WO2013067896A1

WO2013067896A1 - 一种微波化学法提取褐藻多糖的方法

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Publication number: WO2013067896A1
Application number: PCT/CN2012/083932
Authority: WO
Inventors: 张劲松; 李明天; 刘志宇; 许磊
Original assignee: 沈阳科思高科技有限公司
Priority date: 2011-11-07
Filing date: 2012-11-01
Publication date: 2013-05-16
Also published as: CN102417549A; US9447199B2; KR101605065B1; BR112014010922B1; CN102417549B; JP5878241B2; EP2778178B1; EP2778178A4; EP2778178A1; US20140296496A1; KR20140087052A; JP2014532670A; BR112014010922A2

Abstract

发明公开了一种微波化学法提取褐藻活性多糖的方法以及采用该方法获得的褐藻多糖。所述方法包括：将粉碎后的褐藻类原料置于微波反应腔中加入酸溶液进行反应；任选进行浓缩、然后加入有机溶剂洗涤，除去多余的酸；然后水提取后分级醇沉，分别得到富含甘露糖醛酸片段的褐藻胶、褐藻糖胶和/或褐藻淀粉；向剩余褐藻残渣中加入碱溶液进行消化处理，过滤，滤液调节pH值至中性，然后醇沉，得富含古洛糖醛酸片段的褐藻胶沉淀。

Description

一种微波化学法提取褐藻多糖的方法技术领域

本发明涉及医药化学领域，涉及一种褐藻多糖的提取方法，具体为一种基予微波化学法提取褐藻多糖的方法。背景技术

海藻为海产藻类的统称，通常固着于海底或某种固体结构上，是由基础细胞所构成的单株或一长串的简单植物。海藻中的营养成分包括多糖类、蛋白质、脂质、色素及低分子物质。经传统中药及现在科学研究证明，海藻中具有增强免疫力及抗癌活性的物质主要成分是多糖类。

海藻包括红藻、绿藻、褐藻等，而目前海藻多糖中研究和应用比较深入的主要为褐藻类多糖。褐藻为一类较高级的藻类，约有 250属， 1500 多种。褐藻类的藻体呈黄褐色或深褐色，含有多糖类、蛋白类、脂类和甘露醇等物质。有的种类，如海带，细胞内还含有大量^ I。

褐藻多糖是褐藻重要的组成成分，其中包括褐藻胶、褐藻糖胶、褐藻淀粉等。褐藻胶，通常是指褐藻酸钠，是由 β D-甘露糖醛酸（简称 Μ) 和 (X- L古洛糖醛酸（简称 G)两种糖醛酸单体依靠 1 4糖苷键连接成的线性多糖嵌段共聚物，在褐藻中含量很高。其段链结构有三种类型：由连续 Μ单元組成的 Μ嵌段，由连续 G单元形成的 G嵌段，以及由 G单元和 Μ单元交替连接形成的 MG嵌段。褐藻胶也是一类最具代表性的海藻化工产品，有据数据显示， ¾前我国褐藻胶年产量已高居世界首位。为便于保存和使用，一般将褐藻胶转化为褐藻酸钠作为最终产品。作为一种聚阴离子多糖（海藻酸）的钠盐，褐藻酸钠以其固有的理化性质，在工业上有着极为广泛的用途。

在食品工业上，褐藻酸钠低热无毒、易膨化、柔韧度高，添加到食品中可起到凝固、增稠、轧化、悬浮、稳定和防止食品千燥等诸多功能，是一种优良的食用添加剂。

在纺织工业中，褐藻酸钠具有易着色、得色量高、色泽鲜艳和印花织物手感柔软等特点，是棉织物活性染料印花中最常用的糊料。同时，它还可作为经纱浆料、防水加工、制造花边用等工艺过程的水溶纤維。

在化妆品工业中褐藻酸钠用作牙膏基料、洗发剂、整发剂等。在造纸工业上可作为施胶，在橡胶工业中用作胶乳浓縮剂，还可以制成水性涂料和耐水性涂料。

褐藻酸钠还是一种重要的生物医用材料，被广泛用作药物緩释剂、聚合物薄膜、细胞封装、伤口敷料、手术海绵和栓塞剂等，在生物医用材料学、临床医学、组织工程学和药物学等领域正在受到越来越多的关注。至今，褐藻胶的生产基本上仍沿用碱消化工艺，基本原理是利用纯碱（Na.₂C0₃) 把各种不溶予水的褐藻酸盐转化成褐藻酸钠，并溶解在水中，再经过滤除杂、酸 /钙析、钠盐转化后得到干燥的海藻酸钠粉末。

褐藻糖胶是一种杂多糖，组成除了含有岩藻糖和硫酸根外，还含有半轧糖、木糖、甘露糖和糖醛酸等单糖。由于具有独特的结构和优异的生理活性，如调节血脂、降血糖、降血压、抗凝血、抗胂瘤、抗突变和防辐射、抗病毒、增强免疫功能等，褐藻糖胶已成为本世纪海洋药物研究的热点之一。褐藻淀粉又名昆布多糖，同样是一种具有多种生理活性的多糖。褐藻糖胶及褐藻淀粉的制取主要利用生产褐藻胶、碘及甘露醇的废弃物为主要原料，经水浸提后分级醇沉。

现有褐藻胶生产工艺方法的主要缺点：

耗水耗能严重，污染大。这也是制约海藻工业发展的关键因素之一。碱消化工艺原理简单，但实际工业制备中往往需要数十道过程，有些步骤是非常困难的。例如，海带经过碳酸钠处理形成的褐藻酸钠的浓浆中，有许多不溶于水的纤维素等成份需要滤除，由于浓浆粘度过高，除了需要力如入硅藻土等助滤 ^外，还需要消耗大量的水进行稀释，而且对用水的水质要求很高。据统计，生产 1吨成品海藻酸钠约需用 700-1000吨水。另外，现有碱消化工艺的化学过程主要有加酸和如钙盐两种方法：首先把褐藻中不溶于水的褐藻酸盐转换成可溶于水的褐藻酸钠，如入酸或钙离子使褐藻酸钠形成褐藻酸或褐藻酸钙沉淀，然后清洗后转换回褐藻酸钠，最后再进一步把褐藻酸钠加工成各类产品。无论采用哪种方法，都要产生的大量工业废水，对生态环境构成了严重的威胁。

同时，目前褐藻酸钠产品的品种单一，质量欠优，附加值低。褐藻酸钠的分类从结构上可分为高 GZM比、中 G/M比、低 G/M比三种，从粘度上可分为超低粘度、低粘度、中等粘度、高粘度和超高粘度褐藻酸钠，从纯度上可分为工业用、食用以及医用三个级别。目前国内企业生产的褐藻酸钠大多是中等粘度产品，作为保健医药类产品应用受到其胶凝性较强，溶解度低等特性的限制，活性得不到充分体现。

为突破上述困境，国内外研究人员针对以上各项不足，在多个环节做了长期不懈的努力，许多研究卓有成效，取得了许多重要的进展。这些研究包括对旧有工艺的改进以及新工艺的开发，比如最近国外学者报道的褐藻胶反应挤出新工艺，就同时具备节水、省时、减用量少等优点，而且产品的粘度和牧率都有不同程度的提高，但该工艺不能直接得到生物活性良好的水溶性多糖。对传统海藻多糖产品的修饰包括利用生物、化学或物理方法，将褐藻酸钠和褐藻糖胶降解为褐藻胶低聚糖、寡糖和低分子量岩藻糖，对褐藻糖胶的硫含量进行调整等措施。

研究结果也已证实，降解后的褐藻酸钠和褐藻糖胶的活性得到了有效的提高，有些低分子量褐藻酸钠已具有类似肝素的抗胂瘤和抗病毒的生理活性，可用于心脑血管疾病和病毒方面的药用研究。有些具有整肠和解毒、降血糖血脂、抗凝血、抗炎、免疫调节等作用，可作为糖尿病、肥胖症、直肠结肠癌、习惯性便秘患者的疗效食品。

