WO2014077464A1

WO2014077464A1 - 종간교잡을 통해 육성된 탄저병 저항성 고추 품종 및 이를 선별하기 위한 프라이머 세트

Info

Publication number: WO2014077464A1
Application number: PCT/KR2013/001525
Authority: WO
Inventors: 윤재복; 도재왕; 이준대
Original assignee: (주)고추와 육종
Priority date: 2012-11-19
Filing date: 2013-02-26
Publication date: 2014-05-22
Also published as: KR101266193B1

Abstract

본 발명은 탄저병 저항성 고추 품종 및 탄저병 저항성 고추 품종을 선별하기 위한 프라이머 세트에 관한 것으로, 본 발명은 탄저병 (anthracnose)에 저항성을 갖는 일대잡종 고추 품종 (5140)을 제공하며, 본 발명에서 개발한 탄저병 저항성 부계 (2602-11-3) 특이적 DNA 표지들은 본 발명의 탄저병 저항성 일대잡종 고추 품종 (5140) 및 이를 이용하여 육성한 탄저병 저항성을 갖는 새로운 계통도 판별할 수 있어 본 발명의 품종을 보호하는데 효과적으로 이용될 수 있다.

Description

종간교잡을 통해 육성된 탄저병 저항성 고추 품종 및 이를 선별하기 위한 프라이머 세트

본 발명은 종간교잡을 통해 육성된 탄저병 저항성 고추 품종 및 이를 선별하기 위한 프라이머 세트에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 웅성 불임인 모계 고추 (Capsicum annuum) 식물체와 탄저병 저항성이 우수한 부계 고추 식물체를 교배하여 수득된 탄저병 저항성 일대잡종 F1 고추 품종, 상기 탄저병 저항성 고추 품종의 열매 및 종자, 이병성 계통인 캡시쿰 애눔 (Capsicum annuum) SP26과 탄저병 저항성 계통인 캡시쿰 바카툼 (Capsicum baccatum) PBC81을 교배하여 탄저병 저항성이 우수한 종간 잡종 고추 식물체 (2602-11-3)를 수득하는 단계 및 웅성 불임인 고추 식물체 (GM6)와 탄저병 저항성이 우수한 고추 식물체 (2602-11-3)를 교배하는 단계를 포함하는 탄저병 저항성 고추 품종의 육종방법, 상기 방법으로 수득된 탄저병 저항성 고추 품종, 열매, 종자, 화분, 배주 및 배, 서열번호 1 내지 5의 염기서열을 포함하는 탄저병에 대해 저항성을 갖는 본 발명의 고추 품종을 선별하기 위한 조성물, 서열번호 1 내지 5의 염기서열을 증폭하기 위한 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트, 상기 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트 및 증폭 반응을 수행하기 위한 시약을 포함하는 탄저병에 대해 저항성을 갖는 본 발명의 고추 품종을 선별하기 위한 키트 및 상기 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트를 이용하여 탄저병에 대해 저항성을 갖는 본 발명의 고추 품종을 선별하기 위한 방법에 관한 것이다.

고추 탄저병은 우리나라를 비롯한 동남아시아 몬순 기후대의 거의 모든 나라에서 가장 피해가 큰 병해 중의 하나다. 탄저병 병원균은 콜레토트리쿰 속 (genus Colletotrichum)에 속하며 우리나라에서는 콜레토트리쿰 아쿠타툼 (C. acutatum)이 우점하여 발병하고, 인도, 인도네시아, 태국 등은 콜레토트리쿰 아쿠타툼, 콜레토트리쿰 글로에오스포리오이데스 (C. gloeosporioides) 및 콜레토트리쿰 캡시시 (C. capsici)에 의해 발병한다. 우리나라 여름철 장마기와 동남아시아 우기에 많이 발생하며, 주로 과실이 썩어 수량 감소는 물론 품질을 떨어뜨리는 주된 요인이 되고 있다. 탄저병에 의한 우리나라의 연간 피해액은 약 1천억 원으로 추정되고 있으며, 이는 노지 재배 총 생산액의 10% 이상을 차지하는 막대한 양이다. 또한 중국 남부지역, 인도, 인도네시아, 태국 및 대만 등에서 탄저병에 의한 피해 규모가 점차 증가하고 있는 추세이다.

지금까지의 탄저병 방제 대책으로는 살균제 살포에 의한 화학적 방제가 주로 이루어지고 있으나, 재배기간 중 잦은 강우로 인한 약제 방제 시기 선정의 어려움과 새로운 살균제 저항성 병원균의 출현 등의 이유로 인하여 방제 효과가 그리 높지 않은 것이 현실이다. 또한, 지속적인 약제 살포에 의한 화학적 방제의 경우 변종 병원균 발생 및 우점 병원균 변화로 인하여 그 실효성이 매우 의심되고 있다. 따라서 경제적이고 효과적이며 환경친화적인 방법으로서 병 저항성 품종을 육성하여 재배하는 것이 최선의 방제 대책이 될 수 있을 것이다.

병원성이 강한 콜레토트리쿰 아쿠타툼에 의해 발생하는 탄저병에 대하여, 아직까지는 국내 재배 종 고추인 캡시쿰 애눔 (Capsicum annuum)에서 저항성 유전자원이 밝혀지지 않았으며, 캡시쿰 애눔의 근연종으로 남미 지역에서 재배되는 캡시쿰 바카툼 (Capsicum baccatum) 종에 속하는 일부 계통이 탄저병 저항성을 갖는 것이 확인되었다. 그러나 전 세계적으로 탄저병 저항성 계통 및 품종이 상업적으로 육성된 예는 없다. 이는 저항성 품종 육종의 필수적인 전제 조건인 정확하고 안정적인 검정 방법의 부재 및 상업적으로 사용 가능한 고도의 탄저병 저항성 유전자원의 부재 등에 따른 실질적인 저항성 품종 육종 노력의 부재를 들 수 있다.

한편, 한국등록특허 제0504172호에는 '종간 교잡에 의한 잡종 고추의 육종 방법'이 개시되어 있고, 한국등록특허 제1046528호에는 '캡시쿰 애눔 (Capsicum annuum)과 캡시쿰 바카툼 (C. baccatum) 간 종간 교잡을 통하여 육성된 고추 탄저병 저항성 'P＆B-AR3' 식물 계통'이 개시되어 있다. 그러나 본 발명에서와 같이, 탄저병 저항성 고추 품종 및 탄저병 저항성 고추 품종을 선별하기 위한 프라이머 세트에 대해서는 개시된 바가 없다.

