WO2017159554A1 - 還元型グルタチオンの結晶及びその製造方法 - Google Patents

還元型グルタチオンの結晶及びその製造方法 Download PDF

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WO2017159554A1
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crystal
crystals
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一成 福本
茉耶 井口
宏 長野
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協和発酵バイオ株式会社
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    • C30B7/00—Single-crystal growth from solutions using solvents which are liquid at normal temperature, e.g. aqueous solutions
    • C30B7/08—Single-crystal growth from solutions using solvents which are liquid at normal temperature, e.g. aqueous solutions by cooling of the solution
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
    • C07B2200/00—Indexing scheme relating to specific properties of organic compounds
    • C07B2200/13—Crystalline forms, e.g. polymorphs

Definitions

  • the present invention relates to a crystal of reduced glutathione excellent in powder physical properties and a method for producing the same.
  • Reduced glutathione ( ⁇ -L-glutamyl-L-cysteinyl-L-glycine) is a reducing compound widely present in living organisms and is known to have a detoxifying action in the liver. For this reason, reduced glutathione is widely used as products, raw materials, or intermediates such as pharmaceuticals, health foods, and cosmetics.
  • Two types of crystal polymorphs, ⁇ -crystal and ⁇ -crystal, are known for reduced glutathione crystals (Non-patent Document 1), but the ⁇ -crystal is generally used as a product because of its physical properties. .
  • ⁇ -crystals of reduced glutathione tend to become needle-like or elongated columnar crystals because of slow crystal growth in directions other than the major axis (longitudinal) direction. Because of this property, there is a problem that the specific volume increases and the fluidity of the powder deteriorates as a result of an increase in the ratio of the length and width of the crystal. In order to improve the powder physical properties, it is necessary to grow the crystal not only in the vertical direction but also in the horizontal direction and the height direction.
  • Patent Document 1 describes the improvement of the powder physical properties of reduced glutathione, and after adding crystals of reduced glutathione as seed crystals to an aqueous solution in which reduced glutathione is dissolved, the aqueous solution is stirred to Discloses a method for precipitating reduced glutathione.
  • Patent Document 1 is a method in which supersaturation is rapidly broken by adding seed crystals to a high-concentrated reduced glutathione-containing aqueous solution. There was a problem that was insufficient.
  • an object of the present invention is to provide reduced glutathione crystals excellent in fluidity and grindability and a method for producing the same.
  • the present invention relates to the following (1) to (10).
  • FIG. 1 shows the change in the crude specific volume over time when the crystals of reduced glutathione obtained in Example 3 and Comparative Example were pulverized.
  • the vertical axis represents the crude specific volume (mL / g), and the horizontal axis represents the grinding time (minutes).
  • the white diamond represents the result of the comparative example crystal
  • the black circle represents the result of the crystal of Example 3.
  • FIG. 2 shows a schematic diagram of a reduced glutathione crystal of the present invention.
  • the longest axis is referred to as the vertical axis
  • the axis perpendicular to the vertical axis is referred to as the horizontal axis (FIG. 2).
  • the length of the crystal in the vertical axis direction, the major axis of the cross section of the horizontal axis, and the minor axis of the cross section of the horizontal axis are referred to as “crystal length”, “crystal width”, and “crystal thickness”, respectively.
  • the respective averages are referred to as “average length”, “average width”, and “average thickness” (see FIG. 2).
  • the average length, average width, and average thickness are also referred to as “L”, “W”, and “T”, respectively.
  • L, W and T can be measured by the method described in the analysis examples described later.
  • the length of the crystal and the width of the crystal can be measured, for example, using an optical microscope [DIGITAL MICROSCOPE VHX-900 (KEYENCE)] at a measurement magnification of 300 to 600 times.
  • the crystal length and the crystal width are measured for 200 crystals, and the average length L, the average width W, and the ratio L / W between the average length L and the average width W are calculated (FIG. 2, left diagram).
  • the thickness of the crystal can be measured, for example, using a scanning electron microscope [JSM-6510 type (manufactured by JEOL Ltd.)] at a measurement magnification of 250 to 1000 times. For example, for 50 crystals, a crystal whose vertical axis is perpendicular to the field of view of the scanning electron microscope is selected, the crystal thickness is measured (FIG. 2, right diagram), and the average thickness T is measured. The sample is fixed to an aluminum sample stage with carbon double-sided tape.
  • JSM-6510 type manufactured by JEOL Ltd.
  • the crystals of reduced glutathione of the present invention have an average crystal thickness (T) of 10 ⁇ m or more, preferably 11 ⁇ m or more, more preferably 12 ⁇ m or more, and most preferably 13 ⁇ m or more.
  • a crystal having a large crystal thickness is excellent in grindability, so that the reduced glutathione crystal preferably has a large crystal thickness, but the upper limit of the average thickness of the reduced glutathione crystal of the present invention is usually 40 ⁇ m or less, preferably 35 ⁇ m or less, more preferably 30 ⁇ m or less, and most preferably 25 ⁇ m or less.
  • the ratio L / W of the average length L to the average width W is preferably 6.0 or less, more preferably 5.5 or less, still more preferably 5.0 or less, most preferably 4.5 or less.
  • L / W is preferably small for reduced glutathione crystals, but the lower limit of L / W is usually 1.0 or more, preferably 1.1 or more, more preferably 1.2 or more, most preferably Preferably, 1.5 or more can be mentioned.
  • Examples of the reduced glutathione crystals of the present invention include reduced glutathione crystals having an average crystal thickness (T) of 10 ⁇ m or more and a crystal L / W of preferably 6.0 or less.
  • the reduced glutathione crystal of the present invention has a crude specific volume of preferably 2.5 mL / g or less, more preferably 2.3 mL / g or less, still more preferably 2.2 mL / g or less, and most preferably 2.0 mL. / G or less.
  • the reduced glutathione crystal preferably has a small crude specific volume, but the lower limit of the crude specific volume is usually 1.0 mL / g or more, preferably 1.2 mL / g or more. .
  • the coarse specific volume means a value obtained by dividing the volume occupied by the powder when the container is filled with the powder and its mass is measured.
  • the crude specific volume can be measured, for example, using a multi-tester MT-1001T type (manufactured by Seishin Enterprise Co., Ltd.) according to the attached manual under the following measurement conditions.
  • Examples of the reduced glutathione crystals of the present invention include reduced glutathione crystals having an average crystal thickness (T) of 10 ⁇ m or more and a crude specific volume of preferably 2.5 mL / g or less.
  • the reduced glutathione crystals of the present invention have a dense specific volume of preferably 2.0 mL / g or less, more preferably 1.8 mL / g or less, still more preferably 1.6 mL / g or less, and most preferably 1.5 mL. / G or less.
  • the reduced glutathione crystal preferably has a small dense specific volume, but the lower limit of the dense specific volume is usually 0.8 mL / g or more, preferably 1.0 mL / g or more. .
