2-位胺化亚甲基或 2-位酯化亚甲基丹参酮衍生物、 及其制备方法和应用 技术领域
本发明属于天然药物及药物化学领域并涉及新型丹参酮衍生物, 特别是 2-位胺化亚甲基或 2-位酯化亚甲基丹参酮 I衍生物,及制备这些 化合物的方法、 包含该化合物的组合物及其在制备抗肿瘤药物中的用 途。 背景技术
丹参酮 I (Tanshinone 1 ), 又叫丹参醌 I, 化学式(1,6-二甲基 -菲并
[1,2 -b]呋喃 -10,11-二酮),提取于唇形科植物丹参( Salvia miltiorrhiza Bge ) 的根及茎。 丹参酮 I, 其药理作用广泛, 临床使用范围很大, 可用于治 疗冠心病, 心绞痛, 心肌梗塞, 病毒性心肌炎, 心律失常, 脑血管病, 脑供血不足, 脑血栓形成, 脑梗塞, 肝炎, 肿瘤, 高血压等病症的治疗。 因此, 科学家们对以下的各种丹参酮衍生物进行了大量的研究。
Tanshinone Tanshinone IIA Methyl tanshinonate 丹参酮 I 丹参酮 I IA 丹参酸甲酯
Cryptotanshinone Nortanshinone Demethyltanshinone 隐丹参酮 去甲丹参醌 去甲丹参酮
dihydrotanshinone dihydrotanshinone IIA Tanshinondiol B 二氢丹参酮 I 去氢丹参酮 IIA 丹参酮二醇 B
3-hydroxytanshinone IIA Tanshinondiol A Tanshinone IIA sulfonate
3-羟基丹参酮 IIA 丹参酮二醇 A 丹参酮 IIA磺酸钠盐
Przsweiqui门 ons Przewaquinone Przewaquinone B 紫丹参甲素 紫丹参己素 紫丹参乙素
Tanshinone IIB
丹参酮 IIB 由于丹参酮 I的水溶性很差, 其在体内生物利用度很低, 有科学家 试图对丹参酮 I进行结构修饰, 以提高其水溶性和生物利用度, 扩大丹 参酮 I的药用价值。 (秦引林. 丹参酮 I衍生物及其在制药中的应用 [P] CN 1837199A. 2006; 秦引林. 丹参酮 I衍生物及其在制药中的应用 [P] CN 1837200A. 2006; 杜志云等. 丹参酮衍生物及在制备醛糖还原酶抑制 剂药物中的应用 [P] CN 101012270A. 2007)。
丹参酮 I具有一定的抗肿瘤作用。 有报道通过观察丹参酮 I对 Hep
G2细胞体外及体内的实验的多种指标的影响,综合判断其是否具有抗肿 瘤活性。 体外实验结果表明, 丹参酮 I能抑制 Hep G2细胞的增殖。 此
夕卜, 荷瘤棵鼠肿瘤抑制实验结果表明丹参酮 I能够抑制荷瘤棵鼠肿瘤的 生长, 即在活体上也具有抑制肿瘤作用。 (郑国灿, 李智英. 丹参酮 Hep G2细胞抑制作用的体外实验研究. 现代医学, 2004, 32(15):296-298; 郑 国灿, 李智英. 丹参酮 I抗肿瘤作用及作用机制的实验研究. 实用肿瘤 杂志, 2005, 20(1):33-35)。
另外, 有研究报道了丹参酮 I体外对 SGC-7901 胃腺癌细胞的增殖 和凋亡的影响。 实验发现, 丹参酮 I对体外培养的 SGC-7901人胃腺癌 细胞的生长有明显的抑制作用, 且其抑制细胞生长在一定范围内, 随丹 参酮 I的浓度增加而抑制作用增强. (周晓丽等.丹参酮 I对人胃腺癌细 胞 SGC-7901增殖、 凋亡的影响.现代肿瘤医学,201 1, 19(3):423-427)。
尽管对丹参酮的结构修饰与生物活性的研究很多,但是尚未见到水 溶性好、 毒性低和生物活性高的抗肿瘤丹参酮化合物的合成和应用的 报道。 发明内容
本发明的目的之一是提供特征为通式 (I)的新型丹参酮 I衍生物 或其药学上可接受的盐:
当 X为氮时, Y为 , 即式(I )化合物为式 1-1, 2-位胺化 亚甲基丹参酮 I; 当 X为氧时, Y为- (CO)R, 即式(I )化合物为式 1-2, 2-位酯化亚甲基丹参酮 I,
式中 R、 Ri, R2选自 H、 取代或无取代的 d-C18烷基、 取代或无取 代的 C2-C18烯基或炔基、 取代或无取代的 C3-C7环烷基或环烯基、 取代 或无取代的芳基、 取代或无取代的杂环基或杂芳基, 或者 和 与其 连接的碳原子一起形成非芳香含氮杂环基或含氮杂芳基; 其中所述取代 是被选自下组的一个或多个取代基取代: 鹵素、 硝基、 氰基、 氨基、 羟 基、 巯基、 羧基、 d-C6取代氨基、 d-C6烷氧基、 d-C6烷硫基。
本发明的目的之二是提供制备本发明通式( I ) 的 2-位胺化亚甲基 或 2-位酯化亚甲基丹参酮 I衍生物的方法:
tanshinone I 本发明的 2-位胺化亚甲基丹参酮 I衍生物 (1-1)可按上式所示由两步 反应制取。 丹参酮 I ( TA )先经氯甲基化反应, 生成 2-氯亚甲基丹参酮 I中间体; 生成的 2-氯亚甲基丹参酮 I再与相应的有机胺, 在碱存在下 反应生成 2-位胺化亚甲基丹参酮 I衍生物 (1-1), 式中 和 R
2与上文在 通式 (I)中的定义相同, 任选地进一步将所得化合物衍生化得到其他式 (I) 化合物。
tanshinone 本发明的 2-位酯化亚甲基丹参酮 I衍生物 (1-2)可按上式所示由两步 反应制取。 丹参酮 I ( TA )先经羟甲基化反应, 生成 2-羟甲基丹参酮 I 中间体; 生成的 2-羟甲基丹参酮 I再与相应的有机酰氯或酸酐, 在碱存 在下反应生成 2-位酯化亚甲基丹参酮 I衍生物 (1-2), 式中 R与上文在通 式 (I)中的定义相同, 任选地进一步将所得化合物衍生化得到其他式 (I)化 合物。
本发明的目的之三是提供包含本发明化合物的药物组合物, 所述 药物组合物包括至少一种本发明化合物, 和任选的药学上可接受的赋 形剂。
本发明的目的之四是提供本发明化合物或包含该化合物的药物组 合物在制备药物、 特别是抗肿瘤药物中的用途。 相应地, 本发明提供 一种治疗肿瘤患者的方法, 包括给予需要治疗的患者治疗有效量的至 少一种本发明的化合物。 所述肿瘤特别选自白血病、 多发性骨髓瘤、 淋巴瘤、 肝癌、 胃癌、 乳腺癌、 胆管细胞癌、 胰腺癌、 肺癌、 大肠癌、 骨肉瘤、 黑色素瘤、 人宫颈癌、 神经胶质瘤、 鼻咽癌、 喉癌、 食管癌、 中耳肿瘤、 前列腺癌等。
本发明还涉及用于治疗肿瘤的本发明的化合物。 具体实施方式
本发明涉及通式 (I)的新型 2-位胺化亚甲基或 2-位酯化亚甲基丹参 酮 I衍生物或其药学上可接受的盐,
其中, X为氧或氮;
当 X为氮时, Y为 , 即式(I )化合物为式 1-1, 2-位胺化 亚甲基丹参酮 I; 当 X为氧时, Y为- (CO)R, 即式(I )化合物为式 1-2, 2-位酯化亚甲基丹参酮 I,
式中 R、 Ri, R
2选自 H、 取代或无取代的 d-C
18烷基、 取代或无取 代的 C
2-C
18烯基或炔基、 取代或无取代的 C
3-C
7环烷基或环烯基、 取代 或无取代的芳基、 取代或无取代的杂环基或杂芳基, 或者 和 与其 连接的碳原子一起形成非芳香含氮杂环基或含氮杂芳基; 其中所述取代 是被选自下组的一个或多个取代基取代: 鹵素、 硝基、 氰基、 氨基、 羟 基、 巯基、 羧基、 d-C
6取代氨基、 d-C
6烷氧基、 d-C
6烷硫基。
才艮据本发明一个优选的实施方式, 所述 X为氮。
根据本发明另一个优选的实施方式, 所述 为 H、 甲基或乙基; R2为被选自如下的取代基取代的 d-C3烷基: 羟基、 d-C6烷基羰氧基、 环烷基羰氧基、 杂环基羰氧基、 其中氨基任选被 C C6烷氧基羰基取代 的氨基酸酯基、 其中一个羧基任选被 d-C6烷基酯化的任选含有碳 -碳双 键的 C2-C8二羧酸酯基。
根据本发明一个优选的实施方式, 所述 为氢或甲基; R2为被所 述取代基取代的乙基。
根据本发明又一个优选的实施方式, 所述其中所述取代基选自下 组: 羟基、 乙酰氧基、 丙酰氧基、 丁酰氧基、 异丁酰氧基、 戊酰氧基、 异戊酰氧基、 叔戊酰氧基、 哌啶基羰氧基、 哌嗪基羰氧基、 吗啉基羰氧 基、 吡咯烷基羰氧基、 咪唑烷基羰氧基、 甘氨酸酯基、 N-叔丁氧羰基甘 氨酸酯基、 缬氨酸酯基、 谷氨酸酯基、 赖氨酸酯基、 丙二酸单酯基、 丁 二酸单酯基、 马来酸单酯基、 甲基马来酸酯基、 戊二酸单酯基、 己二酸 单酯基、 庚二酸单酯基。
