WO2012116520A1 - 一种奥利司他的制备方法 - Google Patents

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WO2012116520A1
WO2012116520A1 PCT/CN2011/073984 CN2011073984W WO2012116520A1 WO 2012116520 A1 WO2012116520 A1 WO 2012116520A1 CN 2011073984 W CN2011073984 W CN 2011073984W WO 2012116520 A1 WO2012116520 A1 WO 2012116520A1
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orlistat
column
filler
phase
dac
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Application number
PCT/CN2011/073984
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English (en)
French (fr)
Inventor
许勇煌
彭韪
王德刚
唐彬喜
刘德富
Original Assignee
珠海联邦制药股份有限公司
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Publication date
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D305/00—Heterocyclic compounds containing four-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atoms
    • C07D305/02—Heterocyclic compounds containing four-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atoms not condensed with other rings
    • C07D305/10—Heterocyclic compounds containing four-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atoms not condensed with other rings having one or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D305/12—Beta-lactones

Definitions

  • the present invention relates to the field of chemical pharmacy, and relates to a method for purifying and preparing an organic compound. Specifically, the present invention relates to a method for preparing a high-purity lipase inhibitor orlistat. method.
  • Orlistat is a derivative obtained by catalytic hydrogenation of the secondary metabolite linstatin (St ipstatin) of Streptomyces Toxytricini fermentation, which is called tetrahydrogen.
  • Tetrahydrolipstatin (THL), chemical name N-formyl-L-leucine ( 1S) - 1- [ [ ( 2S, 3S ) -3-hexyl-4-oxo-oxetanyl] Methyl]dodecyl ester or (S)-2-formylamino-4-methyl-pentanoic acid (S) -1- [ [ ( 2S, 3S) -3-hexyl-4-oxo-oxygen Heterocyclyl]methyl]dodecyl ester.
  • the chemical reaction of ritastatin (lipstatin) to produce orlistat (Orl istat) after catalytic hydrogenation is as follows:
  • Orlistat is a specific gastrointestinal lipase inhibitor, originally developed by Roche in New Zealand and listed in New Zealand in 1998. Studies by radioisotope C14 tracer showed that orlistat specifically inactivates lipase by covalently binding to the serine residue at the active site of gastrointestinal lipase, thereby preventing the body from directly absorbing the used fat in the food (
  • the triacylglyceride is hydrolyzed to an absorbable monoacylglyceride, which reduces about 80% of the fat absorption in the food, but is rarely absorbed into the blood (the blood concentration is extremely low, the peak value is ⁇ 10 ng/ml).
  • the solution is a low pressure column chromatography of an eluent, and is purified by a low pressure reverse phase column chromatography using a nonpolar reverse phase silica gel as a carrier and a polar solvent such as methanol as an eluent.
  • the method requires multiple column chromatography and repeated crystallization, and the purification efficiency and yield are relatively low, and the equipment is not suitable for industrial amplification, and the production capacity of each batch is very limited.
  • the US 4,598, 089 inventions preferably use Merck's low pressure Lowbar® column (Lichoprep® RP-8, Size C) in batches of only milligrams; using Merck's Gel60 silica gel, ⁇ lOcmX 100 cm The amount of purification treatment of the column is only up to the gram level, and the yield is about 20% ⁇ 30%.
  • the Chinese patent application with the publication number CN1391906 and the invention name "a new type of lipase inhibitor" is also separated and purified by Merck's Gel60 silica gel and a ⁇ 10cm X lOOcm chromatographic column. It is 10°/.
  • the content of the clinical standard for the quality of the drug is continuously increased (the current quality standard of the domestic austenil drug substance requires a purity of 99.0% by HPLC, and a single impurity ⁇ 0.2%, total impurity ⁇ 1. 0%, content 98. 0% or more, compared with the previous requirement of only 97% ⁇ 98% purity, it has been greatly improved.)
  • the publication number is CN176302U, and the Chinese patent application titled "A Method for Purifying Orlistat” is still based on the crystallized purification preparation method for the orlistat sample after catalytic hydrogenation, and the sample content to be purified is required. Up to 85% or more, the purity of the product after purification is about 98.5%, the single impurity is as high as 0.5%, and the preparation efficiency and yield have not yet made a big breakthrough.
  • the publication number is CN101948450A.
  • the Chinese patent application entitled “A Method for Producing Orlistat” is still purified by a combination of ordinary silica gel column and repeated crystallization. The ease of operation, amplification linearity and yield Still have to wait
  • preparation methods using extraction, cooling crystallization, extraction, adsorption filtration and vacuum drying such as
  • the present invention provides a novel production preparation method for orlistat purification using a semi-preparative or preparative high performance liquid phase system (Pre-HPLC) based on a Dynamic Axial Compression (DAC).
  • Pre-HPLC semi-preparative or preparative high performance liquid phase system
  • DAC Dynamic Axial Compression
  • the reversed-phase silica filler or the reversed-phase polymer resin filler has a particle diameter of 5 ⁇ m to 30 ⁇ m, preferably 10 ⁇ m to 20 ⁇ m ; a pore diameter of 50 ⁇ to 300 ⁇ , preferably 100 A to 150 ⁇ ;
  • the shape is irregular or spherical, preferably spherical.
  • the reverse phase silica gel filler is a silica gel having a C4 ⁇ (:18 aliphatic hydrocarbon chain as a bonded phase, preferably an octyl C8 or an octadecyl C18, based on SiO 2 or a derivative thereof.
