WO2014091718A1 - 微細藻類の培養方法及び培養システム - Google Patents

微細藻類の培養方法及び培養システム Download PDF

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福田　裕章
憲秀 藏野
英明 宮下
原山　重明
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株式会社デンソー
国立大学法人京都大学
学校法人中央大学
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    • C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats

Definitions

  • This disclosure relates to a microalgae culture method and system.
  • Non-Patent Document 1 a method using a neutral or alkaline culture solution has been exclusively used.
  • the present disclosure has been made in view of the above points, and an object thereof is to provide a culture method and a culture system for microalgae in an open system outdoors.
  • the method for culturing microalgae according to the first aspect of the present disclosure uses a culture solution having a culture solution having a pH of 4 or less, and uses the culture solution of Coccomyxa and related organisms, or the unicellular green algae belonging to the Watanabea clade. Are cultured in an outdoor open culture system. According to this culture method, since the pH of the culture solution is 4 or less, the growth of other microalgae and protists can be suppressed. Even if CO2 is introduced into the culture solution, bicarbonate ions are not generated, so that the pH of the culture solution can be prevented from changing.
  • the culture solution has a pH of 4 or less, and a culture solution containing ammonia nitrogen is used to produce the microalgae of the genus Coccomyxa and related organisms, Pseudococcomyxa.
  • a culture solution containing ammonia nitrogen is used to produce the microalgae of the genus Coccomyxa and related organisms, Pseudococcomyxa.
  • the culture solution contains ammonia nitrogen (for example, urea), the growth of other microalgae and protists can be suppressed.
  • the culture solution contains ammonia nitrogen (for example, urea)
  • the culture solution contains ammonia nitrogen (for example, urea)
  • the growth of other microalgae and protists can be suppressed.
  • FIG. 1 is a graph showing the transition of algal body concentration and pH in Example 1.
  • FIG. 2 is a graph showing the transition of algal body concentration and pH in Example 8.
  • FIG. 3 is an explanatory diagram showing the configuration of the culture system 1.
  • FIG. 4 is a diagram showing the nitrogen concentration and fat content in algal cells after completion of the culture.
  • FIG. 5 is a diagram showing the fat and oil content in the alga bodies after the second culture and the third culture.
  • microalgae other than microalgae to be cultured (hereinafter referred to as other microalgae) and protists that prey on microalgae may proliferate.
  • CO2 When cultivating microalgae, CO2 may be continuously introduced into the culture solution, but if the culture solution is neutral or alkaline, bicarbonate ions are generated from CO2 and the pH of the culture solution may fluctuate. There is sex. Then, it is necessary to input a pH adjusting agent to the culture solution, and there is a possibility that the salt concentration in the culture solution increases.
  • microalgae to be cultured in the culture method of the present disclosure examples include the unicellular green algae belonging to the genus Coccomyxa and related organisms, the genus Pseudococcomyxa, or the Watanabea clade.
  • microalgae that is, the above-mentioned simple algae
  • isolation conditions for example, pH 3 and temperature within a range of 15 to 35 ° C.
  • microalgae selected from the samples collected in the hot spring environment include, for example, Pseudochoricystis ellipsoidea N1 strain (MBIC11204: closely related to Pseudococcomyxa genus), Pseudochoricystis ellipsoidea Obi strain (MBIC11220: closely related to Pseudococcomyxa genus C), There are simplex (UTEX274: Coccomyxa genus) and Coccomyxa chodatiiati (UTEXB266: Coccomyxa genus).
  • the above screening is performed to select microalgae of unicellular green algae belonging to the genus Coccomyxa and related organisms, the genus Pseudococcomyxa, or the Watanabea clade, and the culture of the present disclosure. It may be used in the method.
  • it can be confirmed by the homology of DNA that the microalgae are unicellular green algae belonging to the genus Coccomyxa and its related organism group, Pseudococcomyxa genus, or Watanabea clade, and the identity with 18S rRNA is 97% or more . Identity with 18S rRNA is confirmed using well-known DNA databases.
  • a culture solution having a known composition can be used as the culture solution in the culture method of the present disclosure.
  • the pH of the culture solution is 4 or less, preferably pH 3-4.
  • CO2 CO2-containing gas
  • the culture rate of microalgae is maintained at a high level.
  • the pH of the culture solution is 4 or less, bicarbonate is hardly generated even when CO2 is introduced, and the pH of the culture solution is not easily changed.
  • the culture medium may contain ammonia nitrogen.
  • ammonia nitrogen is not specifically limited, For example, it is urea.
  • all or part of the microalgae is recovered from the culture solution used for culturing the microalgae, and the recovered culture solution is used, for example, by adding a deficient medium component.
  • New microalgae can be cultured. In this case, since the culture solution can be reused, the culture cost of microalgae can be reduced.
  • the culturing method of the present disclosure includes, for example, detection means for detecting one or more parameters selected from a parameter group consisting of pH, CO2 concentration, and algal body concentration in a culture solution, and controls the parameters within a predetermined range.
  • detection means for detecting one or more parameters selected from a parameter group consisting of pH, CO2 concentration, and algal body concentration in a culture solution, and controls the parameters within a predetermined range.
  • a culture system with control means is used. If this culture system is used, it becomes easy to maintain the parameters in an appropriate range.
  • the detection means corresponds to a detection unit.
  • the control means corresponds to a control unit.
  • the culture system When pH is included in the parameter, the culture system detects the pH by the detection means and maintains the pH within the range of 4 or less (preferably pH 3 to 4) by the control means. Further, when the CO2 concentration is included in the parameter, the culture system detects the CO2 concentration by the detection means, and maintains the CO2 concentration in a predetermined range by the control means.
  • the predetermined range is, for example, 7.45 to 74.5 mg / L.
  • the detecting means include sensors that can measure the parameters (for example, a pH measurement sensor, a CO2 concentration measurement sensor, and an algal body concentration measurement sensor).
  • the control means for example, adjusting means for adjusting the parameters (for example, a valve mechanism for adjusting the introduction amount of the pH adjusting agent into the culture solution, a valve mechanism for adjusting the introduction amount of the CO2-containing gas into the culture solution) And a valve mechanism for adjusting the amount of microalgae introduced into the culture solution) and a computer for controlling the adjusting means in accordance with the measurement result of the sensor.
  • adjusting means for adjusting the parameters for example, a valve mechanism for adjusting the introduction amount of the pH adjusting agent into the culture solution, a valve mechanism for adjusting the introduction amount of the CO2-containing gas into the culture solution
  • a valve mechanism for adjusting the amount of microalgae introduced into the culture solution for example, a computer for controlling the adjusting means in accordance with the measurement result of the sensor.
  • Ion exchange water 500kg Ammonia nitrogen (urea): 9.8 g Phosphorus: 560mg Potassium: 560mg Calcium: 150mg Magnesium: 170mg Chelate metal salt: 85mg
  • the pH of the culture solution was adjusted to 3.5 using hydrochloric acid before planting the microalgae and not adjusted thereafter.
  • a Pseudochoricystis ellipsoidea N1 strain (MBIC11204), a microalga closely related to the genus Pseudococcomyxa, was planted in this culture solution at a concentration of 0.02 g / l.
  • OD720 indicates the algal body concentration in the culture solution
  • pH indicates the pH of the culture solution.
  • nitrogen concentration and fat content in the algal bodies after completion of the culture were measured. The result is shown in FIG.
