이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 제조예, 실시예 및 실험예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예 및 실험예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 하기 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.
먼저 화학식 1의 화합물을 합성하기 위해 A part와 B part의 합성을 아래 제조예에 나타내었다.
<제조예 1>
화합물 A-I
의 합성
1-1) 화합물 I의 합성:
-78℃에서 메틸렌클로라이드(120 mL)가 들어있는 반응용기에 옥살릴클로라이드(1.3 mL, 15 mmol)을 넣고 메틸렌클로라이드(20 mL)에 다이메틸설폭사이드(2.45 mL, 30 mmol)가 들어있는 용액을 천천히 첨가하였다. -78℃에서 10분 교반 후 메틸렌클로라이드(20 mL)에 N-Boc에탄올아민(2 g, 12.4 mmol)이 들어있는 용액을 천천히 첨가하였다. 트리에틸아민(8.64 mL, 62 mmol)을 첨가 후 -78℃에서 30분 교반하고 반응 용기을 상온으로 옮긴 후 30분 교반하였다. 위 반응용액을 물 (100 mL)와 소금물 (100 mL)로 씻어주고 유기층을 무수황산나트륨으로 탈수시켜 감압농축하고 관크로마토그래피(n-hex:EA = 3:1 ~ 1:1)을 시행하여 화합물 I 270 mg(14%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 7.83(s, 1H), 7.49(s, 1H), 6.88(d, J=5.4Hz, 1H), 6.36(br, 2H), 4.81(br, 1H), 3.13(m, 4H), 1.39(s, 9H)
1-2) 화합물 A-I의 합성:
4,5-다이아미노피리미딘 하이드로클로라이드(2.0 g, 18.1 mmol)과 화합물 I (3.0 g, 18.8 mmol)을 메탄올 (60 mL)에 녹이고 아세트산(1.0 g, 18.1 mmol)을 첨가한 후 상온에서 12시간 교반하였다. 위 결과물에 소듐시아노보로하이드라이드(2.2 g, 36.3 mmol)을 첨가한 후 상온에서 3시간 교반하였다. 반응용액을 감압농축하고 관크로마토그래피(MC:MeOH = 50:1 ~ 20:1)을 시행하여 표제화합물 1.09 g (24%)을 수득하였다.
<제조예 2>
화합물 A-II
의 합성
2-1) 화합물 II의 합성:
코직 엑시드(50 g, 0.35 mol)를 N,N-다이메틸포름아마이드(900 mL)에 녹이고 포타슘카보네이트(58.4 g, 0.42 mol)와 4-메톡시벤질 클로라이드(61.7 g, 0.39 mol)을 차례로 첨가하였다. 80℃에서 3시간 교반하였다. 반응용액을 감압농축하고, 반응욕액을 물(800 mL)에 천천히 첨가하여 고체를 얻었다. 고체를 에테르:헥세인=1:1(800 mL) 혼합용매로 씻어주어 화합물 II 90 g(98%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, chloroform-d1) δ 7.51(s, 1H), 7.32(d, J=8.4Hz, 2H), 6.90(d, J=8.0Hz, 2H), 6.45(s, 1H), 5.00(s, 2H), 4.45(s, 2H), 3.81(s, 3H)
2-2) 화합물 III의 합성:
화합물 II (50 g, 0.19 mol)과 하이드록실아민 하이드로클로라이드(66.2 g, 0.95 mol)을 피리딘(620 mL)에 녹이고 70℃~75℃에서 2시간 교반하였다. 반응용액을 감압농축하고 물(350 mL)에 녹이고 0℃에서 교반하면서 6N 염산(pH 1~2)을 첨가하여 고체를 얻었다. 고체를 에테르(300 mL)로 씻어주어 화합물 III 15g(30%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 7.96(s, 1H), 7.38(d, J=8.0Hz, 2H), 6.96(d, J=8.0Hz, 2H0, 6.86(s, 1H), 5.54(br, 1H), 5.03(s, 2H), 4.45(s, 2H), 3.74(s, 3H)
2-3) 화합물IV의 합성:
화합물 III (31 g, 0.11 mol)을 N,N-다이메틸포름아마이드(350 mL)에 녹이고 포타슘카보네이트(31 g, 0.22 mol)와 4-메톡시벤질 클로라이드(19.3 g, 0.12mol)을 차례로 첨가하였다. 상온에서 15시간 교반하였다. 반응용액을 감압농축하고 에틸아세테이트(400 mL)로 희석하였다. 결과물을 감압여과하고 여액을 물(300 mL), 소금물(300 mL)로 씻어주고 유기층을 무수황산나트륨으로 탈수시켜 감압농축하였다. 결과물을 에테르:헥세인=1:1(400mL) 혼합용매로 씻어주어 화합물 IV 42 g(95%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, chloroform-d1) δ 7.27~7.21(m, 5H), 6.99(s, 1H), 6.90(d, J= 8.0Hz, 2H), 6.86(d, J=8.0Hz, 2H), 6.49(s, 1H), 5.03(s, 2H), 4.93(s, 2H), 4.50(s, 2H), 3.82(s, 3H), 3.78(s, 3H)
2-4) 화합물 V의 합성:
화합물IV (20 g, 50.3 mmol)을 메틸렌클로라이드(580 mL)에 녹이고 증류수(50 mL)을 첨가하고 0℃에서 교반하였다. 1M 소듐브로마이드(30 mL), 1M 테트라부틸암모니움브로마이드(55 mL), TEMPO(2.36 g, 15.1 mmol), 소듐하이드로카보네이트 포화수용액(110 mL), 소듐하이포아염소산용액(120 mL, 2.01 mol)을 순차적으로 첨가하였다. 0℃에서 상온으로 1시간 30분 교반한 후 1N 염산(pH6~7)을 첨가하고 t-부탄올(380 mL)과 테트라하이드로퓨란에 녹아있는 2M 2-메틸-2-부텐(607 mL)을 첨가하였다. 소듐클로라이트(45.5 g, 503 mmol)과 소듐다이하이드로젠포스페이트 모노하이드레이트(52 g, 377 mmol)을 증류수(170 mL)에 녹이고, 위 반응용액에 첨가하였다. 상온에서 1시간 교반하였다. 반응용액을 분액깔때기에 넣어 유기층과 수용액층을 분리하고 유기층을 소듐다이하이드로젠포스페이트 포화수용액(800 mL)로 씻어주고 유기층을 무수황산나트륨으로 탈수 시켜 감압농축하였다. 결과물을 관크로마토그래피(MC : MeOH = 50 : 1 ~ 8 : 1)를 시행하여 화합물 V 40 g(61%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, chloroform-d1) δ 7.35(d,J=8.4Hz, 2H), 7.25(d, 8.4Hz, 2H), 6.86(m, 4H), 6.72(s, 1H), 6.38(s, 1H), 6.49(s, 1H), 5.30(s, 2H), 4.85(s, 2H), 3.80(s, 3H), 3.79(s, 3H), 3.28(m, 8H), 1.65(m, 8H), 1.42(m, 8H), 0.99(t, J=6.6Hz, 12H)
2-5) 화합물 A-II의 합성:
화합물 VI(1.89 g, 10 mmol)을 N,N-다이메틸포름아마이드(50 mL)에 녹이고 다이아이소프로필에틸아민 (7.2 mL, 40 mmol), 화합물V(6.52 g, 10 mmol)을 차례로 첨가한 후 벤조트리아졸-1-일-옥시트리피롤리디노포스포노늄 헥사플로로포스페이트(6.24 g, 12 mmol)을 첨가하고 상온에서 30분 교반하였다. 에틸아세테이트(300 mL)로 희석한 후 물(200 mL)과 소금물(150 mL)로 씻어주었다. 무수황산나트륨으로 탈수시켜 감압농축하고 관크로마토그래피 (MC : MeOH = 40 : 1 ~ 10 : 1)를 시행하여 화합물 A-II 2.2 g(40%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, CD3OD) δ 7.92(s, 1H), 7.45(d, J=8.4Hz, 2H), 7.35(s, 1H), 7.02(d, J=12.6Hz, 2H), 6.95(d, J=12.6Hz, 2H), 6.66(d, J=13.2Hz, 2H), 6.41(s, 1H), 5.33(s, 2H), 4.77(s, 2H), 3.79(s, 3H), 3.73(s, 3H), 3.56(t, J=9.0Hz, 2H), 3.10(t, J=9.0Hz, 2H)
<제조예 3>
화합물 A-III
의 제조
3-1) 화합물VII의 제조:
화합물 II (1.0 g, 3.81 mmol)과 에탄올에 녹아있는 33% 메틸아민(19 mL)을 첨가한 후 상온에서 20시간 교반하였다. 흰색 고체를 감압여과하고 에탄올(50 mL)과 에테르(20 mL)로 씻어주어 화합물 VII 778 mg(75%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 7.53(s, 1H), 7.34(d, J=9.0Hz, 2H), 6.94(d, J=9.0Hz, 2H), 6.21(s, 1H), 5.55(brs, 1H), 4.91(s, 2H), 4.36(s, 2H), 3.75(s, 3H), 3.58(s, 3H)
3-2) 화합물 VIII의 제조:
화합물 VII (778 mg, 2.83 mmol)을 다이메틸설폭사이드(7 mL)에 녹이고 트리에틸아민(1.3 g, 12.7 mmol), 메틸렌클로라이드(7 mL), 설퍼 트리옥사이드 콤플렉스(1.35 g, 8.48 mmol)를 첨가하였다. 상온에서 2시간 교반하였다. 반응용액을 클로로포름(150 mL)으로 희석한 후 물(30 mL)로 씻어주었다. 무수황산나트륨으로 탈수시켜 감압농축하고 관크로마토그래피(MC : MeOH = 30 : 1 ~ 10 : 1)를 시행하여 화합물 VIII 718 mg(93%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, chloroform-d1) δ 9.61(s, 1H), 7.34(d, J=8.4Hz, 2H), 6.99(s, 1H), 6.97(s, 1H), 6.88(d, J=8.4Hz, 2H), 5.18(s, 2H), 3.86(s, 3H), 3.80(s, 3H)
3-3) 화합물 IX의 제조:
화합물 VIII(718 mg, 2.63 mmol)을 t-부탄올(8.5mL)와 테트라하이드로퓨란(8.5 mL) 혼합용매에 녹이고 테트라하이드로퓨란에 녹아있는 2M 2-메틸-2-부텐(3.3 mL)을 첨가한 후 상온에서 교반하였다. 위 반응용액에 소듐클로라이트(1.9 g, 21.0 mmol)과 소듐다이하이드로젠포스페이트 모노하이드레이트(2.1 g, 15.2 mmol)을 물(8.5mL)에 녹이고, 위 반응용액에 첨가하였다. 상온에서 1시간 교반하였다. 반응용액의 흰색고체를 감압여과하고 물(4 mL)에 녹이고 1N 염산(pH1~2)을 첨가하여 흰색고체를 생성시켜 감압 여과하였다. 에틸아세테이트(50 mL)와 에테르(50 mL)로 씻어주어 화합물IX 510 mg(67%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 7.79(s, 1H), 7.37(d, J=12.6Hz, 2H), 6.96(d, J=12.6Hz, 2H), 6.71(s, 1H), 4.97(s, 2H), 3.83(s, 3H), 3.76(s, 3H)
3-4) 화합물 A-III의 제조:
화합물 VI(34.5 mg, 0.18 mmol)와 화합물 IX(52.6 mg, 0.18 mmol)을 사용하여 제조예 2-5와 동일한 방법으로 화합물A-III 19.4 mg(25%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, CD3OD) δ 7.96(s, 1H), 7.64(s, 1H), 7.59(s, 1H), 7.38(d, J=8.4Hz, 2H), 6.91(d, J=8.4Hz, 2H), 6.56(s, 1H), 5.02(s, 2H), 3.79(s, 3H), 3.77(s, 3H), 3.61(t, J=6.0Hz, 3.39(t, J=6.6Hz, 2H)
<제조예 4>
화합물 XI
의 합성
4-1) 화합물 X의 제조:
2-아미노에탄올(2.0 g, 32.7 mmol)을 메틸렌클로라이드(110 mL)에 녹이고 벤질옥시카보닐클로라이드(5.07 g, 29.8 mmol)과 트리에틸아민(4.44 g, 44.6 mmol)을 순차적으로 첨가한 후 상온에서 1시간 교반하였다. 반응용액에 물(40 mL) 첨가하여 씻어주었다. 무수황산나트륨으로 탈수시켜 감압농축하여 화합물 X 4.05 g(70%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, chloroform-d1) δ 7.40(m, 5H), 5.19(brs, 1H), 5.11(s, 2H), 3.73(t, J=4.2Hz, 2H), 3.37(q, J=5.4Hz, 2H), 2.23(brs, 1H)
4-2) 화합물 XI의 제조:
화합물 X(3 g, 15.3 mmol)을 이용하여 제조예 3-2와 동일한 방법으로 화합물 XI 2.72 g(91%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, chloroform-d1) δ 9.66(s, 1H), 7.39(m, 5H), 5.44(brs, 1H), 5.13(s, 2H), 4.16(d, J=4.8Hz, 2H)
<제조예 5>
화합물 A-IV
의 제조
5-1) 화합물 XII의 제조:
2,4-다이클로로-5-나이트로피리미딘 (3 g, 15.4 mmol)을 테트라하이드로퓨란 (50 mL)에 녹이고 아이소프로필에틸아민(2.0 g, 15.4 mmol)을 첨가하였다. -78℃에서 N-Boc-에틸렌다이아민(2.48 g, 15.4 mmol)을 테트라하이드로퓨란(20 mL)에 녹여서 천천히 첨가하고 50분 교반 한 후 상온에서 10분 교반하였다. 반응용액을 감압농축하고 관크로마토그래피(EA : Hex = 1:4 ~ 1:3)를 시행하여 화합물 XII 3.16 g(64%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, CDCl3) δ 9.05(s, 1H), 8.80(br, 1H), 4.84(br, 1H), 3.78(q, J=6Hz, 2H), 3.48(q, J=6Hz, 2H), 1.43(s, 9H)
5-2) 화합물 XIII의 제조:
화합물 XII(3.1 g, 9.75 mmol)을 사용하여 메탄올(50 ml)에 녹이고 10% 팔라듐차콜(1 g, 0.98 mmol)을 첨가한 후 수소 가스를 퍼지하고 상온에서 40분 교반하였다. 반응용액을 셀라이트 여과한 후 감압 농축하여 화합물 XIII 2.8g (99%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 8.62(br, 1H), 8.33(s, 1H), 7.48(s, 1H), 6.99 (brs, 1H), 5.88(brs, 2H), 3.45(br, 2H), 3.19(br, 2H), 1.35(s, 9H)
5-3) 화합물 XIV의 제조:
화합물 XIII(1.02 g, 3.52 mmol)에 1,2-다이클로로에테인(34 mL), 다이아이소프로필에틸아민(455 mg, 3.52 mmol), 화합물 XI(796 mg, 4.12 mmol), 소듐트리아세톡시보로하이드라이드(1.12 g, 5.28 mmol)을 순차적으로 첨가하였다. 상온에서 3시간 교반하였다. 반응용액에 메틸렌클로라이드(180 mL)로 희석한 후 물(100 mL), 소금물(100 mL)로 순차적으로 씻어주었다. 무수황산나트륨으로 탈수시켜 감압농축하고 관크로마토그래피(MC:MeOH = 60:1 ~ 20:1)를 시행하여 화합물XIV 218 mg(14%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, CDCl3) δ 8.22(s, 1H), 7.60(s, 1H), 7.34~7.30(m, 5H), 5.77(br, 1H), 5.46(br, 1H), 5.18(br, 1H), 5.11(s, 2H), 3.58(br, 2H), 3.54(br, 2H), 3.38(br, 2H), 3.20(br, 2H), 1.39(s, 9H)
5-4) 화합물 XV의 제조:
화합물XIV(218 mg, 0.51 mmol)을 사용하여 제조예 5-2와 동일한 방법으로 화합물XV 150 mg(100%)을 수득하였다. 정제없이 다음 반응에 이용하였다.
5-5) 화합물 A-IV의 제조:
화합물XV(150 mg, 0.51 mmol)과 화합물V (330 mg, 0.51 mmol)를 사용하여 제조예 2-5와 동일한 방법으로 화합물A-IV 198 mg (57%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, CDCl3) δ 8.22(s, 1H), 8.44(br, 1H), 8.09(s, 1H), 7.55(d, J=7.8Hz, 2H), 7.29(s, 1H), 7.03(s, 2H), 6.94(d, J=8.4Hz, 2H), 6.67(d, J=7.2Hz, 2H), 6.44(m, 3H), 5.49(br, 2H), 4.48(s, 2H), 4.32(br, 1H), 3.79(s, 3H), 3.75(s, 3H), 3.60(br, 2H), 3.42(br, 2H), 3.09(br, 2H), 2.79(br, 2H), 1.39(9H)
<제조예 6>
화합물 A-V
의 제조
6-1) 화합물 XVI의 제조:
화합물 XIII(90 mg, 0.35 mmol)에 1,4-다이옥세인에 녹아있는 4M 염산을 첨가한 후 상온에서 1시간 교반하였다. 반응용액을 감압증류하고 건조하여 화합물XVI 70mg(100%)을 수득하였다. 정제없이 다음 반응을 진행하였다.