본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로서, 웅성 불임인 모계 고추 (Capsicum annuum) 식물체 (GM6)와 탄저병 저항성이 우수한 부계 고추 식물체 (2602-11-3)를 교배하여 탄저병 (anthracnose) 저항성을 갖는 고추 품종 (5140)을 개발하였고, 상기 탄저병 저항성을 갖는 고추 품종 (5140)을 선별할 수 있는 5개 마커 유전자 및 프라이머 세트를 개발함으로써, 본 발명을 완성하였다.

상기 과제를 해결하기 위해, 본 발명은 웅성 불임인 모계 고추 (Capsicum annuum) 식물체와 탄저병 저항성이 우수한 부계 고추 식물체를 교배하여 수득된 탄저병 저항성 일대잡종 F1 고추 품종, 이의 열매 및 종자를 제공한다.

또한, 본 발명은

(a) 이병성 계통인 캡시쿰 애눔 (Capsicum annuum) SP26을 모본으로 하고, 탄저병 저항성 계통인 캡시쿰 바카툼 (Capsicum baccatum) PBC81을 부본으로 하여 교배하는 단계;

(b) 상기 (a) 단계의 교배에 의해 생산된 배주 (ovule)를 배양하여 배를 회생 (embryo rescue)한 후, 종간잡종 F1 식물체를 수득하는 단계;

(c) 상기 F1 식물체 (모본)와 상기 캡시쿰 애눔 SP26 (부본)의 여교잡 (F1 x SP6)을 수행하여 탄저병 저항성 종간잡종 BC1F1 식물체를 수득하는 단계;

(d) 원예적 형질이 우수한 5537 계통 (모본)과 상기 BC1F1 식물체 (부본)의 교배로 얻은 탄저병 저항성 식물체에서 탄저병 저항성 개체 선발과 자식을 반복하여 탄저병 저항성이 우수한 개체 (2602-11-3)를 선발하는 단계; 및

(e) 웅성 불임인 고추 (Capsicum annuum) 식물체 (GM6)를 모본으로 하고, 최종적으로 선발된 상기 탄저병 저항성 고추 식물체 (2602-11-3)를 부본으로 하여 교배하는 단계를 포함하는 탄저병 저항성 고추품종 (5140)의 육종방법을 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 방법으로 수득된 탄저병 저항성 고추 품종, 열매, 종자, 화분 (pollen), 배주 (ovule) 및 배 (embryo)를 제공한다.

또한, 본 발명은 서열번호 1 내지 5의 염기서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 염기서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 탄저병에 대해 저항성을 갖는 본 발명의 고추 품종을 선별하기 위한 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 서열번호 1 내지 5의 염기서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 염기서열을 증폭하기 위한 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트를 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트 및 증폭 반응을 수행하기 위한 시약을 포함하는, 탄저병에 대해 저항성을 갖는 본 발명의 고추 품종을 선별하기 위한 키트를 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트를 이용하여 탄저병에 대해 저항성을 갖는 본 발명의 고추 품종을 선별하기 위한 방법을 제공한다.

본 발명에서 개발된 탄저병 저항성 고추 품종 (5140)을 재배하면 수량 감소에 따른 피해 및 탄저병 방제용 화학약품의 사용을 줄일 수 있어 생산 농가는 생산비 및 노동력을 절감할 수 있고, 소비자는 안전한 먹거리를 제공받을 수 있다. 또한, 우리나라 고추 종자산업 규모 확대에 기여할 수 있고, 탄저병 피해가 증가하고 있는 여러 나라에 탄저병 저항성 품종을 수출함으로써 우리나라 종자산업의 국제 경쟁력을 높이는데 일조할 수 있을 것으로 기대된다.

도 1은 본 발명의 탄저병 저항성 고추 품종을 생산하기 위해 부계로 사용한 2602-11-3의 포장 재배 사진이다.

도 2는 웅성 불임인 모계 고추 식물체 (GM6)와 탄저병 저항성이 우수한 부계 고추 식물체 (2602-11-3)를 교배하여 얻은 탄저병 (anthracnose) 저항성을 갖는 고추 품종 (5140)의 포장 재배 사진이다.

도 3은 탄저병 저항성 품종의 품종 특이적 DNA 마커 5개에 대한 HRM 분석 결과를 나타낸다. 5개의 DNA 마커의 HRM 분석 결과는 각각 244687-HRM(A), 570374-HRM(B), 38820-HRM(C), 284900-HRM(D) 및 Anth12-HRM(E)이다. R (파란색)은 탄저병 저항성 부계 (2602-11-3)를 가리키고, H (녹색)는 탄저병 저항성 일대잡종 품종(5140)을 의미하며, S (빨간색)는 탄저병 감수성 웅성 불임 모계 (GM6) 및 일반 상용 고추 품종 53개 (표 2)를 나타낸다.

본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 웅성 불임인 모계 고추 (Capsicum annuum) 식물체와 탄저병 저항성이 우수한 부계 고추 식물체를 교배하여 수득된 탄저병 저항성 일대잡종 F1 고추 품종을 제공한다.

본 발명의 일 구현 예에 따른 탄저병 저항성 고추 품종은 수탁번호 KCTC 12285BP의 5140 품종일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 상기 고추 종자를 한국생명공학연구원에 2012년 10월 10일자로 기탁하였다 (기탁번호: KCTC 12285BP).

