WO2012116577A1

WO2012116577A1 - 绿原酸类似物及其制备方法和应用

Info

Publication number: WO2012116577A1
Application number: PCT/CN2012/000280
Authority: WO
Inventors: 马超美; 服部征雄; 达尼施塔拉布⋅M
Original assignee: 内蒙古大学
Priority date: 2011-03-03
Filing date: 2012-03-05
Publication date: 2012-09-07
Also published as: CN102653514A; CN102653514B

Description

绿原酸类似物及其制备方法和应用技术领域

本发明涉及绿原酸类似物及其制备方法和应用，具体涉及以酰胺键代替酯键的绿原酸类似物，其制备方法及所使用的中间体、包含所述绿原酸类似物的组合物及其在药物、（功能）食品、化妆品等方面的应用。背景技术

绿原酸

是天然药物和蔬菜中广泛存在的生物活性物质（Clifford MN. et αί , "Chlorogenic acids and other cinnamates-nature, occurrence and dietary burden" , J Sci Food Agric 999,，9'H i2 、。因为有很强的抗氧化活性，因此该化合物可能对 II-型糖尿病、心血管疾病及一些和衰老有关的疾病有子贞防作用（ Johnston KL， et αί , "Coffee acutely modifies gastrointestinal hormone secretion and glucose tolerance in humans: glycemic effects of chlorogenic acid and caffeine", Am J Clin Nutr 2003, 78 : 728-733 ; 和 Morton LW, et al , "Chemistry and biological effects of dietary phenolic compounds: relevance to cardiovascular disease", Clin Exp Pha瞧 col Physiol 2 2， \ 52- \ 59 。另据报道，绿原酸有抑制肝脏葡萄糖 -6-磷酸酶作用，因而可能调节血糖水平，从而对糖尿病患者有益，而绿原酸的水解产物咖啡酸和奎宁酸则无该作用（Schindler PW, et al. , "Identification of two new inhibitors of hepatic glucose-6-phosphate translocase", Diabetologia 1994, 37 [Suppl. l ], A134)。在挪威和英国，绿原酸以商品名 " Svetol" 出售，作为食品添力口剂力 p 入咖啡和口香糖等中用于减肥 (http://en.wikipedia.org/wiki/Chlorogenic_acid. accessed: Feb.22, 201 1)。

由于绿原酸的重要地位，研究人员对该化合物的全合成进行了许多尝试， Sefkow 的合成方法是以奎宁酸为原料，通过缩酮结构保护其 1 , 7和 3 , 4位羟基，生成只有 5-位为游离羟基的奎宁酸二缩酮中间体，再与乙酰咖啡酰氯反应后去保护得到收率较好的绿原酸（ Sefkow M. et al. , "First efficient synthesis of chlorogenic acid" , Eur J Org Chem 2001 , 1 137- 1 141 ) 。 Candice Menozzi Smarrito等通过全宁酸马龙酸酯与阿魏进行 Knoevenagel 缩合反应，合成了 5-O-feruloylquinic acid (阿魏酰奎宁酸），即 3'-甲基化绿原酸（ Smarrito CM, α/.， "A novel efficient and versatile route to the synthesis of 5-O-feruloylquinic acids", Org Biomol Chem 2008, 6:986-987 ) 。

研究表明，由于分子中有化学性质不稳定的酯键存在，绿原酸口服后仅有微量可被完整吸收，绝大部分绿原酸在体内会发生酯键断裂水解释放出咖 ρ非炱 ( Azuma K， et al. , "Absorption of chlorogenic acid and caffeic acid in rats after oral administration", J Agric Food Chem , 2000 ; 48 :5496 - 500; Nardini M, et al. , "Absorption of phenolic acids in humans after coffee consumption", J Agric Food Chem， 2002, 50:5735-41；和 Lafay S, et al.， "Chlorogenic acid is absorbed in its intact form in the stomach of rats", J Nw/r 2006, 136: 1 192- 1 197 ) 。

本发明人经过深入研究和大量实验，首次以酰胺键替代酯键合成出一类新型的性质比绿原酸稳定的绿原酸类似物。实验证明，与绿原酸相似，所述绿原酸类似物具有很强的抗氧化活性。由于酰胺键比酯键稳、定 ( Williams DA, Drug Metabolism, in: Lemke TL, et al. (Eds.), Foye's Principles of Medicinal Chemistry, Lippincott Williams & Wilkins, Philadephia, 2008, PP.284-285 ) ，可以预期本发明化合物在体内以原型存在的时间有望更长，会具有更佳的药代动力学参数。此外，神经氨酸酶是流感病毒成熟后脱离宿主细胞感染新细胞的必需酶，是研究开发抗病毒药物的重要把点 ( von Itzstein M. The war against influenza: discovery and development of sialidase inhibitors. Nat Rev Drug Discov. 6: 967-974. 2007 )；实验证明，所述以酰胺键替代酯键合成出的绿原酸类似物对神经氨酸酶具有抑制活性，表明本发明化合物具有抗病毒潜力。

