプチド（化合物４３）を用いて合成された抗体修飾試薬は、以下である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000108
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝１　１９０９［Ｍ＋Ｈ］＋，ｚ＝３　９５５［Ｍ＋Ｈ］＋
　実施例１で合成した抗体親和性ペプチド（化合物４４）を用いて合成された抗体修飾試薬は、以下である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000109
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝２　１２３９　［Ｍ＋２Ｈ］２＋，ｚ＝３　８２７　［Ｍ＋３Ｈ］３＋
　実施例１で合成した抗体親和性ペプチド（化合物４５）を用いて合成された抗体修飾試薬は、以下である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000110
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝２　１２５３　［Ｍ＋２Ｈ］２＋，ｚ＝３　８３６　［Ｍ＋３Ｈ］３＋
　実施例１で合成した抗体親和性ペプチド（化合物４６）を用いて合成された抗体修飾試薬は、以下である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000111
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝２　１２６０　［Ｍ＋２Ｈ］２＋，ｚ＝３　８４１　［Ｍ＋３Ｈ］３＋
　実施例１で合成した抗体親和性ペプチド（化合物４７）を用いて合成された抗体修飾試薬は、以下である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000112
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝２　１２６５［Ｍ＋Ｈ］＋，ｚ＝３　８４４［Ｍ＋Ｈ］＋
　実施例１で合成した抗体親和性ペプチド（化合物４８）を用いて合成された抗体修飾試薬は、以下である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000113
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝２　１２２５　［Ｍ＋２Ｈ］２＋，ｚ＝３　８１７　［Ｍ＋３Ｈ］３＋
　実施例１で合成した抗体親和性ペプチド（化合物４９）を用いて合成された抗体修飾試薬は、以下である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000114
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝２　８５３　［Ｍ＋２Ｈ］２＋
　実施例１で合成した抗体親和性ペプチド（化合物５０）を用いて合成された抗体修飾試薬は、以下である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000115
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝２　１２３２　［Ｍ＋２Ｈ］２＋，ｚ＝３　８２２　［Ｍ＋３Ｈ］３＋
　実施例１で合成した抗体親和性ペプチド（化合物５１）を用いて合成された抗体修飾試薬は、以下である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000116
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝２　１２５３　［Ｍ＋２Ｈ］２＋，ｚ＝３　８３６　［Ｍ＋３Ｈ］３＋
　実施例１で合成した抗体親和性ペプチド（化合物５２）を用いて合成された抗体修飾試薬は、以下である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000117
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝２　１２５４　［Ｍ＋２Ｈ］２＋，ｚ＝３　８３６　［Ｍ＋３Ｈ］３＋
　実施例１で合成した抗体親和性ペプチド（化合物５３）を用いて合成された抗体修飾試薬は、以下である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000118
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝２　１１４７　［Ｍ＋２Ｈ］２＋，ｚ＝３　７６４　［Ｍ＋３Ｈ］３＋
［実施例６：ＩｇＧ１　Ｆｃ親和性ペプチド試薬によるＩｇＧ１　Ｆｃの位置特異的修飾とＥＳＩ－ＴＯＦＭＳによる解析］
（６－１）抗体修飾基（求電子基）のβ位に炭素原子を有する抗体修飾試薬での抗体修飾反応
（６－１－１）親和性ペプチド試薬（化合物２７、化合物５９）を用いた抗体修飾反応（アジド修飾抗体１，２）
　実施例５で合成したアジドを搭載した親和性ペプチド試薬（化合物２７）をＮ，Ｎ’－ジメチルホルムアミドに溶解し０．２２ｍＭとした。抗ＨＥＲ２　ＩｇＧ抗体トラスツズマブ（中外製薬）２００μｇを５０ｍＭＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ　７．２）１２００μＬに溶解させ、０．２２ｍＭのペプチド試薬を抗体に対して２０モル当量加えて、３７度で１６時間攪拌した。反応液に１０ｍｇ／ｍＬのＬｙｓ水溶液を５０μＬ加え、３０分攪拌することで反応を停止させた。反応混合物をＰｒｏｔｅｉｎ　Ａ（Ａｓｐｉｒｅ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ａ　Ｔｉｐｓ，Ｔｈｅｒｍｏ）にて精製し、溶出液を　９．５７ｍＭ　ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．０）へと置換し限外濾過（Ａｍｉｃｏｎ　Ｕｌｔｒａ，　１０Ｋ　ＭＷＣＯ）により濃縮することでＩｇＧ抗体トラスツズマブ－アジド修飾体（アジド修飾抗体１）を得た。
　同様の手法にて、アジドを搭載した親和性ペプチド試薬（化合物５９）を用いて抗体修飾反応を行いＩｇＧ抗体トラスツズマブ－アジド修飾体（アジド修飾抗体２）を得た。
（６－１－２）親和性ペプチド試薬（化合物２８、化合物６１）を用いた抗体修飾反応（アジド修飾抗体３、４）
　実施例５で合成したアジドを搭載した親和性ペプチド試薬（化合物２８）をＮ，Ｎ’－ジメチルホルムアミドに溶解し０．２２ｍＭとした。抗ＨＥＲ２　ＩｇＧ抗体トラスツズマブ（中外製薬）２００μｇを５０ｍＭＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ　７．２）１２００μＬに溶解させ、０．２２ｍＭのペプチド試薬を抗体に対して２０モル当量加えて、３７度で１６時間攪拌した。反応液に１０ｍｇ／ｍＬのＬｙｓ水溶液を５０μＬ加え、３０分攪拌することで反応を停止させた。反応混合物をＰｒｏｔｅｉｎ　Ａ（Ａｓｐｉｒｅ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ａ　Ｔｉｐｓ，Ｔｈｅｒｍｏ）にて精製し、溶出液を　９．５７ｍＭ　ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．０）へと置換し限外濾過（Ａｍｉｃｏｎ　Ｕｌｔｒａ，　１０Ｋ　ＭＷＣＯ）により濃縮することでＩｇＧ抗体トラスツズマブ－アジド修飾体（アジド修飾抗体３）を得た。
　同様の手法にてアジドを搭載した親和性ペプチド試薬（化合物６１）を用いて抗体修飾反応を行いＩｇＧ抗体トラスツズマブ－アジド修飾体（アジド修飾抗体４）を得た。
（６－１－３）親和性ペプチド試薬（化合物２９、化合物６２～８３）を用いた抗体修飾反応（アジド修飾抗体５～２７）
　実施例５で合成したアジドを搭載した親和性ペプチド試薬（化合物２９）をＮ，Ｎ’－ジメチルホルムアミドに溶解し０．２２ｍＭとした。抗ＨＥＲ２　ＩｇＧ抗体トラスツズマブ（中外製薬）２００μｇを５０ｍＭＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ　７．２）１２００μＬに溶解させ、０．２２ｍＭのペプチド試薬を抗体に対して２０モル当量加えて、３７度で１６時間攪拌した。反応液に１０ｍｇ／ｍＬのＬｙｓ水溶液を５０μＬ加え、３０分攪拌することで反応を停止させた。反応混合物をＰｒｏｔｅｉｎ　Ａ（Ａｓｐｉｒｅ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ａ　Ｔｉｐｓ，Ｔｈｅｒｍｏ）にて精製し、溶出液を　９．５７ｍＭ　ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．０）へと置換し限外濾過（Ａｍｉｃｏｎ　Ｕｌｔｒａ，　１０Ｋ　ＭＷＣＯ）により濃縮することでＩｇＧ抗体トラスツズマブ－アジド修飾体を得た（アジド修飾抗体５）。
　同様の手法にてアジドを搭載した親和性ペプチド試薬（化合物６２）を用いて抗体修飾反応を行いＩｇＧ抗体トラスツズマブ－アジド修飾体（アジド修飾抗体６）を得た。
　同様の手法にてアジドを搭載した親和性ペプチド試薬（化合物６３）を用いて抗体修飾反応を行いＩｇＧ抗体トラスツズマブ－アジド修飾体（アジド修飾抗体７）を得た。
　同様の手法にてアジドを搭載した親和性ペプチド試薬（化合物６４）を用いて抗体修飾反応を行いＩｇＧ抗体トラスツズマブ－アジド修飾体（アジド修飾抗体８）を得た。
　同様の手法にてアジドを搭載した親和性ペプチド試薬（化合物６５）を用いて抗体修飾反応を行いＩｇＧ抗体トラスツズマブ－アジド修飾体（アジド修飾抗体９）を得た。
　同様の手法にてアジドを搭載した親和性ペプチド試薬（化合物６６）を用いて抗体修飾反応を行いＩｇＧ抗体トラスツズマブ－アジド修飾体（アジド修飾抗体１０）を得た。
　同様の手法にてアジドを搭載した親和性ペプチド試薬（化合物６７）を用いて抗体修飾反応を行いＩｇＧ抗体トラスツズマブ－アジド修飾体（アジド修飾抗体１１）を得た。
　同様の手法にてアジドを搭載した親和性ペプチド試薬（化合物６８）を用いて抗体修飾反応を行いＩｇＧ抗体トラスツズマブ－アジド修飾体（アジド修飾抗体１２）を得た。
　同様の手法にてアジドを搭載した親和性ペプチド試薬（化合物６９）を用いて抗体修飾反応を行いＩｇＧ抗体トラスツズマブ－アジド修飾体（アジド修飾抗体１３）を得た。
　同様の手法にてアジドを搭載した親和性ペプチド試薬（化合物７０）を用いて抗体修飾反応を行いＩｇＧ抗体トラスツズマブ－アジド修飾体（アジド修飾抗体１４）を得た。
　同様の手法にてアジドを搭載した親和性ペプチド試薬（化合物７１）を用いて抗体修飾反応を行いＩｇＧ抗体トラスツズマブ－アジド修飾体（アジド修飾抗体１５）を得た。
　同様の手法にてアジドを搭載した親和性ペプチド試薬（化合物７２）を用いて抗体修飾反応を行いＩｇＧ抗体トラスツズマブ－アジド修飾体（アジド修飾抗体１６）を得た。
　同様の手法にてアジドを搭載した親和性ペプチド試薬（化合物７３）を用いて抗体修飾反応を行いＩｇＧ抗体トラスツズマブ－アジド修飾体（アジド修飾抗体１７）を得た。
　同様の手法にてアジドを搭載した親和性ペプチド試薬（化合物７４）を用いて抗体修飾反応を行いＩｇＧ抗体トラスツズマブ－アジド修飾体（アジド修飾抗体１８）を得た。
　同様の手法にてアジドを搭載した親和性ペプチド試薬（化合物７５）を用いて抗体修飾反応を行いＩｇＧ抗体トラスツズマブ－アジド修飾体（アジド修飾抗体１９）を得た。
　同様の手法にてアジドを搭載した親和性ペプチド試薬（化合物７６）を用いて抗体修飾反応を行いＩｇＧ抗体トラスツズマブ－アジド修飾体（アジド修飾抗体２０）を得た。
　同様の手法にてアジドを搭載した親和性ペプチド試薬（化合物７７）を用いて抗体修飾反応を行いＩｇＧ抗体トラスツズマブ－アジド修飾体（アジド修飾抗体２１）を得た。
　同様の手法にてアジドを搭載した親和性ペプチド試薬（化合物７８）を用いて抗体修飾反応を行いＩｇＧ抗体トラスツズマブ－アジド修飾体（アジド修飾抗体２２）を得た。
　同様の手法にてアジドを搭載した親和性ペプチド試薬（化合物７９）を用いて抗体修飾反応を行いＩｇＧ抗体トラスツズマブ－アジド修飾体（アジド修飾抗体２３）を得た。
　同様の手法にてアジドを搭載した親和性ペプチド試薬（化合物８０）を用いて抗体修飾反応を行いＩｇＧ抗体トラスツズマブ－アジド修飾体（アジド修飾抗体２４）を得た。
　同様の手法にてアジドを搭載した親和性ペプチド試薬（化合物Ｆ８１）を用いて抗体修飾反応を行いＩｇＧ抗体トラスツズマブ－アジド修飾体（アジド修飾抗体２５）を得た。
　同様の手法にてアジドを搭載した親和性ペプチド試薬（化合物８２）を用いて抗体修飾反応を行いＩｇＧ抗体トラスツズマブ－アジド修飾体（アジド修飾抗体２６）を得た。
　同様の手法にてアジドを搭載した親和性ペプチド試薬（化合物８３）を用いて抗体修飾反応を行いＩｇＧ抗体トラスツズマブ－アジド修飾体（アジド修飾抗体２７）を得た。
（６－１－４）親和性ペプチド試薬（化合物６６）を用いたトラスツマブ以外の抗体修飾反応（アジド修飾抗体２８～３１）
　実施例５で合成したアジドを搭載した親和性ペプチド試薬（化合物６６）をＮ，Ｎ’－ジメチルホルムアミドに溶解し２．０ｍＭとした。抗ＴＮＦ－α　ＩｇＧ抗体アダリムマブ（エーザイ）２００μｇを５０ｍＭＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ　７．２）１２００μＬに溶解させ、２．０ｍＭのペプチド試薬を抗体に対して２０モル当量加えて、２５度で１６時間攪拌した。反応液に１０ｍｇ／ｍＬのＬｙｓ水溶液を５０μＬ加え、３０分攪拌することで反応を停止させた。反応混合物をＰｒｏｔｅｉｎ　Ａ（Ａｓｐｉｒｅ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ａ　Ｔｉｐｓ，Ｔｈｅｒｍｏ）にて精製し、溶出液を　９．５７ｍＭ　ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．０）へと置換し限外濾過（Ａｍｉｃｏｎ　Ｕｌｔｒａ，　１０Ｋ　ＭＷＣＯ）により濃縮することでＩｇＧ抗体アダリムマブ－アジド修飾体を得た（アジド修飾抗体２８）。
　上記と同様の手法にて、抗ＲＡＮＫＬ　ＩｇＧ抗体デノスマブ（第一三共）を用いて抗体修飾反応を行い、ＩｇＧ抗体デノスマブマブ－アジド修飾体（アジド修飾抗体２９）を得た。
　上記と同様の手法にて、抗ＩＬ－４／１３　ＩｇＧ抗体デュピルマブ（サノフィ）を用いて抗体修飾反応を行い、ＩｇＧ抗体デュピルマブ－アジド修飾体（アジド修飾抗体３０）を得た。
　上記と同様の手法にて、抗ＣＤ２０　ＩｇＧ抗体リツキシマブ（ロッシュ社）を用いて抗体修飾反応を行い、ＩｇＧ抗体リツキシマブ－アジド修飾体（アジド修飾抗体３１）を得た。
（６－２）ＩｇＧ抗体トラスツズマブ－アジド修飾体の還元条件でのＥＳＩ－ＴＯＦＭＳ解析による重鎖選択性の確認
（６－２－１）修飾反応に化合物２７、化合物５９を用いた際のトラスツズマブ－アジド修飾体（アジド修飾抗体１，２）の還元条件でのＥＳＩ－ＴＯＦＭＳ解析による重鎖選択性の確認
　実施例６の（６－１－１）で合成したトラスツズマブ－アジド修飾体（アジド修飾抗体１）に対して７ｍＭトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩溶液２．０μＬ（抗体に対して１００等量）を加えて、室温で２０分放置した。ＥＳＩ－ＴＯＦＭＳにより質量を測定したところ、コントロールとして用いた原料のトラスツズマブは５０５９５，５０７５７に重鎖ピーク、２３４４０に軽鎖ピークが観測された。反応生成物は重鎖にアルキルアジドが導入された５０７３３，５０８９５、および原料と同じ２３４４０に軽鎖ピークが観測された。ＥＳＩ－ＴＯＦＭＳ解析結果を図５に示す。
　同様の手法にて、アジド修飾抗体２についてもＥＳＩ－ＴＯＦ　ＭＳ解析を行った。コントロールとして用いた原料のトラスツズマブは５０６０２，５０７６４に重鎖ピーク、２３４４３に軽鎖ピークが観測された。反応生成物は重鎖にアルキルアジドが導入された５０７４２，５０９０４、および原料と同じ２３４４３に軽鎖ピークが観測された。
（６－２－２）修飾反応に化合物２８、化合物６１を用いた際のトラスツズマブ－アジド修飾体（アジド修飾抗体３、４）の還元条件でのＥＳＩ－ＴＯＦＭＳ解析による重鎖選択性の確認
　実施例６の（６－１－２）で合成したトラスツズマブ－アジド修飾体（アジド修飾抗体３）に対して７ｍＭトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩溶液２．０μＬ（抗体に対して１００等量）を加えて、室温で２０分放置した。ＥＳＩ－ＴＯＦＭＳにより質量を測定したところ、コントロールとして用いた原料のトラスツズマブは５０５９５，５０７５７に重鎖ピーク、２３４４０に軽鎖ピークが観測された。反応生成物は重鎖にアミン安息香酸が導入された５０７１４，５０８７６、および原料と同じ２３４４０に軽鎖ピークが観測された。なお、測定前処理の７ｍＭトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン塩の還元反応により、アジド安息香酸導入体は還元されアミン安息香酸導入体となっている。ＥＳＩ－ＴＯＦＭＳ解析結果を図６に示す。
　同様の手法にて、アジド修飾抗体４についてもＥＳＩ－ＴＯＦ　ＭＳ解析を行った。コントロールとして用いた原料のトラスツズマブは５０５９７，５０７５８に重鎖ピーク、２３４４１に軽鎖ピークが観測された。反応生成物は重鎖にアミン安息香酸が導入された５０７１６，５０８７７、および原料と同じ２３４４１に軽鎖ピークが観測された。
（６－２－３）修飾反応に化合物２９、化合物６２～８３を用いた際のトラスツズマブ－アジド修飾体（アジド修飾抗体５～２７）の還元条件でのＥＳＩ－ＴＯＦＭＳ解析による重鎖選択性の確認
