WO2012155376A1

WO2012155376A1 - 一种四磨汤制剂的检测方法

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Publication number: WO2012155376A1
Application number: PCT/CN2011/075806
Authority: WO
Inventors: 刘令安; 易跃能; 王长虹; 程雪梅
Original assignee: 湖南汉森制药股份有限公司
Priority date: 2011-05-13
Filing date: 2011-06-16
Publication date: 2012-11-22
Also published as: CN102346177A; CN102346177B

Description

一种四磨汤制剂的检测方法技术领域

本发明涉及一种四磨汤制剂的检测方法。背景技术

中成药四磨汤是一种快速排除胃肠积滞、增强消化机能的验方。该方主要成分包括木香、枳壳、乌药和槟榔等药。其中，木香、枳壳行气宽中和胃，槟榔降逆气，乌药散寒止痛。诸药合用，共奏行气导滞、消胀止痛之功效。临床主要用于婴幼儿乳食内滞，中老年气滞食积，以及腹部手术后、产后促进肠胃功能的恢复。四磨汤早期被用于防治婴幼儿消化不良及老年人腹部胀气均有明显疗效，近年用于手术后胃肠功能恢复，疗效显著，安全可靠。据药理学实验证明，四磨汤具有增强胃肠蠕动，促进消化液分泌，调节胃肠功能，排除肠胃积滞作用，适用于功能性消化不良的治疗。

四磨汤中的木香含有木香烃内酯（costunolide) 、去氢木香烃内酯等有效成分，能使大肠兴奋，收缩力加强，蠕动加快，可缓解胃肠气胀所致的腹胀，对胃排空和肠推进均有促进作用，对乙酰胆碱和组织胺所致的肠肌痉挛有对抗作用。枳壳及其所含的主要有效成分辛弗林（synephrine ) 和 N-甲基酪胺（N-methyltyramine ) 等生物碱对胃肠道平滑肌有一定的兴奋作用，可使胃肠运动收缩节律性增加，枳壳能增强小肠平滑肌紧张程度，使小肠蠕动加强，胃肠收缩节律增快。其中，辛弗林对胃肠运动具有调节作用，主要通过平滑肌细胞膜上的乙酰胆碱受体、肾上腺素受体、 5-HT受体调节，以及对平滑肌细胞的直接作用，进一歩肯定辛弗林为枳壳作用胃肠运动的有效成分之一。槟榔及其所含的主要有效成分槟榔碱（arecolidine) 可兴奋 M-胆碱受体，引起腺体分泌增加，使消化液分泌旺盛，并具有兴奋肠平滑肌作用，可治食积、气滞、腹胀、便秘等。乌药在组方中起关键性作用，不仅能增强配方中其它药物的药理作用，而且亦能兴奋胃肠平滑肌使其收缩活动加强，可以加速血液循环，有促进肠蠕动的作用。乌药中的主要活性成分除脂溶性成分乌药醚内酯等外，主要含有另一类水溶性更好的异喹啉类生物碱成分如去甲异波尔定（norisobolidine)，新木姜子碱（laurolitsine)，牛心果碱（reticuline) 等。其中去甲异波尔定（norisobolidine) 已成为中国药典 2010版药典乌药药材的含量控制指标。

槟榔碱（式 1 ) 、辛弗林（式 2) 和去甲异波尔定（式 3 ) 三种生物碱是四磨汤口服液中发挥重要药理作用的主要成分。因此，建立一种简单、经济和有效的分析方法测定四磨汤口服液中上述三种生物碱成分，对控制药品质量十分必要。

式 1 式 2 式 3

但现有的测定方法主要为针对在药材、其他复方中草药制剂及生物样品中某一种上述成分的分析测定。如有关槟榔碱，现有方法主要涉及高效液相色谱法测定槟榔子、人类唾液中槟榔碱含量的测定。有关辛弗林，现有方法主要涉及通过毛细管电泳电化学检测法、流动注射化学发光法、 LC-MS法、反相离子对高效液相色谱法测定枳实、枳壳、青皮、柑橘、母乳等中的辛弗林含量的方法。有关去甲异波尔定，现有方法主要涉及高效液相色谱法测定乌药、大鼠血浆中去甲异波尔定的含量的方法。