根据本发明一个优选的实施方式, 所述 2-位胺化亚甲基丹参酮 I被 在苯环上任选由 |¾素取代的苄基季铵化。
才艮据本发明一个优选的实施方式, 所述 X为氧或硫, R为由羟基或 鹵素任选取代的 CrC6烷基或由羟基或 |¾素任选取代的芳基或杂芳基。
本发明的部分优选的 2-位胺化亚甲基或 2-位酯化亚甲基丹参酮 I衍 生物如下所示。 这些实施例举只对本发明做进一步说明, 并不对本发明 的范围构成任何限制。
BS-TA-B08 BS-TA-B09 BS-TA-B10 BS-TA-B1 1
-vi-sa 09-v丄 -sg os-v丄 -sg
TOZN3/X3d ZZ06 .0/CT0Z OAV
BS-TA-80 BS-TA-81 上面所列化合物部分数据如下表所示: 分子 反应总收 化合物编号 分子式 外观 状态
里 率 (%)
BS-TA-A01 C25H16C1N05 445.86 红色 固体 4.8
BS-TA-A02 C26 7F05 428.42 红色 固体 4.3
BS-TA-A03 C22H18O5 362.39 红色 固体 1.2
BS-TA-B01 。27¾3Νθ3 409.49 深红色 固体 20.0
BS-TA-B03 C22H21N03 347.42 棕色 固体 26.4
BS-TA-B05 C26H27N03 401.51 深红色 固体 82.9
BS-TA-B06 C26H27N03 401.51 深红色 固体 57.6
BS-TA-B07 C23H21N03 359.43 深红色 固体 45.6
BS-TA-B08 C26H21N03 395.46 深红色 固体 98.5
BS-TA-B09 C26H27N03 401.51 红色 固体 58.1
BS-TA-B10 C23H23NO3 361.44 深红色 固体 51.7
BS-TA-B11 C26H21N03 395.46 深红色 固体 31.2
BS-TA-B12 C25H26N2O3 402.50 深红色 固体 23.9
BS-TA-B13 C24H19NO3S 401.49 深红色 固体 46.9
BS-TA-B14 C25H27N03 389.50 深红色 固体 55.0
BS-TA-B16 C25H24N2O4 416.48 红色 固体 80.1
BS-TA-B17 C22H21N04 363.42 深红色 固体 85.5
BS-TA-B18 C23H21N03S 391.49 深红色 固体 85.1
BS-TA-B21 C22H17N03 343.39 深红色 固体 25.1
BS-TA-B22 C26H20ClNO3 429.91 深红色 固体 31.3
BS-TA-50 C29H26BrClFN03 570.88 绿色 固体 16.9
BS-TA-60 C29H26BrClFN04 586.88 红色 固体 13.6
BS-TA-61 C24H23N05 405.44 棕色 固体 31.5
BS-TA-62 C27H29N05 447.52 棕色 固体 16.9
BS-TA-63 C26H27N06 449.5 棕色 固体 22.6
BS-TA-64 C28H30N2O5 474.55 棕色 固体 8.6
BS-TA-65 C21H19N04 349.38 棕色 固体 32.2
BS-TA-71 C27H30N2O5 462.54 棕色 固体 12.4
BS-TA-72 。29¾2 07 520.57 棕色 固体 22.2
BS-TA-73 C26H25N07 463.48 棕色 固体 9.8
BS-TA-74 C27H25N07 475.49 棕色 固体 57.7
BS-TA-79 C23H21N05 391.42 棕色 固体 11.1
BS-TA-80 C23H21N05 391.42 棕色 固体 2.8
BS-TA-81 C25H23N06 433.45 棕色 固体 0.1 在另一种实施方式中, 本发明特别优选如下的通式 (I )化合物:
BS-TA-B01
2-( V-甲基苄胺基)甲基-丹
BS-TA-B03
BS-TA-B17
2-(V-甲基乙醇胺基)甲基-丹参酮 I
BS-TA-61
2-( -甲基-乙酰氧乙基-胺基)甲基-丹参酮 I
BS-TA-64
-(( -甲基- (4_哌啶酰) 氧乙基-胺基))甲基-丹参酮 I
BS-TA-71
2-( V-甲基 -L-缬氨酰氧乙基-胺基)甲基-丹参酮 I
BS-TA-72
-( N-甲 -Boc-甘氨酰氧乙基-胺基)甲基-丹
BS-TA-73
BS-TA-74
2-( -甲基-反式富马甲酯单酰氧乙基-胺基)甲基-丹参酮 I
本发明的 2-位胺化亚甲基或 2-位酯化亚甲基丹参酮 I衍生物具有抗 癌活性。 与丹参酮 I本身相比, 本发明优选的化合物具有更高的抗癌活 性, 甚至提高数倍或数十倍。
如本文所使用, 术语"烷基"是指含有指定碳原子数的直链或支链 烷烃基。 所述烷基可以包含 1-18个碳原子, 例如 1-12个、 1-10个、 1-8个、 1-6个、 1-5个、 1-4个或 1-3个碳原子。 烷基的例子包括但不 限于甲基、 乙基、 正丙基、 异丙基、 叔丁基、 正戊基、 正己基和正十 八烷基。
术语"烯基"是指含有指定碳原子数的直链或支链烯基。 所述烯基 可以包含 2-18个碳原子, 例如 2-12个、 2-10个、 2-8个、 2-6个、 2-5 个、 2-4个或 2-3个碳原子。 烯烃基的例子包括但不限于乙烯基、 烯 丙基、 和十八烯基。
术语" d-C18烷酰基 "是指含有 1-18个碳原子的直链或支链的烷酰 基。 (^-( 18烷酰基的例子包括但不限于乙酰基、 丁酰基。
术语" CrC18烷氧基叛基"是指含有 1-18个碳原子的直链或支链烷 氧酰基。 C C18烷氧基羰基的例子包括但不限于甲氧基羰基, 叔丁氧基 羰基。
术语" d-C18烷硫基叛基"是指含有 1-18个碳原子的直链或支链烷 硫基羰基。 d-C18烷硫基羰基的例子包括但不限于甲硫基羰基, 乙硫基 羰基。
术语 "C3-C7环烷基或环烯基"是指具有饱和或不饱和环的 3-7元单 环系统的烃基。 C3-C7环烷基或环烯基可以为环丙基、 环丁基、 环戊基、 环己基、 环庚基、 环丙烯基和环己烯基。
术语"芳基"是指含有 6-14个碳原子 (例如 6-12个、 6-10个碳原
子)的单碳环芳香基或稠合或非稠合的多碳环芳香基, 在多碳环的情 况下,只要一个碳环是芳香的即可。芳基也包括与杂环基稠合的芳基。 所述芳基的例子有苯基、 联苯基、 萘基、 5,6,7,8-四氢萘基、 2.3-二氢 苯并呋喃基等。
术语"杂芳基 "是指在环中含有 1-4个杂原子 (例如 1、 2、 3或 4 个杂原子)作为环成员的芳香环基团。 杂原子是指氮、 氧或硫。 杂芳 基可以是具有 5-7个环原子的单环杂芳基, 或者具有 7-11个环原子的双 环杂芳基。 所述双环芳基中只要一个环是芳香杂环即可, 另一个可以是 芳香的或非芳香的、 含杂原子的或不含杂原子的。 杂芳基的例子有例如 吡咯基、 吡唑基、 咪唑基、 噁唑基、 吡啶基、 嘧啶基、 呋喃基、 噻吩基、 异噁唑基、 吲哚基等。
术语 "含氮杂芳基" 是指至少含有一个氮原子作为环成员的如上所 定义的 "杂芳基" 。
术语"杂环基 "是指含有 1-4个杂原子 (例如 1、 2、 3或 4个杂原 子)作为环成员的非芳香环基团。 杂原子是指氮、 氧或硫。 杂环基可 以是具有 4-8个环原子的单环杂环基(例如 4-7元环、 5-7元环、 5-6 元环) , 或者具有 7- 11 个环原子的双环杂环基。 杂环基可以是芳香 或非芳香的。 杂环基的例子有氮杂环丁基、 吡咯烷基、 吡咯啉基、 四 氢呋喃基、 二氢呋喃基、 哌嗪基、 哌啶基、 吗啉基、 硫代吗啉基、 四 氢吡喃基、 四氢噻喻基等。
术语 "含氮杂环基" 是指至少含有一个氮原子作为环成员的如上 所定义的 "杂环基" 。
术语"鹵素"是指氟、 氯、 溴或碘。
术语"烷基取代氨基 "是指 -N-烷基。
术语"烷氧基 "是指 -0-烷基。
术语"烷硫基 "是指 -S-烷基。