  • the dense specific volume is a value obtained by dividing the volume occupied by the powder by applying a certain impact to the container after the container is filled with the powder and measuring its mass.
  • the dense specific volume can be measured, for example, using a multi-tester MT-1001T type (manufactured by Seishin Enterprise Co., Ltd.) according to the attached manual under the following measurement conditions.
  • Tapping speed 1 time / second Tapping frequency: 200 times
  • Examples of the reduced glutathione crystals of the present invention include reduced glutathione crystals having an average crystal thickness (T) of 10 ⁇ m or more and a dense specific volume of preferably 2.0 mL / g or less.
  • the difference between the crude specific volume and the dense specific volume is preferably 1.2 mL / g or less, more preferably 1.0 mL / g or less.
  • the lower limit of the difference between the crude specific volume and the dense specific volume is usually 0.1 mL / g or more, preferably 0.2 mL / g or more.
  • the difference between the coarse specific volume and the dense specific volume refers to a positive value when the dense specific volume is subtracted from the coarse specific volume.
  • the reduced glutathione crystal of the present invention has an average crystal thickness (T) of 10 ⁇ m or more, and preferably L / W of the crystal of 6.0 or less, and there is a difference between the crude specific volume and the dense specific volume.
  • T average crystal thickness
  • Preferred examples include reduced glutathione crystals of 1.2 mL / g or less.
  • the crystal of reduced glutathione of the present invention has an angle of repose of preferably 50 degrees or less, more preferably 48 degrees or less, still more preferably 47 degrees or less, and most preferably 45 degrees or less.
  • the reduced glutathione crystal preferably has a small angle of repose, but the lower limit of the angle of repose is usually 30 degrees or more, preferably 35 degrees or more.
  • the angle of repose refers to the angle formed between the generatrix of the cone formed by the powder and the horizontal plane when the powder is gently dropped onto a horizontal surface like a funnel.
  • the angle of repose can be measured, for example, using a multitester MT-1001T type (manufactured by Seishin Enterprise Co., Ltd.) according to the attached manual under the following measurement conditions.
  • Examples of the reduced glutathione crystals of the present invention include reduced glutathione crystals having an average crystal thickness (T) of 10 ⁇ m or more and an angle of repose of preferably 50 degrees or less.
  • the crystal of reduced glutathione of the present invention has a collapse angle of preferably 45 degrees or less, more preferably 43 degrees or less, still more preferably 42 degrees or less, and most preferably 40 degrees or less.
  • the difference between the collapse angle and the repose angle is preferably small, but the lower limit value of the collapse angle is usually 30 degrees or more, preferably Can mention 35 degrees or more.
  • the decay angle is formed when a constant impact is indirectly applied to a cone formed by powder when the powder is gently dropped on a horizontal surface like a funnel.
  • the collapse angle can be measured, for example, using a multi-tester MT-1001T type (manufactured by Seishin Enterprise Co., Ltd.) according to the attached manual under the following measurement conditions.
  • Examples of the reduced glutathione crystals of the present invention include reduced glutathione crystals having an average crystal thickness (T) of 10 ⁇ m or more and a collapse angle of preferably 45 degrees or less.
  • the crystal of reduced glutathione of the present invention may be a crystalline powder containing crystal polymorphs such as ⁇ crystal and ⁇ crystal, but ⁇ crystal is preferable as the crystal of reduced glutathione.
  • the ratio of ⁇ crystal in the total reduced glutathione is usually 95% or more, preferably 97% or more, more preferably 98% or more, further preferably 99% or more, particularly preferably 99.5% or more, Most preferred is a crystalline powder of 99.9% or more.
  • the production method of the present invention comprises reducing glutathione crystals in a reduced glutathione-containing aqueous solution, and then adding a supersaturated reduced glutathione-containing aqueous solution to the aqueous solution in a continuous or divided manner.
  • the method is characterized in that crystals of reduced glutathione are precipitated and / or grown, and then crystals of reduced glutathione contained in the aqueous solution are collected.
  • the reduced glutathione-containing aqueous solution may be produced by any production method such as a fermentation method, an enzyme method, an extraction method from a natural product, or a chemical synthesis method.
  • a culture containing reduced glutathione obtained by culturing a microorganism having the ability to produce glutathione International Publication No. 2008/126784
  • an aqueous solution containing reduced glutathione obtained by an enzymatic method [Appl. Microbiol. Biotechnol., 66, 233 (2004), Japanese Patent Application Laid-Open No. 60-105499, etc.] and the like can be mentioned.
  • More preferred is an aqueous solution of reduced glutathione obtained by the method described in Example 1 of Japanese Patent No. 5243963.
  • the reduced glutathione-containing aqueous solution for example, by concentrating the reduced glutathione-containing aqueous solution to a concentration equal to or higher than the saturation solubility, the reduced glutathione-containing aqueous solution is converted into the reduced glutathione-containing aqueous solution.
  • An example is a method of crystallization. Stirring may be involved when concentrating and crystallizing.
  • the method for concentrating the reduced glutathione-containing aqueous solution is not particularly limited, and examples thereof include evaporation under reduced pressure conditions and a method using a reverse osmosis membrane.
  • the concentration of reduced glutathione in the reduced glutathione-containing aqueous solution when crystallizing reduced glutathione is usually 100 g / L or higher, preferably 250 g / L or higher, more preferably 400 g / L or higher. .
  • a method for allowing the reduced glutathione crystals to exist in the reduced glutathione-containing aqueous solution for example, before concentrating the reduced glutathione-containing aqueous solution to crystallize the reduced glutathione crystals, A method may be mentioned in which a crystal of reduced glutathione is added as a seed crystal to cause crystallization so that the concentration of is usually 0.05 to 25 g / L, preferably 0.1 to 10 g / L. Stirring may be involved in adding the seed crystal to cause crystallization.
  • the temperature at which the crystal of reduced glutathione is crystallized is usually 0 to 50 ° C., preferably 5 to 40 ° C., more preferably 10 to 30 ° C.
  • reduced glutathione crystals By adding a supersaturated reduced glutathione-containing aqueous solution continuously or divided into an aqueous solution in which reduced glutathione crystals are present, reduced glutathione crystals can be precipitated and / or grown.
  • Precipitating and / or growing reduced glutathione crystals means adding a supersaturated reduced glutathione-containing aqueous solution to 1) newly crystallize reduced glutathione crystals in the reduced glutathione-containing aqueous solution. 2) increasing the crystallized crystals, and 3) increasing the crystals of reduced glutathione present in the reduced glutathione-containing aqueous solution before adding the supersaturated reduced glutathione-containing aqueous solution. Contains.
  • the supersaturated reduced glutathione-containing aqueous solution can be prepared by the same method as described above.
  • the temperature at which the supersaturated reduced glutathione-containing aqueous solution is added is not particularly limited as long as the reduced glutathione does not decompose, but is usually 0 to 50 ° C., preferably 5 to 40 ° C., more preferably 10 -30 ° C can be mentioned.
  • the supersaturated reduced glutathione-containing aqueous solution may be added continuously at a constant rate, or the total amount of the solution may be divided and added.
