WO2016085302A1 - 제니스테인 또는 에피갈로카테친 갈레이트를 포함하는 세포 회춘 촉진 유도용 조성물 - Google Patents

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WO2016085302A1
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cell line
cell
genistein
melanin
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이은경
고명진
최현정
조은경
이태룡
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Definitions

  • Genistein and Epigallocatechin gallate EGCG
  • Free radicals produced by metabolites of active oxygen species act on proteins, membranes, DNA, etc. in vivo and cause oxidative damage. To prevent these effects, much research has been conducted on antioxidants and antioxidants. Research for exploring new materials with action has been actively conducted at home and abroad.
  • aging is not only caused by oxidation but is influenced by numerous factors such as telomeres, cell replication capacity, gene damage and recovery ability. Therefore, in order to evaluate the aging inhibitory ability, not the antioxidant effect of natural products and drugs, There is a need for a method that uses aging.
  • Cell aging is a phenomenon in which normal somatic cells can no longer divide after a certain number of divisions, which contributes to aging of individuals and tissues, and is an important mechanism for inhibiting abnormal proliferation and cancer formation of cells.
  • Cell aging is caused by shortening of telomeres, the ends of chromosomes due to repeated division of somatic cells, increased activity of oncogenes or cancer suppressor genes, excessive oxidative stress, UV or radiation, cytotoxic substances such as anticancer agents, and inflammatory reactions. It is also caused by the back.
  • Cell aging not only contributes to the aging of individuals or tissues, but also plays an important role in the pathogenesis of many different diseases. Aging cells are frequently found in inflammatory lesion tissues such as rheumatoid arthritis, osteoarthritis, hepatitis, chronic skin damage tissues, and atherosclerotic vascular tissues. In addition, cell aging is observed in prostate hyperplasia, hepatitis, liver cancer and the like.
  • the senescent cells As the senescent cells accumulate, the senescent cells do not divide well and thus, damaged tissues cannot be properly recovered, and the tissues are accelerated by secreting enzymes or inflammatory cytokines that degrade the surrounding tissues. Contribute to etiology.
  • Examples of substances known to regulate cell aging include resveratrol, which is found in red wine known to increase SIRT1 activity, and the use of retinoic acid to delay cellular aging in keratinocytes.
  • resveratrol which is found in red wine known to increase SIRT1 activity
  • retinoic acid to delay cellular aging in keratinocytes.
  • research has been reported to identify and isolate substances that can regulate cell aging from plant extracts and to utilize them in cosmetics and health functional foods.
  • Non-Patent Document 1 Harman, D., Free radical theory of aging: Role of free radicals in the origination and evolution of life, aging and disease processes, 3-49. Alan R Liss, New York (1986)
  • an object of the present invention Genistein, Epigallocatechin gallate (EGCG), derivatives thereof, isomers thereof, pharmaceutically acceptable salts thereof, prodrugs thereof, It is to provide a cell rejuvenation induction use of these hydrates and their solvates.
  • an object of the present invention is to reduce the expression of melanin pigmentation ability-related factors.
  • an object of the present invention is to regulate the expression of melanin pigmentation related enzymes to induce cell rejuvenation.
  • the present invention provides Genistein, Epigallocatechin gallate (EGCG), derivatives thereof, isomers thereof, pharmaceutically acceptable salts thereof, prodrugs thereof, and hydrates thereof. And one or more selected from the group consisting of solvates thereof.
  • Genistein, Epigallocatechin gallate (EGCG) of the present invention, derivatives thereof, isomers thereof, pharmaceutically acceptable salts thereof, prodrugs thereof, Compositions comprising at least one selected from the group consisting of hydrates and solvates thereof reduce the expression of melanin pigmentation ability-related factors including tyrosinase and reduce the expression of aging, including p16 and p21.
  • EGCG Epigallocatechin gallate
  • Compositions comprising at least one selected from the group consisting of hydrates and solvates thereof reduce the expression of melanin pigmentation ability-related factors including tyrosinase and reduce the expression of aging, including p16 and p21.
  • Figure 1 shows the change in the expression of melanin pigmentation ability-related factors when melanocytes are passaged in a medium containing Genistein or Epigallocatechin gallate (EGCG).
  • FIG. 2 shows changes in aging indices (p16 and p21) when melanocytes are passaged in a medium containing Genistein or Epigallocatechin gallate (EGCG).
  • EGCG Epigallocatechin gallate
  • Figure 3 shows the change in the expression of melanin formation-related enzymes when melanocytes are passaged in a medium containing Genistein or Epigallocatechin gallate (EGCG).
  • Figure 4 shows melanocyte phenotype changes when melanocytes are passaged in a medium containing Genistein or Epigallocatechin gallate (EGCG),
  • Figure 4a is a microscopic observation
  • 4B is a graph showing the ratio of aged cells among the total melanocytes.
  • PA means each passage
  • PA11E means passage 11 melanocytes cultured in medium containing EGCG
  • PA12E means 12 passages melanin cells cultured in the medium containing EGCG from the seventh passage
  • PA12G means 12 passages melanin cells cultured in the medium containing Genistein from the seventh passage.
  • Genistein Epigallocatechin gallate (EGCG), derivatives thereof, isomers thereof, pharmaceutically acceptable salts thereof, prodrugs thereof, hydrates thereof And at least one selected from the group consisting of solvates thereof.
  • EGCG Epigallocatechin gallate
  • “derivative” may refer to a compound obtained by substituting a part of the structure of a specific compound with another atom or atomic group.
  • “isomers” in particular are not only optical isomers (eg, essentially pure enantiomers, essentially pure diastereomers or mixtures thereof), but also form isomers ( conformation isomers (ie, isomers that differ only by their angles of one or more chemical bonds), position isomers (especially tautomers) or geometric isomers (eg, cis-trans isomers) do.
  • essentially pure means, when used in connection with, for example, an enantiomer or diastereomer, about 90% or more, specifically about 95% or more, of specific compounds, for example enantiomers or diastereomers, More specifically at least about 97% or at least about 98%, even more specifically at least about 99%, even more specifically at least about 99.5% (w / w).
  • pharmaceutically acceptable means the approval of a government or equivalent regulatory body to use in animals, more specifically in humans, by avoiding significant toxic effects when used in conventional medicinal dosages. It can be received or approved, or listed in a pharmacopoeia or recognized as another general pharmacopeia.
  • salts means salts according to one aspect of the invention that are pharmaceutically acceptable and have the desired pharmacological activity of the parent compound.
  • the salt is formed from (1) an inorganic acid such as hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, nitric acid, phosphoric acid, or the like; Or acetic acid, propionic acid, hexanoic acid, cyclopentanepropionic acid, glycolic acid, pyruvic acid, lactic acid, malonic acid, succinic acid, malic acid, maleic acid, fumaric acid, tartaric acid, citric acid, benzoic acid, 3- (4-hydroxybenzoyl) Benzoic acid, cinnamic acid, mandelic acid, methanesulfonic acid, ethanesulfonic acid, 1,2-ethane-disulfonic acid, 2-hydroxyethanesulfonic acid, benzenesulfonic acid, 4-chlorobenzenes
  • prodrug refers to a drug that modulates physical and chemical properties by chemically changing a drug, which itself does not exhibit physiological activity, but is originally produced by the action of a chemical or enzyme in the body after administration. The drug can be turned into a drug.
  • hydrate refers to a compound to which water is bound, and is a broad concept including an inclusion compound having no chemical bonding force between water and the compound.
  • solvate means a higher order compound produced between molecules or ions of a solute and molecules or ions of a solvent.
  • genistein may mean one of isoflavones, which is a vegetable compound contained in a plant, and may be present in soybean, picture tree, clover, and other plant species. Genistein may mean a material having the structure of Formula 1:
  • the zesteine derivative is represented by the following Chemical Formula 2, wherein R1 to R4 are each independently hydrogen, hydroxy, alkyl or substituted alkyl, phenyl or substituted phenyl, diphenyl ethyl or substituted diphenyl ethyl, and thiophenyl.
  • substituted thiophenyl alkoxy, cycloalkyl, cycloalkoxy, heterocycloalkyl group, aryloxy, haloalkoxy, aryl, haloalkyl, methoxyl, benzyl or substituted benzyl, benzoyl, oxo, alkylidene, carbonyl, It may be one selected from the group consisting of acyl group, alkene group and alkylamino dialkylamino, but is not limited thereto.
  • the derivatives of genistein mentioned herein are 6 ”-O-acetylgenistin, 6” -O-acetylmalonylgenistin, 6-carboxymethyl It may be, but is not limited to, 6-carboxymethylgenistein socoricoside.
  • epigallocatechin gallate may mean a material having a structure of Formula 3:
  • derivatives of epigallocatechin gallate referred to herein include (-)-epicatechin gallate (ECG), gallic acid (GA), (-)-epigallocatechin (EGC), (-) - May be selected from the group consisting of epicatechin (EC) and gallocatechin (GC), but is not limited thereto.
  • the cell line may be a melanin cell line.
  • cell rejuvenation may mean returning aged cells to young and healthy cells.
  • cell line may refer to a clone of cultured melanocytes, which may continue to divide or proliferate through culturing melanocytes and join the stem.