针对四磨汤口服液，目前仅有少量文献建立了测定其中槟榔碱或辛弗林的含量的高效液相色谱法：文献 (HPLC法测定四磨汤口服液中辛弗林的含量. 中国医药导刊， 2009， 11(1): 165-166；高效液相色谱法测定四磨汤口服液中槟榔碱的含量，湖南中医药大学学报， 2009， 29(4): 27-29)。至今，尚未见可同时测定四磨汤制剂中槟榔碱、辛弗林和去甲异波尔定三种生物碱的方法的报道。发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种简单、经济、且有效的，可同时测定四磨汤制剂中槟榔碱、辛弗林和去甲异波尔定三种生物碱成分的方法，以满足对四磨汤制剂质量考察和控制的需要。

本发明的检测方法包括如下歩骤：将四磨汤制剂的供试品进行高效液相色谱法检测，即可；所述的高效液相色谱法的色谱条件为下述中的任一种：方式一：色谱柱为强阳离子型交换色谱柱，流动相为体积比为 40〜80： 60〜20、更佳的为 45〜80： 55〜20、较佳的为 65: 35的甲醇和体积百分比 0.2%、 H 3.8的磷酸水溶液，检测波长为 215 nm;

方式二：色谱柱为十八垸基硅垸键合硅胶柱，流动相为体积比 50: 50 的甲醇和质量百分比 0.1%SDS水溶液，流速如表 1所示，检测波长为 230nm。

表 1

本发明中，所述的四磨汤为现有中药方，其包括木香、枳壳、乌药和槟榔四味药材，各药材重量份数比一般为 100: 50-150： 50-150： 50〜150。所述的四磨汤制剂为现有的根据四磨汤中药方制备的各种剂型的四磨汤制剂，例如口服液（如中国专利 CN1106288公开的四磨汤口服液）、丸剂（如蜜丸、浓缩丸或滴丸）、乳化剂、胶囊（如软胶囊）、片剂（如咀嚼片或泡腾片）、干混悬剂、口服凝胶剂、颗粒剂或栓剂等。上述四磨汤制剂可由下述方法制得：将原药材经水蒸气蒸馏法提取的挥发性成分，与药渣经水提醇沉提取的水提物，按现有方法制成各剂型。

本发明中，所述的四磨汤制剂的供试品可按常规的色谱供试溶液的预处理方法制备而得。具体的，对于四磨汤口服液，可直接用微孔滤膜过滤，滤液可不经稀释，或者稀释至原体积 100倍以下（稀释溶剂可为水或流动相），即为供试品。所述的微孔滤膜的孔径可按常规条件选择，一般为 0.22〜0.8μηι，优选 0.45μηι。各种类的微孔滤膜均适用本发明，如聚醚砜微孔滤膜。对于其他剂型（如其他液体制剂或固体制剂）的四磨汤制剂，可将溶有四磨汤制剂的溶液经超声处理，冷却，之后用微孔滤膜（同前述）过滤，滤液即为供试品。其中，所述的溶有四磨汤制剂的溶液中的溶剂可为甲醇、乙醇、体积百分比 40%以上的甲醇水溶液、体积百分比 40〜95%的乙醇水溶液、氯仿、乙酸乙酯、乙醚、石油醚、丙酮或环己垸，优选前四种。所述的溶剂的用量以使四磨汤制剂的浓度适宜色谱检测为准。具体的，可根据上述四磨汤口服液供试品中的浓度，按其他四磨汤制剂的药材用量折算配制成相同浓度。所述的超声处理的条件较佳的为 160〜250W，频率 40kHz，超声 20〜60min。