  • the supersaturated reduced glutathione-containing aqueous solution When the supersaturated reduced glutathione-containing aqueous solution is added in portions, the supersaturated reduced glutathione-containing aqueous solution can be added in an arbitrary number of times, and each addition can be spaced at an arbitrary interval. it can. Further, when the supersaturated reduced glutathione-containing aqueous solution is not added, only stirring may be continued.
  • the time required for adding the supersaturated reduced glutathione-containing aqueous solution is usually 4 to 50 hours, preferably 7 to 40 hours, more preferably 10 to 30 hours.
  • the amount of the supersaturated reduced glutathione-containing aqueous solution to be added is usually 2 to 200 times equivalent, preferably 5 to 100 times equivalent to the reduced glutathione-containing aqueous solution obtained by crystallization of reduced glutathione crystals. More preferably, an equivalent amount of 8 to 50 times can be mentioned.
  • Precipitation and / or growth of glutathione crystals can be promoted by adding a reduced glutathione-containing aqueous solution and then cooling.
  • a cooling temperature it is 40 degrees C or less normally, Preferably it is 30 degrees C or less, More preferably, 20 degrees C or less can be mentioned.
  • a solvent selected from the group consisting of alcohols and ketones is added or dropped as necessary to promote precipitation and / or growth of reduced glutathione crystals. You can also
  • a solution in which alcohols or ketones and water are mixed at an arbitrary ratio can also be used.
  • alcohols preferably C1-C6 alcohols, more preferably C1-C3 alcohols, and still more preferably alcohols selected from the group consisting of methanol, ethanol, n-propanol and isopropyl alcohol, Most preferably, alcohols selected from the group consisting of methanol and ethanol can be mentioned.
  • the ketones are preferably ketones selected from acetone, methyl ethyl ketone and diethyl ketone, more preferably acetone.
  • the temperature at which alcohols and ketones are added or dropped may be any temperature as long as the reduced glutathione does not decompose, but in order to reduce the solubility and improve the crystallinity of the reduced glutathione crystals.
  • 40 ° C. or lower preferably 30 ° C. or lower, more preferably 25 ° C. or lower, and most preferably 20 ° C. or lower.
  • 0 degreeC or more normally, Preferably 5 degreeC or more can be mentioned.
  • the amount of alcohols and ketones to be added or dripped is usually 0.1 to 3 times, preferably 0.2 to 2 times the amount of the aqueous solution.
  • the aqueous solution containing the further grown crystals is usually 1 to 48 hours, preferably 1 to 24 hours, most preferably 1 to 12 hours, Usually, the crystals can be aged by stirring or leaving at 0 to 40 ° C., preferably 5 to 30 ° C., more preferably 5 to 20 ° C.
  • Aging refers to stopping the process of precipitating reduced glutathione crystals and further growing the crystals.
  • Crystal ripening is performed mainly for the purpose of growing a crystal, but a new crystal may be precipitated simultaneously with the growth of the crystal.
  • the step of precipitating and / or growing the crystal of reduced glutathione may be resumed.
  • Examples of a method for collecting the crystal of reduced glutathione obtained by precipitation and / or growth as described above or an aqueous solution containing the crystal of reduced glutathione obtained by further aging include, for example, filtration, pressurization, and the like. Examples thereof include filtration, suction filtration, and centrifugal separation. Further, in order to reduce the adhesion of the mother liquor to the crystal and improve the quality of the crystal, the crystal may be appropriately washed after collecting the crystal.
  • solution used for washing water, methanol, ethanol, acetone, n-propanol, isopropyl alcohol, and one kind of solution selected from them, or a solution in which a plurality of kinds are mixed in any ratio can be used.
  • the wet crystals obtained above may be dried.
  • the drying conditions may be any method as long as the reduced glutathione crystals can be maintained, and examples thereof include reduced-pressure drying, vacuum drying, fluidized bed drying, and ventilation drying.
  • the drying temperature may be any as long as it can remove adhering moisture and solution and the reduced glutathione does not decompose, but it is usually 70 ° C. or lower, preferably 60 ° C. or lower, more preferably 50 ° C. or lower.
  • the reduced glutathione crystal of the present invention obtained by the above method can be further pulverized to produce the reduced glutathione crystal of the present invention.
  • Crystal crushing can be performed, for example, using an Osterizer Oster Vintage Blender 16-speed dual range (Osterizer OSTER) under the following conditions.
  • Example 1 Production of crystal of the present invention-1
  • an aqueous solution containing reduced glutathione at a concentration of 125 g / L was obtained.
  • the aqueous solution was concentrated to 530 g / L under heating and reduced pressure.
  • 0.02 g of ⁇ -type crystals of reduced glutathione (manufactured by Kojin Co., Ltd.) was added as seed crystals to 180 mL of the concentrated solution at 25 ° C., and stirred to crystallize ⁇ -type crystals of reduced glutathione. .
  • aqueous solution 3850 mL of a reduced glutathione-containing aqueous solution concentrated to 520 to 530 g / L was added at 25 ° C. over 17 hours to precipitate and / or grow crystals.
  • the obtained aqueous solution containing ⁇ -form crystals of reduced glutathione was cooled to 10 ° C., 0.3 times the equivalent amount of ethanol was added, and then the aqueous solution layer was removed by centrifugation to obtain the reduced form
  • the ⁇ -form crystals of glutathione were washed with 30 v / v% ethanol and dried by blowing air at 40 ° C. to obtain ⁇ -form crystals of reduced glutathione.
  • Example 2 Production of crystal of the present invention-2 A reduced glutathione-containing aqueous solution obtained in the same manner as in Example 1 was concentrated to 436 g / L under heating and reduced pressure. Addition of 0.02 g of ⁇ -type crystals of reduced glutathione (made by Kojin Co., Ltd.) as seed crystals to 330 mL of the concentrated solution at 25 ° C. and stirring to form ⁇ -type crystals of reduced glutathione I let you. To this aqueous solution, 2920 mL of a reduced glutathione aqueous solution concentrated to 420 to 430 g / L was added at 25 ° C. over 11 hours to precipitate and / or grow crystals.
  • the resulting reduced glutathione aqueous solution containing ⁇ -form crystals is cooled to 10 ° C., 0.3 times the equivalent amount of ethanol is added, and then the aqueous solution layer is removed by centrifugation to obtain the reduced glutathione obtained
  • the ⁇ -form crystal was washed with 30 v / v% ethanol and dried by blowing air at 40 ° C. to obtain ⁇ -form crystal of reduced glutathione.
  • Example 3 Production of crystal of the present invention-3 A reduced glutathione-containing solution containing reduced glutathione at a concentration of 134 g / L was prepared in the same manner as in Example 1, and then concentrated to 540 g / L under heating and reduced pressure. 0.02 g of glutathione ⁇ -type crystals (manufactured by Kojin Co., Ltd.) were added as seed crystals to 190 mL of the concentrated liquid at 25 ° C., and stirred to crystallize ⁇ -type crystals of reduced glutathione. .