  • passage system may refer to a system including any one or more of melanin blast lines and cell lines passaged one to several times.
  • melanocyte blast line means a melanin cell line before subculture.
  • “early (or early)” and “late” are classified according to the number of cell lines cultured.
  • “electrical cell line” refers to a melanocyte parental cell line PA1 and a parental cell line 1, 2, 3, 4, respectively.
  • PA2, PA3, PA4, PA5, and PA6 cell lines, which have been passaged five times and the “late cell line” refers to the parent cell lines 6, 7, 8, 9, 10, and 11 passages, respectively. It may mean any one or more of PA7, PA8, PA9, PA10 PA11 and PA12 cell line.
  • the electric melanin cell line may include a first electric melanin cell line and a second electric melanin cell line
  • the late melanin cell line may include a first late melanin cell line and a second late melanin cell line.
  • the first electric melanin cell line may include one or more of PA1, PA2 and PA3 cell lines
  • the second electric melanin cell line may include one or more of PA4, PA5 and PA6 melanin cell lines.
  • the first late melanin cell line may include one or more of PA7, PA8, and PA9 cell lines
  • the second late melanin cell line may include one or more of PA10, PA11, and PA12 melanin cell lines.
  • n passages, passage n means a cell line passaged n-1 times the parent cell line.
  • passages or PA3 means a cell line passaged two times in the parent cell line.
  • N is an integer.
  • the cell rejuvenation may mean that the late passage cells return to the same or similar state as the cells in the previous period.
  • a PA12 cell line is in a PA1 cell line
  • a PA12 cell line is in a PA2 cell line
  • a PA12 cell line is in a PA3 cell line
  • a PA12 cell line is in a PA4 cell line
  • a PA12 cell line is in a PA5 cell line state
  • a PA12 cell line is In the state of the PA6 cell line, in the state of the PA11 cell line, in the state of the PA1 cell line, in the state of the PA11 cell line, in the state of the PA2 cell line, in the state of the PA11 cell line, in the state of the PA11 cell line, and in the state of the PA5 cell line.
  • PA11 cell line to PA6 cell line PA10 cell line to PA1 cell line, PA10 cell line to PA2 cell line, PA10 cell line to PA3 cell line, PA10 cell line to PA4 cell line, PA10 cell line to PA5
  • PA10 cell line in the state of PA10 cell line, in the state of PA6 cell line, in the state of PA9 cell line, in the state of PA9 cell line, in the state of PA2 cell line, in the state of PA9 cell line, in the state of PA3 cell line
  • Attention to the state, the state of the cell lines PA5 PA9 cells, the cells PA9 could mean a return to the status of the cell line PA6.
  • the said composition returns a biological cell corresponding to the state of the cell line passaged 6 or more times among the cell lines contained in a passage system to the state of the cell line passaged 5 times or less.
  • the passaging system is an electric melanin including any one or more of PA2, PA3 PA4, PA5 and PA6 cell lines, which are passaged 1, 2, 3, 4 and 5 times, respectively, the melanin blast line PA1 cell line and the melanocyte blast line Cell lines; And subcultured melanin cell lines comprising any one or more of PA7, PA8, PA9, PA10, PA11 and PA12 cell lines, each of which has been passaged 6, 7, 8, 9, 10 and 11 times. It may be, but is not limited to.
  • the passage system may be composed of PA1, PA2, PA3, PA4, PA5, PA6, PA7, PA8, PA9, PA10, PA11 and PA12 cell lines, but is not limited thereto. no.
  • the passaged cell line may be a cell line of Accession No. KCTC12906BP or KCTC12907BP.
  • the former melanin cell line may be an accession number KCTC12906BP cell line
  • the late melanin cell line may be a KCTC12907BP cell line.
  • the PA3 cell line is an accession number KCTC12906BP cell line
  • the PA11 cell line is a KCTC12907BP cell line.
  • the composition comprising at least one selected from the group consisting of hydrates and solvates thereof is tyrosinase, microphthalmia-associated tranion factor (MITF), tyrosinase
  • TRP-1 tyrosinase related protein-1
  • TRP-2 tyrosinase related protein-2
  • EZH1 enhancer of zeste homolog 1
  • p16 and p21 May be reduced, but is not limited thereto.
  • the expression amount of the material containing the tyrosinase may increase, but the cell line passaged (for example, from the seventh passage) in a medium containing the composition, which is a consistent point of the present invention.
  • One or more expression amounts are selected from the group consisting of the tyrosinase, microphthalmia associated transcription factor, tyrosinase-related protein-1 and tyrosinase-related protein-2, EZH1, p16 and p21 It may be reduced to levels equal to or less than the amount of expression in the cell line (eg passage 2).
  • the composition is p14, p19, p27, cyclin D (cyclin D), cyclin E (cyclin E), cyclin dependent kinase (CDK4), cardin-associated antibacterial peptide ( One or more expressions selected from the group consisting of cathelin-related antimicrobial peptide (CRAMP), stasmin, EF-1a and chitinase 3-like 3 can be reduced.
  • CRAMP cathelin-related antimicrobial peptide
  • stasmin stasmin
  • EF-1a chitinase 3-like 3
  • the expression level of the substance containing p14 may be increased, but the cell line subcultured (for example, from seven passages) in a medium containing the composition of the present invention is consistent with the above.
  • the amount of expression such as p14 may be reduced to a level equal to or less than the amount of expression in the electric cell line.
  • the composition may increase the expression of histone deacetylase 5 (histonedeacetylase 5).
  • the expression change detection may be made in tissues, cells (eg, melanocytes), body fluids (eg, blood, tissue fluid), but is not limited thereto.
  • the composition may be a pharmaceutical, health food or cosmetic composition.
  • Formulations suitable for this purpose are preferably parenteral administration preparations for injection or topical administration.
  • Injectable formulations are preferably aqueous isotonic solutions or suspensions.
  • diluents or excipients such as fillers, extenders, binders, wetting agents, disintegrating agents, surfactants, etc. which are generally used may be used together.
  • the formulation of the present invention thus prepared may be administered parenterally, for example, directly to a specific site, according to conventional methods. At this time, the injection of the composition may be made using a syringe.
  • the actual dosage of the active ingredient should be determined in view of several relevant factors such as the route of administration, the weight, age and sex of the patient, for example the concentration of the composition included in a single dose may be 1 ⁇ M.
  • the dosage does not limit the scope of the invention in any aspect.
  • the composition may be a composition for topical administration.
  • the composition may be a cosmetic composition.
  • the cosmetic composition may include, for example, a basic cosmetic, a makeup cosmetic, a hair cosmetic, a body cosmetic, and the like, and its formulation is not particularly limited and may be appropriately selected as desired.
  • the cosmetic composition may be formulated into solutions, suspensions, emulsions, pastes, gels, creams, lotions, powders, soaps, surfactant-containing cleansing, oils, powder foundations, emulsion foundations, wax foundations, sprays, and the like. It may be, but is not limited thereto.
  • Basic cosmetics such as (O / W) and water-in-oil (O / W), color cosmetics such as lipstick, makeup base or foundation, cleaning agents such as shampoo, rinse, body cleanser, toothpaste or mouthwash, hair tonic
  • a cosmetic composition for hair such as a hair dressing agent such as a gel or a mousse, a wool or a hair dye.
  • the cosmetic composition contains a cosmetically acceptable medium or base.
  • a cosmetically acceptable medium or base for example emulsions, suspensions, microemulsions, microcapsules, microgranules or ionic (liposomes) obtained by dispersing an oil phase in a solution, gel, solid or pasty anhydrous product, aqueous phase, and / or It may be provided in the form of a nonionic vesicle dispersant or in the form of a cream, skin, lotion, powder, ointment, spray or cone stick.
  • These compositions can be prepared according to conventional methods in the art.
  • a solvent, solubilizer or emulsifier is used as the carrier component, such as water, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate, benzyl alcohol, benzyl benzoate, propylene glycol, 1 Fatty acid esters of, 3-butylglycol oil, glycerol aliphatic ester, polyethylene glycol or sorbitan.
  • liquid carrier diluents such as water, ethanol or propylene glycol
  • suspending agents such as ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene sorbitol ester and polyoxyethylene sorbitan ester, microcrystals Soluble cellulose, aluminum metahydroxy, bentonite, agar or tracant and the like can be used.
  • the formulation of the present invention is a paste, cream or gel, animal oils, vegetable oils, waxes, paraffins, starches, trachants, cellulose derivatives, polyethylene glycols, silicones, bentonites, silicas, talc or zinc oxide may be used as carrier components.
  • animal oils, vegetable oils, waxes, paraffins, starches, trachants, cellulose derivatives, polyethylene glycols, silicones, bentonites, silicas, talc or zinc oxide may be used as carrier components.
  • animal oils vegetable oils, waxes, paraffins, starches, trachants, cellulose derivatives, polyethylene glycols, silicones, bentonites, silicas, talc or zinc oxide
  • cellulose derivatives polyethylene glycols
  • silicones bentonites
  • silicas talc or zinc oxide
  • lactose, talc, silica, aluminum hydroxide, calcium silicate or polyamide powder may be used, in particular in the case of a spray, additionally chlorofluorohydrocarbon, propane Propellant such as butane or dimethyl ether.
