WO2015141775A1 - クマリン誘導体を有効成分として含有する治療・予防剤 - Google Patents

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therapeutic agent
preventive
trifluoromethyl
phenyl
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内木　充
沼澤　拓身
裕樹 藤澤
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日本臓器製薬株式会社
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    • C07D409/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D409/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links

Definitions

  • the present invention relates to a preventive or therapeutic agent for inflammatory diseases or disc degenerative diseases.
  • Inflammation is a defense mechanism in the body for efficient removal of pathogens and damaged tissues. Inflammation causes various transmitters to be released from the cells, accompanied by symptoms such as swelling, pain, and fever. While transient inflammation is necessary for biodefense, uncontrolled inflammation causes tissue damage and is the root cause of various diseases.
  • Inflammatory disease is a general term for diseases caused by transmitter substances due to inflammatory reaction, asthma, chronic obstructive pulmonary disease (COPD), pulmonary fibrosis, allergic disease, autoimmune disease, rhinitis, gastroenteritis, hepatitis, pancreatitis , Nephritis, cystitis, enteritis, inflammatory pain, arteriosclerosis, dermatitis, myositis, vasculitis, inflammatory eye disease, multiple sclerosis and the like.
  • COPD chronic obstructive pulmonary disease
  • pulmonary fibrosis allergic disease
  • autoimmune disease rhinitis
  • gastroenteritis hepatitis
  • pancreatitis pancreatitis
  • Nephritis cystitis
  • enteritis enteritis, inflammatory pain, arteriosclerosis, dermatitis, myositis, vasculitis, inflammatory eye disease, multiple sclerosis and the like.
  • Inflammation is induced by a complex interaction of lipid mediators such as prostaglandins and leukotrienes, inflammatory cytokines and chemokines released from inflammatory cells (mast cells, basophils, endothelial cells, macrophages, neutrophils, etc.). To be adjusted. In the early stages of inflammation, in response to local inflammatory signals, vascular permeability increases, endothelial cell activation, and inflammatory cell infiltration occurs, where inflammatory cytokines [interleukin (IL) -1 ⁇ IL-6, IL-8, interferon (IFN) - ⁇ , tumor necrosis factor (TNF) - ⁇ , etc.], chemokines, and lipid mediators have been found to play a central role.
  • IL interleukin
  • IFN interferon
  • TNF tumor necrosis factor
  • intervertebral disc degeneration is caused by various factors such as aging, mechanical stress, smoking, and genetic factors.
  • the intervertebral disc is composed of a gel-like nucleus pulposus rich in water and annulus fibrosus surrounding the periphery, but the age-related change of the intervertebral disc begins in the late teens, and the water content and proteoglycan content in the nucleus pulposus decrease.
  • the intervertebral disc undergoes degeneration such as a decrease in elasticity and a decrease in volume, but the denatured tissue has a poor natural repair ability, and there is no effective treatment at present.
  • Intervertebral disc degeneration can irritate nerves around the intervertebral disc, strain the ligaments, joints and muscles, and cause back pain.
  • Factors that inhibit the synthesis of proteoglycans in the nucleus pulposus that cause intervertebral disc degeneration include excessive mechanical stress and decreased oxygen supply to the disc due to smoking.
  • diseases caused by disc degeneration include lumbar disc disease and degenerative scoliosis. Symptoms of these diseases may include pain, numbness of the lower limbs, muscle weakness, and the like.
  • Non-steroidal anti-inflammatory drugs NSAID
  • COX cyclooxygenase
  • a certain coumarin derivative is useful as a preventive or therapeutic agent for inflammatory diseases and intervertebral disc degeneration because it has an anti-inflammatory effect and an inhibitory effect on disc degeneration.
  • coumarin derivatives compounds in which sulfonylamino is substituted at the 3-position of the coumarin skeleton are disclosed in Non-Patent Documents 1 and 2, but these documents only report that the compounds were synthesized. No mention is made that the compounds have a pharmacological action.
  • An object of the present invention is to provide a preventive or therapeutic agent for inflammatory diseases and disc degenerative diseases.
  • the present inventors have found that a coumarin derivative represented by the following general formula (I) or a pharmaceutically acceptable salt or hydrate thereof (hereinafter referred to as “present”).
  • the term “compound” may include a pharmaceutically acceptable salt or hydrate thereof), which is an excellent suppression of inflammatory cytokine expression and transcription factor. It has been found that it has a pharmacological action such as inhibiting the activation of inflammatory diseases and is useful as a preventive or therapeutic agent for inflammatory diseases or intervertebral disc degenerative diseases, and has completed the present invention.
  • the present inventors have found that the present compound is useful as a preventive or therapeutic agent for arthropathy (osteoarthritis and rheumatoid arthritis) (PCT / JP2013 / 075414). Therefore, hereinafter, “inflammatory disease” in the present application does not include “arthropathy”.
  • the coumarin derivative represented by the following general formula (I) or a pharmaceutically acceptable salt or hydrate thereof (present compound) showed an excellent inhibitory action in various pharmacological tests relating to inflammation and intervertebral disc degeneration. Therefore, this compound has high usefulness as a preventive or therapeutic agent for inflammatory diseases such as asthma and hepatitis and intervertebral disc degenerative diseases.
  • prevention and treatment in the present application include the meaning that the symptoms of the disease are reduced, alleviated or improved.
  • the present invention relates to the prevention of inflammatory diseases and intervertebral disc degeneration diseases comprising as an active ingredient at least one of the coumarin derivatives represented by the following general formula (I) and pharmaceutically acceptable salts and hydrates thereof (this compound). Or it relates to a therapeutic agent.
  • R 1 and R 2 are the same or different and are substituted with (a) alkoxy, alkyl, cyano, nitro, hydroxy, trifluoromethyl, amino, carboxy, alkoxycarbonyl, phenyl or 1 or 2 halogens. May represent phenyl, (b) pyridyl, (c) alkyl or (d) thienyl. ]
  • the alkyl is preferably linear or branched having 1 to 4 carbon atoms such as methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, sec-butyl, t-butyl and the like.
  • Alkoxy preferably represents a linear or branched alkoxy group having 1 to 4 carbon atoms such as methoxy, ethoxy, n-propoxy, isopropoxy, n-butoxy, isobutoxy, sec-butoxy, t-butoxy and the like.
  • Halogen represents fluorine, chlorine, bromine, iodine or the like.
  • the compound of general formula (I) can be obtained by sulfonylamidation reaction of the compound of general formula (II).
  • the sulfonylamidation reaction can be performed in a pyridine or basic solvent, preferably at a suitable temperature between room temperature and the boiling point of the solvent, with the compound of general formula (II) and the substituted benzenesulfonyl halide.
  • the compound of general formula (II) is obtained by an acid hydrolysis reaction of the compound of general formula (III).
  • the acid hydrolysis reaction can be performed in a mixed solvent of an organic acid such as acetic acid and sulfuric acid adjusted to an appropriate concentration, preferably at a suitable temperature from room temperature to the boiling point of the solvent.
  • the compound of general formula (III) is obtained by sulfonyl esterification reaction of compound (IV).
  • the sulfonyl esterification reaction can be performed by reacting the compound of the general formula (IV) and the substituted benzenesulfonyl halide in a basic solvent such as pyridine, preferably at a suitable temperature between room temperature and the boiling point of the solvent.
  • the compound represented by the general formula (I) includes various salts when pharmaceutically acceptable salts exist, such as hydrochloric acid, sulfuric acid, nitric acid, hydrobromic acid, phosphoric acid, Perchloric acid, thiocyanic acid, boric acid, formic acid, acetic acid, haloacetic acid, propionic acid, glycolic acid, citric acid, tartaric acid, succinic acid, gluconic acid, lactic acid, malonic acid, fumaric acid, anthranilic acid, benzoic acid, cinnamon Addition salts with acids, acids with p-toluenesulfonic acid, naphthalenesulfonic acid, sulfanilic acid, etc., or salts with alkali metals such as sodium and potassium, alkaline earth metals such as calcium and magnesium, or metals such as aluminum, Or the salt with bases, such as ammonia and organic amine, can be mentioned.
  • salts such as hydrochloric acid, sulfuric acid,
  • salts can be produced from each free compound by known methods, or can be converted into each other.
  • the present compound exists in the form of a isomer such as a cis-trans isomer, an optical isomer, a conformer, a solvate such as a hydrate, or a metal complex, Any stereoisomers, solvates and complex compounds thereof are included.
  • Tables 1 and 2 show substituents corresponding to R 1 and R 2 of the general formula (I) in each compound.
  • substituents of R 1 and R 2 in the table methyl may be represented by "Me”, ethyl “Et”, phenyl “Ph”, pyridyl “Py”, thienyl “thienyl”, others for Displayed using element symbols.
  • the following compound numbers are used.
  • a prophylactic or therapeutic agent for an inflammatory disease or an intervertebral disc degeneration disease comprising at least one of the coumarin derivatives represented by the general formula (I) and pharmaceutically acceptable salts and hydrates thereof.