　実施例６の（６－１－３）で合成したトラスツズマブ－アジド修飾体（アジド修飾抗体５）に対して７ｍＭトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩溶液２．０μＬ（抗体に対して１００等量）を加えて、室温で２０分放置した。ＥＳＩ－ＴＯＦＭＳにより質量を測定したところ、コントロールとして用いた原料のトラスツズマブは５０５９５，５０７５７に重鎖ピーク、２３４４０に軽鎖ピークが観測された。反応生成物は重鎖にアミン安息香酸が導入された５０７１４，５０８７６、および原料と同じ２３４４０に軽鎖ピークが観測された。なお、測定前処理でアジド安息香酸導入体は還元されアミン安息香酸導入体となっている。
　同様の手法にて、アジド修飾抗体６についてもＥＳＩ－ＴＯＦ　ＭＳ解析を行った。コントロールとして用いた原料のトラスツズマブは５０５９４，５０７６に重鎖ピーク、２３４３９に軽鎖ピークが観測された。反応生成物は重鎖にアミン安息香酸が導入された５０７１４，５０８７５、および原料と同じ２３４３９に軽鎖ピークが観測された。ＥＳＩ－ＴＯＦＭＳ解析結果を図７に示す。
　同様の手法にて、アジド修飾抗体７についてもＥＳＩ－ＴＯＦ　ＭＳ解析を行った。コントロールとして用いた原料のトラスツズマブは５０５９４，５０７６に重鎖ピーク、２３４３９に軽鎖ピークが観測された。反応生成物は重鎖にアミン安息香酸が導入された５０７１３，５０８７５、および原料と同じ２３４３９に軽鎖ピークが観測された。
　同様の手法にて、アジド修飾抗体８についてもＥＳＩ－ＴＯＦ　ＭＳ解析を行った。コントロールとして用いた原料のトラスツズマブは５０６０２，５０７６４に重鎖ピーク、２３４４３に軽鎖ピークが観測された。反応生成物は重鎖にアミン安息香酸が導入された５０７２１，５０８８３、および原料と同じ２３４４２に軽鎖ピークが観測された。ＥＳＩ－ＴＯＦＭＳ解析結果を図８に示す。
　同様の手法にて、アジド修飾抗体９についてもＥＳＩ－ＴＯＦ　ＭＳ解析を行った。コントロールとして用いた原料のトラスツズマブは５０５９５，５０７５７に重鎖ピーク、２３４４０に軽鎖ピークが観測された。反応生成物は重鎖にアミン安息香酸が導入された５０７１４，５０８７５、および原料と同じ２３４４０に軽鎖ピークが観測された。
　同様の手法にて、アジド修飾抗体１０についてもＥＳＩ－ＴＯＦ　ＭＳ解析を行った。コントロールとして用いた原料のトラスツズマブは５０６０２，５０７６４に重鎖ピーク、２３４４３に軽鎖ピークが観測された。反応生成物は重鎖にアミン安息香酸が導入された５０７２１，５０８８３、および原料と同じ２３４４３に軽鎖ピークが観測された。ＥＳＩ－ＴＯＦＭＳ解析結果を図９に示す。
　同様の手法にて、アジド修飾抗体１１についてもＥＳＩ－ＴＯＦ　ＭＳ解析を行った。コントロールとして用いた原料のトラスツズマブは５０５９５，５０７５７に重鎖ピーク、２３４４０に軽鎖ピークが観測された。反応生成物は重鎖にアミン安息香酸が導入された５０７１３，５０８７４、および原料と同じ２３４４０に軽鎖ピークが観測された。
　同様の手法にて、アジド修飾抗体１２についてもＥＳＩ－ＴＯＦ　ＭＳ解析を行った。コントロールとして用いた原料のトラスツズマブは５０５９５，５０７５７に重鎖ピーク、２３４４０に軽鎖ピークが観測された。反応生成物は重鎖にアミン安息香酸が導入された５０７１４，５０８７６、および原料と同じ２３４４０に軽鎖ピークが観測された。
　同様の手法にて、アジド修飾抗体１３についてもＥＳＩ－ＴＯＦ　ＭＳ解析を行った。コントロールとして用いた原料のトラスツズマブは５０５９４，５０７５６に重鎖ピーク、２３４４０に軽鎖ピークが観測された。反応生成物は重鎖にアミン安息香酸が導入された５０７１４，５０８７６、および原料と同じ２３４４０に軽鎖ピークが観測された。
　同様の手法にて、アジド修飾抗体１４についてもＥＳＩ－ＴＯＦ　ＭＳ解析を行った。コントロールとして用いた原料のトラスツズマブは５０５９４，５０７５６に重鎖ピーク、２３４４０に軽鎖ピークが観測された。反応生成物は重鎖にアミン安息香酸が導入された５０７１４，５０８７６、および原料と同じ２３４４０に軽鎖ピークが観測された。
　同様の手法にて、アジド修飾抗体１５についてもＥＳＩ－ＴＯＦ　ＭＳ解析を行った。コントロールとして用いた原料のトラスツズマブは５０５９４，５０７５６に重鎖ピーク、２３４４０に軽鎖ピークが観測された。反応生成物は重鎖にアミン安息香酸が導入された５０７１４，５０８７６、および原料と同じ２３４４０に軽鎖ピークが観測された。
　同様の手法にて、アジド修飾抗体１６についてもＥＳＩ－ＴＯＦ　ＭＳ解析を行った。コントロールとして用いた原料のトラスツズマブは５０５９４，５０７５６に重鎖ピーク、２３４４０に軽鎖ピークが観測された。反応生成物は重鎖にアミン安息香酸が導入された５０７１４，５０８７５、および原料と同じ２３４４０に軽鎖ピークが観測された。
　同様の手法にて、アジド修飾抗体１７についてもＥＳＩ－ＴＯＦ　ＭＳ解析を行った。コントロールとして用いた原料のトラスツズマブは５０５９５，５０７５７に重鎖ピーク、２３４４０に軽鎖ピークが観測された。反応生成物は重鎖にアミン安息香酸が導入された５０７１４，５０８７６、および原料と同じ２３４４０に軽鎖ピークが観測された。
　同様の手法にて、アジド修飾抗体１８についてもＥＳＩ－ＴＯＦ　ＭＳ解析を行った。コントロールとして用いた原料のトラスツズマブは５０５９４，５０７５６に重鎖ピーク、２３４３９に軽鎖ピークが観測された。反応生成物は重鎖にアミン安息香酸が導入された５０７１４，５０８７６、および原料と同じ２３４４０に軽鎖ピークが観測された。
　同様の手法にて、アジド修飾抗体１９についてもＥＳＩ－ＴＯＦ　ＭＳ解析を行った。コントロールとして用いた原料のトラスツズマブは５０５９５，５０７５７に重鎖ピーク、２３４４０に軽鎖ピークが観測された。反応生成物は重鎖にアミン安息香酸が導入された５０７１４，５０８７５、および原料と同じ２３４４０に軽鎖ピークが観測された。
　同様の手法にて、アジド修飾抗体２０についてもＥＳＩ－ＴＯＦ　ＭＳ解析を行った。コントロールとして用いた原料のトラスツズマブは５０５９５，５０７５７に重鎖ピーク、２３４４０に軽鎖ピークが観測された。反応生成物は重鎖にアミン安息香酸が導入された５０７１４，５０８７５、および原料と同じ２３４４０に軽鎖ピークが観測された。
　同様の手法にて、アジド修飾抗体２１についてもＥＳＩ－ＴＯＦ　ＭＳ解析を行った。コントロールとして用いた原料のトラスツズマブは５０５９５，５０７５７に重鎖ピーク、２３４４０に軽鎖ピークが観測された。反応生成物は重鎖にアミン安息香酸が導入された５０７１４，５０８７６、および原料と同じ２３４４０に軽鎖ピークが観測された。
　同様の手法にて、アジド修飾抗体２２についてもＥＳＩ－ＴＯＦ　ＭＳ解析を行った。コントロールとして用いた原料のトラスツズマブは５０５９５，５０７５７に重鎖ピーク、２３４４０に軽鎖ピークが観測された。反応生成物は重鎖にアミン安息香酸が導入された５０７１４，５０８７５、および原料と同じ２３４４０に軽鎖ピークが観測された。
　同様の手法にて、アジド修飾抗体２３についてもＥＳＩ－ＴＯＦ　ＭＳ解析を行った。コントロールとして用いた原料のトラスツズマブは５０５９７，５０７５９に重鎖ピーク、２３４４０に軽鎖ピークが観測された。反応生成物は重鎖にアミン安息香酸が導入された５０７１４，５０８７６、および原料と同じ２３４４０に軽鎖ピークが観測された。
　同様の手法にて、アジド修飾抗体２４についてもＥＳＩ－ＴＯＦ　ＭＳ解析を行った。コントロールとして用いた原料のトラスツズマブは５０５９７，５０７５９に重鎖ピーク、２３４４０に軽鎖ピークが観測された。反応生成物は重鎖にアミン安息香酸が導入された５０７１４，５０８７６、および原料と同じ２３４４０に軽鎖ピークが観測された。
　同様の手法にて、アジド修飾抗体２５についてもＥＳＩ－ＴＯＦ　ＭＳ解析を行った。コントロールとして用いた原料のトラスツズマブは５０５９７，５０７５９に重鎖ピーク、２３４４０に軽鎖ピークが観測された。反応生成物は重鎖にアミン安息香酸が導入された５０７１４，５０８７６、および原料と同じ２３４４０に軽鎖ピークが観測された。
　同様の手法にて、アジド修飾抗体２６についてもＥＳＩ－ＴＯＦ　ＭＳ解析を行った。コントロールとして用いた原料のトラスツズマブは５０５９７，５０７５９に重鎖ピーク、２３４４０に軽鎖ピークが観測された。反応生成物は重鎖にアミン安息香酸が導入された５０７１４，５０８７６、および原料と同じ２３４４０に軽鎖ピークが観測された。
　同様の手法にて、アジド修飾抗体２７についてもＥＳＩ－ＴＯＦ　ＭＳ解析を行った。コントロールとして用いた原料のトラスツズマブは５０６０２，５０７６４に重鎖ピーク、２３４４３に軽鎖ピークが観測された。反応生成物は重鎖にアミン安息香酸が導入された５０７２１，５０８８３、および原料と同じ２３４４０に軽鎖ピークが観測された。
（６－２－３）修飾反応に化合物５を用いた際の抗体－アジド修飾体（アジド修飾抗体２８～３１）の還元条件でのＥＳＩ－ＴＯＦＭＳ解析による重鎖選択性の確認
　実施例６の（６－１－４）で合成したアダリムマブ－アジド修飾体（アジド修飾抗体２８）に対して７ｍＭトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩溶液２．０μＬ（抗体に対して１００等量）を加えて、室温で２０分放置した。ＥＳＩ－ＴＯＦＭＳにより質量を測定したところ、コントロールとして用いた原料のアダリムマブは５０６４５，５０７６４に重鎖ピーク、２３４１２に軽鎖ピークが観測された。反応生成物は重鎖にアミン安息香酸が導入された５０７６３，５０９２６、および原料と同じ２３４１２に軽鎖ピークが観測された。なお、測定前処理の７ｍＭトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン塩の還元反応により、アジド安息香酸導入体は還元されアミン安息香酸導入体となっている（以下同様）。ＥＳＩ－ＴＯＦＭＳ解析結果を図１０に示す。
　同様の手法にて、アジド修飾抗体２９（デノスマブ―アジド修飾抗体）についてもＥＳＩ－ＴＯＦ　ＭＳ解析を行った。コントロールとして用いた原料のデノスマブは５０２０８，５０３７１に重鎖ピーク、２３４８７に軽鎖ピークが観測された。反応生成物は重鎖にアミン安息香酸が導入された５０３２７，５０４９０、および原料と同じ２３４８７に軽鎖ピークが観測された。ＥＳＩ－ＴＯＦＭＳ解析結果を図１１に示す。
　同様の手法にて、アジド修飾抗体３０（デュピルマブ―アジド修飾抗体）についてもＥＳＩ－ＴＯＦ　ＭＳ解析を行った。コントロールとして用いた原料のデュピルマブは５０８８９に重鎖ピーク、２４０２２に軽鎖ピークが観測された。反応生成物は重鎖にアミン安息香酸が導入された５１００９、および原料と同じ２４０２２に軽鎖ピークが観測された。ＥＳＩ－ＴＯＦＭＳ解析結果を図１２に示す。
　同様の手法にて、アジド修飾抗体３１（リツキシマブ―アジド修飾抗体）についてもＥＳＩ－ＴＯＦ　ＭＳ解析を行った。コントロールとして用いた原料のリツキシマブは５０５１５，５０６７８に重鎖ピーク、２３０４０に軽鎖ピークが観測された。反応生成物は重鎖にアミン安息香酸が導入された５０６３５，５０７９７、および原料と同じ２３０４０に軽鎖ピークが観測された（図１３）。
［比較例１：β位にヘテロ原子を有するペプチド試薬によるＩｇＧ１　Ｆｃの修飾反応とＥＳＩ－ＴＯＦＭＳによる解析］
　実施例５で合成したβ位にヘテロ原子を有するペプチド試薬（化合物２６）をＮ，Ｎ’－ジメチルホルムアミドに溶解し０．２２ｍＭとした。抗ＨＥＲ２　ＩｇＧ抗体トラスツズマブ（中外製薬）２００μｇを５０ｍＭＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ　７．２）１２００μＬに溶解させ、０．２２ｍＭのペプチド試薬を１２０μＬ（抗体に対して２０モル当量）加えて、３７度で１６時間攪拌した。反応液に１０ｍｇ／ｍＬのＬｙｓ水溶液を５０μＬ加え、３０分攪拌することで反応を停止させた。これを限外濾過（Ａｍｉｃｏｎ　Ｕｌｔｒａ，　１０Ｋ　ＭＷＣＯ）によりＰＢＳ溶液へと溶媒置換した後、７ｍＭトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩溶液２．０μＬ（抗体に対して１００等量）を加えて、室温で２０分放置した。ＥＳＩ－ＴＯＦＭＳにより質量を測定したところ、コントロールとして用いた原料のトラスツズマブは５０５９５，５０７５７に重鎖ピーク、２３４４０に軽鎖ピークが観測された。同様に反応生成物も５０５９５，５０７５７に重鎖ピーク、２３４４０に軽鎖ピークが観測され、抗体修飾基（求電子基）のβ位にヘテロ原子を有する化合物２６での抗体修飾反応は進行していないことが確認できた。
　同様にβ位にヘテロ原紙を有するペプチド試薬（化合物６０）を用いて、抗体修飾反応を行った。ＥＳＩ－ＴＯＦＭＳにより質量を測定したところ、コントロールとして用いた原料のトラスツズマブは５０６０２，５０７６４に重鎖ピーク、２３４４３に軽鎖ピークが観測された。同様に反応生成物も５０６０２，５０７６４に重鎖ピーク、２３４４３に軽鎖ピークが観測され、β位にヘテロ原子を有する化合物６０での抗体修飾反応は進行していないことが確認できた。
　この結果から、アジドの位置選択的導入反応（６－２）において化合物２７、２８、２９を用いたときには抗体の修飾反応が進行し、化合物２６を用いた際には進行しないことが分かった。
［実施例７：チオール保護体を搭載した抗体修飾試薬の合成］
（７－１）保護チオール試薬と親和性ペプチドの連結による抗体修飾試薬（化合物８４）の合成
　（３－５－３）で合成したヒドロキシマレイミド－親和性ペプチド体（化合物５７）をジメチルスルホキシド溶媒に溶かし、３－（アセチルチオ）プロピオン酸（４０モル当量）、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（３２モル当量）、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール（３２モル当量）を加え、２時間攪拌した。反応終結をＬＣ－ＭＳで確認した後、分取ＨＰＬＣにて精製した。目的物を含むフラクションをＥＳＩ－ＭＳで確認した後、凍結乾燥し生成物であるアセチルチオール－親和性ペプチド試薬（化合物８４）を得た。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000119
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝２　１２１７　［Ｍ＋２Ｈ］２＋，ｚ＝３　８１２　［Ｍ＋３Ｈ］３＋
（７－２）保護チオール試薬と親和性ペプチドの連結による抗体修飾試薬（化合物８５）の合成
　（３－５－３）で合成したヒドロキシマレイミド－親和性ペプチド体（化合物５７）をジメチルスルホキシド溶媒に溶かし、（Ｓ）－３－（ベンゾイルチオ）－２－メチルプロピオン酸（４０モル当量）、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（３２モル当量）、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール（３２モル当量）を加え、２時間攪拌した。反応終結をＬＣ－ＭＳで確認した後、分取ＨＰＬＣにて精製した。目的物を含むフラクションをＥＳＩ－ＭＳで確認した後、凍結乾燥し生成物であるベンゾイルチオール－親和性ペプチド試薬（化合物８５）を得た。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000120
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝２　１２５５　［Ｍ＋２Ｈ］２＋，ｚ＝３　８３７　［Ｍ＋３Ｈ］３＋
［実施例８：チオール保護体搭載ＩｇＧ１　Ｆｃ親和性ペプチド試薬によるＩｇＧ１　Ｆｃの位置特異的修飾とＥＳＩ－ＴＯＦＭＳによる解析］
（８－１）チオール保護体搭載ＩｇＧ１　Ｆｃ親和性ペプチド試薬での抗体修飾反応
（８－１－１）親和性ペプチド試薬（化合物８４）を用いた抗体修飾反応
　実施例７で合成した保護チオールを搭載した親和性ペプチド試薬（化合物８４）をＮ，Ｎ’－ジメチルホルムアミドに溶解し２．０ｍＭとした。抗ＨＥＲ２　ＩｇＧ抗体トラスツズマブ（中外製薬）２００μｇを５０ｍＭＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ　７．２）２００μＬに溶解させ、２．０ｍＭのペプチド試薬を抗体に対して２０モル当量加えて、２５度で３時間攪拌した。反応液を限外濾過（Ａｍｉｃｏｎ　Ｕｌｔｒａ，　１０ｋ　ＭＷＣＯ）により濃縮することでＩｇＧ抗体トラスツズマブ－保護チオール修飾体を得た。
（８－１－２）親和性ペプチド試薬（化合物８５）を用いた抗体修飾反応
　実施例７で合成した保護チオールを搭載した親和性ペプチド試薬（化合物８５）をＮ，Ｎ’－ジメチルホルムアミドに溶解し２．０ｍＭとした。抗ＨＥＲ２　ＩｇＧ抗体トラスツズマブ（中外製薬）２００μｇを５０ｍＭＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ　７．２）２００μＬに溶解させ、２．０ｍＭのペプチド試薬を抗体に対して２０モル当量加えて、２５度で３時間攪拌した。反応液を限外濾過（Ａｍｉｃｏｎ　Ｕｌｔｒａ，　１０ｋ　ＭＷＣＯ）により濃縮することでＩｇＧ抗体トラスツズマブ－保護チオール修飾体を得た。
（８－２）ＩｇＧ抗体トラスツズマブ－保護チオール修飾体の還元条件でのＥＳＩ－ＴＯＦＭＳ解析による重鎖選択性の確認
（８－２－１）修飾反応に親和性ペプチド試薬（化合物８４）を用いた際のトラスツズマブ－アジド修飾体の還元条件でのＥＳＩ－ＴＯＦＭＳ解析による重鎖選択性の確認
