WO2015085447A1 - 新的雷公藤甲素衍生物及其制备方法和用途 - Google Patents

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WO2015085447A1
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triptolide
benzyl
sgc8c
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张戈
吕爱平
王成
吕诚
鲁军
刘彪
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香港浸会大学
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    • C12N2320/30—Special therapeutic applications

Definitions

  • the invention relates to the field of pharmacy, in particular to a triptolide derivative, a preparation method thereof and
  • Tripterygium wilfordii is a woody vine of the genus Euphorbiae, which is distributed in the south or southwest of the Yangtze River basin. It is cold, bitter and poisonous.
  • Triptolide (TP) also known as retinoid, is an epoxidized diterpene lactone compound isolated from the traditional Chinese medicine Tripterygium wilfordii. It is one of the main active constituents of Tripterygium wilfordii. It is white crystal and insoluble. Water, soluble in a variety of organic solvents.
  • Triptolide is a diterpene compound with a rosin skeleton, containing three epoxy structures and one ⁇ , ⁇ unsaturated five-actactone ring. Triptolide has anti-inflammatory, immunosuppressive, anti-fertility, anti-tumor and many others. Active, widely used in the treatment of rheumatoid arthritis, systemic lupus erythematosus, ankylosing spondylitis and tumors. Studies have shown that triptolide is a broad-spectrum tumor inhibitor that induces apoptosis in a variety of tumor cells in vitro, including ovarian cancer, breast cancer, colon cancer, oral cancer, gastric cancer, etc., which inhibits tumor growth and tumors in vivo.
  • rapamycin is also resistant to tumor resistance, while increasing the sensitivity of tumor cells to other anticancer drugs, in combination with chemotherapeutic drugs and ionizing radiation.
  • triptolide which inhibits the expression of heat shock protein 70 (HSP70).
  • HSP70 heat shock protein 70
  • Triptolide can effectively inhibit the expression of HSP70 gene, sensitize tumor cells, and induce apoptosis during induction.
  • Triptolide inhibits nuclear factor kappaB (NF-KB not only promotes tumor cell proliferation, but also induces oncogene and anti-apoptotic gene activation) to reduce the sensitivity of tumor cells to apoptosis.
  • Triptolide inhibits NF- ⁇ and target genes on the one hand
  • the specific DNA sequence binds to NF- ⁇ to bind to the specific DNA sequence of the target gene to interfere with the transcriptional activity of NF- ⁇ ; on the other hand, it can block the phosphorylation of NF-kB transactivation region by blocking nuclear kinase.
  • the role of the NF- ⁇ assisted activator cAMP response in the nucleosome aggregation and the interaction of P65 with RNA polymerase also inhibits the transcriptional activity of NF-KB and promotes apoptosis.
  • triptolide can also exert anti-tumor effects by inhibiting ubiquitin-proteasome, affecting the activity of RNA polymerase, affecting p53 gene expression, and activating multiple pathways such as caspase. .
  • triptolide Although triptolide has significant anti-tumor activity, it has its own poor water solubility, low bioavailability, strong toxicity, and narrow therapeutic window, which limits its clinical application.
  • the activity of the compound in the anti-tumor, immunosuppressive, etc. is significantly reduced.
  • the modification of C 5 can cause the decrease of cytotoxic activity and immunosuppressive activity, it still maintains a good effect in vivo and in vitro, and the toxicity is reduced more significantly, so that the safety of treatment is greatly improved, as shown in Figure 1-4. .
  • C 14 -position ⁇ - ⁇ is a molecule The only nucleophilic group, which is related to the water solubility and cytotoxicity of triptolide, can form intramolecular hydrogen bonds with the ⁇ -epoxy group at the C 9 and u positions, and is a key group for antitumor effects.
  • the ⁇ , ⁇ -unsaturated five-actactone ring is an essential group, and the modification of the lactone ring will reduce the activity of the derivative in anti-tumor and immunosuppression, but still It has a good effect, and the reduction in toxicity is more significant, so that the safety of treatment is greatly enhanced.
  • triptolide Although the structural diversity and modification of triptolide mainly include C 14 hydroxyl, Ci 2 , 13 epoxy, ⁇ , ⁇ unsaturated quinolactone ring, C 7 , 8 epoxy, C 9 , Epoxy. However, in the modification of triptolide after the modification, only the hydroxyl group at C 14 , C 12 , 13 epoxy And the C 18 -based compound can be converted into triptolide in vivo to exert its therapeutic effect in the body.
  • An aptamer is a class of therapeutic oligonucleotides that bind specifically and with high affinity to a target protein and function like a monoclonal antibody.
  • the aptamer has many advantages in practical applications: high affinity and high specificity; small molecular weight, can enter the cell through the cell membrane, can be more conveniently enriched into the target site in the body; and has a long half-life and good stability in vivo. It is not sensitive to ambient temperature and easy to store; it is easy to synthesize and easy to modify, which improves its application in clinical diagnosis and treatment.
  • An aptamer can directly treat a disease as a drug.
  • the binding site is a functional region of the protein, and protein function is inhibited.
  • the aptamer can also act as a drug delivery vehicle, linking the drug to the aptamer to provide cell selectivity and avoid toxic side effects on normal tissues and cells.
  • AS1411 is a guanine-rich oligonucleotide (GROs) capable of forming a stable G-quadruplex with a nucleotide sequence of 5 ' - GGTGGTGGTGGTTGTGGTGGTGGTGG-3' is effective against cell nuclease degradation.
  • GROs guanine-rich oligonucleotide
  • AS1411 can specifically bind to nucleolin, which is highly expressed on the surface of tumor cells. At the same time, nucleolin on the surface of the membrane can promote the large-cell drinking effect of tumor cells on AS1411 and increase the intake. Numerous studies have shown that AS1411 has a wide-ranging anti-tumor activity.
  • Sgc8c is a single-stranded DNA aptamer that specifically targets acute T-lymphocytic leukemia by index-enriched ligand-based evolutionary technology (cell-SELEX) targeting intact cells, due to its high serum stability.
  • Sgc8c as a targeting ligand coupled with chemotherapeutic drugs, has achieved good results in the treatment of acute T lymphocytic leukemia.
  • the nucleotide sequence of Sgc8c is (5'-ATC
  • triptolide In view of the biological activity of triptolide, it is mainly related to the functional group (the structure is as follows):
  • the structural modification or modification site of triptolide mainly includes c 14 hydroxyl group, c 12 ,
  • the present invention provides novel triptolide derivatives having a compound of formula (1):
  • R 2 7 H or OH
  • R 4 7 H or OH
  • R 5 is H or OH
  • R 6 is H or OH
  • R 7 is H or OH
  • G is O or NH
  • (CH 2 ) n further contains a linear or branched alkyl group, an alkenyl group, an aralkyl group and an alkyl group substituted with one or more hydrogens of (CH 2 ) n .
  • An aralkyl group an aromatic hydrocarbon, a halogen, a hetero atom group, a heterocyclic substituent, the alkyl group including but not limited to a methyl group, an ethyl group, a propyl group, a butyl group, a pentyl group, a hexyl group or a heptyl group; Recording base, 1-propenyl, allyl, isopropyl, 1-butenyl, 2-butyryl, 3-butyryl, 1, 3-butadienyl, or E, Z thereof
  • Examples of isomers; aralkyl and alkyl aralkyl groups include, but are not limited to, benzyl, benzhydryl, tolylmethyl, trityl, cinnamyl, phenethyl, styryl, phenyl Butyl, neophenyl; the aryl group includes, but is not limited to, phenyl,
  • B is an aptamer, and the aptamer is AS1411 or Sgc8c;
  • M is O or OH
  • X is o
  • the A is selected from
  • -CH 2 -CH CH-CH 2 -CH 2 -CO-
  • -CH 2 -CH CH-CH 2 -CH 2 -CH 2 -CO-
  • -CH 2 -CH CH- CH 2 -CH 2 -CH 2 - CH 2 -CO;
  • the triptolide derivative has the structure of the following formula II:
  • Ri is H or OH
  • R 2 is H or OH
  • R 3 is H or OH
  • R 4 is H or OH
  • R 5 is H or OH
  • R 6 is H or OH
  • R 7 is H or OH
  • G is O or NH
  • M is O
  • Z is O
  • X is o, forming a bullying base at c 18 ;
  • (CH 2 ) n further contains a linear or branched alkyl group, an alkenyl group, an aralkyl group and an alkyl group substituted with one or more hydrogens of (CH 2 ) n .
  • An aralkyl group an aromatic hydrocarbon, a halogen, a hetero atom group, a heterocyclic substituent, the alkyl group including but not limited to a methyl group, an ethyl group, a propyl group, a butyl group, a pentyl group, a hexyl group or a heptyl group; Recording base, 1-propenyl, allyl, isopropyl, 1-butenyl, 2-butyryl, 3-butyryl, 1, 3-butadienyl, or E, Z thereof
  • Examples of isomers; aralkyl and alkyl aralkyl groups include, but are not limited to, benzyl, benzhydryl, tolylmethyl, trityl, cinnamyl, phenethyl, styryl, phenyl Butyl, neophenyl; the aryl group includes, but is not limited to, phenyl,
  • ⁇ is an aptamer, the aptamer is AS1411 or Sgc8c;
  • M is O or OH; z is o;
  • X is o
  • the A is selected from
  • -CH 2 -CH CH-CH 2 -CH 2 -CO-
  • -CH 2 -CH CH-CH 2 -CH 2 -CH 2 -CO-
  • -CH 2 -CH CH- CH 2 -CH 2 -CH 2 - CH 2 -CO;
  • B is an aptamer
  • the aptamer is AS1411 or Sgc8c.
  • the triptolide derivative of the formula II is a compound having the following structure:
  • the triptolide derivative is a compound having the following formula III:
  • R 5 is H or OH
  • R 6 is H or OH
  • R 7 is H or OH
  • G is O or NH
  • M is OH
  • Z is O
  • X is o
  • A is -S0 2 -Ph-CO-, or -S0 2 -Ph-(CH 2 ) n -CO-; wherein K n ⁇ 14; preferably K n ⁇ 7, for example, n is 1, 2, 3, 4 , 5, 6 or 7;
  • (CH 2 ) n further contains a linear or branched alkyl group, an alkenyl group, an aralkyl group and an alkyl group substituted with one or more hydrogens of (CH 2 ) n .
  • alkyl group an aromatic hydrocarbon, a halogen, a hetero atom group, a heterocyclic substituent, the alkyl group including but not limited to a methyl group, an ethyl group, a propyl group, a butyl group, a pentyl group, a hexyl group or a heptyl group; Alkyl, 1-propenyl, allyl, isopropenyl, 1-butenyl, 2-butyryl, 3-butenyl, 1, 3-butane, or an alkenyl group thereof Isomers of E or Z; examples of aralkyl and alkylaralkyl groups include, but are not limited to, benzyl, benzhydryl, tolylmethyl, trityl, cinnamyl, phenethyl, styrene a phenyl group, or a neophenyl group; the aryl group includes, but is not limited to, a
  • B is an aptamer, and the aptamer is AS1411 or Sgc8c.
  • said A is selected from -S0 2 -Ph-CO-, -S0 2 -Ph- CH 2 -CO-, -S0 2 -Ph- CH 2 -CH 2 -CO-, - S0 2 -Ph-CH 2 -CH 2 -CH 2 -CO- or -S0 2 -Ph-CH 2 -CH 2 -CH 2 -CO-.
  • B is an aptamer, and the aptamer is AS1411 or Sgc8c.
  • the triptolide derivative of the formula m is a compound having the following structure:
  • the triptolide derivative has the following formula IV compound of:
  • Ri is H or OH
  • R 2 is H or OH
  • R 3 is H or OH
  • R 4 is H or OH
  • R 5 is H or OH
  • R 6 is H or OH
  • R 7 is H or OH
  • G is O or NH
  • M is OH
  • Z is O
  • X is o
  • (CH 2 ) n further contains a linear or branched alkyl group, an alkenyl group, an aralkyl group and an alkyl group substituted with one or more hydrogens of (CH 2 ) n .
  • An aralkyl group an aromatic hydrocarbon, a halogen, a hetero atom group, a heterocyclic substituent, the alkyl group including but not limited to a methyl group, an ethyl group, a propyl group, a butyl group, a pentyl group, a hexyl group or a heptyl group; Recording base, 1-propyl base, ene a propyl group, a isopropyl group, a 1-butenyl group, a 2-butyryl group, a 3-butylidene group, a 1, 3-butadienyl group, and an isomer of these alkenyl groups including E and Z; an aralkyl group and Examples of alkylaralkyl groups include, but are not limited to, benzyl, benzhydryl, tolylmethyl, trityl, cinnamyl, phenethyl, styryl, phenylbut
  • B is an aptamer, and the aptamer is AS1411 or Sgc8c;
  • M is O or OH
  • X is o
  • the A is selected from
  • B is an aptamer
  • the aptamer is AS1411 or Sgc8c.
  • the triptolide derivative of the formula IV is a compound of the following structure:
  • triptolide or a modification thereof as a bridging intermediate in an organic solvent at -20 ° C to 100 ° C, optionally under the action of a catalyst;
  • the method further comprises first protecting the c 14 hydroxyl group from the protective agent, wherein the protective agent is selected from the group consisting of Dimethylsilyl trifluoromethanesulfonate or benzyl bromide.
  • the organic solvent in the step 1) is selected from the group consisting of pyridine, dichloromethane, acetonitrile, N-methylmorpholine, dimethyl sulfoxide, triethylamine or hydrazine, hydrazine dimethyl Pyridine, or a combination of two or more of them.
  • the catalyst in the step 1) is silver oxide.
  • the alkaline solution in the step 2) is selected from a buffer solution of sodium carbonate/sodium hydrogencarbonate, triethylamine or potassium carbonate or a combination of two or more kinds thereof;
  • the pH of the sodium carbonate/sodium bicarbonate buffer solution The value is 9.0.
  • the alkaline solution is selected from a sodium carbonate/sodium bicarbonate buffer solution, triethylamine or potassium carbonate or Two or more combinations of them.
  • the organic solvent is selected from the group consisting of dichloromethane, dimethyl sulfoxide, acetonitrile or chlorinated 4-(4, 6-Dimethoxy-1,3,5-triazin-2-yl)-4-methylmorpholine salt (DMT-MM), or a combination of two or more of them.
  • the bridging intermediate may be selected from the group consisting of succinic anhydride, phosgene, allyl bromide, and propiolic acid. , 4-bromomethylbenzoic acid, isocyanate, acid chloride, chloroformate, benzenesulfonyl chloride, 2-bromoacetyl chloride or methyl 4-bromo-2-butenoate or the like.
  • the bridging intermediates in the method of the present invention are all small molecule compounds known in the art, which can be purchased by commercially available methods or can be prepared by those skilled in the art through the description of the prior art documents.
  • Small molecule compounds including, but not limited to, succinic anhydride, phosgene, propiolic acid, ethyl 4-bromo(methoxy)methylbenzoate, ethyl 4-bromomethylbenzoate, isocyanate Ester, methyl 4-bromo-2-butenoate, chloroformate, 2-bromoacetyl chloride, methyl 4-sulfonyl chlorobenzoate or the like.
  • triptolide and its garnish are all compounds known in the art, which can be purchased by a commercially available method or can be passed by a person skilled in the art. It has been prepared in the technical literature, including but not limited to triptolide, triptolide, triptolide, 16-hydroxy triptolide or triptolide.
  • the aptamers in the invention of the present invention include, but are not limited to, AS1411 or Sgc8c, and may be other known aptamers having similar properties, the source of which may be purchased commercially, It can also be prepared by those skilled in the art through the contents of the prior art documents.
  • the separation and purification steps are carried out, and the steps can be separated and purified by a person skilled in the art according to the common knowledge and the description of the present invention, and the separation and purification methods include, but are not limited to, filtration, phase separation, crystallization, adsorption, which are commonly used in the art.
  • Various conventional methods such as color column elution. Knowledge, for example, including but not
  • a novel triptolide containing a substituent A of -CO-(CH 2 ) n-CO- or a modification thereof is prepared by using succinic anhydride or the like as a bridging intermediate.
  • succinic anhydride or the like includes, but not limited to, malonic anhydride, succinic anhydride, glutaric anhydride, pimelic anhydride, and the like;
  • the preparation method comprises:
  • a propiolic acid or the like is used as a bridge intermediate
  • the propiolic acid or the like thereof includes, but not limited to, propynoic acid, butynoic acid, pentenoic acid, heptanoic acid, etc.; and the preparation method comprises the following: ', ', ', propyne
  • DMF dimethylformamide
  • a weak base for example including but not limited to sodium hydrogencarbonate
  • the substituent A is prepared as -CH(OC3 ⁇ 4)-Ph-CO-
  • the 4-bromo(methoxy)methylbenzene Methyl formate or its analogs include, but are not limited to, methyl 4-bromo(methoxy)methylbenzoate, methyl 4-bromo(methoxy)methylphenylacetate, 4-bromo(methoxy) Methyl methacrylate, methyl 4-bromo(methoxy)methyl phenylbutanoate, or
  • One of the preparation methods includes:
  • Dissolve triptolide or its modification in DMF at 0 ° (:, under nitrogen, add 4-bromo(methoxy)methylbenzoate or its analog and catalyst; react at temperature Completely, the intermediate product-1 in the process is obtained; in the case of 0 ° C, the reaction intermediate-1 is dissolved in dichloromethane (DCM), and an aqueous sodium hydroxide solution is added, and the reaction is completed under the temperature condition.
  • the intermediate product-2 in the process is obtained; then the obtained intermediate product-2 is dissolved in dimethyl sulfoxide (DMSO) (or a similar solvent), and DMT-MM is dissolved in distilled water and will be adapted.
  • DMSO dimethyl sulfoxide
  • the product is dissolved in an alkaline buffer solution; the intermediate product dissolved in DMSO and DMT-MM dissolved in distilled water are added to the alkaline buffer solution containing the aptamer at room temperature. Under the full reaction, the corresponding derivative of the new triptolide described in the present invention is obtained.
  • the substituent A is prepared as -CH 2 -Ph-CO- or CH 2 -Ph-(CH 2 a new triptolide containing n-CO- or a modification thereof in combination with an aptamer; said methyl 4-bromomethylphenylacetate or an analogue thereof, including but not limited to 4-bromo Methyl methyl benzoate, methyl 4-bromomethyl phenylacetate, methyl 4-bromomethyl phenylpropionate, methyl 4-bromomethyl phenylbutyrate, or their ethyl esters, propyl esters Or butyl ester, etc.;
  • the preparation method includes: ', , ', in 0 ° (:, under nitrogen, the triptolide or its modification is dissolved in DMF, after adding 4-bromo Methyl phenyla
  • methyl 4-bromomethylphenylacetate is used as a bridging intermediate
  • the substituent A is prepared as -CO-NH-CO- or -CO-NH-(CH 2 ) n-CO. - a new derivative of triptolide or a modification thereof in combination with an aptamer; said methyl isocyanate or an analogue thereof, including but not limited to methyl isocyanate, isocyanic acid Methyl formate, methyl isocyanate, methyl isocyanate or their methyl esters, propyl or butyl esters, etc.;
  • the preparation method comprises:
  • HOBT hydroxybenzotriazole
  • EDCI 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride
  • methyl isocyanate is used as a bridging intermediate
  • the methyl 4-bromo-2-butenoate or the like Substitutes include, but are not limited to, methyl 4-bromo-2-butenoate, methyl 4-bromo-2-pentenoate, methyl 4-bromo-2-hexenoate, 4-bromo-2-heptene Methyl ester, methyl 4-bromo-2-octenoate or their ethyl ester, propyl or butyl ester, etc.; and the preparation method includes: ' , , ' at 0 ° C, nitrogen In the condition,
  • the intermediate product-1 was dissolved in DCM under the condition of 0 ° C, and an aqueous sodium hydroxide solution was added thereto, and the reaction was completed under the temperature condition to obtain the intermediate product-2 in the method; then the obtained intermediate product-2 was dissolved in two.
  • DMSO methyl sulfoxide
  • methyl 4-bromo-2-butenoate is used as a bridging intermediate
  • the synthetic route is as follows:
  • the preparation of the substituent A is -CO-CH 2 - or -CO-0- (e.g., using benzyl 3-(chlorobuloxy)propionate or the like as a bridging intermediate.
  • the 3-benzyl chloride (chloropropionyloxy)propionate or the like thereof is included
  • DMSO dimethyl sulfoxide
  • DMT-MM is dissolved in distilled water and the aptamer is dissolved in an alkaline buffer solution.
  • the intermediate product-2 dissolved in DMSO and DMT-MM dissolved in distilled water are added to the alkaline buffer solution containing the aptamer, and fully reacted at room temperature to obtain the corresponding invention.
  • a new derivative of triptolide is then dissolved in dimethyl sulfoxide (DMSO) (or a similar solvent), and DMT-MM is dissolved in distilled water and the aptamer is dissolved in an alkaline buffer solution.
