WO2013026383A1 - 5-位碳取代的汉防己甲素衍生物、及其制备方法和应用 - Google Patents

5-位碳取代的汉防己甲素衍生物、及其制备方法和应用 Download PDF

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WO2013026383A1
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alkyl
substituted
tetrandrine
heteroaryl
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徐荣臻
荣风光
谢福文
赖洪喜
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杭州本生药业有限公司
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    • C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
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    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
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    • C07D491/14—Ortho-condensed systems
    • C07D491/147—Ortho-condensed systems the condensed system containing one ring with oxygen as ring hetero atom and two rings with nitrogen as ring hetero atom
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    • C07D491/12—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains three hetero rings
    • C07D491/18—Bridged systems

Definitions

  • the present invention belongs to the field of natural medicines and medicinal chemistry, and relates to novel tetrandrine derivatives, particularly 5-position carbon-substituted tetrandrine derivatives, and methods for preparing the same, compositions comprising the same, and Use in the preparation of anti-tumor drugs. Background technique
  • Tetradrine also known as tetrandrine, chemical formula (6,6,7,12-tetramethoxy-2,2,dimethyl berbamine), is the root of Chinese herbal medicine A bisbenzylisoquinoline alkaloid extracted from the block. Tetrandrine inhibits central nervous system and has anti-inflammatory, analgesic and antipyretic effects. Because of its direct expansion of peripheral blood vessels, P-bar pressure is significant and long-lasting, so it can be used for rheumatic pain, arthritis, neuralgia, and muscle. Pain and various types of high blood pressure.
  • Tetrandrine has a negative inotropic effect on the heart, negative frequency and negative conduction, and reduces myocardial oxygen consumption, which can prolong myocardial refractory period and atrioventricular conduction, increase myocardial blood flow, and reduce total peripheral circumference.
  • the vascular resistance causes the blood pressure to drop, and the non-reflective heart rate increases when the P-bar pressure is applied. Since the after-load is reduced, the cardiac output can be increased.
  • ⁇ tetrandrine has a proliferation inhibitory effect on cervical cancer HeLa cells.
  • the MTT assay was used to inhibit the effect. Apoptosis was detected by flow cytometry and laser confocal microscopy. It was confirmed that tetrandrine has a proliferation inhibitory effect on cervical cancer HeLa cells in a time- and concentration-dependent manner.
  • Tetrandrine inhibits the proliferation of liver cancer cells. After the action of tetrandrine on hepatocellular carcinoma cells, it caused the production of reactive oxygen species within 2 hours. With the increase of dose, the production of ROS increased significantly, suggesting that tetrandrine may produce reactive oxygen species by interfering with the function of mitochondria. Cellular lipid peroxidation, damage to DNA molecules or regulation of apoptosis-related genes inhibits proliferation of liver cancer cells. (Jing Xubin et al., Experimental study on the oxidative damage of hepatoma cells induced by tetrandrine, Clinical Journal of Clinical Hepatology, 2002, 18 (6), 366).
  • tetrandrine has a significant growth inhibitory effect on human neuroblastoma TGW. Studies have shown that as the dose increases, the inhibitory effect increases gradually, and the inhibitory effect is also enhanced with the prolongation of the action time, with good dose-time correlation (Li Yusong et al., Clinical Pediatrics Journal, tetrandrine-induced neuroblasts) A study on the risk of TDW apoptosis in tumor strains, 2006, 24 (6), 512).
  • the tetrandrine has the above-mentioned interference with tumor cells, inhibits its proliferation and proliferation, induces apoptosis, and increases tumor growth, and also regulates P-glycoprotein-mediated drug resistance of multi-drug resistant cells and down-regulates the drug resistance gene mdrl mRNA. expression.
  • tetrandrine can promote the cancer cells after irradiation to enter the M phase from the G2 phase, reducing the repair time of radiotherapy cell damage, thereby achieving the purpose of radiosensitization.
  • the experiment selected low-concentration Hsweepingjia to study the radiosensitization effect, and found that the survival fraction of TE1 cells decreased exponentially with the increase of radiation dose, and the radiation sensitization reached 0.52 at 0.5 g/mL drug concentration, indicating that tetrandrine was cultured in vitro.
  • the esophageal cancer cells have a certain radiosensitizing effect, and the mechanism may be to release the G2+M phase arrest by increasing the expression of the cyclic protein cyclin B l .
  • One of the objects of the present invention is to provide a novel 5-substituted substituted tetrandrine derivative of the formula (I) or a pharmaceutically acceptable adduct, complex or salt thereof: among them,
  • X is selected from the group consisting of oxygen, sulfur, nitrogen and carbonyloxy
  • R is independently selected from H, dC 6 alkyl, C 3 -C 7 cycloalkyl or cycloalkenyl, aryl or heteroaryl, aryl-dC 3 alkyl, heteroaryl-dC 3 alkyl, aromatic Oxy-dC 3 alkyl, heteroaryloxy-dC 3 alkyl, when X is a carbonyloxy group, R may also be dC 6 alkoxy or dC 6 alkylthio, when X is nitrogen, two R may form a non-aromatic nitrogen-containing heterocyclic ring or a nitrogen-containing heteroaryl group together with the nitrogen atom to which they are attached; the non-hydrogen group is optionally substituted with a group selected from the group consisting of halogen, amino, Ci-Q; Alkylamino, nitro, cyano, hydroxy, dC 6 alkoxy, fluorenyl and dC 6 alkylthio; said cycloalkyl, cycloal
  • the 5-position carbon-substituted tetrandrine derivative of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof is represented by the formula (I-b) (wherein X is a carbonyloxy group)
  • non-hydrogen group is optionally substituted with a group selected from the group consisting of: halogen , amino, dC 6 alkylamino, nitro, tt, hydroxy, dC 6 alkoxy, fluorenyl and dC 6 alkylthio; said aryl and heteroaryl optionally being selected from C C6 alkyl, hydroxy Substituents of dC 6 alkyl and fluorenyl Ci-C 6 alkyl groups.
  • the 5-position carbon-substituted tetrandrine derivative or a pharmaceutically acceptable salt thereof is represented by the formula (I-c) (wherein X is nitrogen)
  • the 5-position carbon-substituted tetrandrine derivative of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof is represented by the formula (Id) or (Ie ) (X in the formula I is oxygen) Or sparse),
  • R 2 is selected from dC 6 alkyl, aryl, C 3 -C 7 cycloalkyl or cyclodecyl, aryl-dC 3 alkyl, heteroaryl-C C3 alkyl, heterocyclyl-dC 3 Alkyl, aryloxy-dC 3 alkyl, heteroaryloxy-dC 3 alkyl, said group optionally substituted by a group selected from the group consisting of: halogen, amino, Ci-Q; alkylamino a nitro group, a cyano group, a hydroxyl group, a dC 6 alkoxy group, a fluorenyl group and a dC 6 alkylthio group; the cyclo
  • the 5-position-substituted tetrandrine derivative of the formula (I) of the present invention can be obtained by a two-step reaction as shown in the above formula.
  • a third object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition comprising a compound of the present invention, the pharmaceutical composition comprising at least one compound of the present invention, and optionally a pharmaceutically acceptable excipient.
  • a fourth object of the present invention is to provide a use of a compound of the present invention or a pharmaceutical composition comprising the same for the preparation of a medicament, particularly an antitumor medicament. Accordingly, the invention provides a method of treating a tumor patient comprising administering to a patient in need of treatment a therapeutically effective amount of at least one compound of the invention.
  • the tumor is particularly selected from the group consisting of leukemia, multiple myeloma, lymphoma, liver cancer, gastric cancer, breast cancer, cholangiocarcinoma, pancreatic cancer, lung cancer, colon cancer, osteosarcoma, melanoma, human cervical cancer, glioma, Nasopharyngeal cancer, laryngeal cancer, esophageal cancer, middle ear tumor, prostate cancer, etc.
  • the invention also relates to compounds of the invention for use in the treatment of tumors.
  • Figure 1 Dynamic changes in the effects of BS-TE-403 and BS-TE-333 on body weight of rats;
  • Figure 2 Dynamic curves of the effects of BS-TE-403 and BS-TE-333 on transplanted tumors in human lung cancer;
  • Figure 3 Photograph of human lung cancer xenografts in rats administered BS-TE-403 and BS-TE-333;
  • Figure 4 Effect of BS-TE-403 and BS-TE-333 on the weight of transplanted lung cancer in mice;
  • Figure 5 Inhibition of lung cancer xenografts in rats by BS-TE-403 and BS-TE-333;
  • Figure 6 Dynamic changes in the effects of BS-TE-354 on body weight in rats;
  • Figure 7 Dynamic curve of the effect of BS-TE-354 on human lung cancer xenografts
  • Figure 8 Photograph of human lung cancer xenografts in rats administered BS-TE-354;
  • Figure 10 Inhibition of BS-TE-354 on human lung cancer xenografts. detailed description
  • the present invention provides a novel class of tetrandrine derivatives having antitumor activity, particularly 5-position-substituted tetrandrine derivatives.
  • the present invention relates to a 5-position-substituted tetrandrine derivative of the formula (I) or a pharmaceutically acceptable compound thereof Accepted adduct, complex or salt
  • X is selected from the group consisting of oxygen, sulfur, nitrogen and carbonyloxy
  • R is independently selected from H, dC 6 alkyl, C 3 -C 7 cycloalkyl or cycloalkenyl, aryl or heteroaryl, aryl-dC 3 alkyl, heteroaryl-dC 3 alkyl, aromatic Oxy-dC 3 alkyl, heteroaryloxy-dC 3 alkyl, when X is a carbonyloxy group, R may also be dC 6 alkoxy or dC 6 alkylthio, when X is nitrogen, two R may form a non-aromatic nitrogen-containing heterocyclic ring or a nitrogen-containing heteroaryl group together with the nitrogen atom to which they are attached; the non-hydrogen group is optionally substituted with a group selected from the group consisting of halogen, amino, C C6 alkyl Amino, nitro, cyano, hydroxy, dC 6 alkoxy, fluorenyl and dC 6 alkylthio; said cycloalkyl, cycloal
  • non-hydrogen group is optionally substituted with a group selected from the group consisting of: halogen , amino, dC 6 alkylamino, nitro, tt, hydroxy, dC 6 alkoxy, fluorenyl and dC 6 alkylthio; said aryl and heteroaryl optionally being selected from C C6 alkyl, hydroxy Substituents of dC 6 alkyl and fluorenyl Ci-C 6 alkyl groups.
  • the 5-position carbon-substituted tetrandrine derivative of the formula (Ib) or a pharmaceutically acceptable salt thereof is selected from the group consisting of C r C 6 alkyl, aryl and heteroaryl.
  • the 5-position carbon-substituted tetrandrine derivative of the formula (Ib) or a pharmaceutically acceptable salt thereof is selected from the group consisting of methyl, ethyl, propyl, isopropyl, phenyl, and Methylaminophenyl, furyl, thienyl, methylthienyl and the like.
  • X in the formula (I) is nitrogen
  • the 5-position carbon-substituted tetrandrine derivative of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof is represented by the formula (I-c).
  • Fc where, and independently selected from hydrogen, dC 6 alkyl, c 3 -c 7 cycloalkyl or cycloalkenyl, aryl -Dc 3 alkyl group, a heteroaryl group -dC 3 alkyl, aryloxy - dC 3 alkyl, heteroaryloxy - dC 3 alkyl, or form a non-aromatic-containing and R 2 together with the nitrogen atom to which they are attached nitrogen heterocycle or nitrogen-containing aryl group; a non-hydrogen group optionally substituted with a group selected from the group consisting of: halogen, amino, C C6 alkyl, nitro, cyano, hydroxy, dC 6 alkyl group, a mercapto group, and dC 6 alkylthio; said cycloalkyl, cycloalkenyl, aryl, heteroaryl, a nitrogen-containing heterocyclic group or an optionally substituted heteroaryl selected from C r
  • the 5-position carbon-substituted tetrandrine derivative of the formula (Ic) or a salt thereof is a compound of the formula, wherein R 2 is independently selected from the group consisting of hydrogen, dC 6 alkyl, C 3 -C 7
  • R 2 is independently selected from the group consisting of hydrogen, dC 6 alkyl, C 3 -C 7
  • the non-hydrogen group is substituted with a group selected from the group consisting of an amino group, a CC 6 alkane a base amino group, a nitro group, a cyano group, a hydroxyl group, a CC 6 alkoxy group; the cycloalkyl group, cycloalkenyl group, aryl group, heteroaryl group, nitrogen-containing heterocyclic ring or nitrogen-containing heteroaryl group is selected from C r C The group of 6 alkyl, hydroxy CC 6 alkyl and phenyl is substituted.
  • the 5-position carbon-substituted tetrandrine derivative of formula (Ic) or a pharmaceutically acceptable salt thereof and independently selected from hydrogen, optionally hydroxy or C r C 6 alkoxy substituted ( ⁇ - (6-alkyl, optionally substituted with hydroxy or ( ⁇ - (6 alkoxy-substituted on C 3 -C 7 cycloalkyl, aryl optionally substituted dC 6 alkyl-substituted aryl group a non-aromatic nitrogen-containing heterocyclic ring of -d-Cs alkyl, heteroaryl-heteroaryl-CC 3 alkyl optionally substituted by C r C 6 alkyl, or together with R 2 and the nitrogen atom to which they are attached Or a nitrogen-containing heteroaryl group, optionally selected from the group consisting of hydroxyl, hydroxy dC 6 alkyl, amino, dC 6 alkylamino, dC 6 alkyl, tt,
  • the 5-position carbon-substituted tetrandrine derivative of the formula (Ic) or a pharmaceutically acceptable salt thereof and independently selected from hydrogen, dC 3 alkoxy-substituted dC 3 alkyl, C 3- C 6 cycloalkyl, arylmethyl, aryl (methyl)methyl, heteroarylmethyl, or 1 and R 2 together with the nitrogen atom to which they are attached form a non-aromatic nitrogen-containing heterocyclic group
  • the non-aromatic nitrogen-containing heterocyclic group is optionally selected from the group consisting of a hydroxyl group, a hydroxyl group C r C 6 alkyl group, an amino group, a C r C 6 alkylamino group, and a Ci-C 6 group.
  • Substituents of alkyl, cyano, nitro and phenyl groups are optionally selected from hydrogen, dC 3 alkoxy-substituted dC 3 alkyl, C 3- C 6 cyclo
  • the non-aromatic nitrogen-containing heterocyclic ring is a 5-7 membered ring, optionally in addition to And the linked nitrogen atom further contains 1-2 heteroatoms selected from nitrogen, oxygen and sulfur; more preferably, the non-aromatic nitrogen-containing heterocycle is pyrrolidinyl, pyrrolinyl, piperidinyl, piperazinyl , morpholinyl, thiomorpholinyl, diazepane.
  • the aryl group in the aryl group-containing group is preferably a phenyl group; an aryl group in the aryl group is preferably a heteroaryl optionally substituted with dC 3 alkyl substituted pyridyl, optionally substituted dC 3 alkyl substituted furyl or optionally substituted by C r C 3 alkyl substituted thienyl.
  • X in the formula (I) is oxygen or sulfur
  • the 5-position carbon-substituted tetrandrine derivative of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof is represented by the formula (Id) or (Ie).
  • R 2 is selected from dC 6 alkyl, aryl, C 3 -C 7 cycloalkyl or cycloalkenyl, aryl-dC 3 alkyl, heteroaryl-C C3 alkyl, heterocyclyl-dC 3 Alkyl, aryloxy-dC 3 alkyl, heteroaryloxy-dC 3 alkyl, said group optionally substituted by a group selected from the group consisting of: halogen, amino, Ci-Q; alkylamino a nitro group, a cyano group, a hydroxyl group, a dC 6 alkoxy group, a fluorenyl group and a dC 6 alkylthio group; the cycloalkyl group, cycloalkenyl group, aryl group and heteroaryl group are optionally selected from a C 6 alkyl group, The group of the hydroxy C r C 6 alkyl group and the fluorenyl C r C 6 alkyl
  • R 2 is selected from aryl -CC 3 alkyl, aryl, heteroaryl -dC 3 alkyl, aryloxy - dC 3 alkyl, heteroaryloxy - dC 3 alkyl.
  • the aryl group or the heteroaryl group in the aryl group-containing group is substituted with a group selected from a halogen and a dC 6 alkoxy group.
  • the aryl group in the aryl group-containing group is preferably a phenyl group ; hetero aryl radical in the heteroaryl group is preferably a pyrazolyl 0 3 ⁇ 4, imidazolyl or thienyl.
  • the 5-position carbon-substituted tetrandrine derivative of the present invention is shown below. These examples are only intended to further illustrate the present invention and are not intended to limit the scope of the invention.
  • the invention particularly preferably exemplifies the following compounds of formula (I):
  • 5-(m-Thienylmethoxy-methylene)-barbital has been shown to have antitumor activity, and the preferred compounds of the present invention have significantly superior antitumor activity to tetrandrine TTD.
  • the present invention relates to compounds of the formula (I) of the invention in the form of their salts, solvates, hydrates, adducts, complexes, polymorphs and prodrugs.
  • alkyl refers to a straight or branched alkyl group containing the specified number of carbon atoms, for example, C r C 6 alkyl, dC 5 alkyl, C r C 4 alkyl, C r C 3 Alkyl and the like.
  • alkyl groups include, but are not limited to, methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, t-butyl, n-pentyl, n-hexyl, and the like.
  • C 3 -C 7 cycloalkyl or cycloalkenyl refers to a saturated (cycloalkyl) or unsaturated (cycloalkenyl) 3-7 membered monocyclic hydrocarbon group, including a 3-4 membered ring, 3-5 Yuanhuan, 3-6 yuan ring.
  • the C 3 -C 7 cycloalkyl group may be a cyclopropyl group, a cyclobutyl group, a cyclopentyl group, a cyclohexyl group, a cycloheptyl group, a cyclopentenyl group, and a cyclohexyl group.
  • aryl refers to a monocarbocyclic aryl group having 6 to 14 carbon atoms or a fused or non-fused polycarbocyclic aryl group. In the case of a polycarbocyclic ring, as long as one carbocyclic ring is aromatic, can.
  • the aryl group also includes an aryl group fused to a heterocyclic group. Examples of the aryl group are a phenyl group, a biphenyl group, a naphthyl group, a 5,6,7,8-tetrahydronaphthyl group, a 2.3-dihydrobenzofuranyl group and the like.
  • heteroaryl refers to an aromatic ring group containing from 1 to 4 heteroatoms (eg 1, 2, 3 or 4 heteroatoms) as ring members in the ring. Heteroatoms refer to nitrogen, oxygen or sulfur.
  • the heteroaryl group may be a monocyclic heteroaryl group having 5 to 7 ring atoms, or a bicyclic heteroaryl group having 7 to 11 ring atoms. As long as one ring of the bicyclic aryl group is an aromatic heterocyclic ring, the other may be Aromatic or non-aromatic, heteroatom-containing or heteroatom-free.
  • heteroaryl group examples are, for example, a pyrrolyl group, a pyrazolyl group, an imidazolyl group, an oxazolyl group, a pyridyl group, a pyrimidinyl group, a furyl group, a thienyl group, an isoxazolyl group, a fluorenyl group and the like.
  • the "nitrogen-containing heteroaryl group” means a "heteroaryl group” as defined above containing at least one nitrogen atom as a ring member.
  • Heterocyclyl has a non-aromatic ring group containing from 1 to 4 heteroatoms (e.g. 1, 2, 3 or 4 heteroatoms) as ring members. Heteroatoms refer to nitrogen, oxygen or sulfur.
  • the heterocyclic group may be a monocyclic heterocyclic group having 4 to 8 ring atoms (for example, a 4-7 membered ring, a 5-7 membered ring, a 5-6 membered ring), or a bicyclic heterocyclic ring having 7 to 11 ring atoms. Ring base.
  • Heterocyclyl groups can be saturated, or unsaturated but non-aromatic.
  • heterocyclic groups are azetidinyl, pyrrolidinyl, pyrrolinyl, tetrahydrofuranyl, dihydrofuranyl, piperazinyl, piperidinyl, morpholinyl, thiomorpholinyl, tetrahydropyran Base, tetrahydrothiol and the like.
  • nitrogen-containing heterocyclic group means a “heterocyclic group” as defined above containing at least one nitrogen atom as a ring member.
  • halogen means fluoro, chloro, bromo or iodo.
  • alkylamino refers to an amino group substituted with one or two alkyl groups having the specified number of carbon atoms, including cycloalkyl groups.
  • alkoxy includes alkoxy and cycloalkyloxy.
  • alkylthio alkylthio and cycloalkylthio.
  • pharmaceutically acceptable admixtures and complexes of the compounds of formula (I) refers to products in which the compounds of the present invention are further combined with other small molecules or biomacromolecules by non-chemical or non-covalent intramolecular forces.
  • the term "pharmaceutically acceptable salts of the compounds of formula (I)" is an organic acid salt formed from an organic acid which forms a pharmaceutically acceptable anion; these organic acid salts include, but are not limited to, toluene Acid salt, methanesulfonate, malate, acetate, citrate, malonate, tartrate, succinate, benzoate, ascorbate, (X-ketoglutarate and X-glycerol phosphate; suitable inorganic salts are also formed; these include, but are not limited to, hydrochlorides, sulfates, nitrates, hydrogencarbonates and carbonates, phosphates, hydrobromides, hydrogen iodides Acid salt, etc. Pharmaceutically acceptable salts can be obtained using standard procedures well known in the art. For example, it is produced by administering a sufficient amount of a basic compound and a suitable pharmaceutically acceptable anion.
  • polymorph refers to the solid crystalline form of a compound of the invention or a complex thereof. Different polymorphs of the same compound may exhibit different physical, chemical and/or spectral properties. Different physical properties include, but are not limited to, stability (eg, for heat or light), compressibility and density (important for formulation and product production), and dissolution rate (which can affect bioabsorbability and availability).
  • Differences in stability can result in chemical reactivity (eg, differential oxidation, such that when formulated from one polymorph, fades faster than when formed from another polymorph) or mechanical properties (eg, as storage) Changes in the kinetically favorable polymorphic tablet granules converted to thermodynamically more stable polymorphs) or both (for example, a polymorphic tablet is more susceptible to breakage at high humidity) .
  • the different physical properties of polymorphs can affect their processing. For example, one polymorph may be more likely to form a solvate than the other or may be more difficult to filter or wash away than the other due to the different shape or size distribution of the particles.
  • hydrate refers to a compound of the invention or a salt thereof, which further comprises a stoichiometric or non-stoichiometric amount of water bound by non-covalent intermolecular forces.
  • prodrug refers to a derivative which can be hydrolyzed, oxidized or otherwise reacted under biological conditions (in vitro or in vivo) to provide a compound of the invention. Prodrugs undergo this reaction to become active compounds only under biological conditions, or they are active in their unreacted form. Prodrugs can generally be prepared using well-known methods, for example, 1 Burger's Medicinal Chemistry and Drug Discovery (1995) 172-178, 949-982 (Manfred E. Wolff Editor, 5th Edition) and J. Rautio's Prodrugs and Targeted Delivery (201 1) 31-60 (Wiley-VCH, Methods and Principles in Medicinal Chemistry, Vol. 47) and G. Thomas's Fundamentals of Medicinal Chemistry (2003) 195-200 (Wiley).
  • treating generally refers to obtaining the desired pharmacological and/or physiological effects.
  • the effect # may completely or partially prevent the disease or its symptoms, may be prophylactic; and/or may be therapeutic based on partial or complete stabilization or cure of the disease and/or side effects due to the disease.
  • treatment encompasses any treatment for a patient's condition, including: (a) prevention of a disease or condition that is predisposed to a disease or condition but has not yet been diagnosed; (b) inhibition of the symptoms of the disease, That is, to prevent its development; or (c) to alleviate the symptoms of the disease, that is, to cause the disease or symptoms to degenerate.
  • the preparation method of the compound of the formula (I) of the invention is as follows:
  • the raw material tetrandrine of the formula (I) can be isolated by natural extraction.
  • the chloromethylation reaction is generally carried out at low temperature or at room temperature.
  • R and X in the formula (I) are the same as defined above in the formula (I).
