WO2016072115A1 - 菌検出方法 - Google Patents

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WO2016072115A1
WO2016072115A1 PCT/JP2015/071026 JP2015071026W WO2016072115A1 WO 2016072115 A1 WO2016072115 A1 WO 2016072115A1 JP 2015071026 W JP2015071026 W JP 2015071026W WO 2016072115 A1 WO2016072115 A1 WO 2016072115A1
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storage chamber
reagent
collection unit
chamber
sample
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PCT/JP2015/071026
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嘉仁 吉田
巌 和賀
Original Assignee
Ｎｅｃソリューションイノベータ株式会社
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Publication date
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M1/00—Apparatus for enzymology or microbiology
    • C12M1/34—Measuring or testing with condition measuring or sensing means, e.g. colony counters
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
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    • C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
    • C12Q1/045—Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/24—Methods of sampling, or inoculating or spreading a sample; Methods of physically isolating an intact microorganisms
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56911—Bacteria

Definitions

  • the present invention relates to a bacteria detection method.
  • a method for detecting bacterial cells for example, there is a method using a swab type device having a cotton ball at the tip of a stick (for example, Patent Document 1 and Patent Document 2).
  • a sample is collected at the tip of the device, the tip is immersed in a medium to culture the sample, and a substrate for the enzyme of the target cell is added as a reagent to detect the enzyme reaction.
  • the bacterial cells can be detected indirectly.
  • an ELISA method and an SPR method using binding molecules for example, antibodies, aptamers, binding peptides, sugar chains, binding proteins, etc.
  • binding molecules for example, antibodies, aptamers, binding peptides, sugar chains, binding proteins, etc.
  • these methods require a washing step for removing the unbound binding molecules after binding the target cells and the binding molecules. For this reason, there is a problem that such a method cannot be carried out in the swab type device as described above that does not assume the cleaning step.
  • an object of the present invention is to provide a new method for detecting bacterial cells by a device more easily and quickly using a binding molecule that can bind to a target bacterial cell.
  • the bacteria detection method of the present invention comprises Preparation process for preparing the sample, Incubating the sample in a reagent for concentrating bacteria, A reaction step of reacting the sample in the bacterium concentration reagent with a fluorescently labeled binding molecule that binds to a target bacterium, and Including a detection step of detecting the target by detecting a fluorescence polarization degree of the fluorescently labeled binding molecule;
  • the sample preparation step is performed using a sampling tool,
  • the incubation step, the reaction step, and the detection step are performed using a bacteria detection tool in which the sample collection tool is mounted on a main body;
  • the sample collection tool includes a collection unit for collecting a sample and a connection unit with the main body;
  • the body is A reagent storage chamber for storing the bacteria concentration reagent and the fluorescently labeled binding molecule;
  • a sampling part storage chamber for storing the sampling part of the sampling tool; Including a connecting portion with the sampling tool, The reagent storage chamber
  • the fungus detection tool of the present invention Having a sampling tool and a body;
  • the sample collection tool includes a collection unit for collecting a sample and a connection unit with the main body;
  • the body is A reagent storage chamber for storing the bacteria concentration reagent and the fluorescently labeled binding molecule;
  • a sampling part storage chamber for storing the sampling part of the sampling tool; Including a connecting portion with the sampling tool, The reagent storage chamber and the collection unit storage chamber are independent;
  • the sample collection tool and the main body are connected at a connection portion of the sample collection tool and a connection portion of the main body in a state where the collection portion of the sample collection tool is accommodated in the collection portion accommodating chamber of the main body; It is used for the detection method of the present invention.
  • a fluorescently labeled binding molecule is used as a binding molecule that binds to the target fungus, and the fluorescence polarization degree of the fluorescently labeled binding molecule that changes due to the binding between the fluorescently labeled binding molecule and the target
  • the target is detected by detecting. Since this method does not require the washing step as described above, according to the detection method of the present invention, the bacteria detection tool including the sample collection tool and the main body can be used, simply and quickly. Target detection can be performed. Therefore, the method for detecting a bacterium according to the present invention can be said to be an extremely useful method in fields such as food production, food management, and food distribution.
  • FIG. 1 is an example of the fungus detection tool of the present invention, (A) is a cross-sectional view, and (B) is a cross-sectional view showing a state in use.
  • FIG. 2 is another example of the fungus detection tool of the present invention, and (A), (B) and (C) are cross-sectional views showing variations of the fungus detection tool.
  • FIG. 3 is another example of the fungus detection tool of the present invention, and (A), (B), (C), (D) and (E) are cross-sectional views showing variations of the fungus detection tool. .
  • FIG. 4 is a cross-sectional view showing another example of the bacteria detection tool of the present invention.
  • FIG. 5 is another example of the fungus detection tool of the present invention, and (A), (B) and (C) are cross-sectional views showing variations of the fungus detection tool.
  • FIG. 6 is a cross-sectional view showing another example of the bacteria detection tool of the present invention.
  • FIG. 7 is another example of the fungus detection tool of the present invention, and (A), (B) and (C) are cross-sectional views showing variations of the fungus detection tool.
  • FIG. 8 is a cross-sectional view showing another example of the bacteria detection tool of the present invention.
  • FIG. 9 is another example of the fungus detection tool of the present invention, and (A), (B) and (C) are cross-sectional views showing variations of the fungus detection tool.
  • the detection method of the present invention is, for example,
  • the reagent storage chamber is a storage chamber in which a mixed reagent of the bacterium concentration reagent and the fluorescently labeled binding molecule is stored; After the preparation step, by connecting the inside of the reagent storage chamber and the inside of the collection portion storage chamber, the sample included in the collection portion of the reagent collection tool is brought into contact with the mixed reagent, and the incubation step; The reaction step is performed simultaneously.
  • the reagent storage chamber of the main body is arranged in the upward or downward direction of the collection unit storage chamber.
  • the reagent storage chamber independently includes a first reagent storage chamber and a second reagent storage chamber
  • the first reagent storage chamber is a storage chamber in which the bacteria concentration reagent is stored
  • the second reagent storage chamber is a storage chamber in which the fluorescently labeled binding molecule is stored
  • Each of the first reagent storage chamber and the second reagent storage chamber is independent of the collection unit storage chamber; After the preparation step, by connecting the inside of the first reagent storage chamber and the inside of the collection portion storage chamber, the sample of the collection portion of the reagent collection tool and the bacteria concentration reagent are brought into contact with each other, Performing the incubation step; After the incubation step, the reaction step is performed by bringing the incubated sample and the fluorescently labeled binding molecule into contact with each other by communicating the inside of the second reagent storage chamber and the inside of the collection unit storage chamber.
  • both the first reagent storage chamber and the second reagent storage chamber are arranged upward or downward in the collection unit storage chamber. .
  • the main body when in use, is arranged such that one of the first reagent storage chamber and the second reagent storage chamber is arranged above the collection unit storage chamber, and the other is , And is arranged in a downward direction of the collection unit accommodation chamber.
  • the detection method of the present invention further includes, for example, a sterilization step of treating the incubated sample with a sterilizing agent after the detection step;
  • the main body further includes a sterilizing agent storage chamber for storing the sterilizing agent, Each of the reagent storage chamber and the collection unit storage chamber is independent of the bactericide storage chamber; After the detection step, the sterilization step is performed by communicating the inside of the sterilizing agent storage chamber with the inside of the collection unit storage chamber.
  • the main body has the sterilant storage chamber arranged in an upward or downward direction of the collection unit storage chamber.
  • the detection method of the present invention is, for example,
  • the collection unit accommodating chamber is A reaction chamber for performing the incubation step and the reaction step;
  • the detection region is formed of a member capable of detecting the degree of fluorescence polarization inside the collection unit housing chamber from the outside;
  • the reagent storage chamber is a storage chamber in which a mixed reagent of the bacteria concentration reagent and the fluorescently labeled binding molecule is stored; After the preparation step, the mixed reagent is introduced from the reagent storage chamber into the collection unit storage chamber by communicating the inside of the reagent storage chamber with the inside of the collection unit storage chamber, and the incubation step and the reaction The process is performed simultaneously.
  • the detection method of the present invention is, for example,
  • the collection unit accommodating chamber is A reaction chamber for performing the incubation step and the reaction step;
  • the detection region is formed of a member capable of detecting the degree of fluorescence polarization inside the collection unit housing chamber from the outside;
  • the reagent storage chamber independently includes a first reagent storage chamber and a second reagent storage chamber,
  • the first reagent storage chamber is a storage chamber in which the bacteria concentration reagent is stored,
  • the second reagent storage chamber is a storage chamber in which the fluorescently labeled binding molecule is stored,
  • Each of the first reagent storage chamber and the second reagent storage chamber is independent of the collection unit storage chamber; After the preparation step, by introducing the inside of the first reagent storage chamber and the inside of the collection unit storage chamber, introducing the bacteria concentration reagent from the first reagent storage chamber into the collection unit storage chamber, Performing the incubation step; After the incubation step, the fluorescently labeled binding molecule is
  • the detection method of the present invention further includes, for example, a sterilization step of treating the incubated sample with a sterilizing agent after the detection step;
  • the main body further includes a sterilizing agent storage chamber for storing the sterilizing agent, Each of the reagent storage chamber and the collection unit storage chamber is independent of the bactericide storage chamber;
  • the bactericide is introduced from the bactericide storage chamber to the collection unit storage chamber by communicating the inside of the bactericide storage chamber and the inside of the collection unit storage chamber, and the sterilization step.
  • the pair of accommodating chambers to be communicated is connected by inserting a hollow tube for communication,
  • the hollow tube has a closed end at one end; Due to the closed portion of the hollow tube, the inside of one housing chamber and the inside of the other housing chamber become non-communication, Both ends of the hollow tube are opened by cutting the hollow tube in the axial direction and separating the closed portion from the hollow tube, so that the inside of the one storage chamber and the other storage chamber Communicate with the interior of the.
  • the detection method of the present invention is, for example, The main body further has a through hole forming means;
  • a pair of storage chambers that communicate with each other One storage chamber has an opening that can communicate with the other storage chamber,
  • the other storage chamber can form an opening by the through hole forming means;
  • By forming a through-hole in the other storage chamber with the through-hole forming means the inside of the one storage chamber is formed by the opening of the one storage chamber and the through-hole formed in the other storage chamber. And the inside of the other storage chamber communicate with each other.
  • the reagent container is a breakable capsule; By breaking the capsule, the inside of the reagent storage chamber communicates with the inside of the collection unit storage chamber.
  • the detection method of the present invention is, for example,
  • the reagent storage chamber is A reaction chamber for performing the incubation step and the reaction step; Contains a mixed reagent of the bacteria concentration reagent and the fluorescently labeled binding molecule, In addition, including a detection area,
  • the detection region is formed of a member capable of detecting the degree of fluorescence polarization inside the collection unit housing chamber from the outside; After the preparation step, the collection unit accommodated in the collection unit storage chamber is accommodated in the reagent storage chamber, thereby bringing the collection unit into contact with the mixed reagent in the reagent storage chamber, and the incubation step and the reaction step And simultaneously.
  • the detection method of the present invention is, for example,
  • the reagent storage chamber includes an independent first reagent storage chamber and a second reagent storage chamber
  • the first reagent storage chamber is a storage chamber in which the bacteria concentration reagent is stored
  • the second reagent storage chamber is a storage chamber in which the fluorescently labeled binding molecule is stored,
  • Each of the first reagent storage chamber and the second reagent storage chamber is independent of the collection unit storage chamber
  • the first reagent storage chamber is a reaction chamber for performing the incubation step
  • the second reagent storage chamber is a reaction chamber for performing the reaction step,
  • the detection region is formed of a member capable of detecting the degree of fluorescence polarization inside the second reagent storage chamber from the outside; After the preparation step, by storing the collection unit accommodated in the collection unit storage chamber in the first reagent storage chamber, the collection unit is brought into contact with the bacteria concentration reagent in the first reagent storage chamber, Performing the incubation step; After
  • the detection method of the present invention further includes, for example, a sterilization step of treating the incubated sample with a sterilizing agent after the detection step;
  • the main body further includes a sterilizing agent storage chamber for storing the sterilizing agent, Each of the reagent storage chamber and the collection unit storage chamber is independent of the bactericide storage chamber;
  • the sterilizing agent is introduced from the sterilizing agent storage chamber into the sampling unit storage chamber by communicating the inside of the sterilizing agent storage chamber with the inside of the sampling unit storage chamber, and the sterilization step is performed.
  • the bacterium concentration reagent is a medium for microbial cells to be detected.
  • the binding molecule that binds to the target fungus is selected from the group consisting of aptamers, low molecular weight compounds, sugar chains, peptides, proteins, nucleic acids, viruses, and phages. Is at least one.
  • the protein is an antibody.
  • Bacteria detection method The detection method of the present invention will be specifically described below.
  • the detection method of the present invention is a preparation step of preparing a sample, Incubating the sample in a reagent for concentrating bacteria, A reaction step of reacting the sample in the bacterium concentration reagent with a fluorescently labeled binding molecule that binds to a target bacterium, and Including a detection step of detecting the target by detecting a fluorescence polarization degree of the fluorescently labeled binding molecule;
  • the sample preparation step is performed using a sampling tool,
  • the incubation step, the reaction step, and the detection step are performed using a bacteria detection tool in which the sample collection tool is mounted on a main body;
  • the sample collection tool includes a collection unit for collecting a sample and a connection unit with the main body;
  • the body is A reagent storage chamber for storing the bacteria concentration reagent and the fluorescently labeled binding molecule;
  • a sampling part storage chamber for storing the sampling part of the sampling tool; Including a connecting portion with the sampling tool,
  • the detection of the target by detecting the degree of fluorescence polarization is based on, for example, the fluorescence polarization method.
  • the fluorescence polarization method has a characteristic that when a labeling substance is irradiated with polarized excitation light, the fluorescence emitted from the labeling substance exhibits different degrees of polarization depending on the molecular weight of the molecule labeled with the labeling substance. It is a measurement method based on.
  • the fluorescent labeled binding molecule obtained by labeling the binding molecule with the fluorescent labeling substance is used, the binding between the target and the fluorescent labeled binding molecule is detected by the fluorescence polarization method. it can.
  • the fluorescence-labeled binding molecule when the fluorescence-labeled binding molecule is compared with the target unbound state and the target bound state, the former has a relatively small molecular weight, so The latter has a relatively high degree of fluorescence polarization because the latter has a relatively high molecular weight. For this reason, for example, by comparing the fluorescence polarization degree of the fluorescently labeled binding molecule that is not in contact with the sample with the fluorescence polarization degree of the fluorescently labeled binding molecule that is in contact with the sample, the target and Binding to the fluorescently labeled binding molecule can be detected.
  • the fluorescence-labeled binding molecule brought into contact with the sample on the basis of the fluorescence polarization degree of at least one of the fluorescence-labeled binding molecule unbound to the target and the fluorescence-labeled binding molecule bound to the target By evaluating the degree of fluorescence polarization, the binding between the target and the fluorescently labeled binding molecule can be detected.
  • the preparation step is a step of preparing a sample.
  • the type of the sample is not particularly limited.
  • the sample include samples derived from living organisms, food and drink, and environment.
  • the living body is not particularly limited, and examples thereof include non-human mammals such as humans, cows, pigs, sheep, mice, rats, rabbits, horses, and animals such as birds and fish.
  • the biological sample include excrement, body fluid, skin, meat, mucous membrane, body hair and the like.
  • Examples of the sample derived from food and drink include beverages, foods, and food ingredients.
  • Examples of the environment-derived sample include living organisms, water, soil, air, and the like.
  • Examples of the water sample include groundwater, river water, seawater, domestic wastewater, and the like.
  • the sample derived from the environment includes, for example, deposits in food processing plants, kitchens, and the like.
  • the bacteria to be detected are not particularly limited, and examples include Listeria, Salmonella, pathogenic Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Campylobacter, Vibrio, Welsh, Vibrio cholerae, and Haemophilus influenzae.
  • the detection target is not limited to the bacterium itself, and may be a bacterium-derived substance.
  • the detection of the substance derived from the bacterium by detecting a substance derived from the bacterium that can identify the bacterium, the detection of the substance derived from the bacterium, for example, indirectly detecting the bacterium identified by the substance. it can.
  • the substance derived from the bacterium include secretions derived from the bacterium, endogenous substances of the bacterium, and the like.
  • the present invention preferably uses a binding molecule that binds to a substance derived from the bacterium.
  • the incubation step is a step of incubating the sample in a reagent for concentrating bacteria.
  • the concentration of bacteria includes, for example, concentration by culturing bacteria in a medium and growing the bacteria.
  • the bacteria concentration reagent include a medium for growing target bacteria.
  • the type of the medium is not particularly limited, and can be appropriately set according to the target fungus, for example.
  • the medium can be various, for example, in addition to a medium that specifically grows the target. It may be a medium that can be used for bacteria.
  • the conditions for the incubation step are not particularly limited, and can be appropriately determined according to, for example, the type of the sample and the type of the target. In the case of the present invention, for the reasons described above, for example, the conditions for specifically growing the target are not limited.
  • the reaction step is a step of reacting the sample in the bacterium concentration reagent with a fluorescently labeled binding molecule that binds to a target bacterium.
  • the incubation step and the reaction step may be performed simultaneously, for example, or the reaction step may be performed after the incubation step.
  • both the steps may be performed using a mixed reagent obtained by mixing the bacterium concentration reagent and the fluorescently labeled binding molecule, or the bacterium concentration reagent and the fluorescently labeled bond. Both steps may be performed after contacting the molecule with the sample in random order.
  • the reaction step is further performed by bringing the sample and the fluorescently labeled binding molecule into contact with each other.
  • the form using the mixed reagent is also referred to as “one reagent system”
  • the form using the bacteria concentration reagent and the fluorescently labeled binding molecule independently is also referred to as “two reagent system”.
  • a binding molecule that binds to the target is labeled with a fluorescent substance.
  • the binding molecule is not particularly limited as long as it can bind to the target, and can be appropriately determined according to the type of the target, for example.
  • binding molecule examples include aptamers, low molecular compounds, sugar chains, peptides, proteins, nucleic acids, viruses, and phages.
  • An example of the protein is an antibody.
  • the aptamer is, for example, a nucleic acid molecule that binds to the target, and examples thereof include RNA, DNA, chimera of RNA and DNA, and may further include an artificial nucleic acid.
  • the fluorescent substance is not particularly limited.
  • the fluorescent material include dyes such as pyrene, TAMRA, fluorescein, Cy3 dye, Cy5 dye, FAM dye, rhodamine dye, Texas red dye, and fluorophores such as JOE, MAX, HEX, and TYE.
  • Specific examples include Alexa dyes such as Alexa488 and Alexa647.
  • the fluorescent substance may be directly linked to the binding molecule or indirectly linked via a linker.
  • the fluorescent substance may be bound to any part of the aptamer, for example, at least one of the 5 'end and the 3' end.
  • the linker is not particularly limited, and examples thereof include the nucleic acid molecules as described above, similarly to the aptamer.
  • the conditions for the reaction step are not particularly limited, and can be appropriately determined according to, for example, the type of the sample, the type of the target, the type of the binding molecule, and the like.
  • the reaction temperature is, for example, 4 to 37 ° C., 18 to 25 ° C.
  • the reaction time is, for example, 10 to 120 minutes, 30 to 60 minutes.
  • other components may be allowed to coexist in addition to the fluorescently labeled binding molecule.
  • the other components include water, an aqueous solvent such as a buffer, a surfactant, a salt, a metal ion, and an additive.
  • the detection step is a step of detecting the target by detecting the degree of fluorescence polarization of the fluorescently labeled binding molecule.