  • R 1 and R 2 are the same or different and may be substituted with alkoxy, alkyl, cyano, nitro, hydroxy, trifluoromethyl, amino, carboxy, alkoxycarbonyl, phenyl or 1 or 2 halogens
  • R 1 and R 2 are the same or different and are alkoxy, alkyl, cyano, nitro, hydroxy, trifluoromethyl, amino, carboxy, alkoxycarbonyl, phenyl or phenyl substituted with 1 or 2 halogens
  • R 1 and R 2 may be the same or different and may be substituted with alkoxy, alkyl, cyano, nitro, hydroxy, trifluoromethyl, amino, carboxy, alkoxycarbonyl, phenyl, or 1 or 2 halogens
  • R 1 and R 2 are the same or different and are alkoxy, alkyl, cyano, nitro, hydroxy, trifluoromethyl, amino, carboxy, alkoxycarbonyl, phenyl or phenyl substituted with 1 or 2 halogens
  • R 1 and R 2 are the same or different and are optionally substituted with alkoxy, alkyl, cyano, nitro, hydroxy, trifluoromethyl, amino, carboxy, alkoxycarbonyl, phenyl or 1 or 2 halogens
  • the prevention or treatment method according to the above (22), wherein (24) R 1 and R 2 are the same or different and are alkoxy, alkyl, cyano, nitro, hydroxy, trifluoromethyl, amino, carboxy, alkoxycarbonyl, phenyl or phenyl substituted with 1 or 2 halogens The prevention or treatment method according to the above (23).
  • R 1 and R 2 are the same or different and are optionally substituted with alkoxy, alkyl, cyano, nitro, hydroxy, trifluoromethyl, amino, carboxy, alkoxycarbonyl, phenyl, or 1 or 2 halogens
  • R 1 and R 2 are the same or different and are alkoxy, alkyl, cyano, nitro, hydroxy, trifluoromethyl, amino, carboxy, alkoxycarbonyl, phenyl or phenyl substituted with 1 or 2 halogens
  • the present compound may be a pharmaceutical composition in which various excipients such as excipients, binders, wetting agents, disintegrants, lubricants, diluents and the like suitable for the dosage form are combined as necessary. it can.
  • Oral preparations can be prepared into dosage forms such as tablets, capsules, powders, granules, solutions, syrups, sublinguals and the like.
  • As a parenteral preparation it can be formulated into an injection or an external preparation for subcutaneous, intramuscular, joint cavity or intravenous administration.
  • External preparations can be formulated into ointments, creams, lotions, patches, aerosols, suppositories, etc., as well as inhalants for pulmonary administration or intranasal administration.
  • the present compound may be used in the form of its pharmaceutically acceptable salt or hydrate, and can be used alone or in appropriate combination. Moreover, it is good also as a compounding agent with another pharmaceutically active ingredient.
  • excipients such as lactose, mannitol, corn starch and potato starch
  • binders such as crystalline cellulose, cellulose derivatives, gum arabic, corn starch and gelatin
  • corn Disintegrants such as starch, potato starch and carboxymethylcellulose potassium
  • lubricants such as talc and magnesium stearate, other bulking agents, wetting agents, buffering agents, preservatives, flavors, etc.
  • a fragrance or the like may be added.
  • viscous agent When preparing as a liquid or emulsion, suspension, viscous injection, commonly used solubilizers, suspending agents, emulsifiers, stabilizers, preservatives, isotonic agents, A viscous agent, a base for intra-articular administration and the like may be added as appropriate, and sterilization is usually performed.
  • the desired dose of this compound may vary depending on the administration subject (patient age, body weight, etc.), the type and extent of the disease, the dosage form, the administration method, the administration period, etc.
  • 0.5 to 1000 mg, preferably 1 to 500 mg of the present compound can be orally administered in 1 to several times a day.
  • the daily dose is set to a dose level of 3 to 1/10 of each of the above doses, and can be administered usually once a day or several times a day.
  • a sustained-release preparation that releases the drug over a very long period of time, it is preferable to administer it once a week to once a year.
  • Example 1 Production of 3-acetylamino-2-oxochromen-8-ylbenzenesulfonate Benzenesulfonyl chloride (4.0 g, 22.8 mmol) was added to a solution of 3-acetylamino-2-oxo-8-hydroxychromene (5.0 g, 22.8 mmol) in pyridine (50 mL), and the mixture was stirred overnight. Chloroform (100 mL) was added and the crystals were collected by filtration and washed with hexane. The crystals were dried to obtain 7.0 g (85%) of the title compound. Mp. 229-231 ° C.
  • Example 3 Preparation of 3-[(4-hydroxyphenyl) sulfonylamino] -2-oxochromen-8-yl 4-hydroxybenzenesulfonate
  • Embodiment 5 Production of 4- [3-[(3-nitrophenyl) sulfonylamino] -2-oxochromen-8-yl] oxysulfonylbenzoic acid [Compound 49] To a solution of compound 48 (0.1 g, 0.2 mmol) obtained in the same manner as in Example 1 in methanol (5 mL) was added 10 mol / L aqueous sodium hydroxide solution (0.2 mL, 2 mmol as NaOH) and 0.5 at room temperature. Stir for hours. The solvent was distilled off under reduced pressure, water (5 mL) was added to the residue, and the mixture was extracted with chloroform. The solvent was distilled off under reduced pressure, and the residue was crystallized with petroleum ether-ether to obtain 20 mg (22%) of compound 49.
  • Tables 3 to 9 show physical property data of the compounds obtained by the production in the above Examples.
  • Test Example 1 Evaluation of inhibitory effect on gene expression of inflammation-related factors in bovine cartilage (1) Culture of bovine cartilage pieces 6-8 pieces of bovine metacarpophalangeal joint cartilage pieces (4 mm in diameter) in each well of a 24-well plate The cells were added one by one and cultured overnight in a CO 2 incubator set at 37 ° C. and 5 vol% CO 2 with 1 mL of basal medium. Thereafter, the cells were cultured for 2 hours in a basal medium containing 20 ⁇ mol / L of the test substance, and human recombinant IL-1 ⁇ (3 ng / mL) was added and further cultured for 8 hours. After completion of the culture, discard the culture medium, add an RNA stabilizer to the cartilage pieces, incubate overnight at 4 ° C, then cut the cartilage pieces with scissors, place them in a microtube, and store them frozen until RNA extraction. did.
  • RNA extraction and cDNA synthesis from bovine cartilage fragments Using Tissue Lyser (QIAGEN), crush the cartilage fragment in the microtube (25 Hz, 5 minutes, 2 times), add 1 mL of QIAzol Lysis Reagent (QIAGEN), suspend, and add 200 ⁇ L of chloroform. After mixing, the supernatant was collected by centrifugation (4 ° C., 1500 rpm). Total RNA was extracted and purified from the supernatant using QIACube (QIAGEN) and RNeasy Micro Kit (QIAGEN). cDNA was prepared from total RNA using Omniscript RT kit (QIAGEN) and Oligo (dT) 12-18 Primer (Invitrogen).
  • Test Example 2 Evaluation of inhibitory action on expression of inflammation-related factor in human monocyte cell line (THP-1 cell) (1) Culture of THP-1 cell THP-1 cells were induced to differentiate for 72 hours with PMA (phorbol 12-myristate 13-acetate; 100 nM / L), and then THP-1 cells (5 ⁇ 10 5 cells / mL) were added to RPMI1640 + 10% FCS in a 24-well plate. The cells were cultured for 24 hours in the culture solution. Then, add the test substance to a final concentration of 12.5 ⁇ mol / mL and incubate for 2 hours, then add lipopolysaccharide (LPS) to a final concentration of 10 mg / mL, and after 3 hours, It was collected.
  • PMA phorbol 12-myristate 13-acetate
  • FCS RPMI1640 + 10% FCS
  • RNA extraction and cDNA synthesis from THP-1 cells 1 mL of QIAzol Lysis Reagent (QIAGEN) was added and suspended, 200 ⁇ L of chloroform was added and mixed, and then centrifuged (4 ° C., 1500 rpm) to recover the supernatant.
  • Total RNA was extracted and purified from the supernatant using QIACube (QIAGEN) and RNeasy Micro Kit (QIAGEN).
  • cDNA was prepared from total RNA using Omniscript RT kit (QIAGEN) and Oligo (dT) 12-18 Primer (Invitrogen).
  • Test Example 3 Evaluation of inhibitory action on gene expression of fibrosis-related factors in cultured human lung fibroblasts (NHLH cells)
  • NHLH cells NHLF cells are seeded at 4 ⁇ 10 4 cells / well in each well of a 12-well plate, and fibroblast additive factor set-2 (FGM-2 SingleQuots, Lonza) is added to the fibroblast basic medium (FBM, Lonza).
  • FGM-2 SingleQuots, Lonza fibroblast basic medium
  • FBM fibroblast basic medium
  • TGF tumor growth factor
  • RNA extraction and cDNA synthesis from NHLH cells 1 mL of QIAzol Lysis Reagent (QIAGEN) was added and suspended, 200 ⁇ L of chloroform was added and mixed, and then centrifuged (4 ° C., 1500 rpm) to recover the supernatant.
  • Total RNA was extracted and purified from the supernatant using QIACube (QIAGEN) and RNeasy Micro Kit (QIAGEN).
  • cDNA was prepared from total RNA using Omniscript RT kit (QIAGEN) and Oligo (dT) 12-18 Primer (Invitrogen).
  • Test Example 4 Evaluation of inhibitory action on NF- ⁇ B activation (1) Production of transiently expressing cells Includes pGL4.32 [luc2P / NF- ⁇ B-RE / Hygro] (Promega) for NF- ⁇ B reporter vector, pGL4.74 [hRluc / TK] (Promega) for control vector and Lipofectamine LTX (Life Technologies) for gene transfer The prepared solution was added to human fetal kidney cells (HEK293T cells) seeded on 100 mm dishes to produce cells that transiently express the reporter protein.
  • HEK293T cells human fetal kidney cells
  • Test Example 5 Evaluation of inhibitory effect on pulmonary fibrosis mouse pulmonary wet weight increase in bleomycin-induced pulmonary fibrosis mice
  • ICR male mice were repeatedly intravenously administered with bleomycin 2 mg / kg for 5 days.