尤其是近年来，经过修饰后的低分子量褐藻胶或岩藻多糖的独特的生理作用不断被发现出来，它的活性及药用价值的研究已成为新的研究挑占 -― _n

另外，聚甘露糖醛酸（M) 和聚古洛糖醛酸（G) 是褐藻胶分子中所特有的，在自然界中尚未发现有单独存在的此类化合物。而且褐藻胶中两种糖醛酸聚糖的比例（M/G)、嵌段的结构和排列等不同时，其性能会表现出显著不同。因此，也有许多科研工作者通过不同的降解、分离方法得到这类结构独特的多糖片段及其寡糖，研究其独特的生物活性，以所有这些结构不同的系列低聚糖或寡糖，极大地丰富了海藻多糖产物的多祥性。但上述这些研究都以中等粘度褐藻胶为原料，并未从根本上解决褐藻酸钠的传统生产工艺中所存在的耗水耗能、污染严重、产率 / 含量低等问题。

Microwave assisted rapid method for hydrolysis of sodium alginate for

M/G ratio determination (Mahesh Clihatbar, C rhoh dmtePolymers Vol 76 (2009) 650-656) ; 其公开了在家用微波炉中，以草酸溶液或者硫酸的稀溶液为溶剂，对褐藻酸钠进行部分降解，其主要目的是寻找一种简便快速、温和的测定褐藻酸钠中 M/G (甘露糖醛酸 /古洛糖醛酸）比值的方法。但是该方法所用褐藻酸钠原料仍沿用传统的提取方法制备，并未克服旧有工艺耗水、耗能等缺陷。

Microwave assisted desuifation of sulfated polysaccharides (Diego A, Navaroo, C rboh dmiePol mers Vol 69 (2007) 742-747) 公开了在家用微波炉中，利用微波辅助方法脱除红藻多糖角叉胶、琼胶以及褐藻中岩藻多糖、动物多糖硫酸软骨素中的硫成分，以克服常用的盐酸脱硫方法的弊病，该方法仍以多糖为原料，并未克服现有工艺中耗水耗能等缺陷。另外该文中追求过高的脱硫率的目的是为了提高分析样品时的方便性，并未顾及到多糖的活性。

因此，有必要继续开展海洋科学与海藻工业新工艺、新技术、新产品的研究和开发。发明内容

针对以上技术缺陷，本发明提供一种新的褐藻多糖的提取方法，即微波化学法提取褐藻活性多糖的方法。本发明微波化学法提取褐藻活性多糖的方法，包括如下步骤：

1 ) 将粉碎后的褐藻粉置入微波反应腔中，加入质量浓度为 5% 99% 酸溶液，在微波功率为每千克物料 1千瓦-每千克物料 10千瓦质量功率密度、工作压力为 20mmHg 760mmHg下反应 5 i20min; 可选择地进行浓縮，然后加入有机溶剂洗涤，除去多余的酸.。 2) 向歩骤 1 ) 所得产物加入水溶液进行水提，将提取液浓缩，用碱调节 PH至中性，然后进行分级醇沉，分别得到富含甘露糖醛酸片段（富 M) 褐藻胶、褐藻糖胶和 /或褐藻淀粉；并剩余褐藻残渣。

3 ) 向步骤 2) 所得褐藻残渣中加入碱溶液，在 35 60°C温度进行碱消化反应 20-80分钟，滤去残渣，将滤液调节 pH值至中性，浓縮后醇沉，得富含古洛糖醛酸片段（富 G) 的褐藻胶沉淀。

本发明方法中，所述粉碎的褐藻粉为本领域常规方法进行粉碎而得的褐藻粉，或购买粉碎好的褐藻粉直接用于本发明方法中，其中粉碎的褐藻粉的目数为本领域常规的目数，或由本领域技术人员结合本发明及本发明方法中，作为实施方式之一，当步骤 1 ) 中加入的酸溶液中，有机酸为不挥发性酸时，在微波作用结束后则不依靠浓缩来除去酸液；当加入的有机酸为挥发性酸时，在微波作用结束后，先进行浓缩除酸，此时优选微波加热下的减压浓缩，然后再用有机溶剂洗涤去除少量残留的酸。

本发明方法中，作为实施方式之一，所述步骤 1 ) 中的微波功率施加方式为连续微波或连续微波与脉冲微波相结合方式；其中，连续微波与脉冲微波相结合的使用方式中，先用连续微波辐照至酸溶液回流后，转换为脉沖微波，继续辐照 5min- 120min; 连续微波同样是至溶液回流后保持 5ιτώι- 120min。

本发明方法中，作为进一步优选的实施方式之一，所述步骤 1 ) 中，在连续微波情况下，质量功率密度为每千克物料 1千瓦每千克物料 5千瓦；脉冲微波情况下，质量功率密度为每千克物料 2千瓦-每千克物料 10千瓦，占空比为 A/B, 其中 100秒， B=l秒 _1 ()0秒。

本发明方法中，所述微波反应腔的选择可以由本领域技术人员结合本发明以及本领域常识进行确定，既可为行波式微波反应腔，也可以为谐振式微波反应腔。本发明方法中，作为实施方式之一，所述步骤 1 ) 中褐藻原料与酸溶液的重量比范围 =5/1 - 1/5。

本发明方法中，作为实施方式之一，所述步骤 1 ) 中的酸溶液选自有机酸或有机酸与无机酸的混合溶液。

本发明方法中，作为进一步实施方式之一，所述有机酸选自质量浓度为 5 %- 50%的草酸、优选 10%- 35%的草酸； 10%- 99%的甲酸、优选 30- 85%的甲酸； 10%- 99%的乙酸，优选 60- 95%的乙酸；或 10% 99%丙酸，优选 70 95%的丙酸的水溶液。进行制备相应浓度的酸溶液，如用浓度为 100%酸（例如純甲酸）然后加入适量的水稀释至相应的浓度。

本发明方法中，作为实施方式之一，当使用有机酸和无机酸的混合溶液时，在有机酸和无机酸组合的溶液中，所述混合酸溶液中的有机酸的浓度为以上所限定有机酸的浓度；而无机酸质量百分比浓度为

15% ; 作为进一步优选实施方式之一，无机酸选自盐酸、硫酸、硝酸或磷酸。

上述无机酸溶液可以是直接商业购买的化学试剂，然后采用本领域常规的方法进行制备相应浓度的有机-无机混酸溶液，如用浓度为 36%的盐酸，然后加入到有机酸中至相应的浓度。

本发明方法中，通过控制反应条件，利用微波、有机酸分子和褐藻高分子多糖之间的协同作用，选择性切断褐藻高分子多糖的糖苷键，实现褐藻多糖的可控降解。

本发明方法中，作为实施方式之一，所述步骤 1 ) 中洗涤残余酸的有机溶剂选自甲醇、乙醇、丙醇或丙酮，或它们中的两种或两种以上的组合，所述有机溶剂的浓度没有特殊的要求，本领域技术人员可以结合本领域现有技术或常识进行确定。

本发明方法中，作为实施方式之一，所述歩骤 2) 中， : 骤 1 )所得产物积的 5- 8倍。本领域技术人员结合本发明及常识可以进行适当的增加或:. V；当对提取液进行浓縮时，优选浓縮至提取液的 1/5-1/8。

本发明方法中所述步骤 2) 中，调节 pH值所用

段低聚褐藻胶沉淀；然后加乙醇至含量 60wt%- 70wt%时，过滤或离心分离、获得褐藻糖胶沉淀；最后加乙至含醇量 8()wt%- 85 %时，过滤

或氫氡化钠

氫氧化钠溶液。

本发明方方式之一，所述步驟 3) 中调节 pH值所用的酸选自盐酸，

i

其特征在于，所述步骤 3) 中醇沉所用的醇选自乙醇或甲醇，采用乙醇或曱醇进行醇沉，原则上是添加醇至溶液中不再有沉淀析出，优选溶液中含醇量达到 80%- 85%即可。

本发明方法中，利用本发明方法从中提取分离褐藻多糖的褐藻包括但不 I¹艮于，海带属 (Laminaria) 海带、马尾藻属 (Sargassum) 海蒿子、海黍子、羊栖菜、鼠尾藻、匍枝马尾藻、墨角藻属（Fucus) 岩藻、墨角藻、鹿角菜属（Pdvetia) 鹿角菜、裙带菜属（Undaria) 裙带菜或巨藻属 ( Maerocystis ) 巨藻。

