WO2012031539A1

WO2012031539A1 - 嘧啶核苷衍生物、合成方法及其在制备抗肿瘤、抗病毒药物中的应用

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Publication number: WO2012031539A1
Application number: PCT/CN2011/079301
Authority: WO
Inventors: 常俊标; 安浩云; 余学军; 郭晓河
Original assignee: 河南省科学院高新技术研究中心; 郑州格然林医药科技有限公司; 郑州大学
Priority date: 2010-09-07
Filing date: 2011-09-02
Publication date: 2012-03-15
Also published as: CN102351931B; EP2615101A4; US20130303747A1; CN102351931A; EP2615101B1; US9422321B2; EP2615101A1

Description

说明书

嘧啶核苷衍生物、合成方法及其在制备抗肿瘤、抗病毒药物中的应用技术领域本发明涉及嘧啶类核苷衍生物、制备方法及其应用，尤其涉及 4' -叠氮 -2 ' -去氧 -2 ' _ β -氟代嘧啶类核苷衍生物、其制备方法及其在制备抗肿瘤和抗病毒等方面的应用。背景技术癌症仍然是最常见且严重威胁人类生命健康的最主要疾病之一，是人类健康的第二个最大的杀手。治疗癌症的现有手段包括：手术切除，放射疗法，化学药物疗法，免疫治疗、介入治疗、导入治疗等方法，或这些方法的和并使用。在所有这些方法中，化学疗法是应用最广而且已经用于多种不同的癌症，尤其是那些用其他方法几乎无法治疗。尽管不少具有化学治疗作用的化合物已被用于临床，由于疗效不够突出，治疗范围窄，大多数化学疗法都只限于延缓癌症的恶化而并非真正的治愈。由于肿瘤细胞对一些药物产生耐药性，肿瘤及其转移常常无法用化学疗法治疗。有些肿瘤对一些种类的化疗药物具有内在的抗药性。肿瘤对化疗药物的耐药性是在治疗过程中逐渐产生的。因此，现有的化疗药物在治疗不同种类肿瘤时的效果受到极大的限制。进而，很多不同种类治疗癌症的化疗药物都产生很严重的毒副作用，从而导致化学治疗不能继续进行下去。所以，寻找新的、临床上对疗效更好、毒副反应小的化学抗癌药物对维护人类健康仍然是迫切需要的。

各种病毒，如乙肝、丙肝和艾滋病等，给人类带来的危害极为严重。禽流感来临时期，几乎无药能够治疗。在全球 60亿人口中， 1/2的人生活在乙型肝炎病毒（HBV) 高流行区，约 20亿人被证明有 HBV感染， 3〜4亿人为 HBV慢性感染，其中 15 %〜25 %最终将死于肝硬化和肝癌。在全球前 10位疾病死因中，乙肝占第 7位，每年因乙肝死亡者约为 100万例。乙型肝炎病毒是威胁人类健康的重大疾病。在治疗 HBV药物中面临着许多难题，如耐药性，药物靶点不清楚，产生耐药性等。仍然需要研究开发高效、低毒的抗 HBV新药。

丙型肝炎呈全球性流行，是欧美及日本等国家终末期肝病的最主要原因。据世界卫生组织 2009年统计全球约 1. 8亿人患丙肝，而且每年新发丙型肝炎病例约 3. 5万例。全球由丙肝相关肝病引起的死亡人数每 10年约增加一倍，目前丙肝死亡率在全球所有疾病中排在第十位。目前还没有丙肝疫苗。美国 Valeant发明的利巴韦林（三氮唑核苷）和聚乙二醇化干扰素 (X-2b联合治疗慢性丙肝，已被认为是常规治疗， HCV病毒应答率

( SVR) 仅为 47%〜54%，而且还有部分病人不得不因其严重的副作用而停止用药。还有众多病人没药可用。因此，研究开发高效、低毒抗丙肝新药迫在眉睫。

艾滋病毒（HIV) 是严重威胁人类健康的重大疾病。虽然已有几个核苷类药物用于减缓艾滋病人的痛苦，但大都疗效不高，毒副作用大，而且费城容易产程耐药性。因此，研究核苷类抗艾滋病新药仍然是人类战胜严重疾病的重要领域。

天然产物脱氧核酸 DNA和核酸 RNA单体核苷经修饰改性而得到的天然产物类药物，毒副作用较低。到目前为止，有 70多个核苷类药物被广泛地用于治疗癌症、病毒等疾病。然而，仍然不能满足维护人类健康的需要，仍需研究开发出更好的核苷类新药，最理想的药物应该是可以同时治疗病毒和肿瘤，对人类健康会起到更为重要的作用。发明内容本发明目的在于提供一类具有抗肿瘤，抗癌，抗病毒抗传染及抗增生扩散等活性的 4 ' -叠氮 -2 ' -去氧 -2 ' _ β -氟代嘧啶类核苷衍生物；另一目的在于提供其制备方法；又目的在于提供其在制备抗病毒和抗肿瘤药物方面的应用。

为实现本发明目的，本发明对核糖核苷进行了结构修饰，合成了 4位和 5位取代的以及取代 4， 5-环化嘧啶类的 4- ' 叠氮 -2 ' -去氧 -2 ' _ β -氟代核糖核苷衍生物及其差向异构体，并包括其在药学中可使用的各种盐及衍生物。其具有如下结构通式，并且包括其药学中可以使用的盐，酯，前药或其代谢物。

其中，选自 0H， NHOH, NH0CH₃, NHOEt, NHOR, NROH, NROR, NHR, NRR, NH (CH₂) _n0H_: NH (CH₂) _n0R, NH (CH₂) nSR, N [ (CH₂) nOH] ₂, NHCH₂Ar, NHCH₂- Het， CN, COOH, C0NH₂, COOR, CSNH₂, C (=NH) NH₂, C (=NH) OR, C (=NH) OH, NHNH₂, NHNHR, NRNH₂, NRNHR, NRNRR, NHNHC (=0) NH₂, NHNHC (=S) NH₂, NHNHC (=0) NHR, NHNHC (=S) NR, NHC (=0) NHR, NHC (=S) NHR, NHCH₂C0NH₂, NHCH₂C0NHR; 或者 _NRR， NRNHR, NRNRR基团上的两个 R基团连接成 C₃-C₁₀ 元的环状基团且该环状基团中杂原子为 N和 0或 S原子；其中， n = 2- 8 ; R 是 d- C₈的烷基、 C₂- C₈烯基、 C₂- C₈烷烯基、 C₂- C₈烯烷基、 C₂- C₈ 炔基、（：₂_(：₈烷炔基、（：₂_(：₈炔烷基、（：₃_(：₈环烷基、（：₃_(：₈环烯基、氨基酸、取代氨基酸、 d- 羟烷基、 C₂-C₈硫烷基、 d- 腈烷基、 d-Cs氨烷基、 d-C₈羧基烷基、甲氧基、甲硫基、（：₂_(：₈烷氧基、 ( ₂_(：₈烷硫基， C₆_C₁₂芳香烷基、 C₃_C₆杂环烷基; 或 R是 H， F, CI, Br, I， CF₃， 0CF₃, 0- C₆_C₁₂芳香基、 0- C₃_C₆杂环基；其中， Ar是 Cs-G。的共轭单环芳香基或双环芳香基； Het是含有 1_3个 0或 S杂原子的 Cs-G。的共轭单环芳香、双环芳香基；

选自 H, OH, NH₂, 甲基、乙基、 G-G。的烷基、甲氧基、甲硫基、。烷氧基、 CfG。烷硫基、 CH₂NH₂、 CH₂0H或 CH₂0R; 或 C^G。共轭芳香环基、 C₃_C₆杂环烷基或者其环上含有被上述 R取代的基团；

选自 H， CH₃，CH₂CH₃， CH₂CH₂CH₃, CHMe₂, CH₂SH， CH₂CH₂SH , CH₂0H, CH₂C₆¾, CH₂C0NH₂, CH₂C00H, CH₂C00R, CH₂CH₂C0NH₂, CH₂CH₂C00H, CH₂CH₂C00R, CH₂CH₂CH₂NHC (=NH) NH₂, CHMeCH₂CH₃， CH₂CHMe₂， CH₂CH₂CH₂CH₂NH₂, CH₂CH₂SCH₃, CH (OH) CH₃, CH₂C₆H₄0H- p， CH₂-imidazole, CH^indole 。烷基，。羟烷基，（：₄-₁₍₎硫烷基， Ar, CH₂Ar, CH₂_Het或者 Ar 、 He环上含有被上述 R取代的基团； Ar 、 Het、 R基团与上述定义相同；是甲基、乙基、 -G。的烷基、 C₆_C₁₂芳香烷基或 C₃_C₆杂环烷基；

R5是 C「C₁₀的院基、 C₂ ^_Cio C₂_C₁₀院録基、 C₂_C₁₀ ¾院基、 C₂_C₁₀块基、 C₂ ^_Cio 烷炔基、 -G。炔烷基、 d- 。腈烷基、 d- 。氨烷基或 d-G。羧基烷基；（CH₂) _n0H, (CH₂) _n0R, (CH₂) _nSR, CH₂Ar, CH₂CH₂Ar, CH₂_Het, CH₂CH₂_Het, 或者 Ar 、 He环上含有被上述 R取代的基团；其中， n = 2-8； Ar 、 Het、 R基团与上述定义相同；

R₆是 NHR, NRR, NH (CH₂) _n0H, NH (CH₂) _n0R, NH (CH₂) nSR, N [ (CH₂) nOH] ₂, NHCH₂Ar, NHAr, N ( CH₂Ar ) ₂， NAr₂, NHCH₂-Het ; 含 3_8个碳原子的环状氨基或其环上的 1_2碳原子被 0、 S、 NH, NR, P0，或 P ( 0) (OH) 2取代；其中， R基团是 C厂 C₁₅的烷基， C₂- C₁₅烯基， C₂- C₁₅ c₂-Ci5 c₂-Ci5 ¾: ， c₂-Ci5 c₂_c₁₅ c₃_c₁₅ c₃_c₁₅ 环烯基， c₆-c₁₂芳香烷基， c₃-c₆杂环烷基，羟烷基，硫烷基，腈烷基，氨烷基或羧基烷基； Ar 、 Het、 R基团与上述定义相同；另外，本发明还合成了具有下列结构通式（5 )和（6 ) 的化合物，并且包括其药学中可以使用的盐，酯，前药或其代谢物。

其中，如上所述。是 -(：₁₈的烷基、羟甲基、羟乙基、羟丙基或 C₄-C₁₍₎羟烷基； CH₂0R, CH₂SR, Ar, Het, (CH₂) !-^-Ar, (CH₂) !-^-Het, 或 d-ds的烷基连中含有 1_3双键或三键或 1_3个 0, S原子； Ar和 Het基团如上所述。

在上述通式 1-6的取代基团中一些典型的芳香基 Ar，杂环基 Het和 R₅， R₇优选哌嗪基，哌啶基，吗啉基，硫代吗啉基，苯基，萘基，呋喃基，噻吩基，吡唑基，吡咯基，咪唑基，噻唑基，恶唑基，异恶唑，异噻唑， [ 1, 2, 4]恶二唑，三唑，噻二唑，吡啶基，哒嗪基，嘧啶基，吡嗪基，三嗪基，中氮茚（indol iz inyl) , 吲哚基，异吲哚基，异喹啉基，喹唑啉基，苯并呋喃，苯并噻吩基，吲唑，苯并嘧唑基，苯并噻唑基，嘌啉，喹啉基，异喹啉， 2, 3-二氮杂萘（cinnol inyl) , 酞嗪，喹嗪基，喹喔啉基，吡唑嘧啶基，萘吡啶，蝶啶，吩嗪，吩噻嗪，苯喔二唑，苯并 [ 1， 2， 4]恶二唑等；其中每个基团均可分别且独立地被一个或一个以上的杂原子 0， N ， S和卤素取代，或被的烷基， 0₃-₁₀ 的环烷基， C₂-₁₀ 的烯基或炔基，芳香基，杂环取代，而且每个这样的基团均可含杂原子。

