WO2015126226A1 - 녹차 잎자루 유래 추출물을 함유하는 피부 미백용 조성물 - Google Patents

녹차 잎자루 유래 추출물을 함유하는 피부 미백용 조성물 Download PDF

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WO2015126226A1
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WO
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green tea
skin
composition
present
tea leaf
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PCT/KR2015/001775
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유세진
황정아
김서영
신송석
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주식회사 아모레퍼시픽
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    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/97—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
    • A61K8/9783—Angiosperms [Magnoliophyta]
    • A61K8/9789—Magnoliopsida [dicotyledons]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/02—Preparations for care of the skin for chemically bleaching or whitening the skin

Definitions

  • the present invention relates to a composition for skin whitening, which is safe for the skin and at the same time has an excellent skin whitening effect and contains a high green tea leaf extract derived from the high stability.
  • Human skin color is determined by several factors, such as the activity of melanocytes (melanocytes) that make melanin pigment, the distribution of blood vessels, the thickness of the skin, and the presence or absence of pigments in and outside the body, such as carotenoids and bilirubin.
  • melanocytes melanocytes
  • a black pigment called melanin produced by the action of various enzymes such as tyrosinase in melanocytes is the most important factor.
  • the formation of melanin pigment is influenced by genetic factors, physiological factors related to hormone secretion, stress, and environmental factors such as ultraviolet irradiation.
  • Melanin is present in the skin and plays an important role in protecting the body from ultraviolet rays, but it is known that the production of melanin promotes pigmentation and skin aging and also plays a major role in inducing skin cancer.
  • Ascorbic acid, kojic adcid, arbutin, and hydroquinone (hudroquinone) to treat or alleviate excessive melanin pigmentation caused by abnormal skin pigmentation symptoms and UV exposure.
  • Glutathione or derivatives thereof, and substances having tyrosinase inhibitory activity have been used in cosmetics and pharmaceuticals, which have insufficient whitening effects, safety problems for the skin, and when formulated in cosmetics. Its use is limited due to stability problems.
  • the present inventors have found that the extract of green tea leaf, which has been discarded without being used in the past, can provide an excellent skin whitening effect without irritation to the skin, thereby completing the present invention.
  • an object of the present invention is to provide a composition that exhibits an excellent skin whitening effect by using extracts derived from green tea leaf.
  • the present invention provides a skin external preparation composition for whitening containing green tea leaf extract derived as an active ingredient.
  • the present invention has excellent utilization value in terms of utilization of waste resources by using green tea stalks that have been discarded and not utilized.
  • the composition of the present invention contains extracts derived from green tea leaves, which is safe for the skin and has high formulation stability, exhibits excellent skin whitening effect, reduces pigmentation symptoms such as blemishes and freckles, improves skin dullness, and improves skin dullness. Make it look bright.
  • FIG. 1 is a graph showing the results of high performance liquid chromatography (HPLC) analysis of green tea leaf extract.
  • composition of the present invention contains green tea leaf extract as an active ingredient, it can provide an excellent skin whitening effect.
  • Green tea has generally used the leaves of Camellia sinensis.
  • the present invention is not limited to the type of tea tree and the number of days of cultivation, the use site is characterized in that the petiole.
  • the petioles used in the present invention can be used both dried and undried.
  • the petiole of green tea used in the present invention is a site also called lobe, and the tube bundle in the petiole serves to connect the tube bundle of the stem and the tube bundle of the leaf body, and was previously discarded after collecting the leaves from the tea tree.
  • the present inventors analyzed the green tea stalks, it could be predicted that the green tea leaves had a great difference in the type and content of the contained ingredients, and thus, there would be a difference in the effect provided with the green tea leaves.
  • the present invention is also excellent in terms of utilization of waste resources It is worth it.
  • Green tea petiole-derived extract used in the present invention may be prepared by a method known in the art, and the method is not particularly limited, but preferably a method of extracting a water-soluble component contained in the green tea petiole.
  • the extract is added to the dried green tea stalk by adding hot water five times the weight of the green tea stalk, specifically purified water having a temperature of 80 ⁇ 90 °C. After heating and stirring for 2 hours while maintaining the temperature and cooling the temperature to room temperature, only the water-soluble component is separated and it is first filtered. Ethanol corresponding to twice the total weight of the filtrate is added while stirring slowly, chlorophyll of the supernatant is removed, and only the precipitates are collected and hot air dried. Maintain 30 ⁇ 40 °C when drying hot air to prevent heat denaturation. In this way it is possible to prepare extracts derived from green tea stalks used in the present invention.
  • the green tea leaf-derived extract prepared in this manner contains 0.90% of catechin and 0.12% of caffeine, and differs in content from the general green tea leaf extract containing 22.1% of catechin and 4.61% of caffeine. The effects exhibited by this also differ from each other.