作为优选的实施方式之一，本发明还提供一种采用海带属海带制备 500mmHg-760niniHg气压下保甲酸溶液回流 1.5 30min,然后减压蒸千甲酸溶液。向反应腔中加入海带粉重量的 3- 5倍的乙醇溶液，搅拌洗涤 40- 60 分钟，过滤。滤渣烘干后用水进行提取 2次，每次用水量为滤渣重量的 4- 6 倍，提取温度 60- 80 C，提取时间约 40分钟。过滤，合并两次滤液，用氫氧化钠溶液中和至中性，浓縮至提取液体枳的 1/5，然后加入乙醇至溶液中乙醇含量达到 35%，静置 4- 8小时，过滤，滤饼用无水乙醇及乙醚洗涤后烘千，得到多糖 A,继续向滤液中添加乙醇至溶液中乙醇含量达到 65%, 静置 4- 8小时，过滤，滤饼用无水乙醇及乙醚洗涤后烘干，得到多糖13。继续向滤液中补加乙醇至溶液中乙醇含量达到 85%, 静置 4 8小时，过滤，滤饼经无水乙醇和乙醚洗涤后烘干，得到多糖(:：。

上述水提后的海带滤渣中加入碳酸钠溶液，在 35 60°C温度进行碱消化反应约 40分钟，过滤，滤液用盐酸调节 pH值至中性，浓缩后醇沉，得到多糖 D。

其中多糖 A为富含甘露糖醛酸（富 M) 的褐藻酸钠，多糖 B为褐藻糖胶，多糖 C为褐藻淀粉，多糖 D为富含古洛糖醛酸（富 G) 的褐藻酸钠。

作为优选的实施方式之一，本发明还提供一种采用马尾藻属羊栖菜制备活性多糖的方法，所述方法如下：将千羊栖菜粉加入到微波提取腔中，加入 (),5- 1.0倍的 20%的草酸溶液，于 1 2KW/Kg功率密度的微波下， 500mmHg-760mmHg气压下保持草酸溶液回流 15-25min,然后减压蒸干微波提取腔中的液体。向反应腔中加入海带粉重量的 4 6倍的乙醇溶液，搅拌洗涤物料 40 60分钟，过滤，滤渣烘千。滤液蒸馏回收乙醇和草酸。烘干的滤渣水提取两次，每次用水为物料重量的 4- 6倍，提取温度 70°C，提取时间约 40分钟。过滤，合并两次滤液，用氫氧化钠溶液中和至中性，浓缩至提取液体积的约 1/5，然后加入乙醇至溶液中乙醇含量达到 3()%，静置 4 8小时，过滤，滤饼用无水乙醇及乙醚洗涤后烘干，得到多糖 A，继续向滤液中添加乙醇至溶液中乙醇含量达到 6()%，静置 4- 8小时，过滤，滤饼用无水乙醇及乙醚洗涤后烘千，得到多糖8。继续向滤液中补加乙醇至溶液中乙醇含量达到 80%, 静置 4- 8小时，过滤，滤饼经无水乙醇和乙醚洗涤后烘干，得到多糖 C。上述水提后的羊栖菜滤渣中加入碳酸钠溶液，在 35- 6CTC温度进行碱消化反应 40- 60分钟，过滤，滤液用盐酸调节 pH值. 至中性，浓缩后醇沉，得到多糖:0。

5 其中多糖 A为富含甘露糖醛酸（富 M) 的褐藻酸钠，多糖 B为褐藻糖胶，多糖 C为褐藻淀粉，多糖 D为富含古洛糖醛酸（富 G) 的褐藻酸钠。

作为优选的实施方式之一，本发明还提供一种采用墨角藻属岩藻制备活性多糖的方法，所述方法如下：将干岩藻粉加入到微波提取腔中，加入 1-2倍 80%- 95%的丙酸溶液，于 3- 5KW/Kg功率密度的微波下作用，至

10 丙酸溶液回流后， 5 OOmmHg- 760mmHg气压下保持 40- 6()min,然后减压蒸干丙酸溶液。向反应腔中加入岩藻粉重量的 3- 5倍的乙醇溶液，搅拌 30 6() 分钟，过滤，滤渣烘干。向烘千的滤渣中加入 4- 6倍的水，于 70°C下提取 4()分钟，过滤。重复上述提取过程一次，合并两次滤液，用氫氧化钠溶液中和至中性，浓縮至提 -取液体积的 1/5，然后加入乙醇至溶液中乙醇含 i s 量达到 35%, 静置 4- 8小时，过滤，滤饼用无水乙醇及乙醚洗涤后烘干，得到多糖 A,继续向滤液中添加乙醇至溶液中乙醇含量达到 65%, 静置 4 8 小时，过滤，滤饼用无水乙醇及乙醚洗涤后烘干，得到多糖8。继续向滤液中补加乙醇至溶液中乙醇含量达到 85%, 静置 4 8小时，过滤，滤饼经无水乙醇和乙醚洗涤后烘干，得到多糖 (：。上述水提后的岩藻滤渣中加入 0 碳酸钠溶液，在 35 6()°C温度进行碱消化反应 40- 60分钟，过滤, 滤液用盐酸调节 pH值至中性，浓缩后醇沉，得到多糖0。

作为优选的实施方式之一，本发明还提供一种采用鹿角菜属鹿角菜 5 制备活性多糖的方法，所述方法如下：将干鹿角菜粉加入到微波提取腔中，加入 ().5- 2倍草酸 -盐酸混酸溶液，混酸中草酸含量为 20%，盐酸含量为 0, 1 % , 于 i - 2KW/Kg功率密度的微波下， 500mmHg 760mmHg气压下保持混酸溶液回流 15- 25min,然后减压蒸干反应腔中液体。向反应腔中加入鹿角菜粉重量的 3- 5倍的乙醇溶液，搅拌 30- 60分钟，过滤。滤渣烘千后加入 4— 6倍的水，于 70 C下提取 40分钟，过滤。重复上述提取过程一次，合并两次滤液，用氫氣化钠溶液中和至中性，浓缩至提取液体积的 1/5，然后加入乙醇至溶液中乙醇含量达到 35%, 静置 4- 8小时，过滤，滤饼用无水乙醇及乙醚洗涤后烘干，得到多糖 A，继续向滤液中添加乙醇至溶液中乙醇含量达到 65%，静置 4- 8小时，过滤，滤饼用无水乙醇及乙醚洗涤后烘干，得到多糖8。继续向滤液中补加乙醇至溶液中乙醇含量达到 85%，静置 4- 8小时，过滤，滤饼经无水乙醇和乙醚洗涤后烘干，得到多糖(〕。上述水提后的鹿角菜滤渣中加入碳酸納溶液，在 35- 60 C温度进行碱消化反应 40- 60分钟，过滤，滤液用盐酸调节 pH值至中性，浓縮后醇沉，得到多糖 D。

作为优选的实施方式之一，本发明还提供一种采用裙带菜属裙带菜制备活性多糖的方法，所述方法如下：将千裙带菜粉加入到微波提取腔中，加入 0.5- 2.5倍甲酸 -盐酸的混酸溶液，其中甲酸含量为 80%, 盐酸含量为 0,5%, 于 2- 4:KW/Kg功率密度的微波下， 500mmHg 760π ηΙ 气压下保持混酸溶液回流 10- 3()miri，然后减压蒸干混酸溶液。向反应腔中加入裙带菜粉重量的 3 5倍的乙醇溶液，搅拌 30 60分钟，过滤。滤渣烘干后加入 4- 6倍的水，于 60 C下提取 40分钟，过滤。重复上述提取过程一次，合并两次滤液，用氫氧化钠溶液中和至中性，浓缩至提取液体积的 1/5，然后加入乙醇至溶液中乙醇含量达到 35%，静置 4- 8小时，过滤，滤饼用无水乙醇及乙醚洗涤后烘干，得到多糖 A,继续向滤液中添加乙醇至溶液中乙醇含量达到 65%，静置 4 8小时，过滤，滤饼用无水乙醇及乙醚洗涤后烘干，得到多糖]8。继续向滤液中补加乙醇至溶液中乙醇含量达到 85%，静置 4 8小时，过滤，滤饼经无水乙醇和乙醚洗涤后烘千，得到多糖(。上述水提后的裙带菜滤渣中加入碳酸钠溶液，在 35- 60 C温度进行碱消化反应 40- 60分钟，过滤，滤液用盐酸调节 pH值至中性，浓縮后醇沉，得到多糖0。