本发明包括以上述通式 1-6 所包含的核苷化合物为活性成分配制成的制剂成分以及其制剂组成的配制。制剂制备方法中包括：将本发明所涵盖的化合物溶解到水溶性的有机溶剂、非离子性的表面活性剂、水溶性的类脂、各种环糊精、脂肪酸、脂肪酸酯、磷脂或其组合溶剂中而制得制剂溶液；加入生理盐水获 1-20%的碳水化合物。所述有机溶剂包括多聚乙二醇（PEG) , 乙醇，丙二醇或这些溶剂的组合溶剂。本专利所用 "烷基 "指各种饱和的直链的，带侧链的或环状的碳氢基团，优选十个或十个碳以下的小烷基。例如，甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、仲丁基、戊基、己基等仅为本定义中的一些典型例子。所用 "烯基与上述 "烷基"定义相同但其中必须最少有一个碳碳双键（c=c)，所以本发明所用的烯基包括含有两个到十个碳原子的直链的，带有分支链的或环状的并至少含有一个碳碳双键的烃基，如乙烯基，丙烯基，丁烯基等。以此类推，本发明所用的 "炔基"或 "炔烃基 "为上述烷基或烯基并含有至少一个碳碳三键。所以，炔基包括含有两个到十个碳原子并含有至少一个碳碳三键的直链的，带有分支链的或环状的烃基或炔基，如乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基等。本发明所述的 "烯烷基"或 "炔烷基"中碳碳双键或碳碳三键在该取代基的末端而远离取代基与分子总体结构连接的位点；而 "烷烯基"或 "烷炔基"中碳碳双键或碳碳三键则与分子总体结构直接相连。

本发明所用 "环烷基"为环状的碳氢基团并优先选用含有三到八个碳的环烷基。因此，环丙烷、环丁烷、环戊烷、环己烷、环庚烷均为本定义下的典型例子。环烷基中含有一个或两个碳碳双键即形成 "环烯基"。环烷基上还可带有烷基、烯基、炔基、卤原子等。

本发明所述的 "芳香基"为环状共轭芳香系统，也可在环中含有一个或一个以上的非碳原子（除碳以外的其他杂原子如氮，硫，磷等）如苯基，萘基和吡啶基等。这些芳香基还可通过两个共价键与其他的五元或六元芳香基或杂环基团相稠和而形成 "稠合芳香基"。

本发明所述的 "杂环基"， "杂环烷基"系指任何多个原子通过共价键构成的环状共轭或非共轭基团并且至少含有一个非碳原子。杂环基团优选含有氮，硫或氧非碳原子的五元和六元环状系统如嘧唑、吡咯、吲哚、吡啶、噻唑等。这些杂环基团进而与单环或双环或杂环稠合而成 "稠合杂环基"。

本发明所述的 "烷氧基"指把氧原子与直链或带支链的烷烃基连接所形成的烷基氧化物或烷基氧化基。本基团中碳氢部分可含有任何数目的碳原子并可包括一个或两个氧、硫或氮原子，并可含有双键或三键。此类烷氧基团的例子包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、甲氧乙氧基等。同样 "烷硫基"指把硫原子与直链或带支链的烷基连接所形成的烷硫化物或烷基硫化基。本基团中碳氢部分可含有任何数目的碳原子并可包括一个或两个氧、硫或氮原子，并可含有双键或三键。此类烷硫基团的例子包括甲硫基、乙硫基、丙硫基、异丙硫基、甲氧乙硫基等。 "烷基胺基"指直链或带支链的烷烃氨基，其中氨基氮原子可含有一个或两个烷基，其中该烷基中可含双键或三键。本基团中碳氢部分可含有任何数目的碳原子并可包括一个或两个氧，硫或氮原子，并可含有双键或三键。此类烷基氨基的例子包括甲氨基、二甲氨基、乙氨基、二乙氨基等。而"氨烷基"指氨基在烷基末端，如氨基乙基为 H₂NCH₂CH₂-。

本发明中的 "氨基酸"指取代的天然和非天然的氨基酸，纯的 L- 或 D- 构型或外消旋混合物，以及其由氨基和羧基而衍生出来的基团。

特别值得进一步说明的是，上述所定义的各种取代基还包括它们被进一步取代而构成的基团，其中这些新的取代基也可含有其他的基团。例如，烷基或芳香基上的氢原子被氨基，卤素或其他基团取代即成为新的属于上述各定义中的基团。

本发明所述通式 1-6中所涵盖的化合物及其盐和前药用于制备治疗、预防或缓解抗肿瘤、抗病毒药物或药物制剂。尤其适用于治疗或缓解人体组织或器官肿瘤细胞引起的癌症。所指癌症优选结肠癌、肝癌、淋巴瘤、肺癌、食管癌、乳腺癌、中枢神经系统肿瘤、黑色素瘤、卵巢癌、宫颈癌、肾癌、白血病、前列腺癌、胰腺癌、胃癌等。本发明所述通式 1-6中的化合物还可用于治疗或预防或缓解病毒引起的疾病。所指病毒优选乙型肝炎、丙型肝炎、爱滋病毒、黄热病毒（YFV)、呼吸道合胞病毒（RSV)、单纯疱疹病毒（HSV)、牛病毒性腹泻病毒（BVDV)、庚型肝炎病毒（HGV)、 GB病毒 -B (GBV_B)、登革病毒（Dengue )、人鼻病毒（HRV)、脊髓灰质炎病毒（Pol iovirus )、水痘-带状疱疹病毒（VZV)、 EB病毒（EBV)、细胞巨化病毒（CMV) 等。本发明所述通式 1-6中化合物盐形式可以是由分子中带有正电荷的基团（如胺基）与药学中适宜的负离子形成的。适宜的负离子包括但并不限于氟化物、氯化物、溴化物、碘化物、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐、酒石酸盐、甲基磺酸盐、三氟乙酸盐、马来酸盐、乙酸盐等。药学中可使用的盐还可以由化合物中的带负电荷基团（羧基）与正离子形成。可以用于本目的带正电荷离子，如钠盐、钾盐、镁盐、钙盐、和有机胺盐离子如四甲基铵盐离子，四丁基铵盐离子及其他的有机离子。本发明创新点及优点在于：对核苷嘧啶碱基进行修饰，发明合成了多系列 4' -叠氮 -2 ' -去氧 -2 ' _ β -氟代嘧啶类新型核苷衍生物，这些化合物具有抗肿瘤，抗癌，抗病毒抗传染及抗增生扩散等活性；制备方法可行；将其应用于治疗病毒和肿瘤药物，具有好的应用前景。具体实施方式通过以下详细实施例对本发明进行更好的说明。实施例 1 本发明专利所涵盖的嘧啶核苷衍生物可由下述方案合成关键中间体化合物 3: 关键中间体 2 '-脱氧 -2 ' - β -氟 -4 '-叠氮 -3 ' - 苯甲酰基 -5 '-(h (间-氯苯甲酰肌）尿苷 ( 3 ) 的合成方法参见 CN 100532388C文献说明书中描述。本专利对最后两步的合成工艺进行了修改：将化合物 1溶于 DMF中，搅拌下加入苯甲酰氯，而后分别加入 mCPBA/mCBA, 室温反应 8 h，过滤。减压下移除溶剂（50°C以下），用柱色谱纯化，得到化合物 3 ( 71. 3%)。见路线 A。

路线 A、关键中间体 3的合成实施例 2 本发明所述的通式 1嘧啶核苷衍生物由下述方法合成；

关键中间体 3的 4位先活化（Ding, Y.； Habib, Q.； Shaw, S. W.； Li, D. Y.； Abt, J. W.； Hong, Z.； An, H. J. Combinatorial Chem. 2003, 5， 851 - 859)。不同类型的取代氨、羟氨、肼等类构造分子（Bui lding Blocks ) 与化合物 4反应，脱掉保护及后即得所要的产品。 m- ClBz

路线 B、活性中间体的合成活性中间体 4的合成：反应瓶中加入保护的尿苷 3 (3.00 g, 5.66 mmol), 无水二氯甲烷（600 ml), DMAP (0.14 g, 1.13隱 ol)和 N_乙基二异丙基胺（5.84 g, 45.28 mmol )o 反应混合物在室温和氮气保护条件下搅拌 1小时。加入 TPSC1 (3.43 g, 11.32 mmol) 之后，继续搅拌 22小时。减压下除去溶剂，粗产品用硅胶柱提纯 (TLC，石油醚-乙酸乙酯 = 5/1， R_f= 0.5), 用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂作洗脱液，得到 3.87克白色固体产品 4，收率： 86%。见路线 B。

实施例 3

Cmdilkm^DMAP'Ca琴 (CH₇)¾， DMF,0J¾ 5-01 -5-33

路线（：、 4-取代嘧啶核苷 5-01至 5-33的合成合成 4-取代嘧啶核苷 5-01至 5-33的通用过程：于反应瓶中依次加入无水 N， N-二甲基甲酰胺， DMAP (0.2 eq), N_乙基二异丙基胺（ 5 eq)和所选的胺类构造分子（1.5 eq)。反应混合物在室温和氮气保护条件下搅拌 0.5 小时。加入乙酸乙酯，用水洗涤三次，无水硫酸钠干燥。减压条件下除去溶剂。所得粗产品和氨气饱和的甲醇溶液在封闭的反应瓶中室温搅拌 12小时。减压下除去溶剂，粗产品用制备硅胶色谱板提纯白色固体产品 5-0广 5-33。见路线 (：。所得产品结构中基团见下表 1:

上表中典型化合物的核磁共振图谱和质谱数据：

化合物 5-01: ¾NMR (300 MHz, DMSO^) δ 1.10 (t, 3Η， /= 6. OHz, C¾)， 3.25 (m, 2H， C¾CH₂)， 3.6—3.8 (m, 2H， 5， — CH₂)， 4.49 (d， 1H， /= 24Hz, 3， — H)， 5.24 (d， 1H， /= 54Hz, 2， — H)， 5.77 (d， 1H， J: 12. OHz, 5-H), 6.40 (d， 1H， J : 12.0Hz, H)， 7.51 (d， 1H， / = 9. OHz, 6_H)， 7.92 (t, 1H， / = 6.0Hz, NH)。

化合物 5-03: HRMS (ESI) calcd for C₁₇H₁₉FN₆0₅Na [M + Na] + 429.1299， found 429.1276； calcd for C₁₇H₂。FN₆0₅ [M + H]⁺ 407.1479, found 407.1456。化合物 5- 04: ¾NMR (300 MHz, DMS0_rf6) δ 1. 40 (m, 6H， 2 X CH₃) , 3. 15 (m，4H， 2 X CH₃CH₂) , 3. 65 (m, 2H, 5， _CH₂)， 4. 72 (d， 1H， J = 6. 0Hz, 3， -H) 5. 21 (d， 1H， J : 54Hz, 2， — H)， 5. 79 (s， 1H， 3， -OH) , 5. 92 (d， 1H， = 6. 0Hz, 5-H) , 6. 28 (s， 1H， 5， -OH) , 6. 55 (d， 1H， = 9. 0Hz, — H)， 7. 82 (d， 1H， = 6. 0Hz, 6_H)。

化合物 5- 05: ¾NMR (300 MHz, DMSO_d6) δ 3. 55 (m, 4H， 2 X CH₂) , 3. 77 (m, 2H, 5， — CH₂)， 3. 95 (m, 4H， 2 X CH₂) , 4. 74 (d， 1H， = 21Hz, 3， — H)， 5. 30 (d， 1H， J : 54Hz, 2， _H)， 5. 90 (d， 1H， J : 6. 0Hz, 5-H) , 6. 55 (d， 1H， = 6. 0Hz, — H)， 7. 97 (d， 1H， = 9. 0Hz, 6_H)。

化合物 5- 06: HRMS (ESI) calcd for C_uH₁₅FN₆0₅Na [M + Na] ⁺ 353. 0986， found 353. 0981 ; calcd for C_uH₁₆FN₆0₅ [M + H] + 331. 1166， found 331.