  • Example 2 As the microalgae, instead of the Pseudochoricystis ellipsoidea N1 strain (MBIC11204), which is a microalga closely related to the genus Pseudococcomyxa, the Pseudochoricystis ellipsoidea Obi strain (MBIC11220), a microalga closely related to the genus Pseudococcomyxa, was used as in Example 1 above. The culture was performed.
  • MBIC11204 Pseudochoricystis ellipsoidea N1 strain
  • MBIC11220 a microalga closely related to the genus Pseudococcomyxa
  • Example 3 As microalgae, Coccomyxa simplex (UTEX274) was used instead of Pseudochoricystis ellipsoidea N1 strain (MBIC11204), and culture was performed in the same manner as in Example 1. The nitrogen concentration in the algal bodies after the completion of the culture was measured. The result is shown in FIG. As shown in FIG. 4, the growth of microalgae was good.
  • Example 4 As microalgae, Coccomyxa chodatii (UTEXB266) was used instead of Pseudochoricystis ellipsoidea N1 strain (MBIC11204), and culture was performed in the same manner as in Example 1.
  • Example 5 A culture solution having the following composition was accommodated in an outdoor open culture system (500 L).
  • Ion exchange water 500kg Nitrate-form nitrogen (sodium nitrate): 27.3 g Phosphorus: 560mg Potassium: 560mg Calcium: 150mg Magnesium: 170g Chelate metal salt: 85mg
  • the pH of the culture solution was adjusted to 3 using hydrochloric acid before planting the microalgae, and was not adjusted thereafter.
  • Single-cell green algae belonging to Watanabea clade was planted in this culture solution so as to be 0.02 g / l.
  • This microalgae is a microalgae that was screened from a sample collected in a hot spring environment or the like under a condition that the pH is 3 and the temperature is in the range of 15 to 35 ° C.
  • the microalgae were confirmed to be unicellular green algae belonging to the Watanabea clade by DNA homology.
  • the DNA sequence of this microalgae is shown in SEQ ID NOs: 4 to 6 in the sequence listing
  • Example 6 Using the same microalgae as in Example 1, the culture was performed in the same manner as in Example 1. This is the first culture. From the culture medium after the first culture, the microalgae are recovered, and in the culture medium after the recovery (the culture liquid substantially free of microalgae), new microalgae (the same microalgae as in Example 1) are obtained. The cells were cultured in the same manner as in Example 1. This is the second culture. Regarding the culture medium composition, the same amount as in Example 1 was added.
  • microalgae are recovered from the culture solution after the second culture, and in the culture solution after the recovery (culture solution substantially free of microalgae), new microalgae (the same fineness as in Example 1 above) is obtained.
  • Algae were cultured in the same manner as in Example 1. This is the third culture.
  • the culture medium composition the same amount as in Example 1 was added.
  • Algae concentration after first culture OD720
  • pH after first culture alga body concentration after second culture (OD720)
  • pH after second culture alga bodies after third culture
  • the concentration (OD720) and the pH after the third culture are shown in FIG.
  • the fats and oils content in the algal body after the 2nd culture and the 3rd culture are shown in FIG.
  • the pH after the n-th culture is expressed as n-th_pH.
  • Example 7 When a mixture of various microorganisms collected from a hot spring is used and cultured in the same manner as in Example 5, only the microalgae of unicellular green algae belonging to the genus Coccomyxa and related organisms, the genus Pseudococcomyxa, or the Watanabea clade Proliferation was observed.
  • the DNA sequences of the microalgae of the genus Coccomyxa and related organisms, Pseudococcomyxa are shown in SEQ ID NOs: 1 to 3 in the sequence listing.
  • Example 8 The DNA sequences of microalgae of unicellular green algae belonging to the Watanabea clade are shown in SEQ ID NOs: 4 to 6 in the sequence listing.
  • Example 8 When a mixture of various microorganisms collected from a hot spring was used and cultured in the same manner as in Example 1, only Cocccomyxa genus and related organisms, Pseudococcomyxa microalgae grew.
  • the DNA sequences of the microalgae of the genus Coccomyxa and related organisms, Pseudococcomyxa are shown in SEQ ID NOs: 1 to 3 in the sequence listing.
  • FIG. 3 shows the configuration of the culture system 1.
  • the culture system 1 includes a raceway type culture tank 3, a stirring paddle 5 for stirring the culture solution in the culture tank 3, a pH measurement sensor 7 for detecting the pH of the culture solution, and the CO2 concentration in the culture solution.
  • a CO2 concentration measuring sensor 9 to be detected a control unit 11 comprising a well-known computer, a pH adjusting agent introducing unit 13 for introducing a pH adjusting agent into a culture solution, and a CO2 for introducing a CO2-containing gas into the culture solution.
  • the pH adjuster charging unit 13 has a well-known valve mechanism, and can adjust the input amount of the pH adjuster to the culture solution.
  • the CO2 gas introduction unit 15 has a well-known valve mechanism, and can adjust the amount of CO2-containing gas introduced into the culture solution.
  • the control unit 11 acquires the measurement result of the pH measurement sensor 7, controls the pH adjuster charging unit 13 so that the pH in the culture solution is maintained in the range of 3 to 4, and adjusts the pH as necessary. Add the agent to the culture.
  • the control unit 11 acquires the measurement result of the CO2 concentration measurement sensor 9, and controls the CO2 gas introduction unit 15 so that the CO2 concentration in the culture solution is maintained in the range of 7.45 to 74.5 mg / L. Adjust the amount of CO2-containing gas introduced into the culture solution.
  • the pH measurement sensor 7 and the CO2 concentration measurement sensor 9 are an embodiment of the detection means, and the control unit 11, the pH adjuster charging unit 13, and the CO2 gas introduction unit 15 are an embodiment of the control means.
  • the culture system 1 of this example can be used for culturing microalgae in Examples 1 to 6.
  • the culture system 1 may include a sensor for measuring the concentration of algal bodies in the culture solution and means for adjusting the algal body concentration to a predetermined range according to the measurement result of the sensors.
  • the control part 11 can maintain algal body concentration in a preferable range by adjusting algal body concentration according to the measurement result of algal body concentration.
  • the method for culturing microalgae according to the first aspect of the present disclosure uses a culture solution having a culture solution having a pH of 4 or less, and uses the culture solution of Coccomyxa and related organisms, or the unicellular green algae belonging to the Watanabea clade. Are cultured in an outdoor open culture system. According to this culture method, since the pH of the culture solution is 4 or less, the growth of other microalgae and protists can be suppressed. Even if CO2 is introduced into the culture solution, bicarbonate ions are not generated, so that the pH of the culture solution can be prevented from changing.
  • the culture solution has a pH of 4 or less, and a culture solution containing ammonia nitrogen is used to produce the microalgae of the genus Coccomyxa and related organisms, Pseudococcomyxa.
  • a culture solution containing ammonia nitrogen is used to produce the microalgae of the genus Coccomyxa and related organisms, Pseudococcomyxa.
  • the culture solution contains ammonia nitrogen (for example, urea), the growth of other microalgae and protists can be suppressed.
  • the culture solution contains ammonia nitrogen (for example, urea)
  • the culture solution contains ammonia nitrogen (for example, urea)
  • the growth of other microalgae and protists can be suppressed.
  • CO2 is introduced into the culture solution, bicarbonate ions are not generated, so that the pH of the culture solution can be prevented from changing.
  • this indication is not limited to the said embodiment at all, and it cannot be overemphasized that it can implement in a various aspect in the range which does not deviate from this indication.
  • substantially the same effect can be obtained by using other ammonia nitrogen instead of urea.
  • the cultivation method and culture system of the micro algae concerning this indication were illustrated, the embodiment and composition concerning this indication are not limited to each embodiment and each composition mentioned above. Embodiments and configurations obtained by appropriately combining technical elements disclosed in different embodiments and configurations are also included in the scope of the embodiments and configurations according to the present disclosure.