　（８－１－１）で合成したトラスツズマブ－保護チオール修飾体に対して７ｍＭトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩溶液２．０μＬ（抗体に対して１００等量）を加えて、室温で２０分放置した。ＥＳＩ－ＴＯＦＭＳにより質量を測定したところ、コントロールとして用いた原料のトラスツズマブは５０５９４，５０７５６に重鎖ピーク、２３４３９に軽鎖ピークが観測された。反応生成物は重鎖にアセチル保護チオール基が導入された５０７２３，５０８８５、および原料と同じ２３４３９に軽鎖ピークが観測された。ＥＳＩ－ＴＯＦＭＳ解析結果を図１４に示す。
（８－２－２）修飾反応に親和性ペプチド試薬（化合物３）を用いた際のトラスツズマブ－保護チオール体の還元条件でのＥＳＩ－ＴＯＦＭＳ解析による重鎖選択性の確認
　（８－１－２）で合成したトラスツズマブ－保護チオール修飾体に対して７ｍＭトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩溶液２．０μＬ（抗体に対して１００等量）を加えて、室温で２０分放置した。ＥＳＩ－ＴＯＦＭＳにより質量を測定したところ、コントロールとして用いた原料のトラスツズマブは５０５９４，５０７５６に重鎖ピーク、２３４３９に軽鎖ピークが観測された。反応生成物は重鎖にベンゾイル保護チオール基が導入された５０８００，５０９６２、および原料と同じ２３４３９に軽鎖ピークが観測された。
（８－３）ＩｇＧ抗体トラスツズマブ－チオール修飾体の生成確認
（８－３－１）ＩｇＧ抗体トラスツズマブ－アセチル保護チオール修飾体の脱保護
　（８－２－１）で得た、ＩｇＧ抗体抗体トラスツズマブ－アセチル保護チオール修飾体を２０ｍＭエチレンジアミン、０．５Ｍヒドロキシルアミン水溶液（ｐＨ６調製品）に置換し、室温で１時間静置した。反応液を限外濾過（Ａｍｉｃｏｎ　Ｕｌｔｒａ，　１０ｋ　ＭＷＣＯ）により濃縮することでＩｇＧ抗体トラスツズマブ－チオール修飾体を得た。
（８－３－２）ＥＳＩ－ＴＯＦＭＳ解析によるＩｇＧ抗体トラスツズマブ－チオール修飾体の生成確認
　（８－３－１）で脱保護したトラスツズマブ－チオール修飾体に対して７ｍＭトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩溶液２．０μＬ（抗体に対して１００等量）を加えて、室温で２０分放置した。ＥＳＩ－ＴＯＦＭＳにより質量を測定したところ、反応生成物は重鎖にアセチル基が脱保護された５０６８１，５０８４４が観測され、アセチル基が外れてチオールとなっていることを確認できた。ＥＳＩ－ＴＯＦＭＳ解析結果を図１５に示す。
（８－３－３）ＩｇＧ抗体トラスツズマブ－ベンゾイル保護チオール修飾体の脱保護
　（８－２－２）で得た、ＩｇＧ抗体抗体トラスツズマブ－ベンゾイル保護チオール修飾体を２０ｍＭエチレンジアミン、０．５Ｍヒドロキシルアミン水溶液（ｐＨ６調製品）に置換し、室温で１時間静置した。反応液を限外濾過（Ａｍｉｃｏｎ　Ｕｌｔｒａ，　１０ｋ　ＭＷＣＯ）により濃縮することでそれぞれのＩｇＧ抗体トラスツズマブ－チオール修飾体を得た。
（８－３－４）ＥＳＩ－ＴＯＦＭＳ解析によるＩｇＧ抗体トラスツズマブ－チオール修飾体の生成確認
　（８－３－３）で脱保護したトラスツズマブ－チオール修飾体に対して７ｍＭトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩溶液２．０μＬ（抗体に対して１００等量）を加えて、室温で２０分放置した。ＥＳＩ－ＴＯＦＭＳにより質量を測定したところ、反応生成物は重鎖にベンゾイル基が脱保護された５０６９６，５０８５８が観測されベンゾイル基が外れてチオールとなっていることを確認できた。
［実施例９：ＩｇＧ１　Ｆｃ親和性ペプチド試薬によるＩｇＧ１　Ｆｃの異なる複数標的領域の位置選択的修飾とＥＳＩ－ＴＯＦＭＳによる解析］
（９－１）２種類の親和性ペプチド試薬を段階的に用いた異なる複数標的領域の位置選択的修飾ＥＳＩ－ＴＯＦＭＳによる解析
（９－１－１）２種類の親和性ペプチド試薬（化合物６６、化合物６４）を段階的に用いた複数個所位置特異的抗体修飾反応
　実施例５で合成したアジドを搭載した親和性ペプチド試薬（化合物６６）をＮ，Ｎ’－ジメチルホルムアミドに溶解し２．０４ｍＭとした。抗ＨＥＲ２　ＩｇＧ抗体トラスツズマブ（中外製薬）３００μｇを５０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ　４．７）３００μＬに溶解させ、２．０４ｍＭのペプチド試薬を抗体に対して２０モル当量加えて、２５度で３時間攪拌した。限外濾過（Ａｍｉｃｏｎ　Ｕｌｔｒａ，　１０ｋ　ＭＷＣＯ）によりペプチド試薬残渣を除去し、得られた濃縮液を５０ｍＭＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ　７．２）２００μＬにて希釈した。ここに、実施例５で合成したアジドを搭載した親和性ペプチド試薬（化合物６４）の２．０ｍＭＮ，Ｎ’－ジメチルホルムアミド溶液を抗体に対して２０モル当量加えて、３７度で１６時間攪拌した。反応液に１０ｍｇ／ｍＬのＬｙｓ水溶液を５０μＬ加え、３０分攪拌することで反応を停止させた。限外濾過（Ａｍｉｃｏｎ　Ｕｌｔｒａ，　１０ｋ　ＭＷＣＯ）により濃縮することでＩｇＧ抗体トラスツズマブ－アジド修飾体を得た。
（９－１－２）ＩｇＧ抗体トラスツズマブ－アジド修飾体の還元条件でのＥＳＩ－ＴＯＦＭＳ解析による重鎖選択性の確認
　実施例９の（９－１－１）で合成したトラスツズマブ－アジド修飾体に対して７ｍＭトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩溶液２．０μＬ（抗体に対して１００等量）を加えて、室温で２０分放置した。ＥＳＩ－ＴＯＦＭＳにより質量を測定したところ、コントロールとして用いた原料のトラスツズマブは５０６０２，５０７６４に重鎖ピーク、２３４４３に軽鎖ピークが観測された。反応生成物は重鎖に二つアミン安息香酸が導入された５０８４１，５１００２が観測された。軽鎖ピークは原料と同じ２３４４３が観測された。なお、測定前処理でアジド安息香酸導入体は還元されアミン安息香酸導入体となっている。ＥＳＩ－ＴＯＦＭＳ解析結果を図１６に示す。
（９－１－３）２種類の親和性ペプチド試薬（化合物６４、化合物６６）を段階的に用いた異なる複数標的領域の位置選択的修飾反応
　実施例５で合成したアジドを搭載した親和性ペプチド試薬（化合物６４）をＮ，Ｎ’－ジメチルホルムアミドに溶解し２．０ｍＭとした。抗ＨＥＲ２　ＩｇＧ抗体トラスツズマブ（中外製薬）３００μｇを５０ｍＭＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ　７．２）３００μＬに溶解させ、２．０ｍＭのペプチド試薬を抗体に対して２０モル当量加えて、３７度で１６時間攪拌した。限外濾過（Ａｍｉｃｏｎ　Ｕｌｔｒａ，　１０ｋ　ＭＷＣＯ）によりペプチド試薬残渣を除去し、得られた濃縮液を５０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ　４．７）２００μＬにて希釈した。ここに、実施例５で合成したアジドを搭載した親和性ペプチド試薬（化合物６６）の２．０４ｍＭＮ，Ｎ’－ジメチルホルムアミド溶液を抗体に対して２０モル当量加えて、３７度で１６時間攪拌した。反応液に１０ｍｇ／ｍＬのＬｙｓ水溶液を５０μＬ加え、３０分攪拌することで反応を停止させた。限外濾過（Ａｍｉｃｏｎ　Ｕｌｔｒａ，　１０ｋ　ＭＷＣＯ）により濃縮することでＩｇＧ抗体トラスツズマブ－アジド修飾体を得た。
（９－１－４）ＩｇＧ抗体トラスツズマブ－アジド修飾体の還元条件でのＥＳＩ－ＴＯＦＭＳ解析による重鎖選択性の確認
　実施例９の（９－１－２）と同様の方法にてＥＳＩ－ＴＯＦＭＳにより質量を測定した。コントロールとして用いた原料のトラスツズマブは５０６０２，５０７６４に重鎖ピーク、２３４４３に軽鎖ピークが観測された。反応生成物は重鎖に二つアミン安息香酸が導入された５０８４０，５１００２が観測された。軽鎖ピークは原料と同じ２３４４３が観測された。なお、測定前処理でアジド安息香酸導入体は還元されアミン安息香酸導入体となっている。
（９－１－５）２種類の親和性ペプチド試薬（化合物８４，化合物６４）を段階的に用いた複数個所位置特異的抗体修飾反応
　実施例７で合成したチオール保護体を搭載した親和性ペプチド試薬（化合物８４）をＮ，Ｎ’－ジメチルホルムアミドに溶解し２．０４ｍＭとした。抗ＨＥＲ２　ＩｇＧ抗体トラスツズマブ（中外製薬）３００μｇを５０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ　４．７）３００μＬに溶解させ、２．０４ｍＭのペプチド試薬を抗体に対して２０モル当量加えて、２５度で３時間攪拌した。限外濾過（Ａｍｉｃｏｎ　Ｕｌｔｒａ，　１０ｋ　ＭＷＣＯ）によりペプチド試薬残渣を除去し、得られた濃縮液を５０ｍＭＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ　７．２）２００μＬにて希釈した。ここに、実施例５で合成したアジドを搭載した親和性ペプチド試薬（化合物６４）の２．０ｍＭＮ，Ｎ’－ジメチルホルムアミド溶液を抗体に対して２０モル当量加えて、３７度で１６時間攪拌した。反応液に１０ｍｇ／ｍＬのＬｙｓ水溶液を５０μＬ加え、３０分攪拌することで反応を停止させた。限外濾過（Ａｍｉｃｏｎ　Ｕｌｔｒａ，　１０ｋ　ＭＷＣＯ）により濃縮することでＩｇＧ抗体トラスツズマブ－アジド修飾体を得た。
（９－１－６）ＩｇＧ抗体トラスツズマブ－アジドーチオール修飾体の還元条件でのＥＳＩ－ＴＯＦＭＳ解析による重鎖選択性の確認
　（９－１－５）で合成したＩｇＧ抗体トラスツズマブ－アジド修飾体について、実施例９の（９－１－２）と同様の方法にてＥＳＩ－ＴＯＦＭＳにより質量を測定した。コントロールとして用いた原料のトラスツズマブは５０５９７，５０７５７に重鎖ピーク、２３４３９に軽鎖ピークが観測された。反応生成物は重鎖にアミン安息香酸とアセチル保護チオール基が導入された５０８４３，５１００５が観測された。軽鎖ピークは原料と同じ２３４４３が観測された。なお、測定前処理でアジド安息香酸導入体は還元されアミン安息香酸導入体となっている。ＥＳＩ－ＴＯＦＭＳ解析結果を図１７に示す。
（９－２）複数誘導化部位を持つ親和性ペプチドを用いた異なる複数標的領域の位置選択的修飾とＥＳＩ－ＴＯＦＭＳによる解析
（９－２－１）複数誘導化部位を持つ親和性ペプチド（化合物８６）の合成
　実施例１で合成した抗体親和性ペプチド（化合物５４）をジメチルスルホキシドに溶解させ、２－イミノチオラン塩酸塩（１０モル当量）、ジイソプロピルエチルアミン（１５モル当量）を加え、１時間攪拌した。原料消失をＬＣ－ＭＳで確認した後、Ｎ－ヒドロキシマレイミド（２０モル当量）のジメチルスルホキシド溶液を加え、１時間攪拌した。反応進行をＬＣ－ＭＳで確認した後、４－アジド安息香酸（４０モル当量）、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（３２モル当量）、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール（３２モル当量）を加え、２時間攪拌した。反応終結をＬＣ－ＭＳで確認した後、分取ＨＰＬＣにて精製した。目的物を含むフラクションをＥＳＩ－ＭＳで確認した後、凍結乾燥し生成物であるジ（アジド－フェニル）－親和性ペプチド試薬（化合物８６）を得た。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000121
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝３　１５８７　［Ｍ＋３Ｈ］３＋，　３　１１９１　［Ｍ＋４Ｈ］４＋
（９－２－２）複数誘導化部位を持つ親和性ペプチドを用いた複数個所位置特異的抗体修飾反応
　実施例９の（９－２－１）で合成したジ（アジド－フェニル）－親和性ペプチド試薬（化合物８６）をＮ，Ｎ’－ジメチルホルムアミドに溶解し２．０ｍＭとした。抗ＨＥＲ２　ＩｇＧ抗体トラスツズマブ（中外製薬）２５０μｇを５０ｍＭＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ　７．２）２５０μＬに溶解させ、２．０ｍＭのペプチド試薬を抗体に対して２０モル当量加えて、２５度で３時間攪拌した。反応液を限外濾過（Ａｍｉｃｏｎ　Ｕｌｔｒａ，　１０ｋ　ＭＷＣＯ）により濃縮することでＩｇＧ抗体トラスツズマブ－アジド修飾体を得た。
（９－２－３）ＩｇＧ抗体トラスツズマブ－アジド修飾体の還元条件でのＥＳＩ－ＴＯＦＭＳ解析による重鎖選択性の確認
　実施例９の（９－２－２）で合成したトラスツズマブ－アジド修飾体に対して７ｍＭトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩溶液２．０μＬ（抗体に対して１００等量）を加えて、室温で２０分放置した。ＥＳＩ－ＴＯＦＭＳにより質量を測定したところ、コントロールとして用いた原料のトラスツズマブは５０６０２，５０７６４に重鎖ピーク、２３４４３に軽鎖ピークが観測された。反応生成物は重鎖に二つアミン安息香酸が導入された５０８４１，５１００３が観測された。軽鎖ピークは原料と同じ２３４４３が観測された。なお、測定前処理でアジド安息香酸導入体は還元されアミン安息香酸導入体となっている。ＥＳＩ－ＴＯＦＭＳ解析結果を図１８に示す。
［実施例１０：トラスツズマブの位置特異的アジド導入体と任意の化合物とのコンジュゲーションおよび生成物のＥＳＩ－ＴＯＦＭＳ解析］
（１０－１）トラスツズマブの位置特異的アジド導入体とＣｙ３－シクロアルキンとのコンジュゲーション
（１０－１－１）トラスツズマブの位置特異的アジド導入体とＣｙ３－ＤＢＣＯとのコンジュゲーションおよびＥＳＩ－ＴＯＦＭＳ解析
　実施例６の（６－１－２）で合成したトラスツズマブのアジド安息香酸導入体を２０ｍＭ　ＰＢＳ緩衝液に溶解し０．３ｍＭとした後、Ｓｉｇｍａ　Ａｌｄｒｉｃｈ製　Ｄｉｂｅｎｚｏｃｙｃｌｏｏｃｔｙｎｅ－Ｃｙ３（０．９４ｍＭ、ジメチルスルホキシドに溶解）を２０μＬ添加し、室温で１２時間攪拌した。反応液を限外濾過（Ａｍｉｃｏｎ　Ｕｌｔｒａ，　１０Ｋ　ＭＷＣＯ）により水置換し反応を停止した。ＥＳＩ－ＴＯＦＭＳにより質量を測定したところ、トラスツズマブは１４８０６０にピークが観測され、（６－１－２）で合成したトラスツズマブのアジド導入体は１４８４８９にピークが観測され、反応生成物はＣｙ３が２つ導入された１５０４８７にピークが観測された（図１９）。
（１０－１－２）還元条件でのＥＳＩ－ＴＯＦＭＳ解析
　（１０－１－１）で合成したトラスツズマブ－Ｃｙ３複合体のＰＢＳ溶液に７ｍＭトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩溶液２μＬ（トラスツズマブ－Ｃｙ３複合体に対して１００等量）を加えて、室温で２０分攪拌した。ＥＳＩ－ＴＯＦＭＳにより質量を測定したところ、原料である実施例６の（６－１－１）で合成したトラスツズマブのアジド導入体は５０７１４および５０８７６に重鎖ピーク、２３４４０に軽鎖ピークが観測され、トラスツズマブ－Ｃｙ３複合体は重鎖にＣｙ３が導入された５１７２２および５１８８５にピークが観察され、原料と同じ２３４４０に軽鎖ピークが観測された（図２０）。なお、測定前処理の７ｍＭトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン塩の還元反応により、アジド安息香酸導入体は還元されアミン安息香酸導入体となっている。
（１０－２）トラスツズマブの位置特異的アジド導入体とペプチド－シクロアルキンとのコンジュゲーション
（１０－２－１）ペプチド－シクロアルキンの合成
　下記の化合物３０のペプチド部分をＦｍｏｃ法による２－クロロトリチルレジンを用いたペプチド固相合成によって合成した。固相合成後、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール（２モル当量）、１－エチル―３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩　（２モル当量）、トリエチルアミン（２モル当量）、５－（５，６－ジヒドロ－１１，１２－ジデヒドロジベンゾ［ｂ，ｆ］［ｂ，ｆ］アゾシン－５（６Ｈ）－イル）－オキソペンタン酸（２．２モル当量）を随時添加し、１９時間攪拌した。トリフルオロ酢酸：水：トリイソプロピルシラン＝９５：２．５：２．５の溶液にて１時間攪拌することで樹脂からの切り出しと脱保護を行い、切り出し後のろ液にはトリエチルアミンを加え中和した。樹脂をフィルトレーションにより除去し、ジエチルエーテルを加え沈殿を行い、ジエチルエーテルをデカンテーションすることで除去し、ペプチドを粗結晶として得た。これを分取ＨＰＬＣにて精製し、生成物である下記化合物３０を得た。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000122
ＭＳ　（ＥＳＩ）　ｍ／ｚ：１２００［Ｍ＋Ｈ］＋
（１０－２－２）トラスツズマブの位置特異的アジド導入体とペプチド－シクロアルキンとのコンジュゲーションおよびＥＳＩ－ＴＯＦＭＳ解析
　実施例６の（６－１－２）で合成したトラスツズマブのアジド安息香酸導入体を２０ｍＭ　ＰＢＳ緩衝液に溶解し０．３ｍＭとした後、実施例７の（７－２－１）で合成したペプチド－シクロアルキン（化合物２９）０．９４ｍＭ水溶液を２０μＬ添加し、室温で１２時間攪拌した。反応液を限外濾過（Ａｍｉｃｏｎ　Ｕｌｔｒａ，　１０Ｋ　ＭＷＣＯ）により水置換し反応を停止した。ＥＳＩ－ＴＯＦＭＳにより質量を測定したところ、トラスツズマブは１４８０６０にピークが観測され、（６－１－２）で合成したトラスツズマブのアジド導入体は１４８４８９にピークが観測され、反応生成物はペプチドが２つ導入された１５０９１２にピークが観測された（図２１）。
（１０－２－３）還元条件でのＥＳＩ－ＴＯＦＭＳ解析