본 발명의 일 구현 예에 따른 탄저병 저항성 일대잡종 F1 고추 품종을 수득하기 위해 부계로 사용한 고추 식물체는 서열번호 1 내지 서열번호 5의 염기서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 탄저병 저항성 마커 유전자를 포함할 수 있으며, 바람직하게는 서열번호 1 내지 서열번호 5의 염기서열로 이루어진 탄저병 저항성 마커 유전자를 포함하는 2602-11-3 품종일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 또한, 모계로 사용한 고추 식물체는 캡시쿰 애눔 (Capsicum annuum)일 수 있으며, 바람직하게는 웅성 불임 (genic male sterility; GMS)인 고추 식물체일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 일 구현 예에 따른 탄저병 저항성 일대잡종 F1 고추 품종은 서열번호 1 내지 서열번호 5의 염기서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 염기서열을 포함하는 탄저병 저항성 마커 유전자를 포함할 수 있으며, 바람직하게는 서열번호 1 내지 서열번호 5의 염기서열로 이루어진 탄저병 저항성 마커 유전자를 포함하는 5140 품종일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

서열번호 1 내지 5로 나타낸 염기서열은 본 발명의 바람직한 실시예로서 제시되는 탄저병 저항성 고추 품종 식별용 마커 유전자의 염기서열을 나타낸다. 서열번호 1 내지 5로 나타낸 본 발명에 따른 탄저병 저항성 고추 품종 식별용 마커는 본 발명의 탄저병 저항성 고추 품종 유래의 고추 품종을 식별하기 위해 고안되었다. 상기 본 발명에 따른 고추 품종 식별용 마커 각각은 고추의 염색체에 분포하는 COSII (conserved ortholog set II) 마커를 참고하여 일정 부위를 PCR로 증폭한 후, 이 부위의 염기서열을 분석하여 캡시쿰 애눔과 캡시쿰 바카툼 사이에 존재하는 SNP 또는 indel 위치를 찾아내고, 이 위치를 이용하여 품종별 식별이 가능한 대립유전자 특이 마커를 개발한 것이다. 상기 마커는 서열번호 1 내지 5의 염기서열의 부가, 결실 또는 치환된 서열도 포함할 수 있다.

본 발명의 일 구현 예에 따른 탄저병 저항성 고추 품종은 하배축에 안토시아닌 착색이 있고 식물체 초형은 직립, 식물체 줄기의 솜털은 없거나 매우 적고 잎은 진한 녹색, 꽃자루의 자세는 약간 하향이며 꽃 색은 백색, 과실 성숙 전의 색은 녹색이고 과실의 길이는 중간, 과실의 가로 단면 모양은 원형, 과실표면의 질감은 매끈하고 성숙기 과실의 색은 빨간색, 과실 꼭지에 함몰이 없으며 끝의 모양은 뾰족함, 과실 심실수는 2개이고 속살의 두께가 얇음, 꽃받침의 모양은 노출형이고 과실 태좌 부분에 매운맛이 없음 및 탄저병에 대한 저항성 등의 특성을 모두 가질 수 있으나, 탄저병 저항성 고추 품종의 특성이 이에 제한되는 것은 아니다.

또한, 본 발명은 상기 탄저병 저항성 고추 품종의 열매 또는 종자를 제공한다.

또한, 본 발명은

(e) 웅성 불임인 고추 (Capsicum annuum) 식물체 (GM6)를 모본으로 하고, 최종적으로 선발된 상기 탄저병 저항성 고추 식물체 (2602-11-3)를 부본으로 하여 교배하는 단계를 포함하는 탄저병 저항성 고추 품종 (5140)의 육종방법을 제공한다.

본 발명에서 캡시쿰 애눔과 캡시쿰 바카툼을 교배하여 종간잡종 식물체를 수득하기 위해 사용한 배주 배양 방법은 주로 같은 속내의 종간 교잡시에 자주 발생하는 배의 생육 정지 현상을 피하기 위해 사용되는 배양 방법이며, 수정 직후 배의 퇴화가 일어나기 전에 배주를 꺼내어 인공배지에서 배양하는 방법을 말한다.

본 발명에서 사용된 고추 계통의 원예적 형질은 국립종자원의 품종보호공보에 실려있는 원예적 특성 평가에 따른 형질을 말한다. 원예적 형질은 육안으로 간략하게 조사될 수 있으며, 하배축의 안토시아닌 착색 정도 및 식물체 초형, 식물체 줄기의 솜털 유무 및 잎의 녹색 정도, 꽃자루의 방향 및 꽃 색, 성숙 전 과실의 녹과색 및 성숙 과색, 과실의 가로 단면 모양, 과실 표면의 질감 및 과실의 길이, 과실 꼭지의 함몰 유무 및 모양, 과실의 심실 수 및 속살의 두께 정도, 꽃 받침의 모양 및 과실의 매운맛 정도 등이 조사될 수 있다.

본 발명의 일 구현 예에 따른 육종방법에서 상기 탄저병 저항성 고추 품종 (5140)은 수탁번호 KCTC 12285BP일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 일 구현 예에 따른 육종방법에서 상기 탄저병 저항성 고추 품종을 수득하기 위해 부본으로 사용한 고추 식물체는 서열번호 1 내지 서열번호 5의 염기서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 탄저병 저항성 마커 유전자를 포함할 수 있으며, 바람직하게는 서열번호 1 내지 서열번호 5의 염기서열로 이루어진 탄저병 저항성 마커 유전자를 포함하는 2602-11-3 품종일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 일 구현 예에 따른 육종방법에서 상기 탄저병 저항성 고추 품종은 서열번호 1 내지 서열번호 5의 염기서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 염기서열을 포함하는 탄저병 저항성 마커 유전자를 포함할 수 있으며, 바람직하게는 서열번호 1 내지 서열번호 5의 염기서열로 이루어진 탄저병 저항성 마커 유전자를 포함하는 5140 품종일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 일 구현 예에 따른 육종방법에서 상기 탄저병 저항성 고추 품종은 하배축에 안토시아닌 착색이 있고 식물체 초형은 직립, 식물체 줄기의 솜털은 없거나 매우 적고 잎은 진한 녹색, 꽃자루의 자세는 약간 하향이며 꽃 색은 백색, 과실 성숙 전의 색은 녹색이고 과실의 길이는 중간, 과실의 가로 단면 모양은 원형, 과실표면의 질감은 매끈하고 성숙기 과실의 색은 빨간색, 과실 꼭지에 함몰이 없으며 끝의 모양은 뾰족함, 과실 심실수는 2개이고 속살의 두께가 얇음, 꽃받침의 모양은 노출형이고 과실 태좌 부분에 매운맛이 없음 및 탄저병에 대한 저항성 등의 특성을 모두 가질 수 있으나, 탄저병 저항성 고추 품종의 특성이 이에 제한되는 것은 아니다.