作为优选的实施方式之一，本发明还提供一种采用巨藻属巨藻制备活性多糖的方法，所述方法如下：将干巨藻粉加入到微波提取腔中，加入 0,3- 1.2倍 80%- 95%的乙酸溶液，于 1- 4KW/Kg功率密度的微波下作用，至乙酸溶液回流后 , 500mmHg~760mmHg气压下 'ί呆持 30- 4()min,然后减压蒸干乙酸溶液。向反应腔中加入巨藻粉重量的 3- 5倍的乙醇溶液，搅拌 30- 60分钟，过滤,滤渣烘干后加入 4 6倍的水于 60 C下提取 40分钟，过滤。重复上述提取过程一次，合并两次滤液，用氫氧化钠溶液中和至中性，浓縮至提取液体积的 1/5 , 然后加入乙醇至溶液中乙醇含量达到 35%, 静置 4- 8小时，过滤，滤饼用无水乙醇及乙醚洗涤后烘干，得到多糖 A,继续向滤液中添加乙醇至溶液中乙醇含量达到 65%, 静置 4- 8小时，过滤，滤饼用无水乙醇及乙醚洗涤后烘千，得到多糖:13。继续向滤液中补加乙醇至溶液中乙醇含量达到 85%，静置 4- 8小时，过滤，滤饼经无水乙醇和乙醚洗涤后烘干，得到多糖(。上述水提后的巨藻滤渣中加入碳酸钠溶液，在 35- 60 C温度进行碱消化反应 40- 60分钟，过滤，滤液用盐酸调节 pH值至中性，浓缩后醇沉，得到多糖:0。

本发明还提供一种采用本发明方法制备而得的褐藻多糖，其特征在于，所述褐藻多糖采用本发明方法制备而得。

作为优选实施方式之一，本发明还提供一种采用本发明方法制备的富含古洛糖醛酸片段 (富 G) 的褐藻胶或富含甘露糖醛酸片段（富 M) 褐藻胶；作为优选的实施方式之一，本发明所述富含古洛糖醛酸片段（富 G) 的褐藻胶优选为富含古洛糖醛酸片段（富 G) 的海带褐藻胶、羊栖菜褐藻胶、岩藻褐藻胶、鹿角菜褐藻胶、裙带菜褐藻胶或巨藻褐藻胶；

同样作为优选的实施方式之一，本发明所述富含甘露糖醛酸片段（富 M) 的褐藻胶优选为富含甘露糖醛酸片段（富 M) 褐藻胶的海带褐藻胶、羊栖菜褐藻胶、岩藻褐藻胶、鹿角菜褐藻胶、裙带菜褐藻胶或巨藻褐藻胶。

本发明还提供一种富含甘露糖醛酸片段（富 M) 褐藻酸钠的制备方法，所述方法为：采用本发明方法制备 ¾得的富含甘露糖醛酸段（富 M) 褐藻胶加入碳酸钠转化, ¾得富含甘露糖醛酸片段（富 M) 褐藻酸钠。

本发明还提供一种采用本发明方法制备的富含甘露糖醛酸段（富 M) 褐藻酸钠。

本发明方法具有以下特 ¾：

第一，使用微波配合有机酸直接作用于褐藻原料，利用有机酸断裂多糖与褐藻原料细胞壁的有机大分子物质（包括纤維素、藻胶）之间的各种键合作用，从而促进药材原料中多糖的释放，提高多糖的提取率；同时有机酸，除了： H⁺离子对多糖的降解作用外，有机酸根离子还能通过与多糖中的羟基形成氫键等作用而对多糖分子起到保护作用。

第二，微波强化的有机酸可进一步将释放的多糖进行适度降解，从而使多糖的水溶性大幅增强，得到分子量分布相对集中、水溶性良好的多糖，在整个过程中实现了褐藻多糖高效提取及结构调整。

第三，具有不同分子结构的褐藻多糖对微波辐射和有机酸作用的敏感度不同，褐藻中对微波辐射下的有机酸降解作用较敏感的富 M片段的分子量显著降低，其水溶性大大增加，不需经过消化就可以顺利提出。

对微波辐射下的有机酸降解作用不敏感的富 G片段则残留在褐藻残渣中，可通过碱消化工艺提出，简化了富 M褐藻胶和富 G褐藻胶的分离过程 o

第四，微波加热能使物料内外得到同时加热，能充分克服常规加热方式中难以克服的物料受热不均匀、能耗高等系列问题；

与现有技术相比，本发明更具有如下优点：

1、本发明省时、酸用量少、且易高效回收、节水和节能效果显著。采用微波加热技术，有效地克服了常规加热所难以避免的传热问题，显著降低有机酸用量，减少处理时间，特別是在蒸馏排酸过程中，能很好地消除常规加热时无法避免受热不均现象。这一特点在规模化生产时表现得尤为明显。

2、微波强化的有机酸可进一步将释放的褐藻多糖分子结构进行适度调整，包括对褐藻胶进行适度降解，改善其水溶性，并实现其中富 M片段和富 G片段的分离。适度降低含硫褐藻多糖的硫含量。本方法使用酸直接作用于药材原料，克服了已有工艺过程中多糖提取时的诸多不足。而目前对褐藻多糖所进行的各种修饰改性的研究基本都是以褐藻多糖为原料，无法克服多糖提取时的诸多问题。

3、本发明获得的多糖产物分子量分布范围窄、纯度高、水溶性好、活性好，本发明工艺在大规模工业化生产時优势明显。附 a说明；

图 1为本发明工艺流程示意图。具体实施方式

本发明通过以下实施例和试验例进行进一步的说明，但本发明并不受限于此。

本发明的工艺过程如下：

1 ) 将经洗净.、千燥、粉碎后的褐藻类原料置入微波反应腔中，加入有机酸或有机 /无机混酸溶液，充分搅拌使均润湿；

2) 微波处理，施加微波功率，利用微波、有机酸分子和褐藻高分子多糖三者之间的协同作用，选择性切断褐藻高分子多糖的糖苷键，实现其可控降解；

3 )利用微波加热减压蒸馏，排除大部分有机酸溶液或有机 /无机混酸溶液，利用有机溶剂充分洗涤，除去少量残留的酸，完成褐藻的微波预赴理；

4) 经微波预处理的褐藻，加入约 5- 8倍水进行提取，提取液浓縮后分步醇沉可得到水溶性良好的富含甘露糖醛酸片段（富 M) 的褐藻胶、褐藻糖胶和褐藻淀粉；

5) 经过水提后的微波预处理褐藻原料残渣，再按碱消化工艺进行处理，可获得富含古洛糖醛酸片段（富 G) 的褐藻胶。

整个工艺过程见附图 1。

为了对新工艺进行评价，各实施例中特参考文献制定了对照工艺，并把对照工艺、新工艺各实施例相应的褐藻酸钠、褐藻糖胶、褐藻淀粉的提取率、工艺过程中的总耗水量、褐藻酸钠产品的分子量、作用时间、有机酸（或混酸）用量以及褐藻糖胶硫酸根含量等数据进行了列表比较。褐藻酸钠产物再经适当的方法純化后得组成均一的单体多糖，采用

H¹ NMR方法测定其聚甘露糖醛酸片段（M) 与古洛糖醛酸片段（G) 比值 M/G (参见《糖复合物生化研究技术》一书），褐藻酸钠分子量采用高效液相色谱仪进行测定（台文静，于广利，吴建东，赵峡„4种海蕴多糖的提取及理化性质，中国海洋大学学报， 2010,40 (5) : 23-26.) , 褐藻糖胶硫酸根含量采用比浊法测定（丛建波.王长振,李妍，等，褐藻硫酸多糖硫酸基含量测定一硫酸钡比浊法研究 [J] 。解放军药学学报， 2003,19 (3) : 181.) 对照例 i

对照工艺：称取 100克经洗净、千燥、粉碎后的海带粉原料放入 2L 的烧杯中，加入 1L水以及 20g碳酸钠于 70°C的热水浴中进行搅拌时，然后用 80-100L的水进行冲稀，充分搅拌后过滤，滤液加盐酸调节 pH值至 2,0，离心分离，沉淀中加入碳酸钠进行转化，得到褐藻酸钠。离心所得上清液用乙醇分级沉淀，可得到褐藻糖胶（如乙醇至含醇量 65wt%) 和褐藻淀粉（加乙醇至含醇量 85wt%)。各步产物千燥后分别计算提取率，提取率为各步产物与原料海带粉的质量比的百分数。所有分析结果见表实施例 1 :