  • Bonded phase silica gel; the reverse phase polymer resin is a high pressure resistant polymer resin, the matrix of which is one or a kind of polystyrene/divinylbenzene (styrene-divinylbenzene), acrylic acid, phenolic
  • the above mixing as a matrix filler preferably a polystyrene/bivinylbenzene material-based filler.
  • suitable column parameters such as silica gel packing
  • the typical column pressure is generally 10 MPa to 45 MPa, the height of the bed. Generally, it is 20 C m ⁇ 35 C m, and the columnar pressure of the reversed-phase polymer resin packing can be selected from the range of IMPa to about 10 MPa, wherein the suitable solvent for the pulping is the filler and mobile phase used.
  • the solution is chemically compatible with a low molecular weight water-soluble organic solvent having a viscosity of 2 mPa ⁇ 3 to 5 mPa - s (25 ° C), and a homologue of a mobile phase solvent is preferably prepared as a pulping solvent, such as a lower aliphatic alcohol such as isopropyl alcohol.
  • a pulping solvent such as a lower aliphatic alcohol such as isopropyl alcohol.
  • concentration of the filler slurry is generally 50% 80% (volume/volume, that is, the volume of the filler per 100 ml of the slurry is 50 ml and 80 ml).
  • the loading amount of the upper column adsorption is 0.1% 5.0% (mass/mass), preferably 0.5% 2.0% (mass/mass) for the reverse phase silica gel filler; 0.5% 30.0% for the reverse phase polymer resin (mass/ Mass), preferably 1.0% 10.0/. (quality
  • the solution flow rate of the DAC preparation column in equilibrium, loading and analysis is 0.02 BV / min 0.50 BV / min, preferably 0.10 BV / min 0.20 BV / mine.
  • the crude solution of orlistat is Orlistus
  • the intermediate linastatin is prepared by dissolving and diluting the water-soluble low-viscosity low-molecular organic solvent or the mobile phase prepared by the reaction, or directly catalyzing hydrogenation of the commercially available orlistat crude product after being dissolved by the mobile phase.
  • the orlistat sample was prepared at a concentration of 0.5% 10% (mass/volume, representing 0.5 g of 10 g per 100 ml of solution), preferably 2% 5% (mass/volume, representing samples per 100 ml of solution) 2g 5g).
  • the water-soluble low-viscosity low-molecular organic solvent used in the mobile phase is a low-substituted group of a 0H CN, a halogen atom, an oxo group, a carbonyl group, a carboxyl group or the like of a lower aliphatic hydrocarbon having 13 carbon atoms.
  • the segmentation collection is based on monitoring the peak shape curve of the UV detector to collect the analytical solution, and the collection is completed in three segments, respectively, and the ultraviolet curve starts to rise significantly to about 75°/80% of the peak height.
  • the first large segment, 75% of the curve rising phase, 80% peak height to 80% of the curve falling phase, 70% peak height is the second largest segment, and the curve descending phase of 80°/70% peak height to the curve basically falls back
  • the third largest segment is to the baseline, and each large segment is further subdivided into small segments for collection.
  • the collection time is generally 5 seconds/sample to 60 seconds/sample, preferably 15 seconds/sample to 40 seconds/sample.
  • the crude solution of orlistat is subjected to a batch continuous process on a column, an analytical continuous injection purification method, and each batch of the analytical solution is subjected to fractional collection.
  • the orlistat purification preparation method developed by the invention has a batch purification preparation amount of up to kilograms or even 10,000 grams, and the purification preparation batch magnification is up to four orders of magnitude of the prior art, and the purification production cycle is also from the previous longest number. It can be shortened to about 12 hours in ten hours, and even reduced to 20 40 minutes if the continuous injection production cycle is carried out.
  • the crude product of orlistat with a purity of 85% 95% and a content of about 50% 70% (weight/weight) after catalytic hydrogenation can be directly purified by a DAC preparation column to meet the current clinical drug quality standards.
  • the purified qualified sample can be used for the production of orlistat preparation only after it has to be crystallized once to obtain the medicinal B crystal form.
  • FIG. 1 and FIG. 1b are schematic diagrams showing the monitoring curve and the segmentation collection of the UV detector of the MC preparative column purification analytical process; wherein, FIG.
  • FIG. 1 is a schematic diagram of the UV monitoring spectrum and the segmentation collection of the single-needle injection purification of the DAC preparation column; Analytical UV monitoring map and segmentation collection diagram for DAC preparation column multi-needle continuous injection purification;
  • Figure 2a and Figure 2b are the HPLC detection results of crude oliishstat before purification of DAC preparation column;
  • Figure 2a is the first and second embodiment HPLC test results of crude auresta before purification;
  • Figure 2b shows the results of HPLC analysis of crude auresta before purification of Example 3;
  • Figures 3a, 3b, 3c and 3d are HPLC of purified orlistat finished products The results of the test, wherein FIG. 3a is the HPLC test result of the purified orlistat finished product of the first embodiment;
  • FIG. 3a is the HPLC test result of the purified orlistat finished product of the first embodiment;
  • FIG. 3a is the HPLC test result of the purified orlistat finished product of the first embodiment;
  • FIG. 3b is the HPLC test result of the orlistat finished product after the second purification
  • FIG. 3c is the third embodiment of the purified orlistat after the third embodiment.
  • Figure 3d shows the HPLC test results of the orlistat finished product after the fourth purification.
  • about 80Kg of a reverse phase C18 spherical silica gel filler having a particle size of 10 ⁇ m and a pore diameter of 300 A was poured into about 150 L of isopropyl alcohol, and uniformly stirred to prepare a filler slurry, which was quickly removed after removing filler fragments and fine powder.