  • the tetrandromethylene ester derivative of the 5-position esterified methylene group of the formula (I-b) of the present invention can be obtained by the reaction shown in the above formula.
  • Heating, nucleophilic substitution reaction produces a 5-position esterified methylene tetrandrine derivative of the formula (Ib).
  • the base used in the above reaction includes, but is not limited to, an inorganic base.
  • an inorganic base For example: sodium hydride, sodium hydroxide, potassium hydroxide, lithium hydroxide.
  • the sodium organic acid may be a commercially available reaction raw material, or an organic acid may be used to form an organic sodium salt in the reaction system.
  • the temperature of the above reaction depends on the reactivity of the organic acid radical, and may be from 50 to 80 ° C.
  • the above reaction is generally carried out in a solvent.
  • Solvents for the reaction include, but are not limited to, acetonitrile, hydrazine, hydrazine-dimethylformamide, tetrahydrofuran.
  • the base used in the above reaction includes, but is not limited to, an organic base.
  • an organic base for example: ⁇ , ⁇ -diisopropylethylamine. (DIPEA), triethylamine (TEA), pyridine, 4-dimethylaminopyridine (DMAP).
  • the temperature of the above reaction depends on the reactivity of the organic acid amine, and may be from 50 to 80 ° C.
  • the above reaction is generally carried out in a solvent.
  • Solvents for the reaction include, but are not limited to, acetonitrile, hydrazine, hydrazine-dimethylformamide, tetrahydrofuran.
  • R 2 and X are the same as defined above in the formula (I). ((1) as a leaving group in the reaction.
  • Tetrandrine I -a (X CI)
  • the 5-position alkoxy methylene tetrandrine derivative of the formula (I-d) of the present invention can be obtained by the reaction shown in the above formula.
  • the base used in the above reaction includes, but is not limited to, an inorganic base.
  • an inorganic base For example: Sodium hydride, sodium hydroxide, potassium hydroxide, lithium hydroxide.
  • the organic sodium alcohol may be a commercially available reaction raw material, and an alcohol may be used to form an organic sodium alcohol in the reaction system.
  • the temperature of the above reaction depends on the reactivity of the alcohol and may be 50 - 80 °C.
  • Solvents for the reaction include, but are not limited to, acetonitrile, hydrazine, hydrazine-dimethylformamide, tetrahydrofuran.
  • R ⁇ X in the formula (Id) is the same as defined above in the formula (I).
  • X which is C1 acts as a leaving group in the reaction.
  • the 55-position alkanethiothiomethylene methyl-based Han Han anti-anti-self-methyl-derived derivative bio-cocoa by the invention of the invention ((II--ee)) The reverse reaction shown in the above formula should be prepared. .
  • the reaction reaction of chlorochloromethylation by BBllaanncc RReeaaccttiioonn is carried out to form 55-chlorochloromethylmethylhanhan anti-self-methanol.
  • the above-mentioned reverse reaction should be such that the alkali base package for use includes, but is not limited to, an inorganic alkali-free base.
  • examples are as follows: For example, sodium hydrogen hydride, sodium sodium oxyhydrogen oxyhydroxide, potassium hydrogen oxyhydroxide, lithium lithium oxyhydroxide, and lithium lithium oxyhydroxide.
  • the organic sodium thiosulfanol sodium sodium may be a commercially available reverse reaction raw material, or the organic thiol alcohol may be used in the reaction system. Zhongsheng is formed into organic sodium sodium thiophanate. .
  • the temperature and temperature dependence of the above-mentioned reverse reaction is determined by the reactivity of the reaction with organic thiol alcohol, and may be 5500 - 8800. . CC..
  • the above-mentioned reverse reaction should generally be carried out in a solvent.
  • the solvent solution package for the reverse reaction includes, but is not limited to, acetonitrile, hydrazine, hydrazine-dimethyl dimethyl carbamide, tetratetrahydrofuranfuran . .
  • the IIUU XX is the same as the above definition in the general formula ((II)): XX ((for CC11))
  • the reaction is carried out as a leaving group. .
  • X is selected from the group consisting of a hydroxyl group, a thiol group, an amino group, and a halogen.
  • Raw materials for the above reaction organic acid, organic sodium salt, organic acid anhydride, organic acid halide, alcohol, Schulcanol, sodium alkoxide, sodium sulphate, and organic amines are all commercially available.
  • the tetrandrine material is isolated and extracted from natural products and is commercially available.
  • the general operation of the above reaction may be, but not limited to, the addition of a suitable ratio of the reactant starting material and the base or condensing agent to the acetonitrile solution of 5-chloromethylhanaline.
  • the reaction was carried out under heating and stirring for several hours, and then the resulting product was extracted with an organic solvent, washed with water and brine, dried and concentrated to give a crude product. It is then purified by high performance liquid chromatography to obtain a pure product. Blanc Reaction chloromethylation reaction (G. Blanc, Bull. Soc. Chim.
  • Protecting groups are those which, once attached to an active moiety (eg, a hydroxyl or amino group), prevent such protecting groups include, but are not limited to, alkyl, benzyl, allyl, trityl (ie, triphenylmethyl)
  • An acyl group for example, benzoyl, acetyl or HOOC-X"-CO-, X" is an alkylene, alkenylene, cycloalkylene or arylene group
  • a silyl group for example, Trimethylsilyl, triethylsilyl and tert-butyldimethylsilyl
  • alkoxycarbonyl aminocarbonyl (for example, dimethylaminocarbonyl, methylethylaminocarbonyl and phenylaminocarbonyl), Alkoxymethyl, benzyloxymethyl and alkyl fluorenylmethyl.
  • amino protecting group examples include, but are not limited to, an alkoxycarbonyl group, an alkanoyl group, an aryloxycarbonyl group, an aryl-substituted alkyl group, and the like. Hydroxyl and amino protecting groups are available at TW Greene and PGM Wuts , Protective Groups in Discussed in Organic Synthesis, 2nd Edition, John Wiley and Sons (1991). Both the 3 ⁇ 4 group and the amino protecting group can be removed by a conventional method after the reaction.
  • the invention also provides a pharmaceutical composition comprising a compound of formula I of the invention.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition comprising at least one of the compounds of formula I of the present invention as described above, and optionally a pharmaceutically acceptable excipient.
  • Methods of preparing the pharmaceutical compositions include incorporation of suitable pharmaceutical excipients, carriers, diluents and the like.
  • the pharmaceutical preparation of the present invention is produced by a known method, including a conventional mixing, dissolving or lyophilizing method.
  • the compounds of the present invention can be formulated into pharmaceutical compositions and administered to a patient in a variety of routes suitable for the chosen mode of administration, e.g., orally or parenterally (by intravenous, intramuscular, topical or subcutaneous routes).
  • the compounds of the invention may be administered systemically, e.g., orally, in combination with a pharmaceutically acceptable carrier such as an inert diluent or an edible carrier. They can be enclosed in hard or soft gelatin capsules and can be compressed into tablets.
  • a pharmaceutically acceptable carrier such as an inert diluent or an edible carrier.
  • the active compound may be combined with one or more excipients and in the form of swallowable tablets, buccal tablets, tablets, capsules, elixirs, suspensions, syrups, wafers, and the like.
  • Such compositions and preparations should contain at least 0.1% of active compound.
  • the ratio of such compositions and formulations may of course vary and may range from about 1% to about 99% by weight of a given unit dosage form.
  • the amount of active compound is such that an effective dosage level can be obtained.
  • Tablets, lozenges, pills, capsules, and the like may also contain: a binder such as tragacanth, acacia, corn starch or gelatin; an excipient such as dicalcium phosphate; a disintegrant such as corn starch , potato starch, alginic acid, etc.; a lubricant such as magnesium stearate; and a sweetener such as sucrose, fructose, lactose or aspartame; or a flavoring agent such as mint, wintergreen or cherry.
  • a binder such as tragacanth, acacia, corn starch or gelatin
  • an excipient such as dicalcium phosphate
  • a disintegrant such as corn starch , potato starch, alginic acid, etc.
  • a lubricant such as magnesium stearate
  • a sweetener such as sucrose, fructose, lactose or aspartame
  • a flavoring agent such as mint, winter
  • any material used to prepare any unit dosage form should be pharmaceutically acceptable and substantially non-toxic in the amounts employed.
  • the active compound can be incorporated into sustained release formulations and sustained release devices.
  • the active compound can also be administered intravenously or intraperitoneally by infusion or injection.
  • An aqueous solution of the active compound or a salt thereof, optionally a miscible non-toxic surfactant, can be prepared.
  • Dispersing agents in glycerin, liquid polyethylene glycols, triacetin and mixtures thereof, and oils can also be prepared. Under ordinary conditions of storage and use, these preparations contain a preservative to prevent the growth of microorganisms.
  • the pharmaceutical dosage form suitable for injection or infusion may comprise a sterile aqueous solution or dispersion of the active ingredient (optionally encapsulated in a liposome) comprising a ready-to-use preparation suitable for sterile injectable or infusible solutions or dispersions. Or sterile powder.
  • the final dosage form must be sterile, liquid, and stable under the conditions of manufacture and storage.
  • the liquid carrier can be a solvent or liquid dispersion medium including, for example, water, ethanol, polyol (for example, glycerol, propylene glycol, liquid polyethylene glycol, and the like), vegetable oils, non-toxic glycerides, and suitable mixtures thereof.
  • Appropriate fluidity can be maintained, for example, by liposome formation, by maintaining the desired particle size in the case of dispersing agents, or by the use of surfactants.
  • Microbial action can be prevented by various antibacterial and antifungal agents (e.g., parabens, chlorobutanol, phenol, sorbic acid, thimerosal, etc.).
  • isotonic agents such as sugars, buffers or sodium chloride.
  • Prolonged absorption of the injectable compositions can be brought about by the use of compositions that delay the absorption (e.g., aluminum monostearate and gelatin).
  • Sterile injectable solutions are prepared by combining the required active compound in a suitable solvent with the various other ingredients listed above, followed by filter sterilization.
  • the preferred preparation methods are vacuum drying and lyophilization techniques which result in a powder of the active ingredient plus any additional ingredients present in the previously sterile filtration solution.
  • Useful solid carriers include 4 divided solids (e.g., talc, clay, ⁇ twinned cellulose, silica, alumina, etc.).
  • Useful liquid carriers include water, ethanol or ethylene glycol or water-ethanol
  • the I glycol mixture, the compound of the present invention may be dissolved or dispersed in an effective amount, optionally with the aid of a non-toxic surfactant.
  • Adjuvants e.g., flavors
  • additional antimicrobial agents can be added to optimize the properties for a given use.
  • Thickeners can also be used with liquid carriers to form coatable pastes, gels, ointments. , soap, etc., used directly on the user's skin.
  • the therapeutic requirements of a compound or an active salt or derivative thereof depend not only on the particular salt selected, but also on the mode of administration, the nature of the disease to be treated, and the age and condition of the patient, ultimately depending on the attending physician or clinician decision.
  • unit dosage form is a unit dosage unit containing a physical dispersion unit suitable for administration to humans and other mammalian bodies.
  • the unit dosage form can be a capsule or tablet, or a lot of capsules or tablets.
  • the amount of unit dose of the active ingredient can vary or be adjusted from about 0.1 to about 1000 grams or more.
  • the invention further provides the use of a compound of the invention or a composition comprising the compound for the preparation of a medicament, in particular an antitumor medicament. Accordingly, the invention provides a method of treating a tumor patient comprising administering to a patient in need of treatment a therapeutically effective amount of at least one compound of the invention.
  • the 5-position carbon-substituted tetrandrine derivative of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof can be used, for example, for treating leukemia, multiple myeloma, lymphoma, liver cancer, gastric cancer, breast cancer, cholangiocarcinoma, pancreatic cancer , lung cancer, colorectal cancer, osteosarcoma, melanoma, human cervical cancer, glioma, nasopharyngeal carcinoma, laryngeal cancer, esophageal cancer, middle ear tumor, prostate cancer and other tumors.
  • the compound BS-TE-202 LC- was prepared by reacting 5-chloromethyl-barbital with hydrazine, hydrazine-dimethylglycine according to the method of preparing BS-TE-215 using the same reagent and solvent. MS 1.04 min (63.88%), 1.13 min (3 1.41%, s.); m/z 739.6 [M+H] + .
  • the compound BS-TE-204 LC-MS was prepared by reacting 5-chloromethyl-tansine with 4-dimethylaminobenzoic acid according to the method of preparing BS-TE-215 using the same reagent and solvent. 1.36min (90.68%); m/z 800.9 [M+H] + , 401.4 [ 1/2 M+H] + .
  • the compound BS-TE-213 LC was prepared by reacting 5-chloromethyl-barbital with 4-methylthiazole-5-carboxylic acid according to the method of preparing BS-TE-215 using the same reagent and solvent. - MS 1. 13 min (42.48%), 1.20 min (57.52%, isomer); m/z 653.8 [M+H] + , 327.8 [ 1/2 M+H]+.
  • the compound BS-TE-224 was prepared by reacting 5-chloromethyl-tansine with benzoic acid according to the method of preparing BS-TE-215 using the same reagent and solvent.
  • the compound BS-TE-307 was prepared by reacting 5-chloromethyl-nodalin with morpholine according to the method of preparing BS-TE-305 using the same alkaline reagent and solvent:
  • the compound BS-TE-308 was prepared by reacting 5-chloromethyl-nodalin with 4-hydroxypiperidine according to the method of preparing BS-TE-305 by using the same alkaline reagent and solvent:
  • the compound BS-TE-322 was prepared by reacting 5-chloromethyl-nodalin with 3-hydroxypyrrolidine according to the method of preparing BS-TE-305 using the same alkaline reagent and solvent: LC-MS 1.03min (59.49%), l. l lmin (31.36%, isomer). m/z 722.9 [M+H] + , 362.3 [1/2 M+H] + .
  • the compound BS-TE-323 was prepared by reacting 5-chloromethyl-nodalin with 4-cyanopiperidine according to the method of preparing BS-TE-305 using the same basic reagent and solvent:
  • the compound BS-TE-329 LC was prepared by reacting 5-chloromethyl-nodalin with 2,5-dihydropyrrole according to the method of preparing BS-TE-305 using the same alkaline reagent and solvent.
  • -MS l. lOmin (45.45%), 1.34 min (31.32%, isomer).
  • the compound BS-TE-333 LC was prepared by reacting 5-chloromethyl-nodalin with 1-isopropylpiperazine according to the method of preparing BS-TE-305 using the same alkaline reagent and solvent. -MS 1.06min (97.06%). m/z 763.9 [M+H] + , 383.0 [1/2 M+H] + .
  • the compound BS-TE-334 LC was prepared by reacting 5-chloromethyl-nosine with N-hydroxyethylpiperazine according to the method of preparing BS-TE-305 using the same alkaline reagent and solvent. -MS 1.02min (98.72%). m/z 765.9 [M+H] + , 384.0 [1/2 M+H] + .
  • the compound BS-TE-340 was prepared by reacting 5-chloromethyl-nodalin with 3-methoxypropylamine according to the method of preparing BS-TE-305 using the same alkaline reagent and solvent. MS 1.07 min (73.86%), 1.12 min (14.47%, isomer). m/z 724.9 [M+H] + , 363.4 [1/2 M+H] + .
  • the compound BS-TE-351 LC was prepared by reacting 5-chloromethyl-nodalin with 3-hydroxymethylpiperidine according to the method of preparing BS-TE-305 using the same alkaline reagent and solvent. -MS 1.28 min (83.02%), 1.42 min (16.98%, isomer). m/z 750.9 [M+H] + , 376.4 [1/2 M+H] + .
  • the compound BS-TE-352 was prepared by reacting 5-chloromethyl-nodalin with 2-methylaminopyridine according to the method of preparing BS-TE-305 using the same alkaline reagent and solvent.
  • LC-MS 1.33min (54.28%), 1.74min (0.28%, isomer).
  • the compound BS-TE-354 LC was prepared by reacting 5-chloromethyl-nodalin with 4-dimethylaminopiperidine according to the method of preparing BS-TE-305 using the same basic reagent and solvent. -MS 1.21min (91.1%). m/z 763.9 [M+H] + , 383.0 [1/2 M+H] + .
  • the compound BS-TE-356 LC was prepared by reacting 5-chloromethyl-nodalin with N-methylhomopiperazine according to the method of preparing BS-TE-305 using the same alkaline reagent and solvent. -MS 1.24min (84.77%). m/z 750.0 [M+H] + , 375.9 [1/2 M+H] + .
  • the compound BS-TE- was prepared by reacting 5-chloromethyl-nodalin with 1-methoxy-2-propanol according to the method of preparing BS-TE-418 by using the same alkaline reagent and solvent. 406: LC-MS 1.22 min (85.14%). m/z 725.8 [M+H] + , 363.8 [1/2 M+H] + .
  • the compound BS-TE-41 1 was prepared by reacting 5-chloromethyl-nodalin with 3-pyridinemethanol according to the method of preparing BS-TE-418 by using the same alkaline reagent and solvent.
  • the compound BS-TE-416 LC was prepared by reacting 5-chloromethyl-nodalin with 3-methoxypropanol according to the method of preparing BS-TE-418 using the same basic reagent and solvent. -MS 1.22min (92.15%). m/z 725.9 [M+H] + , 363.8 [1/2 M+H] + .
  • the compound BS-TE-417 was prepared by reacting 5-chloromethyl-nodalin with 3-tetrahydrofuran methanol according to the method of preparing BS-TE-418 by using the same alkaline reagent and solvent: LC-MS 1.20 Min (99.34%). m/z 737.9 [M+H] + , 369.8 [1/2 M+H] + .
  • Example 5 Anti-leukemia activity of the 5-position carbon-substituted tetrandrine derivative of the present invention Determination
  • Leukemia cell line leukemia cell line: K562/adr (resistant chronic myeloid leukemia, CML), NB4 (acute promyelocytic leukemia, AML), Kasumi-1 (acute myeloid leukemia M2, AML-M2), Jurkat (acute lymphocytic leukemia, ALL), the above cell lines were all donated to the Institute of Cancer Research, Zhejiang University; H9 (acute lymphocytic leukemia, ALL), purchased from the China Center for Type Culture Collection.
  • TTD tetrandrine
  • 6000 well-grown leukemia cells were inoculated into the wells of a 96-well cell culture plate.
  • the culture broth was a 1640 cell culture medium containing 10% fetal calf serum.
  • Different concentrations of tetrandrine were added, mixed, and placed in a carbon dioxide (5% C0 2 ) cell culture incubator 37. C was cultured for 72 hours.
  • the viable cell concentration was then determined by the MTT method.
  • the cell viability of the control group (without compound treatment) was set to 100%, and the cell viability (%) after compound action and the half-growth inhibition concentration of leukemia cells at 72 hours (72 h IC 5 value and IC 9 were calculated). value).
  • Table 1 shows that the 5-position carbon-substituted tetrandrine derivative of the present invention can induce cell death of human chronic myeloid leukemia, acute myeloid leukemia and acute lymphocytic leukemia and inhibit the growth of these leukemia cells, and tetrandrine itself.
  • the activity of the 5-position carbon-substituted tetrandrine derivative BS-TE-329 against K562/adr (resistant chronic myeloid leukemia, CML) of the present invention is improved by nearly 4 times; BS-TE-305, BS-TE-321, BS-TE-329, BS-TE-346, BS-TE-350, BS-TE-354, BS-TE-355, BS-TE-359, BS-TE-360
  • A-anti-Kasumi-1 acute myeloid leukemia M2, AML-M2
  • BS-TE-346, BS-TE-350, BS-TE-354, BS-TE-355, BS -TE-358, BS-TE-360 is better than tetrandrine against Jurkat (acute lymphocytic leukemia, ALL) activity increased nearly 4 times; BS-TE-402 anti-NB4 (acute promyelocytic leukemia, AML)
  • Table 1 Determination of growth inhibition concentration of leukemia cells, human multiple myeloma and lymphoma cells at the 5-position carbon-substituted tetrandrine derivative (72 hours, IC 5 (g/mL) value and IC 9 . g/mL) value).
  • Example 6 5-position carbon-substituted tetrandrine derivative of the present invention for anti-human multiple myeloma and lymphoma cell activity assay
  • Myeloma and lymphoma cell line RPMI8226 (multiple myeloma), purchased from Shanghai Fuxiang Biotechnology Co., Ltd.
  • Table 2 shows that the 5-position carbon-substituted tetrandrine derivative of the present invention can induce human myeloma and lymphoma cell death and inhibit the growth of these tumor cells, wherein the 5-position carbon-substituted tetrandrine derivative of the present invention is derived.
  • BS-TE-305, BS-TE-342 increased the activity of tetrandrine anti-RPMI8226 (multiple myeloma) by more than 60 times, and BS-TE-329 by nearly 90 times.
  • Example 7 The anti-human solid tumor effect of the 5-position carbon-substituted tetrandrine derivative of the present invention Determination
  • Human solid tumor cell lines Hep-2 (larynx cancer), A549 (human lung cancer), CaES-17 (esophage cancer cells), PC-3 (prostate cancer), CNE (nasopharyngeal carcinoma cells), SK-OV-3 (ovarian cancer cells), all purchased from the China Center for Type Culture Collection; RKO (human colon adenocarcinoma), MGC 803 (human gastric cancer cells), MG63 (osteosarcoma), U87 MG (malignant glioma cells), All purchased from Shanghai Fuxiang Biotechnology Co., Ltd.; PANC-1 (pancreatic cancer), Huh7 (human liver cancer cells), Becap37 (human breast cancer cells), Hela (human cervical cancer cells), all received from Zhejiang University Cancer Research All.
  • the culture solution was a DMEM high glucose cell culture medium containing 10% fetal calf serum. Place in a carbon dioxide (5% C0 2 ) cell culture incubator 37. C was cultured for 24 hours, and then, different concentrations of tetrandrine derivatives were added, and after mixing, carbon dioxide (5% C0 2 ) cell incubator 37 was further placed. C was cultured for 72 hours. Then, the concentration of the living cells was measured by the MTT method, and the cell viability (%) after the action of the drug was calculated. In this experiment, the cell viability of the control group (without compound treatment) was set to 100%.
  • Table 2 shows that the 5-position carbon-substituted tetrandrine derivative of the present invention can induce human solid tumor cell death and inhibit the growth of these tumor cells, and compared with tetrandrine itself, the 5-position carbon-substituted Han Fang of the present invention
  • the activity of the A derivative against solid tumor cells is significantly enhanced, wherein the activity of the 5-position carbon-substituted tetrandrine derivative BS-TE-305 of the present invention against A549 (human lung cancer) is improved by nearly 3 times; BS-TE-317 , BS-TE-354 anti-PANC-1 (pancreatic cancer) activity increased by 2 times, BS-TE-354 anti-Huh7 (human liver cancer cell) activity increased nearly 8 times; BS-TE-317, BS-TE-333, BS-TE-346, BS-TE-350, BS-TE-354, BS-TE-355, BS-TE-359, BS-TE-360 anti-MGC 803
  • Table 2 Determination of the half-growth inhibition concentration of tetrandrine derivatives on human solid tumor cells (72 hours, IC 5 o (g/mL) value and IC 9 og/mL)
  • BS-TE-411 1.09 2.55 1.32 3.33 8.00 >16 It can be seen from the in vitro test data of the implementations of Li 6 and 7, that the compounds of the present invention tested have antitumor activity.
  • the compound of the formula (Ic) and the compound of the formula (Id) and the formula (Ie) have stronger antitumor activity than the compound of the formula (Ib).
  • the IC5 () values of the compounds of formula (Ic), formula (Id) and formula (Ie) tested for at least one tumor cell line were lower than or equivalent to the control compound TTD.
  • Example 8 Determination of activity of a tumor in a partial 5-carbon-substituted tetrandrine derivative of the present invention and preliminary test of toxicity.
  • Experiment 8-1 Inhibition of lung cancer xenografts in rats by BS-TE-403 and BS-TE-333
  • Cell line human non-small cell lung cancer cell line A549, derived from China Center for Type Culture Collection (CCTCC);
  • tetrandrine TTD is derived from Jiangxi Jinfurong Biological Co., Ltd. All compounds are 50 mg/kg body weight/time dose
  • the above tumor cells in the logarithmic growth phase were collected under aseptic conditions, and the cell volume (live cell rate >95%) of 5 ⁇ 10 6 /0.2 ml/mouse was subcutaneously injected into the right axilla of the mouse to establish a non-small human.