6-2) 화합물 A-V의 제조:
화합물XVI (60 mg, 0.31 mmol)과 화합물 V (206 mg, 0.31 mmol)를 사용하여 제조예 2-5과 동일한 방법으로 화합물A-V 103 mg(59%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, CDCl3) δ 8.55(br, 1H), 8.05(s, 1H), 7.48(s, 1H), 7.40(d, J=8.4Hz, 2H), 7.11(s, 1H), 6.92(m, 4H), 6.69(br, 1H), 6.60(d, J=7.8Hz, 2H), 6.33(s, 1H), 5.35(s, 2H), 4.48(s, 2H), 3.80(s, 3H), 3.73(s, 3H), 3.44(br, 2H), 3.34(br, 2H)
<제조예 7>
화합물 A-VI
의 제조
7-1) 화합물 XVII의 제조:
터트-부틸 4-하이드록시부틸카바메이트(1.5 g, 7.93 mmol)을 메틸렌클로라이드(36 mL)에 녹이고 이미다졸(1.35 g, 19.8 mmol)과 터트-부틸 다이메틸실릴클로라이드(1.43 g, 9.51 mmol)를 0℃에서 순차적으로 첨가하였다. 반응용액을 에테르(250 mL)로 희석한 후 물(40 mL x 2), 소금물(40 mL x 2)로 씻어주었다. 무수황산나트륨으로 탈수시키고 감압 농축하여 화합물XVII 2.4 g(100%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, CDCl3) δ 4.68(s, 1H), 3.63(m, 2H), 3.13(br, 2H), 1.54(m, 4H), 1.43(s, 9H), 0.88(s, 9H), 0.04(s, 6H)
7-2) 화합물 XVIII의 제조:
화합물XVII(2.5 g, 8.23 mmol)을 테트라하이드로퓨란(50 mL)으로 녹이고 헥세인에 녹아있는 1.6 M n-부틸리튬을 0℃에서 천천히 첨가하였다. 다이-터트-부틸 다이카보네이트(2.15 g, 9.88 mmol)를 첨가한 후 상온에서 2시간 교반하였다. 반응용액을 에테르(300 mL)로 희석한 후 물(30 mL), 소금물(30 mL)로 씻어주었다. 무수황산나트륨으로 탈수시켜 감압농축하였다. 위 결과물을 테트라하이드로퓨란(18 mL)에 녹이고 테트라하이드로퓨란에 녹아있는 1.0 M테트라부틸암모니움브로마이드(14.8 mL, 14.8 mmol)을 천천히 첨가하였다. 상온에서 4시간 30분 교반하였다. 반응용액을 에테르(150 mL)로 희석한 후 물(30 mL x 2), 소금물(40 mL) 씻어주었다. 무수황산나트륨으로 탈수시켜 감압농축하고 관크로마토그래피(EA : Hex = 1 : 4)를 시행하여 화합물 XVIII 1.33 g(56%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, CDCl3) δ 3.68(m, 2H), 3.61(t, J=7.2Hz, 2H), 1.68(m, 2H), 1.59(m, 2H), 1.50(s, 18H)
7-3) 화합물 XIX의 제조:
화합물 XVIII(330 mg, 1.14 mmol)을 다이메틸설폭사이드(2.5 mL)에 녹이고 다이아이소프로필에틸아민(300 mg, 2.30 mmol), 메틸렌클로라이드(2.5 mL), 설퍼 트리옥사이드 콤플렉스(370 mg, 2.28 mmol)를 -20℃에서 첨가한 후 상온에서 30분 교반하였다. 반응용액을 에틸아세테이트(150 mL)로 희석한 후 물(40 mL), 소금물(40 mL)로 씻어주었다. 무수황산나트륨으로 탈수시키고 감압농축하여 화합물XIX 333 mg(100%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, CDCl3) δ 9.78(s, 1H), 3.63(t, J=7.2Hz, 2H), 2.48(t, J=7.2Hz, 2H), 1.91(m, 2H), 1.50(s, 18H)
7-4) 화합물 XX의 제조:
4,5-다이아미노피리미딘(182 mg, 1.65 mmol)와 화합물 XIX(948 mg, 3.30 mmol)을 이용하여 제조예 5-3과 동일한 방법으로 화합물 XX 220 mg(35%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, CDCl3) δ 8.09(s, 1H), 7.63(s, 1H), 5.84(br, 2H), 3.65(t, J=6.6Hz, 2H), 3.15(t, J=6Hz, 2H), 1.74(m, 2H), 1.68(m, 2H), 1.50(s, 18H)
7-5) 화합물 XXI의 제조:
화합물 XX(220 mg, 0.58 mmol)를 사용하여 제조예 6-1과 동일한 방법으로 화합물 XXI 111 mg(89%)을 수득하였다.
7-6) 화합물 A-VI의 제조:
화합물 XXI(110 mg, 0.50 mmol)과 화합물 V(330 mg, 0.50 mmol)를 사용하여 제조예 2-5와 동일한 방법으로 화합물 A-VI 153 mg(53%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, CDCl3) δ 8.36(br, 1H), 7.98(s, 1H), 7.44(d, J=12.6Hz, 2H), 7.33(s, 1H), 7.11(br, 1H), 6.94(m, 4H), 6.65(d, J=12.6Hz, 2H), 6.25(s,1H), 5.85(br, 2H), 5.34(s, 2H), 4.49(s, 2H), 3.77(s, 3H), 3.75(s, 3H), 3.26(br, 2H), 2.78(br, 2H), 1.63(br, 2H), 1.44(br, 2H)
<제조예 8>
화합물 A-VII
의 제조
8-1) 화합물 XXII의 제조:
화합물 IV(1.0 g, 2.51 mmol)을 아세토나이트릴(13 mL)에 녹이고 50℃에서 망가니즈(IV)옥사이드(5.5 g, 63.5 mmol)를 첨가하여 7시간 교반하였다. 반응용액을 셀라이트 여과 및 감압농축한 후 관크로마토그래피(MC : MeOH = 40 : 1)를 시행하여 혼합물 XXII로 0.73 g(24%)을 수득하였다.
8-2) 화합물 XXIII의 제조:
화합물 VI(60 mg, 0.39 mmol), 화합물XXII(232 mg, 0.59 mmol)을 메탄올 (13 ml)에 녹이고 아세트산 10방울을 첨가한 후 상온에서 12시간 교반하였다. 위 결과물에 소듐시아노보로하이드라이드(370 mg, 587 mmol)을 첨가한 후 상온에서 3시간 교반하였다. 반응용액을 감압농축하고 관크로마토그래피(MC : MeOH = 50 : 1 ~ 20 : 1)을 시행하여 화합물XXIII 40 mg(20%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, CD3OD) δ 8.05(s, 1H), 7.50(s, 1H), 7.20(d, J=8.4Hz, 2H), 7.16(d, J=8.4Hz, 2H), 7.05(s, 1H), 6.88(d, J=8.4Hz, 2H), 6.81(d, J=8.4Hz, 2H), 6.42(s, 1H), 5.05(s, 2H), 4.76(s, 2H), 3.80(s, 3H), 3.76(s, 3H), 3.61(s, 2H), 3.12(br, 2H), 2.90(br, 2H)
8-3) 화합물 A-VII의 제조:
화합물 XXIII(40 mg, 0.07 mmol)을 테트라하이드로퓨란(1 mL)와 메탄올(0.5 mL)에 녹이고 다이-터트-부틸 다이카보네이트(18 mg, 0.08 mmol)를 첨가한 후 1시간 30분 환류 교반하였다. 반응용액을 감압농축하고 관크로마토그래피(MC : MeOH = 50 : 1 ~ 8 : 1)를 시행하여 화합물 A-VII 16 mg(34%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, CDCl3) δ 8.08(s, 1H), 7.49~7.43(br, 1H), 7.22(Br, 2H), 7.14(br, 2H), 7.09~7.02(br, 1H), 6.91~6.87(br, 2H), 6.79(br, 2H), 6.12~6.02(s, 1H), 5.03(s, 1H), 4.97(s, 1H), 4.87(s, 1H), 4.72(s, 1H), 4.45(s, 1H), 4.22(s, 1H), 3.79(s, 3H), 3.77(s, 3H), 3.36(br, 2H), 3.1~3.02(2H), 1.44~1.35(br, 9H)
<제조예 9>
화합물 A-VIII
의 제조
9-1) 화합물 A-VIII의 제조:
화합물 II(2 g, 7.63 mmol)을 아세톤(100 mL)에 열을 가하여 녹이고 존스 시약(황산 1.88 mL, 증류수 6 mL, CrO3 2.14 g)을 천천히 0℃에서 첨가하였다. 0℃에서 1시간 교반 후 상온에서 1시간 추가 교반하였다. 메탄올(20 mL)을 첨가 후 상온에서 5분 교반하였다. 생성된 고체를 감압여과하여 제거하고 여액을 감압농축하였다. 생성된 고체를 메탄올로 씻어주어 화합물 XXV 560 mg(27%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 8.34(s, 1H), 7.37(d, J=11.4Hz, 2H), 6.97(d, J=11.4Hz , 2H), 6.92(s, 1H), 4.90(s, 2H), 3.76(s, 3H)
9-2) 화합물 XXVI의 제조:
화합물 XXV(550 mg, 2 mmol)을 암모니아수(15 mL)에 넣고 2시간 동안 환류교반하였다. 추가로 암모니아수(7 mL)을 더 넣어주고 1시간 환류교반 후 상온으로 냉각 후 감압농축하여 과량의 암모니아을 제거하였다. 5N 염산용액으로 산성화시키고 생성된 고체를 감압여과하여 화합물 XXVI 500 mg(91%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 7.88(br, 1H), 7.38(d, J=8.4Hz, 2H), 7.19(br, 1H), 6.91(d, J=7.8Hz, 2H), 5.15(s, 2H), 3.72(s, 3H)
9-3) 화합물 XXVII의 제조:
화합물 XXVI(200 mg, 0.73 mmol)을 N,N-다이메틸포름아미드(9 mL)에 녹이고 포타슘카보네이트(1 g, 7.3 mmol), 4-메톡시벤질 클로라이드(570 mg, 3.64 mmol)을 차례로 첨가하였다. 60℃에서 18시간 교반 후 에틸아세테이트 (60 mL)로 희석하였다. 결과물을 감압여과하고 여액을 물(30 mL x 3), 소금물(30 mL)로 씻어주고 유기층을 무수황산나트륨으로 탈수시켜 감압 농축하였다. 결과물을 관크로마토그래피(SiO2, n-hex : EA = 3 : 1 ~ 1 : 1)을 이용하여 화합물 XXVII 220 mg(59%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, chloroform-d1) δ 8.22(s, 1H), 7.70(s, 1H), 7.39~7.23(m, 6H), 6.88~6.84(m, 6H), 5.31(s, 2H), 5.15(s, 2H), 5.12(s, 2H), 3.79(s, 3H), 3.78(s, 3H), 3.77(s, 3H)
9-4) 화합물 XXVIII의 제조:
화합물 XXVII(220 mg, 427 μmol)을 테트라하이드로퓨란(11 mL)에 녹이고 2N 포타슘하이드록사이드 수용액 (4.4 mL)을 첨가 후 1.5시간동안 환류교반하였다. 상온으로 냉각 후 감압농축하여 유기용매을 제거 하고 1N 염산 수용액으로 산성화하였다. 생성된 고체을 감압여과하여 화합물 XXVIII 160 mg(95%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 8.31(s, 1H), 7.74(s, 1H), 7.35(m, 4H), 6.93(m, 4H), 5.21(s, 2H), 5.18(s, 2H), 3.71(s, 3H), 3.70(s, 3H)
9-5) 화합물 A-VIII의 제조:
화합물 VI (86 mg, 455 μmol)과 화합물 XXVIII (150 mg, 380 μmol)을 이용하여 제조예 2-5과 동일한 방법으로 화합물 A-VIII 110 mg(55%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 8.79(t, J=5.4Hz, 1H), 8.25(s, 1H), 7.84(s, 1H), 7,73(s, 1H), 7.56(s, 1H), 7.39(m, 4H), 6.97(m, 4H), 6.40(br, 2H), 5.22(s, 2H), 5.20(s, 2H), 4.97(t, J=5.4Hz, 1H), 3.76(s, 3H), 3.75(s, 3H), 3.51(q, J=6.6Hz, 2H), 3.21(q, J=6Hz, 2H)
<제조예 10>
화합물 A-IX
의 제조
4,5-다이아미노피리미딘 하이드로클로라이드(100 mg, 0.91 mmol)과 4-다이메틸아미노피리딘(22 mg, 0.18 mmol)을 메틸렌클로라이드(3 mL)에 녹이고 3-(터트-부톡시카보닐아미노)프로판오닉 엑시드를 첨가하였다. 0℃에서 다이아이소프로필 카보다이이미드(138 mg, 1.1 mmol)를 천천히 첨가한 후 상온에서 교반하였다. 반응 용액을 감압농축하고 관크로마토그래피(MC : MeOH = 40 : 1 ~ 10 : 1)를 시행하여 화합물 A-IX 133 mg(52%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, chloroform-d1) δ 8.44(s, 1H), 8.34(s, 1H), 8.17(br, 1H), 5.67(br, 1H), 5.16(br, 1H), 3.56(q, J=9.0Hz, 2H), 2.69(t, J=9.0Hz, 2H), 1.45(s, 9H)
<제조예 11>
화합물 A-X
의 제조
11-1) 화합물 XXIX의 제조:
화합물 A-IX(146 mg, 0.52 mmol)를 사용하여 제조예 6-1과 동일한 방법으로 화합물 XXIX 112 mg (100%)을 수득하였다.
11-2) 화합물 A-X의 제조:
화합물XXIX(63 mg, 0.29 mmol)과 화합물 V(189 mg, 0.29 mmol)를 사용하여 제조예 2-5와 동일한 방법으로 화합물 A-X 102 mg(61%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, CDCl3) δ 8.29(s, 1H), 8.19(s, 1H), 7.27(br, 2H), 7.09(br, 2H), 6.97(s, 1H), 6.87(d, J=8.4Hz, 2H), 6.77(d, J=7.8Hz, 2H), 6.38(s, 1H), 5.20(s, 2H), 4.51(s, 2H), 3.77(s, 3H), 3.76(s, 3H), 3.53(br, 2H), 2.47(br, 2H)
<제조예 12>
화합물 A-XI
의 제조
화합물XXIX (66.3 mg, 0.30 mmol)와 화합물XXVIII (120 mg, 0.30 mmol)을 사용하여 제조예 2-5와 동일한 방법으로 화합물 A-XI 147 mg(86%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, CDCl3) δ 8.36(s, 1H), 8.30(s, 1H), 8.06(s, 1H), 7.73(s, 1H), 7.37(d, J=8.4Hz, 2H), 7.31(d, J=8.4Hz, 2H), 6.91(d, J=8.4Hz, 2H), 6.87(d, J=8.4Hz, 2H), 5.16(s, 2H), 5.13(s, 2H), 3.80(s, 3H), 3.79(s, 3H), 3.75(t, J=5.4Hz, 2H), 2.72(t, J=6Hz, 2H)
<제조예 13>
화합물 A-XII
의 제조
4,5-다이아미노피리미딘(200 mg, 1.81 mmol)과 화합물 V (1.18g, 1.81 mmol)를 사용하여 제조예 2-5와 동일한 방법으로 화합물 A-XII 146 mg(16%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 8.28(s, 1H), 8.19(s, 1H), 8.06(s, 1H), 7.38(m, 4H), 6.98(m, 4H), 5.28(s, 2H), 4.95(s, 2H), 3.76(s, 3H), 3.75(s, 3H)
<제조예 14>
화합물 A-XIII
의 제조
14-1) 화합물 XXX의 제조:
터트-부틸 2-하이드록시에틸(메틸)카바메이트(17 g, 97 mmol)을 이용하여 제조예 3-2와 동일한 방법으로 화합물 XXX 12 g(71%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, chloroform-d1) δ 9.61(s, 1H), 3.92(s, 2H), 2.92(s, 3H), 1.46(s, 9H)
14-2) 화합물 XXXI의 제조:
4,5-다이아미노피리미딘(200 mg, 1.82 mmol)과 화합물 XXX (536 mg, 3.09 mmol)을 이용하여 제조예 8-2와 동일한 방법으로 화합물 XXXI 180mg(38%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, chloroform-d1) δ 8.09(s, 1H), 7.53(s, 1H), 6.74(br, 2H), 3.48~3.32(m,4H), 2.97(s, 3H), 1.46(s, 9H)
14-3) 화합물 XXXII의 제조:
화합물XXXI (180 mg, 0.67 mmol)에 제조예 6-1과 동일한 방법으로 화합물XXXII을 수득하였다. 정제없이 다음 반응을 진행하였다.
14-4) 화합물 A-XIII의 제조:
화합물 XXXII (70 mg, 0.34 mmol)과 3-하이드록시-4-(4-메톡시벤질옥시)벤조익 엑시드(103 mg, 0.38 mmol)을 이용하여 제조예 2-5와 동일한 방법으로 화합물 A-XIII 30 mg(22%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, chloroform-d1) δ 8.11(s, 1H), 7.64(s, 1H), 7.37(d, J=8.4Hz, 2H), 7.03(br, 1H), 6.93(d, J=8.4Hz, 2H), 6.81(br, 1H), 5.21(m, 3H), 3.80(s, 3H), 3.42(br, 5H), 3.07(br, 2H)
<제조예 15>
화합물 A-XIV
의 제조
화합물 XXIX(35 mg, 0.16 mmol)과 3-하이드록시-4-(4-메톡시벤질옥시)벤조익 엑시드(49 mg, 0.18 mmol)을 사용하여 제조예 2-5와 동일한 방법으로 화합물 A-XIV 35 mg(49%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, DMSO-d6+D2O) δ 8.22(s, 1H), 8.16(s, 1H), 7.41(d, J=8.4Hz, 2H), 7.29(d, J=1.8Hz, 1H), 7.26(dd, J=1.8Hz, 9.4Hz, 1H), 7.04(d, J=8.4Hz, 2H), 6.95(d, J=8.4Hz, 2H), 5.09(s, 2H), 3.76(s, 3H), 3.54(t, J=7.2Hz, 2H), 2.61(t, J=7.2Hz, 2H)
<제조예 16>
화합물 A-XV
의 제조
화합물XXXII(200 mg, 0.98 mmol)와 3,4-비스(4-메톡시벤질옥시)벤즈알데하이드 (408 mg, 1.08 mmol)를 사용하여 제조예 8-2와 동일한 방법으로 화합물 A-XV 221 mg(43%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 7.94(s, 1H), 7.47(s, 1H), 7.31(m, 4H), 7.08(br, 1H), 6.99(br d, 1H), 6.90(m, 5H), 5.94(br, 2H), 4.97(s, 2H), 4.94(s, 2H), 3.71(s, 3H), 3.70(s, 3H), 3.30(br, 5H), 2.85(br, 2H), 2.41(m, 2H), 3.02(d, J=4.2Hz, 3H)
<제조예 17>
화합물 A-XVI
의 제조
화합물 VI(95 mg, 500 μmol)과 3-하이드록시-4-(4-메톡시벤질옥시)벤조익엑시드(165 mg, 600 μmol)을 이용하여 제조예 2-5와 동일한 방법으로 화합물 A-XVI 40 mg(20%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 9.17(s 1H) 8.30 (t, J=6Hz, 1H), 7.8 (s,1H) 7.52(s, 1H), 7.36(d, J=8.4Hz, 2H), 7.28(d, J=1.8Hz, 1H), 7.24(dd, J=8.4Hz, 2.4H, 1H), 7.00(d, J=8.4Hz, 1H), 6.91(d, J=9Hz, 2H), 6.34(br, 2H) 5.04(s, 2H), 4.93(br, 1H) 3.71(s, 3H),3.38(q, J=6Hz, 2H), 3.17(q, J=6Hz, 2H)
<제조예 18>
화합물 A-XVII
의 제조
화합물 A-IX (450 mg, 1.6 mmol)을 무수 테트라하이드로퓨란(12 mL)에 녹이고 0℃에서 리튬알루미늄하이드라이드 (152 mg, 3.2 mmol)을 나누어서 천천히 첨가하였다. 상온에서 3시간 교반 후 15% 소듐하이드록사이드 수용액 (200 μL) 첨가 후 상온에서 1시간 교반하고 생성된 고체을 감압여과였다. 받아진 여액을 감압농축하고 결과물을 관크로마토그래피을 수행하여 (SiO2, MC : MeOH = 30 : 1 ~ 10 : 1) 화합물 A-XVII 140 mg (33%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, chloroform-d1+CD3OD) δ 8.01(s, 1H), 7.44(s, 1H), 3.23~3.12(m, 4H), 1.85(m, 2H), 1.48(s, 9H)
<제조예 19>
화합물 A-XVIII
의 제조
19-1) 화합물 XXXIII의 제조:
화합물 A-XVII(150 mg, 560μmol)을 이용하여 제조예 6-1과 동일한 방법으로 화합물 XXXIII 110 mg (100%)을 수득하였다.