化合物 5- 07: HRMS (ESI) calcd for C₁₀H₁₃FN₆0₅Na [M + Na] ⁺ 339. 0829， found 339. 0831。

化合物 5- 08: HRMS (ESI) calcd for C_uH₁₅FN₆0₅Na [M + Na] ⁺ 353. 0986， found 353. 0986 o

化合物 5-09: HRMS (ESI) calcd for C₁₄H₁₅FN₆0₅Na [M + Na] ⁺ 389. 0986， found 389. 0995； calcd for C₁₄H₁₆FN₆0₅ [M + H] ⁺ 367. 1166， found 367. 1167。

化合物 5-10: HRMS (ESI) calcd for C₁₅H₂₁FN₆0₄Na [M + Na] ⁺ 391. 1506, found 391. 1517； calcd for C₁₅H₂₂FN₆0₄ [M + H] ⁺ 369. 1687, found 369.

化合物 5-11 : HRMS (ESI) calcd for C₁₈H₂₁FN₆0₆Na [M + Na] ⁺ 459.

found 459. 1405； calcd for C₁₈H₂₂FN₆0₆ [M + H] ⁺ 437. 1585, found 437.

化合物 5- 12: HRMS (ESI) calcd for C₁₃H₁₇FN₆0₅Na [M + Na] ⁺ 379. 1142， found 379. 1123； calcd for C₁₃H₁₈FN₆0₅ [M + H] ⁺ 357. 1323， found 357. 1304。化合物 5-13： HRMS (ESI) calcd for C_uH₁₅FN₆0₅Na [M + Na] ⁺ 353. 0986， found 353. 0966; calcd for C_uH₁₆FN₆0₅ [M + H] ⁺ 331. 1166， found 331. 1149。

化合物 5-14： HRMS (ESI) calcd for C₁₂H₁₇FN₆0₅Na [M + Na] ⁺ 367. 1142， found 367. 1126； calcd for C₁₂H₁₈FN₆0₅ [M + H] ⁺ 345. 1323， found 345. 1308。

化合物 5-15： HRMS (ESI) calcd for C₁₅H₁₆FN₇0₄Na [M + Na] ⁺ 400. 1145, found 400. 1129； calcd for C₁₅H₁₇FN₇0₄ [M + H] + 378. 1326， found 378. 1306。

化合物 5-16： HRMS (ESI) calcd for C₁₆H₁₇FN₆0₄Na [M + Na] ⁺ 399. 1193， found 399. 1179； calcd for C₁₆H₁₈FN₆0₄ [M + H] ⁺ 377. 1374， found 377. 1365。

化合物 5-17 : ¾NMR (300 MHz, DMS0_rf6) 5 3. 74 (m, 2H, 5， - CH₂)， 4. 45 (d， 1H， J : 24Hz, 3， _H)， 5. 28 (d， 1H， J : 54Hz, 2， _H)， 5. 68 (d， 1H， = 30Hz, 5-H) , 6. 34 (m, 1H， H)， 6. 85 (d， 1H， = 9. 0Hz, 6— H)。 HRMS (ESI) calcd for C₉H_uFN₆0₅Na [M + Na] ⁺ 325. 0673, found 325. 0672。

化合物 5- 18 : HRMS (ESI) calcd for C₁₂H₁₇FN₆0₆Na [M + Na] ⁺ 383. 1091， found 383. 1068； calcd for C₁₂H₁₈FN₆0₆ [M + H] ⁺ 361. 1272, found 361. 1124。

化合物 5- 19 : HRMS (ESI) calcd for C₁₃H₁₉FN₆0₆Na [M + Na] ⁺ 397. 1248， found 397. 1229； calcd for C₁₃H₂。FN₆0₆ [M + H] ⁺ 375. 1428， found 375.

化合物 5- 20 : HRMS (ESI) calcd for C₁₉H₂oFN₇0₄Na [M + Na] ⁺ 452.

found 452. 1454； calcd for C₁₉H₂₁FN₇0₄ [M + H] ⁺ 430. 1639， found 430.

化合物 5-21 : HRMS (ESI) calcd for C_uH₁₅FN₆0₄Na [M + Na] ⁺ 337.

found 337. 1036; calcd for C_uH₁₆FN₆0₄ [M + H] ⁺ 315. 1217, found 315.

化合物 5- 22 : HRMS (ESI) calcd for C₁₃H₁₈FN₇0₅Na [M + Na] ⁺ 394. 1251, found 394. 1258； calcd for C₁₃H₁₉FN₇0₅ [M+ + H] 372. 1432， found 372. 化合物 5- 23: HRMS(ESI) calcd for C₁₃H₁₉FN₆0₅Na [M + Na] ⁺ 381.1299 found 381.1322； calcd for C₁₃H₂。FN₆0₅ [M + H]⁺ 359.1479, found 359. 化合物 5-24: HRMS(ESI) calcd for C₁₄H₂₁FN₆0₄Na [M + Na] ⁺ 379. 1506, found 379.1508； calcd for C₁₄H₂₂FN₆0₄ [M+ + H] 357.1687, found 357. 化合物 5- 25: HRMS(ESI) calcd for C₁₅H₂₃FN₆0₄Na [M + Na] ⁺ 393. 1663 found 393.1658； calcd for C₁₅H₂₄FN₆0₄ [M + H]⁺ 371.1843 found 371. 1841 化合物 5- 26: HRMS(ESI) calcd for C₁₆H₂₅FN₆0₄Na [M + Na] ⁺ 407. 1819 found 407.1807； calcd for C₁₆H₂₆FN₆0₄ [M + H]⁺ 385.2000 found 385. 化合物 5- 27: HRMS(ESI) calcd for C₁₇H₂₇FN₆0₄Na [M + Na] ⁺ 421. 1976 found 421.1962； calcd for C₁₇H₂₈FN₆0₄ [M + H]+ 399.2156, found 399. 化合物 5- 28: HRMS(ESI) calcd for C_1QH₁₃FN₆0₄Na [M + Na] ⁺ 323. 0880 found 323.0878； calcd for C₁₀H₁₄FN₆0₄ [M+ + H] 301.1061 found 301. 化合物 5-29: ¹誦 R (300 MHz, DMS0_rf6) S2.68 (m, 4H 2 X SCH₂) , , 3.88

(m, 2H, 5 — CH₂)， 4.05 (m, 4H 2XNCH₂), 4.67 (d 1H = 21Hz, 3 — o H)，

o o o 5.25 (d 1H = 54Hz, 2 _H)， 6.24 (d 1H = 9.0Hz, 5_H)， 6.57 (d 1H J: 12Hz, H)， 7.82 (d 1H = 9.0Hz, 6— H) ; ¹³C NMR (75MHz, DMS0_d6) δ 27.7 (2 X CH₂) , 63.4 (3 X CH₂) , 76.3 (3 - CH d = 24.8Hz), 84.2 ( - CH d = 17.3Hz), 92.5 (5- CH)， 96 (2 - CH d J_FC = 192Hz) , 98.3 (4 - C d J= 7.5Hz), 143.2 (6- CH)， 156.8 (4- C) 163.6 (CO) HRMS (ESI) calcd for C₁₃H₁₇FN₆0₄SNa [M + Na]⁺ 395.0914 found 395.0913； calcd for C₁₃H₁₈FN₆0₄S [M + H]⁺ 373.1094 found 373.1093 化合物 5-30: 匪 R (300 MHz, CD₄0)： δ 3.85 (2H, s, 5 - CH₂)， 4.49 (1H dd J = 21.8 and 4.7 3 - H)， 5.21 (1H d, J = 53.6 2 - H) 5.93 (1H， s， 5-H), 6.47 (1H， dd， J = 11.9 and 4.9, - H)， 7.61 (1H， s, 6-H)； ¹³C NMR (75 MHz, CD₄0)： δ 63.4 (5， — CH₂)， 76.4 (3， - CH， d， J 24.9), 84.6 ( -CH)， 92.6 (5_CH)， 96.2 (2， _CH， d， J_FC 192.4) , 98.6 (4， - C)， 144.1 (6-CH) , 156.7 (4-C) , 161.9 (CO)； HRMS (ESI) calcd for C₁₀H₁₃FN₈0₅Na [M + Na] + 367.0891， found 367.0912 (calcd for C₁₃H_2QFN₆0₆ [M + H] + 345.1071, found 345.1103)。化合物 5-32: ¾匪 R (300 MHz, CD₄0)： δ 2.01 (2H, m, ΝΗ0Η₂0 Η₂ΝΗ₂) ,

3.15 (2H, t, J = 6.4， NHCH₂CH₂C ₂NH₂) , 3.43 (2H, t, J = 5.8， ΝΗ0 Η₂0Η₂ΝΗ₂) , 3.85 (2H, s， 5， ~CH₂) , 4.52 (1H， dd， = 22.1 and 4.6, 3， - H)， 5.31 (1H， dt, = 53.6 and 5.0, 2， - H)， 5.93 (1H， d， = 7.6,

5- H), 6.49 (1H， dd， = 11.8 and 5.0， - H)， 7.68 (1H， ά, J = 7.6，

6- H)； ¹³C匪 R (75 MHz, CD₄0)： δ 33.0， 35.1， 40.0 and 63.4 (all CH₂)， 76.4 (3， -CH， d， 25.1), 84.5 (1， _CH， d， 17.4), 96.2 (2， _CH， d， J_FC 192.3) , 97.2 (5- CH)， 98.6 (4， - C， d， J7.4), 141.5 (6-CH) , 158.2 (4-C) , 166.1 (CO)； HRMS (ESI) calcd for C₁₂H₁₈FN₇0₄Na [M + Na] + 366.1302， found 366.1339 (calcd for C₁₂H₁₉FN₇0₄ [M + H] + 344.1483， found 344.1526)。

化合物 5-33: ¾ NMR (300 MHz, CD₄0)： δ 2.63 (2H, m, NHCH₂CH (OH) C聊 ₂)， 3.25 (2H, m, NHC .CH (OH) CH₂NH₂) , 3.75 (1H， m, NHCH₂C (0H) CH₂NH₂) , 3.86 (2H, s, 5， ~CH₂) ,

4.52 (1H， dd， / = 22.0 and 4.7, 3， - H)， 5.22 (1H， dt, / = 53.8 and 4.9, 2， - H)，

5.99 (1H， d, J= 7.6, 5-H), 6.49 (1H， dd， J = 11.8 and 5.2, - H)， 7.70 (1H， dd， / = 7.6 and 0.9, 6-H)； ¹³C NMR (75 MHz, CD₄0)： δ 39.8, 42.7 and 63.3 (all CH₂), 73. 1 (NHCH₂C (0H)CH₂NH₂), 76.3 (3， — CH, d, J24.8), 84.5 (1， -CH, d, JIT.0) , 96.2 (2， - CH, d, JPC 192. 1), 97.3 (5- CH) , 98.5 (4， - C, d, J8. 1), 141.6 (6-CH) , 158. 1 (4-C) , 166.2 (CO)； HRMS (ESI) calcd for C₁₂H₁₈FN₇0₆Na [M + Na] + 382. 1251, found 382. 1290 (calcd for C₁₂H₁₉FN₇0₆ [M + H] + 360. 1432, found 360. 1468)。实施例 4 氨基酸甲酯盐酸盐的合成：取氨基酸于 50 mL单口瓶中，滴加 2.0 eq的 TMSC1, 然后加入 5 mL干燥的甲醇做溶剂，密封室温搅拌 24 h 。反应完全后蒸出溶剂，再加入甲醇（3X10mL)共蒸，带出剩余的氯化氢，蒸干后得到油状物。加入乙醚后析出白色固体。用甲醇-乙醚重结晶的白色固体产品实验数据见下表。表 2

上表中代表性产品核磁共振数据：

产品 E2: ¾ NMR (300 MHz) 8.78 (s, 2H), 4.33 (t, 1H， / = 6.0 Hz) , 3.73 3H), 3.65 (s, 3H), 3.03 (q, 2H, / = 3· 0 Hz)。

产品 E3: ¾ NMR (300 MHz) 8.55 (s, 1H), 3.87 (d， 1H， / = 3.0 Hz) , 3.76 3H), 2.18 (dd， 1H， J = 12.0 Hz, / = 6.0 Hz) , 0.96 (q, 6H， / = 6· 0 Hz)。产品 E4: ¾ NMR (300 MHz) 8.87 (s, 2H) , 4.08 (t, 1H， / = 6.0 Hz) , 3.76 3H), 3.00 (d， 1H， / = 9.0 Hz), 2.53-2.50 (m, 1H) , 2.14 (m, 1H) , 2.11 (q, J = 6.0 Hz), 2.06 (s, 3H)。产品 E5 : ¾ NMR (300 MHz) 5. 64 (s, 1H) , 4. 09 (d， 1H， / = 3. 0 Hz) , 3. 84 (d, 2H, / = 3. 0 Hz) , 3. 74 (s, 3H)。