  • the preparation containing the substituent A is -CO-CH 2 - or -CO-0-(CH 2 )n-CO-
  • the 2-bromoacetyl chloride or the like thereof includes but not limited to 2-bromoacetyl chloride, 2-bromoformyl chloride, 2 -Bromopropionyl chloride, 2-bromobutyryl chloride, 2-bromopentanoyl chloride, 2-bromohexanoyl chloride, 2-bromoheptanoyl chloride, etc.
  • the preparation method can be carried out by a conventional preparation method in the art, as one of the embodiments
  • the preparation method comprises the steps of: dissolving triptolide or its modification in DMF at 0 ° C under nitrogen, adding benzyl
  • the intermediate product-1 of the method is completely obtained at room temperature; the intermediate product-1 is dissolved in tetrahydrofuran (THF), an aqueous sodium hydroxide solution is added, and the reaction system is heated to 50 to 75 ° C to complete the reaction, that is, the middle of the method is obtained.
  • Product-2 The intermediate product-2 was dissolved in dichloromethane, triethylamine was added, and methoxy phenylsulfonyl chloride dissolved in dichloromethane was slowly added dropwise at 0 V. After the dropwise addition, the reaction system naturally rose. To the room temperature, the reaction is completed in the desired product -3 in the process.
  • the target product-3 is dissolved in THF, 50 mg of 10% palladium carbon is added, the hydrogen is replaced, and the reaction is carried out at room temperature for 5 hours. The reaction is monitored by TLC. After the reaction is completed, the palladium carbon is removed by suction filtration, and the next step is directly carried out; at 0 ° C, The product of the above step is dissolved in DCM, and an aqueous solution of lithium hydroxide is added, and the reaction is completed under the temperature condition, thereby obtaining the corresponding derivative of the new triptolide according to the present invention.
  • N-3 is one of the embodiments of the present invention, if methyl 4-(chlorosulfonyl)-benoate or its analog is used as a bridging intermediate, the substituent A is -S0 2 - When Ph-CO-, or -S0 2 -Ph-(CH 2 ) n -CO-, triptolide or a modification thereof is combined with a aptamer derivative;
  • 4-bromo-2-butene Methyl ester or the like includes, but is not limited to, methyl 4-sulfonyl chlorophenylacetate, methyl 4-sulfonyl chlorophenylpropionate, methyl 4-sulfonyl chlorophenylbutanoate, methyl 4-sulfonyl chlorophenyl valerate , methyl 4-sulfonyl chlorobenzoate, methyl 4-sulfonyl chlorophenylheptanoate, methyl 4-sulfonyl chloro
  • triptolide as a starting material is used in the above synthetic route.
  • triptolide is also suitable for use with other medicinally active other triptolide modifications to prepare new derivatives which are required by the invention to bind to aptamers, including, but not limited to, Leigong Rattan, triptolide, triptolide, 16-hydroxy triptolide and triptolide triol.
  • the present invention also provides a pharmaceutical use of the triptolide derivative represented by Formula I, that is, in the preparation of a treatment for pancreatic cancer, spleen cancer, small cell lung cancer, brain cancer, nerve cancer, bone cancer, lymphoma, colon cancer, uterus
  • a pharmaceutical use of the triptolide derivative represented by Formula I that is, in the preparation of a treatment for pancreatic cancer, spleen cancer, small cell lung cancer, brain cancer, nerve cancer, bone cancer, lymphoma, colon cancer, uterus
  • novel triptolide derivative of the present invention and various suitable excipients can be used to prepare various preparations commonly used in the art including, but not limited to, injections, oral preparations and the like, and the administration routes thereof include, but are not limited to, Muscle, subcutaneous, intravenous, and oral, nasal, etc. administration.
  • administration routes thereof include, but are not limited to, Muscle, subcutaneous, intravenous, and oral, nasal, etc. administration.
  • Figure 1 The mass transfer diagram of AS1411 in Example 1;
  • Figure 2 The mass transfer diagram of Sgc8c in Example 12;
  • Figure 5 LC-MS image transfer of A-3 (i.e., compound (1)) in Example 1;
  • Figure 6 HPLC image transfer of A-3 (i.e., compound (1)) in Example 1;
  • Figure 7 LC-MS map transfer of D-1 in Example 3;
  • Figure 10 is a H-NMR chart of D-2 in Example 3.
  • Figure 11 is a LC-MS diagram of D-3 (i.e., compound (3)) in Example 3;
  • Figure 12 is an HPLC diagram of D-1 (i.e., compound (3)) in Example 3;
  • Figure 14 is a H-NMR chart of W-1 in Example 12;
  • Figure 15 is an LC-MS diagram of W-2 in Example 12;
  • Figure 16 is an H-NMR chart of W-2 in Example 12;
  • Figure 17 is an LC-MS image of W-3 (i.e., compound (22)) in Example 12.
  • Figure 22 is a graph showing the in vivo stability of A-3 (i.e., compound (1)) in Example 3;
  • Figure 23 is a graph showing the plasma stability of A-3 (i.e., compound (1)) in Example 3;
  • Figure 25 is the study of lung stability of A-3 (ie, compound (1)) in Example 3;
  • Figure 27 is the liver stability study of A-3 (ie, compound (1)) in the whole of Example 3; A-3 (ie compound (1)) kidney stability study;
  • Figure 29 Study on the stability of tumor tissue of A-3 (i.e., compound (1)) in Experimental Example 1. detailed description
  • Example 2 Preparation of Compound ( 2 )
  • N-2 (480 mg, 1 mmol) was dissolved in acetonitrile, potassium carbonate (129 mg, 1.2 mmol) was added, and then AS 1411 (20 nmol) was added under nitrogen atmosphere, and then the whole reaction system was raised to 50. C reaction for 4 hours, after TLC or LC-MS monitoring, the reaction is completed and purified to obtain N-3.
  • 0-2 (566 mg, lmmol) was dissolved in methanol, 50 mg of 10% palladium carbon was added, and hydrogen was replaced, and the reaction was carried out under normal temperature conditions. After the reaction was completed by TLC, suction filtration and evaporation of organic solvent afforded crude product. Choose the appropriate purification method to get 0-3.
  • E-2 (450 mg, lmmol) was dissolved in THF, aqueous solution of sodium hydroxide (120 mg, 3 mmol) was added, the reaction system was heated to 75 ° C, and the reaction was completed after TLC was monitored. The mixture was cooled to room temperature, and the THF was removed under reduced pressure. The organic phase was washed with brine, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered, and evaporated.
  • E-3 (468 mg, 1 mmol) was dissolved in dichloromethane, triethylamine (151 mg, 1.5 mmol) was added, and methoxycarbonylbenzenesulfonyl chloride dissolved in dichloromethane was slowly added dropwise at 0 °C. (280mg, 1.2mmol), after the addition is completed, the reaction system naturally rises to room temperature, and the reaction is monitored by TLC. After the reaction is completed, the organic phase is washed with water and saturated brine respectively, dried over anhydrous sodium sulfate, and anhydrous sodium sulfate Dry, filter, steam to get the crude E-4.
  • E-4 (666 mg, lmmol) was dissolved in THF, 50 mg of 10% palladium carbon was added, the hydrogen was replaced, and the reaction was carried out at room temperature for 5 h. The reaction was monitored by TLC. After the reaction was completed, the palladium carbon was removed by suction filtration, and the next step was carried out directly at 0°. Under the condition of C, 1 mmol of the above product was dissolved in DCM, and a lithium hydroxide (38 mg, 2 mmol) aqueous solution was added thereto, and the reaction was maintained at this temperature. After the reaction was completed by TLC, the organic phase was saturated. Wash with salt water, dry anhydrous sodium sulfate, filter, steam to obtain E-5 crude
  • TP 360 mg, 1 mmol
  • dichloromethane 0 ° C
  • DIEA 195 mg, 1.5 mmol
  • tert-butyldimethyltrifluoromethanesulfonate diluted with dichloromethane
  • the ester (TBSOTf) 317 mg, 1.2 mmol
  • the temperature was maintained for 0.5 hour and then allowed to react to room temperature for 4 hours.
  • the reaction solution was poured into a saturated aqueous solution of sodium hydrogencarbonate.
  • the mixture was extracted with methylene chloride, washed with saturated brine, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered, and evaporated.
  • F-2 (474 mg, lmmol) was dissolved in dry tetrahydrofuran, and a slight excess of LDA was slowly added under a nitrogen-protected condition. After maintaining this temperature for one hour, succinic anhydride (100 mg was added). , lmmol), and then the reaction system was naturally raised to room temperature for 2 hours. After the TLC monitoring reaction was completed, a saturated aqueous solution of ammonium chloride was added, and the solution was concentrated and evaporated to dryness. , anhydrous sodium sulfate dry, filtered, steamed thousands, can get crude F-3.
  • F-3 (574 mg, 1 mmol) was dissolved in a mixed solution of dry tetrahydrofuran and water, and tetrabutylammonium fluoride (313 mg, 1.2 mmol) was added thereto at room temperature, and the mixture was stirred at room temperature for 3 hours, and then concentrated. The mixture was extracted with methylene chloride, washed with saturated brine, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered, and evaporated.
  • AS1411 also known as “nucleolin aptamer”
  • source commercially available
  • Triptolide- AS1411 conjugate also known as "drug 1"
  • source Compound (3) prepared using Practice 3.
  • DMEM Cell culture medium
  • McCoy's > RPMI-1640, Leibovitz's L-05 was purchased from GIBCO, and fetal calf serum was purchased from Hyclone.
  • CCK-8 was used to detect cell viability and was purchased from Sigma.
  • pancreatic cancer cells (MiaPaCa-2, PANC-1, BxPC-3, SW1990, ASPC-1) used in the experiment were purchased from the Shanghai Cell Bank.
  • PANC-1 is DMEM
  • the medium of BxPC-3 and ASPC-1 is RPMI 1640
  • the medium of SW1990 is L-05.
  • Fetal bovine serum and a double antibody were added to the above culture to prepare a complete medium having a final content of 10% and 1%.
  • the cells were cultured in an incubator at a temperature of 37 ° (C02 concentration of 5%).
  • Pancreatic cancer cells are at a lower density (1 ⁇ 103 ⁇ 1 ⁇ 104, the specific data depends on the cell line, culture conditions refer to the Shanghai cell bank), uniform Spread in a 96-well plate, place it in the incubator overnight, pour off the old perfumes, and replace the drug-free serum-free medium.
  • Triptolide dissolved in DMSO to a concentration of 10 mM stock solution, triptolide-nucleolin aptamer conjugate and nucleolin aptamer, all dissolved in serum-free medium to form a 10 mM solution , now available.
  • TP and TP-AS 1411 conjugates significantly inhibited the killing effect of pancreatic cancer cells in the range of 50 nM-200 nM, with time and dose dependence.
  • the nucleolar aptamers have no significant effect on pancreatic cancer cells.
  • the TP-nucleoenol aptamer conjugate has significant effects on pancreatic cancer cells. See Table 1 and Figure for details.
  • SGC8C also known as "leukemia aptamer,,;), source: commercial purchase;
  • triptolide-SGC8C conjugate also referred to as "drug 2"
  • source Compound (22) prepared in Example 12.
  • CCRF-CEM acute lymphoblastic leukemia T cells
  • L-02 liver cells
  • Acute lymphocytic leukemia T cells CCRF-CEM
  • hepatocyte L-02
  • Fetal bovine serum and a double antibody were added to the above culture to prepare a complete medium having a final content of 10% and 1%. Place the cells at a temperature of 37 ° ( , C0 2 Incubate in a 5% incubator. Cell growth was observed periodically and cell counts were performed, and all experiments were performed in logarithmic growth phase cells.
  • Test drug treatment Triptolide dissolved in DMSO, formulated into a concentration of lmg / mL stock solution, stored in a -20 ° C water tank; sgc8c dissolved in serum-free medium, fully dissolved and placed in a -20 ° C water tank Preservation; Triptolide-sgc8c conjugate is fully dissolved in double distilled water and is now available.
  • CCRF-CEM Acute lymphoblastic leukemia T cells
  • L-02 hepatocytes at a lower density, (1 ⁇ 10 3 ⁇ 1 ⁇ 10 4 , specific data depending on cell line) evenly spread in 96 wells Plate, overnight in the incubator to adhere to the wall, pour off the old Peggy, replace the drug-containing serum-free medium.
  • Triptolide was dissolved in DMSO to a stock solution with a concentration of 10 mM.
  • Triptolide-sgc8c was dissolved in serum-free medium to form a 10 mM solution, which is now available.
  • the final concentration gradient of triptolide and triptolide-sgc8c was: 0, 25, 50, 100, 200 nM o at a temperature of n ° C and a concentration of C 2 2 of 5%.
  • the incubator was incubated for 24 h, 48 h. Cell viability was measured by MTT. Operate in parallel 3 times.
  • triptolide was significantly cytotoxic to CCRF-CEM and L-02 cells in a dose-dependent manner in the concentration range of 50 nM to 200 nM.
  • Triptolide-sgc8c has significant cytotoxicity against CCRF-CEM, but has no significant effect on L-02 cells.
  • sgc8c had no obvious killing effect on both, see Table 2 and Figure 20-21.
  • Triptolide (TP) source: market purchase
  • AS1411 also known as “nucleolin aptamer”
  • source market purchase
  • Triptolide-nucleolin aptamer conjugate, source compound prepared using Example 3 (3);
  • RPMI1640 medium fetal bovine serum, penicillin-streptomycin, matrigel, absolute ethanol, physiological saline, ethyl acetate, acetonitrile, and the like.
  • Cells Human pancreatic cancer cell line BxPC-3.
  • Experimental equipment ultra-clean workbench, co 2 incubator, inverted display mirror, high-speed centrifuge, ultracentrifuge, vacuum dryer, high-performance liquid crystal color transmitter.
  • BxPC-3 cell line culture The human pancreatic cancer cell line BxPC-3 was purchased from the Shanghai Cell Bank of the Chinese Academy of Sciences. The cells were supplemented with RPMI 1640 medium (purchased from sigma) containing 10% fetal calf serum (purchased from sigma) and 1.2 ml/1000 ml of penicillin-streptomycin (purchased from sigma) at 5% C0 2 , The culture was carried out in an incubator at 37 °C. The cells were observed and counted by an inverted microscope, and all experiments were performed on cells in the logarithmic growth phase.
  • BxPC-3 in situ tumor-bearing mouse model Female mice were provided and raised by the animal house of the College of Traditional Chinese Medicine of Hong Kong Institution University. Logarithmic growth phase BxPC-3 cells with serum free media and matrigel 50:50 resuspended to a concentration of 2xl0 7 cells / ml. Female mice weighing about 20 g and 6-8 weeks old were selected and injected into the right back subcutaneously with ⁇ cell suspension. The size of the tumor is measured daily using a two-way vernier caliper.
  • V (length X width 2) /2, the longest diameter of the tumor is taken, the width is the shortest diameter perpendicular to the length, and the tumor grows to 200 mm. At 3 o'clock, follow-up tests were conducted.
  • Test drug configuration triptolide and triptolide-nucleolin aptamer conjugate. Weighing triptolide dissolved in 50:50 ethanol/physiological saline solution, and dissolving it into a drug solution with a concentration of 0.6 mg/ml, and placing it in a 4 °C water tank for use; weighing triptolide-nucleolin The drug was dissolved in 50:50 ethanol/saline, and the drug solution was set to a concentration of 22.0 mg/ml, and placed in a 4 ° C water tank for use. 2.2.2 Experimental grouping and treatment: When tumors were grown to 200 mm 3 , 30 tumor-bearing mice were randomly divided into groups A and B.
  • mice in each group were anesthetized with intraperitoneal injection of pentobarbital sodium, and blood was taken by cardiac puncture to extract heart, liver, spleen, lung, kidney, and entity. Tissues such as tumors. Blood samples were centrifuged at 3000 rpm for 20 min at 4 ° C, and serum was taken for use; tissues such as heart, liver, spleen, lung, kidney, solid tumor were stored at -80 ° C for later use.
  • the chromatographic conditions were: separation column Symmetry ShieldTM RP18 column (4.6 mm x 250 mm, 5 um, ), guard column ODS guid column (3.9 mm x 20 mm, 5 um); mobile phase: acetonitrile-water (23: 77); flow rate 1.0 mL/min; Temperature 35 ° C; detection wavelength 219 nm; injection volume 20.0uL.
  • the experimental data were expressed as mean ⁇ standard deviation (SD), and the data processing was performed using Graphpad Prism 6.0 statistical software.
  • the difference significance test was performed using the t test and the analysis of variance.
  • the novel antitumor compound, the novel triptolide derivative and the preparation method thereof adopts a nucleic acid aptamer and a triptolide as a starting material, and passes through Leigong
  • the nalotinicin contains a hydroxyl group at the C14 position, an epoxy group, and a five-membered ring lactone to introduce a special bond, which in turn links the nucleic acid aptamer.
  • the triptolide derivative obtained by structural modification has the characteristics of good targeting, strong anticancer activity, low toxicity, good water solubility and high bioavailability.
  • the process of the invention is scientific and reasonable, the quality is controllable, the reproducibility is good, and the process is suitable for production.