术语 "氨基酸酯基" 是除去氨基酸羧基上氢原子后的基团。
术语 "氨基酸" 是羧基的 α碳原子上含有氨基的一类有机小分子化 合物,优选天然的 L-氨基酸或其相应的 D型异构体。 天然氨基酸的例子
例如为丙氨酸、 缬氨酸、 亮氨酸、 异亮氨酸、 脯氨酸、 苯丙氨酸、 色氨 酸、 蛋氨酸、 甘氨酸、 丝氨酸、 苏氨酸、 半胱氨酸、 酪氨酸、 天冬酰胺、 谷氨酰胺、 赖氨酸、 精氨酸、 组氨酸、 天冬氨酸和谷氨酸等。
如本文所使用, 术语"式 (I)化合物的药学上可接受的盐 "的例子是由 形成药学上可接受的阴离子的有机酸形成的有机酸盐; 这些有机酸盐包 括但不限于甲苯磺酸盐、 甲磺酸盐、 苹果酸盐、 醋酸盐、 柠檬酸盐、 丙 二酸盐、 酒石酸盐、 琥珀酸盐、 苯甲酸盐、 抗坏血酸盐、 乳酸盐、 α-酮 戊二酸盐和 (X-甘油磷酸盐; 也可形成合适的无机盐; 这些无机酸盐包括 但不限于盐酸盐、 硫酸盐、 硝酸盐、 碳酸氢盐和碳酸盐、 磷酸盐、 氢溴 酸盐、 氢碘酸盐等。
药学上可接受的盐可使用本领域熟知的标准程序获得。 例如, 通过 将足量的碱性化合物和提供药学上可接受的阴离子的合适的 ^应生 成。
本文使用的术语"治疗"一般是指获得需要的药理和 /或生理效应。 该效应 #居完全或部分地预防疾病或其症状, 可以是预防性的; 和 / 或根据部分或完全稳定或治愈疾病和 /或由于疾病产生的副作用,可以 是治疗性的。本文使用的"治疗"涵盖了对患者疾病的任何治疗, 包括:
(a)预防易感染疾病或症状但还没诊断出患病的患者所发生的疾病或 症状; (b)抑制疾病的症状, 即阻止其发展; 或(c)緩解疾病的症状, 即, 导致疾病或症状退化。 发明的式 (I)化合物可按如下通用方法制备:
Tansh inone I 2-ch lorom ethyl
tansh i none I
本发明的 2-位胺化亚甲基丹参酮 I衍生物 (1-1)可按上式所示由两步 反应制取。 丹参酮 I ( TA )先经氯甲基化反应, 生成 2-氯亚甲基丹参酮 I中间体; 生成的 2-氯亚甲基丹参酮 I再与相应的有机胺, 在碱的存在 下反应生成 2-位胺化亚甲基丹参酮 I衍生物 (1-1), 式中 和 R2与上文 在通式 (I)中的定义相同, 任选地进一步将所得化合物衍生化得到其他式 (I)化合物。
丹参酮 I ( TA ) 的氯甲基化反应称为布兰克 (Blanc Reaction)氯甲基 化反应, 一般在低温或室温下进行。
上述的氯甲基化反应一般在有活性的氯甲基化试剂存在下进行。 这 里氯甲基化试剂可以是但不限于多聚甲醛和盐酸与氯化辞的混合物(即 传统的布兰克反应) , 或者是氯甲基甲基醚。
2-氯亚甲基丹参酮 I的胺化反应一般在有碱存在下。这里碱可以是 但不限于碳酸钾, 三乙胺。
2-氯亚甲基丹参酮 I的胺化反应一般在低温或室温下进行。反应的 温度取决于有机胺的反应活性。
2-氯亚甲基丹参酮 I的胺化反应一般在溶剂中进行。反应溶剂可以 是但不限于乙腈,四氢呋喃, Ν,Ν-二甲基甲酰胺,二甲亚砜(DMSO ) 等。
如上式所示, 本发明的 2-位酯化亚甲基丹参酮 I衍生物 (1-2)可按上 式所示由两步反应制取。 丹参酮 I ( ΤΑ )先经羟甲基化反应, 生成 2- 羟甲基丹参酮 I中间体; 生成的 2-羟甲基丹参酮 I再与相应的有机酰氯 或酸酐, 在碱存在下反应生成 2-位酯化亚甲基丹参酮 I衍生物 (1-2), 式 中 R与上文在通式 (I)中的定义相同, 任选地进一步将所得化合物衍生化
得到其他式 (I)化合物。
丹参酮 I与氯甲基甲基醚在乙酸溶剂中反应生成 2-氯甲基丹参酮 I 和 2-羟甲基丹参酮 I的混合物。 前者可以水解生成后者。
2-羟甲基丹参酮 I的酯化反应一般在碱存在下进行。 这里碱可以是 但不限于碳酸 4甲, 二甲基胺吡啶, 三乙胺。
2-羟甲基丹参酮 I的酯化反应的温度一般在 0。C至 80。C. 反应温度 取决于有机酰氯或酸酐的反应活性。
制备 2-位胺化亚甲基或 2-位酯化亚甲基丹参酮 I衍生物 (I)一般按如 下操作。
将天然提取分离得到的丹参酮 I与与甲醛在盐酸和二氯化辞存在 下, 由布兰克 (Blanc Reaction)氯甲基化反应, 生成 2-氯甲基丹参酮 I; 布兰克 (Blanc Reaction)氯甲基化反应一般在低温或室温下按经典成熟的 条件操作 ( C. C. Price, Org. React. 3, 1 (1946) )进行。
2-氯甲基丹参酮 I经水解反应, 生成相应的 2-羟甲基丹参酮 I。 将丹参酮 I与氯甲基甲基醚在醋酸溶液中于室温下反应, 生成 2-羟 甲基丹参酮 I和 2-氯甲基丹参酮 I的红色固体混合物。 后者经水解可转 化为前者。
生成的 2-羟甲基丹参酮 I与相应的有机酰氯, 在三乙胺和二甲基胺 基吡啶存在下, 生成 2-位酯化亚甲基丹参酮 I。 2-氯甲基丹参酮 I与相 应的有机酸钠在碱存在下, 在有机溶剂中加热, 经亲核取代反应也可生 成 2-位酯化亚甲基丹参酮 I。反应终止后,用有机溶剂萃取生成的产物, 经水洗和饱和食盐水洗、 干燥、 浓缩, 得到粗品。 再用硅胶柱或高效液 相色语仪分离, 得到产物纯品.
生成的 2-氯甲基丹参酮 I与相应的有机胺, 在碱的存在下, 于室温 下反应, 即可生成 2-位胺化亚甲基丹参酮 I。 反应终止后, 用有机溶剂 萃取生成的产物, 经水洗和饱和食盐水洗、 干燥、 浓缩, 得到粗品。 再 用硅胶柱或高效液相色谱仪分离, 得到产物纯品。
常规的化学转换可用于实施本发明。 本领域的技术人员可以决定 用于这些化学转换的适当的化学试剂、 溶剂、 保护基和反应条件。 相
关信息描述于 R. Larock , Comprehensive Organic Transformations , VCH Publishers ( 1989); T. W. Greene and P.G.M. Wuts , Protective Groups in Organic Synthesis , 3rd Ed, John Wiley and Sons( 1999); L. Fieser and M. Fieser, Fieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons( 1994); L. A. Paquette editor, Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons( 1995)及其后来的版本。
保护基指那些一旦连接活性部分 (例如, 羟基或氨基), 防止这些 基保护基的例子包括但不限于,烷基、苯甲基、烯丙基、三苯甲基 (即, 三苯基甲基)、 酰基 (例如, 苯甲酰基、 乙酰基或 HOOC-X"-CO-, X" 为亚烷基、 亚链烯基、 亚环烷基或亚芳基)、 甲硅烷基 (例如, 三甲基 硅烷基、 三乙基硅烷基和叔丁基二甲基硅烷基)、 烷氧基羰基、 氨基 羰基 (例如, 二甲基氨基羰基、 甲基乙氨基羰基和苯基氨基羰基)、 烷 氧甲基、苯甲氧甲基和烷基巯甲基。氨基保护基的例子包括但不限于, 烷氧基羰基、 烷酰基、 芳氧基羰基、 芳基取代的烷基等。 羟基和氨基 保护基已在 T.W. Greene and P.G..M. Wuts , Protective Groups in Organic Synthesis , 2nd Edition, John Wiley and Sons( 1991)中讨论。 ¾ 基和氨基保护基都可在反应后通过常规的方法去除。
具体而言,优选的本发明式 (I)化合物中, BS-TA-A01、 BS-TA-A03、 为由天然提取分离的丹参酮 I ( TA )为原料, 经羟甲基化反应和酯化反 应来制备。
BS-TA-B0 BS-TA-B03、 BS-TA-B05、 BS-TA-B06、 BS-TA-B07、 BS-TA-B08、 BS-TA-B09、 BS-TA-B 10、 BS-TA-B 11、 BS-TA-B 12、 BS-TA-B 13、 BS-TA-B 14、 BS-TA-B 16、 BS-TA-B 17、 BS-TA-B 18、