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Abstract

　ｐＨが４以下である培養液を用いて、Coccomyxa属およびその近縁生物群、又はWatanabeaクレードに帰属する単細胞緑藻類の微細藻類を屋外の開放系培養システムにおいて培養する微細藻類の培養方法。ｐＨが４以下であり、アンモニア態窒素を含む培養液を用いて、Coccomyxaおよびその近縁生物群属、又はPseudococcomyxa属の微細藻類を屋外の開放系培養システムにおいて培養する微細藻類の培養方法。

Description

微細藻類の培養方法及び培養システム 関連出願の相互参照
　本出願は、２０１２年１２月１４日に出願された日本特許出願２０１２－２７３６３３に基づいており、ここにその記載内容を参照により援用する。
　本開示は微細藻類の培養方法及び培養システムに関するものである。
　近年、微細藻類が生産する脂質や糖等の有用物質の利用と活用が注目されている。有用物質の生産性を高めるためには、微細藻類を効率よく培養する必要がある。従来、微細藻類の培養方法としては、中性やアルカリ性の培養液を用いる方法が専ら用いられてきた（非特許文献１参照）。
AquaFUELs-D1.4 Rev7-30November 2010 Page28-36
　本開示は以上の点に鑑みなされたものであり、屋外での開放系における微細藻類の培養方法及び培養システムを提供することを目的とする。
　本開示の第１局面に係る微細藻類の培養方法は、培養液のｐＨが４以下である培養液を用いて、Coccomyxa属およびその近縁生物群、又はWatanabeaクレードに帰属する単細胞緑藻類の微細藻類を屋外の開放系の培養システムにて培養する。この培養方法によれば、培養液のｐＨが４以下であるので、他の微細藻類や原生生物の増殖を抑制することができる。培養液中にＣＯ2を導入しても、重炭酸イオンが生じないので、培養液のｐＨが変動を抑制することができる。
　本開示の第２局面に係る微細藻類の培養方法は、培養液のｐＨが４以下であり、アンモニア態窒素を含む培養液を用いて、Coccomyxa属およびその近縁生物群、Pseudococcomyxa属の微細藻類を屋外の開放系の培養システムにて培養する。この培養方法によれば、培養液のｐＨが４以下であるので、他の微細藻類や原生生物の増殖を抑制することができる。特に、培養液がアンモニア態窒素（例えば尿素）を含むことから、他の微細藻類や原生生物の増殖を抑制することができる。培養液中にＣＯ2を導入しても、重炭酸イオンが生じないので、培養液のｐＨが変動することを抑制できる。
　本開示についての上記および他の目的、特徴や利点は、添付図面を参照した下記詳細な説明から、より明確になる。添付図面において
図１は、実施例１における藻体濃度とｐＨの推移を表すグラフである。 図２は、実施例８における藻体濃度とｐＨの推移を表すグラフである。 図３は、培養システム１の構成を表す説明図である。 図４は、培養終了後における藻体中の窒素濃度及び油脂含量を表す図である。 図５は、２回目の培養後及び３回目の培養後における藻体中の油脂含量を表す図である。
　培養液が中性又はアルカリ性である場合、培養の対象である微細藻類以外の微細藻類（以下、他の微細藻類とする）や、微細藻類を捕食する原生生物が増殖する可能性がある。微細藻類を培養する場合、培養液中にＣＯ2を連続的に導入することがあるが、培養液が中性又はアルカリ性であると、ＣＯ2から重炭酸イオンが生じ、培養液のｐＨが変動する可能性がある。すると、培養液へのｐＨ調整剤の投入が必要となり、培養液中の塩濃度が増加する虞がある。
　本開示の実施形態を説明する。本開示の培養方法において培養の対象となる微細藻類としては、Coccomyxa属およびその近縁生物群、Pseudococcomyxa属、又はWatanabeaクレードに帰属する単細胞緑藻類がある。特に、温泉湧出環境等において採取したサンプルから、所定の単離条件（例えば、ｐＨ３であり、温度が１５～３５℃の範囲内にある条件）にてスクリーニングされた微細藻類（つまり、上記の単離条件で生育可能な微細藻類）がある。
　温泉湧出環境等において採取したサンプルから、上記のスクリーニングで選択される微細藻類として、例えば、Pseudochoricystis ellipsoidea N1株(MBIC11204：Pseudococcomyxa属近縁)、Pseudochoricystis ellipsoidea Obi株(MBIC11220：Pseudococcomyxa属近縁)、Coccomyxa simplex （UTEX274：Coccomyxa属）、Coccomyxa chodatii （UTEXB266：Coccomyxa属）がある。
　また、温泉湧出環境等において採取したサンプルから、上記のスクリーニングにより、Coccomyxa属およびその近縁生物群、Pseudococcomyxa属、又はWatanabeaクレードに帰属する単細胞緑藻類の微細藻類を選択し、それを本開示の培養方法に用いてもよい。なお、微細藻類がCoccomyxa属およびその近縁生物群、Pseudococcomyxa属、又はWatanabeaクレードに帰属する単細胞緑藻類であることは、ＤＮＡの相同性により確認でき、18S rRNAでの同一性が97%以上である。18S rRNAでの同一性は、周知のＤＮＡデータベースを使用して確認される。
　本開示の培養方法における培養液としては、周知の組成を有する培養液を用いることができる。培養液のｐＨは４以下であり、好ましくはｐＨ３～４である。本開示の培養方法において、例えば、培養液にＣＯ2（ＣＯ2含有ガス）を連続的に導入することができる。この場合、微細藻類の培養速度が高水準に維持される。なお、培養液のｐＨが４以下であることにより、ＣＯ2を導入しても重炭酸は生じにくく、培養液のｐＨは変動しにくい。
　本開示の培養方法において、培養液中にアンモニア態窒素を含むことができる。この場合、他の微細藻類や原生生物の増殖が一層生じにくくなる。アンモニア態窒素は特に限定されないが、例えば尿素である。
　本開示の培養方法では、例えば、微細藻類の培養に用いた培養液から微細藻類の全部又は一部を回収し、回収後の培養液を用い、例えば、不足分の培地成分を追加することで新たな微細藻類を培養することができる。この場合、培養液を再利用できるので、微細藻類の培養コストを低減することができる。
　本開示の培養方法は、例えば、培養液における、ｐＨ、ＣＯ2濃度、及び藻体濃度から成るパラメータ群から選ばれる１以上のパラメータを検知する検知手段と、そのパラメータを所定の範囲内に制御する制御手段を備える培養システムを用いる。この培養システムを用いれば、前記パラメータを適切な範囲に維持することが容易になる。なお、検知手段は検知部に相当する。制御手段は制御部に相当する。
　前記パラメータにｐＨが含まれる場合、培養システムは、検知手段によってｐＨを検知し、制御手段によってｐＨを４以下（好ましくはｐＨ３～４）の範囲に維持する。また、前記パラメータにＣＯ2濃度が含まれる場合、培養システムは、検知手段によってＣＯ2濃度を検知し、制御手段によってＣＯ2濃度を、所定の範囲に維持する。所定の範囲は、例えば、７．４５～７４．５ｍｇ／Ｌである。
　検知手段としては、例えば、前記パラメータを測定可能なセンサ（例えばｐＨ測定センサ、ＣＯ2濃度測定センサ、藻体濃度測定センサ）がある。また、制御手段としては、例えば、前記パラメータを調整する調整手段（例えば、培養液へのｐＨ調整剤の導入量を調整するバルブ機構、培養液へのＣＯ2含有ガスの導入量を調整するバルブ機構、培養液への微細藻類の導入量を調整するバルブ機構）と、上記のセンサの測定結果に応じて上記の調整手段を制御するコンピュータと、から成るものがある。
（実施例１）
　屋外の開放系培養システム（５００Ｌ）に、以下の組成を有する培養液を収容した。
　　イオン交換水：５００ｋｇ
　　アンモニア態窒素（尿素）：９．８ｇ
　　リン：５６０ｍｇ
　　カリウム：５６０ｍｇ
　　カルシウム：１５０ｍｇ
　　マグネシウム：１７０ｍｇ
　　キレート金属塩：８５ｍｇ
　培養液のｐＨは微細藻類の植株前に塩酸を用いて３．５に調整し、その後は調整しなかった。この培養液に、Pseudococcomyxa属近縁の微細藻類であるPseudochoricystis ellipsoidea N1株(MBIC11204)を、０．０２ｇ／ｌとなるように植株した。
　培養中は、光源に太陽による日射を用い、二酸化炭素濃度１ｖｏｌ％のガスを連続的に培養液に通気させた。培養中、培養液における藻体濃度とｐＨとを継続的に測定した。その測定結果を図１に示す。図１においてＯＤ７２０は培養液中の藻体濃度を示し、ｐＨは培養液のｐＨを示す。また、培養終了後における藻体中の窒素濃度及び油脂含量を測定した。その結果を図４に示す。
　図１及び図４から明らかなように、培養中、培養液のｐＨはほとんど変動せず、微細藻類の生育は良好であった。また、他の微細藻類や原生生物の増殖は見られなかった。