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Abstract

本发明公开了雷公藤甲素和核酸适配子的衍生物、制备方法及其用途。雷公藤甲素和核酸适配子的衍生物的结构如式Ｉ，其中R1-R7，G，A，B，M，Z，X的定义如说明书所述。本发明以核酸适配子与雷公藤甲素或其修饰物为起始原料，在雷公藤甲素中的C-14羟基、环氧基团和五元环内酯处引入连接基团A，再连接核酸适配子B，得到雷公藤甲素和核酸适配子的衍生物。本发明所述的雷公藤甲素和核酸适配子的衍生物具有靶向性好、抗癌活性强、毒副作用低、水溶性好、生物利用度高的特点，且本发明的制备方法科学合理，质量可控，重现性好，适于生产。

Description

新的雷公藤甲素衍生物及其制备方法和用途
本发明涉及制药领域， 具体涉及雷公藤甲素衍生物及其制备方法和
皆景技术
雷公藤， 是卫矛科雷公藤属木质藤本植物， 分布于长江流域以南部 或西南地区， 性寒、 味苦、 有大毒。 雷公藤甲素 （Triptolide, TP ) 又名 雷甲素是从传统中药雷公藤中分离得到的环氧化二萜内酯化合物， 是雷 公藤的主要有效成分之一， 其为白色晶体， 不溶于水， 易溶于多种有机 溶剂。
Figure imgf000003_0001
雷公藤甲素是具有松香烷骨架的二萜化合物， 含有三个环氧结构和 一个 α、 β不饱和五元内酯环， 雷公藤甲素具有抗炎、 免疫抑制、 抗生育 抗肿瘤等诸多活性， 广泛用于治疗类风湿性关节炎、 系统性红斑狼疮、 强直性脊柱炎和肿瘤等。 研究表明， 雷公藤甲素是一种广傳肿瘤抑制剂， 体外可诱导多种肿瘤细胞的凋亡， 包括卵巢癌、 乳腺癌、 结肠癌、 口腔 癌、 胃癌等， 体内可抑制肿瘤生长和肿瘤细胞转移， 包括血液学肿瘤、 恶性肿瘤、 实体瘤。 雷公藤甲素抗肿瘤活性优于顺铂、 阿霉素、 紫杉醇 等传统的抗癌药物， 在极低浓度 ( 2-10ng/ml ) 下即可有效抑制肿瘤细胞 增殖。 除此之外， 雷公甲素还可对抗肿瘤耐药， 同时提高肿瘤细胞对其 他抗癌药物的敏感性、 与化疗药物和电离辐射相结合发挥协同效应。
目前， 诸多研究对雷公藤甲素的抗肿瘤作用机制进行了探索， 雷公 藤甲素可抑制热休克蛋白 70 ( HSP70 ) 的表达。 雷公藤甲素作为热休克 蛋白应答抑制剂， 可有效抑制 HSP70基因表达， 敏化肿瘤细胞， 诱导期 调亡。 雷公藤甲素可抑制核转录因子（nuclear factor kappaB, NF-KB不仅 可以促进肿瘤细胞增殖， 还可以介导致癌基因和抗凋亡基因活化） 降低 肿瘤细胞对凋亡的敏感性。 雷公藤甲素一方面可抑制 NF-κΒ与靶基因上 特异 DNA序列结合进而千扰 NF-κΒ与靶基因上特异 DNA序列结合而进 行千扰 NF-κΒ的转录活性； 另一方面可通过阻断核内激酶对 NF-kB反式 激活区的磷酸化作用或千扰 NF-κΒ的辅助活化蛋白 cAMP应答原件结合 蛋白在核内聚集以及 P65与 RNA聚合酶的相互作用还抑制 NF-KB的转 录活性， 促进细胞凋亡。 除了上述机制外， 雷公藤甲素还可通过抑制泛 素 -蛋白酶体，影响 RNA聚合酶的活性，影响 p53基因表达，激活 caspase 等多途径发挥抗肿瘤作用， 是极具有潜力的抗肿瘤候选药。
雷公藤甲素虽具有显著的抗肿瘤活性， 但其本身还存在水溶性差， 生物利用度较低、 毒性较强， 治疗窗窄的等特点， 限制了其临床应用。
本领域研发人员并对雷公藤甲素结构进行了修饰性研究， 已有研究 结果显示：
1 : 当 C14羟基被吸电子取代时，衍生物的细胞毒性将增加，如图 1-1 ; M-1和 M-2的细胞毒性都大于 TP，但是 M-1的活性更强于 M-2，这也说 明 C-14位的立 显。
Figure imgf000004_0001
图 1-1
2: C14当羟基形成三元环氧结构， 生物活性增大， 毒性减少， 因为 不能形成分子内氢键的原因， 但是当形成的是 5元环时， 则活性减弱， 可能是由于空间
Figure imgf000004_0002
图 1-2
3: 当（ 12,13位环氧开环时， 形成的结构在体内有一定的稳定性， 那 么这^ ^生物的免疫抑制活性将消失， 但是它仍然具有抗炎活性； C7,8位氧 环结构受亲核进攻的相对性较弱， 但是开环后形成的衍生物的生物活性 以及细胞毒性都会降低； （ 12,13位环氧开环的相关衍生物报道较少， 但是 开环后的衍生物的各种活性变 如图 1-3:
Figure imgf000005_0001
丄 图 1-3
4: α, β-不饱和五元内酯环是生物活性必需基团之一,对内酯环的改
vΛ.〜
造会使化合物在抗肿瘤、 免疫抑制等方面的活性显著降低。 C5位的改造 虽然会引起细胞毒活性与免疫抑制活性的降低，但依然保持了体内、外的 良好作用，同时毒性的降低更为显著，从而使治疗安全性大大提高， 如图 1-4。
Figure imgf000005_0002
M-S M-y 图 1-4
综上所述，
C14位羟基， α,β-不饱和五元内酯环， （ 12,13位环氧， C7,8位环氧， C9,u位环 氧。 C14位的 β-ΟΗ是分子中唯一的亲核基团， 与雷公藤甲素水溶性和细 胞毒性作用相关， 可与 C9,u位的 β-环氧基团形成分子内氢键， 是抗肿瘤 作用的关键基团。 当 C14位 β-ΟΗ被吸电子基团取代时， 衍生物的细胞毒 性将增强； 当 C14位的 β-ΟΗ形成三元环氧结构时，不能形成分子内氢键， 此时生物活性增加， 毒性降低。 （ 12,13位的-环氧结构开环后在体内有一定 的稳定性， 仍保留抗炎活性， 但免疫抑制性消失； C7,8位的环氧结构开环 后生物活性及其细胞毒性作用均降低。 α,β-不饱和五元内酯环是必需基 团， 对内酯环的改造会使衍生物在抗肿瘤、 免疫抑制等方面的活性降低， 但仍具有良好作用， 同时毒性的降低更为显著， 从而使治疗安全性大大 提面。
虽然雷公藤甲素的结构多样性改造和修饰部位主要包括有 C14位羟 基， Ci2, 13位环氧， α， β不飽和五元内酯环， C7, 8位环氧， C9, 环氧。 但改造之后的雷公藤甲素的修饰物中， 只有从 C14位羟基， C12, 13位环氧 以及 C18位欺基修饰的化合物能在体内再次转换成雷公藤甲素，从而在体 内发挥其治疗效果。
适配子 (aptamer)是一类具有治疗作用的寡核苷酸， 能与靶蛋白发生 特异性、 高亲和力的结合， 其功能类似单克隆抗体。 适配子在实际应用 中具有许多优点： 高亲和力和高特异性； 分子量小， 可通过细胞膜进入 细胞内， 能更方便地富集到体内靶向部位； 且在体内半衰期长， 稳定性 好， 对环境温度不敏感， 易保存； 易合成， 易修饰， 提高了其在临床诊 断和治疗中的应用。 适配子可直接作为药物治疗疾病， 部分适配子在与 其对应的靶序列特异结合时， 结合位点为蛋白的功能区域， 蛋白功能将 会被抑制。 适配子还可作为药物运输载体， 将药物与适配子相连使之具 有细胞选择性， 避免对正常组织和细胞的毒副作用。
已知的适配子例如 AS1411、 Sgc8c, 其中 AS1411是一种富含鸟嘌 呤结构的寡聚核苷酸 (GROs)， 能形成稳定的 G-四联体结构， 核苷酸序列 为 5 ' -GGTGGTGGTGGTTGTGGTGGTGGTGG-3 ' , 能有效对抗细胞内核 酸酶降解。 AS1411可与肿瘤细胞表面高表达的核仁素特异性结合， 同时 膜表面的核仁素又能促进肿瘤细胞对 AS1411的大胞饮作用， 增加摄取 量。 众多研究表明， AS1411具有广傳的抗肿瘤活性， 通过研究其对多种 人类细胞系的抗增殖活性， 发现几乎对所有的肿瘤细胞增殖都有很好的 抑制作用， IC5。达到微摩尔级， 该浓度对正常细胞的影响很弱。 AS1411 的抗肿瘤活性机制主要涉及入核后阻遏细胞 DNA复制，使细胞周期停滞 于 S期， 从而抑制肿瘤细胞增殖。 Sgc8c是通过以完整细胞为靶的指数富 集的配基系统进化技术（cell-SELEX ) 筛选得到的特异性靶向急性 T淋 巴细胞白血病的单链 DNA适配子， 由于其血清稳定性高、特异性强和免 疫原性低等优势， Sgc8c作为靶向配体与化疗药物相偶联，在急性 T淋巴 细胞白血病的治疗上取得了很好的效果。 Sgc8c的核苷酸序列为（5'-ATC
雷公藤甲素 ^其结构修^物的生 ^特性方面的报道。- ' ' 发明内容 针对现有雷公藤甲素及结构修饰物存在的现有技术情况， 本发明提 供了新的雷公藤甲素衍生物及其制备方法和应用。
鉴于雷公藤甲素的生物活性主要与其中的官能团有关 （其结构如 下）：
Figure imgf000007_0001
针对雷公藤甲素的结构改造或修饰部位主要包括有 c14位羟基， c12,
13位环氧基， α, β不飽和五元内酯环， C7, 8位环氧， C9, 环氧。 但是 改造之后的雷公藤甲素衍生物中， 只有从 C14位羟基， C12, 13位环氧以及 C18位欺基修饰的化合物能在体内再次转换成雷公藤甲素。
因此、 本发明提供了具有如下式（ 1 )化合物的新的雷公藤甲素衍生 物：
Figure imgf000007_0002
7 H或 OH;
R2= 7 H或 OH;
7 H或 OH;
R4= 7 H或 OH; R5=为 H或 OH;
R6=为 H或 OH;
R7=为 H或 OH;
G为 O或 NH;
A为 -CO-、 -CO-(CH2)n-CO-、 -CH=CH-CO-、 -CH=CH-(CH2)n-CO-、 -CH(OH)-Ph-CO- 、 -CH(OH)-Ph-(CH2)n-CO- 、 -CH2-Ph-(CH2)n-CO- 、 -CO-NH-CO- 、 -CO-NH-(CH2)n-CO- 、 -CH2-CH=CH-CO- 、 -CH2-CH=CH-(CH2)n-CO-、 -CO-CH2-、 -CO-0-(CH2)n-CO-、 -S02-Ph-CO-、 -S02-Ph-(CH2)n-CO-; 其中 1 < η < 14; 优选为 1 < η < 7， 例如 n为 1、 2、 3、 4、 5、 6或 7。
作为本发明实施方式之一， 可选择地、 （CH2)n还含有取代 (CH2)n中 一个或多个氢的直链或支链烷基、 链烯基、 芳烷基和烷基芳烷基、 芳香 烃、 卤素、 杂原子基团、 杂环取代基， 所述烷基包括但不限于甲基、 乙 基、 丙基、 丁基、 戊基、 己基或庚基； 所述链錄基乙錄基、 1-丙錄基、 烯 丙基、 异丙錄基、 1-丁烯基、 2-丁錄基、 3-丁錄基、 1， 3-丁二烯基， 或其 E、 Z 的异构体； 芳烷基和烷基芳烷基的示例包括但不限于苄基、 二苯 甲基、 甲苯基甲基、 三苯甲基、 肉桂基、 苯乙基、 苯乙烯基、 苯基丁 基、 新苯基； 所述芳香基包括但不限于苯基、 二苯基、 甲苯基、 甲苄基、 4， 2， 6-三甲苯基、 枯烯基、 二（叔丁基）苯基、 蒽基、 茚基、 萘基、 卤代 芳基、 卤代芳烷基苯氧基、 甲苯氧基、 二甲苯基氧基、 2,4,6-三甲苯氧基 和枯烯氧基、 二苯基、 苯胺基、 甲苯氨基、 甲苯磺酰基、 烯丙苄基或苯 基、 呋喃基、 吡啶基、 2-吡啶基（吡啶 -2-基）、 吲哚 -1-基、 氯甲基苄基或 苯基、 三氟甲基苄基或苯基、 羟基苄基或苯基、 甲氧基苄基或苯基、 乙 氧基苄基或苯基、 甲氧基乙氧基苄基或苯基、 烯丙氧基苄基或苯基、 苯 氧基苄基或苯基、 乙酰氧基苄基或苯基、 苯甲酰氧基苄基或苯基、 甲硫 基苄基或苯基、 苯疏基苄基或苯基、 甲苯疏基苄基或苯基、 甲基氨基苄 基或苯基、 二甲基氨基苄基或苯基、 乙基氨基苄基或苯基、 二乙基氨基 苄基或苯基、 乙酰氨基苄基或苯基、 羧基苄基或苯基、 甲氧羰基苄基或 苯基、 乙氧羰基苄基或苯基、 苯氧基羰基苄基或苯基、 氯代苯氧基羰基 苄基或苯基、 N-环己基氨基甲酰氧基苄基或苯基、 烯丙氧基羰基苄基或 苯基、 氨 甲酰基苄基或苯基、 N-甲基氨甲酰基苄基或苯基、 Ν, Ν- 二丙 基氨甲酰基苄基或苯基、 Ν-苯氨基甲酰基苄基或苯基、 硝基苄基或苯基、 氰基苄基或苯基、硫代苄基或苯基、硫酸根-苄 基或苯基、 膦酰基苄基或 苯基、 磷酸根苄基或苯基、 和吗啉代苄基或苯基等； 所述卤素包括氟、 氯、 溴或碘； 所述杂原子包括但不限于甲氧基、 乙氧基、 丙氧基、 异丙 氧基、 正丁氧基、 异丁氧基、 叔丁氧基、 甲硫基、 乙硫基、 正丙硫基、 异丙硫基、 正丁硫基、 异丁硫基、 叔丁硫基、 甲亚磺酰基、 乙亚磺酰基、 异丙亚磺酰基、 甲磺酰基、 乙磺酰基、 异丙磺酰基； 所述杂环包括但不 限于吡啶基、 喹啉基、 噻吩基、 呋喃基、 噁唑基、 四唑基、 噻唑基、 咪 唑基、 吡唑基或吲哚基。
B为适配子， 所述适配子为 AS1411或 Sgc8c;
M为 O或 OH;
Z为 o;
X为 o;
其中八与 M、 Z或 X连接。 作为本发明的实施方式之一， 所述 A选自
-CO-;
-CO-CH2-CO- 、 -CO-CH2-CH2-CO- 、 -CO-CH2-CH2-CH2-CO- 、 -CO-CH2-CH2-CH2-CH2-CO-；
-CH=CH-CO-;
-CH(OH)-Ph-CO- 、 -CH(OH)-Ph-CH2-CO- 、
-CH(OH)-Ph-CH2-CH2-CO- 、 -CH(OH)-Ph-CH2-CH2-CH2-CO- 、 -CH(OH)-Ph-CH2-CH2-CH2 -CH2-CO-;
-CH2-Ph-CH2-CO-、 -CH2-Ph-CH2-CH2-CO-、
-CH2-Ph-CH2-CH2-CH2-CO-、 -CH2-Ph-CH2-CH2-CH2 -CH2-CO-;
-CO-NH-CO- 、 -CO-NH-CH2-CO- 、 -CO-NH-CH2-CH2-CO- 、 -CO-NH-CH2- CH2-CH2-CO-、 -CO-NH-CH2- CH2-CH2-CH2-CO-;
-CH2-CH=CH-CO- 、 -CH2-CH=CH-CH2-CO- 、
-CH2-CH=CH-CH2-CH2-CO- 、 -CH2-CH=CH-CH2-CH2-CH2-CO- 、 -CH2-CH=CH- CH2-CH2-CH2- CH2-CO;
-CO-CH2-;
-CO-O-CO- 、 -CO-0-CH2-CO- 、 -CO-0-CH2-CH2-CO- 、 -CO-0-CH2-CH2-CH2-CO-、 -CO-0-CH2-CH2-CH2-CH2-CO-； -S02-Ph-CO- 、 -S02-Ph-CH2-CO- 、 -S02-Ph-CH2-CH2-CO- 、 -S02-Ph-CH2-CH2-CH2-CO-或 -S02-Ph- CH2-CH2-CH2-CH2-CO-； 作为本发明实施方式之一， 所述雷公藤甲素衍生物具有如下式 II结 构：
Figure imgf000010_0001
式 II
其中， Ri=为 H或 OH;
R2=为 H或 OH;
R3=为 H或 OH;
R4=为 H或 OH;
R5=为 H或 OH;
R6=为 H或 OH;
R7=为 H或 OH;
G为 O或 NH;
M为 O;
Z为 O;
X为 o， 在 c18位形成欺基；
A选自 -CO-、 -CO-(CH2)n-CO-、 -CH=CH-CO-、 -CH=CH-(CH2)n-CO-、 -CH(OH)-Ph-CO- 、 -CH(OH)-Ph-(CH2)n-CO- 、 -CH2-Ph-(CH2)n-CO- 、 -CO-NH-CO- 、 -CO-NH-(CH2)n-CO- 、 -CH2-CH=CH-CO- 、 -CH2-CH=CH-(CH2)n-CO-、 -CO-CH2-、 -CO-0-(CH2)n-CO-、 -S02-Ph-CO-、 或 -S02-Ph-(CH2)n-CO-; 其中 K n < 14; 优选为 K n < 7， 例如 n为 1、 2、 3、 4、 5、 6或 7; 作为本发明实施方式之一， 可选择地、 （CH2)n还含有取代 (CH2)n中 一个或多个氢的直链或支链烷基、 链烯基、 芳烷基和烷基芳烷基、 芳香 烃、 卤素、 杂原子基团、 杂环取代基， 所述烷基包括但不限于甲基、 乙 基、 丙基、 丁基、 戊基、 己基或庚基； 所述链錄基乙錄基、 1-丙錄基、 烯 丙基、 异丙錄基、 1-丁烯基、 2-丁錄基、 3-丁錄基、 1， 3-丁二烯基， 或其 E、 Z的异构体； 芳烷基和烷基芳烷基的示例包括但不限于苄基、 二苯甲 基、 甲苯基甲基、 三苯甲基、 肉桂基、 苯乙基、 苯乙烯基、 苯基丁 基、 新苯基； 所述芳香基包括但不限于苯基、 二苯基、 甲苯基、 甲苄基、 4， 2， 6-三甲苯基、 枯烯基、 二（叔丁基）苯基、 蒽基、 茚基、 萘基、 卤代 芳基、 卤代芳烷基苯氧基、 甲苯氧基、 二甲苯基氧基、 2， 4， 6三甲苯 氧基和枯烯氧基、 二苯基、 苯胺基、 甲苯氨基、 甲苯磺酰基、 烯丙苄基 或苯基、 呋喃基、 吡啶基、 2-吡啶基（吡啶 -2-基）、 吲哚 -1 -基、 氯甲基苄 基或苯基、三氟甲基苄基或苯基、羟基苄基或苯基、 甲氧基苄基或苯基、 乙氧基苄基或苯基、 甲氧基乙氧基苄基或苯基、 烯丙氧基苄基或苯基、 苯氧基苄基或苯基、 乙酰氧基苄基或苯基、 苯甲酰氧基苄基或苯基、 甲 疏基苄基或苯基、 苯疏基苄基或苯基、 甲苯疏基苄基或苯基、 甲基氨基 苄基或苯基、 二甲基氨基苄基或苯基、 乙基氨基苄基或苯基、 二乙基氨 基苄基或苯基、 乙酰氨基苄基或苯基、 羧基苄基或苯基、 甲氧羰基苄基 或苯基、 乙氧羰基苄基或苯基、 苯氧基羰基苄基或苯基、 氯代 苯氧基羰 基苄基或苯基、 N-环己基氨基甲酰氧基苄基或苯基、 烯丙氧基羰基苄基 或苯基、氨甲酰基苄基或苯基、 N-甲基氨甲酰基苄基或苯基、 Ν, Ν- 二丙 基氨甲酰基苄基或苯基、 Ν-苯氨基甲酰基苄基或苯基、硝基苄基或苯基、 氰基苄基或苯基、硫代苄基或苯基、硫酸根-苄 基或苯基、 膦酰基苄基或 苯基、 磷酸根苄基或苯基、 和吗啉代苄基或苯基等； 所述卤素包括氟、 氯、 溴或碘； 所述杂原子包括但不限于甲氧基、 乙氧基、 丙氧基、 异丙 氧基、 正丁氧基、 异丁氧基、 叔丁氧基、 甲硫基、 乙硫基、 正丙硫基、 异丙硫基、 正丁硫基、 异丁硫基、 叔丁硫基、 甲亚磺酰基、 乙亚磺酰基、 异丙亚磺酰基、 甲磺酰基、 乙磺酰基、 异丙磺酰基； 所述杂环但不限于 吡啶基、 啉基、 噻51分基、 呋喃基、 噁唑基、 四唑基、 噻唑基、 咪唑基、 吡唑基或吲哚基；
Β为适配子， 所述适配子为 AS1411或 Sgc8c;
M为 O或 OH; z为 o;
X为 o;
其中八与 M、 Z或 X连接。 作为本发明的实施方式之一， 所述 A选自
-CO-;
-CO-CH2-CO- 、 -CO-CH2-CH2-CO- 、 -CO-CH2-CH2-CH2-CO- 、 -CO-CH2-CH2-CH2-CH2-CO-；
-CH=CH-CO- 、 -CH=CH-CH2-CO- 、 -CH=CH-CH2-CH2-CO- 、 -CH=CH-CH2-CH2-CH2-CO-、 -CH=CH-CH2-CH2-CH2-CH2-CO-；
-CH(OH)-Ph-CO- 、 -CH(OH)-Ph-CH2-CO- 、
-CH(OH)-Ph-CH2-CH2-CO- 、 -CH(OH)-Ph-CH2-CH2-CH2-CO- 、 -CH(OH)-Ph-CH2-CH2-CH2 -CH2-CO-;
-CH2-Ph-CH2-CO-、 -CH2-Ph-CH2-CH2-CO-、
-CH2-Ph-CH2-CH2-CH2-CO-、 -CH2-Ph-CH2-CH2-CH2 -CH2-CO-;
-CO-NH-CO- 、 -CO-NH-CH2-CO- 、 -CO-NH-CH2-CH2-CO- 、 -CO-NH-CH2- CH2-CH2-CO-、 -CO-NH-CH2- CH2-CH2-CH2-CO-;