BS-TA-B2 BS-TA-B22 , BS-TA-65为由天然提取分离的丹参酮 I ( TA ) 为原料, 经氯甲基化反应和胺化反应来制备。
BS-TA-50、 BS-TA-60以 BS-TA-03为原料进行季铵化而获得。 BS-TA-6 BS-TA-62 , BS-TA-63以 BS-TA- 17为原料经酯化而获
付。
BS-TA-64、 BS-TA-71、 BS-TA-72、 BS-TA-74、 以 BS-TA-17为原 料进行酯化并去保护基而获得。
BS-TA-73以 BS-TA-17为原料进行酯化而获得。
BS-TA-79以 BS-TA-65为原料进行 Cbz化、 酯化并脱去 Cbz而获得。
BS-TA-80以 BS-TA-65为原料酰胺化而获得。
BS-TA-81以 BS-TA-65为原料酰胺化并酯化而获得。 本发明还提供了包含本发明式 I化合物的药物组合物。
本发明提供了这样的药物组合物, 其中包含至少一种如上所述的 本发明的式 I化合物, 和任选的药学上可接受的赋形剂。
制备各种含有一定量的活性成分的药物组合物的方法是已知的,
REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, Martin, E.W., ed., Mack Publishing Company, 19th ed. (1995)所述。制备所述药物组合物的方法 包括掺入适当的药学赋形剂、 载体、 稀释剂等。
以已知的方法制造本发明的药物制剂, 包括常规的混合、 溶解或 冻干方法。
本发明的化合物可以制成药物组合物, 并向患者以适于选定的施用 方式的各种途径施用, 例如口服或肠胃外 (通过静脉内、 肌内、 局部或 皮下途径) 。
因此, 本发明的化合物结合药学上可接受的载体(如惰性稀释剂或 可食用的载体)可以全身施用, 例如, 口服。 它们可以封闭在硬或软壳 的明胶胶嚢中, 可以压为片剂。 对于口服治疗施用, 活性化合物可以结 合一种或多种赋形剂, 并以可吞咽的片剂、 颊含片剂、 含片、 胶嚢剂、 酏剂、 悬浮剂、 糖浆、 圆片等的形式使用。 这种组合物和制剂应该包含 至少 0.1%的活性化合物。 这种组合物和制剂的比例当然可以变化, 可以 占给定的单位剂型重量的大约 1%至大约 99%。 在这种治疗有用的组合 物中, 活性化合物的量使得能够获得有效剂量水平。
片剂、 含片、 丸剂、 胶嚢剂等也可以包含: 粘合剂, 如黄蓍胶、 阿 拉伯胶、 玉米淀粉或明胶; 赋形剂, 如磷酸氢二钙; 崩解剂, 如玉米淀 粉、 马铃薯淀粉、 藻酸等; 润滑剂, 如硬脂酸镁; 和甜味剂, 如蔗糖、 果糖、 乳糖或阿司帕坦; 或调味剂, 如薄荷、 冬青油或樱桃香味。 当单 位剂型是胶嚢时, 除了上面类型的材料, 它还可以包含液体载体, 如植 物油或聚乙二醇。 各种其他材料可以存在, 作为包衣, 或以其他方式改 变固体单位剂型的物理形式。 例如, 片剂、 丸剂或胶嚢剂可以用明胶、 蜡、 虫胶或糖等包衣。 糖浆或酏剂可以包含活性化合物, 蔗糖或果糖作 为甜味剂, 对羟苯甲酸甲酯或对羟苯甲酸丙酯作为防腐剂, 染料和调味 剂 (如樱桃香料或桔子香料) 。 当然, 用于制备任何单位剂型的任何材 料应该是药学上可接受的且以应用的量基本上无毒。 此外, 活性化合物 可以掺入緩释制剂和緩释装置中。
活性化合物也可以通过输注或注射到静脉内或腹腔内施用。 可以制 备活性化合物或其盐的水溶液, 任选的可混的无毒的表面活性剂。 也可 以制备在甘油、 液体聚乙二醇、 甘油三乙酸酯及其混合物以及油中的分 散剂。 在普通的储存和使用条件下, 这些制剂包含防腐剂以防止微生物 生长。
适于注射或输注的药物剂型可以包括包含适于无菌的可注射或可 输注的溶液或分散剂的即时制剂的活性成分(任选封装在脂质体中) 的 无菌水溶液或分散剂或无菌粉末。 在所有情况下, 最终的剂型在生产和 储存条件下必须是无菌的、 液体的和稳定的。 液体载体可以是溶剂或液 体分散介质, 包括, 例如水、 乙醇、 多元醇(例如, 甘油、 丙二醇、 液 体聚乙二醇等) 、 植物油、 无毒的甘油酯及其合适的混合物。 可以维持 合适的流动性, 例如, 通过脂质体的形成, 通过在分散剂的情况下维持 所需的粒子大小, 或通过表面活性剂的使用。 可以通过各种抗细菌剂和 抗真菌剂 (如对羟苯甲酸酯、 氯丁醇、 苯酚、 山梨酸、 硫柳汞等)产生 预防微生物的作用。 在许多情况下, 优选包括等渗剂, 如糖、 緩冲剂或 氯化钠。 通过使用延緩吸收剂的组合物 (例如, 单硬脂酸铝和明胶)可 以产生可注射的组合物的延长吸收。
通过将合适的溶剂中的需要量的活性化合物与需要的上面列举的 各种其他成分结合, 然后进行过滤灭菌, 制备无菌可注射溶液。 在用于 制备无菌注射溶液的无菌粉末的情况下, 优选的制备方法是真空干燥和 冷冻干燥技术, 这会产生活性成分加上任何另外需要的以前无菌过滤溶 液中存在的成分的粉末。
有用的固体载体包括 4分碎的固体(如滑石、 粘土、 4敖晶纤维素、 二 氧化硅、 氧化铝等)。 有用的液体载体包括水、 乙醇或乙二醇或水 -乙醇
I乙二醇混合物,本发明的化合物可以任选在无毒的表面活性剂的帮助下 以有效含量溶解或分散在其中。 可以加入佐剂 (如香味)和另外的抗微 生物剂来优化对于给定用途的性质。
增稠剂 (如合成的聚合物、 脂肪酸、 脂肪酸盐和酯、 脂肪醇、 改性 纤维素或改性无机材料)也可和液体载体用于形成可涂覆的糊剂、凝胶、 软膏、 肥皂等, 直接用于使用者的皮肤上。
化合物或其活性盐或衍生物的治疗需要量, 不仅取决于选择的特定 的盐, 而且取决于施药方式、待治疗的疾病的本质和患者的年龄和状态, 最终取决于在场医师或临床医生的决定。
上述制剂可以以单位剂型存在, 该单位剂型是含有单位剂量的物 理分散单元, 适于向人体和其它哺乳动物体给药。 单位剂型可以是胶 嚢或片剂, 或是很多胶嚢或片剂。 根据所涉及的具体治疗, 活性成分 的单位剂量的量可以在大约 0.1到大约 1000亳克或更多之间进行变化 或调整。
本发明还提供本发明的化合物或包含该化合物的组合物在制备药 物、 特别是抗肿瘤药物中的用途。 相应地, 本发明提供一种治疗肿瘤 患者的方法, 包括给予需要治疗的患者治疗有效量的至少一种本发明 的化合物。 本发明的 2-位胺化亚甲基或 2-位酯化亚甲基丹参酮 I衍生 物 (I)或其药学上可接受的盐,例如可用于治疗白血病、多发性骨髓瘤、 淋巴瘤、 肝癌、 胃癌、 乳腺癌、 胆管细胞癌、 胰腺癌、 肺癌、 大肠癌、 骨肉瘤、 黑色素瘤、 人宫颈癌、 神经胶质瘤、 鼻咽癌、 喉癌、 食管癌、 中耳肿瘤、 前列腺癌等肿瘤。
在下列实施例中, 将更加具体地解释本发明。 但应理解, 下列实 施例旨在说明本发明而不对本发明的范围构成任何限制。 的合成方法获得。 实施例 1: 化合物(BS-T A-A03)的合成
Tanshinone I 2-Hydroxymethyl tanshinone I 2-Chloromethyl tanshinone 式中, MOMC1: 氯甲基甲基醚。
在水浴条件下, 将氯甲基甲基醚(1.6 g, 20 mmol)加入到溶有丹参 酮 I (0.276 g, 1 mmol)的醋酸溶液 (24 mL)中,反应液室温下搅拌 20小 时后, 将反应生成的沉淀过滤, 滤渣经水洗, 干燥后得到红色固体化 合物, 2-羟甲基丹参酮 I和 2-氯甲基丹参酮 I的混合物 (0.2 g, 收率 62%) 。 后者经水解可转化为前者。
2-Hydroxymethyl tanshinone BS-TA-A03 式中, Et3N: 三乙胺; DMAP: 4-二甲氨基吡啶。
在 0°C条件下, 向溶有 2-羟甲基丹参酮 I (50 mg, 0.18 mmol), 三 乙胺 (41 mg, 0.45 mmol), 4-二甲氨基吡0 (4 mg, 0.036 mmol)的氯仿 (3 mL)中滴加丙酰氯 (20 mg, 0.216 mmol),随后反应加热升温至 65 °C, 过夜搅拌。 反应结束后, 加入水, 再经萃取, 硅胶柱或者制备色谱柱 分离纯化, 得到红色固体化合物 BS-TA-A03 (1.1 mg, 收率 1.2%)。
LC-MS: 保留时间: 4.2 min (83.13%); m/z: 363.3 (M+H).