发明内容

因此，本发明提供下述通式 (I)化合物及其盐：

式中：

和1 ₂相同或不同，各自独立地选自氢或 C ₆烷基，其中的 c_1-6 烷基是未被取代的或被选自 c_1-6烷基或 c_1-6烷氧基的取代基取代；

或者，和邻位的一个 R₂—起形成 -CH₂-;

n表示 0-2的整数，例如 0、 1或 2;

表示该键可以为 α键或（3键；

二二表示单键或双键，所述双键可以为顺式或反式。

本发明的另一个方面，提供含有所述通式（I )化合物或其盐的组合物。

本发明还提供含有所述通式（I ) 化合物或其盐的药物制剂。

本发明的又一个方面，提供所述通式（I )化合物或其盐或者含有所述通式（I ) 化合物或其盐的组合物用作为抗氧化剂。

本发明的再一个方面，提供所述通式（I )化合物或其盐或者含有所述通式（I ) 化合物或其盐的组合物在制备抗氧化剂方面的应用。另一个方面，本发明提供所述通式（I)化合物或其盐或者含有所述通式（I) 化合物或其盐的组合物用作为药物。

本发明还提供所述通式（I) 化合物或其盐或者含有所述通式（I) 化合物或其盐的组合物在制备用于抗氧化应激和 /或自由基的药物方面的应用。

本发明还提供所述通式（I) 化合物或其盐或者含有所述通式（I) 化合物或其盐的组合物在制备用于预防和 /或治疗由氧化应激和 /或自由基介导的疾病的药物方面的应用。

本发明的另一个方面，提供所述通式（I)化合物或其盐或者含有所述通式（I) 化合物或其盐的组合物用作为抗病毒药物。

本发明的又一个方面，提供所述通式（I)化合物或其盐或者含有所述通式（I) 化合物或其盐的组合物在制备神经氨酸酶抑制剂方面的应用。

本发明还提供治疗或预防病毒感染的方法，包括给予需要的对象所述通式（I)化合物或其盐或者含有所述通式（I)化合物或其盐的组合物的步骤。

本发明的再一个方面，提供所述通式（I)化合物的制备方法，包括下述步骤：

首先按文献 ( Sefkow M. et ai, "First efficient synthesis of chlorogenic acid", Eur J Org Chem 2001, 1137-1141 )报道的方法合成化合物 A0H [先将奎宁酸用三曱基氯硅烷（Me₃SiCl )转化为五硅烷化奎宁酸，再在三氟曱磺酸三曱基硅酯 [TMS-OTf]的催化下低温和丙酮及 1 , 2-二曱氧基丙烷的混合物反应得到 A0H]; 化合物 AOH 经氧化生成 5-羰基化物 (AO)； AO 和盐酸羟胺反应生成 ANOH; 以及将 ANOH还原，生成 5-氨基 5-去羟奎宁酸衍生物 ANH;

使 ANH与 B反应 {B为相应的酰卤（若 B中存在酚羟基，即和 /或 R₂'为氢时，则这里使用的酰卤中的酚羟基用酰基例如曱酰基、乙酰基、丙酰基或丁酰基等予以保护）或相应的羧酸 +常规缩合试剂 [例如二环己基碳化二亚胺（DCC ) 等] } , 得 AACNQ, AACNQ经脱保护得到通式（I ) 化合物；

其中：

Ri'和 R₂'的定义分别与通式 (I)中 1^和 R₂的定义相同;

X'为鹵素或羟基，饵当 B化合物中 X'为卤素、 '和 /或 R₂'为氢时，将该酰中的游离酚羟基用酰基予以保护，所述酰基包括例如曱酰基、乙酰基、丙酰基、丁酰基等；当 X'为羟基时，该羧酸化合物与常规缩合试剂一同使用.；以及

Ri R₂和 n与通式 (I)中的^义相同。

所述氧化剂为有机合成化学中用于将羟基氧化为羰基的常规氧化剂，选自例如 PCC ( pyridinium chlorochromate 氯铬酸吡啶锴盐 ) , PDC ( pyridinium dichromate 重铬酸吡镥盐） , 三氧化铬等。

所述还原剂为有机合成化学中用于将肟基还原为氨基的常规还原剂，选自例如催化氢化、 NaBH₃CN+TiCl₃(氰基硼氢钠 +三氯化钛）、 Ni(OOCCH₃)₂+NaBH₄(醋酸镍 +硼氢化钠）等。