-CH2-CH=CH-CO- 、 -CH2-CH=CH-CH2-CO- 、
-CH2-CH=CH-CH2-CH2-CO- 、 -CH2-CH=CH-CH2-CH2-CH2-CO- 、 -CH2-CH=CH- CH2-CH2-CH2- CH2-CO;
-CO-CH2-;
-CO-O-CO- 、 -CO-0-CH2-CO- 、 -CO-0-CH2-CH2-CO- 、 -CO-0-CH2-CH2-CH2-CO-、 -CO-0-CH2-CH2-CH2-CH2-CO-；
-S02-Ph-CO- 、 -S02-Ph- CH2-CO- 、 -S02-Ph-CH2-CH2-CO- 、 -S02-Ph-CH2-CH2-CH2-CO-、 或 -S02-Ph- CH2-CH2-CH2-CH2-CO-。
作为本发明实施方式之一、 B 为适配子， 所述适配子为 AS1411 或 Sgc8c。
作为本发明实施方式之一， 所述式 II雷公藤甲素衍生物为如下结构 的化合物：
Figure imgf000012_0001
Figure imgf000013_0001
(36) H H OH H H H H 0 0 0 0 -CH=CH-CO- AS1411
(37) H H H OH H H H 0 0 0 0 -CH=CH-CO- AS1411
(38) H H H H OH H H 0 0 0 0 -CH=CH-CO- AS1411
(39) H H H H H OH H 0 0 0 0 -CH=CH-CO-
Figure imgf000014_0001
AS1411
(40) H H H H H H OH 0 0 0 0 -CH=CH-CO- AS1411
(41) H H H H H H H NH 0 0 0 -CH=CH-CO- AS1411
(42) OH H H H H H H 0 0 0 0 -CH=CH-CO- Sgc8c
(43) H OH H H H H H 0 0 0 0 -CH=CH-CO- Sgc8c
(44) H H OH H H H H 0 0 0 0 -CH=CH-CO- Sgc8c
(45) H H H OH H H H 0 0 0 0 -CH=CH-CO- Sgc8c
(46) H H H H OH H H 0 0 0 0 -CH=CH-CO- Sgc8c
(47) H H H H H OH H 0 0 0 0 -CH=CH-CO- Sgc8c
(48) H H H H H H OH 0 0 0 0 -CH=CH-CO- Sgc8c
(49) H H H H H H H NH 0 0 0 -CH=CH-CO- Sgc8c 作为本发明实施方式之一， 所述雷公藤曱素衍生物为具有如下式 III 的化合物：
Figure imgf000014_0002
R5=为 H或 OH;
R6=为 H或 OH;
R7=为 H或 OH;
G为 O或 NH;
M为 OH;
Z为 O;
X为 o;
A为 -S02-Ph-CO-、 或 -S02-Ph-(CH2)n-CO-; 其中 K n < 14; 优选为 K n < 7， 例如 n为 1、 2、 3、 4、 5、 6或 7;
作为本发明实施方式之一， 可选择地 （CH2)n还含有取代 (CH2)n中一 个或多个氢的直链或支链烷基、 链烯基、 芳烷基和烷基芳烷基、 芳香烃、 卤素、 杂原子基团、 杂环取代基， 所述烷基包括但不限于甲基、 乙基、 丙基、 丁基、 戊基、 己基或庚基； 所述链烯基乙錄基、 1-丙錄基、 烯丙基、 异丙烯基、 1-丁烯基、 2-丁錄基、 3-丁烯基、 1， 3-丁二錄基， 或其链烯基 的 E或 Z的异构体； 芳烷基和烷基芳烷基的示例包括但不限于苄基、 二 苯甲基、 甲苯基甲基、 三苯甲基、 肉桂基、 苯乙基、 苯乙烯基、 苯基丁 基、 或新苯基； 所述芳香基包括但不限于苯基、 二苯基、 甲苯基、 甲苄 基、 2, 4,6-三甲苯基、 枯烯基、 二（叔丁基）苯基、 蒽基、 茚基、 萘基、 卤代芳基、 卤代芳烷基苯氧基、 甲苯氧基、 二甲苯基氧基、 2,4, 6-三甲苯 氧基和枯烯氧基、 二苯基、 苯胺基、 甲苯氨基、 甲苯磺酰基、 烯丙苄基 或苯基、 呋喃基、 吡啶基、 2-吡啶基（吡啶 -2-基）、 吲哚 -1 -基、 氯甲基苄 基或苯基、三氟甲基苄基或苯基、羟基苄基或苯基、 甲氧基苄基或苯基、 乙氧基苄基或苯基、 甲氧基乙氧基苄基或苯基、 烯丙氧基苄基或苯基、 苯氧基苄基或苯基、 乙酰氧基苄基或苯基、 苯甲酰氧基苄基或苯基、 甲 疏基苄基或苯基、 苯疏基苄基或苯基、 甲苯疏基苄基或苯基、 甲基氨基 苄基或苯基、 二甲基氨基苄基或苯基、 乙基氨基苄基或苯基、 二乙基氨 基苄基或苯基、 乙酰氨基苄基或苯基、 羧基苄基或苯基、 甲氧羰基苄基 或苯基、 乙氧羰基苄基或苯基、 苯氧基羰基苄基或苯基、 氯代苯氧基羰 基苄基或苯基、 N-环己基氨基甲酰氧基苄基或苯基、 烯丙氧基羰基苄基 或苯基、氨甲酰基苄基或苯基、 N-甲基氨甲酰基苄基或苯基、 Ν, Ν- 二丙 基氨甲酰基苄基或苯基、 Ν-苯氨基甲酰基苄基或苯基、 硝基苄基或苯基、 氰基苄基或苯基、 硫代苄基或苯基、 硫酸根-苄基或苯基、 膦酰基苄基或 苯基、 磷酸根苄基或苯基、 和吗啉代苄基或苯基等； 所述卤素包括氟、 氯、 溴或碘； 所述杂原子包括但不限于甲氧基、 乙氧基、 丙氧基、 异丙 氧基、 正丁氧基、 异丁氧基、 叔丁氧基、 甲硫基、 乙硫基、 正丙硫基、 异丙硫基、 正丁硫基、 异丁硫基、 叔丁硫基、 甲亚磺酰基、 乙亚磺酰基、 异丙亚磺酰基、 甲磺酰基、 乙磺酰基、 异丙磺酰基； 所述杂环包括但不 限于吡啶基、 喹啉基、 噻吩基、 呋喃基、 噁唑基、 四唑基、 噻唑基、 咪 唑基、 吡唑基或吲哚基等。
B为适配子， 所述适配子为 AS1411或 Sgc8c。
作为本发明实施方式之一， 所述 A 选自 -S02-Ph-CO-、 -S02-Ph- CH2-CO-、 -S02-Ph- CH2-CH2-CO-、 -S02-Ph- CH2-CH2-CH2-CO-或 -S02-Ph- CH2-CH2-CH2-CH2-CO-。
作为本发明实施方式之一， B 为适配子， 所述适配子为 AS1411 或 Sgc8c。 作为本发明实施方式之一， 所述式 m的雷公藤甲素衍生物为如下结 构的化合物：
Figure imgf000016_0001
作为本发明实施方式之一， 所述的雷公藤甲素衍生物具有如下式 IV 的化合物:
Figure imgf000017_0001
式 IV
其中， Ri=为 H或 OH;
R2=为 H或 OH;
R3=为 H或 OH;
R4=为 H或 OH;
R5=为 H或 OH;
R6=为 H或 OH;
R7=为 H或 OH;
G为 O或 NH;
M为 OH;
Z为 O;
X为 o;
A为 -CO-、 -CO-(CH2)n-CO-、 -CH=CH-CO-、 -CH=CH-(CH2)n-CO-、 -CH(OH)-Ph-CO- 、 -CH(OH)-Ph-(CH2)n-CO- 、 -CH2-Ph-(CH2)n-CO- 、 -CO-NH-CO- 、 -CO-NH-(CH2)n-CO- 、 -CH2-CH=CH-CO- 、 -CH2-CH=CH-(CH2)n-CO-、 -CO-CH2-、 -CO-0-(CH2)n-CO-、 -S02-Ph-CO-、 或 -S02-Ph-(CH2)n-CO-; 其中 K n < 14; 优选为 K n < 7， 例如 n为 1、 2、 3、 4、 5、 6或 7;
作为本发明实施方式之一， 可选择地、 （CH2)n还含有取代 (CH2)n中 一个或多个氢的直链或支链烷基、 链烯基、 芳烷基和烷基芳烷基、 芳香 烃、 卤素、 杂原子基团、 杂环取代基， 所述烷基包括但不限于甲基、 乙 基、 丙基、 丁基、 戊基、 己基或庚基； 所述链錄基乙錄基、 1-丙錄基、 烯 丙基、 异丙錄基、 1-丁烯基、 2-丁錄基、 3-丁錄基、 1， 3-丁二烯基， 和这 些链烯基的包括 E和 Z的异构体； 芳烷基和烷基芳烷基的示例包括但不 限于苄基、 二苯甲基、 甲苯基甲基、 三苯甲基、 肉桂基、 苯乙基、 苯乙 烯基、 苯基丁基或新苯基； 所述芳香基包括但不限于苯基、 二苯基、 甲 苯基、 甲苄基、 2, 4,6-三甲苯基、 枯烯基、 二（叔丁基）苯基、 蒽基、 茚 基、 萘基、 1¾代芳基、 1¾代芳烷基苯氧基、 甲苯氧基、 二甲苯基氧基、 2,4,6-三甲苯氧基和枯烯氧基、 二苯基、 苯胺基、 甲苯氨基、 甲苯磺酰基、 烯丙苄基或苯基、 呋喃基、 吡啶基、 2-吡啶基（吡啶 -2-基）、 吲哚 -1-基、 氯甲基苄基或苯基、 三氟甲基苄基或苯基、 羟基苄基或苯基、 甲氧基苄 基或苯基、 乙氧基苄基或苯基、 甲氧基乙氧基苄基或苯基、 烯 丙氧基苄 基或苯基、 苯氧基苄基或苯基、 乙酰氧基苄基或苯基、 苯甲酰氧基苄基 或苯基、 甲疏基苄基或苯基、 苯疏基苄基或苯基、 甲苯疏基苄基或苯基、 甲基氨基苄基或苯基、 二甲基氨基苄基或苯基、 乙基氨基苄基或苯基、 二乙基氨基苄基或苯基、 乙酰氨基苄基或苯基、 羧基苄基或苯基、 甲氧 羰基苄基或苯基、乙氧羰基苄基或苯基、苯氧基羰基苄基或苯基、氯代 苯 氧基羰基苄基或苯基、 N-环己基氨基甲酰氧基苄基或苯基、 烯丙氧基羰 基苄基或苯基、氨甲酰基苄基或苯基、 N-甲基氨甲酰基苄基或苯基、 N, N- 二丙基氨甲酰基苄基或苯基、 N-苯氨基甲酰基苄基或苯基、 硝基苄基或 苯基、 氰基苄基或苯基、 硫代苄基或苯基、 硫酸根-苄 基或苯基、 膦酰基 苄基或苯基、 磷酸根苄基或苯基、 和吗啉代苄基或苯基等； 所述卤素包 括氟、 氯、 溴或碘； 所述杂原子包括但不限于甲氧基、 乙氧基、 丙氧基、 异丙氧基、 正丁氧基、 异丁氧基、 叔丁氧基、 甲硫基、 乙硫基、 正丙硫 基、 异丙硫基、 正丁硫基、 异丁硫基、 叔丁硫基、 甲亚磺酰基、 乙亚磺 酰基、 异丙亚磺酰基、 甲磺酰基、 乙磺酰基、 异丙磺酰基； 所述杂环包 括但不限于吡啶基、 喹啉基、 噻吩基、 呋喃基、 噁唑基、 四峻基、 噻唑 基、 咪峻基、 吡唑基或吲哚基等。
B为适配子， 所述适配子为 AS1411或 Sgc8c;
M为 O或 OH;
Z为 o;
X为 o;
其中八与 M、 Z或 X连接。 作为本发明的实施方式之一， 所述 A选自
-CO-;
-CO-CH2-CO- 、 -CO-CH2-CH2-CO- 、 -CO-CH2-CH2-CH2-CO- 、 -CO-CH2-CH2-CH2-CH2-CO-；
-CH=CH-CO- 、 -CH=CH-CH2-CO- 、 -CH=CH-CH2-CH2-CO- 、
-CH=CH-CH2-CH2-CH2-CO-、 -CH=CH-CH2-CH2-CH2-CH2-CO-；
-CH(OH)-Ph-CO- 、 -CH(OH)-Ph-CH2-CO- 、
-CH(OH)-Ph-CH2-CH2-CO- 、 -CH(OH)-Ph-CH2-CH2-CH2-CO- 、 -CH(OH)-Ph-CH2-CH2-CH2 -CH2-CO-;
-CH2-Ph-CH2-CO-、 CH2-Ph-CH2-CH2-CO-、
CH2-Ph-CH2-CH2-CH2-CO-、 -CH2-Ph-CH2-CH2-CH2 -CH2-CO-;
-CO-NH-CO- 、 -CO-NH-CH2-CO- 、 -CO-NH-CH2-CH2-CO- 、 -CO-NH-CH2- CH2-CH2-CO-、 -CO-NH-CH2- CH2-CH2-CH2-CO-;
-CH2-CH=CH-CO- 、 -CH2-CH=CH-CH2-CO- 、 -CH2-CH=CH-CH2-CH2-CO- 、 -CH2-CH=CH-CH2-CH2-CH2-CO- 、 -CH2-CH=CH- CH2-CH2-CH2- CH2-CO;
-CO-CH2-;
-CO-O-CO- 、 -C0-0-CH2-C0- 、 -CO-0-CH2-CH2-CO- 、 -CO-0-CH2-CH2-CH2-CO-、 -CO-0-CH2-CH2-CH2-CH2-CO-；
-S02-Ph-C0-、 -S02-Ph- CH2-CO-、 -S02-Ph- CH2-CH2-CO-、 -S02-Ph-
CH2-CH2-CH2-CO-、 或 -S02-Ph-CH2-CH2-CH2-CH2-CO-。
作为本发明实施方式之一， B 为适配子， 所述适配子为 AS1411 或 Sgc8c。
作为本发明实施方式之一， 所述式 IV的雷公藤甲素衍生物为如下结 构的^ ^合物：
Figure imgf000019_0001
(60) H H H H H H H 0 OH 0 0 -CO-NH-CH2-CO- AS1411
(61) H H H H H H H 0 OH 0 0 -CH2-CH=CH-CH2-CO- AS1411
(62) H H H H H H H 0 OH 0 0 -CO-0-CH2-CO- AS1411
(63) H H H H H H H 0 OH 0 0 -S02-Ph-CH2-CO- AS1411
(64) H H H H H H H 0 OH 0 0 -CO- CH2- CH2-CO- AS1411
(70) H H H H H H H 0 OH 0 0 -CO-CH2-CO- Sgc8c
(71) H H H H H H H 0 OH 0 0 -CH=CH-CH2-CO- Sgc8c
(72) H H H H H H H 0 OH 0 0 -CH=CH-CO- Sgc8c
(73) H H H H H H H 0 OH 0 0 -CH2-Ph-CH2-CO- Sgc8c
(74) H H H H H H H 0 OH 0 0 -CO-NH-CH2-CO- Sgc8c
(75) H H H H H H H 0 OH 0 0 -CH2-CH=CH-CH2-CO- Sgc8c
(76) H H H H H H H 0 OH 0 0 -CO-0-CH2-CO- Sgc8c
(77) H H H H H H H 0 OH 0 0 -S02-Ph-CH2-CO- Sgc8c
(78) H H H H H H H 0 OH 0 0 -CO- CH2- CH2-CO- Sgc8c 本发明还进一步提供了所述新的雷公藤甲素衍生物的制备方法， 所 述方法包括：
1 )将雷公藤甲素或其修饰物与做为桥接中间体于有机溶剂中、 -20°C 〜100°C、 可选择地并在催化剂作用下、 反应；
2 )将碱性溶液中适配子与步骤 1 )所得产物于有机溶剂中 0°C〜室温 下进行反应。
作为本发明实施方式之一， 所述方法中当在 C18或 C12位结合适配子 时， 还进一步包括首先对 c14位羟基与保护剂进行保护反应， 所述保护剂 选自叔丁基二甲硅基三氟甲磺酸酯或苄溴。
作为本发明实施方式之一， 所述步骤 1)中的有机溶剂选自吡啶、 二 氯甲烷、 乙腈、 N-甲基吗啉、 二甲基亚砜、 三乙胺或 Ν,Ν二甲基吡啶、 或它们中两种或两种以上组合物。
作为本发明实施方式之一， 所述步骤 1) 中的催化剂为氧化银。
作为本发明实施方式之一， 所述步骤 2) 中的碱性溶液选自碳酸钠 / 碳酸氢钠的緩冲溶液、 三乙胺或碳酸钾或它们中的两种或两种以上的组 合； 作为本发明实施方式之一， 所述碳酸钠 /碳酸氢钠的緩冲溶液的 pH 值为 9.0。
作为本发明实施方式之一， 所述雷公藤甲素衍生物制备方法的步骤 2 ) 中， 所述的碱性溶液选自碳酸钠 /碳酸氢钠的緩冲溶液 、 三乙胺或碳 酸钾或它们中的两种或两种以上的组合。
作为本发明实施方式之一， 所述雷公藤甲素衍生物制备方法的步骤 2 )中， 所述的有机溶剂选自二氯甲烷 、二甲基亚砜、 乙腈或氯化 4-(4,6- 二甲氧基 -1,3,5-三嗪 -2-基) -4-甲基吗啉盐 （DMT-MM ), 或它们中的两种 或两种以上的组合。
作为本发明实施方式之一， 所述雷公藤甲素衍生物制备方法的步骤 步骤 2 ) 中， 所述的桥接中间体可以选自以丁二酸酐、 光气、 烯丙基溴、 丙炔酸、 4-溴甲基苯甲酸、 异氰酸酯、 酰氯、 氯甲酸酯、 苯磺酰氯、 2- 溴乙酰氯或 4-溴 -2-丁烯酸甲酯或它们的类似物。
本发明方法中的桥接中间体均为本领域已知的小分子化合物， 既可 以通过市售的方式进行购买、 也可以由本领域技术人员通过现有技术文 献记载内容制备而成， 所述桥接中间体的小分子化合物包括但不限于丁 二酸酐、 光气 、 丙炔酸、 4-溴（甲氧基） 甲基苯甲酸乙酯、 4-溴甲基苯 甲酸乙酯、异氰酸乙酸甲酯、 4-溴 -2-丁烯酸甲酯、氯甲酸酯、 2-溴乙酰氯、 4-磺酰氯苯甲酸甲酯或它们的类似物。
作为本发明实施方式之一， 本发明所述制备方法中雷公藤甲素及其 爹饰物均为本领域已知的化合物， 既可以通过市售的方式进行购买、 也 可以由本领域技术人员通过现有技术文献记载内容制备而成， 其包括但 不限于雷公藤乙素， 雷公藤内酯酮， 雷公藤内酯， 16-羟基雷公藤内酯醇 或雷公藤内酯三醇。
本发明所述发明中的适配子包括但不限于 AS1411或 Sgc8c， 还可以 是其他的具有类似属性的已知适配子， 所述适配子的来源既可以通过市 售的方式进行购买、 也可以由本领域技术人员通过现有技术文献记载内 容制备而成。 进行分离纯化步骤，' 所 步骤均可以由本领域技术人员根据本领 常识 及本发明记载采用常规的方法进行分离纯化、 所述分离纯化方法包括但 不限于本领域常用的过滤、 相分离、 结晶、 吸附、 色傳柱洗脱等各种常 规的方法。 识， 例如利用包括但不
TLC、 HPLC的方法来判断各反应过程的反应完全程度，
Figure imgf000022_0001
结合常识来 进行操作。
作为本发明实施方式之一， 如采用丁二酸酐或其类似物作为桥接中 间体时制备含有取代基 A为 -CO-(CH2)n-CO-的新的雷公藤甲素或其修饰 物与适配子结合的衍生物时； 所述丁二酸酐或其类似物指包括但不限于 丙二酸酐、 丁二酸酐、 戊二酸酐、 庚二酸酐等等；
Figure imgf000022_0002
， 作为实施方 式之一， 其制备方法包括：
将在常温条件下， 向溶有雷公藤甲素或其修饰物的吡啶溶液中加入 丁二酸酐或其类似物；然后在氮气保护的条件下， ^^应体系升温至 70°C 〜100°C下、 应结束后， 降至室温， 分离精制所得中间产物； 然后将所得 中间产物溶于二甲基亚砜 (DMSO ) (或性质类似的溶剂） 中， 并将 DMT-MM溶于蒸榴水中， 同时将适配子溶于碱性緩冲溶液中； 之后将溶 于 DMSO中的中间产物和溶于蒸榴水中的 DMT-MM—次性加入到含有 适配子的碱性緩冲溶液中， 室温条件下充分反应、 即得到相应的本发明 所述的新的雷公藤甲素的衍生物。
作为本发明实施方式之一， 采用丁二酸酐作为桥接中间体， 制备 C14 位结合适配子的式（ II )化合物时， 所述合成路线如下：
Figure imgf000023_0001
(GGTGGTGGTGGTTGTGGTGGTGGTGG)CH2CH(OH)CH20(CH2)3NH2'
AS1411 )
Figure imgf000023_0002
A-3
作为本发明实施方式之一， 采用光气作为桥接中间体， 制备 c14位结 合适配子的式（ II )化合物时， 所述合成路线如下：
Figure imgf000023_0003
TriptoUde ΰ_
5 (GGTGGTGGTGGTTGTGGTGGTGGTGG)CH2CH(OH)CH
Figure imgf000023_0004
B-3