Ή NMR (300Hz, DMSO d-6) δ 9.196 (d, 1H), 8.465 (d, 1H), 7.882 (d, 1H), 7.624 (m, 1H), 7.462 (d, 1H), 5.206 (s, 2H), 2.689 (s, 3H), 2.392 (m, 2H), 2.261 (s, 3H), 1.074 (m, 3H). 按照 BS-TA-A03的方法, 使用上述同样的试剂, 将化合物 2-羟 甲基丹参酮 I与 2-氯异烟酸反应, 制备了 BS-TA-A01 :
LC-MS: 保留时间: 4.4 min (21.77%); m/z: 446.2 (M+H). 按照 BS-TA-A03 的方法, 使用上述同样的试剂, 将化合物 2-羟 甲基丹参酮 I与对氟苯甲酸反应, 制备了 BS-TA-A02:
LC-MS: 保留时间: 4.6 min (92.00%); m/z: 429.3 (M+H). 实施例 2: 化合物(BS-TA-B01)的合成
2-Chloromethyl tanshinone BS-TA-B01
将 2-氯甲基丹参酮 I (50 mg, 0.18 mmol)溶于二氯甲烷 (1 mL)中, 加 入溶有 N-甲基 (苯基)甲胺 (47 mg, 0.54 mmol) 的乙腈溶液 (3 mL),碳酸钾 (43 mg, 0.36 mmol), 反应液室温下搅拌 3〜5小时。 反应结束后, 经萃取 和制备簿层色谱纯化分离得到深红色固体化合物 BS-TA-B01 (17.8 mg, 收率 20.0%)。
LC-MS: 保留时间: 3.2 min (92.29%); m/z: 410.2 (M+H).
!H NMR (300Hz, DMSO d-6) δ 9.181 (d, 1H), 8.505 (d, 1H), 7.916 (d, 1H), 7.633 (m, 3H), 7.479 (m, 4H), 4.563 (s, 2H), 4.416 (s, 2H), 2.727 (s, 3H), 2.694 (s, 3H), 2.312 (s, 3H).
按照 BS-TA-BOl的方法,使用上述同样的试剂, 将化合物 2-羟甲基 丹参酮 I与 N-甲基乙胺反应, 制备了 BS-TA-B03:
LC-MS: 保留时间: 2.7 min (96.38%); m/z: 348.2 (M+H). 按照 BS-TA-BOl的方法,使用上述同样的试剂, 将化合物 2-羟甲基 丹参酮 I与 N-甲基环己胺反应, 制备了 BS-TA-B05:
LC-MS: 保留时间: 3.2 min (80.05%); m/z: 402.3 (M+H). 按照 BS-TA-BOl的方法,使用上述同样的试剂, 将化合物 2-羟甲基 丹参酮 I与环己甲胺反应, 制备了 BS-TA-B06:
LC-MS: 保留时间: 3.3 min (85.49%); m/z: 402.4 (M+H). 按照 BS-TA-BOl的方法,使用上述同样的试剂, 将化合物 2-羟甲基 丹参酮 I与环丙甲胺反应, 制备了 BS-TA-B07:
LC-MS: 保留时间: 3.9 min (95.97%); m/z: 360.3 (M+H). 按照 BS-TA-B01的方法,使用上述同样的试剂, 将化合物 2-羟甲基 丹参酮 I与 N-甲基苯胺反应, 制备了 BS-TA-B08:
LC-MS: 保留时间: 4.7 min (91.40%); m/z: 396.3 (M+H). 按照 BS-TA-B01的方法,使用上述同样的试剂, 将化合物 2-羟甲基 丹参酮 I与 2-甲基环己胺反应, 制备了 BS-TA-B09:
LC-MS: 保留时间: 3.2 min (69.55%); m/z: 402.3 (M+H). 按照 BS-TA-B01的方法,使用上述同样的试剂, 将化合物 2-羟甲基 丹参酮 I与丁胺反应, 制备了 BS-TA-B10:
LC-MS: 保留时间: 3.0 min (87.98%); m/z: 362.3 (M+H).
按照 BS-TA-BOl的方法,使用上述同样的试剂, 将化合物 2-羟甲基 丹参酮 I与苯甲胺反应, 制备了 BS-TA-B11 :
LC-MS: 保留时间: 4.2 min (82.78%); m/z: 396.3 (M+H). 按照 BS-TA-BOl的方法,使用上述同样的试剂, 将化合物 2-羟甲基 丹参酮 I与 N-甲基高哌嗪反应, 制备了 BS-TA-B12:
LC-MS: 保留时间: 3.4 min (95.04%); m/z: 403.3 (M+H). 按照 BS-TA-BOl的方法,使用上述同样的试剂, 将化合物 2-羟甲基 丹参酮 I与 2-噻吩甲胺反应, 制备了 BS-TA-B13:
LC-MS: 保留时间: 4.2 min (99.54%); m/z: 402.3 (M+H). 按照 BS-TA-BOl的方法,使用上述同样的试剂, 将化合物 2-羟甲基 丹参酮 I与 2-噻吩甲胺反应, 制备了 BS-TA-B14:
LC-MS: 保留时间: 3.3 min (86.03%); m/z: 390.4 (M+H). 按照 BS-TA-B01的方法,使用上述同样的试剂, 将化合物 2-羟甲基 丹参酮 I与 4-哌啶甲酰胺反应, 制备了 BS-TA-B16:
LC-MS: 保留时间: 2.6 min (91.91%); m/z: 417.1 (M+H). 按照 BS-TA-B01的方法,使用上述同样的试剂, 将化合物 2-羟甲基 丹参酮 I与 N-甲基 -2-羟基乙胺反应, 制备了 BS-TA-B17:
LC-MS: 保留时间: 2.0 min (94.23%); m/z: 364.2 (M+H). 按照 BS-TA-B01的方法,使用上述同样的试剂, 将化合物 2-羟甲基 丹参酮 I与硫代吗啉反应, 制备了 BS-TA-B18:
LC-MS: 保留时间: 4.1 min (98.80%); m/z: 392.3 (M+H). 按照 BS-TA-B01的方法,使用上述同样的试剂, 将化合物 2-羟甲基
丹参酮 I与丙烯胺反应, 制备了 BS-TA-B21 :
LC-MS: 保留时间: 3.6 min (67.99%); m/z: 344.3 (M+H). 按照 BS-TA-B01的方法,使用上述同样的试剂, 将化合物 2-羟甲基 丹参酮 I与对氯苯甲胺反应, 制备了 BS-TA-B22:
LC-MS: 保留时间: 4.4 min (76.49%); m/z: 430.3 (M+H). 实施例 3: 化合物(BS-TA-50)的合成
向溶有 BS-TA-B03 (100 mg, 0.288 mmol)的甲苯 (8 mL)溶液中加入 4- (溴甲基) -2-氯 -1-氟苯 (193 mg, 0.864 mmol), 反应加热升温至 45 °C, 搅 拌反应 16小时。反应结束后, 将生成的固体过滤, 滤渣经甲苯 (5 mL*2), 二氯甲烷 (10 mL*2)洗涤后得到绿色固体化合物 BS-TA-50 (28.06 mg, 收 率 16.9%)。
LC-MS: 保留时间: 2.53 min (100%); m/z: 490 (M-Br);
!H NMR (400Hz, DMSO d-
6) δ 9.187 (d, J= 8.8 Hz, IH), 8.492 (d, J= 8.8 Hz, IH), 7.902 (t, 2H), 7.677-7.592 (m, 3H), 7.502 (d, J= 6.8 Hz, IH), 4.888 (d, J=14.8 Hz, IH), 4.752 (d, J=14.8 Hz, IH), 4.664 (s, 2H), 3.435 (m, IH), 3.320 (m, IH), 3.040 (s, 3H), 2.693 (s, 3H), 2.372 (s, 3H), 1.496 (t, 3H).
(H 's) οτοτ
'(HI 'ZH 0'9 =/ 'Ρ) ζΐΠ '(Ηΐ Ί) L09.L '(Ηΐ 'zH 8·8 =ί 'Ρ) '(Ηΐ'ζΗ 17*8 =/ 'Ρ) '(Ηΐ 'ΖΗ 8'8 =/ 'Ρ) 9Y69 (9Ψ OSMQ ' OO ) ¾ΜΜ ΗΓ Ζ
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'(H 's) 669T '(H 's) TOT *e m w£ m 's) o '(HI 8 T
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099S80/ZT0ZN3/X3d ZZ06.0/CT0Z OAV
特戊酰氯反应, 制备了 BS-TA-62:
LC-MS: 保留时间: 2.4 min (100.0%); m/z: 448.3 (M+H).
!H NMR (400Hz, CDC13) δ 9.268 (d, J=8.8 Hz, IH), 8.312 (d, J= 8.8 Hz, IH), 7.874 (d, J= 8.8 Hz, IH), 7.567 (t, IH), 7.367 (d, J= 7.2 Hz, IH), 4.277 (s, 2H), 3.689 (s, 2H), 2.790 (s, 2H), 2.708 (s, 3H), 2.398 (s, 3H), 2.298 (s, 3H), 1.212 (s, 9H). 按照 BS-TA-6的方法, 使用上述同样的试剂, 将化合物 BS-TA-B17与 氯甲酸异丙酯反应, 制备了 BS-TA-63:
LC-MS: 保留时间: 2.3 min (100.0%); m/z: 450.3 (M+H).