  • Cell lung cancer mouse xenograft model The above tumor cells in the logarithmic growth phase were collected under aseptic conditions, and the cell volume (live cell rate >95%) of 5 ⁇ 10 6 /0.2 ml/mouse was subcutaneously injected into the right axilla of the mouse to establish a non-small human. Cell lung cancer mouse xenograft model.
  • the experiment was divided into 4 groups: negative control group (solvent group), positive control group (lead compound TTD group), BS-TE-403 group and BS-TE-333 group.
  • the drug was administered on the third day after inoculation.
  • Each mouse was intragastrically administered with 0.4 mL per day for 3 times.
  • the administration time was 8 points, 14 points, 20 points, and the interval was 6 hours, and the administration was continued for 10 days.
  • the body weight and tumor diameter were measured every 5 days on the 0th day before the administration, and the body weight and tumor growth dynamic maps were made.
  • On the 27th day the tumor was dissected and weighed.
  • the tumor inhibition rate (%) was calculated by the inhibition rate of the control group.
  • Figure 1 shows the dynamic changes in the effects of BS-TE-403 and BS-TE-333 on body weight of rats.
  • BS-TE-403 showed no significant weight loss compared with the control group, indicating that BS-TE-403 had no significant side effects at this dose.
  • BS-TE-333 showed a significant decrease in body weight, indicating that BS-TE-333 had toxic side effects at this dose.
  • Figure 2 shows the dynamic curves of the effects of BS-TE-403 and BS-TE-333 on human lung cancer xenografts.
  • BS-TE-403 and BS-TE-333 have anti-tumor effects on transplanted lung cancer in mice.
  • Figure 3 shows a graph of lung cancer xenografts in rats
  • Figure 4 shows the effects of BS-TE-403 and BS-TE-333 on the weight of transplanted lung cancer in mice
  • Figure 5 shows the inhibitory effects of BS-TE-403 and BS-TE-333 on transplanted human lung cancer xenografts.
  • the inhibition rate of BS-TE-403 on transplanted lung cancer xenografts was 29.08%
  • the inhibition rate of BS-TE-333 on transplanted lung cancer xenografts was 31.15%.
  • BS-TE-403 and BS-TE-333 have inhibitory effects on human lung cancer xenografts.
  • Experiment 8-2 Inhibition of BS-TE-354 on human lung cancer xenografts
  • Cell line human non-small cell lung cancer cell line A549, derived from China Center for Type Culture Collection (CCTCC);
  • Reagent BS-TE-354 (present invention), dose of 50 mg/kg body weight/time
  • the tumor cells in the logarithmic growth phase were collected under aseptic conditions, and the cell volume (live cell rate >95%) of 1.3 ⁇ 10 7 /0.2 ml/mouse was injected subcutaneously into the right axilla of the mouse to establish human non-human.
  • Small cell lung cancer mouse xenograft model The tumor cells in the logarithmic growth phase were collected under aseptic conditions, and the cell volume (live cell rate >95%) of 1.3 ⁇ 10 7 /0.2 ml/mouse was injected subcutaneously into the right axilla of the mouse to establish human non-human.
  • Small cell lung cancer mouse xenograft model Small cell lung cancer mouse xenograft model.
  • the experiment was divided into three groups: negative control group (solvent group), positive control group (gefitinib, Jef), and BS-TE-354 group.
  • the drug was administered on the third day after inoculation.
  • Each mouse was intragastrically administered with 0.4 ml each time, and the drug was administered three times a day.
  • the administration time was 8 points, 14 points, 20 points, and the interval was 6 hours, and the administration was continued for 10 days.
  • the body weight and tumor diameter were measured every 5 days on the 0th day before the administration, and the body weight and tumor growth dynamic maps were made.
  • On the 29th day the tumor was dissected and weighed.
  • the tumor inhibition rate was 0, and the drug was calculated. Tumor inhibition rate after the action (%).
  • Figure 6 shows the dynamic changes in the effect of BS-TE-354 on body weight of rats. As shown in Fig. 6, BS-TE-354 showed a significant decrease in body weight compared with the control group, indicating that BS-TE-354 had toxic side effects at this dose.
  • Figure 7 shows the dynamic curve of the effect of BS-TE-354 on rat lung cancer xenografts.
  • Figure 8 is a graph showing the tumor of a human lung cancer transplanted in rats.
  • Figure 9 shows the effect of BS-TE-354 on the weight of transplanted tumors in human lung cancer.
  • Figure 10 shows the inhibitory effect of BS-TE-354 on transplanted human lung cancer xenografts. As shown in the above table and figure, in vivo experiments, the inhibition rate of BS-TE-354 on lung cancer xenografts was 43.60%.
  • BS-TE-354 inhibited the transplanted lung cancer in mice.

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Abstract

本发明属于天然药物及药物化学领域，具体涉及通式（I）的新型5-位碳取代的汉防己甲素衍生物或其药学上可接受的加成物，复合物和盐，制备这些化合物的方法、包含该化合物的药物组合物及其在制备抗肿瘤药物中的用途。

Description

5-位破取代的汉防己甲素衍生物、 及其制备方法和应用 技术领域
本发明属于天然药物及药物化学领域， 并涉及新型汉防己甲素衍 生物， 特别是 5-位碳取代的汉防己甲素衍生物， 及制备这些化合物的方 法、 包含该化合物的组合物及其在制备抗肿瘤药物中的用途。 背景技术
汉防己甲素 (tetrandrine， TTD), 又叫粉防己碱， 化学式（ 6,6，, 7,12- 四甲氧基 -2,2，二甲基小檗胺） ， 是从中草药防己的根块中提取的双苄基 异喹啉类生物碱。 汉防己甲素对中枢神经有抑制作用， 有消炎、 镇痛、 退热作用， 由于其直接扩张周围血管， P条压作用显著而持久， 因此可用 于风湿性疼痛、 关节炎、 神经痛、 肌肉痛及各种类型的高血压。 汉防己 甲素对心脏有负性肌力作用， 负性频率作用及负性传导作用， 并降低心 肌耗氧量， 可延长心肌的不应期和房室传导， 增加心肌血流量， 降低总 外周血管阻力， 使血压下降， P条压时无反射性心率增快， 由于后负荷降 低， 心输出量可增加。 这些作用均与其钙拮抗作用有关。 因此， 各国的 科学家对汉防己甲素及其衍生物和类似物进行了广泛的研究。 （季宇彬 等. 中药抗肿瘤有效成分药理与应用. 哈尔滨： 黑龙江科学技术出版社, 1995; Su, J. Y. Naunyn- Schmiedeberg ' s Arch Pharmacol. 1993.
347:445-451; Wei, N.; Sun, H.; Wang, F. P. Cancer Chenother Pharmacol.
2011, 67: 1017-1025; Rahman, A. U. Chem Pharm Bull, 2004, 52(7): 802; 汪纪武等. 植物药有效成分手册. 北京： 人民卫生出版社， 1986; Knox, V.
D. Use of tetrandrine and its derivatives to treat malaria. [P]. US 5025020. 1991; Virginio, C; Graziani, F.; Terstappen, G. C. Neuroscience Letters.
2005. 381 :299-304; Karen, O. L.; Carolina, G. A.; Alexey, v. E.; Anatoly, K.
Y. Org. Biomol. Chem. 2004, 2: 1712-1718; 林沐彬等，粉防己碱 -N-氧化 物的化学研究，化学学报， 1984, 42(2): 199-203; Tsutsumi, T.; Kobayashi,
S.; Liu, Y. Y.; Kontani, Η. Biol. Pharm. Bull. 26(3):313-317. )
Figure imgf000003_0001
Oxyacanthine 7-O-ethyl tetrandrine 5-Bromotetrandrine 尖刺碱 7-0-乙基汉防己甲素 5-溴代汉防己甲素
CAS: 15352-74-6
Figure imgf000003_0002
Cocsoline Thalrugosaminine Cepharanthine 防己索林 绉唐松草宁 千金藤素
CAS: 54352-70-4 CAS: 22226-73-9 CAS: 481 -49-2
Figure imgf000003_0003
Cycleanine
环轮藤宁 防己苏林 鹤氏唐松草碱 CAS: 518-94-5 CAS: 26279-88-9 CAS: 6681 -13-6
Figure imgf000003_0004
Ν,Ν'-dibenzyl-tetrandrine
Ν,Ν'-二苄基 -汉防己甲素
Figure imgf000004_0001
Tetrandrine Berbamine
汉防己甲素
小檗胺 Tetrandrine 2'-N- β-oxide CAS: 518-34-3
CAS: 478-61-5 汉防己甲素 2' -Ν-β-氧化物 汉防己甲素及其衍生物和类似物
^汉防己甲素对宫颈癌 HeLa细胞具有增殖抑制作用^ 研究采用 MTT法， 抑制作用。 通过流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测细胞凋亡情况。 实 验证明， 汉防己甲素对宫颈癌 HeLa细胞具有增殖抑制作用， 且呈时间、 浓度依赖性。 （朱克修等， 粉防己碱诱导宫颈癌细胞凋亡的定性定量研 究， 西安交通大学学报 (医学版)， 2010, 31 (1)， 102 ) 。
汉防己甲素能抑制肝癌细胞的增殖。 汉防己甲素作用于肝癌细胞 后，在 2小时内引起活性氧的产生， 随着剂量的增大， ROS产生明显增加， 提示汉防己甲素可能通过干扰细胞线粒体的功能而产生活性氧， 引起细 胞脂质过氧化、损伤 DNA分子或调节细胞凋亡相关基因而抑制肝癌细胞 的增殖。 （荆绪斌等， 汉防己甲素诱导肝癌细胞氧化损伤的实验研究， 临 床肝胆病杂志， 2002， 18 (6)， 366)。
此外报道了体外汉防己甲素对人神经母细胞瘤 TGW有明显的生长 抑制作用。 研究显示， 随着剂量的增大， 抑制作用逐渐增强， 随着作用 时间的延长抑制作用也明显增强， 有着良好的剂量时间相关性（李巍松 等， 临床儿科杂志， 汉防己甲素诱导神经母细胞瘤株 TDW凋亡作用的 实险研究， 2006， 24 ( 6 ) ， 512 ) 。
汉防己甲素具有上述干扰肿瘤细胞， 抑制其分裂增殖， 诱导细胞 凋亡， 肿瘤生长之外， 还能调节 P-糖蛋白介导的多要耐药细胞的耐药 性及下调耐药基因 mdrlmRNA表达。
有报道通过体外实验证明汉防己甲素用于耐药肺癌后， 耐药指数 有用阿霉素时的 5.43 降至 1.89， 说明汉防己甲素可以逆转 GLC-82/ADR耐药肺癌细胞对阿霉素的耐药。 此外， 有研究汉防己甲 素对人乳腺癌多药耐药株 MCF-7/ADR的逆转作用， 发现 2.5 μπιοΙ/L 的汉防己甲素可使阿霉素对耐药肿瘤的细胞毒性增加 20.4倍。证明汉 防己甲素对肿瘤 ADR逆转具有极大的潜在作用。 （徐萌等， 汉方己 甲素逆转肺癌化疗耐药和凋亡抗性的实 3 研究，实用癌症杂志， 2003， 18( 4 ) : 347; Fu, L. W, et al. The multidrug resistance of tumour cells was reversed by tetrandrine in vitro and in xenografts derived from human breast adenocarcinoma MCF-7/adr cells. European Journal of Cancer, 2002, 38(3):418 ) 。
此外， 临床实验还证实， 汉防己甲素可促进照射后的癌细胞由 G2期进入 M期， 减少放疗细胞损伤修复时间， 从而达到放疗增敏的 目的。
有报道通过对汉防己甲素增加乳腺癌细胞放射敏感性的实验研 究得出， 细胞受照射后诱导的周期阻滞与 p53基因功能有密切关系。 细胞在受到 γ射线照射后，其 Cyclin B l与 Cdc2蛋白表达水平明显降 低， 分裂指数也明显降低， 说明汉防己甲素是一种 G2期阻滞清除剂， 能显著增加 γ射线对人乳腺癌细胞的杀伤作用。 除此之外， 还有研究 发现汉防己甲素对人食管癌 TE1细胞立体实验具有放射增敏作用。实 验选取低浓度汉防己甲 来研究放射增敏效应，发现 TE1细胞存活分 数随辐射剂量增高呈指数型下降， 0.5 g/mL药物浓度时放射增敏最 大达 1.62， 说明汉防己甲素对体外培养的食管癌细胞具有一定放射增 敏作用， 其机制可能是通过增加周期蛋白 cyclin B l表达解除细胞 G2+M期阻滞。 （田庆中等， 汉方己甲素增加乳腺癌细胞放射敏感性 的实验研究， 东南大学学报， 2005， 24 ( 4 ) ， 233 ; 于静萍等， 汉防 己甲素对体外培养食管癌细胞放射增敏作用的初步研究， 中华放射肿 瘤学杂志， 2010 , 19 ( 6 ) ， 568 ) 。
显而易见， 市场仍需高活性的汉防己甲素药物。 迄今， 尚未见到 5-位被碳原子取代与修饰的汉防己甲素衍生物的合成和应用的报道。 发明内容
本发明的目的之一是提供特征为通式 (I)的新型 5-位取代的汉防己 甲素衍生物或其药学上可接受的加成物， 复合物或者盐：
Figure imgf000006_0001
其中，
X选自氧、 硫、 氮和羰氧基；
n为 1或 2， 其中当 X为氧或石克时， n=l ; 当 X为氮时， n=2;
R独立地选自 H、 d-C6烷基、 C3-C7环烷基或环烯基、 芳基或杂芳基、 芳基 -d-C3烷基、杂芳基 -d-C3烷基、芳氧基- d-C3烷基、杂芳氧基- d-C3 烷基， 当 X为羰氧基时， R还可以为 d-C6烷氧基或 d-C6烷硫基， 当 X 为氮时， 两个 R可以与它们连接的氮原子一起形成非芳香含氮杂环或含 氮杂芳基； 所述非氢基团任选地被选自下组的基团取代： 鹵素、 氨基、 Ci-Q;烷基氨基、 硝基、 氰基、 羟基、 d-C6烷氧基、 巯基和 d-C6烷硫 基； 所述环烷基、 环烯基、 芳基、 杂芳基、 含氮杂环或含氮杂芳基任选 地被选自 d-C6烷基、 羟基 d-C6烷基、 巯基 d-C6烷基和苯基的基团取 代。
根据本发明的一个实施方案， 本发明的 5-位碳取代的汉防己甲素 衍生物或其药学上可接受的盐由通式 (I-b)代表（式 I中 X为羰氧基）
Figure imgf000006_0002
其中， 选自 H、 d-C6烷基、 芳基或杂芳基、 d-C6烷氧基、 d-C6烷硫 基， 所述非氢基团任选地被选自下组的基团取代： 鹵素、 氨基、 d-C6 烷基氨基、 硝基、 tt、 羟基、 d-C6烷氧基、 巯基和 d-C6烷硫基； 所 述芳基和杂芳基任选地被选自 C C6烷基、 羟基 d-C6烷基和巯基 Ci-C6 烷基的基团取代。
根据本发明的另一实施 本发明的 5-位碳取代的汉防己甲素衍 生物或其药学上可接受的盐由通式 (I-c)代表（式 I中 X为氮）
Figure imgf000007_0001
其中， 和 独立地选自氢、 d-C6烷基、 c3-c7环烷基或环烯烃基、 芳 基 -d-C3烷基、 杂芳基 -d-C3烷基、 芳氧基 - d-Cs烷基、 杂芳氧基 - C C3 烷基， 或者 和 R2与它们连接的氮原子一起形成非芳香含氮杂环或含 氮杂芳基； 所述非氢基团任选地被选自下组的基团取代： 鹵素、 氨基、 C C6烷基氨基、 硝基、 氰基、 羟基、 d-C6烷氧基、 巯基和 d-C6烷硫 基； 所述环烷基、 环烯基、 芳基、 杂芳基、 含氮杂环或含氮杂芳基任选 地被选自 d-C6烷基、 羟基 CrC6烷基、 巯基 d-C6烷基的基团取代和苯 基的基团取代。
根据本发明的另一实施方案， 本发明的 5-位碳取代的汉防己甲素 衍生物或其药学上可接受的盐由通式 (I-d)或 （I-e )代表（式 I中 X为 氧或疏 )， 其中， R2选自 d-C6烷基、 芳基、 C3-C7环烷基或环諦基、 芳基 -d-C3烷 基、 杂芳基 -C C3烷基、 杂环基 -d-C3烷基、 芳氧基 - d-C3烷基、 杂芳 氧基 - d-C3烷基， 所述基团任选地被选自下组的基团取代： 鹵素、氨基、 Ci-Q;烷基氨基、 硝基、 氰基、 羟基、 d-C6烷氧基、 巯基和 d-C6烷硫 基； 所述环烷基、 环烯基、 芳基和杂芳基任选地被选自 C C6烷基、 羟 基 CrC6烷基和巯基 CrC6烷基的基团取代。 本发明的目的之二是提供制备本发明通式（I ) 5-位取代的汉防己 甲素衍生物的方法：
Figure imgf000008_0001
f 本发明通式（I ) 5-位取代的汉防己甲素衍生物可按上式所示由两步 反应制取。 先将汉防己甲素与甲醛在盐酸和二氯化辞存在下， 由布兰克 (Blanc Reaction)氯甲基化反应， 生成 5-氯甲基汉防己甲素 (I-a, X=C1); 再 由 5-氯甲基汉防己甲素 (I-a, X=C1)与相应的有机小分子， 经取代反应或 缩合反应生成通式（I ) 5-位取代的汉防己甲素衍生物。 式 (I)中 R和 X 与上文在通式 (I)中的定义相同。 本发明的目的之三是提供包含本发明化合物的药物组合物， 所述 药物组合物包括至少一种本发明化合物， 和任选的药学上可以接受的 赋形剂。
本发明的目的之四是提供本发明化合物或包含该化合物的药物组 合物在制备药物、 特别是抗肿瘤药物中的用途。 相应地， 本发明提供 一种治疗肿瘤患者的方法， 包括给予需要治疗的患者治疗有效量的至 少一种本发明的化合物。 所述肿瘤特别选自白血病、 多发性骨髓瘤、 淋巴瘤、 肝癌、 胃癌、 乳腺癌、 胆管细胞癌、 胰腺癌、 肺癌、 大肠癌、 骨肉瘤、 黑色素瘤、 人宫颈癌、 神经胶质瘤、 鼻咽癌、 喉癌、 食管癌、 中耳肿瘤、 前列腺癌等。
本发明还涉及用于治疗肿瘤的本发明的化合物。 附图简要说明
图 1 : BS-TE-403和 BS-TE-333对棵鼠体重影响的动态变化； 图 2: BS-TE-403和 BS-TE-333对棵鼠人肺癌移植瘤影响的动态曲 线；
图 3:在施用 BS-TE-403和 BS-TE-333的棵鼠中的人肺癌移植瘤照 片；
图 4: BS-TE-403和 BS-TE-333对棵鼠人肺癌移植瘤重量的影响； 图 5: BS-TE-403和 BS-TE-333对棵鼠人肺癌移植瘤的抑制作用； 图 6: BS-TE-354对棵鼠体重影响的动态变化；
图 7: BS-TE-354对棵鼠人肺癌移植瘤影响的动态曲线；
图 8: 在施用 BS-TE-354的棵鼠中的人肺癌移植瘤照片；
图 9: BS-TE-354对棵鼠人肺癌移植瘤重量的影响；
图 10: BS-TE-354对棵鼠人肺癌移植瘤的抑制作用。 具体实施方式
本发明提供一类具有抗肿瘤活性的新型汉防己甲素衍生物、 特别 是 5-位取代的汉防己甲素衍生物。
本发明涉及通式 (I)的 5-位取代的汉防己甲素衍生物或其药学上可 接受的加成物、 复合物或者盐
Figure imgf000010_0001
其中，
X选自氧、 硫、 氮和羰氧基；
n为 1或 2， 其中当 X为氧或石克时， n=l ; 当 X为氮时， n=2;