또한, 본 발명은 상기 방법으로 수득된 탄저병 저항성 고추 품종, 이의 열매 또는 종자를 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 방법으로 수득된 탄저병 저항성 고추 품종의 화분 (pollen), 배주 (ovule) 또는 배 (embryo)인 식물의 일부를 제공한다.

또한, 본 발명은 서열번호 1 내지 5의 염기서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 염기서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 탄저병에 대한 저항성을 갖는 본 발명의 고추 품종을 선별하기 위한 조성물을 제공한다.

본 발명의 일 구현 예에 있어서, 본 발명의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트는 바람직하게는 탄저병에 대해 저항성을 갖는 본 발명의 고추 품종을 선별하기 위한 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트로, 서열번호 6 및 7의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트; 서열번호 8 및 9의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트; 서열번호 10 및 11의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트; 서열번호 12 및 13의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트; 및 서열번호 14 및 15의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 프라이머 세트를 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

상기 올리고뉴클레오티드는 바람직하게는 서열번호 6의 서열 내의 16개 이상, 17개 이상, 18개 이상, 19개 이상, 20개 이상, 21개 이상, 22개 이상, 23개 이상, 24개 이상의 연속 뉴클레오티드의 절편으로 이루어진 올리고뉴클레오티드일 수 있다. 또한, 상기 올리고뉴클레오티드는 바람직하게는 서열번호 7의 서열 내의 16개 이상, 17개 이상, 18개 이상, 19개 이상, 20개 이상, 21개 이상의 연속 뉴클레오티드의 절편으로 이루어진 올리고뉴클레오티드일 수 있다.

상기 올리고뉴클레오티드는 바람직하게는 서열번호 8의 서열 내의 16개 이상, 17개 이상, 18개 이상, 19개 이상, 20개 이상, 21개 이상, 22개 이상, 23개 이상, 24개 이상의 연속 뉴클레오티드의 절편으로 이루어진 올리고뉴클레오티드일 수 있다. 또한, 상기 올리고뉴클레오티드는 바람직하게는 서열번호 9의 서열 내의 16개 이상, 17개 이상, 18개 이상, 19개 이상, 20개 이상, 21개 이상, 22개 이상, 23개 이상의 연속 뉴클레오티드의 절편으로 이루어진 올리고뉴클레오티드일 수 있다.

상기 올리고뉴클레오티드는 바람직하게는 서열번호 10의 서열 내의 16개 이상, 17개 이상, 18개 이상, 19개 이상, 20개 이상, 21개 이상, 22개 이상, 23개 이상, 24개 이상, 25개 이상, 26개 이상의 연속 뉴클레오티드의 절편으로 이루어진 올리고뉴클레오티드일 수 있다. 또한, 상기 올리고뉴클레오티드는 바람직하게는 서열번호 11의 서열 내의 16개 이상, 17개 이상, 18개 이상, 19개 이상, 20개 이상, 21개 이상, 22개 이상, 23개 이상의 연속 뉴클레오티드의 절편으로 이루어진 올리고뉴클레오티드일 수 있다.

상기 올리고뉴클레오티드는 바람직하게는 서열번호 12의 서열 내의 16개 이상, 17개 이상, 18개 이상, 19개 이상, 20개 이상, 21개 이상, 22개 이상의 연속 뉴클레오티드의 절편으로 이루어진 올리고뉴클레오티드일 수 있다. 또한, 상기 올리고뉴클레오티드는 바람직하게는 서열번호 13의 서열 내의 16개 이상, 17개 이상, 18개 이상, 19개 이상, 20개 이상, 21개 이상, 22개 이상, 23개 이상의 연속 뉴클레오티드의 절편으로 이루어진 올리고뉴클레오티드일 수 있다.

상기 올리고뉴클레오티드는 바람직하게는 서열번호 14의 서열 내의 16개 이상, 17개 이상, 18개 이상, 19개 이상, 20개 이상, 21개 이상, 22개 이상, 23개 이상의 연속 뉴클레오티드의 절편으로 이루어진 올리고뉴클레오티드일 수 있다. 또한, 상기 올리고뉴클레오티드는 바람직하게는 서열번호 15의 서열 내의 16개 이상, 17개 이상, 18개 이상, 19개 이상, 20개 이상, 21개 이상의 연속 뉴클레오티드의 절편으로 이루어진 올리고뉴클레오티드일 수 있다.

본 발명에 있어서, "프라이머"는 카피하려는 핵산 가닥에 상보적인 단일 가닥 올리고뉴클레오티드 서열을 말하며, 프라이머 연장 산물의 합성을 위한 개시점으로서 작용할 수 있다. 상기 프라이머의 길이 및 서열은 연장 산물의 합성을 시작하도록 허용해야 한다. 프라이머의 구체적인 길이 및 서열은 요구되는 DNA 또는 RNA 표적의 복합도 (complexity) 뿐만 아니라 온도 및 이온 강도와 같은 프라이머 이용 조건에 의존할 것이다.

본 명세서에 있어서, 프라이머로서 이용된 올리고뉴클레오티드는 또한 뉴클레오티드 유사체 (analogue), 예를 들면, 포스포로티오에이트 (phosphorothioate), 알킬포스포로티오에이트 (alkylphosphorothioate) 또는 펩티드 핵산 (peptide nucleic acid)을 포함할 수 있거나 또는 삽입 물질 (intercalating agent)을 포함할 수 있다.

본 발명의 키트에서, 상기 증폭 반응을 수행하기 위한 시약은 DNA 폴리머라제, dNTPs, 버퍼 등을 포함할 수 있다. 또한, 본 발명의 키트는 증폭된 산물을 분석하기 위해 HRM (High resolution melting) 분석 또는 염기서열 결정에 필요한 시약을 추가로 포함할 수 있다. 또한, 본 발명의 키트는 최적의 반응 수행 조건을 기재한 사용자 안내서를 추가로 포함할 수 있다. 안내서는 키트 사용법, 예를 들면, PCR 완충액 제조 방법, 제시되는 반응 조건 등을 설명하는 인쇄물이다. 안내서는 팜플렛 또는 전단지 형태의 안내 책자, 키트에 부착된 라벨, 및 키트를 포함하는 패키지의 표면상에 설명을 포함한다. 또한, 안내서는 인터넷과 같이 전기 매체를 통해 공개되거나 제공되는 정보를 포함한다.