  • aqueous solution 3920 mL of a reduced glutathione aqueous solution concentrated to 540 to 550 g / L was added at 25 ° C. over 15 hours to precipitate and / or grow crystals.
  • the obtained aqueous solution containing ⁇ -form crystals of reduced glutathione was cooled to 10 ° C., 0.3 times the equivalent amount of ethanol was added, and then the aqueous solution layer was removed by centrifugation to obtain the reduced form
  • the ⁇ -form crystals of glutathione were washed with 30 v / v% ethanol and dried under reduced pressure at room temperature using a box can to obtain ⁇ -form crystals of reduced glutathione.
  • the obtained aqueous solution containing ⁇ -form crystals of reduced glutathione was cooled to 10 ° C., 0.3 times the equivalent amount of ethanol was added, and then the aqueous solution layer was removed by centrifugation to obtain the reduced form
  • the ⁇ -form crystals of glutathione were washed with 60 v / v% ethanol and dried under reduced pressure at 40 ° C. to obtain ⁇ -form crystals of reduced glutathione.
  • Example 4 Measurement of powder physical properties ⁇ -type crystals of reduced glutathione obtained in Examples 1 to 3, ⁇ -type crystals of reduced glutathione obtained in Comparative Examples, and ⁇ -type crystals of commercially available reduced glutathione For (commercial products A and B), the average length L, the average width W, the ratio L / W of the average length L and the average width W, the crude specific volume and the dense specific volume were measured. The results are shown in Table 1.
  • the ⁇ -type crystals of reduced glutathione obtained in Examples 1 to 3 were crystals compared to the ⁇ -type crystals of reduced glutathione obtained in Comparative Example and the commercial product A. It was found that the average thickness T was large and the grindability was excellent.
  • Example 5 Production of crystal of the present invention-4 The ⁇ -type crystals of reduced glutathione obtained in Example 3 and Comparative Example were pulverized, and the change in the crude specific volume over time was measured.
  • Example 3 Further, the crude specific volume of the ⁇ -type crystals of reduced glutathione obtained in Example 3 was smaller than the crude specific volume of the ⁇ -type crystals of reduced glutathione obtained in the comparative example at any pulverization time. .
  • Example 3 As shown in Table 3, the ⁇ -type crystals of reduced glutathione obtained in Example 3 were compared with the ⁇ -type crystals of reduced glutathione obtained in Comparative Example both before and after pulverization. Since the repose angle and the collapse angle were small, it was found that the fluidity was good and the powder physical properties were excellent.
  • the crystal of the present invention was superior in pulverization and powder physical properties to existing reduced glutathione crystals.

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Abstract

本発明は、流動性及び粉砕性に優れたグルタチオンの結晶、並びにその製造方法を提供する。本発明は、結晶の平均厚みが１０μｍ以上である、還元型グルタチオンの結晶に関する。

Description

還元型グルタチオンの結晶及びその製造方法
　本発明は、粉体物性に優れた還元型グルタチオンの結晶及びその製造方法に関する。
