KR101979105B1 - 액상 플라즈마를 포함하는 피부 미백용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 액상 플라즈마를 포함하는 피부 미백용 조성물에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 발명은 액상 플라즈마를 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물, 피부 색소 침착 질환의 치료 또는 예방용 약제학적 조성물에 관한 것이다.

Description

액상 플라즈마를 포함하는 피부 미백용 조성물{COMPOSITION FOR SKIN-WHITENING COMPRISING NON THERMAL PLASMA TREATED SOLUTION}

본 발명은 액상 플라즈마를 포함하는 피부 미백용 조성물에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 발명은 액상 플라즈마를 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물, 및 피부 색소 침착 질환의 치료 또는 예방용 약제학적 조성물에 관한 것이다.

피부흑화(melanogenesis)는 멜라닌 색소생성세포(melanocyte)에서 자외선 등의 자극에 대한 방어기작으로 멜라닌 생성활동이 증가되고 이로 말미암아 만들어진 다량의 멜라닌이 각질형성세포(keratinocyte)로 전이되어 피부표피층에 축척된 결과이다. 비록 멜라닌이 피부보호작용을 하나 피부의 과색소침착은 기미, 주근깨, 피부염증 후의 피부흑화, 노인성 색소반점 등을 일으키며 이로 인해 당사자에게 미용상의 불편뿐만 아니라 정신적으로 부정적인 영향을 미쳐 사회활동에 불편을 초래하기도 한다. 멜라닌 생성 과정은 아미노산의 일종인 티로신(tyrosine)에 티로시나제(tyrosinase)라는 효소가 작용하여 도파(DOPA), 도파퀴논(dopaquinone)으로 바뀐 후 비효소적인 산화 반응을 거쳐 만들어 지며, 이것이 피부 내에 이상 침착하여 기미, 검버섯 등이 생기는 것이라고 알려져 있다. 이와 같은 색소침착, 기미, 반점 등의 완화, 예방 및 치료에는 멜라닌 생성을 억제하는 물질, 예를 들면 하이드로퀴논(hydroquinone), 알부틴, 비타민 C 및 그 유도체 등이 개발되어 이를 함유한 미백화장료가 공개되었으며, 한국 특허공고번호 제 2005-0509848호에는 전호로부터 분리된 케락톤 유도체를 함유한 미백화장료가 공개되어 있고. 또한, 한국특허공고번호 2005-0479741호에는 글루코오스 아실화 유도체를 함유한 미백화장료가 공개되어 있다. 이 중, 하이드로퀴논은 일단 효과가 인정되고 있지만 감작성이 있기 때문에 일반적으로 사용이 제한되고 있다. 아스콜빈산은 쉽게 산화되어, 이를 배합한 화장료는 변색, 변취되는 문제를 야기하고, 식물추출물 유래의 물질들은 식물의 산지에 따라 효능의 차이가 심하여 제품의 균질성이 유지되기 어렵고, 글루코오스 아실화 유도체는 합성 효율이 매우 낮은 단점이 있다.

본 발명은 상기와 같은 종래 기술상의 문제점을 해결하기 위해 안출된 것으로, 액상 플라즈마를 포함하는 피부 미백용 조성물에 관한 것이다.

이에 본 발명자들은 피부의 색소 침착의 근본적인 치료를 위한 방법을 개발하기 위하여 예의 노력한 결과, 액상 플라즈마가 티로시나아제 활성을 저해 효과 및 멜라닌 생합성을 억제효과를 나타내므로 피부 미백에 이용될 수 있음을 확인하고 본 발명을 완성하였다.

그러나 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.