또한, 본 발명은

고추 시료에서 게놈 DNA를 분리하는 단계;

상기 분리된 게놈 DNA를 주형으로 하고, 상기 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트를 이용하여 증폭 반응을 수행하여 표적 서열을 증폭하는 단계; 및

상기 증폭 산물을 분석하는 단계를 포함하는, 탄저병에 대해 저항성을 갖는 본 발명의 고추 품종을 선별하기 위한 방법을 제공한다.

본 발명의 방법은 고추 시료에서 게놈 DNA를 분리하는 단계를 포함한다. 상기 시료에서 게놈 DNA를 분리하는 방법은 당업계에 공지된 방법을 이용할 수 있으며, 예를 들면, CTAB 방법을 이용할 수도 있고, wizard prep 키트 (Promega)를 이용할 수도 있다. 상기 분리된 게놈 DNA를 주형으로 하고, 본 발명의 일 실시예에 따른 하나 이상의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트를 프라이머로 이용하여 증폭 반응을 수행하여 표적 서열을 증폭할 수 있다. 표적 핵산을 증폭하는 방법은 중합효소연쇄반응 (PCR), 리가아제 연쇄반응 (ligase chain reaction), 핵산 서열 기재 증폭 (nucleic acid sequence-based amplification), 전사 기재 증폭 시스템 (transcription-based amplification system), 가닥 치환 증폭 (strand displacement amplification) 또는 Qβ 복제효소 (replicase)를 통한 증폭 또는 당업계에 알려진 핵산 분자를 증폭하기 위한 임의의 기타 적당한 방법이 있다. 이 중에서, PCR이란 중합효소를 이용하여 표적 핵산에 특이적으로 결합하는 프라이머 쌍으로부터 표적 핵산을 증폭하는 방법이다. 이러한 PCR 방법은 당업계에 잘 알려져 있으며, 상업적으로 이용가능한 키트를 이용할 수도 있다.

본 발명의 일 구현 예에 있어서, 상기 증폭된 표적 서열은 검출가능한 표지 물질로 표지될 수 있다. 상기 표지 물질은 바람직하게는 형광을 발하는 물질일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 바람직하게는, 상기 표지 물질은 Cy-5 또는 Cy-3이다. 표적 서열의 증폭시 프라이머의 5'-말단에 Cy-5 또는 Cy-3를 표지하여 PCR을 수행하면 표적 서열이 검출가능한 형광 표지 물질로 표지될 수 있다. 표적 서열을 증폭하기 위해 이용된 하나 이상의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트는 상기에 기재된 바와 같다.

본 발명의 일 구현 예에 있어서, 탄저병에 대해 저항성을 갖는 본 발명의 고추 품종을 선별하기 위한 방법은 상기 증폭 산물을 분석하는 단계를 포함하며, 상기 증폭 산물의 분석은 SNP 유전형분석 (single nucleotide polymorphism genotyping) 방법을 이용할 수 있으며, 바람직하게는 HRM (High resolution melting) 분석 또는 염기서열 결정 (sequencing)을 통해 수행될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.

실시예 1. 탄저병 저항성 고추 품종 육종

남미 지역에서 재배되는 캡시쿰 애눔 (Capsicum annuum)의 근연종인 캡시쿰 바카툼 (Capsicum baccatum) PBC81에 존재하는 고추 탄저병 저항성을 국내 재배종 (C. annuum) SP26으로 옮기기 위하여 이들 간의 종간 교잡을 수행하였다. 그러나 종간 교잡 불화합성 (interspecific incompatability)으로 인하여 정상적인 종자를 얻을 수 없었다. 이를 극복하기 위해 캡시쿰 바카툼과 교배가 잘 되는 캡시쿰 애눔 계통을 탐색하였고, 그 결과, 필리핀 및 멕시코에서 재배되는 캡시쿰 애눔 계통에서 부분 화합성이 있는 것을 확인하였다. 하지만 이것도 정상적인 종자까지 발달하지 못하고 중간에 퇴화되어, 이를 극복하기 위하여 배주 배양 (ovule culture)을 통한 배 회생 (embryo rescue) 방법을 사용하였다.

캡시쿰 바카툼 PBC81과 캡시쿰 애눔 SP26의 수분 후 발생한 배주를 꺼내 인공 배지에서 배양하여 정상적인 F1 식물체를 얻었다. 종간 교잡 F1 식물체는 웅성 불임이어서 캡시쿰 애눔 교배친의 화분으로 인공 교잡을 수행하여 과실당 4~5개의 종자를 얻을 수 있었으며, 인공 교잡을 통해 최종적으로 총 250여 개의 BC1F1 종자를 얻었다. 얻어진 최초의 BC₁F₁ 분리집단 중에서 2/3 이상의 식물체가 웅성 불임을 나타내어 정상적인 착과가 이루어지지 않았다. 따라서 착과가 양호한 88개체를 선발하였으며, 이들의 과실을 대상으로 탄저병 저항성 검정을 수행한 결과, 일부 개체에서 고도의 저항성을 보이면서 잡종 불임 문제도 나타나지 않는 것을 확인할 수 있었다. 또한 선발된 탄저병 저항성 개체를 사용하여 자식 후대를 육성하고, 매 세대마다 저항성 검정을 통해 고도의 저항성 개체를 지속적으로 선발하여 고정시킴으로써 탄저병 저항성 품종 (2602-11-3)을 육성하였다.