　還元型グルタチオン（γ－Ｌ－グルタミル－Ｌ－システイニル－Ｌ－グリシン）は生物に広く存在する還元性化合物であり、肝臓において解毒作用を有することが知られている。このため、還元型グルタチオンは医薬品、健康食品及び化粧品等の製品、原料又は中間体として広く用いられている。還元型グルタチオンの結晶にはα晶とβ晶という２種類の結晶多形が知られている（非特許文献１）が、その物性より、一般に製品として利用されるのはα晶の方である。
　しかしながら、還元型グルタチオンのα晶の結晶は長軸（縦）方向以外への結晶成長が遅いため、針状や細長い柱状の結晶になりやすい。この性質のために、結晶の長さと幅の比が大きくなる結果、比容積が増大し、粉体の流動性が悪化するという問題がある。粉体物性を改善するためには、結晶を縦方向だけでなく、横方向や高さの方向にも成長させることが必要である。
　特許文献１には、還元型グルタチオンの粉体物性の改善に関する記載があり、還元型グルタチオンが溶解している水溶液に還元型グルタチオンの結晶を種晶として添加した後、撹拌することで該水溶液中に還元型グルタチオンを析出させる方法が開示されている。
日本国特許第５２４３９６３号明細書
Ｙａｍａｓａｋｉ，Ｋ．ｅｔ　ａｌ．，分析化学，１８（７），ｐ８７４－８７８（１９６９）
　特許文献１の方法は、高濃度の還元型グルタチオン含有水溶液に種晶を添加することによって過飽和を急激に破る方法であるため、結晶の縦方向以外への成長が追いつかず、粉体物性の改善が不十分であるという問題があった。
　したがって、本発明は、流動性及び粉砕性に優れた還元型グルタチオンの結晶、並びにその製造法を提供することを目的とする。
　本発明は、以下の（１）～（１０）に関する。
（１）結晶の平均厚みが１０μｍ以上である、還元型グルタチオンの結晶。
（２）結晶の平均長Ｌと、平均幅Ｗの比Ｌ／Ｗが、６．０以下である、（１）に記載の結晶。
（３）粗比容が２．５ｍＬ／ｇ以下である、（１）又は（２）記載の結晶。
（４）密比容が２．０ｍＬ／ｇ以下である、（１）～（３）のいずれか１に記載の結晶。
（５）安息角が５０度以下である、（１）～（４）のいずれか１に記載の結晶。
（６）崩壊角が４５度以下である、（１）～（５）のいずれか１に記載の結晶。
（７）還元型グルタチオンの結晶がα晶である、（１）～（６）のいずれか１に記載の結晶。
（８）還元型グルタチオン含有水溶液中に還元型グルタチオンの結晶を存在せしめた後、該水溶液に、過飽和状態の還元型グルタチオン含有水溶液を連続又は分割しながら添加することにより、還元型グルタチオンの結晶を析出及び／又は成長させ、その後、該水溶液中に含有される還元型グルタチオンの結晶を採取することを特徴とする、還元型グルタチオンの結晶の製造方法。
（９）さらに、採取した還元型グルタチオンの結晶を粉砕する工程を含む、（８）に記載の製造方法。
（１０）還元型グルタチオンの結晶がα晶である、（８）又は（９）に記載の製造方法。
　本発明により、流動性及び粉砕性に優れた還元型グルタチオンの結晶、並びにその製造方法が提供される。
図１は、実施例３と比較例で得られた還元型グルタチオンの結晶を粉砕したときの、経時の粗比容の変化を表わす。縦軸は粗比容（ｍＬ／ｇ）を、横軸は粉砕時間（分）を表わす。図１において、白ひし形は比較例の結晶、黒丸は実施例３の結晶の結果を表わす。 図２は、本発明の還元型グルタチオンの結晶の模式図を表わす。
１．本発明の結晶
　本明細書においては、顕微鏡を用いて結晶を３次元で把握したときに、最も長い軸を縦軸といい、縦軸に垂直な軸を横軸という（図２）。さらに、結晶の縦軸方向の長さ、横軸の断面の長径、横軸の断面の短径を、それぞれ、「結晶の長さ」、「結晶の幅」、及び「結晶の厚み」といい（図２参照）、それぞれの平均を、「平均長」、「平均幅」、「平均厚み」という。
　また、平均長、平均幅、平均厚みは、それぞれ、「Ｌ」、「Ｗ」、及び「Ｔ」ともいう。Ｌ、Ｗ及びＴは、後述の分析例に記載の方法により測定することができる。
　結晶の長さ及び結晶の幅は、例えば、光学顕微鏡［ＤＩＧＩＴＡＬ　ＭＩＣＲＯＳＣＯＰＥ　ＶＨＸ－９００（ＫＥＹＥＮＣＥ）］を用い、３００～６００倍の測定倍率で測定することができる。例えば、結晶２００個について結晶の長さと結晶の幅を測定し、平均長Ｌ、平均幅Ｗ、及び平均長Ｌと平均幅Ｗの比Ｌ／Ｗを算出する（図２、左図）。
　結晶の厚みは、例えば、走査型電子顕微鏡［ＪＳＭ－６５１０型（日本電子社製）］を用い、測定倍率２５０～１０００倍で測定することができる。例えば、結晶５０個について、走査型電子顕微鏡視野に対して結晶の縦軸が垂直となったものを選び、結晶の厚みを測定し（図２、右図）、平均厚みＴを測定する。試料は、アルミ製試料台にカーボン両面テープで固定する。
　本発明の還元型グルタチオンの結晶は、結晶の平均厚み（Ｔ）が１０μｍ以上、好ましくは１１μｍ以上、より好ましくは１２μｍ以上、最も好ましくは１３μｍ以上である。
　結晶の厚みが大きい結晶は、粉砕性に優れるため、還元型グルタチオンの結晶としては、結晶の厚みが大きいものが好ましいが、本発明の還元型グルタチオンの結晶の平均厚みの上限値としては、通常４０μｍ以下、好ましくは３５μｍ以下、より好ましくは３０μｍ以下、最も好ましくは２５μｍ以下を挙げることができる。
　本発明の還元型グルタチオンの結晶は、平均長Ｌと平均幅Ｗの比Ｌ／Ｗが、好ましくは６．０以下、より好ましくは５．５以下、さらに好ましくは５．０以下、最も好ましくは４．５以下である。
　Ｌ／Ｗが大きい結晶は、針状や細長い柱状の結晶であり、比容積が大きく、粉体の流動性が悪い。そのため、還元型グルタチオンの結晶としてはＬ／Ｗが小さいことが好ましいが、Ｌ／Ｗの下限値としては、通常１．０以上、好ましくは１．１以上、より好ましくは１．２以上、最も好ましくは１．５以上を挙げることができる。
　本発明の還元型グルタチオンの結晶としては、結晶の平均厚み（Ｔ）が１０μｍ以上で、かつ結晶のＬ／Ｗが好ましくは６．０以下の還元型グルタチオンの結晶を挙げることができる。
　本発明の還元型グルタチオンの結晶は、粗比容が、好ましくは２．５ｍＬ／ｇ以下、より好ましくは２．３ｍＬ／ｇ以下、さらに好ましくは２．２ｍＬ／ｇ以下、最も好ましくは２．０ｍＬ／ｇ以下である。
　粗比容が小さい結晶は、充填性に優れ、各種加工工程におけるハンドリングが容易であり、また輸送面でのコストも低い。そのため、還元型グルタチオンの結晶としては、粗比容が小さいことが好ましいが、粗比容の下限値としては、通常１．０ｍＬ／ｇ以上、好ましくは１．２ｍＬ／ｇ以上を挙げることができる。
　ここで、粗比容とは、容器に粉体を充填してその質量を測定した際、粉体の占める容積を該質量で割った値をいう。粗比容は、例えば、マルチテスターＭＴ－１００１Ｔ型（セイシン企業社製）を用い、付属のマニュアルに従って以下の測定条件で測定することができる。
［粗比容の測定条件］
ふるい：１．４ｍｍ
スペーサ：３０ｍｍ
振動幅：０．６～０．７ｍｍ
結晶容量：４０ｍＬ
　本発明の還元型グルタチオンの結晶としては、結晶の平均厚み（Ｔ）が１０μｍ以上で、かつ粗比容が好ましくは２．５ｍＬ／ｇ以下の還元型グルタチオンの結晶を挙げることができる。