在本发明方法中将 AACNQ脱保护所使用的酸为常规酸，例如盐酸、硫酸、磷酸等；碱为常规碱，例如氢氧化钠，氨水、氢氧化钾等。

本发明还涉及上述制备方法中使用的新颖的中间体：

其中：

'和 R₂'的定义分别与通式 (I)化合物中的和 R₂的定义相同； n 与通式 (I)中.的定义相同。

本发明还涉及所述中间体的制备方法。

在本发明中，术语 "C^烷基" 表示直链或支链的含有 1-6、优选 1-4、例如 1 - 3个碳的烷基，如曱基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、 2-曱基丁基、新戊基、正己基、异己基等。

在本发明中，术语 "C ₆烷氧基" 表示直链或支链的含有 1-6、优选 1-4、例如 1 - 3个碳的烷氧基，如曱氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基、异戊氧基、 2-甲基丁基、新戊氧基、正己氧基、异己氧基等。

在本发明中，术语 "卤素" 是指氟、氯、溴、碘。

在本发明中， "本发明化合物的盐" 是指本发明通式（I )化合物与药学、食品或化妆品上可接受的、非毒性碱形成的盐，这些盐可在式 (I)化合物的分离和 /或提纯过程中制备，或者可通过使式 (I)化合物以其游离酸形式与适宜的碱进行反应来制备，包括有机碱盐和无机碱盐。有机碱盐包括胺盐，包括本发明通式（I ) 化合物与伯、仲或叔胺形成 —的盐，可以选自与下列有机碱形成的盐：例如精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、乙醇胺、三曱胺、乙二胺、三乙胺等。无机减盐包括与氨、碱金属、碱土金属或过渡金属形成的盐，例如铵盐以及锂盐、钠盐、钾盐、钙盐、镁盐、锌盐、铁盐、亚铁盐等。

在本发明通式（I)化合物的一个实施方案中， 1 !和 R₂各自独立地选自氢或烷基，其中的 C_1-6烷基是未被取代的或被选自 -4烷基或 C^₄烷氧基的取代基取代。

在本发明通式（I)化合物的一个实施方案中，和 R₂各自独立地选自氢或 CM烷基，其中的 C_M烷基是未被取代的或被选自 C_M烷基或（^_₄烷氧基的取代基取代。

在本发明通式（I)化合物的一个实施方案中，和 R₂各自独立地逸自氢或 _₄烷基，其中的 C_1-4烷基是未被取代的或被选自下列一组的取代基取代：甲基、乙基、曱氧基和乙氧基。

在本发明通式（I)化合物的一个实施方案中， 1^和1₂为氢。在本发明通式（I)化合物的一个实施方案中， n表示 2或 1。

在本发明通式（I)化合物的一个实施方案中，二― 表示单键。在本发明通式（I)化合物的一个实施方案中，二二表示双键，该双键可以为反式或顺式。

在本发明通式（I)化合物的另一个实施方案中， 1^和 1₂各自独立地选自氢或 _₃烷基,. 其中的烷基是未被取代的或被选自 C_1-3 烷基或 .3烷氧基的取代基取代， n表示 1或 2; ^表示 α键或 β键； =二表示双键，可以为反式或顺式。

在本发明通式（I)化合物的另一个实施方案中， 1^和1₂各自独立地选自氢或烷基，其中的烷基是未被取代的或被选自下列一组的取代基取代：曱基、乙基、曱氧基和乙氧基， n表示 1; ^表示 o键或 β键；二二表示双键，可以为反式或顺式。

在本发明中，作为通式 (I)所表示的化合物，可具体提及下列化合物及其盐：

-6-

0!

6

L

9

08Z000/Jl0iN3/X3d LLS9WZ10Z OAV 一 οι -

I

:

..S9ll/ZT0Z OAV - II -

Z000/ZT0ZN3/X3d ..S9ll/ZT0Z OAV

抗氧化活性测试结果表明，与绿原酸相似，本发明化合物具有很强的抗氧化活性。此外，由于酰胺键比酯键稳定（Williams DA, Drug Metabolism, in: Lemke TL, Williams DA, Roche VF, Zito SW(Eds) Foye's Principles of Medicinal Chemistry, Lippincott Williams & Wilkins, Philadephia, 2008, PP.284-285 ) , 可以预期与绿原酸相比，本发明化合物在体内以原型存在的时间会长得多。