1 ) L5kg千海带粉置于行波式微波反应腔中；

2) 取无水甲酸 0 5L，加水 0 25L配成 70%的甲酸溶液 0,75:L;

3)将步骤 2) 中的甲酸溶液 0.75L, 加到步骤 1 ) 中的微波反应腔中，充分搅摔使海带粉均匀润湿；

4) 步骤 3) 中得到的润湿的物料予 5KW连续微波功率下辐照至有液体回流，即有机酸溶液汽化，改为脉冲微波功率工作方式，占空比为 5 秒 /5秒（即：接通时间与断开时间的比值），峰值功率 10KW, 保持 12iiiin 抽真空（反应腔工作压力为 20mmHg)，至微波反应腔中无液体，完

^海带粉的微波预处理；

5) 经过预处理后的海带粉 i .5kg中加入无水乙醇 5L，充分搅拌，过滤，滤液蒸餾回收乙醇，滤渣干燥后即为微波预处理海带粉；

6) 取步骤 5) 中微波预^理海带粉 100克，放入 1L的烧杯中，加人 500ml 蒸馏水，于 7CTC '的热水浴中提取 40ηώι，过滤，重复上述过程 1 次，合并两次滤液并调 pH至中性，滤渣备用；

7) 步骤 6) 中滤液浓縮后分级醇沉，得到富 M片段的褐藻酸钠（加乙醇至含醇量 30wt%)、褐藻糖胶（加乙醇至含醇量 65wt%) 和褐藻淀粉

(加乙醇至含醇量 85wt%) ;

8) 步骤 6) 中所得滤渣中加入 6g碳酸钠及 500ml水，于 70°C的热水浴中进行搅摔 40min, 过滤，滤液中和浓縮，醇沉得到富 G片段藻酸纳。

各步产物提取率，以及工艺过程中的总耗水：

度、褐藻糖胶中硫酸根含量等数据结果见表 i。

表 i 微波预处

提取率、总用水量、

对照工艺新工艺用水量（水 /海带粉） 100/1 15/1

10.1% (富 M)

褐藻酸钠得率 (wt) 16.2%

6,2% (富 G)

褐藻糖胶得率 (wt) 1 ,4% 4,0%

褐藻淀粉得率 (wt) 1.0% 1.0%

褐藻酸钠分子量 1,5 X 10⁶ 1.2 X 10⁵ (富 M) 褐藻搪胶硫酸根含量 (wt) 15,5% 6.9%

用减量 ('喊 /海带粉) 0.2 0.05

有机酸溶液用量（液固比） - 1/2

褐藻酸钠 M/G 8.52 (富 M)

理（min) 60 12

对照工艺如下：称取 100 克经洗净、干燥、粉碎后的羊栖菜粉原料放入 2L的烧杯中，加入 1L水以及 25g碳酸钠于 70Γ的热水浴中进行搅拌 1 小时，然后用 80- 100L的水进行沖稀，充分搅拌后过滤，滤液加盐酸调节 pH值至 2„0, 离心分离，沉淀中加入碳酸钠进行转化，得到褐藻酸钠。离心所得上清液用乙醇分级沉淀，可得到褐藻糖胶（加乙醇至含醇量 65wt%) 和褐藻淀粉（加乙醇至含醇量 85wt%) , 产物参数测定方法同对照例 1。所有分析结果见表 2。

实施例 2：

1 ) L5kg干羊栖菜粉置予行波式微波反应腔中；

2) 取草酸 l_80g，加水 L5L配成 10%的草酸溶液；

3) 取步骤 2) 中的草酸溶液 1,5L，加到步骤 1 ) 中的微波反应腔中，充分搅拌使羊栖菜粉均润湿；

4) 步骤 3) 中均匀润湿的物料于 3KW 连续微波功率下辐照至有液体回流，即有机酸溶液汽化，改为脉冲微波功率工作方式，占空比为 5 秒 Z5 秒，峰值.功率 5KW , 保持 15min 后，抽真空（反应腔工作压力为 lOOmmHg) 减压蒸馏，排除有机酸溶液，至微波反应腔中无液体，完成羊栖菜粉的微波预赴理；

5) 步骤 4) 中经过预处理后的羊栖菜粉 1.5kg中加入无水乙醇 5:L，充分搅拌，过滤，滤液蒸馏回收乙醇和草酸，滤渣干燥后即为微波预处理羊栖菜粉；

6) 取步骤 5) 中微波预赴理羊栖菜粉 100克，放入 1L的烧杯中，加入 500mi蒸馏水，于 70 C的热水浴中提取 40min, 过滤，重复上述过程 i 次，合并两次滤液并调 pH至中性, 滤渣备用；

7)、 8) 步骤同实施例 1。

各步产物提取率，以及工艺过程中的总耗水量、褐藻酸钠产品的分子量、褐藻糖胶硫酸根含量等数据结果见表 2。

表 2微波预处理羊栖菜干粉与未经处理羊栖菜干粉原料的各步多糖产物提取率、总用水量及褐藻酸钠分子量等比较情况：

对照例 3

对照工艺如下：称取 100 克经洗净、干燥、粉碎后的巨藻粉原料放入 2L的烧杯中，加入 1L水以及 25g碳酸钠于 70°C的热水浴中进行搅拌 1小时，然后用 80 100L的水进行沖稀，充分搅拌后过滤，滤液加盐酸调节 pH值至 2,0，离心分离，沉淀中加入碳酸钠进行转化，得到褐藻酸钠。离心所得上清液用乙醇分级沉淀，可得到褐藻糖胶（加乙醇至含醇量 65wt%) 和褐藻淀粉（加乙醇至含醇量 85wt%)，产物参数测定方法同对照例 1。所有分析结果见表 3。

实施例 3 :

1 ) i .5Kg干巨藻粉置于谐振式微波反应腔中；

2) 取无水乙酸 0 4L，加水 0 1丄配成 80%的乙酸溶液 0.5L;

3 ) 取步骤 2) 中乙酸溶液 0,5L, 加到步骤 i ) 中的徽波反应腔中，充分搅摔使均勻润湿；

4) 步骤 3) 中均匀润湿的物料于 2KW连续微波功率下辐照至有液体回流，即有机酸溶液汽化，改为脉冲微波功率工作方式，占空比为 5 秒 /5 秒，峰值功率 4KW，保持 35min 后，抽真空（反应腔工作压力为 200mmHg) 减压蒸馏，排除有机酸溶液，至微波反应腔中无液体；

5) 步骤 4) 中的微波反应腔体中如入无水乙醇 5L，充分搅拌，过滤，滤液蒸馏回收乙醇，滤渣千燥后即为微波预处理巨藻粉；

6) 取步骤 5) 中的微波预处理巨藻粉 100克，放入 1L的烧杯中，加入 500ml蒸餾水，于 70°C '的热水浴中提取 40min，过滤，重复上述过程 1 次，合并两次滤液并调 pH至中性，滤渣备用；

7) 8) 步骤同实施例 1。

各步产物提取率，以及工艺过程中的总耗水量、褐藻酸钠产品的分

对照工艺微波工艺

用水量（水 /巨藻粉） 100/1 15/1

16.0% (富 M) 褐藻酸钠得率 (wt) 24,6%

8,8% (富 G)

褐藻糖腔得率 (wt) 0.6% 3.5% 褐藻淀粉得率 (wt) 0.6% 褐藻酸钠分子量 L 15 X 10⁶ 7.8 X 10⁴ (富 Μ) 褐藻糖胶硫酸根含量 (wt) 15.5% 6 8%

用碱量（碱 /巨藻粉） 0,25 0.05

有机酸溶液用量（液固比） ― 1/3

褐藻酸钠 M/G L56 7.55 (富 Μ)

处理时间（min) 60 35 比较例 4

称取 100克经洗净、千燥、粉碎后的裙带菜原料放入 2L的烧杯中，加入 1L水以及 25g碳酸钠于 70Γ的热水浴中进行搅拌 1 小时，然后用 80- 100L的水进行冲稀，充分搅拌后过滤，滤液加盐酸调节 pH值至 2,0，离心分离，沉淀中加入碳酸钠进行转化，得到褐藻酸钠。离心所得上清液用乙醇分级沉淀，可得到褐藻糖胶（加乙醇至含醇量 65wt%) 和褐藻淀粉（加乙醇至含醇量 85wt%)。产物参数测定方法同实施例 1。所有分析结果见表 4。实施例 4