!H NMR (400Hz, CDC13) δ 9.268 (d, J= 8.8 Hz, IH), 8.312 (d, J= 8.4 Hz, IH), 7.874 (d, J= 8.0 Hz, IH), 7.565 (t, IH), 7.367 (d, J= 6.8 Hz, IH), 4.882 (m, IH), 4.298 (s, 2H), 3.707 (s, 2H), 2.946 (s, IH), 2.818 (s, IH), 2.707 (s, 3H), 2.401 (s, 3H), 2.294 (s, 3H), 1.295 (d, 6H). 实施例 5: 化合物(BS-TA-64)的合成
BS-TA-B17 BS-TA-64- 1 式中, HOBT: 1-羟基苯并三唑; EDC1: 1-乙基 -(3-二甲基氨基丙基) 碳二亚胺盐酸盐; DIPEA: Ν,Ν-二异丙基乙胺
向二氯甲烷(15 mL)中加入 BS-TA-B 17(200 mg, 0.55 mmol), l-Boc-4- K甲酸(151.4 mg, 0.66 mmol), 1-羟基苯并三唑(148.6 mg, 1.1 mmol), 1-乙基 -(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐 (210.9 mg, 1.1 mmol), Ν,Ν- 二异丙基乙胺 (177.1 mg, 1.375 mmol)。反应液室温搅拌 48小时。 反应结 束后,除去溶剂,得到的粗产物经制备薄层色谱 (二氯甲烷 /乙酸乙酯 1:2) 分离纯化后得到棕色固体化合物 BS-TA-64-l(45 mg, 收率 14.25%)。
BS-TA-64-1 BS-TA-64 式中, TFA: 三氟乙酸
向二氯甲烷 (6 mL)中加入 BS-TA-64- l(45 mg, 0.078 mmol) , 随后加 入三氟乙酸 (3 mL),反应液室温搅拌 2小时。反应结束后将反应液浓缩, 用饱和碳酸氢钠溶液调节 pH至 9。反应液经萃取得到的有机相经制备薄 层色谱分离纯化后得到棕色固体化合物 BS-TA-64(22.41 mg, 收率 60.6%)。
LC-MS: 保留时间: 2.0 min (100.0%); m/z: 475.3 (M+H).
!H NMR (400Hz, DMSO d-6) δ 9.140 (d, J= 9.2 Hz, 1H), 8.405 (d, J=
6.4 Hz, 1H), 7.808 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 7.587 (t, 1H), 7.426 (d, J= 6.8 Hz, 1H), 4.165 (s, 2H), 3.664 (s, 2H), 2.818 (d, J= 12.0 Hz, 2H), 2.665 (s, 5H), 2.415-2.278 (m, 3H), 2.235 (s, 3H), 2.196 (s, 3H), 2.1 15 (m, 1H), 1.677 (d, J= 12.0 Hz, 2H), 1.427-1.341 (m, 2H). 实施例 6: 化合物(BS-TA-65)的合成
2-Chloromethyl tanshinone I DO" 1 M"OJ 向二氯甲烷 (10 mL)中加入 2-氯甲基丹参酮 I (100 mg, 0.309 mmol) , 随后加入溶有乙醇胺 (56.4 mg, 0.926 mmol) , 碳酸钾(127.6 mg, 0.926 mmol)的乙腈溶液 (15 mL), 反应液室温搅拌 2小时后, 将生成的固体过 滤, 滤渣经水洗 (10 mL*2), 二氯甲烷 (5 mL*2)洗涤后得到棕色固体化合
物 BS-TA-65(27.21 mg, 收率 32.2%)。
LC-MS: 保留时间: 2.0 min (97.46%); m/z: 350.2 (M+H).
!H NMR (400Hz, DMSO d-6) δ 9.148 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 8.418(s, 1H), 7.863 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.579 (m, 1H), 7.434 (s, 1H), 4.525 (s, 1H), 3.790 (s, 2H), 3.482 (s, 2H), 2.671-2.628 (m, 5H), 2.194-2.156 (m, 4H). 实施例 7: 化合物(BS-TA-71)的合成
BS-TA-B17 BS-TA-71 -1 向二氯甲烷(10 mL)中加入 BS-TA-B 17(150 mg, 0.413 mmol) , 1- 羟基苯并三唑(111 mg, 0.826 mmol), 1-乙基 -(3-二曱基氨基丙基)碳二 亚胺盐酸盐(157 mg, 0.826 mmol) , Ν,Ν-二异丙基乙胺(133 mg, 1.033 mmol), 随后加入 Boc-L-缬氨酸(107 mg, 0.496 mmol), 反应液室温搅 拌 1小时。 反应结束后, 加入水(10 mL), 用二氯甲烷 (50 mL)萃取, 有机相浓缩后得到的粗产物经制备薄层色谱 (二氯甲烷 /乙酸乙酯 1: 1) 纯化分离后, 得到棕色固体化合物 BS-TA-71- 1(70 mg, 收率 30.2%)。
将化合物 BS-TA-71-1(70 mg, 0.125 mmol)溶于三氟乙酸 (2 mL) , 二氯甲烷(10 mL)的混合溶液中, 反应液室温搅拌 3 小时。 反应结束
后, 除去溶剂, 得到的粗产物经制备色谱分离纯化后得到棕色固体化 合物 BS-TA-71(24 mg, 收率 41.7%).
LC-MS: 保留时间: 2.8 min (96.28%); m/z: 463.2 (M+H).
!H NMR (400Hz, CDC13) δ 9.25 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 8.30 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.85 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.55 (t, 1H), 7.36 (d, J= 6.8 Hz, 1H), 4.33 (t, 2H), 3.72 (s, 2H), 3.37 (d, J= 4.8 Hz, 1H), 2.82 (t, 2H), 2.70 (s, 3H), 2.41(s, 3H), 2.30 (s, 3H), 2.19 (s, 1H), 0.99 (d, J= 6.8 Hz, 3H), 0.92 (d, J= 6.8 Hz, 3H). 实施例 8: 化合物(BS-TA-72)的合成
向二氯甲烷(10 mL)中加入 BS-TA-B 17(200 mg, 0.550 mmol) , 1- 羟基苯并三唑(149 mg, 1.10 mmol) , 1-乙基 -(3-二甲基氨基丙基)碳二亚 胺盐酸盐(21 1 mg, 1.10 mmol) , Ν,Ν-二异丙基乙胺(178 mg, 1.38 mmol) , 随后加入 Boc-甘氨酸(145 mg, 0.66 mmol) , 反应液室温搅拌 30分钟。 反应结束后, 加入水(10 mL), 用二氯甲烷 (50 mL)萃取, 有 机相浓缩后得到的粗产物经制备薄层色谱 (二氯甲烷 /乙酸乙酯 1: 1)及 制备色谱纯化分离后, 得到棕色固体化合物 BS-TA-72 (25 mg, 收率 22.2%)„
LC-MS: 保留时间: 2.0 min (100%); m/z: 521.2 (M+H).
!H NMR (400Hz, CDC13) δ 9.26 (d, J= 9.2 Hz, 1H), 8.32 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.86 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.56 (t, 1H), 7.36 (d, J= 6.8 Hz, 1H), 5.01 (s, 1H), 4.35 (t, 2H), 3.95 (d, J= 5.2 Hz, 2H), 3.70 (s, 2H), 2.80 (m, 2H), 2.70 (s, 3H), 2.39 (s, 3H), 2.29 (s, 3H), 1.44 (s, 9H).
按照 BS-TA-721的方法,使用上述同样的试剂,将化合物 BS-TA-B 17 与富马酸单甲酯反应, 制备了 BS-TA-74:
LC-MS: 保留时间: 2.3 min (96.87%); m/z: 476.3 (M+H).
!H NMR (400Hz,CDCl3) δ 9.25 (d, J= 9.2 Hz, IH), 8.29 (d, J= 8.8 Hz, IH), 7.83 (d, J= 8.8 Hz, IH), 7.56 (t, IH), 7.35 (d, J= 6.8 Hz, IH), 6.86 (s, 2H), 4.38 (t, 2H), 3.74 (s, 3H), 3.68 (s, 2H), 2.82 (t, 2H), 2.70 (s, 3H), 2.41 (s, 3H), 2.28 (s, 3H).
实施例 9: 化合物(BS-TA-73)的合成
BS-TA-B17 BS-TA-73
式中, DMAP: 4-二甲氨基吡啶
向二氯甲烷 (8 mL)中加入 BS-TA-B17(200 mg, 0.550 mmol) , 4-二甲 氨基吡啶 (6.7 mg, 0.0550 mmol), 三乙胺 (56 mg, 0.550 mmol), 随后加 入丁二酸酐 (66 mg, 0.660 mmol)。 反应液室温搅拌 1小时。 反应结束 后, 将生成的固体过滤, 得到的粗产物经制备色谱分离纯化后得到棕 色固体化合物 BS-TA-73(25 mg, 收率 9.8%)。
LC-MS: 保留时间: 1.5 min (97.56%); m/z: 464.0 (M+H).