　本発明の還元型グルタチオンの結晶は、密比容が、好ましくは２．０ｍＬ／ｇ以下、より好ましくは１．８ｍＬ／ｇ以下、さらに好ましくは１．６ｍＬ／ｇ以下、最も好ましくは１．５ｍＬ／ｇ以下である。
　密比容が小さい結晶は、充填性に優れ、輸送面でのコストも低い。そのため、還元型グルタチオンの結晶としては、密比容が小さいことが好ましいが、密比容の下限値としては、通常０．８ｍＬ／ｇ以上、好ましくは１．０ｍＬ／ｇ以上を挙げることができる。
　ここで、密比容とは、容器に粉体を充填してその質量を測定したのちに容器に一定の衝撃を加えた際、粉体の占める容積を該質量で割った値をいう。密比容は、例えば、マルチテスターＭＴ－１００１Ｔ型（セイシン企業社製）を用い、付属のマニュアルに従って以下の測定条件で測定することができる。
［密比容の測定条件］
タッピング速度：１回／秒
タッピング回数：２００回
　本発明の還元型グルタチオンの結晶としては、結晶の平均厚み（Ｔ）が１０μｍ以上で、かつ密比容が好ましくは２．０ｍＬ／ｇ以下の還元型グルタチオンの結晶を挙げることができる。
　本発明の還元型グルタチオンの結晶は、粗比容と密比容の差が、好ましくは１．２ｍＬ／ｇ以下、より好ましくは１．０ｍＬ／ｇ以下である。粗比容と密比容の差の下限値としては、通常０．１ｍＬ／ｇ以上、好ましくは０．２ｍＬ／ｇ以上を挙げることができる。ここで、粗比容と密比容の差とは、粗比容から密比容を引いた際の正の値のことをいう。
　本発明の還元型グルタチオンの結晶としては、結晶の平均厚み（Ｔ）が１０μｍ以上で、かつ結晶のＬ／Ｗが好ましくは６．０以下であり、かつ粗比容と密比容の差が好ましくは１．２ｍＬ／ｇ以下の還元型グルタチオンの結晶を挙げることができる。
　本発明の還元型グルタチオンの結晶は、安息角が、好ましくは５０度以下、より好ましくは４８度以下、さらに好ましくは４７度以下、最も好ましくは４５度以下である。
　安息角が大きい結晶は、ホッパーから排出する際、ホッパー底部の傾斜角が安息角の角度よりも大きくなければホッパー底部から完全に排出することができないので、装置が限定され、ハンドリングが煩雑となる。また、安息角が大きい結晶は、流動性が悪い。そのため、還元型グルタチオンの結晶としては、安息角が小さいことが好ましいが、安息角の下限としては、通常３０度以上、好ましくは３５度以上を挙げることができる。
　ここで、安息角とは、粉体を漏斗のようなもので水平な面に静かに落下させた時に粉体で形成される円錐体の母線と水平面のなす角のことをいう。安息角は、例えば、マルチテスターＭＴ－１００１Ｔ型（セイシン企業社製）を用い、付属のマニュアルに従って以下の測定条件で測定することができる。
［安息角の測定条件］
　安息角テーブルに振動を与えないように回転して、３ヶ所で角度を読み、それらの相加平均値を安息角とする。
ふるい：１．４ｍｍ
振動幅：０．６～０．７ｍｍ
安息角テーブルユニット（部品番号：ＭＴ－１０２８）使用
　本発明の還元型グルタチオンの結晶としては、結晶の平均厚み（Ｔ）が１０μｍ以上で、かつ安息角が好ましくは５０度以下の還元型グルタチオンの結晶を挙げることができる。
　本発明の還元型グルタチオンの結晶は、崩壊角が、好ましくは４５度以下、より好ましくは４３度以下、さらに好ましくは４２度以下、最も好ましくは４０度以下である。
　崩壊角と安息角の差が大きい結晶は噴流性が高く制御が困難であるため、崩壊角と安息角の差は小さいことが好ましいが、崩壊角の下限値としては、通常３０度以上、好ましくは３５度以上を挙げることができる。
　ここで、崩壊角とは、粉体を漏斗のようなもので水平な面に静かに落下させた時に粉体で形成される円錐体に、間接的に一定の衝撃を加えた際形成される、円錐体の母線と水平面のなす角のことをいう。崩壊角は、例えば、マルチテスターＭＴ－１００１Ｔ型（セイシン企業社製）を用い、付属のマニュアルに従って以下の測定条件で測定することができる。
［崩壊角の測定条件］
　安息角テーブルユニットの下についている鍾をゆっくりタッピングテーブルの下まで持ち上げて落下させる操作を３回繰り返す。上記安息角の測定方法と同様の方法で、３ヶ所の角度を読み、それらの相加平均値を崩壊角とする。
　本発明の還元型グルタチオンの結晶としては、結晶の平均厚み（Ｔ）が１０μｍ以上で、かつ崩壊角が好ましくは４５度以下の還元型グルタチオンの結晶を挙げることができる。
　本発明の還元型グルタチオンの結晶は、α晶及びβ晶などの結晶多形を含む結晶性粉末であってもよいが、還元型グルタチオンの結晶としてはα晶が好ましい。結晶性粉末としては総還元型グルタチオンに占めるα晶の比率が通常９５％以上、好ましくは９７％以上、より好ましくは９８％以上、さらに好ましくは９９％以上、特に好ましくは９９．５％以上、最も好ましくは９９．９％以上である結晶性粉末を挙げることができる。
２．本発明の製造方法
　本発明の製造方法は、還元型グルタチオン含有水溶液中に還元型グルタチオン結晶を存在せしめた後、該水溶液に過飽和状態の還元型グルタチオン含有水溶液を連続又は分割しながら添加することにより、還元型グルタチオンの結晶を析出及び／又は成長させ、その後、該水溶液中に含有される還元型グルタチオンの結晶を採取することを特徴とする方法である。
　還元型グルタチオン含有水溶液は、発酵法、酵素法、天然物からの抽出法、化学合成法等のいずれの製造方法によって製造されたものであってもよい。例えば、グルタチオンを生産する能力を有する微生物を培養して得られる還元型グルタチオンを含有する培養物（国際公開第２００８／１２６７８４号）、及び酵素法で得られる還元型グルタチオン含有水溶液［Appl. Microbiol. Biotechnol., 66, 233 (2004)、日本国特開昭６０－１０５４９９号公報等］等から不溶物を除去する等して得られる溶液を挙げることができる。より好ましくは日本国特許第５２４３９６３号明細書の実施例１に記載の方法で得られる還元型グルタチオンの水溶液を挙げることができる。
　還元型グルタチオン含有水溶液中に還元型グルタチオンの結晶を存在せしめる方法としては、例えば、還元型グルタチオン含有水溶液を飽和溶解度以上の濃度に濃縮することにより、還元型グルタチオン含有水溶液に還元型グルタチオンの結晶を起晶させる方法を挙げることができる。濃縮して起晶させる際に攪拌を伴ってもよい。
　還元型グルタチオン含有水溶液の濃縮の方法に特に制限はなく、例えば、減圧条件下での蒸発や逆浸透膜を用いた方法を挙げることができる。
　還元型グルタチオンの結晶を起晶させるときの還元型グルタチオン含有水溶液の還元型グルタチオンの濃度としては、通常１００ｇ／Ｌ以上、好ましくは２５０ｇ／Ｌ以上、より好ましくは４００ｇ／Ｌ以上を挙げることができる。
　また、還元型グルタチオン含有水溶液中に還元型グルタチオンの結晶を存在せしめる方法としては、例えば、還元型グルタチオン含有水溶液を濃縮して還元型グルタチオンの結晶を起晶させる前に、還元型グルタチオン含有水溶液中の濃度が通常０．０５～２５ｇ／Ｌ、好ましくは０．１～１０ｇ／Ｌ、となるように、還元型グルタチオンの結晶を種晶として添加して起晶させる方法を挙げることができる。種晶を添加し起晶させる際に攪拌を伴ってもよい。