  • the group was organized into 4 groups: normal control group, onset control group, test substance administration group, and pirfenidone administration group.
  • the test substance was suspended in 0.5 w / v% carboxymethyl cellulose monosodium (CMC), and 50 mg / kg was orally administered twice a day for 2 weeks using a rat transsonde while stirring.
  • CMC carboxymethyl cellulose monosodium
  • Pirfenidone was suspended in 0.5 w / v% CMC, and 200 mg / kg was orally administered twice a day for 2 weeks using a rat transsonde while stirring.
  • the normal control group and the onset control group were repeatedly orally administered with 0.5 w / v% CMC in the same administration schedule. At the end of the administration period, both lungs were removed from the mice and the wet weight was measured.
  • Test Example 6 Evaluation of inhibitory action on lower limb hyperalgesia and decrease in walking duration of nicotine-induced disc degeneration rats (1) Preparation of nicotine-induced disc degeneration rats 16 days after arrival of SD male rats, 50 against body weight and mechanical stimulation Based on the% response threshold (measurement method will be described later) and the walking duration, the normal control group and the nicotine group were organized, and nicotine exposure was started in the nicotine group 17 days after arrival. Nicotine was adjusted to 344.8 mg / mL with physiological saline, enclosed in an osmotic pump, and placed subcutaneously in the lumbar region of rats.
  • an osmotic pump in which a newly prepared nicotine solution was encapsulated was placed in the skin of 5 groups of rats other than the normal control group. Nicotine was adjusted to 357.0 mg / mL with physiological saline, sealed in an osmotic pump, and placed in the lumbar region of SD male rats.
  • test substance is suspended in 0.5 w / v% CMC, and 10 mL / kg is used once a day from 14 to 52 or 53 days after the start of nicotine exposure using a rat translosonde while stirring. Repeated oral administration. In the normal control group and the onset control group, 0.5 w / v% CMC was repeatedly orally administered in the same administration schedule and administration method.
  • the gait duration of the rat was measured before the start of nicotine exposure and 48 days after the start of nicotine exposure using a rat / mouse rotarod.
  • the rotation speed was set to 15 revolutions / minute after 300 seconds at a constant acceleration after the rotor started rotating.
  • the rat was placed on the rotor while the rotor was stopped, rotated the rotor, measured the time until it dropped (maximum 300 seconds), and determined the average of 3 trials.
  • Table 15 shows an example of the results of (4) and (5) above. This compound showed a strong inhibitory effect on limb hyperalgesia and gait disturbance due to nicotine exposure. From this, it was confirmed that this compound has the hyperalgesia inhibitory effect and the gait disturbance inhibitory effect by the disc degenerative disease.
  • Test Example 7 Evaluation of inhibitory effect on gene expression of fibrosis-related factors in cultured human lung fibroblasts (NHLH cells) II
  • NHLH cells NHLF cells were seeded at 5 ⁇ 10 4 cells / well in each well of a 24-well plate, and fibroblast additive factor set-2 (FGM-2 SingleQuots, Lonza) was added to fibroblast basic medium (FBM, Lonza).
  • FGM-2 SingleQuots, Lonza fibroblast basic medium
  • the cells are cultured for 2 hours in a DMEM medium containing 30 ⁇ M test substance, 200 ⁇ g / mL pirfenidone, 30 ⁇ M dexamethasone (DEX), 1.0 ⁇ M TPCA-1 or 10 ⁇ M fluticasone propionate (FP), and the final concentration is 0.5.
  • TGF- ⁇ was added to a concentration of ng / mL and further cultured for 4 hours.
  • RNA extraction from NHLH cells The effects of test substances on RNA extraction from NHLH cells, synthesis of cDNA from RNA, and gene expression of fibrosis-related factors [CTGF, TGF- ⁇ 1, fibronectin, Col1] were as described in (2) of Test Example 3 above. The test was carried out in the same manner as (3).
  • the present invention has an excellent inflammation-related factor expression inhibitory action and fibrosis-related factor expression inhibitory action, and an excellent lung fibrosis inhibitory action in a pulmonary fibrosis model even in animal experiments.
  • it has an excellent hyperalgesia-inhibiting action and gait disturbance inhibiting action in an intervertebral disc degenerative disease model. Therefore, the present invention is highly useful as a preventive or therapeutic agent for inflammatory diseases or disc degenerative diseases.

Abstract