因此，本发明还涉及含有本发明通式 (I)化合物或其盐的组合物。在本发明组合物的一个实施方案中，该组合物还包含药物、食品或化妆品可接受的载体。所述本发明组合物，可以按照常规方法，通过将所述通式 (I)化合物或其盐与药物、食品或化妆品可接受的载体混合来制备。

在本发明中，所述 "药物可接受的载体" 是指常规的可药用载体，包括，但不限于，例如淀粉；纤维素；糊精；磷酸钙；碳酸钙；滑石；硬脂酸钙；硬脂酸镁；聚乙二醇；乳糖；明胶；阿拉伯胶；惰性稀释剂，例如水、其它可药用溶剂以及油，例如棉籽油、花生油、玉米胚油、橄榄油、蓖麻油、芝麻油等；或它们的混合物。

在本发明中，所述 "食品可接受的载体" 是指常规可用于食品的载体，包括，但不限于，例如纤维素，糊精，淀粉，乳脂，动植物油脂例如玉米胚油、棉籽油、花生油、橄榄油、棕榈油、菜籽油、芝麻油等；或它们的混合物。

在本发明中，所述 "化妆品可接受的载体" 是指常规可用于化妆品中的载体，包括，但不限于，例如蜂蜡，石蜡，凡士林，硬脂酸，蓖麻油，羊毛脂等；或它们的混合物。

在本发明组合物中，活性成分通式 (I)化合物或其盐的含量可以为 0.001 -99.9%,例如 0.01-99.9%、 1.0-99.0%、 5.0-98.0%、 10-95%、 20-90%、 30-80.0%等。

本发明通式 U )化合物及其盐本身以及含有通式（I )化合物或其盐的本发明组合物可用作抗氧化剂。

作为抗氧化剂，本发明通式（I )化合物或其盐或本发明组合物可用于食品和化妆品领域，所述食品包括，但不限于，乳制品、肉类制品、调味酱、饮料等，以及功能性食品，包括，但不限于例如减肥糖果、减肥食品和饮料等；所述化妆品包括，但不限于，护肤类化妆品如乳液、化妆水；美容类化妆品如胭脂、唇膏、睫毛膏等；毛发护理用品如香波、护发素等；个人护理用品例如洗浴液等。

此外，本发明还涉及所述通式（I )化合物或其盐或者含有所述通式（I ) 化合物或其盐的组合物在制备抗氧化剂方面的应用。

氧化应激和自由基被认为是引起衰老的原因之一 (Larsen？ L.et αί , "Aging and resistance to oxidative damage in Caenorhabditis elegans" ， Proc Natl Acad Sci U S A, 1993,90: 8905 - 8909)。另据报道，活性氧是引起胰岛素抵抗的重要触发因素，所以抗氧化剂可,能用于防治 II型-糖尿病及其它和胰岛素抵抗有关的疾病如一些癌症和肥胖等 (Houstis N， et αί , "Reactive oxygen species have a causal role in multiple forms of insulin resistance", Nature, 2006, 440: 944 - 948)。

实验证明，本发明带有酰胺键的绿原酸类似物有很强的抗氧化活性并且应有比绿原酸稳定的性质，因此预期能对上述这些疾病有良好的治疗和 /或预防作用。

因此，本发明涉及通式（I ) 化合物及其盐本身以及含有通式（I ) 化合物或其盐的本发明组合物用作药物。

本发明还涉及含有本发明通式 (I)化合物或其盐的药物组合物。在本发明药物组合物的一个实施方案中，该组合物还包含药物可接受的载体。所述本发明药物组合物，可以按照常规方法，通过将所述通式 (I) 化合物或其盐与药物可接受的载体混合来制备。

此外，本发明还涉及含有本发明通式 (I)化合物或其盐的药物制剂。可以按照常规制备方法将本发明化合物或其盐配制为常规药物制剂，例如胶嚢剂、片剂、丸剂、颗粒剂、乳剂、混浮剂、溶液剂、软膏剂、滴剂等。

本发明还涉及所述通式（I ) 化合物或其盐或者含有所述通式（I ) 化合物或其盐的组合物在制备用于抗氧化应激和 /或自由基的药物方面的应用。本发明还涉及所述通式（I ) 化合物或其盐或者含有所述通式（I ) 化合物或其盐的组合物在制备用于预防和 /或治疗氧化应激和 /或自由基介导的疾病的药物方面的应用。

在本发明中，术语 "氧化应激和 /或自由基介导的疾病" 是指由氧化应激和 /或自由基诱发导致的疾病，包括 II型-糖尿病、肥胖、炎症、肿瘤、癌症、与胰岛素抵抗有关的疾病、神经退化性疾病如阿尔兹海默症、帕金森病等。