  • Dump into a cylindrical DAC with an inner diameter of ⁇ 800mm set the packing pressure to 20MPa, open the pneumatic piston rod of the packing machine for axial compression, and open the DAC to prepare the lower end of the column to discharge and recover the isopropyl alcohol.
  • the packing When the piston is compressed to a set pressure of 20 MPa, the packing is completed, the height of the bed is 250 mm, and the bed size is > 800 mm X 250 ram.
  • the installed DAC preparation column was tested by column efficiency, and the number of theoretical plates reached 46,812 N/m.
  • the ritastatin (purity: 87.46%, content 66.20%) was dissolved in 86% methanol solution, and the diluted leptesten was dissolved.
  • the concentration of the statin is about 2.5%, followed by catalytic hydrogenation.
  • the method of catalytic hydrogenation can be carried out by the method of U.S. Patent No. 4,598,089, the disclosure of which is hereby incorporated herein.
  • the hydrogenation was completed and the Pd/C catalyst was removed by filtration to obtain a methanol solution of crude orlistat to be purified having a purity of 88.81% (as shown in Fig. 2a).
  • the isopropyl alcohol in the DAC preparation column was replaced, washed and equilibrated with 2B. V.
  • the BV in the present invention means a Bed Volume, that is, a bed volume.
  • the above solution containing 2 kg of orlistat crude product was loaded with a high pressure preparation pump at a flow rate of 0.2 B.V. /min.
  • wash it with a linear gradient of 80% 83% methanol solution wash it to the UV monitoring curve level and then use 85% methanol solution for analysis.
  • the fractional collection was carried out at a flow rate of 0.2 B. V.
  • about 75K g of a reverse phase C8 spherical silica gel filler having a particle size of 10 ⁇ m and a pore diameter of 100 A is poured into about 150 L of isopropyl alcohol, and uniformly stirred to form a filler slurry, and after removing the filler fragments and fine powder, Quickly pour into the column of the DAC with an inner diameter of ⁇ 800mm to prepare the column cylinder, set the column pressure to 24MPa, open the pneumatic piston rod of the column packing machine for axial compression, and open the DAC to prepare the lower end of the column to discharge and recover the isopropyl alcohol.
  • % (as shown in Figure 2a) of a crude solution of orlistat to be purified in methanol. Turn on the UV detector, set the detection wavelength to 195nm, and warm up for half an hour. The isopropyl alcohol in the DAC preparation column was replaced, washed and equilibrated with 2B. V. anhydrous methanol and an appropriate amount of 85% methanol solution, respectively, until the level of the UV detector was stable and then zeroed. The above solution containing 2 kg of orlistat crude was loaded with a high pressure pump at a flow rate of 0.2 B.V. /min. After the end of the sample, the solution was washed with 85% methanol solution and analyzed.
  • the sample was collected at intervals of 15 seconds/sample to 30 seconds.
  • the flow rate was 0.15 B. V. /min.
  • the collection liquid of the main peak of orlistat of the orlistat is determined by HPLC to be >99. 0%, single miscellaneous ⁇ 0.2%, and total miscellaneous ⁇ 1.0% in accordance with current clinical drug quality standards, and concentrated, according to US patent US6 734, 314, the method of crystallization, drying, to obtain the current pharmaceutical quality standards of orlistat 1.
  • 83Kg The yield of the finished product is 99.80% (as shown in Figure 3b), the maximum single impurity is 0. 10%, the total amount is 0. 20%' content 99. 48%, the purification yield is 91.
  • a high-pressure reversed-phase polymer resin filler having a polystyrene/divinylbenzene matrix and having a pore diameter of 100 m and a pore diameter of 100 A is poured into about 20 L of isopropyl alcohol, and uniformly stirred. After filling the slurry and removing the filler fragments and fine powder, quickly pour it into the column of the DAC with an inner diameter of ⁇ 300mm, set the pressure to 10MPa, open the pneumatic piston rod of the packing machine for axial compression, and open the DAC to prepare the lower end of the column. Isopropyl alcohol is discharged and recovered.
  • the packing When the piston is compressed to the set pressure lOMPa, the packing is completed, the height of the bed is 300mm, and the bed size is ⁇ 300mm X 300mm.
  • the assembled MC preparation column was tested by column efficiency, and the number of theoretical plates reached 38,764 N/m.
  • the ritastatin (purity: 89.17%, content 64.56 ° /.) is dissolved in a solution of 84% ethanol, and the concentration of lipitastatin after dissolution is about 3%.
  • the catalytic hydrogenation can be carried out according to US Pat. No. 4,598. The method described in 089 is carried out.
  • the yield of the finished product is 99.66% (as shown in Fig. 3c), the maximum single impurity is 0.17%, the total amount is 0. 34%, the content is 98.87%, and the purification yield is 93.46%.
  • Embodiment 4 This embodiment is based on the foregoing embodiment. 5% ⁇ 2. 5% ( After the completion of the preparation of the column, the pulverastatin catalyzed hydrogenation, the UV detector, the pre-heating equilibrium, and the zero-rec Or the polymer resin is 10% ⁇ 15% by weight of the crude solution of orlistat, and the sample is applied by a high pressure pump at a flow rate of 0.2 B.V. /min, and immediately after the end of the sample, 85% methanol solution is used.
  • the purity of the finished product was 99.64°/. 5% ⁇ Purification yield 92. 30%, the maximum single impurity is 0. 13%, the total amount of 0. 36%, the content of 99. 12%, the purification yield of 92. 30%.