　本発明は、炎症性疾患又は椎間板変性疾患の予防又は治療剤を提供することを課題とする。本発明予防又は治療剤の有効成分であるクマリン誘導体又はその薬学的に許容される塩若しくは水和物は、炎症性サイトカイン等の炎症関連因子、線維化関連因子の産生を指標とした薬理試験において優れた抑制作用を示す。さらに該化合物は、肺線維症モデル動物や椎間板変性症モデル動物に対しても優れた抑制効果を示す。従って、本発明は、炎症性疾患や椎間板変性疾患の予防又は治療剤として非常に有用なものである。

Description

クマリン誘導体を有効成分として含有する治療・予防剤
　本発明は、炎症性疾患又は椎間板変性疾患の予防又は治療剤に関する。
炎症は、病原体や傷害組織の効率的な除去のために生体に備わった防御機構である。炎症では細胞から種々の伝達物質が放出され、腫れ、痛み、発熱等の症状を伴う。一過性の炎症が生体防御に必要である一方で、制御されない炎症は組織の損傷を引き起こし、様々な疾患の根本原因になる。炎症性疾患とは炎症反応による伝達物質によって引き起こされる疾患の総称であり、喘息、慢性閉塞性肺疾患（COPD）、肺線維症、アレルギー性疾患、自己免疫疾患、鼻炎、胃腸炎、肝炎、膵炎、腎炎、膀胱炎、腸炎、炎症性疼痛、動脈硬化症、皮膚炎、筋炎、血管炎、炎症性眼疾患、多発性硬化症等が挙げられる。炎症は、プロスタグランジン、ロイコトリエン等の脂質メディエーター、炎症細胞（マスト細胞、好塩基球、内皮細胞、マクロファージ、好中球等）から放出される炎症性サイトカイン及びケモカインの複雑な相互作用によって誘導され、調節されるとされている。炎症の初期過程においては、局所的な起炎シグナルに応答して、血管透過性の増大、内皮細胞の活性化、炎症細胞の浸潤が起こり、そこでは炎症性サイトカイン〔インターロイキン（IL）-1β、IL-6、IL-8、インターフェロン（IFN）-γ、腫瘍壊死因子（TNF）-α等〕やケモカイン、脂質メディエーターが中心的役割を果たしていることがわかってきている。一方、椎間板変性は、加齢や力学的ストレス、喫煙、遺伝的要素等様々な因子が関与して引き起こされる。椎間板は、水分に富むゲル状の髄核とその周囲を取り囲む線維輪からなるが、椎間板の加齢性変化は１０代後半より始まり、髄核中の水分含量やプロテオグリカン含量が減少していく。その結果、椎間板は弾性の低下、容量の低下等の変性を生じるが、変性した組織は自然修復能が乏しく、有効な治療法がないのが現状である。椎間板変性が起きると、椎間板の周りの神経を刺激したり、靭帯、関節や筋肉に負担がかかり、腰痛の原因になることがある。椎間板変性を引き起こす髄核中のプロテオグリカンの合成阻害の要因としては、過度の力学的ストレスの他、喫煙による椎間板への酸素供給の低下も挙げられている。椎間板変性により引き起こされる疾患としては、腰部椎間板症、変性側弯症等がある。これらの疾患の症状としては、痛みの他、下肢のしびれ、筋力低下等の症状が生じる場合もあり、悪化すると日常生活に支障が生じる。炎症性疾患や椎間板変性疾患の治療に主に使用される非ステロイド抗炎症薬(NSAID) 及びシクロオキシゲナーゼ(COX)-2 阻害剤には抗炎症効果や鎮痛効果があるが、胃腸及び心血管への副作用の点から、より副作用が少なく優れた効果を有する新しい薬剤が臨床現場で強く求められている。
本発明者らは、あるクマリン誘導体が抗炎症作用及び椎間板変性抑制作用を有することから、炎症性疾患及び椎間板変性疾患の予防又は治療剤として有用であることを見出した。クマリン誘導体については、クマリン骨格の3位にスルホニルアミノが置換した化合物が非特許文献１及び２に開示されているが、これらの文献は当該化合物を合成したことが報告されているのみで、当該化合物が薬理作用を有することは何ら記載されていない。
Science and Culture、31巻、1号、27頁、1965年 Science and Culture、37巻、1号、58－59頁、1971年
　本発明は、炎症性疾患及び椎間板変性疾患の予防又は治療剤を提供することを課題とする。
　本発明者らは、上記の課題を解決するために鋭意研究を行った結果、下記一般式（Ｉ）で表されるクマリン誘導体又はその薬学的に許容される塩若しくは水和物（以下「本化合物」ともいう。また、本願において、単に「化合物」という場合でも、その薬学的に許容される塩又は水和物を含むことがある。）が、優れた炎症性サイトカインの発現抑制、転写因子の活性化抑制等の薬理作用を有し、炎症性疾患又は椎間板変性疾患の予防又は治療剤として有用であることを見出し、本発明を完成するに至った。なお、本発明者らは、本発明とは別に本化合物が関節症（変形性関節症や関節リウマチ）の予防又は治療剤として有用であることを見出している（PCT/JP2013/075414）。よって、以下、本願における「炎症性疾患」には、「関節症」は含まれないものとする。
　下記一般式（Ｉ）で表されるクマリン誘導体又はその薬学的に許容される塩若しくは水和物（本化合物）は、炎症や椎間板変性に関する各種の薬理試験において優れた抑制作用を示した。このことから、本化合物は、喘息や肝炎等の炎症性疾患及び椎間板変性疾患の予防又は治療剤として、その有用性が高いものである。なお、本願における「予防」及び「治療」には、疾患の症状が軽減、緩和又は改善される意味が含まれる。
　本発明は下記一般式（I）で表されるクマリン誘導体並びにその薬学的に許容される塩及び水和物の少なくとも一種（本化合物）を有効成分として含有する炎症性疾患及び椎間板変性疾患の予防又は治療剤に関する。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000002
 〔式中、R1及びR2は同一又は異なって（a）アルコキシ、アルキル、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、トリフルオロメチル、アミノ、カルボキシ、アルコキシカルボニル、フェニル又は1若しくは2のハロゲンで置換されていてもよいフェニル、（b）ピリジル、（c）アルキル又は（d）チエニルを表す。〕
　前記一般式（I）の置換基において、アルキルとは、好ましくはメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、sec-ブチル、t-ブチル等の炭素数1乃至4の直鎖状又は分岐状のアルキル基を表す。アルコキシとは、好ましくはメトキシ、エトキシ、n-プロポキシ、イソプロポキシ、n-ブトキシ、イソブトキシ、sec-ブトキシ、t-ブトキシ等の炭素数1乃至4の直鎖状又は分岐状のアルコキシ基を表す。ハロゲンとは、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素等を表す。
以下に本化合物の一般的製法を示す。但し、当業者は、特定の化合物の製造に際して、適宜その化学構造に応じた変更をすることができることは当然である。
一般式（I）の化合物は、一般式（II）の化合物のスルホニルアミド化反応により得られる。例えば、スルホニルアミド化反応は、一般式（II）の化合物と置換ベンゼンスルホニルハライドをピリジン又は塩基性溶媒中で、好ましくは室温から溶媒の沸点との間の好適な温度で行うことができる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000003
一般式（II）の化合物は、一般式（III）の化合物の酸加水分解反応により得られる。例えば、酸加水分解反応は、酢酸などの有機酸と適当な濃度に調整した硫酸の混合溶媒中、好ましくは室温から溶媒の沸点までの好適な温度で行うことができる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000004
一般式（III）の化合物は、化合物（IV）のスルホニルエステル化反応により得られる。例えば、スルホニルエステル化反応は、一般式（IV）の化合物と置換ベンゼンスルホニルハライドをピリジンなどの塩基性溶媒中で、好ましくは室温から溶媒の沸点との間の好適な温度で行うことができる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000005
　また前記一般式（I）で表される化合物において、R1及びR2が同一の置換基の場合には、下記実施例２のように、3-アミノ-2-オキソ-8-ヒドロキシクロメンにスルホニルアミド化反応及びスルホニルエステル化反応を同時に行って、本化合物を製造することができる。
　前記一般式（I）で表される化合物は、その薬学的に許容しうる塩が存在する場合はそれら各種の塩を包含し、例えば、塩酸、硫酸、硝酸、臭化水素酸、リン酸、過塩素酸、チオシアン酸、ホウ酸、ギ酸、酢酸、ハロ酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、クエン酸、酒石酸、コハク酸、グルコン酸、乳酸、マロン酸、フマル酸、アントラニル酸、安息香酸、ケイ皮酸、ｐ-トルエンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸、スルファニル酸等との酸との付加塩、又はナトリウム、カリウム等のアルカリ金属、カルシウム、マグネシウム等のアルカリ土類金属若しくはアルミニウム等の金属との塩、或いはアンモニア、有機アミン等の塩基類との塩を挙げることができる。これらの塩は公知の方法により、遊離の各化合物より製造でき、或いは相互に変換できる。また、本化合物に、シス－トランス異性体、光学異性体、配座異性体等の立体異性体或いは水和物等の溶媒和物又は金属錯化合物の状態で存在する場合においては、本化合物はそのいずれの立体異性体、溶媒和物及び錯化合物をも包含する。
このようにして得た化合物の例を以下に示す。また、各化合物における上記一般式（I）のR1及びR2に対応する置換基を表１及び２に示す。なお、表中のR1及びR2の置換基は、メチルは「Me」、エチルは「Et」、フェニルは「Ph」、ピリジルは「Py」、チエニルは「thienyl」で表し、その他については元素記号を用いて表示している。以下、それぞれの化合物を呼ぶ場合には、下記の化合物番号を用いる。
3-[(4-メトキシフェニル)スルホニルアミノ]-2-オキソクロメン-8-イル 4-メトキシベンゼンスルホネート［化合物１］
3-[(3-メトキシフェニル)スルホニルアミノ]-2-オキソクロメン-8-イル 3-メトキシベンゼンスルホネート［化合物２］
3-[(2-メトキシフェニル)スルホニルアミノ]-2-オキソクロメン-8-イル 2-メトキシベンゼンスルホネート［化合物３］
2-オキソ-3-(p-トルイルスルホニルアミノ)クロメン-8-イル 4-メチルベンゼンスルホネート［化合物４］
3-(m-トルイルスルホニルアミノ)-2-オキソクロメン-8-イル 3-メチルベンゼンスルホネート［化合物５］
3-(o-トルイルスルホニルアミノ)-2-オキソクロメン-8-イル 2-メチルベンゼンスルホネート［化合物６］