实验证明，本发明化合物对神经氨酸酶具有抑制活性，表明本发明化合物具有抗病毒、特别是抗流感病毒的潜力。因此，本发明还涉及所述通式（I )化合物或其盐或者含有所述通式（I )化合物或其盐的组合物在制备用于预防和 /或治疗病毒感染、特别是流感病毒感染的药物方面的应用。附图说明

图 1为实施例 1化合物 (ChlN, 化合物 1)的高效液相-质谱图：图 la 为总离子流图，图 lb 为 320nm 检测的层析图，图 lc 为离子流图中 5.5分时所出现的峰的质谱；所用仪器为 Agilent 1100 高效液相 - Bruker Esquire 3000plus 质谱，电喷雾电离；层析柱为 Cosmosil 5C18-MS-II (150 x 4.6 mm i.d.), 流动相为 10-100%甲醇-水 10 分钟梯度洗脱，流速为 1 ml/min, 在质谱检测器前加有分流器使进入质谱的流速为 0.2 ml/min, 负离子模式在 m/z 50-1000区间扫描，毛细管电压 4000 V, 高纯度千燥氮气流速 9 L/min, 温度 350°C。具体实施方式

下面通过具体实施例，进一步阐述本发明。这些实施例仅用于例证本发明，不应将其理解为对本发明保护范围的限制。实施例中所采用的原料为可商业上购得的。实施例中，缩写具有所属技术领域的常规含义，其中 CH₂C1₂代表二氯曱烷， MeOH代表曱醇， AcOEt代表乙酸乙酯， DMAP代表 4-二曱氨基吡啶。

除非另有说明，实施例中，份数和百分比分别为重量份数和重量百分比。

实施例 1: (lR,3R,4S,5S)-5a-「3-(3,4-二羟苯基) -丙烯酰胺基 1-1,3,4-三羟

基-环己羧酸 (ChlN，化合物 1)的制备

化合物 AOH 按文献 Sefkow M. et a I. , "First efficient synthesis of chlorogenic acid" ， Eur J Org Chem 2001, 1137-1141 的方法制备：将奎宁酸 35 g, 二氯曱烷 600 ml和三乙胺 120 ml混合后于 -15 度搅拌，过几分钟溶液澄清后加入三曱基氯硅烷 (trimethylsilyl chloride) 105 ml 搅拌 5小时。向混合物中加入 1800 1111石¾醚，过滤除去沉淀，石油醚溶液浓缩后得五硅烷化奎宁酸（产率 95%) 。五硅烷化奎宁酸 76 g 溶于 375 ml 丙酮和 375 ml 2, 2-二曱氧基丙烷 (2， 2-dimethoxypropane)中，于含干冰的丙酮浴中冷却后，向反应混合物中慢慢加入含 4. 5 ml 三氟曱磺酸三曱基硅酯（TMS- OTf ) 的二氯曱烷溶液 45 ml。反应混合物低温搅拌 24 小时后在含干冰的丙酮浴中冷却条件下加入饱和的 NaHC0₃溶液 1500 ml。撤去冷浴后，反应混合液用乙酸乙酯萃取（3 X 600 ml ) , 浓缩乙酸乙酯至 75 ml 放置过夜，析出结晶，抽滤收集结晶得 A0H (产率 m ) 。

将化合物 AOH (23.2 g)、重铬酸吡啶 (50 g)和 3 分子筛（70 g) 在 300 ml CH₂C1₂中室温搅拌过夜，所得反应混合物浓缩后用硅胶短柱纯化，以 AcOEt:MeOH 99: 1 -95:5洗脱，得到 AO (产率 96% ) 。

在含 18 g AO的 100 ml吡啶溶液中加入 16.3 g 的 NH₂OH。将该混合物在 50°C 搅拌 3h后加入其体积 50倍的 0.5% HC1，所得混合物直接上 ODS柱层纯化， MeOH-H₂0梯度洗脱 [梯度为 10-100% MeOH] , 在 20-40% MeOH洗脱部分得到 ANOH (14 g, 74%)。 .