  • the composition of the present invention may contain the green tea leaf extract derived in an amount of 0.001 to 20% by weight based on the total weight of the composition. If the green tea leaf extract derived from less than 0.001% relative to the total weight of the composition, the expression of the whitening effect is weak, when it contains more than 20% by weight may cause skin irritation.
  • composition of the present invention has excellent skin whitening efficacy, safe to the skin and high in stability is preferable for industrial use.
  • composition of the present invention may be formulated as an external composition for skin, in particular a cosmetic composition, and may be formulated containing a cosmetically or dermatologically acceptable medium or base.
  • compositions of the present invention may be provided in all formulations suitable for topical application, for example, emulsions obtained by dispersing an oil phase in a solution, an aqueous phase, emulsions obtained by dispersing an aqueous phase in an oil phase, suspensions, solids, gels, powders, It may be provided in the form of a paste, foam or aerosol composition.
  • Compositions of such formulations may be prepared according to conventional methods in the art.
  • composition according to the present invention may include other ingredients in addition to the above-mentioned materials within a range not impairing the main effect, preferably a synergistic effect on the main effect.
  • the composition according to the present invention may further include a moisturizer, an emulsifier, a UV absorber, a preservative, a fungicide, an antioxidant, a pH adjuster, organic and inorganic pigments, flavoring, cooling agent or limiting agent.
  • the blending amount of the above components can be easily selected by those skilled in the art within the range that does not impair the object and effect of the present invention, the blending amount may be 0.01 to 5% by weight, specifically 0.01 to 3% by weight relative to the total weight of the composition. .
  • compositions of the present invention may be formulated as pharmaceutical compositions.
  • the composition according to the present invention When the composition according to the present invention is applied to a pharmaceutical product, it may be formulated as an oral or parenteral dosage form in the form of a solid, semi-solid or liquid by adding a commercially available inorganic or organic carrier to the active ingredient used in the present invention.
  • the pharmaceutical composition according to the invention can be administered orally, parenteral, rectal, topical, transdermal, intravenous, intramuscular, intraperitoneal, subcutaneous.
  • Formulations for oral administration include tablets, pills, granules, capsules, powders, fine granules, powders, emulsions, syrups, pellets and the like.
  • the formulation for parenteral administration includes injections, drops, ointments, lotions, sprays, suspensions, emulsions, suppositories, and the like.
  • the composition according to the present invention can be easily formulated by carrying out according to a conventional method, and at this time, surfactants, excipients, coloring agents, spices, preservatives, stabilizers, buffers, suspending agents, and other commercially available auxiliaries can be suitably used. have.
  • the dosage of the active ingredient of the pharmaceutical composition of the present invention will vary depending on the age, sex, weight, pathology and severity of the subject to be administered, the route of administration or the judgment of the prescriber. Determination of a suitable dose based on these factors is within the level of one of skill in the art and its daily dosage may be, for example, 0.1 mg / kg / day to 100 mg / kg / day, more specifically 5 mg / kg / day to 50 mg / kg. May be, but is not limited to.
  • Purified water having a temperature of 80-90 ° C. was added to the dried green tea stalk (purchased by Jangwon Co., Ltd.) in an amount of 5 times the weight of the green tea sack, and the mixture was heated and stirred for 2 hours while maintaining the temperature. After cooling to room temperature, only water-soluble components were separated and Adventec No. Primary filtration was performed using 131 (Adventec MFS, Inc., Japan). Add ethanol equivalent to 2 times the total weight of the filtrate with slow stirring, remove the chlorophyll from the supernatant, collect only the precipitate, dry it with hot air while maintaining the temperature of 30-40 °C, and extract the green tea leaf extract derived from the white powder. Obtained as (yield: 1-3%).
  • Purified water having a temperature of 80-90 ° C. was added to the amount of 5 times the weight of the green tea leaves at the Amorepacific Sulloc tea plant, and the mixture was heated and stirred for 2 hours while maintaining the temperature. After cooling to room temperature, only water-soluble components were separated and Adventec No. Primary filtration was performed using 131 (Adventec MFS, Inc., Japan). After filtration, the resultant was concentrated using a vacuum distillation apparatus and dried using a lyophilizer to obtain green tea leaf extract as a yellowish brown powder.
  • the liquid chromatography used in the experiment is Waters's Alliance 2695, to which a 2996 photodiode array UV detector (PDA) is connected.
  • the column used a Waters symmetry C18 column (4.6 mm x 7.5 cm, 3.5 ⁇ m), and data processing was performed using Waters' Empower II program. Injection volume was set to 20.00 ⁇ l.