이하, 본원에 기재된 다양한 구체예가 도면을 참조로 기재된다. 하기 설명에서, 본 발명의 완전한 이해를 위해서, 다양한 특이적 상세사항, 예컨대, 특이적 형태, 조성물, 및 공정 등이 기재되어 있다. 그러나, 특정의 구체예는 이들 특이적 상세 사항 중 하나 이상 없이, 또는 다른 공지된 방법 및 형태와 함께 실행될 수 있다. 다른 예에서, 공지된 공정 및 제조 기술은 본 발명을 불필요하게 모호하게 하지 않게 하기 위해서, 특정의 상세사항으로 기재되지 않는다. "한 가지 구체예" 또는 "구체예"에 대한 본 명세서 전체를 통한 참조는 구체예와 결부되어 기재된 특별한 특징, 형태, 조성 또는 특성이 본 발명의 하나 이상의 구체예에 포함됨을 의미한다. 따라서, 본 명세서 전체에 걸친 다양한 위치에서 표현된 "한 가지 구체예에서" 또는 "구체예"의 상황은 반드시 본 발명의 동일한 구체예를 나타내지는 않는다. 추가로, 특별한 특징, 형태, 조성, 또는 특성은 하나 이상의 구체예에서 어떠한 적합한 방법으로 조합될 수 있다.

본 발명의 하나의 목적은 티로시나아제 활성억제효과 및 멜라닌 생합성 억제효과를 통해 우수한 미백효과를 나타내며, 안정성 면에서도 우수한 액상 플라즈마를 포함하는 피부 미백용 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 상기 액상 플라즈마를 포함하는 피부 미백용 조성물을 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 플라즈마를 포함하는 피부 미백용 조성물을 함유하는 색소 침착 질환의 치료 또는 예방용 약제학적 조성물을 제공하는데 있다.

본 명세서에서 사용된 용어 "미백"은 피부가 자외선에 지속적으로 노출되어 멜라닌 세포가 증가하고 그로 인해 피부에 멜라닌 색소가 과도하게 침착되는 것을 방지하거나, 기존에 침착된 멜라닌 색소를 엷게 하는 기능을 일컫는다. 이에 따라, 과도한 멜라닌 색소의 침착으로 생기는 기미나 주근깨의 생성을 억제할 수 있다.

본 명세서에서 사용된 용어 "액상 플라즈마(non thermal plasma treated solution, NTS)"는 고밀도 고에너지 플라즈마를 액체 속에서 발생시키는 것을 의미하며, 대기압의 상온 비열 플라즈마(nonthermal plasma, NTP)에 노출시켜 제조될 수 있다. 상기 용어 “액상 플라즈마”는 용어 “플라즈마 처리된 액상 물질(plasma-conditioned liquid material)"과 상호교환적으로 사용될 수 있고, 상기의 “액상 물질”은 액상 형태의 물질은 제한없이 사용 가능하나, 바람직하게는 물, 식염수, 완충액, 또는 배지이고, 가장 바람직하게는 배지이다.

본 명세서에서 사용된 용어 "배지(culture media)"는 인 비트로(in vitro)에서 세포 성장 및 생존을 지지할 수 있게 하는 배지를 의미하고, 세포의 배양에 적절한 당 분야에서 사용되는 통상의 배지를 모두 포함한다. 세포의 종류에 따라 배지와 배양조건을 선택할 수 있다. 세포의 배양에 사용되는 기본배지는 바람직하게는 세포 배양 최소 배지(cell culture minimum medium: CCMM)로, 일반적으로 탄소원, 질소원 및 미량원소 성분을 포함한다. 이런 세포 배양 기본 배지에는 예를 들면, DMEM(Dulbeco's Modified Eagle's Medium), MEM(Minimal essential Medium), BME(Basal Medium Eagle), RPMI1640, F-10, F-12,(Minimal essential Medium), GMEM(Glasgow's Minimal essential Medium), Iscove's Modified Dulbecco's Medium 등이 있으나, 이로 제한되지 않는다.

본 발명의 일 구체예에서 "치료”란, 본 발명에 따른 액상 플라즈마를 이용하여 피부 색소침착 및 이로 인한 다른 증세를 호전시키거나 이롭게 변경하는 모든 행위를 의미한다. 본원이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자라면, 대한의학협회 등에서 제시된 자료를 참조하여 피부 색소침착의 정확한 기준을 파악하고, 개선, 향상 및 치료된 정도를 판단할 수 있을 것이다.