本发明中，所述的高效液相色谱法检测的进样量根据色谱检测领域常规条件选择，一般为 2〜5(^L，以 5〜2(^L为佳。

本发明方法的方式一中，所述的强阳离子型交换色谱柱可为现有的各种类型的强阳离子型交换色谱柱，如磺酸基阳离子交换柱。所述的强阳离子型交换色谱柱的型号规格可为现有各种型号规格，如 4.6mmX 250mm、 4.6mm X 150mm等径长规格均可适用，最优选 4.6mm X 250mm。所述的强阳离子型交换色谱柱的填料粒径较佳的为 5μηι。本发明特别优选 Agilent SCX柱 (4.6x250 mm ，填料粒径 5 μηι)。

本发明方法的方式二中，所述的十八垸基硅垸键合硅胶柱可为现有的各种型号规格的十八垸基硅垸键合硅胶柱，如 4.6mm X 250mm, 4.6mm X 150mm等径长规格均可适用，最优选 4.6mm X 250mm。所述的十八垸基硅垸键合硅胶柱的填料粒径较佳的为 5μηι。本发明特别优选 Agilent ZORBAX SB-C₁₈柱（4.6x250 mm, 填料粒径 5 μηι)。

本发明方法的方式一或二中，柱温对分离效果影响不大，可采用常规的色谱柱可以允许使用的温度范围，一般为 15〜50°C，较佳的为 30〜40°C，最佳的为 35°C。

本发明方法的方式一中，流速对本发明检测方法的分离效果影响不大，可按本领域常规方法选择，一般为 0.5〜1.5 mL/min,较佳的为 0.8〜1.2 mL/min, 最佳的为 1 mL /min。

本发明方法的方式二采用梯度流速，表 1中，所述的改变可为 HPLC领域常规的各种梯度变化方式，较佳的为线性梯度改变方式。

在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。

本发明所用试剂和原料均市售可得。

本发明的积极进歩效果在于：本发明的检测方法可同时测定四磨汤制剂中槟榔碱、辛弗林和去甲异波尔定三种生物碱成分。该方法所测得的色谱峰的分离度、理论塔板数、对称因子、峰纯度均较佳，且在较大浓度范围内与峰面积呈良好线性关系，具有优异的精密度、重复性和准确度。本发明为四磨汤制剂的质量控制提供了简单、经济和有效可靠的分析方法。附图说明

图 1为实施例 1中方法一洗脱条件 1、 2和 4检测四磨汤口服液的供试品溶液的色谱图，色谱图中 1为辛弗林， 2为去甲异波尔定， 3为槟榔碱。

图 2为实施例 1中方法二洗脱条件 1和 3检测四磨汤口服液的供试品溶液的色谱图，色谱图中 1为辛弗林， 2为去甲异波尔定， 3为槟榔碱。

图 3为实施例 1最佳洗脱条件，即方法一洗脱条件 3和方法二洗脱条件 2 检测对照品溶液和四磨汤口服液的供试品溶液的色谱图，其中 1为辛弗林， 2为去甲异波尔定， 3为槟榔碱， A为对照品溶液， B为四磨汤口服液的供试品溶液。

图 4为实施例 2不同柱温下方法一检测四磨汤口服液的供试品溶液的色谱图，其中， A为 30°C， B为 35°C， C为 40°C _; 1为辛弗林， 2为去甲异波尔定， 3为槟榔碱。

图 5 为实施例 2不同流速下方法一检测四磨汤口服液的供试品溶液的色谱图，其中， A为 0.8 mL/min， B为 1.0 mL/min， C为 1.2 mL/min_; 1为辛弗林， 2为去甲异波尔定， 3为槟榔碱。具体实施方式

下面通过实施例的方式进一歩说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。

下述实施例中，所用设备和试剂：

Agilent 1100型液相色谱仪（Agilent 1100，包括四元泵、自动进样器、柱温箱、检测器、工作站）， BP211D电子分析天平（Sartorius CO. )。

辛弗林（Synephrine, 110727-200306) 、氢溴酸槟榔碱（Arecoline hydrobromide, 111684-200401 ) 对照品由中国生物制品检定所提供（供含量测定用）。去甲异波尔定（Norisoboldine) 由上海中药标准化研究中心提供，纯度大于 98%。磷酸、甲醇为色谱纯， SDS等其余试剂均为分析纯，水为超纯水。