在含有 0.7 g ANOH 的 7 ml MeOH 溶液中加入 1.4g 的 Ni(OOCCH₃)₂和 0.65 g的 NaBH₄,搅拌 4h。在反应液中加入 30 ml 冰水后用 ODS柱层纯化， MeOH-H₂0梯度洗脱 [梯度为 10-100% MeOH] , 在 20-50% MeOH洗脱部分得到 ANHaMe 和 ANHa 的混合物（250 mg， 36.9 %, ANHaMe 和 ANHa的比率约为 2.5: 1)。

在 ANHaMe 和 ANHa的混合物（200 mg)和 DMAP (32 mg, 0.30 mmol)的 CH₂C1₂ (10 ml) 溶液中加入吡啶 (3 ml)和二乙酰咖啡酰氯 (0.56 g)。反应混合物在室温下搅拌 5h 后用 1 M HC1水溶液酸化至 pH=3。回收有机溶剂后，残留物用 ODS 柱层纯化，以 MeOH-H₂0梯度洗脱 [梯度为 10-100% MeOH] ,将 60-100% 曱醇洗脱部分干燥，然后加入 10ml 0.5 N HC1的 MeOH-H₂0 ( 4: 1 )溶液，室温搅拌过夜后浓缩至干，残渣用 6 ml lN NaOH 和 9 ml MeOH的混合物室温处理 1小时后用 IN HC1 中和至 pH=6。在 40 °C将所得混合物中的曱醇蒸发后，残留物用 ODS 柱层纯化，依次用水和 MeOH-H₂0 9: l洗脱。 MeOH-H₂0 9: l 洗脱部分再经葡聚糖凝胶 LH-20柱层纯化，先用水洗去无机盐，再增加曱醇的含量，在 10% MeOH 洗脱部分得到 1 15 mg 标题化合物 (lR,3R，4S,5S)-⁵o -[3-(3,⁴-二羟苯基) -丙烯酰胺基 ]-l，3，4-三羟基-环己羧酸（ ChlN )的钠盐 ( ChlNa ),为白色固体， [ cc ]²⁴ _D -14.8。 (c 0.19, CH₃OH); lU NMR (CD₃OD, 500 MHz), δ 1.85 (m, 4H, H-6a, 6b和 2a, 2b), 3.94 (t, J = 2.5 Hz, IH, H-4), 4.25 (ddd, J = 2.5, 4,5, 11.0 Hz, 1H， H-3), 4.56 (ddd, J = 2.5, 5.0, 10.5 Hz, 1H， H-5), 6.44 (d， J = 15.5 Hz, IH, H-8'), 6.76 (d, J = 8.5 Hz, IH, H-5'), 6.89 (dd, J = 2.0, 8.5 Hz, IH, H-6')， 7.02 (d， J = 2.0 Hz, IH, H-2'), 7.37 (d, J = 15.5 Hz, IH, H-7');

照射 H-5 时 H-3 出现了明显的 NOE效应，表明 H-5 和 H-3为同一方向，均为 β-Η, 所以， 5-0-取代基和 3-ΟΗ—样，均为 ct取向。

13_C醒 _R (CD3OD, 125 MHz), δ 36.9 (C-6), 39.2 (C-2), 49.7 (C-5),

69.9 (C-3), 71.6 (C-4), 74.6 (C-1), 115.0 (C-2'), 116.4 (C-5')， 118.9 (C-8')， 122.1 (C-6*), 128.4 (C-V), 142.0 (C-7*), 146.7 (C-4*), 148.7 (C-3，)， 168.8 (C-9')， 181.9 (C-7)

将 ANHaMe 和 ANHa 的混合物（100 mg)经与上面同样的反应处理，只是最后一步用 IN HC1中和时调至 pH=3，纯化后得 50 mg标题化合物（lR,3R,4S，5S)-5 α -[3-(3，4-二羟苯基) -丙烯酰胺基 ]-1,3,4-三羟基-环己羧酸（ChlN) ，为白色固体， [a]²⁴ _D-26.1° (c 0.5, CH₃OH);

^!H NMR (CD3OD, 500 MHz), δ 1.90 (m,2H, H-2a,6a), 2.02 (ddd, J =3.0, 4.5, 13.0 Hz, IH, H-6b), 2.14 (dd, J =4.0, 13.0 Hz, IH, H-2b), 3.91 (m, 2H, H-3, 4)， 4.23 (ddd, J = 2.0, 4.5, 12.5 Hz, IH, H-5), 6.46 (d, J = 15.5 Hz, IH, H-8'), 6.77 (d, J = 8.0 Hz, IH, H-5'), 6.92 (dd, J = 2.0, 8.0 Hz IH, H-6')， 7.03 (d, J = 2.0 Hz, IH, H-2'), 7.40 (d, J = 15.5 Hz, IH, H-7');

¹³C NMR (CD3OD, 125 MHz), δ 35.8 (C-6), 38.1 (C-2), 49.3 (C-5), 69.1 (C-3), 71.2 (C-4), 73.9 (C-1), 115.1 (C-2')₅ 116.4 (C-5'), 118.5 (C-8'), 122.1 (C-6')₅ 128.4 (C-V), 142.4 (C-7'), 146.7 (C-4'), 148.7 (C-3'), 168.4 (C-9，)， 177.4 (C-7);