（１０－２－２）で合成したトラスツズマブ－ペプチド複合体のＰＢＳ溶液に７ｍＭトリス　（２－カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩溶液２μＬ（トラスツズマブ－ペプチド複合体に対して１００等量）を加えて、室温で２０分攪拌した。ＥＳＩ－ＴＯＦＭＳにより質量を測定したところ、原料である実施例６の（６－１－１）で合成したトラスツズマブのアジド導入体は５０７１４および５０８７６に重鎖ピーク、２３４４０に軽鎖ピークが観測され、トラスツズマブ－ペプチド複合体は重鎖にペプチドが導入された５１９４１および５２１０２にピークが観察され、原料と同じ２３４４０に軽鎖ピークが観測された（図２２）。なお、測定前処理の７ｍＭトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン塩の還元反応により、アジド安息香酸導入体は還元されアミン安息香酸導入体となっている。
（１０－３）トラスツズマブの位置特異的チオール導入体とマレイミド化合物とのコンジュゲーションおよびＥＳＩ－ＴＯＦＭＳ解析
（１０－３－１）トラスツズマブの位置特異的チオール導入体とマレイミド化合物とのコンジュゲーションおよびＥＳＩ－ＴＯＦＭＳ解析
　実施例８の（８－３－１）で合成したトラスツズマブのチオール導入体を２０ｍＭ　ＰＢＳ緩衝液に溶解し０．３ｍＭとした後、ｍ－ｄＰＥＧ（登録商標）２４－ＭＡＬを５モル当量添加し、室温で１２時間攪拌した。反応液を限外濾過（Ａｍｉｃｏｎ　Ｕｌｔｒａ，　１０ｋ　ＭＷＣＯ）により処理した。ＥＳＩ－ＴＯＦＭＳにより質量を測定したところ、トラスツズマブは１４８２２にピークが観測され、（８－３－３）で合成したトラスツズマブのチオール導入体は１４８２４３にピークが観測され、反応生成物はｍ－ｄＰＥＧ（登録商標）２４－ＭＡＬが二つ導入された１５０８８０にピークが観測された（図２３）。
（１０－３－２）還元条件でのＥＳＩ－ＴＯＦＭＳ解析
　（１０－３－１）で合成したトラスツズマブ－ペグ複合体のＰＢＳ溶液に７ｍＭトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩溶液２μＬ（トラスツズマブ－ペグ複合体に対して１００等量）を加えて、室温で２０分攪拌した。ＥＳＩ－ＴＯＦＭＳにより質量を測定したところ、原料である実施例８の（８－３－３）で合成したトラスツズマブのチオール導入体は５０６８２および５０８４４に重鎖ピーク、２３４４９に軽鎖ピークが観測され、反応生成物は重鎖にｍ－ｄＰＥＧ（登録商標）２４－ＭＡＬが導入された５１９２２および５２０８３にピークが観察され、原料と同じ２３４４９に軽鎖ピークが観測された（図２４）。
［実施例１１：トラスツズマブの生体直交性官能基導入体の位置特異的修飾の確認］
（１１－１）トラスツズマブの生体直交性官能基導入体の糖鎖切断
（１１－１－１）トラスツズマブのアジド安息香酸導入体の糖鎖切断（１）
　実施例６の（６－１－２）で合成したトラスツズマブのアジド安息香酸導入体（アジド修飾抗体３）をＰＮＧａｓｅ　Ｆ（ＮＥＷ　ＥＮＧＬＡＮＤ　ＢｉｏＬａｂｓ，カタログ番号Ｐ０７０４）を用い、製造者プロトコルおよび特許（ＷＯ２０１７／１９１８１７の手法に従い、糖鎖の切断と後処理を行った。
（１１－１－２）トラスツズマブのアジド安息香酸導入体の糖鎖切断（２）
　実施例６の（６－１－３）で合成したトラスツズマブのアジド安息香酸導入体（アジド修飾抗体５）をＰＮＧａｓｅ　Ｆ（ＮＥＷ　ＥＮＧＬＡＮＤ　ＢｉｏＬａｂｓ，カタログ番号Ｐ０７０４）を用い、製造者プロトコルおよび特許（ＷＯ２０１７／１９１８１７）の手法に従い、糖鎖の切断と後処理を行った。
（１１－１－３）トラスツズマブのマレイミド導入体の糖鎖切断（３）（Ｋ２４６／２４８）
　実施例４の（４－５－１）で合成したトラスツズマブのマレイミド導入体を３－メルカプトプロピオン酸（２０モル当量）存在下、ＰＮＧａｓｅ　Ｆ（ＮＥＷ　ＥＮＧＬＡＮＤ　ＢｉｏＬａｂｓ，カタログ番号Ｐ０７０４）を用い、製造者プロトコルおよび特許（ＷＯ２０１７／１９１８１７５７）の手法に従い、糖鎖の切断と後処理を行った。
（１１－１－４）トラスツズマブのアルキルアジド導入体の糖鎖切断（４）（Ｋ２４６／２４８）
　実施例６の（６－１－１）で合成したトラスツズマブのアルキルアジド導入体（アジド修飾抗体２）をＰＮＧａｓｅ　Ｆ（ＮＥＷ　ＥＮＧＬＡＮＤ　ＢｉｏＬａｂｓ，カタログ番号Ｐ０７０４）を用い、製造者プロトコルおよび特許（ＷＯ２０１７／１９１８１７５７）の手法に従い、糖鎖の切断と後処理を行った。
（１１－１－５）トラスツズマブのアジド安息香酸導入体の糖鎖切断（５）（Ｋ３１７）
　実施例６の（６－１－３）で合成したトラスツズマブのアジド安息香酸導入体（アジド修飾抗体６）をＰＮＧａｓｅ　Ｆ（ＮＥＷ　ＥＮＧＬＡＮＤ　ＢｉｏＬａｂｓ，カタログ番号Ｐ０７０４）を用い、製造者プロトコルおよび特許（ＷＯ２０１７／１９１８１７５７）の手法に従い、糖鎖の切断と後処理を行った。
（１１－１－６）トラスツズマブのアジド安息香酸導入体の糖鎖切断（６）（Ｋ２８８／２９０）
　実施例６の（６－１－３）で合成したトラスツズマブのアジド安息香酸導入体（アジド修飾抗体８）をＰＮＧａｓｅ　Ｆ（ＮＥＷ　ＥＮＧＬＡＮＤ　ＢｉｏＬａｂｓ，カタログ番号Ｐ０７０４）を用い、製造者プロトコルおよび特許（ＷＯ２０１７／１９１８１７５７）の手法に従い、糖鎖の切断と後処理を行った。
（１１－１－７）トラスツズマブのアジド安息香酸導入体の糖鎖切断（７）（Ｋ２４６／２４８）
　実施例６の（６－１－３）で合成したトラスツズマブのアジド安息香酸導入体（アジド修飾抗体１０）をＰＮＧａｓｅ　Ｆ（ＮＥＷ　ＥＮＧＬＡＮＤ　ＢｉｏＬａｂｓ，カタログ番号Ｐ０７０４）を用い、製造者プロトコルおよび特許（ＷＯ２０１７／１９１８１７５７）の手法に従い、糖鎖の切断と後処理を行った。
（１１－１－８）トラスツズマブのアセチル保護チオール導入体の糖鎖切断（８）（Ｋ２４６／２４８）
　実施例８の（８－１－３）で合成したトラスツズマブのアセチル保護チオール導入体をＰＮＧａｓｅ　Ｆ（ＮＥＷ　ＥＮＧＬＡＮＤ　ＢｉｏＬａｂｓ，カタログ番号Ｐ０７０４）を用い、製造者プロトコルおよび特許（ＷＯ２０１７／１９１８１７５７）の手法に従い、糖鎖の切断と後処理を行った。
（１１－１－９）トラスツズマブのアジド安息香酸複数標的領域導入体の糖鎖切断（９）
　実施例９の（９－１－３）で合成したトラスツズマブのアジド安息香酸複数標的領域導入体をＰＮＧａｓｅ　Ｆ（ＮＥＷ　ＥＮＧＬＡＮＤ　ＢｉｏＬａｂｓ，カタログ番号Ｐ０７０４）を用い、製造者プロトコルおよび特許（ＷＯ２０１７／１９１８１７５７）の手法に従い、糖鎖の切断と後処理を行った。
（１１－１－１０）トラスツズマブのアジドーチオール複数標的領域導入体の糖鎖切断（１０）
　実施例９の（９－１－４）で合成したトラスツズマブのアジドーチオール複数標的領域導入体をＰＮＧａｓｅ　Ｆ（ＮＥＷ　ＥＮＧＬＡＮＤ　ＢｉｏＬａｂｓ，カタログ番号Ｐ０７０４）を用い、製造者プロトコルおよび特許（ＷＯ２０１７／１９１８１７５７）の手法に従い、糖鎖の切断と後処理を行った。
（１１－１－１１）デノスマブのアジド安息香酸複数標的領域導入体の糖鎖切断（１１）
　実施例６の（６－１－４）で合成したデノスマブのアジド安息香酸導入体（アジド修飾抗体２９）をＰＮＧａｓｅ　Ｆ（ＮＥＷ　ＥＮＧＬＡＮＤ　ＢｉｏＬａｂｓ，カタログ番号Ｐ０７０４）を用い、製造者プロトコルおよび特許（ＷＯ２０１７／１９１８１７５７）の手法に従い、糖鎖の切断と後処理を行った。
（１１－１－１２）デュピルマブのアジド安息香酸複数標的領域導入体の糖鎖切断（１２）
　実施例６の（６－１－４）で合成したデュピルマブのアジド安息香酸導入体（アジド修飾抗体３０）をＰＮＧａｓｅ　Ｆ（ＮＥＷ　ＥＮＧＬＡＮＤ　ＢｉｏＬａｂｓ，カタログ番号Ｐ０７０４）を用い、製造者プロトコルおよび特許（ＷＯ２０１７／１９１８１７５７）の手法に従い、糖鎖の切断と後処理を行った。
（１１－２）トラスツズマブのアジド安息香酸導入体のトリプシン処理
（１１－２－１）トラスツズマブのアジド安息香酸導入体の糖鎖切断物のトリプシン処理（１）
　１．５ｍＬ低吸着マイクロテストチューブに（１１－１－１）で得たトラスツズマブのアジド安息香酸導入体の糖鎖切断物のサンプル溶液を３．４μＬ、５０ｍＭ炭酸水素アンモニウム緩衝液を６．６μＬ添加して計１０μＬとし、５０ｍＭ炭酸水素アンモニウム緩衝液、２０％トリフルオロエタノールに溶解した２０ｍＭのジチオスレイトール水溶液１０μＬを加えて６５℃で１時間加温後、５０ｍＭのヨードアセトアミド水溶液１０μＬを添加し、遮光下室温にて３０分間３００ｒｐｍで振盪し反応させた。反応後、５０ｍＭ炭酸水素アンモニウム緩衝液を４０μＬ加えて撹拌し、２０ｎｇ／μＬのトリプシン水溶液を１０μＬ添加して３７℃で１８時間酵素消化した。消化後、２０％トリフルオロ酢酸水溶液を２μＬ添加し反応を止めた。その後、５０ｍＭ炭酸水素アンモニウム緩衝液、０．５％トリフルオロ酢酸を用いて１０倍希釈し、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ測定に使用した。
（１１－２－２）トラスツズマブのアジド安息香酸導入体の糖鎖切断物のトリプシン処理（２）
　１．５ｍＬ低吸着マイクロテストチューブに（１１－１－２）で得たトラスツズマブのアジド安息香酸導入体の糖鎖切断物のサンプル溶液を１０μＬ、５０ｍＭ炭酸水素アンモニウム緩衝液、２０％トリフルオロエタノールに溶解した２０ｍＭのジチオスレイトール水溶液１０μＬを加えて６５℃で１時間加温後、５０ｍＭのヨードアセトアミド水溶液１０μＬを添加し、遮光下室温で３０分間３００ｒｐｍで振盪し反応させた。反応後、５０ｍＭ炭酸水素アンモニウム緩衝液を４０μＬ加えて撹拌し、２０ｎｇ／μＬのトリプシン水溶液を１０μＬ添加して３７℃で１８時間酵素消化した。消化後、２０％トリフルオロ酢酸水溶液を２μＬ添加し反応を止めた。その後、５０ｍＭ炭酸水素アンモニウム緩衝液、０．５％トリフルオロ酢酸を用いて１０倍希釈し、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ測定に使用した。
（１１－２－３）トラスツズマブのマレイミド導入体の糖鎖切断物のトリプシン処理（３）
　１．５ｍＬ低吸着マイクロテストチューブに（１１－１－３）で得たトラスツズマブのマレイミド導入体の糖鎖切断物のサンプル溶液を１０μＬ加え、１１－２－１と同様の処理を行いＬＣ－ＭＳ／ＭＳ測定用サンプルを得た。
（１１－２－４）トラスツズマブのアルキルアジド導入体の糖鎖切断物のトリプシン処理（４）
　１．５ｍＬ低吸着マイクロテストチューブに（１１－１－４）で得たトラスツズマブのアルキルアジド導入体の糖鎖切断物のサンプル溶液を１０μＬ加え、１１－２－１と同様の処理を行いＬＣ－ＭＳ／ＭＳ測定用サンプルを得た。
（１１－２－５）トラスツズマブのアジド安息香酸導入体の糖鎖切断物のトリプシン処理（５）
　１．５ｍＬ低吸着マイクロテストチューブに（１１－１－５）で得たトラスツズマブのアジド安息香酸導入体の糖鎖切断物のサンプル溶液を１０μＬ加え、１１－２－１と同様の処理を行いＬＣ－ＭＳ／ＭＳ測定用サンプルを得た。
（１１－２－６）トラスツズマブのアジド安息香酸導入体の糖鎖切断物のトリプシン処理（６）
　１．５ｍＬ低吸着マイクロテストチューブに（１１－１－６）で得たトラスツズマブのアジド安息香酸導入体の糖鎖切断物のサンプル溶液を１０μＬ加え、１１－２－１と同様の処理を行いＬＣ－ＭＳ／ＭＳ測定用サンプルを得た。
（１１－２－７）トラスツズマブのアジド安息香酸導入体の糖鎖切断物のトリプシン処理（７）
　１．５ｍＬ低吸着マイクロテストチューブに（１１－１－７）で得たトラスツズマブのアジド安息香酸導入体の糖鎖切断物のサンプル溶液を１０μＬ加え、１１－２－１と同様の処理を行いＬＣ－ＭＳ／ＭＳ測定用サンプルを得た。
（１１－２－８）トラスツズマブのアセチルチオール導入体の糖鎖切断物のトリプシン処理（８）
　１．５ｍＬ低吸着マイクロテストチューブに（１１－１－８）で得たトラスツズマブのアセチルチオール導入体の糖鎖切断物のサンプル溶液を１０μＬ加え、１１－２－１と同様の処理を行いＬＣ－ＭＳ／ＭＳ測定用サンプルを得た。
（１１－２－９）トラスツズマブのアジド安息香酸導入体の糖鎖切断物のトリプシン処理（９）
　１．５ｍＬ低吸着マイクロテストチューブに（１１－１－９）で得たトラスツズマブのアジド安息香酸導入体の糖鎖切断物のサンプル溶液を１０μＬ加え、１１－２－１と同様の処理を行いＬＣ－ＭＳ／ＭＳ測定用サンプルを得た。
（１１－２－１０）トラスツズマブのアセチルチオールおよびアジド安息香酸導入体の糖鎖切断物のトリプシン処理（１０）
　１．５ｍＬ低吸着マイクロテストチューブに（１１－１－８）で得たトラスツズマブのアセチルチオールおよびアジド安息香酸導入体の糖鎖切断物のサンプル溶液を１０μＬ加え、１１－２－１と同様の処理を行いＬＣ－ＭＳ／ＭＳ測定用サンプルを得た。
（１１－２－１１）デノスマブのアジド安息香酸導入体の糖鎖切断物のトリプシン処理（１１）
　１．５ｍＬ低吸着マイクロテストチューブに（１１－１－１１）で得たデノスマブのアジド安息香酸導入体の糖鎖切断物のサンプル溶液を１０μＬ加え、１１－２－１と同様の処理を行いＬＣ－ＭＳ／ＭＳ測定用サンプルを得た。
（１１－２－１２）デュピルマブのアジド安息香酸導入体の糖鎖切断物のトリプシン処理（１２）
　１．５ｍＬ低吸着マイクロテストチューブに（１１－１－１２）で得たデュピルマブのアジド安息香酸導入体の糖鎖切断物のサンプル溶液を１０μＬ加え、１１－２－１と同様の処理を行いＬＣ－ＭＳ／ＭＳ測定用サンプルを得た。
（１１－３）トラスツズマブのＬＣ－ＭＳ／ＭＳ測定条件
（分析装置）
ナノＨＰＬＣ：ＥＡＳＹ－ｎＬＣ　１０００（サーモフィッシャーサイエンティフィック）
質量分析計：トライブリッド質量分析計Ｏｒｂｉｔｒａｐ　Ｆｕｓｉｏｎ（サーモフィッシャーサイエンティフィック）
（ＨＰＬＣ分析条件）
　トラップカラム：Ａｃｃｌａｉｍ　ＰｅｐＭａｐ（登録商標）　１００，７５μｍｘ２ｃｍ（サーモフィッシャーサイエンティフィック）
分析カラム：ＥＳＩ－ｃｏｌｕｍｎ（ＮＴＣＣ－３６０／７５－３－１２５，７５μｍ×１２．５ｃｍ，３μｍ（日京テクノス））
　移動相Ａ：０．１％ギ酸水溶液
　移動相Ｂ：０．１％ギ酸、アセトニトリル溶液
ローディング溶液：０．１％トリフルオロ酢酸水溶液
　流速：３００ｎＬ／ｍｉｎ
　サンプル注入量：０．３－１μＬ
　グラジエント条件（Ｂ％）：２％（０．０－０．５分）、２％→３０％（０．５－２３．５分）、３０％→７５％（２３．５－２５．５分）、７５％（２５．５－３５．０分）
（質量分析計分析条件）
　イオン化法：ＥＳＩ，　Ｐｏｓｉｔｉｖｅモード
　スキャンタイプ：Ｄａｔａ　Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　Ａｑｕｉｓｉｔｉｏｎ
　Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　Ｔｙｐｅ：Ｃｏｌｌｉｓｉｏｎ　Ｉｎｄｕｃｅｄ　Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ（ＣＩＤ）
　データの取得は付属ソフトであるＸｃａｌｉｂｕｒ　３．０（サーモフィッシャーサイエンティフィック）およびＴｈｅｒｍｏ　Ｏｒｂｉｔｒａｐ　Ｆｕｓｉｏｎ　Ｔｕｎｅ　Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　２．０（サーモフィッシャーサイエンティフィック）を用いて行った。
（１１－４）トラスツズマブ、デノスマブおよびデュピルマブの修飾部位の解析条件
　ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ測定結果に対する修飾部位解析については、ＢｉｏＰｈａｒｍａ　Ｆｉｎｄｅｒ　３．０（サーモフィッシャーサイエンティフィック）を用いて行った。
　ＢｉｏＰｈａｒｍａ　Ｆｉｎｄｅｒでの解析は、Ｓ／Ｎ　Ｔｈｒｅｓｈｏｌｄを１、ＭＳ　Ｎｏｉｓｅ　Ｌｅｖｅｌをピークトップの強度の０．０１％となるように設定して実施した。また、消化酵素をＴｒｙｐｓｉｎに、ＳｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙをＨｉｇｈに設定した。さらに、ピーク検出時のＭａｓｓ　Ｔｏｌｅｒａｎｃｅは４ｐｐｍ、ペプチド同定時のＭａｓｓ　Ａｃｃｕｒａｃｙは５ｐｐｍとした。Ｓｔａｔｉｃ　Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎにはヨードアセトアミドによるシステイン残基の修飾として、Ｃａｒｂａｍｉｄｏｍｅｔｈｙｌ（＋５７．０２１Ｄａ）を設定した。Ｄｙｎａｍｉｃ　Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓについては、メチオニンの酸化（＋１５．９９５Ｄａ）およびリジン残基への修飾体（マレイミド導入体（＋２１９．０９０Ｄａ）、メルカプトプロピオン酸付加マレイミド導入体（＋３２５．０９８Ｄａ）、アルキルアジド導入体（＋１３９．０７５Ｄａ）、アルキルアミン導入体（＋１１３．０８４Ｄａ）、アジド安息香酸導入体（＋１４５．０２８Ｄａ）、アミン安息香酸導入体（＋１１９．０３７Ｄａ）、アセチルチオール導入体（＋１３０．００９Ｄａ）、カルバミドメチル化を受けたアセチルチオール導入体（＋１４５．０２０Ｄａ））を設定した。また、Ｃｏｎｆｉｄｅｎｃｅ　Ｓｃｏｒｅが８０以上、ＭＳ／ＭＳが観測できているもののみとなるようフィルターを設定した。
　なお、消化の際にジチオスレイトールおよびヨードアセトアミドによる還元アルキル化を行うため、アルキルアジド導入体は一部還元されアルキルアミン導入体に、アジド安息香酸導入体は還元されアミン安息香酸導入体になり、アセチルチオール導入体はカルバミドメチル化を受ける。