  • the degree of fluorescence polarization is increased compared to the case where the target is not bound. For this reason, since the target can be detected by detecting the degree of fluorescence polarization, for example, qualitative analysis and quantitative analysis of the target can be performed.
  • the method for detecting the degree of fluorescence polarization is not particularly limited, and can be appropriately set according to, for example, the type of the fluorescent substance.
  • the wavelength of the polarized excitation light is, for example, 620 to 680 nm
  • the detection wavelength of the degree of polarization is, for example, 660 to 800 nm.
  • the irradiation time of the polarized excitation light is not particularly limited, and examples thereof include 1 nanosecond to 5 nanoseconds.
  • the detection method of the present invention may further include a sterilization step of treating the incubated sample with a bactericide after the detection step.
  • a sterilization step for example, bacteria that have proliferated by incubating the sample can be killed, the influence of waste on the environment can be avoided, and safety can be further improved.
  • the sterilizing agent is not particularly limited, and a component showing a sterilizing effect of bacteria can be used.
  • the disinfectant for example, sodium hypochlorite, chlorine dioxide or the like can be used.
  • the detection method of the present invention is performed using the bacteria detection tool including the sample collection tool and the main body.
  • the sample preparation step is performed using the sample collection tool
  • the incubation step, the reaction step, and the detection step are performed by mounting the sample collection tool on a main body. This is done using the fungus detection tool.
  • the sample collection tool is detachable from the main body.
  • the upward direction and the downward direction are, for example, the vertical direction when using the fungus detection tool.
  • the direction of the sampling part in the sample collection tool is the downward direction, and the sample collection tool
  • the direction opposite to the sampling part in (for example, the direction of the connecting part) will be described as the upward direction.
  • the sample collection tool includes a collection unit for collecting a sample and a connection unit with the main body.
  • the sample collecting tool is, for example, a rod-shaped tool, and includes the sampling portion at one end of a rod-shaped support member, and an upper region (for example, an upper end portion or an upper end portion) of the support member. It is preferable that (region) is the said connection part.
  • Examples of the sampling tool include a swab, a brush, a spatula, and a spoon.
  • the collection unit is not particularly limited, and examples thereof include fiber spheres, and examples of the fibers include cotton and resin fibers.
  • the connecting portion is not particularly limited as long as it can be connected to the connecting portion of the main body. The connecting part in the sampling tool will be described later together with the connecting part of the main body.
  • the sample preparation step using the sample collection tool can be performed, for example, by holding the sample collection tool, rubbing a portion to be detected by the collection unit, and collecting the sample in the collection unit.
  • the location to be detected is not particularly limited, and is, for example, a location where the sample as described above exists.
  • the main body includes a reagent storage chamber for storing the bacteria-concentrating reagent and the fluorescently labeled binding molecule, a collection unit storage chamber for storing the collection unit of the sample collection tool, and the sample collection tool.
  • the reagent storage chamber and the collection unit storage chamber are independent of each other.
  • the sample collection tool and the main body are in a state in which the collection portion of the sample collection tool is accommodated in the collection portion accommodating chamber of the main body after the preparation step and before the incubation step.
  • the connecting portion of the sample collection tool and the connecting portion of the main body, and after the preparation step by connecting the inside of the reagent storage chamber and the inside of the collection portion storage chamber, the incubation step and The reaction step is performed.
  • the reagent storage chamber may be composed of, for example, a single storage chamber, or may include two or more independent storage chambers.
  • “the reagent storage chamber includes two or more independent storage chambers” means, for example, a form in which two or more separated chambers are formed inside one storage chamber.
  • the reagent storage chamber may have two or more storage chambers, and two or more independent storage chambers may be separately formed separately.
  • the reagent storage chamber is, for example, one storage chamber in which the mixed reagent is stored. is there.
  • the bacteria concentration reagent and the fluorescently labeled binding molecule are used separately, the latter is preferable.
  • the reagent storage chamber is independent of the first reagent storage chamber.
  • a second reagent storage chamber wherein the first reagent storage chamber is a storage chamber in which the bacterium concentration reagent is stored, and the second reagent storage chamber is a storage in which the fluorescently labeled binding molecule is stored. It is a room.
  • the first reagent storage chamber and the second reagent storage chamber are each independent of the collection unit storage chamber.
  • the arrangement location of the reagent storage chamber is not particularly limited.
  • the reagent storage chamber may be disposed above the collection unit storage chamber during use, or the collection unit storage
  • the reagent storage chamber may be disposed below the chamber.
  • all of the storage chambers may be arranged in the upward direction of the sampling unit storage chamber, or the sampling May be arranged in the downward direction of the storage chamber, and any one of the storage chambers is arranged in the upward direction of the collection unit storage chamber, and the remaining storage chambers are arranged in the downward direction of the collection unit storage chamber. May be.
  • the former is disposed above the collection unit storage chamber, and the latter is disposed below the collection unit storage chamber.
  • the former may be arranged in the lower direction of the collection unit accommodation chamber, and the latter may be arranged in the upper direction of the collection unit accommodation chamber.
  • the main body has one or more storage chambers in the upward direction of the collection unit storage chamber, hereinafter, these storage chambers are collectively referred to as an “upper main body” and the collection unit storage chamber is referred to as a “lower main body”. Also called. Further, when the main body has one or more storage chambers in the lower direction of the collection unit storage chamber, hereinafter, these storage chambers are collectively referred to as a “lower main body” and the collection unit storage chamber as an “upper main body”. Say. When the main body has one or more storage chambers in the upward and downward directions of the collection unit storage chamber, hereinafter, the upper storage chambers are collectively referred to as “upper main body”, the collection unit storage chamber. Is also referred to as the “lower body”.
  • the sampling unit of the reagent sampling tool when the mixed reagent is used, for example, after the preparation step, by connecting the inside of the reagent storage chamber and the inside of the collection unit storage chamber, the sampling unit of the reagent sampling tool has the The incubation step and the reaction step can be performed simultaneously by bringing the sample and the mixed reagent into contact.
  • the bacteria concentration reagent and the fluorescence-labeled binding molecule are used independently, for example, after the preparation step, the inside of the first reagent storage chamber and the inside of the collection unit storage chamber By connecting the sample of the sampling unit of the reagent sampling tool with the bacteria concentration reagent, the incubation step is performed, and after the incubation step, the inside of the second reagent storage chamber and the sampling By communicating with the inside of the compartment housing chamber, the incubated sample and the fluorescently labeled binding molecule can be brought into contact with each other to carry out the reaction step.
  • the main body when the sterilizing agent is further used, the main body further includes, for example, a sterilizing agent storage chamber for storing the sterilizing agent. At this time, the reagent storing chamber and the sampling unit Each of the storage chambers is independent of the disinfectant storage chamber.
  • the main body when the mixed reagent is used, the main body independently includes, for example, the reagent storage chamber for storing the mixed reagent and the bactericide storage chamber independently.
  • the main body independently includes the first reagent storage chamber, the second reagent storage chamber, and the bactericide storage. Including chambers.
  • the disposition location of the disinfectant storage chamber is not particularly limited.
  • the disinfectant storage chamber may be disposed above the collection unit storage chamber during use, or the collection The disinfectant storage chamber may be disposed below the unit storage chamber.
  • the sterilizing agent storage chamber may be disposed in the same direction as the reagent storage chamber with respect to the collection unit storage chamber, or may be disposed in a direction opposite to the reagent storage chamber.
  • the sterilizing step can be performed by communicating the inside of the sterilizing agent storage chamber with the inside of the collection unit storage chamber.
  • each storage chamber is independent, for example, in a form in which the storage chambers are arranged apart from each other, and in addition, the storage chambers are adjacent to each other but are not in communication with each other. And a form having an isolation wall that separates the storage chamber from the storage chamber.
  • the collection unit storage chamber may be a reaction chamber
  • the reagent storage chamber may be a reaction chamber
  • the collection unit storage chamber is, for example, a reaction chamber for performing an incubation step and the reaction step.
  • the said collection part accommodation chamber contains the detection area
  • the mixed reagent is introduced from the reagent storage chamber into the collection unit storage chamber by communicating the inside of the reagent storage chamber and the inside of the collection unit storage chamber, The incubation step and the reaction step can be performed simultaneously.
  • the collection unit accommodating chamber is, for example, a reaction chamber that performs the incubation step and the reaction step.
  • the said collection part accommodation chamber contains the detection area
  • the bacteria are concentrated from the first reagent storage chamber to the collection unit storage chamber by communicating the inside of the first reagent storage chamber and the inside of the collection unit storage chamber.
  • the reagent is introduced, the incubation step is performed, and after the incubation step, the inside of the second reagent storage chamber and the inside of the sampling portion storage chamber are communicated with each other, and the sampling portion is removed from the second reagent storage chamber.
  • the fluorescently labeled binding molecule can be introduced into a storage chamber to perform the reaction step.
  • the member forming the detection region is not particularly limited as long as the degree of fluorescence polarization can be detected from the outside.
  • the member is, for example, a transparent member, and specific examples include glass and plastic. Examples of the plastic include polystyrene and polycarbonate. The same applies hereinafter.
  • the detection method of the present invention further includes a sterilization step, for example, after the detection step, the inside of the sterilant storage chamber and the collection unit storage chamber By communicating with the inside, the sterilizing step can be performed by introducing the sterilizing agent from the sterilizing agent storage chamber into the sampling unit storage chamber.
  • the method of communication between the chambers is not particularly limited, and examples thereof include the methods of Form A, Form B, and Form C shown below.
  • the form A is a method using a hollow tube.
  • the pair of accommodating chambers to be communicated is connected by inserting a communicating hollow tube, and the hollow tube has a closed portion at one end.
  • the inside of one housing chamber and the inside of the other housing chamber are disconnected from each other by the closed portion of the hollow tube, but the hollow tube is cut halfway in the axial direction, By separating the closed portion from the hollow tube, both ends of the hollow tube can be opened, and the inside of the one housing chamber and the inside of the other housing chamber can be communicated with each other.
  • the pair of storage chambers are, for example, the reagent storage chamber and the collection unit storage chamber, the first reagent storage chamber and the collection unit storage chamber, the second reagent storage chamber and the collection unit storage chamber, and the disinfectant.
  • Examples include a storage chamber, the collection unit storage chamber, and the like (hereinafter the same).
  • the form B is a method using a through hole forming means.
  • the main body further includes a through hole forming means, and the pair of storage chambers communicated with each other in the main body has an opening in which one storage chamber can communicate with the other storage chamber.
  • an opening can be formed by the through-hole forming means.
  • the through hole forming means is not particularly limited, and examples thereof include a cutter, a screw, and the like, and can also be referred to as a perforating means for making a hole.
  • the form C is a method using a capsule.
  • the reagent container in the main body, is a breakable capsule. For example, by destroying the capsule, the inside of the reagent storage chamber and the inside of the collection unit storage chamber can be communicated with each other.
  • this form is a form in which the chamber in which the sampling part of the sample collecting tool is accommodated becomes a reaction chamber. That is, this form is a form D in which the reaction chambers are moved and the reaction chambers are moved by the movement of the collection unit.
  • the reagent storage chamber is, for example, a reaction chamber for performing an incubation step and the reaction step.
  • the reagent storage chamber further includes, for example, a detection region, and the detection region is preferably formed of a member capable of detecting the degree of fluorescence polarization inside the collection unit storage chamber from the outside.
  • the collection unit accommodated in the collection unit accommodation chamber is accommodated in the reagent accommodation chamber, thereby bringing the collection unit into contact with the mixed reagent in the reagent accommodation chamber, The incubation step and the reaction step can be performed simultaneously.
  • the collection unit is accommodated in the reagent storage chamber from the collection unit storage chamber.
  • the isolation wall that separates the collection unit storage chamber and the reagent storage chamber is broken by the tip of the collection unit.
  • the first reagent storage chamber serves as a reaction chamber for performing the incubation step
  • the second reagent storage chamber serves as the reaction chamber. It becomes a reaction chamber for performing the reaction process.
  • the second reagent storage chamber further includes, for example, a detection region, and the detection region is formed of a member capable of detecting the degree of fluorescence polarization inside the second reagent storage chamber from the outside. Is preferred.
  • the collection unit accommodated in the collection unit accommodation chamber is accommodated in the first reagent accommodation chamber, whereby the bacteria concentration reagent in the first reagent accommodation chamber is stored in the first reagent storage chamber.
  • the collecting part is brought into contact, the incubation step is performed, and after the incubation step, the collecting part accommodated in the first reagent accommodating chamber is accommodated in the second reagent accommodating chamber.
  • the bacterial concentration reagent after the incubation can be introduced into the second reagent storage chamber to perform the reaction step.
  • the detection method of the present invention further includes a sterilization step, for example, after the detection step, the inside of the sterilant storage chamber and the collection unit storage chamber By communicating with the inside, the sterilizing step can be performed by introducing the sterilizing agent from the sterilizing agent storage chamber into the sampling unit storage chamber.
  • each drawing is a schematic diagram, and for convenience, the structure and shape of each part may be simplified as appropriate, and the size, shape, and the like of each part may be schematically shown, unlike actual ones.
  • the up and down direction in each figure is the up and down direction when the fungus detection tool is used, and the sample collection tool of the fungus detection tool is represented such that the collection portion is downward and the connection portion with the main body is upward. Yes.
  • each embodiment can incorporate each description, unless otherwise indicated.
  • the collection unit storage chamber is a reaction chamber for the incubation step and the reaction step, and the collection unit storage chamber uses a bacteria detection tool having the detection region, and between the storage chambers.
  • This is a form in which communication is performed according to the form A.
  • FIG. 1 shows a schematic diagram of the bacteria detection tool.
  • FIG. 1 (A) is a cross-sectional view showing an outline of the bacteria detection tool
  • FIG. 1 (B) is a cross-sectional view showing an outline of the bacteria detection tool in use.
  • the main body includes a reagent storage chamber 11 that is an upper main body and a collection unit storage chamber 10 that is a lower main body.
  • the sample collection tool 15 has a communication hollow tube 151 and a collection unit 152, the collection unit 152 is connected to the lower end of the hollow tube 151, and the upper end of the hollow tube 151 is connected to the sample collection tool 15.
  • the hollow tube 151 since the hollow tube 151 is easy to cut, the hollow tube 151 may have a narrowed portion with a narrow hole at a desired cutting position.
  • the sample collection tool 15 is connected to the reagent storage chamber 11 which is the upper body. Specifically, the upper region of the hollow tube 151 of the sample collection tool 15 is located inside the reagent storage chamber 11. It is arranged to be located.
  • the reagent storage chamber 11 to which the sample collection tool 15 is connected and the collection unit storage chamber 10 are detachable, and the reagent storage chamber 11 places the collection unit 152 of the sample collection tool 15 inside the collection unit storage chamber 10. In the accommodated state, it can be attached to the collection unit accommodating chamber 10.
  • the collection unit accommodating chamber 10 is a reaction chamber for the incubation step and the reaction step, and for example, a bottom region thereof serves as the detection region.
  • 1A can be used as follows, for example.
  • the reagent storage chamber 11 (upper main body) provided with the sample collection tool 15 is removed from the collection section storage chamber 10 (lower body) of the bacteria detection tool, and the exposed tip of the sample collection tool 15 (the collection section) is used. Take a sample. Then, the reagent storage chamber 11 (upper main body) is mounted in the sampling section storage chamber 10 (lower main body) in a state where the sampling section of the sample collecting tool 15 is stored inside the sampling section storage chamber 10 (lower main body). .
  • the hollow tube 151 of the sampling tool 15 is cut in the middle of the axial direction, and the region 151 ′ having the closed portion is separated from the hollow tube 151.
  • both ends of the hollow tube 151 are opened, so that the mixed reagent in the reagent storage chamber 11 is introduced into the hollow tube 151 from the upper opening of the hollow tube 151, and the sample collection tool 15
  • the sample is introduced into the collection unit accommodation chamber (reaction chamber) 10 through the collection unit 152.
  • the collected sample is attached to the collecting unit 152 of the reagent collecting tool 15, the mixed reagent and the sample that have reached the collecting unit 152 are mixed, and a mixture of the mixed reagent and the sample is formed. Then, it is dripped at the bottom of the collection part accommodating chamber 10.
  • the support member of the sample collection tool 15 is a hollow tube, and the inside of the reagent storage chamber 11 and the collection unit storage chamber 10 are communicated, but this is not restrictive.
  • the reagent storage chamber 11 and the collection unit storage chamber 10 are connected by inserting a hollow tube 151 having a closed portion at an upper end, and the sample collection tool 15 is connected to the reagent storage chamber 11. You may connect only to a bottom part.
  • Embodiment A2 This embodiment is the same as the embodiment A1 except that it further includes the number of reagent storage chambers or a bactericide storage chamber. In the present embodiment, the embodiment A1 and the embodiment A3 described later can be used unless otherwise specified.
  • FIG. 2 shows another schematic diagram of the bacteria detection tool.
  • FIG. 2A shows a first reagent storage chamber 13 for storing the bacterium concentration reagent and a second reagent storage for storing the fluorescently labeled binding molecule in the upward direction of the collection unit storage chamber 10 (lower body).
  • 2 (B) the reagent storage chamber 11 for storing the mixed reagent and the disinfectant in the upward direction of the collecting unit storage chamber 10 (lower main body).
  • FIG. 2 (C) shows a first reagent that contains the reagent for concentrating bacteria in the upward direction of the collecting part storage chamber 10 (lower main body). It is a form which has the storage chamber 13, the 2nd reagent storage chamber 12 which accommodates the said fluorescence labeling binding molecule, and the bactericide storage chamber 14 which accommodates the said bactericidal agent as an upper main body.
  • Each of the second reagent storage chamber 12 and the bactericide storage chamber 14 is separated by an isolation wall or the like, but adjacent storage chambers are connected by the isolation wall and integrated as a whole. Preferably it is.
  • the first reagent storage chamber 13, the second reagent storage chamber 12, the reagent storage chamber 11 or the sterilizing agent storage chamber 14 is removed from the collection unit storage chamber 10 (lower main body), the other storage is accompanied.
  • the chamber can also be removed.
  • the first reagent storage chamber 13 and the collection unit storage chamber 10 are connected by inserting a hollow tube 151 of the sample collection tool 15.
  • the relationship among the first reagent storage chamber 13, the collection unit storage chamber 10, and the sample collection tool 15 is the relationship between the reagent storage chamber 11, the collection unit storage chamber 10, and the sample collection tool 15 in FIG. You can use relationships.
  • the relationship among the reagent storage chamber 11, the collection unit storage chamber 10, and the sample collection tool 15 in FIG. 2B is the same as that in FIG. 1A of the embodiment A1.
  • the second reagent storage chamber 12 and the collection unit storage chamber 10 in FIGS. 2A and 2C, and the bactericide storage chamber 14 and the collection unit storage chamber 10 in FIG. They are connected by inserting a hollow tube 16 having a closed portion at the part.
  • the hollow tube 16 is the same as the hollow tube 151 of the sample collection tool 15 in FIG. 1 of the embodiment A1, and has a closed portion at the upper end, and can be cut in the middle of the axial direction. is there.
  • 2A can be used as follows, for example. First, after removing the upper body provided with the sample collection tool 15 from the collection part accommodation chamber 10 (lower body) of the bacteria detection tool and collecting the sample, the collection part of the sample collection tool 15 is again accommodated in the collection part. The upper main body is attached to the lower main body so as to be accommodated in the chamber 10 (lower main body). Next, the hollow tube of the sample collection tool 15 is cut, the bacteria concentration reagent is introduced from the first reagent storage chamber 13 into the collection section storage chamber 10, the incubation step is performed, and the second reagent storage is further performed.