产品 E6 : ¾ NMR (300 MHz) 4. 36 (d， 1H， / = 6. 0 Hz) , 3. 77 (s, 3H) , 3. 02 (dd， 2H， / = 6. 0 Hz, / = 3. 0 Hz)。

产品 E7 : ¾ NMR (300 MHz) 8. 70 (s, 2H) , 7. 37-7. 23 (m, 5H) , 4. 26 (s, 1H)， 3. 66 (s, 3H) , 3. 12 (dd, 2H, J = 18. 0 Hz, J = 12. 0 Hz)。

实施例 5 氨基酸及相关构件取代的嘧啶核苷衍生物的合成：路线见 D。

路线 D、 4-氨基酸取代嘧啶核苷衍生物的合成化合物 6a的合成：将化合物 4 (50. 0 mg, 0. 06 mmol, 1. 0 eq)溶于 15 mL干燥的 DMF中，加入甘氨酸乙酯盐酸盐（17. 0 mg, 0. 12 mmol, 2. 0 eq)，二异丙基乙胺（14. 0 mg， 0. 12 mmol, 2. 0 eq)和催化量的 DMAP。得到无色透明溶液在室温下搅拌反应 3 h。 TLC 监测反应进程。反应液加水处理，再用乙酸乙酯萃取。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，除去溶剂。所得粗产品用硅胶柱分离提纯，洗脱剂为乙酸乙酯：石油醚 =2: 3 (R_f=0. 35) 得到 16 mg淡黄色油状物 6a, 收率： 45%。

化合物 7a的合成：将化合物 6a (29 mg, 0. 06 mmol , 1. 0 eq)溶于 7 mL THF, 1 mL H₂0 和 1 mL CH₃0H中，加入氢氧化锂（16. 0 mg, 0. 38 mmol, 6. 0 eq) , 搅拌两个小时后直接蒸干。粗产品用薄层色谱板分离提纯：展开剂： DCM : CH₃0H=2. 2 : l (R_f=0. 3)。 ¾ NMR (300 MHz) 7. 95 (s, 1H) , 7. 58 (s, 1H) , 7. 51 (d， 1H， / = 9. 0 Hz) , 6. 38 (q, 1H， J = 6. 0 Hz) , 6. 07 (d， 1H， / = 6. 0 Hz) , 5. 27-5. 05 (dt， 1H， / = 54 Hz , / = 6. 0 Hz) , 4. 49 (dd， 1H， / = 24 Hz , / = 6. 0 Hz) , 3. 73 (dd， 2H, J = 12 Hz , / = 18 Hz) , 3. 58 (d, 2H, / = 6. 0 Hz) , 1. 06 (t, 3H, / = 7· 5 Hz)。

化合物 8a的合成：化合物 7a用氢氧化钾水解得到相应的 4-氨基酸取代的嘧啶衍生物 fe。

路线 E、 4-氨基酸取代嘧啶核苷衍生物的合成化合物 6b的合成：将化合物 4 (200. 0 mg, 0. 25 mmol, 1. 0 eq)， L-谷氨酸二甲酯盐酸盐（76. 8 mg, 0. 30 mmol, 1. 2 eq)和催化剂 DMAP ( 15. 0 mg, 0. 13 mmol, 0. 5 eq) 置于 50 mL单口瓶中，氮气保护下，加入 5 mL干燥的乙腈，加入二异丙基乙胺 (96. 6 mg， 0. 75 mmol, 3. 0 eq)。得到无色透明溶液在室温搅拌过夜反应，得到浅黄色溶液， TLC 监测反应进程。反应完全后加水处理，得到白色混浊液。用乙酸乙酯萃取三次，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，除去溶剂。粗产品用硅胶色谱柱提纯。洗脱剂为乙酸乙酯：石油醚 =1 : 1 (R_f=0. 4) 得到 125 mg浅黄色油状物 6b, 收率： 72%。

化合物 7b用前述类似方法合成。

路线 F、 4-氨基酸取代嘧啶核苷衍生物的合成化合物 6c的合成：将化合物 4 (200. 0 mg, 0. 25 mmol, 1. 0 eq)， D-色氨酸甲酯盐酸盐（76. 8 mg, 0. 30 mmol, 1. 2 eq)，催化剂 DMAP (15. 0 mg, 0. 13 mmol, 0. 5 eq) 置于 50 mL单口瓶中，氮气保护。加入 5 mL干燥的乙腈中，不溶，滴加二异丙基乙胺（96. 6. 0 mg, 0. 75 mmol, 3. 0 eq)后全溶，得到无色透明溶液。室温搅拌反应过夜， TLC监测反应进程。反应完全后加水，得到白色混浊液。用乙酸乙酯萃取三次，上下层均为透明液，有机相用无水硫酸钠干燥后用薄层色谱法提纯。展开剂为乙酸乙酯：石油醚 =2:

1 (R_f=0. 5) 得到 105 mg浅黄色油状物 6c, 收率： 57%。

化合物 7c的合成：将化合物 6c (80 mg, 0. 11 mmol , 1. 0 eq)溶于 7 mL THF, 1 mL H₂0和 1 mL CH₃0H中，加入氢氧化锂 (27. 7 mg, 0. 66 mmol , 6. 0 eq) , 搅拌两个小时后处理反应。用稀盐酸调 ra为 3左右，用乙酸乙酯萃取三次。无水硫酸钠干燥，薄层色谱分离提纯： DCM： CH₃0H=3： 1 (R_f=0. 3)得产品 7c。

化合物 8c用前述类似方法合成。

路线 G 4-氨基酸取代嘧啶核苷衍生物的合成化合物 6d的合成：取化合物 4 (200. 0 mg, 0. 25 mmol, 1. 0 eq)溶于 15 mL干燥的乙腈中，加入 DMAP (15. O mg, 0. 13 mmol, 0. 5 eq)和 L-色氨酸甲酯盐酸盐 (76. 8 mg, 0. 30 mmol, 1. 2 eq)，不溶，加入二异丙基乙胺（96. 6. 0 mg, 0. 75 mmol, 3. 0 eq)后全溶，得到无色透明溶液。室温搅拌反应过夜，溶液颜色逐渐变为浅黄色， TLC监测反应进程。反应完全后加水，得到白色混浊液，用乙酸乙酯萃取三次，上下层均为透明液。有机相用无水硫酸钠干燥后用薄层色谱法提纯。展开剂为乙酸乙酯：石油醚 =2: 1 (R_f=0. 5)。得到 165 mg浅黄色油状物 6d, 收率： 90%

化合物 7d的合成：将化合物 6d (175 mg 0. 24 mmol , 1. 0 eq)溶于 14 mL THF 2 mL H₂0和 2 mL CH₃0H中，加入氢氧化锂 (90. 7 mg, 2. 16 ol, 9. 0 eq) , 搅拌两个小时后处理反应。用稀盐酸调 ra为 3左右，用乙酸乙酯萃取三次。无水硫酸钠干燥，薄层色谱分离提纯： DCM CH₃0H=3 1 (R_f=0. 3)得产品 7d

化合物 8d的合成：化合物 8d用前述方法合成。 OCH;

路线 H、 4-氨基酸取代嘧啶核苷衍生物的合成化合物 6e的合成：化合物 4(300 mg， 0.36 mmol, 1.0 eq)溶于 15 mL干燥的 DMF 中，加催化量 DMAP， L-天冬氨酸甲酯盐酸盐（120. O mg, 0.72 mmol, 2.0 eq)和二异丙基乙胺（139. Omg, 1.08 mmol, 3.0 eq)后全溶，得到无色透明溶液。室温搅拌反应过夜，溶液颜色逐渐变为浅黄色， TLC监测反应进程。反应完全后加水，得到白色混浊液，用乙酸乙酯萃取三次，上下层均为透明液。有机相用无水硫酸钠干燥后用薄层色谱法提纯。过柱，梯度洗脱：乙酸乙酯：石油醚 =1: 1 -2:1 (R_f=0.5)。得到 130 mg浅黄色油状物 6e，收率： 54 %。

化合物 7e的合成：用上述类似方法合成产品 7e。

化合物 8e的合成：用上述类似方法合成产品 8e。

CHQ

H

路线 I、 4-氨基酸取代嘧啶核苷衍生物的合成化合物 6f 的合成：取化合物 4(200.0 mg, 0.25 mmol, 1.0 eq)溶于 15 mL干燥的乙腈中，加入 DMAP (15.0 mg, 0.13 mmol, 0.5 eq) , D_3_甲基 _2_氨基丁酸甲酯盐酸盐 (49.0 mg, 0.38 mmol, 1.5 eq),不溶，加入二异丙基乙胺（129.0 mg， 1.00 mmol, 4.0 eq)后仍不溶，加入 10mLDMF，仍不溶，得到白色浑浊液。室温搅拌反应过夜，溶液颜色逐渐变为浅黄色， TLC监测反应进程。反应完全后加水，得到白色混浊液，用乙酸乙酯萃取三次，上下层均为透明液。有机相用无水硫酸钠干燥后用薄层色谱法提纯。展开剂为乙酸乙酯：石油醚 =2: 3 (R_f=0.5) o得到 52 mg浅黄色油状物 6f, 收率： 32%。 ¹誦 R (300 MHz) 8.19 (d， 1H， / = 9.0 Hz) , 8.04 (d， 2H, / = 6.0 Hz) , 7.88 (d， 2H, /= 3.0 Hz), 7.76-7.71 (m, 3H) , 7.57 (t, 2H, / = 7.5 Hz) , 7.49 (t, 1H， / = 7.5 Hz), 6.63 (d, 1H, / = 9.0 Hz), 6.17 (d, 1H, / = 21 Hz), 6.07 (d, 1H, / = 6.0 Hz), 5.90-5.70 (m, 1H， / = 54 Hz, / = 6.0 Hz) , 4.93 (dd， 2H, / = 12 Hz, /= 15 Hz), 4.51 (q, 1H， / = 6.0 Hz) , 3.67 (s, 3H) , 2.13 (dd， 1H， / = 7.5 Hz, / = 15.0 Hz), 0.95 (t, 6H， / = 7.5 Hz) o

化合物 7f 的合成：用上述类似方法合成产品 7f。

化 8f。

路线 J、 4-氨基酸取代嘧啶核苷衍生物的合成化合物 6g的合成：取化合物 4(200.0 mg, 0.25 mmol, 1.0 eq)溶于 15mL干燥的乙腈中，加 DMAP (15. Omg, 0.13 mmol, 0.5 eq) , L_甲硫氨酸甲酯盐酸盐（55.3 mg, 0.28 mmol, L I eq)，不溶，加入二异丙基乙胺（130.0 mg, 1.00 mmol, 4.0 eq)后仍不溶，加 2 mL DMF，得到无色透明溶液。室温搅拌反应过夜，溶液颜色逐渐变为浅黄色， TLC 监测反应进程。反应完全后加水，得到白色混浊液，用乙酸乙酯萃取三次，上下层均为透明液。有机相用无水硫酸钠干燥后用薄层色谱法提纯。展开剂为乙酸乙酯：石油醚 =1： 2 (R_f=0. 1)得产品 6g。