　また、修飾部位の検索対象のアミノ酸配列のデータとして、トラスツズマブに関しては図２５に示される（１）～（２）を、デノスマブに関しては図２６に示される（１）～（２）を、デュピルマブに関しては図２７に示される（１）～（２）をそれぞれ用いた。
（１１－５）消化物のＬＣ－ＭＳ／ＭＳによる修飾部位の解析結果
（１１－５－１）トリプシン消化物のＬＣ－ＭＳ／ＭＳによる修飾部位の解析結果（１）
　ＬＣ－ＭＳ／ＭＳを用いた解析の結果、（１１－２－１）で得たトラスツズマブアジド修飾体のトリプシン消化によるリジン残基への修飾部位（アミン安息香酸導入体（＋１１９．０３７Ｄａ））を含むアミノ酸３３残基からなるペプチド、ＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲ（配列番号１１）のペプチドフラグメントのＭＳスペクトル（実測値：ｍ／ｚ　９４５．７３３２８、理論値：９４５．７３３５０、４価）が観測され（図２９）、ＣＩＤスペクトルより重鎖のＥＵ　ｎｕｍｂｅｒｉｎｇにおける２４６位もしくは２４８位のリジン残基の修飾を示す、２価のｙ１９に相当するｍ／ｚ　１１２５．４９（理論値：１１２５．１１）のプロダクトイオンが確認された（図３０）。
（１１－５－２）トリプシン消化物のＬＣ－ＭＳ／ＭＳによる修飾部位の解析結果（２）
　ＬＣ－ＭＳ／ＭＳを用いた解析の結果、（１１－２－２）で得たトラスツズマブアジド修飾体のトリプシン消化によるリジン残基への修飾部位（アミン安息香酸導入体（＋１１９．０３７Ｄａ））を含むアミノ酸１８残基からなるペプチド、ＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲ（配列番号１２）のペプチドフラグメントのＭＳスペクトル（実測値：ｍ／ｚ　７６０．３８２８７、理論値：７６０．３８３９０、３価）が観測され（図３１）、ＣＩＤスペクトルより重鎖のＥＵ　ｎｕｍｂｅｒｉｎｇにおける２８８位もしくは２９０位のリジン残基の修飾を示す、２価のｙ１６に相当するｍ／ｚ　１００９．８３（理論値：１００９．５２）のプロダクトイオンが確認された（図３２）。
（１１－５－３）トリプシン消化物のＬＣ－ＭＳ／ＭＳによる修飾部位の解析結果（３）
　ＬＣ－ＭＳ／ＭＳを用いた解析の結果、（１１－２－３）で得たトラスツズマブマレイミドＭＰＡ修飾体のトリプシン消化によるリジン残基への修飾部位（メルカプトプロピオン酸付加マレイミド導入体（＋３２５．０９８Ｄａ））を含むアミノ酸３３残基からなるペプチド、ＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲ（配列番号１１）のペプチドフラグメントのＭＳスペクトル（実測値：ｍ／ｚ　９９７．２４９８６、理論値：９９７．２４９０８、４価）が観測され（図３３）、ＣＩＤスペクトルより重鎖のＥＵ　ｎｕｍｂｅｒｉｎｇにおける２４６位もしくは２４８位のリジン残基の修飾を示す、２価のｙ２０に相当するｍ／ｚ　１２５６．９６（理論値：１２５６．６５）のプロダクトイオンが確認された（図３４）。
　この結果より、上記（１１－２－３）では、抗体の重鎖上、ＥＵ　ｎｕｍｂｅｒｉｎｇにおけるＬｙｓ２４６およびＬｙｓ２４８に位置選択的にコンジュゲーションが進行していることが分かった。
（１１－５－４）トリプシン消化物のＬＣ－ＭＳ／ＭＳによる修飾部位の解析結果（４）
　ＬＣ－ＭＳ／ＭＳを用いた解析の結果、（１１－２－４）で得たトラスツズマブアルキルアジド修飾体のトリプシン消化によるリジン残基への修飾部位（アルキルアジド導入体（＋１３９．０７５Ｄａ））を含むアミノ酸３３残基からなるペプチド、ＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲ（配列番号１１）のペプチドフラグメントのＭＳスペクトル（実測値：ｍ／ｚ　９５０．７４２６３、理論値：９５０．７４３１３、４価）が観測され（図３５）、ＣＩＤスペクトルより重鎖のＥＵ　ｎｕｍｂｅｒｉｎｇにおける２４６位もしくは２４８位のリジン残基の修飾を示す、２価のｙ２０に相当するｍ／ｚ　１１６３．９２（理論値：１１６３．６４）のプロダクトイオンが確認された（図３６）。
　この結果より、上記（１１－２－４）では、抗体の重鎖上、ＥＵ　ｎｕｍｂｅｒｉｎｇにおけるＬｙｓ２４６およびＬｙｓ２４８に位置選択的にコンジュゲーションが進行していることが分かった。
（１１－５－５）トリプシン消化物のＬＣ－ＭＳ／ＭＳによる修飾部位の解析結果（５）
　ＬＣ－ＭＳ／ＭＳを用いた解析の結果、（１１－２－５）で得たトラスツズマブアジド安息香酸修飾体のトリプシン消化によるリジン残基への修飾部位（アミン安息香酸導入体（＋１１９．０３７Ｄａ））を含むアミノ酸１９残基からなるペプチド、ＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫ（配列番号１０１）のペプチドフラグメントのＭＳスペクトル（実測値：ｍ／ｚ　７８３．０８７３１、理論値：７８３．０８６９０、３価）が観測され（図３７）、ＣＩＤスペクトルより重鎖のＥＵ　ｎｕｍｂｅｒｉｎｇにおける３１７位のリジン残基の修飾を示す、２価のｙ１７に相当するｍ／ｚ　１０７５．３１（理論値：１０７５．０６）のプロダクトイオンが確認された（図３８）。また、ＢｉｏＰｈａｒｍａ　Ｆｉｎｄｅｒでの解析により、３１７位のリジン残基への修飾が高選択的に起こっていることが示された（図３９）。
　この結果より、上記（１１－２－５）では、抗体の重鎖上、ＥＵ　ｎｕｍｂｅｒｉｎｇにおけるＬｙｓ３１７に位置選択的にコンジュゲーションが進行していることが分かった。
（１１－５－６）トリプシン消化物のＬＣ－ＭＳ／ＭＳによる修飾部位の解析結果（６）
　ＬＣ－ＭＳ／ＭＳを用いた解析の結果、（１１－２－６）で得たトラスツズマブアジド安息香酸修飾体のトリプシン消化によるリジン残基への修飾部位（アミン安息香酸導入体（＋１１９．０３７Ｄａ））を含むアミノ酸１８残基からなるペプチド、ＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲ（配列番号１２）のペプチドフラグメントのＭＳスペクトル（実測値：ｍ／ｚ　５７０．５４０２６、理論値：５７０．５３９９１、４価）が観測され（図４０）、ＣＩＤスペクトルより重鎖のＥＵ　ｎｕｍｂｅｒｉｎｇにおける２８８位もしくは２９０位のリジン残基の修飾を示す、３価のｙ１６に相当するｍ／ｚ　６７３．４８（理論値：６７３．３５）のプロダクトイオンが確認された（図４１）。また、ＢｉｏＰｈａｒｍａ　Ｆｉｎｄｅｒでの解析により、２８８位もしくは２９０位のリジン残基への修飾が高選択的に起こっていることが示された（図４２）。
　この結果より、上記（１１－２－６）では、抗体の重鎖上、ＥＵ　ｎｕｍｂｅｒｉｎｇにおけるＬｙｓ２８８およびＬｙｓ２９０に位置選択的にコンジュゲーションが進行していることが分かった。
（１１－５－７）トリプシン消化物のＬＣ－ＭＳ／ＭＳによる修飾部位の解析結果（７）
　ＬＣ－ＭＳ／ＭＳを用いた解析の結果、（１１－２－７）で得たトラスツズマブアジド安息香酸修飾体のトリプシン消化によるリジン残基への修飾部位（アミン安息香酸導入体（＋１１９．０３７Ｄａ））を含むアミノ酸３３残基からなるペプチド、ＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲ（配列番号１１）のペプチドフラグメントのＭＳスペクトル（実測値：ｍ／ｚ　９４５．７３５０１、理論値：９４５．７３３７６、４価）が観測され（図４３）、ＣＩＤスペクトルより重鎖のＥＵ　ｎｕｍｂｅｒｉｎｇにおける２４６位もしくは２４８位のリジン残基の修飾を示す、２価のｙ２０に相当するｍ／ｚ　１１５３．８７（理論値：１１５３．６２）のプロダクトイオンが確認された（図４４）。また、ＢｉｏＰｈａｒｍａ　Ｆｉｎｄｅｒでの解析により、２４６位もしくは２４８位のリジン残基への修飾が高選択的に起こっていることが示された（図４５）。
　この結果より、上記（１１－２－７）では、抗体の重鎖上、ＥＵ　ｎｕｍｂｅｒｉｎｇにおけるＬｙｓ２４６およびＬｙｓ２４８に位置選択的にコンジュゲーションが進行していることが分かった。
（１１－５－８）トリプシン消化物のＬＣ－ＭＳ／ＭＳによる修飾部位の解析結果（８）
　ＬＣ－ＭＳ／ＭＳを用いた解析の結果、（１１－２－８）で得たトラスツズマブアセチルチオール修飾体のトリプシン消化によるリジン残基への修飾部位（カルバミドメチル化を受けたアセチルチオール導入体（＋１４５．０２０Ｄａ））を含むアミノ酸３３残基からなるペプチド、ＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲ（配列番号１１）のペプチドフラグメントのＭＳスペクトル（実測値：ｍ／ｚ　９５２．２３３６８、理論値：９５２．２２９４２、４価）が観測され（図４６）、ＣＩＤスペクトルより重鎖のＥＵ　ｎｕｍｂｅｒｉｎｇにおける２４６位もしくは２４８位のリジン残基の修飾を示す、２価のｙ２０に相当するｍ／ｚ　１１６６．９５（理論値：１１６６．６１）のプロダクトイオンが確認された（図４７）。また、ＢｉｏＰｈａｒｍａ　Ｆｉｎｄｅｒでの解析により、２４６位もしくは２４８位のリジン残基への修飾が高選択的に起こっていることが示された（図４８）。
　この結果より、上記（１１－２－８）では、抗体の重鎖上、ＥＵ　ｎｕｍｂｅｒｉｎｇにおけるＬｙｓ２４６およびＬｙｓ２４８に位置選択的にコンジュゲーションが進行していることが分かった。
（１１－５－９）トリプシン消化物のＬＣ－ＭＳ／ＭＳによる修飾部位の解析結果（９）
　ＬＣ－ＭＳ／ＭＳを用いた解析の結果、（１１－２－９）で得たトラスツズマブアジド安息香酸修飾体のトリプシン消化によるリジン残基への修飾部位（アミン安息香酸導入体（＋１１９．０３７Ｄａ））を含むアミノ酸３３残基からなるペプチド、ＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲ（配列番号１１）のペプチドフラグメントのＭＳスペクトル（実測値：ｍ／ｚ　９４５．７４１１４、理論値：９４５．７３３７６、４価）が観測され（図４９）、ＣＩＤスペクトルより重鎖のＥＵ　ｎｕｍｂｅｒｉｎｇにおける２４６位もしくは２４８位のリジン残基の修飾を示す、２価のｙ２０に相当するｍ／ｚ　１１５３．９４（理論値：１１５３．６２）のプロダクトイオンが確認された（図５０）。また、リジン残基への修飾部位（アミン安息香酸導入体（＋１１９．０３７Ｄａ））を含むアミノ酸１８残基からなるペプチド、ＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲ（配列番号１２）のペプチドフラグメントのＭＳスペクトル（実測値：ｍ／ｚ　５７０．５４４７０、理論値：５７０．５３９９１、４価）が観測され（図５１）、ＣＩＤスペクトルより重鎖のＥＵ　ｎｕｍｂｅｒｉｎｇにおける２８８位もしくは２９０位のリジン残基の修飾を示す、３価のｙ１４に相当するｍ／ｚ　５５７．１８（理論値：５５６．９７）のプロダクトイオンが確認された（図５２）。
　この結果より、上記（１１－２－９）では、抗体の重鎖上、ＥＵ　ｎｕｍｂｅｒｉｎｇにおけるＬｙｓ２４６もしくはＬｙｓ２４８、および、Ｌｙｓ２８８もしくはＬｙｓ２９０に位置選択的にコンジュゲーションが進行していることが分かった。
（１１－５－１０）トリプシン消化物のＬＣ－ＭＳ／ＭＳによる修飾部位の解析結果（１０）
　ＬＣ－ＭＳ／ＭＳを用いた解析の結果、（１１－２－１０）で得たトラスツズマブアセチルチオールおよびアジド安息香酸修飾体のトリプシン消化によるリジン残基への修飾部位（カルバミドメチル化を受けたアセチルチオール導入体（＋１１９．０３７Ｄａ））を含むアミノ酸３３残基からなるペプチド、ＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲ（配列番号１１）のペプチドフラグメントのＭＳスペクトル（実測値：ｍ／ｚ　９５２．２３０２８、理論値：９５２．２２９４２、４価）が観測され（図５３）、ＣＩＤスペクトルより重鎖のＥＵ　ｎｕｍｂｅｒｉｎｇにおける２４６位もしくは２４８位のリジン残基の修飾を示す、２価のｙ２０に相当するｍ／ｚ　１１６６．９０（理論値：１１６６．６１）のプロダクトイオンが確認された（図５４）。また、リジン残基への修飾部位（アミン安息香酸導入体（＋１１９．０３７Ｄａ））を含むアミノ酸１８残基からなるペプチド、ＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲ（配列番号１２）のペプチドフラグメントのＭＳスペクトル（実測値：ｍ／ｚ　５７０．５４０３０、理論値：５７０．５３９９１、４価）が観測され（図５５）、ＣＩＤスペクトルより重鎖のＥＵ　ｎｕｍｂｅｒｉｎｇにおける２８８位もしくは２９０位のリジン残基の修飾を示す、３価のｙ１６に相当するｍ／ｚ　６７３．５２（理論値：６７３．３５）のプロダクトイオンが確認された（図５６）。さらに、ＢｉｏＰｈａｒｍａ　Ｆｉｎｄｅｒでの解析により、２４６位もしくは２４８位のリジン残基へのカルバミドメチル化を受けたアセチルチオール修飾、および、２８８位もしくは２９０位のリジン残基へのアミン安息香酸修飾が高選択的に起こっていることが示された（図５７）。
　この結果より、上記（１１－２－１０）では、抗体の重鎖上、ＥＵ　ｎｕｍｂｅｒｉｎｇにおけるＬｙｓ２４６もしくはＬｙｓ２４８、および、Ｌｙｓ２８８もしくはＬｙｓ２９０に位置選択的にコンジュゲーションが進行していることが分かった。
（１１－５－１１）トリプシン消化物のＬＣ－ＭＳ／ＭＳによる修飾部位の解析結果（１１）
　ＬＣ－ＭＳ／ＭＳを用いた解析の結果、（１１－２－１１）で得たデノスマブアジド安息香酸修飾体のトリプシン消化によるリジン残基への修飾部位（アミン安息香酸導入体（＋１１９．０３７Ｄａ））を含むアミノ酸３３残基からなるペプチド、ＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲ（配列番号１０２）のペプチドフラグメントのＭＳスペクトル（実測値：ｍ／ｚ　９６１．７２０７８、理論値：９６１．７１９８０、４価）が観測され（図５８）、ＣＩＤスペクトルより重鎖の配列中の番号（すなわち、Ｎ末のアミノ酸を１番目とする。以下同様）における２４７位もしくは２４９位のリジン残基の修飾を示す、３価のｙ２３に相当するｍ／ｚ　８７２．０８（理論値：８７１．８１）のプロダクトイオンが確認された（図５９）。また、ＢｉｏＰｈａｒｍａ　Ｆｉｎｄｅｒでの解析により、２４７位もしくは２４９位のリジン残基への修飾が高選択的に起こっていることが示された（図６０）。
　この結果より、上記（１１－２－１１）では、抗体の重鎖上、配列中の番号におけるＬｙｓ２４７もしくはＬｙｓ２４９に位置選択的にコンジュゲーションが進行していることが分かった。
（１１－５－１２）トリプシン消化物のＬＣ－ＭＳ／ＭＳによる修飾部位の解析結果（１２）
　ＬＣ－ＭＳ／ＭＳを用いた解析の結果、（１１－２－１２）で得たデュピルマブアジド安息香酸修飾体のトリプシン消化によるリジン残基への修飾部位（アミン安息香酸導入体（＋１１９．０３７Ｄａ））を含むアミノ酸３４残基からなるペプチド、ＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲ（配列番号１０３）のペプチドフラグメントのＭＳスペクトル（実測値：ｍ／ｚ　９７２．９９０６４、理論値：９７２．９８８８６、４価）が観測され（図６１）、ＣＩＤスペクトルより重鎖の配列中の番号における２５１位もしくは２５３位のリジン残基の修飾を示す、３価のｙ２９に相当するｍ／ｚ　１１０５．９８（理論値：１１０５．５８）のプロダクトイオンが確認された（図６２）。また、ＢｉｏＰｈａｒｍａ　Ｆｉｎｄｅｒでの解析により、２５１位もしくは２５３位のリジン残基への修飾が高選択的に起こっていることが示された（図６３）。
　この結果より、上記（１１－２－１２）では、抗体の重鎖上、配列中の番号におけるＬｙｓ２５１もしくはＬｙｓ２５３に位置選択的にコンジュゲーションが進行していることが分かった。
［実施例１２：４種の抗体薬物複合体（ＡＤＣ）、トラスツズマブ－ＤＭ１およびトラスツズマブ－ＭＭＡＥ、ならびにリツキシマブ－ＤＭ１およびリツキシマブ－ＭＭＡＥの合成］
（１２－１）トラスツズマブの位置特異的アジド導入体とＤＢＣＯ－ＤＭ１とのコンジュゲーション
（１２－１－１）位置選択的トラスツズマブ－ＤＭ１コンジュゲートの合成
　実施例６の（６－１－２）で合成したトラスツズマブのアジド安息香酸導入体（アジド抗体３）０．９ｍｇを４７３μＬの１００ｍＭ　ＰＢＳ、１０ｍＭ　ＥＤＴＡバッファーに溶解させたのち、５１μＬのＮ，Ｎ’－ジメチルアセトアミドとＤＢＣＯ－ＤＭ１（Ａｂｚｅｎａ社製、化合物８７）をＮ，Ｎ’－ジメチルアセトアミドに溶解し４ｍＭとしたものを２μＬ添加し２５℃で１６時間攪拌した。反応後、ＮＡＰ－５カラムにより抽出し、ＤＭ１を取り除いた。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000123
（１２－１－２）　ＥＳＩ－ＴＯＦＭＳによる平均ＤＡＲの算出
　ＥＳＩ－ＴＯＦＭＳはアジレント社製のＡｇｉｌｅｎｔ　６５５０　ｃｏｕｐｌｅｄ　ｔｏ　Ａｇｉｌｅｎｔ　１２９０　ＵＰＬＣ　ｗｉｔｈ　ＤＡＤ　ｄｅｔｅｃｔｏｒ，　Ａｕｔｏｓａｍｐｌｅｒ　ｃｏｏｌｉｎｇ　ａｎｄ　Ｔｈｅｒｍｏｓｔａｔｔｅｄ　ｃｏｌｕｍｎ　ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔを使用した。ソフトウェアはＭａｓｓＨｕｎｔｅｒを使用し、ＤＡＲを算出した。生成物はＤＭ１が２つ導入された１５０５３１およびＤＭ１が１つ導入された１４９８２７にピークが観測され、平均ＤＡＲは１．８と算出された（図６４）。
（１２－１－３）還元条件でのＥＳＩ－ＴＯＦＭＳ解析