3-[(4-クロロフェニル)スルホニルアミノ]-2-オキソクロメン-8-イル 4-クロロベンゼンスルホネート［化合物７］
3-[(3-クロロフェニル)スルホニルアミノ]-2-オキソクロメン-8-イル 3-クロロベンゼンスルホネート［化合物８］
3-[(2-クロロフェニル)スルホニルアミノ]-2-オキソクロメン-8-イル 2-クロロベンゼンスルホネート［化合物９］
3-[(4-フルオロフェニル)スルホニルアミノ]-2-オキソクロメン-8-イル 4-フルオロベンゼンスルホネート［化合物１０］
3-[(3-フルオロフェニル)スルホニルアミノ]-2-オキソクロメン-8-イル 3-フルオロベンゼンスルホネート［化合物１１］
3-[(2-フルオロフェニル)スルホニルアミノ]-2-オキソクロメン-8-イル 2-フルオロベンゼンスルホネート［化合物１２］
3-[(4-シアノフェニル)スルホニルアミノ]-2-オキソクロメン-8-イル 4-シアノベンゼンスルホネート［化合物１３］
3-[(3-シアノフェニル)スルホニルアミノ]-2-オキソクロメン-8-イル 3-シアノベンゼンスルホネート［化合物１４］
3-[(2-シアノフェニル)スルホニルアミノ]-2-オキソクロメン-8-イル 2-シアノベンゼンスルホネート［化合物１５］
3-[(4-ニトロフェニル)スルホニルアミノ]-2-オキソクロメン-8-イル 4-ニトロベンゼンスルホネート［化合物１６］
3-[(3-ニトロフェニル)スルホニルアミノ]-2-オキソクロメン-8-イル 3-ニトロベンゼンスルホネート［化合物１７］
3-[(2-ニトロフェニル)スルホニルアミノ]-2-オキソクロメン-8-イル 2-ニトロベンゼンスルホネート［化合物１８］
3-[(4-ヒドロキシフェニル)スルホニルアミノ]-2-オキソクロメン-8-イル 4-ヒドロキシベンゼンスルホネート［化合物１９］
3-(ベンゼンスルホニルアミノ)-2-オキソクロメン-8-イル 4-シアノベンゼンスルホネート［化合物２０］
3-[(4-シアノフェニル)スルホニルアミノ]-2-オキソクロメン-8-イル ベンゼンスルホネート［化合物２１］
3-[(3-シアノフェニル)スルホニルアミノ]-2-オキソクロメン-8-イル ベンゼンスルホネート［化合物２２］
3-[(4-ニトロフェニル)スルホニルアミノ]-2-オキソクロメン-8-イル ベンゼンスルホネート［化合物２３］
3-[(3-ニトロフェニル)スルホニルアミノ]-2-オキソクロメン-8-イル ベンゼンスルホネート［化合物２４］
3-[(3-フルオロフェニル)スルホニルアミノ]-2-オキソクロメン-8-イル ベンゼンスルホネート［化合物２５］
3-[(3,4-ジフルオロフェニル)スルホニルアミノ]-2-オキソクロメン-8-イル ベンゼンスルホネート［化合物２６］
2-オキソ-3-[[4-(トリフルオロメチル)フェニル]スルホニルアミノ]クロメン-8-イル ベンゼンスルホネート［化合物２７］
2-オキソ-3-[[3-(トリフルオロメチル)フェニル]スルホニルアミノ]クロメン-8-イル ベンゼンスルホネート［化合物２８］
3-[(4-クロロフェニル)スルホニルアミノ]-2-オキソクロメン-8-イル ベンゼンスルホネート［化合物２９］
2-オキソ-3-[(4-フェニルフェニル)スルホニルアミノ]クロメン-8-イル ベンゼンスルホネート［化合物３０］
3-[(3-ブロモフェニル)スルホニルアミノ]-2-オキソクロメン-8-イル ベンゼンスルホネート［化合物３１］
3-[(3-ブロモフェニル)スルホニルアミノ]-2-オキソクロメン-8-イル 3-ブロモベンゼンスルホネート［化合物３２］
2-オキソ-3-[[3-(トリフルオロメチル)フェニル]スルホニルアミノ]クロメン-8-イル 3-(トリフルオロメチル)ベンゼンスルホネート［化合物３３］
3-(ベンゼンスルホンアミド)-2-オキソクロメン-8-イル 3-ブロモベンゼンスルホネート［化合物３４］
3-(ベンゼンスルホンアミド)-2-オキソクロメン-8-イル 3-(トリフルオロメチル)ベンゼンスルホネート［化合物３５］
3-[(3-ブロモフェニル)スルホニルアミノ]-2-オキソクロメン-8-イル ピリジン-3-スルホネート［化合物３６］
3-[(3-ブロモフェニル)スルホニルアミノ]-2-オキソクロメン-8-イル メタンスルホネート［化合物３７］
2-オキソ-3-(3-ピリジルスルホニルアミノ)クロメン-8-イル 3-ブロモベンゼンスルホネート［化合物３８］
3-(メタンスルホンアミド)-2-オキソクロメン-8-イル 3-ブロモベンゼンスルホネート［化合物３９］
3-(メタンスルホンアミド)-2-オキソクロメン-8-イル ベンゼンスルホネート［化合物４０］
2-オキソ-3-[[3-(トリフルオロメチル)フェニル]スルホニルアミノ]クロメン-8-イル 4-ニトロベンゼンスルホネート［化合物４１］
3-[(4-ニトロフェニル)スルホニルアミノ]-2-オキソクロメン-8-イル 3-(トリフルオロメチル)ベンゼンスルホネート［化合物４２］
3-[(3-ニトロフェニル)スルホニルアミノ]-2-オキソクロメン-8-イル チオフェン-2-スルホネート［化合物４３］
2-オキソ-3-(2-チエニルスルホニルアミノ)クロメン-8-イル 3-ニトロベンゼンスルホネート［化合物４４］
4-[[8-(3-ニトロフェニル)スルホニルオキシ-2-オキソクロメン-3-イル]スルファモイル]安息香酸［化合物４５］
塩酸2-オキソ-3-[[3-(トリフルオロメチル)フェニル]スルホニルアミノ]クロメン-8-イル 4-アミノベンゼンスルホネート［化合物４６］
3-[(4-アミノフェニル)スルホニルアミノ]-2-オキソクロメン-8-イル 3-(トリフルオロメチル)ベンゼンスルホネート［化合物４７］
エチル 4-[3-[(3-ニトロフェニル)スルホニルアミノ]-2-オキソクロメン-8-イル]オキシスルホニルベンゾエート［化合物４８］
4-[3-[(3-ニトロフェニル)スルホニルアミノ]-2-オキソクロメン-8-イル]オキシスルホニル安息香酸 ［化合物４９］
2-オキソ-3-[[3-(トリフルオロメチル)フェニル]スルホニルアミノ]クロメン-8-イル 3-ニトロベンゼンスルホネート［化合物５０］
3-[(3-ニトロフェニル)スルホニルアミノ]-2-オキソクロメン-8-イル 3-(トリフルオロメチル)ベンゼンスルホネート［化合物５１］
2-オキソ-3-[(4-フェニルフェニル)スルホニルアミノ]クロメン-8-イル 3-(トリフルオロメチル)ベンゼンスルホネート［化合物５２］
2-オキソ-3-[(4-フェニルフェニル)スルホニルアミノ]クロメン-8-イル 3-ブロモベンゼンスルホネート［化合物５３］
3-[(3-ブロモフェニル)スルホニルアミノ]-2-オキソクロメン-8-イル 3-ニトロベンゼンスルホネート［化合物５４］
2-オキソ-3-[(4-フェニルフェニル)スルホニルアミノ]クロメン-8-イル 3-ニトロベンゼンスルホネート［化合物５５］
3-[(3-ブロモフェニル)スルホニルアミノ]-2-オキソクロメン-8-イル 3-(トリフルオロメチル)ベンゼンスルホネート［化合物５６］
2-オキソ-3-[[3-(トリフルオロメチル)フェニル]スルホニルアミノ]クロメン-8-イル 4-(トリフルオロメチル)ベンゼンスルホネート［化合物５７］
3-[(3-ブロモフェニル)スルホニルアミノ]-2-オキソクロメン-8-イル 4-(トリフルオロメチル)ベンゼンスルホネート［化合物５８］
3-[(3-ニトロフェニル)スルホニルアミノ]-2-オキソクロメン-8-イル 3-ブロモベンゼンスルホネート［化合物５９］
2-オキソ-3-[[3-(トリフルオロメチル)フェニル]スルホニルアミノ]クロメン-8-イル 3-ブロモベンゼンスルホネート［化合物６０］
2-オキソ-3-[[4-(トリフルオロメチル)フェニル]スルホニルアミノ]クロメン-8-イル 3-ブロモベンゼンスルホネート［化合物６１］
3-[(3-ニトロフェニル)スルホニルアミノ]-2-オキソクロメン-8-イル 4-フェニルベンゼンスルホネート［化合物６２］
2-オキソ-3-[[3-(トリフルオロメチル)フェニル]スルホニルアミノ]クロメン-8-イル 4-フェニルベンゼンスルホネート［化合物６３］
2-オキソ-3-[[4-(トリフルオロメチル)フェニル]スルホニルアミノ]クロメン-8-イル 4-フェニルベンゼンスルホネート［化合物６４］
3-[(3-ブロモフェニル)スルホニルアミノ]-2-オキソクロメン-8-イル 4-フェニルベンゼンスルホネート［化合物６５］
2-オキソ-3-[(4-フェニルフェニル)スルホニルアミノ]クロメン-8-イル 4-フェニルベンゼンスルホネート［化合物６６］
2-オキソ-3-[[4-(トリフルオロメチル)フェニル]スルホニルアミノ]クロメン-8-イル 3-ニトロベンゼンスルホネート［化合物６７］
2-オキソ-3-[[4-(トリフルオロメチル)フェニル]スルホニルアミノ]クロメン-8-イル 3-(トリフルオロメチル)ベンゼンスルホネート［化合物６８］
3-[(3-ニトロフェニル)スルホニルアミノ]-2-オキソクロメン-8-イル 4-(トリフルオロメチル)ベンゼンスルホネート［化合物６９］
2-オキソ-3-[(4-フェニルフェニル)スルホニルアミノ]クロメン-8-イル 4-(トリフルオロメチル)ベンゼンスルホネート［化合物７０］
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000006
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000007
　以下に本発明の好ましい態様を示す。
（１）前記一般式（I）で表されるクマリン誘導体並びにその薬学的に許容される塩及び水和物の少なくとも一種を含有する炎症性疾患又は椎間板変性疾患の予防又は治療剤。
（２）R1及びR2が同一又は異なって、アルコキシ、アルキル、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、トリフルオロメチル、アミノ、カルボキシ、アルコキシカルボニル、フェニル又は1若しくは2のハロゲンで置換されていてもよいフェニルである上記（１）記載の予防又は治療剤。
（３）R1及びR2が同一又は異なって、アルコキシ、アルキル、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、トリフルオロメチル、アミノ、カルボキシ、アルコキシカルボニル、フェニル又は1若しくは2のハロゲンで置換されているフェニルである上記（２）記載の予防又は治療剤。
（４）R1及びR2の両方がトリフルオロメチルで置換されているフェニルである上記（３）記載の予防又は治療剤。