作为本发明实施方式之一， 如采用丙炔酸或其类似物作为桥接中间 体时制备含有取代基 A 为 -CH=CH-CO-或 -CH=CH-(CH2)n-CO-的新的雷 公藤甲素或其修饰物与适配子结合的衍生物时； 所述的丙炔酸或其类似 物指包括但不限于丙炔酸、 丁炔酸、 戊炔酸、 庚炔酸等等； 式之二， 其制备 法 括： ' 、 、' 、 将丙炔酸溶于 Ν,Ν二甲酰胺（DMF ) 中， 加入弱碱（例如包括但不 限于碳酸氢钠）， 室温条件下反应，加入烯丙基溴，保持在室温条件反应， 反应完全后，得该方法中的中间产物 -1; 然后将雷公藤甲素或其修饰物与 中间产物 -1溶于乙腈溶剂中、然后加入 Ν-甲基吗啉 (ΝΜΜ)， 室温条件下 反应完全， 得到该方法中的中间产物 -2; 然后将中间产物 -2 溶于四氢呋 喃中， 加入吗啉和四三苯基膦钯， 常温条件下反应完全， 得到该方法中 的中间产物 -3; 然后将所得中间产物 -3溶于二甲基亚砜 (DMSO ) (或性质 类似的溶剂）中， 并将 DMT-MM溶于蒸榴水中， 并将适配子溶于碱性緩 冲溶液中；之后将溶于 DMSO中的中间产物和溶于蒸馏水中的 DMT-MM 一次性加入到含有适配子的碱性緩冲溶液中， 室温条件下充分反应、 即 得到相应的本发明所述的新的雷公藤甲素的衍生物。
作为本发明实施方式之一， 采用丙炔酸作为桥接中间体， 制备 C14 位结合适配子的式（ II )化合物时， 所述合成路线如下：
Figure imgf000025_0001
D-3
作为本发明实施方式之一， 如采用 4-溴（甲氧基） 甲基苯甲酸甲酯 或其类似物作为桥接中间体时制备含有取代基 A为- CH(OC¾)-Ph-CO-、 CH(OC¾)-Ph-(CH2)n-CO-的新的雷公藤甲素或其修饰物与适配子结合的 衍生物时； 所述的 4-溴（甲氧基） 甲基苯甲酸甲酯或其类似物指包括但 不限于 4-溴（甲氧基） 甲基苯甲酸甲酯、 4-溴（甲氧基） 甲基苯乙酸甲 酯、 4-溴（甲氧基） 甲基苯丙酸甲酯、 4-溴（甲氧基） 甲基苯丁酸甲酯、 或其
Figure imgf000025_0002
式之一， 其制备方法包括：
在 0° (：， 氮气条件下， 将雷公藤甲素或其修饰物溶于 DMF中， 在加 入 4-溴（甲氧基） 甲基苯甲酸甲酯或其类似物和催化剂； 温度下反应完 全， 得该方法中的中间产物 -1 ; 在 0°C条件下， 将反应中间产物 -1溶于二 氯甲烷中 （DCM ) 中， 加入氢氧化钠水溶液， 保持此温度条件下反应完 全， 得到该方法中的中间产物 -2; 然后将所得中间产物 -2 溶于二甲基亚 砜 (DMSO ) (或性质类似的溶剂） 中， 并将 DMT-MM溶于蒸馏水中， 并 将适配子溶于碱性緩冲溶液中； 将溶于 DMSO中的中间产物和溶于蒸馏 水中的 DMT-MM—次性加入到含有适配子的碱性緩冲溶液中，室温条件 下充分反应、 即得到相应的本发明所述的新的雷公藤甲素的衍生物。
作为本发明实施方式之一， 采用 4-溴（甲氧基） 甲基苯甲酸甲酯作 为桥接中间体， 制备 C14位结合适配子的式（ II )化合物时， 所述合成路 线如
Figure imgf000026_0001
作为本发明实施方式之一， 如采用 4-溴甲基苯乙酸甲酯或其类似物 作为桥接中间体制备含有取代基 A为 -CH2-Ph-CO-或 CH2-Ph-(CH2)n-CO- 的新的雷公藤甲素或其修饰物与适配子结合的衍生物时； 所述的 4-溴甲 基苯乙酸甲酯或其类似物指包括但不限于 4-溴甲基甲基苯甲酸甲酯、 4- 溴甲基苯乙酸甲酯、 4-溴甲基苯丙酸甲酯、 4-溴甲基苯丁酸甲酯、 或其它 们的乙酯、 丙酯或丁酯等等； 式之二， 其制备 法 括： ' 、 、' 、 在 0° (：， 氮气条件下， 将雷公藤甲素或其修饰物溶于 DMF中， 在加 入 4-溴甲基苯乙酸甲酯或其类似物和催化剂； 温度下反应完全， 得该方 法中的中间产物 -1 ; 在 0°C条件下， 将反应中间产物 -1 溶于二氯甲烷
( DCM ) 中， 加入氢氧化钠水溶液， 保持此温度条件下反应完全， 得到 该方法中的中间产物 -2;然后将所得中间产物 -2溶于二甲基亚砜 (DMSO )
(或性质类似的溶剂）中， 并将 DMT-MM溶于蒸榴水中， 并将适配子溶 于碱性緩冲溶液中； 将溶于 DMSO 中的中间产物和溶于蒸榴水中的 DMT-MM一次性加入到含有适配子的碱性緩冲溶液中， 室温条件下充分 反应、 即得到相应的本发明所述的新的雷公藤甲素的衍生物。
作为本发明实施方式之一， 采用 4-溴甲基苯乙酸甲酯作为桥接中间 体，
Figure imgf000027_0001
作为本发明实施方式之一， 如采用异氰酸乙酸甲酯或其类似物作为 桥接中间体制备含有取代基 A为- CO-NH-CO-或 -CO-NH-(CH2)n-CO-的新 的雷公藤甲素或其修饰物与适配子结合的衍生物时； 所述的异氰酸乙酸 甲酯或其类似物指包括但不限于异氰酸乙酸甲酯、 异氰酸甲酸甲酯、 异 氰酸丙酸甲酯、 异氰酸丁酸甲酯或其它们的甲酯、 丙酯或丁酯等等；
Figure imgf000027_0002
， 作为实施方 式之一， 其制备方法包括：
将雷公藤甲素或其爹饰物和三乙胺溶于二氯甲烷中， 然后加入异氰 酸乙酸甲酯或其类似物， 室温条件下反应完全， 得到该方法中的中间产 物 -1; 在 0°C条件下， 将中间产物 -1溶于 DCM中，加入氢氧化钠水溶液， 保持此温度条件下反应完全，得到该方法中的中间产物 -2;在室温条件下， 将中间产物 -2溶于 DMF中， 然后加入羟基苯并三唑（ HOBT )和 1-乙基 -3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐（EDCI ), 在室温条件反应完全， 加入 适配子， 继续反应完全、 即得相应的本发明所述的新的雷公藤甲素的衍 生物。
作为本发明实施方式之一， 采用异氰酸乙酸甲酯作为桥接中间体，
Figure imgf000028_0001
Figure imgf000028_0002
作为本发明实施方式之一， 如采用 4-溴 -2-丁烯酸甲酯或其类似物作 为 桥接 中 间 体制 备含有取代基 A 为 -CH2-CH=CH-CO- 、 -CH2-CH=CH-(CH2)n-CO-的新的雷公藤甲素或其修饰物与适配子结合的 衍生物时； 所述的 4-溴 -2-丁烯酸甲酯或其类似物指包括但不限于 4-溴 -2- 丁烯酸甲酯、 4-溴 -2-戊烯酸甲酯、 4-溴 -2-己烯酸甲酯、 4-溴 -2-庚烯酸甲 酯、 4-溴 -2-辛烯酸甲酯或其它们的乙酯、 丙酯或丁酯等等； 式之二， 其制备 法 括： ' 、 、' 、 在 0°C， 氮气条件下， 将雷公藤甲素或其修饰物溶于 DMF中， 在加 4-溴 -2-丁烯酸甲酯或其类似物和催化剂， 室温下反应完全得该方法中的 中间产物 -1。 在 0°C条件下， 将中间产物 -1溶于 DCM中， 加入氢氧化钠 水溶液， 保持此温度条件下反应完全， 得方法中的中间产物 -2; 然后将所 得中间产物 -2 溶于二甲基亚砜 (DMSO ) (或性质类似的溶剂） 中， 并将 DMT-MM 溶于蒸榴水中， 并将适配子溶于碱性緩冲溶液中； 将溶于 DMSO中的中间产物 -2和溶于蒸榴水中的 DMT-MM—次性加入到含有 适配子的碱性緩冲溶液中， 室温条件下充分反应即得到相应的本发明所 述的新的雷公藤甲素的衍生物。
作为本发明实施方式之一，采用 4-溴 -2-丁烯酸甲酯作为桥接中间体， 制备 C14位结合适配子的式（ II )化合物时， 所述合成路线如下:
Figure imgf000029_0001
L-4
作为本发明实施方式之一， 如采用 3- (氯欺基氧基） 丙酸苄酯或其 类似物作为桥接中 间体制备含有取代基 A 为 -CO-CH2-或 -CO-0-(CH2)n-CO-的新的雷公藤甲素或其修饰物与适配子结合的衍生物 时； 所述的 3- (氯欺基氧基）丙酸苄酯或其类似物指包括但不限于 3- (氯 羰基氧基） 乙酸苄酯、 3- (氯羰基氧基）丁酸苄酯、 3- (氯羰基氧基）戊 酸苄酯、 3- (氯欺基氧基） 己酸苄酯、 3- (氯欺基氧基）庚酸苄酯或其它 们的乙酯、 丙酯或丁酯、 苯甲酯、 苯乙酯等等； 式之二， 其制备 法 括： ' 、 、' 、 在 0°C氮气条件下， 将雷公藤甲素或其修饰物和 Ν,Ν-二甲基吡啶溶 于二氯甲烷中， 然后加入 3- (氯欺基氧基） 丙酸苄酯或其类似物、 室温 下反应完全， 得到该方法中的中间产物 -1 ; 将中间产物 -1 溶于甲醇中， 加入催化剂， 常温条件反应完全、得到该方法中的中间产物 -2; 然后将所 得中间产物 -2 溶于二甲基亚砜 (DMSO ) (或性质类似的溶剂） 中， 并将 DMT-MM 溶于蒸榴水中， 并将适配子溶于碱性緩冲溶液中； 将溶于 DMSO中的中间产物 -2和溶于蒸榴水中的 DMT-MM—次性加入到含有 适配子的碱性緩冲溶液中， 室温条件下充分反应即得到相应的本发明所 述的新的雷公藤甲素的衍生物。
作为本发明实施方式之一， 采用 3- (氯欺基氧基） 丙酸苄酯作为桥 接中间体， 制备 C14位结合适配子的式（ II )化合物时， 所述合成路线如
Figure imgf000030_0001
Figure imgf000030_0002
作为本发明实施方式之一， 如采用 2-溴乙酰氯或其类似物作为桥接 中间体制备含有取代基 A为 -CO-CH2-或 -CO-0-(CH2)n-CO-的新的雷公藤 甲素或其修饰物与适配子结合的衍生物时； 所述的 2-溴乙酰氯或其类似 物指包括但不限于 2-溴乙酰氯、 2-溴甲酰氯、 2-溴丙酰氯、 2-溴丁酰氯、 2-溴戊酰氯、 2-溴己酰氯、 2-溴庚酰氯等等； 其制备方法可以采用本领域 常规的制备方法进行制备，作为实施方式之一，其制备方法包括：在 0°C， 氮气条件下， 将雷公藤甲素或其修饰物溶于 DMF中， 在加入苄溴和催化 剂。室温完全得该方法的中间产物 -1;将中间产物 -1溶于四氢呋喃（THF ) 中， 加入氢氧化钠水溶液， 将反应体系升温至 50〜75°C反应完全， 即得该 方法中的中间产物 -2。将中间产物 -2溶于二氯甲烷中，加入三乙胺，在 0V 条件下緩慢滴加溶于二氯甲烷中的甲氧基欺基苯磺酰氯， 滴加完后， 是 反应体系自然升至室温，反应完全的该方法中的目标产物 -3。将目标产物 -3溶于 THF中， 加入 50mg 10%钯碳， 置换氢气， 常温反应 5h， TLC监 测反应， 反应结束后， 抽滤除去钯碳， 直接进行下一步； 在 0°C条件下， 将上步产物溶于 DCM中，加入氢氧化锂水溶液，保持此温度条件下反应 完全， 即得相应的本发明所述的新的雷公藤甲素的衍生物 C14
Figure imgf000031_0001
TP
N-2
Figure imgf000031_0002
N-3 作为本发明实施方式之一， 如采用 4-磺酰氯苯甲酸甲酯 （methyl-4- ( chlorosulfonyl ) -benoate ) 或其类似物作为桥接中间体制备含有取代基 A为 -S02-Ph-CO-、或 -S02-Ph-(CH2)n-CO-的雷公藤甲素或其修饰物与适配 子结合的衍生物时； 所述的 4-溴 -2-丁烯酸甲酯或其类似物指包括但不限 于 4-磺酰氯苯乙酸甲酯、 4-磺酰氯苯丙酸甲酯、 4-磺酰氯苯丁酸甲酯、 4- 磺酰氯苯戊酸甲酯、 4-磺酰氯苯己酸甲酯、 4-磺酰氯苯庚酸甲酯、 4-磺酰 氯苯辛酸甲酯或其它们的乙酯、 丙酯或丁酯等等；
作为本发明实施方式之一， 采用 4-磺酰氯苯甲酸甲酯作为桥接中间 体， 制备 C12位结合适配子的式（III )化合物时， 所述合成路线如下：
Figure imgf000032_0001
作为本发明实施方式之一， 采用丁二酸酐作为桥接中间体， 制备 Cl8 位结合适配子的式（IV)化合物时， 所述合成路线如下：
Figure imgf000033_0001
Figure imgf000033_0002
Figure imgf000033_0003
本发明上述以合成路线图显示的采用不同桥接中间体以制备本发明 新的雷公藤甲素衍生物的方法中， 仅是以雷公藤甲素为起始原料的示范 例， 上述合成路线中并不仅仅限于雷公藤甲素本身、 其同样适用于其他 的具有医药活性的其他雷公藤甲素的修饰物以制备成本发明所要求的与 适配子结合的新衍生物， 例如包括但不限于雷公藤乙素， 雷公藤内酯酮， 雷公藤内酯， 16-羟基雷公藤内酯醇以及雷公藤内酯三醇。
本发明还提供了式 I所示的雷公藤甲素衍生物的制药用途，即在制备 治疗胰腺癌、 賢癌、 小细胞肺癌、 脑癌、 神经癌、 骨癌、 淋巴癌、 肠癌、 子宫癌、 乳腺癌、 白血病、 肝癌、 前列腺癌、 皮肤癌、 黑色素瘤等肿瘤 的药物的应用。
在本发明的制药应用中， 可以将本发明新雷公藤甲素衍生物与适当 药用辅料制备本领域常用的各种制剂包括但不限于注射剂、 口服剂等， 其给药途径包括但不限于肌肉、 皮下、 静脉注射、 以及口服、 鼻腔等给 药。 附图说明
图 1 ： 实施例 1中 AS1411的质傳图； 图 2 ： 实施例 12中 Sgc8c的质傳图；
图 3: 为实施例 1中的 A-2的 LC-MS图傳；
图 4: 为实施例 1中的 A-2的 H-NMR图傳；
图 5: 为实施例 1中的 A-3 (即化合物 （ 1 ) ) 的 LC-MS图傳； 图 6: 为实施例 1中的 A-3 (即化合物 （ 1 ) ) 的 HPLC图傳； 图 7: 为实施例 3中的 D-1的 LC-MS图傳；
图 8: 为实施例 3中的 D-1的 H-NMR图傳；
图 9: 为实施例 3中的 D-2的 LC-MS图傳；
图 10 为实施例 3中的 D-2的 H-NMR图傳；
图 11 为实施例 3中的 D-3 (即化合物 （ 3 ) ) 的 LC-MS图傳； 图 12 为实施例 3中的 D-1 (即化合物 （ 3 ) ) 的 HPLC图傳； 图 13 为实施例 12中的 W-1的 LC-MS图傳；
图 14 为实施例 12中的 W-1的 H-NMR图傳；
图 15 为实施例 12中的 W-2的 LC-MS图傳；
图 16 为实施例 12中的 W-2的 H-NMR图谱；
图 17 为实施例 12中的 W-3 (即化合物 （22 ) ) 的 LC-MS图傳
18 为实验例 1中的 A-3 (即化合物 （ 1 ) )体外抑制 BxPC-3生 长作用曲线 （24小时） ；
图 19: 为实验例 1中的 A-3 (即化合物 （ 1 ) )体外抑制 BxPC-3生 长作用曲线 （48小时） ；
图 20: 为实验例 2中的 W-3 (即化合物（ 22 ) )体外抑制 CCRF-CEM 生长作用曲线（24小时） ；
图 21 : 为实验例 2中的 W-3 (即化合物（ 22 ) )体外抑制 L-02生长 作用;
图 22 为实全例 3中的 A-3 (即化合物 ( 1 ) )体内稳定性研究； 图 23 为实全例 3中的 A-3 (即化合物 ( 1 ) )血浆稳定性研究； 图 24 为实全例 3中的 A-3 (即化合物 ( 1 ) ) 心脏稳定性研究； 图 25 为实全例 3中的 A-3 (即化合物 ( 1 ) )肺脏稳定性研究； 图 26 为实全例 3中的 A-3 (即化合物 ( 1 ) )脾脏稳定性研究； 图 27 为实全例 3中的 A-3 (即化合物 ( 1 ) )肝脏稳定性研究 ； 图 28 为实全例 3中的 A-3 (即化合物 ( 1 ) ) 腎脏稳定性研究 ； 图 29: 为实验例 1中的 A-3 (即化合物（ 1 ) )肿瘤组织稳定性研究。 具体实施方式
本发明通过以下实施例或实验例进一步说明本发明， 但本发明并不 受限于此。 实施例 1 化合物 ( 1
Figure imgf000035_0001
(GGTGGTGGTGGTTGTGGTGGTGGTGG)CH2CH(OH)CH20(CH2)3NH2'
Figure imgf000035_0002
实验操作：
化合物 A-2的合成：
在常温条件下， 向溶有 TP ( 150 mg, 0.42 mmol )的吡啶溶液中加入 丁二酸酐 (125 mg, 1.25 mmol)。 在氮气保护的条件下， 使反应体系升温至 85 °C , 并保持在此温度下反应 30小时。 反应结束后 （TLC监测）， 降至 室温， 加入正己烷， 将产生的固体抽滤， 并用正己烷洗涤固体产物。 最 后将粗品通过正己烷 /乙酸乙酯来重结晶进行纯化得到 A-2。
LC-MS (ESI): [M+H] +: 461; [M+Na] +: 483
IH NMR (400 MHz, CDC13) δ = 5.09 (s, IH), 4.68 (s, 2H), 3.83 (d, J = 2.8 Hz, IH), 3.53 (d, J = 2.4, IH), 3.46 (d, J = 5.6 Hz, IH), 2.72 (m, 5H), 2.31 (m, IH), 2.14 (m, 2H), 1.89 (m, 2H), 1.56 (m, IH), 1.22 (m, IH), 1.05 (s, 3H), 0.95 (d, J = 7.2 Hz, 3H), 0.83 (d, J = 7.2 Hz, 3H).
化合物 A-3的合成：
将 (3 mg)的 AS1411溶于 pH=9.0的碳酸钠和碳酸氢钠的緩冲液中， 一次加入溶于 DMSO(54 ul)中的 A-2(5.4 umol, 150 eq.)和溶于 ddH20 (54 uL)中的 DMT-MM(5.4 umol, 200 eq.)，反应体系保持在室温条件下反应 12 小时， 反应结束后， 用 RP HPLC 纯化粗品后得到目标产物 A-3。
MS: calculated 8926 (found 8926.6)
实施例 1中相关原料或产物的图傳参见图 1、 3-6。 实施例 2化合物 ( 2 )的制备
Figure imgf000036_0001
化合物 B-2的合成：
在 -20° (：， 氮气条件下， 将光气（phosgene ) ( 108mg, l.lmmol )溶于 二氯甲烷中， 再将溶于二氯甲烷中的 TP(360mg, lmmol)逐滴加入， 滴加 完成后， 保持在这样的温度下反应 0.5 小时， 然后自然升至室温反应 2 小时。 TLC监测反应结束后， 在减压条件下除去生成的盐酸气体以及未 反应的光气。 然后将粗品直接用于下一步。
化合物 B-3的合成：
在 0°C条件下， 将 AS1411(3mg)溶于千燥的二氯甲烷中， 加入三乙胺 (2.02mg, 0.02mmol), 然后将上步所得到 B-2(4.22mg, O.Olmmol)滴加入反 应瓶中，然后将整个反应体系自然升至室温反应 4小时， TLC或是 LC-MS 监测反应结束后， 纯化即得。
MS: calculated 8872 (found 8871.4)
实施例 3化合物 ( 3 )的制备
Figure imgf000037_0001
D-3 将 C-1 (0.91 g, 13 mmol)溶于 DMF 中， 加入碳酸氢钠 (2.18 g, 26 mmol), 室温条件下搅拌一个小时后， 加入烯丙基溴 (2.28 g, 16.9 mmol)， 保持在室温条件过夜反应， TLC监测反应完全后，向反应体系中加入 EA， 然后用水多次萃取， 最后将有机相用无水硫酸钠千燥， 过滤， 蒸千， 得 到 C-2粗品。
化合物 D-1的合成：
将 TP (50 mg, 139 umol)和 C-2 (23 mg, 208 umol)溶于乙腈中，然后加 入 NMM(15 ul, 0.5 eq.)， 这个反应体系保持在室温条件下反应 12小时， TLC监测反应完全后， 在减压条件下除去有机溶剂， 得到的粗品经过快 速硅胶柱得到纯品 D-1.