  • the preparation of orlistat was carried out by continuous injection purification. When the purification yield was at a high level, the production cycle was shortened to an average of 30 minutes per batch, and the consumption of the solvent was reduced, which has considerable application prospects.

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Description

一种奥利司他的制备方法 技术领域 本发明属化学制药领域， 涉及一种有机化合物的纯化制备方法， 具体而言， 本发明涉及 一种制备高纯度脂肪酶抑制剂奥利司他的纯化方法。 技术背景 奧利司他 （Orlistat ) 是放线菌毒三素链霉菌（Streptomyces Toxytricini)发酵次级代 谢产物利普司他汀 （l ipstatin ) 经催化加氢后得到的衍生物， 故又叫四氢利普司他汀 (Tetrahydrolipstatin, THL), 化学名称 N-甲酰基 -L-亮氨酸 ( 1S) - 1- [ [ ( 2S, 3S ) -3-己 基 -4-氧-氧杂环丁基]甲基]十二垸基酯或（S ) -2-甲酰氨 -4-甲基 -戊酸（S) -1- [ [ ( 2S, 3S) -3-己基 -4-氧代-氧杂环丁基]甲基]十二垸基酯。 利普司他汀 （lipstatin ) 经催化加氢后生 成奥利司他 （Orl istat ) 的化学反应式如下：
Figure imgf000003_0001
τ . t †. Orlistat
(Tetrahydrolipstatin,THL) 奧利司他是一种特异性胃肠脂肪酶抑制剂， 由罗氏公司原研，最早于 1998年在新西兰上 市。 经放射性同位素 C14示踪法研究表明， 奥利司他通过与胃肠脂肪酶活性位点丝氨酸残基 特异性共价结合， 使脂肪酶失活， 从而阻止食物中人体不能直接吸收利用的脂肪 （三酰基甘 油酯）水解成可吸收的单酰基甘油酯， 进而减少食物中约 30%左右的脂肪吸收， 而自身却极 少吸收入血（血药浓度极低， 峰值〈10ng/ml )， 因而疗效及安全性较以往治疗超重、肥胖症药 物有显著提高。该产品目前分别作为 0TC和 Rx药物（双跨）被广泛用于体重超重（身体质量 指数丽 15≥ 25. 0) 或肥胖症 （身体质量指数丽 15≥ 30. 0) 患者的治疗。 关于奥利司他的制备方法， 国内外已有较为深入的研究， 现简析如下： 奥利司他原研企业瑞士罗氏公司分别申请了以下专利： 专利号为 US4，598，089的美国专 利， 及公开号为 CN85109209、 发明名称为 《 氧杂环丁 -2-酮类化合物的制备方法》 的中国专 利申请， 公开号为 CN85108888、 发明名称为《环氧丙垸酮类化合物的制备方法》 的中国专利 申请， 公开号为 CN97109732. 1 、 发明名称为 《生产脂抑制素和四氢脂制素的方法》 的中国 专利申请， 催化氢化制得的奥利司他粗品均使用以硅胶为载体的低压柱层析进行纯化。 如在 发明 US4, 598， 089中， 分别有用到以硅胶为载体、 氯仿为洗脱液进行的硅胶过滤层析， 以硅 胶为载体及以己垸、乙酸乙酯或己垸-乙酸乙酯混合溶液为洗脱液进行的低压柱层析， 以非极 性的反相硅胶为载体、 以甲醇等极性溶剂为洗脱液的低压反相柱层析等纯化方式。 该法因需 进行多次柱层析及反复结晶， 纯化效率及收率均比较低， 且设备不适合工业放大， 每批产能 十分有限。如发明 US4, 598, 089分别优选使用默克公司的低压 Lowbar®柱 ( Lichoprep® RP-8, Size C) , 批处理量仅为毫克级； 使用默克公司 Gel60硅胶、 规格为 Φ lOcmX 100cm的层析柱 批纯化处理量亦只达到克级， 收率约为 20%〜30%。 公开号为 CN1391906、发明名称为 《一种 新型脂肪酶抑制剂》 的中国专利申请亦采用默克公司 Gel60硅胶、 规格为 Φ 10cm X lOOcm的 层析柱进行分离纯化， 层析柱载样量约为 10°/。， 经三次柱层析， 分别依次用氯仿、 己垸 -乙酸 乙酯 （9 : 1〜4 : 1 )、 甲醇溶液洗脱， 收率仅为 2%左右。 公开号为 CN1266058、 发明名称为 《一制胰脂菌素的提纯方法》 的中国专利申请通过使 用与利普司他汀双流萃取相同的溶剂溶解奥利司他粗品进行结晶来分离提纯， 优选的溶剂为 己烷或庚垸。 该法较之前采用的低压硅胶柱层析纯化法相比较， 虽易于放大， 批处理量也有 大幅提高， 收率可达 75%以上， 但纯度仅为 90%〜97%， 远远达不到近年不断提高的临床用药 质量标准要求（目前国内奥利司他原料药质量标准要求经 HPLC检验纯度需达 99. 