R独立地选自 H、 d-C6烷基、 C3-C7环烷基或环烯基、 芳基或杂芳基、 芳基 -d-C3烷基、杂芳基 -d-C3烷基、芳氧基- d-C3烷基、杂芳氧基- d-C3 烷基， 当 X为羰氧基时， R还可以为 d-C6烷氧基或 d-C6烷硫基， 当 X 为氮时， 两个 R可以与它们连接的氮原子一起形成非芳香含氮杂环或含 氮杂芳基； 所述非氢基团任选地被选自下组的基团取代： 鹵素、 氨基、 C C6烷基氨基、 硝基、 氰基、 羟基、 d-C6烷氧基、 巯基和 d-C6烷硫 基； 所述环烷基、 环烯基、 芳基、 杂芳基、 含氮杂环或含氮杂芳基任选 地被选自 d-C6烷基、 羟基 d-C6烷基、 巯基 d-C6烷基和苯基的基团取 代。
当式 (I)中 X为羰氧基时， 本发明的 5-位碳取代的汉防己甲素衍生 物或其药学上可接受的盐由通式 (I-b)代表
Figure imgf000011_0001
其中， 选自 H、 d-C6烷基、 芳基或杂芳基、 d-C6烷氧基、 d-C6烷硫 基， 所述非氢基团任选地被选自下组的基团取代： 鹵素、 氨基、 d-C6 烷基氨基、 硝基、 tt、 羟基、 d-C6烷氧基、 巯基和 d-C6烷硫基； 所 述芳基和杂芳基任选地被选自 C C6烷基、 羟基 d-C6烷基和巯基 Ci-C6 烷基的基团取代。
优选地， 式 (I-b)的 5-位碳取代的汉防己甲素衍生物或其药学上可 接受的盐中， 选自 CrC6烷基、 芳基和杂芳基。
更优选地，式 (I-b)的 5-位碳取代的汉防己甲素衍生物或其药学上可 接受的盐中， 选自甲基、 乙基、 丙基、 异丙基、 苯基、 二甲基氨基苯 基、 呋喃基、 噻吩基、 甲基噻吩基等。 当式（I ) 中 X为氮时， 本发明的 5-位碳取代的汉防己甲素衍生物 或其药学上可接受的盐由通式 (I-c)代表，
Figure imgf000011_0002
f-c 其中， 和 独立地选自氢、 d-C6烷基、 c3-c7环烷基或环烯烃基、 芳 基 -d-c3烷基、 杂芳基 -d-C3烷基、 芳氧基 - d-C3烷基、 杂芳氧基 - d-C3 烷基， 或者 和 R2与它们连接的氮原子一起形成非芳香含氮杂环或含 氮杂芳基； 所述非氢基团任选地被选自下组的基团取代： 鹵素、 氨基、 C C6烷基氨基、 硝基、 氰基、 羟基、 d-C6烷氧基、 巯基和 d-C6烷硫 基； 所述环烷基、 环烯基、 芳基、 杂芳基、 含氮杂环或含氮杂芳基任选 地被选自 CrC6烷基、 羟基 CrC6烷基、 巯基 CrC6烷基的基团取代和苯 基的基团取代。
优选地， 式 (I-c)的 5-位碳取代的汉防己甲素衍生物或其要学上可 接受的盐中， 和 R2独立地选自氢、 d-C6烷基、 C3-C7环烷基、芳基 -d-C3 烷基、 杂芳基 -C C3烷基， 或者 和 与它们连接的氮原子一起形成 非芳香含氮杂环或含氮杂芳基。
优选地， 式 (I-c)的 5-位碳取代的汉防己甲素衍生物或其药学上可 接受盐中，所述非氢基团被选自下组的基团取代：氨基、 C C6烷基氨基、 硝基、 氰基、 羟基、 C C6烷氧基； 所述环烷基、 环烯基、 芳基、 杂芳基、 含氮杂环或含氮杂芳基被选自 CrC6烷基、羟基 C C6烷基和苯基的基团 取代。
优选地， 式 (I-c)的 5-位碳取代的汉防己甲素衍生物或其药学上可 接受的盐中， 和 独立地选自氢、任选地被羟基或 CrC6烷氧基取代 的（^-( 6烷基、 任选地被羟基或(^-( 6烷氧基取代的 C3-C7环烷基、 芳基 上任选地被 d-C6烷基取代的芳基 -d-Cs烷基、 杂芳基上任选地被 CrC6 烷基取代的杂芳基 -C C3烷基， 或者 和 R2与它们连接的氮原子一起 形成非芳香含氮杂环基或含氮杂芳基， 所述非芳香含氮杂环基任选地被 选自羟基、 羟基 d-C6烷基、 氨基、 d-C6烷基氨基、 d-C6烷基、 tt、 硝基和苯基的基团取代。
优选地， 式 (I-c)的 5-位碳取代的汉防己甲素衍生物或其药学上可 接受的盐中， 和 独立地选自氢、 d-C3烷氧基取代的 d-C3烷基、 C3-C6环烷基、 芳基甲基、 芳基（甲基） 甲基、 杂芳基甲基， 或者 1^和 R2与它们连接的氮原子一起形成非芳香含氮杂环基， 所述非芳香含氮杂 环基任选地被选自羟基、 羟基 CrC6烷基、 氨基、 CrC6烷基氨基、 Ci-C6 烷基、 氰基、 硝基和苯基的基团取代。
优选地，式 (I-c)的 5-位碳取代的汉防己甲素衍生物或其药学上可接 受的盐中， 所述非芳香含氮杂环为 5-7元环， 任选地除了与 和 连 接的氮原子外还含有 1-2个选自氮、 氧和硫的杂原子； 更优选地所述非 芳香含氮杂环为吡咯烷基、 吡咯啉基、 哌啶基、 哌嗪基、 吗啉基、 硫代 吗啉基、 二氮杂环庚烷基。
优选地，式 (I-c)的 5-位碳取代的汉防己甲素衍生物或其药学上可接 受的盐中， 所述含芳基基团中的芳基优选为苯基； 所述含杂芳基的基团 中的杂芳基优选为任选被 d-C3烷基取代的吡啶基、任选被 d-C3烷基取 代的呋喃基或任选被 CrC3烷基取代的噻吩基。 当式 (I)中 X为氧或硫时， 本发明的 5-位碳取代的汉防己甲素衍生 物或其药学上可接受的盐由通式 (I-d)或 (I-e)代表，
Figure imgf000013_0001
其中， R2选自 d-C6烷基、 芳基、 C3-C7环烷基或环烯基、 芳基 -d-C3烷 基、 杂芳基 -C C3烷基、 杂环基 -d-C3烷基、 芳氧基 - d-C3烷基、 杂芳 氧基 - d-C3烷基， 所述基团任选地被选自下组的基团取代： 鹵素、氨基、 Ci-Q;烷基氨基、 硝基、 氰基、 羟基、 d-C6烷氧基、 巯基和 d-C6烷硫 基； 所述环烷基、 环烯基、 芳基和杂芳基任选地被选自 C C6烷基、 羟 基 CrC6烷基和巯基 CrC6烷基的基团取代。
优选地，在式 (I-d)或 (I-e)的 5-位碳取代的汉防己甲素衍生物或其药 学上可接受的盐中， R2选自芳基 -C C3烷基、 杂芳基 -d-C3烷基、 芳氧 基 - d-C3烷基、 杂芳氧基 - d-C3烷基。
更优选地，式 (I-d)或 (I-e)的 5-位碳取代的汉防己甲素衍生物或其药 学上可接受的盐中， 所述含芳基基团中的芳基或含杂芳基基团中的杂芳 基被选自鹵素和 d-C6烷氧基的基团取代。
更优选地，式 (I-d)或 (I-e)的 5-位碳取代的汉防己甲素衍生物或其药 学上可接受的盐中， 所述含芳基基团中的芳基优选为苯基； 所述含杂芳 基基团中的杂芳基优选为吡0 ¾、 咪唑基或噻吩基。 本发明的部分 5-位碳取代的汉防己甲素衍生物如下所示。 这些实 施例举只对本发明做进一步说明， 并不对本发明的范围构成任何限制。
Figure imgf000014_0001
3SH
Figure imgf000014_0002
Figure imgf000015_0001
Figure imgf000015_0002
Figure imgf000015_0003
t £O O/ZlOZSD/lDd
Figure imgf000016_0001
Figure imgf000016_0002
Figure imgf000016_0003
Figure imgf000016_0004
C8C9Z0/CT0Z OAV
Figure imgf000017_0001
Figure imgf000017_0002
Figure imgf000017_0003
t £O O/ZlOZSD/lDd e8C9io/eTO∑; OAV
Figure imgf000018_0001
上面所列化合物的部分数据如下表所示:
Figure imgf000018_0002
BS-TE-342 C45H56N4O6 748.95 黄褐色 粉末状固体 22
BS-TE-343 C49H56N4O6 796.99 浅粉色 粉末状固体 22
BS-TE-346 C45H55N306 733.94 白色 粉末状固体 24
BS-TE-348 C45H50N4O6 742.9 黄色 粉末状固体 18
BS-TE-350 C44H49N3O7 731.88 橙黄色 粉末状固体 18
BS-TE-351 C45H55N307 749.93 黄色 粉末状固体 32
BS-TE-352 C45H50N4O6 742.9 棕色 粉末状固体 32
BS-TE-354 C46H58N4O6 762.976 白色 粉末状固体 12
BS-TE-355 C44H53N306 719.91 白色 粉末状固体 29
BS-TE-356 C45H56N4O6 748.949 白色 粉末状固体 35
BS-TE-358 C45H51N307 745.902 白色 粉末状固体 18
BS-TE-359 C44H49N3O6S 747.941 白色 粉末状固体 15
BS-TE-360 C44H54N4O6 734.92 黄色 粉末状固体 25
BS-TE-361 C39H45N306 651.33 白色 粉末状固体 7
BS-TE-402 (^47¾2 08 772.92 黄色 粉末状固体 1
BS-TE-403 C49H56N2O9 816.4 白色 粉末状固体 14
BS-TE-406 C43H52N2O8 724.88 白色 粉末状固体 6
BS-TE-408 C46¾9FN207 760.35 白色 粉末状固体 17
BS-TE-411 C45H49N307 743.36 白色 粉末状固体 11
BS-TE-415 C44H48N207S 748.32 白色 粉末状固体 10
BS-TE-416 C43H52N2O8 724.88 浅黄色 粉末状固体 9
BS-TE-417 C44H52N2O8 736.37 白色 粉末状固体 12
BS-TE-418 C44H50N4O7 746.37 白色 粉末状固体 17
BS-TE-419 C41 8N207 680.83 浅黄色 粉末状固体 30
BS-TE-420 。40 6 07 666.8 浅黄色 粉末状固体 11
BS-TE-421 C45H48N2O6S 744.94 浅黄色 粉末状固体 35
BS-TE-V1 C44H53N308 751.38 浅黄色 黏状固体 8 在另一种实施方式中， 本发明特别优选如下的通式（I )化合物:
Figure imgf000020_0001
BS-TE-301
5- (环丙烷基-氨基-亚甲基) -汉防己甲素
Figure imgf000020_0002
BS-TE-307
5- (吗啡啉基-亚甲基) -汉防己甲素
Figure imgf000020_0003
BS-TE-317
-[(7?)-N-甲基-苯乙胺基-亚甲基] -汉防己甲素
Figure imgf000021_0001
BS-TE-321
； -(m-羟基哌啶-亚甲基) -汉防己曱素
Figure imgf000021_0002
BS-TE-323
-(p-氰基哌啶-亚甲基) -汉防己甲素
Figure imgf000021_0003
10 BS-TE-328
- (硫代吗啉-亚甲基) -汉防己甲素
Figure imgf000021_0004
BS-TE-329
5-(2 , 5-二氢吡咯-亚甲基) -汉防己甲素
Figure imgf000022_0001
BS-TE-333 5-(N-异丙基哌嗪-亚甲基) -汉防己甲素
Figure imgf000022_0002
BS-TE-340 5- (甲氧基 -丙胺基-亚甲基) -汉防己甲素
Figure imgf000022_0003
BS-TE-342 5-(N-乙基哌。秦-亚甲基) -汉防己甲素
Figure imgf000023_0001
BS-TE-346 5-(m-甲基哌啶-亚曱基) -汉防己曱素
Figure imgf000023_0002
BS-TE-350 5- (呋喃 -甲胺基-亚甲基) -汉防己甲素
Figure imgf000023_0003
BS-TE-354 5_(4-二甲胺基哌啶-亚甲基) -汉防己甲素
Figure imgf000023_0004
BS-TE-355
5- (哌啶基-亚甲基) -汉防己甲素
Figure imgf000024_0001
BS-TE-359
5-(N-甲基哌。秦-亚甲基) -汉防己甲素
Figure imgf000024_0002
Figure imgf000025_0001
BS-TE-403
-(3, 4-二甲氧基-苯乙氧基-亚甲基) -汉防己甲素
Figure imgf000025_0002
BS-TE-408
5-(p-氟-苯甲氧基-亚甲基) -汉防己甲素
Figure imgf000025_0003
BS-TE-411
5-(m-吡啶甲氧基-亚甲基) -汉防己甲素
Figure imgf000026_0001
BS-TE-415
5-(m-噻吩甲氧基-亚甲基) -汉防己甲素 已经证明本发明化合物具有抗肿瘤活性， 本发明优选的化合物具 有显著优于汉防己甲素 TTD的抗肿瘤活性。 本发明涉及以下形式的本发明的式 (I)化合物： 它们的盐、 溶剂化 物、 水合物、 加成物、 复合物、 多晶型物和前药。
如本文所使用， 术语"烷基"是指含有指定碳原子数的直链或支链 烷基， 例如 CrC6烷基、 d-C5烷基、 CrC4烷基、 CrC3烷基等。 烷基 的例子包括但不限于甲基、 乙基、 正丙基、 异丙基、 叔丁基、 正戊基、 正己基等。
术语 "C3-C7环烷基或环烯基"是指饱和（环烷基）或不饱和（环烯 基）的 3-7元单环烃基， 包括 3-4元环、 3-5元环、 3-6元环。例如 C3-C7 环烷基可以为环丙基、 环丁基、 环戊基、 环己基、 环庚基、 环戊烯基和 环己婦基。
术语"芳基"是指含有 6-14 个碳原子的单碳环芳香基或稠合或非 稠合的多碳环芳香基， 在多碳环的情况下， 只要一个碳环是芳香的即 可。 芳基也包括与杂环基稠合的芳基。 所述芳基的例子有苯基、 联苯 基、 萘基、 5,6,7,8-四氢萘基、 2.3-二氢苯并呋喃基等。
术语"杂芳基 "是指在环中含有 1-4个杂原子 （例如 1、 2、 3或 4 个杂原子）作为环成员的芳香环基团。 杂原子是指氮、 氧或硫。 杂芳 基可以是具有 5-7个环原子的单环杂芳基， 或者具有 7-11个环原子的双 环杂芳基。 所述双环芳基中只要一个环是芳香杂环即可， 另一个可以是 芳香的或非芳香的、 含杂原子的或不含杂原子的。 杂芳基的例子有例如 吡咯基、 吡唑基、 咪唑基、 噁唑基、 吡啶基、 嘧啶基、 呋喃基、 噻吩基、 异噁唑基、 吲哚基等。 "含氮杂芳基" 是指至少含有一个氮原子作为环 成员的如上所定义的 "杂芳基" 。
"杂环基" 含有 1-4个杂原子 （例如 1、 2、 3或 4个杂原子）作 为环成员的非芳香环基团。 杂原子是指氮、 氧或硫。 杂环基可以是具 有 4-8个环原子的单环杂环基（例如 4-7元环、 5-7元环、 5-6元环）， 或者具有 7- 11 个环原子的双环杂环基。 杂环基可以是饱和的， 或者 不饱和但非芳香的。 杂环基的例子有氮杂环丁基、 吡咯烷基、 吡咯啉 基、 四氢呋喃基、 二氢呋喃基、 哌嗪基、 哌啶基、 吗啉基、 硫代吗啉 基、 四氢吡喃基、 四氢噻喻基等。
"含氮杂环基"是指至少含有一个氮原子作为环成员的如上所定 义的 "杂环基" 。
术语"鹵素"是指氟、 氯、 溴或碘。
术语"烷基氨基"是指被一个或两个具有指定碳原子数的烷基（包 括环烷基）取代的氨基。
术语"烷氧基"包括烷氧基和环烷基氧基。
术语"烷硫基 "烷硫基和环烷基硫基。
术语"式 (I)化合物的药学上可以接受的加和物和复合物"是指本发 明的化合物进一步与其他小分子或生物大分子以非化学键或者非共 价分子间力结合的产物。
如本文所使用， 术语"式 (I)化合物的药学上可以接受的盐"的例子是 由形成药学上可以接受的阴离子的有机酸形成的有机酸盐； 这些有机酸 盐包括但不限于甲苯磺酸盐、 甲磺酸盐、 苹果酸盐、 醋酸盐、柠檬酸盐、 丙二酸盐、 酒石酸盐、 琥珀酸盐、 苯甲酸盐、 抗坏血酸盐、 （X-酮戊二酸 盐和 (X-甘油磷酸盐； 也可形成合适的无机盐； 这些无机酸盐包括但不限 于盐酸盐、 硫酸盐、 硝酸盐、 碳酸氢盐和碳酸盐、 磷酸盐、 氢溴酸盐、 氢碘酸盐等。 药学上可以接受的盐可使用本领域熟知的标准程序获得。 例如， 通 过将足量的碱性化合物和提供药学上可以接受的阴离子的合适的^ 应生成。
如本文所使用， 术语"多晶型物 "是指本发明的化合物或其复合物 的固体晶体形式。 相同化合物的不同的多晶型物可以显示不同的物 理、化学和 /或光谱性质。不同的物理性质包括但不限于稳定性（例如， 对热或光） 、 可压缩性和密度（对于配制制剂和产品生产是重要的） 和溶解速率（其可以影响生物吸收度和利用度） 。 稳定性的不同会造 成化学反应性（例如差异氧化， 使得当由一种多晶型物构成时比由另 一多晶型物构成时剂型更快地褪色）或机械性能（例如， 储存时作为 动力学有利的多晶型物的片剂碎末转化成热力学更加稳定的多晶型 物）或两者（例如， 一种多晶型物的片剂在高潮湿度时更加容易破碎） 中的变化。 多晶型物的不同的物理性质可以影响它们的加工。 例如， 一种多晶型物可能比另一种更可能形成溶剂化物或可能比另一种更 加难以过滤或洗去杂质， 这是由于其颗粒的形状或大小分布不同的缘 故。
如本文所使用， 术语"水合物 "是指本发明的化合物或其盐， 其进 一步包含通过非共价分子间力结合的化学计量的或非化学计量的水。
如本文所使用， 除非另外说明， 术语"前药"是指可以在生物学条 件（体外或体内）下水解、 氧化或进行其他反应以提供本发明的化合 物的衍生物。 前药仅在生物学条件下经过该反应成为活性化合物， 或 者它们在它们不反应的形式中具有活性。 通常可以使用公知的方法制 备前药，例如 1 Burger's Medicinal Chemistry and Drug Discovery (1995) 172-178, 949-982 (Manfred E. Wolff Editor , 5th Edition) and J. Rautio's Prodrugs and Targeted Delivery (201 1) 31-60 (Wiley-VCH, Methods and Principles in Medicinal Chemistry, Vol. 47) and G. Thomas's Fundamentals of Medicinal Chemistry (2003) 195-200(Wiley) 中描述的那些方法。
本发明化合物中 5-位碳取代的汉防己甲素衍生物的两个手性中心 具有式 （I ) 结构式所显示的立体化学结构。 本文使用的立体化学的
P. Parker, Ed., McGraw-Hill Book Company, New York, 1984); ELIEL, E. 和 WILEN, S.， STEREOCHEMISTRY OF ORGANIC COMPOUNDS (John Wiley & Sons, Inc., New York, 1994)„ 许多有机化合物以光学活性形式存在， 即 它们具有旋转平面偏光的平面的能力。
本文使用的术语"治疗"一般是指获得需要的药理和 /或生理效应。 该效应 #居完全或部分地预防疾病或其症状， 可以是预防性的； 和 / 或根据部分或完全稳定或治愈疾病和 /或由于疾病产生的副作用，可以 是治疗性的。本文使用的"治疗"涵盖了对患者疾病的任何治疗， 包括： ( a)预防易感染疾病或症状但还没诊断出患病的患者所发生的疾病或 症状； （b)抑制疾病的症状， 即阻止其发展； 或（c)緩解疾病的症状， 即， 导致疾病或症状退化。 发明的式 (I)化合物的制备方法如下：
Figure imgf000029_0001
式 (I)的原料汉防己甲素可由天然提取分离得到。汉防己甲素与甲醛在 盐酸和二氯化辞存在下， 由布兰克 (Blanc Reaction)氯甲基化反应， 生成 5-氯甲基汉防己甲素 (I-a, X=C1); 布兰克 (Blanc Reaction)氯甲基化反应一 般在低温或室温下进行。 5-氯甲基汉防己甲素 (I-a, X=C1)可与小分子反 应， 例如： 水、 氨或氢碘酸， 生成相应的取代亚甲基衍生物， 5-羟甲基 汉防己甲素 (I-a, X=OH)， 5-氨甲基汉防己甲素 (I-a, X=NH2)，和 5-碘甲基 汉防己甲素 (I-a, X=I)。 5 -氯甲基汉防己甲素 (I-a, X=C1)与相应的有机小分 子， 经取代反应或缩合反应生成通式（ I ) 5-位取代的汉防己甲素衍生物。 式 (I)中 R和 X与上文在通式 (I)中的定义相同。
Figure imgf000030_0001
l-b 本发明通式（I-b )的 5-位酯化亚甲基的汉防己甲素衍生物可按上式所示 反应制取。 先由布兰克 (Blanc Reaction)氯甲基化反应， 生成 5-氯甲基汉 防己甲素 (I-a, X=Cl); 再由其与相应的有机酸钠在碱存在下， 在有机溶 剂中加热， 经亲核取代反应生成通式（I-b )的 5-位酯化亚甲基汉防己甲 素衍生物。
上述反应使用的碱包括但不限于无机碱。 例如： 氢化钠、 氢氧化钠、 氢氧化钾、 氢氧化锂。 有机酸钠可以是商购的反应原料， 也可使用有机 酸在反应体系中生成有机酸钠。
上述反应的温度取决于有机酸根的反应活性， 可以是 50 - 80 °C. 上述反应一般在溶剂中进行。 反应的溶剂包括但不限于乙氰， Ν,Ν- 二甲基甲酰胺， 四氢呋喃。
式 (I-b)中 和 X与上文在通式 (I)中的定义相同， X (为 C1 )在反应 中作为离去基团。
Figure imgf000030_0002
本发明通式（I-c )的 5-位烷基胺化亚甲基汉防己甲素衍生物可按上 式所示反应制取。 先由布兰克 (Blanc Reaction)氯甲基化反应， 生成 5-氯 甲基汉防己甲素 (I-a, X=Cl); 再由其与相应的有机胺在碱存在下， 在有 机溶剂中加热， 经亲核取代反应生成通式（ I-c )的 5-位烷基胺化亚甲基 汉防己甲素衍生物。
上述反应使用的碱包括但不限于有机碱。例如： Ν,Ν-二异丙基乙基 胺。 （DIPEA ) ， 三乙基胺（TEA )， 吡啶， 4-二甲胺基吡啶（DMAP ) 。
上述反应的温度取决于有机酸胺的反应活性， 可以是 50 - 80 °C. 上述反应一般在溶剂中进行。反应的溶剂包括但不限于乙氰， Ν,Ν- 二甲基甲酰胺， 四氢呋喃。
式 (I-c)中 、 R2和 X与上文在通式 (I)中的定义相同。 （为（ 1 )在 反应中作为离去基团。
Figure imgf000031_0001
Tetrandrine I -a (X=CI) 本发明通式（I-d )的 5-位烷氧亚甲基汉防己甲素衍生物可按上式所 示反应制取。 先由布兰克 (Blanc Reaction)氯甲基化反应， 生成 5-氯甲基 汉防己甲素 (I-a, X=Cl); 再由其与相应的有机醇或有机醇钠在碱存在下， 在有机溶剂中加热， 经亲核取代反应生成通式（I-d )的 5-位烷氧亚甲基 汉防己甲素衍生物。
上述反应使用的碱包括但不限于无机碱。 例如： 例如： 氢化钠、 氢 氧化钠、 氢氧化钾、 氢氧化锂。 有机醇钠可以是商购的反应原料， 也可 使用醇在反应体系中生成有机醇钠。
上述反应的温度取决于醇的反应活性， 可以是 50 - 80 °C.
上述反应一般在溶剂中进行。 反应的溶剂包括但不限于乙氰， Ν,Ν- 二甲基甲酰胺， 四氢呋喃。
式 (I-d)中 R^ X与上文在通式 (I)中的定义相同 . X (为 C1 )在反应 中作为离去基团。
Figure imgf000032_0001
本本发发明明通通式式（（II--ee )) 的的 55--位位烷烷硫硫基基亚亚甲甲基基汉汉防防己己甲甲素素衍衍生生物物可可按按上上式式 所所示示反反应应制制取取。。 先先由由布布兰兰克克 ((BBllaanncc RReeaaccttiioonn))氯氯甲甲基基化化反反应应，， 生生成成 55--氯氯甲甲 基基汉汉防防己己甲甲素素 ((II--aa,, XX==CCll));; 再再由由其其与与相相应应的的有有机机硫硫醇醇或或有有机机硫硫醇醇钠钠在在碱碱 存存在在下下，， 在在有有机机溶溶剂剂中中加加热热，， 经经亲亲核核取取代代反反应应生生成成通通式式（（II--ee ))的的 55--位位烷烷 硫硫基基亚亚甲甲基基汉汉防防己己甲甲素素衍衍生生物物。。
上上述述反反应应使使用用的的碱碱包包括括但但不不限限于于无无机机碱碱。。 例例如如：： 例例如如：： 氢氢化化钠钠、、 氢氢 氧氧化化钠钠、、 氢氢氧氧化化钾钾、、 氢氢氧氧化化锂锂。。 有有机机硫硫醇醇钠钠可可以以是是商商购购的的反反应应原原料料，， 也也 可可使使用用有有机机硫硫醇醇在在反反应应体体系系中中生生成成有有机机硫硫醇醇钠钠。。
上上述述反反应应的的温温度度取取决决于于有有机机硫硫醇醇的的反反应应活活性性，， 可可以以是是 5500 -- 8800。。CC.. 上上述述反反应应一一般般在在溶溶剂剂中中进进行行。。 反反应应的的溶溶剂剂包包括括但但不不限限于于乙乙氰氰，， ΝΝ,,ΝΝ-- 二二甲甲基基甲甲酰酰胺胺，， 四四氢氢呋呋喃喃。。
式式 ((II--ee))中中 IIUU XX与与上上文文在在通通式式 ((II))中中的的定定义义相相同同 .. XX ((为为 CC11 ))在在反反应应 中中作作为为离离去去基基团团。。
II--aa化化合合物物或或
Figure imgf000032_0002
其中， X选自羟基、 巯基、 氨基和鹵素。 上述反应的原料： 有机酸、 有机酸钠盐、 有机酸酐、 有机酰鹵、 醇、 石克醇、 醇钠、 石克醇钠、 有机胺全部可以在市场上购买获得。 汉防己甲素 原料由天然产物提取分离得到， 可从市场购买获得。
上述反应的一般操作可以是但不局限于： 向 5-氯甲基汉防己甲素的 乙氰溶液中， 投入合适比例的反应物原料和碱或缩合剂。 在加热搅拌下 反应数小时，然后用有机溶剂萃取生成的产物，经水洗和饱和食盐水洗、 干燥、 浓缩， 得到粗品。 再用高效液相色语仪纯化， 得到产物纯品. 布兰克 (Blanc Reaction)氯甲基化反应 (G. Blanc, Bull. Soc. Chim.
France 33(4), 313 (1923); R. C. Fuson, C. H. McKeever, Org. React. 1, 63 (1942) )和弗-克反应 ( Friedel-Crafts Reaction )按经典成熟的条件操作 ( C. C. Price, Org. React. 3, 1 (1946) ) .
