WO2018025871A1 - ノビレチン含有固体分散体の製造方法 - Google Patents

ノビレチン含有固体分散体の製造方法 Download PDF

Info

Publication number
WO2018025871A1
WO2018025871A1 PCT/JP2017/027923 JP2017027923W WO2018025871A1 WO 2018025871 A1 WO2018025871 A1 WO 2018025871A1 JP 2017027923 W JP2017027923 W JP 2017027923W WO 2018025871 A1 WO2018025871 A1 WO 2018025871A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
nobiletin
solid dispersion
mass
water
hesperidin
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/JP2017/027923
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
真純 岩下
正裕 梅原
慎太郎 大西
征輝 山本
啓輔 山神
喬晃 石上
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Kao Corp
Original Assignee
Kao Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Kao Corp filed Critical Kao Corp
Priority to CN201780049260.XA priority Critical patent/CN109562095B/zh
Priority to US16/322,601 priority patent/US11160782B2/en
Publication of WO2018025871A1 publication Critical patent/WO2018025871A1/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/35—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom
    • A61K31/352—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings, e.g. methantheline 
    • A61K31/353—3,4-Dihydrobenzopyrans, e.g. chroman, catechin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/105—Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/35—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom
    • A61K31/352—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings, e.g. methantheline 
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/22—Heterocyclic compounds, e.g. ascorbic acid, tocopherol or pyrrolidones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin

Definitions

  • the present invention relates to a method for producing a solid dispersion containing nobiletin.
  • Nobiletin is a kind of polymethoxyflavonoids contained in citrus fruits such as Wenzhou mandarin oranges and seekers. Nobiletin is known to have various physiological activities such as PPAR activation action and adiponectin secretion promoting action (Patent Document 1), neurite outgrowth promoting action (Patent Document 2), and memory disorder inhibiting action (Non-Patent Document 1). Therefore, it is recognized as an important ingredient of health food.
  • Patent Document 4 it has been reported that when water-soluble polyphenols are mixed with poorly water-soluble polyphenols, heated and melted, and then cooled and solidified, the solubility of poorly water-soluble polyphenols in water is increased (Patent Document 4). However, the literature does not describe any solubilization of nobiletin, and the effect is not clear.
  • Patent Document 1 International Publication No. 2006/049234
  • Patent Document 2 JP 2002-60340
  • Patent Document 3 JP 11-169148
  • Patent Document 4 JP 2014-125461
  • Patent Document 1 Japanese Journal of Pharmacology, 2015, 145, 234-236
  • the present invention relates to the following (1) to (5).
  • a method for producing a solid dispersion containing nobiletin which comprises mixing nobiletin or a nobiletin-containing material and a water-soluble hesperidin derivative, and then heating and melting, and cooling and solidifying the melt.
  • a manufacturing method including a process.
  • the figure which shows the result of the powder X-ray diffraction of the ellagic acid (upper figure) of comparative example 2 and an ellagic acid-methyl hesperidin solid dispersion (180 degreeC preparation, lower figure).
  • the present invention relates to providing a method for easily producing a nobiletin composition having excellent solubility in water.
  • the present inventor has intensively studied in view of the above problems, and when nobiletin or a nobiletin-containing product is mixed with a water-soluble hesperidin derivative, heated and melted, and then cooled and solidified, nobiletin is dispersed in an amorphous state. A solid dispersion is obtained, and such a solid dispersion has extremely high solubility of nobiletin in water, high solubility in water is stably maintained, and high biomembrane permeability is obtained. Furthermore, it has been found that high blood transferability and tissue transferability are imparted by oral administration of animals.
  • the present invention it is possible to provide a nobiletin-containing solid dispersion in which the solubility of nobiletin in water is dramatically improved.
  • the solid dispersion of the present invention it is expected that the biomembrane permeability of nobiletin, the blood transferability upon oral intake and the tissue transferability can be improved, and the physiological function of nobiletin is enhanced.
  • the solid dispersion of this invention does not use an organic solvent during a manufacturing process, it is suitable for the use to food-drinks.
  • nobiletin is 3 ′, 4 ′, 5,6,7,8-hexamethoxyflavone and has the following structure.
  • the nobiletin may be any of chemically synthesized, separated from natural products, purified after separation from chemical synthesis or natural products, commercial products, and the like.
  • the purity of nobiletin is not particularly limited, and may be any purity as long as a desired pharmacological effect can be exhibited when, for example, a solid dispersion is obtained.
  • a citrus fruit or juice residue is extracted with a nobiletin-soluble organic solvent such as methanol or ethanol, and separated and purified as appropriate, and contains nobiletin at a high content or high content. Can also be used.
  • nobiletin-containing material examples include a seeker extract containing a high content of nobiletin (for example, “PMF90” ⁇ manufactured by Okinawa Research Center Co., Ltd., nobiletin content of about 60% by weight>, etc.).
  • a seeker extract containing a high content of nobiletin for example, “PMF90” ⁇ manufactured by Okinawa Research Center Co., Ltd., nobiletin content of about 60% by weight>, etc.
  • water-soluble hesperidin derivative examples include hesperidins whose water-solubility is increased by enzymatic or chemical treatment of hesperidin.
  • a sugar moiety (rutinose moiety) of hesperidin such as glucosyl hesperidin
  • examples include sugar-transferred hesperidin and methyl hesperidin combined with sugar.
  • methyl hesperidin and glucosyl hesperidin are preferred from the viewpoint of water solubility.
  • methyl hesperidin it is known that chalcone type compound (1) and flavanone type compound (2) are mainly included, and examples of the constituents include those having the structures shown below.
  • R represents a hydrogen atom or a methyl group
  • methyl hesperidin as a pharmaceutical additive and a food additive is mainly handled as a mixture of compounds (3) and (4).
  • Hesperidin methyl chalcone as a cosmetic raw material is handled as a compound represented by (5). In the case of a composition containing a large amount of chalcone type compound, it is also called hesperidin methyl chalcone.
  • R represents a hydrogen atom or a methyl group.
  • the methyl hesperidin used in the present invention may contain both the chalcone type compound (1) and the flavanone type compound (2) shown above, or may contain only one of them.
  • more preferred methyl hesperidin includes a mixture of compound (3) and compound (4).
  • Methyl hesperidin is a known method, for example, hesperidin is dissolved in an aqueous sodium hydroxide solution, a corresponding amount of dimethyl sulfate is allowed to act on the alkaline solution, the reaction solution is neutralized with sulfuric acid, and extracted with n-butyl alcohol.
  • methyl hesperidin-containing preparations may be used as methyl hesperidin, for example, “Methyl Hesperidin” (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.), “Hesperidin Methyl Chalcone” (Sigma), “Methyl Hesperidin” (Hamari Pharmaceutical Co., Ltd.) Co., Ltd.), “Methyl Hesperidin” (Showa Denko Co., Ltd.), and “Methyl Hesperidin” (Alps Pharmaceutical Co., Ltd.).
  • glucosyl hesperidin examples include monoglucosyl hesperidin (“ ⁇ G Hesperidin PA-T” (Toyo Sugar Co., Ltd.), “Hayashibara Hesperidin (registered trademark) S” (Hayashibara Corporation), and the like.
  • the solid dispersion containing nobiletin of the present invention can be produced by mixing nobiletin or a nobiletin-containing material and a water-soluble hesperidin derivative, followed by heating and melting, and cooling and solidifying the melted melt. If necessary, various plasticizers and polymers can be mixed into nobiletin and water-soluble hesperidin derivative before heating and melting.
  • the content of nobiletin is 1% by mass or more, and further 3% by mass in the mixture from the viewpoint of increasing the content of nobiletin in the solid dispersion.
  • 4% by mass or more, further 5% by mass or more, further 7.5% by mass or more, further 10% by mass or more, and further preferably 15% by mass or more are preferable.
  • 70% by mass or less, further 60% by mass or less, further 50% by mass or less, further 45% by mass or less, further 40% by mass or less, and further 35% by mass or less are preferable.
  • the content of nobiletin in the mixture is 1 to 90% by mass, further 3 to 70% by mass, further 4 to 60% by mass, further 5 to 50% by mass, further 7.5 to 45% by mass, and further 10 to 10%. It is preferably 40% by mass, more preferably 15 to 35% by mass, and particularly preferably 25%.
  • the content of the water-soluble hesperidin derivative varies depending on the type, but from the viewpoint of solubility of nobiletin in water, it is 10% by mass or more, further 20% by mass or more, further 25% by mass or more, and further 30% or more. Further, 45% or more, further 60% or more, more preferably 65% or more, and 99 mass% or less, further 97 mass% or less, further 96 mass% or less, and further 92 from the viewpoint of easy preparation of a solid dispersion. It is preferably 5% or less, more preferably 90% or less, and further preferably 85% or less.
  • the content of methyl hesperidin in the mixture is 10 to 99% by mass, further 20 to 97% by mass, further 25 to 96% by mass, further 30 to 92.5% by mass, and further 45 to 90% by mass. Further, 60 to 85% by mass, further 65 to 85% by mass is preferable, and 75% is particularly preferable.
  • the mass ratio of nobiletin to the water-soluble hesperidin derivative is the content of nobiletin in the resulting solid dispersion From the viewpoint of enhancing and ease of preparing a solid dispersion, it is preferably 0.01 or more, more preferably 0.03 or more, still more preferably 0.04 or more, still more preferably 0.07 or more, and One or more is more preferable.
  • 9 or less is preferable, 4 or less is more preferable, 3 or less is further more preferable, 1 or less is further more preferable, 0.67 or less is still more preferable.
  • 0.01 to 9 is preferable, 0.03 to 4 is more preferable, 0.04 to 3 is more preferable, 0.07 to 1 is further preferable, 0.1 to 0.67 is further preferable, and 0 .33 is particularly preferred.
  • Sugar or sugar alcohol can be added as a plasticizer to nobiletin or a mixture of nobiletin-containing material and a water-soluble hesperidin derivative.
  • nobiletin or a mixture of nobiletin-containing material and a water-soluble hesperidin derivative.
  • glucose, fructose, maltose, mannose, rhamnose, ribose, xylose, trehalose, xylitol, sorbitol, mannitol, erythritol, arabinose, inositol, glucosamine, sucralose, sorbitol are preferable.
  • various polymers can be contained in the nobiletin or a mixture of nobiletin-containing material and a water-soluble hesperidin derivative for the purpose of cost reduction, improvement of dissolution behavior, and improvement of powder physical properties.
  • the content of the plasticizer and various polymers varies depending on the type, but from the viewpoint of the solubility of nobiletin, 5% by mass or more, more preferably 10% by mass or more, further preferably 15% by mass or more, and further preferably 25% by mass or more.
  • the content of the plasticizer and various polymers in the mixture is 5 to 90% by mass, further 10 to 90% by mass, further 15 to 85% by mass, further 15 to 80% by mass, and further 25 to 70% by mass. More preferred is 25 to 65% by mass, and further preferred is 25 to 50% by mass.
  • 0.2 or more is preferable, and 0.3 or more is more preferable.
  • 19 or less is preferable, 17 or less is more preferable, 9 or less is more preferable, 6 or less is more preferable, and 2 or less is more preferable from the point which improves the solubility of nobiletin in water.
  • the mass ratio is preferably 0.2 to 19, more preferably 0.2 to 17, further 0.2 to 9, further 0.3 to 6, and further preferably 0.3 to 2.
  • the mass ratio of nobiletin to the total amount of water-soluble hesperidin derivative and plasticizer / various polymers when mixing nobiletin or nobiletin-containing material, water-soluble hesperidin derivative and plasticizer / various polymers [nobiletin / (water-soluble hesperidin derivative + The plasticizer / various polymers)] is preferably 0.01 or more, more preferably 0.02 or more, further preferably 0.04 or more, from the viewpoint of increasing the content of nobiletin in the solid dispersion, 0.07 The above is more preferable, 0.1 or more is further preferable, 0.17 or more is further preferable, and 0.25 or more is more preferable.
  • 9 or less is preferable, 4 or less is more preferable, 3 or less is further more preferable, 1 or less is further more preferable, 0.67 or less is further more preferable, and 0. 55 or less is more preferable, and 0.43 or less is more preferable.
  • 0.01 to 9 is preferable, 0.03 to 4 is more preferable, 0.04 to 3, more preferably 0.07 to 1, further 0.1 to 0.67, and still more preferably 0.0. It is preferably 17 to 0.55, more preferably 0.25 to 0.43.
  • a method for heating and melting nobiletin or a mixture of a nobiletin-containing material and a water-soluble hesperidin derivative is not particularly limited, and a known method can be applied, but it is preferable to heat and melt the mixture while stirring.
  • a kneader such as an extruder or a kneader, or an extruder can be used.
  • a stirrer such as a ribbon mixer can be used.
  • the heating means include water vapor and electricity.
  • an extruder equipped with a screw capable of simultaneously kneading and heating and melting may be either a single-screw type or a twin-screw type, but a twin-screw extruder is preferable from the viewpoint of increasing the conveyance capability.
  • a twin-screw extruder an extruder in which two screws are rotatably inserted into a cylinder is preferable, and a conventionally known one can be used.
  • the rotation directions of the two screws may be the same or opposite directions, but the rotation in the same direction is preferable from the viewpoint of increasing the conveyance capability.
  • the screw engagement conditions may be any of full-engagement, partial meshing, and non-meshing extruders. However, from the viewpoint of improving the processing capability, the complete meshing type and the partial meshing type are preferable.
  • the kneading disk part is composed of a plurality of kneading discs, which are combined continuously and shifted in a constant phase, for example by 90 degrees, with a narrow gap as the screw rotates.
  • An extremely strong shearing force can be imparted by forcibly passing a nobiletin or a mixture of a nobiletin-containing material and a water-soluble hesperidin derivative.
  • the kneading disk portion and the plurality of screw segments are alternately arranged. In the case of a twin screw extruder, it is preferable that the two screws have the same configuration.
  • nobiletin or a mixture of a nobiletin-containing material and a water-soluble hesperidin derivative, preferably a coarsely pulverized mixture of the mixture is charged into the extruder and continuously rotated by rotating the screw.
  • the method of processing is preferred.
  • the screw speed is preferably 30 to 500 r / min, more preferably 50 to 300 r / min, further preferably 50 to 250 r / min, further preferably 80 to 200 r / min, and particularly preferably 80 r / min.
  • As the shear rate is preferably 10 sec -1 or more, more preferably 20 ⁇ 30000 sec -1, more preferably 50 ⁇ 3000 sec -1. A shear rate of 10 sec ⁇ 1 or more is preferable because grinding proceeds effectively.
  • the melt melted in an extruder equipped with a screw is extruded and formed.
  • the number of passes by the extruder a sufficient effect can be obtained even with one pass, but it is preferable to carry out two passes or more from the viewpoint of improving the dispersibility of nobiletin. From the viewpoint of productivity, 1 to 10 passes are preferable. By repeating the pass, it is possible to obtain a solid dispersion containing nobiletin, in which coarse particles are pulverized and particle size variation is small.
  • a plurality of extruders may be arranged in series for processing.
  • the heating temperature is not less than the softening point of the water-soluble hesperidin derivative, and preferably not less than the melting point of the water-soluble hesperidin derivative.
  • the softening point is a temperature at which a substance begins to soften and begins to deform when the solid substance is heated.
  • methyl hesperidin has a softening point of 98 ° C.
  • glucosyl hesperidin has a melting point of 150 ° C.
  • nobiletin melts there.
  • the melting point of normal methyl hesperidin is 135 ° C.
  • the heating temperature is preferably 95 ° C.
  • the heating temperature is preferably 95 to 200 ° C., more preferably 95 to 180 ° C., further 100 to 185 ° C., further 100 to 160 ° C., further 105 to 140 ° C., and particularly preferably 130 ° C.
  • the heating time is preferably 30 minutes or less, more preferably 15 minutes or less after reaching the temperature at which the water-soluble hesperidin derivative melts, from the viewpoint of the thermal stability and productivity of the water-soluble hesperidin derivative and nobiletin, and further preferably 10 minutes or less. From the viewpoint of mixing the water-soluble hesperidin derivative and nobiletin and the solubility of nobiletin in water, it is preferably 1 minute or longer, more preferably 3 minutes or longer, and further preferably 5 minutes or longer.
  • the heating time is preferably 1 to 30 minutes after reaching the temperature at which the water-soluble hesperidin derivative melts, more preferably 3 to 15 minutes, further preferably 5 to 10 minutes, and particularly preferably 10 minutes.
  • nobiletin in the solid dispersion preferably has a crystallinity of 50% or less, more preferably a crystallinity of 40% or less, and further a crystallinity of 20% or less.
  • the solid dispersion of the present invention preferably has no nobiletin crystalline diffraction peak detected in powder X-ray diffraction measurement.
  • the crystallinity of nobiletin can be calculated by the following method. First, from the diffraction intensity value obtained by the X-ray diffraction method, a peak is separated into a crystalline diffraction line and an amorphous halo using a profile fitting technique without considering the influence of incoherent scattering, lattice disturbance, and the like. Next, the crystallinity of nobiletin is calculated by the following formula [1] from the integrated intensity of each peak obtained there.
  • Crystallinity of nobiletin (%) [ ⁇ I ⁇ / ( ⁇ I ⁇ + ⁇ Iam)] ⁇ 100 [1] [ ⁇ I ⁇ is the sum of the integrated intensities of the peaks of the crystalline diffraction line, and ⁇ Iam is the sum of the intensities of the peaks of the diffraction lines of the amorphous part]
  • the refrigerant temperature at the time of cooling the melt is lower than the temperature at which the water-soluble hesperidin derivative melts, preferably 50 ° C. or less, and more preferably 30 ° C. or less.
  • the solid dispersion is preferably placed in an atmosphere of 50 ° C. or lower, further 30 ° C.
  • the cooling rate of the solid dispersion calculated from the time required to decrease from the heat treatment temperature to 50 ° C. is 0.1 ° C./s or more, further 0.2 ° C./s or more, and further 0.3 ° C./s or more. From the viewpoint of restrictions on production equipment, etc., for example, it is preferably 100 ° C./s or less, and more preferably 50 ° C./s or less.
  • the cooling time is preferably 30 minutes or less, more preferably 20 minutes or less, further preferably 10 minutes or less, and further preferably 5 minutes or less.
  • the solid dispersion containing nobiletin and water-soluble hesperidin derivative solidified by cooling can be molded into any shape and size, and examples thereof include pellets and granules. Furthermore, you may grind
  • nobiletin-containing solid dispersion is extremely excellent in solubility in water (initial solubility, solubility over time).
  • Such high solubility can be obtained in a solid dispersion produced by mixing a compound known as a poorly soluble polyphenol (for example, hesperidin, sesamin, ellagic acid) with a water-soluble hesperidin derivative in the same manner as nobiletin.
  • a compound known as a poorly soluble polyphenol for example, hesperidin, sesamin, ellagic acid
  • a water-soluble hesperidin derivative in the same manner as nobiletin.
  • the nobiletin-containing solid dispersion of the present invention is extremely excellent in permeability of nobiletin to cell membranes derived from human small intestinal epithelial cells, and the effect cannot be predicted from the solid dispersions of other poorly soluble polyphenols. It is.
  • the water content in the solid dispersion is preferably 20% by mass or less, more preferably 10% by mass or less, further 7% by mass or less, and further preferably 5% by mass or less from the viewpoint of easy miniaturization and good handleability.
  • the solid dispersion containing nobiletin obtained by the production method of the present invention can be used for various foods and drinks, pharmaceuticals, quasi drugs, cosmetics and the like.
  • it is useful to use for water-based products.
  • confectionery such as beverages, breads, noodles, cookies, snacks, jelly, dairy products, frozen foods, instant foods such as powdered coffee, starch processed products, processed meat products, and other processed foods , Liquid, solid or semi-solid foods and beverages such as seasonings and dietary supplements.
  • pharmaceuticals or quasi drugs include dosage forms such as tablets (such as chewable tablets), capsules, and powders.
  • cosmetics include cleaning agents, skin lotions, makeup cosmetics, sunscreen cosmetics, acne cosmetics, deodorant cosmetics, whitening cosmetics, hair wash, hair restorer and the like. Aspects and preferred embodiments of the present invention are shown below.
  • a method for producing a solid dispersion containing nobiletin which comprises mixing nobiletin or a nobiletin-containing product and a water-soluble hesperidin derivative, and then heating and melting, and cooling and solidifying the melt.
  • a manufacturing method including a process.
  • the content of nobiletin in the nobiletin or nobiletin-containing product and the water-soluble hesperidin derivative mixture is preferably 1% by mass or more, more preferably 3% by mass or more, more preferably 4% in the mixture.
  • % By mass or more, more preferably 7.5% by mass or more, more preferably 10% by mass or more, more preferably 15% by mass or more, preferably 90% by mass or less, more preferably 80% by mass or less, and still more preferably. It is 75 mass% or less, More preferably, it is 50 mass% or less, More preferably, it is 40 mass% or less, More preferably, it is 35 mass% or less. Further, it is preferably 1 to 90% by mass, more preferably 3 to 80% by mass, further preferably 4 to 75% by mass, further preferably 7.5 to 50% by mass, more preferably 10 to 40%, and still more preferably. It is 15 to 35%, particularly preferably 25%.
  • the content of the water-soluble hesperidin derivative in the nobiletin or nobiletin-containing product and the water-soluble hesperidin derivative mixture is preferably 10% by mass or more, more preferably 20% by mass or more. More preferably, it is 25% by mass or more, more preferably 30% or more, further preferably 45% or more, more preferably 60% or more, further preferably 65% or more, preferably 99% by mass or less, more preferably 97% by mass. % Or less, more preferably 96% by mass or less, further preferably 92.5% or less, more preferably 90% or less, and still more preferably 85% or less.
  • the mass ratio [nobiletin / water-soluble hesperidin derivative] of nobiletin and water-soluble hesperidin derivative when mixing nobiletin or a nobiletin-containing product and a water-soluble hesperidin derivative is preferably 0.01.
  • more more preferably 0.03 or more, further preferably 0.04 or more, more preferably 0.07 or more, more preferably 0.1 or more, preferably 9 or less, more preferably 4 or less, still more preferably. It is 3 or less, more preferably 1 or less, and still more preferably 0.67 or less. Further, it is preferably 0.01 to 9, more preferably 0.03 to 4, more preferably 0.04 to 3, more preferably 0.07 to 1, and still more preferably 0.1 to 0.67. Most preferably, it is 0.33.
  • the extruder provided with the screw is preferably a single-screw extruder or a twin-screw extruder, more preferably a twin-screw extruder, and more preferably two screws are rotatable inside the cylinder.
  • the manufacturing method of the solid dispersion of ⁇ 5> which is an inserted twin-screw extruder.
  • the screw rotational speed is preferably 30 to 500 r / min, more preferably 50 to 300 r / min, still more preferably 50 to 250 r / min, still more preferably 80 to 200 r / min, and even more preferably 80 r / min.
  • a method for producing a solid dispersion according to ⁇ 5> or ⁇ 6>, wherein min. ⁇ 8> The method for producing a solid dispersion according to any one of ⁇ 5> to ⁇ 7>, wherein the shear rate is preferably 10 sec ⁇ 1 or more, more preferably 20 to 30000 sec ⁇ 1 , and still more preferably 50 to 3000 sec ⁇ 1. .