본 발명의 일 구체예에서 “예방”이란, 본 발명에 따른 액상 플라즈마를 이용하여 피부 색소침착 및 이로 인한 다른 증세를 억제 또는 지연시키는 모든 행위를 의미한다. 피부 색소침착 질환에 치료효과가 있는 본원의 조성물은 피부 색소침착의 초기증상 또는 증상이 나타나기 전에 본 발명에 따른 액상 플라즈마를 이용하여 이러한 질환을 예방할 수 있다는 것은 당업자에게 자명할 것이다.

본 명세서에 있어서 “약학조성물”이란, 특정한 목적을 위해 투여되는 조성물을 의미한다. 본 발명의 목적상, 본 발명의 약학조성물은 플라즈마를 액상 물질에 조사하여 제조한 액상 플라즈마를 유효성분으로 포함하는 것이며, 이에 관여하는 단백질 및 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 포함할 수 있다. 상기의 "약학적 허용될 가능한" 담체 또는 부형제는 정부의 규제부에 의해 승인된 것이나, 또는 척추 동물, 그리고 보다 특별하게는 인간에게 사용을 위한 정부 또는 기타 일반적으로 승인된 약전에서 리스트된 것을 의미한다.

비경구적인 투여를 위해 본 발명의 약학조성물은 유성 또는 수성 담체에 있는 현탁액, 용액 또는 에멀젼의 형태로 될 수 있고, 고체 또는 반고체의 형태로 제조될 수 있다. 또한, 본 발명의 약학조성물은 현탁제, 안정화제, 용해제 및/또는 분산제와 같은 제형화제를 포함할 수 있고, 멸균될 수 있다. 상기 약학조성물은 제조 및 저장의 조건 하에서 안정할 수 있고, 세균이나 곰팡이와 같은 미생물의 오염 작용에 대해 보존될 수 있다. 대안적으로, 본 발명의 약학조성물은 사용 전에 적절한 담체와 재구성을 위해 멸균 분말 형태일 수 있다. 약학조성물은 단위-복용량 형태로, 마이크로니들 패치에, 앰플에, 또는 기타 단위-복용량 용기에, 또는 다-복용량 용기에 존재할 수 있다. 대안적으로, 약학적 조성물은 단지 멸균 액체 담체, 예를 들어 사용 바로 전에 주사용 물의 부가함을 요하는 동결-건조된(냉동건조) 상태로 보관될 수 있다. 즉시 주사용액 및 현탁액은 멸균 분말, 그래뉼 또는 타블렛으로 제조될 수 있다.

몇몇 비 제한적인 실시형태에 있어서, 본 발명의 약학조성물은 제형화되어 질 수 있고, 또는 액체 속에 미립구의 형태로 포함될 수 있다. 어떤 비 제한적인 실시형태에 있어서, 본 발명의 약학조성물은 이들의 약학적으로 허용될 수 있는 화합물 및/또는 혼합물을 0.001 내지 100,000 U/kg 사이의 농도로 포함할 수 있다. 또한 어떤 비 제한적인 실시형태에 있어서, 본 발명의 약학조성물은 적절한 부형제는 보존제, 현탁제, 추가적인 안정화제, 염료, 완충제, 항균제, 항진균제, 및 등장화제, 예를 들어, 설탕 또는 염화나트륨을 포함할 수 있다. 여기서 사용된 것으로, 용어 "안정화제"는 보존 수명을 증가하기 위해 본 발명의 약학조성물에 선택적으로 사용된 화합물을 언급한다. 비-제한적인 실시에 있어서, 안정화제는 당, 아미노산, 또는 폴리머일 수 있다. 또한 본 발명의 약학조성물은 하나 또는 그 이상의 약학적으로 허용될 수 있는 담체를 포함할 수 있고, 상기 담체는 용매 또는 분산 배지일 수 있다. 약학적으로 허용될 수 있는 담체의 비-제한적인 예는 물, 식염수, 에탄올, 폴리올 (예, 글리세롤, 프로필렌 글리콜 및 액체 폴리에틸렌 글리콜), 오일, 및 이들의 적절한 혼합물을 포함한다. 본 발명의 약학조성물에 적용되는 멸균 기술의 비-제한적인 예는 세균-억제 필터를 통한 여과, 터미날 멸균화, 멸균 제제의 합체, 방사선 조사, 멸균 가스 조사, 가열, 진공 건조 및 동결 건조를 포함한다.