常规的化学转换可用于实施本发明。 本领域的技术人员可以决定 用于这些化学转换的适当的化学试剂、 溶剂、 保护基和反应条件。 相 关信息描述于 R. Larock, Comprehensive Organic Transformations , VCH Publishers ( 1989); T. W. Greene and P.G.M. Wuts , Protective Groups in Organic Synthesis , 3rd Ed.， John Wiley and Sons( 1999); L. Fieser and M. Fieser , Fieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis， John Wiley and Sons ( 1994)； L. A. Paquette editor, Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis , John Wiley and Sons ( 1995)及其后来的版本。 保护基指那些一旦连接活性部分 (例如， 羟基或氨基）， 防止这些 基保护基的例子包括但不限于，烷基、苯甲基、烯丙基、三苯甲基 (即， 三苯基甲基）、 酰基 (例如， 苯甲酰基、 乙酰基或 HOOC-X"-CO-， X" 为亚烷基、 亚链烯基、 亚环烷基或亚芳基)、 甲硅烷基 (例如， 三甲基 硅烷基、 三乙基硅烷基和叔丁基二甲基硅烷基)、 烷氧基羰基、 氨基 羰基 (例如， 二甲基氨基羰基、 甲基乙氨基羰基和苯基氨基羰基)、 烷 氧甲基、苯甲氧甲基和烷基巯甲基。氨基保护基的例子包括但不限于， 烷氧基羰基、 烷酰基、 芳氧基羰基、 芳基取代的烷基等。 羟基和氨基 保护基已在 T.W. Greene and P. G. M. Wuts , Protective Groups in Organic Synthesis , 2nd Edition, John Wiley and Sons( 1991)中讨论。 ¾ 基和氨基保护基都可在反应后通过常规的方法去除。 本发明还提供了包含本发明式 I化合物的药物组合物。
本发明提供了这样的药物组合物， 其中包含至少一种如上所述的 本发明的式 I化合物， 和任选的药学上可以接受的赋形剂。
制备各种含有一定量的活性成分的药物组合物的方法是已知的，
REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, Martin, E.W., ed" Mack Publishing Company, 19th Edition (1995)所述。 制备所述药物组合物的 方法包括掺入适当的药学赋形剂、 载体、 稀释剂等。
以已知的方法制造本发明的药物制剂， 包括常规的混合、 溶解或 冻干方法。
本发明的化合物可以制成药物组合物， 并向患者以适于选定的施用 方式的各种途径施用， 例如口服或肠胃外 （通过静脉内、 肌内、 局部或 皮下途径） 。
因此， 本发明的化合物结合药学上可以接受的载体（如惰性稀释剂 或可食用的载体）可以全身施用， 例如， 口服。 它们可以封闭在硬或软 壳的明胶胶嚢中， 可以压为片剂。 对于口服治疗施用， 活性化合物可以 结合一种或多种赋形剂， 并以可吞咽的片剂、 颊含片剂、 含片、 胶嚢剂、 酏剂、 悬浮剂、 糖浆、 圆片等的形式使用。 这种组合物和制剂应该包含 至少 0.1%的活性化合物。 这种组合物和制剂的比例当然可以变化， 可以 占给定的单位剂型重量的大约 1%至大约 99%。 在这种治疗有用的组合 物中， 活性化合物的量使得能够获得有效剂量水平。
片剂、 含片、 丸剂、 胶嚢剂等也可以包含： 粘合剂， 如黄蓍胶、 阿 拉伯胶、 玉米淀粉或明胶； 赋形剂， 如磷酸氢二钙； 崩解剂， 如玉米淀 粉、 马铃薯淀粉、 藻酸等； 润滑剂， 如硬脂酸镁； 和甜味剂， 如蔗糖、 果糖、 乳糖或阿司帕坦； 或调味剂， 如薄荷、 冬青油或樱桃香味。 当单 位剂型是胶嚢时， 除了上面类型的材料， 它还可以包含液体载体， 如植 物油或聚乙二醇。 各种其他材料可以存在， 作为包衣， 或以其他方式改 变固体单位剂型的物理形式。 例如， 片剂、 丸剂或胶嚢剂可以用明胶、 蜡、 虫胶或糖等包衣。 糖浆或酏剂可以包含活性化合物， 蔗糖或果糖作 为甜味剂， 对羟苯甲酸甲酯或对羟苯甲酸丙酯作为防腐剂， 染料和调味 剂 （如樱桃香料或桔子香料） 。 当然， 用于制备任何单位剂型的任何材 料应该是药学上可以接受的且以应用的量基本上无毒。 此外， 活性化合 物可以掺入緩释制剂和緩释装置中。
活性化合物也可以通过输注或注射到静脉内或腹膜内施用。 可以制 备活性化合物或其盐的水溶液， 任选可混和的无毒的表面活性剂。 也可 以制备在甘油、 液体聚乙二醇、 甘油三乙酸酯及其混合物以及油中的分 散剂。 在普通的储存和使用条件下， 这些制剂包含防腐剂以防止微生物 生长。
适于注射或输注的药物剂型可以包括包含适于无菌的可注射或可 输注的溶液或分散剂的即时制剂的活性成分（任选封装在脂质体中） 的 无菌水溶液或分散剂或无菌粉末。 在所有情况下， 最终的剂型在生产和 储存条件下必须是无菌的、 液体的和稳定的。 液体载体可以是溶剂或液 体分散介质， 包括， 例如水、 乙醇、 多元醇（例如， 甘油、 丙二醇、 液 体聚乙二醇等） 、 植物油、 无毒的甘油酯及其合适的混合物。 可以维持 合适的流动性， 例如， 通过脂质体的形成， 通过在分散剂的情况下维持 所需的粒子大小， 或通过表面活性剂的使用。 可以通过各种抗细菌剂和 抗真菌剂 （如对羟苯甲酸酯、 氯丁醇、 苯酚、 山梨酸、 硫柳汞等）产生 预防微生物的作用。 在许多情况下， 优选包括等渗剂， 如糖、 緩冲剂或 氯化钠。 通过使用延緩吸收剂的组合物（例如， 单硬脂酸铝和明胶）可 以产生可注射的组合物的延长吸收。
通过将合适的溶剂中的需要量的活性化合物与需要的上面列举的 各种其他成分结合， 然后进行过滤灭菌， 制备无菌可注射溶液。 在用于 制备无菌注射溶液的无菌粉末的情况下， 优选的制备方法是真空干燥和 冷冻干燥技术， 这会产生活性成分加上任何另外需要的以前无菌过滤溶 液中存在的成分的粉末。 有用的固体载体包括 4分碎的固体（如滑石、 粘土、 ^敖晶纤维素、 二 氧化硅、 氧化铝等）。 有用的液体载体包括水、 乙醇或乙二醇或水 -乙醇
I乙二醇混合物，本发明的化合物可以任选在无毒的表面活性剂的帮助下 以有效含量溶解或分散在其中。 可以加入佐剂 （如香味）和另外的抗微 生物剂来优化对于给定用途的性质。
增稠剂 （如合成的聚合物、 脂肪酸、 脂肪酸盐和酯、 脂肪醇、 改性 纤维素或改性无机材料）也可和液体载体用于形成可涂覆的糊剂、凝胶、 软膏、 肥皂等， 直接用于使用者的皮肤上。
化合物或其活性盐或衍生物的治疗需要量， 不仅取决于选择的特定 的盐， 而且取决于施药方式、待治疗的疾病的本质和患者的年龄和状态， 最终取决于在场医师或临床医生的决定。
上述制剂可以以单位剂型存在， 该单位剂型是含有单位剂量的物 理分散单元， 适于向人体和其它哺乳动物体给药。 单位剂型可以是胶 嚢或片剂， 或是很多胶嚢或片剂。 根据所涉及的具体治疗， 活性成分 的单位剂量的量可以在大约 0.1到大约 1000亳克或更多之间进行变化 或调整。
本发明还提供本发明的化合物或包含该化合物的组合物在制备药 物、 特别是抗肿瘤药物中的用途。 相应地， 本发明提供一种治疗肿瘤 患者的方法， 包括给予需要治疗的患者治疗有效量的至少一种本发明 的化合物。 本发明的 5-位碳取代的汉防己甲素衍生物或其药学上可接 受的盐例如可用于治疗白血病、 多发性骨髓瘤、淋巴瘤、 肝癌、 胃癌、 乳腺癌、 胆管细胞癌、 胰腺癌、 肺癌、 大肠癌、 骨肉瘤、 黑色素瘤、 人宫颈癌、 神经胶质瘤、 鼻咽癌、 喉癌、 食管癌、 中耳肿瘤、 前列腺 癌等肿瘤。
在下列实施例中， 将更加具体地解释本发明。 但应理解， 下列实 施例旨在说明本发明而不对本发明的范围构成任何限制。 的合成方法获得。 实施例 1: 化合物 BS-TE-215的合成
Figure imgf000037_0001
l-a X=CI 式中： (CH20)n: 多聚甲醛
将汉防己甲素（1.0 g, 1.6 mmol) 溶于浓盐酸 （5 mL) 中，在 0。C条 件下加入多聚甲醛 (50 mg, 1.68 mmol)。 升至室温搅拌 3小时。 将反应 液浓缩后得到亮黄色固体粗产品， 直接用于下一步反应。
Figure imgf000037_0002
向溶有 5-氯甲基 -汉防己甲素 （ 120 mg, 0.17 mmol ) ， 噻吩 -2-甲 酸（44 mg, 0.34 mmol ) 的乙腈 （3 mL) 中加入氢化钠 (15 mg, 0.34 mmol) , 加热升温至 75 。C搅拌 2小时后， 将反应液过滤， 滤液浓缩 后得到的粗产品经制备色谱分离纯化后得到白色固体粉末化合物
BS-TE-215(36.8 mg, 32%)„
LC-MS: 1.36min (97.64%), m/z 382.8 [1/2 M+H]+.
!H NMR (300 MHz, partial assignment of signals in CD3OD) δ 7.79 (dd, J=3.6 Hz, 1.2 Hz, IH), 7.74 (dd, J=4.8 Hz, 1.2 Hz, IH), 7.55 (d, J=8.1 Hz 2.8 Hz, IH), 7.14-7.13 (m, 2H), 6.95 (m, 2H), 6.54-6.48 (m, 2H), 6.14 (s, IH), 4.50 (m, IH), 3.90 (s, 3H), 3.75 (s, 3H), 3.42 (s, 3H), 2.97 (s, 3H), 2.65 (s, 3H), 2.43 (s, 3H)。 按照制备 BS-TE-215的方法， 使用同样的试剂和溶剂， 将 5-氯甲基- 汉防己甲素与 Ν,Ν-二甲基甘氨酸反应， 制备了化合物 BS-TE-202: LC-MS 1.04min (63.88%), 1.13min (3 1.41 %, 异构体）； m/z 739.6 [M+H]+.
!H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7.60 (d, IH), 7. 16 (d, IH), 7.02 (m, 2H),
6.89 (d, IH), 6.57-6.52 (m, 2H), 6.19 (s, IH), 4.25 (m, IH), 3.91 (s, 3H), 3.76 (s, 3H), 3.49 (s, 3H), 3.33 (s, 3H), 3. 14 (s, 3H), 3.08 (s, 3H), 2.50 (s, 3H)。 按照制备 BS-TE-215的方法， 使用同样的试剂和溶剂， 将 5-氯甲基- 汉防己甲素与 4-二甲氨基苯甲酸反应， 制备了化合物 BS-TE-204: LC-MS 1.36min (90.68%); m/z 800.9 [M+H]+, 401.4 [ 1/2 M+H]+.
!H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7.8 1 (d, J=9 Hz, 2 H), 7.50 (d, IH), 7. 1 1 (d, IH), 6.93 (m, 2H), 6.77 (m, 2H), 6.67 (d, 2H), 6.55 (s, IH), 3.89 (s, 3H), 3.73 (s, 3H), 3.41 (s, 3H), 3.34 (s, 3H), 3.01 (s, 6H), 2.85 (s, 3 H), 2.36 (s, 3H)。 按照制备 BS-TE-215的方法， 使用同样的试剂和溶剂， 将 5-氯甲基- 汉防己甲素与 4-甲基噻唑 -5-甲酸反应， 制备了化合物 BS-TE-213 : LC-MS 1. 13min (42.48%), 1.20min (57.52%, 异构体）； m/z 653.8 [M+H]+, 327.8 [ 1/2 M+H]+。
!H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7.62 (dd, /=8.4 Hz, 2.8 Hz, IH), 7. 13 (dd, /=8.4 Hz, 2.4 Hz, IH), 7.03 (d, 2H), 6.88 (s, IH), 6.86 (d, IH), 6.55 (d, IH), 6.53 (s, IH), 6.20 (s, IH), 3.91 (s, 3H), 3.74 (s, 3H), 3.47 (s, 3H), 3.34 (s, 3H), 3.08 (s, 3H), 2.73 (s, 3H)。 按照制备 BS-TE-215的方法， 使用同样的试剂和溶剂， 将 5-氯甲基- 汉防己甲素与 2-呋喃甲酸反应， 制备了化合物 BS-TE-216:
LC-MS 1.27min (98.44%). m/z 747.8 [M+H]+, 374.9 [ 1/2 M+H]+.
!H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7.71 (dd, J= 1.5 Hz, 0.6 Hz, IH), 7.47 (dd, /=8.4 Hz, 2.4 Hz, IH), 7. 19 (d, IH), 7.09 (dd, /=8.4 Hz, 2.7 Hz, IH),
6.90 (d, IH), 6.86 (dd, J=8. 1 Hz, 1.8 Hz, IH), 6.79 (dd, /=8.4 Hz, 2.4 Hz, IH), 6.68 (s, IH), 6.56 (m, 2H), 6.42 (dd, J=8. 1 Hz, 2. 1 Hz, IH), 6.03(s, IH), 4.03 (m, IH), 3.88 (s, 3H), 3.72 (s, 3H), 3.37 (s,3H), 3.24 (s, 3H), 2.65 (s, 3H), 2.25 (s, 3 H)„ 按照制备 BS-TE-215的方法， 使用同样的试剂和溶剂， 将 5-氯甲基- 汉防己甲素与 5-甲基异恶唑 -4-甲酸反应， 制备了化合物 BS-TE-220: LC-MS 1.27min (88%). m/z 762.9 [M+H]+。 按照制备 BS-TE-215的方法， 使用同样的试剂和溶剂， 将 5-氯甲基- 汉防己甲素与乙酸反应， 制备了化合物 BS-TE-223 :
LC-MS 1. 19min (91.97%). m/z 695.8 [M+H]+, 348.8 [ 1/2 M+H]+.
!H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7.52 (dd, J=8. 1 Hz, 1.8 Hz, IH), 7.47 (dd, J=8. 1 Hz, 2.4 Hz, IH), 6.94 (d, IH), 6.89 (dd, J=7.8 Hz, 2. 1 Hz, IH), 6.82 (dd, J=8. 1 Hz, 2.4 Hz, IH), 6.76 (s, IH), 6.53 (d, IH), 6.47 (dd, J=8. 1 Hz, 2. 1 Hz, IH), 6.09(s, IH), 4.32 (m, IH), 3.97 (d, IH), 3.89 (s, 3H), 3.70 (s, 3H), 3.41 (s, 3H), 3.25 (s, 3H), 2.84 (s, 3H), 2.72-2.55 (m, 4H), 2.35 (s, 3 H), 2.03 (s, 3H)。
按照制备 BS-TE-215的方法， 使用同样的试剂和溶剂， 将 5-氯甲基- 汉防己甲素与苯甲酸反应， 制备了化合物 BS-TE-224:
LC-MS 1.38min (85.3%). m/z 757.8 [M+H]+, 379.9 [ 1/2 M+H]+.
!H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7.98 (m, 2H), 7.58-7.42 (m, 4H), 7. 10 (dd /=8.4 Hz, 2.4 Hz, IH), 6.95-6.87 (m, 2H), 6.82 (dd, /=8.4 Hz, 2.4 Hz, IH), 6.76 (s, IH), 6.54 (d, IH), 6.47 (dd, /=8.4 Hz, 1.8 Hz, IH), 6.09(s, IH), 4.30 (m, IH), 4.01 (d, IH), 3.88 (s, 3H), 3.73 (s, 3H), 3.40 (s, 3H), 3.26 (s, 3H), 2.83 (s, 3H), 2.34 (s, 3 H)。 实施例 2: 化合物 BS-TE-305的合成
Figure imgf000039_0001
l-a X=CI BS-TE-305 向溶有 5-氯甲基 -汉防己甲素（ 120 mg, 0. 17 mmol， Ν, Ν-二异丙基 乙胺（ 60 uL, 0.34 mmol )， 吡咯烷（ 24 mg, 0.34 mmol )的乙腈 （3 mL) 中加入氢化钠 （15 mg, 0.34 mmol)， 加热升温至 75 °C搅拌 2小时后， 将反应液过滤， 滤液浓缩后得到的粗产品经制备色谱分离纯化后得到 白色固体粉末化合物 BS-TE-305 (30.5 mg, 22%)„
LC-MS: 1.05min (91.95%), m/z 706.9 [M+H]+, 354.4 [ 1/2 M+H]+.
!H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7.54 (dd, J=8.4 Hz, 2.4 Hz, IH), 7. 14 (dd, /=8.4 Hz, 2.4 Hz, IH), 6.95 (d, IH), 6.91 (dd, J=8.1 Hz, 1.8 Hz, IH), 6.85-6.8 1 (m, 2H), 6.51 -6.48 (m, 2H), 6. 14 (s, IH), 4.49 (m, IH), 3.90 (s, 3H), 3.80 (s, 3H), 3.44 (s, 3H), 3.3 1 (s, 3H), 2.95 (s, 3H), 2.35 (s, 3H)。 按照制备 BS-TE-305的方法， 使用同样的碱性试剂和溶剂， 将 5-氯 甲基-汉防己甲素与环丙胺反应， 制备了化合物 BS-TE-301 :
LC-MS 1.06min (74.25%). m/z 692.9 [M+H]+, 347.3 [ 1/2 M+H]+.
!H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7.46 (dd, J=8. 1 Hz, 2.4 Hz, IH), 7.07 (dd, J=8. 1 Hz, 2.4 Hz, IH), 6.90 (d, IH), 6.86 (dd, J=8.1 Hz, 1.8 Hz, IH), 6.75 (dd, J=8. 1 Hz, 2.7 Hz, IH), 6.66 (s, IH), 6.54 (d, IH), 6.41 (dd, J=8. 1 Hz, 2.1 Hz, IH), 6.01 (s, IH), 4.01 (m, IH), 3.88 (s, 3H), 3.80 (d, IH), 3.73 (s, 3H), 3.35 (s, 3H), 3.23 (s, 3H), 2.63 (s, 3H), 2.25 (s, 3 H)。 按照制备 BS-TE-305的方法， 使用同样的碱性试剂和溶剂， 将 5-氯 甲基 -汉防己甲素与吗啉反应， 制备了化合物 BS-TE-307:
LC-MS l .O lmin (91.41%). m/z 722.8 [M+H]+, 362.4 [ 1/2 M+H]+.
!H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7.53 (dd, /=8. 1 Hz, 2. 1 Hz, IH), 7. 1 1 (dd, J=8. 1 Hz, 2.4 Hz, IH), 6.96 (d, IH), 6.93 (dd, J=7.8 Hz, 2. 1 Hz, IH), 6.8 1 (dd, J=8.4 Hz, 2.7 Hz, IH), 6.76 (s, IH), 6.54 (d, IH), 6.48 (dd, J=8. 1 Hz, 2.1 Hz, IH), 6. 10 (s, IH), 4.34 (m, IH), 4. 13 (d, IH), 3.90 (s, 3H), 3.38 (s, 3H), 3.26 (s, 3H), 2.85 (s, 3H), 2.69 (d, IH), 2.45 (s, 3 H)。 按照制备 BS-TE-305的方法， 使用同样的碱性试剂和溶剂， 将 5-氯 甲基-汉防己甲素与 4-羟基哌啶反应， 制备了化合物 BS-TE-308:
LC-MS l .OOmin (80.99%). m/z 736.9 [M+H]+, 369.3 [ 1/2 M+H]+.
!H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7.65 (d, J=9.0 Hz, IH), 7. 15 (dd, J=8A Hz, 1.8 Hz, IH), 7.07 (s, 2H), 6.90 (m, 2H), 6.59 (dd, J=8A Hz, 2. 1 Hz, IH), 6.52 (s, IH), 6.23 (s, IH), 3.92 (s, 3H), 3.83 (s, 3H), 3.51 (s, 3H), 3.34 (s, 3H), 3. 1 1 (s, 3H), 2.79 (s, 3H)。 按照制备 BS-TE-305的方法， 使用同样的碱性试剂和溶剂， 将 5-氯 甲基-汉防己甲素与异丙胺反应， 制备了化合物 BS-TE-311：
LC-MS 1.08min (69.65%). m/z 694.9 [M+H]+, 348.4 [1/2 M+H]+.
!H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7.64 (d, J=6. Hz, IH), 7.14 (dd, J=7.8 Hz, 2.1 Hz, IH), 7.04 (s, 2H), 6.90 (m, 2H), 6.57 (dd, J=8.1 Hz, 1.8 Hz, IH), 6.51 (s, IH), 6.23 (s, IH), 3.92 (s, 3H), 3.86 (s, 3H), 3.50 (s, 3H), 3.34 (s, 3H), 3.11 (s, 3H), 2.75 (s, 3H)。 按照制备 BS-TE-305的方法， 使用同样的碱性试剂和溶剂， 将 5-氯 甲基-汉防己甲素与 4-氨基 -1-甲基哌啶反应， 制备了化合物 BS-TE-313:
LC-MS l.Olmin (58.11%), 1.12min (29.03%, 异构体）. m/z 750.9 [M+H]+.
!H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7.64 (d, IH), 7.15 (dd, IH), 7.04 (s, 2H), 6.90 (s, 2H), 6.51 (m, 2H), 6.24 (s, IH), 3.92 (s, 3H), 3.87 (s, 3H), 3.51 (s 3H), 3.35 (s, 3H), 3.11 (s, 3H), 2.79 (s, 3H)。 按照制备 BS-TE-305的方法， 使用同样的碱性试剂和溶剂， 将 5-氯 甲基-汉防己甲素与 1-氨基 -2-丙醇反应， 制备了化合物 BS-TE-315: LC-MS 1.04min (94.45%). m/z 710.9 [M+H]+, 356.4 [1/2 M+H]+.
!H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7.47 (d, J=9.0 Hz, IH), 7.08 (dd, J=8.1 Hz, 2.4 Hz, IH), 6.93 (d, IH), 6.85 (dd, J=8A Hz, 1.8 Hz, IH), 6.78(d, IH), 6.66 (s, IH), 6.54 (s, IH), 6.38 (dd, J=8A Hz, 1.5Hz), 6.01 (s, 1 H), 3.88 (s, 3H), 3.74 (s, 3H), 3.36 (s, 3H), 3.23 (s, 3H), 2.62(s, 3H), 2.24 (s, 3H), 1.29 (s, 3H)。 按照制备 BS-TE-305的方法， 使用同样的碱性试剂和溶剂， 将 5-氯 甲基-汉防己甲素与（S)-N-甲基 -1-苯基乙胺反应， 制备了化合物 BS-TE-317:
LC-MS l.llmin (97.03%). m/z 770.9 [M+H]+, 386.5 [1/2 M+H]+.
!H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7.65 (d, J=9.0 Hz, IH), 7.15 (dd, J=8A Hz, 1.8 Hz, IH), 7.07 (s, 2H), 6.90 (s, 2H), 6.59 (dd, J=8A Hz, 2.1 Hz, IH), 6.52 (s, IH), 6.23 (s, IH), 3.92 (s, 3H), 3.83 (s, 3H), 3.51 (s, 3H), 3.34 (s, 3H), 3.11 (s, 3H), 2.79 (s, 3H)。 按照制备 BS-TE-305的方法， 使用同样的碱性试剂和溶剂， 将 5-氯 甲基-汉防己甲素与 2-氨基噻唑反应， 制备了化合物 BS-TE-320:
LC-MS l.lOmin (55.04%), 1.20min (13.08%, 异构体）. m/z 735.8 [M+H] , 368.8 [1/2 M+H] .