  • the heating temperature is preferably 95 ° C. or higher, more preferably 100 ° C. or higher, more preferably 105 ° C. or higher, preferably 200 ° C. or lower, more preferably 185 ° C. or lower. More preferably, it is 180 ° C. or lower, more preferably 160 ° C. or lower, and further preferably 140 ° C. or lower. Further, it is preferably 95 to 200 ° C, more preferably 95 to 180 ° C, further preferably 100 to 185 ° C, more preferably 100 to 160 ° C, still more preferably 105 to 140 ° C, and still more preferably 130 ° C. .
  • the heating time is preferably 30 minutes or less, more preferably 15 minutes or less, further preferably 10 minutes or less after reaching the temperature at which the water-soluble hesperidin derivative melts. It is preferably 1 minute or longer, more preferably 3 minutes or longer, and further preferably 5 minutes or longer. Further, it is preferably 1 to 30 minutes, more preferably 3 to 15 minutes, further preferably 5 to 10 minutes, and particularly preferably 10 minutes.
  • the crystallinity of nobiletin is preferably 50% or less, more preferably 40% or less, still more preferably 20% or less, still more preferably 10% or less, still more preferably 5% or less, and even more preferably 0%.
  • the cooling temperature is preferably lower than the temperature at which the water-soluble hesperidin derivative melts, more preferably 50 ° C. or less, still more preferably 30 ° C. or less, and still more preferably room temperature (25 ° C.)
  • the cooling rate of the solid dispersion calculated from the time required to decrease from the heat treatment temperature to 25 ° C.
  • the water content in the solid dispersion is preferably 20% by mass or less, more preferably 10% by mass or less, still more preferably 7% by mass or less, and further preferably 5% by mass or less.
  • ⁇ 1> to ⁇ 14 A method for producing a solid dispersion according to any one of the above.
  • ⁇ 16> The method for producing a solid dispersion according to any one of ⁇ 1> to ⁇ 15>, wherein the water-soluble hesperidin derivative is methyl hesperidin.
  • ⁇ 19> The nobiletin-containing solid dispersion according to ⁇ 17> or ⁇ 18>, wherein the water-soluble hesperidin derivative is methyl hesperidin.
  • ⁇ 20> A nobiletin-containing solid dispersion obtained by the production method of any one of ⁇ 1> to ⁇ 16> and having a nobiletin crystallinity of 10% or less calculated from an X-ray diffraction spectrum.
  • ⁇ 21> A food, beverage, medicine or quasi-drug containing the nobiletin-containing solid dispersion according to any one of ⁇ 17> to ⁇ 20>.
  • Quantification of poorly water-soluble substances Quantification of poorly water-soluble polyphenols was performed using a high-performance liquid chromatograph manufactured by Agilent Technologies, Inc., equipped with a column L-Column ODS-2 (4.6 mm ⁇ ⁇ 50 mm, 2 ⁇ m) manufactured by Chemical Substance Evaluation Research Organization, and the column temperature The gradient method was performed at 40 ° C.
  • the sample injection amount was 10 ⁇ L
  • the mobile phase A solution was 0.1 wt% trifluoroacetic acid aqueous solution
  • the B solution was acetonitrile
  • the solution was fed at 1.0 mL / min.
  • the gradient conditions are as follows.
  • absorbance at a wavelength of 280 nm was used.
  • the mGHes-containing solution obtained by this method was concentrated under reduced pressure to remove acetonitrile.
  • the concentrate was purified by column chromatography using Diaion HP-20 (Mitsubishi Chemical Co., Ltd.), concentrated under reduced pressure, and freeze-dried to obtain mGHes as powder. This product was used as a raw material for the solid dispersion.
  • X-ray diffraction intensity was measured using “MiniFlex II” manufactured by Rigaku Corporation, X-ray source: Cu / K ⁇ -radiation, tube voltage: 30 kV, tube current: 15 mA, measurement range: diffraction angle: 5 to 40 °, X The line scan speed was measured under the condition of 10 ° / min. A sample for measurement was prepared by compressing a pellet having an area of 400 mm2 ⁇ 0.5 mm thickness.
  • Caco-2 cells were suspended in a seeding basic medium supplemented with MITO + TM sealam extender and seeded on the upper part of the insert (apical membrane side), and the same medium was also added to the lower part of the insert (basement membrane side). After culturing Caco-2 cells for 24 hours, the seeding basal medium was replaced with Entero-STIM intestinal epithelial differentiation medium supplemented with MITO + TM sealam extender. Thereafter, the cells were further cultured for 48 hours to differentiate into small intestinal epithelial cell sheets.
  • the transepithelial electrical resistance (TEER) value was measured using Millicell ERS (manufactured by Millipore) immediately before the permeation enhancement test of the poorly water-soluble substance and the solid dispersion of the small intestine.
  • Caco-2 cells having a specified value (350 ⁇ ⁇ cm 2 ) or more were used.
  • the evaluation sample was prepared as follows. After adding 6 mL of HBSS (manufactured by Invitrogen, 10 mM MES, 5 mM glucose, 10 mM glutamine, 1 mM ascorbic acid and adjusting to pH 6.0) to a 20 mL screw tube (manufactured by Marum, No.
  • HBSS (10 mM HEPES, 5 mM glucose, 10 mM glutamine, pH 7.4) was added to the lower part of the insert.
  • Caco-2 cells were cultured at 37 ° C. in the presence of 5% CO 2 for 4 hours. Thereafter, HBSS in the lower part of the insert was recovered, and the poorly water-soluble substance that permeated the small intestinal epithelium was quantified by liquid chromatography / tandem mass spectrometry (LC-MS / MS) by the following method.
  • the sample injection amount was 10 ⁇ L
  • the mobile phase A solution was 5.0 wt% formic acid aqueous solution
  • the B solution was acetonitrile
  • the solution was fed at 0.6 mL / min.
  • the gradient conditions are as follows. Time (min) A liquid (%) B liquid (%) 0 99 1 0.5 99 1 4 5 95 5 5 95 5.01 99 1 6 99 1
  • Mass spectrometer was used QTRAP (R) 4500 (Co. AB Sciex). The scan conditions were measured with MRM, and the parameter table was measured with analyte.
  • Nobiletin has MRM (m / Z) 404.0 ⁇ 374.0 ions in positive ion mode
  • sesamin has MRM (m / Z) 355 ⁇ 276.9 ions in positive ion mode
  • hesperidin has positive ion mode.
  • the ions of MRM (m / Z) 611.2 ⁇ 71.0 were quantified, and ellagic acid was quantified by detecting ions of MRM (m / Z) 300.9 ⁇ 284.0 in the negative mode.
  • Test Example 2 LDH Activity Measurement Test The HBSS at the top of the insert of Test Example 1 was collected and determined by measuring the LDH (Lactate dehydrogenase) activity in the solution released from the Caco-2 cells constituting the cell membrane by the following method. The cell viability was evaluated from the cytotoxicity of the evaluation sample. Cytotoxicity was evaluated by a predetermined method using LDH Cytotoxicity Assay Kit (manufactured by Cayman Chemical Company). The LDH activity was calculated from the amount of formazan produced by the contained LDH (quantified from the absorbance intensity at 490 nm) using the test solution above the insert after the evaluation as a sample.
  • LDH Lactate dehydrogenase
  • the collected blood was centrifuged at 12000 rpm for 10 minutes, and 30 ⁇ L of plasma was collected in an Eppendorf tube.
  • the obtained plasma was stored at ⁇ 80 ° C. until measurement of nobiletin content.
  • Plasma nobiletin concentration was measured by LC-MS / MS.
  • mice [Evaluation of tissue migration of nobiletin after oral administration of mice] (animal) C57BL / 6J mice (male, 6 weeks old) were purchased from Nippon Claire Co., Ltd. After acclimatization for more than one week, it was used for the test. The number of animals per test group was 5 or more, which was considered to be the minimum necessary to obtain a statistical advantage in this test system.
  • each tissue liver, white adipose tissue, brown adipose tissue, gastrocnemius, soleus, tibia, femur, left brain, and right brain (cerebral cortex, hippocampus)
  • the collected blood was centrifuged at 12000 rpm for 10 minutes, and 30 ⁇ L of plasma was collected in an Eppendorf tube.
  • the obtained plasma and each tissue sample were stored at ⁇ 80 ° C. until measurement of nobiletin content.
  • tissue sample processing other than bone tissue To 10 mg of the collected tissue, 300 ⁇ L of acetonitrile was added, and the mixture was stirred for 3 minutes with a homogenizer (Hiscotron NS-310E (manufactured by Microtech Nichion Co., Ltd.)), followed by centrifugation at 4 ° C. and 15000 rpm for 20 minutes. 50 ⁇ L of the obtained supernatant was collected in an LC measurement vial, and the nobiletin concentration was measured by LC-MS / MS.
  • a homogenizer Hiscotron NS-310E (manufactured by Microtech Nichion Co., Ltd.)
  • Example 1 Nobiletin (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) and methyl hesperidin (manufactured by Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.) were mixed at a ratio of 25% by mass and 75% by mass, respectively, and the mixture was a biaxial extruder (manufactured by HAAKE). , Heating temperature: 160 ° C., heating time: 10 minutes, screw rotation speed: 80 r / min, cooling at 25 ° C. and cooling to 25 ° C. in 5 minutes (cooling rate) : 0.52 ° C./s), a solid dispersion was prepared. At this time, no clogging was observed inside the extruder, and the discharge of the molded product of the solid dispersion was good.
  • HAAKE biaxial extruder
  • Example 2 In the same manner as in Example 1, nobiletin (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) and methyl hesperidin (manufactured by Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.) were mixed at a ratio of 10% by mass and 90% by mass as poorly water-soluble substances. Thus, a solid dispersion was prepared (heating temperature: 160 ° C., heating time: 10 minutes, screw rotation speed: 80 r / min). As in Example 1, the results of powder X-ray diffraction measurement (FIG. 2) confirmed that nobiletin was amorphized in the solid dispersion, and the crystallinity of the solid dispersion was 0. %, And the crystallinity of nobiletin is also estimated to be 0%. The results of [Evaluation of solubility over time] and [Evaluation of permeability to Caco-2 cell membrane] are shown in Table 1-1.
  • Example 3 In the same manner as in Example 1, nobiletin (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) and methyl hesperidin (manufactured by Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.) were mixed at a ratio of 15% by mass and 85% by mass as poorly water-soluble substances. Thus, a solid dispersion was prepared (heating temperature: 160 ° C., heating time: 10 minutes, screw rotation speed: 80 r / min). Similar to Example 1, the results of powder X-ray diffraction measurement (FIG. 3) confirmed that nobiletin was amorphized in the solid dispersion, and the crystallinity of the solid dispersion was 0. %, And the crystallinity of nobiletin is also estimated to be 0%. The results of [Evaluation of solubility over time] and [Evaluation of permeability to Caco-2 cell membrane] are shown in Table 1-1.
  • Example 4 In the same manner as in Example 1, nobiletin (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) and methyl hesperidin (manufactured by Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.) were mixed at a ratio of 20% by mass and 80% by mass as poorly water-soluble substances. Thus, a solid dispersion was prepared (heating temperature: 160 ° C., heating time: 10 minutes, screw rotation speed: 80 r / min). As in Example 1, the result of powder X-ray diffraction measurement (FIG. 4) confirmed that nobiletin was amorphized in the solid dispersion, and the crystallinity of the solid dispersion was 0. %, And the crystallinity of nobiletin is also estimated to be 0%. The results of [Evaluation of solubility over time] and [Evaluation of permeability to Caco-2 cell membrane] are shown in Table 1-1.
  • Example 5 In the same manner as in Example 1, nobiletin (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) and methyl hesperidin (manufactured by Tokyo Kasei Kogyo Co., Ltd.) were mixed at a ratio of 33% by mass and 67% by mass as poorly water-soluble substances. Thus, a solid dispersion was prepared (heating temperature: 160 ° C., heating time: 10 minutes, screw rotation speed: 80 r / min). As in Example 1, the result of powder X-ray diffraction measurement (FIG. 5) confirmed that nobiletin was amorphized in the solid dispersion, and the crystallinity of the solid dispersion was 0. %, And the crystallinity of nobiletin is also estimated to be 0%. The results of [Evaluation of solubility over time] and [Evaluation of permeability to Caco-2 cell membrane] are shown in Table 1-1.
  • Example 6 In the same manner as in Example 1, nobiletin (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) and methyl hesperidin (manufactured by Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.) were mixed at a ratio of 40% by mass and 60% by mass as poorly water-soluble substances. Thus, a solid dispersion was prepared (heating temperature: 160 ° C., heating time: 10 minutes, screw rotation speed: 80 r / min). As in Example 1, the results of powder X-ray diffraction measurement (FIG. 6) confirmed that nobiletin was amorphized in the solid dispersion, and the crystallinity of the solid dispersion was 0. %, And the crystallinity of nobiletin is also estimated to be 0%. The results of [Evaluation of solubility over time] and [Evaluation of permeability to Caco-2 cell membrane] are shown in Table 1-1.
  • Example 7 Examples: PMF90 (manufactured by Okinawa Research Center Co., Ltd., containing 60% nobiletin) and methyl hesperidin (manufactured by Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.) as poorly water-soluble substances mixed in proportions of 25% by mass and 75% by mass, respectively
  • a solid dispersion was prepared in the same manner as in No. 1 (heating temperature: 160 ° C., heating time: 10 minutes, screw rotation speed: 80 r / min).
  • Example 1 the result of the powder X-ray diffraction measurement (FIG.
  • Example 8 In the same manner as in Example 1, PMF90 (manufactured by Okinawa Research Center Co., Ltd.) and methyl hesperidin (manufactured by Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.) were mixed at a ratio of 10% by mass and 90% by mass as poorly water-soluble substances. A solid dispersion was prepared (heating temperature: 160 ° C., heating time: 10 minutes, screw rotation speed: 80 r / min). As in Example 1, the result of the powder X-ray diffraction measurement (FIG. 8) confirmed that the crystalline substance contained in PMF90 in the solid dispersion was amorphized.
  • the crystallinity of the body is estimated to be 0%, and the crystallinity of nobiletin is also estimated to be 0%.
  • the results of [Evaluation of solubility over time] and [Evaluation of permeability to Caco-2 cell membrane] are shown in Table 1-1.
  • Example 9 In the same manner as in Example 1, PMF90 (manufactured by Okinawa Research Center Co., Ltd.) and methyl hesperidin (manufactured by Tokyo Kasei Kogyo Co., Ltd.) were mixed at a ratio of 33% by mass and 67% by mass as poorly water-soluble substances. A solid dispersion was prepared (heating temperature: 160 ° C., heating time: 10 minutes, screw rotation speed: 80 r / min). As in Example 1, the result of powder X-ray diffraction measurement (FIG.
  • Example 10 In the same manner as in Example 1, PMF90 (manufactured by Okinawa Research Center Co., Ltd.) and methyl hesperidin (manufactured by Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.) were mixed at a ratio of 40% by mass and 60% by mass as poorly water-soluble substances. A solid dispersion was prepared (heating temperature: 160 ° C., heating time: 10 minutes, screw rotation speed: 80 r / min). As in Example 1, the result of the powder X-ray diffraction measurement (FIG.
  • Example 11 In the same manner as in Example 1, PMF90 (manufactured by Okinawa Research Center Co., Ltd.) and methyl hesperidin (manufactured by Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.) were mixed at a ratio of 60% by mass and 40% by mass as poorly water-soluble substances. A solid dispersion was prepared (heating temperature: 160 ° C., heating time: 10 minutes, screw rotation speed: 80 r / min). As in Example 1, the result of powder X-ray diffraction measurement (FIG.
  • Example 12 In the same manner as in Example 1, PMF90 (manufactured by Okinawa Research Center Co., Ltd.) and methyl hesperidin (manufactured by Tokyo Kasei Kogyo Co., Ltd.) were mixed at a ratio of 67% by mass and 33% by mass as poorly water-soluble substances. A solid dispersion was prepared (heating temperature: 160 ° C., heating time: 10 minutes, screw rotation speed: 80 r / min). As in Example 1, the result of powder X-ray diffraction measurement (FIG.
  • Example 13 PMF90 (manufactured by Okinawa Research Center Co., Ltd.) and monoglucosyl hesperidin (hereinafter referred to as mGHes, refined product using HPLC by the above method using ⁇ G hesperidin PA-T) 25 each as a poorly water-soluble substance
  • mGHes monoglucosyl hesperidin
  • a solid dispersion was prepared in the same manner as in Example 1 by mixing at a ratio of mass% and 75 mass% (heating temperature: 160 ° C., heating time: 10 minutes, screw rotation speed: 80 r / min).
  • the result of the powder X-ray diffraction measurement FIG.
  • Example 14 A solid dispersion was prepared in the same manner as in Example 1 by mixing PMF90 (manufactured by Okinawa Research Center Co., Ltd.) as a poorly water-soluble substance and mGHes at a ratio of 33% by mass and 67% by mass, respectively (heating temperature). : 160 ° C., heating time: 10 minutes, screw rotation speed: 80 r / min).
  • the result of the powder X-ray diffraction measurement confirmed that the crystalline substance contained in PMF90 in the solid dispersion was amorphized.
  • the crystallinity of the body is estimated to be 0%, and the crystallinity of nobiletin is also estimated to be 0%.
  • the results of [Evaluation of solubility over time] and [Evaluation of permeability to Caco-2 cell membrane] are shown in Table 1-1.
  • Example 15 A mixture of PMF90 (manufactured by Okinawa Research Center Co., Ltd.) and ⁇ G hesperidin PA-T (manufactured by Toyo Sugar Co., Ltd.) at a ratio of 25% by mass and 75% by mass, respectively, as a poorly water-soluble substance was the same as in Example 1. Thus, a solid dispersion was prepared (heating temperature: 160 ° C., heating time: 10 minutes, screw rotation speed: 80 r / min). As in Example 1, the result of the powder X-ray diffraction measurement (FIG.
  • Example 16 A mixture of PMF90 (manufactured by Okinawa Research Center Co., Ltd.) and ⁇ G hesperidin PA-T (manufactured by Toyo Sugar Co., Ltd.) at a ratio of 33% by mass and 67% by mass as poorly water-soluble substances was the same as in Example 1. Thus, a solid dispersion was prepared (heating temperature: 160 ° C., heating time: 10 minutes, screw rotation speed: 80 r / min). As in Example 1, the result of the powder X-ray diffraction measurement (FIG.
  • Example 1 What mixed ellagic acid dihydrate (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.) and methyl hesperidin (manufactured by Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.) as poorly water-soluble substances in proportions of 25 mass% and 75 mass%, respectively.
  • a solid dispersion was prepared in the same manner as described above (heating temperature: 160 ° C., heating time: 10 minutes, screw rotation speed: 80 r / min).
  • the results of powder X-ray diffraction measurement confirmed that ellagic acid was amorphized in the present solid dispersion.
  • the results of [Evaluation of solubility over time] and [Evaluation of permeability to Caco-2 cell membrane] are shown in FIG. 6 and Table 1-2.
  • Example 3 A mixture of sesamin (manufactured by CHROMADEX INC.) And methyl hesperidin (manufactured by Tokyo Kasei Kogyo Co., Ltd.) at a ratio of 25% by mass and 75% by mass as a poorly water-soluble substance in the same manner as in Example 1 was obtained. A body was prepared (heating temperature: 160 ° C., heating time: 10 minutes, screw rotation speed: 80 r / min). As in Example 1, it was confirmed from the results of the powder X-ray diffraction measurement (FIG. 19) that sesamin was amorphized in the solid dispersion. The results of [Evaluation of solubility over time] and [Evaluation of permeability to Caco-2 cell membrane] are shown in FIG. 6 and Table 1-2.
  • Comparative Example 4 In the same manner as in Example 1, hesperidin (manufactured by Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.) and methyl hesperidin (manufactured by Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.) were mixed at a ratio of 25% by mass and 75% by mass as poorly water-soluble substances. A solid dispersion was prepared (heating temperature: 160 ° C., heating time: 10 minutes, screw rotation speed: 80 r / min). As in Example 1, the results of powder X-ray diffraction measurement (FIG. 20) confirmed that hesperidin was amorphized in the present solid dispersion. The results of [Evaluation of solubility over time] and [Evaluation of permeability to Caco-2 cell membrane] are shown in FIG. 6 and Table 1-2.
  • Comparative Example 5 A mixture of nobiletin (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) and methyl hesperidin (manufactured by Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.) at a ratio of 25% by mass and 75% by mass was evaluated as a hardly water-soluble substance. From the result of the powder X-ray diffraction measurement (FIG. 21), it was confirmed that nobiletin was present as crystals in this mixture. The results of [Evaluation of solubility over time] and [Evaluation of permeability to Caco-2 cell membrane] are shown in Table 1-2.
  • Comparative Example 9 A mixture of PMF90 (manufactured by Okinawa Research Center Co., Ltd.) and ⁇ G hesperidin PA-T at a ratio of 25 mass% and 75 mass%, respectively, was evaluated as a hardly water-soluble substance. The results of [Evaluation of solubility over time] and [Evaluation of permeability to Caco-2 cell membrane] are shown in Table 1-2.
  • [Mobilization of nobiletin into blood after oral administration of mice] 7 shows the transition of nobiletin blood concentration up to 180 minutes after administration of nobiletin, the composition described in Comparative Example 5 and the composition described in Example 1 in terms of nobiletin blood translocation during oral administration to mice.
  • Table 2 shows the maximum blood concentration (Cmax) and the area under the curve (AUC) in the medium concentration transition curve.
  • Table 3 shows the amount of nobiletin transferred in each tissue at 30 minutes after administration of nobiletin, the composition described in Comparative Example 5 and the composition described in Example 1 for oral nobiletin tissue transfer at the time of oral administration to mice. .
  • the composition described in Comparative Example 5 the composition described in Example 1, which is a solid dispersion, significantly increased the migration amount to the examined tissue.
  • the solubility of nobiletin over time in the nobiletin-containing solid dispersion was as extremely high as 2.20 ⁇ 10 5 ppm ⁇ min as in Example 1, for example, and a high dissolution concentration was maintained for a long time (Table 1 1 and FIG. 23).
  • Such high solubility is similar to that in solid dispersion as compared to solid dispersion produced by mixing hesperidin, sesamin, or ellagic acid, which are known as poorly soluble polyphenols like nobiletin, respectively with methyl hesperidin. It is assumed that there is a specific intermolecular interaction between nobiletin and methyl hesperidin in an aqueous solution.
  • nobiletin-containing solid dispersions are extremely excellent in permeability to cell membranes derived from human small intestinal epithelial cells.
  • nobiletin solubilizing ability of water-soluble hesperidin derivatives This is probably because the supersaturation phenomenon of nobiletin is expressed at a high concentration for a long time.
  • Various compounds classified as Class 4 in the Biopharmaceutical Classification System (BCS) do not improve cell membrane permeability and oral absorption even if high solubility is achieved.
  • the insert upper part addition liquid at the time of cell membrane permeability evaluation in all Examples and Comparative Examples described above was prepared by the same method, the high solubility of nobiletin is the very superior nobiletin of this solid dispersion. It is considered that cell membrane permeability is realized, and further, high blood transferability and tissue transferability are realized in oral administration experiments using animals.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)