（５）R1又はR2の一方がトリフルオロメチルで置換されているフェニルである上記（３）記載の予防又は治療剤。（６）R1又はR2の一方がトリフルオロメチルで置換されているフェニルであり、他方がハロゲンで置換されているフェニルである上記（５）記載の予防又は治療剤。
（７）ハロゲンが臭素である上記（６）記載の予防又は治療剤。
（８）炎症性疾患が、慢性閉塞性肺疾患又は肺線維症である上記（１）乃至（７）のいずれかに記載の予防又は治療剤。
（９）経口剤である上記（１）乃至（８）のいずれかに記載の予防又は治療剤。
（１０）注射剤である上記（１）乃至（８）のいずれかに記載の予防又は治療剤。
（１１）外用剤である上記（１）乃至（８）のいずれかに記載の予防又は治療剤。
（１２）吸入剤である上記（１１）記載の予防又は治療剤。
（１３）経肺投与剤である上記（１２）記載の予防又は治療剤。
（１４）炎症性疾患又は椎間板変性疾患を予防又は治療するために用いる前記一般式（I）で表されるクマリン誘導体又はその薬学的に許容される塩若しくは水和物。
（１５）R1及びR2が同一又は異なって、アルコキシ、アルキル、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、トリフルオロメチル、アミノ、カルボキシ、アルコキシカルボニル、フェニル又は1若しくは2のハロゲンで置換されていてもよいフェニルである上記（１４）記載のクマリン誘導体又はその薬学的に許容される塩若しくは水和物。
（１６）R1及びR2が同一又は異なって、アルコキシ、アルキル、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、トリフルオロメチル、アミノ、カルボキシ、アルコキシカルボニル、フェニル又は1若しくは2のハロゲンで置換されているフェニルである上記（１５）記載のクマリン誘導体又はその薬学的に許容される塩若しくは水和物。
（１７）R1及びR2の両方がトリフルオロメチルで置換されているフェニルである上記（１６）記載のクマリン誘導体又はその薬学的に許容される塩若しくは水和物。
（１８）R1又はR2の一方がトリフルオロメチルで置換されているフェニルである上記（１６）記載のクマリン誘導体又はその薬学的に許容される塩若しくは水和物。
（１９）R1又はR2の一方がトリフルオロメチルで置換されているフェニルであり、他方がハロゲンで置換されているフェニルである上記（１８）記載のクマリン誘導体又はその薬学的に許容される塩若しくは水和物。
（２０）ハロゲンが臭素である上記（１９）記載のクマリン誘導体又はその薬学的に許容される塩若しくは水和物。
（２１）炎症性疾患が、慢性閉塞性肺疾患又は肺線維症である上記（１４）乃至（２０）のいずれかに記載のクマリン誘導体又はその薬学的に許容される塩若しくは水和物。
（２２）炎症性疾患又は椎間板変性疾患を有する患者に前記一般式（I）で表されるクマリン誘導体並びにその薬学的に許容される塩及び水和物の少なくとも一種の有効量を投与することを特徴とする、炎症性疾患又は椎間板変性疾患の予防又は治療方法。
（２３）R1及びR2が同一又は異なって、アルコキシ、アルキル、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、トリフルオロメチル、アミノ、カルボキシ、アルコキシカルボニル、フェニル又は1若しくは2のハロゲンで置換されていてもよいフェニルである上記（２２）記載の予防又は治療方法。
（２４）R1及びR2が同一又は異なって、アルコキシ、アルキル、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、トリフルオロメチル、アミノ、カルボキシ、アルコキシカルボニル、フェニル又は1若しくは2のハロゲンで置換されているフェニルである上記（２３）記載の予防又は治療方法。
（２５）R1及びR2の両方がトリフルオロメチルで置換されている上記（２４）記載の予防又は治療方法。
（２６）R1又はR2の一方がトリフルオロメチルで置換されているフェニルである上記（２４）記載の予防又は治療方法。
（２７）R1又はR2の一方がトリフルオロメチルで置換されているフェニルで、他方がハロゲンで置換されているフェニルである上記（２６）記載の予防又は治療方法。
（２８）ハロゲンが臭素である上記（２７）記載の予防又は治療方法。
（２９）炎症性疾患が、慢性閉塞性肺疾患又は肺線維症である上記（２２）乃至（２８）のいずれかに記載の予防又は治療方法。
（３０）炎症性疾患又は椎間板変性疾患を予防又は治療するための医薬の製造における前記一般式（I）で表されるクマリン誘導体又はその薬学的に許容される塩若しくは水和物の使用。
（３１）R1及びR2が同一又は異なって、アルコキシ、アルキル、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、トリフルオロメチル、アミノ、カルボキシ、アルコキシカルボニル、フェニル又は1若しくは2のハロゲンで置換されていてもよいフェニルである上記（３０）記載の使用。
（３２）R1及びR2が同一又は異なって、アルコキシ、アルキル、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、トリフルオロメチル、アミノ、カルボキシ、アルコキシカルボニル、フェニル又は1若しくは2のハロゲンで置換されているフェニルである上記（３１）記載の使用。
（３３）R1及びR2の両方がトリフルオロメチルで置換されているフェニルである上記（３２）記載の使用。
（３４）R1又はR2の一方がトリフルオロメチルで置換されているフェニルである上記（３２）記載の使用。
（３５）R1又はR2の一方がトリフルオロメチルで置換されているフェニルで、他方がハロゲンで置換されているフェニルである上記（３４）記載の使用。
（３６）ハロゲンが臭素である上記（３５）記載の使用。
（３７）炎症性疾患が、慢性閉塞性肺疾患又は肺線維症である上記（３０）乃至（３６）のいずれかに記載の使用。
本化合物は、その剤型に適した賦形剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤、滑沢剤、希釈剤等の各種医薬用添加剤を必要に応じて組み合わせた医薬組成物とすることができる。経口剤としては、錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、液剤、シロップ剤、舌下剤等の剤型に調製できる。非経口剤としては、皮下、筋肉内、関節腔又は静脈内投与のための注射剤や外用剤等に製剤化できる。外用剤としては、軟膏剤、クリーム剤、ローション剤、貼付剤、エアゾール剤、座剤等の他、経肺投与用あるいは鼻腔内投与用の吸入剤等に製剤化することができる。処方にあたっては、本化合物をその薬学的に許容しうる塩や水和物の形で用いてもよく、単独若しくは適宜組み合わせて用いることができる。又、他の医薬活性成分との配合剤としてもよい。
　経口剤にする場合の添加剤としては、例えば、乳糖、マンニット、トウモロコシデンプン、バレイショデンプン等の慣用の賦形剤、結晶セルロース、セルロース誘導体、アラビアゴム、トウモロコシデンプン、ゼラチン等の結合剤、トウモロコシデンプン、バレイショデンプン、カルボキシメチルセルロースカリウム等の崩壊剤、タルク、ステアリン酸マグネシウム等の滑沢剤、その他増量剤、湿潤化剤、緩衝剤、保存剤、香料等を適宜組み合わせることができ、嬌味剤、芳香剤等を加えてもよい。
　液剤若しくは乳濁性、懸濁性、粘稠性の注射剤として調製する場合には、通常使用されている溶解補助剤、懸濁化剤、乳化剤、安定化剤、保存剤、等張剤、粘稠剤、関節腔内投与用基剤等を適宜添加しても良く、通常滅菌処理を行う。
　本化合物の望ましい投与量は、投与対象（患者の年齢、体重等）、疾病の種類や程度、剤型、投与方法、投与期間等によって変わり得るが、所望の効果を得るには、通常一般に成人に対して、本化合物0.5乃至1000 mg、好ましくは1乃至500 mgを１日1乃至数回に分けて経口投与することができる。非経口投与の場合、１日投与量は、前記各々の投与量の3乃至10分の1の用量レベルとし、通常１日1回乃至数回に分けて投与することができる。非常に長期間にわたり薬剤が放出する徐放性製剤にした場合は、１週間乃至１年に１回程度の投与とすることが好ましい。
次に実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらに何ら限定されるものではない。
以下の実施例１から５により製造された本化合物の物性における融点はYamato MP-21型融点測定器を使用して測定し、温度計の補正は行っていない。NMRスぺクトルはBruker AVANCEIII500型核磁気共鳴装置で測定し、内部標準としてテトラメチルシランを用いた。シリカゲルカラムクロマトグラフィーはシリカゲルPSQ100B（富士シリシア化学）を用いて行った。薄層クロマトグラフィーはSilica gel F254（Merck、No. 5715）を使用し、検出はUVランプ及び5 w/v%リンモリブデン酸-エタノール発色試薬、ヨウ素‐シリカゲルを用いた。また、試薬及び溶媒は市販品をそのまま用いた。
実施例１．
（１）3-アセチルアミノ-2-オキソクロメン-8-イルベンゼンスルホネートの製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000008
 　3-アセチルアミノ-2-オキソ-8-ヒドロキシクロメン（5.0 g、22.8 mmol）のピリジン（50 mL）溶液にベンゼンスルホニルクロリド（4.0 g、22.8 mmol）を加え一晩かき混ぜた。クロロホルム（100 mL）を加え結晶をろ取し、ヘキサンで洗浄した。結晶を乾燥し表題化合物を7.0 g（85%）得た。
　Mp. 229-231℃. 1H-NMR (DMSO-d6) δ: 2.15 (s, 3H), 7.22-7.34 (m, 2H), 7.58-7.89 (m, 6H), 8.58 (s, 1H), 9.81 (s, 1H).
（２）3-アミノ-2-オキソクロメン-8-イルベンゼンスルホネートの製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000009
 　上記（１）で得られた化合物（3.0 g、8.3 mmol）の酢酸（30 mL）溶液に50 vol％硫酸（30 mL）を加え、50℃にてかきまぜた。結晶が完全に溶解した後、放冷し、反応混合物を水に加えた。析出した結晶をろ取乾燥し表題化合物を2.2 g（83%）得た。
Mp. 129-131℃. 1H-NMR (DMSO-d6)　δ : 5.88 (s, 2H), 6.64 (s, 1H), 6.93-7.87 (m, 8H).