ESI-MS(Negative):352.0[M-H]-; HR-FAB-MS[M-H]" m/z 352.10167 (理论值： 352.10322)。实施例 2: (lR,3R,4S，5S)-5a-「3-(4-羟基 -3-甲氧基苯) -丙烯酰胺基 1,3,4- 三羟基-环己羧酸（化合物 4) 的制备

将实施例 1 中的二乙酰咖啡酰氯替换成乙酰 4-羟基 -3-曱氧基肉桂酰氯，用与实施例 1 同样的方法进行反应和后处理，得到标题化合物； ESI-MS(Negative): 366·2[Μ-Η] -。实施例 3: (lR,3R,4S,5S)-5a-「3-(4-羟苯基) -丙烯酰胺基 1-1,3,4-三羟基-

将实施例 1 中的二乙酰咖啡酰氯替换成乙酰 P-香豆酰氯，用与实施例 1 同样的方法进行反应和后处理，得到标题化合物；

ESI-MS(Negative): 336.1 [M-H]"₀ 实施例 4: 本发明化合物的抗氧化活性测定

用本发明人报道的方法（ Ma CM， et al., "Daneshtalab Μ. Synthesis, anti-HIV and anti-oxidant activities of caffeoyl 5 ,6-anhydroquinic acid derivatives", Bioorg Med Chem 2010, 18:863-869 ) , 比较了本发明化合物绿原酸的超氧化物歧化酶（SOD )样作用和清除自由基的作用。

SOD 样作用测定所用试剂盒为 SOD Assay Kit-WST (Dojindo Chemical, Kumamoto, Japan)。在 96-孔板的每孔加入 10 μΐ 受试化合物 DMSO溶液和 100 μΐ 的 WST- K 2- (4-碘苯基 )-3-(4-硝基苯基) -5-(2，4- 二磺基苯基 )-2Η-四唑单钠盐，（2-(4-Iodophenyl)-3-(4-nitrophenyl)-5- (2,4-disulfophenyl)-2H-tetrazolium, monosodium salt) ) 溶液。力口入 10 μΐ 的黄嘌呤氧化酶使反应开始，并在 37 °C进行 20 分钟后用酶标仪 [ ( InterMed ImmunoReader (Nippon InterMed K.K. Tokyo, Japan)]测定 450 nm的吸收。超氧化物歧化酶样作用活性用下述公式计算：抑制率⁰ /₀={[(A 空白 A 空白 ₃)-(A受试化合物 -A 空白 ₂)]/(A 空白！ A 空白 ₃)} X 100, 其中空白 1以 DMSO代替受试化合物 DMSO溶液，空白 2 以緩冲液代替酶溶液，空白 3只含 DMSO和緩冲液。每一个样品测定 4个浓度，

IC₅₀ 通过绘制百分抑制率 -浓度曲线求出。

清除自由基的作用也在 96-孔板上测得。每孔含 ΙΟ μΙ 受试化合物溶液（DMSO)和 190 μΐ DPPH [1，1-二苯基 -2-间三硝基苯肼自由基 (1 ,1 -Diphenyl-2-picrylhydrazyl radical)] (0, 1 mM)乙醇溶液。室温培养 20 分钟后测定 540 nm的吸收值。清除自由基的作用计算公式如下：有效率⁰ /_ο=100 χ (Α 对照 - A 受试化合物 )/A 对照

其中对照用 DMSO代替受试化合物溶液。每个样品测定 4个浓度， EC₅₀ 通过有效率％对受试化合物浓度曲线求得。

抗氧化活性测试结果见表 1 , 其中 IC_5Q ( g/ml)代表 SOD样受试化合物抑制 50% WST- 1 曱臜形成时的浓度， EC_5G ( g /ml)代表受试化合物还原 50% DPPH时的浓度。表 1. 本发明化合物和绿原酸的抗氧化活性受¾化合物 SOD样作用（iC_M.) 清除由½作用 ¾ > < mS0% WST-I Φ 形成的浓度） (还原 50% DPPI,时的浓接 ^:）

Chl '÷ ( 17 g/mi)