  • C catechin
  • GC gallocatechin
  • CG catechin gallate
  • GCG gallocatechin gallate
  • EC epicatechin
  • EGC epigallo catechin
  • ECG epicatechin gallate
  • EGCG epigallocatechin gallate
  • CAF Caffeine
  • The% Area for each component in Table 1 above means the area of the graph shown in FIG. 1, which increases in proportion to the amount of components contained.
  • the melanin production inhibitory effect of the green tea leaf extract derived from Example 1 was evaluated in comparison with the green tea leaf derived extract obtained in Comparative Example 1 and arbutin, a known skin whitening substance.
  • the cells used melan-a cells derived from normal epidermal melanoblasts of syngeneic C57BL mouse embryos.
  • Example 1 Comparative Example 1
  • arbutin was dissolved in water in a 1% stock.
  • Table 2 the experimental concentration shown in Table 2.
  • the control did not process any test substance for comparison at this time.
  • test material was treated, the medium was removed and the cells were removed by tapping by washing with DPBS. Thereafter, 100 ⁇ l of 2N NaOH was added thereto and incubated for 1 hour in an incubator. 90 ⁇ l of cell lysate was transferred to a 96 well plate and the absorbance was measured at 475 nm of ELISA Reader (Synergy 2, BIOTEK, USA).
  • the protein was quantified using the BCA method.
  • 200 ⁇ l of BCA (Bicinchoninic acid) solution (a liquid: thermo 23228, b liquid: PIERCE 1859078) was added to 10 ⁇ l of the sample per well, and then left for 30 minutes in an incubator, and then absorbance was measured at 560 nm.
  • the green tea leaf extract shows a different effect from the green tea leaf extract and can be used as a very good skin lightening material.
  • the green tea leaf-derived extract obtained in Example 1 was dissolved in water, and a solution made at a concentration of 10% was evenly applied to the skin of the back in an amount of 20 mg / cm 2 .
  • the patch was applied to the site after application, the patch was removed after 24 hours, the first reading was taken after 30 minutes, the second reading was taken after 24 hours, and the last reading was considered definite.
  • weight is given according to the degree of skin reaction (-, +, ++, +++, ++++), 0, 1, 2, 3, 4 respectively.
  • To obtain the average reactivity of the skin and when the average reactivity is 1 or more was read as a positive stimulus. Specific criteria for determination are shown in Table 3 below. In addition, the average skin reactivity was calculated by the following Equation 2, and the result determination criteria are shown in Table 4 below.
  • the average skin reactivity after using the extract derived from green tea leaves was between 0.0 and 0.9 and finally determined that there was no irritation to the skin.
  • composition shown in Table 5 was prepared in the conventional method for the flexible cosmetic.
  • Nutritional longevity was prepared according to the composition described in Table 6 below in a conventional manner.
  • Nutritional cream was prepared in a conventional manner according to the composition shown in Table 7.
  • Table 8 Compounding ingredient Content (% by weight) Green tea leaf extract derived from Example 1 3.0 glycerin 8.0 Butylene glycol 4.0 Liquid paraffin 45.0 Beta Glucan 7.0 Carbomer 0.1 Caprylic / Capric Triglycerides 3.0 Beeswax 4.0 Cetearyl Glucoside 1.5 Sesqui oleic acid sorbitan 0.9 Vaseline 3.0 paraffin 1.5 Preservative, coloring, flavoring Quantity Purified water Remaining amount
  • the ointment was prepared in a conventional manner according to the composition described in Table 10 below.

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Abstract

본 발명은 피부에 안전하면서, 동시에 우수한 피부 미백 효능을 가지고 안정성이 높은 녹차 잎자루 유래 추출물을 함유하는 피부 미백용 조성물에 관한 것이다. 본 발명은 기존에 활용되지 못하고 폐기되었던 녹차 잎자루를 이용함으로써 폐자원의 활용 측면에서 우수한 이용 가치가 있다. 또한, 본 발명의 조성물은 녹차 잎자루 유래 추출물을 함유함으로써 피부에 안전하면서도 제형 안정성이 높으며, 우수한 피부 미백 효과를 나타내어 기미, 주근깨와 같은 색소 침착 증상을 감소시키고, 피부 칙칙함을 개선시켜 피부색을 균일하고 밝게 보일 수 있게 한다.

Description

녹차 잎자루 유래 추출물을 함유하는 피부 미백용 조성물
본 발명은 피부에 안전하면서, 동시에 우수한 피부 미백 효능을 가지고 안정성이 높은 녹차 잎자루 유래 추출물을 함유하는 피부 미백용 조성물에 관한 것이다.