19-2) 화합물 A-XVIII의 제조:
화합물 XXXIII(50 mg, 245 μmol)과 3-하이드록시-4-(4-메톡시벤질옥시)벤조익엑시드(92 mg, 335 μmol)을 이용하여 제조예 2-5와 동일한 방법으로 화합물 A-XVIII 35 mg (41%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 9.15(s, 1H), 8.24(t, J=6Hz, 1H), 7.78(s, 1H), 7.38(s, 1H), 7.37(d, J=8.4Hz, 2H), 7.26(d, J=2.4Hz, 1H), 7.22( dd, J=8.4Hz, 2.4Hz, 1H), 6.99(d, J=8.4Hz, 1H), 6.90(d, J=8.4Hz), 6.37(br, 2H), 5.03(s, 2H), 4.73(t, J=5.4Hz, 1H), 3.71(s, 3H), 3.30(m, 2H), 3.04(q, J=6.6Hz, 2H), 1.80(m, 2H)
<제조예 20>
화합물 A-XIX
의 제조
20-1) 화합물 XXXIV의 제조:
4,5-다이아미노피리미딘(500 mg, 4.54 mmol)과 2-(터트-부톡시카보닐아미노)아세틱 엑시드(876 mg, 4.99 mmol)를 사용하여 제조예 2-5와 동일한 방법으로 화합물 XXXIV 854 mg (70%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, chloroform-d1) δ 8.46(s, 1H), 8.25(br, 1H), 8.11(br, 1H), 5.45(br d, 3H), 3.91(s, 2H), 1.48(s, 9H)
20-2) 화합물 XXXV의 제조:
화합물 XXXIV(854 mg, 3.19 mmol)을 사용하여 제조예 6-1과 동일한 방법으로 화합물 XXXV 650 mg(100%)을 수득하였다.
20-3) 화합물 A-XIX의 제조:
화합물 XXXV(250 mg, 1.23 mmol)과 3-하이드록시-4-(4-메톡시벤질옥시)벤조익 엑시드(337 mg, 1.23 mmol)을 사용하여 제조예 2-5와 동일한 방법으로 화합물 A-XIX 357 mg(68%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 8.24(s, 1H), 8.14(s, 1H), 7.41(d, J=8.4Hz, 2H), 7.35~7.31(m, 2H), 7.07(d, J=8.0Hz, 1H), 6.95(d, J=8.4Hz, 2H), 6.79(br, 2H), 5.10 (s, 2H), 4.02(d, J=6.0Hz, 2H)
<제조예 21>
화합물 A-XX
의 제조
21-1) 화합물 XXXVI의 제조:
4-브로모아소프탈릭 엑시드(1 g, 4.1 mmol)을 증류수 (4 mL)에 넣고 소듐바이카보네이트(1.2 g, 11 mmol)을 첨가하였다. 85℃에서 1.5시간 교반하여 시작물질을 녹이고 다른 용기에 N1, N1, N2, N2-테트라메틸에탄-1,2-다이아민(31 mg, 270 μmol)과 쿠퍼브로마이드 (18 mg, 126 μmol)을 증류수 (0.5 mL)에 녹이고 1시간 교반하였다. 두 반응 용액을 섞고 85℃에서 18시간 교반하였다. 상온으로 냉각 후 1N 염산 수용액으로 산성화시키고 생성된 고체를 감압여과한 후 물로 씻어주고 감압 건조하여 화합물 XXXVI 720 mg(97%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 8.34(t, J=3.6Hz, 1H), 8.04(dt, J=1.2Hz, 13.2Hz, 1H), 7.05(dd, J=3.6Hz, 12.6Hz, 1H)
21-2) 화합물 XXXVII의 제조:
화합물 XXXVI(720 mg, 3.95 mmol)을 트리플로로아세트산 (4.32 mL)에 녹이고 아세톤(2 mL) 트리플로로아세틱언하이드라이드(TFAA) (1.45 mL)을 순차적으로 첨가 후 100℃에서 8시간 교반하였다. 상온으로 냉각 후 감압농축하였다. 결과물을 에틸아세테이트 (100 mL)에 녹이고 1N 염산 수용액(50 mL)으로 씻어주었다. 유기층을 무수황산나트륨으로 탈수시켜 감압농축하면서 생성된 고체을 감압여과하여 화합물 XXXVII 500 mg(57%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, chloroform-d1) δ 8.76(d, J=2.4Hz, 1H), 8.30(dd, J=9.0Hz, 1.8Hz, 1H), 7.08(d, J=8.4Hz, 1H), 1.78(s, 6H)
21-3) 화합물 A-XX의 제조:
화합물 VI(80 mg, 416 μmol)과 화합물 XXXVII (78 mg, 350 μmol)을 이용하여 제조예2-5와 동일한 방법으로 화합물 A-XX 90 mg(72%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, CD3OD) δ 8.42(d, J=3.6Hz, 1H), 8.13(m, 1H), 7.94(s, 1H), 7.61(s, 1H), 7.14(d, 12.6Hz, 1H) 3.66(t, 9.6Hz, 2Hz) 3.40(t, 9.6Hz, 2H), 1.74(s, 6H)
<제조예 22>
화합물 A-XXI
의 제조
22-1) 화합물 XXXVIII의 제조:
에틸 3,4-다이하이드록시벤조에이트(5g, 28 mmol)을 N,N-다이메틸포름아미드 (50 mL)에 녹이고 포타슘카보네이트(15 g, 110 mmol)을 첨가 후 상온에서 2일 교반하였다. 에틸아세테이트(400 mL)로 희석후 감압필터하여 여과액을 물 (300 mL x 3), 소금물 (300 mL)로 씻어주었다. 유기층을 감압농축하고 결과물에 핵산을 첨가하여 생성된 고체을 감압여과하여 화합물 XXXVIII 11 g(97%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, chloroform-d1) δ 7.64(d, J=1.8Hz, 1H), 7.63(dd, J=7.8Hz, 2.4Hz, 1H), 7.38(m, 4H), 6.93(m, 5H), 5.13(s, 2H), 5.11(s, 2H), 4.35(q, J=7.2Hz, 2H), 3.81(s, 6H), 1.38(t, J=7.2Hz, 3H)
22-2) 화합물 XXXIX의 제조:
화합물 XXXVIII(11 g, 27 mmol)을 테트라하이드로퓨란 (120 mL)와 에탄올 (130 mL)에 녹이고 2N 리튬하이드록사이드 수용액 (52 mL)을 첨가 후 상온에서 12시간 교반하였다. 감압농축 후 증류수 (200 mL)을 첨가 희석 후 에틸아세테이트 (200 mL)로 씻어주었다. 수용액층을 1N 염산 수용액으로 산성화 시킨 후 생성된 고체을 감압여과하고 진공건조하여 화합물 XXXIX 8.6 g(81%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 7.50(m, 2H), 7.34(m, 4H), 7.11(d, J=9.6Hz, 1H),6.91(m, 4H), 5.07(s, 2H), 5.02(s, 2H), 3.71(s, 6H)
22-3) 화합물 A-XXI의 제조:
화합물 VI(190 mg, 1 mmol)과 화합물XXXIX(410 mg, 1.1 mmol)을 이용하여 제조예 2-5와 동일한 방법으로 화합물 A-XXI 300 mg(57%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 8.46(t, J=5.4Hz, 1H), 7.84(s, 1H), 7.56(d, 11.4Hz, 2H), 7.46(dd, J=9.0Hz, 2.4Hz, 1H ), 7.37(d, J=9Hz, 4H), 7.132(d, J=8.4Hz, 1H), 6.94(d, J=9hz, 4H), 6.37(br, 2H) 5.09 (s, 2H), 5.06(s, 2H), 4.99(t, J=5.4Hz, 1H), 3.75(s, 6H), 3.45(q, J= 6Hz, 2H), 3.26(q, J=6Hz, 2H)
<제조예 23>
화합물 A-XXII
의 제조
4,5-다이아미노피리미딘 하이드로클로라이드(100 mg, 0.91 mmol)과 터트-부틸 4-옥소부타노에이트 (158 mg, 0.99 mmol)을 이용하여 제조예 8-2와 동일한 방법으로 화합물 A-XXII 135 mg(59%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, chloroform-d1) δ 8.11(s, 1H), 7.33(s, 1H), 6.43(br, 2H), 5.06(br, 1H), 3.16(t, J=6.6Hz, 2H), 2.48(t, J=6.6Hz, 2H), 2.02(m, 2H), 1.47(s, 9H)
<제조예 24>
제조예 A-XXIII
의 제조
24-1) 화합물 XL의 제조:
2,4-다이클로로-5-나이트로피리미딘(3g, 15.4 mmol)을 테트라하이드로퓨란(52 mL)에 녹이고, -78℃에서 테트라하이드로퓨란에 녹아있는 2N 메틸아민(15.4 mL)를 천천히 첨가하고 10분 교반 한 후 상온에서 50분 교반하였다. 반응용액을 감압농축하고 에틸아세테이트(50 mL)를 첨가하여 희석한 후 물(30 mL)과 소금물(30 mL)로 씻어주었다. 무수황산나트륨으로 탈수시켜 감압농축하고 관크로마토그래피(EA : Hex = 20 : 1 ~ 5 : 1)를 시행하여 화합물 XL 925 mg(32%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, chloroform-d1) δ 9.05(s, 1H), 8.41(br, 1H), 3.23(d, J=4.8Hz, 3H)
24-2) 화합물 A-XXIII의 제조:
화합물 XL(506 mg, 2.68 mmol)을 메탄올(5 mL)에 녹이고 10%팔라듐차콜(285 mg, 0.27 mmol)을 첨가한 후 수소 가스를 퍼지하고 상온에서 2시간 교반하였다. 반응용액을 셀라이트 여과 및 감압농축을 시행하여 화합물 A-XXIII 411 mg(98%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 8.87(br, 1H), 8.37(s, 1H), 7.47(s, 1H), 5.94(br, 2H), 3.02(d, J=4.2Hz, 3H)
<제조예 25>
화합물 A-XXIV
의 제조
화합물 VI(50 mg, 0.32 mmol)을 메탈올(1 mL)에 녹이고 트리에틸아민(40 mg, 0.40 mmol)과 터트-부틸 이미노(1H-피라졸-1-일)메틸카바메이트(69 mg, 0.32 mmol)을 첨가한 후 상온에서 15시간 교반하였다. 반응용액을 감압농축하고 관크로마토그래피(MC : MeOH = 10 : 1 ~ 7 : 1)를 시행하여 화합물 A-XXIV 24 mg(25%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, CD3OD) δ 8.02(br, 1H), 7.60(br, 1H), 3.64(t, J=5.4Hz, 2H), 3.44(br, 2H), 1.55sm, 9H)
<제조예 26>
화합물 A-XXV
의 제조
화합물 XLI(192 mg, 0.68 mmol)과 화합물 XIX(333 mg, 1.16 mmol)을 사용하여 제조예 8-2과 동일한 방법으로 화합물 A-XXV 189 mg(50%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, CDCl3) δ 8.19(s, 1H), 7.49(s, 1H), 6.07(br, 1H), 4.92(br, 1H), 3.64(t, J=7.2Hz, 2H), 3.53(br, 2H), 3.20(br, 2H), 3.11(t, J=6.6Hz, 2H), 1.72(m, 6H), 1.60(m, 2H), 1.50~1.44(m, 27H)
<제조예 27>
화합물 A-XXVI
의 제조
4,5-다이아미노피리미딘(144 mg, 1.31 mmol)과 4-(터트-부톡시카보닐아미노)부타노익 엑시드(266 mg, 1.31 mmol)을 사용하여 제조예 2-5와 동일한 방법으로 화합물 A-XXVI 228 mg(59%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, CD3OD) δ 8.30(s, 1H), 8.24(s, 1H), 3.18(t, J=6Hz, 2H), 2.51(t, J=6.6Hz, 2H), 1.89(t, J=6.6Hz, 2H), 1.47(s, 9H)
<제조예 28>
화합물 A-XXVII
의 제조
28-1) 화합물 XLII의 제조:
화합물 A-XXVI(232 mg, 0.78 mmol) 사용하여 제조예 6-1과 동일한 방법으로 화합물 XLII 180 mg(100%)을 수득하였다.
28-2) 화합물 A-XXVII의 제조:
리튬알루미눔하이드라이드(87 mg, 2.3 mmol)에 테트라하이드로퓨란(5 mL)를 첨가하고 상온에서 교반하였다. 화합물 XLII(180 mg, 0.78 mmol)을 첨가한 후 20분 환류 교반하였다. 15% 소듐하이드록사이드 수용액(0.1 mL)을 첨가하고 생성된 고체를 감압여과하였다. 여액을 감압농축한 후 메탄올(4 mL)에 다시 녹이고 다이-터트-부틸 다이카보네이트(171 mg, 0.78 mmol)를 첨가한 후 30분 환류 교반하였다. 위 결과물을 감압농축하고 관크로마토그래피(MC : MeOH = 45 : 1 ~ 15 : 1)를 시행하여 화합물 A-XXVII 25.6 mg(11%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, CDCl3) δ 8.14(s, 1H), 7.62(s, 1H), 3.28(br, 2H), 3.15(br, 2H), 1.71(m, 2H), 1.64(m, 2H), 1.45(s, 9H)
<제조예 30>
화합물 A-XXVIII
의 제조
4,5,6-트리아미노피리미딘 설페이트(200 mg, 0.86 mmol)와 2-(터트-부톡시카보닐아미노)아세틱 엑시드(166 mg, 0.95 mmol)을 사용하여 제조예 2-5와 동일한 방법으로 화합물 A-XXVIII 135 mg(55%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, CD3OD) δ 7.83(s, 1H), 3.82(s, 2H), 1.46(s, 9H)
<제조예 31>
화합물 A-XXIX
의 제조
4,5,6-트리아미노피리미딘(193 mg, 1.54 mmol)와 화합물 I(370 mg, 2.31 mmol)을 사용하여 제조예 8-2과 동일한 방법으로 화합물 A-XXIX 257 mg(62%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, CD3OD) δ 7.89(s, 1H), 3.19(t, J=6Hz, 2H), 2.90(t, J=6Hz, 2H), 1.42(s, 9H)
<제조예 32>
화합물 A-XXX
의 제조
4,5,6-트리아미노피리미딘 설페이트(200 mg, 0.86 mmol)와 2-(터트-부톡시카보닐아미노)아세틱 엑시드(179 mg, 0.95 mmol)을 사용하여 제조예 2-5와 동일한 방법으로 화합물 A-XXX 112 mg(44%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, CD3OD) δ 7.81(s, 1H), 3.42(t, J=6.6Hz, 2H), 2.60(t, J=6Hz, 2H), 1.43(s, 9H)
<제조예 33>
화합물 A-XXXI
의 제조
4,5,6-트리아미노피리미딘 설페이트(500 mg, 2.24 mmol)와 3-(터트-부톡시카보닐아미노)부타노익 엑시드(500 mg, 2.46 mmol)을 사용하여 제조예 2-5와 동일한 방법으로 화합물 A-XXXI 420 mg(60%)을 흰색 고체로 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.47(s, 1H), 7.72(s, 1H), 6.85(t, J=8.4Hz, 1H), 5.87(brs, 4H), 2.94(m, 2H), 2.30(t, J=10.8Hz, 2H), 1.64(m, 2H), 1.39(s, 9H)
<제조예 34>
화합물 A-XXXII
의 제조
34-1) 화합물 XLIII의 제조:
크로토닉엑시드(4 g, 47 mmol)을 사염화탄소(30 mL)에 녹이고 NBS(9 g, 51 mmol)와 벤조일퍼옥사이드(75 mg, 0.3 mmol)을 환류교반하면서 3시간에 걸쳐 첨가하였다.(시작 4 g, 25 mg, 1시간후 3 g, 25 mg, 2시간 후 2 g, 25 mg) 상온으로 냉각한 후 메틸렌클로라이드(20 mL)로 희석하고 0.2 N 염산수용액으로 씻어주었다. 유기층을 무수황산나트륨으로 탈수시켜 감압농축하여 화합물 XLIII 2.2 g (27%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, chloroform-d1) δ 7.10(q, J=7.2Hz, 1H), 6.01(dt, J=15Hz, 1.2Hz 1H), 4.00(dd, J=7.2Hz, 0.6Hz ,2H)
34-2) 화합물 XLIV 의 제조:
화합물 XLIII(1 g, 6.06 mmol) 무수 메틸렌클로라이드(20 mL)에 녹이고 상온에서 옥살릴클로라이드(1.03 mL, 12 mmol)을 첨가한 후 N,N-다이메틸포르아미드 3방울을 첨가 하였다. 상온에서 1시간 교반 후 감압증류하여 용매를 제거하였다. 위 결과물을 테트라하이드로퓨란(12 mL)에 녹이고 얼음물을 이용하여 0℃로 냉각시킨 후 O-(4-메톡시벤질)하이드록시아민(928 mg, 6 mmol)을 테트라하이드로퓨란 (20 mL)에 녹인 용액으로 천천히 첨가하였다. 결과반응용액에 다이아이소프로필에틸아민(4.1 mL, 21 mmol)을 첨가 후 0℃에서 30분 상온에서 20분 교반하였다. 결과물을 감압농축하고 에틸아세테이트 30 mL로 희석한 후 물 30 mL, 소금물 30 mL로 씻어주고 유기층을 무수황산나트륨으로 탈수시켜 감압농축하였다. 결과물을 관크로마토그래피(n-Hex : EA = 3 : 1)을 이용하여 화합물 XLIV 515 mg(28%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, chloroform-d1) δ 7.30(d, J=7.8Hz, 2H), 7.00(q, J=7.2Hz, 1H), 6.96(d, J =7.2Hz, 2H), 4.86(br, 2H), 4.00(d, J=11.42Hz, 2H), 3.79(s, 2H)
34-3) 화합물 A-XXXII의 제조:
화합물 XLIV(150 mg, 0.5 mmol)과 4,5-다이아미노피리미딘을 N,N-다이메틸포름아미드 (1 mL)에 녹이고 상온에서 12시간 교반하였다. 에틸아세테이트(10 mL)로 희석 후 물 (10 ml)로 씻어준 후 유기층을 무수황산나트륨으로 탈수 시켜 감압농축하였다. 결과물을 관크로마토그래피을 이용하여 화합물 A-XXXII 5 mg (3%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, chloroform-d1+CD3OD) δ 7.98(s, 1H), 7.30(m 3H), 6.84(m, 3H), 5.87(br, 1H), 4.86(br, 2H), 3.83~3.75(m, 5H)
<제조예 35> 화합물 A-XXXIII의 제조
4,5-다이아미노피리미딘(500 mg, 4.54 mmol)와 2-(터트-부톡시카보닐아미노)아세틱 엑시드(876 mg, 4.99 mmol)을 사용하여 제조예 2-5와 동일한 방법으로 화합물 A-XXXIII 854 mg(71%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, chloroform-d1) δ 8.46(s, 1H), 8.24(s, 1H), 8.11(s, 1H) 5.49(br, 2H), 5.41(s, 1H), 3.91(s, 2H), 1.47(s, 9H)
<제조예 36>
화합물 XLV
의 제조
GCLE ((6S,7R)-4-methoxybenzyl 3-(chloromethyl)-8-oxo-7-(2-phenylacetamido)-5-thia-1-azabicyclo[4.2.0]oct-2-ene-2-carboxylate) (49 g, 0.1 mol)을 메틸렌클로라이드 (700 mL)에 녹이고 0℃에서 피리딘 (15.8 g, 0.2 mol)과 포스포러스팬타클로라이드(33.3 g, 0.16 mol)을 메틸렌클로라이드(350 mL)에 녹인 용액을 첨가 하고 0℃에서 2시간 교반하였다. 결과용액을 -40℃로 냉각하고 메탄올(80 mL)을 첨가한 후 동일 온도에서 10분 0℃에서 2시간 교반 후 메틸렌클로라이드(400 mL)을 첨가하여 희석 후 5% 소듐바이카보네이트 수용액(800 mL x 2)과 1N 염산 수용액(1 L)로 씻어주었다.