0%以上， 且 单杂〈0. 2%、 总杂质〈1. 0%、 含量 98. 0%以上， 较之前的仅要求纯度达 97%〜98%即可上市又有 了较大提高）。我们按照该发明专利技术重复结晶纯化生产过程，发现若要制备符合当前质量 标准要求的奥利司他产品， 其纯化效率及收率仍然很低， 纯化收率在 10°/。以下。 公开号为 CN176302U发明名称为《一种提纯奥利司他的方法》的中国专利申请， 对于催化氢化后的奥 利司他样品仍采用以结晶为主的纯化制备方式， 且待纯化样品含量要求高达 85%以上， 纯化 后产品纯度为 98. 5%左右， 单个杂质高达 0. 5%， 制备效率及收率仍未有较大突破。 公开号为 CN101948450A. 发明名称为 《一种生产制备奧利司他的方法》 的中国专利申请亦仍采用普通 硅胶柱与反复结晶相结合的方式进行纯化， 操作步骤简易程度、 放大线性及收率均仍有待进
~ "步提 1¾。 此外还有采用萃取、 冷却结晶， 萃取、 吸附过滤与真空干燥相结合的制备方式， 如
W02005/007639, W02005/026140, W02009/040827等专利所述， 这些专利申请一定程度上仍 是在罗氏专利技术基础上的局部改进， 纯化工艺未有显著突破。 发明内容 本发明提供一种使用基于动态轴向压縮柱 （Dynamic Axial Compression, DAC) 的半制 备或制备型高效液相系统 （Pre-HPLC)进行奥利司他纯化的新的生产制备方法。 为了实现上述发明目的， 本发明采用了以下技术方案： 一种奥利司他的制备方法， 包括 以下步骤：
( 1 )以反相硅胶或反相聚合物树脂作为 DAC制备柱填料， 以有机溶剂与填料混合搅拌均 匀制浆；
( 2 ) 将匀好的填料浆液装入 DAC制备柱柱筒中， 开启装柱机进行轴向压縮； ( 3 ) 用制备泵将流动相泵入 MC制备柱中对柱内有机溶剂进行置换洗涤， 同时平衡制备 柱， 柱效测试理论塔板数不低于 35000N/m;
(4) 将奧利司他粗品溶液用高压制备泵注射至 DAC制备柱内上柱吸附；
( 5 ) 上柱吸附结束后用流动相进行解析， 并对解析液分段收集；
(6 ) 将纯度合格样合并、 浓缩、 结晶及干燥， 制得奥利司他成品。 其中，所述反相硅胶填料或反相聚合物树脂填料的粒径为 5 μ m〜30 μ m，优选 10 μ m〜20 ιη; 孔径为 50Α〜300 Α, 优选 100 A〜150 A; 填料形状为不规则形或球形， 优选球形。 具体地来说， 所述反相硅胶填料为以 Si02或其衍生物为基质， 以 C4〜(： 18脂肪烃链为键 合相的硅胶，优选以辛基 C8或十八垸基 C18为键合相的硅胶； 所述反相聚合物树脂为可耐高 压聚合物树脂， 其基质为聚苯乙烯 /联乙烯苯 （苯乙烯——二乙烯苯）、 丙烯酸、 酚醛的一种 或一种以上的混合作为基质的填料， 优选以聚苯乙烯 /联乙烯苯材料为基质的填料。 根据填料类型及规格选择适当装柱参数，如硅胶填料常用装柱压力一般为 10MPa〜45MPa、 柱床高度一般为 20Cm〜35Cm， 反相聚合物树脂填料装柱压力视装柱高度一般可选择从 IMPa 到 lOMPa左右不等。 其中，所述制浆的适宜溶剂是与所用填料及流动相溶液化学性质兼容的粘度为 2mPa ·3〜 5mPa - s ( 25°C )的低分子水溶性有机溶剂， 优选配制流动相溶剂的同系物作为制浆溶剂。 如 异丙醇等低级脂肪醇等。 其中， 所述填料浆液其浓度一般为 50% 80% (体积 /体积， 即每 100ml浆液中含填料体 积为 50ml 80ml)。 其中，上柱吸附的载样量对于反相硅胶填料为 0.1% 5.0% (质量 /质量），优选 0.5% 2.0% (质量 /质量）； 对于反相聚合物树脂为 0.5% 30.0% (质量 /质量）， 优选 1.0% 10.0/。（质量
/质量）。 其中，所述 DAC制备柱在平衡、上样及解析的溶液流速为 0.02B. V. /min 0.50B. V. /min, 优选 0.10B. V. /min 0.20B. V. /mine 所述的奥利司他粗品溶液是将奥利司他中间体利普司他汀经水溶性低粘度低分子有机溶 剂或将其配制成的流动相溶解稀释后再催化氢化而制得， 或直接采购市售奥利司他粗品经流 动相溶解稀释后制得， 奥利司他样品上样浓度为 0.5% 10% (质量 /体积， 表示每 100ml溶液 中含样品 0.5g 10g)， 优选 2% 5% (质量 /体积， 表示每 100ml溶液中含样品 2g 5g)。 具体地来说，所述流动相采用的水溶性低粘度低分子有机溶剂为含 1 3个碳原子的低级 脂肪烃的一 0H CN、 卤素原子、 氧代、 羰基、 羧基等基团的低取代物、 衍生物或其混合物， 且其粘度 5mPa*S (25°C)， 如低级脂肪醇、 低级酯、 醚、 酮、 腈等， 优选水溶性强的溶剂， 如甲醇、 乙醇。 