  • the cosmetic composition may further contain a thickener.
  • the thickener included in the cosmetic composition of the present invention is methyl cellulose, carboxy methyl cellulose, carboxy methyl hydroxy guanine, hydroxy methyl cellulose, hydroxyethyl cellulose, carboxy vinyl polymer, polyquaternium, cetearyl alcohol, stearic acid, Carrageenan and the like can be used, and preferably, at least one of carboxy methyl cellulose, carboxy vinyl polymer and polyquaternium can be used, and most preferably, carboxy vinyl polymer.
  • the cosmetic composition may contain a variety of suitable bases and additives as necessary, the type and amount of these components can be easily selected by the inventors. If necessary, it may contain an acceptable additive, for example, may further include components such as preservatives, pigments, additives and the like conventional in the art.
  • Preservatives may be specifically phenoxyethanol (Phenoxyethanol) or 1,2-hexanediol (1,2-Hexanediol) and the like, fragrance may be artificial flavors and the like.
  • the cosmetic composition may include a composition selected from the group consisting of water-soluble vitamins, oil-soluble vitamins, polymer peptides, polymer polysaccharides, sphingolipids, and seaweed extracts.
  • Other components that may be added include fats and oils, moisturizers, emollients, surfactants, organic and inorganic pigments, organic powders, ultraviolet absorbers, preservatives, fungicides, antioxidants, plant extracts, pH adjusters, alcohols, pigments, flavorings, Blood circulation accelerators, cooling agents, limiting agents, purified water and the like.
  • health foods are manufactured using nutrients or ingredients (functional ingredients) having useful functions for the human body, which are often lacking in daily meals, and maintaining health through maintaining normal functions of the human body or activating physiological functions. It may mean a food to improve, but is not limited thereto.
  • the health food may be manufactured and processed in the form of tablets, capsules, powders, granules, liquids, pills, and the like, but is not limited thereto and may be manufactured and processed in any form according to the law.
  • the health beverage composition is not particularly limited to other ingredients except for containing the compound as an essential ingredient in the indicated ratio, and may contain various flavors or natural carbohydrates as additional ingredients, such as ordinary drinks.
  • natural carbohydrates are conventional sugars such as monosaccharide polysaccharides, cyclodextrins, and the like, and sugar alcohols such as xylitol, sorbitol, and erythritol.
  • natural flavoring agents tacumatin, stevia extract (for example, rebaudioside A, glycyrrhizin, etc.) and synthetic flavoring agents (saccharin, aspartame, etc.) can be used.
  • the effective amount administered by the health food composition may range from 0.0001 mg / kg / day to approximately 1000 mg / kg / day. More preferred dosages may be from 0.02 mg / kg / day to 100 mg / kg /. Administration may be administered once a day or may be divided several times.
  • the compounding component which may be added other than this is not limited to this, Moreover, any of the above components can be mix
  • the composition is 0.001 to 2.0 ⁇ M or 0.005 to 1.5 ⁇ M Genistein, Epigallocatechin gallate (EGCG), derivatives thereof, isomers thereof, Pharmaceutically acceptable salts thereof, prodrugs thereof, hydrates thereof or solvates thereof.
  • Genistein Epigallocatechin gallate (EGCG)
  • EGCG Epigallocatechin gallate
  • isomers thereof Pharmaceutically acceptable salts thereof, prodrugs thereof, hydrates thereof or solvates thereof.
  • ⁇ M or less 2.0 ⁇ M or less, 1.9 ⁇ M or less, 1.8 ⁇ M or less, 1.7 ⁇ M or less, 1.6 ⁇ M or less, 1.5 ⁇ M or less, 1.4 ⁇ M or less, 1.3 ⁇ M or less, 1.2 ⁇ M or less, 1.1 ⁇ M or less, 1.0 ⁇ M or less, 0.9 ⁇ M or less, 0.85 ⁇ M or less, 0.80 ⁇ M or less, 0.75 ⁇ M or less, 0.70 ⁇ M or less, 0.65 ⁇ M or less, 0.60 ⁇ M 0.55 ⁇ M or less, 0.50 ⁇ M or less, 0.45 ⁇ M or less, 0.40 ⁇ M or less, 0.35 ⁇ M or less, 0.30 ⁇ M or less, 0.25 ⁇ M or less, 0.20 ⁇ M or less, 0.15 ⁇ M or less, 0.10 ⁇ M or less, 0.05 ⁇ M or less, 0.04 ⁇ M or less, 0.03 ⁇ M or less, 0.02 ⁇
  • M-254 medium (Gibco BRL) with human primary melanocytes (Life Technologies, CA, USA) added human melanocyte growth supplement (HMGS), Gibco BRL, NY, USA , NY, USA)) is used to change the medium in a 100 mm culture dish every two days, incubated in a 5% CO 2 incubator until the cell density occupies 80% of the plate area, another 100 mm culture The following subcultures were carried out in a dish at a ratio of 1: 4.
  • HMGS human melanocyte growth supplement
  • EGCG Genistein and Epigallocatechin gallate
  • the melanin cells were subcultured to the 11th and 12th passages without any treatment, and the experimental group was subcultured in the same environment as the control group until the 6th passage, and then the 7th passage was genistein or epigallocatechin gallate ( Epigallocatechin gallate (EGCG) was passaged to passage 11 and passage 12 in a medium containing 1 ⁇ M.
  • EGCG epigallocatechin gallate
  • tyrosinase tyrosinase, microphthalmia-associated tranion factor (MITF), tyrosinase related protein-1 1, TRP-1) and tyrosinase-related protein-2 (TRP-2)
  • MIMF microphthalmia-associated tranion factor
  • TRP-1 tyrosinase related protein-1 1, TRP-1
  • TRP-2 tyrosinase-related protein-2
  • Primers are TaqMan products manufactured by Applied Biosystems, respectively: tyrosinase (TYR, product number: Hs01099965_m1), MITF (product number: Hs01117294_m1), TRP1 (product number: Hs00167051_m1), TRP2 (product number: Hs01095856_m1) .
  • FIG. 1 As a result (FIG. 1), increased tyrosinase, microphthalmia-associated tranion factor (MITF), tyrosinase related protein-1 increased in late passage in the control group. -1, TRP-1) and the amount of mNRA expression of tyrosinase-related protein-2 (TRP-2) was found to be significantly reduced in the experimental group (the graph vertical axis in the figure shows the mRNA expression level of each gene / GAPDH). mRNA expression is the relative expression of the gene).
  • control group and the experimental group were the same as in Example 2.
  • cDNA was prepared by obtaining RNA from melanocytes of various passages and mRNA changes were measured by Q-PCR (Applied biosystems, 7500 Fast) using p16 and p21 specific primers. Primers were TaqMan manufactured by Applied Biosystems, respectively, as follows: p16 (product number: Hs00923894_m1) and p21 (product number: Hs00355782_m1).
  • EZH1 enhancer of zeste homolog 1
  • siRNA was used to inhibit the expression of EZH1 protein. As a result, it was confirmed that the melanin pigment formed was greatly reduced, and it was found that EZH1 inhibited melanin pigment formation (below FIG. 3).
  • control group and the experimental group were the same as in Example 2.
  • cDNA was prepared by obtaining RNA from melanocytes of the control group and the experimental group, and the change of mRNA amount was measured by Q-PCR (Applied biosystems, 7500 Fast) using EZH1 specific primers.
  • the EZH1 primer is EZH1 (product number: Hs00940463_m1) from TaqMan manufactured by Applied Biosystems.
  • Genistein or Epigallocatechin gallate affected the phenotype of melanocytes
  • the phenotypes of melanocytes in the control and experimental groups were observed by light microscopy (400x magnification).
  • the phenotype of the cells was observed 40 times magnified by light microscopy in the living state containing the medium.
  • the melanocyte phenotype flattened compared with the initial passage, the size of the cell body (cell body) increased, the number of dendrite and heterogeneous (heterogeniety) Increased number of aging-shaped cells: increased cell size more than 3 ⁇ m in diameter, but again prolonged exposure to Genistein or Epigallocatechin gallate (EGCG). I could confirm the loss.
  • EGCG Epigallocatechin gallate

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Abstract

본 명세서에는 제니스테인(Genistein), 에피갈로카테친 갈레이트(Epigallocatechin gallate, EGCG), 이들의 유도체, 이들의 이성질체, 이들의 약학적으로 허용 가능한 염, 이들의 프로드럭, 이들의 수화물 및 이들의 용매화물의 신규한 용도가 개시된다. 상기 제니스테인, 에피갈로카테친 갈레이트, 이들의 유도체 이들의 이성질체, 이들의 약학적으로 허용 가능한 염, 이들의 프로드럭, 이들의 수화물 또는 이들의 용매화물을 포함하는 조성물은, 멜라닌 색소 형성능 증가 관련 인자의 발현을 감소시키고, 노화 지표 단백질의 발현을 감소시키며, 멜라닌 색소 형성 관련 효소의 발현을 조절함으로써, 멜라닌 세포를 포함하는 세포의 회춘 효과를 가질 수 있다.

Description

제니스테인 또는 에피갈로카테친 갈레이트를 포함하는 세포 회춘 촉진 유도용 조성물
본 명세서에는 제니스테인(Genistein) 및 에피갈로카테친 갈레이트(Epigallocatechin gallate, EGCG)의 신규한 용도가 개시된다.