与实施例 1不同之处在于：

1 ) L5kg经千燥除杂、粉碎后的裙带菜置于谐振式微波反应腔中；

2) 取无水甲酸 0.8L, 加水 0.15L, 加 20\\1;%的盐酸溶液 0.05L配成甲酸-盐酸混酸溶液 1L，其中甲酸含量为 83%，盐酸含量为 0.1% ;

3 ) 取歩骤 2) 中的混酸溶液 1L, 加到步骤 1 ) 中的微波反应腔中，充分搅拌使均润湿；

4) 步骤 3) 中的润湿物料于 15KW连续微波功率下辐照至有液体回流，即有机酸溶液汽化，改为脉冲微波功率工作方式，占空比为 5 秒 Z5 秒，峰值功率 7KW，保持 13min后，抽真空（反应腔工作压力为 150mmHg) 减压蒸馏，排除有机酸溶液，至微波反应腔中无液体。 5 ) 上述步骤 4) 中微波反应腔体中加入无水乙醇 5L，充分搅拌，过滤。滤液蒸馏回收乙醇，滤渣千燥后即为微波预处理裙带菜粉。

6)取上述步骤 5 )中微波预处理裙带菜粉 100克，放入 1 L的烧杯中，加入 500ιτι1蒸馏水，于 70°C的热水浴中提取 40min, 过滤，重复上述过程 1次，合并两次滤液，调 pH至中性，滤渣备用。

7 ) 8) 步骤同实施例 1。

各步产物提取率，以及工艺过程中的总耗水量、褐藻酸钠产品的分子量、褐藻糖胶硫酸根含量等数据结果见表 4。

比较-例 5

称取克经洗净、干燥、粉碎后的岩藻原料放入 2L的烧杯中，加入 1L 水以及 25g碳酸钠于 7CTC的热水浴中进行搅拌 1 小时，然后用 80-100L的水进行冲稀，充分搅拌后过滤，滤液加盐酸调节 pH值至 2.0，离心分离，沉淀中加入碳酸钠进行转化，得到褐藻酸钠。离心所得上清液用乙醇分級沉淀，可得到褐藻糖胶（加乙醇至含醇量 65wt%) 和褐藻淀粉（加乙醇至含醇量 85wt%)。产物参数测定方法同实施例 1。所有分柝结果见表 5。

实施例 5

与实施例 1不同之处在于：

1 ) L5kg经千燥除杂、粉碎后的岩藻置于谐振式微波反应腔中； 2) 取无水丙酸 L8L，加水 0 2L，配成 90%的丙酸溶液 2L;

3 ) 取步骤 2) 中的丙酸溶液 2L，加到步骤 i ) 中的徽波反应腔中，充分搅摔使均勻润湿；

4) 步骤 3) 中的润湿物料于 4KW 连续微波功率下辐照至有液体回流，即有机酸溶液汽化，微波功率改为 2KW, 保持 30min后，抽真空 (反应腔工作压力为 150mmHg) 减压蒸馏，排除有机酸溶液，至微波反应腔中无液体。

5) 上述步骤 4) 中微波反应腔体中加入无水乙醇 5:L，充分搅摔，过滤。滤液蒸馏回收乙醇，滤渣干燥后即为微波预处理岩藻粉。

6) 取上述步骤 5) 中微波预处理岩藻粉 100克，放入 iL的烧杯中，加入 500ml蒸馏水，于 70Ό的热水浴中提取 40min，过滤，重复上述过程 i次，合并两次滤液，调 pH至中性，滤渣备用。

7) 8) 步骤同实施例 1。

对照工艺微波工艺

用水量（水 /岩藻粉） 100/1 15/1

7.0% (富 M)

褐藻酸钠得率 (wt) 1 1.7%

6,2% (富 G)

褐藻糖胶得率 (wt) 1.1 % 2,2%

褐藻淀粉得率 (wt) 0.6% 0,7%

褐藻酸納分子量 6.7 X 10⁵ 2,2 X 1()⁵(富 M )

褐藻糖胶硫酸根含量 (wt) 13,7% 5,7%

用^!量 (咸./岩藻.粉) 0.25 0.05 有机酸溶液用量（液固比） - 4/3 褐藻酸钠 M/G 2.53 5.90 (富 M)

处理时间（min) 60 30 比较例 6

称取 100克经洗净、千燥、粉碎后的鹿角菜原料放入 2L的烧杯中，加入 1L水以及 25g碳酸钠于 70Γ的热水浴中进行搅拌 1 小时，然后用 80- 100L的水进行冲稀，充分搅拌后过滤，滤液加盐酸调节 pH值至 2,0，离心分离，沉淀中加入碳酸钠进行转化，得到褐藻酸钠。离心所得上清液用乙醇分级沉淀，可得到褐藻糖胶（加乙醇至含醇量 65wt%) 和褐藻淀粉（加乙醇至含醇量 85wt%)。产物参数测定方法同实施例 1。所有分析结果见表 5。实施例 6

与实施例 1不同之处在于：

1 ) i .5kg经千燥除杂、粉碎后的鹿角菜置予谐振式微波反应腔中；

2) 取无水草酸 300g，加入 0.12%盐酸溶液 1.5L, 配成草酸-盐酸混酸溶液约 1.5L, 混酸中草酸含量为 20%, 盐酸含量 0.1%;

3) 取步骤 2) 中的草酸-盐酸混酸溶液 1.5L, 加到步骤 1 ) 中的微波反应腔中，充分搅拌使均润湿；

4) 步骤 3) 中的润湿物料予 3KW连续微波功率下辐照至有液体回流，即有机酸溶液汽化，将微波功率改为 L5KW，保持 30min后，抽真空（反应腔工作压力为 lOOmmHg) 减压蒸馏，至微波反应腔中无液体。

5) 上述步骤 4) 中微波反应腔体中加入无水乙醇 5L，充分搅摔，过滤。滤液蒸馏回收乙醇和草酸，滤渣千燥后即为微波预处理鹿角菜粉。

6)取上述步骤 5)中微波预^理鹿角菜粉 iOO克，放入 1L的烧杯中，加入 500ml蒸馏水，于 70Ό的热水浴中提取 40min，过滤，重复上述过程 i次，合并两次滤液，调 pH至中性，滤渣备用。 7) 8) 步骤同实施例 1。

5

实施例结果表明，本发明采用微波化学方式对褐藻类原料进行预处理，然后再分别采用水浸提和碱消化工艺处理，即可得到结构不同的糖醛酸低聚糖和褐藻糖胶低聚糖，并使褐藻糖胶中的硫酸根含量处于一个适中的范围，同时克服了现有工艺耗水、污染严重等诸多缺点。

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实验例 1 海带褐藻多糖对糖尿病小鼠血糖影响的实验

实验动物：昆明种小鼠，雄性，体重（22i:2) g, 由北京军事医学科学院动物实验中心提供

实验材料：链脲佐菌素 (STZ)为 Sigma公司产品，海带褐藻多糖为实 3 5 施例 1制备。

主要的仪器和设备： TU- 1810紫外可见分光光度计，北京普析通用仪器有限责任公司； BS 124S电子天平，德国塞多利斯股份公司； TGL 16G- A 离心机，上海安亭科学仪器厂； HPX- 9052MBE电热恒温箱，上海博迅实业有限公司； F6/ 10超细匀浆机，上海弗鲁克流体机械制造有限公司。

验方法：取小鼠一次性腹腔注射链脲佐菌素（STZ)50mg/kg, 取血糖值≥1L1 mmoi/L的作为糖尿病模型,取成模小鼠 20只，按血糖值的高低随机分组，分为模型組、褐藻多糖組，另取正常小鼠 10只，作为空白组。各組小鼠每天早 9:00灌胃治疗，褐藻多糖組灌胃剂量为 500mgZkg，模型組和空白組给予相应体积的蒸馏水。连续灌胃治疗 32d.，于第 21天和第 32 天小鼠禁食不禁水 12 h，眼眶取血，分离血清检测小鼠空腹血糖值。统计学方法：统计学方法采用 SPSS统计软件，各組数据均用土 s表示，組间比较用方差分析。实验结果列在下表：海带褐藻多糖对糖尿病小鼠空腹血糖的影响 ( x±s，匪 ol/L )