（実施例２）
　微細藻類として、Pseudococcomyxa属近縁の微細藻類であるPseudochoricystis ellipsoidea N1株(MBIC11204)の代わりに、Pseudococcomyxa属近縁の微細藻類であるPseudochoricystis ellipsoidea Obi株(MBIC11220)を用いて、前記実施例１と同様に培養を行った。
　培養終了後における藻体中の窒素濃度及び油脂含量を測定した。その結果を図４に示す。図４で示されるように、微細藻類の生育は良好であった。また、培養中、培養液のｐＨはほとんど変動せず、他の微細藻類や原生生物の増殖は見られなかった。
（実施例３）
　微細藻類として、Pseudochoricystis ellipsoidea N1株(MBIC11204)の代わりに、Coccomyxa simplex （UTEX274）を用いて、前記実施例１と同様に培養を行った。
　培養終了後における藻体中の窒素濃度を測定した。その結果を図４に示す。図４で示されるように、微細藻類の生育は良好であった。また、培養中、培養液のｐＨはほとんど変動せず、他の微細藻類や原生生物の増殖は見られなかった。
（実施例４）
　微細藻類として、Pseudochoricystis ellipsoidea N1株(MBIC11204)の代わりに、Coccomyxa chodatii （UTEXB266）を用いて、前記実施例１と同様に培養を行った。
　培養終了後における藻体中の窒素濃度及び油脂含量を測定したところ、微細藻類の生育が良好であることを裏付けていた。また、培養中、培養液のｐＨはほとんど変動せず、他の微細藻類や原生生物の増殖は見られなかった。
（実施例５）
　屋外の開放系培養システム（５００Ｌ）に、以下の組成を有する培養液を収容した。
　　イオン交換水：５００ｋｇ
　　硝酸体態窒素（硝酸ナトリウム）：２７．３ｇ
　　リン：５６０ｍｇ
　　カリウム：５６０ｍｇ
　　カルシウム：１５０ｍｇ
　　マグネシウム：１７０ｇ
　　キレート金属塩：８５ｍｇ
　培養液のｐＨは微細藻類の植株前に塩酸を用いて３に調整し、その後は調整しなかった。この培養液に、Watanabeaクレードに帰属する単細胞緑藻類を、０．０２ｇ／ｌとなるように植株した。この微細藻類は、温泉湧出環境等において採取したサンプルから、ｐＨが３であり、温度が１５～３５℃の範囲内にある条件にてスクリーニングされた微細藻類である。この微細藻類がWatanabeaクレードに帰属する単細胞緑藻類であることはＤＮＡの相同性により確認した。この微細藻類のＤＮＡ配列を、配列表の配列番号４～６に示す。
　培養中は、光源に太陽による日射を用い、二酸化炭素濃度１ｖｏｌ％のガスを連続的に通気させた。培養中、培養液のｐＨはほとんど変動せず、微細藻類の生育は良好であった。また、他の微細藻類や原生生物の増殖は見られなかった。
（実施例６）
　前記実施例１と同じ微細藻類を用い、前記実施例１と同様に培養を行った。これを１回目の培養とする。１回目の培養後の培養液から、微細藻類を回収し、回収後の培養液（微細藻類を実質的に含まない培養液）において、新たな微細藻類（前記実施例１と同じ微細藻類）を、前記実施例１と同様の方法で培養した。これを２回目の培養とする。培養液の培地組成に関しては、前記実施例１と同量添加した。
　次に、２回目の培養後の培養液から、微細藻類を回収し、回収後の培養液（微細藻類を実質的に含まない培養液）において、新たな微細藻類（前記実施例１と同じ微細藻類）を、前記実施例１と同様の方法で培養した。これを３回目の培養とする。培養液の培地組成に関しては、前記実施例１と同量添加した。
　１回目の培養後における藻体濃度（ＯＤ７２０）、１回目の培養後におけるｐＨ、２回目の培養後における藻体濃度（ＯＤ７２０）、２回目の培養後におけるｐＨ、３回目の培養後における藻体濃度（ＯＤ７２０）、及び３回目の培養後におけるｐＨを図２に示す。また、２回目の培養後及び３回目の培養後における藻体中の油脂含量を図５に示す。なお、図２において、ｎ回目（ｎ＝１、２、３）の培養後における藻体濃度は、ｎ回目＿ＯＤと表記し、ｎ回目の培養後におけるｐＨは、ｎ回目＿ｐＨと表記する。
　図２及び図５に示されるように、１～３回目の培養のいずれにおいても、微細藻類の生育は良好であり、ｐＨは殆ど変動しなかった。
（実施例７）
　温泉より採取したいろいろな微生物が混ざったものを用いて、実施例５と同様な方法で培養すると、Coccomyxa属およびその近縁生物群、Pseudococcomyxa属、又はWatanabeaクレードに帰属する単細胞緑藻類の微細藻類のみに増殖が見られた。Coccomyxa属およびその近縁生物群、Pseudococcomyxa属の微細藻類のＤＮＡ配列を、配列表の配列番号１～３に示す。Watanabeaクレードに帰属する単細胞緑藻類の微細藻類のＤＮＡ配列を、配列表の配列番号４～６に示す。
（実施例８）
　温泉より採取したいろいろな微生物が混ざったものを用いて、実施例１と同様な方法で培養すると、Coccomyxa属およびその近縁生物群、Pseudococcomyxa属の微細藻類のみに増殖が見られた。Coccomyxa属およびその近縁生物群、Pseudococcomyxa属の微細藻類のＤＮＡ配列を、配列表の配列番号１～３に示す。
（実施例９）
　図３に、培養システム１の構成を表す。培養システム１は、レースウェイ型の培養槽３と、培養槽３中の培養液を攪拌する攪拌用パドル５と、培養液のｐＨを検知するｐＨ測定センサ７と、培養液中のＣＯ2濃度を検知するＣＯ2濃度測定センサ９と、周知のコンピュータから成る制御部１１と、培養液へのｐＨ調整剤の投入を行うｐＨ調整剤投入部１３と、培養液へのＣＯ2含有ガスの導入を行うＣＯ2ガス導入部１５と、を備える。
　ｐＨ調整剤投入部１３は周知のバルブ機構を有しており、培養液へのｐＨ調整剤の投入量を調整できる。また、ＣＯ2ガス導入部１５は周知のバルブ機構を有しており、培養液へのＣＯ2含有ガスの導入量を調整できる。
　制御部１１は、ｐＨ測定センサ７の測定結果を取得し、培養液中のｐＨが３～４の範囲に維持されるように、ｐＨ調整剤投入部１３を制御し、必要に応じてｐＨ調整剤を培養液に投入する。
　制御部１１は、ＣＯ2濃度測定センサ９の測定結果を取得し、培養液中のＣＯ2濃度が７．４５～７４．５ｍｇ／Ｌの範囲に維持されるように、ＣＯ2ガス導入部１５を制御し、培養液中へのＣＯ2含有ガスの導入量を調整する。なお、ｐＨ測定センサ７及びＣＯ2濃度測定センサ９は検知手段の一実施形態であり、制御部１１、ｐＨ調整剤投入部１３、及びＣＯ2ガス導入部１５は制御手段の一実施形態である。
　本実施例の培養システム１は、前記実施例１～６における微細藻類の培養に用いることができる。本実施例の培養システム１を用いれば、培養液のｐＨ及びＣＯ2濃度を好適な範囲に維持することが容易になる。
　培養システム１は、培養液中の藻体濃度を測定するセンサと、そのセンサの測定結果に応じて藻体濃度を所定の範囲に調整する手段を備えていてもよい。この場合、制御部１１は、藻体濃度の測定結果に応じて藻体濃度を調整することで、藻体濃度を好ましい範囲に維持することができる。
　本開示の第１局面に係る微細藻類の培養方法は、培養液のｐＨが４以下である培養液を用いて、Coccomyxa属およびその近縁生物群、又はWatanabeaクレードに帰属する単細胞緑藻類の微細藻類を屋外の開放系の培養システムにて培養する。この培養方法によれば、培養液のｐＨが４以下であるので、他の微細藻類や原生生物の増殖を抑制することができる。培養液中にＣＯ2を導入しても、重炭酸イオンが生じないので、培養液のｐＨが変動を抑制することができる。
　本開示の第２局面に係る微細藻類の培養方法は、培養液のｐＨが４以下であり、アンモニア態窒素を含む培養液を用いて、Coccomyxa属およびその近縁生物群、Pseudococcomyxa属の微細藻類を屋外の開放系の培養システムにて培養する。この培養方法によれば、培養液のｐＨが４以下であるので、他の微細藻類や原生生物の増殖を抑制することができる。特に、培養液がアンモニア態窒素（例えば尿素）を含むことから、他の微細藻類や原生生物の増殖を抑制することができる。培養液中にＣＯ2を導入しても、重炭酸イオンが生じないので、培養液のｐＨが変動を抑制することができる。
　尚、本開示は前記実施形態になんら限定されるものではなく、本開示を逸脱しない範囲において種々の態様で実施しうることはいうまでもない。例えば、前記実施例１～４、６、８において、尿素の代わりに、他のアンモニア態窒素を用いても略同様の効果を得ることができる。
　以上、本開示に係る微細藻類の培養方法および培養システムを例示したが、本開示に係る実施の形態および構成は、上述した各実施の形態および各構成に限定されるものではない。異なる実施の形態および構成にそれぞれ開示された技術的要素を適宜組み合わせて得られる実施の形態および構成についても本開示に係る実施の形態および構成の範囲に含まれる。
 