　（１２－１－１）で合成したトラスツズマブ－ＤＭ１コンジュゲートのＰＢＳ溶液に７ｍＭトリス　（２－カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩溶液２μＬ（トラスツズマブ－ＤＭ１コンジュゲートに対して１００等量）を加えて、室温で２０分攪拌した。ＥＳＩ－ＴＯＦＭＳにより質量を測定したところ、原料である実施例６の（６－１－１）で合成したトラスツズマブのアジド導入体は５０７１５および５０８７７に重鎖ピーク、２３４４０に軽鎖ピークが観測され、トラスツズマブ－ＤＭ１コンジュゲートは重鎖にＤＭ１が導入された５１７４８および５１９０９７にピークが観察され、原料と同じ２３４４０に軽鎖ピークが観測された（図６５）。なお、測定前処理の７ｍＭトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン塩の還元反応により、アジド安息香酸導入体は還元されアミン安息香酸導入体となっている。
（１２－２）トラスツズマブの位置特異的アジド導入体とＤＢＣＯ－ＭＭＡＥとのコンジュゲーション
（１２－２－１）位置選択的トラスツズマブ－ＭＭＡＥコンジュゲートの合成
　実施例６の（６－１－２）で合成したトラスツズマブのアジド安息香酸導入体（アジド抗体３）を０．５ｍｇを実施例１２の（１２－１－１）と同様の手法にて、ＤＢＣＯ－ＭＭＡＥ（Ａｂｚｅｎａ社製、化合物８８）と反応させた。反応後、ＮＡＰ－５カラムにより抽出し、ＤＢＣＯ－ＭＭＡＥを取り除いた。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000124
（１２－２－２）　ＥＳＩ－ＴＯＦＭＳによる平均ＤＡＲの算出
　実施例１２の（１２－１－２）と同様の手法にてＤＡＲを算出した。生成物はＭＭＡＥが２つ導入された１５１３３６およびＭＭＡＥが１つ導入された１４９９７２にピークが観測され、平均ＤＡＲは１．８と算出された（図６６）。
（１２－２－３）還元条件でのＥＳＩ－ＴＯＦＭＳ解析
　（１２－２－１）で合成したトラスツズマブ－ＭＭＡＥコンジュゲートのＰＢＳ溶液に７ｍＭトリス　（２－カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩溶液２μＬ（トラスツズマブ－ＤＭ１コンジュゲートに対して１００等量）を加えて、室温で２０分攪拌した。ＥＳＩ－ＴＯＦＭＳにより質量を測定したところ、原料である実施例６の（６－１－１）で合成したトラスツズマブのアジド導入体は５０７１５および５０８７７に重鎖ピーク、２３４４０に軽鎖ピークが観測され、トラスツズマブ－ＭＭＡＥコンジュゲートは重鎖にＭＭＡＥが導入された５２１５４および５２３１６にピークが観察され、原料と同じ２３４４０に軽鎖ピークが観測された（図６７）。なお、　測定前処理の７ｍＭトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン塩の還元反応により、アジド安息香酸導入体は還元されアミン安息香酸導入体となっている。
（１２－３）リツキシマブの位置特異的アジド導入体とＤＢＣＯ－ＤＭ１とのコンジュゲーション
（１２－３－１）位置選択的リツキシマブ－ＤＭ１コンジュゲートの合成
　実施例６の（６－１－４）で合成したリツキシマブのアジド安息香酸導入体（アジド修飾抗体１０１）を実施例１２の（１２－１－１）と同様の手法にて、ＤＢＣＯ－ＤＭ１（Ａｂｚｅｎａ社製、化合物８７）と反応させた。反応後、ＮＡＰ－５カラムにより抽出し、ＤＢＣＯ－ＤＭ１を取り除いた。
（１２－３－２）　ＥＳＩ－ＴＯＦＭＳによる平均ＤＡＲの算出
　実施例１２の（１２－１－２）と同様の手法にてＤＡＲを算出した。生成物はＤＭ１が２つ導入された１４９５４９およびＤＭ１が１つ導入された１４８８４５にピークが観測され、平均ＤＡＲは１．８と算出された（図６８）。
（１２－３－３）還元条件でのＥＳＩ－ＴＯＦＭＳ解析
　（１２－３－１）で合成したリツキシマブ－ＤＭ１コンジュゲートのＰＢＳ溶液に７ｍＭトリス　（２－カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩溶液２μＬ（トラスツズマブ－ＤＭ１コンジュゲートに対して１００等量）を加えて、室温で２０分攪拌した。ＥＳＩ－ＴＯＦＭＳにより質量を測定したところ、原料である実施例６の（６－１－４）で合成したリツキシマブのアジド導入体は５０６３５および５０７９７に重鎖ピーク、２３０４０に軽鎖ピークが観測され、リツキシマブ－ＤＭ１コンジュゲートは重鎖にＤＭ１が導入された５１６６８および５１８３１にピークが観察され、原料と同じ２３０４０に軽鎖ピークが観測された（図６９）。なお、　測定前処理の７ｍＭトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン塩の還元反応により、アジド安息香酸導入体は還元されアミン安息香酸導入体となっている。
（１２－４）リツキシマブの位置特異的アジド導入体とＤＢＣＯ－ＭＭＡＥとのコンジュゲーション
（１２－４－１）位置選択的リツキシマブ－ＭＭＡＥコンジュゲートの合成
　実施例６の（６－１－４）で合成したリツキシマブのアジド安息香酸導入体（アジド修飾抗体１０１）を実施例１２の（１２－１－１）と同様の手法にて、ＤＢＣＯ－ＭＭＡＥ（Ａｂｚｅｎａ社製、化合物８８）と反応させた。反応後、ＮＡＰ－５カラムにより抽出し、ＤＢＣＯ－ＭＭＡＥを取り除いた。
（１２－４－２）　ＥＳＩ－ＴＯＦＭＳによる平均ＤＡＲの算出
　実施例１２の（１２－２）と同様の手法にてＤＡＲを算出した。生成物はＭＭＡＥが２つ導入された１５０３５４およびＭＭＡＥが１つ導入された１４８９９４にピークが観測され、平均ＤＡＲは１．６と算出された（図７０）。
（１２－４－３）還元条件でのＥＳＩ－ＴＯＦＭＳ解析
　（１２－４－１）で合成したリツキシマブ－ＭＭＡＥコンジュゲートのＰＢＳ溶液に７ｍＭトリス　（２－カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩溶液２μＬ（リツキシマブ－ＭＭＡＥコンジュゲートに対して１００等量）を加えて、室温で２０分攪拌した。ＥＳＩ－ＴＯＦＭＳにより質量を測定したところ、原料である実施例６の（６－１－４）で合成したリツキシマブのアジド導入体は５０６３５および５０７９７に重鎖ピーク、２３０４０に軽鎖ピークが観測され、リツキシマブ－ＭＭＡＥコンジュゲートは重鎖にＭＭＡＥが導入された５２０７１および５２２３３にピークが観察され、原料と同じ２３０４０に軽鎖ピークが観測された（図７１）。なお、測定前処理の７ｍＭトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン塩の還元反応により、アジド安息香酸導入体は還元されアミン安息香酸導入体となっている。
［実施例１３：ペイロードモデル搭載ＩｇＧ１　Ｆｃ親和性ペプチド試薬によるＩｇＧ１　Ｆｃの位置特異的ペイロードモデル導入とＥＳＩ－ＴＯＦＭＳによる解析］
（１３－１）ペイロードモデル搭載ＩｇＧ１　Ｆｃ親和性ペプチド試薬の合成
（１３－１－１）ペイロードモデル搭載ＩｇＧ１　Ｆｃ親和性ペプチド試薬（化合物８９）の合成
　実施例１で合成した抗体親和性ペプチド（化合物３６）をジメチルスルホキシドに溶解させ、２－イミノチオラン塩酸塩（１０モル当量）、ジイソプロピルエチルアミン（１５モル当量）を加え、１時間攪拌した。原料消失をＬＣ－ＭＳで確認した後、Ｎ－ヒドロキシマレイミド（２０モル当量）のジメチルスルホキシド溶液を加え、１時間攪拌した。反応進行をＬＣ－ＭＳで確認した後、Ｆｍｏｃ－Ｎ－アミド－ｄＰＥＧ１２酸（４０モル当量）、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（３２モル当量）、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール（３２モル当量）を加え、２時間攪拌した。反応終結をＬＣ－ＭＳで確認した後、分取ＨＰＬＣにて精製した。目的物を含むフラクションをＥＳＩ－ＭＳで確認した後、凍結乾燥し生成物であるＦｍｏｃ－Ｎ－ａｍｉｄｏ－ｄＰＥＧ１２－親和性ペプチド試薬（化合物８９））を得た。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000125
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝２　１５６３　［Ｍ＋２Ｈ］２＋，　３　１０４３　［Ｍ＋３Ｈ］３＋
（１３－１－２）ペイロードモデル搭載ＩｇＧ１　Ｆｃ親和性ペプチド試薬（化合物９０）の合成
　実施例（１３－１－１）と同様にして、ビオチン－親和性ペプチド試薬（化合物９０）を得た。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000126
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝２　１５６３　［Ｍ＋２Ｈ］２＋，ｚ＝３　１０４３　［Ｍ＋３Ｈ］３＋
（１３－２）ペイロードモデル搭載ＩｇＧ１　Ｆｃ親和性ペプチド試薬によるＩｇＧ１　Ｆｃの位置特異的ペイロードモデル導入およびＥＳＩ－ＴＯＦＭＳ解析
（１３－２－１）ペイロードモデルｄＰＥＧ１２搭載ＩｇＧ１　Ｆｃ親和性ペプチド試薬によるＩｇＧ１　Ｆｃの位置特異的ペイロードモデル導入およびＥＳＩ－ＴＯＦＭＳ解析
　（１３－１－１）で合成したペイロードモデル搭載した親和性ペプチド試薬（化合物８９）をＮ，Ｎ’－ジメチルホルムアミドに溶解し２．０ｍＭとした。抗ＨＥＲ２　ＩｇＧ抗体トラスツズマブ（中外製薬）２００μｇを５０ｍＭＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ　７．２）２００μＬに溶解させ、２．０ｍＭのペプチド試薬を抗体に対して２０モル当量加えて、２５度で３時間攪拌した。反応液を限外濾過（Ａｍｉｃｏｎ　Ｕｌｔｒａ，　１０ｋ　ＭＷＣＯ）により濃縮することでＩｇＧ抗体ペイロードモデルｄＰＥＧ１２導入体を得た。
　ＥＳＩ－ＴＯＦＭＳにより質量を測定したところ、トラスツズマブは１４８０６１にピークが観測され、反応生成物はＦｍｏｃ－ｄＰＥＧ１２が二つ導入された１４９８６７にピークが観測された。
（１３－２－２）ペイロードモデルｄＰＥＧ１２搭載ＩｇＧ１　Ｆｃ親和性ペプチド試薬によるＩｇＧ１　Ｆｃの位置特異的ペイロードモデル導入およびＥＳＩ－ＴＯＦＭＳ解析
　（１３－１－２）で合成したペイロードモデル搭載した親和性ペプチド試薬（化合物９０）を用い、（１３－２－１）と同様の検討を行い、ＩｇＧ抗体ペイロードモデルビオチン導入体を得た。
（１３－３）ペイロードモデル搭載ＩｇＧ１　Ｆｃ親和性ペプチド試薬によるＩｇＧ１　Ｆｃの位置特異的ペイロードモデル導入の還元条件でのＥＳＩ－ＴＯＦＭＳによる解析
（１３－３－１）ペイロードモデルｄＰＥＧ１２搭載ＩｇＧ１　Ｆｃ親和性ペプチド試薬によるＩｇＧ１　Ｆｃの位置特異的ペイロードモデル導入の還元条件でのＥＳＩ－ＴＯＦＭＳによる解析
　（１３－２－１）で合成したトラスツズマブ－ペイロードモデルに対して７ｍＭトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩溶液２．０μＬ（抗体に対して１００等量）を加えて、室温で２０分放置した。ＥＳＩ－ＴＯＦＭＳにより質量を測定したところ、コントロールとして用いた原料のトラスツズマブは５０６０２，５０７６４に重鎖ピーク、２３４４３に軽鎖ピークが観測された。反応生成物は重鎖にＦｍｏｃ－ｄＰＥＧ１２が導入された５１４２５，５１５８４、および原料と同じ２３４４３に軽鎖ピークが観測された。
（１３－３－２）ペイロードモデルビオチン搭載ＩｇＧ１　Ｆｃ親和性ペプチド試薬によるＩｇＧ１　Ｆｃの位置特異的ペイロードモデル導入の還元条件でのＥＳＩ－ＴＯＦＭＳによる解析
　（１３－２－２）で合成したトラスツズマブ－ペイロードモデルに対して７ｍＭトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩溶液２．０μＬ（抗体に対して１００等量）を加えて、室温で２０分放置した。ＥＳＩ－ＴＯＦＭＳにより質量を測定したところ、コントロールとして用いた原料のトラスツズマブは５０５９６，５０７５７に重鎖ピーク、２３４３９に軽鎖ピークが観測された。反応生成物は重鎖にビオチンが導入された５０８２０，５０９８２、および原料と同じ２３４３９に軽鎖ピークが観測された。
［実施例１４：ペイロード搭載ＩｇＧ１　Ｆｃ親和性ペプチド試薬によるＩｇＧ１　Ｆｃの位置特異的ペイロード導入とＥＳＩ－ＴＯＦＭＳによる解析］
（１４－１）ＭＭＡＥ搭載ＩｇＧ１　Ｆｃ親和性ペプチド試薬（化合物９１）の合成
　実施例５で合成したＦｃ親和性ペプチド試薬（化合物６６）をＮ，Ｎ’－ジメチルホルムアミドに溶解し０．２２ｍＭとした。ＤＢＣＯ－ＭＭＡＥ（Ａｂｚｅｎａ社製、化合物９１）を加え、２５度で１６時間攪拌した。原料消失をＬＣ－ＭＳで確認し、生成物であるＭＭＡＥ搭載Ｆｃ親和性ペプチド試薬を得た。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000127
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝２　１９３０［Ｍ＋２Ｈ］２＋，ｚ＝３　１２８７［Ｍ＋３Ｈ］３＋
（１４－２）ＭＭＡＥ搭載ＩｇＧ１　Ｆｃ親和性ペプチド試薬によるＩｇＧ１　Ｆｃ位置選択的トラスツズマブ－ＭＭＡＥコンジュゲートの合成およびＥＳＩ－ＴＯＦＭＳ解析
　抗ＨＥＲ２　ＩｇＧ抗体トラスツズマブ（中外製薬）２００μｇを用い、（１４－１）で合成したＭＭＡＥ搭載Ｆｃ親和性ペプチド試薬（化合物９１）と実施例１３の（１３－２）と同様の手法にて反応させた。反応液を限外濾過（Ａｍｉｃｏｎ　Ｕｌｔｒａ，　１０ｋ　ＭＷＣＯ）により濃縮することで位置選択的トラスツズマブ－ＭＭＡＥコンジュゲートを得た。
　その結果、ＥＳＩ－ＴＯＦＭＳにより質量を測定したところ、ＭＭＡＥが２つ導入された１５１３３６およびＭＭＡＥが１つ導入された１４９９７２のピークが観測された。
［実施例１５：グルタミン酸残基からのリンカーを有するＩｇＧ１　Ｆｃ親和性ペプチド試薬によるＩｇＧ１　Ｆｃの位置特異的修飾とＥＳＩ－ＴＯＦＭＳによる解析］
（１５－１）抗体に対する親和性ペプチドの合成
　（１－１）に示す方法で、化合物９２を合成、取得した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000128
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝２　１０４６．４　［Ｍ＋２Ｈ］２＋，　Ｚ＝３　６９８．３　［Ｍ＋３Ｈ］３＋
（１５－２）アジド試薬と親和性ペプチド連結による抗体修飾試薬の合成
　（１５－１）で合成した抗体親和性ペプチドをジメチルスルホキシドに溶解させ、１－エチル―３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（４０モル当量）、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール（４０モル当量）を加え、攪拌した。そこへ２－アミノエタノール溶液（４０モル当量）とトリエチルアミン（１モル当量）を加え、室温で１時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳを測定し後、逆相ＨＰＬＣで分離精製を行った。各フラクションをＭＳにて確認し、目的物が含まれるフラクションを凍結乾燥した。得られた化合物をジメチルスルホキシドに溶かし、トリエチルアミン（１モル当量）とＮ－ヒドロキシマレイミド（１．２モル当量）を加えて室温で１時間撹拌し、ＬＣ－ＭＳ測定を行い反応の進行を確認した。４－アジド安息香酸（４０モル当量）、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（３２モル当量）、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール（３２モル当量）を加え、２時間攪拌した。反応終結をＬＣ－ＭＳで確認した後、分取ＨＰＬＣにて精製した。目的物を含むフラクションをＥＳＩ－ＭＳで確認した後、凍結乾燥し生成物であるアジド－フェニル－親和性ペプチド試薬（化合物９３）を得た。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000129
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝２　１２０４．３　［Ｍ＋２Ｈ］２＋，　Ｚ＝３　８０３．３　［Ｍ＋３Ｈ］３＋
（１５－３）親和性ペプチド試薬（化合物９３）を用いた抗体修飾反応
　（１５－２）で合成したアジドを搭載した親和性ペプチド（化合物９３）を用い、（６－１－３）に示す方法で反応を行い、ＩｇＧ抗体トラスツズマブ－アジド修飾抗体を得た。
（１５－４）ＩｇＧ抗体トラスツズマブ－アジド修飾抗体の還元条件でのＥＳＩ－ＴＯＦＭＳ解析による重鎖選択性の確認
　（１５－３）で得られたトラスツズマブ－アジド修飾体を、実施例６の（６－２－３）に示す方法で還元、ＥＳＩ－ＴＯＦＭＳ解析を行った。コントロールとして用いた原料のトラスツズマブは５０６０２，５０７６４に重鎖ピーク、２３４４３に軽鎖ピークが観測された。反応生成物は重鎖にアミン安息香酸が導入された５０７２５，５０８８５、および２３４４６に軽鎖ピークが観測された。
［実施例１６：チオグリコール酸エステルを脱離基とするＩｇＧ１　Ｆｃ親和性ペプチド試薬によるＩｇＧ１　Ｆｃの位置特異的修飾とＥＳＩ－ＴＯＦＭＳによる解析］
（１６－１）チオグリコール酸エステル脱離基とするリンカー（化合物９５）の合成