具体地来说，所述分段收集是根据 UV检测仪监控峰形曲线分段收集解析液， 收集分三大 段完成， 分别为紫外曲线开始显著上升至 75°/ 80%峰高处左右为第一大段， 曲线上升阶段的 75% 80%峰高处至曲线下降阶段的 80% 70%峰高处为第二大段， 曲线下降阶段的 80°/ 70% 峰高处至曲线基本回落至基线处为第三大段， 每一大段进一步细分小段收集， 收集时长一般 5秒 /样〜 60秒 /样， 优选 15秒 /样〜 40秒 /样。 作为另一种实施方式， 所述奥利司他粗品溶液采用分批连续方式上柱、 解析的连续进样 纯化方式， 且对每批解析液进行分段收集。 本发明研究开发的奧利司他纯化制备方法， 其批纯化制备量高达千克级甚至万克级， 纯 化制备批量放大倍数达以往工艺的近四个数量级， 纯化生产周期亦由以往的长达数十小时缩 短至约 1 2小时， 若进行连续进样生产周期甚至可进一歩降低至 20 40分钟。 催化氢化后 纯度为 85% 95%左右、 含量约为 50% 70% (重量 /重量） 左右的奥利司他粗品， 直接经一次 DAC制备柱纯化后其纯度即可满足当前临床用药质量标准要求， 纯化合格样品仅需结晶一次 制得药用 B晶型后即可用于奥利司他制剂生产。 该法易于生产操控， 可实现不同生产规模的 线性放大， 同时采用连续进样方式更可有效降低单位产量产品的溶媒消耗， 相比低压柱层析 与简单的反复结晶纯化， 可大幅缩短生产周期至原周期的 5%左右。 纯化收率可达 90%〜95%， 纯化与结晶总收率达 85%〜93%， 收率最高可达当前其它生产技术的近十倍甚至数十倍。 附图说明 图 la和图 lb为 MC制备柱纯化解析过程 UV检测仪监控曲线及分段收集示意图； 其中 图 la为 DAC制备柱单针进样纯化解析紫外监测图谱及分段收集示意图； 图 lb为 DAC制备柱多针连续进样纯化解析紫外监测图谱及分段收集示意图； 图 2a和图 2b为 DAC制备柱纯化前奥利司他粗品的 HPLC检测结果； 其中 图 2a为实施例一、 二、 四纯化前奥利司他粗品的 HPLC检验结果； 图 2b为实施例三纯化前奥利司他粗品 HPLC的检验结果； 图 3a、 3b、 3c和 3d为纯化后奥利司他成品的 HPLC检测结果， 其中 图 3a为实施例一纯化后奥利司他成品 HPLC检验结果； 图 3b为实施例二纯化后奥利司他成品 HPLC检验结果； 图 3c为实施例三纯化后奥利司他成品 HPLC检验结果； 图 3d为实施例四纯化后奥利司他成品 HPLC检验结果。 具体实施方式 以下实施例为对本发明的详细说明， 而非限制本发明。 实施例一 将约 80Kg调和粒径为 10 μ m、 孔径为 300 A的反相 C18球形硅胶填料倒入约 150L异丙 醇中， 搅拌均匀制成填料浆液， 去除填料碎片及细粉后， 快速倾倒至内径为 Φ 800mm 的 DAC 制备柱柱筒中， 设定装柱压力 20MPa, 开启装柱机气动活塞杆进行轴向压缩， 同时打开 DAC 制备柱下端阀门将异丙醇排出、 回收。 活塞压缩至设定压力 20MPa时， 完成装柱， 柱床高度 250mm, 柱床规格 > 800mmX 250ram。 装好的 DAC制备柱经柱效测试， 理论塔板数达 46812N/m。 将利普司他汀 （纯度 87. 46%, 含量 66. 20%)用 86%甲醇溶液溶解， 溶解稀释后利普司他
更正页 （细则第 91条) 汀浓度约为 2. 5%， 然后进行催化氢化。 催化氢化的方法可采用美国专利 US4 598 089中的方 法， 在此不作赘述。 完成氢化经过滤除去 Pd/C催化剂， 制得纯度为 88. 81% (如图 2a所示） 的待纯化奥利司他粗品的甲醇溶液。 开启 UV检测仪，设定检测波长为 195nm，预热半小时。依次分别用 2B. V.无水甲醇及 80% 甲醇溶液对 DAC制备柱内异丙醇进行置换、洗涤、平衡， 至 UV检测仪监控曲线水平稳定后基 线调零。 本发明中的 B. V.指 Bed Volume , 即柱床体积。 取含有 2Kg奥利司他粗品的上述溶液， 用高压制备泵以 0. 2B. V. /min的流速上样吸附。 上样结束后立即用 80% 83%甲醇溶液线性梯度洗涤，洗至 UV监测曲线水平后换用 85%甲醇溶 液解析， 出峰后根据峰形曲线按每 15 秒 /样〜 30 秒 /样立即进行分段收集， 流速均为 0. 2B. V. /min, 各收集液分别取样进行 HPLC检测。 将经 HPLC检测奥利司他主峰纯度〉 99. 0%、单杂〈0. 2%且总杂〈1. 0%的符合用药质量标准要 求的收集液合并、 浓缩、 结晶及干燥， 结晶及干燥采用现有技术， 例如可采用美国专利 US6 734 314所记载的方法。 制得符合当前药用标准的奥利司他 1. 84Kg。 经检验， 成品纯度 为 99. 82% (如图 3a所示）， 最大单杂 0. 10%, 总杂 0. 18%, 含量 99. 62%, 纯化收率 92. 13°/ 本发明所述纯度、 含量均为 HPLC法检测值， 其具体含义及计算方法在 《中国药典》 附录