사람의 피부색은 멜라닌 색소를 만드는 멜라노사이트(melanocyte)의 활동성, 혈관의 분포, 피부의 두께, 및 카로티노이드, 빌리루빈 등 인체 내외의 색소 함유 유무와 같은 여러 요인들에 의해 결정된다. 특히 멜라노사이트에서 타이로시나제(tyrosinase) 등의 여러 효소가 작용하여 생성되는 멜라닌이라는 흑색 색소가 가장 중요한 요인이다. 멜라닌 색소의 형성에는 유전적 요인, 호르몬 분비, 스트레스 등과 관련된 생리적 요인 및 자외선 조사 등과 같은 환경적 요인이 영향을 미친다. 멜라닌은 피부에 존재하여 자외선 등으로부터 신체를 보호하는 중요한 기능을 하지만 멜라닌이 과잉생산됨으로써 색소침착 및 피부노화를 촉진하고 피부암 유발에도 주요한 작용을 하는 것으로 알려져 있다. 피부색소 이상 침착 증상과 자외선 노출 등에 의해 발생된 과도한 멜라닌 색소 침착을 치료 또는 경감시켜주기 위해서 이전부터 아스코르빈산(ascorbic acid), 코지산(kojic adcid), 알부틴(arbutin), 하이드로퀴논(hudroquinone), 글루타치온(glutathione) 또는 이들의 유도체, 타이로시나제 저해활성을 가진 물질들을 화장료나 의약품에 배합하여 사용해 왔는데, 이들은 불충분한 미백 효과, 피부에 대한 안전성 문제, 및 화장료에 배합시 제형 내에서의 안정성 문제 등으로 인해 그 사용이 제한되고 있다.
이에 본 발명자들은 기존에 활용되지 않고 버려졌던 녹차 잎자루의 추출물이 피부에 자극이 없으면서 우수한 피부 미백 효과를 제공할 수 있음을 발견하고 본 발명을 완성하게 되었다.
따라서, 본 발명은 녹차 잎자루 유래 추출물을 사용함으로써 우수한 피부 미백 효과를 나타내는 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
상기한 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 녹차 잎자루 유래 추출물을 유효성분으로 함유하는 미백용 피부 외용제 조성물을 제공한다.
본 발명은 기존에 활용되지 못하고 폐기되었던 녹차 잎자루를 이용함으로써 폐자원의 활용 측면에서 우수한 이용 가치가 있다. 또한, 본 발명의 조성물은 녹차 잎자루 유래 추출물을 함유함으로써 피부에 안전하면서도 제형 안정성이 높으며, 우수한 피부 미백 효과를 나타내어 기미, 주근깨와 같은 색소 침착 증상을 감소시키고, 피부 칙칙함을 개선시켜 피부색을 균일하고 밝게 보일 수 있게 한다.
도 1은 녹차 잎자루 추출물의 HPLC (high performance liquid chromatography) 분석 결과를 나타낸 그래프이다.
본 발명의 조성물은 녹차 잎자루 추출물을 유효성분으로서 함유하여, 우수한 피부 미백 효과를 제공할 수 있다.
녹차(Green tea)는 일반적으로 차나무(Camellia sinensis)의 잎을 이용하여 왔다. 그러나, 본 발명에서는 차나무의 종류 및 재배 일수에는 제한이 없으나, 사용 부위는 잎자루인 것을 특징으로 한다. 또한, 본 발명에서 사용되는 잎자루는 말리거나 말리지 않은 것을 모두 사용할 수 있다.
본 발명에서 사용되는 녹차의 잎자루는 엽병이라고도 하는 부위로서, 잎자루 속의 관다발은 줄기의 관다발과 잎몸의 관다발을 연락하는 역할을 하며, 기존에는 차나무에서 잎을 채취한 후 버려지는 부위였다. 그러나, 본 발명자들이 녹차 잎자루를 분석한 결과, 녹차 잎과는 포함된 성분의 종류 및 함량에 있어서 큰 차이를 나타내어 녹차 잎과는 제공하는 효과에 있어서 차이가 있을 것임을 예측할 수 있었다.
또한, 기존에는 활용되지 못하고 폐기되었던 녹차 잎자루 유래의 추출물을 제조하고 이를 상품에 적용함으로써, 고부가가치의 기능성 소재 및 응용제품으로의 이용이 가능하게 되므로, 본 발명은 폐자원의 활용 측면에서도 우수한 이용 가치가 있다.
본 발명에서 사용되는 녹차 잎자루 유래 추출물은 당업계에 공지된 방법에 의해 제조될 수 있으며, 그 방법이 특별히 한정되지는 않지만, 바람직하게는 녹차 잎자루에 포함된 수용성 성분을 추출하는 방법을 이용한다.