配列番号：１
配列の長さ：１６７７
配列の型：ＤＮＡ
生物名：Coccomyxa and its allied species, A
配列：１
agtcatatgc ttgtctcaaa gattaagcca tgcatgtcta agtataaact gctttatact 
gtgaaactgc gaatggctca ttaaatcagt tatagtttat ttgatggtac cttactactc 
ggataaccgt agtaattcta gagctaatac gtgcgtaaat cccgacttct ggaagggacg 
tatttattag ataaaaggcc gaccggactc tgtccgactc gcggtgaatc atgataactc 
cacggatcgc atggcctcga gccggcgacg tttcattcaa atttctgccc tatcaacttt 
cgacggtaag gtattggctt accgtggtgg taacgggtga cggaggatta gggttcgatt 
ccggagaggg agcctgagaa acggctacca catccaagga aggcagcagg cgcgcaaatt 
acccaatctt gacacaagga ggtagtgaca ataaataaca ataccggggt ttttcaactc 
tggtaattgg aatgagtaca atctaaaccc cttaacgagg atcaattgga gggcaagtct 
ggtgccagca gccgcggtaa ttccagctcc aatagcgtat atttaagttg ttgcagttaa 
aaagctcgta gttggatttc gggcgggctc ggctggtccg cctatcggtg tgcactgacc 
gagcccgtct tgttgccggg gacgggctcc tgggcttaac tgtccgggac tcggagtcgg 
cgaggttact ttgagtaaat tagagtgttc aaagcaggcc tacgctctga atacattagc 
atggaataac acgataggac tctggcctat cttgttggtc tgtgggaccg gagtaatgat 
taagagggac agtcgggggc attcgtattt cattgtcaga ggtgaaattc ttggatttat 
gaaagacgaa ctactgcgaa agcatttgcc aaggatgttt tcattaatca agaacgaaag 
ttgggggctc gaagacgatt agataccgtc ctagtctcaa ccataaacga tgccgactag 
ggattggcgg gcgttctttt gatgacctcg ccagcacctt atgagaaatc aaagtttttg 
ggttccgggg ggagtatggt cgcaaggctg aaacttaaag gaattgacgg aagggcacca 
ccaggcgtgg agcctgcggc ttaatttgac tcaacacggg aaaacttacc aggtccagac 
atagtgagga ttgacagatt gagagctctt tcttgattct atgggtggtg gtgcatggcc 
gttcttagtt ggtgggttgc cttgtcaggt tgattccggt aacgaacgag acctcagcct 
gctaactagt cacggttggt tttaccagcc ggccgacttc ttagagggac tattggcgac 
tagccaatgg aagtgtgagg caataacagg tctgtgatgc ccttagatgt tctgggccgc 
acgcgcgcta cactgatgca atcaacgagc ctagccttgg ccgagaggtc cgggtaatct 
ttgaaactgc atcgtgatgg ggatagatta ttgcaattat taatcttcaa cgaggaatgc 
ctagtaagcg cgagtcatca gctcgcgttg attacgtccc tgccctttgt acacaccgcc 
cgtcgctcct accgattggg tgtgctggtg aagcgttcgg attggcggct tcagggc
 