Abstract

水への溶解性に優れるノビレチン組成物およびそれを簡便に製造する方法の提供。　ノビレチンを含有する固体分散体の製造方法であって、ノビレチン又はノビレチン含有物と、水溶性ヘスペリジン誘導体を混合した後、加熱して溶融させる工程と、溶融した溶融物を冷却し、固化させる工程を含む、製造方法。当該方法により製造されるノビレチン含有組成物。

Description

ノビレチン含有固体分散体の製造方法
　本発明は、ノビレチンを含有する固体分散体の製造方法に関する。
　ノビレチンは、温州みかんやシークワーサー等の柑橘類に含まれるポリメトキシフラボノイドの一種である。ノビレチンは、ＰＰＡＲ活性化作用及びアディポネクチン分泌促進作用（特許文献１）、神経突起伸長促進作用（特許文献２）、記憶障害抑制作用（非特許文献１）等の種々の生理活性を有することが知られていることから、健康食品の重要な成分として認識されている。
　しかしながら、ノビレチンは難水溶性であり、その原体そのものの生理機能を飲食品・医薬品等で有効活用することは難しい。
　そこで、ノビレチンを水に可溶化させる技術が検討され、例えばシクロデキストリン包接物とする方法が報告されている（特許文献３）。しかしながら、この製造方法では、溶媒としてエタノール水溶液を用いているため、その除去のためにプロセスが煩雑化し、コスト上昇の一因になるという問題があり、また水溶性の面でも十分ではない。
　一方、難水溶性ポリフェノール類に水溶性ポリフェノールを混合し、加熱溶融した後に冷却、固化した場合に難水溶性ポリフェノール類の水への溶解性が高まることが報告されている（特許文献４）。しかしながら、当該文献にはノビレチンの可溶化については全く記載されておらず、その効果は明らかではない。
　　〔特許文献１〕国際公開第２００６／０４９２３４号
　　〔特許文献２〕特開２００２－６０３４０号公報
　　〔特許文献３〕特開平１１－１６９１４８号公報
　　〔特許文献４〕特開２０１４－１２５４６１号公報
　　〔非特許文献１〕日本薬理学雑誌, 2015, 145, 234-236
　本発明は、以下の（１）～（５）に係るものである。
（１）ノビレチンを含有する固体分散体の製造方法であって、ノビレチン又はノビレチン含有物と水溶性ヘスペリジン誘導体を混合した後、加熱して溶融させる工程と、溶融した溶融物を冷却し、固化させる工程を含む、製造方法。
（２）ノビレチン又はノビレチン含有物と、水溶性ヘスペリジン誘導体を含有し、ノビレチンがＸ線回折スペクトルから算出される結晶化度１０％以下の状態で分散してなるノビレチン含有固体分散体。
（３）ノビレチン又はノビレチン含有物と、水溶性ヘスペリジン誘導体を含有し、ノビレチンが分散してなる、Ｘ線回折スペクトルから算出される結晶化度１０％以下のノビレチン含有固体分散体。
（４）（１）の製造方法により得られ、Ｘ線回折スペクトルから算出されるノビレチンの結晶化度が１０％以下であるノビレチン含有固体分散体。
（５）（２）～（４）のいずれかのノビレチン含有固体分散体を含有する飲食品、医薬品又は医薬部外品。
実施例１のノビレチン（上図）及びノビレチン－メチルヘスペリジン固体分散体（下図）の粉末Ｘ線回折の結果を示す図。 実施例２のノビレチン（上図）及びノビレチン－メチルヘスペリジン固体分散体（下図）の粉末Ｘ線回折の結果を示す図。 実施例３のノビレチン（上図）及びノビレチン－メチルヘスペリジン固体分散体（下図）の粉末Ｘ線回折の結果を示す図。 実施例４のノビレチン（上図）及びノビレチン－メチルヘスペリジン固体分散体（下図）の粉末Ｘ線回折の結果を示す図。 実施例５のノビレチン（上図）及びノビレチン－メチルヘスペリジン固体分散体（下図）の粉末Ｘ線回折の結果を示す図。 実施例６のノビレチン（上図）及びノビレチン－メチルヘスペリジン固体分散体（下図）の粉末Ｘ線回折の結果を示す図。 実施例７のＰＭＦ９０（上図）及びＰＭＦ９０－メチルヘスペリジン固体分散体（下図）の粉末Ｘ線回折の結果を示す図。 実施例８のＰＭＦ９０（上図）及びＰＭＦ９０－メチルヘスペリジン固体分散体（下図）の粉末Ｘ線回折の結果を示す図。 実施例９のＰＭＦ９０（上図）及びＰＭＦ９０－メチルヘスペリジン固体分散体（下図）の粉末Ｘ線回折の結果を示す図。 実施例１０のＰＭＦ９０（上図）及びＰＭＦ９０－メチルヘスペリジン固体分散体（下図）の粉末Ｘ線回折の結果を示す図。 実施例１１のＰＭＦ９０（上図）及びＰＭＦ９０－メチルヘスペリジン固体分散体（下図）の粉末Ｘ線回折の結果を示す図。 実施例１２のＰＭＦ９０（上図）及びＰＭＦ９０－メチルヘスペリジン固体分散体（下図）の粉末Ｘ線回折の結果を示す図。 実施例１３のＰＭＦ９０（上図）及びＰＭＦ９０－ｍＧＨｅｓ固体分散体（下図）の粉末Ｘ線回折の結果を示す図。 実施例１４のＰＭＦ９０（上図）及びＰＭＦ９０－ｍＧＨｅｓ固体分散体（下図）の粉末Ｘ線回折の結果を示す図。 実施例１５のＰＭＦ９０（上図）及びＰＭＦ９０－αＧヘスペリジン ＰＡ－Ｔ固体分散体（下図）の粉末Ｘ線回折の結果を示す図。 実施例１６のＰＭＦ９０（上図）及びＰＭＦ９０－αＧヘスペリジン ＰＡ－Ｔ固体分散体（下図）の粉末Ｘ線回折の結果を示す図。 比較例１のエラグ酸（上図）及びエラグ酸－メチルヘスペリジン固体分散体（１６０℃調製、下図）の粉末Ｘ線回折の結果を示す図。 比較例２のエラグ酸（上図）及びエラグ酸－メチルヘスペリジン固体分散体（１８０℃調製、下図）の粉末Ｘ線回折の結果を示す図。 比較例３のセサミン（上図）及びセサミン－メチルヘスペリジン固体分散体（下図）の粉末Ｘ線回折の結果を示す図。 比較例４のヘスペリジン（上図）及びヘスペリジン－メチルヘスペリジン固体分散体（下図）の粉末Ｘ線回折の結果を示す図。 比較例４のノビレチン（上図）及びノビレチン－メチルヘスペリジン混合物（下図）の粉末Ｘ線回折の結果を示す図。 固体分散体の数例を用いた溶解性の経時追跡の結果を示す図。 マウス経口投与時のノビレチン血中移行性評価における、投与後１８０分までのノビレチン血中濃度推移を示す図。
発明の詳細な説明
　本発明は、水への溶解性に優れるノビレチン組成物を簡便に製造する方法を提供することに関する。
　本発明者は、上記課題に鑑み鋭意検討したところ、ノビレチン又はノビレチン含有物に水溶性ヘスペリジン誘導体を混合し、加熱溶融させた後、冷却、固化させると、ノビレチンが非晶質の状態で分散した固体分散体が得られること、斯かる固体分散体は、ノビレチンの水への溶解性が極めて高く、且つ水中での高い溶解性が安定的に維持され、また高い生体膜透過性を有すること、更には、動物の経口投与において、高い血中移行性、組織移行性を与えることを見出した。
　本発明によれば、ノビレチンの水への溶解性が飛躍的に向上したノビレチン含有固体分散体を提供することができる。本発明の固体分散体を用いることにより、ノビレチンの生体膜透過性、経口摂取時の血中移行性並びに組織移行性を向上でき、ノビレチンの生理機能を増強することなどが期待される。また、本発明の固体分散体は、製造工程中に有機溶媒を用いないため飲食品への使用に好適である。
　本発明において、「ノビレチン」とは、３’，４’，５，６，７，８－ヘキサメトキシフラボンであり、以下の構造を有する。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
　ノビレチンとしては、例えば、化学合成したもの、天然物から分離したもの、化学合成や天然物から分離した後に精製したもの、市販品等、何れのものでも良い。ノビレチンの純度は特に限定されず、例えば、固体分散体とした際に所望の薬理効果が発揮できる程度の純度であればよい。例えば、柑橘類の果実や搾汁残渣を、メタノールやエタノール等のノビレチン可溶性の有機溶媒で抽出処理し、適宜分離・精製して得られる、ノビレチンを高含有率又は高含有量で含む「ノビレチン含有物」を用いることもできる。ノビレチン含有物としては、例えばノビレチンを高含有量で含むシークワーサーエキス（例えば「ＰＭＦ９０」＜株式会社沖縄リサーチセンター製、ノビレチン含有率約６０重量％＞等）が挙げられる。
　本発明において用いられる「水溶性ヘスペリジン誘導体」としては、ヘスペリジンを酵素又は化学処理することにより水溶性を高めたヘスペリジン類が挙げられ、例えばグルコシルヘスペリジン等のヘスペリジンの糖部分（ルチノース部分）に別の糖を結合させた糖転移ヘスペリジンやメチルヘスペリジンが挙げられる。このうち水溶性の点から、メチルヘスペリジン、グルコシルへスペリジンが好ましい。
　「メチルヘスペリジン」としては、主に、カルコン型化合物（１）及びフラバノン型化合物（２）が含まれることが知られており、その構成成分として、例えば以下に示す構造のものが挙げられる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000002
　（式中、Ｒは、水素原子もしくはメチル基を表す）
　ここで、医薬品添加物および食品添加物としてのメチルヘスペリジンは、主に、化合物（３）及び（４）の混合物として取り扱われている。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000003
　（式中、Ｇｌは、グルコース残基、Ｒｈは、ラムノース残基を表す。また、Ｇｌ－２は、グルコース残基の２位（(３－１)の場合、３位も含む）、Ｒｈ－２は、ラムノース残基の２位を表す。）
　また、化粧品原料としてのヘスペリジンメチルカルコンは、（５）で示される化合物として取り扱われている。なお、カルコン型化合物を多く含む組成の場合、ヘスペリジンメチルカルコンとも呼ばれる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000004
（式中、Ｒは水素原子又はメチル基を表す。）
　本発明において用いられるメチルヘスペリジンは、上記で示したカルコン型化合物（１）とフラバノン型化合物（２）の両方を含むものでもよいし、また、それぞれの片方のみを含むものでもよい。
　本発明において、より好適なメチルヘスペリジンとしては、化合物（３）と化合物（４）の混合物が挙げられる。
　メチルヘスペリジンは、公知の方法、例えば、ヘスペリジンを水酸化ナトリウム水溶液に溶かし、そのアルカリ溶液に対応量のジメチル硫酸を作用させ、反応液を硫酸で中和し、ｎ－ブチルアルコールで抽出し、溶媒を留去したのち、イソプロピルアルコールで再結晶することにより製造できるが（崎浴、日本化學雑誌、７９、７３３－６（１９５８））、その製造法はこれに限るものではない。
　メチルヘスペリジンとして市販のメチルヘスペリジン含有製剤を使用してもよく、例えば、「メチルヘスペリジン」（東京化成工業（株））、「ヘスペリジンメチルカルコン」（Ｓｉｇｍａ社）、「メチルヘスペリジン」（浜理薬品工業（株））、「メチルヘスペリジン」（昭和電工(株)）、「メチルヘスペリジン」（アルプス薬品工業(株)）が挙げられる。
　また、グルコシルヘスペリジンとしては、例えばモノグルコシルヘスペリジン（「αＧヘスペリジン　ＰＡ－Ｔ」（東洋製糖（株））、「林原ヘスペリジン（登録商標）Ｓ」（林原株式会社）等が挙げられる。
　本発明のノビレチンを含有する固体分散体は、ノビレチン又はノビレチン含有物と水溶性ヘスペリジン誘導体を混合した後、加熱して溶融させる工程と、溶融した溶融物を冷却し、固化させることにより製造できる。また、必要であるならば、加熱溶融前のノビレチンと水溶性ヘスペリジン誘導体に各種可塑剤や高分子を混合することもできる。
　ここで、ノビレチン又はノビレチン含有物と水溶性ヘスペリジン誘導体を混合する際、ノビレチンの含有量は、固体分散体中のノビレチンの含有量を高める点から、混合物中に１質量％以上、更に３質量％以上、更に４質量％以上、更に５質量％以上、更に７．５質量％以上、更に１０質量％以上、更に１５質量％以上が好ましく、また、加工しやすい点から、９０質量％以下、更に７０質量％以下、更に６０質量％以下、更に５０質量％以下、更に４５質量％以下、更に４０質量％以下、更に３５質量％以下が好ましい。また、混合物中のノビレチンの含有量は、１～９０質量％、更に３～７０質量％、更に４～６０質量％、更に５～５０質量％、更に７．５～４５質量％、更に１０～４０質量％、更に１５～３５質量％が好ましく、２５％が殊更好ましい。
　水溶性ヘスペリジン誘導体の含有量は、その種類によって異なるが、ノビレチンの水への溶解性の点から、混合物中に１０質量％以上、更に２０質量％以上、更に２５質量％以上、更に３０％以上、更に４５％以上、更に６０％以上、更に６５％以上が好ましく、また、固体分散体の調製がしやすい点から、９９質量％以下、更に９７質量％以下、更に９６質量％以下、更に９２．５％以下、更に９０％以下、更に８５％以下が好ましい。また、前記混合物中のメチルヘスペリジンの含有量は、１０～９９質量％、更に２０～９７質量％、更に２５～９６質量％、更に３０～９２．５％質量％、更に４５～９０％質量％、更に６０～８５質量％、更に６５～８５質量％が好ましく、７５％が殊更好ましい。
　本発明において、ノビレチン又はノビレチン含有物と水溶性ヘスペリジン誘導体を混合する際、水溶性ヘスペリジン誘導体に対するノビレチンの質量比［ノビレチン／水溶性ヘスペリジン誘導体］は、得られる固体分散体中のノビレチンの含有量を高める点、また、固体分散体を調製しやすさの点から、０．０１以上が好ましく、０．０３以上がより好ましく、０．０４以上が更に好ましく、０．０７以上が更に好ましく、０．１以上が更に好ましい。また、得られるノビレチンの水への溶解性を高める点から、９以下が好ましく、更に４以下がより好ましく、３以下が更に好ましく、１以下が更に好ましく、０．６７以下が更に好ましい。また、０．０１～９が好ましく、０．０３～４がより好ましく、０．０４～３がより好ましく、更には０．０７～１が、更には０．１～０．６７が好ましく、０．３３が殊更好ましい。
　ノビレチン又はノビレチン含有物と水溶性ヘスペリジン誘導体の混合物には、可塑剤として糖や糖アルコールを含有させることができる。例えば、グルコース、フルクトース、マルトース、マンノース、ラムノース、リボース、キシロース、トレハロース、キシリトール、ソルビトール、マンニトール、エリスリトール、アラビノース、イノシトール、グルコサミン、スクラロース、ソルビトールが好ましい。
　また、ノビレチン又はノビレチン含有物と水溶性ヘスペリジン誘導体の混合物には、コスト低減や溶解挙動の改善、また粉体物性の改善を目的として各種高分子を含有させることが出来る。例えば、アマシードガム、アラビアガム、アラビノガラクタン、ウェランガム、カシアガム、ガディガム、カードラン、カラギナン、キサンタンガム、キチン、キトサン、グァーガム、ジェランガム、シクロデキストリン、タマリンドシードガム、タラガム、トラガントガム、微結晶セルロース、微小繊維状セルロース、ナイシン、プルラン、ペクチン、マクロホモプシスガム、ラムザンガム、アセチル化アジピン酸架橋デンプン、アセチル化酸化デンプン、アセチル化リン酸架橋デンプン、アルギン酸及びその塩、オクテニルコハク酸デンプンナトリウム、カゼイン及びその塩、カルボキシメチルセルロース及びその塩、コンドロイチン硫酸ナトリウム、ヒドロキシプロピル化リン酸架橋デンプン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルデンプン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース、リン酸架橋デンプン、リン酸化デンプンなど、多糖及びその誘導体やたんぱく質、ポリアクリル酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、ポリビニルポリピロリドンなどの合成高分子が好ましい。
　可塑剤及び各種高分子の含有量は、その種類によって異なるが、ノビレチンの溶解度の点から混合物中に５質量％以上、更に１０質量％以上、更に１５質量％以上が好ましく、更に２５質量％以上が好ましく、また、固体分散体の調製がしやすい点から、９０質量％以下、更に８５質量％以下、更に８０質量％以下、更に７０質量％以下、更に６５質量％以下、更に５０質量％以下が好ましい。また、前記混合物中の可塑剤及び各種高分子の含有量は、５～９０質量％、更に１０～９０質量％、更に１５～８５質量％、更に１５～８０質量％、更に２５～７０質量％が好ましく、更に２５～６５質量％、更に２５～５０質量％が好ましい。
　ノビレチン又はノビレチン含有物と水溶性ヘスペリジン誘導体と可塑剤・各種高分子を混合する際のノビレチンと可塑剤・各種高分子成分の質量比［可塑剤・各種高分子／ノビレチン］は、固体分散体を調製しやすい点から、０．２以上が好ましく、０．３以上がより好ましい。また、ノビレチンの水への溶解度を高める点から、１９以下が好ましく、１７以下がより好ましく、９以下がより好ましく、６以下がより好ましく、２以下がより好ましい。また、斯かる質量比は、０．２～１９、更に０．２～１７、更に０．２～９、更に０．３～６、更に０．３～２が好ましい。
　ノビレチン又はノビレチン含有物と水溶性ヘスペリジン誘導体と可塑剤・各種高分子を混合する際の水溶性ヘスペリジン誘導体と可塑剤・各種高分子の質量比［可塑剤・各種高分子／水溶性ヘスペリジン誘導体］は、固体分散体を調製しやすい点から、０．０５以上、０．０６以上、より好ましくは０．０８以上、更に好ましくは０．１１以上である。また、ノビレチンの水への溶解度を高めるための点から、１００以下が好ましく、１７以下が好ましく、４以下がより好ましく、２以下がよりいっそう好ましい。また、斯かる質量比は、０．０５～１００、０．０５～１７、更に０．０８～４、更に０．１１～２が好ましい。