《高效液相色谱法》相关章节均有说明。 本发明所述纯度具体是按照药典附录《高效液相色 谱法》项下的 "面积归一化法"检测计算得到， 含量是按照外标法检测计算得到。 实施例二 将约 75Kg调和粒径为 10 μ m、 孔径为 100 A的反相 C8球形硅胶填料倒入约 150L异丙醇 中， 搅拌均匀制成填料浆液， 去除填料碎片及细粉后， 快速倾倒至内径为 Φ 800mm的 DAC制 备柱柱筒中， 设定装柱压力 24MPa， 开启装柱机气动活塞杆进行轴向压縮， 同时打开 DAC制 备柱下端阔门将异丙醇排出、回收。活塞压缩至设定压力 24MPa时，完成装柱,柱床高度 250 柱床规格 Φ 800mmX 250mm。 装好的 DAC制备柱经柱效测试， 理论塔板数达 42663N/m 将利普司他汀（纯度 87. 46%， 含量 66. 20 用 85%甲醇溶液溶解， 溶解稀释后利普司他 汀浓度约为 3%，然后进行催化氢化。催化氢化的方法可采用美国专利 US4, 598, 089中的方法， 在此不再赘述。 完成氢化经过滤除去 Pd/C催化剂， 制得纯度为 88. 81% (如图 2a所示） 的待 纯化奥利司他粗品的甲醇溶液。 开启 UV检测仪， 设定检测波长为 195nm， 预热半小时。 依次分别用 2B. V.无水甲醇及适 量 85%甲醇溶液对 DAC制备柱内异丙醇进行置换、 洗涤、 平衡， 至 UV检测仪监控曲线水平稳 定后调零。 取含有 2Kg奥利司他粗品的上述溶液， 用高压泵以 0. 2B. V. /min的流速上样吸附。 上样 结束后立即用 85%甲醇溶液洗涤并解析， 出峰后按每 15秒 /样〜 30秒 /样立即进行分段收集， 流速为 0. 15B. V. /min, 各收集液分别取样进行 HPLC检测。 将经 HPLC检测奥利司他主峰纯度〉 99. 0%、单杂〈0. 2%且总杂 <1. 0%的符合当前临床用药质 量标准要求的收集液合并、 浓缩， 按美国专利 US6, 734， 314所述方法进行结晶、 干燥， 制得 符合当前药用质量标准的奥利司他 1. 83Kg。 经检验， 成品纯度为 99. 80% (如图 3b所示）， 最 大单杂 0. 10%， 总杂 0. 20%' 含量 99. 48%， 纯化收率 91. 53%。 实施例三 将约 10Kg调和粒径为 15 m、 孔径为 100 A的以聚苯乙烯 /联乙烯苯为基质的耐高压反 相聚合物树脂填料倒入约 20L异丙醇中， 搅拌均匀制成填料浆液， 去除填料碎片及细粉后， 快速倾倒至内径为 Φ 300mm的 DAC制备柱柱筒中， 设定压力 10MPa， 开启装柱机气动活塞杆进 行轴向压缩， 同时打开 DAC制备柱下端阔门将异丙醇排出、回收。活塞压縮至设定压力 lOMPa 时， 完成装柱， 柱床高度 300mm， 柱床规格 Φ 300mm X 300mm。 装好的 MC制备柱经柱效测试， 理论塔板数达 38764N/m。 将利普司他汀（纯度 89. 17%， 含量 64. 56°/。）用用 84%乙醇溶液溶解， 溶解后利普司他汀 浓度约为 3%, 催化氢化可依照美国专利 US4, 598， 089中所记载的方法进行。 完成氢化并经过 滤除去 Pd/C催化剂后， 制得纯度为 90. 15% (如图 2b所示） 的奥利司他粗品的乙醇溶液。 开启 UV检测仪， 设定检测波长为 195nm， 预热半小时。 依次分别用 2B. V.无水乙醇及适 量 82. 5%乙醇溶液对 DAC制备柱内异丙醇进行置换、 洗涤、 平衡， 至 UV检测仪监控曲线水平 稳定后调零。 取含有 1. 5Kg奥利司他粗品的上述溶液，用高压制备泵以 0. 15B. V. /min的流速上样吸附。 上样结束后立即用 75%〜82%乙醇溶液线性梯度洗涤至 UV检测曲线水平后改用 83. 0%乙醇溶液 解析， 流速均为 0. IB. V. /min， 出峰后按每 20秒 /样〜 40秒 /样立即进行分段收集， 各收集液 分别取样进行 HPLC检测。 将经 HPLC检测奥利司他主峰纯度〉 99. 0%、单杂〈0. 2%且总杂〉1. 0%的符合临床用药质量标 准要求的收集液合并、 浓縮， 按美国专利 US6， 734， 314所述方法进行结晶、 干燥， 制得药用 标准的奥利司他 1. 40Kg。 经检验， 成品纯度为 99. 66% (如图 3c所示）， 最大单杂 0. 17%, 总 杂 0. 34%， 含量 98. 87%， 纯化收率 93. 46%。 实施例四 本实施例基于前述实施例。 在完成装柱、 利普司他汀催化氢化、 紫外检测仪预热平衡稳 定及调零等准备工作后， 每次取含有相当于 DAC制备柱内硅胶填料重量 1. 5%〜2. 5% (或聚合 物树脂重量 10%〜15%) 的奥利司他粗品的溶液， 用高压泵以 0. 2B. V. /min的流速上样吸附， 上样结束后立即用 85%的甲醇溶液以同样流速洗涤、 解析。 在解析至奥利司他峰即将流出前 适当时间进行第二针纯化样上柱吸附， 上柱结束立即平衡、 解析。 如此进行多批的样品 "上 柱吸附一 85%甲醇溶液洗漆、 解析" 循环连续纯化制备 （如图 lb所示）。 