본 명세서에 있어서 “투여”란, 어떠한 적절한 방법으로 환자에게 본 발명의 조성물을 도입하는 것을 의미하며, 본 발명의 조성물의 투여경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 어떠한 일반적인 경로를 통하여 투여될 수 있다. 경구 투여, 복강 내 투여, 정맥 내 투여, 근육 내 투여, 피하 투여, 피내 투여, 비내 투여, 폐내 투여, 직장내 투여, 강내 투여, 복강 내 투여, 경막 내 투여가 이루어질 수 있으나, 본 발명의 약학조성물은 피부 위에 도포하거나 피하 또는 피내에 주사하는 형태로 제공되는 것이 가장 바람직하나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 치료 방법은 상기 약학조성물을 약제학적 유효량으로 투여하는 것을 포함할 수 있다. 본 발명에서 유효량은 질환의 종류, 질환의 중증도, 조성물에 함유된 유효 성분 및 다른 성분의 종류 및 함량, 제형의 종류 및 환자의 연령, 체중, 일반 건강 상태, 성별 및 식이, 투여 시간, 투여 경로 및 조성물의 분비율, 치료 기간, 동시 사용되는 약물을 비롯한 다양한 인자에 따라 조절될 수 있다.

본 명세서에 있어서 “화장료 조성물”이란, 피부 색소침착 및 이로 인한 다른 증세를 호전시키거나 개선을 위한 조성물이다. 본 발명의 조성물을 유효성분으로 포함하는 화장료조성물은 화장수, 영양로션, 영양에센스, 마사지 크림, 미용목욕물첨가제, 바디로션, 바디밀크, 배스오일, 베이비오일, 베이비파우더, 샤워겔, 샤워크림, 선스크린로션, 선스크린크림, 선탠크림, 스킨로션, 스킨크림, 자외선차단용 화장품, 크렌징밀크, 탈모제(화장용), 페이스 및 바디로션, 페이스 및 바디크림, 피부미백크림, 핸드로션, 헤어로션, 화장용크림, 쟈스민오일, 목욕비누, 물비누, 미용비누, 샴푸, 손세정제(핸드클리너), 약용비누(비의료용), 크림비누, 페이셜워시, 헤어린스, 화장비누, 치아미백용 겔, 치약 등의 형태로 제조될 수 있다. 이를 위해 본 발명의 조성물은 화장료조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 또는 희석제를 더 포함할 수 있다. 본 발명의 화장료 조성물 내에 더 추가될 수 있는 담체, 부형제 또는 희석제로는 정제수, 오일, 왁스, 지방산, 지방산 알콜, 지방산 에스테르, 계면활성제, 흡습제(humectant), 증점제, 항산화제, 점도 안정화제, 킬레이팅제, 완충제, 저급 알콜 등이 포함되지만, 이에 제한되는 것은 아니다. 또한, 필요에 따라 미백제, 보습제, 비타민, 자외선 차단제, 향수, 염료, 항생제, 항박테리아제, 항진균제를 포함할 수 있다. 상기 오일로서는 수소화 식물성유, 피마자유, 면실유, 올리브유, 야자인유, 호호바유, 아보카도유가 이용될 수 있으며, 왁스로는 밀랍, 경랍, 카르나우바, 칸델릴라, 몬탄, 세레신, 액체 파라핀, 라놀린이 이용될 수 있다. 지방산으로는 스테아르산, 리놀레산, 리놀렌산, 올레산이 이용될 수 있고, 지방산 알콜로는 세틸알콜, 옥틸도데칸올, 올레일알콜, 판텐올, 라놀린알콜, 스테아릴 알콜, 헥사데칸올이 이용될 수 있으며 지방산 에스테르로는 이소프로필미리스테이트, 이소프로필 팔미테이트, 부틸스테아레이트가 이용될 수 있다. 계면활성제로는 당업계에 알려진 양이온 계면활성제, 음이온 계면활성제 및 비이온성 계면활성제가 사용가능하며 가능한 한 천연물 유래의 계면활성제가 바람직하다. 그 외에도 화장품 분야에서 널리 알려진 흡습제, 증점제, 항산화제 등을 포함할 수 있으며, 이들의 종류와 양은 당업계에 공지된 바에 따른다.