유기층을 무수황산나트륨으로 탈수시켜 약 200 mL까지 감압농축하였다. 결과물을 에테르(3 L)에 첨가하여 생성된 고체를 감압여과하여 화합물 XLV 30 g(74%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 8.8(br, 2H), 7.33(d, J=12.6Hz, 2H), 6.91(d, J=12.6Hz, 2H), 5.23(m, 4H), 4.55(dd, J=17.4Hz, 57Hz, 2H), 3.78(dd, J=26.4Hz, 70.8Hz, 2H), 3.71(s, 3H)
<제조예 37>
화합물 XLVII
의 제조
에틸 2-옥소-2-(2-(트리틸아이모)티아졸-5-일)아세테이트 (100 g, 230 mmol)을 메탄올 (95 mL)에 녹이고 소듐하이드록사이드(9.4 g, 235 mmol)이 녹아있는 메탄올 (235 mL)용액을 첨가 후 10분 동안 환류교반하였다. 생성된 고체를 감압여과하고 메탄올로 씻어주었다. 고체를 물(200 mL)에 녹인 다음 2N 염산 수용액으로 산성화하였다. 생성된 고체을 감압여과하여 화합물 XLVII 84 g (84%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 9.03(s, 1H), 7.79(s, 1H), 7.34~7.21(m, 15)
<제조예 38>
화합물 B-1
의 제조
38-1) 화합물 XLVIII의 제조:
벤조페논(25 g, 137 mmol)을 에탄올(250 mL)에 녹이고 하이드라진 모노하이드라이트(13.7 g, 274 mmol)을 첨가 후 하루 동안 환류교반하였다. 추가로 하이드라진 모노하이드라이트(13 g)을 첨가 후 하루 추가로 환류교반하였다. 시작물질이 사라짐을 확인 후 감압농축하여 에탄올을 제거하였다. 에틸아세테이트(500 mL)로 희석후 물(300 mL x 2), 소금물(200 mL)로 씻어주었다. 유기층을 무수황산나트륨으로 탈수 후 감압농축하는 동안 생성된 고체을 감압여과하여 화합물 XLVIII 20 g(75%)을 수득하였다. 여액을 에틸아세테이트와 핵산 용액에서 재결정하여 화합물 XLVIII 4 g(15%)을 수득하였다.
1H NMR (400MHz, DMSO-d6 ) δ 7.55~7.17(m, 10H), 6.20(s, 2H)
38-2) 화합물 XLIX의 제조:
화합물 XLVIII(20 g, 102 mmol)을 에테르(320 mL)에 녹이고 소듐설페이트(Na2SO4, 22 g, 153 mmol), 포화된 포타슘하이드록사이드 에탄올 용액(8 mL, 40 g/100 mL EtOH) 그리고 머큐리옥사이드(HgO, 55 g, 255 mmol)을 순차적으로 첨가 후 빠르게 1시간 동안 교반하였다.
고체를 Celite을 통하여 감압여과하여 제거하고 여액을 감압농축하여 화합물 XLIX 19 g(100%)을 수득하였다. 정제없이 다음 반응에 이용하였다.
1H NMR (400MHz, chloroform-d1) δ 7.39~7.15(m, 10H)
38-3) 화합물 L의 제조:
(+) 라틱엑시드(85%, 9.6 g, 90 mmol)을 에틸아세테이트(400 mL)에 녹이고 화합물 XLIX (19 g, 100 mmol)을 에틸아세테이트(200 mL)에 녹인 용액을 0℃에서 약 20분에 걸쳐 첨가후 상온에서 12시간 교반하였다. 결과물을 감압농축하고 관크로마토그래피(SiO2, EA : n-hex = 1 : 6)을 이용하여 화합물 L 17 g(76%)을 수득하였다.
[α]D = - 9.41 (C = 5.00, CHCl3)
1H NMR (600MHz, chloroform-d1) δ 7.35~7.24(m, 10H), 6.92(s, 1H), 4.39(m, 1H), 2.76(d, J=5.4Hz, 1H), 1.47(d, J=7.2Hz, 3H)
38-4) 화합물 LI 의 제조:
화합물 L(10 g, 39 mmol)을 N,N-다이메틸포름아마이드(40 mL)에 녹이고 0℃로 냉각 후 설퍼릴클로라이드(Sulfuryl chloride, 5.79 g, 42.9 mmol)을 천천히 약 15분 동안 첨가하였다. 0℃에서 20분, 상온에서 1.5시간 교반하였다. 결과물을 에틸아세테이트 (200 mL)로 희석하고 차가운 소듐바이카보네이트용액 100 mL을 첨가하여 반응을 종료시킨 후 포화된 소듐바이카보네트용액(100 mL), 소금물(10 0mL)로 씻어주었다. 유기층을 무수황산나트륨으로 탈수하고 여액을 감압농축하였다. 결과물을 관크로마토그래피(SiO2, EA : n-hex = 1 : 9)을 이용하여 화합물 LI 5.3g(49%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, chloroform-d1) δ 7.36~7.26(m, 10H), 6.90(s, 1H), 4.51(q, J= 6.6Hz, 1H), 1.72(d, J=6.6Hz, 3H)
38-5) 화합물 LII의 제조:
화합물 LI(4 g, 14.6 mmol)을 N,N-다이메틸포름아마이드(30 mL)에 녹이고 N-하이드록시 프탈이마이드(2.45 g, 15 mmol)와 포타슘카보네이트(2.07g, 15 mmol)을 첨가 후 상온에서 12시간 교반하였다. 결과물에 에틸아세테이트 (400 mL)를 첨가하여 희석 후 물(200 mL), 소금물(200 mL x 2)로 씻어주고 핵산으로 결정화하여 화합물 LII 6 g(99%)을 수득하였다.
[α]D = - 63.26 (C = 5.00, CHCl3)
1H NMR (600MHz, chloroform-d1) δ 7.76(m, 4H), 7.32~7.19(m, 10H), 6.91(s, 1H), 5.05(q, J=6.6Hz, 1H), 1.65(d, J=7.2Hz, 3H)
38-6) 화합물 LIII의 제조:
화합물 LII(2.5 g, 6.23 mmol)을 메틸렌클로라이드(10 mL)에 녹이고 0℃에서 메틸하이드라진(287 mg, 6.23 mmol)을 첨가하였다. 0℃에서 2시간 교반 후 생성된 고체을 감압여과하여 제거하고 여액을 감압농축하여 화합물 LIII을 수득하였다. 정제없이 다음반응에 이용하였다.
38-7) 화합물 LIV의 제조:
화합물 LIII을 메틸렌클로라이드(5 mL)와 메탄올 (20 mL)에 녹이고 0℃에서 화합물 XLVII(2.6 g, 6.2 mmol)을 첨가하였다. 0℃에서 30분 교반 후 상온에서 3시간 교반하였다. 감압농축하여 용매을 제거하고 에틸아세테이트 (150 mL)로 희석 후 0.1N 염산 수용액 (100 mL)와 소금물(100 mL)로 씻어주었다. 유기층을 무수탄산나트륨으로 탈수하고 감압농축하여 용매를 제거하고 에틸아세테이트와 핵산을 이용하여 결정화시켜 화합물 LIV 2.5g(60%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 8.87(s, 1H), 7.44(m, 25H), 6.82(s, 2H), 4.89(q, J =7.2Hz, 1H), 1.41(d, J=6.6Hz, 3H)
38-8) 화합물 B-1의 제조
화합물 LIV(2.07 g, 4.03 mmol)과 화합물XLV(1.8 g, 4.44 mmol)을 메틸렌클로라이드(45 mL)에 녹이고 0℃에서 피리딘(1.47 mL, 18 mmol)을 첨가하고 포스포릴클로라이드(POCl3, 376 μL, 4.03 mmol)을 첨가하였다. 동일 온도에서 20분 교반하고 에틸아세테이트(150 mL)로 희석 후 물(50 mL), 소금물 (30 mL x 2)로 씻어주었다. 유기층을 유기층을 무수황산나트륨으로 탈수시킨 후 감압농축하고 관크로마토그래피(SiO2, n-hex : EA = 6 : 1 ~ 2 : 1)을 이용하여 화합물 B-1 1.9 g(47%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, chloroform-d1) δ 8.10(d, J=8.4Hz, 1H), 7.34~7.22(m, 27H), 6.98(s, 1H), 6.91(s, 1H), 6.89(d, J=7.8Hz, 2H), 6.73(s, 1H), 5.91(dd, J=4.8Hz, 8.4Hz, 1H), 5.26(m, 4H), 4.94(d, J=5.4Hz, 1H), 4.58(dd, J=11.4Hz, 94.8Hz, 2H), 3.79(s, 3H), 3.546(dd, 18Hz, 105.6Hz, 2H), 1.61(d, J=6.6Hz, 3H)
<제조예 39>
화합물 B-II
의 제조
39-1) 화합물 LVI의 제조:
화합물 LV(30 g, 149 mmol)을 테트라하이드로퓨란(500 mL)에 녹이고 다이-터트-부틸 다이카보네이트(33 g, 152 mmol)와 4-다이메틸아미노피리딘(388 mg, 3.17 mmol)을 순차적으로 첨가한 후 상온에서 20시간 교반하였다. 반응용액을 감압농축하고 관크로마토그래피(EA : Hex = 1 : 7 ~ 1 : 5)를 시행하여 화합물 LVI 17.7 g (39%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, chloroform-d1) δ 8.58(br, 1H), 8.27(s, 1H), 4.44(q, J=7.8Hz, 2H), 1.54(s, 9H), 1.42(t, J=6.6Hz, 3H)
39-2) 화합물 LVII의 제조:
화합물 LVI(17.7 g, 58.9 mmol)을 메탄올(118 mL)에 녹이고 상온에서 교반하였다. 소듐 하이드록사이드(4.24 g, 106 mmol)을 증류수(40 mL)에 녹여서 위 반응용액에 천천히 첨가한 후 상온에서 1시간 교반하였다. 반응용액을 감압농축하고 물(200 mL)에 녹인 후 1N 염산(pH 1~2)으로 고체화 시킨다. 고체를 감압여과하고 물(200 mL)로 씻어주어 화합물 LVII 16 g (100%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 11.92(s, 1H), 8.35(s, 1H), 1.47(s, 9H)
39-3) 화합물 LVIII의 제조:
화합물 LVII(16 g, 58.7 mmol)을 1,4-다이옥세인(118 mL)에 녹이고 N-클로로석신이마이드(NCS, 8.1 g, 60.7 mmol)을 첨가하였다. 상온에서 30분 교반한 후 40℃에서 15시간 교반하였다. 반응용액의 고체를 감압여과한 후 여액을 감압농축하였다. 결과물을 에테르/n-헥세인=2/1 혼합용매(150 mL)로 생성된 고체를 감압여과하여 버리고 여액을 감압농축하여 화합물 LVIII 12.3 g (68%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 12.19(s, 1H), 1.43(s, 9H)
39-4) 화합물 LIX의 제조:
화합물 LVIII(12.3 g, 40.1 mmol)과 화합물 LIII(12.8 g, 47.2 mmol)을 이용하여 제조예 38-7과 동일한 방법으로 화합물 LIX 14.2 g (63%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, chloroform-d1) δ 7.34~7.27(m, 10H), 6.92(s, 1H), 5.09(q, J=6.6Hz, 1H), 1.60(d, J=7.2Hz, 3H), 1.51(s, 9H)
39-5) 화합물 B-II의 제조:
화합물 LIX(3.0 g, 5.35 mmol)과 화합물 XLV(2.82g, 6.96 mmol)을 이용하여 제조예 38-8과 동일한 방법으로 화합물 B-II 2.62 g (54%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, chloroform-d1) δ 7.96(br, 1H), 7.86(d, J=9.6Hz, 1H), 7.35(d, J=9Hz, 2H), 7.29~7.25(m, 10H), 6.92~6.87(m, 3H), 6.03(q, J=4.8Hz, 1H), 5.27(d, J=11.4Hz, 1H), 5.21(d, J=11.4Hz, 1H), 5.10(q, J=7.2Hz, 1H), 4.98(d, J=5.4Hz, 1H), 4.60(d, J=12Hz, 1H), 4.44(d, J=12Hz, 1H), 3.81(s, 3H), 3.59(d, J=18.6Hz, 1H), 3.41(d, J=18Hz, 1H), 1.64(d, J=7.2Hz, 3H), 1.52(s, 9H)
<제조예 40>
화합물 B-III
의 제조
40-1) 화합물 LX의 제조:
터트-부틸 2-브로모-2-메틸프로파노에이트(100 g, 0.6 mol), N-하이드록시프탈이마이드(136 g, 0.6 mol) 그리고 트리에틸아민(93 g, 0.9 mol)을 80℃에서 24시간 교반하였다. 반응용액에 에틸아세테이트(1L x 2)로 희석한 후 물(1L), 1N 염산(800 mL) 그리고 0.5N 소듐 하이드록사이드(500 mL)로 씻어주었다. 무수황한나트륨으로 탈수시켜 감압농축하였다. 흰색 고체를 n-헥세인(800 mL)으로 씻어준 후 감압여과하여 표제화합물 91g(49%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, chloroform-d1) δ 7.85(q, J=3Hz, 2H), 7.76(q, J=3Hz, 2H), 1.59(s, 6H), 1.52(s, 9H)
40-2) 화합물 LXI의 제조:
화합물 LX(2.63 g, 8.6 mmol)을 메틸렌클로라이드(11 mL)과 메탄올(2 mL)에 녹인 후 하이드라진 모노하이드레이트 (1.7 mL)을 첨가 후 상온에서 1.5시간 교반하였다. 생성된 고체을 감압여과하여 제거하고 여액을 에틸아세테이트(20 mL)로 묽히고 증류수(20 mL x 2), 소금물(20 mL)로 씻어주었다. 유기층을 무수황산나트륨으로 탈수시킨 후 감압농축하여 화합물 LXI을 수득하였다. 정제없이 다음반응에 이용하였다.
40-3) 화합물 LXII의 제조:
아세트아미딘 하이드로클로라이드(6 g, 64 mmol)을 증류수(75 mL)에 녹이고 0℃로 냉각 후 소듐하이퍼클로라이트(4% chlorine available sol, 95 mL)을 1.5시간 동안 첨가하고 동일온도에서 1시간 추가 교반하였다. 과량의 소듐클로라이드을 첨가하고 결과물을 에틸아세테이트(150 mL x 2)로 추출하였다. 유기층을 무수황산나트륨으로 탈수시킨 후 감압농축하여 화합물 LXII 5.1 g(87%)을 수득하였다. 정제없이 다음반응에 이용하였다.
40-4) 화합물 LXIII의 제조:
화합물 LXII(5,1 g, 55 mmol)을 메탄올(250 mL)에 녹이고 0℃로 냉각 후포타슘티아시아네이트(5.3 g, 55 mmol)을 첨가 후 상온에서 12시간 교반하였다. 결과물을 감압농축하고 에틸아세테이트(200 mL)로 희석 후 감압여과하여 고체을 제거하였다. 여액을 감암농축하는 동안 생성된 고체를 감압여과하여 화합물LXIII 2 g(32%)을 수득하였다. 여액을 농축하고 관크로마토그래피 (SiO2, n-hex : EA = 4 : 1)을 이용하여 화합물 LXIII 2 g(32%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, CD3OD) δ 3.27(s, 3H)
40-5) 화합물 LXIV의 제조:
화합물LXIII(2 g, 17.4 mmol)에 Boc2O (6 mL)을 첨가 후 12시간 환류교반하였다. 감압농축후 관크로마토그래피(SiO2, n-hex : EA = 4 : 1)을 이용하여 화합물 LXIV 2 g (53%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, chloroform-d1) δ 10.97(br, 1H), 2.55(s, 3H), 1.55(s, 9H)
40-6) 화합물 LXV의 제조:
다이아이소프로필아민(11.37 mL, 82 mmol)을 무수 테트라하이드로퓨란 (50 mL)에 녹이고 -78℃로 냉각 후 부틸리튬(1.6 M n-hex sol., 56.1 mL, 90 mmol)을 첨가한 후 동일온도에서 10분간 교반하여 LDA 용액을 제조하였다.
위에서 제조된 LDA용액에 화합물 LXIV(4,39 g, 20.4 mmol)이 녹아있는 무수 테트라하이드로퓨란(20 mL) 용액을 -78℃에서 천천히 첨가하였다. 위 결과 용액을 -40℃로 옮기고 탄산가스를 용액 속으로 흘려주었다. 동일온도에서 1시간 교반 후 0℃에서 30분 교반 후 상온에서 4시간 교반하였다. 증류수(5 mL)을 첨가하여 반응을 종료시키고 감압농축하였다. 증류수(200 mL)로 녹이고 에테르(150 mL x 3) 추출하여 남아있는 시작물질을 회수(2 g)하고 수용액을 1N 염산 수용액으로 산성화시켜 에틸아세테이트(250 mL)로 추출하였다. 유기층을 무수황산나트륨으로 탈수시킨 후 감압농축하여 화합물 LXV 2.2 g(40%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, DMSO-d6 ) δ 12.34(s, 1H), 3.74(s, 2H), 1.50(s, 9H)
40-7) 화합물 LXVI의 제조:
화합물 LXV(2.2 g, 8.5 mmol)을 1,4-다이옥산(33 mL)에 녹이고 셀레늄다이옥사이드(SeO2, 1.87 g, 17 mmol)을 첨가 후 100℃에서 교반하였다. 상온으로 냉각 후 감압여과 후 1,4-다이옥산으로 씻어주었다. 여액을 감압농축하여 화합물 LXVI을 수득하였다. 정제없이 다음반응에 이용하였다.