노화를 지연시켜 퇴행성질환이 발병하지 않고 건강하게 질병 없이 오래 사는 것은 모든 사람의 바람으로 노화를 억제시키는 물질을 찾는 노력은 과거부터 현재까지도 계속해서 진행되고 있다. 노화를 촉진시키는 원인으로 슈퍼옥사이드, 과산화수소, 수산화기 및 일중항산소와 같은 활성산소종들에 의한 산화 작용을 들 수 있다.
활성산소종들의 대사산물로 생성된 자유기(free radical)들이 생체 내에서 단백질, 생체막, DNA 등에 작용하여 산화적 손상을 주는데, 이들 작용을 억제시키기 위해서 항산화 성분에 대해 많은 연구가 이루어졌고, 항산화 작용을 갖는 새로운 소재를 탐색하기 위한 연구가 국내외에서 활발하게 이루어지고 있다.
그러나 노화현상은 산화에 의해서만 이루어지는 것이 아니고 텔로미어, 세포복제능력, 유전자손상 및 회복능력 등 수많은 요인에 의해서 영향을 받는 것으로 알려져 있기 때문에 천연물 및 약제의 항산화 효과가 아닌 노화억제능력을 평가를 위해서는 세포의 노화를 이용하는 방법이 필요하다.
세포노화는 정상 체세포가 일정 횟수 분열한 후 더 이상 분열하지 못하는 현상으로, 개체 및 조직의 노화에 기여하며, 세포의 비정상적인 증식과 암 형성을 억제하는 중요한 기전이다. 세포노화는 반복되는 체세포의 분열로 인해 염색체의 끝 부분인 텔로미어가 짧아지므로 생기거나, 암유전자 또는 암억제 유전자의 활성 증가, 과다한 산화스트레스, 자외선이나 방사선 조사, 항암제와 같은 세포독성 물질, 염증반응 등에 의해서도 생긴다.
세포노화는 단순히 개체나 조직의 노화에 기여할 뿐만 아니라, 여러 가지 다양한 질병의 병인에 중요한 역할을 한다. 노화세포는 류마티스성 관절염, 골관절염, 간염, 만성 피부손상 조직, 동맥경화 혈관조직 등과 같은 염증성 병변 조직에서 많이 관찰된다. 또한, 전립샘 증식증과 간염, 간암 등에서도 세포노화 현상이 관찰된다.
이와 같이 노화세포가 축적되면 노화세포는 잘 분열하지 못하므로 손상된 조직이 적절히 복구되지 못할 뿐만 아니라, 주위 조직을 분해하는 효소나 염증성 싸이토카인 등을 분비하여 조직의 손상을 가속시키므로, 노화와 관련된 질병의 병인에 기여한다.
세포성 노화가 노화의 필수 원인 요소인 것으로 여겨지기 때문에, 세포성 노화를 지연시키는 방법을 개발하려는 노력이 계속되어왔다. 그 중에서 세포노화를 조절할 수 있는 물질을 탐색하여, 이를 질병의 예방과 치료에 활용하고자 하는 연구가 일부 보고되고 있다.
세포노화를 조절하는 것으로 알려진 물질로는 SIRT1 활성을 증가시키는 것으로 알려진 붉은 포도주에 많이 들어있는 레스베라트롤(resveratrol), 각질세포 (keratinocyte) 에서 세포성 노화를 지연시키기 위한 레티노산의 용도 등이 대표적이다. 아울러 식물 추출물로부터 세포노화를 조절할 수 있는 물질을 동정하고 분리하여 화장품과 건강 기능성 식품 등에 활용하고자 하는 연구가 보고되고 있다.
그러나, 최근까지의 연구는 노화를 예방 또는 지연하는 방법에 그칠 뿐, 노화된 세포를 젊고 건강한 세포로 되돌리는 적극적인 개념인 세포 회춘(rejuvenation)에 대한 연구는 보고된 바 없다.
(비특허문헌 1) Harman, D., Free radical theory of aging: Role of free radicals in the origination and evolution of life, aging and disease processes, 3-49. Alan R Liss, New York (1986)
일 측면에서, 본 발명의 목적은, 제니스테인(Genistein), 에피갈로카테친 갈레이트(Epigallocatechin gallate, EGCG), 이들의 유도체, 이들의 이성질체, 이들의 약학적으로 허용 가능한 염, 이들의 프로드럭, 이들의 수화물 및 이들의 용매화물 의 세포 회춘 유도 용도를 제공하는 것이다.
다른 측면에서, 본 발명의 목적은, 멜라닌 색소 형성능 증가 관련 인자의 발현을 감소시키는 것이다.
다른 측면에서, 본 발명의 목적은, 멜라닌 색소 형성 관련 효소의 발현을 조절하여, 세포의 회춘을 유도하는 것이다.
일 측면에서, 본 발명은 제니스테인(Genistein), 에피갈로카테친 갈레이트(Epigallocatechin gallate, EGCG), 이들의 유도체, 이들의 이성질체, 이들의 약학적으로 허용 가능한 염, 이들의 프로드럭, 이들의 수화물 및 이들의 용매화물로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상을 포함하는 조성물을 제공한다.
일 측면에 있어서, 본 발명의 제니스테인(Genistein), 에피갈로카테친 갈레이트(Epigallocatechin gallate, EGCG), 이들의 유도체, 이들의 이성질체, 이들의 약학적으로 허용 가능한 염, 이들의 프로드럭, 이들의 수화물 및 이들의 용매화물로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상을 포함하는 조성물은, 타이로시나아제(tyrosinase)를 포함하는 멜라닌 색소 형성능 증가 관련 인자의 발현을 감소시키고, p16 및 p21을 포함하는 노화 지표의 발현을 감소시키며, 히스톤탈아세틸화효소 5 및 EZH1(enhancer of zeste homolog 1)을 포함하는 멜라닌 색소 형성 관련 효소의 발현을 조절함으로써, 멜라닌 세포를 포함하여 세포의 회춘 유도 효과를 가질 수 있다.
도 1은 멜라닌 세포를 제니스테인(Genistein) 또는 에피갈로카테친 갈레이트(Epigallocatechin gallate, EGCG)가 함유된 배지에서 계대배양했을 때, 멜라닌 색소 형성능 증가 관련 인자의 발현 변화를 측정한 것이다.
도 2는 멜라닌 세포를 제니스테인(Genistein) 또는 에피갈로카테친 갈레이트(EGCG)가 함유된 배지에서 계대배양했을 때, 노화 지표(p16 및 p21)의 변화를 관찰한 것이다.
도 3은 멜라닌 세포를 제니스테인(Genistein) 또는 에피갈로카테친 갈레이트(Epigallocatechin gallate, EGCG)가 함유된 배지에서 계대배양했을 때, 멜라닌 색소 형성 관련 효소의 발현 변화를 관찰한 것이다.
도 4는 멜라닌 세포를 제니스테인(Genistein) 또는 에피갈로카테친 갈레이트(Epigallocatechin gallate, EGCG)가 함유된 배지에서 계대배양했을 때, 멜라닌 세포의 표현형 변화를 관찰한 것으로, 도 4a는 현미경 관찰 결과이고, 도 4b는 전체 멜라닌 세포 중 노화된 세포의 비율을 나타낸 그래프이다.
각 도에서, PA는 각 계대를 의미하고, PA11E는 7계대부터 EGCG가 함유된 배지에서 배양된 11계대 멜라닌 세포를 의미하며, PA11G는 7계대부터 제니스테인이 함유된 배지에서 배양된 11계대 멜라닌 세포를 의미하고, PA12E는 7계대부터 EGCG가 함유된 배지에서 배양된 12계대 멜라닌 세포를 의미하며, PA12G는 7계대부터 제니스테인이 함유된 배지에서 배양된 12계대 멜라닌 세포를 의미한다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 일 관점에서, 제니스테인(Genistein), 에피갈로카테친 갈레이트(Epigallocatechin gallate, EGCG), 이들의 유도체, 이들의 이성질체, 이들의 약학적으로 허용 가능한 염, 이들의 프로드럭, 이들의 수화물 및 이들의 용매화물로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상을 포함하는, 세포 회춘 유도용 조성물이다.
본 명세서에서 "유도체"는, 특정 화합물의 구조 일부를 다른 원자나 원자단으로 치환하여 얻어지는 화합물을 의미할 수 있다. 본 명세서에서 "이성질체"는 특히 광학 이성질체(optical isomers)(예를 들면, 본래 순수한 거울상 이성질체(essentially pure enantiomers), 본래 순수한 부분 입체 이성질체(essentially pure diastereomers) 또는 이들의 혼합물)뿐만 아니라, 형태 이성질체(conformation isomers)(즉, 하나 이상의 화학 결합의 그 각도만 다른 이성질체), 위치 이성질체(position isomers)(특히, 호변이성체(tautomers)) 또는 기하 이성질체(geometric isomers)(예컨대, 시스-트랜스 이성질체)를 포함한다.