실시예 2. 탄저병 저항성 고추 품종 육종

탄저병 저항성 고추 품종을 육성하기 위해, 캡시쿰 바카툼 PBC81과 캡시쿰 애눔 SP26의 종간 교잡으로 얻은 탄저병 저항성 고추 식물체 2602-11-3을 부본으로 하고, 웅성 불임인 고추 식물체 (GM6)를 모본으로 하여 교배를 수행하였다. 부본으로 사용한 2602-11-3 계통은 탄저병 저항성 주동유전자 (major gene)를 동형접합형 (RR)으로 가지고 있고, 담배 모자이크 바이러스(TMV, Tobacco Mosaic Virus)에 대한 저항성 유전자도 L ₃/L ₃로 가지고 있다 (도 1). 모본으로 사용한 GM6 계통은 웅성 불임 (GMS) 유전자 중에서 ms _k에 의한 웅성 불임 개체로 유전자형이 ms _k/ms _k이고, 역병 저항성 주동유전자를 동형접합형 (RR)으로 가지고 있다. 상기 두 계통을 교배하여 얻은 탄저병 저항성 일대잡종 (F1) 품종은 5140 (수탁번호 KCTC 12285BP)으로 명명하였으며, 식물체의 주요 특성은 다음과 같다. 하배축에 안토시아닌 착색이 있고 식물체 초형은 직립형이다. 식물체 줄기의 솜털은 약한 편이고 잎 색은 약간 짙으며, 꽃자루의 자세는 약간 하향이고 꽃의 색은 백색이다. 성숙 전 과실의 색은 녹색이고 과실 길이는 중간이다. 과실의 가로 단면 모양은 원형이고, 과실 표면의 질감은 매끈하고 성숙기의 색은 빨간색이다. 과실 꼭지의 함몰은 없으며 끝의 모양은 약간 뾰족하다. 과실의 심실 수는 2개이고 속살의 두께는 얇다. 꽃받침의 모양은 노출형이고 태좌에는 매운맛이 없다. 그리고 탄저병에 저항성이 있다 (도 2).

실시예 3. 탄저병 저항성 마커 유전자 선발

탄저병 저항성 일대잡종 고추 품종 (5140)의 탄저병 저항성 특이적 DNA 마커를 이용하여 본 발명의 탄저병 저항성 품종을 판별하기 위하여, 고추의 DNA를 추출하여 마커 유전자를 선발하였다.

DNA 추출은 어린 고추 잎 0.1g을 1.5㎖ 튜브에 채취하여 지름 3mm 크기의 구슬 2개를 넣고, 550㎕의 DNA 추출 버퍼 (50mM Tris-HCl, 20mM EDTA, 1.4M 염화나트륨(NaCl), 0.5% SDS), 0.05g PVP (polyvinylpyrrolidone) 및 12.5㎕의 β-머캅토에탄올 (β-mercaptoethanol)을 넣어 잘 섞은 다음, TissueLyser (Qiagen cat.#85220)를 사용하여 잎을 완전히 파쇄하고, 65℃ 건조기에서 30분간 반응시켰다. 반응 후 동량의 클로로포름:이소아밀알콜 (24:1)을 첨가하고 충분히 섞은 후 12,000rpm으로 15분간 원심분리하였다. 상등액을 새로운 1.5㎖ 튜브에 옮기고 2배의 에탄올을 첨가하여 DNA를 침전시켰다. 침전된 DNA는 70% 에탄올로 두 번 씻어낸 후, 65℃ 건조기에 넣어 말리고 멸균된 3차 증류수 (TDW) 또는 TE 버퍼를 넣어 DNA를 녹였다. TE 버퍼에 녹인 DNA에 RNase 1㎕를 넣고 37℃에 1시간 동안 반응시켰다. DNA 농도는 DNA 형광계 (fluorometer, Hoefer Co.)를 이용하여 10ng/㎕ 농도로 맞추었다.

탄저병 저항성 계통 특이적 마커를 개발하기 위해, 3개의 식물재료 (PBC81, 2601-11-3 및 NB1)에 대해 대량 염기서열 분석 (NGS sequencing)을 수행하였다. PBC81은 탄저병 저항성 원 유전자원으로 캡시쿰 바카툼 (Capsicum baccatum) 종에 속하며, 2601-11-3은 탄저병 저항성 육성 계통으로 PBC81과 교배한 후대에서 탄저병 저항성을 갖는 식물체를 선발한 것이다. NB1은 국내 재배종 (Capsicum annuum)으로 탄저병 이병성 계통이다. 분석된 총 염기서열 길이는 PBC81이 33.6Gbp, 2601-11-3이 35.6Gbp, NB1이 4.6Gbp였다. 이 염기서열들을 분석하여, 2601-11-3의 염기서열 중 PBC81에서 유래한 염기서열만 선발하였다. 그 결과, 12,729개의 고추 컨티그 (contig)가 PBC81에서 유래한 염기서열을 갖는 것으로 분석되었다. 그 중에서 COSII (conserved ortholog set II) 마커 염기서열을 분석하여 고추 유전자지도 위의 위치정보를 확인하였고, 142개의 고추 컨티그를 선발할 수 있었다. 이 중에서 8개의 컨티그 염기서열 (244687-AN12, 570374-AN12, 38820-AN4, 284900-AN4, 1334453-AN4, 1335025-AN11, 45609-AN11 및 Anth12)에 대한 SNP를 분석하여 HRM 분자 마커를 개발하였으며, 최종적으로 탄저병 저항성 계통 특이적인 5개의 HRM 분자 마커 (244687-AN12 (서열번호 1), 570374-AN12 (서열번호 2), 38820-AN4 (서열번호 3), 284900-AN4 (서열번호 4) 및 Anth12 (서열번호 5))를 선발하였다.

실시예 3. 탄저병 저항성 마커 유전자의 HRM 분석

추출한 고추 DNA의 HRM (High Resolution Melting) 분석은 표 1에 제시된 5개 프라이머 쌍을 이용하여 수행되었다. 각각의 프라이머 쌍을 이용하여 PCR 증폭 [95℃ 3분 전변성(pre-denaturation); 95℃ 10초 변성(denaturation); 60℃ 20초 프라이머접합(annealing); 40회 반복]을 수행한 후, 95℃ 10초 동안 유지한 다음 65℃에서 90℃까지 0.2℃씩 온도를 높여가며 각 온도에서 5초 동안 유지하면서 형광량을 측정하였다.