　ジチオジグリコール酸をジクロロメタンに溶解し、グリシン　ｔ－ブチルエステル（２．２モル当量）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルアミン（４．８モル当量）、１－エチル―３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（２．４モル当量）を加え１時間撹拌した。反応液を水で分液洗浄後、得られた有機層を減圧下濃縮した。得られた残渣をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド／水（１：１）で溶解し、トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩（１．３モル当量）を加え、室温で１時間撹拌した。酢酸エチルにて抽出後、減圧濃縮し、酢酸エチル／ヘキサンでシリカゲルカラム処理を行い、化合物９４を得た。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000130
ＭＳ　（ＥＳＩ）　［２Ｍ＋Ｈ］＋　＝４１１，　［Ｍ－Ｈ］－＝２０４
　化合物９４をジクロロメタンに溶解し、４－アジド安息香酸（１モル当量）、１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イルオキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスファート（１．２モル当量）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（１．５モル当量）を加え、室温で３０分撹拌した。反応液をシリカゲルカラムにて精製後、得られた白色結晶をジクロロメタン／トリフルオロ酢酸（１：１）に溶解し、室温で１時間撹拌した。反応液を凍結乾燥し、チオグリコール酸エステル脱離基とするリンカー（化合物９５）を得た。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000131
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝１　２９５　［Ｍ＋Ｈ］１＋
（１６－２）アジド試薬と親和性ペプチド連結による抗体修飾試薬の合成
　（１－１）で合成した抗体親和性ペプチド（化合物３６）に、（１６－１）で合成したリンカー（化合物９５）（４０モル当量）、１－エチル―３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（３２モル当量）、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール（３２モル当量）を加え、２時間攪拌した。反応終結をＬＣ－ＭＳで確認した後、分取ＨＰＬＣにて精製した。目的物を含むフラクションをＥＳＩ－ＭＳで確認した後、凍結乾燥し生成物であるアジド－フェニル－親和性ペプチド試薬（化合物９６）を得た。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000132
ＭＳ　（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：ｚ＝２　１１８３．３　［Ｍ＋２Ｈ］２＋，　Ｚ＝３　７８９．２　［Ｍ＋３Ｈ］３＋
（１６－３）親和性ペプチド試薬（化合物９６）を用いた抗体修飾反応
　（１６－２）で合成したアジドを搭載した親和性ペプチド（化合物９６）を用い、（６－１－３）に示す方法で反応を行い、ＩｇＧ抗体トラスツズマブ－アジド修飾抗体を得た。
（１６－４）ＩｇＧ抗体トラスツズマブ－アジド修飾抗体の還元条件でのＥＳＩ－ＴＯＦＭＳ解析による重鎖選択性の確認
　（１６－３）で得られたトラスツズマブ－アジド修飾体を、実施例６の（６－２－３）に示す方法で還元、ＥＳＩ－ＴＯＦＭＳ解析を行った。コントロールとして用いた原料のトラスツズマブは５０６０２，５０７６４に重鎖ピーク、２３４４３に軽鎖ピークが観測された。反応生成物は重鎖にアミン安息香酸が導入された５０７２０，５０８８２、および原料と同じ２３４４３に軽鎖ピークが観測された。
　（まとめ）
　以上の結果をまとめると、実施例で使用した親和性ペプチドのアミノ酸配列、および実施例で製造した化合物を用いて製造することができる、生体直交性官能基を有する抗体の概要は、以下のとおりである。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000133
　また、抗体について、下記アミノ酸残基を始めとする特定のアミノ酸残基の位置選択的な修飾が可能であることが示された：
（１）２４６位及び／又は２４８位のリジン残基
　例えば、トラスツズマブの２４６位及び／又は２４８位のリジン残基の修飾に関する実施例１１（１１－５－１）、（１１－５－３）、（１１－５－４）、（１１－５－７）、（１１－５－８）、（１１－５－９）、および（１１－５－１０）、デノスマブの２４７位及び／又は２４９位のリジン残基（ＥＵ　ｎｕｍｂｅｒｉｎｇにおけるヒトＩｇＧの２４６位及び／又は２４８位のリジン残基に相当）の修飾に関する実施例１１（１１－５－１１）、ならびにデュピルマブの２５１位及び／又は２５３位のリジン残基（ＥＵ　ｎｕｍｂｅｒｉｎｇにおけるヒトＩｇＧの２４６位及び／又は２４８位のリジン残基に相当）の修飾に関する実施例１１（１１－５－１２）を参照；
（２）２８８位及び／又は２９０位のリジン残基
　例えば、実施例１１（１１－５－２）、（１１－５－６）、（１１－５－９）、および（１１－５－１０）を参照；
（３）３１７位のリジン残基
　例えば、実施例１１（１１－５－５）を参照。
　さらに、下記式（Ｉ）で表される、抗体に対する親和性物質、および生体直交性官能基を有する化合物について、実施例の一部を例に挙げて説明すると以下の表２および表３のとおりである。
Ａ－Ｌ－Ｅ－Ｂ　　　（Ｉ）
〔式中、
　Ａは、抗体に対する親和性物質であり、
　Ｌは、脱離基を含む２価の基であり、
　Ｅは、（ｉ）前記脱離基と連結しており、かつ（ｉｉ）前記抗体中の求核基と反応する能力を有する求電子基を含む２価の基であり、
　Ｂは、生体直交性官能基であり、
　前記脱離基は、前記求核基と前記求電子基との間の反応によりＥから切断されて脱離する能力を有する。〕
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000134
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000135
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000136
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000137
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000138
　以上より、抗体に対する親和性物質、切断性部分および反応性基を有する化合物において、親和性物質の種類、親和性物質と反応性基との間のリンカーの長さ、およびリンカーが導入される親和性物質中の位置等の因子を適宜調節することにより、抗体を位置選択的に修飾できることが示された。
　本発明は、例えば、位置選択的に修飾された抗体の製造に有用である。

Claims (37)

  1. 　下記式（Ｉ）：
    Ａ－Ｌ－Ｅ－Ｂ　　　（Ｉ）
    〔式中、
    　Ａは、抗体に対する親和性物質であり、
    　Ｌは、脱離基を含む２価の基であり、
    　Ｅは、（ｉ）前記脱離基と連結しており、かつ（ｉｉ）前記抗体中の求核基と反応する能力を有する求電子基を含む２価の基であり、
    　Ｂは、生体直交性官能基であり、
    　前記脱離基は、前記求核基と前記求電子基との間の反応によりＥから切断されて脱離する能力を有する。〕で表される、抗体に対する親和性物質、および生体直交性官能基を有する化合物またはその塩。
  2. 　前記親和性物質がペプチドである、請求項１記載の化合物またはその塩。
  3. 　前記ペプチドが、モノクローナル抗体の定常領域に対する結合能を有するペプチドである、請求項２記載の化合物またはその塩。
  4. 　前記ペプチドが、モノクローナル抗体のＦｃ領域に対する結合能を有するペプチドである、請求項２または３記載の化合物またはその塩。
  5. 　前記ペプチドが、ＩｇＧのＦｃ領域に対する結合能を有するペプチドである、請求項４記載の化合物またはその塩。
  6. 　前記ペプチドが、１０～４０のアミノ酸残基を有する、請求項２～５記載のいずれか一項記載の化合物またはその塩。
  7. 　前記ペプチドが、
    （ａ）（ａ－１－１）ＦＮＭＱＱＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤ（配列番号１１）のアミノ酸配列、または、
    （ａ－１－２）ＦＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤＣ（配列番号１２）のアミノ酸配列において、
    　配列中のいずれかの１～３つのアミノ酸残基が、同一でも異なってもよく、リジン残基、アスパラギン酸残基、およびグルタミン酸残基からなる群より選ばれる各々１つのアミノ酸残基により置換されているか、
    （ａ－２－１）β－Ａｌａ－ＮＭＱＱＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤ（配列番号１３）のアミノ酸配列、または、
    （ａ－２－２）β－Ａｌａ－ＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤＣ（配列番号１４）のアミノ酸配列において、
    　配列中のいずれかの１～３つのアミノ酸残基が、同一でも異なってもよく、リジン残基、アスパラギン酸残基、およびグルタミン酸残基からなる群より選ばれる各々１つのアミノ酸残基により置換されており、かつ
    （ｂ）配列番号１１～１４の前記アミノ酸配列各々に対して８５％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２～６のいずれか一項記載の化合物またはその塩。
  8. 　前記ペプチドが、
    式１－１：（Ｘ０－３）ａ－Ｃ－Ｘａａ１－Ｘａａ２－Ｘａａ３－Ｘａａ４－Ｘａａ５－Ｘａａ６－Ｉ－Ｉ－Ｗ－Ｃ－（Ｘ０－３）ｂ（配列番号１５）
    式１－２：（Ｘ０－３）ａ－Ｃ－Ｘａａ１－Ｘａａ２－Ｘａａ３－Ｘａａ４－Ｘａａ５－Ｘａａ６－Ｉ－Ｖ－Ｗ－Ｃ－（Ｘ０－３）ｂ（配列番号１６）
    式１－３：（Ｘ０－３）ａ－Ｃ－Ｘａａ１－Ｘａａ２－Ｘａａ３－Ｘａａ４－Ｘａａ５－Ｘａａ６－Ｖ－Ｖ－Ｗ－Ｃ－（Ｘ０－３）ｂ（配列番号１７）
    式１－４：（Ｘ０－３）ａ－Ｃ－Ｘａａ１－Ｘａａ２－Ｘａａ３－Ｘａａ４－Ｘａａ５－Ｘａａ６－Ａ－Ｖ－Ｗ－Ｃ－（Ｘ０－３）ｂ（配列番号１８）
    式１－５：（Ｘ０－３）ａ－Ｃ－Ｘａａ１－Ｘａａ２－Ｘａａ３－Ｘａａ４－Ｘａａ５－Ｘａａ６－Ｌ－Ｌ－Ｗ－Ｃ－（Ｘ０－３）ｂ（配列番号１９）
    式１－６：（Ｘ０－３）ａ－Ｃ－Ｘａａ１－Ｘａａ２－Ｘａａ３－Ｘａａ４－Ｘａａ５－Ｘａａ６－Ｌ－Ｉ－Ｗ－Ｃ－（Ｘ０－３）ｂ（配列番号２０）
    式１－７：（Ｘ０－３）ａ－Ｃ－Ｘａａ１－Ｘａａ２－Ｘａａ３－Ｘａａ４－Ｘａａ５－Ｘａａ６－Ｌ－Ｖ－Ｆ－Ｃ－（Ｘ０－３）ｂ（配列番号２１）
    式１－８：（Ｘ０－３）ａ－Ｃ－Ｘａａ１－Ｘａａ２－Ｘａａ３－Ｘａａ４－Ｘａａ５－Ｘａａ６－Ｑ－Ｖ－Ｗ－Ｃ－（Ｘ０－３）ｂ（配列番号２２）
    式１－９：（Ｘ０－３）ａ－Ｃ－Ｘａａ１－Ｘａａ２－Ｘａａ３－Ｘａａ４－Ｘａａ５－Ｘａａ６－Ｅ－Ｖ－Ｗ－Ｃ－（Ｘ０－３）ｂ（配列番号２３）
    〔式中、
    　（Ｘ０－３）ａは、なし、アルギニン残基－グリシン残基－アスパラギン残基、アスパラギン酸残基、グリシン残基－アスパラギン残基、またはアスパラギン残基であり、
    　（Ｘ０－３）ｂは、なし、スレオニン残基－チロシン残基－ヒスチジン残基、またはスレオニン残基であり、
    　Ｘａａ１は、アラニン残基であり、
    　Ｘａａ２は、チロシン残基、トリプトファン残基、またはヒスチジン残基であり、
    　Ｘａａ３は、ヒスチジン残基、フェニルアラニン残基、チロシン残基、トリプトファン残基、アルギニン残基、またはグリシン残基であり、
    　Ｘａａ４は、リジン残基、アスパラギン酸残基、またはグルタミン酸残基であり、
    　Ｘａａ５は、グリシン残基、セリン残基、アスパラギン残基、グルタミン残基、アスパラギン酸残基、グルタミン酸残基、フェニルアラニン残基、チロシン残基、トリプトファン残基、ヒスチジン残基、スレオニン残基、ロイシン残基、アラニン残基、バリン残基、イソロイシン残基、またはアルギニン残基であり、
    　Ｘａａ６は、グルタミン残基、グルタミン酸残基、アスパラギン残基、またはアスパラギン酸残基である。〕、あるいは
    式２－１：（Ｘ０－３’）ａ－Ｃ－（Ｘａａ１’）－（Ｘａａ２’）－（Ｘａａ３’）－（Ｘａａ４’）－（Ｘａａ５’）－（Ｘａａ６’）－Ｌ－Ｖ－Ｗ－Ｃ－（Ｘ０－３’）ｂ（配列番号２４）
    〔式中、
    　（Ｘ０－３’）ａおよび（Ｘ０－３’）ｂはそれぞれ、前記（Ｘ０－３）ａおよび（Ｘ０－３）ｂと同じであり、
    　Ｘａａ１’、Ｘａａ２’、Ｘａａ３’、Ｘａａ４’、Ｘａａ５’、Ｘａａ６’はそれぞれ、前記Ｘａａ１、Ｘａａ２、Ｘａａ３、Ｘａａ４、Ｘａａ５、Ｘａａ６と同じである。〕のいずれかのアミノ酸配列を含む、請求項２～６のいずれか一項記載の化合物またはその塩。
  9. 　前記脱離基が、（１）－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓｅ－、－ＳＯ２－Ｏ－、－ＳＯ２－Ｎ（Ｒ）－、－ＳＯ２－、－Ｃ≡Ｃ－ＣＨ２－Ｏ－、－Ｎ（ＯＲ）－、－Ｎ（Ｒ）－、および－Ｏ－Ｎ（Ｒ）－からなる群より選ばれる基（ここで、Ｒは、水素原子または炭素原子数１～６のアルキルである。）、または（２）ヘテロアリーレンである、請求項１～８のいずれか一項記載の化合物またはその塩。
  10. 　前記求核基が、リジン残基の側鎖におけるＮＨ２、チロシン残基の側鎖におけるＯＨ、セリン残基の側鎖におけるＯＨ、スレオニン残基の側鎖におけるＯＨ、およびシステイン残基の側鎖におけるＳＨからなる群より選ばれる基である、請求項１～９のいずれか一項記載の化合物またはその塩。
  11. 　前記求電子基が、－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＳＯ２－、および－ＣＨ２－からなる群より選ばれる基である、請求項１～１０のいずれか一項記載の化合物またはその塩。
  12. 　前記生体直交性官能基が、アジド残基、アルデヒド残基、チオール残基、アルキン残基、アルケン残基、ハロゲン残基、テトラジン残基、ニトロン残基、ヒドロキシルアミン残基、ニトリル残基、ヒドラジン残基、ケトン残基、ボロン酸残基、シアノベンゾチアゾール残基、アリル残基、ホスフィン残基、マレイミド残基、ジスルフィド残基、チオエステル残基、α―ハロカルボニル残基、イソニトリル残基、シドノン残基、およびセレン残基からなる群より選ばれる基である、請求項１～１１のいずれか一項記載の化合物またはその塩。
  13. 　前記生体直交性官能基が、アジド残基、チオール残基、アルキン残基、マレイミド残基、およびジスルフィド残基からなる群より選ばれる基である、請求項１～１２のいずれか一項記載の化合物またはその塩。
  14. 　前記式（Ｉ）で表される化合物が、下記式（Ｉ－１）：
    Ａ－Ｌ１－Ｌ２－Ｅ１－Ｅ２－Ｅ３－Ｂ　　　（Ｉ－１）
    〔式中、
    　ＡおよびＢは、前記式（Ｉ）のものと同じであり、
    　Ｌ１は、結合または２価の基であり、
    　Ｌ２は、脱離基であり、
    　Ｅ１は、（ｉ）前記脱離基と連結しており、かつ（ｉｉ）前記抗体中の求核基と反応する能力を有する求電子基であり、
    　Ｅ２は、（ａ）－Ｘ－Ｙ－〔ここで、Ｅ１と結合するＸは、Ｃ（Ｒ１）（Ｒ２）（ここで、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立して、水素原子または炭素原子数１～６のアルキルである。）、Ｎ（Ｒ３）（ここで、Ｒ３は、水素原子または炭素原子数１～６のアルキルである。）、Ｏ、Ｓ、またはＳｅであり、Ｅ３と結合するＹは、Ｃ（Ｒ４）（Ｒ５）（ここで、Ｒ４およびＲ５はそれぞれ独立して、水素原子または炭素原子数１～６のアルキルである。）である。〕、あるいは（ｂ）下記式（ｉ）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
     （ここで、環Ｚは、Ｅ１と結合する環構成原子Ｘ’およびその両隣の環構成原子の全てが炭素原子である２価の環基であるか、またはＥ１と結合する環構成原子Ｘ’が窒素原子であり、かつ窒素原子の両隣の環構成原子が炭素原子である２価の複素環基である。・は結合手である。）で表される基であり、
    　Ｅ３は、Ｅ２が－Ｘ－Ｙ－の場合には２価の基であり、Ｅ２が式（ｉ）で表される基の場合には結合または２価の基であり、
    　前記脱離基は、前記求核基と前記求電子基との間の反応によりＥ１から切断されて脱離する能力を有する。〕で表される化合物である、請求項１～１３のいずれか一項記載の化合物またはその塩。
  15. 　前記Ｌ２が、
    （ａ）環Ｐ－Ｑ－〔ここで、環Ｐが、電子吸引性基で置換されていてもよいアリーレン、電子吸引性基で置換されていてもよいヘテロアリーレン、縮環していてもよい２，５-ジケトピロリジン、縮環していてもよい２，６－ジケトピペリジン、縮環していてもよい２-ケトピロリジン、縮環していてもよい２－ケトピペリジン、２－ピリドンからなる群より選ばれる基であり、Ｑが、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓｅ－、－ＳＯ２－Ｏ－、－ＳＯ２－Ｎ（Ｒ）－、－ＳＯ２－、－Ｃ≡Ｃ－ＣＨ２－Ｏ－、－Ｎ（ＯＲ）－、－Ｎ（Ｒ）－、および－Ｏ－Ｎ（Ｒ）－からなる群より選ばれる基（ここで、Ｒは、水素原子または炭素原子数１～６のアルキルである。）である。〕、
    （ｂ）ヘテロアリーレン、あるいは