LC-MS (ESI): [M+H] +: 471; [M+Na] +: 493 1H NMR (400 MHz, CDC13) 5 = 7.41 (d, J = 12.4 Hz, 1H), 5.91-5.98 (m: 1H), 5.47 (d, J = 12.4 Hz, 1H), 5.31 (dd, J = 1.2, 17.4 Hz, 1H), 5.22 (dd, J = 1.2, 10.4 Hz, 1H), 4.68 (s, 2H), 4.61 (d, J = 3.6 Hz, 2H), 3.82 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 3.69 (s, 1H), 3.60 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 3.38 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 2.70 (m, 1H), 2.30 (m, 1H), 2.16-2.22 (m, 1H), 1.92-2.06 (m, 2H), 1.57-1.61 (m, 3H),
1.17- 1.25 (m, 3H), 1.07 (s, 3H), 0.97 (d, J = 7.2 Hz, 3H), 0.87 (d, J = 6.8 Hz, 3H). 化合物 D-2的合成：
将 D-l(15 ul, 0.5 eq.)溶于四氢呋喃中， 加入吗啉 (50 ul, 10 equiv.)和四 三苯基膦钯 (14 mg, 0.15 equiv.)， 常温条件下反应， LC-MS监测反应， 直 到 D-1反应消失完全， 将有机溶剂减压除去后， 粗品经过制备色傳柱纯 化得到纯品 D-2.
LC-MS (ESI): [M+H] +: 431
1H NMR (400 MHz, CDC13) δ = 7.47 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 5. 42 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 4.68 (s, 2H), 3.83 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 3.71 (s, 1H), 3.57 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 3.39 (d, J = 5.39 Hz, 1H), 2.68-2.72 (m, 1H), 2.31-2.35 (m, 1H),
2.18- 2.23 (m, 4H), 1.93-2.06 (m, 2H), 1.60 (dd, J = 4.8, 12.4 Hz, 1H), 1.20-1.25 (m, 3H), 1.07 (s, 3H), 0.97 (d, J = 7.2 Hz, 3H), 0.88 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
化合物 D-3的合成：
将 AS1411(20 nmol)溶于 pH=9.0的碳酸钠和碳酸氢钠的緩冲液 (200 uL, pH 9.0)中， 一次加入溶于 DMSO (200 ul)中的 D-2(5 mg, 1200nmol)和 溶于 H20 (200 ul)中的 (200 nmol)DMT-MM, 反应体系保持在室温条件下 反应 12小时， 反应结束后， 用 RP HPLC纯化粗品后得到目标产物 D-3。
MS: calculated 8896 (found 8895.9)
实施例 3中相关原料或产物的图傳参见图 7-12。 实施例 4化合物 ( 4 )的制备方法
Figure imgf000039_0001
Figure imgf000039_0002
G-4
化合物 G-2的合成：
在 0° (：， 氮气条件下， 将 TP(360mg, lmmol)溶于 DMF中， 在加入 Z-l(680mg, 2.5mmol)和氧化银 (458mg, 2mmol)。 反应体系自然升至室温， 并在此温度下反应 24小时， TLC监测反应完全后， 加入水， 乙酸乙酯萃 取， 后合并有机相， 饱和食盐水洗涤， 无水硫酸钠千燥， 过滤， 浓缩得 粗品 0
化合物 G-3的合成：
在 0°C条件下， 将 G-2(552mg, lmmol)溶于 DCM中， 加入氢氧化钠 (80mg, 2mmol)7j溶液， 保持此温度条件下反应， TLC监测反应完全后， 用二氯甲烷萃取， 将有机相用饱和食盐水洗涤， 无水硫酸钠千燥， 过滤， 蒸千得到 G-3粗品。
化合物 G-4的合成：
将 AS1411(20 nmol)溶于 pH=9.0的碳酸钠和碳酸氢钠的緩冲液 (200 uL, pH 9.0)中， 一次加入溶于 DMSO (200 ul)中的 G-3(5 mg, lOOOnmol)和 溶于 H20 (200 ul)中的 (200 nmol)DMT-MM, 反应体系保持在室温条件下 反应 12 小时，反应结束后， 用 RP HPLC 纯化粗品后得到目标产物 G-4。
MS: calculated 8992 (found 8992.6) 实施例 5化合物 ( 5 )的制备方法
Figure imgf000040_0001
化合物 H-1的合成：
在 0°C， 氮气条件下， 将 TP(360mg, lmmol)溶于 DMF中， 在加入 Z-2(602mg, 2.5mmol)和氧化银 (458mg, 2mmol)。 反应体系自然升至室温， 并在此温度下反应 24小时， TLC监测反应完全后， 加入水， 乙酸乙酯萃 取， 后合并有机相， 饱和食盐水洗涤， 无水硫酸钠千燥， 过滤， 浓缩得 粗品 0
化合物 H-2的合成：
在 0°C条件下， 将 H-l(522mg, lmmol )溶于 DCM中， 加入氢氧化钠 (80mg, 2mmol)7j溶液， 保持此温度条件下反应， TLC监测反应完全后， 用二氯甲烷萃取， 将有机相用饱和食盐水洗涤， 无水硫酸钠千燥， 过滤， 蒸千得到 H-2粗品。
4匕合物 H-3的合成：
将 AS1411(20 nmol)溶于 pH=9.0的碳酸钠和碳酸氢钠的緩冲液 (200 uL, pH 9.0)中，一次加入溶于 DMSO (200 ul)中的 H-2(5 mg, 950nmol)和溶 于 H20 (200 ul)的 DMT-MM(200 nmol), 反应体系保持在室温条件下反应 12 小时， 反应结束后， 用 RP HPLC 纯化粗品后得到目标产物 H-3。 MS: calculated 8918 (found 8919.2) 实施例 6
Figure imgf000041_0001
Figure imgf000041_0002
化合物 K-2的合成：
将 TP(360mg, lmmol)和三乙胺（120mg, l. lmmol)溶于二氯甲烷中，然 后加入 Z-3(126mg, l. lmmol) ,这个反应体系保持在室温条件下反应 12小 时， TLC监测反应完全后， 在减压条件下除去有机溶剂， 得到的粗品经 过快速硅胶柱得到纯品 K-2。
化合物 Κ-3的合成：
在 0°C条件下， 将 K-2(475mg, lmmol)溶于 DCM中， 加入氢氧化钠 (80mg, 2mmol)7j溶液， 保持此温度条件下反应， TLC监测反应完全后， 用二氯甲烷萃取， 将有机相用饱和食盐水洗涤， 无水硫酸钠千燥， 过滤， 蒸千得到 K-3粗品。
化合物 K-4的合成：
在室温条件下， 将上步所以的 K-3(461mg, lmmol)溶于 DMF中， 然 后加入 HOBT(148mg, l. lmmol)和 EDCI(210mg, l. lmmol),在室温条件反 应 0.5小时后， 加入 AS1411(20 nmol)， 并在此温度下继续反应 3小时， TLC或是 LC-MS监测反应结束后， 纯化即得。
MS: calculated 8929 (found 8929.8) 实施例 7化合物 ( 7 )的制备
Figure imgf000042_0001
Figure imgf000042_0002
(GGTGGTGGTGGTTGTGGTGGTGGTGG)CH2CH(OH)CH20(CH2)3'
化合物 L-2的合成：
在 0°C， 氮气条件下， 将 TP(360mg, lmmol)溶于 DMF中， 在加入 Z-4(442mg, 2.5mmol)和氧化银 (458mg, 2mmol)。 反应体系自然升至室温， 并在此温度下反应 24小时， TLC监测反应完全后， 加入水， 乙酸乙酯萃 取， 后合并有机相， 饱和食盐水洗涤， 无水硫酸钠千燥， 过滤， 浓缩得 粗品 0
化合物 L-3的合成：
在 0°C条件下， 将 L-2(458mg, lmmol)溶于 DCM中， 加入氢氧化钠 (80mg, 2mmol)7j溶液， 保持此温度条件下反应， TLC监测反应完全后， 用二氯甲烷萃取， 将有机相用饱和食盐水洗涤， 无水硫酸钠千燥， 过滤， 蒸千得到 L-3粗品。
化合物 L-4的合成：
将 AS1411(20 nmol)溶于 pH=9.0的碳酸钠和碳酸氢钠的緩冲液 (200 uL, pH 9.0)中， 一次加入溶于 DMSO(200 ul)中的 L-3(5 mg, 1120nmol)和 溶于 H20 (200 ul)中的 DMT-MM(200 nmol), 反应体系保持在室温条件下 反应 12 小时，反应结束后， 用 RP HPLC 纯化粗品后得到目标产物 L-4。
MS: calculated 8912 (found 8913.2) 实施 8化合物 ( 8 )的制备
Figure imgf000043_0001
N-3
化合物 N-2的合成：
在 0°C，氮气条件下，将 TP (360mg, lmmol)和三乙胺（151mg, 1.5mmol) 溶于二氯曱烷中， 然后加入 Z-4(177mg, 1. lmmol), 这个反应体系升至室 温条件下反应， TLC监测反应完全后， 在减压条件下除去有机溶剂， 得 到的粗品经过快速硅胶柱得到纯品 N-2。
化合物 N-3的合成：
将 N-2(480mg， lmmol)溶于乙腈中， 加入碳酸钾（129mg, 1.2mmol) , 然后氮气保护的条件下加入 AS 1411(20 nmol), 然后将整个反应体系升至 50。C反应 4小时， TLC或是 LC-MS监测反应结束后， 纯化即得 N-3
MS: calculated 8886 (found 8887.4) 实施例 9化合物 ( 9 )的制备
Figure imgf000044_0001
Figure imgf000044_0002
化合物 0-2的合成：
在 0°C，氮气条件下，将 TP(360mg, lmmol)和 Ν,Ν-二甲基吡啶 (146mg, 1.2mmol)溶于二氯甲烷中， 然后加入 Z-5(266mg, l. leq)， 这个反应体系升 至室温条件下反应， TLC监测反应完全后， 在减压条件下除去有机溶剂， 得到的粗品经过快速硅胶柱得到纯品 0-2。
化合物 0-3的合成：
将 0-2(566mg, lmmol)溶于甲醇中， 加入 50mg的 10%的钯碳， 置换 氢气后， 在常温条件反应， TLC监测反应完全后， 抽滤， 蒸去有机溶剂， 得到粗品， 再选择合适的纯化方法得到 0-3.
化合物 0-4的合成：将 AS1411(20 nmol)溶于 pH=9.0的碳酸钠和碳酸 氢钠的緩冲液 (200 uL, pH 9.0)中，一次加入溶于 DMSO(200 ul)中的 0-2(5 mg, 1050nmol)和溶于 H2O (200 ul)中的 DMT-MM(200 nmol)，反应体系保 持在室温条件下反应 12 小时， 反应结束后， 用 RP HPLC 纯化粗品后得 到目标产物 0-3。
MS: calculated 8946 (found 8947.2) 实施例 10化合物 ( 50 )的制备
Figure imgf000045_0001
Figure imgf000045_0002
E-5
(GGTGGTGGTGGTTGTGGTG
Figure imgf000045_0003
化合物 E-2的合成：
在 0°C， 氮气条件下， 将 TP(360mg, lmmol)溶于 DMF中， 在加入苄 溴 (422mg, 2.5mmol)和氧化银 (458mg, 2mmol)。 反应体系自然升至室温， 并在此温度下反应 24小时， TLC监测反应完全后， 加入水， 乙酸乙酯萃 取， 后合并有机相， 饱和食盐水洗涤， 无水硫酸钠千燥， 过滤， 浓缩得 粗品 0
4匕合物 E-3的合成：
将 E-2(450mg, lmmol)溶于 THF中， 加入氢氧化钠（120mg, 3mmol) 水溶液， 将反应体系升温至 75 °C反应， TLC监测反应完全后， 使反应体 系降至室温， 加压除去 THF， 用二氯甲烷萃取， 将有机相用饱和食盐水 洗涤， 无水硫酸钠千燥， 过滤， 蒸千得到 E-3粗品。
4匕合物 E-4的合成：
将 E-3(468mg, lmmol)溶于二氯甲烷中， 加入三乙胺（151mg, 1.5mmol),在 0°C条件下緩慢滴加溶于二氯甲烷中的甲氧基羰基苯磺酰氯 (280mg, 1.2mmol),滴加完后，是反应体系自然升至室温， TLC监测反应， 反应完全后， 分别用水和饱和食盐水洗涤有机相， 无水硫酸钠千燥， 无 水硫酸钠千燥， 过滤， 蒸千得到 E-4粗品。
4匕合物 E-5的合成：
将 E-4(666mg, lmmol)溶于 THF中，加入 50mg 10%钯碳，置换氢气， 常温反应 5h， TLC监测反应， 反应结束后， 抽滤除去钯碳， 直接进行下 一步； 在 0°C条件下， 将 lmmol 的上步产物溶于 DCM中， 加入氢氧化 锂 (38mg, 2mmol)水溶液，保持此温度条件下反应， TLC监测反应完全后， 用二氯甲烷萃取， 将有机相用饱和食盐水洗涤， 无水硫酸钠千燥， 过滤， 蒸千得到 E-5粗品
4匕合物 E-6的合成：
将 (3 mg)的 AS1411溶于 pH=9.0的碳酸钠和碳酸氢钠的緩冲液中， 一次加入溶于 DMSO(54 ul)中的 E-5(5.4 umol, 150 eq.)和溶于 ddH20 (54 uL)中的 DMT-MM(5.4 umol, 200 eq.)，反应体系保持在室温条件下反应 12 小时， 反应结束后， 用 RP HPLC 纯化粗品后得到目标产物 E-6。
MS: calculated 9012 (found 9012.4)
实施例 11 化合物 ( 64 )的制备
Figure imgf000047_0001
Figure imgf000047_0002
化合物 F-2的合成：
在 0 °C条件下， 将 TP(360mg, lmmol)溶于二氯甲烷中， 加入 DIEA(195mg, 1.5mmol) , 然后将用二氯甲烷稀释后的叔丁基二甲硅基三 氟甲磺酸酯 （TBSOTf ) (317mg, 1.2mmol)緩慢滴加进去， 保持这个温度 反应 0.5小时后升至室温反应 4小时， TLC监测反应完全后， 将反应液 倒入饱和的碳酸氢钠水溶液中， 用二氯甲烷萃取， 饱和食盐水洗涤， 无 水硫酸钠千燥， 过滤， 蒸千， 可得 F-2粗品。
4匕合物 F-3的合成：
将 F-2(474mg, lmmol)溶于千燥的四氢呋喃中，在 -78° ( ， 氮气保护的 条件下， 緩慢加入稍微过量的 LDA， 保持这个温度反应一个小时后， 加 入丁二酸酐（lOOmg, lmmol) , 然后将反应体系自然升至室温反应 2小时， TLC监测反应完全后， 将加入飽和的氯化铵水溶液， 再将这个溶液浓缩 蒸去四氢呋喃， 用二氯甲烷萃取， 饱和食盐水洗涤， 无水硫酸钠千燥， 过滤， 蒸千， 可得 F-3粗品。
化合物 F-4的合成：
将 F-3(574mg, lmmol)溶于千燥的四氢呋喃和水的混合溶液中， 在室 温条件下，加入四丁基氟化铵 (313mg,1.2mmol)， 常温搅拌反应 3小时后， 浓缩， 再用二氯甲烷萃取， 饱和食盐水洗涤， 无水硫酸钠千燥， 过滤， 蒸千， 可得 F-4粗品。
4匕合物 F-5的合成： 在室温条件下， 将上步所以的 F-4(460mg, lmmol)溶于二氯甲烷中， 然后加入 HATU(148mg, l.lmmol)和 DIE A(210mg, l. lmmol),在室温条件 反应 0.5小时后， 加入 AS1411(20 nmol)， 并在此温度下继续反应 3小时， TLC或是 LC-MS监测反应结束后， 纯化即得。
MS: calculated 8926 (found 8927.2) 实施例 12化合物 ( 22 )的制备
Figure imgf000048_0001
Triptolide W-l
Figure imgf000048_0002
W-3 将 C-l (0.91 g, 13 mmol)溶于 DMF 中， 加入碳酸氢钠 (2.18 g, 26 mmol), 室温条件下搅拌一个小时后， 加入烯丙基溴 (2.28 g, 16.9 mmol)， 保持在室温条件过夜反应， TLC监测反应完全后，向反应体系中加入 EA， 然后用水多次萃取， 最后将有机相用无水硫酸钠千燥， 过滤， 蒸千， 得 到 C-2粗品。
化合物 W-l的合成：
将 TP (50 mg, 139 umol)和 C-2 (23 mg, 208 umol)溶于乙腈中，然后加 入 NMM(15 ul, 0.5 eq.)， 这个反应体系保持在室温条件下反应 12小时， TLC监测反应完全后， 在减压条件下除去有机溶剂， 得到的粗品经过快 速硅胶柱得到纯品 W- 1.
LC-MS (ESI): [M+H] +: 471; [M+Na] +: 493
1H NMR (400 MHz, CDC13) 5 = 7.41 (d, J = 12.4 Hz, 1H), 5.91 -5.98 (m 1H), 5.47 (d, J = 12.4 Hz, 1H), 5.31 (dd, J = 1.2, 17.4 Hz, 1H), 5.22 (dd, J = 1.2, 10.4 Hz, 1H), 4.68 (s, 2H), 4.61 (d, J = 3.6 Hz, 2H), 3.82 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 3.69 (s, 1H), 3.60 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 3.38 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 2.70 (m, 1H), 2.30 (m, 1H), 2.16-2.22 (m, 1H), 1.92-2.06 (m, 2H), 1.57-1.61 (m, 3H),
1.17- 1.25 (m, 3H), 1.07 (s, 3H), 0.97 (d, J = 7.2 Hz, 3H), 0.87 (d, J = 6.8 Hz, 3H). 化合物 W-2的合成：
将 W- 1(15 ul, 0.5 eq.)溶于四氢呋喃中，加入吗啉 (50 ul, 10 equiv.)和四 三苯基膦钯 (14 mg, 0.15 equiv.)， 常温条件下反应， LC-MS监测反应， 直 到 W-1反应消失完全， 将有机溶剂减压除去后， 粗品经过制备色傳柱纯 化得到纯品 W-2.