구체적으로, 건조된 녹차 잎자루에 녹차 잎자루 중량 대비 5배의 열수, 구체적으로 온도가 80~90℃인 정제수를 가하여 추출한다. 온도를 유지하며 2시간 가열 교반하고 상온으로 온도를 식힌 후에, 수용성 성분만 분리하고, 이를 1차 여과한다. 여과액 전체 중량 대비 2배에 해당하는 에탄올을 천천히 교반하면서 첨가하고, 상등액의 클로로필은 제거하고, 침전된 것만 모아 열풍 건조한다. 열풍 건조시 30~40℃를 유지시켜주어, 열변성을 방지한다. 이러한 방법으로 본 발명에서 사용되는 녹차 잎자루 유래 추출물을 제조할 수 있다.
이와 같은 방법으로 제조한 녹차 잎자루 유래 추출물은 카테킨을 0.90%, 카페인을 0.12% 함유하여, 카테킨을 22.1%, 카페인을 4.61%로 함유하는 일반 녹차 잎 추출물과는 그 구성 성분의 함량이 상이하며, 이에 의하여 나타내는 효과도 서로 상이하다.
본 발명의 조성물은 녹차 잎자루 유래 추출물을 조성물 총 중량에 대하여 0.001~20중량%의 양으로 함유할 수 있다. 녹차 잎자루 유래 추출물이 조성물 총 중량에 대하여 0.001% 미만으로 함유되는 경우 미백효과의 발현이 미약하고, 20 중량% 이상으로 함유하는 경우 피부 자극감을 유발할 수 있다.
본 발명의 조성물은 우수한 피부 미백 효능을 가지면서, 피부에 안전하고 안정도가 높아 산업적으로 이용하기에 바람직하다.
본 발명의 조성물은 피부 외용제 조성물, 특히 화장료 조성물로서 제형화될 수 있으며, 화장품학 또는 피부과학적으로 허용 가능한 매질 또는 기제를 함유하여 제형화될 수 있다. 또한, 본 발명의 조성물은 국소 적용에 적합한 모든 제형으로 제공될 수 있으며, 예를 들어 용액, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 유상에 수상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 고체, 겔, 분말, 페이스트, 포말(foam) 또는 에어로졸 조성물의 제형으로 제공될 수 있다. 이러한 제형의 조성물은 당해 분야의 통상적인 방법에 따라 제조될 수 있다.
또한, 본 발명에 따른 조성물은 상기한 물질 이외에 주 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서, 바람직하게는 주 효과에 상승 효과를 줄 수 있는 다른 성분들을 포함할 수 있다. 또한 본 발명에 따른 조성물은 보습제, 에몰리언트제, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, pH 조정제, 유기 및 무기 안료, 향료, 냉감제 또는 제한제를 더 포함할 수 있다. 상기 성분의 배합량은 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 당업자가 용이하게 선정 가능하며, 그 배합량은 조성물 총 중량에 대하여 0.01~5중량%, 구체적으로 0.01~3중량%일 수 있다.
또한, 본 발명의 조성물은 약학 조성물로서 제형화될 수 있다. 본 발명에 따른 조성물을 의약품에 적용할 경우에는, 본 발명에서 사용되는 유효성분에 상용되는 무기 또는 유기의 담체를 가하여 고체, 반고체 또는 액상의 형태로 경구 투여제 혹은 비경구 투여제로 제형화할 수 있으며, 본 발명에 따른 상기 약학 조성물은 경구, 비경구, 직장, 국소, 경피, 정맥 내, 근육 내, 복강 내, 피하 등으로 투여될 수 있다.
상기 경구 투여를 위한 제형으로서는 정제, 환제, 과립제, 캡슐제, 산제, 세립제, 분제, 유탁제, 시럽제, 펠렛제 등을 들 수 있다. 또한, 상기 비경구 투여를 위한 제형으로는 주사제, 점적제, 연고, 로션, 스프레이, 현탁제, 유제, 좌제 등을 들 수 있다. 본 발명에 따른 조성물은 상법에 따라 실시함으로써, 유효성분을 용이하게 제형화할 수 있으며, 이 때 계면활성제, 부형제, 착색료, 향신료, 보존료, 안정제, 완충제, 현탁제, 기타 상용하는 보조제를 적당히 사용할 수 있다.