!H NMR (400Hz, DMSO d-
6) δ 9.14 (d, J=8.0 Hz, IH), 8.42 (d, J=8.0 Hz, IH), 7.83 (t, IH), 7.59 (t, IH), 7.42 (d, /=6.4 Hz, IH), 4.76 (t, 2H), 3.67 (d, J=7.2 Hz, 2H), 2.70-2.64 (m, 5H), 2.48-2.40 (m, 4H), 2.27 (s, 3H), 2.20 (s, 3H). 实施例 10: 化合物(BS-TA-79)的合成
式中, Cbz-Cl: 氯甲酸苯甲基酯
在水浴条件下, 向加有 BS-TA-65(6.0 g, 17.14 mmol)的二氧六环 (120 mL)悬浮液中加入 1M 氢氧化钠溶液, 随后, 逐滴加入氯甲酸苄 酯(8.5 g, 34.28 mmol),(TC下搅拌反应 3小时。 反应结束后, 向反应液 中加入水, 用乙酸乙酯(50 mL*2)萃取, 有机相经饱和碳酸氢钠溶液 洗涤, 干燥, 浓缩后得到化合物 BS-TA-65-Cbz(6.2 g, 74.7%)。
向二氯甲烷(100 mL)中加入 BS-TA-65-Cbz(6.2 g, 12.84 mmol) , 三乙胺(1.7 g, 14.12 mmol), 4-二甲氨基吡啶 (129.5 mg, 0.1284 mmol), 随后在水浴条件下加入乙酸酐 (2.6 g, 25.68 mmol)。 反应液搅拌 30分 钟后, 加入水, 经二氯甲烷萃取 (50 mL*2), 干燥, 浓缩后得到粗产 品 BS-TA-79-Cbz(5.4 g, 80.1%),此化合物不经纯化直接用于下一步反 应。
向溶有 BS-TA-79-Cbz(5.4 g, 10.29 mmol)的甲醇溶液(160 mL)中 加入钯 /碳 ( 1.0 g), 用氢气置换 3次后, 反应液在氢气条件下常温搅拌 4小时。 反应结束后, 将反应液过滤, 将得到的滤液浓缩后的得到的 粗产品经制备薄层色谱 (二氯甲烷 /乙酸乙酯 1: 1)纯化分离后得到棕色 固体化合物 BS-TA-79( 1.3 g, 收率 1 1.1%)。
LC-MS: 保留时间: 3.56 min (85.62%), m/z: 392.0 (M+H).
!H NMR (400Hz, CDC13) δ 9.26 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 8.3 1 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.86 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.57 (t, 1H), 7.36 (d, J= 6.8 Hz, 1H), 4.24 (t, J= 5.2 Hz, 2H), 3.92 (s, 2H), 2.97 (t, J= 5.6 Hz, 2H), 2.71 (s, 3H) 2.30 (s, 3H), 2.09 (s, 3H).
向 N,N-二甲基甲酰胺(3 mL)中加入 BS-TA-65(50 mg, 0. 1429 mmol) , 碳酸氢钠(6 mg, 0.07145 mmol), 随后, 在(TC条件下加入乙 酰氯(1 1 mg, 10.29 mmol), 搅拌反应 30分钟。 反应结束后, 加入水, 经二氯甲烷萃取 ( 10 mL*2), 干燥, 浓缩后得到的粗产物经制备薄层 色谱(二氯甲烷 /乙酸乙酯 1 : 1)分离纯化后得到棕色固体化合物
BS-TA-80(13.4 mg, 收率 2.8%)。
LC-MS: 保留时间: 3.07 min (88.75%); m/z: 392.0 (M+H).
!H NMR (400Hz, CDC13) δ 9.17 (m, 1H), 8.43 (m, 1H), 7.84 (m, 1H), 7.75 (m, 1H), 7.45 (d, J= 1.2 Hz, 1H), 4.64 (m, 2H), 3.64 (t, J= 6.0 Hz, 2H), 3.47 (t, J= 5.6 Hz, 2H), 3.08 (t, J= 6.0 Hz, 1H), 2.08 (s, 3H), 2.25 (s, 3H), 2.10-1.79 (m, 3H). 实施例 12: 化合物(BS-TA-81)的合成
BS-TA-81
式中, NMM: N-甲基吗啉
向二氯甲烷 (5 mL)中加入 BS-TA-65(50 mg, 0.1429 mmol), N-甲 基吗啉 (7 mg, 0.1429 mmol), 随后在(TC条件下, 加入乙酰氯(11 mg, 0.1429 mmol) , 搅拌反应 30分钟。 反应结束后, 加入水, 用二氯甲烷 (10 mL*2)萃取,有机相干燥,浓缩后得到的粗产物经制备薄层色谱 (二 氯甲烷 /乙酸乙酯 1 : 1)纯化分离后得到棕色 固体化合物 BS-TA-81(11.6 mg, 18.7%)。
LC-MS: 保留时间: 3.49 min (92.16%), m/z: 433.8 (M+H).
!H NMR (400Hz, CDC13) δ 9.27 (m, 1H), 8.33 (m, 1H), 7.80 (m, 1H), 7.57 (m, 1H), 7.36 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 4.69 (s, 1H), 4.60 (s, 1H), 4.30 (m, 2H), 2.71 (d, J= 4.4 Hz, 3H), 2.37-2.08 (m, 9H). 实施例 13: 本发明的 2-位胺化亚甲基或 2-位酯化亚甲基丹参酮 I衍生 物抗白血病的活性测定
(1) 实验材料
白血病细胞株: 白血病细胞株: K562/adr (耐药慢性髓系白血病, CML)、 NB4 (急性早幼粒细胞白血病, AML)、 Kasumi-1 (急性髓系白血 病 M2型, AML-M2)、 Jurkat (急性淋巴细胞白血病, ALL), 以上细胞系 均受赠于浙江大学肿瘤研究所; H9 (急性淋巴细胞白血病, ALL), 购自 中国典型培养物保藏中心。
试剂:丹参酮 I ( TA )标准品购自成都曼斯特生物科技有限公司(四 川) , 本发明 2-位胺化亚甲基或 2-位酯化亚甲基丹参酮 I 。
主要仪器: 细胞培养箱(型号: Thermo Scientific 31 11 ),酶标仪(型 号: Bio-Rad iMark ) 。
(2) 实险方法
丹参酮 I ( TA )标准品及本发明的 2-位胺化亚甲基或 2-位酯化亚甲 基丹参酮 I衍生物, 用二甲基亚砜充分溶解, 配成 10 mg/mL的母液, 置 4°C水箱避光保存, 实验前以细胞培养液稀释至所需浓度。
取生长良好的白血病细胞 6000个, 接种到 96孔细胞培养板孔内。 培养液为含 10%胎牛血清的 RPMI-1640细胞培养液。第二天加入不同浓 度的 2-位胺化亚甲基或 2-位酯化亚甲基丹参酮 I衍生物, 混匀后, 置于 二氧化碳( 5% C02 ) 细胞培养箱 37。C培养 72小时。 然后用 MTT法测 定活细胞浓度。 在本实验中对照组(不加化合物处理) 细胞活力设为 100% , 并计算出化合物作用后细胞活力 (%)和 72小时白血病细胞半 数生长抑制浓度 (72小时 IC5。值, g/mL)。
(3) 实验结果
实验结果见表 1。
表 1显示本发明的 2-位胺化亚甲基或 2-位酯化亚甲基丹参酮 I衍生 物能诱导人慢性髓系白血病、 急性髓系白血病和急性淋巴细胞白血病细 胞死亡和抑制这些白血病细胞生长。 化合物 BS-TA-65尤为明显, 对本 实验所有的细胞株均表现出了广谱抗肿瘤活性, 其中, 抗 H9 (急性淋巴 细胞白血病), NB4 (急性早幼粒细胞白血病)细胞株方面活性较丹参酮 I 本身相比, 活性分别提高 27倍和 24倍; BS-TA-71在抗 H9 (急性淋巴 细胞白血病)上活性提高 28倍; 此外, BS-ΤΑ-ΒΠ在抗 Jurkat (急性淋巴
细胞白血病), NB4 (急性早幼粒细胞白血病)细胞株方面活性较丹参酮 I 本身相比, 活性分別提高 27倍和 24倍; BS- TA-71在抗 H9 (急性淋巴 细胞白血病)上活性提高 28倍; 此外, BS-TA- B17在抗 Jurkat (急性淋巴 细胞白血病)方面活性提高 10倍以上。 表 1 : 2-位胺化亚甲基或 2-位酯化亚甲基丹参酮 I衍生物对白血病 细胞生长抑制浓度测定( 72小时, IC5o ( g/mL )值和 IC9o ( g/mL )值)。
K562/ADR Kasumi-1 NB4
化合物 ic50 IC90 ic50 IC 0 IC50 IC90
TA 0.88 4.17 0.99 3.62 0.98 2.50
BS-TA- AO 1 2.33 6.24 1.75 3.91 0.99 3.97
BS-TA-A03 2.3 6.61 2.35 7.79 1.93 9.65
BS-TA-B01 1.13 2.95 0.66 1.91 0.26 0.96
BS-TA-B03 1.22 2.69 0.81 2 0.92 3.01
BS- TA-B06 0.81 1.8 0.57 1.73 2.13 7.29
BS-TA-B07 3.22 6.38 1.07 3.86 1.35 3.74
BS-TA-B10 0.76 1.8 0.4 0.92 5.79 15.42
BS-TA-B12 1.5 2.79 0.89 1.9 0.94 1.9
BS-TA-B14 0.77 1.82 0.6 1.99 3.59 13.71
BS-TA-B17 0.31 0.86 0.12 0.23 0.14 0.41
BS-TA-B21 1.3 2.73 0.83 1.8 1.53 5.46
BS-TA-50 11.22 >16 5.03 >16 0.99 7
BS-TA-60 1.36 5.12 1.61 3.86 0.9 2.98
BS-TA-61 0.61 1.61 0.31 1.28 0.73 1.9
BS-TA-62 0.78 3.48 0.42 0.97 1.42 3.85
BS-TA-63 1.26 4.6 1.48 3.89 3.73 10.37
BS- TA- 64 0.84 2.82 0.33 0.7 0.25 0.87
BS-TA-65 0.16 1.08 0.074 0.12 0.04 0.08
BS- TA-71 0.47 0.76 0.13 0.39 0.15 0.41
BS-TA-72 1.5 2 0.28 0.47 0.35 0.71
BS-TA-73 1.38 2.74 0.27 0.73 0.21 0.68
BS- TA-74 0.8 1.8 0.26 1.57 0.19 0.49
表 1 (续)
实施例 14: 本发明的 2-位胺化亚甲基或 2-位酯化亚甲基丹参酮 I衍生 物抗人多发性骨髓瘤细胞活性测定
(1) 实验材料
骨髓瘤细胞林: RPMI 8226(多发性骨髓瘤),购自上海复祥生物科技 有限公司。
试剂: 同实施例 13.