  • the hollow tube 16 of the chamber 12 is cut, and the fluorescently labeled binding molecule is introduced from the second reagent storage chamber 12 into the collection unit storage chamber 10 to perform the reaction step. Then, the degree of fluorescence polarization is detected in the detection region of the collection unit housing chamber 10.
  • the bacteria detection tool of FIG. 2 (B) can be used as follows, for example. First, after removing the upper body provided with the sample collection tool 15 from the collection part accommodation chamber 10 (lower body) of the bacteria detection tool and collecting the sample, the collection part of the sample collection tool 15 is again accommodated in the collection part. The upper main body is attached to the lower main body so as to be accommodated in the chamber 10 (lower main body). Next, the hollow tube of the sample collection tool 15 is cut, the mixed reagent is introduced from the reagent storage chamber 11 into the collection unit storage chamber 10, the incubation step and the reaction step are performed, and the sampling unit storage chamber 10 In the detection region, the degree of fluorescence polarization is detected. Further, the hollow tube 16 of the sterilizing agent storage chamber 14 is cut, and the sterilizing agent is introduced from the sterilizing agent storage chamber 14 into the sampling unit storage chamber 10 to perform the sterilization process.
  • the bacteria detection tool of FIG. 2 (C) can be used as follows, for example. First, after removing the upper body provided with the sample collection tool 15 from the collection part accommodation chamber 10 (lower body) of the bacteria detection tool and collecting the sample, the collection part of the sample collection tool 15 is again accommodated in the collection part. The upper main body is attached to the lower main body so as to be accommodated in the chamber 10 (lower main body). Next, the hollow tube of the sample collection tool 15 is cut, the bacteria concentration reagent is introduced from the first reagent storage chamber 13 into the collection section storage chamber 10, the incubation step is performed, and the second reagent storage is further performed.
  • the hollow tube 16 of the chamber 12 is cut, the fluorescently labeled binding molecule is introduced from the second reagent storage chamber 12 into the collection unit storage chamber 10, the reaction step is performed, and in the detection region of the collection unit storage chamber 10 The degree of fluorescence polarization is detected. Then, the hollow tube 16 of the sterilizing agent storage chamber 14 is cut, and the sterilizing agent is introduced from the sterilizing agent storage chamber 14 into the sampling unit storage chamber 10 to perform the sterilization process.
  • Embodiment A3 The present embodiment is the same as the embodiments A1 and A2 except that the arrangement of the reagent storage chambers is different.
  • FIG. 3 shows another schematic diagram of the bacteria detection tool.
  • FIG. 3A shows a form similar to that of the above-described embodiments A1 and A2, in which the collection unit accommodation chamber 10 is a lower body and the accommodation room 21 including the sample collection tool 15 is an upper body.
  • the storage chamber 21 may have, for example, the structure of any upper body in the embodiments A1 and A2. That is, the storage chamber 21 may be, for example, the reagent storage chamber 11 of the embodiment A1, or the upper main body (the first reagent storage chamber 13 and the second reagent storage chamber 12) of FIG. 2A in the embodiment A2. 2B, the upper body (reagent storage chamber 11 and bactericide storage chamber 14), and the upper body of FIG. 2C (first reagent storage chamber 13, second reagent storage chamber 12 and bactericide storage chamber 14). )
  • the fungus detection tool of FIG. 3A can be used in the same manner as in Examples A1 and A2.
  • FIG. 3B shows a form in which the collection unit accommodation chamber 10 is an upper main body, and the reagent storage chamber is a lower main body.
  • the bacteria detection tool of FIG. 3 (B) includes a sample collection tool 15, a gripping part 22, to which the sample collection tool 15 is fixed, a collection part storage chamber 10, and a storage room 21, and the sample collection tool 15 is an upper body and a storage chamber. 21 is a lower main body.
  • the gripping part 22 to which the sample collection tool 15 is fixed is placed in the collection part accommodation chamber 10 (upper main body) in a state where the collection part of the sample collection tool 15 is accommodated inside the collection part accommodation room 10 (upper main body). Can be installed.
  • the storage chamber 21 is the same as Embodiments 1A and 2A except that the arrangement is in the downward direction of the collection unit storage chamber 10.
  • FIG. 3C shows a form in which two or more storage chambers are arranged in the vertical direction of the collection unit storage chamber 10.
  • 3 (C) includes a sample collection tool 15, a collection unit storage chamber 10, an upper storage chamber 23a, and a lower storage chamber 23b, and the upper storage chamber 23a is an upper body.
  • the collection unit storage chamber 10 is a middle main body, and the lower storage chamber 23b is a lower main body.
  • the combination of the storage chamber 23a (upper main body) and the storage chamber 23b (lower main body) is not particularly limited, and the reagent storage chamber for the mixed reagent, the first reagent storage chamber, and the second reagent.
  • the storage chamber and the disinfectant storage chamber can be appropriately combined.
  • the fungus detection tool of FIG. 3 (C) collects a sample, and attaches an upper body 23a including the sample collection tool 15 to a collection unit accommodation chamber 10 (middle body) connected to the lower body 23b, and appropriately It can be used in the same manner as in Embodiments 1A and 2A except that the direction is reversed.
  • FIG. 3D shows a configuration in which three or more storage chambers are arranged in the vertical direction of the collection unit storage chamber 10.
  • the microbe detection tool of FIG. 3D includes a sample collection tool 15, a collection unit storage chamber 10, an upper storage chamber 24a and 24b, and a lower storage chamber 24c, and the upper storage chambers 24a and 24b include It is an upper body, the collection unit housing chamber 10 is a middle body, and the lower housing chamber 24c is a lower body.
  • the combination of the storage chambers 24a and 24b (upper main body) and the storage chamber 24c (lower main body) is not particularly limited, and the reagent storage chamber for the mixed reagent, the first reagent storage chamber, the first Two reagent storage chambers and the bactericide storage chamber can be appropriately combined.
  • the upper main body is the first reagent storage chamber 24b and the second reagent storage chamber 24a
  • the lower main body is the disinfectant storage chamber 24c.
  • FIG. 3 (E) shows a configuration in which three or more storage chambers are arranged in the vertical direction of the collection unit storage chamber 10.
  • 3 (E) includes a sample collection tool 15, a collection unit storage chamber 10, an upper storage chamber 25a, and lower storage chambers 25b and 25c, and the upper storage chamber 25a is the upper body.
  • the collection unit storage chamber 10 is a middle main body, and the lower storage chambers 25b and 25c are lower main bodies.
  • the combination of the storage chamber 25a (upper main body) and the storage chambers 25b and 25c (lower main body) is not particularly limited, and the reagent storage chamber for the mixed reagent, the first reagent storage chamber, the first Two reagent storage chambers and the bactericide storage chamber can be appropriately combined.
  • the upper main body is the first reagent storage chamber 25a and the lower main body is the second reagent storage chamber 25b and the sterilizing agent storage chamber 25c.
  • the microbe detection tool of FIG. 3 (E) collects a sample, and the upper body (25a) including the sample collection tool 15 is connected to the collection unit accommodation chamber 10 (middle body) connected to the lower body (24b and 24c). It can be used in the same manner as in Embodiments 1A and 2A except that it is mounted and the vertical direction is appropriately reversed.
  • the collection unit storage chamber is a reaction chamber for the incubation step and the reaction step, and the collection unit storage chamber uses a bacteria detection tool having the detection region, and between the storage chambers.
  • the communication is performed according to the above-described form B using the through hole forming means.
  • FIG. 4 shows a schematic diagram of the bacteria detection tool.
  • FIG. 4 is a cross-sectional view showing an outline of the bacteria detection tool.
  • the microbe detection tool of FIG. 4 includes a sampling part storage chamber 10, a reagent storage chamber 11 for storing the mixed reagent, a sample sampling tool 15, and a perforation chamber 41 in which a cutter 42 is fixed as a through hole forming means.
  • the reagent storage chamber 11 is an upper main body
  • the collection part storage chamber 10 is a lower main body.
  • the reagent storage chamber 11 (upper main body) is disposed above the perforation chamber 41, and is moved in the direction of the perforation chamber 41 so as to contact the cutter 42 of the perforation chamber 41, thereby providing a through hole at the bottom thereof. be able to.
  • the perforation chamber 41 has a through hole that communicates with the collection unit storage chamber 10 (lower main body), and the sample collection tool 15 is fixed to the outer surface of the bottom portion at a position that does not overlap with the through hole. Yes.
  • the perforation chamber 41 in which the reagent storage chamber 11 and the sample collection tool 15 are connected is detachable from the collection unit storage chamber 10, and the perforation chamber 41 serves as the collection unit storage chamber for the collection unit of the sample collection tool 15. In the state accommodated in the inside of 10, it can be attached to the collection unit accommodating chamber 10.
  • the collection unit accommodating chamber 10 is a reaction chamber for the incubation step and the reaction step, and for example, a bottom region thereof serves as the detection region.
  • a breakable member is preferable.
  • the member include a sheet such as an aluminum sheet.
  • the sample 4 can be used as follows, for example. First, after removing the perforation chamber 41 provided with the reagent storage chamber 11 (upper main body) and the sample collection tool 15 from the collection unit storage chamber 10 (lower main body) of the bacteria detection tool, and collecting the sample, the sample is again collected.
  • the perforation chamber 41 is attached to the lower body so that the collection part of the collection tool 15 is accommodated inside the collection part accommodation chamber (lower body).
  • the sample storage chamber 11 is pushed into the perforation chamber 41, and a through hole is formed in the bottom of the sample storage chamber 11 with the cutter 42 of the perforation chamber 41.
  • the mixed reagent in the sample storage chamber 11 is introduced into the perforation chamber 41, and the mixed reagent is introduced into the collection unit storage chamber (reaction chamber) 10 through the through hole of the perforation chamber 41.
  • the mixed reagent introduced into the collection unit storage chamber 10 and the sample of the collection unit of the sample collection tool 15 come into contact with each other.
  • the fluorescence polarization degree is detected.
  • Embodiment B2 This embodiment is the same as the embodiment B1 except that it further includes the number of reagent storage chambers or a bactericide storage chamber. In the present embodiment, the embodiment B1 can be used unless otherwise indicated.
  • FIG. 5 shows another schematic diagram of the bacteria detection tool.
  • FIG. 5 (A) shows a first reagent storage chamber 13 for storing the reagent for concentrating bacteria and a second reagent storage for storing the fluorescently labeled binding molecule in the upward direction of the collection unit storage chamber 10 (lower body). Chamber 12 as an upper main body, and further has a perforation chamber 41 corresponding to each storage chamber.
  • FIG. 5B shows the above-described upward direction of the collection unit storage chamber 10 (lower main body). 5 has a reagent storage chamber 11 for storing a mixed reagent and a bactericide storage chamber 14 for storing the bactericide as an upper body, and further has a perforation chamber 41 corresponding to each storage chamber.
  • (C) is a first reagent storage chamber 13 for storing the reagent for concentrating bacteria, and a second reagent storage chamber 12 for storing the fluorescently labeled binding molecule, in the upward direction of the collection unit storage chamber 10 (lower body).
  • a bactericide storage chamber 14 for storing the bactericide as an upper main body, and each storage A form having a perforated chamber 41 corresponding to.
  • Each of the perforation chambers 41 is the same as that of the embodiment B1, has a cutter 42 fixed as a through-hole forming means, and has a through-hole with respect to the collection unit accommodation chamber 10.
  • each storage chamber of the upper main body is a combination of (A), (B), and (C) in FIG. 2 in Embodiment A2. Can be used.
  • the perforation chamber 41 provided with the sample collection tool 15 and the storage chambers 12 and 13 is removed from the collection unit accommodation chamber 10 (lower main body) of the bacteria detection tool, and after collecting the sample, the sample collection tool 15 is again collected.
  • the perforation chamber 41 is attached to the lower main body so that the sampling portion is accommodated inside the sampling portion accommodating chamber 10 (lower main body).
  • the first reagent storage chamber 13 is pushed into the perforation chamber 41, and a through hole is formed in the bottom of the first reagent storage chamber 13 with the cutter 42 of the perforation chamber 41.
  • the bacteria concentration reagent introduced into 41 is introduced through the through-hole of the perforation chamber 41 into the collection part storage chamber (reaction chamber) 10.
  • the bacteria concentration reagent introduced into the collection unit accommodating chamber 10 and the sample of the collection unit of the sample collection tool 15 come into contact with each other. And after performing the said incubation process about the mixture of the said reagent for microbe concentration, and the said sample, it introduce
  • the perforation chamber 41 provided with the sample collection tool 15 and the storage chambers 11 and 14 is removed from the collection unit accommodation chamber 10 (lower main body) of the bacteria detection tool, and after collecting the sample, the sample collection tool 15 is again collected.
  • the perforation chamber 41 is attached to the lower main body so that the sampling portion is accommodated inside the sampling portion accommodating chamber 10 (lower main body).
  • the mixed reagent is introduced from the reagent storage chamber 11 into the collection unit storage chamber 10, the incubation step and the reaction step are performed, and the fluorescence polarization is detected in the detection region of the collection unit storage chamber 10. Perform degree detection.
  • the sterilizing agent is introduced from the sterilizing agent storage chamber 14 into the collection unit storage chamber 10 to perform a sterilization process.
  • the fungus detection tool of FIG. 5 (C) can be used as follows, for example. First, the perforation chamber 41 provided with the sample collection tool 15 and the storage chambers 12, 13, and 14 is removed from the collection unit storage chamber 10 (lower main body) of the bacteria detection tool, and the sample is collected again after collecting the sample. The perforation chamber 41 is mounted on the lower main body so that the sampling portion of the tool 15 is accommodated inside the sampling portion accommodating chamber 10 (lower main body). Next, in the same manner as described above, the bacteria concentration reagent is introduced from the first reagent storage chamber 13 into the sampling portion storage chamber 10, the incubation step is performed, and then the sampling portion is extracted from the second reagent storage chamber 12.
  • the fluorescently labeled binding molecule is introduced into the storage chamber 10, the reaction step is performed, and the degree of fluorescence polarization is detected in the detection region of the collection unit storage chamber 10.
  • the sterilizing agent is introduced from the sterilizing agent storage chamber 14 into the collection unit storage chamber 10 to perform a sterilization process.
  • the collection unit storage chamber is a reaction chamber for the incubation step and the reaction step, and the collection unit storage chamber uses a bacteria detection tool having the detection region, and between the storage chambers.
  • communication is performed according to the above-described form C using a capsule.
  • FIG. 6 shows a schematic diagram of the bacteria detection tool.
  • FIG. 6 is a cross-sectional view showing an outline of the bacteria detection tool.
  • 6 includes a sample collection tool 15, a collection unit storage chamber 10, a capsule-shaped reagent storage chamber 11 that stores the mixed reagent, and a holding chamber 61 that holds the reagent storage chamber 11. .
  • the reagent storage chamber 11 and the holding chamber 61 that holds the reagent storage chamber 11 are the upper main body
  • the collection unit storage chamber 10 is the lower main body.
  • the holding chamber 61 has a through hole that communicates with the collection unit storage chamber 10 (lower main body), and the sample collection tool 15 is fixed to the outer surface of the bottom of the holding chamber 61 at a position that does not overlap with the through hole.
  • the holding chamber 61 to which the sample collection tool 15 is connected is detachable from the collection unit accommodation chamber 10, and the retention chamber 61 accommodates the collection unit of the sample collection tool 15 in the collection unit accommodation chamber 10. In the state, it can be attached to the collection unit accommodating chamber 10.
  • the collection unit accommodating chamber 10 is a reaction chamber for the incubation step and the reaction step, and for example, a bottom region thereof serves as the detection region.
  • the holding chamber 61 (upper main body) provided with the capsule-shaped reagent storage chamber 11 and the sample collecting tool 15 from the sampling part receiving chamber 10 (lower main body) of the bacteria detection tool
  • the holding chamber 61 is attached to the lower body so that the collection part of the sample collection tool 15 is accommodated inside the collection part accommodation chamber (lower body).
  • the capsule-like reagent storage chamber 11 held inside the holding chamber 61 is destroyed. Due to the destruction, the mixed reagent in the sample storage chamber 11 is introduced into the holding chamber 61, and the mixed reagent is introduced into the collection unit receiving chamber (reaction chamber) 10 through the through hole of the holding chamber 61.
  • the mixed reagent introduced into the collection unit storage chamber 10 and the sample of the collection unit of the sample collection tool 15 come into contact with each other. And after performing the said incubation process and the said reaction process about the mixture of the said mixed reagent and the said sample, in the detection area
  • Embodiment C2 This embodiment is the same as the embodiment C1 except that it further includes the number of reagent storage chambers or a bactericide storage chamber. In the present embodiment, the embodiment C1 can be used unless otherwise indicated.
  • FIG. 7 shows another schematic diagram of the bacteria detection tool.
  • FIG. 7A shows a capsule-shaped first reagent storage chamber 13 for storing the reagent for concentrating bacteria, its holding chamber 61, and the fluorescently labeled binding molecule in the upward direction of the collection unit storage chamber 10 (lower main body).
  • 6B is a form having a capsule-like second reagent storage chamber 12 and its holding chamber 61 as an upper main body, and FIG. 6B shows the mixing in the upward direction of the collecting portion storage chamber 10 (lower main body).
  • FIG. 6 (C) is a form having a capsule-shaped reagent storage chamber 11 for storing a reagent and its holding chamber 61, and a capsule-shaped bactericide storage chamber 14 for storing the bactericidal agent and its holding chamber 61 as an upper body.
  • Second reagent storage chamber 12 and its holding chamber, and the sterilization The capsular fungicide accommodating chamber 14 and its holding chamber housing the a form having as an upper body.
  • Each holding chamber 61 is the same as that in the embodiment C1 and has a through-hole with respect to the collecting portion accommodating chamber 10.
  • each storage chamber of the upper main body is a combination of (A), (B) and (C) of FIG. 2 in the embodiment A2. Can be used.
  • the holding chamber 61 provided with the sample collection tool 15 and the capsule-shaped storage chambers 12 and 13 is removed from the collection unit storage chamber 10 (lower main body) of the bacteria detection tool, and after collecting the sample, the sample is collected again.
  • the holding chamber 61 is attached to the lower main body so that the sampling part of the sampling tool 15 is accommodated inside the sampling part accommodating chamber 10 (lower main body).
  • the capsule-shaped first reagent storage chamber 13 in the holding chamber 61 is destroyed, and the bacteria concentration reagent introduced from the first reagent storage chamber 13 into the holding chamber 61 is passed through the through hole of the holding chamber 61.
  • the sample is introduced into the collection unit storage chamber (reaction chamber) 10.
  • the bacteria concentration reagent introduced into the collection unit accommodating chamber 10 and the sample of the collection unit of the sample collection tool 15 come into contact with each other. And after performing the said incubation process about the mixture of the said reagent for microbe concentration, and the said sample, it is similarly carried out from the capsule-like 2nd reagent storage chamber 12 to the collection part storage chamber 10, and the said fluorescence labeling binding molecule
  • the holding chamber 61 provided with the sample collection tool 15 and the capsule-shaped accommodation chambers 11 and 14 is removed from the collection unit accommodation chamber 10 (lower main body) of the bacteria detection tool, and after collecting the sample, the sample is collected again.
  • the holding chamber 61 is attached to the lower main body so that the sampling part of the sampling tool 15 is accommodated inside the sampling part accommodating chamber 10 (lower main body).
  • the mixed reagent is introduced from the reagent storage chamber 11 into the collection unit storage chamber 10, the incubation step and the reaction step are performed, and the fluorescence polarization is detected in the detection region of the collection unit storage chamber 10. Perform degree detection.