化合物 7g的合成：用上述类似方法合成产品 7g。

化合物 8g的合成：用上述类似方法合成产品 8g。

H

路线 K、 4-氨基酸取代嘧啶核苷衍生物的合成化合物 6h的合成：取化合物 4 (200. 0 mg, 0. 25 mmol, 1. 0 eq)溶于 15 mL干燥的乙腈中，加 DMAP (15. 0 mg, 0. 13 mmol, 0. 5 eq) , L-丝氨酸甲酯盐酸盐（60. 0 mg, 0. 40 mmol, 1. 5 eq)，不溶，加入二异丙基乙胺（134. 0 mg, 1. 04 mmol, 4. 0 eq)后仍不溶，加入 10 mL DMF，仍不溶，得到白色浑浊液。溶颜色逐渐加深，最后得到橙色混浊液。室温搅拌反应过夜， TLC监测反应进程。反应完全后加水，得到黄色混浊液，用乙酸乙酯萃取三次，上下层均为透明液。有机相用无水硫酸钠干燥后用薄层色谱法提纯。展开剂为乙酸乙酯：石油醚 =2: 1 (R_f=0. 5)。得到 79 mg浅黄色油状物 6h，收率： 50 %。 ¾ NMR (300 MHz) 8. 33 (d， 1H， J = 9. 0 Hz) , 8. 03 (t, 2H, / = 4. 5 Hz) , 7. 86 (t, 2H, / = 3. 0 Hz) , 7. 74-7. 71 (m, 3H) , 7. 60— 7. 49 (m， 3H) , 6. 62 (t, 1H， / = 6. 0 Hz) , 6. 17 (d， 1H， J = 21 Hz) , 6. 10 (d， 1H， / = 9. 0 Hz) , 5. 90-5. 69 (dt， 1H， / = 54 Hz, / = 6. 0 Hz) , 5. 22 (t, 1H， / = 4. 5 Hz) , 4. 93 (dd， 2H, / = 12 Hz, / = 15 Hz) , 4. 72-4. 66 (m, 1H) , 3. 84-3. 75 (m, 2H) , 3. 65 (s, 3H)。

化合物 7h的合成：用上述类似方法合成产品 7h。

化合物 8h的合成：用上述类似方法合成产品 8h。 H

HOOC^~-SH

路线 L、 4-氨基酸取代嘧啶核苷衍生物的合成化合物 6i的合成：取化合物 4 (100. 0 mg, 0. 13 mmol, 1. 0 eq)溶于 15 mL干燥的乙腈中，加 DMAP (7. 7 mg, 0. 06 mmol, 0. 5 eq)， L-半胱氨酸甲酯盐酸盐（32. 4 mg, 0. 19 mmol, 1. 5 eq) , 不溶，加入二异丙基乙胺（65. 0 mg, 0. 50 mmol, 4. 0 eq)后全溶，得到无色透明溶液。室温搅拌反应过夜，溶液颜色逐渐变为浅黄色， TLC监测反应进程。反应完全后加水，得到白色混浊液，用乙酸乙酯萃取三次，上下层均为透明液。有机相用无水硫酸钠干燥后用薄层色谱法提纯。展开剂为乙酸乙酯：石油醚 =2 : l (R_f=0. 6)得产品 6i。

化合物 7i的合成：用上述类似方法合成产品 7i。

化合物 8i的合成：用上述类似方法合成产品 8i。

路线 M、 4-氨基酸取代嘧啶核苷衍生物的合成化合物 6j的合成：取化合物 4 (200. 0 mg, 0. 25 mmol, 1. 0 eq)溶于 15 mL干燥的 DMF中，加催化量 DMAP, 甘氨酰胺盐酸盐（56. 0 mg, 0. 48 mmol, 2. 0 eq) , 二异丙基乙胺（97. 0 mg, 0. 75 mmol, 3. 0 eq)，得到无色透明溶液。室温搅拌反应过夜，溶液颜色逐渐变为浅黄色， TLC监测反应进程。反应完全后加水，得到白色混浊液，用乙酸乙酯萃取三次，上下层均为透明液。有机相用无水硫酸钠干燥后用薄层色谱法提纯。过柱，梯度洗脱，乙酸乙酯冲出杂质，然后用加入少量甲醇和三乙胺的乙酸乙酯冲柱，得到 88 mg紫色固体 6j, 收率： 60%

化合物 7 的合成：用上述类似方法合成产品 7j

路线 N 4-氨基酸取代嘧啶核苷衍生物的合成化合物 6k的合成：取化合物 4 (100. 0 mg, 0. 13 mmol, 1. 0 eq)溶于 15 mL干燥的 DMF中，加 DMAP (7. 7 mg, 0. 06mmol, 0. 5 eq) L_天门冬酰胺甲酯盐酸盐（60. 0 mg, 0. 13 mmol, 1. 5 eq) ,不溶，加入二异丙基乙胺（67. 6. 0 mg, 0· 52 ol, 4. 0 eq)后仍不溶，得到白色混浊液。室温搅拌反应过夜，溶液颜色逐渐变为浅黄色， TLC监测反应进程。反应完全后加水，得到白色混浊液，用乙酸乙酯萃取三次，上下层均为透明液。有机相用无水硫酸钠干燥后用薄层色谱法提纯得产品 6k

化合物 7k的合成：用上述类似方法合成产品 7k

化合物 8k的合成：用上述类似方法合成产品 8k

8L 路线 0、 4-氨基酸取代嘧啶核苷衍生物的合成化合物 6L的合成：取化合物 4(300.0 mg, 0.36 mmol, 1.0 eq)溶于 15 mL干燥的 DMF中，加催化量 DMAP， L-脯氨酸甲酯盐酸盐（120.0 mg, 0.72 mmol, 2.0 eq)，二异丙基乙胺（139.0 mg, 1.08 mmol, 3.0 eq) , 得到无色透明溶液。室温搅拌反应过夜，溶液颜色逐渐变为浅黄色， TLC监测反应进程。反应完全后加水，得到白色混浊液，用乙酸乙酯萃取三次，上下层均为透明液。有机相用无水硫酸钠干燥后用薄层色谱法提纯。过柱，梯度洗脱：乙酸乙酯：石油醚 =1: 1 -2:l(R_f=0.5) o 得到 200 mg白色固体 61，收率： 87%。

化合物 7L的合成：用上述类似方法合成产品 7L。

化合物 8L的合成：用上述类似方法合成产品 8L。

路线 P、 4-氨基酸取代嘧啶核苷衍生物的合成化合物 6m的合成：取化合物 4(200.0 mg, 0.25 mmol, 1.0 eq)溶于 15 mL干燥的乙腈中，加 DMAP(15.0 mg, 0.13隱 ol, 0.5 eq) , D/L-丙氨酸甲酯盐酸盐（42.5 mg, 0.28 mmol, 1.1 eq) , 不溶，加入二异丙基乙胺 130.0 mg, 1.00 mmol, 4. O eq)后全溶，得到无色透明溶液。室温搅拌反应过夜，溶液颜色逐渐变为浅黄色， TLC监测反应进程。反应完全后加水，得到白色混浊液，用乙酸乙酯萃取三次，上下层均为透明液。有机相用无水硫酸钠干燥后用薄层色谱法提纯。展开剂为乙酸乙酯：石油醚 =l:l(R_f=0.3)得产品 6m。

化合物 7m的合成：用上述类似方法合成产品 7m。化合物 8m的合成：用上述类似方法合成产品 8m。 m. p 168_170°C ¾匪 R (DMS0_d₆) ： 8.26 (d， 1H， = 7.0 Hz), 7.60 (d， 1H， = 7.5 Hz), 6.40 (d， 1H， J = 3.6 Hz), 6.36 (d， 1H， = 5.4 Hz), 5.90 (d， 1H， = 7.6 Hz) , 5.68 (s， 1H) ， 5. 17 (dt, 1H， = 52.3 Hz , = 3.5 Hz), 4.55-4.38 (m, 2H) , 3.73 (s， 2H), 3.65 (d， 3H， = 1.6 Hz) ； ¹³C (75 MHz, DMS0_d₆) : S 173. 1, 163.1， 154.4， 141.3， 97.0 (J= 5.1 Hz) , 94.7, 94.6 (J= 191.9 Hz), 82.2 (J= 16.6 Hz), 74.9 (J= 24.0 Hz) , 62.3， 52.1, 48.4， 17.1;HRMS m/z: for C₁₄H₁₉FN₆Na0₆ (M+Na) ⁺ : calcd. 395.11， found 395.1140 ， (M+H) ⁺ :

calcd. 373.13， found 373.1313.

路线 Q、 4-氨基酸取代嘧啶核苷衍生物的合成化合物 6n的合成：取化合物 4(200.0 mg, 0.25 mmol, 1.0 eq)溶于 15 mL干燥的乙腈中，加 DMAP (15. Omg, 0.13隱 ol, 0.5 eq) , L_苯丙氨酸甲酯盐酸盐（59.7 mg, 0.28 mmol, L I eq)，不溶，加入二异丙基乙胺（130.0 mg, 1.00 mmol, 4.0 eq)后全溶，得到无色透明溶液。室温搅拌反应过夜，溶液颜色逐渐变为浅黄色， TLC监测反应进程。反应完全后加水，得到白色混浊液，用乙酸乙酯萃取三次，上下层均为透明液。有机相用无水硫酸钠干燥后用薄层色谱法提纯。展开剂为乙酸乙酯：石油醚 =1:2 (R_f=0.1)得产品 6n。

化合物 7n的合成：用上述类似方法合成产品 7n。

化合物 8n的合成：用上述类似方法合成产品 8n。

实施例 6

5-呋喃取代嘧啶核苷根据下面工艺路线合成:

路线 R、 5-取代嘧啶核苷衍生物的合成化合物 9的合成：在 100 mL的圆底烧瓶中，加入化合物 3 (1.0 g， 1.89 mmol), 无水乙腈 (35 mL), 腳 ₃ (0.614 g, 9.45 mmol )和 IC1 (0.921 g, 5.67 mmol) 的无水乙腈（7 mL)溶解。反应混合物在搅拌加下加热到 50°C，并在此条件下继续反应 3天，冷却到室温。加入亚硫酸钠的饱和水溶液至溶液颜色褪去，用二氯甲烷萃取 3次。有机相干燥，过滤，蒸干。残留物用硅胶色谱柱提纯，用乙酸乙酯：石油醚 =1: 1为洗脱剂（R_f = 0.566)，得到白色粉末化合物 9(1.2 g，收率： 97.6%)。 ¾ NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 8.80 (s, 1H， NH), 8.10-7· 73 (m, 10H, Ar- and 6- H) , 6.63-6· 55 (dd， 1H， _ = 3.4Hz， J₂ = 3.4Hz, Γ-Η), 5.85-5.78 (dd， 1H， _ = 1. 4 Hz, J₂ = 1.4Hz, 3'— H), 5.53—5.35 (qq, 1H， 2'— H), 4.96—4.84 (m, 2H, 5'— H); ¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃) δ 164.70, 164.47, 159.13， 149.44, 144.43， 135.01, 134.35, 133.91, 130.33, 130.16, 130.12, 128.80, 127.66, 95.64, 94.32, 91.74, 84.00, 83.78, 68.86, 65.05； ESI- MS :Α?Λ 678· 0 [M + Na] +。

化合物 10的合成：在 50 mL的圆底烧瓶中，称取化合物 9 (0.6 g， 0.92 mmol), 依次加入 (PPh₃)₂PdCl₂ (0.014 g, 0.018 mmol)、无水 1, 4-二氧六环 (25 mL) 、加入 2- (三丁基锡烷基）呋喃（1.5 g， 4.14 mmol), 在 80 °C下反应 6小时。减压除去溶剂，粗产品用硅胶色谱柱提纯（TLC，乙酸乙酯：石油醚 =1: 1， R_f = 0.57)，用用乙酸乙酯：石油醚混合溶剂做洗脱剂，得到略带黄色的化合物 10 ( 0.6 g，收率 98%)。 ¾丽 R (300 MHz, CDC1₃) δ 8.89 (bs， 1H， NH) , 8.12-7.26 (m, 10H, Ar- and 6- H)， 7.05-7.03 (m, 2H, 5-furan) , 6.75-6.67 (dd， = 3.6Hz, = 3·6Ηζ, 1H， Γ- H), 6.40-6.39 (m, 1H， 5-furan) , 5.94-5.86 (dd， 1H， = 1.6Hz, J₂= 1.6Hz, 3'- H), 5.60-5.342 (qq, 1H， 2'- H)， 4.92-4.89 (m, 2H, 5'- H); ¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃) δ 164.74, 164.42, 159.38, 149.00, 144.96, 141.46, 134.82, 134.29, 133.69, 133.28, 130.52, 130.17, 130.11, 129.88, 128.78, 127.99, 111.72, 110.02, 107.58, 95.52,95.48, 94.52, 91.94, 84.06 83.83, 65.88. ESI-MS:ffl/z 618.1 [M + Na]+。