40-8) 화합물 LXVII의 제조:
화합물 LXVI(12.8 g, 47.1 mmol)과 화합물 LXI(10.2 g, 58.2 mmol)을 이용하여 제조예 38-7과 동일한 방법으로 화합물 LXVII 12.9 g (64%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, DMSO-d6 ) δ 1.49(s, 9H), 1.44(s, 6H), 1.36(s, 9H)
40-9) 화합물 B-III의 제조:
화합물 LXVII(5.85 g, 13.6 mmol)과 화합물 XLV(7.16 g, 17.6 mmol)을 이용하여 제조예 38-8과 동일한 방법으로 화합물 B-III 4.12 g (39%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, chloroform-d1) δ 8.75(br, 1H), 8.05(br, 1H), 7.35(d, J=7.8Hz, 2H), 6.96(d, J=9Hz, 2H), 6.09(dd, J=4.8Hz, 1H), 5.26(d, J=11.4Hz, 1H), 5.21(d, J=11.4Hz, 1H), 5.05(d, J=4.8Hz, 1H), 4.53(d, J=11.4Hz, 1H), 4.47(d, J=11.4Hz, 1H), 3.82(s, 3H), 3.65(d, J=18Hz, 1H), 3.49(d, J=18Hz, 1H), 1.66(s, 3H),1.63(s, 3H), 1.54(s, 9H), 1.40(s, 9H)
<제조예 41>
화합물 LXXII
의 제조
화합물 XLVII와 화합물 LXI을 이용하여 제조예 38-7과 동일한 방법으로 화합물 LXXII을 수득하였다.
<제조예 42> 화합물 B-IV 및 B-V의 제조
42-1) 화합물 LXVIII의 제조:
GCLE(49 g, 0.1 mol)을 아세톤(1 L)에 녹이고 소듐아이오다이드(45 g, 0.3 mol)을 첨가 후 상온에서 2시간 교반하였다. 감압농축 후 에틸아세테이트 (1.2 L)로 희석하고 물(500 ml), 10% 소듐티오설페이트(Na2S2O3.5H2O) 수용액(1 L) 그리고 소금물(500 mL x 2)로 씻어주었다. 유기층을 무수황산나트륨으로 씻어주고 감압농축하여 화합물 LXVIII 57 g (99%)을 수득하였다. 정제없이 다음반응에 이용하였다.
42-2) 화합물 LXIX의 제조:
화합물 LXVIII(57 g, 0.1 mol)을 에틸아세테이트(1 L)에 녹이고 트리페닐포스핀 (52 g, 0.2 mol)을 상온에서 첨가 후 2시간 교반하였다. 생성된 고체를 감압여과하고 에틸아세테이트로 씻어주고 건조하여 화합물 LXIX 80 g(95%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, chloroform-d1) δ 7.80~7.64(m, 15H), 7.35~7.26(m, 5H), 7.16(d, J=7.8Hz, 2H), 7.65(d, J=7.8Hz, 2H), 6.46(d, J=3.0Hz, 1H), 5.66(dd, J=5.4Hz, 9Hz, 1H), 5.62(t, J=15Hz, 1H) 5.16(t, J=15Hz, 1H), 4.58(m, 3H), 4.05(dd, 4.8Hz, 18.6Hz, 1H), 3.80(s, 3H), 3.66(s, 2H), 3.37(d, 18.6Hz, 1H)
42-3) 화합물 LXX의 제조:
화합물 LXIX(40 g, 48 mmol)을 메틸렌클로라이드(450 ml)와 증류수(150 mL)에 녹이고 0℃로 냉각 후 클로로아세타알데하이드(50% aq sol, 30 mL, 238 mmol)을 첨가하였다. 결과용액에 2N 소듐하이드록사이드 수용액 (29 mL) 을 첨가하고 동일 온도에서 30분 교반하였다. 유기층을 물 (200 mL)과 소금물(250 mL)로 씻어주었다. 유기층을 무수황산나트륨으로 탈수시킨 후 감압농축하고 관크로마토그래피(SiO2, n-hex : EA : MC = 2 : 1 : 1)을 이용하여 화합물 LXX 9.1 g(37%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, chloroform-d1) δ 7.63(m, 7H), 6.86(d, J=9Hz, 2H), 6.20(d, J=11.4Hz, 1H), 6.01(d, J=8.4Hz, 1H), 5.82(dd, 4.8Hz, 9Hz, 1H), 5.72(m, 1H), 5.14(m, 2H), 4.98(d, J=4.8Hz, 1H), 3.91(dd, J=8.4Hz, 12.6Hz, 1H), 3.78(s, 3H), 3.72(dd, J=7.2Hz, 12Hz, 1H), 3.67(q, J=16.2Hz, 2H), 3.47(dd, J=18.6Hz, 124.8Hz, 2H)
42-4) 화합물 LXXI의 제조:
화합물 LXX(36 g, 70.2 mmol)을 이용하여 제조예 36과 동일한 방법으로 화합물 LXXI 15 g(50%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, chloroform-d1) δ 7.31(d, J=9.0Hz, 2H), 6.87(d, J=9Hz, 2H), 6.23(d, J=11.4Hz, 1H), 5.70(m, 1H), 5.16(m, 1H), 4.92(d, J=4.8Hz, 1H), 4.74(d, J=4.8Hz, 1H), 3.93(dd, J=9.6Hz, 11.4Hz, 1H), 3.78(s, 3H), 3.72(dd, J=7.2Hz, 12Hz, 1H), 3.51(dd, J=18.6Hz, 124.8Hz, 2H)
42-5) 화합물 B-IV의 제조:
화합물 LXXII(19.7g, 34.5 mmol)과 화합물 LXXI (14.9g, 34.5 mmol)을 이용하여 제조예 38-8과 동일한 방법으로 화합물 B-IV 17g (47%)을 수득하였다. (E/Z mixture 2 : 8)
1H NMR (600MHz, chloroform-d1) δ 8.18(d, J=9Hz, 1H), 7.33~7.24(m, 17H), 6.89(m, 3H), 6.71(s, 1H), 6.27(d, J=10.8Hz, 1H),5.98(m, 1H), 5.74(m, 1H), 5.73(m, 3H), 3.94(dd, J=7.8Hz, 9Hz, 1H), 3.79(s, 3H), 3.75(dd, J=7.8Hz, 9Hz, 1H), 3.47(dd, J=18.Hz, 124.8Hz, 2H), 1.62(d, J=27Hz, 6H), 1.39(s, 9H)
42-6) 화합물 B-V의 제조:
화합물 B-IV(17g, 17.9 mmol)을 이용하여 제조예 42-1과 동일한 방법으로 화합물 B-V 18 g(95%)을 수득하였다. 정제없이 다음반응에 이용하였다.
<제조예 43> 화합물 B-VI 및 B-VII의 제조
43-1) 화합물 B-VI의 제조:
화합물 LIV(2.5 g, 3.7 mmol)과 화합물 LXXI(1.73 g, 3.7 mmol)을 이용하여 제조예 38-8과 동일한 방법으로 화합물 B-VI 2 g (52%)을 수득하였다. (E/Z mixture 2 : 8)
1H NMR (600MHz, chloroform-d1) δ 8.16(d, J=8.4Hz, 1H), 7.35~7.26(m, 27H), 6.98(s, 1H), 6.91(m, 3H), 6.75(s, 1H), 6.33(d, J=10.8Hz, 1H), 5.92(dd, J=4.8Hz, 8.4Hz, 1H), 5.78(m, 1H), 5.20(m, 3H), 5.78(d, J=4.8Hz, 1H), 3.93(dd, J=8.4Hz, 12Hz, 1H), 3.81(s, 3H), 3.75(dd, J=8.4Hz, 12Hz, 1H), 3.47(dd, J=18Hz, 89.4Hz, 2H), 1.69(d, J=7.8Hz, 3H)
43-2) 화합물 B-VII의 제조:
화합물 B-VI(1 g, 0.96 mmol)을 이용하여 제조예 42-1과 동일한 방법으로 화합물 B-VII 1.1 g(99%)을 수득하였다. 정제없이 다음 반응에 이용하였다.
<제조예 44> 화합물 B-VIII의 제조
화합물 LXXII(6.8 g, 10 mmol)과 화합물 XLV(4.86 g, 12 mmol)을 이용하여 제조예 38-8과 동일한 방법으로 화합물 B-VIII 5.3 g (52%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, chloroform-d1) δ 8.23(d, J=3.6Hz, 1H), 7.33(m, 17H), 7.00(s, 1H), 6.90(m, 3H), 6.70(s, 1H), 5.96(dd, J=4.8Hz, 8.4Hz, 1H), 5.24(dd, J=11.4Hz, 34.8Hz, 2H), 5.00(d, J=5.4Hz, 1H), 5.51(dd, J=12Hz, 50.4Hz, 2H), 3.79(s, 3H), 3.60(d, J=18Hz, 1H), 3.44(d, J=18Hz, 1H), 1.61(s, 3H), 1.59(s, 3H), 1.39(s, 9H)
<제조예 45>
화합물 B-IX
의 제조
화합물 B-VIII(5.0 g, 5.42 mmol)을 메틸렌클로라이드(50 mL)에 녹이고 -20℃에서 m-클로로퍼벤조익 엑시드(0.84 g, 4.88 mmol)을 첨가한 후 10℃에서 1시간 교반하였다. 위 반응용액에 소듐티오설페이트 포화수용액(30 mL)를 첨가하고 반응용액을 1/3 감압농축하였다. 에틸아세테이트(100 mL x 2)로 추출하고 무수황산나트륨으로 탈수시켜 감압농축하고 관크로마토그래피(EA : Hex = 1 : 3 ~ 1 : 2)를 시행하여 화합물 B-IX 3.73 g(73%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, CDCl3) δ 7.87(d, J=9.6Hz, 1H), 7.36(d, J=8.4Hz, 2H), 7.31~7.27(m, 15H), 7.03(s, 1H), 6.92(d, J=9Hz, d), 6.69(s, 1H), 6.21(q, J=4.8Hz, 1H), 5.29(d, J=11.4Hz, 1H), 5.24(d, J=11.4H), 5.07(d, J=12Hz, 1H), 4.55(d, J=4.8Hz), 4.22(d, J=12.6Hz, 1H), 3.82(s, 3H), 3.74(d, J=19.2Hz, 1H), 3.39(d, J=18.6Hz, 1H), 1.58(d, J=15Hz, 6H), 1.41(s, 9H)
<제조예 46> 화합물 B-X의 제조
46-1) 화합물 LXXIII의 제조:
화합물 LVIII와 화합물 LXI을 이용하여 제조예 38-7과 동일한 방법으로 화합물 LXXIII을 수득하였다.
46-2) 화합물 B-X의 제조:
화합물 LXXIII(9.2 g, 19.8 mmol)와 화합물 XLV(10.45 g, 25.8 mmol)을 이용하여 제조예 38-8과 동일한 방법으로 화합물 B-X 4 g (25%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, chloroform-d1) δ 7.92(d, J=9.0Hz, 1H), 7.87(brs, 1H), 7.36(d, J=9.6Hz, 2H), 6.92(d, J=9.6Hz, 2H), 6.05 (dd, J=5.4Hz, 9.6Hz, 1H), 5.28(dd, J=11.4Hz, 36.6Hz, 2H), 5.04(d, J=5.4Hz, 1H), 4.56 (dd, J=12Hz, 56.4Hz, 2H), 3.82(s, 3H), 3.66(dd, J=18Hz, 97.8Hz, 2H), 1.62(s, 3H), 1.60(s, 3H), 1.42(s, 9H)
<제조예 47>
화합물 B-XI
의 제조
화합물 LXVII와 화합물 LXXI을 이용하여 제조예 43과 동일한 방법으로 화합물 B-XI 을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, chloroform-d1) δ 8.98(brs, 1H), 8.06(d, J=9.0Hz, 1H), 7.31(d, J=8.4Hz, 2H), 6.87(d, J=8.4Hz, 1H), 6.27(d, J=11.4Hz, 1H), 6.07(m, 1H), 5.74(m, 1H), 5.14(m, 3H), 3.93~ 3.71(m, 2H), 3.52(m, 2H), 1.62(s, 3H), 1.60(s, 3H), 1.52(s, 9H) : 알릴클로라이드의 NMR
<제조예 48>
화합물 B-XII
의 제조
화합물 LIX와 화합물 LXXI을 이용하여 제조예 43와 동일한 방법으로 화합물 B-XII 을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, chloroform-d1) δ 7.99(brs, 1H), 7.85(d, J=9.0Hz, 1H), 7.36~7.12(m, 12H), 6.92(d, J=8.4Hz, 1H), 6.31(d, J=11.4Hz, 1H), 6.04(m, 1H), 5.78(m, 1H), 5.15~4.99(m, 3H), 3.94~ 3.72(m, 2H), 3.45(m, 2H), 1.66(t, J=3Hz, 3H), 1.52(s, 9H) : 알릴클로라이드의 NMR
<제조예 49> 화합물 B-XIII의 제조
화합물 LXXIII와 화합물 LXXI을 이용하여 제조예 43와 동일한 방법으로 화합물 B-XIII을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, chloroform-d1) δ 7.91(m, 2H), 7.36(d, J=8.4Hz, 2H), 6.91(d, J=8.4Hz, 1H), 6.30(d, J=11.4Hz, 1H), 6.06(m, 1H), 5.77(m, 1H), 5.20(dd, J=12Hz, 22.8Hz, 2H), 5.10(d, J=4.8Hz, 1H), 3.96~3.74(m, 2H), 3.55(dd, J=18Hz, 99.6Hz, 2H), 1.62(s, 3H), 1.60(s, 3H), 1.42(s, 9H) : 알릴클로라이드의 NMR
<실시예 1>
화합물 1
의 제조
화합물 B-VIII(193 mg, 0.21 mmol)을 N,N-다이메틸포름아마이드(0.5mL)에 녹이고 소듐아이오다이드(31 mg, 0.21 mmol)을 첨가한 후 상온에서 30분 교반하였다. 위 용액에 화합물 A-II(86 mg, 0.21 mmol)을 첨가한 후 상온에서 4시간 교반하였다. 반응 용액을 에틸아세테이트(5 mL)을 첨가하여 희석한 후 물(3 mL)과 소금물(3 mL)로 씻어준 후 무수황산나트륨으로 탈수시켜 감압농축하고 관크로마토그래피(MC : MeOH = 50 : 1 ~ 10 : 1)를 시행하여 사차염 화합물 67 mg(22%)을 수득하였다.
위에서 합성한 사차염 화합물 (67 mg, 40 μmol)을 메틸렌클로라이드(0.5 mL)에 녹이고 아니솔(0.2 mL)과 트리프로로아세트산(0.5 mL)을 순차적으로 첨가한 후 상온에서 4시간 교반하였다. 반응용액에 아이소프로필에테르 (5 mL)을 첨가한 후 생성된 고체를 감압 여과하여 화합물 1 34 mg (94%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, DMSO-d6+D2O) δ 8.36(s, 1H), 7.86(s, 1H), 7.61(s, 1H), 7.58(s, 1H), 6.77(s, 1H), 5.90(d, J=4.8Hz, 1H), 5.21 (d, J=4.8Hz, 1H), 5.09(dd, J=15Hz, 33.6Hz, 2H), 3.60(m, 4H), 3.28(m, 2H), 1.43(s, 3H), 1.42(s, 3H)
<실시예 2>
화합물 2
의 제조
실시예 1과 동일한 방법으로 화합물 B-VIII과 화합물 A-II으로부터 화합물 2 (2.6 mg, 8%)를 수득하였다.
1H NMR (600 MHz, CD3OD) δ 8.40(s, 1H), 7.90(s, 1H), 7.83(s, 1H), 7.34(s, 1H), 7.03(s, 1H), 5.95(d, J=4.8Hz, 1H), 5.29 (m , 3H), 3.93(s, 3H), 3.66~3.37(m, 6H), 1.61(s, 3H), 1.60(s, 3H)
<실시예 3>
화합물 3
의 제조
실시예 1과 동일한 방법으로 화합물B-I과 화합물 A-II으로부터 화합물 3 (25mg, 41%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, DMSO-d6+D2O) δ 8.33(s, 1H), 7.79(s, 1H), 7.59(s, 1H), 7.53(s, 1H), 6.72(s, 1H), 5.87(d, J=4.8Hz, 1H), 5.14 (d, J=4.8Hz, 1H), 5.05(m, 2H), 4.54(q, J=7.2Hz, 1H), 3.54~3.22(m, 6H), 1.35(s, 3H), 1.32(s, 3H)
<실시예 4>
화합물 4
의 제조
실시예 1과 동일한 방법으로 화합물B-II과 화합물 A-II으로부터 화합물 4 (10 mg, 28%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, DMSO-d6+D2O) δ 8.41(s, 1H), 7.85(s, 1H), 7.71(s, 1H), 7.60(s, 1H), 5.87(d, J=5.4Hz, 1H), 5.16 (d, J=4.8Hz, 1H), 5.08(m, 2H), 4.58(q, J=7.2Hz, 1H), 3.59~3.26(m, 6H), 1.41(d, J=7.2Hz, 3H)
<실시예 5>
화합물 5
의 제조
실시예 1과 동일한 방법으로 화합물B-VIII과 화합물 A-IV으로부터 화합물 5 (7.6 mg, 24%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, CD3OD) δ 8.52(s, 1H), 7.88(s, 1H), 7.86(s, 1H), 7.61(s, 1H), 7.06(s, 1H), 5.97(d, J=5.4Hz, 1H), 5.32(d, J=14.4Hz, 1H), 5.26(d, J=5.4Hz, 1H), 5.17(d, J=14.4Hz, 1H), 3.98(m, 2H), 3.70(m, 2H), 3.44(m, 2H), 3.36~3.28(m, 4H), 1.58(s, 3H), 1.56(s, 3H)
<실시예 6> 화합물 6의 제조
실시예 1과 동일한 방법으로 화합물 B-VIII과 화합물 A-V으로부터 화합물 6 (12 mg, 17%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 11.72(s, 1H), 11.05(s, 1H), 10.88(s, 1H), 9.48(d, J=8.4Hz, 1H), 8.67(br, 1H), 8.48(s, 1H), 7.79(s, 1H), 7.55(s, 1H), 7.31(br, 2H), 6.70(s, 1H), 5.98(br, 1H), 5.93(dd, J=4.8Hz, 5.4Hz, 1H), 5.21(d, J=4.8Hz, 1H), 5.12(d, J=14.4Hz, 1H), 4.94(d, J=15Hz, 1H), 3.75(m, 2H), 3.60(m, 2H), 3.42(m, 2H), 1.41(s, 3H), 1.40(s, 3H)
<실시예 7>
화합물 7
의 제조
실시예 1과 동일한 방법으로 화합물 B-VIII과 화합물 A-VI으로부터 화합물 7 (38 mg, 39%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, DMSO-d6+D2O) δ 8.36(s, 1H), 7.84(s, 1H), 7.57(s, 1H), 7.51(s, 1H), 6.73(s, 1H), 5.91(d, J=4.8Hz, 1H), 5.20(d, J=4.8Hz, 1H), 5.08(q, J=15.6Hz, 2H), 3.54~3.41(m, 2H), 3.37(br, 2H), 3.05(br, 2H), 1.64(br, 4H), 1.43(s, 3H), 1.41(s, 3H)
<실시예 8> 화합물 8의 제조
화합물 B-V(371 mg, 0.39 mmol)과 화합물 A-II(200 mg, 0.36 mmol)을 N,N-다이메틸포름아미드(2 mL) 에 녹이고 상온에서 3 시간 교반하였다. 반응 용액을 에틸아세테이트(15 mL)을 첨가하여 희석한 후 물(20 mL)과 소금물(10 mL)로 씻어준 후 무수황산나트륨으로 탈수시켜 감압농축하고 관크로마토그래피 (MC:MeOH=50:1~10:1)를 시행하여 사차염 화합물 323 mg(60%)을 수득하였다.