  • the sterilizing agent is introduced from the capsule-shaped sterilizing agent storage chamber 14 into the collection unit storage chamber 10 to perform a sterilization process.
  • the holding chamber 61 provided with the sample collection tool 15 and the capsule-shaped storage chambers 12, 13, and 14 is removed from the collection unit storage chamber 10 (lower main body) of the bacteria detection tool, and after collecting the sample, the sample is collected again.
  • the holding chamber 61 is attached to the lower main body so that the sampling part of the sample collecting tool 15 is accommodated inside the sampling part accommodating chamber 10 (lower main body).
  • the bacterium concentration reagent is introduced from the capsule-shaped first reagent storage chamber 13 into the collection unit storage chamber 10, and the incubation step is performed.
  • the fluorescently labeled binding molecule is introduced from the storage chamber 12 into the collection unit storage chamber 10, the reaction process is performed, and the degree of fluorescence polarization is detected in the detection region of the collection unit storage chamber 10.
  • the sterilizing agent is introduced from the capsule-shaped sterilizing agent storage chamber 14 into the collection unit storage chamber 10 to perform a sterilization process.
  • each storage chamber is a reaction chamber for the incubation step and the reaction step, and communication between the storage chambers is performed by the movement of the sampling portion of the form D, that is, the sample collection tool. .
  • FIG. 8 shows a schematic diagram of the bacteria detection tool.
  • FIG. 8 is a cross-sectional view showing an outline of the bacteria detection tool.
  • the microbe detection tool of FIG. 8 includes a sample collection tool 15, a gripping part 21 on which the sample collection tool 15 is fixed, a collection unit storage chamber 10, and a reagent storage chamber 11 for storing the mixed reagent.
  • the reagent storage chamber 11 is connected to the downward direction of the collection unit storage chamber 10, and the upper surface of the reagent storage chamber 11 can form a through hole by contacting the collection unit of the sample collection tool 15.
  • the holding part 21 to which the sample collecting tool 15 is fixed is detachable from the collecting part accommodating chamber 10.
  • the reagent storage chamber 11 is a reaction chamber for the incubation step and the reaction step, and for example, a bottom region thereof serves as the detection region.
  • the collection part of the sample collection tool 15 is again a collection part.
  • the grip portion 21 is attached to the lower main body so as to be accommodated in the storage chamber (upper main body).
  • the tip of the sample collection tool 15 in the sample storage chamber 11 is pushed downward, and the top of the sample storage chamber 11 is pierced by the tip to collect the sample in the mixed reagent in the sample storage chamber 11.
  • the sampling part of the tool 15 is brought into contact. As a result, the mixed reagent and the sample are mixed, and after performing the incubation step and the reaction step, the degree of fluorescence polarization is detected in the detection region of the sample storage chamber 11.
  • Embodiment D2 This embodiment is the same as the embodiment D1 except that it further includes the number of reagent storage chambers or a bactericide storage chamber. This embodiment can use the embodiment D1 unless otherwise specified.
  • FIG. 9 shows another schematic diagram of the bacteria detection tool.
  • FIG. 9A shows a first reagent storage chamber 13 for storing the reagent for concentration of bacteria and a second reagent storage chamber 12 for storing the fluorescently labeled binding molecule in the downward direction of the collection unit storage chamber 10.
  • FIG. 9B shows a reagent storage chamber 11 for storing the mixed reagent, and a sterilizing agent storage chamber 14 for storing the sterilizing agent, in a downward direction of the collecting unit storage chamber 10.
  • FIG. 9C shows the first reagent storage chamber 13 for storing the reagent for concentrating the bacteria and the fluorescently labeled binding molecule in the downward direction of the collection unit storage chamber 10.
  • Each of the sample collection tools 15 is the same as that of the embodiment D1 and is fixed to the grip part 21, and the grip part 21 can be attached to and detached from the collection part storage chamber 10.
  • the collection part of the sample collection tool 15 is again accommodated in the collection part.
  • the grip portion 21 is attached to the upper body so as to be accommodated in the chamber 10 (upper body).
  • the distal end portion of the sample collection tool 15 in the collection portion accommodating chamber 10 is pushed downward, the upper end portion penetrates the upper surface of the first reagent accommodating chamber 13, and the bacteria in the first reagent accommodating chamber 13 are pushed.
  • the collection part of the sample collection tool 15 is brought into contact with the concentration reagent.
  • the bacteria concentration reagent and the sample are mixed, and the incubation step is performed on the mixed solution.
  • the distal end portion of the sample collection tool 15 in the first reagent storage chamber 13 is pushed further downward, and the distal end portion penetrates the upper surface of the second reagent storage chamber 12 to form a through hole in the upper surface.
  • the mixed liquid in the first reagent storage chamber 13 is introduced into the second reagent storage chamber 12.
  • the mixed solution after the incubation step and the fluorescently labeled binding molecule are mixed, and the reaction step is performed on the mixed solution.
  • the fluorescence polarization degree is detected in the detection region of the second reagent storage chamber 12.
  • the collection part of the sample collection tool 15 is again accommodated in the collection part.
  • the grip portion 21 is attached to the upper body so as to be accommodated in the chamber 10 (upper body).
  • the front end of the sample collection tool 15 in the collection unit storage chamber 10 is pushed downward, and the front end pierces the upper surface of the reagent storage chamber 11, and the sample in the mixed reagent in the reagent storage chamber 11 is transferred to the sample.
  • the collection part of the collection tool 15 is brought into contact.
  • the mixed reagent and the sample are mixed, the incubation step and the reaction step are performed on the mixed solution, and the degree of fluorescence polarization is detected in the detection region of the reagent storage chamber 11.
  • the distal end portion of the sample collection tool 15 in the reagent storage chamber 11 is pushed further downward, and the distal end portion penetrates the upper surface of the sterilizing agent storage chamber 14 to form a through hole in the upper surface.
  • the mixed liquid in the chamber 11 is introduced into the bactericide storage chamber 14. Thereby, the mixed liquid after detection and the bactericidal agent are mixed, and the sterilizing step is performed.
  • the fungus detection tool of FIG. 9 (C) can be used as follows, for example. First, after removing the holding part 21 provided with the sample collection tool 15 from the collection part accommodation chamber 10 (upper main body) of the bacteria detection tool and collecting the sample, the collection part of the sample collection tool 15 is again accommodated in the collection part. The grip portion 21 is attached to the upper body so as to be accommodated in the chamber 10 (upper body). Next, the distal end portion of the sample collection tool 15 in the collection portion accommodating chamber 10 is pushed downward, the upper end portion penetrates the upper surface of the first reagent accommodating chamber 13, and the bacteria in the first reagent accommodating chamber 13 are pushed. The collection part of the sample collection tool 15 is brought into contact with the concentration reagent.
  • the bacteria concentration reagent and the sample are mixed, and the incubation step is performed on the mixed solution.
  • the distal end portion of the sample collection tool 15 in the first reagent storage chamber 13 is pushed further downward, and the distal end portion penetrates the upper surface of the second reagent storage chamber 12 to form a through hole in the upper surface.
  • the mixed liquid in the first reagent storage chamber 13 is introduced into the second reagent storage chamber 12.
  • the mixed solution after the incubation step and the fluorescently labeled binding molecule are mixed, and the reaction step is performed on the mixed solution.
  • the fluorescence polarization degree is detected in the detection region of the second reagent storage chamber 12.
  • the distal end portion of the sample collection tool 15 in the second reagent storage chamber 12 is pushed downward, and the distal end portion penetrates the upper surface of the sterilizing agent storage chamber 14 to form a through hole in the upper surface.
  • the mixed liquid in the reagent storage chamber 11 is introduced into the bactericide storage chamber 14. Thereby, the mixed liquid after detection and the bactericidal agent are mixed, and the sterilizing step is performed.
  • the size and shape of the bacteria detection tool used in the bacteria detection method of the present invention are not particularly limited.
  • the shape of each of the storage chambers is, for example, a cylindrical shape, and specific examples include, for example, a cylinder, a square tube, and the like.
  • the cylinder include a perfect circle and an ellipse
  • examples of the rectangular cylinder include a square such as a square and a rectangle, and other polygons.
  • connection and attachment of each part are not particularly limited, and examples thereof include screwing, fitting, and insertion.
  • the insertion is preferably press-fitting, for example.