본 발명의 일 구체예에서, (a) 플라즈마 발생 장치에 캐리어 가스를 충진하는 단계; (b) 상기 플라즈마 발생 장치에 0.5kV 내지 20kV의 전압 및 10 내지 30kHz의 주파수를 공급하여 플라즈마를 발생시키는 단계; 및 (c) 상기 발생된 플라즈마를 액상 물질에 조사하는 단계를 포함하는 피부 미백용 액상 플라즈마 제조 방법을 제공하고, 상기 (a) 단계에서의 캐리어 가스는 질소, 헬륨, 아르곤, 및 산소로 구성되는 그룹으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는 피부 미백용 액상 플라즈마 제조 방법을 제공하며, 상기 캐리어 가스는 헬륨 및 산소인 것을 특징으로 하는 피부 미백용 액상 플라즈마 제조 방법을 제공하며, 상기 (b) 단계에서의 조사는 액상 물질의 표면으로부터 0.1cm 내지 15cm 떨어진 거리에서 1㎖당 1분간 수행하는 것을 특징으로 하는 것인 피부 미백용 액상 플라즈마 제조 방법을 제공하며, 상기 (c) 단계에서의 액상 물질은 물, 식염수, 완충액, 또는 배지인 피부 미백용 액상 플라즈마 제조 방법을 제공한다.

본 발명의 다른 구체예에서, 상기 중 어느 하나 이상의 방법으로 제조된 액상 플라즈마를 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물을 제공하고, 상기 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 또는 바디클린저로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 제형인 것을 특징으로 하는 피부 미백용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 상기 중 어느 하나 이상의 방법으로 제조된 액상 플라즈마를 유효성분으로 포함하는 피부 색소 침착 질환의 예방 또는 치료용 약학조성물을 제공하고, 상기 피부 색소 침착 질환은 기미, 주근깨, 흑색점, 모반, 약물에 의한 색소 침착, 염증 후 색소 침착, 및 피부염에서 발생하는 과색소 침착으로 구성되는 그룹으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는 피부 색소 침착 질환의 예방 또는 치료용 약학조성물을 제공하며, 상기 약학조성물은 크림, 젤, 패취, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 에센스제, 리니멘트제, 파스타제 또는 경피흡수제 제형인 것을 특징으로 하는 피부 색소 침착 질환의 예방 또는 치료용 약학조성물을 제공한다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 상기 중 어느 하나 이상의 방법으로 제조된 약학조성물을 인간을 제외한 개체에 투여하는 단계를 포함하는 피부 색소 침착 질환의 예방 또는 치료 방법을 제공하고, 상기 피부 색소 침착 질환은 기미, 주근깨, 흑색점, 모반, 약물에 의한 색소 침착, 염증 후 색소 침착, 및 피부염에서 발생하는 과색소 침착으로 구성되는 그룹으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는 피부 색소 침착 질환의 예방 또는 치료 방법을 제공한다.