　ノビレチン又はノビレチン含有物と水溶性ヘスペリジン誘導体と可塑剤・各種高分子を混合する際の水溶性ヘスペリジン誘導体と可塑剤・各種高分子の合計量に対するノビレチンの質量比［ノビレチン／（水溶性ヘスペリジン誘導体＋可塑剤・各種高分子）］は、固体分散体中のノビレチンの含有量を高める点から、０．０１以上が好ましく、０．０２以上がより好ましく、０．０４以上が更に好ましく、０．０７以上が更に好ましく、０．１以上が更に好ましく、０．１７以上が更に好ましく、０，２５以上がより更に好ましい。また、得られるノビレチンの水への溶解性を高める点から、９以下が好ましく、更に４以下がより好ましく、３以下が更に好ましく、１以下が更に好ましく、０．６７以下が更に好ましく、０．５５以下が更に好ましく、０．４３以下が更に好ましい。また、０．０１～９が好ましく、０．０３～４がより好ましく、０．０４～３が、更には０．０７～１が、更には０．１～０．６７が、更には０．１７～０．５５が、更には０．２５～０．４３が好ましい。
　ノビレチン又はノビレチン含有物と水溶性ヘスペリジン誘導体の混合物を加熱して溶融させる方法は、特に制限されず、公知の方法を適用できるが、混合物を攪拌しながら加熱溶融させることが好ましい。例えば、エクストルーダー、ニーダー等の混練機、押出機を用いることができる。また、リボンミキサー等の攪拌機を用いることができる。例えば、ＨＡＡＫＥ製のエクストルーダー、Ｔｈｅｒｍｏ　ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ製のエクストルーダー、テクノベル（株）製のＫＺＷ１３４Ｔ、（株）栗本鉄工所のＫＲＣニーダー、浅田鉄工製のミラクルＫ．Ｃ．Ｋ、スエヒロＥＰＭ製のＥＡ－２０、エヌピー食品（株）製のＭＣ－１１０２等が挙げられる。加熱の手段は、例えば、水蒸気、電気が挙げられる。
　なかでも、均一な組成の固体分散体を得る観点から、混練と加熱溶融を同時に行うことのできるスクリューを備えた押出機を用いるのが好ましい。スクリューを備えた押出機としては、単軸、二軸のどちらの形式でもよいが、搬送能力を高める等の観点から、二軸押出機が好ましい。二軸押出機としては、シリンダの内部に２本のスクリューが回転自在に挿入された押出機が好ましく、従来から公知のものを使用できる。２本のスクリューの回転方向は、同一でも逆方向でもよいが、搬送能力を高める観点から、同一方向の回転が好ましい。また、スクリューの噛み合い条件としては、完全噛み合い、部分噛み合い、非噛み合いの各形式の押出機のいずれでもよいが、処理能力を向上させる観点から、完全噛み合い型、部分噛み合い型が好ましい。
　また、スクリューを備えた押出機としては、強い圧縮せん断力を加える観点から、スクリューのいずれかの部分に、いわゆるニーディングディスク部を備えることが好ましい。ニーディングディスク部とは、複数のニーディングディスクで構成され、これらを連続して、一定の位相で、例えば９０度ずつ、ずらしながら組み合わせたものであり、スクリューの回転にともなって、狭い隙間に、ノビレチン又はノビレチン含有物と水溶性ヘスペリジン誘導体の混合物を強制的に通過させることで極めて強いせん断力を付与することができる。スクリューの構成としては、ニーディングディスク部と複数のスクリューセグメントとが交互に配置されることが好ましい。二軸押出機の場合、２本のスクリューが、同一の構成を有することが好ましい。
　スクリューを備えた押出機を用いる際は、ノビレチン又はノビレチン含有物と水溶性ヘスペリジン誘導体の混合物、好ましくは当該混合物を粗粉砕したものを押出機に投入し、スクリューを回転させることにより、連続的に処理する方法が好ましい。
　スクリュー回転数は、３０～５００ｒ／ｍｉｎが好ましく、５０～３００ｒ／ｍｉｎがより好ましく、５０～２５０ｒ／ｍｉｎが更に好ましく、８０～２００ｒ／ｍｉｎが更に好ましく、８０ｒ／ｍｉｎが殊更好ましい。
　また、せん断速度としては、１０ｓｅｃ－１以上が好ましく、２０～３００００ｓｅｃ－１がより好ましく、５０～３０００ｓｅｃ－１が更に好ましい。せん断速度が１０ｓｅｃ－１以上であれば、有効に粉砕が進行するため好ましい。
　スクリューを備えた押出機中で溶融した溶融物は、押出し、成形される。
　押出機によるパス回数は、１パスでも十分効果を得ることができるが、ノビレチンの分散性を向上させる点から、２パス以上行うことが好ましい。また、生産性の点からは、１～１０パスが好ましい。パスを繰返すことにより、粗大粒子が粉砕され、粒径のばらつきが少ないノビレチンを含有する固体分散体を得ることができる。２パス以上行う場合、生産能力を考慮し、複数の押出機を直列に並べて処理を行ってもよい。
　加熱温度は、水溶性ヘスペリジン誘導体の軟化点以上であり、好ましくは水溶性ヘスペリジン誘導体の融点以上である。本発明において、軟化点とは固体物質を加熱していく際に物質が軟化し、変形し始める温度であり、例えばメチルヘスペリジンの軟化点は９８℃、グルコシルヘスペリジンの融点は１５０℃である。加熱によりメチルヘスペリジンが軟化或いは溶融すると、そこにノビレチンが溶融する。具体的には、例えば通常のメチルヘスペリジンの融点は１３５℃である。
　本発明において、加熱温度は、９５℃以上が好ましく、更に１００℃以上が好ましく、更に１０５℃以上が好ましく、また、ノビレチンの熱安定性の点から、２００℃以下が好ましく、更に１８５℃以下、更に１８０℃以下、更に１６０℃以下、更に１４０℃以下が好ましい。また、加熱温度は、９５～２００℃、更に９５～１８０℃、更に１００～１８５℃、更に１００～１６０℃、更に１０５～１４０℃が好ましく、１３０℃が殊更好ましい。
　加熱の時間は、水溶性ヘスペリジン誘導体とノビレチンの熱安定性と生産性の点から、水溶性ヘスペリジン誘導体が溶融する温度に達してから３０分以下が好ましく、更に１５分以下が好ましく、更に１０分以下が好ましく、また、水溶性ヘスペリジン誘導体とノビレチンの混合、およびノビレチンの水への溶解性の点から、１分以上が好ましく、更に３分以上が好ましく、更に５分以上が好ましい。また、加熱の時間は、水溶性ヘスペリジン誘導体が溶融する温度に達してから１～３０分が好ましく、更に３～１５分、更に５～１０分が好ましく、１０分が殊更好ましい。
　次いで、溶融物を冷却し、固化させる。斯かる処理によって、ノビレチンが非晶質化し、ノビレチンを非晶質の状態で含む固体分散体となる。
　非晶質とは、分子配列に一定の規則性を欠いている状態である。非晶質（アモルファス）であることは、粉末Ｘ線回折によって確認できる。
　本発明において固体分散体中のノビレチンは、結晶化度が５０％以下であるものが好ましく、更に結晶化度が４０％以下であるものが好ましく、更に結晶化度が２０％以下であるのものが好ましく、更に結晶化度が１０％以下であるのものが好ましく、更に結晶化度が５％以下であるのものが好ましく、更に結晶化度が０％の完全な非晶質であることが殊更好ましい。
　本発明の固体分散体は、粉末Ｘ線回折測定において、ノビレチンの結晶性回折ピークが検出されないのが好ましい。
　ノビレチンの結晶化度は、以下の方法で算出できる。まず、Ｘ線回折法による回折強度値から、非干渉性散乱や格子の乱れ等の影響を考慮しないで、プロファイル・フィッティングの手法を用いて結晶性回折線と非晶ハローにピーク分離する。次に、そこで得られた各ピークの積分強度よりノビレチンの結晶化度を下記計算式〔１〕により算出する。
　ノビレチンの結晶化度（％）＝［ΣＩα／（ΣＩα＋ΣＩａｍ）］×１００　〔１〕
　［ΣＩαは、結晶性回折線の各ピークの積分強度の和、ΣＩａｍは、非晶部の回折線の各ピークの積分強度の和］
　溶融物冷却時の冷媒温度は、水溶性ヘスペリジン誘導体が溶融する温度よりも低い温度であり、５０℃以下が好ましく、更に３０℃以下が好ましい。冷却方法は、例えば、固体分散体を５０℃以下、更に、３０℃以下、更に室温（２５℃）の雰囲気下におくことが好ましい。また、加熱処理後の固体分散体に冷風を吹き付けて急冷することが好ましい。加熱処理温度から５０℃まで低下するのに要した時間から算出される固体分散体の冷却速度は０．１℃／ｓ以上、更に０．２℃／ｓ以上、更に０．３℃／ｓ以上が好ましく、製造設備の制約等の観点から、例えば１００℃／ｓ以下、更には５０℃／ｓ以下が好ましい。冷却時間は３０分以下が好ましく、更に２０分以下が好ましく、更に１０分以下が好ましく、更に５分以下が好ましい。
　冷却により固化したノビレチンおよび水溶性ヘスペリジン誘導体を含有する固体分散体は、任意の形、大きさに成形可能であり、例えばペレット状、顆粒状等が挙げられる。更に、必要に応じて粉砕してもよい。
　斯くして得られる本発明のノビレチンを含有する固体分散体（「ノビレチン含有固体分散体」）は水への溶解性（初期溶解性、経時的溶解性）に極めて優れる。
　例えば後記実施例に示すように、ノビレチンの経時的溶解性（例えば、ノビレチン含有固体分散体を水に添加して６時間撹拌した場合のノビレチン溶解濃度（攪拌開始６時間後までの曲線下面積（横軸：時間（単位＝分）、縦軸：溶解濃度（単位＝ｐｐｍ））は、約２．２０×１０５ｐｐｍ・ｍｉｎと極めて高く、高い溶解濃度が長時間維持される（図１参照）。斯かる高い溶解性は、ノビレチンと同様に難溶性のポリフェノールとして知られている化合物（例えばヘスペリジン、セサミン、エラグ酸）を水溶性ヘスペリジン誘導体と混合して製造される固体分散体では得られない予想外の効果である。
　また、本発明のノビレチン含有固体分散体は、ノビレチンのヒト小腸上皮細胞由来の細胞膜に対する透過性が極めて優れており、当該効果もまた上記他の難溶性のポリフェノールの固体分散体からは予測できないものである。
　また、固体分散体中の水分含量は、微細化し易く、ハンドリング性が良好な点から、２０質量％以下、更に１０質量％以下、更に７質量％以下、更に５質量％以下が好ましい。
　本発明の製造方法で得られるノビレチンを含有する固体分散体は、様々な飲食品や医薬品、医薬部外品、化粧品等に使用することができる。とりわけ、水系の製品に利用するのが有用である。
　例えば、飲食品としては、飲料、パン類、麺類、クッキー等の菓子類、スナック類、ゼリー類、乳製品、冷凍食品、粉末コーヒー等のインスタント食品、でんぷん加工製品、加工肉製品、その他加工食品、調味料、栄養補助食品等の液状、固形状又は半固形状の飲食品が挙げられる。また、医薬品又は医薬部外品としては、錠剤（チュアブル錠等）、カプセル剤、粉末剤等の剤型が挙げられる。また、化粧品としては、洗浄料、化粧水、メイクアップ用化粧料、日焼け止め用化粧料、ニキビ用化粧料、デオドラント用化粧料、美白用化粧料、洗髪剤、育毛剤等が挙げられる。
　本発明の態様及び好ましい実施態様を以下に示す。
＜１＞ノビレチンを含有する固体分散体の製造方法であって、ノビレチン又はノビレチン含有物と水溶性ヘスペリジン誘導体を混合した後、加熱して溶融させる工程と、溶融した溶融物を冷却し、固化させる工程を含む、製造方法。
＜２＞＜１＞において、ノビレチン又はノビレチン含有物と水溶性ヘスペリジン誘導体混合物中の、ノビレチンの含有量は、混合物中に好ましくは１質量％以上、更に好ましくは３質量％以上、更に好ましくは４質量％以上、更に好ましくは７．５質量％以上、更に好ましくは１０質量％以上、更に好ましくは１５質量％以上であり、好ましくは９０質量％以下、更に好ましくは８０質量％以下、更に好ましくは７５質量％以下、更に好ましくは５０質量％以下、更に好ましくは４０質量％以下、更に好ましくは３５質量％以下である。また、好ましくは１～９０質量％、更に好ましくは３～８０質量％、更に好ましくは４～７５質量％、更に好ましくは７．５～５０質量％、更に好ましくは１０～４０％、更に好ましくは１５～３５％であり、殊更好ましくは２５％である。
＜３＞＜１＞又は＜２＞において、ノビレチン又はノビレチン含有物と水溶性ヘスペリジン誘導体混合物中の、水溶性ヘスペリジン誘導体の含有量は、好ましくは１０質量％以上、更に好ましくは２０質量％以上、更に好ましくは２５質量％以上、更に好ましくは３０％以上、更に好ましくは４５％以上、更に好ましくは６０％以上、更に好ましくは６５％以上であり、好ましくは９９質量％以下、更に好ましくは９７質量％以下、更に好ましくは９６質量％以下、更に好ましくは９２．５％以下、更に好ましくは９０％以下、更に好ましくは８５％以下である。また、好ましくは１０～９９質量％、更に好ましくは２０～９７質量％、更に好ましくは２５～９６質量％、更に好ましくは３０～９２．５％質量％、更に好ましくは４５～９０％質量％、更に好ましくは６０～８５質量％、更に好ましくは６５～８５質量％であり、殊更好ましくは７５質量％である。
＜４＞＜１＞～＜３＞において、ノビレチン又はノビレチン含有物と水溶性ヘスペリジン誘導体を混合する際のノビレチンと水溶性ヘスペリジン誘導体質量比［ノビレチン／水溶性ヘスペリジン誘導体］は、好ましくは０．０１以上、更に好ましくは０．０３以上、更に好ましくは０．０４以上、更に好ましくは０．０７以上、更に好ましくは０．１以上であり、好ましくは９以下、更に好ましくは４以下、更に好ましくは３以下、更に好ましくは１以下、更に好ましくは０．６７以下である。また、好ましくは０．０１～９、更に好ましくは０．０３～４、更に好ましくは０．０４～３、更に好ましくは０．０７～１、更に好ましくは０．１～０．６７であり、殊更好ましくは０．３３である。
＜５＞スクリューを備えた押出機を用いて、ノビレチン又はノビレチン含有物と水溶性ヘスペリジン誘導体を混合した後、加熱して溶融させる工程が行われる＜１＞～＜４＞のいずれかの固体分散体の製造方法。
＜６＞スクリューを備えた押出機が、好ましくは単軸押出機又は二軸押出機であり、より好ましくは二軸押出機であり、更に好ましくはシリンダの内部に２本のスクリューが回転自在に挿入された二軸押出機である＜５＞の固体分散体の製造方法。
＜７＞スクリュー回転数が、好ましくは３０～５００ｒ／ｍｉｎ、より好ましくは５０～３００ｒ／ｍｉｎ、更に好ましくは５０～２５０ｒ／ｍｉｎ、更に好ましくは８０～２００ｒ／ｍｉｎであり、殊更好ましくは８０ｒ／ｍｉｎであるような、＜５＞又は＜６＞の固体分散体の製造方法。
＜８＞せん断速度が、好ましくは１０ｓｅｃ-1以上、より好ましくは２０～３００００ｓｅｃ-1、更に好ましくは５０～３０００ｓｅｃ-1である＜５＞～＜７＞のいずれかの固体分散体の製造方法。
＜９＞＜１＞～＜８＞において、加熱温度は、好ましくは９５℃以上、更に好ましくは１００℃以上、更に好ましくは１０５℃以上であり、好ましくは２００℃以下、更に好ましくは１８５℃以下、更に好ましくは１８０℃以下、更に好ましくは１６０℃以下、更に好ましくは１４０℃以下である。また、好ましくは９５～２００℃、更に好ましくは９５～１８０℃、更に好ましくは１００～１８５℃、更に好ましくは１００～１６０℃、更に好ましくは１０５～１４０℃であり、殊更好ましくは１３０℃である。
＜１０＞＜１＞～＜９＞において、加熱の時間は、水溶性ヘスペリジン誘導体が溶融する温度に達してから好ましくは３０分以下、更に好ましくは１５分以下、更に好ましくは１０分以であり、好ましくは１分以上、更に好ましくは３分以上、更に好ましくは５分以上である。また、好ましくは１～３０分、更に好ましくは３～１５分、更に好ましくは５～１０分であり、殊更好ましくは１０分である。
＜１１＞ノビレチンの結晶化度が、好ましくは５０％以下、より好ましくは４０％以下、更に好ましくは２０％以下、更に好ましくは１０％以下、更に好ましくは５％以下、殊更好ましくは０％である＜１＞～＜１０＞のいずれかの固体分散体の製造方法。
＜１２＞冷却温度が、好ましくは水溶性ヘスペリジン誘導体が溶融する温度よりも低い温度であり、より好ましくは５０℃以下、更に好ましくは３０℃以下であり、更に好ましくは室温（２５℃）の雰囲気下である＜１＞～＜１１＞のいずれかの固体分散体の製造方法。
＜１３＞加熱処理温度から２５℃まで低下するのに要した時間から算出される固体分散体の冷却速度が、好ましくは０．１℃／ｓ以上、より好ましくは０．２℃／ｓ以上、更に好ましくは０．３℃／ｓ以上であり、また、好ましくは１００℃／ｓ以下、より好ましくは５０℃／ｓ以下である＜１＞～＜１２＞のいずれかの固体分散体の製造方法。
＜１４＞冷却時間が、好ましくは３０分以下、より好ましくは２０分以下、更に好ましくは１０分以下、更に好ましくは５分以下である＜１＞～＜１３＞のいずれかの固体分散体の製造方法。
＜１５＞固体分散体中の水分含量が、好ましくは２０質量％以下、より好ましくは１０質量％以下、更に好ましくは７質量％以下、更に好ましくは５質量％以下である＜１＞～＜１４＞のいずれかの固体分散体の製造方法。
＜１６＞水溶性ヘスペリジン誘導体がメチルヘスペリジンである＜１＞～＜１５＞のいずれか固体分散体の製造方法。
＜１７＞ノビレチン又はノビレチン含有物と、水溶性ヘスペリジン誘導体を含有し、ノビレチンがＸ線回折スペクトルから算出される結晶化度１０％以下の状態で分散してなるノビレチン含有固体分散体。
＜１８＞ノビレチン又はノビレチン含有物と、水溶性ヘスペリジン誘導体を含有し、ノビレチンが分散してなる、Ｘ線回折スペクトルから算出される結晶化度１０％以下のノビレチン含有固体分散体。
＜１９＞水溶性ヘスペリジン誘導体がメチルヘスペリジンである＜１７＞又は＜１８＞のノビレチン含有固体分散体。