!H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7.50 (dd, J=8.1 Hz, 2.1 Hz, IH), 7.09 (dd, J=8.1 Hz, 2.14 Hz, IH), 6.93 (d, IH), 6.85 (dd, J=8.1 Hz, 1.8 Hz, IH), 6.75 (dd, J=8.1 Hz, 2.1 Hz, IH), 6.68 (s, IH), 6.55 (d, IH), 6.42 (dd, J=8.1 Hz, 2.1 Hz, IH), 6.20 (m, 2H), 6.03 (s, IH), 3.96 (m, IH), 3.90 (s, 3H), 3.68 (s, 3H), 3.38 (s, 3H), 3.26 (s, 3H), 2.74 (s, 3H), 2.22 (s, 3H)。 按照制备 BS-TE-305的方法， 使用同样的碱性试剂和溶剂， 将 5-氯 甲基-汉防己甲素与 3-羟基哌啶反应， 制备了化合物 BS-TE-321 :
LC-MS l.Olmin (95.15%). m/z 736.9 [M+H]+, 369.4 [1/2 M+H]+.
!H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7.45 (dd, J=8.1 Hz, 2.1 Hz, IH), 7.06 (dd, J=8.1 Hz, 2.4 Hz, IH), 6.91 (d, IH), 6.87 (dd, J=7.8 Hz, 1.8 Hz, IH), 6.77 (dd, J=8.1 Hz, 2.4 Hz, IH), 6.67 (s, IH), 6.56 (d, IH), 6.42 (dd, J=8.1 Hz, 2.4 Hz, IH), 6.02 (s, IH), 4.04 (m, IH), 3.88 (s, 3H), 3.68 (s, 3H), 3.35 (d, 3H), 3.24 (d, 3H), 2.66 (s, 3H), 2.55 (d, IH), 2.27 (s, 3H)。 按照制备 BS-TE-305的方法， 使用同样的碱性试剂和溶剂， 将 5-氯 甲基-汉防己甲素与 3-羟基吡咯烷反应， 制备了化合物 BS-TE-322: LC-MS 1.03min (59.49%), l. l lmin (31.36%, 异构体）. m/z 722.9 [M+H]+, 362.3 [1/2 M+H]+.
!H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7.47 (dd, J=8.1 Hz, 1.8 Hz, IH), 7.07 (dd, J=8.1 Hz, 2.7 Hz, IH), 6.90 (d, IH), 6.85 (dd, J=8.1 Hz, 1.8 Hz, IH),
6.77 (dd, J=8.1 Hz, 2.4 Hz, IH), 6.65 (s, IH), 6.55 (d, IH), 6.41 (dd, J=8.1 Hz, 2.1 Hz, IH), 6.00 (s, IH), 4.29 (s, IH), 3.99 (m, IH), 3.88 (s, 3H), 3.67 (s, 3H), 3.35 (s, 3H), 3.23 (s, 3H), 2.62 (s, 3H), 2.23 (s, 3H)。 按照制备 BS-TE-305的方法， 使用同样的碱性试剂和溶剂， 将 5-氯 甲基-汉防己甲素与 4-氰基哌啶反应， 制备了化合物 BS-TE-323:
LC-MS l. l lmin (81.69%). m/z 745.9 [M+H]+, 373.8 (1/2 M+H).
!H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7.47 (dd, /=8.4 Hz, 2.1 Hz, IH), 7.07 (dd, J=8.1 Hz, 2.7 Hz, IH), 6.91 (d, IH), 6.83 (dd, J=7.8 Hz, 1.8 Hz, IH),
6.78 (dd, /=8.4 Hz, 2.7 Hz, IH), 6.66 (s, IH), 6.56 (d, IH), 6.41 (dd, J=8.1 Hz, 1.8 Hz, IH), 6.01 (s, IH), 4.57 (s, IH), 4.01 (m, IH), 3.88 (s, 3H), 3.73 (s, IH), 3.66 (s, 3H), 3.33 (s, 3H), 3.23 (s, 3H), 2.63 (s, 3H), 2.24 (s, 3H)„ 按照制备 BS-TE-305的方法， 使用同样的碱性试剂和溶剂， 将 5-氯 甲基-汉防己甲素与甲胺反应， 制备了化合物 BS-TE-326: LC-MS 1.16min (83.64%). m/z 666.8 [M+H]+.
!H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7.49 (dd, J=8.1 Hz, 2.1 Hz, IH), 7.09 (dd, J=8.1 Hz, 2.4 Hz, IH), 6.92 (d, IH), 6.88 (dd, J=8.1 Hz, 1.8 Hz, IH), 6.78 (dd, J=8.1 Hz, 2.7 Hz, IH), 6.70 (s, IH), 6.53 (d, IH), 6.41 (dd, /=8.4 Hz, 2.1 Hz, IH), 6.04 (s, IH), 4.56 (s, IH), 4.12 (m, IH), 3.89 (s, 3H), 3.69 (s, 3H), 3.37 (s, 3H), 3.27 (s, 3H), 2.71 (s, 3H), 2.55 (d, IH), 2.26 (s, 3H)。 按照制备 BS-TE-305的方法， 使用同样的碱性试剂和溶剂， 将 5-氯 甲基-汉防己甲素与硫代吗啉反应， 制备了化合物 BS-TE-328:
LC-MS l. l lmin (88.79%), 1.25min (10.42%, 异构体)， 1.41min (0.79%). m/z 738.8 [M+H]+, 370.3 [1/2 M+H]+.
!H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7.46 (dd, J=8.1 Hz, 2.1 Hz, IH), 7.07 (dd, J=8.1 Hz, 2.4 Hz, IH), 6.90 (d, IH), 6.86 (dd, J=8.1 Hz, 1.8 Hz, IH), 6.78 (dd, J=8.1 Hz, 2.4 Hz, IH), 6.65 (s, IH), 6.55 (d, IH), 6.41 (dd, /=8.4 Hz, 2.1 Hz, IH), 6.00 (s, IH), 4.29 (s, IH), 4.00 (m, IH), 3.88 (s, 3H), 3.66 (s, 3H), 3.32 (s, 3H), 3.22 (s, 3H), 2.63 (s, 3H), 2.23 (s, 3H)。 按照制备 BS-TE-305的方法， 使用同样的碱性试剂和溶剂， 将 5-氯 甲基-汉防己甲素与 2,5-二氢吡咯反应， 制备了化合物 BS-TE-329: LC-MS l. lOmin (45.45%), 1.34min (31.32%, 异构体）. m/z 704.9 [M+H]+, 353.3 [1/2 M+H]+.
!H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7.44 (dd, J=8.41 Hz, 1.8 Hz, IH), 7.08 (dd, J=8.1 Hz, 2.7 Hz, IH), 6.90 (d, IH), 6.85 (dd, J=8.1 Hz, 1.8 Hz, IH), 6.77 (dd, J=8.1 Hz, 2.7 Hz, IH), 6.66 (s, IH), 6.55 (d, IH), 6.41 (dd, /=8.4 Hz, 2.1 Hz, IH), 6.01 (m, 2H), 6.005.78 (s, IH), 4.00 (m, IH), 3.88 (s, 3H), 3.67 (s, 3H), 3.35 (s, 3H), 3.24 (s, 3H), 2.63 (s, 3H), 2.51 (d, IH), 2.25 (s, 3H)。 按照制备 BS-TE-305的方法， 使用同样的碱性试剂和溶剂， 将 5-氯 甲基 -汉防己甲素与吡唑反应， 制备了化合物 BS-TE-330:
LC-MS 1.20min (58.93%), 1.22min (39.49%, 异构体）. m/z 703.8 [M+H]+, 352.9 [1/2 M+H]+.
!H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7.44 (m, 2H), 7.28 (d, IH), 7.07 (dd, J=8.1 Hz, 2.7 Hz, IH), 6.89 (d, IH), 6.85 (dd, J=8.1 Hz, 2.1 Hz, IH), 6.77 (dd, J=8.1 Hz, 2.4 Hz, IH), 6.67 (s, IH), 6.54 (d, IH), 6.41 (dd, J=8.1 Hz, 2.1 Hz, IH), 6.23 (t, IH), 6.02 (s, IH), 4.00 (m, IH), 3.87 (s, 3H), 3.61 (s, 3H), 3.36 (s, 3H), 3.25 (s, 3H), 2.62 (s, 3H), 2.20 (s, 3H)。 按照制备 BS-TE-305的方法， 使用同样的碱性试剂和溶剂， 将 5-氯 甲基-汉防己甲素与 1-异丙基哌嗪反应， 制备了化合物 BS-TE-333: LC-MS 1.06min (97.06%). m/z 763.9 [M+H]+, 383.0 [1/2 M+H]+.
!H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7.47 (dd, /=8.4 Hz, 2.1 Hz, IH), 7.08 (dd, /=8.4 Hz, 2.4 Hz, IH), 6.91 (d, IH), 6.86 (dd, J=8.1 Hz, 1.8 Hz, IH), 6.79 (dd, J=8.1 Hz, 2.4 Hz, IH), 6.66 (s, IH), 6.56 (d, IH), 6.43 (dd, J=8.1 Hz, 2.1 Hz, IH), 6.00 (s, IH), 4.29 (s, IH), 3.99 (m, IH), 3.89 (s, 3H), 3.67 (s, 3H), 3.34 (s, 3H), 3.24 (s, 3H), 2.63 (s, 3H), 2.24 (s, 3H)。 按照制备 BS-TE-305的方法， 使用同样的碱性试剂和溶剂， 将 5-氯 甲基-汉防己甲素与 N-羟乙基哌嗪反应， 制备了化合物 BS-TE-334: LC-MS 1.02min (98.72%). m/z 765.9 [M+H]+, 384.0 [1/2 M+H]+.
!H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7.47 (dd, J=8.1 Hz, 1.8 Hz, IH), 7.07 (dd, J=8.1 Hz, 2.4 Hz, IH), 6.91 (d, IH), 6.86 (dd, J=8.1 Hz, 1.8 Hz, IH), 6.77 (dd, /=8.4 Hz, 2.7 Hz, IH), 6.66 (s, IH), 6.56 (d, IH), 6.41 (dd, J=8.1 Hz, 1.8 Hz, IH), 6.00 (s, IH), 4.29 (s, IH), 3.99 (m, IH), 3.89 (s, 3H), 3.66 (s, 3H), 3.33 (s, 3H), 3.23 (s, 3H), 2.63 (s, 3H), 2.24 (s, 3H)。 按照制备 BS-TE-305的方法， 使用同样的碱性试剂和溶剂， 将 5-氯 甲基-汉防己甲素与 3-甲氧基丙胺反应， 制备了化合物 BS-TE-340: LC-MS 1.07min (73.86%), 1.12min (14.47%, 异构体）. m/z 724.9 [M+H]+, 363.4 [1/2 M+H]+.
!H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7.47 (dd, /=8.4 Hz, 2.4 Hz, IH), 7.07 (dd, J=8.1 Hz, 2.4 Hz, IH), 6.91 (d, IH), 6.85 (dd, /=8.4 Hz, 1.8 Hz, IH), 6.77 (dd, /=8.4 Hz, 2.7 Hz, IH), 6.67 (s, IH), 6.54 (d, IH), 6.41 (dd, J=8.4 Hz, 1.8 Hz, IH), 6.02 (s, IH), 3.99 (m, IH), 3.88 (s, 3H), 3.75 (s, 3H), 3.36 (s, 3H), 3.24 (s, 3H), 2.62 (s, 3H), 2.49 (d, IH), 2.24 (s, 3H)。 按照制备 BS-TE-305的方法， 使用同样的碱性试剂和溶剂， 将 5-氯 甲基-汉防己甲素与二甲基胺反应， 制备了化合物 BS-TE-341：
LC-MS 1.07min (71.60%), 1.17min (16.12%, 异构体）. m/z 680.9 [M+H]+, 341.3 [1/2 M+H]+.
!H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7.65 (dd, J=8.1 Hz, 2.1 Hz, IH), 7.20 (dd, /=8.4 Hz, 2.4 Hz, IH), 6.91 (d, IH), 6.88 (m, IH), 6.59 (dd, J=8.1 Hz, 2.1 Hz, IH), 6.52 (s, IH), 6.24 (s, IH), 4.35 (d, IH), 3.92 (s, 3H), 3.86 (s, 3H), 3.51 (s, 3H), 3.34 (s, 3H), 3.11 (s, 3H), 2.89 (s, 6H), 2.74 (s, 3H)。 按照制备 BS-TE-305的方法， 使用同样的碱性试剂和溶剂， 将 5-氯 甲基-汉防己甲素与 N-乙基哌嗪反应， 制备了化合物 BS-TE-342:
LC-MS 1.09min (77.97%), 1.17min (20.17%, 异构体）. m/z 749.9 [M+H]+, 375.9 [1/2 M+H]+.
!H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7.47 (dd, J=8.1 Hz, 2.1 Hz, IH), 7.07 (dd, J=8.1 Hz, 2.7 Hz, IH), 6.91 (d, IH), 6.86 (dd, J=8.1 Hz, 1.8 Hz, IH), 6.79 (dd, /=8.4 Hz, 2.4 Hz, IH), 6.66 (s, IH), 6.56 (d, IH), 6.41 (dd, J=8.1 Hz, 2.1 Hz, IH), 6.00 (s, IH), 4.29 (s, IH), 3.99 (m, IH), 3.88 (s, 3H), 3.66 (s, 3H), 3.33 (s, 3H), 3.23 (s, 3H), 2.62 (s, 3H), 2.24 (s, 3H), 1.28 (s, 3H)„ 按照制备 BS-TE-305的方法， 使用同样的碱性试剂和溶剂， 将 5-氯 甲基-汉防己甲素与 N-苯基哌嗪反应， 制备了化合物 BS-TE-343:
LC-MS 1.44min (79.45%), 1.63min (9.06%). m/z 797.9 [M+H]+, 400.0 [1/2 M+H]+.
!H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7.47 (dd, J=8.1 Hz, 2.1 Hz, IH), 7.256-7.173 (m, 2H), 7.08 (dd, J=8.1 Hz, 2.4 Hz, IH), 7.00-6.92 (m, 3H), 6.87 (dd, J=8.1 Hz, 1.8 Hz, IH), 6.83-6.76 (m, 2H), 6.69 (s, IH), 6.56 (d, IH), 6.43 (dd, J=8.1 Hz, 2.1 Hz, IH), 6.04 (s, IH), 4.29 (s, IH), 4.10 (m, IH), 3.97 (d, IH), 3.89 (s, 3H), 3.69 (s, 3H), 3.36 (s, 3H), 3.26 (s, 3H), 2.69 (s, 3 H), 2.30 (s, 3H)。 按照制备 BS-TE-305的方法， 使用同样的碱性试剂和溶剂， 将 5-氯 甲基-汉防己甲素与 3-甲基哌啶反应， 制备了化合物 BS-TE-346:
LC-MS 1.35min (90.37%). m/z 734.9 [M+H]+, 368.4 [1/2 M+H]+.
!H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7.47 (dd, J=8.1 Hz, 2.1 Hz, IH), 7.07 (dd, /=8.4 Hz, 2.7 Hz, IH), 6.91 (d, IH), 6.85 (dd, J=8.1 Hz, 1.8 Hz, IH), 6.78 (dd, J=8.1 Hz, 2.7 Hz, IH), 6.67 (s, IH), 6.55 (d, IH), 6.41 (dd, J=8.1 Hz, 2.1 Hz, IH), 6.02 (s, IH), 4.01 (m, IH), 3.89 (s, 3H), 3.69 (s, 3H), 3.36 (s, 3H), 3.25 (s, 3H), 2.64 (s, 3H), 2.25 (s, 3H)„ 按照制备 BS-TE-305的方法， 使用同样的碱性试剂和溶剂， 将 5-氯 甲基-汉防己甲素与 3-吡啶甲胺反应， 制备了化合物 BS-TE-348:
LC-MS 1.24min (21.76%, 异构体)， 1.32 (69.43%). m/z 743.9 [M+H]+, 372.9 [1/2 M+H]+.
!H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 8.56 (d, IH), 8.45 (dd, J=4.8 Hz, 1.5 Hz, IH), 7.90 (d, IH), 7.50 (dd, J=8.1 Hz, 2.1 Hz, IH), 7.45-7.40 (m, 2H), 7.10 (dd, J=8.1 Hz, 2.4 Hz, IH), 6.92 (d, IH), 6.88 (dd, J=7.8 Hz, 2.1 Hz, IH), 6.80 (dd, /=8.4 Hz, 2.4 Hz, IH), 6.71 (s, IH), 6.52 (d, IH), 6.45 (dd, J=8.7 Hz, 2.4 Hz, IH), 6.05 (s, IH), 4.20 (m, IH), 3.89 (s, 3H), 3.66 (s, 3H), 3.37 (s, 3H), 3.25 (s, 3H), 2.74 (s, 3H), 2.54 (d, IH), 2.31 (s, 3H)。 按照制备 BS-TE-305的方法， 使用同样的碱性试剂和溶剂， 将 5-氯 甲基-汉防己甲素与 3-呋喃甲胺反应， 制备了化合物 BS-TE-350:
LC-MS 1.13min (99.16%). m/z 732.5 [M+H]+, 366.7 [M+H]+.
!H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7.52 (d, IH), 7.49 (dd, J=7.8 Hz, 2.1 Hz, IH), 7.09 (dd, J=8.7 Hz, 2.1 Hz, IH), 6.94 (d, IH), 6.86 (dd, /=8.4 Hz, 1.8 Hz, IH), 6.76 (dd, J=8.1 Hz, 2.7 Hz, IH), 6.70 (s, IH), 6.52 (d, IH), 6.41 (m, 3H), 6.04(s, IH), 4.11 (m, IH), 3.89 (s, 3H), 3.70 (s, 3H), 3.37 (s,3H), 3.25 (s, 3H), 2.7 (s, 3H) 2.28 (s, 3H)。 按照制备 BS-TE-305的方法， 使用同样的碱性试剂和溶剂， 将 5-氯 甲基-汉防己甲素与 3-羟甲基哌啶反应， 制备了化合物 BS-TE-351 : LC-MS 1.28min (83.02%), 1.42min (16.98%, 异构体）. m/z 750.9 [M+H]+, 376.4 [1/2 M+H]+.
!H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7.47 (dd, /=8.4 Hz, 2.1 Hz, IH), 7.07 (dd, J=8.1 Hz, 2.4 Hz, IH), 6.91 (d, IH), 6.87 (dd, J=8.1 Hz, 1.8 Hz, IH), 6.77 (dd, /=8.4 Hz, 2.4 Hz, IH), 6.66 (s, IH), 6.55 (d, IH), 6.41 (dd, J=8.1 Hz, 1.8 Hz, IH), 6.01 (s, IH), 4.00 (m, IH), 3.88 (s, 3H), 3.68 (s, 3H), 3.34 (s, 3H), 3.24 (s, 3H), 2.63 (s, 3H), 2.53 (d, IH), 2.24 (s, 3H)。 按照制备 BS-TE-305的方法， 使用同样的碱性试剂和溶剂， 将 5-氯 甲基-汉防己甲素与 2-甲氨基吡啶反应， 制备了化合物 BS-TE-352: LC-MS 1.33min (54.28%), 1.74min (0.28%, 异构体). m/z 743.9 [M+H]+ 372.9 [1/2 M+H]+.
!H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 8.49 (d, IH), 7.79 (td, IH), 7.45 (m, 2H), 7.30 (m, IH), 7.05 (dd, /=8.4 Hz, 2.4 Hz, IH), 6.90 (d, IH), 6.85 (dd, J=8.1 Hz, 1.8 Hz, IH), 6.77 (dd, J=8.1 Hz, 2.1 Hz, IH), 6.65 (s, IH), 6.53 (d, IH), 6.40 (dd, /=8.4 Hz, 2.1 Hz, IH), 6.00 (s, IH), 4.01 (m, IH), 3.88 (s, 3H), 3.67 (s, 3H), 3.33 (s, 3H), 3.23 (s, 3H), 2.63 (s, 3H), 2.24 (s, 3H)。 按照制备 BS-TE-305的方法， 使用同样的碱性试剂和溶剂， 将 5-氯 甲基-汉防己甲素与 4-二甲氨基哌啶反应， 制备了化合物 BS-TE-354: LC-MS 1.21min (91.1%). m/z 763.9 [M+H]+, 383.0 [1/2 M+H]+ .
!H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7.47 (dd, /=8.4 Hz, 2.1 Hz, IH), 7.07 (dd, /=8.1 Hz, 2.4 Hz, IH), 6.91 (d, IH), 6.85 (dd, J=7.8 Hz, 1.8 Hz, IH), 6.79 (dd, J=8.1 Hz, 2.4 Hz, IH), 6.66 (s, IH), 6.56 (d, IH), 6.41 (dd, J=8.1 Hz, 2.1 Hz, IH), 6.00 (s, IH), 3.99 (m, IH), 3.88 (s, 3H), 3.66 (s, 3H), 3.33 (s, 3H), 3.23 (s, 3H), 2.63 (s, 3H), 2.35 (s, 6H), 2.23 (s, 3H)。 按照制备 BS-TE-305的方法， 使用同样的碱性试剂和溶剂， 将 5-氯 甲基 -汉防己甲素与哌啶反应， 制备了化合物 BS-TE-355:
LC-MS 1.31min (89.22%). m/z 720.9 [M+H]+, 361.4 [1/2 M+H]+.
!H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7.45 (dd, J=8.1 Hz, 2.1 Hz, IH), 7.06 (dd, /=8.4 Hz, 2.7 Hz, IH), 6.91 (d, IH), 6.84 (dd, /=8.4 Hz, 1.8 Hz, IH), 6.76 (dd, /=8.4 Hz, 2.7 Hz, IH), 6.66 (s, IH), 6.56 (d, IH), 6.39 (dd, J=8.1 Hz, 2.1 Hz, IH), 5.96 (s, IH), 3.98 (m, IH), 3.89 (s, 3H), 3.67 (s, 3H), 3.34 (s, 3H), 3.24 (s, 3H), 2.62 (s, 3H), 2.23 (s, 3H)。 按照制备 BS-TE-305的方法， 使用同样的碱性试剂和溶剂， 将 5-氯 甲基-汉防己甲素与 N-甲基高哌嗪反应， 制备了化合物 BS-TE-356: LC-MS 1.24min (84.77%). m/z 750.0 [M+H]+, 375.9 [1/2 M+H]+.
!H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7.47 (dd, J=8.1 Hz, 2.1 Hz, IH), 7.07 (dd, J=8.1 Hz, 2.7 Hz, IH), 6.91 (d, IH), 6.86 (dd, /=8.4 Hz, 2.1 Hz, IH), 6.79 (dd, /=8.4 Hz, 2.7 Hz, IH), 6.66 (s, IH), 6.56 (d, IH), 6.42 (dd, J=8.1 Hz, 2.1 Hz, IH), 6.01 (s, IH), 3.99 (m, IH), 3.89 (s, 3H), 3.66 (s, 3H), 3.33 (s, 3H), 3.23 (s, 3H), 2.63 (s, 3H), 2.64 (s, 3H), 2.24 (s, 3H)。 按照制备 BS-TE-305的方法， 使用同样的碱性试剂和溶剂， 将 5-氯 甲基-汉防己甲素与 5-甲基 -2-呋喃甲胺反应， 制备了化合物 BS-TE-358:
LC-MS 1.42min (98.01%). m/z 747.0 [M+H]+, 374.4 [1/2 M+H]+.
!H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7.52 (dd, /=8.4 Hz, 2.1 Hz, IH), 7.10 (dd, J=8.1 Hz, 2.7 Hz, IH), 6.92 (d, IH), 6.87 (dd, J=8.1 Hz, 1.8 Hz, IH), 6.82 (dd, J=8.1 Hz, 2.4 Hz, IH), 6.74 (s, IH), 6.51 (d, IH), 6.46 (dd, J=8.1 Hz, 2.1 Hz, IH), 6.41 (d, IH), 6.07 (s, IH), 6.05 (dd, J=3.3 Hz, 1.2 Hz, IH), 4.24 (m, IH), 3.89 (s, 3H), 3.72 (s, 3H), 3.39 (s, 3H), 3.27 (s, 3H), 2.79 (s, 3H), 2.30 (s, 3H)。 按照制备 BS-TE-305的方法， 使用同样的碱性试剂和溶剂， 将 5-氯 甲基-汉防己甲素与 2-噻吩甲胺反应， 制备了化合物 BS-TE-359:
LC-MS 1.37min (99.05%). m/z 748.8 [M+H]+, 375.4 [1/2 M+H]+.