    （ｃ）－Ｑ－〔ここで、Ｑが、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓｅ－、－ＳＯ２－Ｏ－、－ＳＯ２－Ｎ（Ｒ）－、－ＳＯ２－、－Ｃ≡Ｃ－ＣＨ２－Ｏ－、－Ｎ（ＯＲ）－、－Ｎ（Ｒ）－、および－Ｏ－Ｎ（Ｒ）－からなる群より選ばれる基（ここで、Ｒは、水素原子または炭素原子数１～６のアルキルである。）である。〕である、請求項１４記載の化合物またはその塩。
  16. 　前記Ｌ２が、下記構造式からなる群より選ばれる基である、請求項１４または１５記載の化合物またはその塩：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000002
     （ここで、ＥＷＧは、電子吸引性基であり、
    　ｍは、０～４の整数であり、
    　ｎは、０～３の整数であり、
    　Ｒは、水素原子、または炭素原子数１～６のアルキルであり、
    　○（白丸）は、Ｌ１に対する結合手であり、●（黒丸）は、Ｅ１に対する結合手である。）。
  17. 　ＡとＥとを連結するＬまたはＬ１－Ｌ２の主鎖が２０個以下の原子からなる、請求項１～１６のいずれか一項記載の化合物またはその塩。
  18. 　前記式（Ｉ－１）で表される化合物が、下記式（Ｉ－２）：
    Ａ－Ｌ１－Ｌ２－Ｅ１－Ｘ－Ｙ－Ｅ３－Ｂ　（Ｉ－２）
    〔式中、
    　Ａ、Ｌ１、Ｘ、Ｙ、およびＢは、前記式（Ｉ－１）のものと同じであり、
    　Ｌ２は、
    （ａ）環Ｐ－Ｑ－〔ここで、環Ｐが、電子吸引性基で置換されていてもよいアリーレン、電子吸引性基で置換されていてもよいヘテロアリーレン、縮環していてもよい２，５-ジケトピロリジン、縮環していてもよい２，６－ジケトピペリジン、縮環していてもよい２-ケトピロリジン、縮環していてもよい２－ケトピペリジン、２－ピリドンからなる群より選ばれる基であり、Ｑが、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓｅ－、－ＳＯ２－Ｏ－、－ＳＯ２－Ｎ（Ｒ）－、－ＳＯ２－、－Ｃ≡Ｃ－ＣＨ２－Ｏ－、－Ｎ（ＯＲ）－、－Ｎ（Ｒ）－、および－Ｏ－Ｎ（Ｒ）－からなる群より選ばれる基（ここで、Ｒは、水素原子または炭素原子数１～６のアルキルである。）である。〕、
    （ｂ）ヘテロアリーレン、あるいは
    （ｃ）－Ｑ－〔ここで、Ｑが、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓｅ－、－ＳＯ２－Ｏ－、－ＳＯ２－Ｎ（Ｒ）－、－ＳＯ２－、－Ｃ≡Ｃ－ＣＨ２－Ｏ－、－Ｎ（ＯＲ）－、－Ｎ（Ｒ）－、および－Ｏ－Ｎ（Ｒ）－からなる群より選ばれる基（ここで、Ｒは、水素原子または炭素原子数１～６のアルキルである。）である。〕であり、
    　Ｅ１は、－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＳＯ２－、および－ＣＨ２－からなる群より選ばれる基であり、
    　Ｅ３は、２価の基である。〕で表される化合物である、請求項１４～１７のいずれか一項記載の化合物またはその塩。
  19. 　前記式（Ｉ－１）で表される化合物が、下記式（Ｉ－３）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000003
     〔式中、
    　Ａ、Ｌ１、環Ｚ、およびＢは、前記式（Ｉ－１）のものと同じであり、
    　Ｌ２は、
    （ａ）環Ｐ－Ｑ－〔ここで、環Ｐが、電子吸引性基で置換されていてもよいアリーレン、電子吸引性基で置換されていてもよいヘテロアリーレン、縮環していてもよい２，５-ジケトピロリジン、縮環していてもよい２，６－ジケトピペリジン、縮環していてもよい２-ケトピロリジン、縮環していてもよい２－ケトピペリジン、２－ピリドンからなる群より選ばれる基であり、Ｑが、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓｅ－、－ＳＯ２－Ｏ－、－ＳＯ２－Ｎ（Ｒ）－、－ＳＯ２－、－Ｃ≡Ｃ－ＣＨ２－Ｏ－、－Ｎ（ＯＲ）－、－Ｎ（Ｒ）－、および－Ｏ－Ｎ（Ｒ）－からなる群より選ばれる基（ここで、Ｒは、水素原子または炭素原子数１～６のアルキルである。）である。〕、
    （ｂ）ヘテロアリーレン、あるいは
    （ｃ）－Ｑ－〔ここで、Ｑが、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓｅ－、－ＳＯ２－Ｏ－、－ＳＯ２－Ｎ（Ｒ）－、－ＳＯ２－、－Ｃ≡Ｃ－ＣＨ２－Ｏ－、－Ｎ（ＯＲ）－、－Ｎ（Ｒ）－、および－Ｏ－Ｎ（Ｒ）－からなる群より選ばれる基（ここで、Ｒは、水素原子または炭素原子数１～６のアルキルである。）である。〕であり、
    　Ｅ１は、－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＳＯ２－、および－ＣＨ２－からなる群より選ばれる基であり、
    　Ｅ３は、結合または２価の基である。〕で表される化合物である、請求項１４～１７のいずれか一項記載の化合物またはその塩。
  20. 　下記式（Ｉ）：
    Ａ－Ｌ－Ｅ－Ｂ　　　（Ｉ）
    〔式中、
    　Ａは、抗体に対する親和性物質であり、
    　Ｌは、脱離基を含む２価の基であり、
    　Ｅは、（ｉ）前記脱離基と連結しており、かつ（ｉｉ）前記抗体中の求核基と反応する能力を有する求電子基を含む２価の基であり、
    　Ｂは、生体直交性官能基であり、
    　前記脱離基は、前記求核基と前記求電子基との間の反応によりＥから切断されて脱離する能力を有する。〕で表される、抗体に対する親和性物質、および生体直交性官能基を有する化合物またはその塩を含む、生体直交性官能基による抗体の位置選択的修飾試薬。
  21. 　生体直交性官能基を有する抗体またはその塩の製造方法であって、
    　下記式（Ｉ）：
    Ａ－Ｌ－Ｅ－Ｂ　　　（Ｉ）
    〔式中、
    　Ａは、抗体に対する親和性物質であり、
    　Ｌは、脱離基を含む２価の基であり、
    　Ｅは、（ｉ）前記脱離基と連結しており、かつ（ｉｉ）前記抗体中の求核基と反応する能力を有する求電子基を含む２価の基であり、
    　Ｂは、生体直交性官能基であり、
    　前記脱離基は、前記求核基と前記求電子基との間の反応によりＥから切断されて脱離する能力を有する。〕で表される、抗体に対する親和性物質、および生体直交性官能基を有する化合物またはその塩を、抗体と反応させて、
    　下記式（ＩＩ）：
    Ａｂ－Ｅ－Ｂ　　　（ＩＩ）
    〔式中、
    　ＥおよびＢは、前記式（Ｉ）のものと同じであり、
    　Ａｂは、抗体である。〕で表される、生体直交性官能基を有する抗体またはその塩を生成することを含む、方法。
  22. 　機能性物質を有する抗体またはその塩の製造方法であって、
    （１）下記式（Ｉ）：
    Ａ－Ｌ－Ｅ－Ｂ　　　（Ｉ）
    〔式中、
    　Ａは、抗体に対する親和性物質であり、
    　Ｌは、脱離基を含む２価の基であり、
    　Ｅは、（ｉ）前記脱離基と連結しており、かつ（ｉｉ）前記抗体中の求核基と反応する能力を有する求電子基を含む２価の基であり、
    　Ｂは、生体直交性官能基であり、
    　前記脱離基は、前記求核基と前記求電子基との間の反応によりＥから切断されて脱離する能力を有する。〕で表される、抗体に対する親和性物質、および生体直交性官能基を有する化合物またはその塩を、抗体と反応させて、
    　下記式（ＩＩ）：
    Ａｂ－Ｅ－Ｂ　　　（ＩＩ）
    〔式中、
    　ＥおよびＢは、前記式（Ｉ）のものと同じであり、
    　Ａｂは、抗体である。〕で表される、生体直交性官能基を有する抗体またはその塩を生成すること；ならびに
    （２）前記式（ＩＩ）で表される、生体直交性官能基を有する抗体またはその塩を、生体直交性官能基を介して機能性物質と反応させて、
    　下記式（ＩＩＩ）：
    Ａｂ－Ｅ－Ｂ’－Ｆ　　　（ＩＩＩ）
    〔式中、
    　Ａｂは、前記式（ＩＩ）のものと同じであり、
    　Ｅは、前記式（Ｉ）のものと同じであり、
    　Ｂ’は、機能性物質と生体直交性官能基との間の反応により生成する部分を含む２価の基であり、
    　Ｆは、機能性物質である。〕で表される、機能性物質を有する抗体またはその塩を生成することを含む、方法。
  23. 　下記式（ＩＩ－１）：
    Ａｂ－Ｅ１－Ｅ２－Ｅ３－Ｂ　　　（ＩＩ－１）
    〔式中、
    　Ａｂは、抗体であり、
    　Ｅ１は、抗体中の求核基と連結している求電子基であり、
    　Ｅ２は、（ａ）－Ｘ－Ｙ－〔ここで、Ｅ１と結合するＸは、Ｃ（Ｒ１）（Ｒ２）（ここで、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立して、水素原子または炭素原子数１～６のアルキルである。）、Ｎ（Ｒ３）（ここで、Ｒ３は、水素原子または炭素原子数１～６のアルキルである。）、Ｏ、Ｓ、またはＳｅであり、Ｅ３と結合するＹは、Ｃ（Ｒ４）（Ｒ５）（ここで、Ｒ４およびＲ５はそれぞれ独立して、水素原子または炭素原子数１～６のアルキルである。）である。〕、あるいは（ｂ）下記式（ｉ）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000004
     （ここで、環Ｚは、Ｅ１と結合する環構成原子Ｘ’およびその両隣の環構成原子の全てが炭素原子である２価の環基であるか、またはＥ１と結合する環構成原子Ｘ’が窒素原子であり、かつ窒素原子の両隣の環構成原子が炭素原子である２価の複素環基である。・は結合手である。）で表される基であり、
    　Ｅ３は、Ｅ２が－Ｘ－Ｙ－の場合には２価の基であり、Ｅ２が式（ｉ）で表される基の場合には結合または２価の基であり、
    　Ｂは、生体直交性官能基である。〕で表される、生体直交性官能基を位置選択的に有する抗体またはその塩。
  24. 　前記抗体が、モノクローナル抗体の定常領域のみに生体直交性官能基を有する抗体である、請求項２３記載の抗体またはその塩。
  25. 　前記抗体が、モノクローナル抗体のＦｃ領域のみに生体直交性官能基を有する抗体である、請求項２３または請求項２４記載の抗体またはその塩。
  26. 　前記抗体が、ヒトＩｇＧ　Ｆｃ領域における２４６～２４８位または２８８～２９０位のアミノ酸残基からなる領域において、生体直交性官能基を位置選択的に有するヒトＩｇＧである、請求項２３～２５のいずれか一項記載の抗体またはその塩。
  27. 　前記式（ＩＩ－１）で表される前記抗体が、下記式（ＩＩ－２）：
    Ａｂ－Ｅ１－Ｘ－Ｙ－Ｅ３－Ｂ　　　（ＩＩ－２）
    〔式中、
    　Ａｂ、Ｘ、Ｙ、およびＢは、前記式（ＩＩ－１）のものと同じであり、
    　Ｅ１は、－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＳＯ２－、および－ＣＨ２－からなる群より選ばれる基であり、
    　Ｅ３は、２価の基である。〕で表される、生体直交性官能基を位置選択的に有する抗体である、請求項２３～２６のいずれか一項記載の抗体またはその塩。
  28. 　前記式（ＩＩ－１）で表される前記抗体が、下記式（ＩＩ－３）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000005
     〔式中、
    　Ａｂ、環構成原子Ｘ’、環Ｚ、およびＢは、前記式（ＩＩ－１）のものと同じであり、
    　Ｅ１は、－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＳＯ２－、および－ＣＨ２－からなる群より選ばれる基であり、
    　Ｅ３は、結合または２価の基である。〕で表される、生体直交性官能基を位置選択的に有する抗体である、請求項２３～２６のいずれか一項記載の抗体またはその塩。
  29. 　下記式（ＩＩＩ－１）：
    Ａｂ－Ｅ１－Ｅ２－Ｅ３－Ｂ’－Ｆ　　　（ＩＩＩ－１）
    〔式中、
    　Ａｂは、抗体であり、
    　Ｅ１は、抗体中の求核基と連結している求電子基であり、
    　Ｅ２は、（ａ）－Ｘ－Ｙ－〔ここで、Ｅ１と結合するＸは、Ｃ（Ｒ１）（Ｒ２）（ここで、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立して、水素原子または炭素原子数１～６のアルキルである。）、Ｎ（Ｒ３）（ここで、Ｒ３は、水素原子または炭素原子数１～６のアルキルである。）、Ｏ、Ｓ、またはＳｅであり、Ｅ３と結合するＹは、Ｃ（Ｒ４）（Ｒ５）（ここで、Ｒ４およびＲ５はそれぞれ独立して、水素原子または炭素原子数１～６のアルキルである。）である。〕、あるいは（ｂ）下記式（ｉ）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000006
     （ここで、環Ｚは、Ｅ１と結合する環構成原子Ｘ’およびその両隣の環構成原子の全てが炭素原子である２価の環基であるか、またはＥ１と結合する環構成原子Ｘ’が窒素原子であり、かつ窒素原子の両隣の環構成原子が炭素原子である２価の複素環基である。・は結合手である。）で表される基であり、
    　Ｅ３は、Ｅ２が－Ｘ－Ｙ－の場合には２価の基であり、Ｅ２が式（ｉ）で表される基の場合には結合または２価の基であり、
    　Ｂ’は、機能性物質と生体直交性官能基との間の反応により生成する部分を含む２価の基であり、
    　Ｆは、機能性物質である。〕で表される、機能性物質を位置選択的に有する抗体またはその塩。
  30. 　前記抗体が、モノクローナル抗体の定常領域のみに生体直交性官能基を有する抗体である、請求項２９記載の抗体またはその塩。
  31. 　前記抗体が、モノクローナル抗体のＦｃ領域のみに生体直交性官能基を有する抗体である、請求項２９または請求項３０記載の抗体またはその塩。
  32. 　前記抗体が、ヒトＩｇＧ　Ｆｃ領域における２４６～２４８位または２８８～２９０位のアミノ酸残基からなる領域において、機能性物質を位置選択的に有するヒトＩｇＧである、請求項２９～３１のいずれか一項記載の抗体またはその塩。
  33. 　前記式（ＩＩＩ－１）で表される前記抗体が、下記式（ＩＩＩ－２）：
    Ａｂ－Ｅ１－Ｘ－Ｙ－Ｅ３－Ｂ’－Ｆ　　　（ＩＩＩ－２）
    〔式中、
    　Ａｂ、Ｘ、Ｙ、Ｂ’およびＦは、前記式（ＩＩＩ－１）のものと同じであり、
    　Ｅ１は、－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＳＯ２－、および－ＣＨ２－からなる群より選ばれる基であり、
    　Ｅ３は、２価の基である〕で表される、機能性物質を位置選択的に有する抗体である、請求項２９～３２のいずれか一項記載の抗体またはその塩。
  34. 　前記式（ＩＩＩ－１）で表される前記抗体が、下記式（ＩＩＩ－３）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000007
     〔式中、
    　Ａｂ、環構成原子Ｘ’、環Ｚ、Ｂ’およびＦは、前記式（ＩＩＩ－１）のものと同じであり、
    　Ｅ１は、－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＳＯ２－、および－ＣＨ２－からなる群より選ばれる基であり、
    　Ｅ３は、結合または２価の基である。〕で表される、機能性物質を位置選択的に有する抗体である、請求項２９～３２のいずれか一項記載の抗体またはその塩。
  35. 　下記式（ＩＶ）：
    Ａ－Ｌ－Ｅ－Ｆ　　　（ＩＶ）
    〔式中、
    　Ａは、抗体に対する親和性物質であり、
    　Ｌは、脱離基を含む２価の基であり、
    　Ｅは、（ｉ）前記脱離基と連結しており、かつ（ｉｉ）前記抗体中の求核基と反応する能力を有する求電子基を含む２価の基であり、
    　Ｆは、機能性物質であり、
    　前記脱離基は、前記求核基と前記求電子基との間の反応によりＥから切断されて脱離する能力を有する。〕で表される、抗体に対する親和性物質、および機能性物質を有する化合物またはその塩。
  36. 　下記式（ＩＶ）：
    Ａ－Ｌ－Ｅ－Ｆ　　　（ＩＶ）
    〔式中、
    　Ａは、抗体に対する親和性物質であり、
    　Ｌは、脱離基を含む２価の基であり、
    　Ｅは、（ｉ）前記脱離基と連結しており、かつ（ｉｉ）前記抗体中の求核基と反応する能力を有する求電子基を含む２価の基であり、
    　Ｆは、機能性物質であり、
    　前記脱離基は、前記求核基と前記求電子基との間の反応によりＥから切断されて脱離する能力を有する。〕で表される、抗体に対する親和性物質、および機能性物質を有する化合物またはその塩を含む、機能性物質による抗体の位置選択的修飾試薬。
  37. 　機能性物質を有する抗体またはその塩の製造方法であって、
    　下記式（ＩＶ）：
    Ａ－Ｌ－Ｅ－Ｆ　　　（ＩＶ）
    〔式中、
    　Ａは、抗体に対する親和性物質であり、
    　Ｌは、脱離基を含む２価の基であり、
    　Ｅは、（ｉ）前記脱離基と連結しており、かつ（ｉｉ）前記抗体中の求核基と反応する能力を有する求電子基を含む２価の基であり、
    　Ｆは、機能性物質であり、
    　前記脱離基は、前記求核基と前記求電子基との間の反応によりＥから切断されて脱離する能力を有する。〕で表される、抗体に対する親和性物質、および機能性物質を有する化合物またはその塩を、抗体と反応させて、
    　下記式（ＩＩＩ）：
    Ａｂ－Ｅ－Ｆ　　　（ＩＩＩ）
    〔式中、
    　Ａｂは、抗体であり、
    　ＥおよびＦは、前記式（ＩＶ）のものと同じである。〕で表される、機能性物質を有する抗体またはその塩を生成することを含む、方法。
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