　還元型グルタチオンの結晶を起晶させるときの温度としては、通常０～５０℃、好ましくは５～４０℃、より好ましくは１０～３０℃を挙げることができる。
　還元型グルタチオンの結晶を存在せしめた水溶液中に、過飽和状態の還元型グルタチオン含有水溶液を連続又は分割しながら添加することにより、還元型グルタチオンの結晶を析出及び／又は成長させることができる。
　還元型グルタチオンの結晶を析出及び／又は成長させるとは、過飽和状態の還元型グルタチオン含有水溶液を添加することにより、１）還元型グルタチオン含有水溶液中に、新たに還元型グルタチオンの結晶を起晶させること、２）当該起晶させた結晶を増大させること、及び３）過飽和状態の還元型グルタチオン含有水溶液を添加する前に還元型グルタチオン含有水溶液に存在せしめた還元型グルタチオンの結晶を増大させることを含んでいる。
　過飽和状態の還元型グルタチオン含有水溶液は、上記と同様の方法により調製することができる。
　過飽和状態の還元型グルタチオン含有水溶液を添加するときの温度としては、還元型グルタチオンが分解しない範囲であれば特に制限はないが、通常０～５０℃、好ましくは５～４０℃、より好ましくは１０～３０℃を挙げることができる。
　過飽和状態の還元型グルタチオン含有水溶液の添加は、一定の速度で連続して行ってもよいし、全液量を分割して添加してもよい。
　過飽和状態の還元型グルタチオン含有水溶液を分割して添加するときは、過飽和状態の還元型グルタチオン含有水溶液を任意の回数に分けて添加することができ、それぞれの添加には任意の間隔を空けることができる。また、過飽和状態の還元型グルタチオン含有水溶液を添加していないときは、撹拌のみを継続してもよい。
　過飽和状態の還元型グルタチオン含有水溶液の添加に要する時間は、通常４～５０時間、好ましくは７～４０時間、より好ましくは１０～３０時間を挙げることができる。
　添加する過飽和状態の還元型グルタチオン含有水溶液の量としては、還元型グルタチオンの結晶を起晶させた還元型グルタチオン含有水溶液に対して、通常２～２００倍等量、好ましくは５～１００倍等量、より好ましくは８～５０倍等量を挙げることができる。
　還元型グルタチオン含有水溶液を添加した後、冷却することにより、グルタチオンの結晶の析出及び／又は成長を促進させることができる。冷却温度としては、通常４０℃以下、好ましくは３０℃以下、より好ましくは２０℃以下を挙げることができる。
　過飽和状態の還元型グルタチオン含有水溶液を添加した後、必要に応じてアルコール類及びケトン類からなる群より選ばれる溶媒を添加又は滴下することにより、還元型グルタチオンの結晶の析出及び／又は成長を促進することもできる。
　アルコール類及びケトン類からなる群より選ばれる溶媒に代えて、アルコール類又はケトン類と水を任意の割合で混ぜた溶液を用いることもできる。
　アルコール類としては、好ましくはＣ１～Ｃ６のアルコール類を、より好ましくはＣ１～Ｃ３のアルコール類を、さらに好ましくは、メタノール、エタノール、ｎ－プロパノール及びイソプロピルアルコールからなる群より選ばれるアルコール類を、最も好ましくは、メタノール及びエタノールからなる群より選ばれるアルコール類を挙げることができる。
　ケトン類としては、好ましくは、アセトン、メチルエチルケトン及びジエチルケトンから選ばれるケトン類を、より好ましくはアセトンを挙げることができる。
　アルコール類及びケトン類を添加又は滴下するときの温度としては、還元型グルタチオンが分解しない温度であればいずれの温度でもよいが、溶解度を下げて還元型グルタチオンの結晶の結晶化率を向上させるために、通常４０℃以下、好ましくは３０℃以下、より好ましく２５℃以下、最も好ましくは２０℃以下を挙げることができる。温度の下限値としては、通常０℃以上、好ましくは５℃以上を挙げることができる。
　アルコール類及びケトン類を添加又は滴下する量としては、該水溶液の通常０．１～３倍量、好ましくは０．２～２倍量を挙げることができる。
　上記のようにして還元型グルタチオンの結晶を析出及び／又は成長させた後、さらに成長した結晶を含む水溶液を、通常１～４８時間、好ましくは１～２４時間、最も好ましくは１～１２時間、通常０～４０℃、好ましくは５～３０℃、より好ましくは５～２０℃にて、攪拌又は放置することにより、当該結晶を熟成させることができる。
　熟成させるとは、還元型グルタチオンの結晶を析出させる工程を停止して、結晶をさらに成長させることをいう。
　結晶の熟成は、結晶を成長させることを主な目的として行うが、結晶の成長と同時に、新たな結晶の析出が起こっていてもよい。
　結晶を熟成させた後に、還元型グルタチオンの結晶を析出及び／又は成長させる工程を再開してもよい。
　上記で析出及び／若しくは成長させて得られる還元型グルタチオンの結晶、又はさらに熟成させて得られた還元型グルタチオンの結晶を含む水溶液から該結晶を採取する方法としては、例えば、濾取、加圧濾過、吸引濾過、遠心分離等を挙げることができる。さらに結晶への母液の付着を低減し、結晶の品質を向上させるために、結晶を採取した後、適宜、結晶を洗浄してもよい。
　洗浄に用いる溶液に特に制限はないが、水、メタノール、エタノール、アセトン、ｎ－プロパノール、イソプロピルアルコール及びそれらから選ばれる１種類の溶液又は複数種類を任意の割合で混合した溶液を用いることができる。
　上記で得られた湿晶を乾燥してもよい。乾燥条件としては、還元型グルタチオンの結晶の形態を保持できる方法ならばいずれでもよく、例えば、減圧乾燥、真空乾燥、流動層乾燥、通風乾燥等を挙げることができる。
　乾燥温度としては、付着水分や溶液を除去でき、還元型グルタチオンが分解しない範囲ならばいずれでもよいが、通常７０℃以下、好ましくは６０℃以下、より好ましくは５０℃以下を挙げることができる。
　上記の方法によって取得された本発明の還元型グルタチオンの結晶を、さらに粉砕することによって本発明の還元型グルタチオンの結晶を製造することができる。結晶の粉砕は、例えば、オスタライザー　オスター　ビンテージ・ブレンダ―　１６スピード　デュアルレンジ（Ｏｓｔｅｒｉｚｅｒ　ＯＳＴＥＲ）を用い、以下の条件で行うことができる。
［結晶粉砕の条件］
回転数：３３７００～３３９００ｒ／ｍｉｎ
直径：５０ｍｍ
サンプル投入量：２０ｇ／回
　以下に実施例を示すが、本発明は下記実施例に限定されるものではない。
［実施例１］
本発明の結晶の製造－１
　日本国特許第５２４３９６３号明細書の実施例１に記載された方法に従い、還元型グルタチオンを１２５ｇ／Ｌの濃度で含む水溶液を得た。当該水溶液を加熱減圧下で５３０ｇ／Ｌまで濃縮した。２５℃の該濃縮液１８０ｍＬに、種晶として還元型グルタチオンのα型の結晶０．０２ｇ（興人社製）添加し、撹拌することで、還元型グルタチオンのα型の結晶を起晶させた。
　該水溶液に、５２０～５３０ｇ／Ｌに濃縮した還元型グルタチオン含有水溶液３８５０ｍＬを２５℃で１７時間かけて添加し、結晶を析出及び／又は成長させた。得られた還元型グルタチオンのα型の結晶を含む水溶液を１０℃まで冷却し、０．３倍等量のエタノールを添加した後、遠心分離することにより水溶液層を除去して得られた還元型グルタチオンのα型の結晶を３０ｖ／ｖ％エタノールで洗浄し、４０℃の空気を通風させることで乾燥させ、還元型グルタチオンのα型の結晶を得た。