!H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7.46 (dd, J=8.4 Hz, 2.4 Hz, IH), 7.32 (dd, /=5.1 Hz, 1.2 Hz, IH), 7.07 (dd, J=8.1 Hz, 2.4 Hz, IH), 7.01 (d, IH), 6.98-6.95 (m, 2H), 6.90 (d, IH), 6.85 (dd, J=8.1 Hz, 1.8 Hz, IH), 6.77 (dd, J=8.1 Hz, 2.4 Hz, IH), 6.66 (s, IH), 6.54 (d, IH), 6.40 (dd, J=8.1 Hz 2.1 Hz, IH), 6.00 (s, IH), 3.88 (s, 3H), 3.70 (d, IH), 3.67 (s, 3H), 3.35 (s, 3H), 3.23 (s, 3H), 2.62 (s, 3H), 2.23 (s, 3H)。 按照制备 BS-TE-305的方法， 使用同样的碱性试剂和溶剂， 将 5-氯 甲基-汉防己甲素与 N-甲基哌嗪反应， 制备了化合物 BS-TE-360:
LC-MS 1.26min (81.86%), 1.41min (14.19%, 异构体）. m/z 735.9 [M+H]+, 368.9 [1/2 M+H]+.
!H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7.47 (dd, J=l .5 Hz, 2.4 Hz, IH), 7.07 (dd, J=8.1 Hz, 2.7 Hz, IH), 6.91 (d, IH), 6.86 (dd, J=8.1 Hz, 1.8 Hz, IH), 6.79 (dd, /=8.4 Hz, 2.1 Hz, IH), 6.66 (s, IH), 6.55 (d, IH), 6.42 (dd, J=8.1 Hz, 1.5 Hz, IH), 6.01 (s, IH), 4.01 (m, IH), 3.89 (s, 3H), 3.66 (s, 3H), 3.33 (s, 3H), 3.23 (s, 3H), 2.64 (s, 3H), 2.24 (d, 6H)。 按照制备 BS-TE-305的方法， 使用同样的碱性试剂和溶剂， 将 5-氯 甲基-汉防己甲素与氨水反应， 制备了化合物 BS-TE-361：
LC-MS 0.72min (89.40%). m/z 651.0 [M+H]+, 326.6 [1/2 M+H]+。 实施例 3: 化合物 BS-TE-418的合成
Figure imgf000048_0001
l-a X=CI BS-TE-418
向溶有 5-氯甲基 -汉防己甲素 （ 120 mg, 0.17 mmol ) ， 1 -(2-羟乙 基)咪唑（20 mg, 0.25 mmol)的乙腈 (3 mL) 中， 加入氢化钠（15 mg, 0.34 mmol) , 加热升温至 75 。C搅拌 2小时后， 将反应液过滤， 滤液 浓缩后得到的粗产品经制备色谱分离纯化， 得到白色固体粉末化合物 BS-TE-418 (20 mg, 18%)。 LC-MS: 1.07min (95.52%), m/z 747 [M+H] , 374 [1/2 M+H] .
!H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7.60 (s, IH), 7.45 (dd, / = 8.4 Hz, 1.8 Hz, IH), 7.10 (s, IH), 7.07 (dd, J = 8.4 Hz, 2.7 Hz, IH), 6.94-6.91 (m, 2H), 6.86 (dd, / = 8.1 Hz, 1.8 Hz, IH), 6.77 (d, / = 8.4 Hz, 2.4 Hz, IH), 6.67 (s, IH), 6.53 (d, IH), 6.41 (dd, / = 8.1 Hz, 2.1 Hz, IH), 4.02 (m, IH), 3.88 (s, 3H), 3.61 (s, 3H), 3.34 (s, 3H), 3.21 (s, 3H), 2.65 (s, 3H), 2.22 (s, 3H)。 按照制备 BS-TE-418的方法， 使用同样的碱性试剂和溶剂， 将 5-氯 甲基-汉防己甲素与 2-苯氧乙醇反应， 制备了化合物 BS-TE-402:
LC-MS 1.67min (91.83%). m/z 773.9 [M+H]+, 387.9 [1/2 M+H]+.
!H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7.44 (dd, J=8.1 Hz, 2.1 Hz, IH), 7.23 (m, 2H),7.06 (dd, J=8.1 Hz, 2.4 Hz, IH), 6.92-6.87 (m, 4H), 6.84 (dd, J=8.1 Hz, 1.8 Hz, IH), 6.76 (dd, /=8.4 Hz, 2.4 Hz, IH), 6.65 (s, IH), 6.54 (d, IH), 6.38 (dd, J=8.1 Hz, 2.1 Hz, IH), 6.00 (s, IH), 4.59 (s, IH), 4.11 (m, 2H), 3.99 (m, IH), 3.88 (s, 3H), 3.82 (m, 2H), 3.68 (s, 3H), 3.34 (s, 3H), 3.20 (s, 3H), 2.62 (s, 3H), 2.48 (d, IH), 2.22 (s, 3H)。 按照制备 BS-TE-418的方法， 使用同样的碱性试剂和溶剂， 将 5-氯 甲基-汉防己甲素与 3,5-二甲氧基苯乙醇反应， 制备了化合物 BS-TE-403:
LC-MS 1.32min (95.19%). m/z 817.9 [M+H]+, 410.0 [1/2 M+H]+.
!H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7.44 (dd, J=8.4 Hz, 2.4 Hz, IH), 7.05 (dd, J=8.1 Hz, 2.4 Hz, IH), 6.90 (d, IH), 6.90-6.85 (m, 3H), 6.76-6.71 (m, 2H), 6.64 (s, IH), 6.52 (d, IH), 6.38 (dd, J=8.1 Hz, 2.1 Hz, IH), 5.99 (s, IH), 4.48 (m, 2H), 3.99 (m, IH), 3.88 (s, 3H), 3.78 (s, 3H), 3.76 (s,3H), 3.62 (s, 3H), 3.19 (s, 3H), 2.62 (s, 3H), 2.17 (s, 3H)。 按照制备 BS-TE-418的方法， 使用同样的碱性试剂和溶剂， 将 5-氯 甲基-汉防己甲素与 1-甲氧基 -2-丙醇反应， 制备了化合物 BS-TE-406: LC-MS 1.22min (85.14%). m/z 725.8 [M+H]+, 363.8 [1/2 M+H]+.
!H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7.44 (dd, /=8.4 Hz, 2.1 Hz, IH), 7.08 (dd, J=8.1 Hz, 2.4 Hz, IH), 6.93-6.86 (m, 2H), 6.75 (dd, /=8.4 Hz, 2.7 Hz, IH), 6.67 (s, IH), 6.54 (d, IH), 6.38 (dd, /=8.4 Hz, 2.4 Hz, IH), 6.01 (s, IH), 3.99 (m, IH), 3.88 (s, 3H), 3.69 (s, 3H), 3.36 (s, 3H), 3.33 (s, 3H), 3.32 (s, 3H), 2.63 (s, 3H), 2.22 (s, 3H),1.28 (s, 3H)。 按照制备 BS-TE-418的方法， 使用同样的碱性试剂和溶剂， 将 5-氯 甲基-汉防己甲素与 4-氟苯甲醇反应， 制备了化合物 BS-TE-408:
LC-MS 1.36min (83.62%). m/z 761.9 [M+H]+, 382.0 [1/2 M+H]+.
!H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7.44 (dd, J=8.1 Hz, 2.1 Hz, IH), 7.38-7.33 (m, 2H), 7.08-7.02 (m, 5H), 6.92 (m, IH), 6.85 (dd, J=8.1 Hz, 2.1 Hz, IH), 6.75 (dd, /=8.4 Hz, 2.4 Hz, IH), 6.66 (s, IH), 6.54 (d, IH),
6.38 (dd, /=8.4 Hz, 2.4 Hz, IH), 6.01 (s, IH), 4.52 (m, 4H), 3.96 (m, IH),
3.88 (s, 3H), 3.65 (s, 3H), 3.35 (s, 3H), 3.21 (s, 3H), 2.62 (s, 3H), 2.49 (d, IH), 2.24 (s, 3H)。 按照制备 BS-TE-418的方法， 使用同样的碱性试剂和溶剂， 将 5-氯 甲基-汉防己甲素与 3-吡啶甲醇反应， 制备了化合物 BS-TE-41 1 :
LC-MS 1.08min (85.44%). m/z 744.9 [M+H]+, 373.4 [1/2 M+H]+.
!H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 8.51 (d, 2H), 8.22 (dd, J=8.1 Hz, 1.8 Hz, IH), 7.81 (d, IH), 7.46 (m, 2H), 7.08 (dd, J=8.1 Hz, 2.4 Hz, IH), 6.92 (m IH), 6.85 (dd, J=8.4 Hz, 2.1 Hz, IH), 6.76 (dd, J=8.4 Hz, 2.4 Hz, IH), 6.66 (s, IH), 6.54 (d, IH), 6.38 (dd, /=8.4 Hz, 2.1 Hz, IH), 6.01 (s, IH), 4.59 (d, 2H), 3.99 (m, IH), 3.88 (s, 3H), 3.66 (s, 3H), 3.35 (s, 3H), 3.22 (s 3H), 2.62 (s, 3H), 2.49 (d, IH), 2.24 (s, 3H)。 按照制备 BS-TE-418的方法， 使用同样的碱性试剂和溶剂， 将 5-氯 甲基-汉防己甲素与 3-噻吩甲醇反应， 制备了化合物 BS-TE-415:
LC-MS 1.31min (95.23%). m/z 749.8 [M+H]+, 375.9 [1/2 M+H]+.
!H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7.46 (dd, J=8.4 Hz, 2.4 Hz, IH), 7.38 (m, IH), 7.33 (m, IH), 7.09-7.04 (m, 2H), 6.92 (m, IH), 6.85 (dd, /=8.4 Hz, 1.8 Hz, IH), 6.76 (dd, J=7.8 Hz, 1.8 Hz, IH), 6.68 (s, IH), 6.54 (d, IH),
6.39 (dd, /=8.4 Hz, 2.1 Hz, IH), 6.03 (s, IH), 4.55 (m, 3H), 3.99 (m, IH),
3.89 (s, 3H), 3.66 (s, 3H), 3.36 (s, 3H), 3.22 (s, 3H), 2.66 (s, 3H), 2.50 (d, IH), 2.26 (s, 3H)。 按照制备 BS-TE-418的方法， 使用同样的碱性试剂和溶剂， 将 5-氯 甲基-汉防己甲素与 3-甲氧基丙醇反应， 制备了化合物 BS-TE-416: LC-MS 1.22min (92.15%). m/z 725.9 [M+H]+, 363.8 [1/2 M+H]+.
!H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7.44 (dd, J=8.1 Hz, 2.4 Hz, IH), 7.07 (dd, /=8.4 Hz, 2.4 Hz, IH), 6.90 (d, IH), 6.85 (dd, J=8.1 Hz, 1.8 Hz, IH), 6.75 (dd, J=8.1 Hz, 2.4 Hz, IH), 6.67 (s, IH), 6.54 (d, IH), 6.40 (dd, J=8.1 Hz, 2.1 Hz, IH), 6.01 (s, IH), 4.55 (m, 3H), 3.99 (m, IH), 3.88 (s, 3H), 3.68 (s, 3H), 3.54 (t, 2H), 3.44 (t, 2H), 3.36 (s, 3H), 3.21 (s, 3H), 2.63 (s, 3H), 2.50 (d, IH), 2.26 (s, 3H)。 按照制备 BS-TE-418的方法， 使用同样的碱性试剂和溶剂， 将 5-氯 甲基-汉防己甲素与 3-四氢呋喃甲醇反应， 制备了化合物 BS-TE-417: LC-MS 1.20min (99.34%). m/z 737.9 [M+H]+, 369.8 [1/2 M+H]+.
!H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7.46 (dd, J=7.8 Hz, 2.1 Hz, IH), 7.07 (dd, J=8.1 Hz, 2.7 Hz, IH), 6.90 (d, IH), 6.85 (dd, J=7.8 Hz, 1.8 Hz, IH), 6.75 (dd, J=8.1 Hz, 2.4 Hz, IH), 6.66 (s, IH), 6.55 (d, IH), 6.40 (dd, J=8.1 Hz, 2.1 Hz, IH), 6.01 (s, IH), 4.50 (m, 2H), 3.99 (m, IH), 3.88 (s, 3H), 3.68 (s, 3H), 3.36 (s, 3H), 3.21 (s, 3H), 2.62 (s, 3H), 2.50 (d, IH), 2.24 (s, 3H)„ 按照制备 BS-TE-418的方法， 使用同样的碱性试剂和溶剂， 将 5-氯 甲基-汉防己甲素与乙醇反应， 制备了化合物 BS-TE-419:
LC-MS 1.22min (96.86%). m/z 681.9 [M+H]+, 341.8 [1/2 M+H]+.
!H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7.50 (dd, /=8.4 Hz, 2.1 Hz, IH), 7.09 (dd, J=8.1 Hz, 2.7 Hz, IH), 6.96 (d, IH), 6.90 (dd, J=8.1 Hz, 1.8 Hz, IH), 6.84 (dd, J=8.1 Hz, 2.4 Hz, IH), 6.79 (s, IH), 6.53 (d, IH), 6.40 (dd, J=8.1 Hz, 2.1 Hz, IH), 6.1 1 (s, IH), 4.61 (s, 2H), 4.41 (m, IH), 4.10 (d, IH), 3.90 (s, 3H), 3.70 (s, 3H), 3.58 (t, 2H), 3.42 (s, 3H), 3.26 (s, 3H), 2.89 (s, 3H), 2.68 (d, IH), 2.47 (s, 3H)。 按照制备 BS-TE-418的方法， 使用同样的碱性试剂和溶剂， 将 5-氯 甲基-汉防己甲素与环丙胺反应， 制备了化合物 BS-TE-420:
LC-MS 1.21min (100%). m/z 667.8 [M+H]+, 334.8 [1/2 M+H]+.
!H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7.50 (dd, J=8.1 Hz, 2.1 Hz, IH), 7.08 (dd, J=8.1 Hz, 2.4 Hz, IH), 6.94 (d, IH), 6.85 (dd, J=8.1 Hz, 1.8 Hz, IH), 6.75 (dd, /=8.4 Hz, 2.7 Hz, IH), 6.74 (s, IH), 6.54 (d, IH), 6.45 (dd, /=8.4 Hz, 2.1 Hz, IH), 6.07 (s, IH), 4.50 (s, 2H), 4.24 (q, IH), 3.89 (s, 3H), 3.70 (s, 3H), 3.40 (s, 3H), 3.36 (s, 3H), 3.24 (s, 3H), 2.80 (s, 3H), 2.60 (d, IH), 2.37 (s, 3H)„ 按照制备 BS-TE-418的方法， 使用同样的碱性试剂和溶剂， 将 5-氯 甲基-汉防己甲素与苯硫酚反应， 制备了化合物 BS-TE-421：
LC-MS 1.41min (97.69%). m/z 746.5[M+H]+, 373.8 [1/2 M+H]+。
实施例 5:本发明的 5-位碳取代的汉防己甲素衍生物抗白血病的活性 测定
(1) 实验材料
白血病细胞株： 白血病细胞株： K562/adr (耐药慢性髓系白血病， CML)、 NB4 (急性早幼粒细胞白血病， AML)、 Kasumi-1 (急性髓系白血 病 M2型， AML-M2)、 Jurkat (急性淋巴细胞白血病， ALL)， 以上细胞系 均受赠于浙江大学肿瘤研究所； H9 (急性淋巴细胞白血病， ALL)， 购自 中国典型培养物保藏中心。
试剂： 汉防己甲素 (TTD )标准品购自陝西慈缘生物技术有限公司， 本发明的 5-位碳取代的汉防己甲素衍生物
主要仪器： Thermo Scientific 3111细胞培养箱， Bio-Rad iMark酶标 仪。
(2) 实验方法
取生长良好的白血病细胞 6000个， 接种到 96孔细胞培养板孔内。 培养液为含 10 %胎牛血清的 1640细胞培养液。 加入不同浓度的汉防己 甲素类化合物， 混匀后， 置于二氧化碳（5% C02 ) 细胞培养箱 37。C培 养 72小时。 然后用 MTT法测定活细胞浓度。 在本实验中对照组（不加 化合物处理）细胞活力设为 100 %，并计算出化合物作用后细胞活力（％ ) 和 72小时白血病细胞半数生长抑制浓度 (72小时 IC5。值和 IC9。值)。
(3) 实验结果
实验结果见表 1。 表 1显示本发明的 5-位碳取代的汉防己甲素衍生 物能诱导人慢性髓系白血病、 急性髓系白血病和急性淋巴细胞白血病细 胞死亡和抑制这些白血病细胞生长， 与汉防己甲素本身比较， 本发明的 明的 5-位碳取代的汉防己甲素衍生物 BS-TE-329抗 K562/adr (耐药慢性 髓系白血病， CML) 活性提高近 4 倍； BS-TE-305， BS-TE-321 , BS-TE-329, BS-TE-346, BS-TE-350, BS-TE-354, BS-TE-355, BS-TE-359, BS-TE-360比汉防己甲素抗 Kasumi-1 (急性髓系白血病 M2型， AML-M2) 活性提高 3至 4倍； BS-TE-346, BS-TE-350, BS-TE-354, BS-TE-355 , BS-TE-358 , BS-TE-360比汉防己甲素抗 Jurkat (急性淋巴细胞白血病， ALL)活性提高近 4倍； BS-TE-402抗 NB4 (急性早幼粒细胞白血病， AML) 活性提高近 8倍； BS-TE-360， BS-TE-402比汉防己甲素抗 H9 (急性淋 巴细胞白血病， ALL)活性提高近 12倍.