四磨汤口服液由湖南汉森制药股份有限公司或湖南中达骛马制药有限责任公司提供。

实施例 1 系统适用性

1、样品制备

对照品溶液：分别取氢溴酸槟榔碱、辛弗林、去甲异波尔定对照品，精密称定重量，加甲醇溶解，分别制成每 lml含氢溴酸槟榔碱 0.5 mg、辛弗林 0.5 mg、去甲异波尔定 0.4 mg的溶液，作为对照品贮备溶液。分别精密吸取 3种贮备液适量，用甲醇稀释成 lml含氢溴酸槟榔碱 50 μ_§、辛弗林 50 μ_§、去甲异波尔定 40 μ_§的对照品溶液。

四磨汤口服液的供试品溶液:取四磨汤口服液 5支，混合均匀，用 0.45μηι 微孔滤膜（0.45μηι，聚醚砜， SCAA-101水相针式滤器）过滤，取续滤液，即得。

2、色谱方法

(1) 方法一

洗脱条件 1:

色谱柱为 Agilent SCX (4.6 x250 mm, 5 μηι)，流动相为体积比 45: 55 的甲醇 -0.2 % (ν/ V) 磷酸水溶液（氨水调 ρΗ3.8)，柱温为 15°C，流速为 LSmL-min"¹, 进样量 10 L，检测波长为 215nm。

洗脱条件 2:

色谱柱为 Agilent SCX (4.6 x250 mm, 5 μηι)，流动相为体积比 50: 50 的甲醇 -0.2 % (ν/ V) 磷酸水溶液（氨水调 ρΗ3.8)，柱温为 15°C，流速为 LSmL-min"¹, 进样量 10 L，检测波长为 215nm。

洗脱条件 3 (最佳洗脱条件)：

色谱柱为 Agilent SCX (4.6 x250 mm, 5 μηι)，流动相为体积比 65: 35 的甲醇 -0.2 % (ν/ V) 磷酸水溶液（氨水调 ρΗ3.8)，柱温为 35°C，流速为 LOmL-min"¹, 进样量 10 L，检测波长为 215nm。

洗脱条件 4:

色谱柱为 Agilent SCX (4.6 x250 mm, 5 μηι)，流动相为体积比 80: 20 的甲醇 -0.2 % (ν/ V) 磷酸水溶液（氨水调 ρΗ3.8)，柱温为 50°C，流速为 O.SmL-mm¹, 进样量 10 L，检测波长为 215nm。

(2) 方法二

洗脱条件 1:

色谱柱为 Aglient ZORBAX SB-C₁₈ (4.6 x250 mm, 5 μηι)，流动相为体积比 50: 50甲醇 -0.1wt%SDS水溶液，柱温为 50°C，流速如表 2所示，进样 20μ , 检测波长为 230nm。

洗脱条件 2 (最佳洗脱条件)：

色谱柱为 Aglient ZORBAX SB-C₁₈ (4.6 x250 mm, 5 μηι)，流动相为体比 50: 50甲醇 -0.1wt%SDS水溶液，柱温为 35°C，流速如表 3所示，进样 20μL, 检测波长为 230nm。

表 3

洗脱条件 3、

色谱柱为 Aglient ZORBAX SB-C₁₈ (4.6 x250 mm, 5 μηι)，流动相为体比 50: 50甲醇 -0.1wt%SDS水溶液，柱温为 15°C，流速如表 4所示，进样 20μL, 检测波长为 230nm。

表 4

3、实验结果

采用方法一洗脱条件 1〜4、以及方法二洗脱条件 1〜3所得的色谱图如图 1〜3所示，保留时间、分离度、理论塔板数、对称因子和峰纯度如表 5所示。

表 5 方法一和方法二的分离效果

由图 1〜3，表 5可见，方法一和方法二均可满足分离要求。但以方法一和二的最佳洗脱条件相比较，方法二测定的 3种生物碱色谱峰的对称因子为 0.61-0.69, 而方法一的对称因子提高到 0.86〜0.92；与方法二相比，方法一测定的 3种生物碱色谱峰的理论塔板数和分离度，除去甲异波尔定有所降低以外，辛弗林和槟榔碱均大大提高，从而极大提高了检测灵敏度。此外，方法一所得色谱峰的峰纯度均显著优于方法二。因此，由上述结果表明，与采用 ODS反相色谱柱 ZORBAX SB-C₁₈的方法二相比，方法一具有更加优异的分离效果，更加适用于对四磨汤口服液中辛弗林、槟榔碱和去甲异波尔定的分离和检测分析。