［実施例２］
本発明の結晶の製造－２
　実施例１と同様の方法で得た還元型グルタチオン含有水溶液を加熱減圧下で４３６ｇ／Ｌまで濃縮した。２５℃の該濃縮液３３０ｍＬに対し、種晶として還元型グルタチオンのα型の結晶０．０２ｇ（興人社製）を添加し、撹拌することで、還元型グルタチオンのα型の結晶を起晶させた。該水溶液に、４２０～４３０ｇ／Ｌに濃縮した還元型グルタチオン水溶液２９２０ｍＬを２５℃で１１時間かけて添加し、結晶を析出及び／又は成長させた。
　得られた還元型グルタチオンのα型の結晶を含む水溶液を１０℃まで冷却し、０．３倍等量のエタノールを添加した後遠心分離することにより水溶液層を除去して得られた還元型グルタチオンのα型の結晶を３０ｖ／ｖ％エタノールで洗浄し、４０℃の空気を通風させることで乾燥させ、還元型グルタチオンのα型の結晶を得た。
［実施例３］
本発明の結晶の製造－３
　実施例１と同様の方法で還元型グルタチオンを１３４ｇ／Ｌの濃度で含む還元型グルタチオン含有溶液を調整した後、加熱減圧下で５４０ｇ／Ｌまで濃縮した。２５℃の該濃縮液１９０ｍＬに対し、種晶としてグルタチオンのα型の結晶０．０２ｇ（興人社製）を添加し、撹拌することで、還元型グルタチオンのα型の結晶を起晶させた。
　該水溶液に、５４０～５５０ｇ／Ｌに濃縮した還元型グルタチオン水溶液３９２０ｍＬを２５℃で１５時間かけて添加し、結晶を析出及び／又は成長させた。得られた還元型グルタチオンのα型の結晶を含む水溶液を１０℃まで冷却し、０．３倍等量のエタノールを添加した後、遠心分離することにより水溶液層を除去して得られた還元型グルタチオンのα型の結晶を３０ｖ／ｖ％エタノールで洗浄し、箱缶を用いて室温で減圧乾燥させ、還元型グルタチオンのα型の結晶を得た。
［比較例］
　日本国特許第５２４３９６３号明細書の実施例１に記載された方法に従い、還元型グルタチオンを１７９ｇ／Ｌの濃度で含む水溶液を得た。当該水溶液を加熱減圧下で５４６ｇ／Ｌまで濃縮した。２５℃の該濃縮液９５０ｍＬに対し、種晶として還元型グルタチオンのα型の結晶０．０５ｇ（興人社製）を添加した。種晶添加後、２５℃で１０時間撹拌し、還元型グルタチオンのα型の結晶を起晶させた。
　得られた還元型グルタチオンのα型の結晶を含む水溶液を１０℃まで冷却し、０．３倍等量のエタノールを添加した後、遠心分離することにより水溶液層を除去して得られた還元型グルタチオンのα型の結晶を６０ｖ／ｖ％エタノールで洗浄し、４０℃で減圧乾燥させ、還元型グルタチオンのα型の結晶を得た。
［実施例４］
粉体物性の測定
　実施例１～３で取得された還元型グルタチオンのα型の結晶、比較例で取得された還元型グルタチオンのα型の結晶、及び市販品の還元型グルタチオンのα型の結晶（市販品Ａ及びＢ）について、結晶の平均長Ｌ、平均幅Ｗ、平均長Ｌと平均幅Ｗの比Ｌ／Ｗ、粗比容及び密比容を測定した。結果を表１に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
　表１に示すように、実施例１～３で取得された本発明の結晶は、比較例で取得されたグルタチオンの結晶並びに市販品Ａ及びＢと比べて、Ｌ／Ｗ、粗比容、密比容、及び粗比容と密比容の差のいずれも小さく、流動性が良く、粉体物性に優れていることがわかった。
　また、実施例１～３で得られた還元型グルタチオンのα型の結晶、比較例で得られた還元型グルタチオンのα型の結晶、及び市販品Ａの結晶の平均厚みＴを測定した。結果を表２に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
　表２に示すように、実施例１～３で得られた還元型グルタチオンのα型の結晶は、比較例で得られた還元型グルタチオンのα型の結晶、及び市販品Ａと比較して結晶の平均厚みＴが大きく、粉砕性に優れることがわかった。
［実施例５］
本発明の結晶の製造－４
　実施例３及び比較例で得られた還元型グルタチオンのα型の結晶を粉砕し、経時の粗比容の変化を測定した。
　その結果、実施例３で取得した還元型グルタチオンのα型の結晶は、比較例で取得した還元型グルタチオンのα型の結晶と比較して速やかに粉砕され、小さい比容積に収束することがわかった（図１）。
　また、実施例３で取得した還元型グルタチオンのα型の結晶の粗比容は、いずれの粉砕時間においても、比較例で取得した還元型グルタチオンのα型の結晶の粗比容よりも小さかった。
　また、実施例３で得られた還元型グルタチオンのα型の結晶及び比較例で得られた還元型グルタチオンのα型の結晶について、安息角及び崩壊角を測定した。結果を表３に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
　表３に示すように、実施例３で得られた還元型グルタチオンのα型の結晶は、粉砕前と粉砕後のいずれも、比較例で取得した還元型グルタチオンのα型の結晶と比較して安息角及び崩壊角が小さいことから、流動性が良く、粉体物性に優れていることがわかった。
　以上の結果から、本発明の結晶は、既存の還元型グルタチオンの結晶よりも粉砕性及び粉体物性に優れていることがわかった。
　本発明を特定の態様を用いて詳細に説明したが、本発明の意図と範囲を離れることなく様々な変更および変形が可能であることは、当業者にとって明らかである。なお、本出願は、２０１６年３月１７日付けで出願された日本特許出願（特願２０１６－５３８４３号）に基づいており、その全体が引用により援用される。
　本発明により、流動性及び粉砕性に優れた還元型グルタチオンの結晶、及びその製造方法が提供される。

Claims (10)

  1. 　結晶の平均厚みが１０μｍ以上である、還元型グルタチオンの結晶。
  2. 　結晶の平均長Ｌと、平均幅Ｗの比Ｌ／Ｗが、６．０以下である、請求項１に記載の結晶。
  3. 　粗比容が２．５ｍＬ／ｇ以下である、請求項１又は２記載の結晶。
  4. 　密比容が２．０ｍＬ／ｇ以下である、請求項１～３のいずれか１項に記載の結晶。
  5. 　安息角が５０度以下である、請求項１～４のいずれか１項に記載の結晶。
  6. 　崩壊角が４５度以下である、請求項１～５のいずれか１項に記載の結晶。
  7. 　還元型グルタチオンの結晶がα晶である、請求項１～６のいずれか１項に記載の結晶。
  8. 　還元型グルタチオン含有水溶液中に還元型グルタチオンの結晶を存在せしめた後、該水溶液に、過飽和状態の還元型グルタチオン含有水溶液を連続又は分割しながら添加することにより、還元型グルタチオンの結晶を析出及び／又は成長させ、その後、該水溶液中に含有される還元型グルタチオンの結晶を採取することを特徴とする、還元型グルタチオンの結晶の製造方法。
  9. 　さらに、採取した還元型グルタチオンの結晶を粉砕する工程を含む、請求項８に記載の製造方法。
  10. 　還元型グルタチオンの結晶がα晶である、請求項８又は９に記載の製造方法。
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