이하 상기 본 발명을 단계별로 상세히 설명한다.

본 발명에 따른 액상 플라즈마를 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물, 색소 침착 질환의 치료 또는 예방용 조성물은 뛰어난 티로시나아제 활성을 저해 효과 및 멜라닌 생합성을 억제효과를 나타내므로 미백용 화장료 조성물, 피부 색소 침착 질환의 치료 또는 예방용 약제학적 조성물로 유용하게 이용될 수 있을 것으로 기대된다.

도 1은 본 발명에 따른 액상 플라즈마(NTS)의 제조방법을 나타낸 도면이다.
도 2는 본 발명에 따른 액상 플라즈마의 Zebrafish에서의 색소 형성 억제 효과를 나타낸다(실험예 1).
도 3은 본 발명에 따른 액상 플라즈마의 Human Tissue skin에서의 색소 형성 억제 효과를 나타낸다(실험예 2).
도 4는 본 발명에 따른 액상 플라즈마의 Human Tissue skin에서 티로시나아제 활성 억제 효과를 나타낸다(실험예 3).
도 5는 본 발명에 따른 액상 플라즈마의 Melanocyte에서 독성 효과 검증 결과를 나타낸다(실험예 4).
도 6은 본 발명에 따른 액상 플라즈마의 Human melanocyte에서 Melanogenesis marker 감소 효과를 나타낸다(실험예 5).

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

<실시예>

실시예 1. 액상 플라즈마(NTS)의 제조

배지로서 F12(10% FBS 24ug/ml 3-isobutyl-1-methylxanthine, 80nM 12-O-tetradecanoyl Phorbor 13-acetate(TPA), 1.2g/ml bFGF, 0.1ug/ml cholera toxin)를 각각 10ml을 용기에 담고, 헬륨과 산소를 캐리어 가스로 이용하여 플라즈마를 4KV의 세기로 배지로부터 1cm 의 거리를 두고 ml당 1분의 조건으로 처리 액상 플라즈마("플라즈마 처리된 배지")를 완성하였다. 상기 액상 플라즈마의 제조방법을 도 1에 나타내었다.

<실험예>

실험예 1. Zebrafish에서의 색소 형성 억제 효과

제브라 피쉬 암수로부터 채취한 수정란을 제브라피쉬 수정란 배양배지 (Egg water, 0.2 g sea slat/ L)에 넣고 24시간 발생 시킨 후, 실시예 1에서 제조한 액상 플라즈마를 처리하였다. 샘플 처리 시 코리온(chorion)의 샘플 투과 정도를 증가 시키기 위해 수정란의 코리온을 핀셋으로 구멍을 내어 처리 하였고, 샘플 처리 후 24시간 이후 샘플의 독성이 나타난 수정란은 제거 하고, 나머지 수정란의 코리온을 완전 제거 후 다시 동일 농도의 샘플을 처리 하였다. 샘플 처리 48 시간 이후에 대조군 대비 샘플 처리군의 색소 발생 정도를 Stereo　현미경으로 관찰하여 확인하고, 그 결과를 도 2에 나타내었다.

도 2를 참고하면 액상 플라즈마로 처리된 제브라 피쉬의 경우 대조군에 비해 색소의 형성이 억제됨이 확인되었다.

실험예 2. Human Tissue skin에서의 색소 형성 억제 효과

Human foreskin tissue를 Transwell(DMEM high glucose + 4% FBS)에서 culture한 후, 실시예 1에서 제조된 액상 플라즈마를 1min/1ml로 처리하였다. 3일간 배양한 후 고정하여 Fontana-masson stain을 통해 색소 형성 정도를 관찰하고, 그 결과를 도 3에 나타내었다.

도 3을 참고하면 액상 플라즈마로 처리된 Human Tissue skin에서 대조군에 비해 epidermal의 염색이 옅게 나타남이 확인되었다.