本发明褐藻多糖能够有效、显著的降低糖尿病小鼠的血糖。

Claims

L 一种微波化学法提取褐藻活性多糖的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1 ) 将粉碎后的褐藻类原料置入微波反应腔中，加入质量浓度为

5%- 99%酸溶液，在微波功率为每千克物料 1千瓦-每千克物料 10千瓦质量功率密度；工作压力为 20mmHg- 760mmHg下反应 5- 120mm ; 可选择地进行浓缩，然后加入有机溶剂洗涤，除去多余的酸；

2) 向歩骤 1 ) 所得产物加入水溶液提取、将提取液浓縮、用碱调节 PH至中性。进行分级醇沉，分别得到富含甘露糖醛酸片段褐藻胶、褐藻糖胶和褐藻淀粉；并剩余褐藻残渣；

3) 向步骤 2) 所得褐藻残渣中加入碱溶液并在 35 60°C、进行消化反应 20 80分钟，滤去残渣，将滤液调节 pH值至中性，然后醇沉，得富含古洛糖酸片段（富 G) 的褐藻胶沉淀。

2, 根据权利要求 1 所述的方法，其特征在于，所述步骤 1 ) 中的微波功率施加方式为连续微波或连续微波与脉冲微波相结合方式；其中，连续微波与脉沖微波相结合的使用方式中，先用连续微波辐照至酸溶液回流，转换为脉冲微波，继续辐照 5min- 120min。

3. 根据权利要求 i 所述的方法，其特征在于，所述步骤 1 ) 中，当加入的酸溶液为不挥发性酸时，不进行浓縮除酸；当加入的酸为挥发性酸时，先进行浓縮除酸，并优选微波加热下进行减压蒸馏浓缩的方法。

4. 根据权利要求 2所述的方法，其特征在于，所述步骤 1 ) 中，连续微波情况下，质量功率密度为每千克物料 1_千瓦-每千克物料 5千瓦；脉冲微波情况下，质量功率密度为每千克物料 2千瓦-每千克物料 10千瓦，占空比为 AZB，其中 A=l秒- 100秒， B=l秒- 100秒。

5. 根据权利要求 i所述的方法，其特征在于，所述步骤 1 ) 中褐藻原料与酸溶液的重量比范围 =5/1 i/5。

6. 根据权利要求 5所述的方法，其特征在于，所述步骤 1 ) 中的酸溶液选自有机酸或有机酸与无机酸的混合溶液。

7. 根据权利要求 6所述的方法，其特征在于，所述步骤 1 ) 中的有机酸选自 5 % 50%的草酸、优选 10%- 35%的草酸； 10%- 99%的甲酸、优选 30- 85%的甲酸； 10%- 99%的乙酸、优选 60- 95%的乙酸；或 10% 99%的丙酸、优选 70- 95%的丙酸的水溶液。

8. 根据权利要求 6所述的方法，其特征在于，所述步骤 1 ) 中的有机酸和无机酸組合的溶液中，其中无机酸质量百分比浓度为 0.1%- 15%。

9. 根据权利要求 8所述的方法，其特征在于，所述步骤 1 ) 中的无机酸选自盐酸、硫酸、硝酸或磷酸；优选盐酸。

10. 根据权利要求 1所述的方法，其特征在于，所述步骤 1 ) 中洗涤残余酸的有机溶剂选自甲醇、乙醇、丙醇或丙酮、或它们中的两种或两种以上的组合。

11 . 根据权利要求 1所述的方法，其特征在于，所述步骤 2) 中，水的用量为步骤 1 ) 所得产物体积的 5- 8倍。

12. 根据权利要求 1所述的方法，其特征在于，所述步骤 2) 中，调节 pH值所用的碱选自碳酸销或氫氧化销。

13. 根据权利要求 1所述的方法，其特征在于，所述步骤 2) 分级醇沉包括：加乙醇至含醇量 20wt% 4()wt% 、离心或过滤分离，得富含甘露糖醛酸片段低聚褐藻胶沉淀；然后加乙醇至含醇量 60wt%- 70wt%时，过滤或离心分离、获得褐藻糖胶沉淀；最后加乙醇至含醇量 80wt%- 85wt% 时，过滤或离心分离可获得褐藻淀粉沉淀。

14. 根据权利要求 1所述的方法，其特征在于，所述步骤 3 ) 中的碱选自碳酸钠或氫氧化钠。

15. 根据权利要求 1所述的方法，其特征在于，所述步骤 3 ) 中调节 pH:值的酸选自盐酸。

16. 根据权利要求 1所述的方法，其特征在于，所述步骤 3 ) 中醇选自甲醇或乙醇。

17. 根据权利要求 1-16任一所述的方法，其特征在于，所述褐藻选自海带属海带；马尾藻属海蒿子、海黍子、羊栖菜、鼠尾藻、匍枝马尾藻；墨角藻属岩藻、墨角藻；鹿角菜属鹿角菜；裙带菜属裙带菜和 /或巨藻属

5 18. 根据权利要求 17所述的方法，其特征在于，采用海带属海带制备活性多糖的方法如下：

将千海带粉置入微波提取腔中，添加其重量的 0.5- 1„5倍 60%- 85%的甲酸溶液，于 i- 2KW/Kg功率密度的微波下， 500mmHg- 760mmHg压力下保持甲酸溶液回流 15- 3()min,然后减压蒸干甲酸溶液；向反应腔中加入海带

10 粉重量的 3- 5倍的乙醇溶液，搅拌洗涤 40 60分钟，过滤；滤渣烘干后用水进行提取 2次，每次用水量为滤渣重量的 4 6倍，提取温度 60- 80 C，提取时间约 40分钟；过滤，合并两次滤液，用氫氧化納溶液中和至中性，浓缩至提取液体积的 1/5 , 然后加入乙醇至溶液中乙醇含量达到 35%, 静置 4- 8小时，过滤，滤饼用无水乙醇及乙醚洗涤后烘千，得到多糖 A,继续向 i s 滤液中添加乙醇至溶液中乙醇含量达到 65%，静置 4- 8小时，过滤，滤饼用无水乙醇及乙醚洗涤后烘千，得到多糖 B ; 继续向滤液中补加乙醇至溶液中乙醇含量达到 85%, 静置 4- 8小时，过滤，滤饼经无水乙醇和乙醚洗涤后烘千，得到多糖 C ; 上述水提后的海带滤渣中加入碳酸钠溶液，在 35- 60 C温度进行碱消化反应 40- 60分钟，过滤，滤液用盐酸调节 pH值至 0 中性，浓缩后醇沉，得到多糖 D ;

19. 根据权利要求 17所述的方法，其特征在于，采用马尾藻属羊栖菜制备活性多糖的方法如下：将干羊栖菜粉加入到微波提取腔中，加入 5 0,5 U)倍 20%的草酸溶液，于 1 2KW/Kg功率密度的微波下，

500mmHg-760mmHg气压下保持草酸溶液回流 15- 25:min，然后减压蒸千微波提取腔中的液体；向反应腔中加入海带粉重量的 4 6倍的乙醇溶液，搅拌洗涤物料 40- 60分钟，过滤，滤渣烘千；滤液蒸馏回收乙醇和草酸。烘干的滤渣水提取两次，每次用水为物料重量的 4 6倍，提取温度 7CfC，提取时间约 40分钟；过滤，合并两次滤液，用氫氧化钠溶液中和至中性，浓縮至提取液体积的约 1/5，然后加入乙醇至溶液中乙醇含量达到 30%， 5 静置 4- 8小时，过滤，滤饼用无水乙醇及乙醚洗涤后烘干，得到多糖 A,继续向滤液中添加乙醇至溶液中乙醇含量达到 60%，静置 4- 8小时，过滤，滤饼用无水乙醇及乙醚洗涤后烘干，得到多糖 B ; 继续向滤液中补加乙醇至溶液中乙醇含量达到 80%, 静置 4- 8小时，过滤，滤饼经无水乙醇和乙醚洗涤后烘干，得到多糖 ;上述水提后的羊栖菜滤渣中加入碳酸销溶液，