＜２０＞＜１＞～＜１６＞のいずれかの製造方法により得られ、Ｘ線回折スペクトルから算出されるノビレチンの結晶化度が１０％以下であるノビレチン含有固体分散体。
＜２１＞＜１７＞～＜２０＞のいずれかのノビレチン含有固体分散体を含む飲食品、医薬品又は医薬部外品。
〔難水溶性物質の定量〕
　難水溶性ポリフェノール類の定量は、アジレント・テクノロジー株式会社製高速液体クロマトグラフを用い、化学物質評価研究機構製カラムＬ－Ｃｏｌｕｍｎ ＯＤＳ―２　（４．６ｍｍφ×５０ｍｍ、２μｍ）を装着し、カラム温度４０℃でグラジエント法により行った。
　試料注入量は１０μＬ、移動相Ａ液は０．１重量％トリフルオロ酢酸水溶液、Ｂ液はアセトニトリルとし、１．０ｍＬ／分で送液した。グラジエント条件は以下のとおりである。
　　時間（分）　　　　　Ａ液（％）　　Ｂ液（％）
　　　０　　　　　　　　　９９　　　　　　１
　　　１　　　　　　　　　９９　　　　　　１
　　　４　　　　　　　　　　５　　　　　９５
　　　５　　　　　　　　　　５　　　　　９５
　　　５．０１　　　　　　９９　　　　　　１
　　　６　　　　　　　　　９９　　　　　　１
　検出は、ノビレチンは波長３２０ｎｍ、エラグ酸は波長２５４ｎｍ、ヘスペリジン、セサミンは波長２８０ｎｍの吸光度により定量した。
〔モノグルコシルヘスペリジン（ｍＧＨｅｓ）の精製方法〕
　ｍＧＨｅｓの精製には、ジーエルサイエンス株式会社製高速液体分取クロマトグラフを用い、ジーエルサイエンス株式会社製カラムＩｎｅｒｔｓｉｌ ＯＤＳ―３（１４ｍｍφ×２５０ｍｍ、５μｍ）を装着し、カラム温度４０℃でイソクラティック法により行った。
　分取試料はαＧヘスペリジン ＰＡ－Ｔ（東洋製糖株式会社製）の２０ｗ／ｖ％水溶液を用い、一回の分取における試料注入量は２５０μＬとした。また、移動相はＡ液を０．１重量％トリフルオロ酢酸水溶液、Ｂ液をアセトニトリルとし、Ａ：Ｂ＝２５：７５の混合液を用い、１５．０ｍＬ／分で送液した。検出は波長２８０ｎｍの吸光度を用いた。
　本法により得られたｍＧＨｅｓ含有溶液を減圧濃縮し、アセトニトリルを除去した。本濃縮液をダイヤイオンＨＰ－２０（三菱化学株式会社製樹脂）を用いたカラムクロマトグラフィーにより精製、減圧濃縮した後に凍結乾燥することでｍＧＨｅｓを粉末として得た。本品を固体分散体の原料として使用した。
〔Ｘ線回折分析〕
　Ｘ線回折強度は、株式会社リガク製の「ＭｉｎｉＦｌｅｘＩＩ」を用いて、Ｘ線源：Ｃｕ／Ｋα－ｒａｄｉａｔｉｏｎ、管電圧：３０ｋＶ、管電流：１５ｍＡ、測定範囲：回折角：５～４０°、Ｘ線スキャンスピード：１０°／ｍｉｎの条件で測定した。測定用試料は、面積４００ｍｍ２×厚さ０．５ｍｍのペレットを圧縮して作製した。
〔経時的な溶解性の評価〕
　５０ｍＬのスクリュー管（株式会社マルエム製、Ｎｏ．２、褐色）に、イオン交換水を３０ｍＬ加えた後、固体分散体１００ｍｇ（難水溶性物質２５ｍｇ含有）添加、２ｃｍスターラーチップを用いて５００ｒｐｍで攪拌した。攪拌開始を０分とし、攪拌６時間までの間、適宜その一部を０．４５μｍセルロースアセテートフィルターでろ過し、前記〔難水溶性物質の定量〕に記載した方法によりノビレチン溶解量を定量した。
〔Ｃａｃｏ－２細胞膜透過性評価〕
　試験例１　ヒト大腸癌由来上皮細胞を用いた、難水溶性物質原体およびその固体分散体の小腸上皮の透過促進試験
　Ｃａｃｏ－２細胞（ヒト大腸癌由来上皮細胞、ＤＳファーマバイオケミカル社より入手）を３７℃、５％ＣＯ２存在下で培養した。培養にはＣａｃｏ－２細胞分化培地セット（Ｃｏｒｎｉｎｇ社製）、及びバイオコートフィブリラーコラーゲンＨＴＳマルチウェルインサート（２４ウェル、膜孔１μｍ、Ｃｏｒｎｉｎｇ社製）を用いた。ＭＩＴＯ＋ＴＭシーラム・エクステンダーを添加したシーディング基本培地にＣａｃｏ－２細胞を懸濁してインサート上部（頂端膜側）に播種し、インサート下部（基底膜側）にも同培地を添加した。２４時間のＣａｃｏ－２細胞培養後に、前記シーディング基本培地をＭＩＴＯ＋ＴＭシーラム・エクステンダーを添加したＥｎｔｅｒｏ―ＳＴＩＭ腸上皮分化培地に交換した。その後、さらに４８時間前記細胞を培養し、小腸上皮細胞シート様に分化させた。
　腸管のタイトジャンクションの形成を確認するため、難水溶性物質原体および固体分散体の小腸上皮の透過促進試験直前にＭｉｌｌｉｃｅｌｌ　ＥＲＳ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）を用いて経上皮電気抵抗（ＴＥＥＲ）値を測定し、規定値（３５０Ω・ｃｍ２）以上のＣａｃｏ－２細胞を用いた。
　評価サンプルの調製は以下の通り行った。２０ｍＬのスクリュー管（株式会社マルエム製、Ｎｏ．２、褐色）に、ＨＢＳＳ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製、１０ｍＭ　ＭＥＳ、５ｍＭ　グルコース、１０ｍＭ　グルタミン、１ｍＭ　アスコルビン酸を添加しｐＨ６．０に調製）を６ｍＬ加えた後、難水溶性物質原体１０ｍｇもしくは固体分散体４０ｍｇ（難水溶性物質１０ｍｇ含有）添加し、２ｃｍスターラーチップを用いて３００ｒｐｍで１０分間攪拌した。攪拌後、０．４５μｍセルロースアセテートフィルターでろ過した溶液、およびその希釈液を評価サンプルとして用いた。なお、表１には、本ろ液をＨＢＳＳで３０倍に希釈した溶液をインサート上部仕込み液に使用した評価の結果を示した。
　ＴＥＥＲ測定による細胞選別後、インサート上部及び下部をＨＢＳＳで置換して２回洗浄した。その後、インサート上部には、前記方法で調製した難水溶性物質およびその固体分散体水溶液、その希釈液を添加した。各抽出物の評価濃度を表２に示す。インサート下部には、ＨＢＳＳ（１０ｍＭ　ＨＥＰＥＳ、５ｍＭ　グルコース、１０ｍＭ　グルタミン、pH７．４）を添加した。そしてＣａｃｏ－２細胞を３７℃、５％ＣＯ２存在下で４時間培養した。
　その後、インサート下部のＨＢＳＳを回収し、下記の方法で小腸上皮を透過した難水溶性物質を、液体クロマトグラフ・タンデム型質量分析法（ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）により定量した。
[ＬＣ条件]
　アジレント・テクノロジー株式会社製高速液体クロマトグラフを用い、化学物質評価研究機構製カラムＬ－Ｃｏｌｕｍｎ ＯＤＳ―２　（４．６ｍｍφ×５０ｍｍ、２μｍ）を装着し、カラム温度４０℃でグラジエント法により行った。
　ノビレチン、セサミン、ヘスペリジンの測定では、試料注入量は１０μＬ、移動相Ａ液は０．１重量％ぎ酸水溶液、Ｂ液はアセトニトリルとし、０．６ｍＬ／分で送液した。グラジエント条件は以下の通りである。
　　時間（分）　　　　　Ａ液（％）　　Ｂ液（％）
　　　０　　　　　　　　　９０　　　　　１０
　　　０．５　　　　　　　９０　　　　　１０
　　　４　　　　　　　　　１０　　　　　９０
　　　５　　　　　　　　　１０　　　　　９０
　　　５．０１　　　　　　９０　　　　　１０
　　　６　　　　　　　　　９０　　　　　１０
　エラグ酸の測定では、試料注入量は１０μＬ、移動相Ａ液は５．０重量％ぎ酸水溶液、Ｂ液はアセトニトリルとし、０．６ｍＬ／分で送液した。グラジエント条件は以下の通りである。
　　時間（分）　　　　　Ａ液（％）　　Ｂ液（％）
　　　０　　　　　　　　　９９　　　　　　１
　　　０．５　　　　　　　９９　　　　　　１
　　　４　　　　　　　　　　５　　　　　９５
　　　５　　　　　　　　　　５　　　　　９５
　　　５．０１　　　　　　９９　　　　　　１
　　　６　　　　　　　　　９９　　　　　　１
[ＭＳ／ＭＳ条件]
　質量分析装置はＱＴＲＡＰ(R)４５００（株式会社エービーサイエックス製）を用いた。スキャン条件はＭＲＭ，パラメータテーブルはアナライトで測定した。ノビレチンはポジティブイオンモードによりＭＲＭ（ｍ／Ｚ）４０４．０→３７４．０のイオンを、セサミンはポジティブイオンモードによりＭＲＭ（ｍ／Ｚ）３５５→２７６．９のイオンを、ヘスペリジンはポジティブイオンモードによりＭＲＭ（ｍ／Ｚ）６１１．２→７１．０のイオンを、エラグ酸はネガティブモードによりＭＲＭ（ｍ／Ｚ）３００．９→２８４．０のイオンをそれぞれ検出することで定量した。
[ＬＤＨ活性測定試験による細胞生存率評価]
試験例２　ＬＤＨ活性測定試験
　試験例１のインサート上部のＨＢＳＳを回収し、下記の方法で、細胞膜を構成するＣａｃｏ－２細胞から放出された溶液中のＬＤＨ(Ｌａｃｔａｔｅ　ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ)活性測定から求まる、各評価サンプルの細胞傷害性から細胞生存率を評価した。
　細胞傷害性の評価は、ＬＤＨ　Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ　Ａｓｓａｙ　Ｋｉｔ(Ｃａｙｍａｎ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏｍｐａｎｙ製)を用い、所定の方法により行った。評価終了後のインサート上部の試験溶液をサンプルとし、含有ＬＤＨにより産生されるホルマザン量（４９０ｎｍの吸光強度から定量）からＬＤＨ活性を算出した。なお、細胞生存率算出に当たり、Ｃａｃｏ－２細胞膜透過性評価（試験例１）のサンプルとして１．０％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００のＨＢＳＳ溶液を用いた際の、評価終了後のインサート上部の試験溶液でのＬＤＨ活性を生存率０％に相当する値とした。そして、下記式により、ＬＤＨ活性の変化倍率を算出した。（算出式）細胞生存率（％）＝（１．０％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ　ＨＢＳＳ溶液 評価終了後のインサート上部の試験溶液でのＬＤＨ活性－各サンプル 評価終了後のインサート上部の試験溶液のＬＤＨ活性）÷（１．０％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ　ＨＢＳＳ溶液 評価終了後のインサート上部の試験溶液でのＬＤＨ活性）
　算出式により求まる細胞生存率の結果の平均値及び標準誤差（Ｎ＝３―４）を表１に示す。
[マウス経口投与時のノビレチン血中移行性評価]
（動物）
　Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（雄性、６週齢）を日本クレア(株)より購入した。1週間以上の環境馴化を行った後、試験に供した。試験群一群当たりの動物数は、本試験系で統計的優位を得るのに最小で必要と考えられた８匹とした。（試験溶液の調製）本試験では、ノビレチン原体、ノビレチン－メチルヘスペリジン混合物（比較例５組成物）、ノビレチン－メチルヘスペリジン（実施例１組成物）を投与サンプルとした。ノビレチン原体および比較例５組成物、実施例１組成物を用いて、いずれもノビレチン濃度２０ｍｇ／ｍＬの水溶液もしくは水懸濁液を調製した。
（経口投与及び血漿の調製）
　固形食（ＣＥ－ｓ）の自由摂食下にて１週間当該施設で飼育したマウスを用い試験を行った。マウスを１６時間絶食させ、イソフルラン麻酔下で初期採血を眼下静脈叢より行った（ヘパリン処理ヘマトクリット微量採血管、ＶＩＴＲＥＸ製）後、マウス１個体あたり２００ｍｇ／ｋｇ体重の投与量で、各サンプル溶液をゾンデを用いて胃内投与した。溶液投与後、１０、３０、６０、９０、１２０分後にイソフルラン麻酔下で眼下静脈叢より採血を行った。
　採血した血液を、１２０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、エッペンドルフチューブに血漿を３０μＬずつ回収した。得られた血漿は、ノビレチン含有量測定まで－８０℃で保管した。血漿中のノビレチン濃度はＬＣ－ＭＳ／ＭＳにより測定した。
（血漿サンプル処理）
　回収した血漿３０μＬにアセトニトリル３０μＬを加え、ボルテックスミキサーで５秒間攪拌後、室温下１２０００ｒｐｍで１５分間遠心分離した。得られた上清３０μＬをＬＣ測定用バイアルに回収後、さらにアセトニトリルを３０μＬ添加、ボルテックスミキサーで混和した後にＬＣ－ＭＳ／ＭＳでノビレチン濃度を測定した。
[マウス経口投与時のノビレチン組織移行性評価]
（動物）
　Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（雄性、６週齢）を日本クレア(株)より購入した。1週間以上の環境馴化を行った後、試験に供した。試験群一群当たりの動物数は、本試験系で統計的優位を得るのに最小で必要と考えられた５匹以上とした。
（試験溶液の調製）
　本試験では、ノビレチン原体、ノビレチン－メチルヘスペリジン混合物（比較例５組成物）、ノビレチン－メチルヘスペリジン（実施例１組成物）の３点を投与サンプルとした。ノビレチン原体および比較例５組成物、実施例１組成物を用いて、いずれもノビレチン濃度１５ｍｇ／ｍＬの水溶液もしくは水懸濁液を調製した。
（経口投与及び血漿の調製）
　固形食（ＣＥ－ｓ）の自由摂食下にて1週間当該施設で飼育したマウスを用い試験を行った。マウスを１６時間絶食させ、イソフルラン麻酔下で、マウス１個体あたり５０ｍｇ／ｋｇ体重の投与量で、各サンプル溶液をゾンデを用いて胃内投与した。溶液投与後、３０分後にイソフルラン麻酔下で腹部大静脈からの全採血を行い、安楽死させた。なお採血には、ヘパリン処理ヘマトクリット微量採血管、ＶＩＴＲＥＸ製を使用した。
　その後、全組織灌流下にて脱血し、各組織（肝臓、白色脂肪組織、褐色脂肪組織、腓腹筋、ヒラメ筋、脛骨、大腿骨、左脳、右脳各部位（大脳皮質、海馬））を採取した。また、採血した血液を、１２０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、エッペンドルフチューブに血漿を３０μＬずつ回収した。得られた血漿および各組織サンプルは、ノビレチン含有量測定まで－８０℃で保管した。
（骨組織以外の組織サンプル処理）
　回収した組織１０ｍｇにアセトニトリル３００μＬを加え、ホモジナイザー（ヒスコトロンＮＳ－３１０Ｅ（株式会社マイクロテック・ニチオン製））で３分間攪拌後、４℃、１５０００ｒｐｍで２０分間遠心分離した。得られた上清５０μＬをＬＣ測定用バイアルに回収し、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳでノビレチン濃度を測定した。
（骨組織サンプル処理）
　回収した骨組織１０ｍｇを解剖ばさみで切断、室温下１００００ｒｐｍで１分間遠心分離し脱血した。本サンプルを液体窒素を用いて凍結後、破砕機（クライオプレスＣＰ－１００Ｗ（株式会社マイクロテック・ニチオン製））にて破砕した後に、アセトニトリル３００μＬを加え、超音波処理（超音波洗浄機ＦＵ－９Ｈ（東京硝子器械株式会社製））を１５分行った。得られた上清５０μＬをＬＣ測定用バイアルに回収し、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳでノビレチン濃度を測定した。
実施例１
　ノビレチン（和光純薬工業株式会社製）及び、メチルヘスペリジン（東京化成工業株式会社製）をそれぞれ２５質量％、７５質量％の割合で混合し、その混合物を２軸のエクストルーダー（ＨＡＡＫＥ社製）を用いて、加熱温度：１６０℃、加熱時間：１０分、スクリューの回転数：８０ｒ／ｍｉｎの条件で処理し、２５℃の冷風を吹き付けて５分で２５℃まで冷却を行って（冷却速度：０．５２℃／ｓ）、固体分散体を調製した。このとき、押出機の内部での閉塞はみられず、固体分散体の成形体の排出は良好であった。本固体分散体の粉末Ｘ線回折を図１に示す。ノビレチン由来の回折ピークが消失していることから、本固体分散体中でノビレチンが非晶質化していることが確認され、本固体分散体の結晶化度は０％であると見積もられた。メチルヘスペリジンはＸ線回折でピークを与えないことから、ノビレチンの結晶化度は０％であると見積もられる。
　前記〔経時的な溶解性の評価〕により固体分散体のノビレチンの溶解濃度を測定した結果、攪拌開始６時間後までの曲線下面積（横軸：時間（単位＝分）、縦軸：溶解濃度（単位＝ｐｐｍ））は２．２０×１０５ｐｐｍ・ｍｉｎであり、極めて高い溶解濃度を長時間維持することが示された（図６及び表１－１）。
　また、前記〔Ｃａｃｏ－２細胞膜透過性評価〕による、本固体分散体試験時のインサート上部評価開始時ノビレチン濃度は１３２μＭ、インサート下部評価終了時ノビレチン濃度４．３３μＭであり、高い溶解性によるノビレチン膜透過量の向上が確認された（表１－１）。
実施例２
　難水溶性物質としてノビレチン（和光純薬工業株式会社製）及び、メチルヘスペリジン（東京化成工業株式会社製）をそれぞれ１０質量％、９０質量％の割合で混合したものを、実施例１と同様にして固体分散体を調製した（加熱温度：１６０℃、加熱時間：１０分、スクリューの回転数：８０ｒ／ｍｉｎ）。
　実施例１と同様に、粉末Ｘ線回折測定の結果（図２）から、本固体分散体中でノビレチンが非晶質化されていることが確認され、本固体分散体の結晶化度は０％であると見積もられ、同様にノビレチンの結晶化度も０％であると見積もられる。前記〔経時的な溶解性の評価〕、及び〔Ｃａｃｏ－２細胞膜透過性評価〕の結果を表１－１に示す。
実施例３