  • a combination of a male type and a female type can be used for connection of each part, and examples thereof include a combination of a corresponding concave part and a convex part, and a combination of a male screw and a female screw.
  • the fungus detection tool of the present invention Having a sampling tool and a body;
  • the sample collection tool includes a collection unit for collecting a sample and a connection unit with the main body;
  • the body is A reagent storage chamber for storing the bacteria concentration reagent and the fluorescently labeled binding molecule;
  • a sampling part storage chamber for storing the sampling part of the sampling tool;
  • the reagent storage chamber and the collection unit storage chamber are independent;
  • the sample collection tool and the main body are connected at a connection portion of the sample collection tool and a connection portion of the main body in a state where the collection portion of the sample collection tool is accommodated in the collection portion accommodating chamber of the main body; It is used for the detection method of the present invention.
  • the fungus detection tool of the present invention is characterized by being used in the fungus detection method of the present invention, and all the descriptions of the fungus detection tool in the fungus detection method of the present invention can be incorporated.
  • the present invention it is possible to easily and easily culture bacteria in a sample and detect target bacteria.
  • the target bacteria can be detected by using the fluorescence labeled aptamer as a reagent and changing the degree of fluorescence polarization, easy detection is possible. Therefore, the present invention is extremely useful in fields such as food production, food management, and food distribution.

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Abstract

　ターゲット菌体に結合可能な結合分子を使用して、より簡便且つ迅速に、デバイスにより菌体を検出する新たな方法を提供する。　試料を菌濃縮用試薬中でインキュベートし、前記試料を蛍光標識化結合分子と反応させた後、蛍光偏光度を検出することで、前記ターゲットを検出する方法であり、これを、菌検出用具を用いて行う。前記菌検出用具は、試料採取用具を本体に装着した用具であり、前記試料採取用具は、採取部、前記本体との連結部を含み、前記本体は、試薬収容室、採取部収容室、前記試料採取用具との連結部を含み、前記試薬収容室と前記採取部収容室とは、独立している。前記試料採取用具と前記本体とは、前記準備工程後、前記インキュベート工程前に、前記採取部が前記採取部収容室に収容された状態で、前記試料採取用具の連結部と前記本体の連結部とにおいて連結され、前記準備工程後、前記試薬収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることによって、前記インキュベート工程および前記反応工程が行われる。

Description

菌検出方法
　本発明は、菌検出方法に関する。
　近年、大腸菌、サルモネラ菌等の微生物感染による食中毒の増加が問題となっている。この問題の大きな原因は、洗浄不良であることから、食品加工場等では、検査として菌体の検出を行うことが必須となっている。
　菌体の検出方法としては、例えば、棒の先端に綿球を有するスワブ式のデバイスを用いる方法がある（例えば、特許文献１、特許文献２）。この方法では、前記デバイスの先端で試料を採取し、前記先端を培地に浸して前記試料の培養を行い、さらに、試薬としてターゲット菌体の酵素に対する基質を添加して、その酵素反応を検出することで、間接的に、菌体が検出できる。
　しかしながら、前記酵素と前記基質との反応を検出する場合、培養工程において、様々な菌体が増殖すると、前記様々な菌体由来の酵素と基質とが反応し、前記ターゲット菌体を特異的に検出できない可能性がある。このため、前記培養工程において、前記ターゲット菌体を選択的に培養する必要があり、手間がかかる。
　他方、このような問題は、例えば、前記ターゲット菌体に特異的に結合する結合分子（例えば、抗体、アプタマー、結合性ペプチド、糖鎖、結合タンパク質等）を使用するＥＬＩＳＡ法およびＳＰＲ法を採用することによって、解消できる。しかしながら、これらの方法は、前記ターゲット菌体と前記結合分子とを結合させた後、未結合の前記結合分子を除去するための洗浄工程が必須である。このため、洗浄工程を前提としていない前述のようなスワブ式のデバイスでは、このような方法を実施できないという問題がある。
特許第３４３１８１２号 特開２０１３－５１６１７９号公報
　そこで、本発明の目的は、ターゲット菌体に結合可能な結合分子を使用して、より簡便且つ迅速に、デバイスにより菌体を検出する新たな方法を提供することにある。
　本発明の菌検出方法は、
試料を準備する準備工程、
前記試料を、菌濃縮用試薬中でインキュベートするインキュベート工程、
前記菌濃縮用試薬中の前記試料を、ターゲットの菌に結合する蛍光標識化結合分子と反応させる反応工程、および、
前記蛍光標識化結合分子の蛍光偏光度を検出することで、前記ターゲットを検出する検出工程を含み；
前記試料の準備工程は、試料採取用具を用いて行われ、
前記インキュベート工程、前記反応工程および前記検出工程は、前記試料採取用具を本体に装着した菌検出用具を用いて行われ；
前記試料採取用具は、試料を採取する採取部と、前記本体との連結部とを含み；
前記本体は、
　前記菌濃縮用試薬および前記蛍光標識化結合分子を収容する試薬収容室と、
　前記試料採取用具の前記採取部を収容する採取部収容室と、
　前記試料採取用具との連結部とを含み、
　前記試薬収容室と前記採取部収容室とは、独立しており；
前記試料採取用具と前記本体とは、前記準備工程後であり且つ前記インキュベート工程前に、前記試料採取用具の採取部が前記本体の採取部収容室に収容された状態で、前記試料採取用具の連結部と前記本体の連結部とにおいて連結され；
前記準備工程後、前記試薬収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることによって、前記インキュベート工程および前記反応工程を行うことを特徴とする。
　本発明の菌検出用具は、
試料採取用具と本体とを有し；
前記試料採取用具は、試料を採取する採取部と、前記本体との連結部とを含み；
前記本体は、
　前記菌濃縮用試薬および前記蛍光標識化結合分子を収容する試薬収容室と、
　前記試料採取用具の前記採取部を収容する採取部収容室と、
　前記試料採取用具との連結部とを含み、
　前記試薬収容室と前記採取部収容室とは、独立しており；
前記試料採取用具と前記本体とは、前記試料採取用具の採取部が前記本体の採取部収容室に収容された状態で、前記試料採取用具の連結部と前記本体の連結部とにおいて連結され；
前記本発明の検出方法に使用されることを特徴とする。
　本発明では、ターゲットの菌に結合する結合分子として、蛍光標識化された結合分子を使用し、前記蛍光標識化結合分子と前記ターゲットとの結合により変化する前記蛍光標識化結合分子の蛍光偏光度を検出することで、前記ターゲットを検出する。この方法は、前述のような洗浄工程が不要であることから、本発明の検出方法によれば、前記試料採取用具と前記本体とを含む菌検出用具を使用して、簡便且つ迅速に、前記ターゲットの検出を行うことができる。したがって、本発明の菌の検出方法は、例えば、食品製造、食品管理、食品の流通等の分野において、極めて有用な方法といえる。
図１は、本発明の菌検出用具の一例であり、（Ａ）は、断面図であり、（Ｂ）は、使用時の状態を示す断面図である。 図２は、本発明の菌検出用具のその他の例であり、（Ａ）、（Ｂ）および（Ｃ）は、前記菌検出用具のバリエーションを示す断面図である。 図３は、本発明の菌検出用具のその他の例であり、（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）、（Ｄ）および（Ｅ）は、前記菌検出用具のバリエーションを示す断面図である。 図４は、本発明の菌検出用具のその他の例を示す断面図である。 図５は、本発明の菌検出用具のその他の例であり、（Ａ）、（Ｂ）および（Ｃ）は、前記菌検出用具のバリエーションを示す断面図である。 図６は、本発明の菌検出用具のその他の例を示す断面図である。 図７は、本発明の菌検出用具のその他の例であり、（Ａ）、（Ｂ）および（Ｃ）は、前記菌検出用具のバリエーションを示す断面図である。 図８は、本発明の菌検出用具のその他の例を示す断面図である。 図９は、本発明の菌検出用具のその他の例であり、（Ａ）、（Ｂ）および（Ｃ）は、前記菌検出用具のバリエーションを示す断面図である。
　本発明の検出方法は、例えば、
前記試薬収容室が、前記菌濃縮用試薬と前記蛍光標識化結合分子との混合試薬が収容された収容室であり；
前記準備工程後、前記試薬収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることによって、前記試薬採取用具の採取部が有する前記試料と前記混合試薬とを接触させ、前記インキュベート工程と前記反応工程とを同時に行う。
　本発明の検出方法は、例えば、使用時において、前記本体は、前記試薬収容室が、前記採取部収容室の上方向または下方向に配置されている。
　本発明の検出方法は、例えば、前記試薬収容室は、独立して、第１試薬収容室と第２試薬収容室とを含み、
前記第１試薬収容室は、前記菌濃縮用試薬が収容された収容室であり、
前記第２試薬収容室は、前記蛍光標識化結合分子が収容された収容室であり、
前記第１試薬収容室および前記第２試薬収容室は、それぞれ、前記採取部収容室と独立しており；
前記準備工程後、前記第１試薬収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることによって、前記試薬採取用具の採取部が有する前記試料と前記菌濃縮用試薬とを接触させ、前記インキュベート工程を行い；
前記インキュベート工程後、前記第２試薬収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることによって、前記インキュベートした試料と前記蛍光標識化結合分子とを接触させ、前記反応工程を行う。
　本発明の検出方法は、例えば、使用時において、前記本体は、前記第１試薬収容室および前記第２試薬収容室の双方が、前記採取部収容室の上方向または下方向に配置されている。
　本発明の検出方法は、例えば、使用時において、前記本体は、前記第１試薬収容室および前記第２試薬収容室のうち、一方が、前記採取部収容室の上方向に配置され、他方が、前記採取部収容室の下方向に配置されている。
　本発明の検出方法は、例えば、さらに、前記検出工程の後、前記インキュベートした試料を、殺菌剤で処理する殺菌工程を含み；
前記本体は、さらに、前記殺菌剤を収容する殺菌剤収容室を含み、
前記試薬収容室および前記採取部収容室は、それぞれ、前記殺菌剤収容室と独立しており；
前記検出工程後、前記殺菌剤収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることによって、前記殺菌工程を行う。
　本発明の検出方法は、例えば、使用時において、前記本体は、前記殺菌剤収容室が、前記採取部収容室の上方向または下方向に配置されている。
　本発明の検出方法は、例えば、
前記採取部収容室は、
　前記インキュベート工程および前記反応工程を行う反応室であり、
　さらに、検出領域を含み、
前記検出領域は、前記採取部収容室の内部における蛍光偏光度を、外部から検出可能な部材で形成され；
前記試薬収容室は、前記菌濃縮用試薬と前記蛍光標識化結合分子との混合試薬が収容された収容室であり；
前記準備工程後、前記試薬収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることによって、前記試薬収容室から前記採取部収容室に前記混合試薬を導入し、前記インキュベート工程と前記反応工程とを同時に行う。
　本発明の検出方法は、例えば、
前記採取部収容室は、
　前記インキュベート工程および前記反応工程を行う反応室であり、
　さらに、検出領域を含み、
前記検出領域は、前記採取部収容室の内部における蛍光偏光度を、外部から検出可能な部材で形成され；
前記試薬収容室は、独立して、第１試薬収容室と第２試薬収容室とを含み、
前記第１試薬収容室は、前記菌濃縮用試薬が収容された収容室であり、
前記第２試薬収容室は、前記蛍光標識化結合分子が収容された収容室であり、
前記第１試薬収容室および前記第２試薬収容室は、それぞれ、前記採取部収容室と独立しており；
前記準備工程後、前記第１試薬収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることによって、前記第１試薬収容室から前記採取部収容室に前記菌濃縮用試薬を導入し、前記インキュベート工程を行い；
前記インキュベート工程後、前記第２試薬収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることによって、前記第２試薬収容室から前記採取部収容室に、前記蛍光標識化結合分子を導入し、前記反応工程を行う。
　本発明の検出方法は、例えば、さらに、前記検出工程の後、前記インキュベートした試料を、殺菌剤で処理する殺菌工程を含み；
前記本体は、さらに、前記殺菌剤を収容する殺菌剤収容室を含み、
前記試薬収容室および前記採取部収容室は、それぞれ、前記殺菌剤収容室と独立しており；
前記検出工程後、前記殺菌剤収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることによって、前記殺菌剤収容室から前記採取部収容室に、前記殺菌剤を導入し、前記殺菌工程を行合う。
　本発明の検出方法は、例えば、前記本体において、
連通させる一対の収容室は、連通用の中空管の挿入により連結され、
前記中空管は、一端に閉口部を有し；
前記中空管の閉口部により、一方の収容室の内部と他方の収容室の内部とが非連通となり、
前記中空管を軸方向の途中で切断して、前記閉口部を前記中空管から切り離すことによって、前記中空管の両端を開口させ、前記一方の収容室の内部と前記他方の収容室の内部とを連通させる。
　本発明の検出方法は、例えば、
前記本体は、さらに、貫通孔形成手段を有し；
前記本体において、
連通させる一対の収容室は、
　一方の収容室が、他方の収容室と連通可能な開口部を有し、
　他方の収容室が、前記貫通孔形成手段により、開口部を形成可能であり；
前記貫通孔形成手段で、前記他方の収容室に貫通孔を形成することによって、前記一方の収容室の開口部と前記他方の収容室に形成した貫通孔とにより、前記一方の収容室の内部と前記他方の収容室の内部とを連通させる。
　本発明の検出方法は、例えば、前記本体において、
前記試薬収容部は、破壊可能なカプセルであり；
前記カプセルの破壊によって、前記試薬収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させる。
　本発明の検出方法は、例えば、
前記試薬収容室は、
　前記インキュベート工程および前記反応工程を行う反応室であり、
　前記菌濃縮用試薬と前記蛍光標識化結合分子との混合試薬が収容され、
　さらに、検出領域を含み、
前記検出領域は、前記採取部収容室の内部における蛍光偏光度を、外部から検出可能な部材で形成され；
前記準備工程後、前記採取部収容室に収容された前記採取部を前記試薬収容室に収容することによって、前記試薬収容室の混合試薬に前記採取部を接触させ、前記インキュベート工程と前記反応工程とを同時に行う。
　本発明の検出方法は、例えば、
前記試薬収容室は、独立した第１試薬収容室と第２試薬収容室とを含み、
前記第１試薬収容室は、前記菌濃縮用試薬が収容された収容室であり、
前記第２試薬収容室は、前記蛍光標識化結合分子が収容された収容室であり、
前記第１試薬収容室および前記第２試薬収容室は、それぞれ、前記採取部収容室と独立しており；
前記第１試薬収容室は、前記インキュベート工程を行う反応室であり；
前記第２試薬収容室は、前記反応工程を行う反応室であり、
　さらに、検出領域を含み、
前記検出領域は、前記第２試薬収容室の内部における蛍光偏光度を、外部から検出可能な部材で形成され；
前記準備工程後、前記採取部収容室に収容された前記採取部を前記第１試薬収容室に収容することによって、前記第１試薬収容室の前記菌濃縮用試薬に前記採取部を接触させ、前記インキュベート工程を行い；
前記インキュベート工程後、前記第１試薬収容室に収容された前記採取部を前記第２試薬収容室に収容することによって、前記第１試薬収容室の前記インキュベート後の菌濃縮試薬を前記第２試薬収容室に導入し、前記反応工程を行う。
　本発明の検出方法は、例えば、さらに、前記検出工程の後、前記インキュベートした試料を、殺菌剤で処理する殺菌工程を含み；
前記本体は、さらに、前記殺菌剤を収容する殺菌剤収容室を含み、
前記試薬収容室および前記採取部収容室は、それぞれ、前記殺菌剤収容室と独立しており；
前記検出工程後、前記殺菌剤収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることによって、前記殺菌剤収容室から前記採取部収容室に前記殺菌剤を導入し、前記殺菌工程を行う。
　本発明の検出方法は、例えば、前記菌濃縮用試薬が、検出対象の菌体用の培地である。
　本発明の検出方法は、例えば、前記蛍光標識化結合分子において、ターゲットの菌に結合する結合分子が、アプタマー、低分子化合物、糖鎖、ペプチド、タンパク質、核酸、ウィルスおよびファージからなる群から選択された少なくとも一つである。
　本発明の検出方法は、例えば、前記タンパク質が、抗体である。
［１．菌検出方法］
　本発明の検出方法について、以下に、具体的に説明する。
　本発明の検出方法は、前述のように、試料を準備する準備工程、
前記試料を、菌濃縮用試薬中でインキュベートするインキュベート工程、
前記菌濃縮用試薬中の前記試料を、ターゲットの菌に結合する蛍光標識化結合分子と反応させる反応工程、および、
前記蛍光標識化結合分子の蛍光偏光度を検出することで、前記ターゲットを検出する検出工程を含み；
前記試料の準備工程は、試料採取用具を用いて行われ、
前記インキュベート工程、前記反応工程および前記検出工程は、前記試料採取用具を本体に装着した菌検出用具を用いて行われ；
前記試料採取用具は、試料を採取する採取部と、前記本体との連結部とを含み；
前記本体は、
　前記菌濃縮用試薬および前記蛍光標識化結合分子を収容する試薬収容室と、
　前記試料採取用具の前記採取部を収容する採取部収容室と、
　前記試料採取用具との連結部とを含み、
　前記試薬収容室と前記採取部収容室とは、独立しており；
前記試料採取用具と前記本体とは、前記準備工程後であり且つ前記インキュベート工程前に、前記試料採取用具の採取部が前記本体の採取部収容室に収容された状態で、前記試料採取用具の連結部と前記本体の連結部とにおいて連結され；
前記準備工程後、前記試薬収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることによって、前記インキュベート工程および前記反応工程を行うことを特徴とする。
　本発明において、蛍光偏光度の検出による、前記ターゲットの検出は、例えば、蛍光偏光法に基づく。前記蛍光偏光法は、一般に、偏光励起光を標識物質に照射した際、前記標識物質から発せられる蛍光が、前記標識物質で標識された分子の分子量に応じて異なった偏光度を示すという特性に基づく測定方法である。本発明においては、前記蛍光標識物質で前記結合分子を標識化した前記蛍光標識化結合分子を使用しているため、前記蛍光偏光法により、前記ターゲットと前記蛍光標識化結合分子との結合を検出できる。具体的には、前記蛍光標識化結合分子は、前記ターゲットと未結合の状態と、前記ターゲットと結合した状態とを比較した場合、前者は、相対的に分子量が小さいため、相対的に蛍光偏光度が低く、一方、後者は、相対的に分子量が大きいため、相対的に蛍光偏光度が高い。このため、例えば、前記試料と接触させていない前記蛍光標識化結合分子の蛍光偏光度と、前記試料と接触させた前記蛍光標識化結合分子の蛍光偏光度とを比較することで、前記ターゲットと前記蛍光標識化結合分子との結合を検出できる。また、前記ターゲットと未結合の前記蛍光標識化結合分子および前記ターゲットと結合した前記蛍光標識化結合分子の少なくとも一方の蛍光偏光度を評価基準として、前記試料と接触させた前記蛍光標識化結合分子の蛍光偏光度を評価することでも、前記ターゲットと前記蛍光標識化結合分子との結合を検出できる。