본 명세서에서 "본래 순수(essentially pure)"란, 예컨대 거울상 이성질체 또는 부분 이성질체와 관련하여 사용한 경우, 거울상 이성질체 또는 부분 이성질체를 예로 들 수 있는 구체적인 화합물이 약 90% 이상, 구체적으로 약 95% 이상, 더 구체적으로 약 97% 이상 또는 약 98% 이상, 보다 더 구체적으로 약 99% 이상, 보다 더욱 더 구체적으로 약 99.5% 이상(w/w) 존재하는 것을 의미한다.
본 명세서에서 "약학적으로 허용 가능"이란 통상의 의약적 복용량(medicinal dosage)으로 이용할 때 상당한 독성 효과를 피함으로써, 동물, 더 구체적으로는 인간에게 사용할 수 있다는 정부 또는 이에 준하는 규제 기구의 승인을 받을 수 있거나 승인 받거나, 또는 약전에 열거되거나 기타 일반적인 약전으로 인지되는 것을 의미한다.
본 명세서에서 "약학적으로 허용 가능한 염"은 약학적으로 허용 가능하고 모 화합물(parent compound)의 바람직한 약리 활성을 갖는 본 발명의 일측면에 따른 염을 의미한다. 상기 염은 (1) 염산, 브롬화수소산, 황산, 질산, 인산 등과 같은 무기산으로 형성되거나; 또는 아세트산, 프로파이온산, 헥사노산, 사이클로펜테인프로피온산, 글라이콜산, 피루브산, 락트산, 말론산, 숙신산, 말산, 말레산, 푸마르산, 타르타르산, 시트르산, 벤조산, 3-(4-하이드록시벤조일) 벤조산, 신남산, 만델산, 메테인설폰산, 에테인설폰산, 1,2-에테인-디설폰산, 2-하이드록시에테인설폰산, 벤젠설폰산, 4-클로로벤젠설폰산, 2-나프탈렌설폰산, 4-톨루엔설폰산, 캄퍼설폰산, 4-메틸바이사이클로 [2,2,2]-oct-2-엔-1-카르복실산, 글루코헵톤산, 3-페닐프로파이온산, 트리메틸아세트산, tert-부틸아세트산, 라우릴 황산, 글루콘산, 글루탐산, 하이드록시나프토산, 살리실산, 스테아르산, 뮤콘산과 같은 유기산으로 형성되는 산 부가염(acid addition salt); 또는 (2) 모 화합물에 존재하는 산성 프로톤이 치환될 때 형성되는 염을 포함할 수 있다.
본 명세서에서 "프로드럭(prodrug)"은 어떤 약물을 화학적으로 변화시켜 물리적, 화학적 성질을 조절한 약물을 의미하며, 그 자체는 생리 활성을 나타내지 않지만 투여 후 체내에서 화학적 혹은 효소의 작용에 의해 원래의 약물로 바뀌어 약효를 발휘할 수 있다.
본 명세서에서 "수화물(hydrate)"은 물이 결합되어 있는 화합물을 의미하며, 물과 화합물 사이에 화학적인 결합력이 없는 내포 화합물을 포함하는 광범위한 개념이다.
본 명세서에서 "용매화물"은 용질의 분자나 이온과 용매의 분자나 이온 사이에 생긴 고차의 화합물을 의미한다.
본 명세서에서, 제니스테인은 식물체 내 함유된 식물성 화합물인 이소플라본(isoflavone)의 하나를 의미할 수 있고, 대두, 회화나무, 클로버 및 기타 식물종에 존재하는 것일 수 있다. 제니스테인은 하기 화학식 1의 구조를 갖는 물질을 의미할 수 있다:
[화학식 1]
Figure PCTKR2015012881-appb-I000001
본 명세서에서, 제네스테인 유도체는 하기 화학식 2에서, R1 내지 R4가 각각 독립적으로 수소, 히드록시, 알킬 또는 치환된 알킬, 페닐 또는 치환된 페닐, 디페닐 에틸 또는 치환된 디페닐 에틸, 사이오페닐 또는 치환된 사이오페닐, 알콕시, 시클로알킬, 시클로알콕시, 헤테로시클로알킬기, 아릴옥시, 할로알콕시, 아릴, 할로알킬, 메톡실기, 벤질 또는 치환된 벤질, 벤조일, 옥소, 알킬이덴, 카르보닐, 아실기, 알켄기 및 알킬아미노 디알킬아미노로 이루어진 군으로부터 선택된 하나일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 예컨대, 본 명세서에서 언급된 제니스테인의 유도체는 6”-O-아세틸제니스틴(6”-O-acetylgenistin), 6”-O-아세틸말로닐제니스틴인(6”-O-malonylgenistin), 6-카복시메틸제니스테인(6-carboxymethylgenistein) 소포리코사이드(sophoricoside)일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
[화학식 2]
Figure PCTKR2015012881-appb-I000002
본 명세서에서, 에피갈로카테친 갈레이트는 하기 화학식 3의 구조를 갖는 물질을 의미할 수 있다:
[화학식 3]
Figure PCTKR2015012881-appb-I000003
또한, 본 명세서에서 언급된 에피갈로카테친 갈레이트의 유도체는, (-)-에피카테친 갈레이트 (ECG), 갈릭 산(GA), (-)-에피갈로카테친(EGC), (-)-에피카테친(EC) 및 갈로카테킨(GC)로 이루어진 군으로부터 선택된 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 일 관점인 조성물에 있어서, 세포주는 멜라닌 세포주일 수 있다.
본 명세서에서, "세포 회춘(rejuvenation)"은, 노화된 세포를 젊고 건강한 세포로 되돌리는 것을 의미할 수 있다.
본 명세서에서, "멜라닌 세포주(cell line)"는 멜라닌 세포의 배양을 통해 계속 분열 또는 증식하여 대를 이을 수 있는, 배양 멜라닌 세포의 클론을 의미할 수 있다.
또한, 본 명세서에서 "계대배양계"는, 멜라닌 모세포주 및 특정 세포주를 1회 내지 수회 계대배양한 세포주 중 어느 하나 이상을 포함하는 계를 의미할 수 있다.
본 명세서에서, "멜라닌 모세포주"는, 계대배양 전의 멜라닌 세포주를 의미한다.
본 명세서에서 "전기(또는 초기)" 및 "후기" 는, 세포주의 배양 횟수에 따라 분류한 것으로, 예컨대, "전기 세포주"는 멜라닌 모세포주인 PA1 세포주 및 모세포주를 각각 1 , 2 ,3, 4, 및 5회 계대배양한, PA2, PA3, PA4, PA5 및 PA6 세포주 중 어느 하나 이상을 의미할 수 있고"후기 세포주"는 모세포주를 각각 6, 7, 8, 9, 10 및 11회 계대배양한, PA7, PA8, PA9, PA10 PA11 및 PA12 세포주 중 어느 하나 이상을 의미할 수 있다. 상기 전기 멜라닌 세포주는, 제1전기 멜라닌 세포주 및 제2전기 멜라닌 세포주를 포함할 수 있고, 상기 후기 멜라닌 세포주는, 제1후기 멜라닌 세포주 및 제2후기 멜라닌 세포주를 포함할 수 있다. 상기 제1전기 멜라닌 세포주는, PA1, PA2 및 PA3 세포주 중 하나 이상을 포함할 수 있고, 상기 제2전기 멜라닌 세포주는, PA4, PA5 및 PA6 멜라닌 세포주 중 하나 이상을 포함할 수 있다. 또한, 상기 제1 후기 멜라닌 세포주는, PA7, PA8 및 PA9 세포주 중 하나 이상을 포함할 수 있고, 상기 제2후기 멜라닌 세포주는, PA10, PA11 및 PA12 멜라닌 세포주 중 하나 이상을 포함할 수 있다.
본 명세서에서, n계대, 계대 n(passage n 또는 PA n)은 모세포주를 n-1회 계대배양한 세포주를 의미한다. 예컨대, 3계대 또는 PA3은, 모세포주를 2회 계대배양한 세포주를 의미한다. 상기 n은 정수이다.
상기와 같은 관점에서, 상기 세포 회춘은, 후기 계대배양 세포가 전기의 세포와 동등 또는 유사한 상태로 되돌아가는 것을 의미할 수 있다. 예컨대, PA12 세포주가 PA1 세포주의 상태로, PA12 세포주가 PA2 세포주의 상태로, PA12 세포주가 PA3 세포주의 상태로, PA12 세포주가 PA4 세포주의 상태로, PA12 세포주가 PA5 세포주의 상태로, PA12 세포주가 PA6 세포주의 상태로, PA11 세포주가 PA1 세포주의 상태로, PA11 세포주가 PA2 세포주의 상태로, PA11 세포주가 PA3 세포주의 상태로, PA11 세포주가 PA4 세포주의 상태로, PA11 세포주가 PA5 세포주의 상태로, PA11 세포주가 PA6 세포주의 상태로, PA10 세포주가 PA1 세포주의 상태로, PA10 세포주가 PA2 세포주의 상태로, PA10 세포주가 PA3 세포주의 상태로, PA10 세포주가 PA4 세포주의 상태로, PA10 세포주가 PA5 세포주의 상태로, PA10 세포주가 PA6 세포주의 상태로, PA9 세포주가 PA1 세포주의 상태로, PA9 세포주가 PA2 세포주의 상태로, PA9 세포주가 PA3 세포주의 상태로, PA9 세포주가 PA4 세포주의 상태로, PA9 세포주가 PA5 세포주의 상태로, PA9 세포주가 PA6 세포주의 상태로되돌아 가는 것을 의미할 수 있다.