（３）3-[(4-ニトロフェニル)スルホニルアミノ]-2-オキソクロメン-8-イル ベンゼンスルホネート [化合物２３] の製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000010
 上記（２）で得られた化合物（1 g、3.2 mmol）のピリジン（10 mL）溶液に4-ニトロベンゼンスルホニルクロリド（1.0 g、4.8 mmol）を加え、室温で一晩かき混ぜた。減圧下にて溶媒を留去した後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝3：2の後、100％クロロホルム）で精製した。得られた粗結晶をクロロホルムで再結晶し、化合物２３ を0.8 g（52%）得た。
実施例２．
3-[(4-メトキシフェニル)スルホニルアミノ]-2-オキソクロメン-8-イル 4-メトキシベンゼンスルホネート [化合物１] の製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000011
 　塩化メチレン（20 mL）に3-アミノ-2-オキソ-8-ヒドロキシクロメン（500 mg、2.8 mmol）を懸濁させ、氷冷下でピリジン（1.4 mL、17 mmol）を滴下した後、氷冷下で4-メトキシベンゼンスルホニルクロリド（3.5 g、17 mmol）を加え、室温で15時間かき混ぜた。反応液を水、飽和食塩水で洗浄した後、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧下で留去して得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝120：1）で精製して、固体として化合物１を980 mg（67%）得た。
実施例３．
3-[(4-ヒドロキシフェニル)スルホニルアミノ]-2-オキソクロメン-8-イル 4-ヒドロキシベンゼンスルホネート [化合物１９] の製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000012
 　無水塩化メチレン（1.8 mL）に化合物１（300 mg、0.6 mmol）を溶かし、アルゴン置換した後、‐78℃に冷却した。反応液に三臭化ホウ素（3.8 mL、3.8 mmol）を滴下して室温で20時間かき混ぜた。反応液に氷水を加え析出した固体をろ取して、五酸化二リン上で減圧乾燥した。この固体をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝95：5）で精製して、固体として化合物１９を40 mg（14%）得た。
実施例４．
塩酸2-オキソ-3-[[3-(トリフルオロメチル)フェニル]スルホニルアミノ]クロメン-8-イル 4-アミノベンゼンスルホネート [化合物４６] の製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000013
 実施例１と同様の方法で得られた化合物４１（0.2 g、0.4 mmol）のクロロホルム（10 mL）溶液に 5％-Pd-C（10 mg）を加え、水素雰囲気下で2時間かき混ぜた。触媒をろ去後、減圧下にて溶媒を留去し、残渣に塩化水素-ジオキサン溶液（0.2 mL、0.8 mmol）を加えた。減圧下にて溶媒を留去し析出した結晶をろ取乾燥し、化合物４６ を 30 mg（15%）得た。
実施例５．
4-[3-[(3-ニトロフェニル)スルホニルアミノ]-2-オキソクロメン-8-イル]オキシスルホニル安息香酸 [化合物４９] の製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000014
 実施例１と同様の方法で得られた化合物４８（0.1 g、0.2 mmol）のメタノール（5 mL）溶液に10 mol/L 水酸化ナトリウム水溶液（0.2 mL、NaOH として 2 mmol）を加え室温で0.5時間かき混ぜた。減圧下にて溶媒を留去し、残渣に水（5 mL）を加え、クロロホルムで抽出した。減圧下にて溶媒を留去し、残渣を石油エーテル－エーテルで結晶化して化合物４９を20 mg（22%）得た。
　上記以外の化合物については、適当な出発原料を用い、化合物２乃至１８、３２及び３３は実施例２、化合物４７は実施例４、その他の化合物は実施例１と同様の方法で製造した。
上記実施例で製造して得られた本化合物の物性データを表３乃至表９に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000015
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000016
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000017
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000018
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000019
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000020
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000021
試験例１：ウシ軟骨の炎症関連因子の遺伝子発現に対する抑制作用の評価
（１）ウシ軟骨片の培養
　ウシ中手指節関節軟骨片（直径4 mm）を24ウェルプレートの各ウェルに6～8個ずつ入れ、基礎培地1 ｍLで37℃、5 vol％ CO2に設定したCO2インキュベーター中で一晩培養した。その後、20μmol/Lの被験物質を含む基礎培地で2時間培養し、ヒトリコンビナントIL-1α（3 ng/mL）を添加して更に8時間培養した。培養終了後、培養液を廃棄し、軟骨片にRNA安定化剤を添加して4℃で一晩インキュベートした後、軟骨片をはさみで細切し、マイクロチューブに入れてRNA抽出時まで凍結保存した。
（２）ウシ軟骨片からのRNA抽出及びcDNAの合成
Tissue Lyser（QIAGEN）を用いて、マイクロチューブに入った軟骨片を粉砕し（25Hz、5分、2回）、1 ｍLのQIAzol Lysis Reagent（QIAGEN）を加えて懸濁し、200μLのクロロホルムを添加・混和後、遠心（4℃、1500 rpm）して上清を回収した。Total RNAは、上清をQIACube（QIAGEN）と RNeasy Micro Kit（QIAGEN）を用いて、抽出・精製した。cDNAは、Omniscript RT kit（QIAGEN）とOligo(dT)12-18 Primer（Invitrogen）を用いて、Total RNAより作製した。
（３）遺伝子発現量に対する作用の測定
上記（２）で抽出したTotal RNAから合成したcDNAを用いて、Light Cycler LC480（ロシュ・ダイアグノスティックス）による蛍光色素SYBR GREEN I(同)を用いた常法のリアルタイムPCR法により、炎症関連因子〔IL-1β、IL-6、COX-2、iNOS（inducible nitric oxide synthase; 誘導型一酸化窒素合成酵素）〕の遺伝子発現量を測定した。検量線はDNA定量キットPicoGreen dsDNA Quantitation kit（Molecular Probes）で定量したPCR産物を102～107 copies/μLとなるように希釈し作成した。得られた各測定値より、内部標準のGlyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase（GAPDH）遺伝子10000 コピー当たりのコピー数を算出した。
結果の一例を表１０に示す。本化合物は、IL-1αによって誘発された炎症関連因子の遺伝子発現上昇に対して、抑制作用を示し、炎症抑制作用を有することが認められた。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000022
試験例２：ヒト単球系株化細胞（THP-1細胞）の炎症関連因子発現に対する抑制作用の評価
（１）THP-1細胞の培養
THP-1細胞をPMA（phorbol 12-myristate 13-acetate; 100 nM/L）で72時間分化誘導した後、THP-1細胞（5×105 cells/mL）を24ウェルプレート内のRPMI1640＋10%FCS培養液中で24時間培養した。その後、最終濃度が12.5μmol/mLになるように被験物質を添加し2時間前培養した後、最終濃度が10 mg/mLになるようにリポ多糖（LPS）を添加し、3時間後に細胞を回収した。
（２）THP-1細胞からのRNA抽出及びcDNAの合成
1ｍLのQIAzol Lysis Reagent（QIAGEN）を加えて懸濁し、200μLのクロロホルムを添加・混和後、遠心（4℃、1500rpm）して上清を回収した。Total RNAは、上清をQIACube（QIAGEN）と RNeasy Micro Kit（QIAGEN）を用いて、抽出・精製した。cDNAは、Omniscript RT kit（QIAGEN）とOligo(dT)12-18 Primer（Invitrogen）を用いて、Total RNAより作製した。
（３）遺伝子発現量に対する作用の測定
上記（２）で抽出したTotal RNAから合成したcDNAを用いて、Light Cycler LC480（ロシュ・ダイアグノスティックス）による蛍光色素SYBR GREEN I（同）を用いた常法のリアルタイムPCR法により、炎症関連因子〔IL-1β、IL-6、単球走化性タンパク質（MCP）-1〕の遺伝子発現量を測定した。検量線はDNA定量キットPicoGreen dsDNA Quantitation kit（Molecular Probes）で定量したPCR産物を102～107 copies/μLとなるように希釈し作成した。得られた各測定値より、内部標準のGAPDH遺伝子10000 コピー当たりのコピー数を算出した。
　結果の一例を表１１に示す。本化合物は、LPSによって誘発されたTHP-1細胞からの炎症関連因子の遺伝子発現上昇に対して抑制作用を示した。このことから、本化合物は抗炎症作用を有することが認められた。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000023
試験例３：培養ヒト肺線維芽細胞（NHLH細胞）の線維化関連因子の遺伝子発現に対する抑制作用の評価Ｉ
（１）NHLH細胞の培養
NHLF細胞を12ウェルプレートの各ウェルに4×104 cells/wellになるよう播種し、線維芽細胞基本培地（FBM、Lonza）に線維芽細胞添加因子セット-2（FGM-2 SingleQuots、Lonza）を添加した培地中で80%コンフルエントまで培養した。その後、2５μmol/Lの被験物質を含むダルベッコ改変イーグル（DMEM）培地で2時間培養し、最終濃度が5 ng/mLになるように腫瘍増殖因子（TGF）-βを添加して更に24時間培養した。
（２）NHLH細胞からのRNA抽出及びcDNAの合成
1ｍLのQIAzol Lysis Reagent（QIAGEN）を加えて懸濁し、200μLのクロロホルムを添加・混和後、遠心（4℃、1500 rpm）して上清を回収した。Total RNAは、上清をQIACube（QIAGEN）と RNeasy Micro Kit（QIAGEN）を用いて、抽出・精製した。cDNAは、Omniscript RT kit（QIAGEN）とOligo(dT)12-18 Primer（Invitrogen）を用いて、Total RNAより作製した。
（３）遺伝子発現量に対する作用の測定
上記（２）で抽出したTotal RNAから合成したcDNAを用いて、Light Cycler LC480（ロシュ・ダイアグノスティックス）による蛍光色素SYBR GREEN I（同）を用いた常法のリアルタイムPCR法により、線維化関連因子〔結合組織増殖因子（CTGF）、α-平滑筋アクチン（SMA）、フィブロネクチン、エンドセリン、I型コラーゲン（Col1）〕の遺伝子発現量を測定した。検量線はDNA定量キットPicoGreen dsDNA Quantitation kit（Molecular Probes）で定量したPCR産物を102～107 copies/μLとなるように希釈し作成した。得られた各測定値より、内部標準のGAPDH遺伝子10000 コピー当たりのコピー数を算出した。