　本発明において、前記準備工程は、試料を準備する工程である。本発明において、前記試料の種類は、特に制限されない。前記試料は、例えば、生体由来、飲食品由来、環境由来等の試料があげられる。前記生体は、特に制限されず、例えば、ヒト、ウシ、ブタ、ヒツジ、マウス、ラット、ウサギ、ウマ等の非ヒト哺乳類、鳥類、魚類等の動物の生体があげられる。前記生体由来の試料は、例えば、排泄物、体液、皮膚、肉、粘膜、体毛等があげられる。前記飲食品由来の試料は、例えば、飲料、食品、食品原料等があげられる。前記環境由来の試料は、例えば、生物、水、土壌、大気等があげられる。前記水試料は、例えば、地下水、河川水、海水、生活排水等があげられる。また、前記環境由来の試料は、例えば、食品加工場、調理場等における付着物があげられる。
　本発明において、検出対象の菌は、特に制限されず、例えば、リステリア属、サルモネラ属、病原性大腸菌、黄色ブドウ球菌、カンピロバクター属、ビブリオ属、ウェルシュ属、コレラ菌、インフルエンザ菌等があげられる。
　また、本発明において、検出対象は、例えば、菌そのものには制限されず、菌由来の物質であってもよい。本発明において、前記菌を特定可能な前記菌由来の物質を検出対象とすることで、前記菌由来の物質の検出により、例えば、間接的に、前記物質により特定される菌を検出することができる。前記菌由来の物質は、例えば、前記菌由来の分泌物、前記菌の内在性の物質等があげられる。この場合、本発明は、例えば、前記菌由来の物質に結合する結合分子を使用することが好ましい。
　本発明において、前記インキュベート工程は、前記試料を、菌濃縮用試薬中でインキュベートする工程である。本発明において、菌の濃縮とは、例えば、培地中で菌を培養し、前記菌を増殖させることによる濃縮があげられる。前記菌濃縮用試薬とは、例えば、ターゲットの菌を増殖するための培地があげられる。前記培地の種類は、特に制限されず、例えば、ターゲットの菌に応じて適宜設定できる。なお、本発明の場合、前記ターゲットに結合する前記蛍光標識化結合分子を使用して、前記ターゲットを検出できることから、前記培地は、例えば、前記ターゲットを特異的に増殖する培地の他、種々の菌に汎用できる培地であってもよい。
　前記インキュベート工程の条件は、特に制限されず、例えば、前記試料の種類、前記ターゲットの種類に応じて適宜決定できる。本発明の場合、前述のような理由から、例えば、前記ターゲットを特異的に増殖する条件には制限されない。
　本発明において、前記反応工程は、前記菌濃縮用試薬中の前記試料を、ターゲットの菌に結合する蛍光標識化結合分子と反応させる工程である。本発明において、前記インキュベート工程と前記反応工程とは、例えば、同時に行ってもよいし、前記インキュベート工程の後に、前記反応工程を行ってもよい。前者の場合、例えば、前記菌濃縮用試薬と前記蛍光標識化結合分子とを混合した混合試薬を使用して、前記両工程を行ってもよいし、前記菌濃縮用試薬および前記蛍光標識化結合分子を、順不同で前記試料と接触させてから、前記両工程を行ってもよい。後者の場合、例えば、前記菌濃縮用試薬と前記試料とを接触させて前記インキュベート工程を行った後、さらに、前記試料と前記蛍光標識化結合分子とを接触させて前記反応工程を行うことができる。以下、前記混合試薬を使用する形態を、「１試薬系」ともいい、前記菌濃縮用試薬および前記蛍光標識化結合分子を独立して使用する形態を、「２試薬系」ともいう。
　前記蛍光標識化結合分子は、前記ターゲットに結合する結合分子が、蛍光物質で標識化されている。前記結合分子は、前記ターゲットに結合できればよく、特に制限されず、例えば、前記ターゲットの種類に応じて適宜決定できる。
　前記結合分子の具体例は、例えば、アプタマー、低分子化合物、糖鎖、ペプチド、タンパク質、核酸、ウィルスおよびファージ等があげられる。前記タンパク質は、例えば、抗体が例示できる。前記アプタマーは、例えば、前記ターゲットに結合する核酸分子であり、例えば、ＲＮＡ、ＤＮＡ、ＲＮＡとＤＮＡとのキメラ等があげられ、また、さらに人工核酸を含んでもよい。
　前記蛍光物質は、特に制限されない。前記蛍光物質は、例えば、ピレン、ＴＡＭＲＡ、フルオレセイン、Ｃｙ３色素、Ｃｙ５色素、ＦＡＭ色素、ローダミン色素、テキサスレッド色素等の色素、ＪＯＥ、ＭＡＸ、ＨＥＸ、ＴＹＥ等の蛍光団があげられ、前記色素の具体例としては、例えば、Ａｌｅｘａ４８８、Ａｌｅｘａ６４７等のＡｌｅｘａ色素等があげられる。前記蛍光物質は、例えば、前記結合分子に直接的に連結してもよいし、リンカーを介して間接的に連結してもよい。
　前記結合分子が前記アプタマーの場合、前記蛍光物質は、例えば、前記アプタマーのいずれの箇所に結合してもよく、５’末端および３’末端の少なくとも一方が例示できる。また、前記蛍光物質が、例えば、前記リンカーを介して前記アプタマーに結合している場合、前記リンカーは、特に制限されず、例えば、アプタマーと同様に、前述のような核酸分子があげられる。
　前記反応工程の条件は、特に制限されず、例えば、前記試料の種類、前記ターゲットの種類、前記結合分子の種類等に応じて、適宜決定できる。前記反応工程において、反応温度は、例えば、４～３７℃、１８～２５℃であり、反応時間は、例えば、１０～１２０分、３０～６０分である。
　前記反応工程において、前記蛍光標識化結合分子の他に、例えば、さらにその他の成分を共存させてもよい。前記その他の成分としては、例えば、水、緩衝液等の水性溶媒、界面活性剤、塩、金属イオン、添加物等があげられる。
　本発明において、前記検出工程は、前記蛍光標識化結合分子の蛍光偏光度を検出することで、前記ターゲットを検出する工程である。前述のように、前記蛍光標識化結合分子に前記ターゲットが結合した場合、前記ターゲットが未結合の場合と比較して、蛍光偏光度が大きくなる。このため、蛍光偏光度の検出により、前記ターゲットを検出できるため、例えば、前記ターゲットの定性分析および定量分析が可能となる。
　前記検出工程において、前記蛍光偏光度の検出方法は、特に制限されず、例えば、前記蛍光物質の種類に応じて適宜設定できる。具体例として、前記標識物質がＡｌｅｘａ６４７の場合、前記偏光励起光の波長は、例えば、６２０～６８０ｎｍであり、偏光度の検出波長は、例えば、６６０～８００ｎｍである。前記偏光励起光の照射時間は、特に制限されず、例えば、１ナノ秒～５ナノ秒があげられる。
　本発明の検出方法は、さらに、前記検出工程の後、前記インキュベートした試料を、殺菌剤で処理する殺菌工程を含んでもよい。前記殺菌工程により、例えば、前記試料のインキュベートにより増殖した菌を死滅させ、廃棄物による環境への影響を回避し、安全性をより向上することができる。
　前記殺菌工程において、前記殺菌剤は、特に制限されず、菌の殺菌効果を示す成分が使用できる。殺菌剤としては、例えば、次亜塩素酸ナトリウム、二酸化塩素等が使用できる。
　本発明の検出方法は、前述のように、前記試料採取用具と前記本体とを含む前記菌検出用具を使用して行われる。具体的には、本発明の検出方法において、前記試料の準備工程は、前記試料採取用具を用いて行われ、前記インキュベート工程、前記反応工程および前記検出工程は、前記試料採取用具を本体に装着した菌検出用具を用いて行われる。前記菌検体用具において、前記試料採取用具は、前記本体に脱着可能である。
　本発明において、上方向および下方向とは、例えば、前記菌検出用具を使用する際における上下方向であり、具体的には、前記試料採取用具における採取部の方向を下方向、前記試料採取具における前記採取部と反対方向（例えば、連結部の方向）を上方向として、説明する。
　前記試料採取用具は、前述のように、試料を採取する採取部と、前記本体との連結部とを含む。前記試料採取用具は、例えば、棒状用具であり、棒状の支持部材の一方の先端に前記採取部を備え、前記支持部材の上方向の領域（例えば、上方向の端部または上方向の端部領域）が前記連結部であることが好ましい。前記試料採取用具は、例えば、スワブ、ブラシ、スパチュラ、スプーン等があげられる。
　前記試料採取用具において、前記採取部は、特に制限されず、例えば、繊維球があげられ、前記繊維は、例えば、綿、樹脂繊維等があげられる。また、前記試料採取用具において、前記連結部は、特に制限されず、前記本体の連結部と連結可能であればよい。前記試料採取用具における前記連結部については、前記本体の連結部とともに後述する。
　前記試料採取用具を用いた前記試料の準備工程は、例えば、前記試料採取用具を持ち、前記採取部で検出対象となる箇所を擦り、前記採取部に試料を採取することにより行える。前記検出対象となる箇所は、特に制限されず、例えば、前述のような試料が存在する箇所である。
　前記本体は、前述のように、前記菌濃縮用試薬および前記蛍光標識化結合分子を収容する試薬収容室と、前記試料採取用具の前記採取部を収容する採取部収容室と、前記試料採取用具との連結部とを含み、前記試薬収容室と前記採取部収容室とは、独立している。本発明の検出方法は、前記試料採取用具と前記本体とが、前記準備工程後であり且つ前記インキュベート工程前に、前記試料採取用具の採取部が前記本体の採取部収容室に収容された状態で、前記試料採取用具の連結部と前記本体の連結部とにおいて連結され、前記準備工程後、前記試薬収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることによって、前記インキュベート工程および前記反応工程を行う。
　前記本体において、前記試薬収容室は、例えば、１つの収容室から構成されてもよいし、独立した２つ以上の収容室を含んでもよい。本発明において、「前記試薬収容室が、独立した２つ以上の収容室を含む」とは、例えば、一つの収容室の内部に、分離された２つ以上の室が形成されている形態でもよいし、前記試薬収容室として、２つ以上の収容室を有する形態、２つ以上の独立した収容室が、それぞれ、分離して、別個に形成されている形態であってもよい。
　本発明において、前述のように、前記菌濃縮用試薬と前記蛍光標識化結合分子との混合試薬を使用する場合、前記試薬収容室は、例えば、前記混合試薬が収容された一つの収容室である。また、本発明において、前記菌濃縮用試薬と前記蛍光標識化結合分子とを、それぞれ別個に使用する場合、後者が好ましく、例えば、前記試薬収容室は、独立して、第１試薬収容室と第２試薬収容室とを含み、前記第１試薬収容室が、前記菌濃縮用試薬が収容された収容室であり、前記第２試薬収容室が、前記蛍光標識化結合分子が収容された収容室である。後者の場合、例えば、前記第１試薬収容室および前記第２試薬収容室は、それぞれ、前記採取部収容室と独立している。
　前記本体において、前記試薬収容室の配置箇所は、特に制限されず、例えば、使用時において、前記採取部収容室の上方向に、前記試薬収容室が配置されてもよいし、前記採取部収容室の下方向に、前記試薬収容室が配置されてもよい。前記試薬収容室が、前述のように、独立した２つ以上の収容室を含む場合、例えば、各収容室の全てが、前記採取部収容室の上方向に配置されてもよいし、前記採取部収容室の下方向に配置されてもよく、また、いずれかの収容室が、前記採取部収容室の上方向に配置され、残りの収容室が、前記採取部収容室の下方向に配置されてもよい。前記本体が、前記第１試薬収容室および前記第２試薬収容室を含む場合、例えば、前者が前記採取部収容室の上方向に配置され、後者が前記採取部収容室の下方向に配置されてもよいし、前者が前記採取部収容室の下方向に配置され、後者が前記採取部収容室の上方向に配置されてもよい。
　このように、前記本体が、前記採取部収容室の上方向に１つ以上の収容室を有する場合、以下、これらの収容室をまとめて「上本体」、前記採取部収容室を「下本体」ともいう。また、前記本体が、前記採取部収容室の下方向に１つ以上の収容室を有する場合、以下、これらの収容室をまとめて「下本体」、前記採取部収容室を「上本体」ともいう。そして、前記本体が、前記採取部収容室の上方向と下方向に、それぞれ１つ以上の収容室を有する場合、以下、上方向の収容室をまとめて「上本体」、前記採取部収容室を「中本体」、下方向の収容室をまとめて「下本体」ともいう。
　本発明において、前記混合試薬を使用する場合、例えば、前記準備工程後、前記試薬収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることによって、前記試薬採取用具の採取部が有する前記試料と前記混合試薬とを接触させ、前記インキュベート工程と前記反応工程とを同時に行うことができる。また、本発明において、前記菌濃縮用試薬および前記蛍光標識化結合分子を独立して使用する場合、例えば、前記準備工程後、前記第１試薬収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることによって、前記試薬採取用具の採取部が有する前記試料と前記菌濃縮用試薬とを接触させ、前記インキュベート工程を行い、前記インキュベート工程後、前記第２試薬収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることによって、前記インキュベートした試料と前記蛍光標識化結合分子とを接触させ、前記反応工程を行うことができる。
　本発明において、前述のように、さらに前記殺菌剤を使用する場合、前記本体は、例えば、さらに、前記殺菌剤を収容する殺菌剤収容室を含み、この際、前記試薬収容室および前記採取部収容室は、それぞれ、前記殺菌剤収容室と独立している。本発明において、前述のように、前記混合試薬を使用する場合、前記本体は、例えば、独立して、前記混合試薬を収容する前記試薬収容室と前記殺菌剤収容室とを、独立して含み、前記菌濃縮用試薬と前記蛍光標識化結合分子とをそれぞれ別個に使用する場合、前記本体は、例えば、独立して、前記第１試薬収容室と前記第２試薬収容室と前記殺菌剤収容室とを含む。
　前記本体において、前記殺菌剤収容室の配置箇所は、特に制限されず、例えば、使用時において、前記採取部収容室の上方向に、前記殺菌剤収容室が配置されてもよいし、前記採取部収容室の下方向に、前記殺菌剤収容室が配置されてもよい。前記殺菌剤収容室は、例えば、前記採取部収容室に対して、前記試薬収容室と同じ方向に配置されてもよいし、前記試薬収容室と反対の方向に配置されてもよい。
　本発明において、前記殺菌剤を使用する場合、例えば、前記検出工程後、前記殺菌剤収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることによって、前記殺菌工程を行うことができる。
　本発明において、各収容室が独立しているとは、例えば、各収容室が離れて配置されている形態、その他に、各収容室が隣接しているが、互いの内部は連通しない状態であり、収容室と収容室とを隔離する隔離壁を有している形態等があげられる。
　本発明の検出方法は、例えば、前記採取部収容室が反応室でもよいし、前記試薬収容室が反応室でもよい。
　まず、前記採取部収容室が反応室となる形態について説明する。
　前記混合試薬を使用する一試薬系の場合、前記採取部収容室は、例えば、インキュベート工程および前記反応工程を行う反応室となる。そして、前記採取部収容室は、例えば、さらに、検出領域を含み、前記検出領域は、前記採取部収容室の内部における蛍光偏光度を、外部から検出可能な部材で形成されていることが好ましい。この形態では、例えば、前記準備工程後、前記試薬収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることによって、前記試薬収容室から前記採取部収容室に前記混合試薬を導入し、前記インキュベート工程と前記反応工程とを同時に行うことができる。
　前記菌濃縮用試薬と前記蛍光標識化結合分子とを別個に使用する二試薬系の場合、前記採取部収容室は、例えば、前記インキュベート工程および前記反応工程を行う反応室となる。そして、前記採取部収容室は、例えば、さらに、検出領域を含み、前記検出領域は、前記採取部収容室の内部における蛍光偏光度を、外部から検出可能な部材で形成されていることが好ましい。この形態では、例えば、前記準備工程後、前記第１試薬収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることによって、前記第１試薬収容室から前記採取部収容室に前記菌濃縮用試薬を導入し、前記インキュベート工程を行い、前記インキュベート工程後、前記第２試薬収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることによって、前記第２試薬収容室から前記採取部収容室に、前記蛍光標識化結合分子を導入し、前記反応工程を行うことができる。
　前記検出領域を形成する部材は、前記蛍光偏光度を外部から検出可能であればよく、特に制限されない。前記部材は、例えば、透明部材であり、具体例として、例えば、ガラス、プラスチック等があげられ、前記プラスチックは、例えば、ポリスチレン、ポリカーボネート等があげられる。以下、同様である。
　前記一試薬系または前記二試薬系の形態において、本発明の検出方法が、さらに、殺菌工程を含む場合は、例えば、前記検出工程後、前記殺菌剤収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることによって、前記殺菌剤収容室から前記採取部収容室に、前記殺菌剤を導入し、前記殺菌工程を行うことができる。
　前記採取部収容室が反応室の場合、収容室間の連通の方法は、特に制限されないが、例えば、以下に示す形態Ａ、形態Ｂおよび形態Ｃの方法があげられる。
　前記形態Ａは、中空管を利用した方法である。この場合、前記本体において、連通させる一対の収容室は、連通用の中空管の挿入により連結されており、前記中空管は、一端に閉口部を有している。このため、前記中空管の閉口部により、一方の収容室の内部と他方の収容室の内部とが非連通となっているが、前記中空管を軸方向の途中で切断して、前記閉口部を前記中空管から切り離すことによって、前記中空管の両端を開口させ、前記一方の収容室の内部と前記他方の収容室の内部とを連通させることができる。前記一対の収容室とは、例えば、前記試薬収容室と前記採取部収容室、前記第１試薬収容室と前記採取部収容室、前記第２試薬収容室と前記採取部収容室、前記殺菌剤収容室と前記採取部収容室、等があげられる（以下、同様）。
　前記形態Ｂは、貫通孔形成手段を利用した方法である。この場合、前記本体は、さらに、貫通孔形成手段を有しており、前記本体において、連通させる一対の収容室は、一方の収容室が、他方の収容室と連通可能な開口部を有し、他方の収容室が、前記貫通孔形成手段により、開口部を形成可能である。そして、前記貫通孔形成手段で、前記他方の収容室に貫通孔を形成することによって、前記一方の収容室の開口部と前記他方の収容室に形成した貫通孔とにより、前記一方の収容室の内部と前記他方の収容室の内部とを連通させることができる。前記貫通孔形成手段は、特に制限されず、例えば、カッター、スクリュー等があげられ、孔をあける穿孔手段ということもできる。
　前記形態Ｃは、カプセルを利用した方法である。この場合、前記本体において、前記試薬収容部は、破壊可能なカプセルである。そして、例えば、前記カプセルを破壊することによって、前記試薬収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることができる。
　つぎに、前記試薬収容室が反応室となる形態について説明する。この形態は、具体的には、前記試料採取用具の採取部を収容した室が、反応室となる形態である。つまり、この形態は、前記採取部の移動によって、各収容室間の連通を行い、且つ、反応室を移動させる形態Ｄである。
　前記混合試薬を使用する一試薬系の場合、前記試薬収容室は、例えば、インキュベート工程および前記反応工程を行う反応室となる。そして、前記試薬収容室は、例えば、さらに、検出領域を含み、前記検出領域は、前記採取部収容室の内部における蛍光偏光度を、外部から検出可能な部材で形成されていることが好ましい。この形態では、例えば、前記準備工程後、前記採取部収容室に収容された前記採取部を前記試薬収容室に収容することによって、前記試薬収容室の混合試薬に前記採取部を接触させ、前記インキュベート工程と前記反応工程とを同時に行うことができる。前記採取部を、前記採取部収容室から前記試薬収容室に収容させるとは、例えば、前記採取部収容室と前記試薬収容室とを隔離している隔離壁を、前記採取部の先端により破断し、前記採取部収容室から前記試薬収容室に前記採取部を移動させる方法があげられる。
　前記菌濃縮用試薬と前記蛍光標識化結合分子とを別個に使用する二試薬系の場合、例えば、前記第１試薬収容室が前記インキュベート工程を行う反応室となり、前記第２試薬収容室が前記反応工程を行う反応室となる。そして、前記第２試薬収容室は、例えば、さらに、検出領域を含み、前記検出領域は、前記第２試薬収容室の内部における蛍光偏光度を、外部から検出可能な部材で形成されていることが好ましい。この形態では、例えば、前記準備工程後、前記採取部収容室に収容された前記採取部を前記第１試薬収容室に収容することによって、前記第１試薬収容室の前記菌濃縮用試薬に前記採取部を接触させ、前記インキュベート工程を行い、前記インキュベート工程後、前記第１試薬収容室に収容された前記採取部を前記第２試薬収容室に収容することによって、前記第１試薬収容室の前記インキュベート後の菌濃縮試薬を前記第２試薬収容室に導入し、前記反応工程を行うことができる。
　前記一試薬系または前記二試薬系の形態において、本発明の検出方法が、さらに、殺菌工程を含む場合は、例えば、前記検出工程後、前記殺菌剤収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることによって、前記殺菌剤収容室から前記採取部収容室に、前記殺菌剤を導入し、前記殺菌工程を行うことができる。
　以下に、本発明の検出方法の具体例について、図を参照して詳細に説明する。なお、本発明は、これらの例示には制限されない。各図において、同一箇所には、同一符号を付している。各図は、概略図であり、便宜上、各部の構造および形状は、適宜簡略化して示す場合があり、各部の大きさおよび形状等は、実際とは異なり、模式的に表す場合がある。各図における上下方向は、前記菌検出用具の使用時における上下方向であり、前記菌検出用具の試料採取用具について、採取部が下方向、本体との連結部が上方向となるように表している。また、各実施形態は、特に示さない限り、それぞれの記載を援用できる。
（実施形態Ａ１）
　本実施形態は、前記採取部収容室が、前記インキュベート工程および前記反応工程の反応室であり、前記採取部収容室が前記検出領域を有している菌検出用具を使用し、収容室間の連通を前記形態Ａにより行う形態である。
　図１に、菌検出用具の概略図を示す。図１（Ａ）は、菌検出用具の概略を示す断面図であり、図１（Ｂ）は、使用時における前記菌検出用具の概略を示す断面図である。
　図１（Ａ）の菌検出用具は、採取部収容室１０と、前記混合試薬を収容する試薬収容室１１と、試料採取用具１５とを備える。本実施形態において、本体は、上本体である試薬収容室１１と、下本体である採取部収容室１０とから構成される。試料採取用具１５は、連通用の中空管１５１と、採取部１５２とを有し、中空管１５１の下方向先端に採取部１５２が連結され、中空管１５１の上方向の端部には閉口部を有し、中空管１５１は、軸方向の途中で切断可能である。中空管１５１は、例えば、切断しやすいことから、所望の切断箇所において、孔が狭まった狭窄部を有してもよい。そして、試料採取用具１５は、上本体である試薬収容室１１と連結しており、具体的には、試料採取用具１５の中空管１５１の上方向の領域が、試薬収容室１１の内部に位置するように配置されている。試料採取用具１５が連結された試薬収容室１１と、採取部収容室１０とは、着脱可能であり、試薬収容室１１は、試料採取用具１５の採取部１５２を採取部収容室１０の内部に収容した状態で、採取部収容室１０に装着できる。採取部収容室１０は、前記インキュベート工程および前記反応工程の反応室であり、例えば、その底部領域が、前記検出領域となる。