化合物 11的合成：在 50 mL的圆底烧瓶中，称取化合物 10 (98.6 mg, 0.17 mmol), 加入饱和的氨甲醇（20 mL) , 室温搅拌 24小时后，干法上柱，用二氯甲烷：甲醇 =10: 1 (R_f = 0.45) 过柱，得到化合物 11 (34.6 mg, 0.098 mmol, 收率： 59.3%); ¾ NMR (300 MHz, CD3OD) δ 8.21 (s, 1Η， 6_Η) , 7.47 (s, 1Η， 5-furan) , 6.94 (s, 1Η， 5-furan) , 6.95 (s, 1Η， 5-furan) , 6.58—6.53 (dd， j! = 5.6 Hz, J₂= 5.6Hz, 1H， Γ— H), 6.48-6.46 (m, 1H， 5-furan) , 5.39-5.18 (tt， 1H， 3'- H), 4.66-4.59 (dd， 1H， = 5.4 Hz, 2'- H), 3.32-3.30 (m, 2H, 5'- H); ¹³CNMR(75MHz， CD₃0D) δ 162.09, 151.16, 147.49, 142.81, 135.98, 112.55, 110.03, 108.00, 98.44, 98.32, 97.429, 94.85, 83.74, 83.51, 75.93， 62.63。

化合物 12的合成：向反应瓶中加入化合物 10 (0.221 g， 0.371 mmol) 和无水二氯甲烷（5 ml)o 搅拌下依次加入三氮唑（0.282 g) 和吡啶（330wL)，并置于冰浴中冷却，慢慢滴加 P0C1₃ (173 wL)。搅拌反应，两个小时之后补加三氮唑 (0.282 g) 和 POCla (173 wL)。搅拌过夜后加入水淬灭，用二氯甲烷萃取 4次，有机相干燥，蒸干。加入四氢呋喃（20 mL)和氨水（20 mL) ,搅拌一个小时之后，蒸干后加入氨甲醇（40 mL)，搅拌过夜。然后用 CH₂C1_2: CH3OH = 9:1( R_f = 0.32) 过大板得到化合物 12 (18.6 mg, 收率： 14.24%) o 匪 R (300 MHz, CD₃0D) δ 8.17 (s， 1H， 6- H)，7.61 (s， 1H， 5-furan) , 6.60—6.51(s， 3H， l'-H and 5-furan) , 5.38—5.17 (tt, 1H， 3 '-H)， 4.58-4.49 (dd， 1H， J₁ = 5.14 Hz, J₂ = 5.15 Hz, 2'_H)， 3.86—3.80 (m, 2H, 5'-H)； HRMS(FAB) m/z 353.1028 (M + H) ⁺ (C₁₃H₁₄FN₆0₅ requires 353.1010)， 375.0848 (M + Na) + (C₁₃H₁₃F關 a0₅ requires 375.0829)。

15

路线 S， 5-取代和双环嘧啶核苷衍生物的合成化合物 13的合成：化合物 9 (1.5 g， 2.29 mmol), 加入 DMF (无水， 25 mL) , 依次加入 Et₃N (2.4 mL) , 3_丁炔 _1_醇 (0.33 g, 4.58 mmol) Pd₂ (dba) ₄ (46· 8 mg )、 Cul (22.8 mg)和 PPh₃ (0.228 g), 35 °C下氮气保护，反应 30 h，蒸干，干法上柱，用乙酸乙酯：石油醚 = 1.5 ： 1 (R_f=0.45 二氯甲烷：甲醇 = 25： 1) 过柱得到化合物 13 (474 mg, 0.79 mmol, 收率： 34.59%); ¾ NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 8.72 (s， 1Η，腿）， 8.10-7.41 (m, 10H, Ar— and 6— H)， 6.64—6.57 (dd， 1H，

Hz, Γ-Η)， 5.83-5.77 (m, 1H， 3'_H)， 5.53-5.30 (m, 1H， 2'_H)， 4.99-4.79 (m, 2H， 5'_H)， 3.80—3.76 (t, 2H， _CH₂CH₂0H)， 2.66—2.62 (t, 2H, -CH₂CH₂0H)； ¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃) δ 164.62, 161.31， 148.83， 141.94, 135.01, 134.89， 134.33， 133.80， 130.38， 130.16， 130.02， 128.49， 127.96, 127.65, 101.04， 95.60， 94.24， 92.83， 91.67， 84.10， 83.88， 72.31， 65.47, 60.69， 24.05； HRMS (FAB) m/z 620.0980 (M +

Na) ⁺ (C₂₇H₂₁ClFN₅Na0₈ requires 620.0960)。

化合物 14的合成：用类似于合成化合物 11的条件得到化合物 14。

化合物 15的合成：用类似于合成化合物 12的条件得到化合物 15。

化合物 16和 17的合成；化合物 14在不同条件下合环制得相应的双环化合物 16 和 17 (参考: Nucleosides, Nucleotides and Nucleic Acids, 2007, 26, 1083-1086)。实施例 8

20 路线 T、 5—取代氨基嘧啶核苷衍生物的合成化合物 18的合成：化合物 9 (327.5 mg, 0.5 mmol)和 2-氨基乙醇（305 mg, 5 mmol) 的乙醇（5 mL) 溶液在 60 °C下加热 24小时。减压下除去溶剂，加入吡啶（12 mL)和乙酸酐（1.663 mL, 1.53 g, 15 mmol)。反应混合物在室温下搅拌 5小时直到反应完全（TLC, R_f = 0.55, 石油醚-乙酸乙酯 = 1:1)。用二氯甲烷萃取三次，用水洗涤。有机相拥无水硫酸钠干燥，过滤，减压出去溶剂，用甲苯共沸。粗产品用硅胶柱提纯（石油醚 -乙酸乙酯 = 4: 1) 得产品 18(15 mg, 0.03178 mmol, 收率 6.36 %); ¾ NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 7.78 (br， 1Η， 3-ΝΗ) , 6.61 (s, 1Η， 6_Η)， 6.57-6.49 (dd， = 3.58 Hz, = 3· 6 Hz, 1Η， Γ- Η)， 5.51-5.43 (dd， 1Η， = 2.26 Hz, J₂ = 2.28 Hz, 3'- Η)， 5.38-5.19 (qq, 1Η， 2'- Η)， 4.58-4.42 (m, 2Η, 5' - Η) · 4· 27- 4· 23 (t， 2Η, 5- NHCH₂CH₂), 3.26-3.24 (t 2Η, 5-NHCH₂CH₂) , 2.11 (br, 1H， 5- NH)， 2.09 (s, 9H， CH₃)； HRMS (FAB) m/z 472.14 (M + H) +。

化合物 19用类似于合成化合物 11的方法制得。

化合物 20用类似于合成化合物 12的方法制得。

实例 9

23

路线 U、 5-酰胺化嘧啶核苷衍生物的合成化合物 21的合成：化合物 9 (0.2 g, 0.31 mmol) 溶于四氢呋喃（10 ml) 中，然后加入吗啡啉 (0.27 g, 3.1 mmol), N₂保护下加入 Pd(PPh₃)₄(0.04 g, 10%mol)，在 0.3MPa C0(g)压力和 50°C条件下反应 28小时， TLC检测反应基本完全（R_f= 0.2 乙酸乙酯：石油醚 =1:1)，用硅藻土过滤，滤液浓缩，用硅胶柱层析分离提纯（乙酸乙酯：石油醚 =3:1) 得到化合物 21 (0.12 g, 59%)。化合物 22的合成：化合物 21 (77 mg), 加入 NH₃/CH₃0H (20 ml), 密封条件下搅拌 24h, TLC检测原料反应完全（R_f =0.3 二氯甲烷：甲醇 =10:1)，用硅胶柱层析分离提纯

(二氯甲烷：甲醇 =10:1) 得到化合物 22 (30 mg, 63%)。 ¾匪 R (300願 z， CD₃0D) δ 8.07 (s, 6-H), 6.50-6.45 (m, Γ— H)， 5.36-5.14 (tt, 2'— H)， 4.59-4.50 (dd, 1H， J₁ = 5.05Hz, J₂ = 50.8Hz, 3'— H)， 3.85 (s, 2H, 5'— H)， 3.69-3.30 (m, 8H， Morpholine-H )； HRMS (FAB) m/z 400.114 (M + H) ⁺ (C₁₄H₁₇FN₆0₇，计算值 401.121)

化合物 23用类似于合成化合物 12的方法制得。

路线 V、 5-酰胺取代嘧啶核苷衍生物的合成化合物 24的合成：化合物 9 (0.5 g, 0.76 mmol) 溶于四氢呋喃（20 ml) 中，然后加入吡咯烷（0.54 g, 7.6 mmol), N₂保护下加入 Pd (PPh₃) ₄ (0.09 g, 10%mol) , 在 0.4 MPa CO (g)压力下和 50°C温度下搅拌 28小时， TLC检测反应基本完全（R_f = 0.2 乙酸乙酯：石油醚 =1:1)，用硅藻土过滤，滤液浓缩，粗产品永柱层析分离提纯（乙酸乙酯：石油醚 =3:1)得到化合物 24 (0.21 g, 44%)。 ¾匪 R (300 MHz, CDC1₃) δ 10.66 (brs,

1H， NH), 8.29 (s, 6-H), 8.07— 7.36 (m， 9H， Ar), 6.64 (m, 1H， Γ— H)， 5. 89 (m, 1H， 3 ' _H)， 5. 52 (m, 1H， 2 ' _H)， 4. 97-4. 80 (m, 2H, 5 ' _H )， 3. 45-3. 45 (m, 4H， Pyrrol i dine-H) , 1. 92-1. 90 (m， 4H， Pyrrol idine-H)；

HRMS (FAB) m/z 626. 133 (M + H) ⁺ (C₂₈H₂₄FN₆0₆， 627. 145)。

化合物 25和 26用类似于合成化合物 11和 12的方法制得。

采用化合物 22的合成方法和路线，由化合物 9和硫代吗啡啉反应，经脱羟基保护得化合物 27。

本发明合成的化合物可用于抗肿瘤和病毒药物的活性成分，可以单独使用，也可以与其他抗肿瘤抗病毒药物联合用药。本发明所指的联合用药治疗过程中，包括运用至少一种本发明化合物以及其活性衍生物与其他一种或多种抗肿瘤抗病毒药物一起使用以增加总体疗效。联合用药时的药量和给药时间应根据不同的情况下所取得的最合理治疗效果而定。

所涵盖的药剂配伍包括通式 1-6中的化合物的有效剂量。该药剂配伍可含有一种有效的抗肿瘤抗病毒化学成份和药用配方。此处的 "有效剂量 "指的是对于所治疗对象能产生治疗效果所需要该化合物的用量。该有效剂量或剂量可以由有经验者根据不同情况的建议而不同。比如，所治疗的肿瘤和病毒种类不同，药物的用法不同；是否与其它的治疗方法如其他抗肿瘤药物或抗病毒药物共用等，剂量均可发生改变。可以制成任何可使用的制剂剂型。如果某些具有碱性或酸性化合物并可形成无毒性的酸或盐，可以使用该化合物的盐的形式。药学中可使用的有机酸盐包括生理上可使用的负离子盐，如对甲基苯磺酸盐、甲基磺酸盐、乙酸盐、苯甲酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、琥珀酸盐、抗坏血酸盐及甘油磷酸盐等。可使用的无机盐包括氯化物、溴化物、氟化物、碘化物、硫酸盐、硝酸盐、碳酸氢盐、碳酸盐、磷酸盐等。如有像胺这样的碱性的化合物与合适的酸可以制成所述的盐的形式。羧酸类的化合物可以与碱金属或碱土金属形成可使用的盐。本发明中通式 1-6中涵盖的化合物一般易溶解到有机溶剂、水溶性溶剂以及有机溶剂和水溶性溶剂与水的混合溶剂中。水溶性溶剂优选醇、多聚乙二醇、 N-甲基 -2-吡咯啉酮、 N，N-二甲基乙酰胺、 N，N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜、乙氰以及其合用。所述的醇优选甲醇，乙醇，异丙醇，丙三醇或乙二醇。本发明化合物可以与常用的制剂载体混合而制成制剂。化合物溶解到水溶性的有机溶剂、非质子性溶剂、水溶性类脂、环糊精、脂肪酸、磷脂中或这些溶剂的混合溶剂中而制得药物溶液；再加入生理盐水获 1-20%的碳水化合物，如葡萄糖的水溶液。由此而制得的制剂稳定并用于动物和临床。