10 在 35 60°C温度进行碱消化反应 40- 60分钟，过滤，滤液用盐酸调节 pH值至中性，浓缩后醇沉，得到多糖 ΐ)。

其中多糖 Α为富含甘露糖醛酸（富 M) 的褐藻酸钠，多糖 B为褐藻糖胶，多糖 C为褐藻淀粉，多糖 D为富含古洛糖醛酸（富 G) 的褐藻酸钠。

20. 根据权利要求 17所述的方法，其特征在于，采用墨角藻属岩藻 i s 制备活性多糖的方法如下：将千岩藻粉加入到微波提取腔中，加入 1-2倍 8()%- 95%的丙酸溶液，于 3- 5KW/Kg功率密度的微波下作用，至丙酸溶液回流后 , 500mmHg~760mmHg气压下保持 40- 6()min,然后减压蒸干丙酸溶液。向反应腔中加入岩藻粉重量的 3-5倍的乙醇溶液，搅捽 30- 60分钟，过滤，滤渣烘干；向烘干的滤渣中加入 4- 6倍的水，于 70 C下提取 40分钟， 0 过滤；重复上述提取过程一次，合并两次滤液，用氫氧化钠溶液中和至中性，浓缩至提取液体积的 1/5，然后加入乙醇至溶液中乙醇含量达到 35%, 静置 4 8小时，过滤，滤饼用无水乙醇及乙醚洗涤后烘干，得到多糖 A,继续向滤液中添加乙醇至溶液中乙醇含量达到 65%, 静置 4- 8小时，过滤，滤饼用无水乙醇及乙醚洗涤后烘干，得到多糖 B ; 继续向滤液中补 5 加乙醇至溶液中乙醇含量达到 85%, 静置 4- 8小时，过滤, 滤饼经无水乙醇和乙醚洗涤后烘干，得到多糖 C ; 上述水提后的岩藻滤渣中加入碳酸钠溶液，在 35-6CTC温度进行碱消化反应 40 60分钟，过滤，滤液用盐酸调节 pH值.至中性，浓缩后醇沉，得到多糖 D;

21. 根据权利要求 17所述的方法，其特征在于，采用鹿角菜属鹿角菜制备活性多糖的方法如下：将干鹿角菜粉加入到微波提取腔中，加入

0.5- 2倍草酸 -盐酸混酸溶液，混酸中草酸含量为 20%, 盐酸含量为 0„1_%, 于 1 - 2KW/Kg功率密度的微波下， 500minHg- 760mmHg气压下保持混酸溶液回流 15- 25min,然后减压蒸干反应腔中液体；向反应腔中加入鹿角菜粉重量的 3- 5倍的乙醇溶液，搅拌 30- 60分钟，过滤；滤渣烘千后加入 4- 6倍的水，于 70°C下提取 40分钟，过滤；重复上述提取过程一次，合并两次滤液，用氫氧化销溶液中和至中性，浓縮至提取液体积的 1/5 , 然后加入乙醇至溶液中乙醇含量达到 35%，置 4- 8小时，过滤，滤饼用无水乙醇及乙醚洗涤后烘千，得到多糖 Α,继续向滤液中添加乙醇至溶液中乙醇含量达到 65%, 静置 4- 8小时，过滤，滤饼用无水乙醇及乙醚洗涤后烘干，得到多糖 Β ;继续向滤液中补加乙醇至溶液中乙醇含量达到 85%，静置 4- 8 小时，过滤，滤饼经无水乙醇和乙醚洗涤后烘干，得到多糖 C ; 上述水提后的鹿角菜滤渣中加入碳酸销溶液，在 35- 60 C温度进行碱消化反应 40 6() 分钟，过滤，滤液用盐酸调节 p:H值至中性，浓缩后醇沉，得到多糖: D;

22. 根据权利要求 17所述的方法，其特征在于，采用裙带菜属裙带菜制备活性多糖的方法如下：将干裙带菜粉加入到微波提取腔中，加入 0,5 2,5倍甲酸盐酸混酸溶液，其中曱酸含量为 80%, 盐酸含量为 0.5%, 于 2 4KW/Kg功率密度的微波下， 50()mniH:g- 76()mmH:g气压下保持混酸溶液回流 10- 30miri，然后减压蒸干混酸溶液；向反应腔中加入裙带菜粉重量的 3 5倍的乙醇溶液，搅捽 30- 60分钟，过滤；滤渣烘干后加入 4-6倍的水，于 6CTC下提取 40分钟，过滤；重复上述提取过程一次，合并两次滤液，用氫氣化钠溶液中和至中性，浓缩至提取液体积的 1/5，然后加入乙醇至溶液中乙醇含量达到 35%，静置 4- 8小时，过滤，滤饼用无水乙醇及乙醚洗涤后烘干，得到多糖 A,继续向滤液中添加乙醇至溶液中乙醇含量达到 65%, 静置 4- 8小时，过滤，滤饼用无水乙醇及乙醚洗涤后烘干，得到多糖 B ; 继续向滤液中补加乙醇至溶液中乙醇含量达到 85%, 静置 4- 8小时，过滤，滤饼经无水乙醇和乙醚洗涤后烘干，得到多糖 C ; 上述水提后的裙带菜滤渣中加入碳酸钠溶液在 35- 60°C温度进行碱消化反应 40- 60分钟，过滤，滤液用盐酸调节 pH值至中性，浓縮后醇沉，得到多糖 D ;

23. 根据权利要求 17所述的方法，其特征在于，采用巨藻属巨藻制备活性多糖的方法如下：将千巨藻粉加入到微波提取腔中，加入 0,3- 1 ,2 倍 80%- 95%的乙酸溶液，于 1 - 4KW/Kg功率密度的微波下作用，至乙酸溶液回流后， 5()()mmH:g- 76()mmH:g气压下保持 30- 4()min,然后减压蒸干乙酸溶液；向反应腔中加入巨藻粉重量的 3- 5倍的乙醇溶液，搅拌 30- 60分钟，过滤,滤渣烘干后加入 4- 6倍的水于 60 C下提取 4()分钟，过滤；重复上述提取过程一次，合并两次滤液，用氫氧化钠溶液中和至中性，浓縮至提取液体积的 1/5，然后加入乙醇至溶液中乙醇含量达到 35%, 静置 4 8小时，过滤，滤饼用无水乙醇及乙醚洗涤后烘干，得到多糖 A,继续向滤液中添加乙醇至溶液中乙醇含量达到 65%, 静置 4- 8小时，过滤, 滤饼用无水乙醇及乙醚洗涤后烘干，得到多糖： B ; 继续向滤液中补加乙醇至溶液中乙醇含量达到 85%，静置 4- 8小时，过滤，滤饼经无水乙醇和乙醚洗涤后烘干，得到多糖 C；上述水提后的巨藻滤渣中加入碳酸钠溶液在 35 60°C温度进行碱消化反应 40 60分钟，过滤，滤液用盐酸调节 pH值至中性，浓缩后醇沉，得到多糖 D ;

24. 一种褐藻多糖，其特征在于，所述褐藻多糖采用权利要求 1-23 任一所述方法制备而得。

25. 根据权利要求 24 所述的褐藻多糖、其特征在予，所述褐藻多糖为采用权利要求 1-23任一方法制备而得的富含古洛糖醛酸片段的褐藻胶或富含甘露糖醛酸片段褐藻胶。

26. 根据权利要求 25 所述的褐藻多糖、其特征在予，所述富含古洛糖醛酸片段的褐藻胶为富含古洛糖醛酸片段的海带褐藻胶、羊栖菜褐藻胶、岩藻褐藻胶、鹿角菜褐藻胶、裙带菜褐藻胶或巨藻褐藻胶。

27. 根据权利要求 25所述的褐藻多糖、其特征在于，所述富含甘露糖醛酸片段的褐藻胶为富含甘露糖醛酸段褐藻胶的海带褐藻胶、羊栖菜褐藻胶、岩藻褐藻胶、鹿角菜褐藻胶、裙带菜褐藻胶或巨藻褐藻胶。

28. 一种富含甘露糖醛酸片段褐藻酸钠的制备方法，其特征在于，采用权利要求 1-25、27任一所述的富含甘露糖醛酸片段褐藻胶加入碳酸钠转化 _; 得富含甘露糖醛酸片段褐藻酸納。

29. —种权利要求 28所述方法制备的富含甘露糖醛酸片段的褐藻酸钠。