主要仪器: 细胞培养箱 (型号: Thermo Scientific 3111 ) , 酶标仪
基丹参酮 I衍生物, 用二甲基亚砜充分溶解, 配成 10 mg/mL的母液, 置 4°C水箱避光保存, 实验前以细胞培养液稀释至所需浓度。
取生长良好的上述肿瘤细胞 6000个,接种到 96孔细胞培养板孔内。 培养液为含 10%胎牛血清的 1640细胞培养液。 加入不同浓度的 2-位胺 化亚甲基或 2-位酯化亚甲基丹参酮 I衍生物, 混匀后, 置于二氧化碳 ( 5%C02 ) 细胞培养箱 37。C培养 72小时。 然后用 MTT法测定活细胞 浓度。 在本实验中对照组(不加化合物处理) 细胞活力设为 100%, 并 计算出化合物作用后细胞活力(% )和 72小时白血病细胞半数生长抑制 浓度 (72 ' j、时 IC5。值, g/mL)。
(3) 实验结果:
实验结果见表 2。
表 2显示本发明的 2-位胺化亚甲基或 2-位酯化亚甲基丹参酮 I衍生 物能诱导人骨髓瘤细胞死亡和抑制肿瘤细胞生长。 与丹参酮 I本身相 比, 其中本发明 2-位胺化亚甲基或 2-位酯化亚甲基丹参酮 I衍生物 BS-TA-65 , BS-TA-72对 RPMI 8226细胞株抑制率提高 7倍以上。 实施例 15: 本发明 2-位胺化亚甲基和 2-位酯化亚甲基丹参酮 I衍生物 抗人实体瘤作用测定
(1) 实验材料
人实体瘤细胞株:
Hep-2(喉癌)、 A549(人肺癌)、 CaEs-17(食道癌细胞)、 PC-3(前列腺 癌)、 CNE (鼻咽癌细胞)、 SK-OV-3(卵巢癌细胞), 均购自中国典型培养 物保藏中心; RKO(人结肠腺癌细胞)、 MGC-803(人胃癌细胞)、 MG-63(骨 肉瘤)、 U87-MG (恶性脑胶质瘤细胞), 均购自上海复祥生物科技有限公 司; PANC-1(胰腺癌)、 Hep G2(人肝癌细胞)、 Becap-37(人乳腺癌细胞)、 Hela (人宫颈癌细胞), 均受赠于浙江大学肿瘤研究所。
试剂: 同实施例 13
主要仪器: 细胞培养箱 (型号: Thermo Scientific 3111 ) , 酶标仪 (型号: Bio-Rad iMark ) 。
(2) 实验方法
丹参酮 I ( TA )标准品及本发明的 2-位胺化亚甲基或 2-位酯化亚甲 基丹参酮 I衍生物, 用二甲基亚砜充分溶解, 配成 10 mg/mL的母液, 置 4°C水箱避光保存, 实验前以细胞培养液稀释至所需浓度。
取生长良好的人实体瘤细胞 4000个,接种到 96孔细胞培养板孔内。 培养液为含 10%胎牛血清的 DMEM高糖细胞培养液。置于二氧化碳( 5% C02 ) 细胞培养箱 37。C培养 24小时, 然后, 加入不同浓度的 2-位胺化 亚甲基或 2-位酯化亚甲基丹参酮 I衍生物, 混匀后, 继续置二氧化碳 ( 5%C02 ) 细胞培养箱 37。C培养 72小时。 然后用 MTT法测定活细胞 浓度。 在本实验中对照组(不加化合物处理) 细胞活力设为 100%, 并 计算出化合物作用后细胞活力(% )和 72小时白血病细胞半数生长抑制 浓度 (72 ' j、时 IC5。值, g/mL)。
(3) 实验结果
实验结果见表 2。
表 2显示本发明的 2-位胺化亚甲基或 2-位酯化亚甲基丹参酮 I衍生 物能诱导人实体瘤细胞死亡和抑制这些肿瘤细胞生长。 与丹参酮 I本身 比较, 本发明的 2-位胺化亚甲基或 2-位酯化亚甲基丹参酮 I衍生物抗实 体瘤细胞活性明显增强, 其中本发明的 BS-TA-65对本实验中所测的细 胞株均表现出了良好的广谱抗肿瘤活性,尤其在抗 U87-MG (恶性脑胶质 瘤细胞)方面活性提高 42倍以上;此外,化合物 BS-TA-71, BA-TA-B03 , BS-TA-B 17抗 A549(人肺癌)活性提高至 4倍以上; 化合物 BS-TA-B 17 抗 PANC-1(胰腺癌)和 CaEs-17(食道癌细胞)方面活性分别提高 10倍和 7 倍以上; BS-TA-71, BS-TA-72 , BS-TA-B 17抗 Hep-G2(人肝癌细胞)方 面提高 3倍以上; BS-TA-71, BS-TA-B01抗 Becap-37(人乳腺癌细胞)活 性提高 7倍以上; 化合物 BS-TA-71抗 Hep-2(喉癌)活性提高 4倍以上; BS-TA-B01抗 MG-63(骨肉瘤)活性提高近 3倍; BS-TA-71抗 Hela (人宫 颈癌细胞)活性提高 8倍以上, BS-TA-71, BA-TA-B 12抗 CNE (鼻咽癌细 胞)活性提高 11倍以上。
颈癌细胞)活性提高 8倍以上, BS-TA-71 , BA-TA- B12抗 CNE (鼻咽癌 细胞)活性提高 11倍以上。 表 2: 2-位胺化亚曱基或 2-位酯化亚甲基丹参酮 I衍生物对多发性 骨髓瘤和人实体瘤细胞生长抑制浓度测定( 72小时, IC5。值和 IC9。值, g/mL ) .
表 2 (续)
Becap-37 MG-63
R O 化合物 ic
50 IC90 ic
50 IC90 ic
50 I 0 IC
50 IC90
TA 3.03 >16 0.96 >16 2.19 22.13 1.83 〉16
BS-TA- A01 4.74 10.76 2.87 13.99 4.82 16 1.46 13.44
BS-TA-A03 14.24 >16 4.86 >16 10.59 >16 2.77 >16
BS-TA-B01 0.43 3.73 0.38 14.93 1.25 9.41 0.17 16
BS-TA-B03 4 9.37 4.53 12.99 4.69 22.1 1 0.49 14.56
BS-TA-B06 5.9 >16 4.76 >16 13.51 >16 3.42 >16
BS-TA-B07 5.23 14.34 8.14 >16 8.46 >16 0.93 17.04
BS-TA-BIO >16 >16 >16 >16 >16 >16 5.47 >16
BS-TA-B12 3.34 7.38 3.37 5.49 3.8 7.96 0.7 5.26
BS-TA- B14 4.6 >16 4.86 >16 16 >16 3.36 >16
BS-TA-B17 0.76 1.77 0.78 1.76 0.56 1.82 0.125 1.3
BS-TA-B21 6.73 15.08 4.68 15.31 7.3 25.75 2.46 27.85
BS-TA-50 8.1 >16 1.67 >16 >16 >16 2.5 >16
BS- TA-60 1.88 3.67 1.24 5.23 2.5 5.97 0.52 1.88
BS-TA-61 2.54 4.92 2.34 6.79 2.95 9.75 0.46 6.98
BS-TA-62 5.04 11.64 4.88 >16 5.41 22.56 0.47 >16
BS-TA- 63 16 >16 14.13 >16 15.65 >16 1.86 17.63
BS- TA-64 0.77 1.67 0.82 2.16 1.31 3.66 0.29 5.56
BS-TA-65 0.27 0.68 0.31 0.98 0.31 1.5 0.037 0.29
BS-TA-71 0.4 0.9 0.61 1.79 0.66 1.85 0.14 1.28
BS-TA- 72 1.02 1.94 1.08 2.56 0.71 3.85 0.25 2.38
BS- TA-73 1.06 1.91 1.01 3.71 1.39 4.64 0.2 0.87
BS-TA-74 0.85 1.81 1.02 3.26 1.35 5.26 0.28 2.88 表 2 (续)
U87-MG Hela CaEs-17 CNE 化合物 ic50 IC 0 ic50 IC90 ic50 IC90 ic50 IC90
TA 6.36 14.63 4 >16 3.18 16.00 7.4 >16
BS-TA- AO 1 5.71 14.15 4.5 14.86 6.36 12.67 4.1 45
BS-TA-A03 >16 >16 5 >16 15.48 >16 8.5 >16
BS-TA-B01 0.74 8 1.31 16.22 0.97 3.81 0.817 39
BS-TA-B03 2.36 3.85 3.99 10.96 5.55 10.35 8.8 43.58
BS-TA-B06 6.5 >16 7.49 >16 19.26 >16 11.787 >16
BS-TA-B07 10.07 21.22 6.86 18.47 9.16 19.68 9 >16
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