LC-MS (ESI): [M+H] +: 431
1H NMR (400 MHz, CDC13) δ = 7.47 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 5. 42 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 4.68 (s, 2H), 3.83 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 3.71 (s, 1H), 3.57 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 3.39 (d, J = 5.39 Hz, 1H), 2.68-2.72 (m, 1H), 2.31-2.35 (m, 1H),
2.18- 2.23 (m, 4H), 1.93-2.06 (m, 2H), 1.60 (dd, J = 4.8, 12.4 Hz, 1H), 1.20-1.25 (m, 3H), 1.07 (s, 3H), 0.97 (d, J = 7.2 Hz, 3H), 0.88 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
化合物 W-3的合成：
将 Sgc8c(20 nmol)溶于 pH=9.0的碳酸钠和碳酸氢钠的緩冲液 (200 uL, pH 9.0)中，一次加入溶于 DMSO (200 ul)中的 D-2(5 mg, 1200nmol)和溶于 H20 (200 ul)中的 (200 nmol)DMT-MM, 反应体系保持在室温条件下反应 12小时， 反应结束后， 用 RP HPLC纯化粗品后得到目标产物 W-3。 MS: calculated 13263 (found 13261.9)
实施例 12中相关原料或产物的图傳参见图 2、 13-17。
实验例 1 雷公藤甲素 - AS1411偶合物体外抑制肿瘤细胞生长
1. 实验材料：
药物：
雷公藤甲素 （TP )， 来源： 市购；
AS1411 (又称 "核仁素适配子"）， 来源： 市购；
雷公藤甲素- AS1411 偶合物 （又称 "药物 1" )、 来源： 采用实施 3 制备的化合物 （ 3 )。
细胞培养用培基（DMEM、 McCoy's > RPMI-1640、 Leibovitz'sL-05 ) 购买于 GIBCO， 胎牛血清购买于 Hyclone。
CCK-8用于检测细胞活性， 购自 Sigma。
实验所用的 5株胰腺癌细胞 (MiaPaCa-2、 PANC-1、 BxPC-3、 SW1990、 ASPC-1)均从上海细胞库购买。
2. 实验方法
1 ) 细胞培养：
MiaPaCa-2. PANC-1的培养基为 DMEM， BxPC-3、 ASPC-1培养基 为 RPMI 1640培基， SW1990培养基为 L-05。 向以上培养添加胎牛血清 和双抗， 配成最终含量为 10%和 1%的完全培基。将细胞置于温度为 37° ( 、 C02浓度为 5%的孵育箱中培养。
2 )抗肿瘤活性考察：
胰腺癌细胞 (MiaPaCa-2、 PANC-1、 BxPC-3 , SW1990, ASPC-1)以较 低密度，（ 1χ 103〜1χ 104， 具体数据取决于细胞系， 培养条件参照上海细 胞库，） 均匀铺于 96孔板， 在培养箱中过夜使之贴壁， 倒掉旧培基， 更 换含药无血清培基。雷公藤甲素溶于 DMSO配成浓度为 10 mM的储备液， 雷公藤甲素 -核仁素适配子偶合物和核仁素适配子， 均溶于无血清培基配 成 10 mM溶液， 现配现用。 以无血清培基作为空白对照， 雷公藤甲素、 雷公藤甲素-核仁素适配子偶合物、 核仁素适配子给药终浓度梯度为： 0、 25、 50、 100、 200nM。在温度为 37°C、 C02浓度为 5%的孵育箱培育 24h、 48h。 用 MTT检测细胞活性。 平行操作 4次。 3. 实验结果：
和空白对照相比， 在 50nM-200nM 浓度范围内， TP、 TP-AS 1411偶 合物能显著抑制胰腺癌细胞具有杀伤作用， 具有时间和剂量的依赖性。 核仁素适配子对胰腺癌细胞无明显作用。 核仁素适配子组相比， TP-核仁 素适配子偶合物对胰腺癌细胞的作用具有显著性， 具体参见表 1和图
18-19, 29。
表 1
药物吸光度 （24h)
Figure imgf000051_0001
药物吸光度 （48h)
Figure imgf000051_0002
实验例 2 雷公藤甲素 -SGC8C偶合物体外抑制肿瘤细胞生长研究：
1. 实验材料：
药物：
雷公藤甲素 （TP )， 来源： 市购
SGC8C (又称 "白血病适配子，，；)， 来源： 市购 ；
取雷公藤甲素- SGC8C偶合物（又称 "药物 2" )、 来源： 采用实施例 12制备的化合物 （22 )。
细胞株：急性淋巴细胞白血病 T细胞（ CCRF-CEM )、肝细胞（ L-02 ) 。
2. 实全方法：
细胞培养： 急性淋巴细胞白血病 T 细胞（CCRF-CEM ), 肝细胞 ( L-02 )培养基为 RPMI 1640培基。 向以上培养添加胎牛血清和双抗， 配成最终含量为 10%和 1%的完全培基。 将细胞置于温度为 37° ( 、 C02 浓度为 5%的孵育箱中培养。 定期观察细胞生长状况并进行细胞计数， 所 有实验都取对数生长期细胞进行。
受试药处理： 雷公藤甲素溶于 DMSO， 配制成浓度为 lmg/mL的储 备液，储存于 -20°C水箱； sgc8c溶于无血清培养基，充分溶解后置于 -20°C 水箱保存； 雷公藤甲素 -sgc8c偶合物用双蒸水充分溶解， 现配现用。
细胞活性实验： 急性淋巴细胞白血病 T细胞（CCRF-CEM ), 肝细胞 ( L-02 ) 以较低密度，（ 1 χ 103〜1χ 104， 具体数据取决于细胞系）均匀铺于 96孔板， 在培养箱中过夜使之贴壁， 倒掉旧培基， 更换含药无血清培基。 雷公藤甲素溶于 DMSO配成浓度为 10 mM的储备液， 雷公藤甲素 -sgc8c 溶于无血清培基配成 10 mM溶液， 现配现用。 以无血清培基作为空白对 照， 雷公藤甲素、 雷公藤甲素 -sgc8c给药终浓度梯度为： 0、 25、 50、 100、 200nMo在温度为 n°C、 C02浓度为 5%的孵育箱培育 24h、 48h。用 MTT 检测细胞活性。 平行操作 3次。
3. 实验结果
与空白对照组比较， 在 50nM〜200nM 浓度范围内， 雷公藤甲素对 CCRF-CEM和 L-02细胞有显著细胞毒性， 具有剂量依赖性。 雷公藤甲素 -sgc8c对 CCRF-CEM具有显著细胞毒性， 而对 L-02细胞无明显作用。和 空白对照相比， sgc8c对两者均无明显杀伤作用， 参见表 2和图 20-21。
表 2
Figure imgf000052_0001
实验 3雷公藤甲素 -AS1411偶合物体内分布考察 1.实验材料：
实验药品及试剂： 雷公藤甲素 （TP )， 来源 ： 市场购买 ；
AS1411 (又称 "核仁素适配子"）， 来源： 市场购买；
雷公藤甲素-核仁素适配子偶合物， 来源： 采用实施例 3制备的化合 物 （ 3 );
RPMI1640培养基， 胎牛血清， 青霉素-链霉素， 基质胶， 无水乙醇， 生理盐水， 乙酸乙酯， 乙腈等。
细胞： 人源胰腺癌细胞系 BxPC-3。
实验动物 雌性棵鼠。
实验仪器： 超净工作台， co2培养箱， 倒置显 ^敖镜， 高速离心机， 超 速离心机， 真空千燥器， 高效液相色傳仪。
2.试^ r方法：
2.1 胰腺癌肿瘤模型构建：
2.1.1 BxPC-3细胞系培养： 人源胰腺癌细胞系 BxPC-3购自中国科学 院上海细胞库。 细胞用含有 10%的胎牛血清 （购自 sigma公司 ） 和 1.2ml/ 1000ml的青霉素-链霉素 (购自 sigma公司）的 RPMI 1640培养基（购 自 sigma公司）， 于 5% C02， 37°C的孵箱中进行培养。 倒置显微镜对细 胞进行形态观察和计数， 所有的实验取对数生长阶段的细胞进行。
2.1.2人源胰腺癌细胞系 BxPC-3原位荷瘤棵鼠模型的建立： 雌性棵 小鼠由香港浸会大学中医药学院动物房提供并饲养。 取对数生长期的 BxPC-3细胞， 用 50:50的基质胶和无血清培养基重悬至浓度为 2xl07个 /ml。 选取体重 20g左右， 6-8周龄的雌性棵小鼠， 于右侧背部皮下注射 ΙΟΟμΙ细胞悬液进行接种。 每天用双向游标卡尺测量肿瘤的大小， 个体的 肿瘤体积公式如下： V= (长 X宽 2 ) /2， 长取肿瘤最长的直径， 宽取垂直 于长的最短的直径， 肿瘤生长至 200 mm3时， 进行后续试验。
2.2 实全动物分组及给药
2.2.1 受试药物配置： 雷公藤甲素和雷公藤甲素 -核仁素适配子偶合 物。 称取雷公藤甲素溶于 50:50 乙醇 /生理盐水溶液中， 配置成浓度为 0.6mg/ml的药物溶液， 置于 4°C水箱备用； 称取雷公藤甲素 -核仁素适配 子溶于 50:50 乙醇 /生理盐水中， 配置成浓度为 22.0mg/ml的药物溶液， 置于 4°C水箱备用。 2.2.2实验分组及处理： 肿瘤生长至 200 mm3时， 将 30只荷瘤小鼠， 随机分为 A， B组。 其中 A组按 0.6mg/kg剂量尾静脉注射雷公藤甲素的 乙醇 /生理盐水溶液； B组按 22.0mg/kg剂量尾静脉注射雷公藤甲素 -核仁 素适配子偶合物的乙醇 /生理盐水溶液。给药体积均为 lml/kg。分别于 0.5, 2, 6, 12, 和 24 h时， 对每组 3只老鼠采用腹腔注射戊巴比妥钠麻醉， 采 用心脏穿刺取血， 摘取心、 肝、 脾、 肺、 腎、 实体瘤等组织。 血样于 4°C 以 3000rpm离心 20min， 取血清备用； 心、 肝、 脾、 肺、 腎、 实体瘤等 组织于 -80°C保存备用。
2.3 HPLC检测组织中雷公藤甲素 /雷公藤甲素-核仁素适配子偶合物 含量
称取一定重量的组织 （心， 肝， 脾， 肺， 腎， 肿瘤）， 加入一定比例 的 pH7.5PBS溶液， 匀浆。 取 0.2ml匀浆到 eppendorf 管中， 1.2ml 乙酸 乙酯涡流萃取 3分钟， 8000rpm离心 5min。 取上层有机溶液层 ( 1ml)转 移到另一个 eppendorf管中真空千燥处理，残留物再溶入 0.1ml乙醇， 4°C 下 20000rpm离心 10min。 取上清液（ ΙΟμΙ )注入安捷伦 1100型高效液相 色谱仪。 色谱条件为 ： 分 离 柱 Symmetry ShieldTM RP18 column(4.6mmx250mm, 5um, )，保护柱 ODS guid column ( 3.9mmx20mm, 5um); 流动相： 乙腈-水（23: 77 ); 流速 l.OmL/min; 柱温 35°C ; 检测 波长 219nm; 进样体积 20.0uL。
2.4雷公藤甲素-核仁素适配子偶合物体内稳定性考察
取 2.2.2中 B组样品。 通过 2.3中已建立起方法的 HPLC分别检测每 个时间点各组织中游离的雷公藤甲素和雷公藤甲素 -核仁素适配子的浓 度， 并计算出释放率。 计算公式： 释放率 = (雷公藤甲素浓度) /(雷公藤甲素 浓度 +雷公藤甲素 -核仁素适配子浓度）， 监测一定量考察药物在组织内的 稳定性。
2.5 雷公藤甲素-核仁素适配子偶合物组织分布考察
取 2.2.2中 Α,Β组样品。 通过 2.3中已建立好的 HPLC方法进行监测 定量考察药物在正常器官、 肿瘤组织的分布情况。
2.6 统计学分析
实验数据采用平均值 ±标准差 （SD )表示， 数据处理采用 Graphpad Prism 6.0统计软件。 差异显著性检验采用 t检验和方差分析法进行。
3.实验结果： 1.雷公藤甲素-核仁素适配子偶合物体内分布： 各时间点雷公藤甲素 - 核仁素适配子偶合物在各组织中的解离度由 HPLC法确定。 考察结果如 下。雷公藤甲素 -核仁素适配子偶合物经过 24小时后在血浆及心，肝，脾， 肺， 腎等正常组织中几乎不解离或解离得很少； 而在肿瘤组织中， 雷公 藤甲素 -核仁素适配子偶合物大量解离， 并且随着时间的累积， 解离度不 断增加。 以上结果证明了用于连接雷公藤甲素和核仁素适配子的酸性敏 感的烯酸键在体内也有作用。 偶合物在正常组织中不断裂， 保护了 c14 位基团， 减小毒性； 在肿瘤组织中断裂， 释放出 TP， 发挥治疗作用参见 表 3及图 22。
表 3
Figure imgf000055_0001
2.雷公藤甲素 -核仁素适配子偶合物体内选择性分布： 采用 HPLC定 量检测药物在正常器官、 肿瘤组织的分布情况。 考察结果见图 22。 给药 后 0.5小时内， 实验组 A和对照组 B在给药 0.5小时内血药浓度迅速升 高到顶峰， 但是实验组 A在血中消除速度要比对照组 B慢（图 23)。 实 检组 A和阴性对照组 B相比， 药物在心脏， 脾脏， 肺部三个组织部位的 分布趋势在考察全时间段内都相似（都换算为雷公藤甲素的浓度）。 在给 药后 0.5-2小时内， 雷公藤甲素迅速向心， 脾， 肺三个组织分布， 给药后 4小时开始消除 (图 24-26)。 相反地， 实验组 A和阴性对照组 B相比， 药 物在肝脏， 腎脏和肿瘤三个组织部位的分布趋势有很大的不同 （都换算 为雷公藤甲素的浓度）。 实验组 A分布在肝， 腎组织的雷公藤甲素的浓度 明显要比对照组 B低， 而分布在肿瘤部位的雷公藤甲素的浓度要比对照 组 B高出很多（图 27-29)。 以上结果说明核仁素适配子的修饰作用能促使 雷公藤甲素选择性向肿瘤部位积聚， 而避免了在其它组织， 尤其是肝腎 组织累积。 参见表 4及图 23-29 表 4
Figure imgf000056_0001
肝 A组雷公藤甲素浓度 （ng/ml) B组雷公藤甲素浓度 （ng/ml)
0.5h 22.6 12.3 6.9 69.3 58.2 54.4
2h 4.3 7.9 15.2 74.9 57.4 64.8
6h 10.2 5.7 2.4 68.3 37.9 60.7
12h 43.4 1.3 6.5 38.7 35.2 40.7
24h 0 0 0 28.9 15.3 16.4 肾 A组雷公藤甲素浓度 （ng/ml) B组雷公藤甲素浓度 （ng/ml)
0.5h 18.7 13.9 24.3 52.7 65.3 44.8
2h 16.4 12.1 20.7 49.8 53.5 46.2
6h 9.3 16.4 4.2 34.5 28.8 32.3
12h 11.3 2.7 5.9 14.4 4.7 8.9
24h 7.5 8.4 7.1 0.9 6.7 1.3
肿瘤 A组雷公藤甲素浓度 （ng/ml) B组雷公 ΐ甲素浓度 （ng/ml)
0.5h 9.6 10.5 8.3 0.5 0.7 0.3
2h 9.8 11.4 9.6 1.7 1.3 1.1
6h 8.3 9.5 8.7 1.5 1.2 1.4
12h 5.4 7.2 6.3 0 0 0
24h 3.3 2.4 3.9 0 0 0 本发明新型抗肿瘤化合物、 新的雷公藤甲素衍生物及其制备方法中， 本发明以核酸适配子与雷公藤甲素 （Triptolide ) 为起始物料， 通过雷公 藤甲素包含 C14位羟基、环氧基团和五元环内酯来引入特殊键， 继而链接 核酸适配子。 通过结构修饰得到的雷公藤甲素衍生物， 具有靶向性好、 抗癌活性强、 毒副作用低， 水溶性好、 生物利用度高的特点。 本发明的 工艺科学合理， 质量可控， 重现性好， 适于生产。

Claims

权 利 要 求
1. 新的雷公藤甲素衍生物为具有如下式（1) 的化合物:
Figure imgf000058_0001
R尸 7 H或 OH;
R2= 7 H或 OH;
7 H或 OH;
R4= 7 H或 OH;
R5= 7 H或 OH;
R6= 7 H或 OH;
R7= 7 H或 OH;
G为 O或 NH;
A为 -CO-、 -CO-(CH2)n-CO-、 -CH=CH-CO- -CH=CH-(CH2)n-CO-、 -CH(OH)-Ph-CO- 、 CH(OH)-Ph-(CH2)n-CO- 、 -CH2-Ph-(CH2)n-CO- 、 -CO-NH-CO- 、 -CO-NH-(CH2)n-CO- 、 -C¾-CH=CH-CO- 、 -CH2-CH=CH-(CH2)n-CO-、 -CO-CH2-、 -CO-0-(CH2)n-CO-、 -S02-Ph-CO-、 -S02-Ph-(CH2)n-CO-; 其中 1<η < 14; 优选为 1<η <7， 例如 n为 1、 2、 3、 4、 5、 6或 7; 可选择地、 （CH2)n还含有取代 (CH2)n中一个或多个氢 的直链或支链烷基、 链烯基、 芳烷基和烷基芳烷基、 芳香烃、 卤素、 杂 原子基团、 杂环取代基， 所述烷基甲基、 乙基、 丙基、 丁基、 戊基、 己 基或庚基； 所述链烯基乙烯基、 1-丙烯基、烯丙基、异丙烯基、 1-丁烯基、 2-丁錄基、 3-丁錄基、 1， 3-丁二錄基、 或其 E、 Z的异构体； 芳烷基和烷 基芳烷基包括苄基、 二苯甲基、 甲苯基甲基、 三苯甲基、 肉桂基、 苯乙 基、 苯乙烯基、 苯基丁基、 新苯基； 所述芳香基包括苯基、 二苯基、 甲 苯基、 甲苄基、 4， 2， 6-三甲苯基、 枯錄基、 二（叔丁基）苯基、 蒽基、 茚基、 萘基、 卤代芳基、 卤代芳烷基苯氧基、 甲苯氧基、 二甲苯基氧基、 2,4, 6-三甲苯氧基和枯烯氧基、二苯基、苯胺基、 甲苯氨基、 甲苯磺酰基、 烯丙苄基或苯基、 呋喃基、 吡啶基、 2-吡啶基（吡啶 -2-基）、 吲哚 -1-基、 氯甲基苄基或苯基、 三氟甲基苄基或苯基、 羟基苄基或苯基、 甲氧基苄 基或苯基、 乙氧基苄基或苯基、 甲氧基乙氧基苄基或苯基、 烯 丙氧基苄 基或苯基、 苯氧基苄基或苯基、 乙酰氧基苄基或苯基、 苯甲酰氧基苄基 或苯基、 甲疏基苄基或苯基、 苯疏基苄基或苯基、 甲苯疏基苄基或苯基、 甲基氨基苄基或苯基、 二甲基氨基苄基或苯基、 乙基氨基苄基或苯基、 二乙基氨基苄基或苯基、 乙酰氨基苄基或苯基、 羧基苄基或苯基、 甲氧 羰基苄基或苯基、 乙氧羰基苄基或苯基、 苯氧基羰基苄基或苯基、 氯代 苯氧基羰基苄基或苯基、 N-环己基氨基甲酰氧基苄基或苯基、 烯丙氧基 羰基苄基或苯基、 氨 甲酰基苄基或苯基、 N-甲基氨甲酰基苄基或苯基、 Ν, Ν- 二丙基氨甲酰基苄基或苯基、 Ν-苯氨基甲酰基苄基或苯基、硝基苄 基或苯基、 氰基苄基或苯基、 硫代苄基或苯基、 硫酸根-苄基或苯基、 膦 酰基苄基或苯基、 磷酸根苄基或苯基、 和吗啉代苄基或苯基； 所述卤素 包括氟、 氯、 溴或碘； 所述杂原子包括甲氧基、 乙氧基、 丙氧基、 异丙 氧基、 正丁氧基、 异丁氧基、 叔丁氧基、 甲硫基、 乙硫基、 正丙硫基、 异丙硫基、 正丁硫基、 异丁硫基、 叔丁硫基、 甲亚磺酰基、 乙亚磺酰基、 异丙亚磺酰基、 甲磺酰基、 乙磺酰基、 异丙磺酰基； 所述杂环包括： 吡 啶基、 啉基、 噻51分基、 呋喃基、 噁唑基、 四唑基、 噻唑基、 咪唑基、 吡唑基 、 吲哚基；
Α优选为 -CO-;
-CO-CH2-CO- 、 -CO-CH2-CH2-CO- 、 -CO-CH2-CH2-CH2-CO- 、 -CO-CH2-CH2-CH2-CH2-CO-； -CH=CH-CO-;
-CH(OH)-Ph-CO- 、 -CH(OH)-Ph-CH2-CO- 、
-CH(OH)-Ph-CH2-CH2-CO- 、 -CH(OH)-Ph-CH2-CH2-CH2-CO- 、 -CH(OH)-Ph-CH2-CH2-CH2 -CH2-CO-;
-CH2-Ph-CH2-CO-、 -CH2-Ph-CH2-CH2-CO-、
-CH2-Ph-CH2-CH2-CH2-CO-、 -CH2-Ph-CH2-CH2-CH2 -CH2-CO-;
-CO-NH-CO- 、 -CO-NH-CH2-CO- 、 -CO-NH-CH2-CH2-CO- 、 -CO-NH-CH2- CH2-CH2-CO-、 -CO-NH-CH2- CH2-CH2-CH2-CO-;
-CH2-CH=CH-CO- 、 -CH2-CH=CH-CH2-CO- 、