以上述通式 1-6中化合物为活性成份制备成的产品药物，可以通过口服或非肠道途径给药，也可通过体内移植药物泵以及其他方法给药，此处所指的非肠道途径给药是指皮下皮内、肌肉内、静脉内、动脉内、心房内、滑膜内、胸骨内、鞘内、创伤部位内、颅内注射或滴注技术等。由技术人员运用常规的方法配比，混合最终成为所需要的药物剂型。可以是片剂、胶囊、乳剂、粉剂、静脉用药小针、大输液、冻干粉、滴丸、乳悬液、水悬溶液、水溶液、胶体、胶体溶液、缓释制剂、纳米制剂或以其他形式的剂型用于动物或临床。

本发明通式 1-6中的化合物用于治疗或缓解某一组织或器官的癌症药物的制备。所指癌症包括但不只限于结肠癌、肝癌、淋巴瘤、肺癌、食管癌、乳腺癌、中枢神经系统肿瘤、黑色素瘤、卵巢癌、肾癌、白血病、前列腺癌、胰腺癌等。

本发明通式 1-6中的化合物用于治疗或预防或缓解某病毒引起疾病药物的制备。所指病毒包括但不仅限于乙型肝炎（HBV)、丙型肝炎（HVC)、爱滋病（HIV) 毒、黄热病毒 (YFV)、呼吸道合胞病毒（RSV)、单纯疱疹病毒 (HSV)、牛病毒性腹泻病毒 (BVDV)、庚型肝炎病毒（HGV)、 GB病毒 -B (GBV-B)、登革病毒（Dengue)、人鼻病毒（HRV)、脊髓灰质炎病毒（Poliovirus)、水痘-带状疱疹病毒（VZV)、 EB病毒（EBV)、细胞巨化病毒（CMV) 等。

抗病毒和抗肿瘤活性本发明中所涵盖的化合物具有抗病毒活性，包括抗艾滋病 HIV-1、 HBV和 HCV活性，以及抗肿瘤活性。下面仅列举部分实例作一说明。

―、抗 HIV- 1 复制活性测定：测定本发明中所涵盖的化合物对 HIV-1 病毒复制的活性的影响。通过将本发明实施例所得化合物与 293T (来源： ATCC) 细胞孵育 15 分钟后，加入 VSVG/HIV_luc (NL4-3)病毒株， 37°C培养 48小时，以荧光素酶作为报告基因测定 HIV-1 的感染程度。以齐多夫定（Zidovudine, AZT) (厦门迈克制药有限公司）作为阳性对照。培养基： DMEM 培养基（美国 Gibco 公司）， RPMI-1640 , FBS；配制方法： RPMI-1640/DMEM+ 10%FBS。实验用介质：二甲基亚砜 (DMS0, 美国 Sigma)。实验方法： 1、供试品、对照品配制：受试样品称重并溶解于 DMS0 中，贮液浓度为 lOmmol/L; 对照品：称重齐多夫定并溶解于 DMS0, 贮液浓度为 10 mmol/L。

2、实验步骤

2. 1 野生型 HIV-1 重组假病毒的制备：转染前一天，按 2. 2 X 10⁶ 个细胞的密度接种 293ET 细胞到 100 mm培养皿中，用改良的磷酸钙沉淀法共转染 3 ^μ § VSV-G质粒和 8 ¹¹ S野生型核心基因，转染后 16 小时，用 PBS 冲洗细胞并换新鲜的培养基继续培养 32 小时，收集上清并经 0. 45 uM 的滤膜过滤，生成野生型 HIV-1 重组病毒颗粒 VSVG/HIV-WT。

2. 2 HIV-1重组假病毒的 p24抗原测定:倍比稀释病毒原液野生型后各取 450 ^ 1 , 用 50卜 ¹ 的裂解液进行裂解，按照 p24 抗原 ELISA试剂盒说明书（ZeptoMetrix, Cat: 0801111 )，测定并计算野生型重组病毒原液的 p24 抗原浓度。

2. 3 药物对 HIV-1 抑制性检测：感染前一天，将 293T 细胞按每孔 6 X 10⁴ 的密度接种到 24 孔板上，用 DMS0溶解待测化合物，于感染前 15 分钟加入细胞培养液中， DMS0 溶剂作空白对照，再加入 0. 5 ml 病毒液（根据 p24 浓度将病毒原液稀释至

0. 1 - 0. 5 ng p24/ml ) o 感染后 48 小时，去除上清，每孔中加入 50 ^ 1 细胞裂解液

( Promega ) 裂解细胞，再将 20 ^{μ 1}细胞裂解产物加入至 30 ^{u 1}荧光素酶底物中 (Promega)，用 FB15 荧光检测器（Sirius )仪器测定细胞荧光素酶的相对活性，以 DMS0 作对照，计算化合物对野生型 HIV-1 复制的半数抑制浓度。

2. 4 应用 MTS 法检测化合物对细胞存活的影响：将对数生长期的 293T 细胞按 8000^10000 个 /孔的细胞密度接种至 96 孔板中，每孔 100ul， 37°C， 5%C0₂ 培养箱中培养 24 h 后，加入待测化合物并以 DMS0为空白对照（终浓度为 0. 1%)， 37°C， 5%C0₂ 培养箱中继续培养 44 小时。向每孔中加入 20 μ 1 MTS/PMS 现配的混合液， 37°C， 5%C0₂ 培养箱中继续培养 4h 后显色。在酶联检测仪上，波长 490 nm和 650 nm (本底）处检测各孔的光吸收值（0D)，并计算细胞的存活率。测得抗 HIV-1病毒活性（EC₅。）以及细胞毒性（CC₅。）见下表：

T0C6.0/ll0ZN3/X3d 6CSTC0/Z10Z OAV

ζε

u/u O liz-oosld 6siAV

T0C6.0/ll0ZN3/X3d 6CSTC0/Z10Z OAV

317

T0C6.0/ll0ZN3/X3d 6CSTC0/Z10Z OAV

二、抗乙型抗炎 HBV体外生物活性试验:

2. 1、细胞的复苏和培养从液氮罐中取出一支冻存的 PG2. 2. 15细胞，迅速置于 42°C水浴中摇动至融化。于 DMEM完全培养基（胎牛血清 10%，G418 380 ^{U s mL}，青霉素 100U/ml，链霉素 100U/ml )。培养条件为 5%的 C0₂， 37°C培养。细胞正常生长后 2〜3天传代一次。

2. 2、 MTT法检测化合物对 ftepG2. 2. 15细胞的毒性.

根据 Mosmann建立的 MTT比色法检测药物对 HepG2. 2. 15细胞的毒性。连续培养 72 小时，每孔加入 MTTlOul , 4小时后，弃去上清液，每孔加入 DMS0200ul，酶标仪（检测波长 490nm，参考波长 630nm) 读取各孔 0D值，记录结果。计算化合物对 ftepG2. 2. 15 细胞的抑制百分率：

抑制百分率 =空白对照孔值 -给药孔值 _{x 100%}

空白对照孔值

根据药物对细胞的抑制百分率计算药物对细胞的半数毒性浓度（TC₅。）。

2. 3、化合物对 HBV体外抑制实验

选择小于化合物半数毒性浓度作为筛选浓度，检测其对细胞培养液中 HBV表面抗原 s和 e抗原的影响。选用对数生长期的 HepG2. 2. 15细胞，胰酶消化成单细胞悬液，按照 2 X 107ml的浓度接种于 24孔板，每孔 1ml，每个浓度 3个孔。加入含有不同药物浓度的培养基，并设加完全培养基的细胞为正常对照。收集第三天、第六天、第九天的细胞上清液和细胞，于 -20 °C保存。用 ELISA方法测定第三天、第六天、第九天的细胞内外 e 抗原和表面抗原的表达。

2. 4、 ELISA检测化合物对 ftepG2. 2. 15细胞上清液中 HBeAg和 HBsAg的影响

按照试剂盒操作方法进行；

测定：用酶标仪读数，选择双波长 450/630nm，读取各孔 0D值。

结果判定：首先按照 C0V=阴性对照平均 0D值 X 2. 1计算 Cutoff值，如果标本 00值

917 u/u O liz-oosld 6siAV

T0C6.0/ll0ZN3/X3d 6CSTC0/Z10Z OAV

817

三、抗丙型肝炎 HCV活性：

本发明所涵盖的化合物具有抗丙型肝炎 HCV的作用。体外抗 HCV 活性实验如下： 3. 1、细胞培养

HCV复制细胞 (Avva. 5) 在 Dulbecco' s改进的包含 10%牛胎儿血清和 lmg/mL的 G418的 Eagle介质中培养。 293_Sip_L细胞在 Dulbecco' s改进的含 10%牛胎儿血清和

250| ^g/irL的 G418及 150 ^{11 g/mL}的潮霉素 B的 Eagle介质中培养。

3. 2、 HCV感染测定方法 (RT-PCR方法)

用 60mm直径的 Petri培养皿中的细胞在包含 100 μ L的 HCV阳性的培养基中培育 12 小时。然后细胞在不包含 HCV的新鲜介质中培育并且每天更换一次。细胞在感染 7天后检测 HCV-RNA时，细胞需要胰蛋白酶化并用离心法用 Dulbecco' s改进的 Eagle介质清洗两次。第二次洗涤的上层部分（作为对照）和洗过的细胞成对收集来进行 RNA提取和 RT-PCR检测。 β -肌动蛋白 mRNA同时测定以做对照。 3.4、 HCV-RNA的定量检测

采用全自动 PCR 酶联免疫法来定量测定 HCV-RNA (2.0 版， Roche Diagnostics, Branchburg, NJ)。化合物 5-02在 6， 0.6和 0.06 ^{μ g/mL}时有抑制效果（见下表）。 HCV-RNA水平用全自动 PCR酶联免疫法来测定。

四、抗肿瘤活性:

4.1、细胞及细胞培养

细胞培养；将 Raji细胞置 37°C， 5%C02，细胞培养箱中培养，培养液为含有 10% 小牛血清的 RPMI1640培养液，细胞培养 2〜3d，取对数生长期细胞用于实验。

4.2、噻唑蓝（MTT) 还原法检测细胞生长抑制率

取对数生长期的细胞，调整细胞密度为 5 X10⁴个 /ml, 分别接种于三个 96孔培养板中， 100卜 1 /孔，细胞培养 24h后更换培养液，实验组分别加 0.3、 1.5、 3、 6、 12、

24 mol/L N-Cu, 200 " 1 /孔，每种药物浓度为一组。空白组（用于调零）只加含 10% 胎牛血清的 RPMI1640培养液而不加细胞，对照组加入等体积含 10%胎牛血清的 RPMI1640 培养液。以上各组均设 5个复孔。细胞分别继续培养 24h、 48h和 72h后，每孔加入 MTT

(5mg/ml) 溶液 20 ^ 1 , 继续培养 4h。吸弃上清液，加入 DMS0150 ^ 1 /孔，震荡混匀 5min左右，待结晶完全溶解后， 20min内在酶联免疫检测仪上检测波长为 570nm处各孔的吸光度（A) 值。实验重复 3次，取平均值。按以下公式计算细胞的生长抑制率。细胞生长抑制率= (1-实验组平均 A值 /对照组平均 A值） X100%。

本发明所涵盖的化合物具有抗肿瘤作用。典型化合物对人淋巴瘤 Raji细胞的抑制作用见下表：

化合物号结构抑制活性， ic₅。

( M )

Claims

权利要求书

-叠氮 -2' -去氧 -2' -β-氟代嘧啶类核苷衍生物，其特征在于，其具有如下结构

选自 0H， NHOH, NH0CH₃₎ NHOEt, NHOR, NROH, NROR, NHR, NRR, NH(CH₂)_n0H, NH(CH OR, NH(CH₂)nSR, N[(CH₂) nOH]„ NHCH₂Ar, NHCH₂- Het, CN, C00H, C0NH₂₎ C00R, CSNH₂, C(=NH)NH₂₎ C(=NH) OR, C (=NH) OH, NHNH₂, NHNHR, NRNH₂₎ NRNHR, NRNRR, NHNHC(=0)NH₂, NHNHC (=S)NH₂, NHNHC (=0) NHR, NHNHC(=S)NR, NHC(=0)NHR, NHC(=S)NHR， NHCH₂C0NH₂, NHCH₂C0NHR_; 或者- NRR, NRNHR, NRNRR基团上的两个 R基团连接成 C₃-C₁₀ 元的环状基团且该环状基团中杂原子为 N和 0或 S原子；