본 발명의 일 관점인 조성물에 있어서, 상기 조성물은, 계대배양계에 포함된 세포주 중 6회 이상 계대배양한 세포주의 상태에 해당하는 생체 세포를, 5회 이하 계대배양한 세포주의 상태로 되돌리는 것일 수 있다. 상기 계대배양계는, 멜라닌 모세포주인 PA1 세포주 및 상기 멜라닌 모세포주를 각각 1, 2 ,3, 4 및 5회 계대배양한, PA2, PA3 PA4, PA5 및 PA6 세포주 중 어느 하나 이상을 포함하는 전기 멜라닌 세포주; 및 상기 멜라닌 모세포주를 각각 6, 7, 8, 9, 10 및 11회 계대배양한, PA7, PA8, PA9, PA10, PA11 및 PA12 세포주 중 어느 하나 이상을 포함하는 후기 멜라닌 세포주를 포함하는 계대배양계일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 일 관점인 조성물에 있어서, 상기 계대배양계는, PA1, PA2, PA3, PA4, PA5, PA6, PA7, PA8, PA9, PA10, PA11 및 PA12 세포주로 구성된 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기와 같은 측면에서, 상기 계대배양된 세포주는 기탁번호 KCTC12906BP 또는 KCTC12907BP의 세포주일 수 있다. 예컨대, 전기 멜라닌 세포주는 기탁번호 KCTC12906BP 세포주일 수 있고, 후기 멜라닌 세포주는 KCTC12907BP세포주일 수 있다. 구체적으로, PA3 세포주는 기탁번호 KCTC12906BP 세포주이고, PA11 세포주는 KCTC12907BP세포주이다.
본 발명의 일 관점인 조성물에 있어서, 상기 제니스테인(Genistein), 에피갈로카테친 갈레이트(Epigallocatechin gallate, EGCG), 이들의 유도체, 이들의 이성질체, 이들의 약학적으로 허용 가능한 염, 이들의 프로드럭, 이들의 수화물 및 이들의 용매화물로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상을 포함하는 조성물은 타이로시나아제(tyrosinase), 마이크로프탈미아 연관 전사인자(microphthalmia-associated tranion factor, MITF), 타이로시나아제 관련 단백질-1(tyrosinase related protein-1, TRP-1) 및 타이로시나아제 관련 단백질-2(TRP-2), EZH1(enhancer of zeste homolog 1), p16 및 p21로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 발현을 감소시킬 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 상기와 같은 관점에서, 계대배양을 반복할수록 상기 타이로시나아제를 포함하는 물질들의 발현양이 증가할 수 있으나, 본 발명의 일관점인 조성물을 포함한 배지에서 계대배양(예컨대 7계대부터)한 세포주는 상기 타이로시나아제, 마이크로프탈미아 연관 전사인자, 타이로시나아제 관련 단백질-1 및 타이로시나아제 관련 단백질-2, EZH1, p16 및 p21로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 발현양이 전기 계대배양 세포주(예컨대 2계대)에서의 발현양과 동등 또는 그 이하 수준으로 감소될 수 있다.
본 발명의 일 관점인 조성물에 있어서, 상기 조성물은 p14, p19, p27, 사이클린 D(cyclin D), 사이클린 E(cyclin E), 사이클린 의존성 키나아제(cyclin dependent kinase4, CDK4), 카델린연관 향균 펩티드(cathelin-related antimicrobial peptide, CRAMP), 스타스민(stathmin), EF-1a 및 키티나제3 유사3(chitinase 3-like 3)로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 발현을 감소시킬 수 있다. 상기와 같은 관점에서, 계대배양을 반복할수록 상기 p14를 포함하는 물질들의 발현양이 증가할 수 있으나, 본 발명의 일관점인 조성물을 포함한 배지에서 계대배양(예컨대 7계대부터)한 세포주는, 상기 p14 등의 발현양이 전기 세포주에서의 발현양과 동등 또는 그 이하의 수준으로 감소될 수 있다.
본 발명의 일 관점인 조성물에 있어서, 상기 조성물은, 히스톤탈아세틸화효소 5(histonedeacetylase 5)의 발현을 증가시킬 수 있다.
상기 발현 변화 검출은, 조직, 세포(예컨대, 멜라닌 세포), 체액(예컨대, 혈액, 조직액)에서 이루어질 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 일 관점인 조성물에 있어서, 상기 조성물은 약학, 건강식품 또는 화장료 조성물일 수 있다.
구체적으로, 약학 또는 미용 분야에서 통상의 방법에 따라 환자의 신체 내 투여에 적합한 단위투여형의 제제로 제형화시켜 투여할 수 있다. 이러한 목적에 적합한 제형으로는 비경구투여 제제로서 주사제 또는 국소 투여용 제제 등이 바람직하다. 주사용 제형은 등장성 수용액 또는 현탁액이 바람직하다. 그러나, 이때, 일반적으로 사용되는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 함께 사용할 수 있다. 이렇게 제조된 본 발명의 제제는 통상의 방법에 따라 비경구적으로, 예를 들면 특정 부위에 직접 투여할 수 있다. 이때, 조성물의 주입은 주사기를 이용하여 이루어질 수 있다. 유효성분의 실제 투여량은 투여경로, 환자의 체중, 연령 및 성별 등 여러 관련 인자에 비추어 결정되어야 하는 것으로 이해되어야 하며, 예컨대 1회 투여량에 포함되는 조성물의 농도는 1μM 일 수 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
본 발명의 일 관점인 조성물에 있어서, 상기 조성물은 국소 투여용인 조성물일 수 있다.
본 발명의 일 관점인 조성물에 있어서, 상기 조성물은 화장료 조성물일 수 있다. 구체적으로, 화장료 조성물로는 예를 들어, 기초 화장료, 메이크업 화장료, 모발용 화장료, 바디용 화장료 등이 있을 수 있고, 그 제형은 특별히 제한되지 않으며, 목적하는 바에 따라 적절히 선택할 수 있다.
예를 들면, 상기 화장료 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연화장수, 영양화장수, 로션, 바디로션, 영양 크림, 마사지 크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 젤, 패치, 수중유(O/W)형, 유중수(O/W)형 등의 기초 화장료, 립스틱, 메이크업베이스 또는 파운데이션 등의 색조 화장료, 샴푸, 린스, 바디클렌저, 치약 또는 구강 청정제 등의 세정료, 헤어토닉, 젤 또는 무스 등의 정발제, 양모제 또는 염모제 등의 모발용 화장료 조성물로 제형화 될 수 있다.
상기 화장료 조성물은 화장품학적으로 허용가능한 매질 또는 기제를 함유한다. 이는 국소적용에 적합한 모든 제형으로, 예를 들면 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀) 및/또는 비이온형의 소낭 분산제의 형태로, 또는 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱의 형태로 제공될 수 있다. 이들 조성물은 당해 분야의 통상적 방법에 따라 제조될 수 있다.
본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 일 실시태양에서, 상기 화장료 조성물에 추가적으로 점증제를 함유할 수 있다. 본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 점증제는 메틸 셀룰로스, 카르복시 메틸 셀룰로스, 카르복시 메틸 하이드록시 구아닌, 하이드록시 메틸 셀룰로스, 하이드록시에틸셀룰로스, 카르복시 비닐 폴리머, 폴리쿼터늄, 세테아릴 알콜, 스테아릭산, 카라기난 등을 사용할 수 있으며, 바람직하게는 카르복시 메틸 셀룰로스, 카르복시 비닐 폴리머, 폴리쿼터늄 중에서 1종 이상을 사용할 수 있으며, 가장 바람직하게는 카르복시 비닐 폴리머가 될 수 있다.
본 발명의 일 실시태양에서 상기 화장료 조성물은 필요에 따라 적절한 각종의 기제와 첨가제를 함유할 수 있으며, 이들 성분의 종류와 양은 발명자에 의해 용이하게 선정될 수 있다. 필요에 따라 허용 가능한 첨가제를 함유할 수 있으며, 예를 들면, 당업계에 통상적인 방부제, 색소, 첨가제 등의 성분을 추가로 포함할 수 있다.
방부제는 구체적으로 페녹시에탄올(Phenoxyethanol) 또는 1,2-헥산디올 (1,2-Hexanediol) 등이 될 수 있고, 향료는 인공향료 등이 될 수 있다.
그리고, 본 발명의 일 실시태양에서 화장료 조성물은 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 엑기스로 이루어진 군에서 선택된 조성물을 포함할 수 있다. 이외에 첨가해도 되는 배합 성분으로서는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한제, 정제수 등을 들 수 있다.
또한, 건강식품은, 일상 식사에서 결핍되기 쉬운 영양소나 인체에 유용한 기능을 가진 원료나 성분(기능성원료)을 사용하여 제조한 것으로, 인체의 정상적인 기능을 유지하거나 생리기능 활성화를 통하여 건강을 유지하고 개선하는 식품을 의미할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 상기 건강식품은 정제, 캡슐, 분말, 과립, 액상, 환 등의 형태로 제조, 가공될 수 있으나, 이에 한정되지 않으며 법률에 따라 어떤 형태로든지 제조, 가공될 수 있다.