실험예 3. Human Tissue skin에서 티로시나아제 활성 억제 효과

Human foreskin sample을 60mm dish에 2X10⁶으로 seeding 한 후, 실시예 1에서 제조된 액상 플라즈마 1min/1ml로 처리하였다. 24시간 배양후 고정하여 Western blot, PCR, tyrosinase의 활성도 및 melanin content를 측정하고, 그 결과를 도 4에 나타내었다.

도 4로부터 알 수 있듯이 액상 플라즈마로 처리된 Human Tissue skin에서 tyrosinase 및 MITF, melanin content 가 유의성 있게 감소함이 확인되었다.

실험예 4. Melanocyte에서 독성 효과 검증

Human melanocyte에 실시예 1에서 제조한 액상 플라즈마를 처리후 시간별로 세포독성을 확인하여 그 결과를 도 5에 나타내었다.

도 5로부터 알 수 있듯이 본 발명에 따른 액상 플라즈마는 human melanocyte에서 독성을 나타내지 않는 것을 확인되었다.

실험예 5. Human melanocyte에서 Melanogenesis marker 감소 효과

Human melanocyte에 실시예 1에서 제조한 액상 플라즈마를 처리후, 시간별로 Melanogenesis marker들의 감소효과를 확인하여 그 결과를 도 6에 나타내었다.

도 6에서 알 수 있듯이 본 발명에 따른 액상 플라즈마는 human melanocyte에서 melanogenesis marker들을 감소시키는 것이 확인되었고, 이는 protein level 뿐만 아니라 Tyrosinase의 RNA Level 또한 감소시키는 것을 확인하였다.

이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.

Claims (8)

1. (a) 플라즈마 발생 장치에 캐리어 가스를 충진하는 단계;
   (b) 상기 플라즈마 발생 장치에 0.5kV 내지 20kV의 전압 및 10 내지 30kHz의 주파수를 공급하여 플라즈마를 발생시키는 단계; 및
   (c) 상기 발생된 플라즈마를 액상 물질에 조사하여 액상 플라즈마를 제조하는 단계를 포함하고,
   상기 액상 플라즈마는 티로시아나아제 활성 억제 효과 및 멜라닌 생합성 억제 효과를 나타내는 것을 특징으로 하는, 피부 미백용 액상 플라즈마 제조 방법.
   
2. 제 1항에 있어서,
   상기 (a) 단계에서의 캐리어 가스는 질소, 헬륨, 아르곤, 및 산소로 구성되는 그룹으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는, 피부 미백용 액상 플라즈마 제조 방법.
   
3. 제 1항에 있어서,
   상기 (c) 단계에서의 액상 물질은 물, 식염수, 완충액, 또는 배지인, 피부 미백용 액상 플라즈마 제조 방법.
   
4. 제 1항 내지 제 3항 중 어느 하나 이상의 방법으로 제조된 액상 플라즈마를 포함하는, 피부 미백용 화장료 조성물.
   
5. 제 1항 내지 제 3항 중 어느 하나 이상의 방법으로 제조된 액상 플라즈마를 유효성분으로 포함하는, 피부 색소 침착 질환의 예방 또는 치료용 약학조성물.
   
6. 제 5항에 있어서,
   상기 피부 색소 침착 질환은 기미, 주근깨, 흑색점, 모반, 약물에 의한 색소 침착, 염증 후 색소 침착, 및 피부염에서 발생하는 과색소 침착으로 구성되는 그룹으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는, 피부 색소 침착 질환의 예방 또는 치료용 약학조성물.
   
7. 제 5항에 따른 약학조성물을 인간을 제외한 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 피부 색소 침착 질환의 예방 또는 치료 방법.
   
8. 제 7항에 있어서,
   상기 피부 색소 침착 질환은 기미, 주근깨, 흑색점, 모반, 약물에 의한 색소 침착, 염증 후 색소 침착, 및 피부염에서 발생하는 과색소 침착으로 구성되는 그룹으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는, 피부 색소 침착 질환의 예방 또는 치료 방법.
   

Images