表 1: 5-位碳取代的汉防己甲素衍生物对白血病细胞， 人多发性骨髓瘤 和淋巴瘤细胞生长抑制浓度测定（ 72小时， IC5。（ g/mL)值和 IC9。（ g/mL) 值） 。
K562/ADR Kasumi- 1 Jurkat
Compound ID ic50 IC90 IC50 IC90 IC50 IC90
TTD 0.44 2.14 1.69 8.24 2.09 9.85
BS-TE-204 1.47 14.50 2.32 7.50 2.66 9.06
BS-TE-213 3.70 11.11 7.74 >16 >16 >16
BS-TE-215 2.18 8.89 4.92 15.51 4.64 10.92
BS-TE-216 3.06 16.00 3.15 8.98 2.52 8.03
BS-TE-223 0.50 9.91 2.00 8.00 3.42 11.26
BS-TE-224 0.67 4.65 3.19 7.36 3.39 7.65
BS-TE-301 0.49 2.81 1.67 5.53 1.09 6.61
BS-TE-305 0.44 7.20 0.52 3.11 1.35 4.96
BS-TE-307 0.25 7.80 1.00 4.79 3.08 13.25
BS-TE-308 3.54 12.36 1.76 8.69 3.91 12.74
BS-TE-311 1.97 12.00 1.33 5.63 3.15 9.19
BS-TE-315 4.78 10.42 1.99 7.72 4.53 11.04
BS-TE-317 0.36 1.58 0.88 3.57 1.13 4.75
BS-TE-320 0.84 3.36 0.78 3.65 2.00 6.19
BS-TE-321 0.49 3.02 0.48 2.55 0.94 5.75
BS-TE-322 1.10 3.24 1.22 3.83 1.67 3.97
BS-TE-323 0.21 2.16 1.23 4.60 1.28 9.00
BS-TE-326 0.89 2.14 0.96 2.37 1.41 3.98
BS-TE-328 1.46 5.12 0.84 3.76 2.09 8.00
BS-TE-329 0.10 1.33 0.50 3.40 0.91 3.31
BS-TE-330 0.56 2.83 1.45 6.95 2.37 5.51
BS-TE-333 0.43 1.91 0.77 3.29 0.81 4.18
BS-TE-334 1.49 5.99 1.06 3.64 1.88 7.85
BS-TE-340 0.98 2.39 0.66 1.80 2.24 4.00
Figure imgf000054_0001
Figure imgf000054_0002
Figure imgf000054_0003
Figure imgf000054_0004
Ϊ二
Figure imgf000055_0001
BS-TE-415 1.71 2.50
BS-TE-416 2.31 4.40
BS-TE-417 2.03 4.37
BS-TE-418 2.38 5.00
BS-TE-419 4.64 7.26
BS-TE-420 4.40 7.68
实施例 6:本发明的 5-位碳取代的汉防己甲素衍生物抗人多发性骨髓 瘤和淋巴瘤细胞活性测定
(1) 实验材料
骨髓瘤和淋巴瘤细胞株： RPMI8226(多发性骨髓瘤)，购自上海复祥 生物科技有限公司。
试剂： 同实施例 5
主要仪器： Thermo Scientific 3111细胞培养箱， Bio-Rad iMark酶标 仪。
(2) 实险方法
取生长良好的上述肿瘤细胞 6000个，接种到 96孔细胞培养板孔内。 培养液为含 10 %胎牛血清的 1640细胞培养液。 加入不同浓度的汉防己 甲素衍生物， 混匀后, 置于二氧化碳（5% C02 ) 细胞培养箱 37。C培养 72小时。 然后用 MTT法测定活细胞浓度。 在本实验中对照组（不加化 合物处理）细胞活力设为 100 %， 并计算出化合物作用后细胞活力 （％) 和 72小时白血病细胞半数生长抑制浓度 (72小时 IC5。值和 IC9。值)。
(3) 实验结果
实验结果见表 2。 表 2显示本发明的 5-位碳取代的汉防己甲素衍生 物能诱导人骨髓瘤和淋巴瘤细胞死亡和抑制这些肿瘤细胞生长， 其中本 发明的 5-位碳取代的汉防己甲素衍生物 BS-TE-305, BS-TE-342比汉防己 甲素抗 RPMI8226(多发性骨髓瘤）活性提高 60倍以上， BS-TE-329提高 近 90倍。 实施例 7:本发明的 5-位碳取代的汉防己甲素衍生物抗人实体瘤作用 测定
(1) 实验材料
人实体瘤细胞株： Hep-2(喉癌）、 A549(人肺癌）、 CaES-17(食道癌 细胞)、 PC-3(前列腺癌）、 CNE (鼻咽癌细胞)、 SK-OV-3(卵巢癌细胞)， 均 购自中国典型培养物保藏中心； RKO(人结肠腺癌细胞)、 MGC 803(人胃 癌细胞)、 MG63(骨肉瘤）、 U87 MG (恶性脑胶质瘤细胞)， 均购自上海复 祥生物科技有限公司； PANC-1(胰腺癌）、 Huh7(人肝癌细胞)、 Becap37(人 乳腺癌细胞)、 Hela (人宫颈癌细胞)， 均受赠于浙江大学肿瘤研究所。
试剂： 同实施例 5
主要仪器： Thermo Scientific 3111细胞培养箱， Bio-Rad iMark酶标 仪。
(2) 实验方法
取生长良好的人实体瘤细胞 4000个，接种到％孔细胞培养板孔内。 培养液为含 10 %胎牛血清的 DMEM高糖细胞培养液。置于二氧化碳（ 5% C02 ) 细胞培养箱 37。C培养 24小时， 然后， 加入不同浓度的汉防己甲 素衍生物， 混匀后, 继续置二氧化碳（5% C02 ) 细胞培养箱 37。C培养 72小时。 然后用 MTT法测定活细胞浓度， 并计算出药物作用后细胞活 力 （％) 。 在本实验中对照组（不加化合物处理）细胞活力设为 100 %。
(3) 实验结果
实验结果见表 2。 表 2显示本发明的 5-位碳取代的汉防己甲素衍生 物能诱导人实体瘤细胞死亡和抑制这些肿瘤细胞生长， 与汉防己甲素本 身比较， 本发明 5-位碳取代的汉防己甲素衍生物抗实体瘤细胞活性明显 增强， 其中本发明的 5-位碳取代的汉防己甲素衍生物 BS-TE-305 抗 A549(人肺癌）活性提高近 3倍； BS-TE-317, BS-TE-354抗 PANC-1(胰腺 癌)活性提高达 2倍， BS-TE-354抗 Huh7(人肝癌细胞)活性提高近 8倍； BS-TE-317, BS-TE-333, BS-TE-346, BS-TE-350, BS-TE-354, BS-TE-355, BS-TE-359, BS-TE-360抗 MGC 803(人胃癌细胞)活性提高 2倍以上； BS-TE-354和 BS-TE-402抗 Becap37(人乳腺癌细胞)活性提高分别为 17 倍和 13倍； BS-TE-305和 BS-TE-317抗 PC-3(前列腺癌） 活性提高将近 4倍； BS-TE-360和 BS-TE-402抗 RKO (人结肠腺癌细胞） 活性提高分别 为 22倍和 16倍； BS-TE-402抗 Hep-2(喉癌）、 CaES-17(食道癌细胞)、 MG63(骨肉瘤）、 Hela (人宫颈癌细胞） 活性分别提高 7倍、 14倍、 27倍 和 9倍； BS-TE-342, BS-TE-350, BS-TE-351, BS-TE-354, BS-TE-359, BS-TE-360 抗 U87 MG (恶性脑胶质瘤细胞） 活性提高 2 倍以上； BS-TE-354, BS-TE-360抗 CNE (鼻咽癌细胞） 活性提高达 5 至 6倍； BS-TE-354, BS-TE-402抗 SK-OV-3(卵巢癌细胞） 活性也提高达 6倍以 上。
表 2： 汉防己甲素衍生物对人实体瘤细胞半数生长抑制浓度测定 ( 72小时， IC5o( g/mL)值和 IC9o g/mL)值）
RPMI8226 A549 PANC-1 MGC-803
Compound
ID ic50 IC90 IC50 IC90 IC50 IC90 IC50 IC90
TTD 0.37 2.54 2.9 12.5 3.16 7.02 1.97 7.41
BS-TE-204 0.47 1.92 3.12 14.18 6.47 11.08 2.57 9.00
BS-TE-213 1.95 8 >16 >16 >10 >10 18.95 64.43
BS-TE-215 0.87 5.13 11.90 >16 5.11 15.00 5.78 8.00
BS-TE-216 0.54 3.14 8.60 >16 15.77 >16 2.51 4.00
BS-TE-223 0.23 2.29 4.45 14.20 10.73 16.00 3.54 38.06
BS-TE-224 0.27 1.44 >16 >16 5.68 8.76 2.45 3.72
BS-TE-301 0.06 2.95 5.10 >16 2.79 7.35 1.74 7.10
BS-TE-305 0.006 0.42 1.00 5.25 3.72 13.43 1.00 10.00
BS-TE-307 0.07 0.42 2.30 8.00 3.47 8.88 3.74 14.14
BS-TE-308 0.28 0.76 2.79 11.15 6.54 14.68 4.44 23.00
BS-TE-311 0.18 1.74 1.89 9.07 6.31 13.18 3.17 11.79
BS-TE-315 0.30 2.07 1.96 9.36 5.89 14.68 3.63 10.46
BS-TE-317 0.06 1.49 2.20 5.80 1.40 4.18 0.73 1.00
BS-TE-320 0.06 2 2.98 7.85 3.52 9.25 1.72 2.76
BS-TE-321 0.08 3.63 4.40 16.00 2.60 9.14 1.78 6.73
BS-TE-322 0.14 0.7 1.83 6.34 3.29 5.41 2.29 >10
BS-TE-323 0.12 3.88 6.20 16.00 2.46 7.10 3.04 8.00
BS-TE-326 0.27 0.64 1.80 4.90 1.63 5.16 1.46 5.38
BS-TE-328 0.15 0.96 3.70 9.90 2.99 7.15 1.68 4.00
BS-TE-329 0.004 0.29 2.36 4.77 >10 >10 1.26 1.82
Figure imgf000059_0002
Figure imgf000059_0001
Figure imgf000059_0003
Figure imgf000060_0001
Figure imgf000061_0001
Figure imgf000061_0002
Figure imgf000061_0003
Figure imgf000061_0004
Figure imgf000061_0005
Figure imgf000061_0006
s/u siosld
Figure imgf000062_0003
Figure imgf000062_0001
Figure imgf000062_0002
γ ζ ID
TTD 0.66 3.58 3.3 6.2 9.04 >16
BS-TE-215 3.14 8.00 6.97 12.17 7.50 >16
BS-TE-216 1.24 3.74 3.86 13.30 7.00 >16
BS-TE-301 0.69 3.05 3.70 6.20 3.77 24.28
BS-TE-317 0.50 1.81 2.30 3.50 2.00 8.10
BS-TE-321 0.57 2.51 2.80 6.60 3.50 >16
BS-TE-323 0.98 4.02 4.80 10.40 8.00 >16
BS-TE-326 0.75 2.40 3.20 4.95 1.91 5.21
BS-TE-328 1.44 5.39 6.02 >16 6.80 >16
BS-TE-333 0.50 1.51 2.60 5.60 3.04 >16
BS-TE-342 0.30 1.16 1.60 3.70 2.00 >16
BS-TE-346 0.19 0.57 2.50 5.40 3.90 >16
BS-TE-350 0.30 1.13 1.30 3.30 1.80 12.90
BS-TE-351 0.28 0.67 1.32 3.84 3.50 >16
BS-TE-354 0.31 1.44 0.54 1.62 1.40 >16
BS-TE-355 0.37 1.16 1.17 3.64 3.50 >16
BS-TE-356 1.11 2.02 0.94 2.59 2.19 4.00
BS-TE-358 0.65 1.99 2.26 4.12 4.00 >16
BS-TE-359 0.33 1.01 1.57 2.83 2.00 14.40
BS-TE-360 0.33 1.55 0.64 3.55 1.62 3.22
BS-TE-402 0.55 1.78 1.03 2.49 1.37 3.89
BS-TE-403 1.35 2.45 2.12 4.46 3.50 15.10
BS-TE-406 2.86 6.66 1.60 3.49 7.10 >16
BS-TE-411 1.09 2.55 1.32 3.33 8.00 >16 从实施利 6和 7的体外试验数据可以看出， 所测试的本发明化合 物均具有抗肿瘤活性。 与式 (I-b)的化合物相比， 式 (I-c)化合物以及式 (I-d)和式 (I-e)化合物具有更强的抗肿瘤活性。 值得注意的是， 所测试 的式 (I-c)、 式 (I-d)和式 (I-e)化合物至少对于一个肿瘤细胞系的 IC5()值 低于或相当于对照化合物 TTD。 实施例 8: 本发明的部分 5-碳取代汉防己甲素衍生物抗体内肿瘤的 活性测定及毒性的初步测试。 实验 8-1 : BS-TE-403及 BS-TE-333对棵鼠人肺癌移植瘤的抑制作用
( 1 ) 实验材料：
细胞系：人非小细胞肺癌细胞株 A549，来源于中国典型培养物保藏 中心 （CCTCC ) ；
动物： BALB/c棵鼠， 8周， 雌性， 购自中国科学院上海实验动物中 心。
( 2 ) 试剂： BS-TE-403及 BS-TE-333 (本发明）， 汉防己甲素 TTD来源 于江西金芙蓉生物有限公司。 所有化合物均为 50mg/kg体重 /次的 剂量
( 3 ) 主要仪器： 细胞培养箱 ( Thermo Scientific C02培养箱， 3111型）， 生物安全拒（Heal Force, Hfsafe-1200A2 ) ， 层流架（苏杭牌洁净 动物饲养拒， DJ-2型） .
( 4 ) 实验方法
无菌条件下收集对数生长期上述肿瘤细胞，以 5x l06/0.2ml/只棵鼠的 细胞量（活细胞率 >95% )， 经皮下注射于棵鼠右腋下， 建立人非小细胞 肺癌棵鼠移植瘤模型。
实验共分 4组： 阴性对照组（溶剂组） ， 阳性对照组（先导化合物 TTD组） ， BS-TE-403组和 BS-TE-333组。
接种后第三天开始给药， 每只鼠每次灌胃 0.4 mL， 每天用药 3次， 用药时间为 8点， 14点， 20点， 间隔时间为 6小时， 连续给药 10天。 以给药前一天为第 0天， 每隔 5天测体重及瘤径， 做出体重及肿瘤生长 动态图。 第 27天解剖取出瘤体称重， 以对照组抑瘤率为 0， 计算出药物 作用后的肿瘤抑制率（％) 。
测定值用平均数±标准误（M±SD )表示。 表 3: BS-TE-403和 BS-TE-333对棵鼠人肺癌移植瘤的影响
Figure imgf000064_0001
图 1显示 BS-TE-403和 BS-TE-333对棵鼠体重影响的动态变化。 如 图 1所示， BS-TE-403与对照组体重比较， 体重下降不明显， 表明 BS-TE-403在这个剂量下尚无明显毒副作用。 BS-TE-333与对照组体重 比较， 体重下降较明显， 表明 BS-TE-333在这个剂量下有毒副作用。 图 2显示 BS-TE-403和 BS-TE-333对棵鼠人肺癌移植瘤影响的动态曲 线。 如图 2所示， BS-TE-403和 BS-TE-333对棵鼠人肺癌移植瘤有抑瘤 作用。 图 3显示棵鼠人肺癌移植瘤图， 图 4显示 BS-TE-403和 BS-TE-333对 棵鼠人肺癌移植瘤重量的影响。 图 5显示 BS-TE-403和 BS-TE-333对棵 鼠人肺癌移植瘤的抑制作用。 如上述表、 图所示， 在体内实验中， BS-TE-403对棵鼠人肺癌移植 瘤的抑制率为 29.08%， BS-TE-333对棵鼠人肺癌移植瘤的抑制率为 31.15%, BS-TE-403和 BS-TE-333对棵鼠人肺癌移植瘤具有抑制作用。 实验 8-2: BS-TE-354对棵鼠人肺癌移植瘤的抑制作用
( 1 ) 实验材料：
细胞系：人非小细胞肺癌细胞株 A549，来源于中国典型培养物保藏 中心 （CCTCC ) ；
动物： BALB/c棵鼠， 8周， 雌性， 购自中国科学院上海实验动物中 心。
( 2 )试剂： BS-TE-354 (本发明） ， 为 50mg/kg体重 /次的剂量
( 3 )主要仪器： 细胞培养箱（ Thermo Scientific C02培养箱， 3111型）， 生物安全拒（Heal Force, Hfsafe-1200A2 ) ， 层流架（苏杭牌洁净动物 饲养拒， DJ-2型） .
( 4 ) 实验方法
无菌条件下收集对数生长期上述肿瘤细胞， 以 1.3x l07/0.2ml/只棵鼠 的细胞量（活细胞率 >95% )， 经皮下注射于棵鼠右腋下， 建立人非小细 胞肺癌棵鼠移植瘤模型。
实验共分 3组： 阴性对照组（溶剂组） ， 阳性对照组（吉非替尼， Jef ) ， BS-TE-354组。
接种后第三天开始给药， 每只鼠每次灌胃 0.4 ml， 每天用药 3次， 用药时间为 8点， 14点， 20点， 间隔时间为 6小时， 连续给药 10天。 以给药前一天为第 0天， 每隔 5天测体重及瘤径， 做出体重及肿瘤生长 动态图。 第 29天解剖取出瘤体称重， 以对照组抑瘤率为 0， 计算出药物 作用后的肿瘤抑制率（％) 。
测定值用平均数士标准误（M±SD )表示。 表 4: BS-TE-354对棵鼠人肺癌移植瘤的影响
Figure imgf000066_0001
图 6显示 BS-TE-354对棵鼠体重影响的动态变化。 如图 6所示， BS-TE-354与对照组体重比较， 体重下降较明显， 表明 BS-TE-354在这 个剂量下有毒副作用。 图 7显示 BS-TE-354对棵鼠人肺癌移植瘤影响的动态曲线。 图 8显示 棵鼠人肺癌移植瘤图。 图 9显示 BS-TE-354对棵鼠人肺癌移植瘤重量的影 响。 图 10显示 BS-TE-354对棵鼠人肺癌移植瘤的抑制作用。 如上述表、 图所示， 在体内实验中， BS-TE-354对棵鼠人肺癌移植 瘤的抑制率为 43.60 %， BS-TE-354对棵鼠人肺癌移植瘤具有抑制作用。

Claims

权 利 要 求 书
1.通式 (I)的 5-位碳取代的汉防己甲素衍生物或其药学上可接受的
Figure imgf000067_0001
其中，
X选自氧、 硫、 氮和羰氧基；
n为 1或 2， 其中当 X为氧或石克时， n=l, 当 X为氮时， n=2;
R独立地选自 H、 CrC6烷基、 C3-C7环烷基或环烯基、 芳基或杂芳基、 芳基 -d-C3烷基、杂芳基 -CrC3烷基、芳氧基- CrC3烷基、杂芳氧基- d-C3 烷基， 当 X为羰氧基时， R还可以为 CrC6烷氧基或 CrC6烷硫基， 当 X 为氮时， 两个 R可以与它们连接的氮原子一起形成非芳香含氮杂环基或 含氮杂芳基； 所述非氢基团任选地被选自下组的基团取代： 鹵素、氨基、 C C6烷基氨基、 硝基、 氰基、 羟基、 CrC6烷氧基、 巯基和 CrC6烷硫 基； 所述环烷基、 环烯基、 芳基、 杂芳基、 含氮杂环或含氮杂芳基任选 地被选自 d-C6烷基、 羟基 CrC6烷基、 巯基 d-C6烷基和苯基的基团取 代。
2. 根据权利要求 1的 5-位碳取代的汉防己甲素衍生物或其药学上 可接受的盐， 其中 X为羰氧基， 式 (I)化合物由通式 (I-b)代表
Figure imgf000068_0001
其中， 选自 H、 CrC6烷基、 芳基或杂芳基、 CrC6烷氧基、 CrC6烷硫 基， 所述非氢基团任选地被选自下组的基团取代： 鹵素、 氨基、 C C6 烷基氨基、 硝基、 氰基、 羟基、 CrC6烷氧基、 巯基和 CrC6烷硫基； 所 述芳基和杂芳基任选地被选自 CrC6烷基、 羟基 CrC6烷基和巯基 Ci-C6 烷基的基团取代。
3. 根据权利要求 1的 5-位碳取代的汉防己甲素衍生物或其药学上可 接受的盐， 其中 X为氮， 式 (I)化合物由通式 (I-c)代表
Figure imgf000068_0002
其中， 和 独立地选自氢、 CrC6烷基、 C3-C7环烷基或环烯烃基、 芳 基 -C C3烷基、 杂芳基 -CrC3烷基、 芳氧基 - d-C3烷基、 杂芳氧基 - C C3 烷基， 或者 和 R2与它们连接的氮原子一起形成非芳香含氮杂环或含 氮杂芳基； 所述非氢基团任选地被选自下组的基团取代： 鹵素、 氨基、 crc6烷基氨基、 硝基、 氰基、 羟基、 CrC6烷氧基、 巯基和 d-C6烷硫 基； 所述环烷基、 环烯基、 芳基、 杂芳基、 含氮杂环或含氮杂芳基任选 地被选自 d-C6烷基、 羟基 CrC6烷基、 巯基 d-C6烷基的基团取代和苯 基的基团取代。
4. 根据权利要求 1的 5-位碳取代的汉防己甲素衍生物或其药学上 可接受的盐， 其中 X为氧或硫， 式 (I)化合物由通式 (I-d)或 （I-e )代表,
Figure imgf000069_0001
其中， R2选自 CrC6烷基、 芳基、 （ 3-( 7环烷基或环烯基、 芳基 -CrC3烷 基、 杂芳基 -CrC3烷基、 杂环基 -CrC3烷基、 芳氧基 - CrC3烷基、 杂芳 氧基 - d-C3烷基， 所述基团任选地被选自下组的基团取代： 鹵素、氨基、
C C6烷基氨基、 硝基、 氰基、 羟基、 crc6烷氧基、 巯基和 crc6烷硫 基； 所述环烷基、 环烯基、 芳基和杂芳基任选地被选自 crc6烷基、 羟 基 crc6烷基和巯基 crc6烷基的基团取代。
5. 根据权利要求 2的 5-位碳取代的汉防己甲素衍生物或其药学上可 接受的盐， 其中 选自 CrC6烷基、 芳基和杂芳基。
6. 根据权利要求 5的 5-位碳取代的汉防己甲素衍生物或其药学上可 接受的盐， 其中 选自甲基、 乙基、 丙基、 异丙基、 苯基、 二甲基氨基 苯基、 呋喃基、 噻吩基、 甲基噻吩基。
7. 根据权利要求 3的 5-位碳取代的汉防己甲素衍生物或其要学上可 接受的盐， 其中 IU R2独立地选自氢、 CrC6烷基、 （ 3-( 7环烷基、 芳 基 -d-C3烷基、杂芳基 -CrC3烷基， 或者 和 与它们连接的氮原子一 起形成非芳香含氮杂环或含氮杂芳基。
8. 根据权利要求 3或 7的 5-位碳取代的汉防己甲素衍生物或其药学 上可接受盐， 其中所述非氢基团被选自下组的基团取代： 氨基、 C C6 烷基氨基、 硝基、 氰基、 羟基、 d-C6烷氧基； 所述环烷基、 环烯基、 芳 基、 杂芳基、 含氮杂环或含氮杂芳基被选自 crc6烷基、 羟基 crc6烷基 和苯基的基团取代。
9. 根据权利要求 8的 5-位碳取代的汉防己甲素衍生物或其药学上可 接受的盐， 其中， R R2独立地选自氢、 任选地被羟基或 CrC6烷氧基 取代的 CrC6烷基、 任选地被羟基或 CrC6烷氧基取代的（ 3-( 7环烷基、 芳基上任选地被 CrC6烷基取代的芳基 -CrC3烷基、 杂芳基上任选地被 CrC6烷基取代的杂芳基 -CrC3烷基， 或者 1^和 R2与它们连接的氮原子 一起形成非芳香含氮杂环基或含氮杂芳基， 所述非芳香含氮杂环基任选 地被选自羟基、 羟基 CrC6烷基、 氨基、 CrC6烷基氨基、 CrC6烷基、 、 硝基和苯基的基团取代。
10. 根据权利要求 9的 5-位碳取代的汉防己甲素衍生物或其药学上 可接受的盐， 其中， IU R2独立地选自氢、 CrC3烷氧基取代的 CrC3 烷基、 C3-C6环烷基、 芳基甲基、 芳基（甲基） 甲基、 杂芳基甲基， 或者 Ri和 R2与它们连接的氮原子一起形成非芳香含氮杂环基， 所述非芳香 含氮杂环基任选地被选自羟基、羟基 crc6烷基、氨基、 crc6烷基氨基、 crc6烷基、 硝基和苯基的基团取代。
11. 根据权利要求 3、 7-10任一项的 5-位碳取代的汉防己甲素衍生物 或其药学上可接受的盐， 其中所述非芳香含氮杂环为 5-7元环， 任选地 除了与 和 连接的氮原子外还含有 1-2个选自氮、 氧和 ¾f的杂原子； 优选地所述非芳香含氮杂环为吡咯烷基、 吡咯啉基、 哌啶基、 哌嗪基、 吗啉基、 硫代吗啉基、 二氮杂环庚烷基。
12. 根据权利要求 3、 7-10任一项的 5-位碳取代的汉防己甲素衍生物 或其药学上可接受的盐， 其中所述含芳基基团中的芳基优选为苯基； 所 述含杂芳基的基团中的杂芳基优选为任选被 crc3烷基取代的吡啶基、 任选被 CrC3烷基取代的呋喃基或任选被 Ci-C3烷基取代的噻吩基。
13. 根据权利要求 4的 5-位碳取代的汉防己甲素衍生物或其药学上 可接受的盐， R2选自芳基 -d-C3烷基、杂芳基 -CrC3烷基、芳氧基 - d-Cg 烷基、 杂芳氧基 - CrC3烷基。
14. 根据权利要求 4或 13的 5-位碳取代的汉防己甲素衍生物或其药 学上可接 其中所述含芳基基团中的芳基或含杂芳基基团中的杂 芳基被选自鹵素和 d-C6烷氧基的基团取代； 所述含芳基基团中的芳基 优选为苯基； 咪唑基或噻 吩基。
15. 根据权利要求 1的 5-位碳取代的汉防己甲素衍生物或其药学上 可接受的盐， 选自下述化合物：
Figure imgf000071_0001
BS-TE-301 BS-TE-307
5- (环丙烷基-氨基-亚甲基) -汉防己甲素 5- (吗啡啉基-亚甲基) -汉防己甲素
Figure imgf000071_0002
Figure imgf000072_0001
BS-TE-323 BS-TE-328
5- (硫代吗啉-亚甲基) -汉防己甲素 -(p-氰基哌啶-亚甲基) -汉防己甲素
Figure imgf000072_0002
BS-TE-329 BS-TE-333
-(2,5-二氢吡咯-亚甲基) -汉防己甲素 5-(N-异丙基哌嗪-亚甲基) -汉防己甲素
Figure imgf000072_0003
BS-TE-340 BS-TE-342
5- (甲氧基 -丙胺基-亚甲基) -汉防己甲素 5-(N-乙基哌嗪-亚甲基) -汉防己甲素
Figure imgf000073_0001
-(m-甲基哌啶-亚甲基卜汉防己甲素 5- (呋喃 -甲胺基-亚甲基) -汉防己甲素
Figure imgf000073_0002
BS-TE-354 BS-TE-355
5-(4-二甲氨基哌啶-亚甲基) -汉防己甲素 5- (哌啶基-亚甲基) -汉防己甲素
Figure imgf000073_0003
BS-TE-359 BS-TE-360
5-(N-甲基哌嗪-亚甲基) -汉防己甲素 5-(N-甲基哌嗪-亚甲基) -汉防己甲素
Figure imgf000074_0001
BS-TE-402 BS-TE-403
5- (苯氧基 -乙氧基-亚甲基) -汉防己甲素 5-(3, 4-二甲氧基-苯乙氧基-亚甲基) -汉防己甲素
Figure imgf000074_0002
BS-TE-408 BS-TE-41 1
5-(p-氟-苯甲氧基-亚甲基) -汉防己甲素 5-(m-吡啶甲氧基-亚甲基) -汉防己甲素
Figure imgf000074_0003
Figure imgf000075_0001
ί-3 包括将汉防己甲素与甲醛在盐酸和二氯化辞存在下， 由布兰克 (Blanc Reaction)氯甲基化反应， 生成 5-氯甲基汉防己甲素 (I-a, X=C1); 再由 5- 氯甲基汉防己甲素 (I-a, X=C1)经酯化、 胺化或醚化反应， 生成通式（I ) 5-位取代的汉防己甲素衍生物，式 (I)中 R和 X与权利要求 1的定义相同。
17. 一种药物组合物， 其中包含权利要求 1-15中任一项的 5-位取 代的汉防己甲素衍生物或其药学上可接受的盐和药学上可以接受的赋 形剂。
18. 权利要求 1-15 中的任一项的 5-位取代的汉防己甲素衍生物或 其药学上可接受的盐在制备抗肿瘤药物中的用途。
19. 一种治疗肿瘤患者的方法， 包括给予需要治疗的患者治疗有 效量的根据权利要求 1-15任一项的 5-位取代的汉防己甲素衍生物或其 药学上可接受的盐。
20.作为抗肿瘤治疗剂的权利要求 1-15任一项的 5-位取代的汉防 己甲素衍生物或其药学上可接受的盐。
21. #居权利要求 18、 19或 20的用途、 方法或 5-位取代的汉防 己甲素衍生物， 其中， 所述肿瘤选自白血病、 多发性骨髓瘤、 淋巴瘤、 肝癌、 胃癌、 乳腺癌、 胆管细胞癌、 胰腺癌、 肺癌、 大肠癌、 骨肉瘤、 人宫颈癌、 神经胶质瘤、 鼻咽癌、 喉癌、 食管癌、 中耳肿瘤、 黑色素 瘤和前列腺癌。
22. 式 I-a化合物或其
Figure imgf000076_0001
1-3
其中， X选自羟基、 巯基、 氨基和鹵素。
PCT/CN2012/080384 2011-08-19 2012-08-20 5-位碳取代的汉防己甲素衍生物、及其制备方法和应用 WO2013026383A1 (zh)

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