实施例 2 耐用性试验

1、柱温的影响

实验方法：取实施例 1的四磨汤口服液的供试品溶液，分别在柱温 30°C、 35°C和 40°C条件下进行分析，其他条件同实施例 1中方法一洗脱条件 3。

实验结果：色谱图如图 4所示。由图 4可见，柱温在 30〜40°C之间时，对色谱峰的保留时间有一定的影响，但对目的色谱峰的分离情况影响不大。当柱温为 40 °C，分离时间最短。因此 30〜40°C的柱温均可适用方法一的测定。

2、流速的影响

实验方法：取实施例 1的四磨汤口服液的供试品溶液，分别在不同流速 0.8 mL/min, 1.0 mL/min和 1.2 mL/min的条件下进行分析，其他条件同实施例 1中方法一洗脱条件 3。

实验结果：色谱图如图 5所示。由图 5可见， 3种不同的流速对色谱峰分离度影响不大，但对色谱峰的保留时间影响较大，高流速下分析时间大大缩短。因此，流速 O.S l^ miivmU¹的流速均可适用方法一的测定。

由上述实验可见，方法一对柱温和流动相流速的变化有良好的抗干扰能力。

实施例 3 方法学验证用甲醇稀释成如表 6所示的系列混合对照品标准溶液

表 6混合对照品系列标准溶液

分别精密吸取 10 混合对照品标准溶液注入高效液相色谱仪，按实施例 1中方法一洗脱条件 3进行测定。分别以辛弗林、氢溴酸槟榔碱和去甲异波尔定的色谱峰面积与相对应的浓度进行线性回归，得标准曲线回归方程。结果辛弗林、氢溴酸槟榔碱和去甲异波尔定的标准曲线分别为：

辛弗林： y= 18027X+12.397, r=0.9999;

氢溴酸槟榔碱： y = 20543X+ 10.22, r=0.9999;

去甲异波尔定： y = 46596X-1.189, r=l。

辛弗林、氢溴酸槟榔碱和去甲异波尔定分别在 JS^SS gmL^ 1.30〜 208 g mL—¹和 2.015〜201.6 mL—¹的线性范围内线性关系良好。

二、最低定量限与最低检测限

用甲醇配制不同浓度的含辛弗林、去甲异波尔定、氢溴酸槟榔碱的混合对照品溶液，摇匀，进样 10 L，按实施例 1中方法一洗脱条件 3分析。信噪比 S/N=10时，辛弗林、去甲异波尔定和氢溴酸槟榔碱的最低定量限分别 ¾ 2.55 μ mL"¹, 2.015 g mL 和 1.30 ml/ 信噪比 S/N = 3时，辛弗林、去甲异波尔定和氢溴酸槟榔碱的最低检测限分别为 l^S gmL— 1.21μ_§ mL"¹ 和 0.78 gmlA

三、精密度考察

分别取下述三种浓度的混合对照品标准溶液：（1) SJ gmL 辛弗林、 20.1 mL—¹去甲异波尔定和 13 g mL-¹氢溴酸槟榔碱; (2) 51.(^g mL 辛弗林、40.32 g mL—¹去甲异波尔定和 26.(^g mL—¹氢溴酸槟榔碱；（3 )102.0μ_§ mL 辛弗林、 SO A g mL 去甲异波尔定和 S .O g mL 氢溴酸槟榔碱。重复进样 6次，每次进样 10 L，按实施例 1中方法一洗脱条件 3分析，测定峰面积。计算辛弗林在三种浓度下的日内精密度（RSD%) 分别为 0.20、 0.16 和 0.26; 去甲异波尔定在三种浓度下的日内精密度（RSD%)分别 0.22、 0.54 和 0.34; 氢溴酸槟榔碱在三种浓度下的日内精密度（RSD%) 分别为 0.33、 1.03和 1.14。