본 발명의 약학 조성물의 유효 성분의 투여 용량은 투여받을 대상의 연령, 성별, 체중, 병리 상태 및 그 심각도, 투여 경로 또는 처방자의 판단에 따라 달라질 것이다. 이러한 인자에 기초한 적당한 용량의 결정은 당업자의 수준 내에 있으며, 이의 1일 투여 용량은 예를 들어 0.1mg/kg/일 내지 100mg/kg/일, 보다 구체적으로는 5mg/kg/일 내지 50mg/kg/일이 될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
[실시예 1] 녹차 잎자루 유래 추출물의 제조
건조된 녹차 잎자루(구입처: ㈜장원)에 온도가 80~90℃인 정제수를 녹차 잎자루 중량 대비 5배의 양으로 가하고, 온도를 유지하면서 2시간 가열 교반하였다. 상온으로 온도를 식힌 후에, 수용성 성분만 분리하고, Adventec No. 131(Adventec MFS, Inc., 일본)을 이용하여 1차 여과하였다. 여과액 전체 중량 대비 2배에 해당하는 에탄올을 천천히 교반하면서 첨가하고, 상등액의 클로로필은 제거하고, 침전된 것만 모아, 30~40℃의 온도를 유지하면서 열풍 건조시켜, 녹차 잎자루 유래 추출물을 백색 파우더로서 수득하였다(수율: 1~3%).
[비교예 1] 녹차 잎 추출물의 제조
아모레퍼시픽 설록차 사업장에서 옥록 2번 잎차에 온도가 80~90℃인 정제수를 녹차 잎 중량 대비 5배의 양으로 가하고, 온도를 유지하면서 2시간 가열 교반하였다. 상온으로 온도를 식힌 후에, 수용성 성분만 분리하고, Adventec No. 131(Adventec MFS, Inc., 일본)을 이용하여 1차 여과하였다. 여과후 감압 증류장치를 이용하여 농축한 후 동결건조기를 이용함으로써 건조시켜, 녹차 잎 추출물을 노란갈색 파우더로서 수득하였다.
[시험예 1] 녹차 잎자루에서 추출된 성분의 정량 분석
녹차 잎자루에 함유된 성분을 알아보기 위하여, 실시예 1에서 제조된 녹차 잎자루 추출물에 대한 HPLC 분석을 실시하고, 결과를 도 1 및 표 1에 나타내었다.
실험에 사용된 액체크로마토그래피는 워터스(Waters)사의 Alliance 2695이고, 여기에 2996 포토다이오드어레이 유브이 검출기(PDA)가 연결된 시스템이다. 컬럼은 워터스(Waters)사의 symmetry C18 컬럼(4.6 mm x 7.5 cm, 3.5 ㎛)을 사용하였고, 데이터 처리는 워터스(Waters)사의 Empower II 프로그램을 사용하였다. 주입부피(injection volume)는 20.00μl로 하였다.
표 1
Peak Name RT Area % Area Height Amount
1 GC 5.832 33599 2.26 3547 10.230
2 EGC 9.519 106220 7.13 6820 34.724
3 C 12.990 25360 1.70 1474 2.517
4 CAF 15.324 574818 38.59 35113 12.677
5 EC 21.903 70493 4.73 3923 6.050
6 EGCG 22.999 547080 36.73 23985 26.005
7 GCG 27.178 74962 5.03 3896 8.583
8 ECG 39.105 56849 3.82 3028 3.946
9 CG 40.724
(C: 카테킨, GC: 갈로카테킨, CG: 카테킨 갈레이트, GCG: 갈로카테킨 갈레이트, EC: 에피 카테킨, EGC: 에피갈로 카테킨, ECG: 에피카테킨 갈레이트, EGCG: 에피갈로카테킨 갈레이트, CAF: 카페인)
상기 표 1의 각 구성성분에 대한 % Area는 도 1에 나타난 그래프의 면적을 의미하고, 이는 함유된 성분의 양에 비례하여 커진다. 각 성분의 면적비율을 표준면적과 비교하여 녹차 잎자루 추출물의 성분을 정량한 결과, 녹차 잎자루 추출물은 총 카테킨을 0.90%, 카페인을 0.12% 함유한다는 것을 확인할 수 있었다.
[시험예 2] 멜란-a(Melan-a) 세포를 이용한 멜라닌 생성 억제능 평가
상기 실시예 1에서 얻은 녹차 잎자루 유래 추출물의 멜라닌 생성 억제 효과를 비교예 1에서 얻은 녹차 잎 유래 추출물 및 공지된 피부 미백 물질인 알부틴과 비교하여 평가하였다. 세포는 동계번식시킨 C57BL 마우스 배아의 정상 표피 멜라노블라스트에서 유래한 멜란-a 세포를 사용하였다.
48 웰 플레이트에 1.5 X 104 세포수/웰로 씨딩한 후 24시간 배양하였다. 24시간 배양 후 및 4일간 배양 후 시험 물질을 처리하였으며, 이 때 사용한 시험 물질인 상기 실시예 1 및 비교예 1에서 얻은 추출물은 DMSO에 용해시킨 스톡을 사용하였고, 알부틴은 물에 녹인 1% 스톡을 하기 표 2에 제시된 실험 농도에 맞도록 배지에 희석하여 사용하였다. 또한, 이때 비교를 위하여 대조군은 어떠한 시험 물질도 처리하지 않았다.