위에서 합성한 사차염 화합물(323 mg, 0.22 mmol)을 메틸렌클로라이드(4 mL)에 녹이고 아니솔(0.5 mL)과 트리프로로아세트산(4 mL)을 순차적으로 첨가한 후 상온에서 3시간 교반 하였다. 반응용액에 아이소프로필에테르 (20 mL)을 첨가한 후 생성된 고체를 감압 여과하여 화합물 8 (176 mg, 100%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, DMSO-d6+D2O) δ 8.40(s, 1H), 7.85(s, 1H), 7.67(s, 1H), 7.58(s, 1H), 6.91(d, J=16.2Hz, 1H), 6.77(s, 1H), 6.31(m, 1H), 5.84(d, J=4.8Hz, 1H), 5.22(d, J=4.8Hz, 1H), 4.92(m, 2H), 3.85(d, J=18Hz, 1H), 3.74(d, J=18Hz, 1H), 3.57(m, 2H), 3.30(br, 2H), 1.45(s, 3H), 1.43(s, 3H)
<실시예 9>
화합물 9
의 제조
실시예 8과 동일한 방법으로 화합물 B-VII과 화합물 A-II으로부터 화합물 9 (35 mg, 28%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 11.78(t, J=6.6Hz, 1H), 11.03(br d, 2H), 9.54(d, J=8.4Hz, 1H), 9.00(s, 1H), 8.42(s, 1H), 8.09(br, 1H), 7.82(s, 1H), 7.70(s, 1H) 7.57(s, 1H) 7.34(br, 2H) 6.93(d, J=15.6Hz), 6.78(s, 1H), 6.31(m, 1H), 6.04(br, 1H), 5.87(dd, J=4.8Hz, 8.4Hz, 1H), 5.22(d, J=4.8Hz, 1H), 4.93(m, 1H), 4.62(q, J=6.6Hz, 1H), 3.83~3.29(m, 6H), 1.4(d, J=7.2Hz, 3H)
<실시예 10>
화합물 10
의 제조
실시예 8과 동일한 방법으로 화합물 B-V과 화합물 A-II으로부터 화합물 10 (8 mg, 3.2%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, CD3OD) δ 8.34(s, 1H), 7.93(s, 1H), 7.58(s, 1H), 7.10(s, 1H), 7.02(s, 1H), 6.97(d, J=16.2Hz, 1H), 6.23(m, 1H), 5.92(d, J=4.8Hz, 1H), 5.21(d, J=4.8Hz, 1H), 4.96(m, 2H), 4.42(s, 2H), 3.83(d, J=18Hz, 1H), 3.66~3.61(m, 3H), 3.41(t, J=5.4Hz), 1.62(s, 3H), 1.59(s, 3H)
<실시예 11>
화합물 11
의 제조
실시예 8과 동일한 방법으로 화합물 B-V과 화합물 A-VIII으로부터 화합물 11 (51mg, 30%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 9.44(d, J=9Hz, 1H), 8.97(br , 1H), 8.67(br, 1H), 8.39(s, 1H), 8.01(br, 1H), 7.90(s, 1H), 7.63(s, 1H), 7.41(s, 1H), 7.34(br, 2H), 6.89(d, J=15.6Hz, 1H), 6.69(s, 1H), 6.27(m, 1H), 5.93(br, 1H), 5.81(dd, J=4.8Hz, 8.4Hz, 1H), 5.18(d, J=4.8Hz, 1H), 4.89(m, 2H), 3.81(d, J=17.4Hz, 1H), 3.55~3.21(m, 5H) , 1.40(s, 3H), 1.39(s, 3H)
<실시예 12>
화합물 12
의 제조
실시예 8과 동일한 방법으로 화합물 B-V과 화합물 A-X으로부터 화합물 12 (40 mg, 39%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, CD3OD) δ 8.66(s, 1H), 8.60(s, 1H), 7.90(s, 1H), 7.65(s, 1H), 7.19(d, J=15.6Hz, 1H), 6.99(s, 1H), 6.22(m, 1H), 5.92(d, J=4.8Hz, 1H), 5.23(d, J=4.8Hz, 1H), 4.93(m, 2H), 3.82~3.77(m, 3H), 3.68(d, J=18Hz, 1H), 2.80(t, J=6Hz, 2H), 1.61(s, 3H), 1.60(s, 3H)
<실시예 13> 화합물 13의 제조
실시예 8과 동일한 방법으로 화합물 B-V과 화합물 A-XI으로부터 화합물 13 (70 mg, 69%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, CD3OD) δ 8.62(s, 1H), 8.60(s, 1H), 7.90(s, 1H), 7.45(s, 1H), 7.21(d, J=16.2Hz, 1H), 7.06(s, 1H), 6.22(m, 1H), 5.94(d, J=4.8Hz, 1H), 5.23(d, J=4.8Hz, 1H), 4.90 (m, 2H) 3.83~3.65(m, 4H), 2.80(m, 2H), 1.63(s, 3H), 1.61(s, 3H)
<실시예 14>
화합물 14
의 제조
실시예 8과 동일한 방법으로 화합물 B-V과 화합물 A-XII으로부터 화합물 14 (88 mg, 42%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, CD3OD) δ 8.66(s, 1H), 8.65(s, 1H), 7.97(s, 1H), 7.69(s, 1H), 7.23(d, J=16.2Hz, 1H), 7.03(s, 1H), 6.25(m, 1H), 5.94(d, J=4.2Hz, 1H), 5.23(d, J=4.8Hz, 1H), 4.92(m, 2H), 3.85(d, J=18Hz, 1H), 3.69(d, J=17.4Hz), 1.62(s,3H), 1.61(s, 3H)
<실시예 15>
화합물 15
의 제조
실시예 1과 동일한 방법으로 화합물 B-X과 화합물 A-II으로부터 화합물 15 (65 mg, 12%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, CD3OD) δ 8.37(s, 1H), 8.28(s, 1H), 7.87(s, 1H), 7.65(s, 1H), 5.95(d, J=4.8Hz, 1H), 5.28(d, J=14.4Hz, 1H), 5.24(d, J=5.4Hz, 1H), 5.10(d, J=15Hz, 1H), 3.69(m, 3H), 3.43~3.33(m, 3H), 1.56(s, 3H), 1.55(s, 3H)
<실시예 16>
화합물 16
의 제조
실시예 1과 동일한 방법으로 화합물 B-III과 화합물 A-II으로부터 화합물 16 (25 mg, 9%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, DMSO-d6+D2O) δ 8.31(s, 1H), 7.80(s, 1H), 7.79(s, 1H), 7.52(s, 1H), 5.84(d, J=4.8Hz, 1H), 5.12 (d, J=4.8Hz, 1H), 5.05(m, 2H), 3.55~3.20(m, 6H), 1.37(s, 6H)
<실시예 17>
화합물 17
의 제조
실시예 1과 동일한 방법으로 화합물 B-II과 화합물 A-VIII으로부터 화합물 17 (30 mg, 16%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, CD3OD) δ 8.39(d, J=1.8Hz, 1H), 8.00(s, 1H), 7.89(d, J=1.8Hz, 1H), 7.60(s, 1H), 5.96 (d, J=4.8Hz, 1H), 5.34(d, J=14.4Hz, 1H), 5.24(d, J=4.8Hz, 1H), 4.97(d, J=15Hz, 1H), 4.81(q, J=7.2Hz, 1H), 3.65~3.33(m, 6H), 1.51(d, J=7.8Hz, 3H)
<실시예 18>
화합물 18
의 제조
실시예 1과 동일한 방법으로 화합물 B-X과 화합물 A-X으로부터 화합물 18 (69 mg, 20%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, CD3OD) δ 8.78(s, 1H), 8.67(s, 1H), 7.91(s, 1H), 7.65(s, 1H), 5.95(d, J=4.8Hz, 1H), 5.31(d, J=15Hz, 1H), 5.24(d, J=4.8Hz), 5.14(d, J=15.6Hz, 1H), 3.80(m, 2H), 3.70(d, J=18Hz, 1H), 3.14(d, J=18Hz, 1H), 2.78(m, 2H), 1.59(s, 3H), 1.57(s, 3H)
<실시예 19>
화합물 19
의 제조
실시예 1과 동일한 방법으로 화합물 B-III과 화합물 A-X으로부터 화합물 19 (134 mg, 48%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, DMSO-d6+D2O) δ 8.77(s, 1H), 8.64(s, 1H), 7.82(s, 1H), 7.56(s, 1H), 5.91(d, J=4.8Hz, 1H), 5.20~4.97(m, 3H), 3.56(m, 4H), 2.69(m, 2H), 1.43(s, 6H)
<실시예 20> 화합물 20의 제조
실시예 1과 동일한 방법으로 화합물 B-II과 화합물 A-X으로부터 화합물 20 (120 mg, 20%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, DMSO-d6+D2O) δ 8.76(s, 1H), 8.66(s, 1H), 7.82(s, 1H), 7.53(s, 1H), 5.65(d, J=4.2Hz, 1H), 5.09(d, J=14.4Hz, 1H), 4.92(d, J=4.8Hz, 1H), 4.86 (d, J=4.8Hz, 1H), 4.58(q, J=14.4Hz, 1H), 3.56(m, 2H), 3.41(d, J=18Hz, 1H), 3.20(d, J=17.4Hz, 1H), 1.36(s, 3H), 1.35(s, 3H)
<실시예 21>
화합물 21
의 제조
실시예 1과 동일한 방법으로 화합물 B-II과 화합물 A-IV으로부터 화합물 21 (145 mg, 53%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, CD3OD) δ 8.45(s, 1H), 7.93(s, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.61(s, 1H), 5.98 (d, J=4.8Hz, 1H), 5.33 (d, J=14.4Hz, 1H), 5.24(d, J=4.8Hz, 1H), 5.18(d, J=15Hz, 1H), 4.81 (q, J=7.2Hz, 1H), 4.12~3.33(m, 10H), 1.53(d, J=3.6Hz, 3H)
<실시예 22>
화합물 22
의 제조
실시예 1과 동일한 방법으로 화합물 B-X과 화합물 A-XII으로부터 화합물 22 (33 mg, 8%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, CD3OD) δ 8.81(s, 1H), 8.75(s, 1H), 7.97(s, 1H), 7.70(s, 1H), 5.97(d, J=4.8Hz), 5.35(d, J=14.4Hz, 1H), 5.24(d, J=5.4Hz, 1H), 5.01(m, 1H), 3.49~3.43(m, 2H), 1.60(br, 6H)
<실시예 23>
화합물 23
의 제조
실시예 8과 동일한 방법으로 화합물 B-V과 화합물 A-VI으로부터 화합물 23 (11 mg, 28%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 11.72(t, J=6.6Hz, 1H), 11.03(br, 1H), 10.83(br, 1H), 9.48(d, J= 8.4Hz, 1H), 8.98(s, 1H), 8.58(s, 1H), 8.15(br, 1H), 7.81(s, 1H), 7.56(s, 1H) 7.51(s, 1H) 7.33(br, 2H) 6.85(d, J=15.6Hz, 1H), 6.74(s, 1H), 6.28(m, 1H), 5.87(dd, J=5.4Hz, 8.4Hz, 1H), 5.79(br, 1H), 5.23(d, J=4.8Hz, 1H), 4.93(m, 2H), 3.84(d, J=17.4Hz, 1H), 3.62(d, J=7.8Hz 1H) , 3.5~3.09(m, 4H), 1.66(m, 4H), 1.44(s, 3H)1.43(s, 3H)
<실시예 24>
화합물 24
의 제조
실시예 8과 동일한 방법으로 화합물 B-XII과 화합물 A-II으로부터 화합물 24 (49 mg, 38%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 11.76(t, J=5.4Hz, 1), 11.05(s, 1H), 10.90(s, 1H), 9.53(d, J=8.4Hz, 1H), 9.00(s, 1H), 8.42(s, 1H), 8.09(s, 1H), 7.82(s, 1H), 7.69(s, 1H), 7.57(s, 1H), 7.42(br, 2H), 7.12(t, J=7.2Hz, 1H), 6.91(d, J=16.2Hz, 1H), 6.30(m, 1H), 6.05(br, 1H), 5.84(dd, J=4.8Hz, 5.4Hz, 1H), 5.20(d, J=4.8Hz, 1H), 4.91(m, 2H), 4.63(q, J=7.2Hz, 1H), 3.82(d, J=18Hz, 1H), 3.58(m, 3H), 3.30(m, 2H), 1.42(d, J=6.6Hz, 3H)
<실시예 25>
화합물 25
의 제조
실시예 8과 동일한 방법으로 화합물 B-XI과 화합물 A-II으로부터 화합물 25 (26 mg, 36%)을 수득하였다.
1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 11.74(t, J=5.4Hz, 1H), 9.52(d, J=7.8Hz, 1H), 8.97(bs, 1H), 8.44(s, 1H), 8.20(bs, 2H), 8.06(bs, 2H), 7.81(s, 1H), 7.63(s, 1H), 7.11(m, 1H), 6.15(bs, 2H), 5.75(m, 1H), 5.07(m, 1H), 4.94(m, 1H), 4.80(m, 1H), 3.73(m, 2H), 3.55(m, 4H), 1.46(s, 3H), 1.45(s, 3H)
<실시예 26>
화합물 26
의 제조
실시예 8과 동일한 방법으로 화합물 B-XIII과 화합물 A-II으로부터 화합물 26 (22 mg, 29%)을 수득하였다.
1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 11.77(t, J=5.4Hz, 1H), 11.04(bs, 1H), 10.91(bs, 1H), 9.45(d, J=8.4Hz, 1H), 9.00(bs, 1H), 8.42(s, 1H), 8.09(bs, 1H), 7.82(s, 1H), 7.70(s, 1H), 7.57(s, 1H), 7.42(s, 1H), 6.90(d, J=16.2Hz, 1H), 6.29(m, 1H), 6.05(t, J=4.8Hz, 1H), 5.82(dd, J1=8.4Hz, J2=5.4Hz, 1H), 5.20(d, J= 5.4Hz, 1H), 4.88(m, 2H), 3.83(d, J=18.0Hz, 1H), 3.58(m, 3H), 3.29(m, 2H), 1.47(s, 3H), 1.45(s, 3H)
<실시예 27>
화합물 27
의 제조
실시예 1과 동일한 방법으로 화합물 B-VIII과 화합물 A-XIII으로부터 화합물 27 (6 mg, 8%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, CD3OD) δ 8.37(br, 1H), 7.91(br, 1H), 7.34(br, 1H), 6.79(br, 1H), 6.60(br, 1H), 5.95(d, 1.8Hz, 1H), 5.25(m, 2H), 4.94(br, 1H), 3.73~3.23(m, 6H), 3.10(d, J=6.6Hz, 3H), 1.66(d, J=3.6Hz, 6H)
<실시예 28>
화합물 28
의 제조
실시예 1과 동일한 방법으로 화합물 B-VIII과 화합물 A-XIV으로부터 화합물 28 (17mg, 33%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, CD3OD) δ 8.76(s, 1H), 8.66(s, 1H), 7.25(d, J=2.4Hz, 1H), 7.18(dd, J=2.4Hz, 8.4Hz, 1H), 7.04(s, 1H), 6.77(d, J=8.4Hz, 1H), 5.95(d, J=5.4Hz, 1H) 5.29 (d,J=15.6Hz, 1H), 5.21(d, J=4.8Hz, 1H), 4.94(d, J=15.6Hz, 1H), 3.69(m, 3H), 3.41(d, J=18.6Hz, 1H), 2.72(t, J=6.6Hz, 2H), 1.61(s, 6H)
<실시예 29> 화합물 29의 제조
실시예 1과 동일한 방법으로 화합물 B-VIII과 화합물 A-XV으로부터 화합물 29 (42mg30%)을 수득하였다
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 9.62(br, 1H), 9.48(d, J=6.6Hz, 1H), 9.23(s, 1H), 8.43(s, 1H), 8.23(br, 1H), 7.61(s, 1H), 7.37(br, 1H), 6.87(s, 1H), 6.79~6.74(m, 3H), 6.70(s, 1H), 6.17(br, 1H), 5.91(m, 1H), 5.18(d, J=4.8Hz, 1H), 5.06(br, 2H), 4.25(br, 2H), 4.10(br, 2H), 3.48(br, 2H), 3.34(br, 1H), 3.23(br, 1H), 2.71(s, 3H), 1.42(d, J=6.6Hz, 6H)
<실시예 30> 화합물 30의 제조
실시예 1과 동일한 방법으로 화합물 B-VIII과 화합물 A-XVI으로부터 화합물 30 (12 mg, 14%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 9.51(br, 1H), 9.46(d, J=8.4Hz, 1H), 8.35(s, 1H), 8.25(t, J=4.2Hz, 1H), 8.13(s, 1H), 7.61(s, 1H), 7.35(br, 2H), 7.26(d, J=6.6Hz, 1H), 7.15(dd, J=2.4Hz, 7.8Hz, 1H), 6.73(d, J=8.4Hz,1H), 6.675(s, 1H), 5.94(br, 1H), 5.86(dd, J=8.4Hz, 5.4Hz, 1H), 5.15(d, J=5.4Hz, 5.07(m, 2H), 3.5~3.34 (m, 4H), 3.18(m , 2H), 1.38(s, 3H), 1.36(s, 3H)
<실시예 31>
화합물 31
의 제조
실시예 1과 동일한 방법으로 화합물 B-VIII과 화합물 A-XVIII으로부터 화합물 31 (10 mg, 16%) 수득하였다.