　図１（Ａ）の菌検出用具は、例えば、以下のように使用できる。
　まず、前記菌検出用具の採取部収容室１０（下本体）から、試料採取用具１５を備えた試薬収容室１１（上本体）を取り外し、試料採取用具１５の露出した先端（前記採取部）により、試料を採取する。そして、試料採取用具１５の前記採取部を、採取部収容室１０（下本体）の内部に収容した状態で、採取部収容室１０（下本体）に試薬収容室１１（上本体）を装着する。
　つぎに、図１（Ｂ）に示すように、試料採取用具１５の中空管１５１を軸方向の途中で切断して、前記閉口部を有する領域１５１’を、中空管１５１から切り離す。これによって、中空管１５１の両端が開口するため、中空管１５１の上方開口部から、試薬収容室１１内部の前記混合試薬が、中空管１５１の内部に導入され、試料採取用具１５の採取部１５２を通じて、採取部収容室（反応室）１０に導入される。この際、試薬採取用具１５の採取部１５２には、採取した試料が付着しているため、採取部１５２に到達した前記混合試薬と前記試料とが混ざり、前記混合試薬と前記試料との混合物が、採取部収容室１０の底部に滴下される。
　そして、採取部収容室１０に導入された前記混合試薬と前記試料との混合物について、前記インキュベート工程と前記反応工程とを施すことによって、前記試料中のターゲット菌体の培養、および、前記ターゲット菌体と前記蛍光標識化結合分子との結合反応を行う。その後、採取部収容室１０の検出領域について、蛍光偏光度の測定を行う。
　図１は、試料採取用具１５の支持部材を中空管とし、試薬収容室１１と採取部収容室１０の内部を連通させているが、これには制限されない。この他に、例えば、試薬収容室１１と採取部収容室１０とを、上方向の端部に閉口部を有する中空管１５１の挿入により連結し、試料採取用具１５は、試薬収容室１１の底部に連結するのみでもよい。
（実施形態Ａ２）
　本実施形態は、試薬収容室の個数または殺菌剤収容室をさらに含む以外は、前記実施形態Ａ１と同様の形態である。本実施形態は、特に示さない限り、前記実施形態Ａ１および後述する実施形態Ａ３を援用できる。
　図２に、菌検出用具のその他の概略図を示す。図２（Ａ）は、採取部収容室１０（下本体）の上方向に、前記菌濃縮用試薬を収容する第１試薬収容室１３と、前記蛍光標識化結合分子を収容する第２試薬収容室１２とを、上本体として有する形態であり、図２（Ｂ）は、採取部収容室１０（下本体）の上方向に、前記混合試薬を収容する試薬収容室１１と、前記殺菌剤を収容する殺菌剤収容室１４とを、上本体として有する形態であり、図２（Ｃ）は、採取部収容室１０（下本体）の上方向に、前記菌濃縮用試薬を収容する第１試薬収容室１３と、前記蛍光標識化結合分子を収容する第２試薬収容室１２と、前記殺菌剤を収容する殺菌剤収容室１４とを、上本体として有する形態である。
　図２（Ａ）における第１試薬収容室１３と第２試薬収容室１２、図２（Ｂ）における試薬収容室１１と殺菌剤収容室１４、図２（Ｃ）における第１試薬収容室１３と第２試薬収容室１２と殺菌剤収容室１４は、それぞれ、各収容室は、隔離壁等で隔離されているが、隣接する収容室同士が前記隔離壁で連結し、全体として一体化されていることが好ましい。この場合、採取部収容室１０（下本体）から、第１試薬収容室１３、第２試薬収容室１２、試薬収容室１１または殺菌剤収容室１４を取り外せば、それに付随して、他の収容室も取り外すことができる。
　図２（Ａ）および（Ｃ）における第１試薬収容室１３と採取部収容室１０とは、試料採取用具１５の中空管１５１の挿入により連結されている。第１試薬収容室１３と採取部収容室１０と試料採取用具１５との関係は、前記実施形態Ａ１の図１（Ａ）における試薬収容室１１と採取部収容室１０と試料採取用具１５との関係を援用できる。また、図２（Ｂ）における試薬収容室１１と採取部収容室１０と試料採取用具１５との関係は、前記実施形態Ａ１の図１（Ａ）と同じである。
　図２（Ａ）および（Ｃ）における第２試薬収容室１２と採取部収容室１０、および、図２（Ｂ）における殺菌剤収容室１４と採取部収容室１０は、それぞれ、上方向の端部に閉口部を有する中空管１６の挿入により連結している。中空管１６は、前記実施形態Ａ１の図１における試料採取用具１５の中空管１５１と同様であり、上方向の端部に閉口部を有しており、軸方向の途中で切断可能である。
　図２（Ａ）の菌検出用具は、例えば、以下のように使用できる。まず、前記菌検出用具の採取部収容室１０（下本体）から、試料採取用具１５を備えた前記上本体を取り外し、試料を採取した後、再度、試料採取用具１５の採取部が採取部収容室１０（下本体）の内部に収容されるように、前記上本体を前記下本体に装着する。つぎに、試料採取用具１５の中空管を切断して、第１試薬収容室１３から前記菌濃縮用試薬を採取部収容室１０に導入し、前記インキュベート工程を行い、さらに、第２試薬収容室１２の中空管１６を切断して、第２試薬収容室１２から前記蛍光標識化結合分子を採取部収容室１０に導入して前記反応工程を行う。そして、採取部収容室１０の検出領域において、蛍光偏光度の検出を行う。
　つぎに、図２（Ｂ）の菌検出用具は、例えば、以下のように使用できる。まず、前記菌検出用具の採取部収容室１０（下本体）から、試料採取用具１５を備えた前記上本体を取り外し、試料を採取した後、再度、試料採取用具１５の採取部が採取部収容室１０（下本体）の内部に収容されるように、前記上本体を前記下本体に装着する。つぎに、試料採取用具１５の中空管を切断して、試薬収容室１１から前記混合試薬を採取部収容室１０に導入し、前記インキュベート工程および前記反応工程を行い、採取部収容室１０の検出領域において、蛍光偏光度の検出を行う。さらに、殺菌剤収容室１４の中空管１６を切断して、殺菌剤収容室１４から前記殺菌剤を採取部収容室１０に導入して、前記殺菌工程を行う。
　つぎに、図２（Ｃ）の菌検出用具は、例えば、以下のように使用できる。まず、前記菌検出用具の採取部収容室１０（下本体）から、試料採取用具１５を備えた前記上本体を取り外し、試料を採取した後、再度、試料採取用具１５の採取部が採取部収容室１０（下本体）の内部に収容されるように、前記上本体を前記下本体に装着する。つぎに、試料採取用具１５の中空管を切断して、第１試薬収容室１３から前記菌濃縮用試薬を採取部収容室１０に導入し、前記インキュベート工程を行い、さらに、第２試薬収容室１２の中空管１６を切断して、第２試薬収容室１２から前記蛍光標識化結合分子を採取部収容室１０に導入し、前記反応工程を行い、採取部収容室１０の検出領域において、蛍光偏光度の検出を行う。そして、殺菌剤収容室１４の中空管１６を切断して、殺菌剤収容室１４から前記殺菌剤を採取部収容室１０に導入して、前記殺菌工程を行う。
（実施形態Ａ３）
　本実施形態は、試薬収容室の配置が異なる以外は、前記実施形態Ａ１およびＡ２と同様の形態である。
　図３に、菌検出用具のその他の概略図を示す。図３（Ａ）は、前記実施形態Ａ１およびＡ２と同様の形態であり、採取部収容室１０が下本体となり、試料採取用具１５を備える収容室２１が上本体となる形態である。図３（Ａ）において、収容室２１は、例えば、前記実施形態Ａ１およびＡ２におけるいずれの上本体の構成であってもよい。つまり、収容室２１は、例えば、前記実施形態Ａ１の試薬収容室１１でもよいし、前記実施形態Ａ２における図２（Ａ）の上本体（第１試薬収容室１３および第２試薬収容室１２）、図２（Ｂ）の上本体（試薬収容室１１および殺菌剤収容室１４）、図２（Ｃ）の上本体（第１試薬収容室１３、第２試薬収容室１２および殺菌剤収容室１４）でもよい。図３（Ａ）の菌検出用具は、前記実施例Ａ１およびＡ２と同様にして使用することができる。
　図３（Ｂ）は、採取部収容室１０が上本体となり、試薬等の収容室が下本体となる形態である。図３（Ｂ）の菌検出用具は、試料採取用具１５、試料採取用具１５を固定化した把持部２２、採取部収容室１０および収容室２１を備え、試料採取用具１５が上本体、収容室２１が下本体である。試料採取用具１５が固定化された把持部２２は、試料採取用具１５の採取部が、採取部収容室１０（上本体）の内部に収容した状態で、採取部収容室１０（上本体）に装着できる。本実施形態において、収容室２１は、その配置が、採取部収容室１０の下方向である以外は、前記実施形態１Ａおよび２Ａと同様である。
　図３（Ｂ）の菌検出用具は、まず、前記菌検出用具の採取部収容室１０（上本体）から、試料採取用具１５を備えた把持部２２を取り外し、試料を採取した後、再度、試料採取用具１５の採取部が採取部収容室１０（上本体）の内部に収容されるように、把持部２２を前記上本体に装着する。そして、装着後の前記菌検出用具を、収容室２１が上方向となるように、上下を逆にする。その後は、前記実施形態１Ａおよび２Ａと同様にして、収容室２１の内部の試薬または殺菌剤を、採取部収容室１０に導入すればよい。
　図３（Ｃ）は、２つ以上の収容室が、採取部収容室１０の上下方向に配置されている形態である。図３（Ｃ）の菌検出用具は、試料採取用具１５、採取部収容室１０、上方向の収容室２３ａおよび下方向の収容室２３ｂを備え、上方向の収容室２３ａが上本体であり、採取部収容室１０が中本体であり、下方向の収容室２３ｂが下本体となる。本実施形態において、収容室２３ａ（上本体）および収容室２３ｂ（下本体）との組合せは、特に制限されず、前記混合試薬用の試薬収容室、前記第１試薬収容室、前記第２試薬収容室、前記殺菌剤収容室を、適宜組合せることができる。具体例として、前記上本体が前記第１試薬収容室であり、前記下本体が前記第２試薬収容室である組合せ；前記上本体が前記混合試薬用の試薬収容室であり、前記下本体が前記殺菌剤収容室である組合せがあげられる。図３（Ｃ）の菌検出用具は、試料を採取して、試料採取用具１５を備える上本体２３ａを、下本体２３ｂと連結した採取部収容室１０（中本体）に装着し、適宜、上下方向を逆にする以外は、前記実施形態１Ａおよび２Ａと同様にして、使用できる。
　図３（Ｄ）は、３つ以上の収容室が、採取部収容室１０の上下方向に配置されている形態である。図３（Ｄ）の菌検出用具は、試料採取用具１５、採取部収容室１０、上方向の収容室２４ａおよび２４ｂ、ならびに下方向の収容室２４ｃを備え、上方向の収容室２４ａおよび２４ｂが上本体であり、採取部収容室１０が中本体であり、下方向の収容室２４ｃが下本体となる。本実施形態において、収容室２４ａおよび２４ｂ（上本体）ならびに収容室２４ｃ（下本体）との組合せは、特に制限されず、前記混合試薬用の試薬収容室、前記第１試薬収容室、前記第２試薬収容室、および前記殺菌剤収容室を、適宜組合せることができる。具体例として、前記上本体が前記第１試薬収容室２４ｂおよび前記第２試薬収容室２４ａであり、前記下本体が前記殺菌剤収容室２４ｃである組合せがあげられる。図３（Ｄ）の菌検出用具は、試料を採取して、試料採取用具１５を備える上本体（２４ａおよび２４ｂ）を、下本体２４ｃと連結した採取部収容室１０（中本体）に装着し、適宜、上下方向を逆にする以外は、前記実施形態１Ａおよび２Ａと同様にして、使用できる。
　図３（Ｅ）は、３つ以上の収容室が、採取部収容室１０の上下方向に配置されている形態である。図３（Ｅ）の菌検出用具は、試料採取用具１５、採取部収容室１０、上方向の収容室２５ａ、ならびに下方向の収容室２５ｂおよび２５ｃを備え、上方向の収容室２５ａが上本体であり、採取部収容室１０が中本体であり、下方向の収容室２５ｂおよび２５ｃが下本体となる。本実施形態において、収容室２５ａ（上本体）ならびに収容室２５ｂおよび２５ｃ（下本体）との組合せは、特に制限されず、前記混合試薬用の試薬収容室、前記第１試薬収容室、前記第２試薬収容室、および前記殺菌剤収容室を、適宜組合せることができる。具体例として、前記上本体が前記第１試薬収容室２５ａであり、前記下本体が前記第２試薬収容室２５ｂおよび前記殺菌剤収容室２５ｃである組合せがあげられる。図３（Ｅ）の菌検出用具は、試料を採取して、試料採取用具１５を備える上本体（２５ａ）を、下本体（２４ｂおよび２４ｃ）と連結した採取部収容室１０（中本体）に装着し、適宜、上下方向を逆にする以外は、前記実施形態１Ａおよび２Ａと同様にして、使用できる。
（実施形態Ｂ１）
　本実施形態は、前記採取部収容室が、前記インキュベート工程および前記反応工程の反応室であり、前記採取部収容室が前記検出領域を有している菌検出用具を使用し、収容室間の連通を、貫通孔形成手段を使用する前記形態Ｂにより行う形態である。
　図４に、菌検出用具の概略図を示す。図４は、菌検出用具の概略を示す断面図である。図４の菌検出用具は、採取部収容室１０と、前記混合試薬を収容する試薬収容室１１と、試料採取用具１５と、貫通孔形成手段としてカッター４２が固定化された穿孔室４１とを備える。本実施形態において、試薬収容室１１が上本体であり、採取部収容室１０が下本体である。試薬収容室１１（上本体）は、穿孔室４１の上方に配置されており、穿孔室４１の方向に移動させて、穿孔室４１のカッター４２に接触させることで、その底部に貫通孔を設けることができる。穿孔室４１は、採取部収容室１０（下本体）と連通する貫通孔を有しており、その底部の外面において、前記貫通孔とは重複しない位置に、試料採取用具１５が固定化されている。試薬収容室１１と試料採取用具１５とが連結された穿孔室４１は、採取部収容室１０に対して、着脱可能であり、穿孔室４１は、試料採取用具１５の採取部を採取部収容室１０の内部に収容した状態で、採取部収容室１０に装着できる。採取部収容室１０は、前記インキュベート工程および前記反応工程の反応室であり、例えば、その底部領域が、前記検出領域となる。
　試薬収容室１１の底部は、カッター４２により貫通孔を設けることから、例えば、破断可能な部材であることが好ましい。前記部材としては、例えば、アルミシート等のシートがあげられる。
　図４の菌検出用具は、例えば、以下のように使用できる。まず、前記菌検出用具の採取部収容室１０（下本体）から、試薬収容室１１（上本体）と試料採取用具１５とを備えた穿孔室４１を取り外し、試料を採取した後、再度、試料採取用具１５の採取部が採取部収容室（下本体）の内部に収容されるように、穿孔室４１を前記下本体に装着する。つぎに、試料収容室１１を穿孔室４１の内部に押し込み、穿孔室４１のカッター４２で、試料収容室１１の底部に貫通孔を形成する。前記貫通孔の形成により、試料収容室１１中の前記混合試薬が穿孔室４１に導入され、穿孔室４１の貫通孔を通じて、前記混合試薬が採取部収容室（反応室）１０に導入される。これによって、採取部収容室１０に導入された前記混合試薬と、試料採取用具１５の採取部の試料とが接触する。そして、前記混合試薬と前記試料との混合物について、前記インキュベート工程および前記反応工程を行った後、採取部収容室１０の検出領域において、蛍光偏光度の検出を行う。
（実施形態Ｂ２）
　本実施形態は、試薬収容室の個数または殺菌剤収容室をさらに含む以外は、前記実施形態Ｂ１と同様の形態である。本実施形態は、特に示さない限り、前記実施形態Ｂ１を援用できる。
　図５に、菌検出用具のその他の概略図を示す。図５（Ａ）は、採取部収容室１０（下本体）の上方向に、前記菌濃縮用試薬を収容する第１試薬収容室１３と、前記蛍光標識化結合分子を収容する第２試薬収容室１２とを、上本体として有し、さらに、各収容室に対応する穿孔室４１を有する形態であり、図５（Ｂ）は、採取部収容室１０（下本体）の上方向に、前記混合試薬を収容する試薬収容室１１と、前記殺菌剤を収容する殺菌剤収容室１４とを、上本体として有し、さらに、各収容室に対応する穿孔室４１を有する形態であり、図５（Ｃ）は、採取部収容室１０（下本体）の上方向に、前記菌濃縮用試薬を収容する第１試薬収容室１３と、前記蛍光標識化結合分子を収容する第２試薬収容室１２と、前記殺菌剤を収容する殺菌剤収容室１４とを、上本体として有し、さらに、各収容室に対応する穿孔室４１を有する形態である。各穿孔室４１は、それぞれ、前記実施形態Ｂ１と同様であり、貫通孔形成手段として、カッター４２が固定化されており、また、採取部収容室１０に対する貫通孔を有している。
　図５の（Ａ）、（Ｂ）および（Ｃ）の菌検出用具において、前記上本体の各収容室は、前記実施形態Ａ２における図２の（Ａ）、（Ｂ）および（Ｃ）の組合せを援用できる。
　図５（Ａ）の菌検出用具は、例えば、以下のように使用できる。まず、前記菌検出用具の採取部収容室１０（下本体）から、試料採取用具１５と収容室１２および１３とを備えた穿孔室４１を取り外し、試料を採取した後、再度、試料採取用具１５の採取部が採取部収容室１０（下本体）の内部に収容されるように、穿孔室４１を前記下本体に装着する。つぎに、第１試薬収容室１３を穿孔室４１の内部に押し込み、穿孔室４１のカッター４２で、第１試薬収容室１３の底部に貫通孔を形成し、第１試薬収容室１３から穿孔室４１に導入された前記菌濃縮用試薬を、穿孔室４１の貫通孔を通じて、採取部収容室（反応室）１０に導入する。これによって、採取部収容室１０に導入された前記菌濃縮用試薬と、試料採取用具１５の採取部の試料とが接触する。そして、前記菌濃縮用試薬と前記試料との混合物について、前記インキュベート工程を行った後、同様にして、第２試薬収容室１２から採取部収容室１０に、前記蛍光標識化結合分子を導入し、前記反応工程を行う。そして、採取部収容室１０の検出領域において、蛍光偏光度の検出を行う。
　図５（Ｂ）の菌検出用具は、例えば、以下のように使用できる。まず、前記菌検出用具の採取部収容室１０（下本体）から、試料採取用具１５と収容室１１および１４とを備えた穿孔室４１を取り外し、試料を採取した後、再度、試料採取用具１５の採取部が採取部収容室１０（下本体）の内部に収容されるように、穿孔室４１を前記下本体に装着する。つぎに、前述と同様にして、試薬収容室１１から採取部収容室１０に、前記混合試薬を導入し、前記インキュベート工程および前記反応工程を行い、採取部収容室１０の検出領域において、蛍光偏光度の検出を行う。そして、同様にして、殺菌剤収容室１４から採取部収容室１０に、前記殺菌剤を導入し、殺菌工程を行う。
　図５（Ｃ）の菌検出用具は、例えば、以下のように使用できる。まず、前記菌検出用具の採取部収容室１０（下本体）から、試料採取用具１５と収容室１２、１３、１４とを備えた穿孔室４１を取り外し、試料を採取した後、再度、試料採取用具１５の採取部が採取部収容室１０（下本体）の内部に収容されるように、穿孔室４１を前記下本体に装着する。つぎに、前述と同様にして、第１試薬収容室１３から採取部収容室１０に、前記菌濃縮用試薬を導入し、前記インキュベート工程を行い、続いて、第２試薬収容室１２から採取部収容室１０に、前記蛍光標識化結合分子を導入し、前記反応工程を行い、採取部収容室１０の検出領域において、蛍光偏光度の検出を行う。そして、同様にして、殺菌剤収容室１４から採取部収容室１０に、前記殺菌剤を導入し、殺菌工程を行う。
（実施形態Ｃ１）
　本実施形態は、前記採取部収容室が、前記インキュベート工程および前記反応工程の反応室であり、前記採取部収容室が前記検出領域を有している菌検出用具を使用し、収容室間の連通を、カプセルを使用する前記形態Ｃにより行う形態である。
　図６に、菌検出用具の概略図を示す。図６は、菌検出用具の概略を示す断面図である。図６の菌検出用具は、試料採取用具１５と、採取部収容室１０と、前記混合試薬を収容するカプセル状の試薬収容室１１と、前記試薬収容室１１を保持する保持室６１とを備える。本実施形態において、試薬収容室１１と、これを保持する保持室６１とが上本体であり、採取部収容室１０が下本体である。保持室６１は、採取部収容室１０（下本体）と連通する貫通孔を有しており、その底部の外面において、前記貫通孔とは重複しない位置に、試料採取用具１５が固定化されている。試料採取用具１５が連結された保持室６１は、採取部収容室１０に対して、着脱可能であり、保持室６１は、試料採取用具１５の採取部を採取部収容室１０の内部に収容した状態で、採取部収容室１０に装着できる。採取部収容室１０は、前記インキュベート工程および前記反応工程の反応室であり、例えば、その底部領域が、前記検出領域となる。
　図６の菌検出用具は、例えば、以下のように使用できる。まず、前記菌検出用具の採取部収容室１０（下本体）から、カプセル状の試薬収容室１１と試料採取用具１５とを備えた保持室６１（上本体）を取り外し、試料を採取した後、再度、試料採取用具１５の採取部が採取部収容室（下本体）の内部に収容されるように、保持室６１を前記下本体に装着する。つぎに、保持室６１の内部に保持されたカプセル状の試薬収容室１１を破壊する。前記破壊により、試料収容室１１中の前記混合試薬が保持室６１に導入され、保持室６１の貫通孔を通じて、前記混合試薬が採取部収容室（反応室）１０に導入される。これによって、採取部収容室１０に導入された前記混合試薬と、試料採取用具１５の採取部の試料とが接触する。そして、前記混合試薬と前記試料との混合物について、前記インキュベート工程および前記反応工程を行った後、採取部収容室１０の検出領域において、蛍光偏光度の検出を行う。
（実施形態Ｃ２）
　本実施形態は、試薬収容室の個数または殺菌剤収容室をさらに含む以外は、前記実施形態Ｃ１と同様の形態である。本実施形態は、特に示さない限り、前記実施形態Ｃ１を援用できる。
　図７に、菌検出用具のその他の概略図を示す。図７（Ａ）は、採取部収容室１０（下本体）の上方向に、前記菌濃縮用試薬を収容するカプセル状の第１試薬収容室１３とその保持室６１、前記蛍光標識化結合分子を収容するカプセル状の第２試薬収容室１２とその保持室６１を、上本体として有する形態であり、図６（Ｂ）は、採取部収容室１０（下本体）の上方向に、前記混合試薬を収容するカプセル状の試薬収容室１１とその保持室６１、前記殺菌剤を収容するカプセル状の殺菌剤収容室１４とその保持室６１を、上本体として有する形態であり、図６（Ｃ）は、採取部収容室１０（下本体）の上方向に、前記菌濃縮用試薬を収容するカプセル状の第１試薬収容室１３とその保持室、前記蛍光標識化結合分子を収容するカプセル状の第２試薬収容室１２とその保持室、および前記殺菌剤を収容するカプセル状の殺菌剤収容室１４とその保持室を、上本体として有する形態である。各保持室６１は、それぞれ、前記実施形態Ｃ１と同様であり、採取部収容室１０に対する貫通孔を有している。
　図７の（Ａ）、（Ｂ）および（Ｃ）の菌検出用具において、前記上本体の各収容室は、前記実施形態Ａ２における図２の（Ａ）、（Ｂ）および（Ｃ）の組合せを援用できる。
　図７（Ａ）の菌検出用具は、例えば、以下のように使用できる。まず、前記菌検出用具の採取部収容室１０（下本体）から、試料採取用具１５とカプセル状の収容室１２、１３とを備えた保持室６１を取り外し、試料を採取した後、再度、試料採取用具１５の採取部が採取部収容室１０（下本体）の内部に収容されるように、保持室６１を前記下本体に装着する。つぎに、保持室６１内のカプセル状の第１試薬収容室１３を破壊し、第１試薬収容室１３から保持室６１に導入された前記菌濃縮用試薬を、保持室６１の貫通孔を通じて、採取部収容室（反応室）１０に導入する。これによって、採取部収容室１０に導入された前記菌濃縮用試薬と、試料採取用具１５の採取部の試料とが接触する。そして、前記菌濃縮用試薬と前記試料との混合物について、前記インキュベート工程を行った後、同様にして、カプセル状の第２試薬収容室１２から採取部収容室１０に、前記蛍光標識化結合分子を導入し、前記反応工程を行う。そして、採取部収容室１０の検出領域において、蛍光偏光度の検出を行う。