시험 물질을 처리한 후, 배지를 제거하고, DPBS로 세포를 세척하여 태핑(tapping)으로 제거하였다. 그 후 2N NaOH를 100㎕씩 넣고, 인큐베이터에서 1시간 동안 배양하였다. 세포 용해물 90㎕를 96웰 플레이트에 옮겨 ELISA Reader(Synergy 2, BIOTEK, USA) 475nm에서 흡광도를 측정하였다.
또한, 단백질을 BCA법을 사용하여 단백질을 정량하였다. 웰당 시료 10㎕에 BCA(Bicinchoninic acid) 용액(a액: thermo 23228, b액: PIERCE 1859078)을 200㎕씩 넣은 후 인큐베이터에서에서 30분 방치한 다음 560nm에서 흡광도를 측정하였다.
결과는 하기 수학식 1과 같이 대조군의 멜라닌의 양에 대하여 시험 물질을 처리한 경우의 멜라닌의 양의 값을 백분율로 계산하여 하기 표 2에 나타내었다. 또한, 이 때 멜라닌 양은 상기 BCA법으로 측정한 결과를 이용하여 보정한 단백질 보정값을 사용하였다.
수학식 1
Figure PCTKR2015001775-appb-M000001
표 2
시험물질 멜라닌 양(%)
대조군(무첨가) 100
실시예 1(3.12ppm) 83.1
실시예 1(6.25ppm) 78.4
실시예 1(12.5ppm) 73.9
실시예 1(25ppm) 68.3
비교예 1(25ppm) 97.6
알부틴(25ppm) 73.5
상기 표 2를 보면, 녹차 잎 추출물인 비교예 1을 처리한 경우에는 멜라닌의 양이 거의 감소하지 않은 반면, 녹차 잎자루 추출물을 처리한 경우에는 훨씬 더 낮은 양으로 처리한 경우에도 멜라닌의 양이 감소하는 것을 확인할 수 있다. 게다가, 알부틴의 처리 농도보다 더 낮은 농도로 처리한 경우에도 알부틴과 동등한 정도의 멜라닌 감소 효과를 얻을 수 있으며, 동일 양으로 처리한 경우에는 훨씬 더 우수한 멜라닌 감소 효과를 얻을 수 있음을 확인할 수 있다.
이로부터, 녹차 잎자루 추출물은 녹차 잎 추출물과는 다른 효능을 나타내며, 매우 우수한 피부 미백 물질로 사용될 수 있음을 알 수 있다.
[시험예 3] 피부 안정성 평가
본 발명에서 사용하는 녹차 잎자루 유래 추출물이 피부에 자극을 미치는 정도를 알아보기 위하여, 인체 피부 일차 자극 시험을 진행하였다.
시험은 2회에 걸쳐서 진행하였으며, 1회차에는 건강한 성인 여성 34명, 남성 6명 총 40명(평균 나이 35.1세)을 대상으로 하였고, 2회차에는 여성 28명, 남성 2명 총 30명(평균 나이 30.1세)을 대상으로 하였다.
구체적으로 상기 실시예 1에서 수득한 녹차 잎자루 유래 추출물을 물에 용해시켜 10%의 농도로 만든 용액을 20mg/cm2의 양으로 등 부위의 피부에 고르게 도포하였다.
도포 후 그 부위에 첩포를 부착하고, 24시간 경과 후 첩포를 제거한 다음 30분 후에 첫 판독을 시행하였고, 24시간이 경과한 후에 2차 판독을 시행하고, 마지막 판독을 확정적인 것으로 간주하였다. 시료의 피부자극의 강도를 알아보기 위해 피부의 양성 반응의 정도에 따라 가중치를 부여(-, +, ++, +++, ++++ 에　각각 0, 1, 2, 3, 4의 수치를 부여)하여 피부의 평균반응도를 구하였으며, 평균 반응도가 1 이상인 경우를 자극이 양성인 것으로 판독하였다. 구체적인 판정 기준은 하기 표 3에 제시되어 있다. 또한, 피부 평균 반응도 산출은 하기 수학식 2에 의해 계산하였으며, 이에 따른 결과 판정 기준은 표 4에 제시되어 있다.