표 1

HRM 분석 결과 그래프는 도 3에 나타내었다. 5개의 DNA 마커 (244687-AN12, 570374-AN12, 38820-AN4, 284900-AN4 및 Anth12)에 대한 프라이머를 이용한 HRM 분석 결과는 각각 244687-HRM(A), 570374-HRM(B), 38820-HRM(C), 284900-HRM(D) 및 Anth12-HRM(E)이다. 5개의 DNA 마커가 나타내는 R(파란색)은 모든 경우에서 탄저병 저항성 부계 (2602-11-3)를 가리키며, 본 발명에 사용한 53개의 상용 품종 (표 2) 및 모계 (GM6)와 다르게 나타난다. 즉, 5개의 DNA 마커는 탄저병 저항성 부계 특이 DNA 마커라고 할 수 있다. H(녹색)는 탄저병 저항성 일대잡종 품종 (5140)을 나타내는데, 이형접합형 (heterozygous) 상태를 의미한다. 반면에 S(빨간색)는 탄저병 감수성 웅성불임 모계 (GM6) 및 일반 상용 고추 품종 53개를 나타낸다 (도 3). 특히 DNA 마커 'Anth12'은 탄저병 저항성 주동유전자와 연관된 것으로 본 발명의 품종에 탄저병 저항성이 있음을 의미한다 (표 2).

본 발명의 탄저병 저항성 계통 특이적 DNA 마커들은 품종 보호 측면에서 매우 중요하며, 본 발명에서 개발한 탄저병 저항성 일대잡종 품종 (5140)을 이용하여 탄저병 저항성을 갖는 새로운 계통 육성을 했을 때, 이를 확인하기 위해 사용될 수 있다.

표 2

5개의 탄저병 저항성 DNA 마커를 이용한 탄저병 저항성 고추 일대잡종 품종 (5140)과 53개 상용 품종에 대한 HRM 분석 결과

이름	회사명	품종명	244687-HRM	570374-HRM	38820-HRM	284900-HRM	Anth12-HRM
모계	㈜고추와육종	GM6	S	S	S	S	S
F₁	㈜고추와육종	5140	H	H	H	H	H
부계	㈜고추와육종	2602-11-3	R	R	R	R	R
CF1	신젠타코리아	독야청청	S	S	S	S	S
CF2	신젠타코리아	기립박수	S	S	S	S	S
CF3	신젠타코리아	무한질주	S	S	S	S	S
CF4	신젠타코리아	만사형통	S	S	S	S	S
CF5	신젠타코리아	슈퍼비가림	S	S	S	S	S
CF6	농우바이오	PR마니따	S	S	S	S	S
CF7	농우바이오	대촌	S	S	S	S	S
CF8	농우바이오	슈퍼마니따	S	S	S	S	S
CF9	농우바이오	마니따	S	S	S	S	S
CF10	농우바이오	태산	S	S	S	S	S
CF11	농우바이오	PR대촌	S	S	S	S	S
CF12	농우바이오	강력조생건	S	S	S	S	S
CF13	농우바이오	홍초왕	S	S	S	S	S
CF14	농우바이오	강건	S	S	S	S	S
CF15	농우바이오	당찬	S	S	S	S	S
CF16	농우바이오	보은건	S	S	S	S	S
CF17	농우바이오	강력태양	S	S	S	S	S
CF18	농우바이오	참마니	S	S	S	S	S
CF19	몬산토코리아	홍보석	S	S	S	S	S
CF20	몬산토코리아	명작	S	S	S	S	S
CF21	몬산토코리아	천하제일	S	S	S	S	S
CF22	몬산토코리아	부촌	S	S	S	S	S
CF23	몬산토코리아	천하통일	S	S	S	S	S
CF24	몬산토코리아	왕대박	S	S	S	S	S
CF25	몬산토코리아	짱고추	S	S	S	S	S
CF26	몬산토코리아	홍일점	S	S	S	S	S
CF27	몬산토코리아	이구동성	S	S	S	S	S
CF28	몬산토코리아	청광	S	S	S	S	S
CF29	몬산토코리아	부강	S	S	S	S	S
CF30	농협종묘	힘찬	S	S	S	S	S
CF31	농협종묘	한민족	S	S	S	S	S
CF32	농협종묘	PR무적	S	S	S	S	S
CF33	동부팜한농	빨리따	S	S	S	S	S
CF34	동부팜한농	대청	S	S	S	S	S
CF35	동부팜한농	부홍	S	S	S	S	S
CF36	동부팜한농	천하장군	S	S	S	S	S
CF37	사카타코리아	독불왕	S	S	S	S	S
CF38	사카타코리아	조아라	S	S	S	S	S
CF39	사카타코리아	조대	S	S	S	S	S
CF40	코레곤	역강홍장군	S	S	S	S	S
CF41	코레곤	옹골찬	S	S	S	S	S
CF42	코레곤	핫	S	S	S	S	S
CF43	코레곤	PR-만장일치	S	S	S	S	S
CF44	코레곤	왕건	S	S	S	S	S
CF45	다끼이	대들보	S	S	S	S	S
CF46	동부팜대농	태촌	S	S	S	S	S
CF47	동부팜대농	PR불사조	S	S	S	S	S
CF48	동부팜대농	알부자	S	S	S	S	S
CF49	아시아종묘	엄청나	S	S	S	S	S
CF50	아시아종묘	독주역강	S	S	S	S	S
CF51	아시아종묘	역강수문장	S	S	S	S	S
CF52	아시아종묘	따따블	S	S	S	S	S
CF53	아시아종묘	돌풍	S	S	S	S	S

Claims

웅성 불임인 모계 고추 (Capsicum annuum) 식물체와 탄저병 저항성이 우수한 부계 고추 식물체를 교배하여 수득된 탄저병 저항성 일대잡종 F1 고추 품종.
제1항에 있어서, 상기 탄저병 저항성 고추 품종은 수탁번호 KCTC 12285BP의 5140 품종인 것을 특징으로 하는 고추 품종.
제1항에 있어서, 상기 부계 고추 식물체는 서열번호 1 내지 5의 염기서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 염기서열을 포함하는 탄저병 저항성 마커 유전자를 포함하는 2602-11-3 계통인 것을 특징으로 하는 고추 품종.
제1항에 있어서, 상기 일대잡종 F1 고추 품종은 서열번호 1 내지 5의 염기서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 염기서열을 포함하는 탄저병 저항성 마커 유전자를 포함하는 것을 특징으로 하는 고추 품종.
제1항에 있어서, 상기 탄저병 저항성 고추 품종은 하기의 특성을 모두 포함하는 것을 특징으로 하는 고추 품종:

- 하배축에 안토시아닌 착색이 있고 식물체 초형은 직립임

- 식물체 줄기의 솜털은 없거나 매우 적고 잎은 진한 녹색임

- 꽃자루의 자세는 약간 하향이며 꽃 색은 백색임

- 과실 성숙 전의 색은 녹색이고, 성숙기의 색은 빨간색임

- 과실의 가로 단면 모양은 원형임

- 과실표면의 질감은 매끈하고 과실의 길이는 중간임

- 과실 꼭지의 함몰은 없으며 끝의 모양은 뾰족함

- 과실 심실수는 2개이고 속살의 두께가 얇음

- 꽃받침의 모양은 노출형이고 과실 태좌 부분에 매운맛이 없음

- 탄저병에 저항성을 보임.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항의 탄저병 저항성 고추 품종의 열매 또는 종자.
(a) 이병성 계통인 캡시쿰 애눔 (Capsicum annuum) SP26을 모본으로 하고, 탄저병 저항성 계통인 캡시쿰 바카툼 (Capsicum baccatum) PBC81을 부본으로 하여 교배하는 단계;

(b) 상기 (a) 단계의 교배에 의해 생산된 배주 (ovule)를 배양하여 배를 회생 (embryo rescue)한 후, 종간잡종 F1 식물체를 수득하는 단계;

(c) 상기 F1 식물체 (모본)와 상기 캡시쿰 애눔 SP26 (부본)의 여교잡 (F1 x SP6)을 수행하여 탄저병 저항성 종간잡종 BC1F1 식물체를 수득하는 단계;

(d) 원예적 형질이 우수한 5537 계통 (모본)과 상기 BC1F1 식물체 (부본)의 교배로 얻은 탄저병 저항성 식물체에서 탄저병 저항성 개체 선발과 자식을 반복하여 탄저병 저항성이 우수한 개체 (2602-11-3)를 선발하는 단계; 및

(e) 웅성 불임인 고추 (Capsicum annuum) 식물체 (GM6)를 모본으로 하고, 최종적으로 선발된 상기 탄저병 저항성 고추 식물체 (2602-11-3)를 부본으로 하여 교배하는 단계를 포함하는 탄저병 저항성 고추품종 (5140)의 육종방법.
제7항에 있어서, 상기 탄저병 저항성 고추품종 (5140)은 수탁번호 KCTC 12285BP인 것을 특징으로 하는 고추품종의 육종방법.
제7항에 있어서, 상기 탄저병 저항성 고추 식물체 (2602-11-3)는 서열번호 1 내지 5의 염기서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 염기서열을 포함하는 탄저병 저항성 마커 유전자를 포함하는 것을 특징으로 하는 고추품종의 육종방법.
제7항에 있어서, 상기 탄저병 저항성 고추품종 (5140)은 서열번호 1 내지 5의 염기서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 염기서열을 포함하는 탄저병 저항성 마커 유전자를 포함하는 것을 특징으로 하는 고추품종의 육종방법.
제7항에 있어서, 상기 탄저병 저항성 고추 품종은 하기의 특성을 모두 포함하는 것을 특징으로 하는 고추품종의 육종방법:

- 하배축에 안토시아닌 착색이 있고 식물체 초형은 직립임

- 식물체 줄기의 솜털은 없거나 매우 적고 잎은 진한 녹색임

- 꽃자루의 자세는 약간 하향이며 꽃 색은 백색임

- 과실 성숙 전의 색은 녹색이고, 성숙기의 색은 빨간색임

- 과실의 가로 단면 모양은 원형임

- 과실표면의 질감은 매끈하고 과실의 길이는 중간임

- 과실 꼭지의 함몰은 없으며 끝의 모양은 뾰족함

- 과실 심실수는 2개이고 속살의 두께가 얇음

- 꽃받침의 모양은 노출형이고 과실 태좌 부분에 매운맛이 없음

- 탄저병에 저항성을 보임.
제7항에 따른 방법으로 수득된 탄저병 저항성 고추 품종.
제12항에 따른 탄저병 저항성 고추 품종의 열매 또는 종자.
제12항에 따른 탄저병 저항성 고추 품종의 화분 (pollen), 배주 (ovule) 또는 배 (embryo)인 식물의 일부.
서열번호 1 내지 5의 염기서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 염기서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 제1항 또는 제12항의 탄저병에 대해 저항성을 갖는 고추 품종을 선별하기 위한 조성물.
서열번호 1 내지 5의 염기서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 염기서열을 증폭하기 위한 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트.
제16항에 있어서, 상기 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트는 서열번호 6 및 7의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트; 서열번호 8 및 9의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트; 서열번호 10 및 11의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트; 서열번호 12 및 13의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트; 및 서열번호 14 및 15의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 프라이머 세트를 포함하는 것을 특징으로 하는 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트.
제16항에 있어서, 상기 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트는 제1항 또는 제12항의 탄저병에 대해 저항성을 갖는 고추 품종을 선별하기 위한 것임을 특징으로 하는 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트.
제16항 또는 제17항의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트 및 증폭 반응을 수행하기 위한 시약을 포함하는, 제1항 또는 제12항의 탄저병에 대해 저항성을 갖는 고추 품종을 선별하기 위한 키트.
제19항에 있어서, 상기 증폭 반응을 수행하기 위한 시약은 DNA 폴리머라제, dNTPs 및 버퍼를 포함하는 것을 특징으로 하는 키트.
고추 시료에서 게놈 DNA를 분리하는 단계;

상기 분리된 게놈 DNA를 주형으로 하고, 제16항 또는 제17항의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트를 이용하여 증폭 반응을 수행하여 표적 서열을 증폭하는 단계; 및

상기 증폭 산물을 분석하는 단계를 포함하는, 제1항 또는 제12항의 탄저병에 대해 저항성을 갖는 고추 품종을 선별하기 위한 방법.
제21항에 있어서, 상기 증폭된 표적 서열은 형광을 발하는 물질로 표지되어 있는 것을 특징으로 하는 방법.
제21항에 있어서, 상기 증폭 산물의 분석은 HRM (High resolution melting) 분석 또는 염기서열 결정 (sequencing)을 통해 수행되는 것을 특징으로 하는 방법.