　難水溶性物質としてノビレチン（和光純薬工業株式会社製）及び、メチルヘスペリジン（東京化成工業株式会社製）をそれぞれ１５質量％、８５質量％の割合で混合したものを、実施例１と同様にして固体分散体を調製した（加熱温度：１６０℃、加熱時間：１０分、スクリューの回転数：８０ｒ／ｍｉｎ）。
　実施例１と同様に、粉末Ｘ線回折測定の結果（図３）から、本固体分散体中でノビレチンが非晶質化されていることが確認され、本固体分散体の結晶化度は０％であると見積もられ、同様にノビレチンの結晶化度も０％であると見積もられる。前記〔経時的な溶解性の評価〕、及び〔Ｃａｃｏ－２細胞膜透過性評価〕の結果を表１－１に示す。
実施例４
　難水溶性物質としてノビレチン（和光純薬工業株式会社製）及び、メチルヘスペリジン（東京化成工業株式会社製）をそれぞれ２０質量％、８０質量％の割合で混合したものを、実施例１と同様にして固体分散体を調製した（加熱温度：１６０℃、加熱時間：１０分、スクリューの回転数：８０ｒ／ｍｉｎ）。
　実施例１と同様に、粉末Ｘ線回折測定の結果（図４）から、本固体分散体中でノビレチンが非晶質化されていることが確認され、本固体分散体の結晶化度は０％であると見積もられ、同様にノビレチンの結晶化度も０％であると見積もられる。前記〔経時的な溶解性の評価〕、及び〔Ｃａｃｏ－２細胞膜透過性評価〕の結果を表１－１に示す。
実施例５
　難水溶性物質としてノビレチン（和光純薬工業株式会社製）及び、メチルヘスペリジン（東京化成工業株式会社製）をそれぞれ３３質量％、６７質量％の割合で混合したものを、実施例１と同様にして固体分散体を調製した（加熱温度：１６０℃、加熱時間：１０分、スクリューの回転数：８０ｒ／ｍｉｎ）。
　実施例１と同様に、粉末Ｘ線回折測定の結果（図５）から、本固体分散体中でノビレチンが非晶質化されていることが確認され、本固体分散体の結晶化度は０％であると見積もられ、同様にノビレチンの結晶化度も０％であると見積もられる。前記〔経時的な溶解性の評価〕、及び〔Ｃａｃｏ－２細胞膜透過性評価〕の結果を表１－１に示す。
実施例６
　難水溶性物質としてノビレチン（和光純薬工業株式会社製）及び、メチルヘスペリジン（東京化成工業株式会社製）をそれぞれ４０質量％、６０質量％の割合で混合したものを、実施例１と同様にして固体分散体を調製した（加熱温度：１６０℃、加熱時間：１０分、スクリューの回転数：８０ｒ／ｍｉｎ）。
　実施例１と同様に、粉末Ｘ線回折測定の結果（図６）から、本固体分散体中でノビレチンが非晶質化されていることが確認され、本固体分散体の結晶化度は０％であると見積もられ、同様にノビレチンの結晶化度も０％であると見積もられる。前記〔経時的な溶解性の評価〕、及び〔Ｃａｃｏ－２細胞膜透過性評価〕の結果を表１－１に示す。
実施例７
　難水溶性物質としてＰＭＦ９０（株式会社沖縄リサーチセンター製、ノビレチン６０％含有）及び、メチルヘスペリジン（東京化成工業株式会社製）をそれぞれ２５質量％、７５質量％の割合で混合したものを、実施例１と同様にして固体分散体を調製した（加熱温度：１６０℃、加熱時間：１０分、スクリューの回転数：８０ｒ／ｍｉｎ）。
　実施例１と同様に、粉末Ｘ線回折測定の結果（図７）から、本固体分散体中でＰＭＦ９０に含有される結晶性物質が非晶質化されていることが確認され、本固体分散体の結晶化度は０％であると見積もられ、同様にノビレチンの結晶化度も０％であると見積もられる。前記〔経時的な溶解性の評価〕、及び〔Ｃａｃｏ－２細胞膜透過性評価〕の結果を表１－１に示す。
実施例８
　難水溶性物質としてＰＭＦ９０（株式会社沖縄リサーチセンター製）及び、メチルヘスペリジン（東京化成工業株式会社製）をそれぞれ１０質量％、９０質量％の割合で混合したものを、実施例１と同様にして固体分散体を調製した（加熱温度：１６０℃、加熱時間：１０分、スクリューの回転数：８０ｒ／ｍｉｎ）。
　実施例１と同様に、粉末Ｘ線回折測定の結果（図８）から、本固体分散体中でＰＭＦ９０に含有される結晶性物質が非晶質化されていることが確認され、本固体分散体の結晶化度は０％であると見積もられ、同様にノビレチンの結晶化度も０％であると見積もられる。前記〔経時的な溶解性の評価〕、及び〔Ｃａｃｏ－２細胞膜透過性評価〕の結果を表１－１に示す。
実施例９
　難水溶性物質としてＰＭＦ９０（株式会社沖縄リサーチセンター製）及び、メチルヘスペリジン（東京化成工業株式会社製）をそれぞれ３３質量％、６７質量％の割合で混合したものを、実施例１と同様にして固体分散体を調製した（加熱温度：１６０℃、加熱時間：１０分、スクリューの回転数：８０ｒ／ｍｉｎ）。
　実施例１と同様に、粉末Ｘ線回折測定の結果（図９）から、本固体分散体中でＰＭＦ９０に含有される結晶性物質が非晶質化されていることが確認され、本固体分散体の結晶化度は０％であると見積もられ、同様にノビレチンの結晶化度も０％であると見積もられる。前記〔経時的な溶解性の評価〕、及び〔Ｃａｃｏ－２細胞膜透過性評価〕の結果を表１－１に示す。
実施例１０
　難水溶性物質としてＰＭＦ９０（株式会社沖縄リサーチセンター製）及び、メチルヘスペリジン（東京化成工業株式会社製）をそれぞれ４０質量％、６０質量％の割合で混合したものを、実施例１と同様にして固体分散体を調製した（加熱温度：１６０℃、加熱時間：１０分、スクリューの回転数：８０ｒ／ｍｉｎ）。
　実施例１と同様に、粉末Ｘ線回折測定の結果（図１０）から、本固体分散体中でＰＭＦ９０に含有される結晶性物質が非晶質化されていることが確認され、本固体分散体の結晶化度は０％であると見積もられ、同様にノビレチンの結晶化度も０％であると見積もられる。前記〔経時的な溶解性の評価〕、及び〔Ｃａｃｏ－２細胞膜透過性評価〕の結果を表１－１に示す。
実施例１１
　難水溶性物質としてＰＭＦ９０（株式会社沖縄リサーチセンター製）及び、メチルヘスペリジン（東京化成工業株式会社製）をそれぞれ６０質量％、４０質量％の割合で混合したものを、実施例１と同様にして固体分散体を調製した（加熱温度：１６０℃、加熱時間：１０分、スクリューの回転数：８０ｒ／ｍｉｎ）。
　実施例１と同様に、粉末Ｘ線回折測定の結果（図１１）から、本固体分散体中でＰＭＦ９０に含有される結晶性物質が非晶質化されていることが確認され、本固体分散体の結晶化度は０％であると見積もられ、同様にノビレチンの結晶化度も０％であると見積もられる。前記〔経時的な溶解性の評価〕、及び〔Ｃａｃｏ－２細胞膜透過性評価〕の結果を表１－１に示す。
実施例１２
　難水溶性物質としてＰＭＦ９０（株式会社沖縄リサーチセンター製）及び、メチルヘスペリジン（東京化成工業株式会社製）をそれぞれ６７質量％、３３質量％の割合で混合したものを、実施例１と同様にして固体分散体を調製した（加熱温度：１６０℃、加熱時間：１０分、スクリューの回転数：８０ｒ／ｍｉｎ）。
　実施例１と同様に、粉末Ｘ線回折測定の結果（図１２）から、本固体分散体中でＰＭＦ９０に含有される結晶性物質が非晶質化されていることが確認され、本固体分散体の結晶化度は０％であると見積もられ、同様にノビレチンの結晶化度も０％であると見積もられる。前記〔経時的な溶解性の評価〕、及び〔Ｃａｃｏ－２細胞膜透過性評価〕の結果を表１－１に示す。
実施例１３
　難水溶性物質としてＰＭＦ９０（株式会社沖縄リサーチセンター製）及び、モノグルコシルヘスペリジン（以下ｍＧＨｅｓ、東洋製糖株式会社製品αＧヘスペリジン ＰＡ－Ｔを用いて、前記方法によりＨＰＬＣを用いた精製品）をそれぞれ２５質量％、７５質量％の割合で混合したものを、実施例１と同様にして固体分散体を調製した（加熱温度：１６０℃、加熱時間：１０分、スクリューの回転数：８０ｒ／ｍｉｎ）。
　実施例１と同様に、粉末Ｘ線回折測定の結果（図１３）から、本固体分散体中でＰＭＦ９０に含有される結晶性物質が非晶質化されていることが確認され、本固体分散体の結晶化度は０％であると見積もられ、同様にノビレチンの結晶化度も０％であると見積もられる。前記〔経時的な溶解性の評価〕、及び〔Ｃａｃｏ－２細胞膜透過性評価〕の結果を表１－１に示す。
実施例１４
　難水溶性物質としてＰＭＦ９０（株式会社沖縄リサーチセンター製）及び、ｍＧＨｅｓをそれぞれ３３質量％、６７質量％の割合で混合したものを、実施例１と同様にして固体分散体を調製した（加熱温度：１６０℃、加熱時間：１０分、スクリューの回転数：８０ｒ／ｍｉｎ）。
　実施例１と同様に、粉末Ｘ線回折測定の結果（図１４）から、本固体分散体中でＰＭＦ９０に含有される結晶性物質が非晶質化されていることが確認され、本固体分散体の結晶化度は０％であると見積もられ、同様にノビレチンの結晶化度も０％であると見積もられる。前記〔経時的な溶解性の評価〕、及び〔Ｃａｃｏ－２細胞膜透過性評価〕の結果を表１－１に示す。
実施例１５
　難水溶性物質としてＰＭＦ９０（株式会社沖縄リサーチセンター製）及び、αＧヘスペリジン ＰＡ－Ｔ（東洋製糖株式会社製）をそれぞれ２５質量％、７５質量％の割合で混合したものを、実施例１と同様にして固体分散体を調製した（加熱温度：１６０℃、加熱時間：１０分、スクリューの回転数：８０ｒ／ｍｉｎ）。
　実施例１と同様に、粉末Ｘ線回折測定の結果（図１５）から、本固体分散体中でＰＭＦ９０に含有される結晶性物質が非晶質化されていることが確認され、本固体分散体の結晶化度は０％であると見積もられ、同様にノビレチンの結晶化度も０％であると見積もられる。前記〔経時的な溶解性の評価〕、及び〔Ｃａｃｏ－２細胞膜透過性評価〕の結果を表１－１に示す。
実施例１６
　難水溶性物質としてＰＭＦ９０（株式会社沖縄リサーチセンター製）及び、αＧヘスペリジン ＰＡ－Ｔ（東洋製糖株式会社製）をそれぞれ３３質量％、６７質量％の割合で混合したものを、実施例１と同様にして固体分散体を調製した（加熱温度：１６０℃、加熱時間：１０分、スクリューの回転数：８０ｒ／ｍｉｎ）。
　実施例１と同様に、粉末Ｘ線回折測定の結果（図１６）から、本固体分散体中でＰＭＦ９０に含有される結晶性物質が非晶質化されていることが確認され、本固体分散体の結晶化度は０％であると見積もられ、同様にノビレチンの結晶化度も０％であると見積もられる。前記〔経時的な溶解性の評価〕、及び〔Ｃａｃｏ－２細胞膜透過性評価〕の結果を表１－１に示す。
比較例１
　難水溶性物質としてエラグ酸二水和物（東京化成工業株式会社）及び、メチルヘスペリジン（東京化成工業株式会社製）をそれぞれ２５質量％、７５質量％の割合で混合したものを、実施例１と同様にして固体分散体を調製した（加熱温度：１６０℃、加熱時間：１０分、スクリューの回転数：８０ｒ／ｍｉｎ）。
　実施例１と同様に、粉末Ｘ線回折測定の結果（図１７）から、本固体分散体中でエラグ酸が非晶質化されていることが確認された。前記〔経時的な溶解性の評価〕、及び〔Ｃａｃｏ－２細胞膜透過性評価〕の結果を図６及び表１－２に示す。
比較例２
　難水溶性物質としてエラグ酸二水和物（東京化成工業株式会社製）及び、メチルヘスペリジン（東京化成工業株式会社製）をそれぞれ２５質量％、７５質量％の割合で混合したものを、実施例１と同様にして固体分散体を調製した（加熱温度：１８０℃、加熱時間：１０分、スクリューの回転数：８０ｒ／ｍｉｎ）。実施例１と同様に、粉末Ｘ線回折測定の結果（図１８）から、本固体分散体中でエラグ酸が非晶質化されていることが確認された。前記〔経時的な溶解性の評価〕及び〔Ｃａｃｏ－２細胞膜透過性評価〕の結果を図６及び表１－２に示す。
比較例３
　難水溶性物質としてセサミン（ＣＨＲＯＭＡＤＥＸ　ＩＮＣ．製）及び、メチルヘスペリジン（東京化成工業株式会社製）をそれぞれ２５質量％、７５質量％の割合で混合したものを、実施例１と同様にして固体分散体を調製した（加熱温度：１６０℃、加熱時間：１０分、スクリューの回転数：８０ｒ／ｍｉｎ）。実施例１と同様に、粉末Ｘ線回折測定の結果（図１９）から、本固体分散体中でセサミンが非晶質化されていることが確認された。前記〔経時的な溶解性の評価〕及び〔Ｃａｃｏ－２細胞膜透過性評価〕の結果を図６及び表１－２に示す。
比較例４
　難水溶性物質としてヘスペリジン（東京化成工業株式会社製）及び、メチルヘスペリジン（東京化成工業株式会社製）をそれぞれ２５質量％、７５質量％の割合で混合したものを、実施例１と同様にして固体分散体を調製した（加熱温度：１６０℃、加熱時間：１０分、スクリューの回転数：８０ｒ／ｍｉｎ）。実施例１と同様に、粉末Ｘ線回折測定の結果（図２０）から、本固体分散体中でヘスペリジンが非晶質化されていることが確認された。前記〔経時的な溶解性の評価〕及び〔Ｃａｃｏ－２細胞膜透過性評価〕の結果を図６及び表１－２に示す。
　比較例５
　難水溶性物質としてノビレチン（和光純薬工業株式会社製）及び、メチルヘスペリジン（東京化成工業株式会社製）をそれぞれ２５質量％、７５質量％の割合で混合したものを評価した。粉末Ｘ線回折測定の結果（図２１）から、本混合物中ではノビレチンが結晶として存在することを確認した。前記〔経時的な溶解性の評価〕及び〔Ｃａｃｏ－２細胞膜透過性評価〕の結果を表１－２に示す。
比較例６
　難水溶性物質としてＰＭＦ９０（株式会社沖縄リサーチセンター製）及び、メチルヘスペリジン（東京化成工業株式会社製）をそれぞれ２５質量％、７５質量％の割合で混合したものを評価した。前記〔経時的な溶解性の評価〕及び〔Ｃａｃｏ－２細胞膜透過性評価〕の結果を表１－２に示す。
比較例７
　難水溶性物質としてＰＭＦ９０（株式会社沖縄リサーチセンター製）及び、メチルヘスペリジン（東京化成工業株式会社製）をそれぞれ４０質量％、６０質量％の割合で混合したものを評価した。前記〔経時的な溶解性の評価〕及び〔Ｃａｃｏ－２細胞膜透過性評価〕の結果を表１－２に示す。
比較例８
　難水溶性物質としてＰＭＦ９０（株式会社沖縄リサーチセンター製）及び、ｍＧＨｅｓをそれぞれ２５質量％、７５質量％の割合で混合したものを評価した。前記〔経時的な溶解性の評価〕及び〔Ｃａｃｏ－２細胞膜透過性評価〕の結果を表１－２に示す。
比較例９
　難水溶性物質としてＰＭＦ９０（株式会社沖縄リサーチセンター製）及び、αＧヘスペリジン ＰＡ－Ｔをそれぞれ２５質量％、７５質量％の割合で混合したものを評価した。前記〔経時的な溶解性の評価〕及び〔Ｃａｃｏ－２細胞膜透過性評価〕の結果を表１－２に示す。
[マウス経口投与時のノビレチン血中移行性]
　ノビレチン、比較例５記載の組成物および実施例１記載の組成物を用いた、マウス経口投与時のノビレチン血中移行性について、投与後１８０分までのノビレチン血中濃度推移を図７に、血中濃度推移曲線における最高血中濃度（Ｃｍａｘ）と曲線下部面積（ＡＵＣ）を表２に示した。ノビレチン原体ではＣｍａｘ＝３．７μｇ／ｍＬ（投与後６０分）、ＡＵＣ＝３２３μｇ／（ｍＬ・ｍｉｎ）、比較例５記載の組成物ではＣｍａｘ＝１１．１μｇ／ｍＬ（投与後３０分）、ＡＵＣ＝９５６μｇ／（ｍＬ・ｍｉｎ）であるのに対し、固体分散体である実施例１記載の組成物では、Ｃｍａｘ＝３６．４μｇ／ｍＬ（投与後３０分）、ＡＵＣ＝３５５０μｇ／（ｍＬ・ｍｉｎ）と大幅に血中移行量が増加した。
[マウス経口投与時のノビレチン組織移行性]
　ノビレチン、比較例５記載の組成物および実施例１記載の組成物を用いた、マウス経口投与時のノビレチン組織移行性について、投与後３０分での各組織におけるノビレチン移行量を表３に示した。ノビレチン原体、比較例５記載の組成物に対し、固体分散体である実施例１記載の組成物では、検討した組織に対する移行量が大幅に増加した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000005
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000006
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000007
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000008
　以上より、ノビレチン含有固体分散体におけるノビレチンの経時的溶解性は、例えば実施例１の如く２．２０×１０５ｐｐｍ・ｍｉｎと極めて高く、高い溶解濃度が長時間維持されていた（表１－１及び図２３）。
　斯かる高い溶解性は、ノビレチンと同様に難溶性のポリフェノールとして知られているヘスペリジン、セサミン又はエラグ酸をそれぞれメチルヘスペリジンと混合して製造される固体分散体と比較して、固体分散体中及び水溶液中におけるノビレチン－メチルヘスペリジンの特異的な分子間相互作用が存在するためと推察される。
　また、ノビレチン含有固体分散体は、ヒト小腸上皮細胞由来の細胞膜に対する透過性も極めて優れており、上記他の難溶性のポリフェノールの固体分散体と比較して、水溶性ヘスペリジン誘導体のノビレチン可溶化能が著しく高いこと、さらにノビレチンの過飽和現象が高濃度かつ長時間発現しているためと推察される。Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ　Ｓｙｓｔｅｍ（ＢＣＳ）においてＣｌａｓｓ　４に分類されるような各種化合物では、高溶解性を実現したとしても細胞膜透過性・経口吸収性は向上しない。また、記載全ての実施例・比較例における細胞膜透過性評価時のインサート上部添加液は、同じ方法により調製したものであることから、ノビレチンの高溶解こそが本固体分散体の極めて優れたノビレチンの細胞膜透過性を実現していると考えられ、更に動物を用いた経口投与実験での高い血中移行性、組織移行性を実現していると考えられる。
　したがって、本発明のノビレチン含有固体分散体を用いることにより、ノビレチンの経口吸収性を高めることが期待される。