配列番号：２
配列の長さ：１７０９
配列の型：ＤＮＡ
生物名：Coccomyxa and its allied species, B
配列：２
agtcatatgc ttgtctcaaa gattaagcca tgcatgtcta agtataaact gctttatact 
gtgaaactgc gaatggctca ttaaatcagt tatagtttat ttgatggtac cttactactc 
ggataaccgt agtaattcta gagctaatac gtgcggaaat cccgacttct ggaagggacg 
tatttattag ataaaaggcc gaccgggctt gcccgaaacg cggtgaatca tgataactcc 
acgaatcgca tggcctcagc gccggcgatg tttcattcaa atttctgccc tatcaacttt 
cgacggtaag gtattggctt accgtggtgg taacgggtga cggaggatta gggttcgatt 
ccggagaggg agcctgagaa acggctacca catccaagga aggcagcagg cgcgcaaatt 
acccaatctt gacacaagga ggtagtgaca ataaataaca ataccggggt ttttcaactc 
tggtaattgg aatgagtaca atctaaaccc cttaacgagg atcaattgga gggcaagtct 
ggtgccagca gccgcggtaa ttccagctcc aatagcgtat atttaagttg ttgcagttaa 
aaagctcgta gttggatttc gggcgggccc ggccggtccg cctttgggtg tgcactgacc 
gggcccgtct tgttgccggg gacgggctcc tgggcttaac tgtccgggac tcggagtcgg 
cgaggttact ttgagtaaat tagagtgttc aaagcaggcc tacgctctga atacattagc 
atggaataac acgataggac tctggcctat cttgttggtc tgtgggaccg gagtaatgat 
taagagggac agtcgggggc attcgtattt cattgtcaga ggtgaaattc ttggatttat 
gaaagacgaa ctactgcgaa agcatttgcc aaggatgttt tcattaatca agaacgaaag 
ttgggggctc gaagacgatt agataccgtc ctagtctcaa ccataaacga tgccgactag 
ggattggcgg gcgttctttt gatgaccccg ccagcacctt atgagaaatc aaagtttttg 
ggttccgggg ggagtatggt cgcaaggctg aaacttaaag gaattgacgg aagggcacca 
ccaggcgtgg agcctgcggc ttaatttgac tcaacacggg aaaacttacc aggtccagac 
atagtgagga ttgacagatt gagagctctt tcttgattct atgggtggtg gtgcatggcc 
gttcttagtt ggtgggttgc cttgtcaggt tgattccggt aacgaacgag acctcagcct 
gctaactagt cacgattggt tcttccagtc ggccgacttc ttagagggac tattggcgac 
tagccaatgg aagtgtgagg caataacagg tctgtgatgc ccttagatgt tctgggccgc 
acgcgcgcta cactgatgca atcaacgagc ctagccttgg ccgacaggtc cgggtaatct 
ttgaaactgc atcgtgatgg ggatagatga ttgcaattat tcatcttcaa cgaggaatgc 
ctagtaagcg cgagtcatca gctcgcgttg attacgtccc tgccctttgt acacaccgcc 
cgtcgctcct accgattggg tgtgctggtg aagcgttcgg attggcggca gtgcgcggtt 
cgccgctcgc tgcagccgag aagttcgtt
 