　図７（Ｂ）の菌検出用具は、例えば、以下のように使用できる。まず、前記菌検出用具の採取部収容室１０（下本体）から、試料採取用具１５とカプセル状の収容室１１、１４とを備えた保持室６１を取り外し、試料を採取した後、再度、試料採取用具１５の採取部が採取部収容室１０（下本体）の内部に収容されるように、保持室６１を前記下本体に装着する。つぎに、前述と同様にして、試薬収容室１１から採取部収容室１０に、前記混合試薬を導入し、前記インキュベート工程および前記反応工程を行い、採取部収容室１０の検出領域において、蛍光偏光度の検出を行う。そして、同様にして、カプセル状の殺菌剤収容室１４から採取部収容室１０に、前記殺菌剤を導入し、殺菌工程を行う。
　図７（Ｃ）の菌検出用具は、例えば、以下のように使用できる。まず、前記菌検出用具の採取部収容室１０（下本体）から、試料採取用具１５とカプセル状の収容室１２、１３、１４とを備えた保持室６１を取り外し、試料を採取した後、再度、試料採取用具１５の採取部が採取部収容室１０（下本体）の内部に収容されるように、保持室６１を前記下本体に装着する。つぎに、前述と同様にして、カプセル状の第１試薬収容室１３から採取部収容室１０に、前記菌濃縮用試薬を導入し、前記インキュベート工程を行い、続いて、カプセル状の第２試薬収容室１２から採取部収容室１０に、前記蛍光標識化結合分子を導入し、前記反応工程を行い、採取部収容室１０の検出領域において、蛍光偏光度の検出を行う。そして、同様にして、カプセル状の殺菌剤収容室１４から採取部収容室１０に、前記殺菌剤を導入し、殺菌工程を行う。
（実施形態Ｄ１）
　本実施形態は、各収容室が、前記インキュベート工程および前記反応工程の反応室であり、収容室間の連通を、前記形態Ｄ、すなわち、前記試料採取用具の採取部の移動によって行う形態である。
　図８に、菌検出用具の概略図を示す。図８は、菌検出用具の概略を示す断面図である。図８の菌検出用具は、試料採取用具１５と、試料採取用具１５が固定化された把持部２１と、採取部収容室１０と、前記混合試薬を収容する試薬収容室１１とを備える。本実施形態において、試薬収容室１１は、採取部収容室１０の下方向に連結されており、その上面は、試料採取用具１５の採取部を接触させることによって、貫通孔を形成可能である。試料採取用具１５が固定化された把持部２１は、採取部収容室１０に対して、着脱可能である。本実施形態において、試薬収容室１１は、前記インキュベート工程および前記反応工程の反応室であり、例えば、その底部領域が、前記検出領域となる。
　図８の菌検出用具は、例えば、以下のように使用できる。まず、前記菌検出用具の採取部収容室１０（上本体）から、試料採取用具１５を固定化した把持部２１を取り外し、試料を採取した後、再度、試料採取用具１５の採取部が採取部収容室（上本体）の内部に収容されるように、把持部２１を前記下本体に装着する。つぎに、試料収容室１１内の試料採取用具１５の先端部を、下方向に押し込み、前記先端部で、試料収容室１１の上面を突き破り、試料収容室１１中の前記混合試薬に、試料採取用具１５の採取部を接触させる。これによって、前記混合試薬と前記試料とが混合し、前記インキュベート工程および前記反応工程を行った後、試料収容室１１の検出領域において、蛍光偏光度の検出を行う。
（実施形態Ｄ２）
　本実施形態は、試薬収容室の個数または殺菌剤収容室をさらに含む以外は、前記実施形態Ｄ１と同様の形態である。本実施形態は、特に示さない限り、前記実施形態Ｄ１を援用できる。
　図９に、菌検出用具のその他の概略図を示す。図９（Ａ）は、採取部収容室１０の下方向に、前記菌濃縮用試薬を収容する第１試薬収容室１３と、前記蛍光標識化結合分子を収容する第２試薬収容室１２とを、この順序で有する形態であり、図９（Ｂ）は、採取部収容室１０の下方向に、前記混合試薬を収容する試薬収容室１１と、前記殺菌剤を収容する殺菌剤収容室１４とを、この順序で有する形態であり、図９（Ｃ）は、採取部収容室１０の下方向に、前記菌濃縮用試薬を収容する第１試薬収容室１３と、前記蛍光標識化結合分子を収容する第２試薬収容室１２と、前記殺菌剤を収容する殺菌剤収容室１４とを、この順序で有する形態である。試料採取用具１５は、それぞれ、前記実施形態Ｄ１と同様であり、把持部２１に固定化されており、把持部２１は、採取部収容室１０に着脱可能である。
　図９（Ａ）の菌検出用具は、例えば、以下のように使用できる。まず、前記菌検出用具の採取部収容室１０（上本体）から、試料採取用具１５を備えた把持部２１を取り外し、試料を採取した後、再度、試料採取用具１５の採取部が採取部収容室１０（上本体）の内部に収容されるように、把持部２１を前記上本体に装着する。つぎに、採取部収容室１０内の試料採取用具１５の先端部を、下方向に押し込み、前記先端部で、第１試薬収容室１３の上面を突き破り、第１試薬収容室１３中の前記菌濃縮用試薬に、試料採取用具１５の採取部を接触させる。これによって、前記菌濃縮用試薬と前記試料とを混合し、前記混合液に対して前記インキュベート工程を行う。つぎに、第１試薬収容室１３中の試料採取用具１５の先端部を、さらに下方向に押し込み、前記先端部で、第２試薬収容室１２の上面を突き破り、前記上面に貫通孔を形成し、第１試薬収容室１３中の前記混合液を、第２試薬収容室１２に導入する。これによって、前記インキュベート工程後の前記混合液と前記蛍光標識化結合分子とを混合し、この混合液に対して前記反応工程を行う。そして、第２試薬収容室１２の検出領域において、蛍光偏光度の検出を行う。
　図９（Ｂ）の菌検出用具は、例えば、以下のように使用できる。まず、前記菌検出用具の採取部収容室１０（上本体）から、試料採取用具１５を備えた把持部２１を取り外し、試料を採取した後、再度、試料採取用具１５の採取部が採取部収容室１０（上本体）の内部に収容されるように、把持部２１を前記上本体に装着する。つぎに、採取部収容室１０内の試料採取用具１５の先端部を、下方向に押し込み、前記先端部で、試薬収容室１１の上面を突き破り、試薬収容室１１中の前記混合試薬に、試料採取用具１５の採取部を接触させる。これによって、前記混合試薬と前記試料とを混合し、前記混合液に対して前記インキュベート工程および前記反応工程を行い、試薬収容室１１の検出領域において、蛍光偏光度の検出を行う。つぎに、試薬収容室１１中の試料採取用具１５の先端部を、さらに下方向に押し込み、前記先端部で、殺菌剤収容室１４の上面を突き破り、前記上面に貫通孔を形成し、試薬収容室１１中の前記混合液を、殺菌剤収容室１４に導入する。これによって、検出後の前記混合液と前記殺菌剤とを混合し、前記殺菌工程を行う。
　図９（Ｃ）の菌検出用具は、例えば、以下のように使用できる。まず、前記菌検出用具の採取部収容室１０（上本体）から、試料採取用具１５を備えた把持部２１を取り外し、試料を採取した後、再度、試料採取用具１５の採取部が採取部収容室１０（上本体）の内部に収容されるように、把持部２１を前記上本体に装着する。つぎに、採取部収容室１０内の試料採取用具１５の先端部を、下方向に押し込み、前記先端部で、第１試薬収容室１３の上面を突き破り、第１試薬収容室１３中の前記菌濃縮用試薬に、試料採取用具１５の採取部を接触させる。これによって、前記菌濃縮用試薬と前記試料とを混合し、前記混合液に対して前記インキュベート工程を行う。つぎに、第１試薬収容室１３中の試料採取用具１５の先端部を、さらに下方向に押し込み、前記先端部で、第２試薬収容室１２の上面を突き破り、前記上面に貫通孔を形成し、第１試薬収容室１３中の前記混合液を、第２試薬収容室１２に導入する。これによって、前記インキュベート工程後の前記混合液と前記蛍光標識化結合分子とを混合し、この混合液に対して前記反応工程を行う。そして、第２試薬収容室１２の検出領域において、蛍光偏光度の検出を行う。さらに、第２試薬収容室１２中の試料採取用具１５の先端部を、下方向に押し込み、前記先端部で、殺菌剤収容室１４の上面を突き破り、前記上面に貫通孔を形成し、第２試薬収容室１１中の前記混合液を、殺菌剤収容室１４に導入する。これによって、検出後の前記混合液と前記殺菌剤とを混合し、前記殺菌工程を行う。
　本発明の菌検出方法において使用する菌検出用具は、例えば、大きさおよび形状は、特に制限されない。前記菌検出用具において、例えば、前記各収容室等の形状は、例えば、筒状であり、具体例として、例えば、円筒、角筒等があげられる。前記円筒は、例えば、真円、楕円等があげられ、前記角筒は、例えば、正方形、長方形等の４角、その他の多角等があげられる。
　前記菌検出用具において、各部位の連結および装着は、特に制限されず、例えば、螺合、嵌合、挿嵌等があげられる。前記挿嵌は、例えば、圧入が好ましい。各部位の連結等は、例えば、雄型と雌型の組合せを利用することでき、例えば、対応する凹部と凸部との組合せ、雄ネジと雌ネジとの組合せ等が例示できる。
［２．菌検出用具］
　本発明の菌検出用具は、前述のように、
試料採取用具と本体とを有し；
前記試料採取用具は、試料を採取する採取部と、前記本体との連結部とを含み；
前記本体は、
　前記菌濃縮用試薬および前記蛍光標識化結合分子を収容する試薬収容室と、
　前記試料採取用具の前記採取部を収容する採取部収容室と、
　前記試料採取用具との連結部とを含み、
　前記試薬収容室と前記採取部収容室とは、独立しており；
前記試料採取用具と前記本体とは、前記試料採取用具の採取部が前記本体の採取部収容室に収容された状態で、前記試料採取用具の連結部と前記本体の連結部とにおいて連結され；
前記本発明の検出方法に使用されることを特徴とする。
　本発明の菌検出用具は、前記本発明の菌検出方法に使用することが特徴であり、前記本発明の菌検出方法における菌検出用具の記載を全て援用できる。
　以上、実施形態および実施例を参照して本願発明を説明したが、本願発明は、上記実施形態および実施例に限定されるものではない。本願発明の構成や詳細には、本願発明のスコープ内で当業者が理解しうる様々な変更をできる。
　この出願は、２０１４年１１月６日に出願された日本出願特願２０１４－２２５６８２を基礎とする優先権を主張し、その開示の全てをここに取り込む。
　本発明によれば、簡便且つ容易に、試料中の菌の培養および目的の菌の検出を行うことができる。特に、本発明は、試薬として前記蛍光標識アプタマーを使用して、蛍光偏光度の変化により、目的の菌を検出できることから、容易な検出が可能となる。したがって、本発明は、例えば、食品製造、食品管理、食品の流通等の分野において、極めて有用である。
１０　採取部収容室
１１　試薬収容室
１２　第２試薬収容室
１３　第１試薬収容室
１４　殺菌剤収容室
１５　試料採取用具
１６　中空管
２１　把持部
４１　穿孔室
４２　カッター
６１　保持室

Claims (21)

  1. 試料を準備する準備工程、
    前記試料を、菌濃縮用試薬中でインキュベートするインキュベート工程、
    前記菌濃縮用試薬中の前記試料を、ターゲットの菌に結合する蛍光標識化結合分子と反応させる反応工程、および、
    前記蛍光標識化結合分子の蛍光偏光度を検出することで、前記ターゲットを検出する検出工程を含み；
    前記試料の準備工程は、試料採取用具を用いて行われ、
    前記インキュベート工程、前記反応工程および前記検出工程は、前記試料採取用具を本体に装着した菌検出用具を用いて行われ；
    前記試料採取用具は、試料を採取する採取部と、前記本体との連結部とを含み；
    前記本体は、
    　前記菌濃縮用試薬および前記蛍光標識化結合分子を収容する試薬収容室と、
    　前記試料採取用具の前記採取部を収容する採取部収容室と、
    　前記試料採取用具との連結部とを含み、
    　前記試薬収容室と前記採取部収容室とは、独立しており；
    前記試料採取用具と前記本体とは、前記準備工程後であり且つ前記インキュベート工程前に、前記試料採取用具の採取部が前記本体の採取部収容室に収容された状態で、前記試料採取用具の連結部と前記本体の連結部とにおいて連結され；
    前記準備工程後、前記試薬収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることによって、前記インキュベート工程および前記反応工程を行うことを特徴とする菌体の検出方法。
  2. 前記試薬収容室は、前記菌濃縮用試薬と前記蛍光標識化結合分子との混合試薬が収容された収容室であり；
    前記準備工程後、前記試薬収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることによって、前記試薬採取用具の採取部が有する前記試料と前記混合試薬とを接触させ、前記インキュベート工程と前記反応工程とを同時に行う、請求項１記載の検出方法。
  3. 使用時において、
    前記本体は、前記試薬収容室が、前記採取部収容室の上方向または下方向に配置されている、請求項１または２記載の検出方法。
  4. 前記試薬収容室は、独立して、第１試薬収容室と第２試薬収容室とを含み、
    前記第１試薬収容室は、前記菌濃縮用試薬が収容された収容室であり、
    前記第２試薬収容室は、前記蛍光標識化結合分子が収容された収容室であり、
    前記第１試薬収容室および前記第２試薬収容室は、それぞれ、前記採取部収容室と独立しており；
    前記準備工程後、前記第１試薬収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることによって、前記試薬採取用具の採取部が有する前記試料と前記菌濃縮用試薬とを接触させ、前記インキュベート工程を行い；
    前記インキュベート工程後、前記第２試薬収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることによって、前記インキュベートした試料と前記蛍光標識化結合分子とを接触させ、前記反応工程を行う、請求項１記載の検出方法。
  5. 使用時において、
    前記本体は、前記第１試薬収容室および前記第２試薬収容室の双方が、前記採取部収容室の上方向または下方向に配置されている、請求項４記載の検出方法。
  6. 使用時において、
    前記本体は、前記第１試薬収容室および前記第２試薬収容室のうち、一方が、前記採取部収容室の上方向に配置され、他方が、前記採取部収容室の下方向に配置されている、請求項４記載の検出方法。
  7. さらに、前記検出工程の後、前記インキュベートした試料を、殺菌剤で処理する殺菌工程を含み；
    前記本体は、さらに、前記殺菌剤を収容する殺菌剤収容室を含み、
    前記試薬収容室および前記採取部収容室は、それぞれ、前記殺菌剤収容室と独立しており；
    前記検出工程後、前記殺菌剤収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることによって、前記殺菌工程を行う、請求項１から６のいずれか一項に記載の検出方法。
  8. 使用時において、
    前記本体は、前記殺菌剤収容室が、前記採取部収容室の上方向または下方向に配置されている、請求項７記載の検出方法。
  9. 前記採取部収容室は、
    　前記インキュベート工程および前記反応工程を行う反応室であり、
    　さらに、検出領域を含み、
    前記検出領域は、前記採取部収容室の内部における蛍光偏光度を、外部から検出可能な部材で形成され；
    前記試薬収容室は、前記菌濃縮用試薬と前記蛍光標識化結合分子との混合試薬が収容された収容室であり；
    前記準備工程後、前記試薬収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることによって、前記試薬収容室から前記採取部収容室に前記混合試薬を導入し、前記インキュベート工程と前記反応工程とを同時に行う、請求項１から３のいずれか一項に記載の検出方法。
  10. 前記採取部収容室は、
    　前記インキュベート工程および前記反応工程を行う反応室であり、
    　さらに、検出領域を含み、
    前記検出領域は、前記採取部収容室の内部における蛍光偏光度を、外部から検出可能な部材で形成され；
    前記試薬収容室は、独立して、第１試薬収容室と第２試薬収容室とを含み、
    前記第１試薬収容室は、前記菌濃縮用試薬が収容された収容室であり、
    前記第２試薬収容室は、前記蛍光標識化結合分子が収容された収容室であり、
    前記第１試薬収容室および前記第２試薬収容室は、それぞれ、前記採取部収容室と独立しており；
    前記準備工程後、前記第１試薬収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることによって、前記第１試薬収容室から前記採取部収容室に前記菌濃縮用試薬を導入し、前記インキュベート工程を行い；
    前記インキュベート工程後、前記第２試薬収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることによって、前記第２試薬収容室から前記採取部収容室に、前記蛍光標識化結合分子を導入し、前記反応工程を行う、請求項１および４から６のいずれか一項に記載の検出方法。
  11. さらに、前記検出工程の後、前記インキュベートした試料を、殺菌剤で処理する殺菌工程を含み；
    前記本体は、さらに、前記殺菌剤を収容する殺菌剤収容室を含み、
    前記試薬収容室および前記採取部収容室は、それぞれ、前記殺菌剤収容室と独立しており；
    前記検出工程後、前記殺菌剤収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることによって、前記殺菌剤収容室から前記採取部収容室に、前記殺菌剤を導入し、前記殺菌工程を行う、請求項１から１０のいずれか一項に記載の検出方法。
  12. 前記本体において、
    連通させる一対の収容室は、連通用の中空管の挿入により連結され、
    前記中空管は、一端に閉口部を有し；
    前記中空管の閉口部により、一方の収容室の内部と他方の収容室の内部とが非連通となり、
    前記中空管を軸方向の途中で切断して、前記閉口部を前記中空管から切り離すことによって、前記中空管の両端を開口させ、前記一方の収容室の内部と前記他方の収容室の内部とを連通させる、請求項９から１１のいずれか一項に記載の検出方法。
  13. 前記本体は、さらに、貫通孔形成手段を有し；
    前記本体において、
    連通させる一対の収容室は、
    　一方の収容室が、他方の収容室と連通可能な開口部を有し、
    　他方の収容室が、前記貫通孔形成手段により、開口部を形成可能であり；
    前記貫通孔形成手段で、前記他方の収容室に貫通孔を形成することによって、前記一方の収容室の開口部と前記他方の収容室に形成した貫通孔とにより、前記一方の収容室の内部と前記他方の収容室の内部とを連通させる、請求項９から１１のいずれか一項に記載の検出方法。
  14. 前記本体において、
    前記試薬収容部は、破壊可能なカプセルであり；
    前記カプセルの破壊によって、前記試薬収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させる、請求項９から１１のいずれか一項に記載の検出方法。
  15. 前記試薬収容室は、
    　前記インキュベート工程および前記反応工程を行う反応室であり、
    　前記菌濃縮用試薬と前記蛍光標識化結合分子との混合試薬が収容され、
    　さらに、検出領域を含み、
    前記検出領域は、前記採取部収容室の内部における蛍光偏光度を、外部から検出可能な部材で形成され；
    前記準備工程後、前記採取部収容室に収容された前記採取部を前記試薬収容室に収容することによって、前記試薬収容室の混合試薬に前記採取部を接触させ、前記インキュベート工程と前記反応工程とを同時に行う、請求項１から３のいずれか一項に記載の検出方法。
  16. 前記試薬収容室は、独立した第１試薬収容室と第２試薬収容室とを含み、
    前記第１試薬収容室は、前記菌濃縮用試薬が収容された収容室であり、
    前記第２試薬収容室は、前記蛍光標識化結合分子が収容された収容室であり、
    前記第１試薬収容室および前記第２試薬収容室は、それぞれ、前記採取部収容室と独立しており；
    前記第１試薬収容室は、前記インキュベート工程を行う反応室であり；
    前記第２試薬収容室は、前記反応工程を行う反応室であり、
    　さらに、検出領域を含み、
    前記検出領域は、前記第２試薬収容室の内部における蛍光偏光度を、外部から検出可能な部材で形成され；
    前記準備工程後、前記採取部収容室に収容された前記採取部を前記第１試薬収容室に収容することによって、前記第１試薬収容室の前記菌濃縮用試薬に前記採取部を接触させ、前記インキュベート工程を行い；
    前記インキュベート工程後、前記第１試薬収容室に収容された前記採取部を前記第２試薬収容室に収容することによって、前記第１試薬収容室の前記インキュベート後の菌濃縮試薬を前記第２試薬収容室に導入し、前記反応工程を行う、請求項１および４から６のいずれか一項に記載の検出方法。
  17. さらに、前記検出工程の後、前記インキュベートした試料を、殺菌剤で処理する殺菌工程を含み；
    前記本体は、さらに、前記殺菌剤を収容する殺菌剤収容室を含み、
    前記試薬収容室および前記採取部収容室は、それぞれ、前記殺菌剤収容室と独立しており；
    前記検出工程後、前記殺菌剤収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることによって、前記殺菌剤収容室から前記採取部収容室に前記殺菌剤を導入し、前記殺菌工程を行う、請求項１５または１６記載の検出方法。
  18. 前記菌濃縮用試薬が、検出対象の菌体用の培地である、請求項１から１７のいずれか一項に記載の検出方法。
  19. 前記蛍光標識化結合分子において、ターゲットの菌に結合する結合分子が、アプタマー、低分子化合物、糖鎖、ペプチド、タンパク質、核酸、ウィルスおよびファージからなる群から選択された少なくとも一つである、請求項１から１８のいずれか一項に記載の検出方法。
  20. 前記タンパク質が、抗体である、請求項１９記載の検出方法。
  21. 試料採取用具と本体とを有し；
    前記試料採取用具は、試料を採取する採取部と、前記本体との連結部とを含み；
    前記本体は、
    　前記菌濃縮用試薬および前記蛍光標識化試薬を収容する試薬収容室と、
    　前記試料採取用具の前記採取部を収容する採取部収容室と、
    　前記試料採取用具との連結部とを含み、
    　前記試薬収容室と前記採取部収容室とは、独立しており；
    前記試料採取用具と前記本体とは、前記試料採取用具の採取部が前記本体の採取部収容室に収容された状態で、前記試料採取用具の連結部と前記本体の連結部とにおいて連結され；
    請求項１から２０のいずれか一項に記載の菌体の検出方法に使用されることを特徴とする菌検出用具。
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