본 발명의 일 측면에서 건강 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 화합물을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드 폴리사카라이드, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제 (타우마틴, 스테비아 추출물 (예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진등) 및 합성 향미제 (사카린, 아스파르탐 등)를 사용할 수 있다.
일반적으로 건강식품 조성물에 의해 투여되는 유효성분량은 0.0001mg/kg/일 내지 대략 1000mg/kg/일의 범위일 수 있다. 더 바람직한 투여량은 0.02mg/kg/일 내지 100mg/kg/일 수 있다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다.
또한, 이외에 첨가해도 되는 배합 성분은 이에 한정되는 것은 아니며, 또, 상기 어느 성분도 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 배합 가능하다.
본 발명의 일 관점인 조성물에 있어서, 상기 조성물은, 0.001 내지 2.0μM 또는 0.005 내지 1.5μM의 제니스테인(Genistein), 에피갈로카테친 갈레이트(Epigallocatechin gallate, EGCG), 이들의 유도체, 이들의 이성질체, 이들의 약학적으로 허용 가능한 염, 이들의 프로드럭, 이들의 수화물 또는 이들의 용매화물을 포함할 수 있으나 이에 제한되지 않는다. 구체적으로 본 발명의 일 관점에 있어서, 조성물에 포함된 제니스테인, 에피갈로카테친갈레이트, 이들의 유도체, 이들의 이성질체, 이들의 약학적으로 허용 가능한 염, 이들의 프로드럭, 이들의 수화물 또는 이들의 용매화물의 농도는 0.0001μM 이상, 0.001μM 이상, 0.002μM 이상, 0.003μM 이상, 0.004μM이상, 0.005μM 이상, 0.006μM 이상, 0.007μM 이상, 0.008μM 이상, 0.009μM 이상, 0.01μM이상, 0.15μM 이상, 0.15μM 이상, 0.2μM 이상, 0.25μM 이상, 0.3μM 이상, 0.35μM 이상, 0.4μM 이상, 0.45μM 이상, 0.5μM 이상, 0.6μM 이상, 0.7μM 이상, 0.8μM 이상, 0.9μM 이상, 1.0μM 이상, 1.1μM 이상, 1.2μM 이상, 1.3μM 이상, 1.4μM 이상, 1.5μM 이상, 1.6μM 이상, 1.7μM 이상, 1.8μM 이상, 1.9μM 이상, 2.0μM 이상일 수 있으나 이에 제한되지는 않으며, 2.1μM 이하, 2.0μM 이하, 1.9μM 이하, 1.8μM 이하, 1.7μM 이하, 1.6μM 이하, 1.5μM 이하, 1.4μM 이하, 1.3μM 이하, 1.2μM 이하, 1.1μM 이하, 1.0μM 이하, 0.9μM 이하, 0.85μM 이하, 0.80μM 이하, 0.75μM 이하, 0.70μM 이하, 0.65μM 이하, 0.60μM 이하, 0.55μM 이하, 0.50μM 이하, 0.45μM 이하, 0.40μM 이하, 0.35μM 이하, 0.30μM 이하, 0.25μM 이하, 0.20μM 이하, 0.15μM 이하, 0.10μM 이하, 0.05μM 이하, 0.04μM 이하, 0.03μM 이하, 0.02μM 이하, 0.01μM 이하, 0.005μM 이하, 0.004μM 이하, 0.003μM 이하, 0.002μM 이하, 0.001μM 이하, 0.0005μM 이하일 수 있으나 이에 제한되지 않는다.
이하, 하기의 실시예를 통하여 본 발명을 보다 구체적으로 설명한다. 그러나 하기의 실시에는 본 발명에 대한 이해를 돕기 위해 예시의 목적으로만 제공된 것일 뿐, 본 발명의 범주 및 범위가 이에 한정되지 않는다.
[실시예 1] 멜라닌 세포의 계대배양
인간 1차 멜라닌 세포(human primary melanocyte, Life Technologies, CA, USA)를 인간 멜라닌 세포 성장 보충물(human melanocyte growth supplement(HMGS), Gibco BRL, NY, USA)를 첨가한 M-254 배지(Gibco BRL, NY, USA))를 이용하여 100mm 배양접시에서 2일 간격으로 배지를 교환하며, 상온, 5% CO2 배양기에서 세포의 밀도가 플레이트 면적의 80%를 차지할 때까지 배양하고, 또 다른 100mm 배양접시에 1:4의 비율로 다음 계대배양을 수행하였다.
상기 멜라닌 세포를 배양하기 위해 처음 100mm 배양접시에 담았을 때, 이 세포의 계대를 1계대(passage 1, PA1)으로 간주하였고, 계대배양은 최종 11회(PA12)까지 진행하였다.
[실시예 2] 멜라닌 세포의 멜라닌 색소 형성능 증가 관련 인자의 발현 변화 관찰
제니스테인(Genistein), 에피갈로카테친 갈레이트(Epigallocatechin gallate, EGCG)가 후기 계대배양 멜라닌 세포주에 미치는 영향을, 멜라닌 색소 형성과 관련이 있다고 알려진 인자들(타이로시나아제(tyrosinase), 마이크로프탈미아 연관 전사인자(microphthalmia-associated tranion factor, MITF), 타이로시나아제 관련 단백질-1(tyrosinase related protein-1, TRP-1) 및 타이로시나아제 관련 단백질-2(TRP-2))의 발현양 변화를 통하여 확인하였다.
대조군은 멜라닌 세포를 아무런 처리없이 11계대 및 12계대까지 계대배양을 하였고, 실험군은, 6계대까지는 대조군과 동일한 환경에서 계대배양한 후, 7계대부터 제니스테인(Genistein) 또는 에피갈로카테친 갈레이트(Epigallocatechin gallate, EGCG) 1μM을 포함하는 배지에서 11계대 및 12계대까지 계대배양하였다.
구체적으로, 멜라닌 색소 형성과 관련이 있다고 알려진 인자들(타이로시나아제(tyrosinase), 마이크로프탈미아 연관 전사인자(microphthalmia-associated tranion factor, MITF), 티로시나아제 관련 단백질-1(tyrosinase related protein-1, TRP-1) 및 티로시나아제 관련 단백질-2(TRP-2))의 발현양 변화의 관계를 확인하기 위하여, Q-PCR을 수행 하였다. 인간 멜라닌 세포에서 분리한 RNA로부터 cDNA를 합성하였고, 각각의 프라이머를 이용하여 Q-PCR(Applied biosystems, 7500 Fast)로 mRNA양의 변화를 측정하였다. Q-PCR의 실험은 95℃에서 15초, 60℃ 60초 싸이클을 총 40회 반복하였으며, 대조군의 유전자 발현에 비해 해당 유전자 발현이 얼마나 증가하였는지 상대적인 값을 측정하였다. 프라이머는 Applied Biosystems에서 제조한 TaqMan 제품으로 각각 다음과 같다: 티로시나아제 (TYR, 제품번호:Hs01099965_m1), MITF (제품번호:Hs01117294_m1), TRP1 (제품번호:Hs00167051_m1), TRP2 (제품번호:Hs01095856_m1).
그 결과(도 1), 대조군에서 계대배양 후기에서 증가한 타이로시나아제(tyrosinase), 마이크로프탈미아 연관 전사인자(microphthalmia-associated tranion factor, MITF), 타이로시나아제 관련 단백질-1(tyrosinase related protein-1, TRP-1) 및 타이로시나아제 관련 단백질-2(TRP-2)의 mNRA 발현양이, 실험군에서는 크게 감소함을 확인할 수 있었다(도면상의 그래프 세로축은 각 유전자의 mRNA 발현량/GAPDH mRNA 발현량으로써 해당 유전자의 상대적 발현량이다).
[실시예 3] 멜라닌 세포의 노화 지표 관찰
노화된 세포에서 다량 발견되는 p16 및 p21의 발현양이, 제니스테인(Genistein) 또는 에피갈로카테친 갈레이트(Epigallocatechin gallate, EGCG)에 의하여 영향을 받는지 확인하였다.
대조군과 실험군은 실시예 2와 동일하였다.
구체적으로 다양한 계대의 멜라닌 세포에서 RNA를 수득하여 cDNA를 제작하였고 p16, p21 특이적 프라이머를 이용하여 Q-PCR(Applied biosystems, 7500 Fast)로 mRNA양의 변화를 측정하였다. 프라이머는 Applied Biosystems에서 제조한 TaqMan 제품으로 각각 다음과 같다: p16 (제품번호:Hs00923894_m1), p21 (제품번호:Hs00355782_m1)하였다.
그 결과(도 2), 대조군에서는 계대배양 후기에서 p16 및 p21의 발현이 크게 증가하였으나, 실험군에서는 크게 감소하였음을 확인할 수 있었다(도면상의 그래프 세로축은 각 유전자의 mRNA 발현량/GAPDH mRNA 발현량으로써 해당 유전자의 상대적 발현량이다).