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 9.49(d, J=8.4Hz, 1H), 9.09(br, 1H) 8.38(s, 1H), 8.25(br, s) 8.25(t, J=5.4Hz, 1H), 7.54(s, 1H), 7.34(br, 2H), 7.27(d, J= 1.8Hz, 1H), 7.15(dd, J=1.8Hz, 6.6Hz, 1H), 6.76(d, J=7.8Hz, 1H), 6.71(s, 1H), 5.92(dd, J=4.8Hz, 8.4Hz, 1H), 5.84(br, 1H), 5.19(d, J=4.8Hz, 5.05(m, 2H), 3.5~3.32 (m, 4H), 3.07(m, 2H), 1.88(m, 2H), 1.42(s, 3H), 1.41(s, 3H)
<실시예 32>
화합물 32
의 제조
실시예 1과 동일한 방법으로 화합물 B-VIII과 화합물 A-XIX으로부터 화합물 32 (65 mg, 24%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, DMSO-d6+D2O) δ 8.76(s, 1H), 8.73(s, 1H), 7.30(d, J=2.4Hz, 1H), 7.25(dd, J=2.4Hz, 8.4Hz, 1H), 6.83(dd, J=1.2Hz, 7.8Hz, 6.76(s, 1H), 5.90(4.2Hz, 1H), 5.20 (d, J=4.8Hz, 1H), 5.14(d, J=15Hz, 1H), 4.99(d, J= 15Hz, 1H), 4.08(s, 2H), 3.60(dd, J=18Hz, 59.4Hz, 2H), 1.46(s, 3H), 1.44(s, 3H)
<실시예 33>
화합물 33
의 제조
실시예 1과 동일한 방법으로 화합물 B-VIII과 화합물 A-XX으로부터 화합물 33 (15 mg, 12%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, DMSO-d6+D2O) δ 8.34(s, 1H), 8.21(br, s, 1H) 7.77(d, J=6Hz, 1H), 7.73(s, 1H), 6.81(d, J=8.4Hz, 1H), 6.67 (s, 1H), 5.77(d, J=4.2Hz, 1H), 5.10(d, J=4.2Hz, 1H), 5.04~4.86(m, 2H), 3.55~3.20 (m, 6H), 1.39(s, 3H), 1.37(s, 3H)
<실시예 34>
화합물 34
의 제조
실시예 1과 동일한 방법으로 화합물 B-I과 화합물 A-XXI으로부터 화합물 34 (10mg, 9%) 수득하였다.
1H NMR (600MHz, CD3OD) δ 8.33(s, 1H), 7.83(s, 1H), 7.25(s, 1H), 7.20(d, J=7.8Hz, 1H), 6.97(s, 1H), 6.79(d, J=8.4Hz, 1H),5.92(d, J=4.8Hz, 1H), 5.21~ (m, 2H), 4.92(m, 2H), 3.72~3.67(m, 6H), 1.51(2, J=7.2Hz, 3H)
<실시예 35> 화합물 35의 제조
실시예 1과 동일한 방법으로 화합물 B-II과 화합물 A-XXI으로부터 화합물 35 (49 mg, 31%) 수득하였다.
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 9.54(m, 2H) 9.14(s, 1H), 9.06(s, 1H), 8.36(s, 1H), 8.30 (t, J=5.4Hz, 1H), 8.15(s, 1H), 7.75 (s,1H), 7.42(s, 1H), 7.32(s, 1H), 7.19(dd, J=1.8Hz,7.8Hz, 1H), 6.76(d, J=7.8Hz, 1H), 5.98(t, J=5.4Hz, 1H), 5.87(dd, J=5.4Hz, 7.8Hz, 1H), 5.15(d, J=4.8Hz, 1H), 5.08(m, 2H), 4.60(q, J=7.2Hz, 1H), 3.52~3.20(m, 6H), 1.40(d, J=6.6Hz, 3H)
<실시예 36>
화합물 36
의 제조
실시예 1과 동일한 방법으로 화합물 B-VIII과 4,5-다이아미노피리미딘으로부터 화합물 36 (12mg, 52%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, CD3OD) δ 8.34(d, J=1.8Hz, 1H), 7.78(d, J=1.8Hz, 1H), 7.02(s, 1H), 5.99(d, J=4.8Hz, 1H) 5.30~4.90 (m, 3H), 3.65(d, J=18Hz, 1H), 3.34(d, J=18Hz, 1H), 1.60(s, 6H)
<실시예 37>
화합물 37
의 제조
실시예 1과 동일한 방법으로 화합물 B-II과 화합물 A-I으로부터 화합물 37 (19 mg, 31%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, CD3OD) δ 8.43(s, 1H), 7.94(s, 1H), 7.04(s, 1H), 5.90(d, J=4.8Hz, 1H), 5.25~4.8(m, 3H), 3.70(d, J=18.6Hz, 1H), 3.49(t, J=6Hz, 1H), 3.30~3.25(m, 3H), 1.62(s, 6H)
<실시예 38>
화합물 38
의 제조
실시예 1과 동일한 방법으로 화합물 B-VIII과 화합물 A-XXII으로부터 화합물 38 (7 mg, 9%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, CD3OD) δ 8.36(s, 1H), 7.70(s, 1H), 7.04(s, 1H), 5.98(d, J=4.8Hz, 1H), 5.27~4.8(m, 3H), 3.70~3.50(m, 2H), 3.49(m, 2H), 2.45(m, 2H), 1.98(m, 2H), 1.62(s, 6H)
<실시예 39> 화합물 39의 제조
실시예 1과 동일한 방법으로 화합물 B-VIII과 화합물 A-XXIII으로부터 화합물 39 (2 mg, 2%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, CD3OD) δ 8.42(d, J=1.8Hz, 1H), 7.70(d, J=1.8Hz, 1H), 6.99(s, 1H), 5.92(d, J=4.8Hz, 1H) 5.27~4.90 (m, 3H), 3.63(d, J=18Hz, 1H), 3.34(d, J=18Hz, 1H), 3.15(d, J=3.6Hz, 3H), 1.62(s, 6H)
<실시예 40>
화합물 40
의 제조
실시예 1과 동일한 방법으로 화합물 B-VIII과 화합물 A-XXIV으로부터 화합물 40(12 mg, 18%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, CD3OD) δ 8.41(d, J=1.8Hz, 1H), 7.98(d, J=1.8Hz, 1H), 7.03(s, 1H), 5.91(d, J=4.8Hz, 1H), 5.23~4.90 (m, 3H), 3.68~3.37(m, 6H), 1.60(s, 6H)
<실시예 41> 화합물 41의 제조
실시예 1과 동일한 방법으로 화합물 B-VIII과 화합물 A-XXVI으로부터 화합물 41 (70 mg, 40%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, DMSO-d6+D2O) δ 8.46(s, 1H), 7.49(s, 1H), 6.74(s, 1H), 5.90(d, J=4.2Hz, 1H), 5.20(d, J=4.8Hz, 1H), 5.10(q, J=15.6Hz, 2H), 3.62~3.40(m, 6H), 3.03(br, 2H), 2.83(br, 4H), 1.66~1.59(m, 8H), 1.44(s, 3H), 1.43(s, 3H)
<실시예 42>
화합물 42
의 제조
실시예 8과 동일한 방법으로 화합물 B-XII과 화합물 A-XXVII으로부터 화합물 42 (6.2 mg, 28%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, CD3OD) δ 8.26(s, 1H), 7.41(s, 1H), 7.09(d, J=16.2Hz, 1H), 6.25(m, 1H), 5.91(d, J=4.8Hz, 1H), 5.21(d, J=4.8Hz, 1H), 3.82(d, J=18Hz, 1H), 3.66(d, J=18Hz, 1H), 3.21(br, 2H), 2.99(br, 2H), 1.80(br, 4H), 1.62(s, 3H), 1.61(s, 3H)
<실시예 43>
화합물 43
의 제조
실시예 8과 동일한 방법으로 화합물 B-V과 화합물 A-XXVIII으로부터 화합물 43 (38.7 mg, 38%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, CD3OD) δ 8.25(s, 1H), 7.04(s, 1H), 6.16(m, 1H), 5.92(d, J=4.8Hz, 1H), 5.22(d, J=4.8Hz, 1H), 4.87(m, 2H), 3.98(s, 2H), 3.83(d, J=18Hz, 1H), 3.68(d, J=18Hz, 1H), 1.63(s, 3H), 1.61(s, 3H)
<실시예 44> 화합물 44의 제조
실시예 8과 동일한 방법으로 화합물 B-V과 화합물 A-XXIX으로부터 화합물 44 (11.4 mg, 13%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, CD3OD) δ 8.11(s, 1H), 7.00(s, 1H), 6.76(d, J=16.8Hz, 1H), 6.10(d, J=15.6Hz, 1H), 5.87(br, 1H), 5.20(br, 1H), 4.88(m, 2H), 3.78(d, J=17.4Hz, 1H), 3.67(d, J=16.8Hz, 1H), 3.11(m, 4H), 1.62(s, 3H), 1.60(s, 3H)
<실시예 45>
화합물 45
의 제조
실시예 8과 동일한 방법으로 화합물 B-V와 화합물 A-XXX으로부터 화합물 45 (30 mg, 30%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, CD3OD) δ 8.23(s, 1H), 7.03(d, J=16.8Hz, 1H), 6.98(s, 1H), 6.13(m, 1H), 5.91(d, J=5.4Hz, 1H), 5.21(d, J=4.8Hz, 1H), 4.90(m, 2H), 3.81(d, J=17.4Hz, 1H), 3.66(d, J=17.4Hz, 1H), 3.29(t, J=6Hz, 2H), 2.93(t, J=6Hz, 2H), 1.62(s, 3H), 1.60(s, 3H)
<실시예 46>
화합물 46
의 제조
실시예 8과 동일한 방법으로 화합물 B-XIII과 화합물 A-XXXI으로부터 화합물 46 (20 mg, 18%)을 수득하였다.
1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 9.48(m, 1H), 8.93(bs, 1H), 8.36(s, 1H), 7.97(bs, 1H), 7.76(bs, 1H), 7.75(bs, 2H), 7.47(bs, 1H), 7.42(s, 1H), 6.92(d, J=16.2Hz, 1H), 6.08(m, 1H), 5.80(m, 1H), 5.19(d, J=4.8Hz, 1H), 4.82(m, 2H), 3.80(d, J=18.0Hz, 1H), 3.55(d, J=18.0Hz, 1H), 2.83(m, 2H), 2.44(m, 2H), 1.82(m, 2H), 1.48(s, 3H), 1.46(s, 3H)
<실시예 47>
화합물 47
의 제조
실시예 1과 동일한 방법으로 화합물 B-V과 화합물 A-XXXII으로부터 화합물 47 (1mg, 5%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, CD3OD) δ 8.37(s, 1H), 7.52(s, 1H), 6.98(s, 1H), 6.73(m, 1H), 6.01(m, 2H), 5.21~4.90(m, 3H), 3.98(m, 2H), 3.81(m, 2H), 1.58(s, 3H), 1.56(s, 3H)
<실시예 48>
화합물 48
의 제조
실시예 1과 동일한 방법으로 화합물 B-VIII과 화합물 A-IX으로부터 화합물 48 (52 mg, 58%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, CD3OD) δ 8.89(d, J=1.8Hz, 1H), 8.72(d, J=1.8Hz, 1H), 7.07(s, 1H), 5.97(d, J=5.4Hz, 1H), 5.33~4.8(m, 3H), 3.71(d, J=18.6Hz, 1H), 3.41(d, J=18.6Hz, 1H), 3.26~2.91(m, 4H), 1.62(s, 6H)
<실시예 49>
화합물 49
의 제조
실시예 1과 동일한 방법으로 화합물 B-III과 화합물 A-I으로부터 화합물 49 (8 mg, 9%)을 수득하였다.
1H NMR (600 MHz, DMSO-6d) δ 9.54(bs, 1H), 9.06(bs, 1H), 8.44(s, 1H), 8.21(bs, 3H), 7.56(s, 1H), 6.86(d, J=16.2Hz, 1H), 6.29(bs, 1H), 6.05(m, 1H), 5.76(m, 1H), 5.13(d, J=4.8Hz, 1H), 4.85(m, 2H), 3.66(d, J=16.8Hz, 1H), 3.49(d, J=17.4Hz, 1H), 3.02(m, 4H), 1.47(s, 3H), 1.46(s, 3H)
<실시예 50>
화합물 50
의 제조
실시예 1과 동일한 방법으로 화합물 B-V과 화합물 A-I으로부터 화합물 50 (3.5 mg, 7%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, CD3OD) δ 8.31(s, 1H), 7.53(s, 1H), 7.05(m, 2H), 6.22(m, 1H), 5.90(d, J=4.8Hz, 1H), 5.19(d, J=4.8Hz, 1H), 3.80(d, 17.4Hz 1H), 3.64(d, J=17.4Hz, 1H), 3.52 (t, J=6Hz, 2H), 3.24(t, J=6Hz, 2H) 1.61(s, 3H), 1.59(s, 3H)
<실시예 51>
화합물 51
의 제조
실시예 8과 동일한 방법으로 화합물 B-V과 화합물 XXXI으로부터 화합물 51 (48 mg, 60%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, CD3OD) δ 8.33(s, 1H), 7.58(s, 1H), 7.11~7.06(m, 2H), 6.27(m, 1H), 5.92(d, J=4.8Hz, 1H), 5.23(d, J=4.8Hz, 1H), 4.93(m, 2H), 3.84(d, J=18Hz, 1H), 3.68(d, J=18Hz, 1H), 3.57(br, 2H), 3.31(m, 2H), 2.76(s, 3H), 1.64(s, 3H), 1.63(s, 3H)
<실시예 52>
화합물 52
의 제조
실시예 8과 동일한 방법으로 화합물 B-VII과 화합물 A-I으로부터 화합물 52 (18 mg, 30%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, CD3OD) δ 8.31(s, 1H), 7.54(s, 1H), 7.06(m, 2H), 6.22(m, 1H), 5.91(d, J=5.4Hz, 1H), 5.19(d, J=5.4Hz, 1H), 4.80(m, 1H), 3.80(d, 17.4Hz 1H), 3.65(d, J=17.4Hz, 1H), 3.50(t, J=6Hz, 2H), 3.24(t, J=6Hz, 2H) 1.55(d, J=6.6Hz, 3H)
<실시예 53>
화합물 53
의 제조
실시예 8과 동일한 방법으로 화합물 B-XII과 화합물 A-I으로부터 화합물 53 (30 mg, 33%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ 9.53(d, J=7.8Hz, 1H), 9.11(s, 1H), 8.47(s, 1H), 8.07(s, 1H), 7.87(s, 2H), 7.60(s, 1H), 7.42(s, 1H), 6.91(d, J=16.2Hz, 1H), 6.26(m, 1H), 6.02(br, 1H), 5.84(dd, J=4.8Hz, 4.8Hz, 1H), 5.20(d, J=4.8Hz, 1H), 4.93(m, 2H), 4.63(q, J=7.2Hz, 1H), 3.81(d, J=18Hz, 1H), 3.58(d, J=18Hz, 1H), 3.32(m, 2H), 3.06(br, 2H), 1.43(d, J=7.2Hz, 3H)
<실시예 54>
화합물 54
의 제조
실시예 8과 동일한 방법으로 화합물 B-XIII과 화합물 A-I으로부터 화합물 54 (29 mg, 30%)을 수득하였다.
1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 11.77(t, J=5.4Hz, 1H), 11.04(bs, 1H), 10.91(bs, 1H), 9.45(d, J=8.4Hz, 1H), 9.00(bs, 1H), 8.42(s, 1H), 8.09(bs, 1H), 7.82(s, 1H), 7.70(s, 1H), 7.57(s, 1H), 7.42(s, 1H), 6.90(d, J=16.2Hz, 1H), 6.29(m, 1H), 6.05(t, J=4.8Hz, 1H), 5.82(dd, J1=8.4Hz, J2=5.4Hz, 1H), 5.20(d, J=5.4Hz, 1H), 4.88(m, 2H), 3.83(d, J=18.0Hz, 1H), 3.58(m, 3H), 3.29(m, 2H), 1.47(s, 3H), 1.45(s, 3H)
<실시예 55>
화합물 55
의 제조
실시예 8과 동일한 방법으로 화합물 B-XI과 화합물 A-I으로부터 화합물 55 (26 mg, 29%)을 수득하였다.
1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 9.54(bs, 1H), 9.06(bs, 1H), 8.44(s, 1H), 8.21(bs, 3H), 7.56(s, 1H), 6.86(d, J=16.2Hz, 1H), 6.29(bs, 1H), 6.05(m, 1H), 5.76(m, 1H), 5.13(d, J=4.8Hz, 1H), 4.85(m, 2H), 3.66(d, J=16.8Hz, 1H), 3.49(d, J=17.4Hz, 1H), 3.02(m, 4H), 1.47(s, 3H), 1.46(s, 3H)
<실시예 56>
화합물 56
의 제조
실시예 8과 동일한 방법으로 화합물 B-XI과 화합물 A-XVII으로부터 화합물 56 (38 mg, 32%)을 수득하였다.
1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 9.48(d, J=9.0Hz, 1H), 9.04(bs, 1H), 8.42(s, 1H), 8.21(bs, 3H), 7.57(s, 1H), 6.91(d, J=16.2Hz, 1H), 6.14(m,2H), 5.76(bs, 1H), 5.14(m, 1H), 4.84(bs, 1H), 3.53(m, 2H), 3.21(m, 2H), 2.90(m, 2H), 1.88(m, 2H), 1.46(s, 3H), 1.46(s, 3H)
<실시예 57>
화합물 57
의 제조
실시예 8과 동일한 방법으로 화합물 B-XIII과 화합물 A-XVI으로부터 화합물 57 (30 mg, 25%)을 수득하였다.