Claims (11)

  1. 　ノビレチンを含有する固体分散体の製造方法であって、ノビレチン又はノビレチン含有物と、水溶性ヘスペリジン誘導体を混合した後、加熱して溶融させる工程と、溶融した溶融物を冷却し、固化させる工程を含む、製造方法。
  2. 　加熱温度が９５～２００℃、好ましくは１００～１８５℃である請求項１記載の固体分散体の製造方法。
  3. 　加熱温度が９５～１８０℃、好ましくは１００～１６０℃である請求項１記載の固体分散体の製造方法。
  4. 　ノビレチン又はノビレチン含有物と水溶性ヘスペリジン誘導体を混合する際の水溶性ヘスペリジン誘導体に対するノビレチンの質量比［ノビレチン／水溶性ヘスペリジン誘導体］が０．０１～０．６７である請求項１～３のいずれか１項記載の固体分散体の製造方法。
  5. 　スクリューを備えた押出機を用いて、ノビレチン又はノビレチン含有物と水溶性ヘスペリジン誘導体を混合した後、加熱して溶融させる工程が行われる請求項１～４のいずれか１項記載の固体分散体の製造方法。
  6. 　水溶性ヘスペリジン誘導体がメチルヘスペリジンである請求項１～５のいずれか１項記載の固体分散体の製造方法。
  7. 　ノビレチン又はノビレチン含有物と、水溶性ヘスペリジン誘導体を含有し、ノビレチンがＸ線回折スペクトルから算出される結晶化度１０％以下の状態で分散してなるノビレチン含有固体分散体。
  8. 　ノビレチン又はノビレチン含有物と、水溶性ヘスペリジン誘導体を含有し、ノビレチンが分散してなる、Ｘ線回折スペクトルから算出される結晶化度１０％以下のノビレチン含有固体分散体。
  9. 　水溶性ヘスペリジン誘導体がメチルヘスペリジンである請求項７又は８記載のノビレチン含有固体分散体。
  10. 　請求項１～６のいずれか１項記載の製造方法により得られ、Ｘ線回折スペクトルから算出されるノビレチンの結晶化度が１０％以下であるノビレチン含有固体分散体。
  11. 　請求項７～１０のいずれか１項記載のノビレチン含有固体分散体を含有する飲食品、医薬品又は医薬部外品。
PCT/JP2017/027923 2016-08-04 2017-08-01 ノビレチン含有固体分散体の製造方法 Ceased WO2018025871A1 (ja)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201780049260.XA CN109562095B (zh) 2016-08-04 2017-08-01 含川陈皮素的固体分散体的制造方法
US16/322,601 US11160782B2 (en) 2016-08-04 2017-08-01 Method for producing nobiletin-containing solid dispersion

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2016153635 2016-08-04
JP2016-153635 2016-08-04
JP2017-025302 2017-02-14
JP2017025302 2017-02-14

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2018025871A1 true WO2018025871A1 (ja) 2018-02-08

Family

ID=61073672

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/JP2017/027923 Ceased WO2018025871A1 (ja) 2016-08-04 2017-08-01 ノビレチン含有固体分散体の製造方法

Country Status (4)

Country Link
US (1) US11160782B2 (ja)
JP (1) JP6322755B1 (ja)
CN (1) CN109562095B (ja)
WO (1) WO2018025871A1 (ja)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2019182032A1 (ja) * 2018-03-22 2019-09-26 花王株式会社 ノビレチン含有固体分散体の製造方法

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2020125246A (ja) * 2019-02-01 2020-08-20 花王株式会社 認知機能障害改善剤
CN115902028B (zh) * 2022-12-07 2026-02-06 天津中医药大学 一种利用uplc-ms/ms测定陈皮中17种有效成分含量的方法
CN116077441B (zh) * 2022-12-30 2025-03-28 广州医科大学 一种川陈皮素固体分散体和在制备防治肝损伤药物中的应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2014125461A (ja) * 2012-12-27 2014-07-07 Kao Corp ポリフェノール組成物の製造方法
WO2016031651A1 (ja) * 2014-08-29 2016-03-03 花王株式会社 難溶解性ポリフェノール類を含有する固体分散体の製造方法

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP3571899B2 (ja) 1997-12-18 2004-09-29 小川香料株式会社 香味劣化抑制剤
JP4633897B2 (ja) 2000-08-17 2011-02-16 長瀬産業株式会社 神経突起伸長剤
CN104306367A (zh) 2004-11-08 2015-01-28 爱科来株式会社 过氧化物酶体增殖物激活受体活化剂及其用途
JP2009007336A (ja) * 2007-05-25 2009-01-15 Shiseido Co Ltd α−グリコシルヘスペリジンを含有する経口投与・摂取用の、メラニン低下剤、皮膚明度低下抑制剤、皮膚粘弾性低下抑制剤、皮脂量低下抑制剤、ＳＣＦ産生抑制剤、およびかゆみ抑制剤
JP5735254B2 (ja) * 2009-10-22 2015-06-17 花王株式会社 経口紫外線抵抗性向上剤
EP2907395B1 (en) * 2012-10-12 2018-12-12 University of The Ryukyus Methods for manufacturing substance containing nobiletin and tangeretin derived from citrus fruits

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2014125461A (ja) * 2012-12-27 2014-07-07 Kao Corp ポリフェノール組成物の製造方法
WO2016031651A1 (ja) * 2014-08-29 2016-03-03 花王株式会社 難溶解性ポリフェノール類を含有する固体分散体の製造方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ONOUE S ET AL.: "Physicochemical and biopharmaceutical characterization of amorphous solid dispersion of nobiletin, a citrus polymethoxylated flavone, with improved hepatoprotective effects", EUR J PHARM SCI., vol. 49, no. 4, 2013, pages 453 - 460, XP028676551 *
ONOUE, S ET AL.: "Development of high-energy amorphous solid dispersion of nanosized nobiletin, a citrus polymethoxylated flavone, with improved oral bioavailability", J PHARM SCI., vol. 100, no. 9, 2011, pages 3793 - 3801, XP055462040 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2019182032A1 (ja) * 2018-03-22 2019-09-26 花王株式会社 ノビレチン含有固体分散体の製造方法
CN111936132A (zh) * 2018-03-22 2020-11-13 花王株式会社 含川陈皮素的固体分散体的制造方法
EP3769760A4 (en) * 2018-03-22 2021-12-22 Kao Corporation PROCESS FOR PRODUCING A NOBILETIN CONTAINING SOLIDS DISPERSION
US11236060B2 (en) 2018-03-22 2022-02-01 Kao Corporation Method for producing solid dispersion containing nobiletin

Also Published As

Publication number Publication date
CN109562095B (zh) 2022-02-11
CN109562095A (zh) 2019-04-02
US11160782B2 (en) 2021-11-02
US20190183852A1 (en) 2019-06-20
JP6322755B1 (ja) 2018-05-09
JP2018131432A (ja) 2018-08-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6322755B1 (ja) ノビレチン含有固体分散体の製造方法
US10894058B2 (en) Method for producing solid dispersion containing hardly soluble polyphenol
JP6633791B2 (ja) ノビレチン含有固体分散体の製造方法
EP2292242A1 (en) A scutellarin derivative, the preparing process, the pharmaceutical composition and the use thereof
WO2022234922A1 (ko) 들깻잎 유래 나노베지클을 유효성분으로 포함하는 암의 예방, 개선 또는 치료용 조성물
TWI436773B (zh) Melanin-producing inhibitors and pharmaceuticals, foods or cosmetics that have melanin inhibitory effects
CN104039329B (zh) 含去鼠李糖洋丁香酚苷的橄榄提取物
EP4023246A1 (en) Solid composition containing amorphous, poorly water-soluble material, and method for producing same
CN113260359A (zh) 酒精解毒剂
JP2020125246A (ja) 認知機能障害改善剤
CN101678056A (zh) 固体甜菜色素组合物和方法
JP2016053000A (ja) 水分散性の良いシリマリン含有組成物
TWI873094B (zh) 癌細胞之增殖抑制用組合物、抗癌用組合物、正常細胞之癌化抑制用組合物、癌症發病抑制用組合物、及癌細胞死亡誘導用組合物
JP5566008B2 (ja) 多糖類含有組成物
JP2017048135A (ja) レスベラトロール組成物及びその製造方法
JP2006151922A (ja) アントシアニン吸収促進剤
JP3958502B2 (ja) アポトーシスを誘導する新規多糖およびその用途
CN116869958B (zh) 一种醋柳黄酮固体分散体、固体制剂及制备方法
JP2021011455A (ja) フロレチン−４−α−グルコシドの結晶
JP7663347B2 (ja) 非晶質の難水溶性素材を含有する固体組成物、及びその製造方法
JPH04159225A (ja) アセチルコリンエステラーゼ阻害剤
KR20180009316A (ko) 3-O-갈로일-3,3',5,5',7-펜타하이드록시플라반(3-O-galloyl-3,3',5,5',7- pentahydroxyflavan)을 포함하는 인지 기능 개선용 조성물
JP2026013023A (ja) 腫瘍細胞増殖抑制剤
WO2026078719A1 (en) Hexahydroxyflavone compositions, and applications thereof
JP2022035343A (ja) がん細胞のアポトーシス促進、及び／又は、増殖抑制剤

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 17836974

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 17836974

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1