配列番号：３
配列の長さ：１７１４
配列の型：ＤＮＡ
生物名：Coccomyxa and its allied species, C
配列：３
agtcatatgc ttgtctcaaa gattaagcca tgcatgtcta agtataaact gctttatact 
gtgaaactgc gaatggctca ttaaatcagt tatagtttat ttgatggtac cttactactc 
ggataaccgt agtaattcta gagctaatac gtgcggaaat cccgacttct ggaagggacg 
tatttattag ataaaaggcc gaccgggctt gcccgaaacg cggtgaatca tgataactcc 
acgaatcgca tggcctcagt gccggcgatg tttcattcaa atttctgccc tatcaacttt 
cgacggtaag gtattggctt accgtggtgg taacgggtga cggaggatta gggttcgatt 
ccggagaggg agcctgagaa acggctacca catccaagga aggcagcagg cgcgcaaatt 
acccaatctt gacacaagga ggtagtgaca ataaataaca ataccggggt ttttcaactc 
tggtaattgg aatgagtaca atctaaaccc cttaacgagg atcaattgga gggcaagtct 
ggtgccagca gccgcggtaa ttccagctcc aatagcgtat atttaagttg ttgcagttaa 
aaagctcgta gttggatttc gggcgggccc ggccggtccg ccttctggtg tgcactgacc 
gggcccgtct tgttgccggg gacgggctcc tgggcttaac tgtccgggac tcggagtcgg 
cgaggttact ttgagtaaat tagagtgttc aaagcaggcc tacgctctga atacattagc 
atggaataac acgataggac tctggcctat cttgttggtc tgtgggaccg gagtaatgat 
taagagggac agtcgggggc attcgtattt cattgtcaga ggtgaaattc ttggatttat 
gaaagacgaa ctactgcgaa agcatttgcc aaggatgttt tcattaatca agaacgaaag 
ttgggggctc gaagacgatt agataccgtc ctagtctcaa ccataaacga tgccgactag 
ggattggcgg gcgttctttt gatgaccccg ccagcacctt atgagaaatc aaagtttttg 
ggttccgggg ggagtatggt cgcaaggctg aaacttaaag gaattgacgg aagggcacca 
ccaggcgtgg agcctgcggc ttaatttgac tcaacacggg aaaacttacc aggtccagac 
atagtgagga ttgacagatt gagagctctt tcttgattct atgggtggtg gtgcatggcc 
gttcttagtt ggtgggttgc cttgtcaggt tgattccggt aacgaacgag acctcagcct 
gctaactagt cacgattggt tcttccagtc ggccgacttc ttagagggac tattggcgac 
tagccaatgg aagtgtgagg caataacagg tctgtgatgc ccttagatgt tctgggccgc 
acgcgcgcta cactgatgca atcaacgagc ctagccttgg ccgacaggtc cgggtaatct 
ttgaaactgc atcgtgatgg ggatagatga ttgcaattat tcatcttcaa cgaggaatgc 
ctagtaagcg cgagtcatca gctcgcgttg attacgtccc tgccctttgt acacaccgcc 
cgtcgctcct accgattggg tgtgctggtg aagcgttcgg attggcggca gtgcgcggtt 
cgccgctcgc tgcagccgag aagttcgtta aacc
 
配列番号：４
配列の長さ：１７５３
配列の型：ＤＮＡ
生物名：Watanabea
clade and its allied species, D
配列：４
gtcctgccag tagtcatatg cttgtctcaa agattaagcc atgcatgtcc aagtatgaac 
tgcttatact gtgaaactgc gaatggctca ttaaatcagt tatagtttat ttgatggtac 
ctggctactc ggatacccgt agtaattcta gagctaatac gtgcgcacat cccgactctg 
tggaagggac gtatttatta gataaaaggc cgaccgggct tgcccgactc gcggcgaatc 
atgataactc cacgaatcgc acggcctccg cgccggcgat gtttcattca aatttctgcc 
ctatcaactt tcgatggtag gatagaggcc taccatggtt ttgacgggtg acggggaatt 
agggttctat gccggagagg gagcctgaga aacggctacc acatccaagg aaggcagcag 
gcgcgcaaat tacccaatcc cgacacgggg aggtagtgac aataaataac aataccgggc 
tcttacgagt ctggtgattg gaatgagaac aatctaaatc ccttaacgag gatcgattgg 
agggcaagtc tggtgccagc agccgcggta attccagctc caatagcgta tatttaagtt 
gttgcagtta aaaagctcgt agtcggatgt cgggcggcct ccgtcggtcc gccgatcggc 
gtgcaccggc ggggcgccgc ctcgctgccg gggacgggcg cctgggcttc actgtcccgg 
gccccggagt cggcgaggtc actttgagta aattagagtg ttcaaagcag gcagccgctc 
tgaatacgcc agcatggaat gacgcgatag gactctgggc ctattccgtc ggtctgtggg 
accggagtaa tgatgaacag ggacggtcgg gggcattcgt atttcgctgt cagaggtgaa 
attcttggat ttgcgaaaga cggacttctg cgaaagcatt tgccaaggat gttttcattg 
atcaagaacg aaagtcgggg gctcgaagac gattagatac cgtcctagtc tcgaccataa 
acgatgccga ctagggatcg gcgggcgttt cttcgacgac cccgccggca cctcacgaga 
aatcaaagtg ttcgggttcc ggggggagta tggtcgcaag gctgaaactt aaaggaattg 
acggaagggc accaccaggc gtggagcctg cggcttaatt tgactcaaca cgggaaaact 
taccaggtcc agacatagcg aggattgaca gattgacagc tctttcttga ttctatgggt 
ggtggtgcat ggccgttctt agttggtggg ttgccttgtc aggttgattc cggtaacgaa 
cgagacctcg gcctgctaaa tagccccggg cggcgttcgc gccggccggc cgagcttctt 
agagggactc tcggcgacta gccgatggaa gtgcgaggca ataacaggtc tgtgatgccc 
ttagatgttc tgggccgcac gcgcgctaca ctgacgcagc caacgggcgc agccttggcc 
gagaggcccg ggtaatccgg cagcctgcgt cgtgacgggg ctagactctt gcaattatca 
gtcttcaacg aggaatgcct agtaggcgcg agtcatcagc tcgcgtcgat tacgtccctg 
ccctttgtac acaccgcccg tcgctcctac cgattggatg tgctggtgaa gcgctcggac 
cggccgcgtc gcgcggttcg ccgcgcctcg cagccgggaa gtccgttgaa ccctcccacc 
taggggaagg aga
 
配列番号：５
配列の長さ：１７６４
配列の型：ＤＮＡ
生物名：Watanabea
clade and its allied species, E
配列：５
tttatcctgc cagtagtcat atgcttgtct caaagactaa gccatgcatg tgtaagtatg 
aatcgctcat acggtgaaac tgcgaatggc tcattaaatc agttatcgtt tatttgatgg 
tactgcccta ctcggataac cgttggaaat cattggctaa tacgtgcgca catcccgact 
ctcggaaggg acgtatttat tagatagaag accgaccggg cctcggcccg agctgcggtg 
aatcatgata acttcacgaa tcgcatggcc ccgcgccggc gatgtttcat tcaaatttct 
gccctatcaa ctttcgatgg taggatagag gcctaccatg gttttgacgg gtgacggagt 
tttcgggaac ggctccggag aggccgcctg aggaacagcg accatttcca aggaaagcag 
caggcgcgca aattacccaa tcccgacacg gggaggtagt gacaataaat aacaataccg 
ggctttttca agtctggtga ttggaatgag tacaatctaa atcccttaac gaggatcaat 
tggagggcaa gtctggtgcc agcagccgcg gtaattccag ctccaatagc gtatatttaa 
gttgttgcag ttaaaaagct cgtagttgga tctagacgag gccccgccgg tccgccgtca 
ggtgtgcact ggcgtgggcc cgccttgctg tcggggacgg gctcctgggc ttcgctgtcc 
gggacccgga gtcgacgagg ttactttgag taaattagag tgttcaaagc aggcctacgc 
tctgaatacg ttagcatgga ataacacgat aggactctgg cctatcctgt tggtctgtgg 
gaccggagta atgattaaga gggacggtcg ggggcattcg tatttcgttg tcagaggtga 
aattcttgga ttttacaaaa agacggactt ctgcgaaagc atttgccaag gatgttttca 
ttaatcaaga acgaaatttg gggggctcga gacgattaga taccgtccta gtctcaaccc 
ataaacgatg ccgactaggg atcggcgggt gttgaatcga tgaccccgcc ggcacctcac 
gagaaatcaa agtctttggg ttccgggggg agtatggttg caaggctgaa acttaaagga 
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aacttaccag gtccagacat agtgaggatt gacagattga cagctctttc ttgattctgt 
gggtggtggt gcatggccgt tcttagttgg tgggttgcct tgtctgccta atcgcgataa 
acggacgaga ccccggcctg ctaaatagcc acggtcggcg tcccgccggc cggcgggctt 
cttagaggga ctatcggcat ttagccggag gaagtgcggg gcaataacag gtctgtgatg 
cccttagatg ttctgggcgg cacgcgcgct acactggtgc gatcagcgag cctagcctcg 
gccgagaggt ccgggtaatc ttgcaaaccg caccgtgatg gggctagact cttgcaatta 
tcagtcttca acgaggaatg cctagtaagc gcgagtcatc agctcgtgct gattacgtcc 
ctgccctttg tacacaccgc ccgtcgctcc taccgattgg atgtgctggt gaagcgttcg 
gactggcggc gcgggcggct cgttcgcctg gcgccgccgg gaagttcgtt gaaccctccc 
acctaaagga aggagaagtc gtaa
  