+ (1.5 ug ml) + ( 17 g/ml) 测试结果表明，本发明化合物和绿原酸均有强抗氧化活性。实施例 5: 本发明化合物对神经氨酸酶的抑制活性

本发明化合物对神经氨酸酶的抑制活性测定用碧云天生物技术研究所 ( Beyotime Biotechnology, Haimen, Jiangsu, 226100 )生产的神经氛酸酶抑制剂筛选试剂盒（P0309 )测定。试剂盒内含神经氨酸酶，神经氨酸酶荧光底物，神经氨酸酶緩沖液及蒸镏水。具体测定步骤如下：将测试样品溶于蒸馏水中（ lmg/ml ) 。将试剂盒中的神经氨酸酶溶液加 1倍緩沖液稀释。在 96孔黑色板（ BD Falcon )的每孔加緩冲溶液 70μ1、稀释后的酶溶液 10 μ1、样品溶液 (对照组用緩冲液代替） 10 μΐ 及底物 10 μΐ , 在 37 摄氏度培养 30 分钟后，用 Thermo Scientific Varioskan Flash多功能读数仪在 360nm 激发光下测定 440nm的荧光，得样品终浓度为 100 g/ml的 F值。对神经氨酸酶抑制率的计算公式如下：

百分抑制率 =100 x (F )/F 对照测定结果表明：在 100 g/ml浓度时，绿原酸和实施例 1化合物 ( ChlN, 1 )对该酶的抑制率分别为 39.9%和 59.1%。，预期本发明化合物具有抗病毒、特别是抗流感病毒的作用。

Claims

权利要求

1. 通式 (I)化合物或其盐

式中：

R p R₂相同或不同，各自独立地选自氢或 C_1-6 :¾基，其中的 C_1-6 烷基是未被^^代的或被选自 C_1-6烷基或 C_1-6烷氧基的取代基取代；

或者，和邻位的一个 R₂—起形成 -CH ;

n表示 0-2的整数；

表示该键为 α键或（3键;. 以及

^^表示单键或双键，所述双键为顺式或反式。

2. 权利要求 1所述的化合物或其盐，其中所述 1^和 R₂各自独立地选自氢或 ^₆烷基，其中的 d.₆烷基是未被取代的或被选自 C_1-4烷基或 CM烷氧基的取代基取代。

3. 权利要求 1所述的化合物或其盐，其中所述和 R₂各自独立地选自氢或 C_M烷基，其中的 C_M烷基是未被取代的或被选自 .3烷基或 d.₃烷氧基的取代基取代。

4. 权利要求 1所述的化合物或其盐，其中 1^和 R₂各自独立地选自氢或烷基，其中的烷基是未被取代的或被选自烷基或烷氧基的取代基取代， n表示 1或 2; ^表示 α键或 β键；二二表示双键，为反式或顺式。

5. 权利要求 1所述的化合物，选自下列化合物或其盐：

6. 权利要求 1 -5之任一项所述的通式（I) 化合物的制备方法，包括下述步骤：

a)将化合物 AOH氣化生成 5-羰基化物 AO:

b 使 AO 与盐酸羟胺反应生成 ANOH: 以及将 ANOH还原, 生成 5-氨基 5-去羟奎宁酸衍生物 ANH;

. c)使 ANH与酰卤或羧酸 +常规缩合试剂反应，得 AACNO, AACNO 经脱保护得到通式（I) 化合物；

合成路线如下：

I.

、 : 1 一 '""·

ΑΝΗ s_SO B

(I)

其中：

Ri '和 R₂'的定义分别与通式 (I)中 1^和 R₂的定义相同;

X'为卤素或羟基，但当 B化合物中 X'为卤素、 R和 /或 R₂'为氢时，将该酰卤中的游离酚羟基用酰基予以保护；当 X'为羟基时，该羧酸化合物与常规缩合试剂一同使用；以及

Ri, R₂和 n与通式 (I)中的定义相同。

7. 含有权利要求 1 -5 之任一项所述的通式（ I ) 化合物或其盐的组合物。

8. 含有权利要求 1-5 之任一项所述的通式 ( I ) 化合物或其盐的药物制剂。

9. 权利要求 1一 5之任一项所述的通式（I)化合物或其盐或者权利要求 7所述的组合物，用作抗氧化剂。

10. 权利要求 1 - 5之任一项所述的通式（ I )化合物或其盐或者权利要求 7所述的组合物在制备用于抗氧化应激和 /或自由基的药物方面的应用。

11. 权利要求 1-5之任一项所述的通式（I)化合物或其盐或者权利要求 7所述的组合物在制备用于预防和 /或治疗由氧化应激和 /或自由基介导的疾病的药物方面的应用。

12. 权利要求 1 - 5之任一项所述的通式（ I )化合物或其盐或者权利要求 7所述的组合物在制备神经氨酸酶抑制剂方面的应用。

13. 权利要求 1-5 之任一项所述的通式（I)化合物或其盐或者权利要求 7所述的组合物在制备用于预防和 /或治疗病毒感染性疾病的药物方面的,应用。

14. 化合物：

其中：

Ri'和 R₂'的定义分别与权利要求 1所述的通式 (I)化合物中的 1^和 R₂的定义相同； n与权利要求 1 中的定义相同。