分别连续三日按实施例 1中方法一洗脱条件 3进样分析，测定峰面积，计算辛弗林在三种浓度下的日间精密度（RSD%)分别为 1.00、 1.56和 1.38；去甲异波尔定在三种浓度下的日内精密度（RSD%)分别 1.27、 1.58和 1.56；氢溴酸槟榔碱在三种浓度下的日内精密度 (RSD%)分别为 0.81、 1.63和 1.68。

辛弗林、氢溴酸槟榔碱和去甲异波尔定的日内和日间精密度 RSD均小于 2%，满足样品分析的要求。

四、样品稳定性

取实施例 1的四磨汤口服液的供试品溶液，分别在 0、 2、 4、 8、 12、 24 和 48小时进样 ΙΟμΙ^, 按实施例 1中方法一洗脱条件 3分析，测定峰面积，计算辛弗林、槟榔碱和去甲异波尔定的峰面积的稳定性，结果为：辛弗林、槟榔碱和去甲异波尔定峰面积的 RSD%分别为 1.57、 0.53和 1.95，说明该四磨汤口服液中三种成分在 48h内稳定。

五、重复性实验

取 6份实施例 1的四磨汤口服液的供试品溶液，进样 10 L，按实施例 1中方法一洗脱条件 3分析，测定峰面积，结果为：辛弗林、槟榔碱和去甲异波尔定的峰面积的 RSD%分别为 1.60、 1.04和 0.85，表明该方法的重复性良好。

六、准确度与回收率实验

精密量取已准确测定辛弗林（0.02236mg/mL)、槟榔碱（ 0.03516mg/mL) 和去甲异波尔定（0.03940mg/mL)含量的四磨汤口服液（批号 090436)2.5 mL，置 5 mL量瓶中，分别加入各自成分含量 50wt%、 100wt%、 120wt%的对照品溶液，加甲醇至刻度，摇匀，过滤。按实施例 1中方法一洗脱条件 3分析，计算方法的准确度和回收率。辛弗林平均回收率为 99.05%， RSD为 2.56%, 氢溴酸槟榔碱平均回收率为 96.24%， RSD为 1.03%，去甲异波尔定平均回收率为 99.00%， RSD为 1.52%，结果见表 7。

表 7方法一洗脱条件 3测定辛弗林、槟榔碱和去甲异波尔定的

准确度和加样回收率（n =3 )

四磨汤口服液的检测

测定 26批次不同厂家的四磨汤口服液中辛弗林、槟榔碱和去甲异波尔定含量。每批次产品取五支四磨汤口服液，混合、摇匀、过 0.45 μηι的膜，取续滤液，即为四磨汤口服液的供试品溶液。分别吸取对照品溶液和供试品溶液各 ΙΟμΙ^, 进样，按实施例 1中方法一洗脱条件 3进行分析测定。按外标一点法计算百分含量，如表 8所示。 26批四磨汤样品中辛弗林、去甲异波尔定、槟榔碱的平均含量分别为 0.024 ± 0.005 mg mL"¹, 0.041 ± 0.009 mg mL"¹ 禾口 0.029士 0.007 mg mL^-1。

表 8 26批次四磨汤口服液中辛弗林、槟榔碱和去甲异波尔定的含量测定（n=2 ) 含量 (mg mL—¹ )