　結果の一例を表１２に示す。本化合物は、TGF-βによって誘発されたNHLH細胞からの線維化関連因子の遺伝子発現上昇に対して抑制作用を示した。このことから、本化合物は抗線維化作用を有することが認められた。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000024
試験例４：NF-κB活性化に対する抑制作用の評価
（１）一過性発現細胞の作製
NF-κBレポーターベクターのpGL4.32 [luc2P/NF-κB-RE/Hygro]（Promega）、コントロールベクターのpGL4.74　[hRluc/TK] （Promega）及び遺伝子導入試薬　Lipofectamine LTX（Life Technologies）を含む調製液を、100 mm Dishに播種したヒト胎児腎臓細胞（HEK293T細胞）に添加し、レポータータンパク質を一過性に発現する細胞を作製した。
（２）ルシフェラーゼ活性の測定
遺伝子導入24時間後に一過性発現細胞をトリプシン処理により剥がし、ポリリシンコート白色96ウェルプレートに播種し、1晩培養した。最終濃度が25μmol/mLになるように被験物質を添加し、1時間プレインキュベートした後、最終濃度が10 ng/mLになるようにTNF-αを添加し、更に5時間培養した。細胞を溶解し、Dual-Glo Luciferase Assay System（Promega）を用いてホタルルシフェラーゼ及びウミシイタケルシフェラーゼの活性を測定した。TNF-α刺激による発光強度に対する各薬剤添加による発光強度の割合を算出した。
　結果の一例を表１３に示す。本化合物は、TNF-αによって誘発されたNF-κBの活性化に対して抑制作用を示した。このことから、本化合物は抗炎症作用を有することが認められた。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000025
試験例５：ブレオマイシン誘発肺線維症マウスの肺湿重量増加に対する抑制作用の評価
　ICR雄性マウスにブレオマイシン2 mg/kgを5日間反復静脈内投与した。正常対照群、発症対照群、被験物質投与群、ピルフェニドン（Pirfenidone）投与群の4群に群編成した。
被験物質は0.5w/v％のカルボキシメチルセルロ一スナトリウム（CMC）で懸濁し、撹拌しながらラット用経ロゾンデを用いて50 mg/kgを1日2回2週間反復経口投与した。ピルフェニドンは0.5 w/v％のCMCで懸濁し、撹拌しながらラット用経ロゾンデを用いて200 mg/kgを1日2回2週間反復経口投与した。正常対照群及び発症対照群には、同様の投与スケジュールで0.5 w/v％のCMCを反復経口投与した。投与期間終了後、マウスより両肺を摘出し、湿重量を測定した。
　結果の一例を表１４に示す。本化合物は、ブレオマイシンによって誘発された肺線維症モデルマウスにおける肺線維化に対して抑制作用を示し、その程度は抗線維化剤として日本で承認されたピルフェニドンと同等であった。このことから、本化合物は抗線維化作用を有することが認められた。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000026
試験例６：ニコチン誘発椎間板変性症ラットの下肢痛覚過敏及び歩行持続時間の低下に対する抑制作用の評価
（１）ニコチン誘発椎間板変性症ラットの作製
ＳＤ雄性ラットを入荷16日後に体重、機械刺激に対する50％反応閾値（測定方法は後述）及び歩行持続時間から正常対照群とニコチン群に編成し、入荷17日後にニコチン群にはニコチン曝露を開始した。ニコチンは生理食塩液で344.8 mg/mLに調製して浸透圧ポンプに封入し、ラットの腰部皮下に留置した。また、留置21日後に、正常対照群以外の5群のラットの皮下に、新たに調製したニコチン溶液を封入した浸透圧ポンプを留置した。ニコチンは生理食塩液で357.0 mg/mLに調製して浸透圧ポンプに封入し、SD雄性ラットの腰部皮下に留置した。
（２）群編成
ニコチン曝露開始13日後に機械刺激に対する50％反応閾値、歩行持続時間及び体重を測定して正常対照群、発症対照群、化合物57投与群、化合物58投与群、化合物60投与群、化合物68投与群の６群に群編成した。
（３）被験物質の投与
被験物質は0.5 w/v％のCMCで懸濁し、撹拌しながらラット用経ロゾンデを用いて10 mL/kg をニコチン曝露開始14から52又は53日後まで1日1回反復経口投与した。正常対照群及び発症対照群には、同様の投与スケジュールと投与方法で0.5 w/v％のCMCを反復経口投与した。
（４）機械刺激に対する50％反応閾値の測定（フォン・フライ試験）
　機械刺激に対する50％反応閾値は、ニコチン曝露開始前及びニコチン曝露開始41日後に測定した。底が金網の透明アクリルゲージに、上記（２）記載の6群のラットを入れ、約3分間馴化させた後に、機械刺激に対する50％反応閾値を、被験薬の投与1時間後に測定した。
　測定は、Chaplanら（Journal of Neuroscience Methods、53巻、1号、55-63頁、1994年）及びDixonら（Annual Review of Pharmacology and Toxicology、20巻、441-462頁、1980年）の方法に準じ、フォン・フライ フィラメント（von Frey filament、North Coast Medical Inc.製）を用いて行った。8本のフィラメント〔刺激荷重（g）：0.4、0.6、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、15.0〕のうち、2.0ｇのフィラメントより開始し、軽度にフィラメントが湾曲する程度の力で2～3秒間、足底に対し垂直に当て、後肢が逃避反応を示した場合を陽性反応とした。陽性反応が見られた場合は一つ下の、反応がなかった場合は一つ上の強さのフィラメントで同様に刺激し、反応が陰性から陽性へ又は陽性から陰性へ変化した時点を最初の2反応とし、その後4回連続してup-down法により刺激を行った。合計6回の刺激に対する反応を用いて、機械刺激に対する50％反応閾値を測定し、各群の平均値を算出した。なお、陽性反応がないまま15.0 gの刺激まで行った場合は15.0 g、逆に陽性反応が0.4 gまで続いた場合は0.25 gを各々の閾値（疼痛閾値）とした。
（５）歩行持続時間の測定
　ニコチン曝露開始前及びニコチン曝露開始48日後にラット・マウス兼用ロータロッドを用いてラットの歩行持続時間を測定した。回転速度は、ロータが停止した状態から回転を開始して、等加速度で300秒後に15回転／分になるように設定した。ラットは、ロータが停止した状態でロータの上に乗せてからロータを回転させ、落下するまでの時間を測定（最高300秒）し、3試行の平均値を求めた。
　上記（４）及び（５）の結果の一例を表１５に示す。本化合物は、ニコチン曝露による下肢痛覚過敏及び歩行障害に対して、強力な抑制作用を示した。このことから、本化合物は椎間板変性疾患による痛覚過敏抑制作用及び歩行障害抑制作用を有することが認められた。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000027
試験例７：培養ヒト肺線維芽細胞（NHLH細胞）の線維化関連因子の遺伝子発現に対する抑制作用の評価II
（１）NHLH細胞の培養
NHLF細胞を24ウェルプレートの各ウェルに5×104 cells/wellになるよう播種し、線維芽細胞基本培地（FBM、Lonza）に線維芽細胞添加因子セット-2（FGM-2 SingleQuots、Lonza）を添加した培地中で80%コンフルエントまで培養した。その後、30μMの被験物質、200μg/mLのピルフェニドン、30μMのデキサメタゾン（DEX）、1.0μMのTPCA－1又は10μMのフルチカゾンプロピオン酸エステル（FP）を含むDMEM培地で2時間培養し、最終濃度が0.5 ng/mLになるようにTGF-βを添加して更に4時間培養した。
NHLH細胞からのRNA抽出、RNAからのcDNAの合成、並びに、線維化関連因子〔CTGF、TGF-β1、フィブロネクチン、Col1〕の遺伝子発現に対する被験物質の作用は、上記試験例３の（２）及び（３）と同様に試験を実施した。
　結果の一例を表１６に示す。本化合物は、TGF-βによって誘発されたNHLH細胞からの線維化関連因子の遺伝子発現上昇に対して、ピルフェニドン、DEX、FPより強い抑制作用を示した。このことから、本化合物は優れた抗線維化作用を有することが認められた。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000028
上記の薬理試験結果に示したとおり、本発明は、優れた炎症関連因子発現抑制作用並びに線維化関連因子発現抑制作用を有し、動物実験においても肺線維症モデルにおける優れた肺線維化抑制作用並びに椎間板変性疾患モデルにおける優れた痛覚過敏抑制作用及び歩行障害抑制作用を有するものである。従って、本発明は、炎症性疾患又は椎間板変性疾患の予防又は治療剤として有用性の高いものである。

Claims (13)

  1. 　下記一般式（I）で表されるクマリン誘導体並びにその薬学的に許容される塩及び水和物の少なくとも一種を含有する炎症性疾患又は椎間板変性疾患の予防又は治療剤。
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
     〔式中、R1及びR2は同一又は異なって、（a）アルコキシ、アルキル、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、トリフルオロメチル、アミノ、カルボキシ、アルコキシカルボニル、フェニル又は1若しくは2のハロゲンで置換されていてもよいフェニル、（b）ピリジル、（c）アルキル又は（d）チエニルを表す。〕
  2. 　R1及びR2が同一又は異なって、アルコキシ、アルキル、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、トリフルオロメチル、アミノ、カルボキシ、アルコキシカルボニル、フェニル又は1若しくは2のハロゲンで置換されていてもよいフェニルである請求項１に記載の予防又は治療剤。
  3. 　R1及びR2が同一又は異なって、アルコキシ、アルキル、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、トリフルオロメチル、アミノ、カルボキシ、アルコキシカルボニル、フェニル又は1若しくは2のハロゲンで置換されているフェニルである請求項２に記載の予防又は治療剤。
  4. 　R1及びR2の両方がトリフルオロメチルで置換されているフェニルである請求項３に記載の予防又は治療剤。
  5. 　R1又はR2の一方がトリフルオロメチルで置換されているフェニルである請求項３に記載の予防又は治療剤。
  6. 　R1又はR2の一方がトリフルオロメチルで置換されているフェニルであり、他方がハロゲンで置換されているフェニルである請求項５に記載の予防又は治療剤。
  7. 　ハロゲンが臭素である請求項６に記載の予防又は治療剤。
  8. 炎症性疾患が、慢性閉塞性肺疾患又は肺線維症である請求項１乃至７のいずれか一項に記載の予防又は治療剤。
  9. 経口剤である請求項１乃至８のいずれか一項に記載の予防又は治療剤。
  10. 注射剤である請求項１乃至８のいずれか一項に記載の予防又は治療剤。
  11. 外用剤である請求項１乃至８のいずれか一項に記載の予防又は治療剤。
  12. 外用剤が吸入剤である請求項１１に記載の予防又は治療剤。
  13. 吸入剤が経肺投与剤である請求項１２に記載の予防又は治療剤。
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