其中， n = 2- 8; R 是 C,- (₈的垸基、 C₂-C₈稀基、 C₂- C₈垸烯基、 C₂- C₈烯烷基、 C₂- C₈ 炔基、 C₂- C₈烷炔基、 C₂- (：₈炔垸基、 C₃- C₈环垸基、 C₃- (：₈环烯基、氨基酸、取代氨基酸、 <,-(：₈羟垸基、 C₂- (₈硫烷基、 d- C₈腈垸基、 d- (：₈氨烷基、 d- C_s羧基垸基、甲氧基、甲硫基、 C₂- (：₈垸氧基、 C₂- (：₈垸硫基， C_e-C,₂芳香垸基、 C₃_C_e杂环垸基；或 R是 H， F, CI, Br, I, CF,, OCF,, 0- ( - C,₂芳香基、 0 - C_:i- C₆杂环基; 其中， Ar是 C₅- 。的共轭单环芳香基或双环芳香基； Het是含有 1-3个^ 0或 S杂原子的 C₅- C_l(1的共轭单环芳香、双环芳香基；

R₂选自 H, OH, NH₂, 甲基、乙基、 C₃- C,。的烷基、甲氧基、甲硫基、 C₂- C,。烷氧基、。垸硫基、 C¾N 、 CH₂0H或 CH₂0R; 或（ C,。共轭芳香环基、 C₃- C_e杂环垸基或者其环替换页（细则第 26条) 上含有被上述 R取代的基团；

R;选自 H, C ,CH₂CH" CH₂CH₂CH₃. CHMe₂, CH₂SH， CH₂CH₂SH , CH₂0H， C C₆H₅, CH₂C0NH₂, CH₂C00H， CH₂C00R, CH₂CH₂C0NH₂₎ CH₂CH₂C00H, CH₂CH₂COOR, CH₂CH₂C NHC (=NH) NH₂, CHMeCH₂CH₃, CH₂CHMe₂, CH₂CH₂CH₂CH₂NH_2> CH₂CH₂SCH₃₎ CH(OH) CH₃₎ CH₂C₆H₄0H-p, C - imidazole, CHfindole;*^。烷基，。羟垸基， C_M。硫垸基， Ar， C Ar， CH₂- Het或者 Ar 、 He环上含有被上述 R取代的基团； Ar 、 Het, R基团与上述定义相同；

R₄是 H, 甲基、乙基、 -G。的烷基、 C₆- C₁₂芳香垸基或 C₃- C_e杂环垸基；

Rs是 C厂 Cio的院基、 C₂— CK)稀基、 C₂— C₁₍₎烧稀基、 C₂一 C₁₍)稀院基、 c₂— c₁₀块基、 c₂一 c_l0 垸炔基、 C₂- ( 炔烷基、 -C,。腈垸基、 d-C,。氨烷基或 C,- C,。羧基烷基；（CH OH, (CH₂)_n0R, (CH₂)„SR, CH₂Ar, CH₂CH₂Ar, CH₂-Het, CH₂CH₂ - Het, 或者 Ar 、 He环上含有被上述 R取代的基团；其中， n = 2-8； Ar 、 Het, R基团与上述定义相同；

1¾是腿1^ NRR, NH(C )_n0H, NH(CH₂)_n0R, NH(CH₂) nSR, N[(C¾)nOH]₂， NHCH₂Ar， NHAr, N (CH₂Ar) " NAr₂，删₂- Het; 含 3- 8个碳原子的环状氨基或其环上的 1-2碳原子被 0、 S、 NH, NR， P0，或 P (0) (OH) 2取代；其中， R基团是 d- C₁₅的垸基， C₂- C_l5烯基， C₂- C₁₅ 院;) #基， C₂— Cl₅j ^¾， C₂— Cis ^:基， C₂-Cl5 ^¾：¾, C₂-Ci₅ ¾ ¾, C₃— Cl5环^ ¾， C₃— Cl5 环烯基， c₆- c₁₂芳香烷基， c₃- c₆杂环烷基，羟垸基，硫垸基，腈烷基，氨垸基或羧基烷基； Ar 、 Het, R基团与上述定义相同；

R₇是 C,-C₁₈的垸基、羟甲基、羟乙基、羟丙基或 OC,。羟垸基； CH₂0R, CH₂SR, Ar, Het, (CH₂) ,-,₂-Ar, (CH₂) ,-,₂-Het, 或 d- s的烷基连中含有 1-3双键或三键或 1-3个 0, S原子; Ar和 Het基团如上所述；

X = NH, 0， S, NR。

2、如权利要求 1所述的 4' -叠氮 -2' -去氧 -2' -β-氟代嘧啶类核苷衍生物，其特征在于， R₂， R₆优选如下典型基团之一：

替换页（细则第 26条) OH

N O N S HN HN \ HN

NH₂

3、如权利要求 1所述的 4， -叠氮 -2， -去氧 -2， -β-氟代嘧啶类核苷衍生物，其特征在于， R₅优选如下典型基团之一：

替换页（细则第 26条) 、如权利要求 1所述的 4' -叠氮 -2' -去氧 -2' -β_氟代嘧啶类核苷衍生物，其特征在

Η，且为如下基团之

替换页（细则第 26条)

或为如下化合物:

替换页（细则第 26条)

HgCOOC^^/^COGCH;

替换页（细则第 26条) ^s-

替换页（细则第 26条)

替换页（细则第 26条)

替换页（细则第 26条) 嘧啶类核苷衍生物的合成方法，其特征在于，以具有如下结构化合物 4为原料，于反应瓶中依次加入无水 N, N-二甲基甲酰胺， D AP，N-乙基二异丙基胺和所选的胺类构造分子，在室温和氮气保护条件下搅拌反应；而后加入乙酸乙酯，用水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压条件下除去溶剂；最后将所得粗产品和氨气饱和的甲醇溶液在封闭的反应瓶中室温搅拌；减压除去溶剂，粗产品提纯即可；式中 R₂=H, R,如权利要求 1所述，

化合物 4

6、如权利要求 1所述的当碱基时， 4 ' -叠氮 -2， -去氧 -2， - β

-氟代嘧啶类核苷衍生物的合成方法，其特征在于，将具有如下结构的化合物 4溶于干燥的 DMF中，加入氨基酸甲酯盐酸盐，二异丙基乙胺和催化量的 DMAP , 在室温下搅拌反应； TLC 监测反应进程，反应液加水处理，经萃取，有机相干燥，过滤，除去溶剂，

化合物 4

将所得粗产品，得到中间体化合物 Α:

替换页（细则第 26条) 将中间体化合物 A溶于 THF、（^垸基醇中，加入氢氧化锂，搅拌反应后直接蒸干；粗产品用薄层色谱板分离提纯，得到中间体化合物 B:

o人

HO

，中间体化合物 B用氢氧化钾水解,得到相应的 4-氨基酸取代的嘧啶衍生物；式中 R₂=H, R:, R₄如权利要求 1所述。

7、如权利要求 1所述的当碱基为8= 时， 4' -叠氮 -2， -去氧

- 2' 氟代嘧啶类核苷衍生物的合成方法, 其特征在于，将具有如下结构的化合物化合物 9和 2 氨基乙醇的乙醇溶液加热反应；

P-

减压下除去溶剂，加入吡啶和酸酐；反应混合物在室温下搅拌反应，经萃取、洗涤、干

燥，过滤，提纯得中间体化合物：

而后加入无水二氯甲垸，搅拌下依次加入三氮唑和吡啶，并置于冰浴中冷却，滴加 P0C1₃，搅拌反应，补加三氮替换页（细则第 26条唑和 P0Cl_{:i ;} 搅拌过夜后加入水淬灭，萃取，有机相干燥，蒸干，加入四氢呋喃和氨水, 搅拌反应，溶液蒸干后加入氨甲醇，搅拌过夜，萃取制得；式中 R,=NH₂， R₅如权利要求 1所述。

8、如权利要求 1所述当时， 4' -叠氮 -2， -去氧 -2' 氟代嘧啶类核苷衍生物的合成方法，其特征在于，将具有如下结构的化合物 9

9 溶于四氢呋喃中，然后加入含胺类构件化合物和二氧化碳， N₂保护下加入 Pd (PPh₃) 4反应， TLC检测反应，反应完成后过滤，滤液浓缩，用硅胶柱层析分离提纯得到中间体 5-取代

嘧啶核苷中间体化合物 III:

然后加入无水二氯甲烷，搅拌下依次加入三氮唑，和吡啶，并置于冰浴中冷却，慢慢滴加 P0C1_3; 搅拌反应后补加三氮唑和 P0C1_3; 搅拌过夜后加入水淬灭，经萃取、干燥；而后加入 NH₃/CH₃0H, 密封条件下搅拌， TLC检测原料反应完全，用硅胶柱层析分离提纯 5-酰胺化嘧啶核苷衍生物；式中 R尸 NH₂, ！^如权利要求 1所述。

9、如权利要求 1所述 4' -叠氮 -2， -去氧 -2， - β -氟代嘧啶类核苷衍生物的合成方法，其特征在于，将具有如下结构的化合物 9加入无水 DMF 中，

替换页（细则第 26条)

9 Θ 依次加入 Et₃N、 4-取代丁炔、 Pd₂ (dba) ₄、 Cul和 PPh₃，氮气保护下反应；蒸干，干法上柱，用乙酸乙酯 /石油醚过柱得到 5-取代嘧啶核苷中间体化合物：

；然后加入无水二氯甲垸，搅拌下依次加入三氮唑和吡啶，并置于冰浴中冷却，滴加 P0Cl_:i，搅拌反应，补加三氮唑和 P0C1:, ; 搅拌过夜后加入水淬灭，经萃取得到 B=

R₇如权利要求 1所述；将上述中间体化合物加入饱和的氨甲醇，室温搅拌，千法上柱，用二氯甲垸 /甲醇过柱得

5-取代嘧啶核苷羟基脱保护中间体化合物:

替换页（细则第 26条) ，中间体化合物经环合反应得到

时化合物，式中 X、 R,如权利要求 1所述。

10、如权利要求 1-4任何一种所述的 4' -叠氮 -2 ' -去氧 -2- ' β -氟代嘧啶类核苷衍生物在制备药物中的应用，其特征在于，将其作为活性成分应用于制备治疗、预防或缓解抗肿瘤或抗病毒药物和药物制剂。

11、如权利要求 10所述的 4 '-叠氮- 2 ' -去氧 -2 ' - β -氟代嘧啶类核苷衍生物在制备药物中的应用，其特征在于，以其为活性成份制备成口服或非肠道途径给药形式，或通过体内移植药物泵的给药形式。

12、如权利要求 10或 11所述的 4 '-叠氮- 2， -去氧 -2 '- β -氟代嘧啶类核苷衍生物在制备药物中的应用，其特征在于，活性成份为一种或两种以上本发明化合物。

13、如权利要求 10或 11所述的 4 '-叠氮- 2 ' -去氧 -2 '- β -氟代嘧啶类核苷衍生物在制备药物中的应用，其特征在于，将其应用于治疗肿瘤细胞引起的结肠癌，肝癌，淋巴瘤，肺癌，食管癌，乳腺癌，中枢神经系统肿瘤，黑色素瘤，卵巢癌，宫颈癌，肾癌，白血病，前列腺癌，胰腺癌，胃癌癌症药物或药物制剂的制备。

14、如权利要求 10或 11所述的 4 '-叠氮 -2， -去氧 -2 β -氟代嘧啶类核苷衍生物在制备药物中的应用，其特征在于，将其应用于乙型肝炎，丙型肝炎，爱滋病毒，黄热病毒，呼吸道合胞病毒，单纯疱疹病毒，牛病毒性腹泻病毒，庚型肝炎病毒， GB病毒 -Β，登革病毒，人鼻病毒，脊髓灰质炎病毒，水痘-带状疱疹病毒， ΕΒ病毒，细胞巨化病毒药物或药物制剂制备。

替换页（细则第 26条)