批号生广厂家

辛弗林去甲异波尔定槟榔碱

070109 0.021 0.021 0.026

070419 0.024 0.024 0.036

070706 0.031 0.042 0.024

071017 湖 0.022 0.028 0.022

080121 南 0.021 0.036 0.026

080421 汉 0.018 0.040 0.023

080712 0.022 0.041 0.025

081036 制 0.027 0.038 0.027

090225/731 药 0.027 0.044 0.030

090628/477 股 0.027 0.056 0.043

091026/470 份 0.034 0.054 0.035

091243/448 有 0.040 0.049 0.037

090424 限 0.024 0.044 0.021

090425 公 0.025 0.046 0.033

090426 司 0.024 0.046 0.028

090435 0.027 0.046 0.042

090436 0.022 0.039 0.035

20060311 0.020 0.040 0.023

20060601 0.015 0.042 0.036 湖南

20060905 0.019 0.046 0.037 中达

20061203 0.022 0.042 0.029 骜马

20070308 0.022 0.039 0.026 制药

20070624 0.028 0.043 0.019 有限

20070918 0.021 0.021 0.028 责任

20071201 0.019 0.042 0.022 公司

20080306 0.026 0.043 0.028

\ 0.024±0.005 0.041±0.009 0.029±0.007

Claims

权利要求

1、一种四磨汤制剂的检测方法，其特征在于其包括如下歩骤：将四磨汤制剂的供试品进行高效液相色谱法检测，即可；所述的高效液相色谱法的色谱条件为下述中的任一种：

方式一：色谱柱为强阳离子型交换色谱柱，流动相为体积比为 40〜80： 60〜20、更佳的为 45〜80： 55〜20、最佳的为 65: 35的甲醇和体积百分比 0.2%、 H 3.8的磷酸水溶液，检测波长为 215 nm;

方式二：色谱柱为十八垸基硅垸键合硅胶柱，流动相为体积比 50: 50 的甲醇和质量百分比 0.1%SDS水溶液，流速如表 1所示，检测波长为 230nm;

表 1

所述的改变较佳的为线性梯度改变。

2、如权利要求 1所述的方法，其特征在于：所述的四磨汤制剂主要由下述重量份数的原药材制得： 100份木香、 50〜150份枳壳、 50〜150份乌药和 50〜150份槟榔。

3、如权利要求 2所述的方法，其特征在于：所述的四磨汤制剂为由下述方法制得的四磨汤制剂：将原药材经水蒸气蒸馏法提取的挥发性成分，与药渣经水提醇沉提取的水提物，按现有常规方法制成口服液、丸剂（如蜜丸、浓缩丸或滴丸）、乳化剂、胶囊（如软胶囊）、片剂（如咀嚼片或泡腾片）、干混悬剂、口服凝胶剂、颗粒剂或栓剂。

4、如权利要求 1所述的方法，其特征在于：所述的四磨汤制剂的供试品按下述方法制得：当所述的四磨汤制剂为四磨汤口服液时，直接将四磨汤口服液用微孔滤膜过滤，滤液不经稀释，或经稀释至原体积 100倍以下，即为供试品；

当所述的四磨汤制剂为除四磨汤口服液外的其他剂型时，将溶有四磨汤制剂的溶液经超声处理，冷却，之后用微孔滤膜过滤，滤液即为供试品。

5、如权利要求 1所述的方法，其特征在于：所述的高效液相色谱法检测的进样量为 2〜50μΙ^。

6、如权利要求 1所述的方法，其特征在于：所述的强阳离子型交换色谱柱为磺酸基阳离子交换柱，较佳的为 Agilent SCX柱；所述的十八垸基硅垸键合硅胶柱为 Agilent ZORBAX SB-C₁₈柱。

7、如权利要求 1或 6所述的方法，其特征在于：所述的强阳离子型交换色谱柱或十八垸基硅垸键合硅胶柱的径长规格为 4.6mm X 250mm 或 4.6mm X 150mm。

8、如权利要求 7所述的方法，其特征在于：所述的强阳离子型交换色谱柱或十八垸基硅垸键合硅胶柱的填料粒径为 5 μηι。

9、如权利要求 1所述的方法，其特征在于：所述的方式一或方式二中，柱温为 15〜50°C，较佳的为 30〜40°C，最佳的为 35°C。

10、如权利要求 1所述的方法，其特征在于：所述的方式一中，流速为 0.5〜1.5 mL / min，较佳的为 0.8〜1.2 mL / min，最佳的为 l mL / min。