配列番号：６
配列の長さ：２２０５
配列の型：ＤＮＡ
生物名：Watanabea
clade and its allied species, F
配列：６
gtcatatgct gtctcaaaga ttaagccatg catgtccaag tatgaactgc ttatactgtg 
aaactgcgaa tggctcatta aatcagttat agtttatttg atggtacctg gctactcgga 
tacccgtagt aattctagag ctaatacgtg cgcacatccc gactctgtgg aagggacgta 
tttattagat aaaaggccga ccgggcttgc ccgactcgcg gcgaatcatg ataactccac 
gaatcgcacg gcctccgcgc cggcgatgtt tcattcaaat ttctgcccta tcaactttcg 
atggtaggat agaggcctac catggttttg acgggtgacg gggaattagg gttctatgcc 
ggagagggag cctgagaaac ggctaccaca tccaaggaag gcagcaggcg cgcaaattac 
ccaatcccga cacggggagg tagtgacaat aaataacaat accgggctct tacgagtctg 
gtgattggaa tgagaacaat ctaaatccct taacgaggat cgattggagg gcaagtctgg 
tgccagcagc cgcggtaatt ccagctccaa tagcgtatat ttaagttgtt gcagttaaaa 
agctcgtagt cggatgtcgg gcggcctccg tcggtccgcc gatcggcgtg caccggcggg 
gcgccgcctc gctgccgggg acgggcgcct gggcttcact gtcccgggcc ccggagtcgg 
cgaggtcact ttgagtaaat tagagtgttc aaagcaggca gccgctctga atacgccagc 
atggaatgac gcgataggac tctggcctat tccgtcggtc tgtgggaccg gagtaatgat 
gaacagggac ggtcgggggc attcgtattt cgctgtcaga ggtgaaattc ttggatttgc 
gaaagacgga cttctgcgaa agcatttgcc aaggatgttt tcattgatca agaacgaaag 
tcgggggctc gaagacgatt agataccgtc ctagtctcga ccataaacga tgccgactag 
ggatcggcgg gcgtttcttc gacgaccccg ccggcacctc acgagaaatc aaagtgttcg 
ggttccgggg ggagtatggt cgcaaggctg aaacttaaag gaattgacgg aagggcacca 
ccaggcgttt gaccggctct ggcgcctcag agtggcggcc gcgaggccgc cgctagtggc 
cccgccctcg ggcgggaccg cgacactgtc aaattgcggg gacctcctaa agcttcgggt 
gccaagccca gcccggaaac gggcgggtgg ccggggagag agcccccggg tacggcgaca 
agcccggaga tgcgacaatg gacgacccgc agccaagtcc tgaggggcgc cgcacgccgg 
cgcccacgga tgcagttcac agactaaatg gcagtgggcc cgtcgcctgc gggtggaacc 
ggtcgatggc ggtctgcgtc atccgactga tccgccggcg acgcggctta agatatagtc 
ggccctcagc cgagaggctg acccgtcgga ggaaggctgc cctgagcggc gcctgagagc 
cgggcgggag ggccctcccc acgcgaggag ggccccggac cagcgggagc ctgcggctta 
atttgactca acacgggaaa acttaccagg tccagacata gcgaggattg acagattgac 
agctctttct tgattctatg ggtggtggtg catggccgtt cttagttggt gggttgcctt 
gtcaggttga ttccggtaac gaacgagacc tcggcctgct aaatagcccc gggcggcgtt 
cgcgccggcc ggccgagctt cttagaggga ctctcggcga ctagccgatg gaagtgcgag 
gcaataacag gtctgtgatg cccttagatg ttctgggccg cacgcgcgct acactgacgc 
agccaacggg cgcagccttg gccgagaggc ccgggtaatc cggcagcctg cgtcgtgacg 
gggctagact cttgcaatta tcagtctttc aacgaggaat gcctagtagg cgcgagtcat 
cagctcgcgt cgattacgtc cctgcccttt gtacacaccg cccgtcgctc ctaccgattg 
gatgtgctgg tgaagcgctc ggaccggccg cgtcgcgcgg ttcgccgcgc ctcgcagccg 
ggaagtccgt tgaaccctcc cacctagggg aaggagaagt cgtaa
 

Claims (6)

  1. 　ｐＨが４以下である培養液を用いて、Coccomyxa属およびその近縁生物群、又はWatanabeaクレードに帰属する単細胞緑藻類の微細藻類を屋外の開放系培養システムにおいて培養する微細藻類の培養方法。
  2. 　ｐＨが４以下であり、アンモニア態窒素を含む培養液を用いて、Coccomyxa属およびその近縁生物群、又はPseudococcomyxa属の微細藻類を屋外の開放系培養システムにおいて培養する微細藻類の培養方法。
  3. 　前記微細藻類の培養に用いた前記培養液から前記微細藻類を回収し、回収後の前記培養液を用いて新たな前記微細藻類を屋外の開放系培養システムにおいて培養する請求項１又は２記載の微細藻類の培養方法。
  4. 　請求項１～３のいずれか１項に記載の微細藻類の屋外の開放系での培養方法に使用する開放系培養システム（１）であって、
    　前記培養液における、ｐＨ、ＣＯ2濃度、及び藻体濃度から成るパラメータ群から選ばれる１以上のパラメータを検知する検知部（７、９）と、
    　前記パラメータを所定の範囲内に制御する制御部（１１、１３、１５）と、
    　を備える開放系培養システム。
  5. 　前記１以上のパラメータにｐＨが含まれ、
    　ｐＨにおける前記所定の範囲が、４以下である請求項４に記載の開放系培養システム。
  6. 　前記１以上のパラメータにＣＯ2濃度が含まれ、
    　ＣＯ2濃度における前記所定の範囲が、７．４５～７４．５ｍｇ／Ｌである請求項４又は５に記載の開放系培養システム。
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