-CH2-CH=CH-CH2-CH2-CO- 、 -CH2-CH=CH-CH2-CH2-CH2-CO- 、 -CH2-CH=CH- CH2-CH2-CH2- CH2-CO;
-CO-CH2-;
-CO-O-CO- 、 -CO-0-CH2-CO- 、 -CO-0-CH2-CH2-CO- 、 -CO-0-CH2-CH2-CH2-CO-、 -CO-0-CH2-CH2-CH2-CH2-CO-；
-S02-Ph-CO- 、 -S02-Ph- CH2-CO- 、 -S02-Ph-CH2-CH2-CO- 、 -S02-Ph-CH2-CH2-CH2-CO-、 或 -S02-Ph-CH2-CH2-CH2-CH2-CO-;
B为适配子， 所述适配子为 AS1411或 Sgc8c;
M为 O或 OH;
Z为 o;
X为 o;
其中八与 M、 Z或 X连接。
2. 根据权利要求 1所述的衍生物， 其特征在于， 所述化合物具有如 下结构：
Figure imgf000061_0001
式 II
其中， Ri=为 H或 OH;
R2=为 H或 OH;
R3=为 H或 OH;
R4=为 H或 OH;
R5=为 H或 OH;
R6=为 H或 OH;
R7=为 H或 OH;
G为 O或 NH;
M为 O;
Z为 O;
X为 O;
A选自 -CO-、 -CO-(CH2)n-CO-、 -CH=CH-CO-、 -CH=CH-(CH2)n-CO-、 -CH(OH)-Ph-CO- 、 -CH(OH)-Ph-(CH2)n-CO- 、 -CH2-Ph-(CH2)n-CO- 、 -CO-NH-CO- 、 -CO-NH-(CH2)n-CO- 、 -CH2-CH=CH-CO- 、 -CH2-CH=CH-(CH2)n-CO-、 -CO-CH2-、 -CO-0-(CH2)n-CO-、 -S02-Ph-CO-、 或 -S02-Ph-(CH2)n-CO-; 其中 K n < 14; 优选为 K n < 7， 例如 n为 1、 2、 3、 4、 5、 6或 7; 可选择地 、 （CH2)n还含有取代 (CH2)n中一个或多个 氢的直链或支链烷基、 链烯基、 芳烷基和烷基芳烷基、 芳香烃、 卤素、 杂原子基团、 杂环取代基， 所述烷基包括甲基、 乙基、 丙基、 丁基、 戊 基、 己基或庚基； 所述链烯基乙烯基、 1-丙錄基、 烯丙基、 异丙烯基、 1- 丁錄基、 2-丁錄基、 3-丁烯基、 1， 3-丁二錄基， 或其 E、 Z的异构体； 芳 烷基和烷基芳烷基包括苄基、 二苯甲基、 甲苯基甲基、 三苯甲基、 肉桂 基、 苯乙基、 苯乙錄基、 苯基丁 基、 新苯基； 所述芳香基包括但不限于 苯基、 二苯基、 甲苯基、 甲苄基、 4， 2， 6-三甲苯基、 枯烯基、 二（叔 丁基）苯基、 蒽基、 茚基、 萘基、 卤代芳基、 卤代芳烷基苯氧基、 甲苯 氧基、 二甲苯基氧基、 2,4,6-三甲苯氧基和枯烯氧基、 二苯基、 苯胺基、 甲苯氨基、 甲苯磺酰基、烯丙苄基或苯基、呋喃基、吡啶基、 2-吡啶基（吡 啶 -2-基）、 吲哚 -1-基、 氯甲基苄基或苯基、 三氟甲基苄基或苯基、 羟基 苄基或苯基、 甲氧基苄基或苯基、 乙氧基苄基或苯基、 甲氧基乙氧基苄 基或苯基、 烯丙氧基苄基或苯基、 苯氧基苄基或苯基、 乙酰氧基苄基或 苯基、 苯甲酰氧基苄基或苯基、 甲硫基苄基或苯基、 苯硫基苄基或苯基、 甲苯疏基苄基或苯基、 甲基氨基苄基或苯基、 二甲基氨基苄基或苯基、 乙基氨基苄基或苯基、 二乙基氨基苄基或苯基、 乙酰氨基苄基或苯基、 羧基苄基或苯基、 甲氧羰基苄基或苯基、 乙氧羰基苄基或苯基、 苯氧基 羰基苄基或苯基、 氯代 苯氧基羰基苄基或苯基、 N-环己基氨基甲酰氧基 苄基或苯基、 烯丙氧基羰基苄基或苯基、 氨 甲酰基苄基或苯基、 N-甲基 氨甲酰基苄基或苯基、 Ν, Ν- 二丙基氨甲酰基苄基或苯基、 Ν-苯氨基甲 酰基苄基或苯基、 硝基苄基或苯基、 氰基苄基或苯基、 硫代苄基或苯基、 硫酸根-苄 基或苯基、 膦酰基苄基或苯基、磷酸根苄基或苯基、 和吗啉代 苄基或苯基等； 所述卤素包括氟、 氯、 溴或碘； 所述杂原子包括但不限 于甲氧基、 乙氧基、 丙氧基、 异丙氧基、 正丁氧基、 异丁氧基、 叔丁氧 基、 甲硫基、 乙硫基、 正丙硫基、 异丙硫基、 正丁硫基、 异丁硫基、 叔 丁硫基、 甲亚磺酰基、 乙亚磺酰基、 异丙亚磺酰基、 甲磺酰基、 乙磺酰 基、 异丙磺酰基 ； 所述杂环包括： 吡啶基、 喹啉基、 噻吩基、 呋喃基、 噁唑基、 四唑基、 噻唑基、 咪唑基、 吡唑基或吲哚基；
Α优选为 -CO-;
-CO-CH2-CO- 、 -CO-CH2-CH2-CO- 、 -CO-CH2-CH2-CH2-CO- 、 -CO-CH2-CH2-CH2-CH2-CO-；
-CH=CH-CO- 、 -CH=CH-CH2-CO- 、 -CH=CH-CH2-CH2-CO- 、 -CH=CH-CH2-CH2-CH2-CO-、 -CH=CH-CH2-CH2-CH2-CH2-CO-；
-CH(OH)-Ph-CO- 、 -CH(OH)-Ph-CH2-CO- 、
-CH(OH)-Ph-CH2-CH2-CO- 、 -CH(OH)-Ph-CH2-CH2-CH2-CO- 、 -CH(OH)-Ph-CH2-CH2-CH2 -CH2-CO-;
-CH2-Ph-CH2-CO-、 -CH2-Ph-CH2-CH2-CO-、 -CH2-Ph-CH2-CH2-CH2-CO-、 -CH2-Ph-CH2-CH2-CH2 -CH2-CO-;
-CO-NH-CO- 、 -CO-NH-CH2-CO- 、 -CO-NH-CH2-CH2-CO- 、 -CO-NH-CH2- CH2-CH2-CO-、 -CO-NH-CH2- CH2-CH2-CH2-CO-;
-CH2-CH=CH-CO- 、 -CH2-CH=CH-CH2-CO- 、
-CH2-CH=CH-CH2-CH2-CO- 、 -CH2-CH=CH-CH2-CH2-CH2-CO- 、 -CH2-CH=CH- CH2-CH2-CH2- CH2-CO;
-CO-CH2-;
-CO-O-CO- 、 -CO-0-CH2-CO- 、 -CO-0-CH2-CH2-CO- 、 -CO-0-CH2-CH2-CH2-CO-、 -CO-0-CH2-CH2-CH2-CH2-CO-；
-S02-Ph-CO-、 -S02-Ph- CH2-CO-、 -S02-Ph- CH2-CH2-CO-、 -S02-Ph- CH2-CH2-CH2-CO-、 或 -S02-Ph-CH2-CH2-CH2-CH2-CO-
B为适配子， 所述适配子为 AS1411或 Sgc8c。
3.根据权利要求 2所述的雷公藤甲素衍生物， 其特征在于所述化合 物为：
Figure imgf000063_0001
Figure imgf000064_0001
Figure imgf000064_0002
Figure imgf000064_0003
Figure imgf000065_0001
式 III
其中， Ri=为 H或 OH;
R2=为 H或 OH;
R3=为 H或 OH;
R4=为 H或 OH;
R5=为 H或 OH;
R6=为 H或 OH;
R7=为 H或 OH;
G为 O或 NH;
M为 OH;
Z为 O;
X为 o;
A为 -S02-Ph-CO-、 或 -S02-Ph-(CH2)n-CO-; 其中 K n < 14; 优选为 K n < 7， 例如 n为 1、 2、 3、 4、 5、 6或 7; 可选择地， （CH2)n还含有 取代 (C¾)n†—个或多个氢的直链或支链烷基、链烯基、芳烷基和烷基芳 烷基、 芳香烃、 卤素、 杂原子基团、 杂环取代基， 所述烷基包括甲基、 乙基、 丙基、 丁基、 戊基、 己基或庚基； 所述链烯基乙錄基、 1-丙錄基、 烯丙基、 异丙錄基、 1-丁烯基、 2-丁錄基、 3-丁烯基、 1， 3-丁二烯基或其 E、 Z的异构体； 芳烷基和烷基芳烷基包括苄基、二苯甲基、 甲苯基甲基、 三苯甲基、 肉桂基、 苯乙基、 苯乙錄基、 苯基丁 基、 新苯基； 所述芳香 基包括苯基、 二苯基、 甲苯基、 甲苄基、 4， 2， 6-三甲苯基、 枯烯基、 二（叔丁基）苯基、 蒽基、 茚基、 萘基、 卤代芳基、 卤代芳烷基苯氧基、 甲苯氧基、 二甲苯基氧基、 2,4,6-三甲苯氧基和枯烯氧基、 二苯基、 苯胺 基、 甲苯氨基、 甲苯磺酰基、 烯丙苄基或苯基、 呋喃基、 吡啶基、 2-吡啶 基（吡啶 -2-基）、 吲哚 -1-基、 氯甲基苄基或苯基、 三氟甲基苄基或苯基、 羟基苄基或苯基、 甲氧基苄基或苯基、 乙氧基苄基或苯基、 甲氧基乙氧 基苄基或苯基、 烯 丙氧基苄基或苯基、 苯氧基苄基或苯基、 乙酰氧基苄 基或苯基、 苯甲酰氧基苄基或苯基、 甲疏基苄基或苯基、 苯疏基苄基或 苯基、 甲苯疏基苄基或苯基、 甲基氨基苄基或苯基、 二甲基氨基苄基或 苯基、 乙基氨基苄基或苯基、 二乙基氨基苄基或苯基、 乙酰氨基苄基或 苯基、 羧基苄基或苯基、 甲氧羰基苄基或苯基、 乙氧羰基苄基或苯基、 苯氧基羰基苄基或苯基、 氯代 苯氧基羰基苄基或苯基、 N-环己基氨基甲 酰氧基苄基或苯基、 烯丙氧基羰基苄基或苯基、 氨 甲酰基苄基或苯基、 N-甲基氨甲酰基苄基或苯基、 N, N- 二丙基氨甲酰基苄基或苯基、 N-苯 氨基甲酰基苄基或苯基、 硝基苄基或苯基、 氰基苄基或苯基、 硫代苄基 或苯基、 硫酸根-苄基或苯基、 膦酰基苄基或苯基、 磷酸根苄基或苯基、 吗啉代苄基或苯基等； 所述卤素包括氟、 氯、 溴或碘； 所述杂原子包括 甲氧基、 乙氧基、 丙氧基、 异丙氧基、 正丁氧基、 异丁氧基、 叔丁氧基、 甲硫基、 乙硫基、 正丙硫基、 异丙硫基、 正丁硫基、 异丁硫基、 叔丁硫 基、 甲亚磺酰基、 乙亚磺酰基、 异丙亚磺酰基、 甲磺酰基、 乙磺酰基、 异丙磺酰基； 所述杂环包括： 吡啶基、 喹啉基、 噻吩基、 呋喃基、 噁唑 基、 四唑基、 噻唑基、 咪唑基、 吡唑基 、 吲哚基；
优选 A选自 -S02-Ph-CO-、 -S02-Ph- CH2-CO-、 -S02-Ph- CH2-CH2-CO-、 -S02-Ph- CH2-CH2-CH2-CO-、 或 -S02-Ph- CH2-CH2-CH2-CH2-CO-；
B为适配子， 所述适配子为 AS1411或 Sgc8c。
5.根据权利要求 4所述的雷公藤甲素衍生物， 其特征在于所述化合 物为：
Figure imgf000066_0001
-CO-
( 53 ) H H H H H H H 0 OH 0 0 -S02-Ph-CH2 -CO- Sgc8c
-S02-Ph-CH2 - CH2
( 54 ) H H H H H H H 0 OH 0 0 Sgc8c
-CO-
-S02-Ph-C¾-CH2-CH2
( 55 ) H H H H H H H 0 OH 0 0 Sgc8c
-CO-
6. 根据权利要求 1所述的衍生物， 其特征在于， 所述化合物具有如 下结构：
Figure imgf000067_0001
式 IV
其中， Ri=为 H或 OH;
R2=为 H或 OH;
R3=为 H或 OH;
R4=为 H或 OH;
R5=为 H或 OH;
R6=为 H或 OH;
R7=为 H或 OH;
G为 O或 NH;
M为 OH;
Z为 O;
X为 o;
A为
为 -CO-、 -CO-(CH2)n-CO CH=CH-CO-、 -CH=CH-(CH2)n-CO-、 -CH(OH)-Ph-CO- 、 -CH(OH)-Ph-(CH2)n-CO- 、 -CH2-Ph-(CH2)n-CO- 、 -CO-NH-CO- 、 -CO-NH-(CH2)n-CO- 、 -CH2-CH=CH-CO- 、 -CH2-CH=CH-(CH2)n-CO-、 -CO-CH2-、 -CO-0-(CH2)n-CO-、 -S02-Ph-CO-、 或 -S02-Ph-(CH2)n-CO-; 其中 K n < 14; 优选为 K n < 7， 例如 n为 1、 2、 3、 4、 5、 6或 7; 可选择地、 （CH2)n还含有取代 (CH2)n中一个或多个 氢的直链或支链烷基、 链烯基、 芳烷基和烷基芳烷基、 芳香烃、 卤素、 杂原子基团、 杂环取代基， 所述烷基包括甲基、 乙基、 丙基、 丁基、 戊 基、 己基或庚基； 所述链烯基乙烯基、 1-丙錄基、 烯丙基、 异丙烯基、 1- 丁錄基、 2-丁錄基、 3-丁錄基、 1， 3-丁二錄基， 或其 E、 Z的异构体； 包 括但不限于芳烷基和烷基芳烷基包括苄基、 二苯甲基、 甲苯基甲基、 三 苯甲基、 肉桂基、 苯乙基、 苯乙烯基、 苯基丁 基、 新苯基； 所述芳香基 包括但不限于苯基、二苯基、 甲苯基、 甲苄基、 4,2, 6-三甲苯基、枯烯基、 二（叔丁基）苯基、 蒽基、 茚基、 萘基、 卤代芳基、 卤代芳烷基苯氧基、 甲苯氧基、 二甲苯基氧基、 2,4, 6-三甲苯氧基和枯烯氧基、 二苯基、 苯胺 基、 甲苯氨基、 甲苯磺酰基、 烯丙苄基或苯基、 呋喃基、 吡啶基、 2-吡啶 基（吡啶 -2-基）、 吲哚 -1-基、 氯甲基苄基或苯基、 三氟甲基苄基或苯基、 羟基苄基或苯基、 甲氧基苄基或苯基、 乙氧基苄基或苯基、 甲氧基乙氧 基苄基或苯基、 烯丙氧基苄基或苯基、 苯氧基苄基或苯基、 乙酰氧基苄 基或苯基、 苯甲酰氧基苄基或苯基、 甲疏基苄基或苯基、 苯疏基苄基或 苯基、 甲苯疏基苄基或苯基、 甲基氨基苄基或苯基、 二甲基氨基苄基或 苯基、 乙基氨基苄基或苯基、 二乙基氨基苄基或苯基、 乙酰氨基苄基或 苯基、 羧基苄基或苯基、 甲氧羰基苄基或苯基、 乙氧羰基苄基或苯基、 苯氧基羰基苄基或苯基、 氯代苯氧基羰基苄基或苯基、 N-环己基氨基甲 酰氧基苄基或苯基、 烯丙氧基羰基苄基或苯基、 氨甲酰基苄基或苯基、 N-甲基氨甲酰基苄基或苯基、 N, N- 二丙基氨甲酰基苄基或苯基、 N-苯 氨基甲酰基苄基或苯基、 硝基苄基或苯基、 氰基苄基或苯基、 硫代苄基 或苯基、 硫酸根-苄基或苯基、 膦酰基苄基或苯基、 磷酸根苄基或苯基、 和吗啉代苄基或苯基等； 所述卤素包括氟、 氯、 溴或碘； 所述杂原子包 括甲氧基、 乙氧基、 丙氧基、 异丙氧基、 正丁氧基、 异丁氧基、 叔丁氧 基、 甲硫基、 乙硫基、 正丙硫基、 异丙硫基、 正丁硫基、 异丁硫基、 叔 丁硫基、 甲亚磺酰基、 乙亚磺酰基、 异丙亚磺酰基、 甲磺酰基、 乙磺酰 基、 异丙磺酰基； 所述杂环包括吡啶基、 喹啉基、 噻吩基、 呋喃基、 噁 唑基、 四唑基、 噻唑基、 咪唑基、 吡唑基或吲哚基；
优选所述 A选自
-CO-;
-CO-CH2-CO- 、 -CO-CH2-CH2-CO- 、 -CO-CH2-CH2-CH2-CO- 、 -CO-CH2-CH2-CH2-CH2-CO-；
-CH=CH-CO- 、 -CH=CH-CH2-CO- 、 -CH=CH-CH2-CH2-CO- 、 -CH=CH-CH2-CH2-CH2-CO-、 -CH=CH-CH2-CH2-CH2-CH2-CO-；
-CH(OH)-Ph-CO- 、 -CH(OH)-Ph-CH2-CO- 、
-CH(OH)-Ph-CH2-CH2-CO- 、 -CH(OH)-Ph-CH2-CH2-CH2-CO- 、 -CH(OH)-Ph-CH2-CH2-CH2 -CH2-CO-;
-CH2-Ph-CH2-CO-、 -CH2-Ph-CH2-CH2-CO-、
-CH2-Ph-CH2-CH2-CH2-CO-、 -CH2-Ph-CH2-CH2-CH2 -CH2-CO-;
-CO-NH-CO- 、 -CO-NH-CH2-CO- 、 -CO-NH-CH2-CH2-CO- 、 -CO-NH-CH2- CH2-CH2-CO-、 -CO-NH-CH2- CH2-CH2-CH2-CO-;
-CH2-CH=CH-CO- 、 -CH2-CH=CH-CH2-CO- 、
-CH2-CH=CH-CH2-CH2-CO- 、 -CH2-CH=CH-CH2-CH2-CH2-CO- 、 -CH2-CH=CH- CH2-CH2-CH2- CH2-CO;
-CO-CH2-;
-CO-O-CO- 、 -CO-0-CH2-CO- 、 -CO-0-CH2-CH2-CO- 、 -CO-0-CH2-CH2-CH2-CO-、 -CO-0-CH2-CH2-CH2-CH2-CO-；
-S02-Ph-CO- 、 -S02-Ph-CH2-CO- 、 -S02-Ph-CH2-CH2-CO- 、 -S02-Ph-CH2-CH2-CH2-CO-、 或 -S02-Ph-CH2-CH2-CH2-CH2-CO-;
B为适配子， 所述适配子为 AS1411或 Sgc8c。
7. 根据权利要求 6所述的雷公藤甲素衍生物， 其特征在于所述化合 物为：
Figure imgf000069_0001
(63) H H H H H H H 0 OH 0 0 -S02-Ph-CH2-CO- AS1411
(64) H H H H H H H 0 OH 0 0 -CO- CH2- CH2-CO- AS1411
(70) H H H H H H H 0 OH 0 0 -CO-CH2-CO- Sgc8c
(71) H H H H H H H 0 OH 0 0 -CH=CH-CH2-CO- Sgc8c
(72) H H H H H H H 0 OH 0 0 -CH=CH-CO- Sgc8c
(73) H H H H H H H 0 OH 0 0 -CH2-Ph-CH2-CO- Sgc8c
(74) H H H H H H H 0 OH 0 0 -CO-NH-CH2-CO- Sgc8c
(75) H H H H H H H 0 OH 0 0 -CH2-CH=CH-CH2-CO- Sgc8c
(76) H H H H H H H 0 OH 0 0 -CO-0-CH2-CO- Sgc8c
(77) H H H H H H H 0 OH 0 0 -S02-Ph-CH2-CO- Sgc8c
(78) H H H H H H H 0 OH 0 0 -CO- CH2- CH2-CO- Sgc8c
8. 权利要求 1-7任一 所述新的雷公藤甲素衍生物的制备方法，其特 征在于， 所述方法包括：
1 )将雷公藤甲素或其修饰物与桥接中间体于有机溶剂中和可选择地 在催化剂作用下 -20°C〜 100 °C反应；
2)将碱性溶液中适配子与步骤 1 ) 所得产物于有机溶剂中 0°C-室温 下进行反应。
9.根据权利要求 8所述的方法， 其特征在于， 所述方法中当在 C18 或 C12位结合适配子时， 还进一步包括首先对 C14位羟基进行保护反应， 所述保护基团选自叔丁基二甲硅基三氟甲磺酸酯或苄溴。
10. 根据权利要求 8所述的制备方法， 其特征在于所述步骤 1 )中的 有机溶剂选自吡啶、 二氯甲烷、 乙腈、 N-甲基吗啉、 二甲基亚砜、 三乙 胺或 Ν,Ν二甲基吡啶、 或它们中两种或两种以上组合物。
11. 根据权利要求 8所述的制备方法， 其特征在于所述步骤 1)中的 催化剂为氧化银。
12. 根据权利要求 8所述的制备方法， 其特征在于所述步骤 2) 中， 所述的碱性溶液选自碳酸钠 /碳酸氢钠的緩冲溶液 、三乙胺或碳酸钾或它 们中的两种或两种以上的组合。
13. 根据权利要求 8所述的制备方法， 其特征在于所述步骤 2) 中， 所述的碱性溶液选自碳酸钠 /碳酸氢钠的緩冲溶液 、三乙胺或碳酸钾或它 们中的两种或两种以上的组合。
14. 根据权利要求 8所述的制备方法， 其特征在于所述步骤 2) 中， 所述的有机溶剂选自二氯甲烷 、 二甲基亚砜、 乙腈 或 DMT-MM, 或它 们中的两种或两种以上的组合。
15. 根据权利要求 8所述的制备方法， 其特征在于所述步骤 2 ) 中， 所述的桥接中间体选自： 丁二酸酐、 光气、 烯丙基溴、 丙炔酸、 4-溴甲基 苯甲酸、 异氰酸酯、 酰氯、 氯甲酸酯、 苯磺酰氯或它们的类似物。
16.权利要求 1-7任一所述的雷公藤甲素衍生在制备治疗胰腺癌、 腎 癌、 小细胞肺癌、 脑癌、 申经癌、 骨癌、 白血病淋巴癌、 肠癌、 子宫癌、 乳腺癌、 肝癌、 前列腺癌、 皮肤癌或黑色素瘤等疾病的药物中的应用。
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