连续循环进样纯化 过程中， 进样密度以前后相邻两次进样的解析流出峰完全分开且相邻样品间杂质峰与主峰不 重叠为宜， 解析样出峰后按每 15秒 /样〜 40秒 /样立即进行分段收集， 各收集液分别取样进 行 HPLC检测。 将经 HPLC检测奥利司他主峰纯度>99. 0%、 单杂 <0. 2%且总杂〈1. 0%的符合临床 用药质量标准要求的收集液合并、浓缩， 按美国专利 US6, 734, 314所述方法进行结晶、干燥， 制得药用标准的奥利司他。 本例是基于实施例一（采用与实施例 1相同的试验条件）， 连续进样三针， 每针进样量均 含奧利司他约 1. 8Kg， 合并三针纯化解析合格样， 浓缩并结晶， 得奥利司他成品 4. 98Kg。 经 检验， 成品纯度为 99. 64°/。（如图 3d所示）， 最大单杂 0. 13%， 总杂 0. 36%， 含量 99. 12%， 纯 化收率 92. 30%。 本例采用连续进样纯化制备奥利司他， 在保证纯化收率处于较高水平的情况下， 生产周 期縮短至平均每批 30分钟左右， 且溶媒消耗量降低， 具有可观的应用前景。

Claims

权 利 要 求 书
1、 一种奥利司他的制备方法， 其特征在于包括以下歩骤：
( 1 )以反相硅胶或反相聚合物树脂作为 DAC制备柱填料， 以有机溶剂与填料混合搅拌均 匀制浆； ( 2 ) 将匀好的填料浆液装入 DAC制备柱柱筒中， 开启装柱机进行轴向压缩；
( 3 ) 用制备泵将流动相泵入 DAC制备柱中对柱内有机溶剂进行置换洗涤， 同时平衡制备 柱， 柱效测试理论塔板数不低于 35000N/m;
( 4 ) 将奥利司他粗品溶液用高压制备泵注射至 DAC制备柱内上柱吸附；
( 5 ) 上柱吸附结束后用流动相进行解析， 并对解析液分段收集； ( 6 ) 将纯度合格样合并、 浓缩、 结晶及干燥， 制得奥利司他成品。
2、根据权利要求 1所述的奧利司他的制备方法， 其特征在于： 所述反相硅胶填料或反相 聚合物树脂填料的粒径为 5 μ m〜30 μ m,优选 10 μ m〜20 μ m;孔径为 5θΑ〜300 A，优选 100 A〜 150 A; 填料形状为不规则形或球形， 优选球形。
3、根据权利要求 1或 2所述的奥利司他的制备方法， 其特征在于： 所述反相硅胶填料为 以 Si02或其衍生物为基质， 以 C4〜C18脂肪烃链为键合相的硅胶，优选以辛基 C8或十八垸基
C18为键合相的硅胶； 所述反相聚合物树脂为可耐高压聚合物树脂， 其基质为聚苯乙烯 /联乙 烯苯、丙烯酸、酚醛的一种或一种以上的混合作为基质的填料， 优选以聚苯乙烯 /联乙烯苯材 料为基质的填料。
4、根据权利要求 1所述的奥利司他的制备方法， 其特征在于： 所述制浆的适宜溶剂是与 所用填料及流动相溶液化学性质兼容的粘度为 2mPa · s〜5mPa · s的低分子水溶性有机溶剂， 优选配制流动相溶剂的同系物作为制浆溶剂。
5、根据权利要求 1所述的奧利司他的制备方法， 其特征在于： 上柱吸附的载样量对于反 相硅胶填料为 0. 1%〜5. 0%, 优选 0. 5°/。〜2. 0%； 对于反相聚合物树脂为 0. 5%〜30. 0%, 优选 1. 0%〜10. 0%；
6、 根据权利要求 1所述的奥利司他的制备方法， 其特征在于： 所述 DAC制备柱在平衡、 上样及解析的溶液流速为 0. 02B. V. /min 0. 50B. V. /min， 优选 0. 10B. V. /min 0. 20B. V. /min e
7、根据权利要求 1所述的奥利司他的制备方法， 其特征在于： 所述的奧利司他粗品溶液 是将奥利司他中间体利普司他汀经水溶性低粘度低分子有机溶剂溶解稀释后再催化氢化而制 得，或直接采购市售奧利司他粗品经溶解稀释后制得，样品上样浓度为 0. 5% 10%，优选 2% 5%
8、根据权利要求 1所述的奥利司他的制备方法， 其特征在于： 所述流动相采用的水溶性 低粘度低分子有机溶剂为含 1 3个碳原子的低级脂肪烃的一 0H CN、 卤素原子、 氧代、羰 基、 羧基等基团的低取代物、 衍生物或其混合物， 且其粘度 5mPa * S， 如低级脂肪醇、 低级 酯、 醚、 酮、 腈等， 优选水溶性强的溶剂， 如甲醇、 乙醇。
9、 根据权利要求 1所述的奥利司他的制备方法， 其特征在于： 所述分段收集是根据 UV 检测仪监控峰形曲线分段收集解析液， 收集分三大段完成， 分别为紫外曲线开始显著上升至 75°/ 80%峰高处左右为第一大段， 曲线上升阶段的 75% 80%峰高处至曲线下降阶段的 80% 70%峰高处为第二大段， 曲线下降阶段的 80% 70%峰高处至曲线基本回落至基线处为第三大 段， 每一大段进一步细分小段收集， 收集时长一般 5秒 /样〜 60秒 /样， 优选 15秒 /样〜 40秒 /样。
10、 根据权利要求 1所述的奥利司他的制备方法， 其特征在于： 所述奥利司他粗品溶液 采用单针上柱吸附、 解析并进行分段收集； 或采用多针分批连续方式上柱、 解析的连续进样 纯化方式， 且对每批解析液进行分段收集。
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