표 3 판정기준
반응 가중치　　 판정의 기준
- 0 : 무반응
+ 1 : 희미한 홍반
++ 2 : 경계가 뚜렷하나 약한 홍반, 부종 및 구진　　
+++ 3 : 뚜렷한 홍반, 구진 및 수포　
++++ 4 : 대수포
수학식 2
Figure PCTKR2015001775-appb-M000002
표 4 결과 판정 기준
피부 평균 반응도 판정 기준
0.0 ~ 0.91.0 ~ 2.93.0 ~ 4.95.0 이상 무자극경자극중자극강자극
측정 결과 녹차 잎자루 유래 추출물을 사용한 후의 피부 평균 반응도는 0.0~0.9 사이인 것으로 나와 피부에 대하여 자극이 없는 것으로 최종 판정되었다.
이하, 본 발명에 따른 조성물의 제형예를 설명하나, 약학 조성물 및 화장료 조성물은 여러 가지 제형으로 응용 가능하며, 이는 본 발명을 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.
[제형예 1] 유연화장수(스킨로션)
하기 표 5에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 유연화장수를 제조하였다.
표 5
배합 성분 함량 (중량 %)
실시예 1의 녹차 잎자루 유래 추출물 0.2
글리세린 3.0
부틸렌글리콜 2.0
프로필렌글리콜 2.0
카르복시비닐폴리머 0.1
피이지-12 노닐페닐에테르 0.2
폴리솔베이트 80 0.4
에탄올 10.0
트리에탄올아민 0.1
방부제, 색소, 향료 적량
정제수 잔량
[제형예 2] 영양화장수(밀크로션)
하기 표 6에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 영양화장수를 제조하였다.
표 6
배합 성분 함량 (중량 %)
실시예 1의 녹차 잎자루 유래 추출물 1.0
글리세린 3.0
부틸렌글리콜 3.0
프로필렌글리콜 3.0
카르복시비닐폴리머 0.1
밀납 4.0
폴리솔베이트 60 1.5
카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드 5.0
스쿠알란 5.0
솔비타세스퀴올레이트 1.5
유동파라핀 0.5
세테아릴 알코올 1.0
트리에탄올아민 0.2
방부제, 색소, 향료 적량
정제수 잔량
[제형예 3] 영양크림
하기 표 7에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 영양크림을 제조하였다.
표 7
배합 성분 함량(중량%)
실시예 1의 녹차 잎자루 유래 추출물 2.0
글리세린 3.0
부틸렌글리콜 3.0
유동파라핀 7.0
베타글루칸 7.0
카보머 0.1
카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드 3.0
스쿠알란 5.0
세테아릴 글루코사이드 1.5
소르비탄 스테아레이트 0.4
폴리솔베이트 60 1.2
트리에탄올아민 0.1
방부제, 색소, 향료 적량
정제수 잔량
[제형예 4] 마사지 크림
하기 표 8에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 마사지 크림을 제조하였다.
표 8
배합 성분 함량(중량%)
실시예 1의 녹차 잎자루 유래 추출물 3.0
글리세린 8.0
부틸렌글리콜 4.0
유동파라핀 45.0
베타글루칸 7.0
카보머 0.1
카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드 3.0
밀납 4.0
세테아릴 글루코사이드 1.5
세스퀴 올레인산 소르비탄 0.9
바세린 3.0
파라핀 1.5
방부제, 색소, 향료 적량
정제수 잔량
[제형예 5] 팩
하기 표 9에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 팩을 제조하였다.
표 9
배합 성분 함량(중량%)
실시예 1의 녹차 잎자루 유래 추출물 0.2
글리세린 4.0
폴리비닐알콜 15.0
히알루론산 추출물 5.0
베타글루칸 7.0
알란토인 0.1
노닐 페닐에테르 0.4
폴리솔베이트 60 1.2
에탄올 방부제 6.0적량
방부제, 색소, 향료 적량
정제수 잔량
[제형예 6] 연고
하기 표 10에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 연고를 제조하였다.
표 10
배합 성분 함량(중량%)
실시예 1의 녹차 잎자루 유래 추출물 0.2
글리세린 8.0
부틸렌글리콜 4.0
유동파라핀 15.0
베타글루칸 7.0
카보머 0.1
카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드 3.0
스쿠알란 1.0
세테아릴 글루코사이드 1.5
소르비탄 스테아레이트 0.4
세테아릴 알코올 1.0
밀납 4.0
방부제, 색소, 향료 적량
정제수 잔량
이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시태양일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims (4)

  1. 녹차 잎자루 유래 추출물을 유효성분으로 함유하는 미백용 피부 외용제 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 추출물은 조성물 총 중량에 대하여 0.001~20중량%의 양으로 함유되는 피부 외용제 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 녹차 잎자루 유래 추출물은 녹차 잎자루로부터 물을 용매로 사용하여 추출한 것임을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 멜라닌 생성을 억제하는 것을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물.
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