[실시예 4] 멜라닌 색소 형성 관련 효소의 발현 변화 관찰
EZH1(enhancer of zeste homolog 1) 단백질이 멜라닌 색소 형성에 영향을 미치는지 확인하기 위하여 siRNA 를 이용하여, EZH1의 단백질 발현을 억제하였다. 그 결과, 형성된 멜라닌 색소가 크게 감소됨을 확인하여, EZH1이 멜라닌 색소 형성을 억제함을 알 수 있었다(도 3의 아래)
또한, 상기 EZH1의 발현양이 제니스테인(Genistein) 또는 에피갈로카테친 갈레이트(Epigallocatechin gallate, EGCG)에 의하여 영향을 받는지 확인하였다.
대조군과 실험군은 실시예 2와 동일하였다.
구체적으로 대조군과 실험군의 멜라닌 세포에서 RNA를 수득하여 cDNA를 제작하였고 EZH1 특이적 프라이머를 이용하여 Q-PCR(Applied biosystems, 7500 Fast)로 mRNA양의 변화를 측정하였다. EZH1 프라이머는 Applied Biosystems에서 제조한 TaqMan 제품으로 EZH1 (제품번호: Hs00940463_m1)이다.
그 결과(도 3), 대조군에서는 계대배양 후기에 EZH1의 발현양이 크게 증가하였으나, 실험군에서는 크게 감소함을 확인할 수 있었다(도면상의 그래프 세로축은 각 유전자의 mRNA 발현량/GAPDH mRNA 발현량으로써 해당 유전자의 상대적 발현량이다).
[실시예 5] 멜라닌 세포의 표현형 관찰
제니스테인(Genistein) 또는 에피갈로카테친 갈레이트(Epigallocatechin gallate, EGCG)이 멜라닌 세포의 표현형에 영향을 주는지 확인하기 위하여 광학 현미경(배율:400배)로 대조군과 실험군의 멜라닌 세포의 표현형을 관찰하였다. 세포의 표현형은 배지가 포함되어 있는 살아있는 상태에서 광학현미경으로 40배 확대하여 관찰하였다.
그 결과, 도 4에서 확인할 수 있는 바와 같이, 멜라닌 세포의 표현형은 계대배양 초기에 비하여, 평평해지고, 세포체(cell body)의 크기가 증가하였고, 가지돌기(dendrite)의 갯수 및 이질성(heterogeniety)이 증가(노화되어 모양이 변한 세포갯수 증가: 세포체 지름 3μm이상인 세포 증가)하였으나, 제니스테인(Genistein) 또는 에피갈로카테친 갈레이트(Epigallocatechin gallate, EGCG)에 장기 노출된 경우, 다시 계대배양 초기 세포와 유사해지는 것을 확인할 수 있었다.
이하, 본 발명에 따른 조성물의 제형예를 설명하나, 약학 조성물 및 화장료 조성물은 여러 가지 제형으로 응용 가능하며, 이는 본 발명을 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.
[제형예 1] 연고
배합성분 함량(중량%)
제니스테인(Genistein) 또는 에피갈로카테친 갈레이트(Epigallocatechin gallate) 0.1
글리세린 8.0
부틸렌글리콜 4.0
유동파라핀 15.0
베타글루칸 7.0
카보머 0.1
카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드 3.0
스쿠알란 1.0
세테아릴 글루코사이드 1.5
소르비탄 스테아레이트 0.4
세테아릴 알코올 1.0
밀납 4.0
방부제, 색소, 향료 적량
정제수 잔량
[제형예 2] 마사지 크림
배합성분 함량(중량%)
제니스테인(Genistein) 또는 에피갈로카테친 갈레이트(Epigallocatechin gallate) 1.5
글리세린 8.0
부틸렌글리콜 4.0
유동파라핀 45.0
베타글루칸 7.0
카보머 0.1
카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드 3.0
밀납 4.0
세테아릴 글루코사이드 1.5
세스퀴 올레인산 소르비탄 0.9
바세린 3.0
파라핀 1.5
방부제, 색소, 향료 적량
정제수 잔량
[제형예 3] 유연화장수(스킨로션)
배합성분 함량(중량%)
제니스테인(Genistein) 또는 에피갈로카테친 갈레이트(Epigallocatechin gallate) 0.1
글리세린 3.0
부틸렌글리콜 2.
프로필렌글리콜 2.0
카르복시비닐폴리머 0.1
피이지-12 노닐페닐에테르 0.2
폴리솔베이트 80 0.4
에탄올 10.0
트리에탄올아민 0.1
방부제, 색소, 향료 적량
정제수 잔량
[제형예 4] 영양화장수(밀크로션)
배합성분 함량(중량%)
제니스테인(Genistein) 또는 에피갈로카테친 갈레이트(Epigallocatechin gallate) 0.5
글리세린 3.0
부틸렌글리콜 3.0
프로필렌글리콜 3.0
카르복시비닐폴리머 0.1
밀납 4.0
폴리솔베이트 60 1.5
카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드 5.0
스쿠알란 5.0
솔비타세스퀴올레이트 1.5
유동파라핀 0.5
세테아릴 알코올 1.0
트리에탄올아민 0.2
방부제, 색소, 향료 적량
정제수 잔량
[제형예 5] 헤어 팩
배합성분 함량(중량%)
제니스테인(Genistein) 또는 에피갈로카테친 갈레이트(Epigallocatechin gallate) 0.1
글리세린 4.0
폴리비닐알콜 15.0
히알루론산 추출물 5.0
베타글루칸 7.0
알란토인 0.1
노닐 페닐에테르 0.4
폴리솔페이트 60 1.2
에탄올 방부제 6.0
방부제, 색소, 향료 적량
정제수 잔량
[제형예 6] 주사제
배합성분 함량(ppm)
제니스테인(Genistein) 또는 에피갈로카테친 갈레이트(Epigallocatechin gallate) 10
주사용 멸균 증류수 적량
pH 조절제 적량
이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.
[수탁번호]
기탁기관명 : 한국생명공학연구원
수탁번호 : KCTC12906BP
수탁일자 : 20150917
기탁기관명 : 한국생명공학연구원
수탁번호 : KCTC12907BP
수탁일자 : 20150917
[미생물기탁증]
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Claims (11)

  1. 유효 성분으로서, 제니스테인(Genistein), 에피갈로카테친 갈레이트(Epigallocatechin gallate, EGCG), 이들의 유도체, 이들의 이성질체, 이들의 약학적으로 허용 가능한 염, 이들의 프로드럭, 이들의 수화물 및 이들의 용매화물로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상을 포함하는, 세포 회춘 유도용 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 세포는, 멜라닌 세포인, 조성물.
  3. 제 1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 조성물은, 하기 계대배양계에 포함된 세포주 중 6회 이상 계대배양한 세포주의 상태에 해당하는 생체 세포를, 5회 이하 계대배양한 세포주의 상태로 되돌리는 것인, 조성물:
    멜라닌 모세포주인 PA1 세포주 및 상기 멜라닌 모세포주를 각각 1, 2, 3, 4 및 5회 계대배양한, PA2, PA3, PA4, PA5 및 PA6 세포주 중 어느 하나 이상을 포함하는 전기 멜라닌 세포주; 및
    상기 멜라닌 모세포주를 각각 6, 7, 8, 9, 10 및 11회 계대배양한, PA7, PA8, PA9, PA10, PA11 및 PA12 세포주 중 어느 하나 이상을 포함하는 후기 멜라닌 세포주를 포함하는, 계대배양계.
  4. 제3항에 있어서,
    상기 계대배양계는,
    PA1, PA2, PA3, PA4, PA5, PA6, PA7, PA8, PA9, PA10, PA11 및 PA12 세포주로 구성된, 조성물.
  5. 제3항에 있어서,
    상기 계대배양한 세포주는, 기탁번호 KTCT12906BP 또는 KTCT12907BP의 세포주인, 조성물.
  6. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 조성물은, 타이로시나아제(tyrosinase), 마이크로프탈미아 연관 전사인자(microphthalmia-associated tranion factor, MITF), 타이로시나아제 관련 단백질-1(tyrosinase related protein-1, TRP-1), 타이로시나아제 관련 단백질-2(TRP-2) , EZH1(enhancer of zeste homolog 1), p16 및 p21로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 발현을 감소시키는, 조성물.
  7. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 조성물은, 히스톤탈아세틸화효소 5(Histonedeacetylase 5)의 발현을 증가시키는, 조성물.
  8. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 조성물은, 약학, 건강 식품 또는 화장료 조성물인, 조성물.
  9. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 조성물은, 피부에 도포하거나 국소 주사하는 것인, 조성물.
  10. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 조성물은, 0.001 내지 2.0μM의 제니스테인(Genistein), 에피갈로카테친 갈레이트(Epigallocatechin gallate, EGCG), 이들의 유도체 이들의 이성질체, 이들의 약학적으로 허용 가능한 염, 이들의 프로드럭, 이들의 수화물 또는 이들의 용매화물을 포함하는, 조성물.
  11. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 조성물은, 0.005 내지 1.5μM의 제니스테인(Genistein), 에피갈로카테친 갈레이트(Epigallocatechin gallate, EGCG), 이들의 유도체, 이들의 이성질체, 이들의 약학적으로 허용 가능한 염, 이들의 프로드럭, 이들의 수화물 또는 이들의 용매화물을 포함하는, 조성물.
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