1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 9.41(m, 1H), 9.04(bs, 1H), 8.42(s, 1H), 8.22(bs, 2H), 7.58(bs, 1H), 7.42(s, 1H), 6.91(d, J=15.6Hz, 1H), 6.13(m, 2H), 5.73(m, 1H), 5.13(m, 1H), 4.85(m, 2H), 3.52(m, 2H), 3.22(bs, 2H), 2.89(bs, 2H), 1.87(m, 2H), 1.48(s, 3H), 1.46(s, 3H)
<실시예 58>
화합물 58
의 제조
실시예 8과 동일한 방법으로 화합물 B-XIII과 화합물 A-XXVII으로부터 화합물 58 (9 mg, 24%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, CD3OD) δ 8.27(s, 1H), 7.41(s, 1H), 7.10(d, J=15.6Hz, 1H), 6.27(m, 1H), 5.90(d, J=4.8Hz, 1H), 5.21(d, J=4.8Hz, 1H), 4.91(m, 2H), 3.85(d, J=18.6Hz, 1H), 3.66(d, J=18Hz, 1H), 3.21(br, 2H), 3.00(br, 2H), 1.80(br, 4H), 1.60(s, 3H), 1.59(s, 3H)
<실시예 59>
화합물 59
의 제조
실시예 8과 동일한 방법으로 화합물 B-V과 화합물 A-XXXIII으로부터 화합물 59 (47 mg, 49%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, CD3OD) δ 8.65(s, 1H), 8.60(s, 1H), 7.19(d, J=16.2Hz, 1H), 6.97(s, 1H), 6.20(m, 1H), 5.92(d, J=4.8Hz, 1H), 5.21(d, J=4.8Hz, 1H), 4.93~4.83(m, 2H), 3.98(s, 2H), 3.80(d, J=18Hz, 1H), 3.66(d, J=18Hz, 1H), 1.62(s, 3H), 1.6(s, 3H)
<실시예 60>
화합물 60
의 제조
실시예 8과 동일한 방법으로 화합물 B-V과 화합물 A-IX으로부터 화합물 60 (49 mg, 53%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, CD3OD) δ 8.63(s, 1H), 8.62(s, 1H), 7.17(d, J=16.2Hz, 1H), 6.97(s, 1H), 6.19(m, 1H), 5.92(d, J=4.8Hz, 1H), 5.22(d, J=5.4Hz, 1H), 4.92~4.8(m, 2H), 3.80(d, J=18Hz, 1H), 3.66(d, J=17.4Hz, 1H), 3.28(m, 2H), 2.91(t, J=6Hz, 2H), 1.62(s, 3H), 1.60(s, 3H)
<실시예 61>
화합물 61
의 제조
실시예 8과 동일한 방법으로
화합물 B-XI과
화합물 A-IX으로부터
화합물 61 (6.8 mg, 10%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, CD3OD) δ 8.62(s, 1H), 8.60(s, 1H), 7.23(d, J=15.6Hz, 1H), 6.22(m, 1H), 5.92(d, J=4.8Hz, 1H), 5.19(d, J=4.8Hz, 1H), 4.91(m, 2H), 3.80(d, 17.4Hz 1H), 3.64(d, J=17.4, 1H), 3.28(m, 2H), 2.90(t, J=6Hz, 2H), 1.60(s, 3H), 1.58(s, 3H)
<실시예 62>
화합물 62
의 제조
실시예 8과 동일한 방법으로 화합물 B-XIII과 화합물 A-IX으로부터 화합물 62 (11 mg, 13%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, CD3OD) δ 8.45(s, 1H), 8.43(s, 1H), 7.09(d, J=16.2Hz, 1H), 6.12(m, 1H), 5.87(d, J=4.8 Hz, 1H), 5.17(d, J=5.4Hz, 1H), 4.89(m, 2H), 3.74(d, J=17.4Hz 1H), 3.61(d, J=17.4Hz, 1H), 3.30(m, 2H), 2.90(m, 2H), 1.59(s, 3H), 1.57(s, 3H)
<실시예 63>
화합물 63
의 제조
실시예 8과 동일한 방법으로 화합물 B-V과 화합물 A-XXVI으로부터 화합물 63 (46 mg, 57%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, CD3OD) δ 8.66(d,J=1.8Hz, 1H), 8.61(d, J=1.8Hz), 7.18(d, 15.6Hz, 1H), 6.96(s, 1H), 6.19(m, 1H), 5.92(d, J=4.8Hz, 1H), 5.22(d, J=5.4Hz, 1H), 4.91(m, 2H), 3.81(d, J=18Hz, 1H), 3.66(d, J=18Hz, 1H), 3.04(t, J=7.2Hz, 2H), 2.66(t, J=6.6Hz, 2H), 2.04(m, 2H), 1.62(s, 3H), 1.60(s, 3H)
<실시예 64>
화합물 64
의 제조
실시예 8과 동일한 방법으로 화합물 B-XIII과 화합물 A-XXVI으로부터 화합물 64 (12 mg, 14%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, CD3OD) δ 8.69(s, 1H), 8.59(s, 1H), 7.20(d, J=16.2Hz, 1H), 6.24(m, 1H), 5.92(d, J=4.8Hz, 1H), 5.21(d, J=4.8Hz, 1H), 4.93(m, 2H), 3.84(d, J=18Hz, 1H), 3.67(d, J=18Hz, 1H), 3.03(br, 2H), 2.66(br, 2H), 2.03(br, 2H), 1.60(s, 3H), 1.59(s, 3H)
<실시예 65>
화합물 65
의 제조
실시예 8과 동일한 방법으로 화합물 B-XI과 화합물 A-XXVI으로부터 화합물 65 (39 mg, 48%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, CD3OD) δ 8.65(s, 1H), 8.61(s, 1H), 7.19(d, J=15.6Hz, 1H), 6.22(m, 1H), 5.93(d, J=4.8Hz, 1H), 5.21(d, J=4.8Hz, 1H), 4.92(m, 2H), 3.82(d, J=18Hz, 1H), 3.66(d, J=17.4Hz, 1H), 3.04(t, J=7.2Hz, 2H), 2.66(t, J=6.6Hz, 2H), 2.04(m, 2H), 1.62(s, 3H), 1.60(s, 3H)
<실시예 66>
화합물 66
의 제조
실시예 8과 동일한 방법으로 화합물 B-V과 화합물 A-XXX으로부터 화합물 66 (30 mg, 32%)을 수득하였다.
1H NMR (600MHz, CD3OD) δ 8.23(s, 1H), 7.03(d, J=16.8Hz, 1H), 6.98(s, 1H), 6.13(m, 1H), 5.91(d, J=5.4Hz, 1H), 5.21(d, J=4.8Hz, 1H), 4.90(m, 2H), 3.81(d, J=17.4Hz, 1H), 3.66(d, J=17.4Hz, 1H), 3.29(t, J=6Hz, 2H), 2.93(t, J=6Hz, 2H), 1.62(s, 3H), 1.60(s, 3H)
<실시예 67>
화합물 67
의 제조
실시예 8과 동일한 방법으로 화합물 B-XIII과 화합물 A-XXXI으로부터 화합물 67 (20 mg, 18%)을 수득하였다.
1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 9.48(m, 1H), 8.93(bs, 1H), 8.36(s, 1H), 7.97(bs, 1H), 7.76(bs, 1H), 7.75(bs, 2H), 7.47(bs, 1H), 7.42(s, 1H), 6.92(d, J=16.2Hz, 1H), 6.08(m, 1H), 5.80(m, 1H), 5.19(d, J=4.8Hz, 1H), 4.82(m, 2H), 3.80(d, J=18.0Hz, 1H), 3.55(d, J=18.0Hz, 1H), 2.83(m, 2H), 2.44(m, 2H), 1.82(m, 2H), 1.48(s, 3H), 1.46(s, 3H)
<실시예 68>
화합물68
의 제조
B-IX 화합물(170 mg, 0.182 mmol), 4,5-다이아미노피리미딘(20 mg, 0.182 mmol)을 N,N-다이메틸포름아마이드(1.5 mL)에 녹이고, 소듐 브로마이드(37.5 mg, 0.364 mmol)를 첨가하고 상온에서 9시간 교반했다. 포타슘 아이오다이드(211 mg, 1.27 mmol), N,N-다이메틸포름아마이드(1 mL)를 첨가하고 -40℃에서 교반하면서 아세틸 클로라이드(71mg, 0.91 mmol)을 첨가 한 후 5분 교반하고, 0℃에서 1시간 교반했다. 반응용액을 소금물(5 mL)에 소듐 티아 설페이트 5수화물을 녹인 수용액에 0℃에서 첨가하여 얻은 고체를 메틸렌클로라이드(15 mL)에 녹이고 관크로마토그래피(MC : MeOH = 50 : 1 ~ 10 : 1)를 시행하여 사차염 화합물 78 mg(42%) 수득하였다.
사차염 화합물(78 mg, 0.075 mmol)을 메틸렌클로라이드(0.5 mL)에 녹이고 트리에틸실레인(0.5 mL)과 트리프로로아세트산(1.5 mL)을 순차적으로 첨가한 후 상온에서 4시간 교반 하였다. 반응용액에 아이소프로필에테르(25 mL)을 첨가한 후 생성된 고체를 감압 여과하여 화합물 68(50 mg, 99%)을 수득하였다(반응 중간에 아세틸클로라이드로 인하여 4,5-다이아미노피리미딘의 5번 아민위치에 아세틸레이션 된 화합물 68이 생성되었다).
1H NMR (600MHz, CD3OD) δ 8.79(d, J=1.8Hz, 1H), 8.70(d, J=1.8Hz, 1H), 7.08(s, 1H), 6.00(d, J=4.8Hz, 1H) 5.32(d, J=14.4Hz, 1H), 5.27(d, J=4.8Hz, 1H), 4.8(d, J=14.4Hz, 1H), 3.71(d, J=18.6Hz, 1H), 3.44(d, J=18Hz, 1H), 1.60(d, J=1.2Hz, 6H)
<실험예 1> 시험관 내 항균활성 측정
상기 실시예 1 내지 68에서 합성한 세파로스포린 유도체의 항균력을 알아보기 위하여 시험관 내 활성 검사를 하기와 같은 방법으로 수행하였다.
본 발명의 실시예 1 내지 68의 세파로스포린 유도체들의 시험관 내 항균 활성은 분광 측정에 의한 약물 비처리 대조군 성장과 비교하여 균의 성장을 90%까지 억제할 수 있는 항생제의 최소 농도인 90% 억제 농도(MIC90, ug/mL)를 측정하는 것으로 평가하였다. MIC90는 CLSI 표준[참고: Clinical and Laboratory Standards Institute Document.(2000) Methods for Dilution Antimicrobial Susceptibility Test for Bacteria that Grow Aerobically-Fifth Edition:M7-A5. CLSI, Villanova, PA]에 기초한 브로스 마이크로 희석법(Broth microdilution method)로 측정하였다.
대조물질로는 화학식 B에 나타낸 세프타지딤 (ceftazidime)과 화학식 C에 나타낸 CXA-101및 화학식 D에 나타낸 도리페넴(Doripenem)을 사용하여 항균활성을 비교하였으며 그 결과를 하기 표 1 및 표 2에 나타내었다.
[화학식 B]
[화학식 C]
[화학식 D]
상기 화학식 B에 나타낸 세프타지딤은 3세대 세파계 항생제로서 현재 P.aeruginosa에 의한 감염치료에 많이 사용되고 있는 약물이며, 화학식 C에 나타낸 CXA-101은 현재 Cubist에서 그람음성균에 의한 감염치료제로 임상 2상을 진행중인 세파계 항생제이다. 또한, 화학식 D에 나타낸 도리페넴은 다제내성 그람음성균 감염에 가장 많이 사용되고 있는 항생제인 카바페넴 계열의 항생제로 다제내성 그람음성균 감염에 가장 효과적인 치료제 중의 하나이다.
1) 시험 균주
모락셀라 카타랄리스 (M. catarrhalis), 슈도모나스 아리지노사(P. aeruginosa : 5개 균주) , 크립셀라 뉴모니아 (K. pneumoniae : 6개 균주) , 아시네토박터 바우마니 (A. baumannii : 3 개 균주) , 이콜라이(E.coli : 2개 균주), 아시네토박터 칼코아세티쿠스 (A. calcoaceticus), 엔트로박터 클로아세 (E. cloacae) 등 총 19 개 균주에 대해 활성도를 측정하였으며 그 결과를 표 1에 나타내었다.
2) 시험물질 제조법
시험물질(실시예 1 내지 68에서 합성한 본 발명에 따른 세파로스포린 유도체 화합물 1 내지 68)을 10240 ug/mL의 농도로 DMSO에 녹인 후 2배(fold)씩 희석하여 멸균된 3차 증류수로 20배(fold) 희석하였다. 항균 실험 시 최종농도는 최고 128ug/mL에서 최저 0.0625ug/mL이었으며, 부형제로 사용된 DMSO의 농도는 최종적으로 2.5%(V/V)였다.
<표 1> 화학식 1의 화합물들의 항균력 (MIC90, ug/mL)
1: 모락셀라 카타하리스 (M. catarrhalis)
2 ~ 6: 슈도모나스 아리지노사 (P.aeruginosa)
7 ~ 12: 크립셀라 뉴모니아 (K.pneumoniae)
13 ~ 15: 아시네토박터 바우마니 (A.baumannii)
16: 아시네토박터 칼코아세티쿠스 (A. calcoaceticus)
17 ~ 18: 이콜라이 (E.coli)
19: 엔트로박터 클로아세 (E.cloacae)
상기 표1에 나타낸 바와 같이 본 발명의 화합물들 중 사이드로포어를 도입한 화합물들은 사이드로포어를 도입하지 않은 화합물들보다 훨씬 뛰어난 항균력을 보여주고 있다. 또한 사이드로포어의 종류와 도입 위치에 따라서도 활성의 차이가 있으며 적절한 위치에 사이드로포어를 도입하는 것이 활성에 큰 영향을 미치고 있음을 알 수 있다.
화학식 1의 화합물 중에서 사이드로포어의 도입으로 항균력이 많이 증가한 4종의 화합물에 대해서 주요 내성 그람음성균에 대한 활성을 알아보기 위해, 주요 내성 그람음성균의 임상균주 슈도모나스 아리지노사 (P.aeruginosa : 16개 균주), 크립셀라 뉴모니아 (K.pneumoniae : 38개 균주), 아시네토박터 바우마니 (A.baumannii : 6개 균주) 대해 활성도를 측정하였으며 대조약물과 비교하여 그 결과를 표 2에 나타내었다.
표 2에 나타낸 수치는 전체 균주에서 각각의 MIC 값을 가지는 균주의 수를 나타낸다.
<표 2> 주요 임상균주에 대한 항균력 시험결과 (MIC90, ug/mL)
상기 표2에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 세파로스포린 유도체 화합물들 중 사이드로포어를 도입한 화합물들은 현재 치료제로 사용중인 화합물(세프타지딤, 도리페넴) 및 개발 중인 화합물(CXA-101) 보다 더 우수한 활성 스펙트럼을 보이며, 특히 그람음성균에서 가장 문제가 되고있는 슈도모나스 아리지노사(P. aeruginosa) 내성균주에 대한 활성이 뛰어나다. 따라서, 최근 발현하기 시작하여 앞으로 큰 문제가 될 수 있는 다제내성 그람음성균 치료제로 유용하게 사용 될 수 있음을 보여준다.
<실험예 2> 전신감염 마우스에서의 약효 측정
본 발명에 의한 세파로스포린 유도체 화합물들에 대한 약효 측정 실험은 전신감염 마우스 모델을 이용하여 알아보았다. 항균력이 뛰어난 두 화합물에 대해 감수성 균주와 내성균주에 대해 생존율과 ED50 값을 아래의 표 3 및 표 4에 각각 나타내었다.
시험동물: Mouse, ICR 3주령 수컷, 중량 18~22g, 5마리/그룹
동물실조건: 온도 23 ± 2℃, 습도 55 ± 20%
투여방법: 균액으로 전신감염 유도후 1시간, 4시간 후에 0.2 mL 피하투여(sc).
시험방법: 전신감염 접종을 위해, 배양한 균을 0.9% NaCl로 희석하여 최소치사농도의 5~10 배 농도의 균액을 제조하였다. 0.5 mL 의 감염 균액을 복강내에 주사하여 전신감염을 유도하였으며 약물 투여 농도는 시험균주에 대한 약물의 시험관내 MIC를 참고하여, 저농도로부터 고농도까지 4 단계의 용량을 사용하였다. 감염 후 1 시간과 4 시간 후에 각 약물에 대해 4 가지의 다른 농도의 약물을 마우스에 피하투여한 후 4 일 간 마우스의 생존률을 관찰하여, Probit의 방법으로 50%의 마우스를 생존시킬 수 있는 약물의 농도(ED50)를 구하였다.
<표 3> 세프타지딤 감수성 P. aeruginosa 균을 이용한 전신감염 마우스에서의 약효
감염균주: P. aeruginosa 1912E (2 x 106CFU/mouse)
<표 4> 세프타지딤 내성 P. aeruginosa 균을 이용한 전신감염 마우스에서의 약효
감염균주: P. aeruginosa R1023 (2 x 106CFU/mouse)
항균력이 비슷한 감수성 균주에서 전신감염 마우스를 이용한 약효 실험 결과 화합물 8은 대조약물인 세프타지딤과 거의 비슷하거나 약간 우수한 약효를 나타내었으나, 내성균주에 의한 전신감염 마우스에서는 화합물 4가 대조약물인 세프타지딤보다 월등히 좋으며, P. aeruginosa 균에 의한 감염치료에서 가장 우수한 치료제로 꼽히는 카바페넴 계열의 약물인 도리페넴보다도 우수한 약효를 보여주고 있다.
이러한 결과는 사이드로포어를 도입하여 in vitro 상에서 뛰어난 활성을 보일뿐 아니라 in vivo 상에서도 우수한 약효를 유지하고 있음을 보여준다. 일반적으로 많이 사용되고 있는 사이드로포어인 카테콜의 경우 카테콜-오-메틸전이 효소 (COMT, catechol O-metyl transferase)에 의해 in vivo 에서는 활성이 급격히 떨어지게 되는데 반해, 본 발명의 화합물들은 이러한 효소에 의한 활성감소 현상이 크게 나타나지 않으며 여전히 좋은 활성을 보여주고 있다. 이러한 결과로 본 발명의 화합물들은 현재 치료가 어려운 내성균주에 대해 좋은 치료제로 사용할 수 있음을 보여준다.
<실험예 3> 약동학 실험(Pharmacokinetics)
본 발명에 의한 세파로스포린 유도체 화합물들 중 약효가 우수한 약물들에 대해 rat에서의 PK실험을 수행하였으며 대표적인 두 약물에 대한 결과를 아래의 표 5 에 나타내었다.
시험동물: Rat, SD 9주령, 중량 290∼310 g, 3마리/채혈시간
동물실조건: 온도 21 ± 2℃, 습도 50 ± 20%
투여방법: 약물용액을 꼬리정맥으로 투여 (IV)
시험방법: 약물투여 후 24시간까지 지정된 시간에 경정맥에서 채혈한 후 혈장을 분리하여 LC-MS/MS 법으로 정량하였다.
<표 5> 약동학 실험 결과
상기 표에 나타낸 바와 같이 본 발명의 신규한 세파로스포린 유도체는 높은 혈중농도를 유지하고 있으며 우수한 약동학 프로파일을 보여주고 있으므로 약물로서의 가능성이 아주 높다고 할 수 있다.
본 발명이 속한 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 상기 내용을 바탕으로, 본 발명의 범주내에서 다양한 응용 및 변형을 행하는 것이 가능할 것이다.